CN115724955A - 靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体14B1及其应用 - Google Patents
靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体14B1及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115724955A CN115724955A CN202211149172.6A CN202211149172A CN115724955A CN 115724955 A CN115724955 A CN 115724955A CN 202211149172 A CN202211149172 A CN 202211149172A CN 115724955 A CN115724955 A CN 115724955A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- monoclonal antibody
- variable region
- chain variable
- cov
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title abstract description 12
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 title abstract description 9
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims abstract description 11
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 11
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 claims description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 17
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 13
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 13
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 13
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 11
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 8
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 8
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 8
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 claims description 7
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 43
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 241001112090 Pseudovirus Species 0.000 description 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 5
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- NOIIUHRQUVNIDD-UHFFFAOYSA-N 3-[[oxo(pyridin-4-yl)methyl]hydrazo]-N-(phenylmethyl)propanamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1CNC(=O)CCNNC(=O)C1=CC=NC=C1 NOIIUHRQUVNIDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 description 3
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 3
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 3
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 2
- 101710198474 Spike protein Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 2
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 235000017003 Cissus Nutrition 0.000 description 1
- 244000035145 Cissus repens Species 0.000 description 1
- 235000017014 Cissus repens Nutrition 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000773743 Homo sapiens Angiotensin-converting enzyme Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 244000309467 Human Coronavirus Species 0.000 description 1
- 241000711467 Human coronavirus 229E Species 0.000 description 1
- 241001109669 Human coronavirus HKU1 Species 0.000 description 1
- 241000482741 Human coronavirus NL63 Species 0.000 description 1
- 241001428935 Human coronavirus OC43 Species 0.000 description 1
- 208000006083 Hypokinesia Diseases 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 241000127282 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus Species 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710087110 ORF6 protein Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 231100000645 Reed–Muench method Toxicity 0.000 description 1
- 208000004756 Respiratory Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 108091005634 SARS-CoV-2 receptor-binding domains Proteins 0.000 description 1
- 208000037847 SARS-CoV-2-infection Diseases 0.000 description 1
- 101000596353 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 ORF7a protein Proteins 0.000 description 1
- 101000596375 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 ORF7b protein Proteins 0.000 description 1
- 101000992426 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 ORF9b protein Proteins 0.000 description 1
- 101001086079 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Putative ORF3b protein Proteins 0.000 description 1
- 101000992423 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Putative ORF9c protein Proteins 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 101710198378 Uncharacterized 10.8 kDa protein in cox-rep intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 101710095001 Uncharacterized protein in nifU 5'region Proteins 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000002038 chemiluminescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000003235 crystal violet staining Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 208000017574 dry cough Diseases 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- 238000007499 fusion processing Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 102000056252 human ACE Human genes 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 208000010753 nasal discharge Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000007860 single-cell PCR Methods 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明提供了一种靶向RBD的高中和活性抗SARS‑CoV‑2全人源单克隆抗体14B1及其应用，所述全人源单克隆抗体14B1包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有的三个互补决定区的氨基酸序列分别为：EFTIDDYA、ISGDGGRT和AK，所述轻链可变区具有的三个互补决定区的氨基酸序列分别为：QNISAN、GAS和QHYNNWP。所述全人源单克隆抗体14B1具有高效、特异的抗SARS‑COV‑2中和活性、高表达、全人源、稳定性好，可用于制备新冠病毒检测产品或预防和治疗新冠病毒疾病的药物。
Description
技术领域
本发明属于微生物学和免疫学领域，涉及一种靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体14B1及其应用。
背景技术
冠状病毒是一类在自然界中广泛存在的包膜正链RNA病毒，它可以感染禽类、蝙蝠及人类等多个物种，引起胃肠道、肝脏、呼吸系统和神经系统等疾病，对人及家畜存在重大威胁。直至本次新冠疫情，已知可感染人的冠状病毒共有七种，其中四种低致病性的HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1呈全球性分布且在人群中普遍存在，通常只引起呼吸道感染，临床症状较轻，为发热，流涕，咳嗽等。另外，本世纪也爆发了SARS-CoV、MERS-CoV、SARS-CoV-2这三种高致病性人冠状病毒的大流行。2019年底爆发的2019冠状病毒病(COVID-19)，其病原体SARS-CoV-2在进化上与SARS-CoV具有很近的亲缘关系，两者的临床症状也具有极高的相似性，感染早期均以发热、干咳、全身乏力等症状为主，晚期则易发展至不同程度的呼吸衰竭和急性肺炎，免疫力低下和患有基础疾病的人群病死率较高。SARS-CoV-2具有极强的传播能力和致病性。SARS-CoV-2病毒颗粒呈球形或椭圆形，直径约80～160nm。病毒颗粒最外层为脂质双分子层组成的囊膜，囊膜上有大量末端膨大的棘突，病毒颗粒内为病毒的非节段单股正链RNA和核衣壳蛋白(N)组成的核心。病毒基因组大小约30kb，共编码29种蛋白质，其中包括16种非结构蛋白(nsp1-nsp16)、4种结构蛋白(S、E、M、N)和9种辅助蛋白(ORF3a、ORF3b、ORF6、ORF7a、ORF7b、ORF8、ORF9b、ORF9c和ORF10)。病毒颗粒囊膜上含有三种不同的糖蛋白，分别为刺突蛋白(S)、膜蛋白(M)、小囊膜蛋白(E)。S蛋白是冠状病毒主要抗原蛋白，其结构是囊膜伸出末端的球状结构，功能为介导病毒与宿主细胞受体的结合及促进病毒包膜与细胞膜融合过程。
到目前为止，虽有针对新冠病毒的各类疫苗上市，但随着病毒的不断变异，疫苗的保护效果也受到严重挑战。另外，目前治疗冠状病毒的特效药物相对缺乏，经济成本高，临床上一般采用非特异性治疗，预防严重的并发症，降低重症发病率和死亡率，提高治愈率。因此，研发具有高保护效率的通用型新冠状病毒疫苗和特异性治疗药物成为全球应急科研攻关的首要任务。
因此，亟需开发一种针对COVID-19具有良好保护效果的全人源单克隆治疗性抗体。
发明内容
为了解决所述技术问题，本发明提供了一种靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体14B1及其应用，该全人源单克隆治疗性抗体针对COVID-19具有良好保护效果。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
在本发明的第一方面，提供了一种靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体14B1，所述全人源单克隆抗体14B1包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有的三个互补决定区的氨基酸序列分别为：EFTIDDYA、ISGDGGRT和AK，所述轻链可变区具有的三个互补决定区的氨基酸序列分别为：QNISAN、GAS和QHYNNWP。
进一步地，所述单克隆抗体14B1的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。
进一步地，所述单克隆抗体14B1的重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示，轻链恒定区的氨基酸序列均如SEQ ID NO：7所示。
进一步地，所述单克隆抗体还包括：
所述单克隆抗体的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸得到的具有相同功能的抗体；
或者包括具有与所述重链可变区具有至少80％的同源性的氨基酸序列的重链可变区；和与所述轻链可变区具有至少80％的同源性的氨基酸序列的轻链可变区；
或者所述单克隆抗体的N端和/或C端连接标签得到的抗体。
在另外一些实施方案中，VH和/或VL氨基酸序列可以与上述序列85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同源。具有与上述序列的VH和VL区高度(即80％或更高)同源的VH和VL区的抗体可以如下获得：诱变(例如定点诱变或PCR介导的诱变)编码SEQIDNO：1-6的核酸分子，然后用此处所述的功能试验检测编码的被改变抗体的保留的功能。
在其他实施方式中，可采用将可变区基因转化为scFv基因，一旦获得编码VH和VL片段的DNA片段，即可通过标准重组DNA技术进一步操作这些DNA片段，例如将可变区基因转化为全长抗体链基因、Fab片段基因或scFv基因。
在这些操作中，编码VL或VH的DNA片段与编码另外一种蛋白质如抗体恒定区或柔性连接体的另一个DNA片段有效连接。如本文使用的术语“有效连接”意思是两个DNA片段连接在一起，使得这两个DNA片段编码的氨基酸序列保持符合阅读框。
在本发明的第二方面，本发明提供了一种编码所述单克隆抗体的核酸分子，所述核酸分子包括编码所述重链可变区的核酸分子和编码所述轻链可变区的核酸分子。
进一步地，编码所述单克隆抗体14B1的重链可变区和轻链可变区的多核苷酸序列分别如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4所示。
进一步地，编码所述单克隆抗体14B1的重链恒定区的多核苷酸序列均如SEQ IDNO：6所示，轻链恒定区的多核苷酸序列均如SEQ ID NO：8所示。
在本发明的第三方面，提供了一种包含所述核酸的表达载体，所述表达载体能够在原核或者真核宿主细胞中表达所述核酸。
所述载体具体可以为质粒载体、噬菌体载体、病毒载体或哺乳动物表达载体。本发明具体采用哺乳动物表达载体。
在本发明的第四方面，提供了一种包含所述的表达载体的工程菌或真核宿主细胞。
在本发明的第五方面，提供了所述的单克隆抗体在制备COVID-19治疗药物或新冠病毒检测产品中的应用。
本发明实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
本发明提供的靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体14B1显示出对SARS-COV-2感染细胞良好的中和保护效果。本发明的结果显示，所述抗体在制备COVID-19治疗药物中具有广泛应用的前景。具体地，本发明公开的单克隆抗体还具有以下的技术优势：
(1)全人源，在临床应用上，不需要进行人源化改造。
(2)高中和活性，在SARS-COV-2感染的细胞模型上，14B对SARS-CoV-2野生型的半数有效浓度(EC50)为7.664ng/mL；14B对SARS-CoV-2Delta株(B.1.617.2)的半数有效浓度(EC50)为8.548ng/mL。
(3)作用机制明确：14B1与RBD高度特异结合，显示单抗是靶向受体结合区域的，通过特异性阻断病毒与受体的结合发挥抗病毒效应。
(4)稳定性好：因为单抗基因来自人体的同一个细胞，是天然配对的，已知人体内IgG1抗体的半衰期是21～28天，理论上公开的单抗具有一致的人体内半衰期。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1为流式细胞仪单细胞分选图；
图2为单克隆抗体可变区基因扩增自动核酸电泳仪检测图谱；
图3为亲和层析纯化后的变性SDS-PAGE检测图谱；
图4为检测14B1和RBD蛋白的结合活性随浓度变化的曲线图；
图5为抗体在假病毒细胞模型上的EC50测定曲线图；其中，图5A为单克隆抗体14B1对SARS-CoV-2野生型的半数有效浓度；图5B为单克隆抗体14B1对SARS-CoV-2Delta株(B.1.617.2)的半数有效浓度；
图6为抗体在真病毒细胞模型上的EC50测定曲线图；其中，图6左图为单克隆抗体14B对SARS-CoV-2野生型的半数有效浓度；图6右图为单克隆抗体14B1对SARS-CoV-2Delta株(B.1.617.2)的半数有效浓度。
具体实施方式
下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。
在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
下面将结合实施例及实验数据对本申请的单克隆抗体及其制备方法与应用效果进行详细说明。
实施例1、人源抗SARS-CoV-2单克隆抗体的筛选和制备
1、准备96孔板：每孔20μl去RNA酶水+20U RNA酶抑制剂，盖好封板膜，放4℃待用
2、准备样品：
(1)复苏细胞：将冻存的分离自新冠肺炎恢复者外周血的PBMC细胞从-80℃取出，迅速置于37℃的温水中，待细胞融化后，800rpm离心5min，倒去上清；用2-3ml FPBS重悬到流式管中，配平后800rpm离心5min，倒去上清；再用2-3ml FPBS重悬，离心，倒上清。最后加入100μl FPBS重悬，吸取2μl稀释10倍进行细胞计数。
(2)单染管：7管(FVS-780、CD3-BV510、CD4-BV510、CD8-BV510、CD19-PE、IgD-BB700、CD20-BV421、CD38-FITC),每管3×106个细胞，按照说明书推荐的抗体浓度将染料分别加入到装有细胞的流式管中，用FPBS将各反应体积补足50μl。
(3)裸细胞对照：1管，3×106个细胞，用FPBS补足50μl
(4)用来分选的细胞：1管，先确定细胞的数量，终浓度为100μl体系(1×106cells)，同时加入FVS-780、CD3-BV510、CD4-BV510、CD8-BV510、CD19-PE、IgD-BB700、CD20-BV421、CD38-FITC和Biotin-S1荧光染料。
(5)将样品于4℃避光孵育1h。
(6)每管加入3ml FPBS，于4℃，800g离心5min，倒去上清，重复清洗两次。
(7)用400μl FPBS重悬后，用40μm细胞筛去除细胞团，4℃避光保存供分选。
3、流式分选：选择CD19+，CD3-，CD4-，CD8-，IgD-，CD38+，CD20-，S1+的细胞进行分选。流式分选的结果见图1，首先选出淋巴细胞，然后选出未粘连的单个细胞，然后选出活细胞，然后选出CD19+、CD3－、CD4－、CD8－的B细胞，然后选出IgD－的成熟B细胞，最后选出S1+的成熟B细胞，即为我们的目标细胞。
4、利用单细胞-PCR技术扩增全人源单抗可变区基因
4.1反转录PCR参考说明书(QIAGEN，210212)，程序简单介绍如下：通过流式细胞仪分选了94个细胞。向每个反应体系中同时加入以下全部的针对重链(heavy chain，H)、Kappa轻链(kappa chain，κ)、Lamda轻链(Lamda chain，λ)各亚型的特异引物(引物序列见表1)。
引物：
H：5′L-VH 1、L-VH 3、L-VH 4/6，5′L-VH 5、Hu IgG-const-anti、3′CμCH1
κ：5′L Vκ1/2、5′L Vκ3、5′L Vκ4、3′Cκ543–566
λ：5′L Vλ1、5′L Vλ2、5′L Vλ3、5′L Vλ4/5、5′L Vλ6、5′L Vλ7、5′L Vλ8、3′Cλ
表1-反转录PCR引物
PCR反应体系中包含：5×缓冲液6μL、dNTP 1.2μL、反转录酶(Takara生物技术有限公司，RR036A)1.2μL、引物如上、模板为单细胞，水补齐至30μL。
PCR反应条件为：50℃反转录30min；接着，95℃预变性15min，95℃40s，55℃30s，72℃1min，40个循环，最后72℃延伸10min。
4.2巢式PCR
取反转录产物1ul为模板，进行PCR反应扩增H、κ、λ的可变区：扩增重链可变区、kappa轻链可变区和λ轻链可变区的引物如下表2所示。
表2.巢式PCR引物
注：单独划线部分用于与上游片段融合，划线黑体部分用于与下游片段的融合。
PCR反应体系中包含：DNA聚合酶混合物(康为世纪生物科技有限公司，CW2849)12.5μL、引物如上、模板为反转录产物1μL、水补齐至25μL。
PCR反应条件为：94℃预变性4min，接着，94℃30s，57℃30s，72℃45min，40个循环，最后72℃延伸10min。
4.3自动核酸电泳仪进行检测
自动核酸电泳检测的部分结果见图2，图中仅显示了14B1的重链和轻链可变区条带。
5、可变区序的多核苷酸序列的合成
委托苏州金唯智生物科技有限公司，根据上述多核苷酸序列合成抗体的可变区DNA序列。在抗体重链可变区和轻链可变区前添加信号肽序列和限制性酶切位点(5’-GAATTCGCCACCATGGAGACAGACACCCTGCTCCTGTGGGTGCTGCTG-3’)，尾部添加限制性酶切位点(5’-GGTACC-3’)。
6、质粒表达载体的构建
委托苏州金唯智生物科技有限公司，根据抗体重链恒定区DNA序列和轻链恒定区DNA区序列，在重链和轻链恒定区DNA序列前添加限制性酶切位点(5’-GAGCTCGGTACC-3’),序列尾部添加限制性酶切位点(5’-GCTAGC-3’)，合成带有限制性酶切位点的抗体重链恒定区DNA序列和轻链恒定区DNA区序列(重链恒定区序列由SEQ ID NO:5所示，DNA编码序列由SEQ ID NO:6所示，Kappa型轻链恒定区序列由SEQ ID NO:7所示，DNA编码序列由SEQ IDNO:8所示)。利用限制性内切酶Nhe I和Sac I对pCAGGS空载质粒(可购买于上海远慕生物科技有限公司，货号P0165)和抗体重链恒定区DNA序列进行酶切，酶切后的质粒和抗体恒定区DNA片段利用T4 DNA连接酶进行连接即可得到含有抗体重链恒定区的质粒载体。利用限制性内切酶Nhe I和Sac I对pCAGGS空载质粒和抗体轻链恒定区DNA序列进行酶切，酶切后的质粒和抗体恒定区DNA片段利用T4 DNA连接酶进行连接即可得到含有抗体轻链恒定区的质粒载体。
利用限制性内切酶EcoR I和Kpn I对构建的含有抗体重链恒定区的质粒载体和第5步中合成的抗体重链可变区进行酶切，对酶切产物连接，即得到了可用于表达14B1抗体重链的真核表达载体。利用限制性内切酶EcoR I和Kpn I对构建的含有抗体轻链恒定区的质粒载体和第5步中合成的抗体轻链可变区进行酶切，利用T4 DNA连接酶对酶切产物连接，即得到了可用于表达14B1抗体轻链的真核表达载体。上述两个载体即可通过转染真核细胞的方式，进行抗体表达。
单克隆抗体14B1的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ IDNO:1第35-42、60-67、106-107位氨基酸序列所示；轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQID NO:3第36-41、59-61、98-104位氨基酸序列所示。具体如表3所示。
表3
7、单抗的瞬时表达和亲和层析纯化
使用Expi293表达系统，取15ug重链和15ug轻链混合后转染Expi 293F细胞，按照转染试剂的说明书进行操作(上海李记生物科技有限公司，EZ Trans Plus，AC04L011)，5-6天后收获培养液，离心后上清约50ml，使用体积为5ml的预装Protein A亲和层析柱，上样前使用20mM PBS平衡，待电导显示到基线后进样，上样结束后，使用20mM PBS洗涤色谱柱至基线平稳，使用0.1M pH3.0的甘氨酸缓冲液洗脱目的蛋白，待OD280近基线后，停止收集，使用至少3个柱体积的20mM的PBS洗涤色谱柱，至基线平稳后，用20％的乙醇洗涤色谱柱。亲和层析纯化后的单抗SDS-PAGE检测结果见图3。由图3可知，成功纯化获得单克隆抗体14B1。
实施例2、人源抗SARS-CoV-2单克隆抗体14B1与RBD的结合活性分析
1、包被：取RBD抗原用包被液稀释至浓度3μg/mL，包被酶标板，每孔100μL，4℃包被过夜。
2、封闭：每孔加入300μL PBST洗液，洗涤3次×3min/次；拍净孔内液体，加入2％BSA，250μL/孔，37℃封闭1h。
3、样品孵育：每孔加入300μL PBST洗液，洗涤3次×3min/次；拍净孔内液体，加入PBS稀释后的纯化单抗，首孔9ug/ml,3倍系列稀释100μL/孔，37℃孵育2h。
4、二抗孵育：洗涤5次，操作同上；加入HRP羊抗人FC二抗(1:20000稀释)，100μL/孔，37℃孵育1h。
5、显色：洗涤5次，操作同上；每孔加入100μL TMB单组分显色液，37℃显色15min后每孔加50μL终止液终止反应，使用酶标仪检测450nm处的吸光值。使用Graph Pad非线性回归，四参数拟合绘制标准曲线，并根据标准曲线及稀释倍数计算单抗的EC50浓度。
6、结果：见图4。图4中，曲线显示14B1与RBD的检测结果，显示特异结合呈现剂量反应关系，表明单抗是RBD特异的。
实施例4、SARS-CoV-2假病毒细胞模型上中和活性分析
1、假病毒包装：根据野生型SARS-CoV-2和SARS-CoV-2突变株刺突蛋白(S蛋白)包装不同的假病毒。将hACE2基因稳定转染入BHK-21细胞，构建稳定表达人ACE2的细胞hACE2-BHK-21细胞。通过lipofectamine 2000(Biosharp，BL623B)将表达不同S蛋白的质粒转染Vero-E6细胞。24h后，用DMEM稀释5h的VSV-dG-fLuc(1×106％组织培养感染剂量[TCID50]/mL)接种转染细胞，然后补充含有vsv-g单克隆抗体(I1-杂交瘤，培养上清，1:20)的生长培养基(DMEM,10％胎牛血清)。24小时后，收集含SARS-CoV-2假病毒的上清液，在3000rpm离心10分钟，分装，80℃冷冻保存。假病毒的TCID50用一系列稀释法感染BHK-21-hACE2细胞，并按Reed-Muench方法计算。
2、稀释抗体：SARS-CoV-2假病毒(3×105TCID50/孔)与稀释后的血清在96孔白色平板上室温孵育30min，然后与胰蛋白酶处理过的BHK-21-hACE2细胞以2×104/孔的密度混合。
3、检测Luciferase读值并分析：培养16h后，去除感染细胞的培养基，用1×Bright-Glo荧光素酶测定试剂(Promega)裂解细胞，使用SpectraMax iD3多孔发光仪(Molecular devices)进行化学发光检测。用GraphPad Prism 7软件计算50％中和稀释效价(NT50)，非线性回归曲线拟合。
结果：见图5(横坐标表示抗体浓度，纵坐标表示相对阴性对照组的中和效果％)。在SARS-COV-2的假病毒模型上，14B1对SARS-CoV-2野生型假病毒的半数有效浓度(EC50)为3.581ng/mL；14B1对SARS-CoV-2Delta假病毒株(B.1.617.2)的半数有效浓度(EC50)为5.822ng/mL。
实施例5、SARS-CoV-2感染时细胞模型上中和活性分析
1、将Vero E6细胞用0.25％的胰酶消化后，用培养基(DMEM+10％FBS)稀释至5×105cells/mL浓度，接种到24孔细胞培养板中，接种体积0.5mL/孔，置37℃，5％CO2细胞培养箱培养过夜。
2、实验当天，将抗体用培养基DMEM+2％FBS自初始浓度，5倍系列稀释，加入空白的24孔培养板，体积300μL/孔；随即每孔加入300μL COVID-19病毒悬液(用DMEM+2％FBS稀释病毒，加入120PFU/孔)，充分混匀，置细胞培养箱孵育1h。
3、弃去24孔板中细胞培养上清，每孔加入500μL共孵育后的病毒-抗体混合悬液；另设置存活对照(不加病毒和抗体)和死亡对照(只加病毒)，置37℃5％CO2细胞培养箱继续培养2h。弃去培养基，加入含1％甲基纤维素的培养基继续培养。
4、72h后弃去细胞培养上清，加入500μL结晶紫染色液室温染色30min，弃去染液，加入1mL/孔纯水，重复洗涤3次。
5、弃尽洗液，用吸水纸拍干板孔中水份，统计病毒空斑的个数并记录，计算抗体EC50值。
6、单抗在细胞模型上的保护效果和EC50的结果，在SARS-COV-2感染的细胞模型上，14B1对SARS-CoV-2野生型的半数有效浓度(EC50)为7.664ng/mL；14B对SARS-CoV-2Delta株(B.1.617.2)的半数有效浓度(EC50)为8.548ng/mL。
最后，还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (10)
1.一种靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体14B1，其特征在于，所述全人源单克隆抗体14B1包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有的三个互补决定区的氨基酸序列分别为：EFTIDDYA、ISGDGGRT和AK，所述轻链可变区具有的三个互补决定区的氨基酸序列分别为：QNISAN、GAS和QHYNNWP。
2.根据权利要求1所述的一种靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体14B1，其特征在于，所述单克隆抗体14B1的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。
3.根据权利要求1所述的一种靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体14B1，其特征在于，所述单克隆抗体14B1的重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示，轻链恒定区的氨基酸序列均如SEQ ID NO：7所示。
4.根据权利要求1所述的一种靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体14B1，其特征在于，所述单克隆抗体还包括：
所述单克隆抗体的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸得到的具有相同功能的抗体；
或者包括具有与所述重链可变区具有至少80％的同源性的氨基酸序列的重链可变区；和与所述轻链可变区具有至少80％的同源性的氨基酸序列的轻链可变区；
或者所述单克隆抗体的N端和/或C端连接标签得到的抗体。
5.一种编码权利要求1-4任一所述单克隆抗体的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括编码所述重链可变区的核酸分子和编码所述轻链可变区的核酸分子。
6.根据权利要求5所述的的核酸分子，其特征在于，编码所述单克隆抗体14B1的重链可变区和轻链可变区的多核苷酸序列分别如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4所示。
7.根据权利要求5所述的的核酸分子，其特征在于，编码所述单克隆抗体14B1的重链恒定区的多核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示，轻链恒定区的多核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示。
8.一种包含权利要求5-7任一项所述核酸分子的表达载体，其特征在于，所述表达载体能够在原核或者真核宿主细胞中表达所述核酸。
9.一种包含权利要求8所述的表达载体的工程菌或真核宿主细胞。
10.权利要求1-4任一所述的单克隆抗体在制备COVID-19治疗药物或新冠病毒检测产品中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211149172.6A CN115724955A (zh) | 2022-09-21 | 2022-09-21 | 靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体14B1及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211149172.6A CN115724955A (zh) | 2022-09-21 | 2022-09-21 | 靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体14B1及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115724955A true CN115724955A (zh) | 2023-03-03 |
Family
ID=85293266
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211149172.6A Pending CN115724955A (zh) | 2022-09-21 | 2022-09-21 | 靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体14B1及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115724955A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116425871A (zh) * | 2023-05-24 | 2023-07-14 | 优睿赛思(武汉)生物科技有限公司 | 抗新冠病毒s蛋白人源化抗体及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021180218A1 (zh) * | 2020-03-13 | 2021-09-16 | 北京大学 | 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用 |
| CN114989291A (zh) * | 2021-11-25 | 2022-09-02 | 浙江安维珞诊断技术有限公司 | 一种靶向RBD的抗SARS-CoV-2全人源化单克隆抗体及应用 |
-
2022
- 2022-09-21 CN CN202211149172.6A patent/CN115724955A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021180218A1 (zh) * | 2020-03-13 | 2021-09-16 | 北京大学 | 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用 |
| CN114989291A (zh) * | 2021-11-25 | 2022-09-02 | 浙江安维珞诊断技术有限公司 | 一种靶向RBD的抗SARS-CoV-2全人源化单克隆抗体及应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| LATERZA, R等: "SARS-CoV-2 antibodies: Comparison of three high-throughput immunoassays versus the neutralization test", 《EUROPEAN JOURNAL OF CLINICAL INVESTIGATION》, vol. 51, no. 7, 31 July 2021 (2021-07-31), pages 13573 * |
| 康静等: "野生型SARS-CoV-2感染康复者血清中SARS-CoV-2 Omicron突变株BA.1.1.529、BA.2和BA.3的中和抗体评估", 《免疫学杂志》, vol. 38, no. 08, 31 August 2022 (2022-08-31), pages 711 - 714 * |
| 江汉湖: "《食品微生物学 第2版》", 31 August 2005, 中国农业出版社, pages: 389 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116425871A (zh) * | 2023-05-24 | 2023-07-14 | 优睿赛思(武汉)生物科技有限公司 | 抗新冠病毒s蛋白人源化抗体及其应用 |
| CN116425871B (zh) * | 2023-05-24 | 2023-10-20 | 优睿赛思(武汉)生物科技有限公司 | 抗新冠病毒s蛋白人源化抗体及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO2021180218A9 (zh) | 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用 | |
| CN111603557A (zh) | 一种包膜替换型病毒载体疫苗及其构建方法 | |
| Makino et al. | Junctional adhesion molecule 1 is a functional receptor for feline calicivirus | |
| Maruyama et al. | Ebola virus can be effectively neutralized by antibody produced in natural human infection | |
| Rose et al. | Glycoprotein exchange vectors based on vesicular stomatitis virus allow effective boosting and generation of neutralizing antibodies to a primary isolate of human immunodeficiency virus type 1 | |
| Takada et al. | Identification of protective epitopes on ebola virus glycoprotein at the single amino acid level by using recombinant vesicular stomatitis viruses | |
| CN106008709B (zh) | 一种特异性结合PRRS病毒非结构蛋白Nsp4纳米抗体及其应用 | |
| CN104710528A (zh) | 一种特异性结合PRRS病毒非结构蛋白Nsp9纳米抗体及其应用 | |
| CA2548942C (en) | Anti-sars monoclonal antibodies | |
| CN106279410B (zh) | 一种二型登革热病毒ns1蛋白多价纳米抗体及制备方法 | |
| CN107056938B (zh) | 人源抗h7n9禽流感病毒高亲和力抗体10k及其应用 | |
| WO2023216826A1 (zh) | 一种抗裂谷热病毒的单克隆抗体a38及应用 | |
| Rani et al. | Increased antibody affinity confers broad in vitro protection against escape mutants of severe acute respiratory syndrome coronavirus | |
| CN107190013A (zh) | 一种以人Ad5复制缺陷型腺病毒为载体的寨卡病毒病疫苗 | |
| Bergman et al. | Vesicular stomatitis virus expressing a chimeric Sindbis glycoprotein containing an Fc antibody binding domain targets to Her2/neu overexpressing breast cancer cells | |
| CN115724955A (zh) | 靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体14B1及其应用 | |
| CN115724956A (zh) | 靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体7B3及其应用 | |
| JP2023543472A (ja) | ウイルスベクター及びその使用 | |
| Bergman et al. | Preferential targeting of vesicular stomatitis virus to breast cancer cells | |
| CN111925998A (zh) | 模拟SARS-CoV-2感染的系统及其制备方法与应用 | |
| Verheije et al. | Redirecting coronavirus to a nonnative receptor through a virus-encoded targeting adapter | |
| CN116063466A (zh) | 抗SARS-CoV-2病毒N蛋白的结合抗体及其应用 | |
| CN115947838A (zh) | 一种全人源新冠病毒变异株强效中和抗体h4b6及应用 | |
| CN110294802B (zh) | 一种单克隆抗体10g12及其应用 | |
| CN105542002A (zh) | 一种单克隆抗体q206及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |