CN109563157B - 特异性地结合至寨卡病毒表位的新型抗体和其用途 - Google Patents

特异性地结合至寨卡病毒表位的新型抗体和其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN109563157B
CN109563157B CN201780042888.7A CN201780042888A CN109563157B CN 109563157 B CN109563157 B CN 109563157B CN 201780042888 A CN201780042888 A CN 201780042888A CN 109563157 B CN109563157 B CN 109563157B
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
antigen
binding fragment
amino acid
seq
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201780042888.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109563157A (zh
Inventor
D·柯蒂
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Humabs Biomed SA
Original Assignee
Humabs Biomed SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Humabs Biomed SA filed Critical Humabs Biomed SA
Priority to CN202211721078.3A priority Critical patent/CN116199775A/zh
Publication of CN109563157A publication Critical patent/CN109563157A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109563157B publication Critical patent/CN109563157B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1081—Togaviridae, e.g. flavivirus, rubella virus, hog cholera virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/18—Togaviridae; Flaviviridae
    • G01N2333/183—Flaviviridae, e.g. pestivirus, mucosal disease virus, bovine viral diarrhoea virus, classical swine fever virus (hog cholera virus) or border disease virus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明涉及强力地中和ZIKV感染的抗体和其抗原结合片段。本发明还涉及与抗体和抗原结合片段结合的抗原位点，以及编码这种抗体和抗体片段的核酸和产生这种抗体和抗体片段的无线增殖化B细胞。另外，本发明涉及本发明的抗体和抗体片段在筛选方法中以及在诊断、预防和治疗ZIKV感染中的用途。

Description

特异性地结合至寨卡病毒表位的新型抗体和其用途
本发明涉及特异性地结合至寨卡病毒(ZIKV)表位的抗体及其抗原结合片段。这种抗体(i)强力地中和寨卡病毒(ZIKV)的感染或(ii)针对NS1 ZIKV并且可以被用作诊断剂。本发明还涉及与抗体和抗原结合片段结合的抗原位点，以及编码抗体的核酸和产生这种抗体和抗体片段的无限增殖化B细胞。另外，本发明涉及本发明的抗体和抗体片段在筛选方法中以及在ZIKV感染的诊断、预防和治疗中的用途。
寨卡病毒(ZIKV)，一种蚊媒的黄病毒属，是突发公共卫生事件。ZIKV于1947年首次分离自乌干达的寨卡森林中的猕猴(G.W.A.Dick,S.F.Kitchen,A.J.Haddow,Zikavirus.I.Isolations and serological specificity.Trans.R.Soc.Trop.Med.Hyg.46,509–520(1952))，并且于1954年在尼日利亚报道了首次人类感染(F.N.Macnamara,Zikavirus:a report on three cases of human infection during an epidemic ofjaundice in Nigeria.Trans.R.Soc.Trop.Med.Hyg.48,139–145(1954))。从那以后，ZIKV感染在非洲和东南亚偶尔地被报道(D.Musso,Van Mai Cao-Lormeau,D.J.Gubler,Zikavirus:following the path of dengue and chikungunya？The Lancet.386,243–244(2015))，但是于2007年在密克罗尼西亚(M.R.Duffy et al.,Zika virus outbreak onYap Island,Federated States of Micronesia.N Engl J Med.360,2536–2543(2009))以及于2013-14年在法属玻里尼西亚报道了流行病，其中病毒随后传播至大洋洲的其它国家(V.-M.Cao-Lormeau,D.Musso,Emerging arboviruses in the Pacific.Lancet.384,1571–1572(2014)；D.Musso,E.J.Nilles,V.-M.Cao-Lormeau,Rapid spread of emergingZika virus in the Pacific area.Clin.Microbiol.Infect.20,O595–6(2014))。在其于2015年引入巴西之后，ZIKV已经快速地传播并且在2016年2月，世界卫生组织(WHO)宣布其是国际关注的突发公共卫生事件(L.R.Baden,L.R.Petersen,D.J.Jamieson,A.M.Powers,M.A.Honein,Zika Virus.N.Engl.J.Med.374,1552–1563(2016)；A.S.Fauci,D.M.Morens,ZikaVirus in the Americas-Yet Another Arbovirus Threat.N Engl J Med,160113142101009(2016)；D.L.Heymann et al.,Zika virus and microcephaly:why isthis situation a PHEIC？Lancet.387,719–721(2016))。ZIKV感染的主要途径是被黑斑蚊(Aedes mosquitos)咬伤，但是病毒可以通过性(D.Musso et al.,Potential sexualtransmission of Zika virus.Emerg Infect Dis.21,359–361(2015))和垂直传播(J.Mlakar et al.,Zika Virus Associated with Microcephaly.N Engl J Med.374,951–958(2016))。虽然大多数ZIKV感染是无症状的或者仅引起温和症状，但是有证据表明ZIKV感染可以导致成年人的神经系统并发症，比如格-巴二氏综合症(V.-M.Cao-Lormeauet al.,Guillain-BarréSyndrome outbreak associated with Zika virus infectionin French Polynesia:a case-control study.Lancet.0(2016),doi:10.1016/S0140-6736(16)00562-6)，和先天出生缺陷，包括胎儿发育中的头小畸形(G.Calvet,R.S.Aguiar,A.Melo,S.A.Sampaio,Detection and sequencing of Zika virus from amniotic fluidof fetuses with microcephaly in Brazil:a case study.Lancet Infect Dis(2016),doi:10.1016/s1473-3099(16)00095-5；J.Mlakar et al.,Zika Virus Associated withMicrocephaly.N Engl J Med.374,951–958(2016)；E.J.Rubin,M.F.Greene,L.R.Baden,Zika Virus and Microcephaly.N Engl J Med(2016),doi:10.1056/NEJMe1601862)，这很可能通过其感染人神经前体细胞的能力(H.Tang et al.,Zika Virus Infects HumanCortical Neural Progenitors and Attenuates Their Growth.Stem Cell,1–5(2016))。
ZIKV属于黄病毒属，黄病毒属还包括西尼罗河病毒、登革热病毒、蜱传脑炎病毒、黄热病病毒、和可以引起脑炎的几种其他病毒。黄病毒属病毒被二十面体和球形几何结构包膜。直径是大约50nm。基因组是线性正义RNA并且是非节段的，长度为大约10-11kb。黄病毒属病毒的基因组编码3种结构蛋白(Capsid、prM和Envelope)以及8种非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5和NS5B)。
虽然黄病毒属包膜(E)蛋白介导融合并且是中和抗体的主要靶标，但是非结构蛋白1(NS1)由感染的细胞分泌并且参与免疫逃避和发病机制(D.A.Muller,P.R.Young,Theflavivirus NS1 protein:molecular and structural biology,immunology,role inpathogenesis and application as a diagnostic biomarker.Antiviral Res.98,192–208(2013))。两个最近的结构研究表明ZIKV的E蛋白与其他黄病毒属病毒(比如登革热病毒(DENV)、黄热病病毒(YFV)和西尼罗河病毒(WNV))的E蛋白之间的高水平的结构相似性，而且揭示了可能与ZIKV亲神经性相关的独特性质(L.Dai et al.,Structures of the ZikaVirus Envelope Protein and Its Complex with a Flavivirus Broadly ProtectiveAntibody.Cell Host Microbe(2016),doi:10.1016/j.chom.2016.04.013；D.Sirohi etal.,The
Figure GDA0003868052510000021
resolution cryo-EM structure of Zika virus.Science,aaf5316(2016))。类似地，ZIKV NS1的结构分析揭示了与其他黄病毒属病毒的NS1的保守性质，但是具有不同的静电特性(J.Kim et al.,Zika virus NS1 structure reveals diversity ofelectrostatic surfaces among flaviviruses,1–6(2016))。
某些黄病毒属病毒特有的现象是由被异源病毒的既往感染引起的交叉反应性抗体的疾病增强活性。在4种血清型已知的登革热病毒(DENV)的情况下，存在流行病学证据：初次感染保护免受相同血清型的再感染，但是在不同血清型的再感染之后，表示发展严重疾病的危险因子(S.B.Halstead,Dengue Antibody-Dependent Enhancement:Knowns andUnknowns.Microbiol Spectr.2,249–271(2014))。加重的疾病由E和prM特异性抗体触发，该抗体未能中和进入的病毒而是通过Fc受体表达(FcR+)细胞增强其捕获，导致增强的病毒复制和交叉反应性记忆T细胞的活化。所得到的细胞因子爆发被认为是已知为登革出血热/登革休克综合征的最严重形式疾病的基础(S.B.Halstead,Neutralization andantibody-dependent enhancement of dengue viruses.Adv Virus Res.60,421–467(2003)；G.Screaton,J.Mongkolsapaya,S.Yacoub,C.Roberts,New insights into theimmunopathology and control of dengue virus infection.Nat Rev Immunol.15,745–759(2015)。抗体在严重登革热中的作用受到研究的支持：研究表明婴幼儿中的母源抗体的减弱水平代表发展严重登革热疾病的较高风险(S.B.Halstead,Neutralization andantibody-dependent enhancement of dengue viruses.Adv Virus Res.60,421–467(2003)；S.B.Halstead et al.,Dengue hemorrhagic fever in infants:researchopportunities ignored.Emerging Infect Dis.8,1474–1479(2002)；T.H.Nguyen etal.,Dengue hemorrhagic fever in infants:a study of clinical and cytokineprofiles.JInfect Dis.189,221–232(2004)；A.L.Rothman,Dengue:defining protectiveversus pathologic immunity.J Clin Invest.113,946–951(2004))。
最近，表明与DENV包膜蛋白反应的大多数抗体也结合至ZIKV，但是识别主要的线性融合环表位(fusion-loop epitope)(FLE)的那些不中和ZIKV并且相反促进ZIKV感染的抗体依赖性增强(ADE)(Dejnirattisai W,Supasa P,Wongwiwat W,Rouvinski A,Barba-Spaeth G,Duangchinda T,Sakuntabhai A,Cao-Lormeau VM,Malasit P,Rey FA,Mongkolsapaya J,Screaton GR:Dengue virus sero-cross-reactivity drivesantibody-dependent enhancement of infection with zika virus.NatImmunol.2016Jun 23.doi:10.1038/ni.3515.[在印刷之前电子公布])。
而且，根据WHO，潜在地与寨卡病毒感染相关联的头小畸形和其他神经系统紊乱的病例的最近增加促进检测寨卡病毒感染的实验室测试的需求增加。在这种情况下，要求抗体的高特异性，以便于将ZIKV感染与其他黄病毒属病毒的感染区分。但是，已知的抗寨卡病毒抗体通常与其他黄病毒属病毒交叉反应，因而对于将ZIKV感染与其他黄病毒属病毒的感染区分是没有用的。
鉴于以上，本发明的目标是提供新型抗体，其特异性地结合至ZIKV表位。本发明的目标也是提供强力地中和抗ZIKV抗体。这些抗体优选地不促进寨卡病毒感染的抗体依赖性增强(ADE)。本发明的目标也是提供用于诊断和测试ZIKV感染的高度特异性抗ZIKV抗体以及使用这些抗体的诊断方法。
本发明的目标通过要求保护的主题来解决。
虽然下文详细描述了本发明，但是应当理解本发明不限于本文描述的具体方法、方案和试剂，因为它们可以改变。还应当理解，本文中使用的术语不意欲限制本发明的范围，其将仅由所附权利要求书限定。除非另有限定，本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同的含义。
在下文中，将描述本发明的要素。这些要素与具体实施方式一起被列举，但是应当理解，它们可以以任何方式和任何数目进行组合以产生另外的实施方式。多方面描述的实施例和优选的实施方式不应当被解释为将本发明限制为仅明确地描述的实施方式。本说明书应当被理解为支持和包含将明确地描述的实施方式与任意数目的公开的和/或优选的要素进行组合的实施方式。另外，在本申请中的所有描述的要素的任何排列与组合应当被视为被本申请的说明书公开，除非上下文另外指示。
贯穿本说明书和所附权利要求书，除非上下文另外要求，术语“包括(comprise)”和变型比如“包括(comprises,comprising)”将被理解为暗示包含规定的成员、整数或步骤但是不排除任何其它非规定的成员、整数或步骤。术语“由……组成”是术语“包括”的特定实施方式，其中任何其它非规定的成员、整数或步骤被排除。在本发明的背景下，术语“包括”涵盖术语“由……组成”。术语“包括(comprising)”因而涵盖“包含(including)”以及“由……组成”，例如，“包括”X的组合物可以唯一地由X组成或者可以包含一些另外的组成，例如X+Y。
术语“一个(a,an)”和“该(the)”以及在描述本发明的背景下(具体地在权利要求书的背景下)使用的类似引用对象将被解释为涵盖单数和复数形式，除非本文中另有指示或者上下文明显矛盾。本文中值的范围的叙述仅意欲充当分别指落入该范围内的每个单独的值的速写方法。除非本文中另有指示，每个单个值被并入说明书，如同其在本文中单独叙述一样。说明书中语言不应当被解释为指示对实践本发明必不可少的任何非要求保护的要素。
词语“基本上”不排除“完全”，例如“基本上不含”Y的组合物可以完全不含Y。必要时，词语“基本上”可以从本发明的限定中省略。
涉及数值x的术语“大约”意思是x±10％。
如本文所使用的术语“疾病”与术语“紊乱”和“病症”(如在医疗状况下)意欲是通常同义的，并且可交换地使用，因为它们都反映人或动物体或者其身体部位之一的异常状况，该异常状况损害正常功能，通常由有区别的征兆和症状显示，并且使得人和动物具有降低的寿命或生活质量。
如本文所使用，提及对象或患者的“治疗”意欲包括阻止、预防、减轻、改善和疗法。术语“对象”或“患者”在本文中可交换地使用，意思是包括人的所有哺乳动物。对象的实例包括人、牛、狗、猫、马、山羊、绵羊、猪和兔。在一个实施方式中，患者是人。
如本文所使用，术语“抗原结合片段”、“片段”和“抗体片段”可交换地使用，指的是本发明的保留抗体的抗原结合活性的抗体的任何片段。抗体片段的实例包括但不限于单链抗体、Fab、Fab’、F(ab')2、Fv或scFv。进一步，如本文所使用的术语“抗体”包括抗体和其抗原结合片段二者。
如本文所使用，术语“抗体”涵盖各种形式的抗体，其包括但不限于全抗体、抗体片段特别是抗原结合片段、人抗体、嵌合抗体、人源化抗体、重组抗体和基因工程化抗体(变体或突变抗体)，只要保留了根据本发明的固有特性。人抗体和单克隆抗体是优选的并且尤其优选的是人单克隆抗体，具体地为重组人单克隆抗体。
人抗体在现有技术中是熟知的(van Dijk,M.A.,和van de Winkel,J.G.,Curr.Opin.Chem.Biol.5(2001)368-374)。人抗体也在转基因动物(例如，小鼠)中产生，这些转基因动物在免疫之后能够在缺乏内源免疫球蛋白产生的情况下产生人抗体的全部所有组成成分或选择。在这样的种系突变小鼠中转移人种系免疫球蛋白基因阵列将导致在抗原攻击之后产生人抗体(参见，例如，Jakobovits,A.,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90(1993)2551-2555；Jakobovits,A.,et al.,Nature 362(1993)255-258；Bruggemann,M.,etal.,Year Immunol.7(1993)3340)。人抗体也在噬菌体展示文库中产生(Hoogenboom,H.R.,和Winter,G.,J.Mol.Biol.227(1992)381-388；Marks,J.D.,et al.,J.Mol.Biol.222(1991)581-597)。Cole等和Boerner等的技术也可用于制备人单克隆抗体(Cole et al.,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,p.77(1985)；和Boerner,P.,et al.,J.Immunol.147(1991)86-95)。优选地，人单克隆抗体通过使用如在Traggiai E,Becker S,Subbarao K,Kolesnikova L,Uematsu Y,Gismondo MR,Murphy BR,Rappuoli R,Lanzavecchia A.(2004):An efficient method to make human monoclonal antibodiesfrom memory B cells:potent neutralization of SARS coronavirus.Nat Med.10(8):871-5中描述的改善的EBV-B细胞无限增殖化来制备。如本文所使用的术语“人抗体”也包括这样的抗体：其例如在可变区中被修饰以生成如本文描述的根据本发明的性质。如本文所使用，术语“可变区”(轻链(VL)的可变区，重链(VH)的可变区)表示直接地参与结合抗体至抗原的轻和重链对的每个。
本发明的抗体可以具有任何同种型(例如，IgA、IgG、IgM，即α、γ或μ重链)，但是将优选地是IgG。在IgG同种型内，抗体可以是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类，其中IgG1是优选的。本发明的抗体可以具有κ或λ轻链。
优选地，根据本发明的抗体或者其抗原结合片段是纯化的抗体、单链抗体、Fab、Fab’、F(ab')2、Fv或scFv。
本发明的抗体因而可以优选地是人抗体、单克隆抗体、人单克隆抗体、重组抗体或纯化抗体。本发明也提供了本发明的抗体的片段，具体地保留抗体的抗原结合活性的片段。这样的片段包括但不限于单链抗体、Fab、Fab’、F(ab')2、Fv或scFv。虽然说明书，包括权利要求书，在一些地方可能明确地涉及抗原结合片段(一种或多种)、抗体片段(一种或多种)、变体(一种或多种)和/或抗体的衍生物(一种或多种)，但是应当理解，术语“抗体”或“本发明的抗体”包括所有范畴的抗体，即抗原结合片段(一种或多种)、抗体片段(一种或多种)、变体(一种或多种)和抗体的衍生物(一种或多种)。
本发明的抗体的片段可以从抗体通过包括利用酶比如胃蛋白酶或木瓜蛋白酶进行消化的方法，和/或通过化学还原裂解二硫键获得。可选地，抗体的片段可以通过重或轻链的序列的一部分的克隆和表达来获得。抗体“片段”包括Fab、Fab’、F(ab')2和Fv片段。本发明还包括衍生自本发明的抗体的重和轻链的单链Fv片段(scFv)。例如，本发明包括scFv，其包含来自本发明的抗体的CDR。还包括的是重或轻链单体和二聚体、单结构域重链抗体、单结构域轻链抗体以及单链抗体，例如单链Fv，在该单链Fv中重和轻链可变结构域通过肽连接体接合。
本发明的抗体片段可以赋予单价或多价相互作用并且包含在上面描述的多种结构中。例如，scFv分子可以被合成以创建三价“三链抗体”或四价“四链抗体(tetrabody)”。scFv分子可以包括导致二价微抗体(minibody)的Fc区的结构域。另外，本发明的序列可以是多特异性分子的成分，其中本发明的序列靶向本发明的表位并且分子的其它区结合至其它靶标。示例性的分子包括但不限于双特异性Fab2、三特异性Fab3、双特异性scFv和双抗体(Holliger and Hudson,2005,Nature Biotechnology 9:1126-1136)。
根据本发明的抗体可以以纯化形式提供。典型地，抗体将存在于基本上不含其它多肽的组合物中，例如其中少于90％(按重量计)、通常地少于60％并且更通常地少于50％的组合物由其它多肽组成。
根据本发明的抗体在人中和/或在非人(或异源)宿主中，例如在小鼠中可以是免疫原性的。例如，抗体可以具有如此个体决定簇：其在非人宿主中是免疫原性的，但是在人宿主中不是免疫原性的。用于人用途的本发明的抗体包括不能容易地从宿主比如小鼠、山羊、兔、大鼠、非灵长类哺乳动物等分离并且通常不能通过人源化或从异种小鼠获得的那些抗体。
如本文所使用，“中和抗体”是如此抗体：其可以中和，即阻止、抑制、降低、阻碍或干扰病原体引起和/或保持(perpetuate)宿主中的感染的能力。术语“中和抗体”和“中和的抗体(一种或多种)”在本文中可交换地使用。这些抗体可以单独或组合使用，在适当配制之后作为预防或治疗剂，与主动免疫接种联合，作为诊断工具，或者作为本文中描述的生产工具。
剂量通常涉及体重进行表达。因而，表达为[g、mg或其它单位]/kg(或g、mg等)的剂量通常指的是[g、mg或其它单位]“/kg(或g、mg等)体重”，即使术语“体重”没有没明确提及。
术语“特异性结合”和类似的引用对象不涵盖非特异性粘附。
如本文所使用的术语“疫苗”通常被理解为预防或治疗性物质，其提供至少一种抗原，优选地免疫原。抗原或免疫原可以来源于适合于接种疫苗的任何物质。例如，抗原或免疫原可以来源于病原体，比如来自细菌或病毒颗粒等，或者来自肿瘤或癌组织。抗原或免疫原刺激身体的适应性免疫系统以提供适应性免疫应答。具体而言，“抗原”或“免疫原”通常指的是如此物质：其可以被免疫系统，优选地被适应性免疫系统识别，并且其能够触发抗原特异性免疫应答，例如通过形成抗体和/或抗原特异性T细胞作为适应性免疫应答的一部分。通常，抗原可以是或者可以包括可以通过MHC呈递至T细胞的肽或蛋白质。
如本文所使用，“序列变体”(也被称为“变体”)指的是参比序列的任何变更，其中参比序列是在“序列和SEQ ID编号的表格”(序列表)中列举的序列即SEQ ID NO:1到SEQ IDNO:407中的任一种。因而，术语“序列变体”包括核苷酸序列变体和氨基酸序列变体。值得注意的是，在本文中指出的序列变体具体而言是功能性序列变体，即维持例如抗体的生物学功能的序列变体。在本发明的背景下，这种维持的生物学功能优选地是ZIKV感染的中和、抗体与ZIKV E蛋白的结合和/或抗体与ZIKV NS1蛋白的结合。因而，优选的序列变体是如此功能性序列变体：其与参比序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性。如本文所使用，短语“具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能性序列变体”指(i)序列变体具有如本文描述的功能，和(ii)％序列同一性越高，序列变体越优选。换句话说，短语“具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能性序列变体”具体指功能性序列变体与各自的参比序列具有至少70％序列同一性、优选地至少75％序列同一性、优选地至少80％序列同一性、更优选地至少85％序列同一性、更优选地至少88％序列同一性、甚至更优选地至少90％序列同一性、甚至更优选地至少92％序列同一性、仍更优选地至少95％序列同一性、仍更优选地至少96％序列同一性、特别优选地至少97％序列同一性、特别优选地至少98％序列同一性和最优选地至少99％序列同一性。
术语“序列变体”具体包括与参比序列相比包括突变和/或置换的这些变体。Fc部分序列的示例性变体包括但不限于在位置CH2 4、CH2 5、或二者处具有L到A置换的那些。
序列同一性通常关于参比序列(即在本申请中叙述的序列)的全长计算。如本文中提及的百分比同一性可以例如使用BLAST利用由NCBI规定的缺省参数来确定(theNational Center for Biotechnology Information；http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)[Blosum 62矩阵；空位开放罚分(gap open penalty)＝11和空位扩展罚分(gap extensionpenalty)＝1]。
如本文所使用，“核苷酸序列变体”具有变更的序列，其中参比序列中的核苷酸的一个或多个缺失，或被置换，或者一个或多个核苷酸插入参比核苷酸序列的序列中。在本文中通过标准的一字母名称(A、C、G或T)来提及核苷酸。由于遗传密码的简并性，“核苷酸序列变体”可以导致各自的参比氨基酸序列的改变，即导致“氨基酸序列变体”，或者不导致“氨基酸序列变体”。优选的序列变体是这样的核苷酸序列变体，其不导致氨基酸序列变体(沉默突变)，但是其它非沉默突变也在本发明的范围内，尤其是突变的核苷酸序列，其导致氨基酸序列与参比序列具有至少80％、优选地至少90％、更优选地至少95％序列同一性。
“氨基酸序列变体”具有变更的序列，其中参比序列中的氨基酸的一个或多个缺失或被置换，或者一个或多个氨基酸插入参比氨基酸序列的序列中。作为变更的结果，氨基酸序列变体具有与参比序列具有至少80％同一性，优选地与参比序列具有至少90％同一性，更优选地至少95％同一性，最优选地至少99％同一性的氨基酸序列。具有至少90％同一性的变体序列具有不多于10个变更/参比序列的100个氨基酸，即缺失、插入或置换的任何组合。
虽然具有非保守氨基酸置换是可能的，但是优选的置换是保守氨基酸置换，其中置换的氨基酸与参比序列中的相应氨基酸具有类似的结构或化学性质。举例而言，保守氨基酸置换涉及将一种脂肪族或疏水性氨基酸例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸置换为另一种；将一种包含羟基的氨基酸例如丝氨酸和苏氨酸置换为另一种；将一种酸性残基例如谷氨酸或天冬氨酸置换为另一种；将一种包含酰胺的残基例如天冬酰胺和谷氨酰胺替换为另一种；将一种芳香族残基例如苯丙氨酸和酪氨酸替换为另一种；将一种碱性残基例如赖氨酸、精氨酸和组氨酸替换为另一种；和将一种小氨基酸例如丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸和甘氨酸替换为另一种。
氨基酸序列插入包括在从一个残基到包含一百个或更多个残基的多肽的长度范围内的氨基和/或羧基末端融合，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括氨基酸序列的N或C末端与报告分子或酶的融合。
重要地，序列变体的变更不废除各自参比序列的功能，在当前情况下，例如，抗体的序列或者其抗原结合片段结合至相同的表位和/或充分地中和ZIKV的感染的功能。确定哪些核苷酸和氨基酸残基分别可以被置换、插入或缺失而不废除这样的功能的指导通过使用本领域中熟知的计算机程序被发现。
如本文所使用，“衍生自”指定核酸、肽、多肽或蛋白质的核酸序列或氨基酸序列指的是核酸、肽、多肽或蛋白质的起源。优选地，衍生自特定序列的核酸序列或氨基酸序列具有与其衍生自的那个序列或其部分基本上同一的核酸序列，其中“基本上同一”包括如上面所限定的序列变体。优选地，衍生自特定肽或蛋白质的核酸序列或氨基酸序列衍生自该特定肽或蛋白质中的对应结构域。因此，“对应”具体指的是相同功能性。例如，“细胞外结构域”对应于(另一种蛋白质的)另一种“细胞外结构域”，或者“跨膜结构域”对应于(另一种蛋白质的)另一种“跨膜结构域”。肽、蛋白质和核酸的“对应”部分因而对于本领域普通技术人员是容易可确定的。同样地，“衍生自”其它序列的序列对于本领域普通技术人员通常是容易可确定的，因为在序列中具有其起源。
优选地，衍生自另一种核酸、肽、多肽或蛋白质的核酸序列或氨基酸序列可以同一于(其衍生自的)起始核酸、肽、多肽或蛋白质。但是，衍生自另一种核酸、肽、多肽或蛋白质的核酸序列或氨基酸序列也可以具有相对于(其衍生自的)起始核酸、肽、多肽或蛋白质的一种或多种突变，具体而言，衍生自另一种核酸、肽、多肽或蛋白质的核酸序列或氨基酸序列可以是(其衍生自的)起始核酸、肽、多肽或蛋白质的如上面所描述的功能序列变体。例如，在肽/蛋白质中，一个或多个氨基酸残基可以被其它氨基酸残基置换或者一个或多个氨基酸残基插入或缺失可能发生。
如本文所使用，术语“突变”涉及与参比序列例如对应基因组序列相比核酸序列和/或氨基酸序列的改变。例如与基因组序列相比，突变可以是例如(天然存在的)体细胞突变，自发突变，诱发突变——例如由酶、化学物质或辐射诱发的，或者通过位点定向诱变(用于在核酸序列中和/或在氨基酸序列中制造特异性的和有意的改变的分子生物学方法)获得的突变。因而，术语“突变”或“产生突变”应当被理解为也包括例如在核酸序列中或在氨基酸序列中物理地制造突变。突变包括一个或多个核苷酸或氨基酸的置换、缺失和插入，以及数个连续的核苷酸或氨基酸的倒位。为了实现在氨基酸序列中的突变，优选地，突变可以被引入编码所述氨基酸序列的核苷酸序列从而表达(重组)突变的多肽。例如，通过变更——例如通过位点定向诱变——编码一种氨基酸的核酸分子的密码子以产生编码不同氨基酸的密码子，或通过合成序列变体，例如通过知晓编码多肽的核酸分子的核苷酸序列和通过设计包括编码多肽变体的核苷酸序列的核酸分子的合成而不需要使核酸分子的一个或多个核苷酸突变，实现突变。
贯穿本说明书的文本引用了数个文件。本文中引用的文件中的每个(包括所有专利、专利申请、科学出版物、制造商的说明书、指示等)，无论上文或下文，都在此通过引用以其全部被并入。本文中的所有公开内容都将不被解释为承认由于先前的发明而导致本发明无权先于这样的公开内容。
将理解，本发明不限于本文描述的具体方法、方案和试剂，因为它们可以改变。还应当理解，本文中使用的术语仅出于描述具体实施方式的目的，并且不意欲限制本发明的范围，其将仅由所附权利要求书限定。除非另有限定，本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同的含义。
强力地中和寨卡病毒感染的抗体
本发明基于特异性地结合至寨卡病毒表位的抗体的发现和分离等。这种抗体(i)如果针对寨卡病毒包膜(E)蛋白的抗原位点或ZIKV四级表位(quaternary epitope)，则在中和寨卡病毒中是高度有效的，或(ii)如果针对寨卡病毒NS1蛋白，则在诊断寨卡病毒感染中是有用的。这种抗体是期望的，因为为了中和寨卡病毒，仅需要少量的抗体。尤其是，当前不存在可用于寨卡病毒感染的预防/治疗措施。根据本发明的抗体在预防以及治疗或减弱寨卡病毒感染中是高度有效的。而且，由于抗体对寨卡病毒的特异性，它们不引发ADE，而是阻断ADE。在诊断中，寨卡特异性抗体提供用于将寨卡病毒感染与其他黄病毒属病毒比如登革热病毒的感染区分的重要工具。
在第一方面，本发明提供特异性地结合至寨卡病毒表位并中和寨卡病毒感染的分离的抗体或其抗原结合片段。换句话说，根据本发明的抗体或其抗原结合片段降低寨卡病毒的病毒感染性。
为了研究和定量实验室中的病毒感染性(或“中和”)，本领域技术人员知晓各种标准“中和试验”。对于中和试验，动物病毒通常在细胞和/或细胞系中繁殖。在本发明的背景下，中和试验是优选的，其中在待测试抗体的存在(或不存在)下利用固定量的寨卡病毒(ZIKV)培育培养的细胞。例如可以使用流式细胞术作为示值读数。可选地，其他示值读数也是可想到的，比如测定分泌入培养上清液的ZIKV非结构蛋白(比如ZIKV NS1)的量。例如，基于ZIKV非结构蛋白1(NS1)抗原捕获酶联免疫吸附测定(ELISA)的组织培养感染剂量-50(TCID50)测试(TCID50-ELISA)可以被用作用于滴定寨卡病毒的标准噬菌斑试验的替代方案——以与由Li J,Hu D-M,Ding X-X,Chen Y,Pan Y-X,Qiu L-W,Che X-Y:Enzyme-linkedimmunosorbent assay-format tissue culture infectious dose-50test fortitrating dengue virus.PLoS ONE 2011,6:e22553对于登革热病毒(DENV)描述的类似方式。在这样的试验中，例如可以有利地使用如在本申请中描述的ZIKV NS1结合抗体。
在ZIKV中和试验的优选实施方式中，在待测试抗体存在或不存在下利用固定量的ZIKV培育培养的细胞，例如Vero细胞，例如持续大约4小时。在培育后，可以洗涤并进一步培养细胞。为了测量病毒感染性，可以使用流式细胞术。为此，例如利用2％甲醛固定，例如在PBS(磷酸盐缓冲盐水)1％FCS(胎牛血清)0.5％皂苷中渗透，并且例如利用小鼠抗体4G2染色细胞。然后可以利用缀合至染料比如Alexa Fluor 488的山羊抗小鼠IgG培育细胞，并且通过流式细胞术分析。可选地，通过流式细胞术使用例如WST-1试剂(Roche)检测活细胞。在这种中和试验中使用的优选的ZIKV毒株是ZIKV H/PF/2013。
本发明的抗体和抗原结合片段具有高中和效能。与无抗体对照相比，50％中和寨卡病毒需要的抗体的浓度(IC50)是例如至多大约3μg/ml或至多大约1μg/ml。优选地，50％中和ZIKV需要的本发明的抗体的浓度(IC50)是至多大约500ng/ml，更优选地，50％中和ZIKV需要的本发明的抗体的浓度(IC50)是至多大约250ng/ml，甚至更优选地，50％中和ZIKV需要的本发明的抗体的浓度(IC50)是至多大约150ng/ml。最优选地，50％中和ZIKV需要的本发明的抗体的浓度(IC50)是大约100ng/ml或更低，例如大约90ng/ml或更低、大约80ng/ml或更低、大约70ng/ml或更低、大约60ng/ml或更低、大约50ng/ml或更低、大约45ng/ml或更低、大约40ng/ml或更低、大约35ng/ml或更低、大约30ng/ml或更低、大约25ng/ml或更低、大约20ng/ml或更低，特别优选地，大约15ng/ml或更低。具体而言，50％中和ZIKV需要的本发明的抗体的浓度(IC50)优选地是大约50ng/ml或更低。这意思是50％中和ZIKV仅需要低浓度的抗体。可以使用本领域技术人员已知的标准中和试验或者具体地如上面所描述的测量50％中和ZIKV需要的本发明的抗体的浓度(IC50)。
一般而言，可以使用本领域技术人员熟知的标准ELISA(酶联免疫吸附测定)评估抗体的结合。示例性标准ELISA可以如下执行：例如在PBS中，可以将ELISA板涂覆(例如在4℃下过夜)足够量(例如1μg/ml)的与待测试抗体结合的蛋白质/复合物/颗粒(例如，对于如上面所概述的DENV结合，使用DENV E蛋白和/或DENV VLP)。然后可以例如利用牛血清白蛋白(BSA)在PBS中的1％w/v溶液封闭板，并利用待测试抗体培育板(例如，在室温下持续大约1.5小时)。洗涤之后，可以例如使用偶联至碱性磷酸酶的山羊抗人IgG揭露抗体结合。然后可以洗涤板，可以加入需要的底物(例如，p-NPP)并可以例如在405nm下阅读板。抗体结合的相对亲和力可以通过测量在饱和下达到50％最大结合需要的mAb的浓度(EC50)来测定。EC50值可以通过具有可变斜率的拟合四参数非线性回归的结合曲线的插值法来计算。
优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段基本上不结合至登革热病毒样颗粒和/或登革热包膜蛋白。更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段基本上不结合至登革热病毒样颗粒和/或四种DENV血清型DENV1、DENV2、DENV3和DENV4中任一种的登革热包膜蛋白。在此，“基本上不结合”意思是对于抗体或其抗原结合片段，至多102ng/ml、优选地至多103ng/ml、更优选地至多5*103ng/ml、甚至更优选地至多8*103ng/ml、和最优选地至多104ng/ml的EC50值不可以在对登革热病毒样颗粒(DENV VLP)和/或对登革热包膜蛋白(DENVE蛋白)的标准ELISA中被测定。换句话说，在标准ELISA中达到在饱和下对登革热病毒样颗粒(DENV VLP)和/或对登革热包膜蛋白(DENV E蛋白)的50％最大结合需要的抗体或其抗原结合片段的浓度(EC50)通常多于102ng/ml、优选地多于103ng/ml、更优选地多于5*103ng/ml、甚至更优选地多于8*103ng/ml、和最优选地多于104ng/ml。
优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段不促进寨卡病毒感染的抗体依赖性增强(ADE)。更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段阻断寨卡病毒感染的抗体依赖性增强(ADE)。
可以通过基于流式细胞术的试验使用例如培养的细胞或细胞系(比如K562细胞)评估ADE。例如，待测试的抗体和ZIKV可以在37℃下混合1小时并且以5000个K562细胞/孔添加。四天后，例如如上面对于中和试验所描述的，固定、渗透化并利用m4G2染色细胞。例如如上面对于中和试验所描述的，通过流式细胞术测定感染的细胞的数目。
优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段是人抗体。还优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体，优选地人单克隆抗体。而且，还优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段是重组抗体。
优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括Fc部分。更优选地，Fc部分来源于人起源，例如来源于IgG1、IgG2、IgG3和/或IgG4，其中人IgG1是特别优选的。
如本文所使用，术语“Fc部分”指的是衍生自免疫球蛋白重链的一部分的序列，该部分开始于就在木瓜蛋白酶裂解位点上游的铰链区(例如，天然IgG中的残基216，使得重链恒定区的第一残基为114)并终止于免疫球蛋白重链的C末端处。因此，Fc部分可以是完整的Fc部分或其一部分(例如，结构域)。完整的Fc部分包括至少铰链结构域、CH2结构域和CH3结构域(例如，EU氨基酸位置216-446)。额外的赖氨酸残基(K)有时存在于Fc部分的极C末端处，但是常常从成熟抗体裂解。Fc部分内的氨基酸位置中的每个已经根据Kabat的本领域公知的EU编号系统编号，参见例如由Kabat等，在“Sequences of Proteins ofImmunological Interest”,U.S.Dept.Health and Human Services,1983and 1987中。
优选地，在本发明的背景下，Fc部分包括下列的至少一种：铰链(例如，上、中和/或下铰链区)结构域，CH2结构域，CH3结构域，或其变体、部分或片段。在优选的实施方式中，Fc部分包括至少铰链结构域、CH2结构域或CH3结构域。更优选地，Fc部分是完整的Fc部分。Fc部分也可以包括相对于天然存在的Fc部分的一个或多个氨基酸插入、缺失或置换。例如，铰链结构域、CH2结构域或CH3结构域(或其部分)的至少一个可以缺失。例如，Fc部分可以包括下列或由下列组成：(i)融合至CH2结构域(或其部分)的铰链结构域(或其部分)，(ii)融合至CH3结构域(或其部分)的铰链结构域(或其部分)，(iii)融合至CH3结构域(或其部分)的CH2结构域(或其部分)，(iv)铰链结构域(或其部分)，(v)CH2结构域(或其部分)，或(vi)CH3结构域或其部分。
本领域普通技术人员将理解，Fc部分可以被修饰使得其氨基酸序列与来自天然存在的免疫球蛋白分子的完整Fc部分改变，同时保留了天然存在的Fc部分授予的至少一种期望的功能。这些功能包括Fc受体(FcR)结合、抗体半衰期调节、ADCC功能、蛋白A结合、蛋白G结合和补体结合。本领域技术人员熟知天然存在的Fc部分的负责这些功能并且对于这些功能是必需的部分。
例如，为了活化补体级联，C1q结合至IgG1的至少两个分子或IgM的一个分子，其附接至抗原靶标(Ward,E.S.,和Ghetie,V.,Ther.Immunol.2(1995)77-94)。Burton,D.R.描述了(Mol.Immunol.22(1985)161-206)包括氨基酸残基318至337的重链区参与补体固定。Duncan,A.R.和Winter,G.(Nature 332(1988)738-740)，使用位点定向诱变，报道了Glu318、Lys320和Lys322形成与C1q的结合位点。在C1q的结合中Glu318、Lys320和Lys322残基的作用通过包含这些残基的短合成肽抑制补体介导的溶解的能力来确认。
例如，FcR结合可以通过(抗体的)Fc部分与Fc受体(FcR)的相互作用介导，Fc受体是造血细胞上的专门的细胞表面受体。Fc受体属于免疫球蛋白超家族，并且显示为介导如下二者：通过免疫复合物的吞噬作用去除抗体包被的病原体，和经由抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC；Van de Winkel,J.G.,和Anderson,C.L.,J.Leukoc.Biol.49(1991)511-524)溶解利用对应抗体包被的红细胞和各种其它细胞靶标(例如肿瘤细胞)。FcR通过它们对免疫球蛋白种类的特异性来限定；IgG抗体的Fc受体被称为FcγR，IgE的Fc受体被称为FcεR，IgA的Fc受体被称为FcαR，等，并且新生的Fc受体被称为FcRn。Fc受体结合例如在Ravetch,J.V.,和Kinet,J.P.,Annu.Rev.Immunol.9(1991)457-492；Capel,P.J.,et al.,Immunomethods4(1994)25-34；de Haas,M.,et al.,J Lab.Clin.Med.126(1995)330-341；和Gessner,J.E.,et al.,Ann.Hematol.76(1998)231-248中描述。
通过天然IgG抗体(FcγR)的Fc结构域交联受体引发多种效应子功能，包括吞噬作用、抗体依赖性细胞毒作用、和炎性介质的释放、以及免疫复合物清除和抗体产生的调节。因此，提供受体(FcγR)的交联的Fc部分是优选的。在人中，FcγR的三个种类已经被表征，其为(i)FcγRI(CD64)，其以高亲和力结合单体IgG并且在巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞上表达；(ii)FcγRII(CD32)，其以中至低亲和力结合复合的IgG，广泛地表达特别是在白细胞上，已知是抗体介导的免疫力中的核心因素(central player)，并且其可以被分为FcγRIIA、FcγRIIB和FcγRIIC，它们在免疫系统中执行不同的功能，但是以类似的低亲和力结合至IgG-Fc，并且这些受体的胞外域是高度同源的；和(iii)FcγRIII(CD16)，其以中至低亲和力结合IgG并且作为两种类型存在：在NK细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞以及一些单核细胞和T细胞上发现并介导ADCC的FcγRIIIA，和在中性粒细胞上高度表达的FcγRIIIB。FcγRIIA在参与杀伤的许多细胞(例如巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞)上发现并且似乎能够活化杀伤过程。FcγRIIB似乎在抑制过程中起作用并且在B细胞、巨噬细胞上以及在肥大细胞和嗜酸性粒细胞上发现。重要地，所有FcγRIIB的75％在肝脏中发现(Ganesan,L.P.et al.,2012:FcγRIIb on liver sinusoidal endothelium clearssmall immune complexes.Journal of Immunology 189:4981–4988)。FcγRIIB在被称为LESC的肝窦内皮细胞(Liver Sinusoidal Endothelium)上，并且在肝脏中的库普弗细胞中丰富地表达，并且LSEC是小免疫复合物清除的主要位点(Ganesan,L.P.et al.,2012:FcγRIIb on liver sinusoidal endothelium clears small immune complexes.Journal ofImmunology 189:4981–4988)。
因此，在本发明中，这些抗体和其抗原结合片段是优选的，其能够结合至FcγRIIb，例如包括用于结合至FcγRIIb的Fc部分特别是Fc区的抗体，比如，例如IgG型抗体。而且，通过如由Chu,S.Y.et al.,2008:Inhibition of B cell receptor-mediatedactivation of primary human B cells by coengagement of CD19 and FcgammaRIIbwith Fc-engineered antibodies.Molecular Immunology 45,3926–3933描述的引入突变S267E和L328F来工程化Fc部分以增强FcγRIIB结合是可能的。因此，免疫复合物的清除可以增强(Chu,S.,et al.,2014:Accelerated Clearance of IgE In Chimpanzees IsMediated By Xmab7195,An Fc-Engineered Antibody With Enhanced Affinity ForInhibitory Receptor FcγRIIb.Am J Respir Crit,American Thoracic SocietyInternational Conference Abstracts)。因此，在本发明的背景下，这些抗体或其抗原结合片段是优选的，其包括具有突变S267E和L328F的工程化Fc部分，具体地如由Chu,S.Y.etal.,2008:Inhibition of B cell receptor-mediated activation of primary human Bcells by coengagement of CD19 and FcgammaRIIb with Fc-engineeredantibodies.Molecular Immunology 45,3926–3933描述的。
在B细胞上，其似乎起进一步抑制免疫球蛋白产生和同种型转换至表述例如IgE种类的功能。在巨噬细胞上，FcγRIIB用于抑制如通过FcγRIIA介导的吞噬作用。在嗜酸性粒细胞和肥大细胞上，b形式可以有助于通过IgE结合至其单独的受体来抑制这些细胞的活化。
关于FcγRI结合，E233-G236、P238、D265、N297、A327和P329中至少一种的天然IgG的修饰降低结合至FcγRI。置换入IgG1和IgG4的位置233-236处的IgG2残基降低结合至FcγRI达103倍并且消除了对抗体敏化的红细胞的人单核细胞应答(Armour,K.L.,etal.Eur.J.Immunol.29(1999)2613-2624)。关于FcγRII结合，例如对于E233-G236、P238、D265、N297、A327、P329、D270、Q295、A327、R292和K414中至少一种的IgG突变，发现对FcγRIIA降低的结合。关于FcγRIII结合，例如对于E233-G236、P238、D265、N297、A327、P329、D270、Q295、A327、S239、E269、E293、Y296、V303、A327、K338和D376中至少一种的突变，发现对FcγRIIIA降低的结合。在Fc受体的人IgG1上绘制(map)结合位点，在Shields,R.L.,etal.,J.Biol.Chem.276(2001)6591-6604中描述了用于测量结合至FcγRI和FcγRIIA的上面提及的突变位点和方法。
关于结合至关键的FcγRII，天然IgG Fc的两个区似乎对于FcγRII和IgG的相互作用是关键的，即(i)IgG Fc的下部铰链位点，具体地氨基酸残基L、L、G、G(234-237，EU编号)，和(ii)IgG Fc的CH2结构域的相邻区，具体地邻近下部铰链区的上部CH2结构域中——例如在P331的区中——的环和链(Wines,B.D.,et al.,J.Immunol.2000；164:5313-5318)。而且，FcγRI似乎结合至IgG Fc上的相同位点，而FcRn和蛋白A结合至IgG Fc上的不同位点，其似乎在CH2-CH3界面处(Wines,B.D.,et al.,J.Immunol.2000；164:5313-5318)。
例如，Fc部分可以包括至少在本领域中已知为对于FcRn结合或延长的半衰期需要的Fc部分的部分或由其组成。可选地或另外地，本发明的抗体的Fc部分包括至少在本领域中已知为对于蛋白A结合需要的部分和/或本发明的抗体的Fc部分包括至少在本领域中已知为对于蛋白G结合需要的Fc分子的部分。优选地，保留的功能是中和寨卡病毒感染，其假定通过FcγR结合介导。因此，优选的Fc部分包括至少在本领域中已知为对于FcγR结合需要的部分。如上面所概述的，优选的Fc部分可以因而至少包括(i)天然IgG Fc的下部铰链位点，具体地氨基酸残基L、L、G、G(234-237，EU编号)，和(ii)天然IgG Fc的CH2结构域的相邻区，具体地邻近下部铰链区的上部CH2结构域中——例如在P331的区中，例如在P331周围，例如天然IgG Fc的氨基酸320和340(EU编号)之间的天然IgG Fc的上部CH2结构域中至少3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸的区中——的环和链。
优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括Fc区。如本文所使用，术语“Fc区”指的是通过抗体重链的两个或更多个Fc部分形成的免疫球蛋白的部分。例如，Fc区可以是单体的或“单链”Fc区(即，scFc区)。单链Fc区由在单一多肽链内连接的(例如，以单一连续的核酸序列编码的)Fc部分组成。示例性的scFc区在WO 2008/143954 A2中公开。优选地，Fc区是二聚的Fc区。“二聚的Fc区”或“dcFc”指的是由两个单独的免疫球蛋白重链的Fc部分形成的二聚体。二聚的Fc区可以是两个相同的Fc部分的同源二聚体(例如，天然存在的免疫球蛋白的Fc区)或两个不同的Fc部分的异源二聚体。
Fc区的Fc部分可以具有相同的或不同的种类和/或亚类。例如，Fc部分可以衍生自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类的免疫球蛋白(例如，人免疫球蛋白)。优选地，Fc区的Fc部分具有相同的种类和亚类。但是，Fc区(或Fc区的一个或多个Fc部分)也可以是嵌合的，其中嵌合Fc区可以包括衍生自不同免疫球蛋白种类和/或亚类的Fc部分。例如，二聚或单链Fc区的Fc部分的至少两个可以来自不同的免疫球蛋白种类和/或亚类。另外地或可选地，嵌合Fc区可以包括一个或多个嵌合Fc部分。例如，嵌合Fc区或部分可以包括衍生自第一亚类(例如IgG1、IgG2或IgG3亚类)的免疫球蛋白的一个或多个部分，同时Fc区或部分的剩余部分具有不同亚类。例如，Fc多肽的Fc区或部分可以包括衍生自第一亚类(例如IgG1、IgG2或IgG4亚类)的免疫球蛋白的CH2和/或CH3结构域和来自第二亚类(例如IgG3亚类)的免疫球蛋白的铰链区。例如，Fc区或部分可以包括衍生自第一亚类(例如IgG4亚类)的免疫球蛋白的铰链和/或CH2结构域和来自第二亚类(例如IgG1、IgG2或IgG3亚类)的免疫球蛋白的CH3结构域。例如，嵌合Fc区可以包括来自第一亚类(例如IgG4亚类)的免疫球蛋白的Fc部分(例如，完整的Fc部分)和来自第二亚类(例如IgG1、IgG2或IgG3亚类)的免疫球蛋白的Fc部分。例如，Fc区或部分可以包括来自IgG4免疫球蛋白的CH2结构域和来自IgG1免疫球蛋白的CH3结构域。例如，Fc区或部分可以包括来自IgG4分子的CH1结构域和CH2结构域，和来自IgG1分子的CH3结构域。例如，Fc区或部分可以包括来自抗体的具体亚类的CH2结构域的一部分，例如CH2结构域的EU位置292-340。例如，Fc区或部分可以包括衍生自IgG4部分的CH2的位置292-340处的氨基酸和衍生自IgG1部分的CH2的剩余部分(可选地，CH2的292-340可以衍生自IgG1部分并且CH2的剩余部分衍生自IgG4部分)。
而且，Fc区或部分可以(另外地或可选地)例如包括嵌合铰链区。例如，嵌合铰链可以例如部分地衍生自IgG1、IgG2或IgG4分子(例如，中上和中下铰链序列)并且部分地衍生自IgG3分子(例如，中部铰链序列)。在另一实例中，Fc区或部分可以包括部分地衍生自IgG1分子和部分地衍生自IgG4分子的嵌合铰链。在另一实例中，嵌合铰链可以包括来自IgG4分子的上部和下部铰链结构域和来自IgG1分子的中部铰链结构域。这样的嵌合铰链例如通过在IgG4铰链区的中部铰链结构域中的EU位置228处引入脯氨酸置换(Ser228Pro)来制造。在另一实施方式中，嵌合铰链可以包括来自IgG2抗体的EU位置233-236处的氨基酸和/或Ser228Pro突变，其中铰链的剩余氨基酸来自IgG4抗体(例如序列ESKYGPPCPPCPAPPVAGP的嵌合铰链)。可以在根据本发明的抗体的Fc部分中使用的进一步嵌合铰链在US 2005/0163783 A1中描述。
在本发明中，优选的是Fc部分或Fc区包括衍生自人免疫球蛋白序列(例如，衍生自来自人IgG分子的Fc区或Fc部分)的氨基酸序列或由其组成。但是，多肽可以包括来自另一种哺乳动物物种的一种或多种氨基酸。例如，灵长类Fc部分或灵长类结合位点可以包含在对象多肽中。可选地，一种或多种鼠科氨基酸可以存在于Fc部分中或Fc区中。
优选地，具体地除了如上面描述的Fc部分之外，根据本发明的抗体还包括衍生自恒定区——具体地衍生自IgG的恒定区，优选地衍生自IgG1的恒定区，更优选地衍生自人IgG1的恒定区——的其它部分。更优选地，具体地除了如上面描述的Fc部分之外，根据本发明的抗体还包括恒定区的所有其它部分，具体地IgG的恒定区的所有其它部分，优选地IgG1的恒定区的所有其它部分，更优选地人IgG1的恒定区的所有其它部分。
特别优选的恒定区的序列是根据SEQ ID NO:145-148的氨基酸序列(根据SEQ IDNO:149-152的核酸序列)。优选地，IgG1 CH1-CH2-CH3的氨基酸序列根据如本文所描述的SEQ ID NO:145或其功能序列变体。甚至更优选地，IgG1 CH1-CH2-CH3的氨基酸序列根据如本文所描述的SEQ ID NO:146或其功能序列变体，其中“LALA”突变被维持。
如上面所概述的，根据本发明的特别优选的抗体包括衍生自人IgG1的(完整的)Fc区。更优选地，具体地除了衍生自人IgG1的(完整的)Fc区之外，根据本发明的抗体还包括IgG的恒定区的所有其它部分，优选地IgG1的恒定区的所有其它部分，更优选地人IgG1的恒定区的所有其它部分。
不受任何理论束缚，据信寨卡病毒感染的抗体依赖性增强(ADE)通过将抗体的Fc部分，具体而言IgG分子的重链的Fc部分，结合至Fc受体，例如宿主细胞上的Fcγ受体引起。因而，优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括在Fc部分中的一种或多种突变。突变(一种或多种)可以是降低抗体与Fc受体(FcR)的结合，具体而言降低抗体与Fcγ受体(FcγR)的结合的任何突变。另一方面，优选的是根据本发明的抗体包括(完整的)Fc部分/Fc区，其中不损害与FcRn的相互作用/结合。因此，特别优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括在Fc部分中的一种或多种突变，其(i)降低抗体与Fcγ受体的结合，但是不损害与FcRn的相互作用。这种突变的一个实例是下面描述的“LALA”突变。
一般而言，抗体与Fc受体的结合可以通过本领域技术人员已知的各种方法比如ELISA(Hessell AJ,Hangartner L,Hunter M,Havenith CEG,Beurskens FJ,Bakker JM,Lanigan CMS,Landucci G,Forthal DN,Parren PWHI,et al.:Fc receptor but notcomplement binding is important in antibody protection against HIV.Nature2007,449:101–104；Grevys A,Bern M,Foss S,Bratlie DB,Moen A,Gunnarsen KS,AaseA,Michaelsen TE,Sandlie I,Andersen JT:Fc Engineering of Human IgG1 forAltered Binding to the Neonatal Fc Receptor Affects Fc EffectorFunctions.2015,194:5497–5508)或流式细胞术(Perez LG,Costa MR,Todd CA,HaynesBF,Montefiori DC:Utilization of immunoglobulin G Fc receptors by humanimmunodeficiency virus type 1:a specific role for antibodies against themembrane-proximal external region of gp41.J Virol 2009,83:7397–7410；PiccoliL,Campo I,Fregni CS,Rodriguez BMF,Minola A,Sallusto F,Luisetti M,Corti D,Lanzavecchia A:Neutralization and clearance of GM-CSF by autoantibodies inpulmonary alveolar proteinosis.Nat Commun 2015,6:1–9)来评估。
一般而言，根据本发明的抗体可以是糖基化的。例如，附接至重链的CH2结构域的N-连接的多糖可以影响与对C1q和FcR受体具有较低亲和力的无糖基化的抗体的C1q和FcR结合。因此，根据本发明的抗体的Fc部分的CH2结构域可以包括一种或多重突变，其中糖基化的残基被非糖基化的残基置换。多糖结构也可以影响活性，例如，可以看到补体介导的细胞死亡的区别，其取决于多糖的二分支链的末端处半乳糖的数目(0、1或2)。优选地，在施用之后，抗体的多糖不导致人免疫原性应答。
而且，可以通过将随机氨基酸突变引入重链的CH2或CH3结构域的特定区从而与未修饰的抗体相比改变它们对FcR的结合亲和力和/或它们的血清半衰期来修饰根据本发明的抗体。这种修饰的实例包括但不限于来自选自氨基酸残基250、314和428的重链恒定区的至少一种氨基酸的置换。
特别优选地，本发明的抗体的Fc部分包括在位置CH2 4、CH2 5、或二者处的置换。一般而言，在野生型IgGl和IgG3的CH2的位置4和5处的氨基酸是亮氨酸("L")。优选地，根据本发明的抗体包括在位置CH2 4、CH2 5、或二者处的氨基酸，该氨基酸不是L。更优选地，根据本发明的抗体包括在位置CH2 4、CH2 5、或二者处的丙氨酸("A")。最优选地，根据本发明的抗体包括CH2 L4A和CH2 L5A置换二者。这些抗体在本文中被称为“LALA”变体。有趣的是，Fc部分中的这种“LALA”突变不仅导致寨卡病毒感染的抗体依赖性增强(ADE)中各自抗体的促进的缺乏，而且阻断寨卡病毒感染的抗体依赖性增强(ADE)。包括“LALA”突变的IgG1CH1-CH2-CH3的示例性氨基酸序列根据SEQ ID NO:146。因此，IgG1 CH1-CH2-CH3的氨基酸序列优选地根据如本文描述的SEQ ID NO:146或其功能序列变体，其中“LALA”突变被维持。
优选地，抗体或其抗原结合片段结合至寨卡病毒包膜蛋白的结构域III(EDIII，也被称为“DIII”)。换句话说，优选的是，根据本发明的抗体或其抗原结合片段结合至寨卡病毒包膜蛋白的表位，其包括寨卡病毒包膜蛋白的结构域III(EDIII)的一种或多种氨基酸残基。ZIKV包括核衣壳核心，其包括被核心蛋白包裹的单链RNA。核衣壳核心被具有“膜蛋白”和“包膜蛋白”的脂双层膜包封。ZIKV包膜蛋白(E蛋白)是显性抗原。包膜蛋白的胞外域包括三种不同的结构域：E蛋白结构域I(EDI)、E蛋白结构域II(EDII)、和E蛋白结构域III(EDIII)。EDIII在三种不同的ZIKV毒株之间是高度保守的(参见图12，其对齐不同ZIKV毒株的EDIII的氨基酸序列)。
因此，抗体或其抗原结合片段更优选地结合至寨卡病毒包膜蛋白的结构域III(EDIII)，其中EDIII具有下列氨基酸序列(SEQ ID NO:401)：
TAAFTFTKXPAEXXHGTVTVEXQYXGXDGPCKXPXQMAVDXQTLTPVGRLITANPVITEXTENSKMMLELDPPFGDSYIVIGXGXKKITHHWHRS
其中X可以是任何(天然存在的)氨基酸。换句话说，优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段结合至寨卡病毒包膜蛋白的表位，其包括SEQ ID NO:401的一个或多个氨基酸残基。
还优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段结合至寨卡病毒包膜蛋白的结构域III(EDIII)，其中EDIII具有下列氨基酸序列(SEQ ID NO:407)：X1GX2X3YSLCTAAFTFTKX4PAEX5X6HGTVTVEX7QYX8GX9DGPCKX10PX11QMAVDX12QTLTPVGRLITANPVITEX13TX14NSKMMLELDPPFGDSYIVIGX15GX16X17KITHHWHRSG
其中X1可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地K、A或E；
X2可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地V、F或L；
X3可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地S或F；
X4可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地I或V；
X5可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地T或V；
X6可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地L或D；
X7可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地V或G；
X8可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地A或G；
X9可以是除了R之外的任何(天然存在的)氨基酸，优选地T或A；
X10可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地V或I；
X11可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地A或V；
X12可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地M或T；
X13可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地S或G；
X14可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地E或K；
X15可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地V或I；
X16可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地E、A、K或D；和
X17可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地E、A或K，更优选地K或A。
换句话说，优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段结合至寨卡病毒包膜蛋白的表位，其包括SEQ ID NO:407的一种或多种氨基酸残基。
例如，EDIII从ZIKV H/PF/2013毒株(基因库登录号KJ776791)的ZIKV E蛋白的氨基酸309延伸至氨基酸403。因此，抗体或其抗原结合片段最优选地结合至寨卡病毒包膜蛋白的结构域III(EDIII)，其中EDIII具有下列氨基酸序列(SEQ ID NO:402)：TAAFTFTKIPAETLHGTVTVEVQYAGTDGPCKVPAQMAVDMQTLTPVGRLITANPVITESTENSKMMLELDPPFGDSYIVIGVGEKKITHHWHRS。
换句话说，优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段结合至寨卡病毒包膜蛋白的表位，其包括SEQ ID NO:402的一种或多种氨基酸残基。
令人惊讶的是，本发明人已经发现了结合至寨卡病毒包膜蛋白的结构域III(EDIII)的抗体与结合至寨卡病毒包膜蛋白的结构域I/II(EDI/II)的抗体相比显示(i)增加的ZIKV的中和，和(ii)降低的与DENV的交叉反应性(具体地，与DENV基本上没有交叉反应性)。
更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段结合至寨卡病毒包膜蛋白的表位，其包括EDIII的侧脊(LR)的一个或多个氨基酸残基和/或EDI-EDIII铰链区的一个或多个氨基酸残基。EDIII侧脊和EDI-EDIII铰链区是本领域技术人员已知的，并且例如在Zhao,H.,Fernandez,E.,Dowd,K.A.,Speer,S.D.,Platt,D.J.,Gorman,M.J.,Govero,J.,Nelson,C.A.,Pierson,T.C.,Diamond,M.S.,et al.(2016).Structural Basis of Zika Virus-Specific Antibody Protection.Cell 166(4):1016-27中和在Kostyuchenko VA,Lim EX,Zhang S,Fibriansah G,NgTS,Ooi JS,Shi J,Lok SM.Structure of the thermallystable Zika virus.Nature.2016May19；533(7603):425-8中描述。不受任何理论束缚，假定(i)结合至LR可以通过捕获病毒的融合过渡态来抑制融合，和(ii)结合至EDI-EDIII铰链和EDIII可以阻碍EDIII的运动以形成三聚的融合后结构，从而停止膜融合。
因此，优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段(能够)抑制ZIKV的后附接步骤。“后附接”通常指的是在将ZIKV附接至(由ZIKV靶向的细胞的)细胞膜之后，ZIKV感染的任何步骤。例如，根据本发明的抗体或其抗原结合片段优选地(能够)阻止膜融合。而且，还优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段(能够)引起ZIKV(颗粒)的聚集。最优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段(能够)(i)抑制ZIKV的后附接步骤，和(ii)引起ZIKV(颗粒)的聚集。
还优选的是抗体或其抗原结合片段结合至在ZIKV感染性病毒粒子上陈列的四级表位。尽管相当大的中和活性，但是这种抗体在标准ELISA(如上面描述)中通常显示与重组ZIKV E蛋白或与ZIKV EDIII的不可检测到的结合，即如果在体外测试，具体地以纯化形式(即，“在病毒粒子、病毒样颗粒等外部/没有病毒粒子、病毒样颗粒等”的ZIKV E蛋白)。因此，“不可检测到的结合”通常意思是在标准ELISA中没有检测到至多10000ng/ml的EC50。换句话说，如果在标准ELISA中可检测到的EC50高于10000ng/ml，则其可以被称为“不可检测到的结合”。
因此，这种抗体在本文中也被称为“中和-非-E-结合”(NNB)抗体。在ZIKV感染性病毒粒子上陈列的四级表位通常是构象表位。例如，在ZIKV感染性病毒粒子上陈列的四级表位可以在构成二聚体(“包膜二聚体表位”；EDE)的两个包膜蛋白单体的界面处形成或者其可以穿过相邻二聚体形成(“人字形表位”)。
一般而言，根据本发明的抗体或其抗原结合片段优选地包括在重链上的(至少)三种互补决定区(CDR)和在轻链上的(至少)三种CDR。一般而言，互补决定区(CDR)是在重链可变结构域和轻链可变结构域中存在的高变区。典型地，抗体的重链和连接的轻链的CDR一起形成抗原受体。通常，三种CDR(CDR1、CDR2和CDR3)在可变结构域中非连续地排列。由于抗原受体通常由(两种不同的多肽链即重链和轻链上的)两种可变结构域组成，因此对于每种抗原受体存在六种CDR(重链：CDRH1、CDRH2和CDRH3；轻链：CDRL1、CDRL2和CDRL3)。单个抗体分子通常具有两种抗原受体并且因此包含十二种CDR。重和/或轻链上的CDR可以通过构架区分离，其中构架区(FR)是可变结构域中的区，其与CDR相比是较不“可变的”。例如，链(或者分别地每个链)可以由被三个CDR分离的四个构架区组成。
确定了本发明的示例性抗体的重链和轻链的序列，包括在重链上的三种不同CDR和在轻链上的三种不同CDR。CDR氨基酸的位置根据IMGT编号系统限定(IMGT:http://www.imgt.org/；cf.Lefranc,M.-P.et al.(2009)Nucleic Acids Res.37,D1006-D1012)。表1显示根据本发明的示例性抗体的重链CDR(CDRH1、CDRH2和CDRH3)和重链可变区(被称为“VH”)的氨基酸序列的SEQ ID NO：
Figure GDA0003868052510000181
Figure GDA0003868052510000191
Figure GDA0003868052510000201
下面的表2显示根据本发明的示例性抗体的轻链CDR(CDRL1、CDRL2和CDRL3)和轻链可变区(被称为“VL”)的氨基酸序列的SEQ ID NO：
抗体名称 CDRL1 CDRL2 CDRL2长 CDRL3 VL
ZKA190 4 5 6 7 9
ZKA185 22 23 24 25 27
ZKA230 40 41 42 43 45
ZKA78 58 59 60 61 63
ZKA64 76 77 78 79 81
因而，优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括与表1和/或表2中示出的CDR序列、VH序列和/或VL序列的至少一种具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。
优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中至少一个CDR，优选地至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:3、75、39、21、57、239、243、247、251、255、259、263、267、271、275、279、283、287、291、295、299、303、307、311、315、319、323、327、331、335、339、343、347、351、355、359、363、367、371、375、379、383、387、391、395、和399的任一种的氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体或由其组成。
更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中至少一个CDR，优选地至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:3、21、39、57和75的任一种的氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体或由其组成。更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中至少一个CDR，优选地至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:3、21、39和75的任一种的氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体或由其组成。甚至更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中至少一个CDR，优选地至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:3或根据SEQ ID NO:75的氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体或由其组成。还优选的是，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中至少一个CDR，优选地至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:21或根据SEQ ID NO:39的氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体或由其组成。最优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中至少一个CDR，优选地至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:3的氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体或由其组成。
更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个重链CDRH1包括根据SEQ ID NO:1、19、37、55、73、237、241、245、249、253、257、261、265、269、273、277、281、285、289、293、297、301、305、309、313、317、321、325、329、333、337、341、345、349、353、357、361、365、369、373、377、381、385、389、393、和397的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRH2包括根据SEQ ID NO:2、20、38、56、74、238、242、246、250、254、258、262、266、270、274、278、282、286、290、294、298、302、306、310、314、318、322、326、330、334、338、342、346、350、354、358、362、366、370、374、378、382、386、390、394、和398的任一种的氨基酸序列，或至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:3、21、39、57、75、239、243、247、251、255、259、263、267、271、275、279、283、287、291、295、299、303、307、311、315、319、323、327、331、335、339、343、347、351、355、359、363、367、371、375、379、383、387、391、395、和399的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
仍更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个重链CDRH1包括根据SEQ ID NO:1、19、37、55和73的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRH2包括根据SEQ ID NO:2、20、38、56和74的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:3、21、39、57和75的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
甚至更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个重链CDRH1包括根据SEQ ID NO:1、19、37和73的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRH2包括根据SEQ ID NO:2、20、38和74的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:3、21、39和75的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
最优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个重链CDRH1包括根据SEQ ID NO:1或根据SEQ ID NO:73的氨基酸序列；或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRH2包括根据SEQ ID NO:2或根据SEQ ID NO:74的氨基酸序列；或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:3或根据SEQ ID NO:75的氨基酸序列；或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
还优选的是，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个重链CDRH1包括根据SEQ ID NO:19或根据SEQ ID NO:37的氨基酸序列；或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRH2包括根据SEQ ID NO:20或根据SEQ ID NO:38的氨基酸序列；或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:21或根据SEQ ID NO:39的氨基酸序列；或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
特别优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个重链CDRH1包括根据SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRH2包括根据SEQ ID NO:2的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:3的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
还优选的是，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个CDRL1包括根据SEQ ID NO:4、22、40、58和76的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRL2包括根据SEQ ID NO:5、6、23、24、41、42、59、60、77和78的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个CDRL3包括根据SEQ ID NO:7、25、43、61和79的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个CDRL1包括根据SEQ ID NO:4、22、40和76的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRL2包括根据SEQ ID NO:5、6、23、24、41、42、77和78的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个CDRL3包括根据SEQ ID NO:7、25、43和79的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
甚至更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个CDRL1包括根据SEQ ID NO:4或根据SEQ ID NO:76的氨基酸序列；或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRL2包括根据SEQ ID NO:5、6、77和78的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个CDRL3包括根据SEQ ID NO:7或根据SEQ ID NO:79的氨基酸序列；或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
还优选的是，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个CDRL1包括根据SEQ ID NO:22或根据SEQ ID NO:40的氨基酸序列；或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRL2包括根据SEQ ID NO:23、24、41和42的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个CDRL3包括根据SEQ ID NO:25或根据SEQ ID NO:43的氨基酸序列；或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
最优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个CDRL1包括根据SEQ ID NO:4的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRL2包括根据SEQ ID NO:5或6的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个CDRL3包括根据SEQ ID NO:7的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括(i)根据SEQ ID NO:1-3的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(ii)根据SEQ ID NO:19-21的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(iii)根据SEQ IDNO:37-39的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(iv)根据SEQ ID NO:55-57的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(v)根据SEQ ID NO:73-75的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(vi)根据SEQ ID NO:237-239的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(vii)根据SEQ ID NO:241-243的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(viii)根据SEQ ID NO:245-247的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(ix)根据SEQ ID NO:249-251的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(x)根据SEQ IDNO:253-255的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xi)根据SEQ ID NO:257-259的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xii)根据SEQ ID NO:261-263的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xiii)根据SEQ ID NO:265-267的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xiv)根据SEQ ID NO:269-271的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xv)根据SEQ ID NO:273-275的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xvi)根据SEQ ID NO:277-279的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xvii)根据SEQ ID NO:281-283的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xviii)根据SEQ ID NO:285-287的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xix)根据SEQ ID NO:289-291的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xx)根据SEQ ID NO:293-295的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxi)根据SEQ ID NO:297-299的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxii)根据SEQ ID NO:301-303的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxiii)根据SEQ IDNO:305-307的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxiv)根据SEQ ID NO:309-311的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxv)根据SEQ ID NO:313-315的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxvi)根据SEQ ID NO:317-319的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxvii)根据SEQ ID NO:321-323的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxviii)根据SEQ ID NO:325-327的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxix)根据SEQ ID NO:329-331的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxx)根据SEQ ID NO:333-335的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxxi)根据SEQ IDNO:337-339的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxxii)根据SEQ ID NO:341-343的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxxiii)根据SEQ ID NO:345-347的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxxiv)根据SEQ ID NO:349-351的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxxv)根据SEQ ID NO:353-355的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxxvi)根据SEQ ID NO:357-359的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxxvii)根据SEQ ID NO:361-363的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxxviii)根据SEQ ID NO:365-367的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxxix)根据SEQ ID NO:369-371的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xl)根据SEQ ID NO:373-375的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xli)根据SEQ ID NO:377-379的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xlii)根据SEQ ID NO:381-383的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xliii)根据SEQ ID NO:385-387的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xliv)根据SEQ ID NO:389-391的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xlv)根据SEQ IDNO:393-395的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；或(xlvi)根据SEQ ID NO:397-399的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
因此，还优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括(i)根据SEQ ID NO:1-5和7的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(ii)根据SEQ ID NO:1-4和6-7的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(iii)根据SEQ IDNO:19-23和25的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(iv)根据SEQ IDNO:19-22和24-25的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(v)根据SEQ ID NO:37-41和43的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(vi)根据SEQ ID NO:37-40和42-43的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(vii)根据SEQ ID NO:55-59和61的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(viii)根据SEQ ID NO:55-58和60-61的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(ix)根据SEQ ID NO:73-77和79的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；或(x)根据SEQ ID NO:73-76和78-79的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括(i)根据SEQ ID NO:1-5和7的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(ii)根据SEQ ID NO:1-4和6-7的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(iii)根据SEQ ID NO:19-23和25的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(iv)根据SEQ ID NO:19-22和24-25的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(v)根据SEQ IDNO:37-41和43的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(vi)根据SEQ IDNO:37-40和42-43的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(vii)根据SEQ ID NO:73-77和79的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；或(viii)根据SEQ ID NO:73-76和78-79的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
甚至更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括(i)根据SEQ ID NO:1-5和7的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(ii)根据SEQ ID NO:1-4和6-7的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(iii)根据SEQ ID NO:73-77和79的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；或(iv)根据SEQ IDNO:73-76和78-79的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
还优选的是，优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括(i)根据SEQ IDNO:19-23和25的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(ii)根据SEQ IDNO:19-22和24-25的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(iii)根据SEQ ID NO:37-41和43的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；或(vi)根据SEQ ID NO:37-40和42-43的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
最优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括(i)根据SEQ ID NO:1-5和7的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；或(ii)根据SEQ ID NO:1-4和6-7的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
另外，还优选的是，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链可变区(VH)，以及任选地轻链可变区(VL)，其中重链可变区(VH)包括根据SEQ ID NO:8、26、44、62、80、240、244、248、252、256、260、264、268、272、276、280、284、288、292、296、300、304、308、312、316、320、324、328、332、336、340、344、348、352、356、360、364、368、372、376、380、384、388、392、396、和400的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，或由其组成。
而且，还优选的是，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括(i)根据SEQ ID NO:8的重链可变区(VH)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:9的轻链可变区(VL)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(ii)根据SEQ ID NO:26的重链可变区(VH)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:27的轻链可变区(VL)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(iii)根据SEQ ID NO:44的重链可变区(VH)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:45的轻链可变区(VL)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(iv)根据SEQ ID NO:62的重链可变区(VH)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:63的轻链可变区(VL)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(v)根据SEQ ID NO:80的重链可变区(VH)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:81的轻链可变区(VL)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括(i)根据SEQ ID NO:8的重链可变区(VH)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:9的轻链可变区(VL)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(ii)根据SEQ ID NO:26的重链可变区(VH)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:27的轻链可变区(VL)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(iii)根据SEQ ID NO:44的重链可变区(VH)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:45的轻链可变区(VL)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；或(iv)根据SEQ ID NO:80的重链可变区(VH)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:81的轻链可变区(VL)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
甚至更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括(i)根据SEQ ID NO:8的重链可变区(VH)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:9的轻链可变区(VL)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；或(ii)根据SEQ ID NO:80的重链可变区(VH)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:81的轻链可变区(VL)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
还优选的是，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括(i)根据SEQ ID NO:26的重链可变区(VH)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:27的轻链可变区(VL)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；或(ii)根据SEQ ID NO:44的重链可变区(VH)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:45的轻链可变区(VL)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
最优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括根据SEQ ID NO:8的重链可变区(VH)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:9的轻链可变区(VL)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段是gZKA190、gZKA64、gZKA230、gZKA185或gZKA78，优选地，抗体或其抗原结合片段是gZKA190、gZKA64、gZKA230或gZKA185，更优选地，抗体或其抗原结合片段是gZKA190或gZKA64，并且最优选地，抗体或其抗原结合片段是gZKA190。
本发明人已经分离了根据本发明的单克隆抗体(mAb)，其在本文中被称为ZKA190、ZKA64、ZKA230、ZKA185和ZKA78(参见表1和2，实施例1)。基于这些抗体，具体地基于这些抗体的VH和VL基因，如本文所使用的术语“gZKA190”、“gZKA64”、“gZKA230”、“gZKA185”和“gZKA78”指的是各自的“通用”抗体或其抗原结合片段。
即，“gZKA190”指的是如此抗体或其抗原结合片段，其具有根据SEQ ID NO:1的CDRH1氨基酸序列、根据SEQ ID NO:2的CDRH2氨基酸序列、根据SEQ ID NO:3的CDRH3氨基酸序列、根据SEQ ID NO:4的CDRL1氨基酸序列、根据SEQ ID NO:5或6的CDRL2氨基酸序列、和根据SEQ ID NO:7的CDRL3氨基酸序列。重链可变区(VH)优选地具有根据SEQ ID NO:8的氨基酸序列和轻链可变区(VL)优选地具有根据SEQ ID NO:9的氨基酸序列。
“gZKA64”指的是如此抗体或其抗原结合片段，其具有根据SEQ ID NO:73的CDRH1氨基酸序列、根据SEQ ID NO:74的CDRH2氨基酸序列、根据SEQ ID NO:75的CDRH3氨基酸序列、根据SEQ ID NO:76的CDRL1氨基酸序列、根据SEQ ID NO:77或78的CDRL2氨基酸序列、和根据SEQ ID NO:79的CDRL3氨基酸序列。重链可变区(VH)优选地具有根据SEQ ID NO:80的氨基酸序列和轻链可变区(VL)优选地具有根据SEQ ID NO:81的氨基酸序列。
“gZKA230”指的是如此抗体或其抗原结合片段，其具有根据SEQ ID NO:37的CDRH1氨基酸序列、根据SEQ ID NO:38的CDRH2氨基酸序列、根据SEQ ID NO:39的CDRH3氨基酸序列、根据SEQ ID NO:40的CDRL1氨基酸序列、根据SEQ ID NO:41或42的CDRL2氨基酸序列、和根据SEQ ID NO:43的CDRL3氨基酸序列。重链可变区(VH)优选地具有根据SEQ ID NO:44的氨基酸序列和轻链可变区(VL)优选地具有根据SEQ ID NO:45的氨基酸序列。
“gZKA185”指的是如此抗体或其抗原结合片段，其具有根据SEQ ID NO:19的CDRH1氨基酸序列、根据SEQ ID NO:20的CDRH2氨基酸序列、根据SEQ ID NO:21的CDRH3氨基酸序列、根据SEQ ID NO:22的CDRL1氨基酸序列、根据SEQ ID NO:23或24的CDRL2氨基酸序列、和根据SEQ ID NO:25的CDRL3氨基酸序列。重链可变区(VH)优选地具有根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列和轻链可变区(VL)优选地具有根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列。
“gZKA78”指的是如此抗体或其抗原结合片段，其具有根据SEQ ID NO:55的CDRH1氨基酸序列、根据SEQ ID NO:56的CDRH2氨基酸序列、根据SEQ ID NO:57的CDRH3氨基酸序列、根据SEQ ID NO:58的CDRL1氨基酸序列、根据SEQ ID NO:59或60的CDRL2氨基酸序列、和根据SEQ ID NO:61的CDRL3氨基酸序列。重链可变区(VH)优选地具有根据SEQ ID NO:62的氨基酸序列和轻链可变区(VL)优选地具有根据SEQ ID NO:63的氨基酸序列。
优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段用作药物。换句话说，根据本发明的抗体或其抗原结合片段可以用于制备药物。更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段用于预防和/或治疗寨卡病毒感染。换句话说，根据本发明的抗体或其抗原结合片段可以用于制备药物或用于预防和/或治疗寨卡病毒感染。该方面在下面更详细地描述。
核酸分子
在另一方面，本发明还提供了包括多核苷酸的核酸分子，该多核苷酸编码根据本发明的如上面所描述的抗体或其抗原结合片段。核酸分子和/或多核苷酸的实例包括，例如，重组多核苷酸，载体，寡核苷酸，RNA分子比如rRNA、mRNA、miRNA、siRNA或tRNA，或DNA分子比如cDNA。编码本发明的抗体的轻和重链以及CDR的一部分或全部的核酸序列是优选的。优选地，本文提供了编码本发明的示例性抗体的轻和重链，具体地VH和VL序列以及CDR的一部分或全部的核酸序列。表1和2提供了根据本发明的示例性抗体的CDR以及VH和VL的氨基酸序列的SEQ ID编号。
下面的表3提供了编码根据本发明的示例性抗体的CDR以及VH和VL的示例性核酸序列的SEQ ID编号。由于遗传密码的冗余性，本发明还包括这些核酸序列的序列变体，并且具体而言编码相同氨基酸序列这些序列变体。
核酸分子是包括核酸成分，优选地由核酸成分组成的分子。术语核酸分子优选地指DNA或RNA分子。具体而言，其与术语“多核苷酸”同义使用。优选地，核酸分子是包括核苷酸单体或由核苷酸单体组成的聚合物，这些核苷酸单体通过糖/磷酸骨架的磷酸二酯键彼此共价地连接。术语“核酸分子”也包括修饰的核酸分子，比如碱基修饰的、糖修饰的或骨架修饰的等DNA或RNA分子。
表3示出了根据本发明的五种示例性抗体(“ZKA190”、“ZKA64”、“ZKA230”、“ZKA185”和“ZKA78”)的CDR以及重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的示例性核酸序列：
Figure GDA0003868052510000361
Figure GDA0003868052510000371
Figure GDA0003868052510000381
Figure GDA0003868052510000391
优选地，根据本发明的核酸分子的序列包括根据SEQ ID NO:10-18、28-36、46-54、64-72和82-90的任一种的核酸序列或其功能序列变体，或由其组成。
还优选的是根据本发明的核酸序列包括如此核酸序列：其与编码在根据本发明的(示例性)抗体中使用的CDR、VH序列和/或VL序列的核酸，例如与在表3中示出的序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性。
一般而言，核酸分子可以被操作以插入、缺失或变更某些核酸序列。来自这样的操作的改变包括但不限于引入限制位点、修改密码子使用、添加或优化转录和/或翻译调控序列等的改变。也可能的是改变核酸以变更编码的氨基酸。例如，可以有用的是将一个或多个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个等)氨基酸置换、缺失和/或插入引入抗体的氨基酸序列。这样的点突变可以修饰效应子功能、抗原结合亲和力、翻译后修饰、免疫原性等，可以引入氨基酸用于附接共价基团(例如标记)或者可以引入标签(例如，用于纯化目的)。突变可以被引入特定位点或者可以被随机引入，然后选择(例如，分子进化)。例如，编码本发明的(示例性)抗体的CDR区、VH序列和/或VL序列中的任一种的一种或多种核酸可以随机地或定向地突变以在编码的氨基酸中引入不同的性质。这样的改变可以是迭代过程的结果，其中最初改变被保留并且在其它核苷酸位置处的新改变被引入。进一步，在独立步骤中实现的改变可以被组合。引入编码的氨基酸的不同性质可以包括但不限于增强的亲和力。
载体
进一步包含在本发明的范围内的是载体，例如表达载体，其包括根据本发明的核酸分子。优选地，载体包括如上面描述的核酸分子。
术语“载体”指的是核酸分子，优选地指的是重组核酸分子，即天然不存在的核酸分子。在本发明的背景下的载体适合于并入或具有期望的核酸序列。这样的载体可以是贮藏载体、表达载体、克隆载体、转移载体等。贮藏载体是允许方便贮藏核酸分子的载体。因而，载体可以包括例如与根据本发明的期望的抗体或其抗体片段对应的序列。表达载体可以被用于产生表达产物比如RNA，例如mRNA，或肽，多肽或蛋白质。例如，表达载体可以包括对于载体的序列段(stretch)的转录需要的序列，比如启动子序列。克隆载体通常是包含克隆位点的载体，该克隆位点可以被用于将核酸序列并入载体。克隆载体可以是例如质粒载体或噬菌体载体。转移载体可以是适合于将核酸分子转移入细胞或生物体的载体，例如病毒载体。在本发明的背景下的载体可以是例如RNA载体或DNA载体。优选地，载体是DNA分子。例如，在本申请的意义下的载体包括克隆位点、选择标志比如抗生素抗性因子、和适合于载体的操作的序列比如复制起点。优选地，在本申请的背景下的载体是质粒载体。
细胞
在进一步方面，本发明还提供了细胞，其表达根据本发明的抗体或其抗原结合片段；和/或包括根据本发明的载体。
这样的细胞的实例包括但不限于真核细胞，例如酵母细胞、动物细胞或植物细胞。优选地，细胞是哺乳动物细胞，更优选地哺乳动物细胞系。优选的实例包括人细胞、CHO细胞、HEK293T细胞、PER.C6细胞、NS0细胞、人肝细胞、骨髓瘤细胞或杂交瘤细胞。
具体而言，细胞可以转染有根据本发明的载体，优选地转染有表达载体。术语“转染”指的是将核酸分子比如DNA或RNA(例如，mRNA)分子引入细胞，优选地引入真核细胞。在本发明的背景下，术语“转染”包括用于将核酸分子引入细胞，优选地引入真核细胞，比如引入哺乳动物细胞的对于本领域技术人员而言已知的任何方法。这样的方法包括，例如，电穿孔、例如基于阳离子脂质和/或脂质体的脂质转染法、磷酸钙沉淀、基于纳米颗粒的转染、基于病毒的转染或基于阳离子聚合物的转染，比如DEAE-葡聚糖或聚乙烯亚胺等。优选地，引入是非病毒的。
而且，本发明的细胞可以稳定地或瞬时地转染有根据本发明的载体，例如用于表达根据本发明的抗体或其抗原结合片段。优选地，细胞稳定地转染有编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的根据本发明的载体。可选地，还优选的是细胞瞬时地转染有编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的根据本发明的载体。
抗体的任选的另外的特征
本发明的抗体可以例如偶联至递送至治疗位点的药物或者偶联至可检测标记以促进位点的成像，该位点包括感兴趣的细胞。用于偶联抗体至药物和可检测标记的方法在本领域中是熟知的，如使用可检测标记的成像方法。标记的抗体可以在采用多种标记的多种试验中采用。本发明的抗体和感兴趣的表位之间的抗体-抗原复合物的形成的检测可以通过将可检测的物质附接至抗体来促进。适合的检测方式包括使用标记比如放射性核素、酶、辅酶、荧光剂、化学发光剂、色原、酶底物或辅因子、酶抑制剂、辅基复合物、自由基、颗粒、染料等。适合的酶的实例包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；适合的辅基复合物的实例包括链霉亲和素/生物素和抗生物素蛋白/生物素；适合的荧光材料的实例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、若丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的实例是鲁米诺；生物发光材料的实例包括萤光素酶、萤光素和水母发光蛋白；和适合的放射性材料的实例包括125I、131I、35S或3H。这样标记的试剂可以在多种熟知的试验中使用，比如放射免疫测定、酶免疫测定例如ELISA、荧光免疫测定等。根据本发明的标记的抗体因而可以在这些试验中使用，例如，如US 3,766,162；US 3,791,932；US 3,817,837和US 4,233,402中描述的。
根据本发明的抗体可以缀合至治疗部分比如细胞毒素、治疗剂、或放射性金属离子或放射性同位素。放射性同位素的实例包括但不限于I-131、I-123、I-125、Y-90、Re-188、Re-186、At-211、Cu-67、Bi-212、Bi-213、Pd-109、Tc-99、In-111等。这样的抗体缀合物可以被用于修饰给定的生物反应；药物部分将不被解释为限于传统的化学治疗剂。例如，药物部分可以是具有期望的生物学活性的蛋白质或多肽。这样的蛋白质可以包括，例如毒素，比如相思豆毒蛋白、蓖麻毒蛋白A、假单胞菌外毒素或白喉毒素。
用于缀合这样的治疗部分至抗体的技术是熟知的。参见，例如，Arnon et al.(1985)“Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy,”in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,ed.Reisfeld et al.(Alan R.Liss,Inc.),pp.243-256；ed.Hellstrom et al.(1987)“Antibodies for Drug Delivery,”inControlled Drug Delivery,ed.Robinson et al.(2d ed；Marcel Dekker,Inc.),pp.623-653；Thorpe(1985)"Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy:AReview,"in Monoclonal Antibodies'84:Biological and Clinical Applications,ed.Pinchera et al.pp.475-506(Editrice Kurtis,Milano,Italy,1985)；“Analysis,Results,and Future Prospective of the Therapeutic Use of RadiolabeledAntibody in Cancer Therapy,”in Monoclonal Antibodies for Cancer Detection andTherapy,ed.Baldwin et al.(Academic Press,New York,1985),pp.303-316；和Thorpeet al.(1982)Immunol.Rev.62:119-158。
可选地，抗体或其抗体片段可以缀合至第二抗体或其抗体片段以形成抗体复共轭对配合物(heteroconjugate)，如在US 4,676,980中描述的。此外，连接体可以在标记和本发明的抗体之间使用，例如，如在US 4,831,175中描述的。抗体或其抗原结合片段可以直接地用本领域中已知的放射性碘、铟、钇或其它放射性颗粒标记，例如，如在US 5,595,721中描述的。治疗可以由利用同时或随后施用的缀合的或非缀合的抗体的治疗的组合组成，例如，如在WO00/52031；WO00/52473中描述的。
本发明的抗体也可以附接至固相支持体。另外，本发明的抗体或其功能性抗体片段可以通过共价缀合至聚合物而被化学修饰以例如增加它们的循环半衰期。聚合物的实例和将它们附接至肽的方法在US 4,766,106；US 4,179,337；US 4,495,285和US 4,609,546中示出。在一些实施方式中，聚合物可以选自聚氧乙烯化多元醇和聚乙二醇(PEG)。PEG在室温下在水中是可溶的并且具有通式：R(O-CH2-CH2)nO-R，其中R可以是氢，或保护基团比如烷基或烷醇基。优选地，保护基团可以具有1-8个碳原子。例如，保护基团是甲基。符号n是正整数。在一个实施方式中，n在1与1,000之间。在另一实施方式中，n在2与500之间。优选地，PEG的平均分子量在1,000和40,000之间，更优选地，PEG的分子量在2,000和20,000之间，甚至更优选地，PEG的分子量在3,000和12,000之间。而且，PEG可以具有至少一个羟基，例如PEG可以具有末端羟基。例如，其是被活化以与抑制剂上的游离氨基反应的末端羟基。但是，将理解，反应基团的类型和量可以改变以实现本发明的共价缀合的PEG/抗体。
水溶性聚氧乙烯化多元醇在本发明中也是有用的。它们包括聚氧乙烯化山梨醇、聚氧乙烯化葡萄糖、聚氧乙烯化丙三醇(POG)等。在一个实施方式中，使用POG。不受任何理论的束缚，由于聚氧乙烯化丙三醇的丙三醇骨架是在例如动物和人中在单、二、三酸甘油酯中天然存在的相同的骨架，因此在体内该分支将不一定被视为外来物。POG可以具有与PEG相同范围的分子量。可以用于增加循环半衰期的另一种药物递送系统是脂质体。制备脂质体递送系统的方法对于本领域技术人员而言是已知的。其它药物递送系统在本领域中是已知的并且在例如引用的Poznansky等(1980)和Poznansky(1984)中描述。
本发明的抗体可以以纯化形式提供。通常地，抗体将存在于基本上不含其它多肽的组合物中，例如，其中少于90％(按重量计)、通常地少于60％和更通常地少于50％的组合物由其它多肽组成。
本发明的抗体在非人(或者异源的)宿主，例如在小鼠中可以是免疫原性的。具体而言，抗体可以具有如此个体决定簇，其在非人宿主中是免疫原性的，但是在人宿主中不是免疫原性的。具体而言，用于人用途的本发明的抗体包括不能容易地分离自宿主比如小鼠、山羊、兔、大鼠、非灵长类哺乳动物等并且通常不能通过人源化或从异种小鼠获得的那些抗体。
抗体的产生
根据本发明的抗体可以通过本领域中已知的任何方法制造。例如，使用杂交瘤技术制造单克隆抗体的一般方法是熟知的(Kohler,G.and Milstein,C,.1975；Kozbar etal.1983)。在一个实施方式中，使用在WO2004/076677中描述的可选的EBV无限增殖化方法。
优选的方法在WO 2004/076677中描述。在该方法中，产生本发明的抗体的B细胞转化有EBV和多克隆B细胞活化剂。细胞生长和分化的另外的刺激剂可以任选地在转化步骤期间添加以进一步增强效率。这些刺激剂可以是细胞因子比如IL-2和IL-15。在一方面，IL-2在无限增殖化步骤期间添加以进一步提高无限增殖化效率，但是其使用不是必需的。使用这些方法产生的无限增殖化B细胞然后可以使用本领域中已知的方法培养并且自其分离抗体。
另一种优选的方法在WO 2010/046775中描述。在该方法中，浆细胞以有限数目培养，或者在微孔培养板中作为单一浆细胞培养。抗体可以分离自浆细胞培养物。进一步，从浆细胞培养物，可以使用本领域中已知的方法提取RNA和进行PCR。抗体的VH和VL区可以通过RT-PCR(反转录酶PCR)扩增，测序并克隆入表达载体，该表达载体然后被转染入HEK293T细胞或其它宿主细胞。表达载体中核酸的克隆、宿主细胞的转染、转染的宿主细胞的培养和产生的抗体的分离可以使用本领域技术人员已知的任何方法进行。
如果需要，可以使用过滤、离心和各种色谱法比如HPLC或亲和色谱法进一步纯化抗体。用于纯化抗体比如单克隆抗体的技术，包括用于产生药用级别抗体的技术，在本领域中是熟知的。
本发明的抗体的片段可以通过如下方法从抗体获得：所述方法包括利用酶比如胃蛋白酶或木瓜蛋白酶进行消化，和/或通过化学还原裂解二硫键。可选地，抗体的片段可以通过重或轻链的序列的一部分的克隆和表达获得。抗体“片段”包括Fab、Fab’、F(ab')2和Fv片段。本发明还包括衍生自本发明的抗体的重和轻链的单链Fv片段(scFv)。例如，本发明包括含有来自本发明的抗体的CDR的scFv。还包括的是重或轻链单体和二聚体、单结构域重链抗体、单结构域轻链抗体以及单链抗体，例如，如此单链Fv：在该单链Fv中重和轻链可变结构域通过肽连接体接合。
本发明的抗体片段可以赋予单价或多价相互作用并且可以包含在如上面所描述的多种结构中。例如，scFv分子可以被合成以创建三价“三链抗体”或四价“四链抗体”。scFv分子可以包括导致二价微抗体的Fc区的结构域。另外地，本发明的序列可以是多特异性分子的成分，其中本发明的序列靶向本发明的表位和分子的其它区结合至其它靶标。示例性分子包括但不限于双特异性Fab2、三特异性Fab3、双特异性scFv和双抗体(Holliger andHudson,2005,Nature Biotechnology 9:1126-1136)。
分子生物学的标准技术可以被用于制备编码本发明的抗体或抗体片段的DNA序列。期望的DNA序列可以使用寡核苷酸合成技术完全地或部分地合成。位点定向诱变和聚合酶链反应(PCR)技术可以酌情使用。
任何适合的宿主细胞/载体系统可以被用于表达编码本发明的抗体分子或其片段的DNA序列。细菌，例如大肠杆菌和其它微生物系统可以部分地用于表达抗体片段比如Fab和F(ab’)2片段，并且尤其是Fv片段和单链抗体片段，例如单链Fv。真核，例如哺乳动物，宿主细胞表达系统，可以被用于产生更大的抗体分子，包括完整抗体分子。适合的哺乳动物宿主细胞包括但不限于CHO、HEK293T、PER.C6、NS0、骨髓瘤或杂交瘤细胞。
本发明还提供了用于产生根据本发明的抗体分子的方法，其包括在适合于由编码本发明的抗体分子的DNA表达蛋白质的条件下培养包括编码本发明的核酸的载体的宿主细胞，和分离抗体分子。
抗体分子可以包括仅重或轻链多肽，在该情况下仅重链或轻链多肽编码序列需要被用于转染宿主细胞。对于包括重和轻链二者的产物的产生，细胞系可以被转染有两种载体，编码轻链多肽的第一载体和编码重链多肽的第二载体。可选地，可以使用单一载体，所述载体包括编码轻链和重链多肽的序列。可选地，根据本发明的抗体可以通过如下过程产生：(i)在宿主细胞中表达根据本发明的核酸序列，例如通过使用根据本发明的载体，和(ii)分离表达的抗体产物。另外地，该方法可以包括(iii)纯化分离的抗体。可以对转化的B细胞和培养的浆细胞进行产生期望特异性或功能的抗体的那些细胞的筛选。
筛选步骤可以通过任何免疫测定，例如ELISA，通过组织或细胞(包括转染的细胞)的染色，通过中和试验或通过本领域中已知的用于鉴定期望特异性或功能的许多其它方法中的一种进行。试验可以基于一种或多种抗原的简单识别进行选择，或者可以另外基于期望的功能进行选择，例如以选择中和抗体而不仅仅是抗原结合抗体，以选择可以改变靶向的细胞的特性的抗体，比如它们的信号传导级联、它们的形状、它们的生长速率、它们影响其它细胞的能力、它们对其它细胞或其它试剂或在一些条件下的改变的影响的应答、它们的分化状态等。
个别转化的B细胞克隆然后可以从阳性转化的B细胞培养物产生。用于从阳性细胞的混合物分离个别克隆的克隆步骤可以使用有限稀释、显微操作、单细胞沉积，通过细胞分选或本领域中已知的其它方法进行。
来自培养的浆细胞的核酸可以使用本领域中已知的方法在HEK293T细胞或其它已知的宿主细胞中分离、克隆和表达。
本发明的无限增殖化B细胞克隆或转染的宿主细胞可以以多种途径使用，例如，作为单克隆抗体的来源、作为编码感兴趣的单克隆抗体的核酸(DNA或mRNA)的来源、用于研究等。
本发明还提供了包括产生根据本发明的抗体的无限增殖化B记忆细胞或转染的宿主细胞的组合物。
本发明的无限增殖化B细胞克隆或培养的浆细胞也可以被用作克隆随后重组表达的抗体基因的核酸的来源。来自重组来源的表达比来自B细胞或杂交瘤的表达在制药目的方面是更普遍的，例如由于稳定性、再现性、易培养性(culture ease)等的原因。
因而，本发明还提供了用于制备重组细胞的方法，其包括如下步骤：(i)从编码感兴趣的抗体的B细胞克隆或者培养的浆细胞获得一种或多种核酸(例如，重和/或轻链mRNA)；(ii)将核酸插入表达载体和(iii)将载体转染入宿主细胞以便允许感兴趣的抗体在所述宿主细胞中表达。
类似地，本发明提供了用于制备重组细胞的方法，其包括如下步骤：(i)对来自B细胞克隆或者培养的浆细胞的编码感兴趣的抗体的核酸(一种或多种)进行测序；和(ii)使用来自步骤(i)的序列信息制备插入宿主细胞的核酸(一种或多种)以便于允许感兴趣的抗体在所述宿主细胞中的表达。核酸可以但不必在步骤(i)和(ii)之间操作以引入限制位点、以改变密码子使用、和/或以优化转录和/或翻译调控序列。
而且，本发明还提供了制备转染的宿主细胞的方法，其包括将宿主细胞转染有编码感兴趣的抗体的一种或多种核酸的步骤，其中核酸是衍生自本发明的无限增殖化B细胞克隆或培养的浆细胞的核酸。因而，首先制备核酸(一种或多种)，然后使用其转染宿主细胞的过程可以在不同的时间通过不同的人在不同的地方(例如，在不同的国家)进行。
本发明的这些重组细胞然后可以被用于表达和培养目的。它们具体地可用于表达抗体用于大规模药物生产。它们也可以被用作药物组合物的活性成分。可以使用任何适合的培养技术，包括但不限于静置培养、滚瓶培养、腹水液、中空纤维型生物反应器筒、模块化微型发酵罐、搅拌釜、微载体培养、陶瓷芯灌注等。
用于从B细胞或浆细胞获得并测序免疫球蛋白基因的方法在本领域中是熟知的(例如，参见Kuby Immunology的第4章，第4版，2000)。
转染的宿主细胞可以是真核细胞，包括酵母和动物细胞，特别是哺乳动物细胞(例如CHO细胞、NS0细胞、人细胞比如PER.C6或HKB-11细胞、骨髓瘤细胞、或人肝细胞)，以及植物细胞，其中哺乳动物细胞是优选的。优选的表达宿主可以使本发明的抗体糖基化，具体地利用其自身在人中没有免疫原性的糖类结构。在一个实施方式中，转染的宿主细胞可以能够在无血清培养基中生长。在进一步实施方式中，转染的宿主细胞可以能够在不存在动物来源的产品的情况下在培养中生长。转染的宿主细胞也可以被培养以产生细胞系。
本发明还提供了用于制备编码感兴趣的抗体的一种或多种核酸分子(例如，重和轻链基因)的方法，其包括如下步骤：(i)根据本发明制备无限增殖化B细胞克隆或培养浆细胞；(ii)从B细胞克隆或培养的浆细胞获得编码感兴趣的抗体的核酸。进一步，本发明提供了用于获得编码感兴趣的抗体的核酸序列的方法，其包括如下步骤：(i)根据本发明制备无限增殖化B细胞克隆或培养浆细胞；(ii)对来自B细胞克隆或培养的浆细胞的编码感兴趣的抗体的核酸进行测序。
本发明进一步提供了制备编码感兴趣的抗体的核酸分子(一种或多种)的方法，其包括获得核酸的步骤，该核酸获得自本发明的转化的B细胞克隆或者培养的浆细胞。因而，首先获得B细胞克隆或者培养的浆细胞，然后从B细胞克隆或者培养的浆细胞获得核酸(一种或多种)的过程可以在不同的时间通过不同的人在不同的地方(例如，在不同的国家)进行。
本发明还包括用于制备根据本发明的抗体(例如，用于制药用途)的方法，其包括如下步骤：(i)获得和/或测序来自表达感兴趣的抗体的选择的B细胞克隆或者培养的浆细胞的一种或多种核酸(例如，重和轻链基因)；(ii)将核酸(一种或多种)插入表达载体或使用核酸(一种或多种)序列(一种或多种)制备表达载体；(iii)转染能够表达感兴趣的抗体的宿主细胞；(iv)在表达感兴趣的抗体的条件下培养或传代培养转染的宿主细胞；和任选地(v)纯化感兴趣的抗体。
本发明还提供了制备抗体的方法，其包括如下步骤：在表达感兴趣的抗体的条件下培养或传代培养转染的宿主细胞群，例如稳定转染的宿主细胞群，和任选地纯化感兴趣的抗体，其中所述转染的宿主细胞群已经通过如下过程制备：(i)提供编码感兴趣的选择抗体的核酸(一种或多种)，该感兴趣的选择抗体由如上面描述制备的B细胞克隆或培养的浆细胞产生，(ii)将核酸(一种或多种)插入表达载体，(iii)在可以表达感兴趣的抗体的宿主细胞中转染载体，和(iv)培养或传代培养包括插入的核酸的转染的宿主细胞以产生感兴趣的抗体。因而，首先制备重组宿主细胞，然后培养其以表达抗体的过程可以在不同的时间通过不同的人在不同的地方(例如，在不同的国家)进行。
药物组合物
本发明还提供了包括下列的一种或多种的药物组合物：
(i)根据本发明的抗体或其抗体片段；
(ii)编码根据本发明的抗体或抗体片段的核酸；
(iii)包括根据本发明的核酸的载体；和/或
(iv)表达根据本发明的抗体或包括根据本发明的载体的细胞。
换句话说，本发明还提供了药物组合物，其包括根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体和/或根据本发明的细胞。
药物组合物还可以优选地包含药学上可接受的运载体、稀释剂和/或赋形剂。虽然运载体或赋形剂可以促进施用，但是其自身不应当诱导对接受组合物的个体有害的抗体的产生。其也不应当有毒。适合的运载体可以是大的、缓慢代谢的大分子，比如蛋白质、多肽、脂质体、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合的氨基酸、氨基酸共聚物和灭活的病毒颗粒。一般而言，根据本发明的药物组合物中的药学上可接受的运载体可以是活性成分或非活性成分。优选地，根据本发明的药物组合物中的药学上可接受的运载体相对于寨卡病毒感染不是活性成分。
可以使用药学上可接受的盐，例如无机酸盐，比如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐和硫酸盐，或有机酸的盐，比如醋酸盐、丙酸盐、丙二酸盐和苯甲酸盐。
药物组合物中的药学上可接受的运载体可以另外地包含液体比如水、盐水、丙三醇和乙醇。另外地，辅助物质，比如湿润剂或乳化剂或pH缓冲物质可以存在于这样的组合物中。这样的运载体使得药物组合物能够配制为片剂、丸剂、糖衣片、胶囊、液体剂、凝胶剂、糖浆剂、膏剂和悬浮液，用于对象摄入。
本发明的药物组合物可以以多种形式制备。例如，组合物可以被制备为可注射剂，为液体溶液或悬浮液。也可以制备在注射之前适合于溶解在液体媒介或者悬浮在液体媒介中的固体形式(例如，冻干的组合物，类似于SynagisTM和HerceptinTM，用于利用包含防腐剂的无菌水重构)。组合物可以被制备用于外用施用，例如作为药膏、霜剂或粉末。组合物可以被制备用于口服施用，例如作为片剂或胶囊，作为喷雾剂，或作为糖浆剂(任选地调味的)。组合物可以被制备用于肺部施用，例如作为吸入剂，使用细粉末或喷雾剂。组合物可以被制备为栓剂或子宫托。组合物可以被制备用于鼻部、耳部或眼部施用，例如作为滴剂。组合物可以是试剂盒形式，其被设计使得组合的组合物刚好在施用至对象之前被重构。例如，冻干的抗体可以以含有无菌水或无菌缓冲剂的试剂盒形式提供。
优选的是组合物中的活性成分是抗体分子、抗体片段或其变体和衍生物，具体而言，组合物中的活性成分是根据本发明的抗体、抗体片段或其变体和衍生物。这样，其对于在胃肠道中的降解可以是敏感的。因此，如果组合物通过使用胃肠道的途径施用，则组合物可以包含保护抗体免受降解的药剂，但是一旦该药剂从胃肠道吸收，它立即释放抗体。
药学上可接受的运载体的全面讨论在Gennaro(2000)Remington:The Scienceand Practice of Pharmacy,20th edition,ISBN:0683306472中可获得。
本发明的药物组合物通常具有在5.8到8.5之间的pH，在一些实施方式中，其可以在6到8之间，并且在其它实施方式中，大约7。pH可以通过使用缓冲剂来维持。组合物可以是无菌的和/或无致热源的。相对于人，组合物可以是等渗的。在一个实施方式中，本发明的药物组合物在密闭容器中供应。
在本发明的范围内的是以几种施用形式存在的组合物；这些形式包括但不限于适合于肠胃外施用的那些形式，例如，通过注射或输注，例如通过快速浓注或连续输注。在产品用于注射或输注的情况下，其可以采取在油性或水性媒介中的悬浮液、溶液或乳液的形式，并且其可以包含配方剂(formulatory agent)，比如悬浮剂、防腐剂、稳定剂和/或分散剂。可选地，抗体分子可以是干燥形式，在使用之前利用适合的无菌液体重构。媒介通常被理解为如此材料：其适合于储存、运输和/或施用化合物，比如药学活性化合物，具体而言根据本发明的抗体。例如，媒介可以是生理学上可接受的液体，其适合于储存、运输和/或施用药学上活性化合物，具体而言根据本发明的抗体。一旦被配制，本发明的组合物可以直接地被施用至对象。在一个实施方式中，组合物适合于施用至哺乳动物，例如人对象。
本发明的药物组合物可以通过许多途径施用，其包括但不限于口服、静脉内、肌肉内、动脉内、髓内、腹膜内、鞘内、心室内、透皮(transdermal)、经皮(transcutaneous)、外用、皮下、鼻内、肠内、舌下、阴道内或直肠途径。无针注射器(hypospray)也可以被用于施用本发明的药物组合物。优选地，药物组合物可以被制备为用于口服施用，例如作为片剂、胶囊等，用于外用施用，或者作为可注射剂，例如作为液体溶液或悬浮液，其中特别优选的是药物组合物是可注射剂。在注射之前适合于溶解在液体媒介或者悬浮在液体媒介中的固体形式也是优选的，例如药物组合物处于冻干形式。
对于注射，例如静脉内、皮肤或皮下注射，或者在痛苦部位处的注射，活性成分将优选地是肠胃外可接受的水溶液的形式，其是无热原的并且具有适合的pH、等渗性和稳定性。本领域技术人员能够熟练地使用，例如，等渗媒介比如氯化钠注射液、林格液、乳酸盐林格注射液制备适合的溶液。可以根据需要包括防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其它添加剂。无论其是多肽、肽或者核酸分子、将给予个体的根据本发明的其它药学上有用的化合物，施用优选地是以“预防上有效量”或“治疗上有效量”(根据具体情况)，这足以显示对个体有益。施用的实际量、和施用的速度和时间进程将取决于正在治疗的性质和严重程度。对于注射，根据本发明的药物组合物可以例如在预装注射器中提供。
如上面所限定的发明性药物组合物也可以以任何口服可接受的剂型被口服施用，包括但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在用于口服使用的片剂的情况下，通常使用的运载体包括乳糖和玉米淀粉。润滑剂比如硬脂酸镁也通常被添加。对于以胶囊形式的口服施用，有用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当水性悬浮液对于口服使用需要时，活性成分，即如上面所限定的发明性转运蛋白货物缀合物分子(transporter cargoconjugate molecule)，与乳化剂和悬浮剂组合。如果需要，也可以添加某些甜味剂、增味剂或着色剂。
发明性药物组合物也可以被外用施用，尤其是当治疗的靶标包括通过外用施加易接近的区域或器官，例如包括皮肤的疾病或任何其它易接近的上皮组织的疾病。适合的外用制剂容易地被制备用于这些区域或器官中的每个。对于外用应用，发明性药物组合物可以以适合的药膏配制，该药膏包含发明性药物组合物，特别是如上面所限定的其成分，悬浮或溶解在一种或多种运载体中。用于外用施用的运载体包括但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。可选地，发明性药物组合物可以以适合的洗液或霜剂配制。在本发明的背景下，适合的运载体包括但不限于矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二醇、苄醇和水。
剂量治疗可以是单次剂量方案或多次剂量方案。具体地，药物组合物可以作为单次剂量产品被提供。优选地，药物组合物中抗体的量——具体地，如果作为单次剂量产品被提供——不超过200mg，更优选地不超过100mg，并且甚至更优选地不超过50mg。
例如，根据本发明的药物组合物可以每日施用，例如每天一次或几次，例如每天一次、两次、三次或四次，优选地每天一次或两次，更优选地每天一次，持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21或更多天，例如每日施用持续1、2、3、4、5、6个月。优选地，根据本发明的药物组合物可以每周施用，例如每周一次或两次，持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21或更多周，例如每周施用持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或者每周持续2、3、4或5年。而且，根据本发明的药物组合物可以优选地每月施用，例如每月一次，或者更优选地，每两个月一次持续1、2、3、4或5或更多年。还优选的是施用持续终身。另外，还设想仅单次施用，具体地相对于某些适应症，例如用于在非免疫对象中遭受意外暴露的情况下预防寨卡病毒感染。但是，最优选的治疗方案是暴露后预防(PEP)，其中在寨卡感染后尽快施用一次或多次单次剂量。这样的预防设定也是优选的：其中一次或多次单次剂量被施用以预防寨卡感染(即，在寨卡感染之前，具体地在非寨卡免疫的对象中)。
具体而言，优选的是对于单次剂量，例如每日、每周或每月剂量，优选地对于每周剂量，根据本发明的药物组合物中抗体或其抗原结合片段的量不超过1g，优选地不超过500mg，更优选地不超过200mg，甚至更优选地不超过100mg，和特别优选地不超过50mg。
药物组合物通常包括“有效”量的本发明的一种或多种抗体，即足以治疗、改善、减轻或预防期望疾病或病症，或足以展现可检测的治疗效果的量。治疗效果也包括致病效力或身体症状的降低或减轻。任何具体对象的精确有效量将取决于它们的尺寸、重量和健康、病症的性质和程度、以及选择用于施用的治疗剂或治疗剂的组合。对于给定情形，有效量由常规实验确定并且在临床医师的判断内。出于本发明的目的，相对于其被施用至的个体的体重(例如，以Kg计)，有效剂量将通常是从大约0.005到大约100mg/kg、优选地从大约0.0075到大约50mg/kg、更优选地从大约0.01到大约10mg/kg、和甚至更优选地从大约0.02到大约5mg/kg的本发明的抗体(例如药物组合物中抗体的量)。
而且，根据本发明的药物组合物也可以包括另外的活性成分，其可以是进一步的抗体或不是抗体的成分。另外的活性成分优选地是限制点抑制剂。还优选的是如本文描述的ZIKV中和抗体或其抗原结合片段与如本文作为另外的活性成分(助剂(co-agent))描述的ZIKV NS1结合抗体或其抗原结合片段组合。因此，除了ZIKV的中和之外，NS1的病原性作用也可以被阻断。根据本发明的药物组合物可以包括一种或多种另外的活性成分，例如在组合疗法的背景下作为助剂描述的。
根据本发明的抗体或抗原结合片段可以与另外的活性成分存在于同一药物组合物中，或者优选地，根据本发明的抗体或抗原结合片段由第一药物组合物包括并且另外的活性成分由与第一药物组合物不同的第二药物组合物包括。因此，如果设想多于一种另外的活性成分，则每种另外的活性成分和根据本发明的抗体或抗原结合片段优选地由不同的药物组合物包括。这些不同的药物组合物可以组合/同时施用或者在不同时间或在不同位置(例如身体的不同部分)施用。
优选地，根据本发明的抗体或抗原结合片段以及另外的活性成分提供叠加的治疗效果，或优选地，协同治疗效果。术语“协同”被用于描述两种或更多种活性药剂的组合效果，其比每种各自活性药剂的单独效果的总和更强。因而，在两种或更多种药剂的组合效果导致活性或过程的“协同抑制”的情况下，意图是活性或过程的抑制比每种各自活性药剂的抑制效果的总和更强。术语“协同治疗效果”指的是利用两种或更多种疗法的组合观察到的治疗效果，其中该治疗效果(如通过许多参数中的任一种测量的)比利用各自单独疗法观察到的单独治疗效果的总和更强。
包括根据gZKA190、gZKA64、gZKA230、gZKA185、gZKA78的抗体或其抗原结合片段，和药学上可接受的运载体的药物组合物是优选的。
在一个实施方式中，本发明的组合物可以包括本发明的抗体，其中抗体可以占按组合物中的总蛋白质的重量计至少50％(例如，60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多)。在这样的组合物中，抗体优选地是纯化形式。
本发明还提供了制备药物组合物的方法，其包括如下步骤：(i)制备本发明的抗体；和(ii)将纯化的抗体与一种或多种药学上可接受的运载体进行掺合。
在另一实施方式中，制备药物组合物的方法包括如下步骤：将抗体与一种或多种药学上可接受的运载体进行掺合，其中抗体是从本发明的转化的B细胞或培养的浆细胞获得的单克隆抗体。
作为出于治疗目的递送抗体或B细胞的替代方案，可能的是递送编码来源于B细胞或培养的浆细胞的感兴趣的单克隆抗体(或其活性片段)的核酸(通常地DNA)至对象，使得核酸可以在对象中原位表达以提供期望的治疗效果。适合的基因疗法和核酸递送载体是本领域中已知的。
药物组合物可以包括抗菌剂，特别是如果以多次剂量形式包装时。它们可以包括清洁剂，例如吐温(聚山梨醇酯)，比如吐温80。清洁剂通常以低水平存在，例如，低于0.01％。组合物也可以包括钠盐(氯化钠)以给予张力。例如，10±2mg/ml NaCl的浓度是典型的。
进一步，药物组合物可以包括例如大约15-30mg/ml(例如，25mg/ml)的糖醇(例如，甘露醇)或二糖(例如，蔗糖或海藻糖)，特别是如果它们将被冻干或者如果它们包括已经由冻干材料重构的材料。用于冻干的组合物的pH在冻干之前可以调节至5和8之间，或5.5和7之间，或者大约6.1。
本发明的组合物也可以包括一种或多种免疫调节剂。在一个实施方式中，一种或多种免疫调节剂包括佐剂。
医学治疗、试剂盒和用途
医学治疗
在进一步方面，本发明提供了根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物在(i)预防和/或治疗寨卡病毒感染中；或在(ii)诊断寨卡病毒感染中的用途。因此，根据本发明的抗体或其抗原结合片段(和具体地，如上面描述的其优选实施方式)在(i)如本文所描述的预防和/或治疗寨卡病毒感染中；或在(ii)如本文所描述的诊断寨卡病毒感染中的用途是优选的。
诊断方法可以包括将抗体或抗体片段与样品接触。这样的样品可以分离自对象，例如分离的组织样品，其取自例如鼻道、鼻窦(sinus cavity)、唾液腺、肺、肝、胰腺、肾脏、耳朵、眼睛、胎盘、消化道、心脏、卵巢、垂体、肾上腺、甲状腺、脑、皮肤或血液，优选地血浆或血清。诊断方法也可以包括抗原/抗体复合物的检测，具体地在将抗体或抗体片段与样品接触之后。这样的检测步骤通常在试验台进行，即不与人或动物体进行任何接触。检测方法的实例对于本领域技术人员是熟知的并且包括例如ELISA(酶联免疫吸附测定)。
寨卡病毒感染的预防具体指预防环境，其中对象没有被诊断患有寨卡病毒感染(没有进行诊断或诊断结果为阴性)和/或对象没有显示寨卡病毒感染的症状。因此，寨卡病毒感染的预防包括“暴露后预防”(PEP)，即在可能的寨卡病毒感染后，例如在寨卡病毒影响的区域中蚊叮咬之后的预防性治疗。寨卡病毒感染的预防在高危险对象中是特别有用的，比如在怀孕对象中和/或在停留在寨卡病毒影响的区域中的对象(比如在寨卡病毒影响的区域中生活或前往寨卡病毒感染的区域的对象)中。
相比之下，在治疗环境中，对象通常被寨卡病毒感染，诊断患有寨卡病毒感染和/或显示寨卡病毒感染的症状。当然，术语ZIKV感染的“治疗”和“疗法”/“治疗剂”包括ZIKV感染的(完全)治愈以及减轻。
寨卡病毒感染的诊断的优选方法是如本文描述的诊断方法，例如使用根据本发明的中和抗体或其抗原结合片段，和/或根据本发明的ZIKV NS1结合抗体或其抗原结合片段。
因此，根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物优选地用于治疗诊断患有寨卡病毒感染的对象中或显示寨卡感染的症状的对象中的寨卡病毒感染。
还优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物用于预防和/或治疗无症状对象中的寨卡病毒感染。那些对象可以被诊断或不被诊断患有寨卡病毒感染。
优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物用于预防和/或治疗怀孕对象中的寨卡病毒感染，具体地预防先天性感染。例如，这可以以用于预防HCMV先天性感染类似的方式执行，如在Nigro G,Adler SP,La Torre R,Best AM,Congenital CytomegalovirusCollaborating Group:Passive immunization during pregnancy for congenitalcytomegalovirus infection；N Engl J Med 2005,353:1350–1362中描述的。
不受任何理论束缚，假定如果被施用至怀孕对象，例如通过(i.v.)注射或如本文描述的任何其他施用途径，根据本发明的抗体或其抗原结合片段可以通过与FcRn的相互作用穿过胎盘。重要的是，如本文描述的抗体的“LALA”变体与FcRn的相互作用不受损害。据信，FcRn在胎盘中已经在前三个月表达。
可选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段也可以被施用至羊膜之外的空间。
优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物被用于预防和/或治疗寨卡病毒感染，其中抗体或其抗原结合片段、核酸、载体、细胞或药物组合物在(可能的)寨卡病毒感染之后被施用至多七天，优选地在(可能的)寨卡病毒感染之后被施用至多五天，更优选地在(可能的)寨卡病毒感染之后被施用至多四天，甚至更优选地在(可能的)寨卡病毒感染之后被施用至多三天，并且最优选地在(可能的)寨卡病毒感染之后被施用至多一天。这种治疗方案在治疗环境中以及在预防环境中，特别是在暴露后预防(PEP)中可以是有用的。
在PEP中，通常地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物的第一次施用在可能的ZIKV感染之后，例如在ZIKV影响的区域中蚊叮咬之后尽快进行。因此，在PEP中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物的第一次施用通常是在(可能的)寨卡病毒感染之后的至多一天或多天，如上面所描述的。
还优选的是，根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物被用于预防和/或治疗寨卡病毒感染，其中抗体或其抗原结合片段、核酸、载体、细胞或药物组合物在(可能的)寨卡病毒感染之前被施用至多三个月，优选地在(可能的)寨卡病毒感染之前被施用至多一个月，更优选地在(可能的)寨卡病毒感染之前被施用至多两周，甚至更优选地在(可能的)寨卡病毒感染之前被施用至多一周，并且最优选地在(可能的)寨卡病毒感染之前被施用至多一天。这种治疗方案具体指预防环境。
一般而言，并且具体地在PEP中，在根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物的第一次施用之后，一种或多种随后施用可以优选地遵循每天或每两天的单次剂量持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、1、15、16、17、18、19、20、或21天。还优选的是在根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物的第一次施用之后，一种或多种随后施用可以优选地遵循每周一次或两次的单次剂量持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、1、15、16、17、18、19、20、或21周。还优选的是在根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物的第一次施用之后，一种或多种随后施用可以优选地遵循每2或4周的单次剂量持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、1、15、16、17、18、19、20、或21周。还优选的是在根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物的第一次施用之后，一种或多种随后施用可以优选地遵循每二或四月的单次剂量持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、1、15、16、17、18、19、20、或21月。还优选的是在根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物的第一次施用之后，一种或多种随后施用可以优选地遵循每年一次或两次的单次剂量持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10年。
优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物以0.005至100mg/kg体重的(单次)剂量，优选地以0.0075至50mg/kg体重的(单次)剂量，更优选地以0.01至10mg/kg体重的(单次)剂量，甚至更优选地以0.05至5mg/kg体重的(单次)剂量，并且特别优选地以0.1至1mg/kg体重的(单次)剂量被施用。
根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物可以通过许多途径施用，比如口服、静脉内、肌肉内、动脉内、髓内、腹膜内、鞘内、心室内、透皮、经皮、外用、皮下、鼻内、肠内、舌下、阴道内或直肠途径。静脉内施用、或皮下施用或肌肉内施用是优选的，并且静脉内施用或皮下施用是更优选的。
在怀孕对象中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段也可以羊膜内或羊膜外施用，例如通过注射。
因此，本发明还提供了预防和/或治疗对象中的寨卡病毒感染的方法，其中该方法包括给需要其的对象施用根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物。该方法的优选实施方式对应于如上面(和下面关于组合疗法)所描述的医学用途的优选实施方式。例如，在该方法中的优选对象是诊断患有寨卡病毒感染或显示寨卡病毒感染的症状的对象。在该方法中另一种优选的对象是怀孕对象。
组合疗法
根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物在根据本发明的方法和用途中的施用可以单独实施或与特别地可用于预防和/或治疗ZIKV感染的助剂(其在本文中还被称为“另外的活性成分”)组合实施。
本发明包括根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物的施用，其中在可用于治疗和/或预防ZIKV感染的其它治疗方案或助剂之前、同时或随后，其被施用至对象。与所述助剂同时施用的所述抗体、核酸、载体、细胞或药物组合物可以在相同或不同组合物(一种或多种)中并且通过相同或不同的施用途径(一种或多种)施用。
所述其它治疗方案或助剂可以是例如限制点抑制剂。
因而，在本发明的另一方面中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物与用于本文描述的(医疗)用途的限制点抑制剂组合施用。
优选的限制点抑制剂涉及PD-1/PD-L1和/或CTLA4的阻断，并且因而包括抗-PD-1抗体、抗-PD-L1抗体和抗-CTLA4抗体。因而，根据本发明的药物组合物可以包括一种或多种另外的活性成分。
还优选的是如本文描述的ZIKV中和抗体或其抗原结合片段与如本文作为另外的活性成分(助剂)描述的ZIKV NS1结合抗体或其抗原结合片段组合。因此，除了ZIKV的中和之外，NS1的病原性作用也可以被阻断。因此，本文描述的ZIKV NS1结合抗体或其抗原结合片段是优选的另外的活性成分(助剂)。
根据本发明的抗体或抗原结合片段可以与另外的活性成分(助剂)存在于同一药物组合物中，或者优选地，根据本发明的抗体或抗原结合片段由第一药物组合物包括并且另外的活性成分(助剂)由与第一药物组合物不同的第二药物组合物包括。因此，如果设想多于一种另外的活性成分(助剂)，则每种另外的活性成分(助剂)和根据本发明的抗体或抗原结合片段优选地由不同的药物组合物包括。这样的不同的药物组合物可以组合/同时施用或者在不同时间或在不同位置(例如身体的不同部分)施用。
优选地，根据本发明的抗体或抗原结合片段以及另外的活性成分(助剂)提供叠加的治疗效果，或优选地协同治疗效果。术语“协同”被用于描述两种或更多种活性药剂的组合效果，其比每种各自活性药剂的单独效果的总和更强。因而，在两种或更多种药剂的组合效果导致活性或过程的“协同抑制”的情况下，意图是活性或过程的抑制比每种各自活性药剂的抑制效果的总和更强。术语“协同治疗效果”指的是利用两种或更多种疗法的组合观察到的治疗效果，其中该治疗效果(如通过许多参数中的任一种测量的)比利用各自单独疗法观察到的单独治疗效果的总和更强。
进一步用途和试剂盒
在进一步方面，本发明还提供了根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物用于通过检查所述疫苗的抗原包含正确构象的特定表位来监测抗寨卡疫苗的质量的用途。由比如待检查的抗寨卡疫苗包含的优选抗原包括ZIKV包膜蛋白或任何其他分子/复合物，其包括(i)如上面描述的ZIKV E蛋白(EDIII)的结构域III或(ii)如上面所描述的四级ZIKV表位，或由其组成。
而且，本发明还提供了根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物在诊断寨卡病毒感染中的用途。
另外，还提供了根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物在测定分离的血液样品(例如，全血、血清和/或血浆)是否感染寨卡病毒中的用途。
如上面所描述，诊断方法可以包括将抗体或抗体片段与样品接触。这样的样品可以分离自对象，例如分离的组织样品，其取自例如鼻道、鼻窦、唾液腺、肺、肝、胰腺、肾脏、耳朵、眼睛、胎盘、消化道、心脏、卵巢、垂体、肾上腺、甲状腺、脑、皮肤或血液，优选地血清或血浆。诊断方法也可以包括抗原/抗体复合物的检测，具体地在将抗体或抗体片段与样品接触之后。这样的检测步骤通常在试验台进行，即不与人或动物体进行任何接触。检测方法的实例对于本领域技术人员是熟知的并且包括例如ELISA(酶联免疫吸附测定)。
在进一步方面，本发明还提供了组分试剂盒(kit of parts)，其包括根据本发明的至少一种抗体或其抗原结合片段、根据本发明的至少一种核酸、根据本发明的至少一种载体、根据本发明的至少一种细胞、和/或根据本发明的至少一种药物组合物。另外，试剂盒可以包括施用根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞或根据本发明的药物组合物的手段，比如注射器或器皿、传单、和/或如上面所描述的待施用的助剂。
特异性地结合至寨卡病毒的NS1蛋白的抗体
在进一步方面，本发明还提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性地结合至寨卡病毒(ZIKV)的NS1蛋白。
ZIKV NS1蛋白(非结构蛋白1)存在于细胞内，分泌的和细胞表面相关的并且具体地分泌的ZIKV NS1蛋白通常发现于感染ZIKV的对象的体液中，比如血清、唾液、尿液等。分泌的和细胞表面相关的NS1是高度免疫原性的并且引发抗体的产生。NS1已知是ZIKV感染的早期诊断的重要生物标记。因此，特异性地结合至寨卡病毒(ZIKV)的NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段例如在诊断ZIKV感染中是有用的。
一般而言，可以通过本领域技术人员已知的标准ELISA和如上面所描述来评估结合。其中，抗体结合的相对亲和力可以通过测量在饱和下达到50％最大结合需要的抗体的浓度(EC50)来测定。优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段对ZIKV NS1蛋白的EC50不超过50ng/ml，优选地所述EC50不超过25ng/ml，更优选地所述EC50不超过15ng/ml，甚至更优选地所述EC50不超过10ng/ml，和最优选地所述EC50不超过5ng/ml，比如例如大约2或3ng/ml。
优选地，特异性地结合至寨卡病毒(ZIKV)的NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段基本上不结合至登革热病毒(DENV)NS1蛋白。其中，“基本上不结合”意思是对于抗体或其抗原结合片段，在对登革热病毒(DENV)NS1蛋白的标准ELISA中不能测定到至多102ng/ml、优选地至多103ng/ml、更优选地至多5*103ng/ml、甚至更优选地至多8*103ng/ml、和最优选地至多104ng/ml的EC50值。换句话说，在标准ELISA中对登革热病毒(DENV)NS1蛋白在饱和下达到50％最大结合需要的抗体或其抗原结合片段的浓度(EC50)通常多于102ng/ml、优选地多于103ng/ml、更优选地多于5*103ng/ml、甚至更优选地多于8*103ng/ml、和最优选地多于104ng/ml。
还优选的是特异性地结合至寨卡病毒(ZIKV)的NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段基本上不结合至黄热病病毒(YFV)NS1蛋白、西尼罗河病毒(WNV)NS1蛋白、日本脑炎病毒(JEV)NS1蛋白和/或蜱传脑炎病毒(TBEV)NS1蛋白。其中，“基本上不结合”意思是对于抗体或其抗原结合片段，在对黄热病病毒(YFV)NS1蛋白、西尼罗河病毒(WNV)NS1蛋白、日本脑炎病毒(JEV)NS1蛋白和/或蜱传脑炎病毒(TBEV)NS1蛋白的标准ELISA中不能测定到至多102ng/ml、优选地至多103ng/ml、更优选地至多5*103ng/ml、甚至更优选地至多8*103ng/ml、和最优选地至多104ng/ml的EC50值。换句话说，在标准ELISA中对黄热病病毒(YFV)NS1蛋白、西尼罗河病毒(WNV)NS1蛋白、日本脑炎病毒(JEV)NS1蛋白和/或蜱传脑炎病毒(TBEV)NS1蛋白在饱和下达到50％最大结合需要的抗体或其抗原结合片段的浓度(EC50)通常多于102ng/ml、优选地多于103ng/ml、更优选地多于5*103ng/ml、甚至更优选地多于8*103ng/ml、和最优选地多于104ng/ml。
优选地，特异性地结合至寨卡病毒(ZIKV)的NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段是人抗体。还优选的是，特异性地结合至寨卡病毒(ZIKV)的NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体，优选地人单克隆抗体。而且，还优选的是，特异性地结合至寨卡病毒(ZIKV)的NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段是重组抗体。
优选地，特异性地结合至寨卡病毒(ZIKV)的NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括Fc部分。更优选地，特异性地结合至寨卡病毒(ZIKV)的NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括CH2 L4A突变、CH2 L5A突变或二者。对于包括Fc部分和/或包括CH2 L4A突变、CH2 L5A突变或二者的根据本发明的抗体或其抗原结合片段的详细描述，其指的是在中和上面的根据本发明的抗体的背景下对Fc部分和CH2 L4A突变、CH2 L5A突变或二者的详细描述。因此，相应的详细描述以及优选的实施方式也适用特异性地结合至寨卡病毒(ZIKV)的NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段。
但是，还优选的是特异性地结合至寨卡病毒(ZIKV)的NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段不包括Fc部分。具体地，特异性地结合至寨卡病毒(ZIKV)的NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段是纯化抗体、单链抗体、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFv。甚至更优选地，特异性地结合至寨卡病毒(ZIKV)的NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段如本文描述被标记，例如生物素化，比如生物素化的Fab、Fab’或F(ab’)2片段。
优选地，特异性地结合至寨卡病毒(ZIKV)的NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段结合至寨卡病毒NS1蛋白的抗原位点S1和/或抗原位点S2。本发明人惊讶地发现结合至ZIKV NS1蛋白的抗原位点S1和/或抗原位点S2的抗ZIKV NS1抗体与登革热病毒NS1蛋白(DENV NS1)不交叉反应。相反，抗ZIKV NS1抗体，其既不结合至ZIKV NS1蛋白的抗原位点S1也不结合至ZIKV NS1蛋白的抗原位点S2，通常与DENV NS1交叉反应。该出人意料的发现表明ZIKV NS1上的抗原位点S1和S2可以被用于将ZIKV NS1特异性抗体和与DENV NS1交叉反应的抗体区分。
最优选地，特异性地结合至寨卡病毒(ZIKV)的NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段结合至寨卡病毒NS1蛋白的抗原位点S2。抗原位点S2在多种ZIKV谱系中是高度保守的，但是其序列和结构与其他黄病毒属病毒的NS1上的相应位点不是同源的，因而提供对ZIKV的独特特异性。
ZIKV NS1蛋白的抗原位点S1和S2由本发明人如在实施例3、图6中描述的进行鉴定。抗体是否结合至抗原位点S1和/或S2可以由本领域技术人员通过使用交叉竞争研究(例如，如下面或实施例3中描述的)容易地鉴定，其中根据gZKA15(SEQ ID NO:91-99)的S1特异性抗体和/或根据gZKA35(SEQ ID NO:127-135)的S2特异性抗体可以被用作“第二抗体”。在这样的竞争试验中，与gZKA15和/或gZKA35的任何竞争(全部或部分)的存在表明待测试的抗体分别结合至抗原位点S1和/或抗原位点S2。
一般而言，对于竞争试验，可以具体地根据供应商的使用说明使用用于标准蛋白质-蛋白质结合的商业可得的系统，比如例如由FortéBio提供的“
Figure GDA0003868052510000572
RED96系统”。
在例如使用由FortéBio提供的“
Figure GDA0003868052510000573
RED96系统”的示例性竞争试验中，可以将ZIKV-NS1蛋白(例如在PBS中稀释至2.5μg/ml)固定(例如持续7-9分钟)在APS涂覆的传感器芯片的表面上。涂覆的生物传感器然后可以置于包含封闭缓冲液(例如，在PBS中的0.1％BSA；例如持续6分钟)的孔内以封闭游离的生物传感器结合位点。涂覆的生物传感器然后可以利用待测试抗体(一种或多种)(例如，在例如10μg/ml的封闭缓冲液中稀释)培育(例如持续8分钟)。在待测试的抗体的结合之后(步骤1)，生物传感器被移动至包含“第二抗体”(例如gZKA15和/或gZKA35)的孔(例如持续8分钟)(步骤2)。因而可以在步骤2中测定竞争、部分竞争或没有竞争，这取决于是否检测到没有缔合(竞争)、低缔合(部分竞争)或(强)缔合(没有竞争)。
如上面所描述，根据本发明的抗体或其抗原结合片段优选地包括重链上的(至少)三种互补决定区(CDR)和轻链上的(至少)三种CDR。一般而言，互补决定区(CDR)是在重链可变结构域和轻链可变结构域中存在的高变区。通常，抗体的重链和连接的轻链的CDR一起形成抗原受体。通常，三种CDR(CDR1、CDR2和CDR3)在可变结构域中非连续地排列。由于抗原受体通常由两种可变结构域(在不同多肽链上，即重链和轻链)组成，因此对于每种抗原受体存在六种CDR(重链：CDRH1、CDRH2和CDRH3；轻链：CDRL1、CDRL2和CDRL3)。单一抗体分子通常具有两种抗原受体并且因此包含十二种CDR。重链和/或轻链上的CDR可以被构架区分离，其中构架区(FR)是可变结构域中的区，该可变结构域比CDR较少“可变”。例如，链(或每个链，分别地)可以由被三个CDR分离的四个构架区构成。
测定本发明的五种示例性抗体的重链和轻链的序列，其包括在重链上的三种不同的CDR和在轻链上的三种不同的CDR。根据IMGT编号系统限定CDR氨基酸的位置(IMGT:http://www.imgt.org/；参见Lefranc,M.-P.et al.(2009)Nucleic Acids Res.37,D1006-D1012)。
表4示出了根据本发明的示例性抗体的重链CDR(CDRH1、CDRH2和CDRH3)和重链可变区(其被称为“VH”)的氨基酸序列的SEQ ID NO：
Figure GDA0003868052510000571
Figure GDA0003868052510000581
下面的表5示出了根据本发明的示例性抗体的轻链CDR(CDRL1、CDRL2和CDRL3)和轻链可变区(其被称为“VL”)的氨基酸序列的SEQ ID NO：
Figure GDA0003868052510000582
因而，优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括与表4中和/或表5中示出的CDR序列、VH序列和/或VL序列的至少一种具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。
优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中至少一个CDR，优选地至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:93、111、129、155、159、163、167、171、175、179、183、187、191、195、199、203、207、211、215、219、223、227、231、和235的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，或由其组成。
更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中至少一个CDR，优选地至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:93、111和129的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，或由其组成。其中，优选的是至少一个CDR，优选地至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:93的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，或由其组成。还优选的是至少一个CDR，优选地至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:111的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，或由其组成。而且，还优选的是至少一个CDR，优选地至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:129的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，或由其组成。
最优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中至少一个CDR，优选地至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:129的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，或由其组成。
还优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个重链CDRH1包括根据SEQ ID NO:91、109、127、153、157、161、165、169、173、177、181、185、189、193、197、201、205、209、213、217、221、225、229、和233的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRH2包括根据SEQ ID NO:92、110、128、154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226、230、和234的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:93、111、129、155、159、163、167、171、175、179、183、187、191、195、199、203、207、211、215、219、223、227、231、和235的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
仍更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个重链CDRH1包括根据SEQ ID NO:91、109和127的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRH2包括根据SEQ ID NO:92、110和128的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:93、111和129的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
甚至更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个重链CDRH1包括根据SEQ ID NO:91的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRH2包括根据SEQ ID NO:92的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:93的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
甚至还更优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个重链CDRH1包括根据SEQ ID NO:109的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRH2包括根据SEQ ID NO:110的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:111的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
特别优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个重链CDRH1包括根据SEQ ID NO:127的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRH2包括根据SEQ ID NO:128的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个重链CDRH3包括根据SEQ ID NO:129的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个CDRL1包括根据SEQ ID NO:94、112和130的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRL2包括根据SEQ ID NO:95、96、113、114、131和132的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个CDRL3包括根据SEQ ID NO:97、115和133的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
甚至更优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个CDRL1包括根据SEQ ID NO:94的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRL2包括根据SEQ ID NO:95或96的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个CDRL3包括根据SEQ ID NO:97的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
还甚至更优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个CDRL1包括根据SEQ ID NO:112的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRL2包括根据SEQ ID NO:113或114的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个CDRL3包括根据SEQ ID NO:115的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
特别更优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链，重链包括至少一个CDRH1、至少一个CDRH2和至少一个CDRH3，轻链包括至少一个CDRL1、至少一个CDRL2和至少一个CDRL3，其中
(i)至少一个CDRL1包括根据SEQ ID NO:130的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；
(ii)至少一个CDRL2包括根据SEQ ID NO:131或132的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；和/或
(iii)至少一个CDRL3包括根据SEQ ID NO:133的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
最优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括(i)根据SEQ ID NO:91-93的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(ii)根据SEQ ID NO:109-111的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(iii)根据SEQID NO:127-129的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(iv)根据SEQ ID NO:153-155的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(v)根据SEQ ID NO:157-159的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(vi)根据SEQ ID NO:161-163的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(vii)根据SEQ ID NO:165-167的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(viii)根据SEQ ID NO:169-171的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(ix)根据SEQ ID NO:173-175的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(x)根据SEQ ID NO:177-179的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xi)根据SEQ ID NO:181-183的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xii)根据SEQ ID NO:185-187的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xiii)根据SEQ ID NO:189-191的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xiv)根据SEQ ID NO:193-195的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xv)根据SEQ ID NO:197-199的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xvi)根据SEQ ID NO:201-203的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xvii)根据SEQ ID NO:205-207的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xviii)根据SEQ ID NO:209-211的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xix)根据SEQ ID NO:213-215的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xx)根据SEQ ID NO:217-219的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxi)根据SEQ ID NO:221-223的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxii)根据SEQ ID NO:225-227的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(xxiii)根据SEQ ID NO:229-231的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；或(xxiv)根据SEQ ID NO:233-235的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
特别优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括(i)根据SEQ ID NO:91-95和97的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(ii)根据SEQ ID NO:91-94和96-97的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(iii)根据SEQID NO:109-113和115的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(iv)根据SEQ ID NO:109-112和114-115的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(v)根据SEQ ID NO:127-131和133的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；或(vi)根据SEQ ID NO:127-130和132-133的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
最优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括(i)根据SEQ ID NO:127-131和133的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；或(ii)根据SEQ IDNO:127-130和132-133的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
还优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括重链可变区(VH)，和任选地轻链可变区(VL)，其中重链可变区(VH)包括根据SEQ ID NO:98、116、134、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228、232、和236的任一种的氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，或由其组成。
最优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括(i)根据SEQ ID NO:98的重链可变区(VH)氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:99的轻链可变区(VL)氨基酸序列，或至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；(ii)根据SEQ ID NO:116的重链可变区(VH)氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:117的轻链可变区(VL)氨基酸序列，或至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体；或(iii)根据SEQ ID NO:134的重链可变区(VH)氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:135的轻链可变区(VL)氨基酸序列，或至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
最优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包括根据SEQ ID NO:134的重链可变区(VH)氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:135的轻链可变区(VL)氨基酸序列，或至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段是gZKA15、gZKA25或gZKA35，更优选地，抗体或其抗原结合片段是gZKA25或gZKA35，甚至更优选地，抗体或其抗原结合片段是gZKA35。
本发明人已经分离了根据本发明的单克隆抗体(mAb)，其在本文中被称为ZKA15、ZKA25和ZKA35(参见表4和5，实施例1)。基于那些抗体，具体地基于那些抗体的VH和VL基因，如本文所使用的术语“gZKA15”、“gZKA25”和“gZKA35”指的是各自的“通用”抗体或其抗原结合片段。
即，“gZKA15”指的是如此抗体或其抗原结合片段，其具有根据SEQ ID NO:91的CDRH1氨基酸序列、根据SEQ ID NO:92的CDRH2氨基酸序列、根据SEQ ID NO:93的CDRH3氨基酸序列、根据SEQ ID NO:94的CDRL1氨基酸序列、根据SEQ ID NO:95或96的CDRL2氨基酸序列、和根据SEQ ID NO:97的CDRL3氨基酸序列。重链可变区(VH)优选地具有根据SEQ ID NO:98的氨基酸序列，并且轻链可变区(VL)优选地具有根据SEQ ID NO:99的氨基酸序列。
“gZKA25”指的是如此抗体或其抗原结合片段，其具有根据SEQ ID NO:109的CDRH1氨基酸序列、根据SEQ ID NO:110的CDRH2氨基酸序列、根据SEQ ID NO:111的CDRH3氨基酸序列、根据SEQ ID NO:112的CDRL1氨基酸序列、根据SEQ ID NO:113或114的CDRL2氨基酸序列、和根据SEQ ID NO:115的CDRL3氨基酸序列。重链可变区(VH)优选地具有根据SEQ IDNO:116的氨基酸序列，并且轻链可变区(VL)优选地具有根据SEQ ID NO:117的氨基酸序列。
“gZKA35”指的是如此抗体或其抗原结合片段，其具有根据SEQ ID NO:127的CDRH1氨基酸序列、根据SEQ ID NO:128的CDRH2氨基酸序列、根据SEQ ID NO:129的CDRH3氨基酸序列、根据SEQ ID NO:130的CDRL1氨基酸序列、根据SEQ ID NO:131或132的CDRL2氨基酸序列、和根据SEQ ID NO:133的CDRL3氨基酸序列。重链可变区(VH)优选地具有根据SEQ IDNO:134的氨基酸序列，并且轻链可变区(VL)优选地具有根据SEQ ID NO:135的氨基酸序列。
上面关于“抗体的产生”(上面的章节“抗体的产生”)和“抗体的任选的另外的特征”(上面的章节“抗体的任选的另外的特征”)的详细描述适用于所有抗体和其抗原结合片段，如在本申请中描述的——即这些章节不仅适用于根据本发明的中和抗体和其抗原结合片段，而且适用于根据本发明的NS1蛋白结合抗体和其抗原结合片段。
具体地，优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段被标记，例如生物素化。
优选地，根据本发明的抗体或其抗原结合片段是生物素化的。
还优选的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段缀合至酶，比如辣根过氧化物酶(HRP)。抗体与HRP的缀合例如在Wisdom GB.Conjugation of antibodies to horseradishperoxidase.Methods Mol Biol.2005；295:127-30中或在Antibodies–a laboratorymanual.Edited by Edward A.Greenfield,Second edition 2012,Cold Spring HarborLaboratory Press,ISBN:9781936113811中描述。
例如，本发明的抗体或其抗原结合片段可以偶联至可检测标记，例如以提供可测量性，例如用于定量或以促进成像。标记的抗体可以在采用多种标记的多种试验中，具体地在免疫测定中采用。优选的标记包括放射性核素、酶、辅酶、荧光剂、化学发光剂、色原、酶底物或辅因子、酶抑制剂、辅基复合物、自由基、颗粒、染料(例如荧光染料、串联染料)等。适合的酶的实例包括辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；适合的辅基复合物的实例包括链霉亲和素/生物素和抗生物素蛋白/生物素；适合的荧光材料的实例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、若丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的实例是鲁米诺；生物发光材料的实例包括萤光素酶、萤光素和水母发光蛋白；和适合的放射性材料的实例包括125I、131I、35S或3H。这样标记的试剂可以在多种熟知的试验中使用，比如放射免疫测定、酶免疫测定例如ELISA、荧光免疫测定等，优选地在ELISA中使用。根据本发明的标记的抗体因而可以在这些试验中使用，例如，如US 3,766,162；US 3,791,932；US 3,817,837和US 4,233,402中描述的。
优选的标记包括(i)如上面描述的酶，比如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶，具体地在结合阻断试验(Blockade-of-binding assay)、蛋白质印迹、ELISA和免疫组织化学中；(ii)如上面描述的辅基复合物，例如链霉亲和素/生物素和抗生物素蛋白/生物素，具体地在ELISA和免疫组织化学中；(iii)如上面描述的荧光剂，比如荧光染料和荧光蛋白(例如，(增强型)绿色荧光蛋白(EGFP)；TagBFP、Turquoise、Venus、KO2、Cherry、Apple、Kate2)，具体地在免疫荧光法和流式细胞术中；和(iv)流式细胞术中的串联染料。
优选地，抗体或其抗原结合片段是生物素化的。生物素化是快速的、特异性的并且不可能扰乱分子的天然功能，这是由于生物素的小尺寸(MW＝244.31g/mol)。生物素以极其高的亲和力、快速的在线速率(on-rate)和高特异性结合至链霉亲和素和抗生物素蛋白。生物素结合至链霉亲和素和抗生物素蛋白耐受极端的热、pH和蛋白质水解，使得在多种环境中捕获生物素化的分子是可能的。根据本发明的抗体或其抗原结合片段可以是化学或酶促生物素化的。化学生物素化利用各种缀合化学品以获得胺类的非特异性生物素化(例如，NHS偶联给出了抗体中的任何伯胺的生物素化，见下文)。酶促生物素化导致通过使用细菌生物素连接酶生物素化某种序列内的特定赖氨酸。
而且，第二抗体或其抗体片段也可以被用作标记。在这种情况下，根据本发明的抗体或其抗原结合片段缀合至第二抗体或其抗体片段以形成抗体复共轭对配合物，例如在US4,676,980中描述的。在这种情况下，第二抗体可以任选地如本文描述进行标记。
用于将抗体偶联至标记的方法是本领域熟知的。例如，在抗体中或在其抗原结合片段中，赖氨酸的侧链，其终止于伯胺(-NH2)，可以被用于将标记共价地连接至抗体或其抗原结合片段。文献中描述了许多变体标记程序。例如，标记途径可以选自NHS酯、异双官能试剂、碳二亚胺和高碘酸钠。
NHS酯可以具体地在荧光染料标记的情况下使用。荧光染料标记可以以具有嵌入的NHS酯(也被称为‘琥珀酰亚胺酯’)的标记的活化形式购买。活化的染料可以在适当的条件下与抗体或其抗原结合片段(例如经由赖氨酸基团)反应。过量的反应性染料可以被去除(例如通过柱层析)，然后标记的抗体或其抗原结合片段可以用在免疫测定中。
可以使用异双官能试剂，特别是如果标记是蛋白质分子(例如HRP、碱性磷酸酶或藻红蛋白)。在这种情况下，抗体或其抗原结合片段和标记可以具有多个胺。在该情况下，一个分子上(例如抗体或其抗原结合片段上)的赖氨酸中的一些可以被修饰以创建新反应性基团(X)和标记上的赖氨酸可以被修饰以创建另一种反应性基团(Y)(或反之亦然)。‘异双官能试剂’然后被用于引入Y基团，当抗体和标记被混合时，Y基团随后与X基团反应，从而创建异二聚体缀合物。
碳二亚胺，比如EDC，可以具体地被用于创建包含胺和羧基的分子之间的共价连接。碳二亚胺活化羧基，并且活化的中间体然后被胺(例如由在抗体或其抗原结合片段上的赖氨酸残基提供)攻击。碳二亚胺具体地可以被用于将抗体缀合至羧化颗粒(例如，乳胶颗粒、磁珠)，和至其他羧化表面，比如微孔板或芯片表面。碳二亚胺也可以被用于将染料或蛋白质标记附接至抗体或其抗原结合片段。
高碘酸钠具体地可以被用于标记辣根过氧化物酶(HRP)。高碘酸盐活化HRP分子上的碳水化合物链以创建醛基，其能够与抗体或其抗原结合片段上的赖氨酸反应。由于HRP自身具有很少赖氨酸，因此创建抗体-HRP缀合物而无显著的HRP聚合是相对容易的。
任选地，可以在本发明的标记与抗体之间使用连接体，例如如在US 4,831,175中描述的。抗体或其抗原结合片段可以直接地被放射性碘、铟、钇、或本领域中已知的其他放射性颗粒标记，例如如在US 5,595,721中描述的。
因此，本发明还提供了复合物，其包括
(i)根据本发明的抗体或其抗原结合片段；和
(ii)如上面描述的标记。
因此，这种复合物优选地是缀合至根据本发明的抗体或其抗原结合片段的标记。优选地，标记与根据本发明的抗体或其抗原结合片段共价连接。
例如，根据本发明的复合物可以是融合蛋白，其包括(i)根据本发明的抗体和(ii)标记，其是肽或蛋白质，比如荧光肽或蛋白质，例如EGFP。
在另一方面，本发明还提供了包括多核苷酸的核酸分子，该多核苷酸编码如上面所描述的根据本发明的抗体或其抗原结合片段或如上面所描述的根据本发明的复合物，特别是如果根据本发明的复合物是如上面所描述的融合蛋白。
核酸分子和/或多核苷酸的实例包括例如重组多核苷酸，载体，寡核苷酸，RNA分子比如rRNA、mRNA、miRNA、siRNA或tRNA，或DNA分子比如cDNA。
编码本发明的抗体的轻链和重链以及CDR的部分或全部的核酸序列是优选的。优选地，本文因而提供了编码本发明的示例性抗体的轻链和重链，具体地VH和VL序列以及CDR的部分或全部的核酸序列。表4和5提供了根据本发明的示例性抗体的CDR以及VH和VL的氨基酸序列的SEQ ID编号。
下面的表6提供了编码根据本发明的示例性抗体的CDR以及VH和VL的示例性核酸序列的SEQ ID编号。由于遗传密码的冗余性，本发明还包括这些核酸序列的序列变体，并且具体而言编码相同氨基酸序列的这些序列变体。
核酸分子是包括核酸成分，优选地由核酸成分组成的分子。术语核酸分子优选地指DNA或RNA分子。具体而言，其与术语“多核苷酸”同义使用。优选地，核酸分子是包括核苷酸单体或由核苷酸单体组成的聚合物，这些核苷酸单体通过糖/磷酸骨架的磷酸二酯键彼此共价地连接。术语“核酸分子”也包括修饰的核酸分子，比如碱基修饰的、糖修饰的或骨架修饰的等DNA或RNA分子。
表6示出了根据本发明的三种示例性抗体(“ZKA15”、“ZKA25”、“ZKA35”)的CDR以及重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的示例性核酸序列：
Figure GDA0003868052510000691
Figure GDA0003868052510000701
Figure GDA0003868052510000711
优选地，根据本发明的核酸分子的序列包括根据SEQ ID NO:100-108、118-126和136-144的任一种的核酸序列，或由其组成。
还优选的是根据本发明的核酸序列包括与编码根据本发明的(示例性)抗体中使用的CDR、VH序列和/或VL序列的核酸，例如与表6中示出的序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的核酸序列。
一般而言，核酸分子可以被操作以插入、缺失或变更某些核酸序列。来自这样的操作的改变包括但不限于引入限制位点、修改密码子使用、添加或优化转录和/或翻译调控序列等的改变。也可能的是改变核酸以变更编码的氨基酸。例如，可以有用的是将一个或多个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个等)氨基酸置换、缺失和/或插入引入抗体的氨基酸序列。这样的点突变可以修饰效应子功能、抗原结合亲和力、翻译后修饰、免疫原性等，可以引入氨基酸用于附接共价基团(例如标记)或者可以引入标签(例如，用于纯化目的)。突变可以被引入特定位点或者可以被随机引入，然后选择(例如，分子进化)。例如，编码本发明的(示例性)抗体的CDR区、VH序列和/或VL序列中的任一种的一种或多种核酸可以随机地或定向地突变以在编码的氨基酸中引入不同的性质。这样的改变可以是迭代过程的结果，其中最初改变被保留并且在其它核苷酸位置处的新改变被引入。进一步，在独立步骤中实现的改变可以被组合。引入编码的氨基酸的不同性质可以包括但不限于增强的亲和力。
进一步包含在本发明的范围内的是载体，例如表达载体，其包括根据本发明的核酸分子。优选地，载体包括如上面所描述的核酸分子。
术语“载体”指的是核酸分子，优选地指的是重组核酸分子，即天然不存在的核酸分子。在本发明的背景下的载体适合于合并或具有期望的核酸序列。这样的载体可以是贮藏载体、表达载体、克隆载体、转移载体等。贮藏载体是允许方便贮藏核酸分子的载体。因而，载体可以包括例如与根据本发明的期望的抗体或其抗体片段对应的序列。表达载体可以被用于产生表达产物比如RNA，例如mRNA，或肽，多肽或蛋白质。例如，表达载体可以包括对于载体的序列延伸的转录需要的序列，比如启动子序列。克隆载体通常是包含克隆位点的载体，该克隆位点可以被用于将核酸序列并入载体。克隆载体可以是例如质粒载体或噬菌体载体。转移载体可以是适合于将核酸分子转移入细胞或生物体的载体，例如病毒载体。在本发明的背景下的载体可以是例如RNA载体或DNA载体。优选地，载体是DNA分子。例如，在本申请的意义下的载体包括克隆位点、选择标志比如抗生素抗性因子、和适合于载体的操作的序列比如复制起源。优选地，在本申请的背景下的载体是质粒载体。
在进一步方面，本发明还提供了细胞，其表达根据本发明的抗体或其抗原结合片段；和/或包括根据本发明的载体。
这样的细胞的实例包括但不限于真核细胞，例如酵母细胞、动物细胞或植物细胞。优选地，细胞是哺乳动物细胞，更优选地哺乳动物细胞系。优选的实例包括人细胞、CHO细胞、HEK293T细胞、PER.C6细胞、NS0细胞、人肝细胞、骨髓瘤细胞或杂交瘤细胞。
具体而言，细胞可以转染有根据本发明的载体，优选地转染有表达载体。术语“转染”指的是将核酸分子比如DNA或RNA(例如，mRNA)分子引入细胞，优选地引入真核细胞。在本发明的背景下，术语“转染”包括用于将核酸分子引入细胞，优选地引入真核细胞，比如引入哺乳动物细胞的对于本领域技术人员而言已知的任何方法。这样的方法包括，例如，电穿孔、例如基于阳离子脂质和/或脂质体的脂质转染法、磷酸钙沉淀、基于纳米颗粒的转染、基于病毒的转染或基于阳离子聚合物的转染，比如DEAE-葡聚糖或聚乙烯亚胺等。优选地，引入是非病毒的。
而且，本发明的细胞可以稳定地或瞬时地转染有根据本发明的载体，例如用于表达根据本发明的抗体或其抗原结合片段。优选地，细胞稳定地转染有编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的根据本发明的载体。可选地，还优选的是细胞瞬时地转染有编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的根据本发明的载体。
在进一步方面，本发明还提供了组合物，其包括根据本发明的抗体或其抗原结合片段；如上面所描述的根据本发明的复合物；如上面所描述的根据本发明的核酸分子；如上面所描述的根据本发明的载体；或如上面所描述的根据本发明的细胞。包括根据本发明的抗体或其抗原结合片段或如上面所描述的根据本发明的复合物的组合物是优选的。
这种组合物可以是在中和抗体背景下的如上面所描述的药物组合物，其中如上面所描述的对这种药物组合物的详细描述和优选实施方式因此适用于结合至ZIKV NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段。但是，组合物也可以被用于非制药目的，比如在(ZIKV感染的)诊断中或用于分析目的。
优选地，组合物是液体形式，例如以提供用于直接使用的为液体的抗体或其抗原结合片段，例如在诊断试验中。液体(媒介)可以根据目的选择，例如取决于试验。优选地，根据本发明的组合物包括PBS(磷酸盐缓冲盐水)或其他缓冲液。这种缓冲液优选地是生物学缓冲液，并且组合物可以因而包括MES、BIS-TRIS、ADA、PIPES、ACES、MOPSO、BIS-TRIS丙烷、BES、MOPS、TES、HEPES、DIPSO、TAPSO、Trizma、POPSO、HEPPS、TRICINE、Gly-Gly、BICINE、HEPBS、TAPS、AMPD、AMPSO、CHES、CAPSO、AMP、CAPS和CABS的任一种。还优选的是组合物包括林格液。另外，组合物也可以包括Tris，例如Tris-HCl。
根据本发明的组合物也可以包括清洁剂，例如吐温(聚山梨醇酯)，比如吐温20或吐温80。清洁剂通常以低水平存在，例如，低于0.01％。组合物也可以包括钠盐(氯化钠)以给予张力。例如，10±2mg/ml NaCl的浓度是典型的。
另外，根据本发明的组合物可以任选地包括蛋白质稳定剂，比如BSA(牛血清蛋白单)或HSA(人血清蛋白单)。可以任选地包含在根据本发明的组合物中的蛋白质稳定剂的进一步实例包括例如如上面描述的缓冲液；盐，比如氯化钠；氨基酸，比如组氨酸、甘氨酸和精氨酸；多元醇/二糖/多糖，比如海藻糖和蔗糖(二糖)、甘露醇和山梨醇(糖醇)；表面活性剂，比如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、和蛋白质，比如HSA或BSA；聚合物，比如葡聚糖和聚乙二醇；和抗氧化剂。
而且，根据本发明的组合物可以任选地包括防腐剂，比如叠氮化钠。防腐剂通常被用于阻止微生物污染。
在进一步方面，本发明还提供了组分试剂盒，其包括根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的复合物或根据本发明的组合物。
这种组分试剂盒可以任选地进一步包括下列的一种或多种：
(i)例如在诊断试验中待使用的一种或多种溶液，例如以稀释抗体或其抗原结合片段；
(ii)传单，例如具有使用说明；
(iii)如上面所描述的标记，和任选地溶液和/或对于加标记需要的进一步成分；和/或
(iv)例如在诊断试验中有用的器皿或设备，例如一个或多个ELISA板。
优选地，如上面所描述的根据本发明的试剂盒还包括用于颜色的显影的底物。这种底物的实例包括p-NPP，具体地在通过碱性磷酸酶检测的情况下；奥兰酶(oran enzyme)比如ABTS、TMB或OPD，具体地在使用辣根过氧化物酶(HRP)的情况下。任选地，底物可以在适合的缓冲液中稀释，例如在根据本发明的组合物的背景下如上面描述的缓冲液。可选地，底物和缓冲液可以作为单独实体在试剂盒中提供。
关于标记，根据本发明的试剂盒也可以包括酶缀合的链霉亲和素，或其他系统以检测探针抗体的结合。例如，探针抗体可以以鼠化(murinized)形式制造，并且在该情况下，可以利用抗小鼠第二抗体检测结合，无需生物素化。抗小鼠第二抗体通常是多克隆的和/或交叉吸附的(cross-adsorbed)以便不与人抗体反应。
而且，根据本发明的试剂盒优选地包括一个或多个ELISA板。更优选地，那些ELISA板预涂覆有ZIKV-NS1蛋白。任选地，这些预涂覆的ELISA板可以被预先封闭。
寨卡病毒感染的诊断
在进一步方面，本发明还提供了结合至ZIKV NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的复合物、根据本发明的组合物或根据本发明的组分试剂盒在诊断寨卡病毒(ZIKV)感染中的用途。
寨卡病毒(ZIKV)感染的诊断通常在体外进行，例如在待诊断的对象的分离的样品中。优选的对象的分离的样品包括体液的样品和组织样品。体液的样品是更优选的。优选的用于诊断ZIKV感染的体液包括血液(如，全血、血浆、血清)、唾液和尿液。最优选的是血液，具体地血浆或血清。
因此，本发明还提供了结合至ZIKV NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的复合物、根据本发明的组合物或根据本发明的组分试剂盒在测定(体液的)分离的样品比如分离的血液样品是否感染寨卡病毒中的用途。如上面所描述，优选的用于诊断ZIKV感染的体液包括血液(如，全血、血浆、血清)、唾液和尿液。最优选的是血液，具体地血浆或血清。
对于寨卡病毒感染的诊断，可以使用不同的诊断试验。优选的诊断试验是免疫测定。优选的免疫测定的实例包括ELISA、免疫荧光、免疫组织化学和流式细胞术。优选地，诊断包括ELISA。例如，可以使用标准ELISA、夹心ELISA或结合阻断试验。
优选地，诊断分析检测待诊断的对象的(分离的)样品中的
(i)ZIKV NS1蛋白自身(的存在)；和/或
(ii)抗ZIKV NS1抗体(的存在)。
优选地，使用结合阻断试验。在该试验中，来自待诊断对象的分离的样品(例如，体液的样品，比如血液(例如全血、血浆、血清)、唾液和尿液)被添加至涂覆有ZIKV NS1蛋白的ELISA板并且培育(例如，持续至少大约30min或至少大约1小时)以允许结合。其后，加入根据本发明的抗体或其抗原结合片段(作为“探针抗体”)，其中根据本发明的抗体或其抗原结合片段优选地被标记，例如生物素化或缀合至辣根过氧化物酶(HRP)。在另外的培育时间(例如，至少大约1min、优选地至少大约3min、更优选地至少大约5min、甚至更优选地至少大约10min、最优选地至少大约15min)之后，可以测定根据本发明的抗体或其抗原结合片段的结合的抑制。
一般而言，结合的抑制显示对象的样品中存在抗ZIKV NS1抗体，因而指示对象的ZIKV感染。相比之下，在非感染对象的样品中，通常不预期结合的抑制。重要的是，使用本发明的ZIKV NS1结合抗体的这种试验在已经感染其他黄病毒属病毒的对象中不获得阳性。黄病毒属病毒通常导致与ZIKV交叉反应的多种抗体。换句话说，该试验是高度特异性的并且不受交叉反应性Ab的影响。
因此，本发明还提供了用于体外诊断寨卡病毒感染的结合阻断试验，其包括下列步骤：
(i)将来自待诊断对象的分离的样品添加至涂覆有ZIKV NS1蛋白的板并且在所述板上培育所述样品，
(ii)添加根据权利要求47-75的任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求76所述的复合物，
(iii)测定所述抗体或其抗原结合片段的结合的结合抑制。
优选地，来自待诊断对象的分离的样品选自血液、唾液和尿液；优选地，样品是血液，比如全血、血浆或血清。
还优选的是在步骤(ii)中添加的抗体或其抗原结合片段被标记，优选地生物素化或缀合至辣根过氧化物酶(HRP)。
而且，来自待诊断对象的分离的样品优选地被稀释，例如1:5-1:50，优选地1:5-1:25，比如1:10。
优选地，步骤(i)中的培育时间是至少5min、优选地至少15min、更优选地至少30min、甚至更优选地至少45min和最优选地至少60min。
而且，优选的是在步骤(ii)中在添加抗体或其抗原结合片段之后，抗体或其抗原结合片段被培育至少1min、优选地至少3min、更优选地至少5min、甚至更优选地至少10min和最优选地至少15min。
优选地，被用作结合阻断试验中的探针抗体的根据本发明的抗体或其抗原结合片段是优选的根据本发明的抗体或其抗原结合片段。例如，根据本发明的抗体或其抗原结合片段可以优选地是结合至寨卡病毒NS1蛋白的抗原位点S2的根据本发明的抗体或其抗原结合片段。最优选地，被用作结合阻断试验中的探针抗体的根据本发明的抗体或其抗原结合片段是包括下列的抗体或其抗原结合片段：(i)根据SEQ ID NO:127-131和133的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其动能序列变体；或(ii)根据SEQ ID NO:127-130和132-133的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其动能序列变体。特别优选地，被用作结合阻断试验中的探针抗体的根据本发明的抗体或其抗原结合片段是包括下列的抗体或其抗原结合片段：根据SEQ ID NO:134的重链可变区(VH)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:135的轻链可变区(VL)氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
例如，根据本发明的示例性生物素化抗体或其抗原结合片段的结合抑制可以通过测定达到70％最大结合至ZIKV NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段的最佳浓度来评估。例如，达到70％最大结合至ZIKV NS1蛋白的示例性抗体gZKA15、gZKA25和gZKA35的最佳浓度可以分别是38、17和7ng/ml。在执行上述结合阻断试验之后，底物比如p-NPP可以被加入并且ELISA板可以在405nm下阅读并且结合抑制的百分比可以通过下列方程式(I)计算：
(I)％抑制＝(1-[(OD样品-OD阴性对照)/(OD阳性对照-OD阴性对照)])×100其中“％抑制”指的是根据本发明的抗体或其抗原结合片段与ZIKV NS1蛋白的结合抑制的百分比；“OD样品”指的是样品的光学密度；“OD阴性对照”指的是阴性对照的光学密度；和“OD阳性对照”指的是阳性对照的光学密度。
该试验提供几种优势，比如在种群水平下检测临床、亚临床和无症状ZIKV感染的能力，能够将它们与其它黄病毒属病毒感染比如DENV区分。具体地，根据本发明的诊断试验提供与直接ELISA结合试验相比更高的精度。
而且，本发明还提供了用于(体外)诊断(分离的样品中)寨卡感染的方法，其中结合至ZIKV NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的复合物、根据本发明的组合物或根据本发明的组分试剂盒被用于测定(体液的)分离的样品比如分离的血液样品是否感染寨卡病毒。
上述用途在诊断中的优选实施方式也适用于诊断方法。例如，优选的(对象)的分离的样品包括体液的样品和组织样品。体液的样品是更优选的。优选的用于诊断ZIKV感染的体液包括血液(例如全血、血浆、血清)、唾液和尿液。最优选的是血液，具体地血浆或血清。而且，优选的诊断试验是免疫测定。优选的免疫测定的实例包括ELISA、免疫荧光、免疫组织化学和流式细胞术。优选地，诊断包括ELISA。最优选地，使用如上面所描述的结合阻断试验。
优选地，用于(体外)诊断(分离的样品中)寨卡感染的方法包括下列步骤
(i)将分离的样品与结合至ZIKV NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的复合物、或根据本发明的组合物接触。
更优选地，用于(体外)诊断(分离的样品中)寨卡感染的方法包括下列步骤：
(0)将来自待诊断对象的分离的样品(例如，体液的样品，比如血液(例如全血、血浆、血清)、唾液和尿液)添加至涂覆有ZIKV NS1蛋白的ELISA板；
(i’)进一步将根据本发明的抗体或其抗原结合片段添加至ELSA板，其中根据本发明的抗体或其抗原结合片段优选地被标记，例如生物素化；
(ii)任选地，洗涤ELISA板；和
(iii)测定根据本发明的抗体或其抗原结合片段的结合抑制。
在进一步方面，本发明还提供了根据本发明的中和抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞、或根据本发明的药物组合物用于治疗或预防被诊断患有寨卡病毒感染的对象中的ZIKV感染，通过使用结合至ZIKV NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的复合物、根据本发明的组合物、根据本发明的组分试剂盒、或根据本发明用于ZIKV诊断的方法。
在进一步方面，本发明还提供了预防和/或治疗寨卡病毒感染的方法，该方法包括下列步骤：
(i)通过使用结合至ZIKV NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的复合物、根据本发明的组合物、根据本发明的组分试剂盒或根据本发明用于ZIKV诊断的方法诊断对象中的寨卡病毒感染；和
(ii)给所述对象施用根据本发明的中和抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞、或根据本发明的药物组合物。
优选地，在预防和/或治疗寨卡病毒感染的这种方法中，诊断寨卡病毒感染的步骤(i)被执行为对(体液的)分离的样品比如分离的血液样品的体外诊断。
在进一步方面，本发明还提供了组分试剂盒，其包括
(i)结合至ZIKV NS1蛋白的根据本发明的抗体或其抗原结合片段、根据本发明的复合物、根据本发明的组合物、或根据本发明的组分试剂盒；和
(ii)根据本发明的中和抗体或其抗原结合片段、根据本发明的核酸、根据本发明的载体、根据本发明的细胞、或根据本发明的药物组合物。
这种组分试剂盒在上面描述的方法中是特别有用的。通过使用这种方法和/或这种试剂盒，ZIKV感染可以具体地被诊断以及预防和/或治疗。
附图说明
图1示出来源于四种ZIKV免疫供体(ZKA、ZKB、ZKC和ZKD)的抗体对ZIKV和DENV1-4的E蛋白和对ZIKV E蛋白的EDIII结构域的反应性(ELISA)以及ZIKV和DENV1中和活性；NNB–中和、非E蛋白结合抗体。
图2示出来源于四种ZIKV免疫供体(ZKA、ZKB、ZKC和ZKD)的抗体对ZIKV、DENV1-4和其他黄病毒属病毒的NS1蛋白的反应性(ELISA)。YFV–黄热病病毒；WVN–西尼罗河病毒；JEV–日本脑炎病毒；和TBEV–蜱传脑炎病毒(nd，未测定)。
图3示出通过ELISA测量的ZKA190、ZKA78和ZKA64抗体与ZIKV和DENV1 E以及与ZIKV EDIII蛋白的结合。
图4示出通过ELISA测量的ZKA185和ZKA190抗体与ZIKV E、DENV1 VLP和与ZIKVEDIII蛋白的结合。
图5示出通过ELISA测量的ZKA15、ZKA25和ZKA35抗体与ZIKV和DENV1-4NS1蛋白的结合。
图6示出实施例3：使用交叉竞争Octet结合研究的ZIKV NS1蛋白抗原位点图。(A-B)通过Octet对24种mAb(其特异于ZIKV NS1(A)或与DENV NS1交叉反应(B))进行的交叉竞争矩阵。+，第二Ab的结合的缺乏；+/-，第二mAb的结合的部分损失；-，第二mAb的结合。加删除线细胞，未测试。(C)使用BLI(Octet)交叉竞争通过限定的ZIKV NS1特异性mAb靶向的抗原位点的图。
图7示出实施例4：使用mAb ZKA35作为探针检测来自ZIKV-免疫(n＝4)、DENV-免疫(n＝5)和对照供体(n＝48)(1/10稀释)的血浆中ZIKV NS1的结合阻断试验。测试血浆样品结合NS1(空白点)和抑制生物素化的mAb ZKA35与NS1的结合(实心点)的能力。
图8示出实施例5：通过流式细胞术(感染细胞的％)测量的ZKA190、ZKA64、ZKA64-LALA、ZKA230和ZKA78抗体对Vero细胞上的ZIKV(H/PF/2013毒株)和DENV1的中和活性。
图9示出实施例5：利用细胞活力示值读数(wst-1，Roche)测量的ZKA190、ZKA64、ZKA185、ZKA230和ZKA78抗体对Vero细胞上的ZIKV(H/PF/2013毒株)的中和活性。
图10示出实施例6：通过流式细胞术(感染细胞的％)测量的ZKA190、ZKA64、ZKA64-LALA、ZKA185、ZKA230和ZKA78抗体对非许可K562细胞上的ZIKV(H/PF/2013毒株)的感染增强活性(ADE，抗体依赖性增强)。
图11示出实施例6：四种ZIKV-免疫血浆和一种DENV-免疫血浆显示类似的增强K562细胞的ZIKV感染的能力(上图)。该ADE作用在所有五种免疫血浆中被EDIII特异性ZKA64-LALA抗体完全阻断(下图)。
图12示出自2013年来自亚洲谱系的39种ZIKV毒株的EDIII区的氨基酸对齐(包括在1947年分离的非洲谱系的原型毒株MR766)。
图13示出实施例5：通过流式细胞术(感染细胞的％)测量的ZKA190和ZKA190-LALA抗体对Vero细胞上ZIKV的三种毒株(H/PF/2013、MR766和MRS_OPY_马提尼克_PaRi_2015)的中和活性。
图14示出实施例7：欧洲居民的NS1结合阻断分析。示出了在意大利和瑞士收集的样品的BOB值。描绘的是来自ZIKV，初次和二次DENV-、WNV-和CHIKV-感染的个体的样品和一组来自瑞士的健康血液供体的样品中的BOB值。
图15示出实施例8：针对一组ZIKV的四种毒株测试的ZKA190和C8 mAb的中和，如通过在增加mAb的量的存在下感染的Vero细胞的百分比测定的(A)。也示出了IC50值(B)和统计学数据(C)。数据表示至少两个独立实验。
图16示出实施例9：通过抗体ZKA190中和和增强ZIKV感染。(A)通过ZKA190、ZKA190-LALA和对照mAb中和hNPC的ZIKV PRVABC59毒株感染，如通过对Vero细胞的噬菌斑测定(左图)和使用荧光团标记的抗E抗体对感染的hNPC的间接免疫荧光(右图)测定的。(B)通过ZKA190和ZKA190-LALA非许可K562细胞的ZIKV感染的ADE。(C)当ZIKV利用来自不同ZIKV阳性患者的血浆血清系列稀释液预培育时，K562中诱导的ADE(左图)。当KA190LALA被添加至ZIKV-血清复合物时，ADE被抑制(右图)。(D)当ZIKV利用来源于DENV-免疫供体的prM交叉反应性mAb(DV62)的系列稀释液预培育时，K562细胞中诱导的ADE。当与prM反应性抗体DV62复合时，ZKA190-LALA抑制ZIKV的ADE。(E)通过指示的mAb的系列稀释液，对由DENV2血浆(左图)或抗prM DV62 mAb(右图)的峰值增强稀释液诱导的ADE的作用。
图17示出实施例10：ZKA190表位的鉴定和其在ZIKV毒株中保守性的分析。(A)在不存在(黑色)和存在(红色)未标记的ZKA190 Fab的情况下15N标记的ZIKVEDIII的[15N,1H]-HSQC光谱的覆盖图。差别鉴定受抗体结合影响的EDIII残基。(B)ZKA190 Fab与ZKV EDIII复合的NMR表位图。化学位移扰动(CSP，y轴)针对EDIII残基数目图。受抗体结合影响的残基是红色。(C)通过NMR表位图鉴定的FG环中的残基部分地隐藏在E蛋白mol A中但是在mol B和C中大大暴露。E蛋白的EDIII以蓝色着色。通过NMR表位图鉴定的残基以洋红色着色，除了FG环中的那些以绿色着色之外。邻近的E蛋白显示为灰色表面。(D)ZKA190表位中氨基酸残基保守性的水平，如通过在2016年12月24日在ZIKV资源(NCBI)数据库中发现的来自217种ZIKV毒株的序列的分析计算的。(E)示出对接结果的表位和互补位之间的电荷互补性的开放式(open-book)表示。表位和互补位的界限以绿色环绕。Fab的重和轻链与EDIII上其对应足迹之间的边界显示为黄色虚线。
图18示出实施例10：通过NMR和对接鉴定的ZKA190表位。(A)ZIKV EDIII的12种最低能量NMR结构的动画表示，其中受ZKA19结合影响的残基为红色。构建体的N末端的灵活性是明显的。(B)由通过NMR结果验证的计算对接和分子模拟衍生的ZKA190:EDIII复合物的模型。EDIII(灰色)上NMR鉴定的表位是红色。ZKA190重和轻链分别以深绿色和淡绿色着色。当突变时影响或不影响抗体结合的EDIII残基分别显示为橙色和绿色条。(C)NMR鉴定的ZKA190表位(红色)在病毒表面上是可进入的(白色)。
图19示出实施例10：wt或突变的EDIII与ZKA190 IgG的结合。示出了SPR数据和结合动力学。如在图中指示的示出影响(红色强调部分)或不影响结合的EDIII突变体。
图20示出实施例11：共聚焦显微镜实验的结果。向Vero细胞添加利用超过10’000倍ZKA190 Fab或全IgG的IC50值的浓度培育的ZIKV。ZIKV：抗体复合物在细胞内检测(绿色)并且与核内体共局部化(红色、黄色覆盖物)。通过Lysotracker红标记核内体和酸性细胞器；Alexa-488缀合的ZKA190为绿色。利用DAPI对核酸染色(蓝色)。
图21示出实施例12：ZKA190的预防和治疗功效。(A)当预防地施用至被ZIKV毒株MP17451的致死剂量攻击的小鼠((A)中A129和(B)中AG129)时，ZKA190针对ZIKV感染是强保护性的。实验使用N＝4-8只小鼠/组。示出了Kaplan-Meier存活曲线(A)。通过使用Mantel-Cox时序检验测定显著性。图A，左上图：5、1和0.2mg/kg的ZKA190与对照mAb，P＝0.0031；0.04mg/kg的ZKA190与对照mAb，P＝0.0116；5、1、0.2和0.04mg/kg的ZKA190-LALA与对照mAb，P＝0.0031。图A，右上图：14-15天时期内监测的小鼠的发病率得分(使用两种不同的评分方法；参见(Dowall,S.D.,Graham,V.A.,Rayner,E.,Atkinson,B.,Hall,G.,Watson,R.J.,Bosworth,A.,Bonney,L.C.,Kitchen,S.和Hewson,R.(2016).A Susceptible MouseModel for Zika Virus Infection.PLoSNegl Trop Dis 10,e0004658–13))；图A，下图：小鼠的体重。图B：在ZIKV感染后在不同时间点以15mg/kg施用ZKA190或ZKA190-LALA。图B，左上图：示出了Kaplan-Meier存活曲线。实验使用N＝5只小鼠/组。通过使用Mantel-Cox时序检验测定显著性。在第1、2、3或4天时给予ZKA190和ZKA190-LALA，与对照相比，P＝0.0016。图B，右上图：根据(Dowall et al.,2016)在14天内监测的小鼠的发病率得分。在14天时期内监测小鼠的体重损失(图B，下图)。对照抗体是对RSV F蛋白具有特异性的MPE8(Corti,D.,et al.Cross-neutralization of four paramyxoviruses by a human monoclonalantibody.Nature 501,439-443(2013))。
图22示出实施例12：抗ZIKV EDIII特异性mAb ZKA190对ZIKV毒株MP1741的预防功效。(A)示出了在第5天时在所有动物的血液中根据PFU/ml测量的病毒血症。(B)当在实验结束时挑选动物时或者当人道终点满足时，在第5天时在所有动物的血液中和在血液和指示的组织中通过qPCR将病毒载量测量为基因组拷贝/ml。(C)在14天时期内监测小鼠的体重损失。(D)在第5天时血液样品中的人血清IgG浓度。通过非参数未配对的Mann-Whitney U检验测定显著性，与对照抗体治疗相比。*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001。
图23示出实施例12：抗ZIKV EDIII特异性mAb ZKA190的治疗功效。(A)在第5天时在所有动物的血液中病毒载量测量为PFU。(B)当在实验结束时挑选动物时或者当人道终点满足时，在第5天时在所有动物的血液中和在血液和指示的组织中通过qPCR将病毒载量测量为基因组拷贝。通过非参数未配对的Mann-Whitney U检验测定显著性，与对照抗体治疗比较。*p<0.05；**p<0.01。(C)在第5天时血液样品中的人血清IgG浓度。
实施例
在下列实施例中提供本发明的示例性实施方式。下列实施例仅通过说明的方式呈现并且为了帮助本领域普通技术人员使用本发明。实施例决不意欲以其它方式限制本发明的范围。
实施例1：ZIKV特异性抗体的分离和单克隆抗体的产生
使用CD22微珠(Miltenyi Biotec)从四种ZIKV感染的供体(ZKA、ZKB、ZKC和ZKD)的冷藏的外周血单核细胞(PBMC)分离IgG+记忆B细胞，然后通过细胞分选耗尽携带IgM、IgD和IgA的细胞。然后在多个复制孔中如前面所描述的(Traggiai,E.et al.,Nat.Med.10,871–875,2004)利用EBV(EB病毒)和CpG(CpG寡脱氧核苷酸2006)无限增殖化来自ZIKV感染的供体的记忆B，然后在初步筛选中并行使用基于384孔的微中和试验和结合试验(ELISA)测试培养上清液以测试它们结合至ZIKV NS1蛋白和ZIKV E蛋白。结合试验的结果在图1(结合至ZIKV E蛋白)和图2(结合至ZIKV NS1蛋白)中示出。
对Vero细胞进行中和试验。在384孔板中，在37％(5％CO2)下利用上清液培育导致0.35的感染率(m.o.i，感染复数)的ZIKV H/PF/2013持续1h，然后加入预接种的5’000Vero细胞。培育这些细胞持续另外5天，其后去除上清液并且添加WST-1试剂(Roche)。收集并扩展阳性培养物。从阳性培养物，通过RT-PCR恢复VH和VL序列。基本上如描述的(Tiller T,Meffre E,Yurasov S,Tsuiji M,Nussenzweig MC,Wardemann H(2008)Efficientgeneration of monoclonal antibodies from single human B cells by single cellRT-PCR and expression vector cloning.J Immunol Methods 329:112-124)将抗体克隆入人IgG1和Igκ或Igλ表达载体(由Michel Nussenzweig,Rockefeller University,NewYork,US友情提供)。从EBV无限增殖化B细胞或通过293Freestyle细胞(Invitrogen)的瞬时转染产生单克隆抗体。收集来自B细胞或转染细胞的上清液并且通过蛋白A或蛋白G色谱法(GE Healthcare)亲和纯化IgG并且针对PBS脱盐。
图1提供对选择的ZIKV中和抗体的综述(参见表1和2，对于它们的CDR和重/轻链可变区的氨基酸序列)。图1的最后两列提供了ZIKV和DENV1的中和活性(IC50)(如果测试)。其它列提供了抗体与ZIKV E蛋白(ZIKV E)、DENV1 E蛋白(DENV1 E)、DENV2 E蛋白(DENV2 E)、DENV3 E蛋白(DENV3 E)、DENV4 E蛋白(DENV4 E)、DENV1病毒样颗粒(DENV1 VLP)、DENV2病毒样颗粒(DENV2 VLP)、DENV3病毒样颗粒(DENV3 VLP)、DENV4病毒样颗粒(DENV4 VLP)、和ZIKV E蛋白的EDIII结构域(DIII ZKA)的结合活性(EC50)。
另外的抗体被分离，用于它们结合至ZIKV NS1蛋白的能力(参见图2)。收集并扩展阳性培养物。从阳性培养物，通过RT-PCR恢复VH和VL序列。基本上如描述的(Tiller T,Meffre E,Yurasov S,Tsuiji M,Nussenzweig MC,Wardemann H(2008)Efficientgeneration of monoclonal antibodies from single human B cells by single cellRT-PCR and expression vector cloning.J Immunol Methods 329:112-124)将抗体克隆入人IgG1和Igκ或Igλ表达载体(由Michel Nussenzweig,Rockefeller University,NewYork,US友情提供)。从EBV无限增殖化B细胞或通过293Freestyle细胞(Invitrogen)的瞬时转染产生单克隆抗体。收集来自B细胞或转染细胞的上清液并且通过蛋白A或蛋白G色谱法(GE Healthcare)亲和纯化IgG并且针对PBS脱盐。
图2提供对选择的ZIKV NS1蛋白结合抗体的综述(参见表4和5，对于它们的CDR和重/轻链可变区的氨基酸序列)。即，图2提供抗体与ZIKV NS1蛋白(ZIKV NS1)、DENV1 NS1蛋白(DENV1 NS1)、DENV2 NS1蛋白(DENV2 NS1)、DENV3 NS1蛋白(DENV3 NS1)、DENV4 NS1蛋白(DENV4 NS1)、黄热病病毒NS1蛋白(YFV NS1)、西尼罗河病毒NS1蛋白(WNV NS1)、日本脑炎病毒NS1蛋白(JEV NS1)、和蜱传脑炎病毒NS1蛋白(TBEV NS1)的结合活性(EC50)。
实施例2：抗体ZKA190、ZKA185、ZKA230、ZKA64和ZKA78的表征
在实施例1中，鉴定了大量ZIKV中和抗体并表征它们对ZIKV，具体而言ZIKV E蛋白和ZIKV EDIII的特异性以及它们对DENV的交叉反应性。在实施例1中描述的抗体ZKA190(SEQ ID NO:1-18)、ZKA185(SEQ ID NO:19-36)、ZKA230(SEQ ID NO:37-54)、ZKA64(SEQ IDNO:73-90)和ZKA 78(SEQ ID NO:55-72)然后被选择并且通过ELISA进一步针对ZIKV E蛋白(“ZIKV”)、ZIKV EDIII(“DIIIZI”)测试，并且还针对登革热病毒(DENV，血清型编号1)的E蛋白测试。为此，使用标准ELISA。简言之，将ELISA板涂覆1或3μg/ml的ZIKV E蛋白，利用在PBS中的10％FCS封闭，利用血清和人抗体培育并洗涤。通过利用AP缀合的山羊抗人IgG(Southern Biotech)培育检测结合的抗体。然后洗涤板，加入底物(p-NPP，Sigma)并且在405nm下阅读板。通过测量在饱和下达到50％最大结合需要的抗体的浓度(EC50)来测定单克隆抗体结合的相对亲和力。
结果在图3和4中示出。值得注意的是，ZKA64和ZKA190以低EC50值结合至ZIKV E和ZIKV EDIII(“DIII ZI”)，由此表明ZKA64和ZKA190正在结合至ZIKV E蛋白的结构域III(EDIII)。ZKA78结合至ZIKV E，但不结合至ZIKV EDIII，表明ZKA78正在结合至ZIKV E，但是不靶向EDIII区。尽管它们相当大的ZIKV中和活性(参见表1)，但是抗体ZKA185和ZKA230不显示与ZIKV E和ZIKV EDIII的任何可检测到的结合(图4)。因此，ZKA185和ZKA230被称为“中和-非-E-结合”(NNB)抗体。假定那些NNB抗体识别在ZIKV感染性病毒粒子上但不在可溶性蛋白上展现的四级表位。
而且，ZKA190、ZKA185、ZKA230和ZKA64都不显示与DENV E蛋白的任何可检测到的结合(图1，DENV1-4血清型，和图3和4)，表明ZKA190、ZKA185、ZKA230和ZKA64对ZIKV是特异性的并且与登革热病毒不交叉反应。相比之下，ZKA78，假定其结合至ZIKV EDI/II，但不结合至ZIKV EDIII(参见图3)，结合至DENV E蛋白(图1和3)，表明ZKA78是结合至ZIKV和DENV二者的交叉反应性抗体。
为了进一步确认那些结果，ZIKV E蛋白结合抗体ZKA190、ZKA64和ZKA78被另外地针对登革热病毒(DENV，血清型编号1-4)的E蛋白测试。ZKA64和ZKA190不结合至DENV1-4 E蛋白，由此确认ZKA64和ZKA190对ZIKV是特异性的。相比之下，ZKA78结合至DENV1-4 E，确认ZKA78是结合至ZIKV和DENV二者的E蛋白的交叉反应性抗体(参见图1)。
实施例3：ZIKV NS1特异性抗体用于血清学诊断的表征
在实施例1中，鉴定了大量NS1反应性抗体，然后表征它们对ZIKV NS1的特异性以及对其它黄病毒属病毒NS1蛋白的交叉反应性(图2)。然后进一步表征抗体ZKA15(SEQ IDNO:91-108)、ZKA25(SEQ ID NO:109-126)和ZKA 35(SEQ ID NO:127-144)与ZIKV NS1和DENV1 NS1、DENV2 NS1、DENV3 NS1和DENV4 NS1的结合。为此，使用标准ELISA。简言之，将ELISA板涂覆1μg/ml的ZIKV NS1蛋白，利用在PBS中的10％FCS封闭，利用血清和人抗体培育并洗涤。通过利用AP缀合的山羊抗人IgG(Southern Biotech)培育检测结合的抗体。然后洗涤板，加入底物(p-NPP，Sigma)并且在405nm下阅读板。通过测量在饱和下达到50％最大结合需要的抗体的浓度(EC50)来测定单克隆抗体结合的相对亲和力。
结果在图5中示出。所有三种抗体(ZKA15、ZKA25和ZKA35)以高亲和力结合至ZIKVNS1，但是不结合至DENV1-4 NS1抗原(图5)。
为了进一步调查抗体与ZIKV NS1的结合，使用生物层干涉法竞争试验。使用生物层干涉法(BLI；Octet)对特异于ZIKV NS1(即不与DENV NS1交叉反应)的13种抗体(即抗体ZKA24、ZKA15、ZKA32、ZKA19、ZKA50、ZKA37、ZKA46、ZKA10、ZKA48、ZKA35、ZKA25、ZKA44和ZKA30)生成交叉竞争矩阵(参见图6A)。如从图2中可以获得的，那些13种抗体都不显示与DENV NS1的可检测到的结合。
在37℃下利用Octet RED96系统，FortéBio测定竞争试验和抗原位点测定。将在PBS中稀释至2.5μg/ml的ZIKV-NS1蛋白在APS涂覆的传感器芯片的表面上固定7-9分钟。将涂覆的生物传感器置于包含封闭缓冲液(0.1％BSA在PBS中)的孔中持续6分钟以封闭游离的生物传感器结合位点。然后将涂覆的生物传感器利用特异于ZIKV-NS1的在10μg/ml封闭缓冲液中稀释的一组单一纯化的mAb培育8分钟。在第一组mAb的结合之后(步骤1)，将生物传感器移动至包含不同mAb的孔持续8分钟(步骤2)。与第一mAb相比，第二mAb的缔合导致不同抗原位点的识别(例如，非竞争)。当检测到没有缔合或低缔合时，在步骤2中分别测定到竞争或部分竞争。通过多次竞争创建交叉竞争矩阵，以便于预测ZIKV NS1上的抗原表位图。
在图6A和6C中示出结果。首先，所有测试的ZIKV NS1特异性抗体正在结合至抗原位点S1和/或S2(图6A)。但是，抗体中的一些不与其它竞争。例如，ZKA15不竞争与ZKA25和ZKA35的结合，反之亦然(图6A)。因此，抗体ZKA15被分配给抗原位点S1，而抗体ZKA25和ZKA35被分配给抗原位点S2(图6C)。总之，基于使用的抗体，鉴定了ZIKV NS1上的抗原位点(S1和S2)(图6C)。
另外，调查与ZIKV NS1蛋白和DENV NS1蛋白(即，ZKA18、ZKA29、ZKA39、ZKA53、ZKA54、ZKB19、ZKB23、ZKC29、ZKC33和ZKC34；图6B)交叉反应的10种抗体与ZIKV NS1上的抗原位点S1和/或S2的结合。如在图2中可以获得的，那10种抗体全部显示结合至DENV NS1。在交叉竞争试验中如上面所描述(对于ZIKV NS1特异性抗体)针对ZIKV NS1 S1特异性抗体ZKA15和针对ZIKV NS1 S2特异性抗体ZKA35测试那10种交叉反应性抗体。
在图6B中示出结果，有趣的是，十种测试的交叉反应性抗体在结合至ZIKV NS1上的抗原位点S1和/或S2方面都不与ZKA 15和/或ZKA35竞争。这些结果表明NS1交叉反应性抗体不靶向ZKA15和ZKA35抗原位点。因而，NS1抗原位点S1和S2被ZIKV特异性抗体靶向，但是不被交叉反应性抗体靶向。
实施例4：ZIKV NS1特异性抗体在ZIKV感染的诊断中的用途
在当前实施例中，调查本发明的ZIKV NS1特异性抗体在诊断ZIKV感染中的有用性。更具体地，测定本发明的ZIKV NS1特异性抗体特异性地检测ZIKV或DENV感染的供体的血浆样品中针对ZIKV NS1引起的抗体的存在或不存在的用途。
为此，使用“结合阻断”试验。具体地，测量ZIKV NS1反应性血浆抗体抑制生物素化抗体ZKA35与ZIKV NS1的结合的能力。为此，使用EZ-Link NHS-PEO固相生物素化试剂盒(Pierce)生物素化ZIKV NS1特异性抗体ZKA35。测试标记的ZKA35结合至ZIKV NS1以测定达到70％最大结合的ZKA35的最佳浓度。将来自ZIKV-(n＝4)、DENV-免疫(n＝5)供体和对照(n＝48)血浆(1/10稀释)的血浆样品加入至涂覆有ZIKV NS的ELISA板。1h后，在达到70％最大结合的浓度下添加生物素化的抗ZIKV NS1抗体ZKA35并且在室温下培育混合物15分钟。洗涤板，加入底物(p-NPP，Sigma)并且在405nm下阅读板。如下计算抑制百分比：(1-[(OD样品-OD阴性对照)/(OD阳性对照-OD阴性对照)])×100。
图7中示出结果。值得注意的是，结合至NS1上的抗原位点S2的抗体ZKA35仅被来自ZIKV-免疫供体的血浆样品抑制，而不被DENV-免疫供体抑制，并且其结合也不被48种对照血浆样品抑制(图7)。因此，该试验可以被用于特异性地检测种群水平下的临床和亚临床ZIKV感染。
实施例5：根据本发明的抗体强力地中和ZIKV感染
测试分离的抗体ZKA190、ZKA185、ZKA230、ZKA64和ZKA78体外中和ZIKV和DENV1感染的能力。
使用基于微中和流式细胞术的试验测量通过抗体中和DENV和ZIKV感染。将不同的抗体稀释液与ZIKV(MOI为0.35)或减毒DENV1(MOI都为0.04)在37℃混合1小时并且在96孔平底板中添加至5000Vero细胞/孔。四天(对于ZIKV)和五天(对于DENV)之后，细胞利用2％甲醛固定，在PBS 1％FCS 0.5％皂苷中渗透，并利用小鼠mAb 4G2染色。利用缀合至AlexaFluor488(Jackson Immuno-Research，115485164)的山羊抗小鼠IgG培育细胞，并且通过流式细胞术分析。在其它情况下，也使用WST-1试剂(Roche)测定测量细胞存活力的ZIKV中和数据。中和效价(50％抑制浓度[IC50])表达为与仅细胞对照孔相比降低感染达50％的抗体浓度。
图8、9和13中示出结果。EDIII特异性mAb ZKA64和ZKA190以及NNB mAb ZKA230在ZIKV中和(毒株H/PF/2013)中是高度有效的，其中IC50值分别为93、9和10ng/ml(图8，上图)。相比之下，交叉反应性抗体ZKA78仅部分中和ZIKV感染性和交叉中和的DENV1感染性(图8，下图)。类似数据通过测量如利用WST-1试剂测量的ZIKV诱导的细胞致病作用获得(图9)。在该第二试验中，NNB抗体ZKA185也包含在该组测试的抗体中，并且显示与最强力抗体ZKA190(EDIII特异性的)和ZKA230(NNB)类似的IC50。
值得注意的是，除了中和ZIKV H/PH/2013毒株(本实施例)的能力之外，超强力的ZKA64和ZKA190抗体也结合至分别来源于ZIKV毒株MR766和SPH2015的E蛋白和EDIII(图1和图3)。ZKA190和ZKA190-LALA也被确认有效地中和两种另外的ZIKV毒株(MR766和MRS_OPY_Martinique_PaRi_2015)(图13)。合起来看，结果表明超强力的ZKA64和ZKA190抗体与属于不同基因型和起源(来自乌干达、法属玻里尼西亚、马提尼克和巴西的东非人和亚洲人)的ZIKV的多种毒株交叉反应。
实施例6：“LALA”突变通过血清抗体抑制ZIKV感染的抗体依赖性增强
也测试中和抗体增强非许可K562细胞中ZIKV的感染的能力(抗体依赖性增强试验，ADE试验)。通过基于流式细胞术的试验使用K562细胞测量ADE。抗体和ZIKV H/PF/2013(MOI 0.175)在37℃下混合1小时并且加入至5000个K562细胞/孔。四天后，利用m4G2固定、渗透和染色细胞。感染细胞的数目通过流式细胞术测定。
图10中示出结果。所有抗体在宽范围浓度下增强非许可K562细胞中ZIKV的感染，包括在Vero细胞中充分中和ZIKV感染的那些(图10)。值得注意的是，虽然高于1μg/ml的EDIII特异性抗体ZKA64和ZKA190充分地中和K562细胞的ZIKV感染，但是NNB抗体ZKA230未能如此，结果可能由于游离病毒与Fc-γ受体内化的病毒的中和的不同机制。相比之下，仅部分中和ZIKV感染性的交叉反应性ZKA78有效地增强K562细胞的ZIKV感染。这些结果表明由ZIKV或DENV感染引起的交叉反应性抗体可以介导异源性ADE。
鉴于其，调查ADE是否也可以通过免疫血清诱导和这是否可以通过作为“LALA变体”递送的中和抗体阻断。为了获得LALA变体，重链的每个在CH2结构域的氨基酸4和5处通过使用位点定向诱变置换丙氨酸代替天然亮氨酸发生突变。如上面所描述，(人IgG1抗体的)LALA变体不结合至Fc-γ受体和补体。
为了调查ZKA64-LALA抗体在ZIKV ADE中的作用，使用ADE试验的抑制。由于使用ZIKV-或DENV-免疫血浆观察到ZIKV的ADE，因此将ZIKV(MOI 0.175)与来自初次ZIKV-或DENV-感染的供体的血浆在37℃下混合30分钟。加入50μg/ml的ZKA64-LALA抗体，与5000个K562/孔混合并且培育三天。然后利用4G2染色细胞并通过流式细胞术分析。
图11中示出结果。在同源环境中，自康复期患者收集的四种ZIKV-免疫血浆和一种DENV-免疫血浆显示增强K562细胞的ZIKV感染的类似能力(图11，上图)，并且该ADE作用完全地被EDIII特异性ZKA64-LALA抗体阻断(图11，下图)。
值得注意的是，ZIKV-和DENV-免疫血浆的ADE作用完全地被EDIII特异性ZKA64-LALA抗体阻断。一旦内化为核内体，单一EDIII特异性LALA抗体的ADE阻断能力可以不仅与其胜出(out-compete)血清增强抗体的能力有关，而且与中和病毒的能力有关。
这些结果表明以“LALA”形式研发的强力地中和抗体，比如ZKA190、ZKA230、ZKA185或ZKA64具有在预防性或治疗性环境中被用于阻止先天性ZIKV感染(例如，怀孕妇女中和/或在高危险区域中生活的人中)的强的潜力。LALA形式的使用避免ZIKV ADE的风险，并且如上面所示出，也可以阻断已有交叉反应性抗体的ADE，比如在已经对DENV免疫的患者的情况下。
实施例7：使用ZIKV NS1特异性抗体对来自欧洲居民的样品进行分析以便诊断 ZIKV感染
本实施例基于在实施例4中描述的结合阻断试验。为了进一步评估ZIKV NS1 BOB试验的特异性，测试从被DENV、WNV或基孔肯雅病病毒(CHIKV)感染的患者获得的一大组样品。
为此，使用“结合阻断”试验。利用1μg/ml的ZIKV NS1涂覆聚苯乙烯板过夜并且利用包含1％BSA的PBS阻断1小时。将血浆或血清(1:10稀释)加入NS1涂覆的ELISA板。其后，例如在1小时后，加入相等体积的生物素化的抗NS1 ZKA35，并且例如在室温下培育混合物持续15分钟。洗涤板并且添加碱性磷酸酶缀合的链霉亲和素，例如持续30分钟。再次洗涤板并且添加底物。如下计算抑制百分比：(1-[(OD样品-OD阴性对照)/(OD阳性对照-OD阴性对照)])×100。
图14中示出结果。在症状发作之后多于10天从WNV患者收集的32个样品中的31个(96.9％)得分为阴性。值得注意的是，仅从2016年收集的样品获得阳性。在症状发作之后多于10天从DENV患者收集的27个样品中的两个得分为阳性，并且这两个阳性样品来源于二次DENV感染。另外，来源于基孔肯雅病患者或YFV-疫苗的样品得分都不为阳性。也测试在2010年与2016年之间从瑞士人血液供体(n＝116)收集的大量血浆样品。那些样品的得分都不为阳性。获得的结果确认和加强NS1 BOB ELISA试验的高敏感性和特异性。
实施例8：根据本发明的抗体与现有技术抗体EDE1 mAb C8相比更强力地中和ZIKV
为了将根据本发明的中和抗体与现有技术的强力地中和抗ZIKV抗体进行比较，将ZKA190的中和性能与现有技术强力地中和Ab EDE1 C8的中和性能(Barba-Spaeth G,Dejnirattisai W,Rouvinski A,Vaney MC,Medits I,Sharma A,Simon-Lorière E,Sakuntabhai A,Cao-Lormeau VM,Haouz A,England P,Stiasny K,Mongkolsapaya J,Heinz FX,Screaton GR,Rey FA.Structural basis of potent Zika-dengue virusantibody cross-neutralization.Nature.2016Aug 4；536(7614):48-53)进行比较。针对一组四种不同的ZIKV毒株(H/PF/2013、MR766、MRS-OPY和PV10552)测试两种抗体的中和。
简言之，使用基于微中和流式细胞术的试验测量ZIKV感染通过mAb的中和。将不同的mAb稀释液与ZIKV(MOI为0.35)在37℃下混合1小时并且在96孔平底板中加入5000个Vero细胞/孔。四天(对于ZIKV)后，细胞利用2％甲醛固定，在包含1％胎牛血清(Hyclone)和0.5％皂苷的PBS中渗透，并利用小鼠mAb 4G2染色。利用缀合至Alexa Fluor488(JacksonImmuno-Research，115485164)的山羊抗小鼠IgG培育细胞，并且通过流式细胞术分析。中和效价(50％抑制浓度[IC50])表达为与仅细胞对照孔相比降低感染达50％的抗体浓度。
图15中示出结果。ZKA190 mAb以0.6至8ng/ml范围内的IC50强力地中和非洲、亚洲和美国毒株。相比之下，现有技术抗体C8的效力低大约24倍。
实施例9：抗体ZKA190的进一步表征
进一步体外或体内调查抗体ZKA190的效力。为此，以IgG1野生型(wt)形式和以IgG1Fc-LALA形式合成mAb。简言之，基本上如描述的(Tiller T,Meffre E,Yurasov S,Tsuiji M,Nussenzweig MC,Wardemann H:Efficient generation of monoclonalantibodies from single human B cells by single cell RT-PCR and expressionvector cloning.J Immunol Methods 2008,329:112–124)将VH和VL序列克隆入人Igγ1、Igκ和Igλ表达载体(由Michel Nussenzweig,Rockefeller University,New York,NY,USA友情提供)。重组mAb通过EXPI293细胞(Invitrogen)的瞬时转染产生，通过蛋白A色谱法(GEHealthcare)纯化并且针对PBS脱盐。为了获得LALA变体，重链的每个在CH2结构域的氨基酸4和5处通过使用位点定向诱变置换丙氨酸代替天然亮氨酸发生突变。如上面所描述，(人IgG1抗体的)LALA变体不结合至Fc-γ受体和补体。
如在图15A中所示和在实施例8中所描述的，针对一组四种ZIKV毒株测试ZKA190。ZKA190 mAb以0.004至0.05nM范围内的IC50强力地中和非洲、亚洲和美洲毒株(图15A；0.6至8ng/ml)。
由于ZIKV已经显示感染人神经祖细胞(hNPC)，导致提高的细胞毒性、细胞周期的调节异常和降低的细胞生长，因此在hNPC中测试ZKA190和ZKA190-LALA。为此，使用CytoTune-iPS 2.0仙台病毒试剂盒(Life Technologies)重编程从Movement DisordersBio-Bank(Neurogenetics Unit of the Neurological Institute‘Carlo Besta’,Milan)获得的成年男性纤维母细胞。在无饲养条件下在mTeSR1(Stem Cell Technologies)中维持hiPSC。为了生成胚状体(EB)，将解离的hiPSC平板接种入补充有N2(0.5x)(ThermoFisherScientific)、人头蛋白(0.5mg/ml，R&D System)、SB431542(5μM，Sigma)、Y27632(10μM，Miltenyi Biotec)和青霉素/链霉素(1％，Sigma)的mTeSR1中的低粘着板(如在MarchettoMCN,Carromeu C,Acab A,Yu D,Yeo GW,Mu Y,Chen G,Gage FH,Muotri AR:A model forneural development and treatment of Rett syndrome using human inducedpluripotent stem cells.Cell 2010,143:527–539中描述的)。为了获得花纹样体(rosette)，10天后在具有N2(1:100)、非必需氨基酸(1％，ThermoFisher Scientific)和青霉素/链霉素的DMEM/F12(Sigma)中将EB平板接种至matrigel涂覆的板上(1:100，减少的matrigel生长因子，Corning)。10天后，利用Accutase(Sigma)传代细胞并且在包含DMEM/F12、N2(0.25％)、B27(0.5％，ThermoFisher Scientific)、青霉素/链霉素和FGF2(20ng/ml，ThermoFisher Scientific)的NPC培养基中接种至matrigel涂覆的烧瓶中。在被PRVABC59毒株感染之前3天，将hNPC(3x104)平板接种在24孔板中的盖玻片上。在添加至hNPC之前1h，将病毒原液利用mAb培育以获得0.5的MOI。在病毒吸附4h后，去除培养上清液并且重新添加包含mAb的新鲜培养基。感染后96h收集上清液以通过对Vero细胞的噬菌斑试验测量病毒效价。在4％多聚甲醛(PFA，Sigma)溶液中在磷酸盐缓冲盐水(PBS，Euroclone)中固定细胞30min用于间接免疫荧光法。在包含0.2％Triton X-100(Sigma)和10％驴血清(Sigma)的封闭液中渗透固定的细胞持续30分钟(min)，并且在4℃下利用一级抗体在封闭液中培育。使用下列抗体进行检测：抗包膜蛋白(anti-envelope)(1:200，Millipore，MAB10216)。然后，利用PBS洗涤细胞并且利用Hoechst和抗小鼠Alexa Fluor-488二级抗体(在封闭液中1:1,000，ThermoFisher Scientific)培育1h。在PBS洗涤之后，再次洗涤并安装(mount)细胞。图16A中示出结果。ZKA190和ZKA190-LALA二者充分地废除ZIKV在hNPC中的感染和复制。
接下来，在K562细胞系中如在实施例6中所描述的测试ZKA190和ZKA190-LALA引起ADE的能力。简言之，通过基于流式细胞术的试验使用K562细胞测量ADE。简言之，对于ZKA190，将ZKA190和ZIKV H/PF/2013(MOI 0.175)在37℃下混合1小时并加入5000个K562细胞/孔。四天后，固定、渗透并利用mAb m4G2染色细胞。通过流式细胞术测定感染细胞的数目。对于ZKA190-LALA，将ZIKV(MOI 0.175)与来自初次ZIKV感染的供体的血浆在37℃下混合30分钟。加入50μg/ml的ZKA190-LALA，与5000个K562细胞/孔混合，并培育三天。然后利用4G2染色细胞并通过流式细胞术分析。在图16B中示出结果。从0.0001到1nM的ZKA190支持ADE；如预期的，ZKA190-LALA不显示任何ADE活性。也测试ZKA190-LALA抑制K562细胞中由来自四种ZIKV-免疫供体的血浆诱导的ADE的能力。图16C中示出结果。发现ZKA190-LALA完全抑制由血浆抗体诱导的ADE(图16C)。
主要抗体的抗prM抗体形式部分在针对黄病毒属病毒的人免疫应答期间引起并且已经显示体外增强病毒感染(Dejnirattisai,W.,Jumnainsong,A.,Onsirisakul,N.,Fitton,P.,Vasanawathana,S.,Limpitikul,W.,Puttikhunt,C.,Edwards,C.,Duangchinda,T.,Supasa,S.,et al.(2010).Cross-reacting antibodies enhancedengue virus infection in humans.Science 328,745–748)。利用来源于DENV免疫供体的prM交叉反应性抗体DV62的系列稀释液预培育K562细胞(Beltramello,M.,Williams,K.L.,Simmons,C.P.,Macagno,A.,Simonelli,L.,Quyen,N.T.H.,Sukupolvi-Petty,S.,Navarro-Sanchez,E.,Young,P.R.,de Silva,A.M.,et al.(2010).The human immuneresponse to Dengue virus is dominated by highly cross-reactive antibodiesendowed with neutralizing and enhancing activity.Cell Host Microbe 8,271–283)。图16D示出结果。DV62与ZIKV prM蛋白交叉反应并在宽范围的浓度下引起ADE(图16D)。ZKA190-LALA可以充分地阻断不成熟或部分不成熟ZIKV颗粒的抗prM DV62 mAb诱导的ADE(图16D)。
最后，测试在人抗DENV2血浆或DV62的增强浓度的存在下不同浓度的ZKA190、ZKA190-LALA和ZKA190 Fab引起或阻断ZIKV的ADE的能力。在图16E中示出结果。低浓度下的ZKA190增加ZIKV感染的prM DV62介导的ADE，与其促进不成熟和成熟病毒粒子的进入的能力一致，而在高于1.3nM(即，200ng/ml)的浓度下，ZKA190阻断由DENV血浆和mAb DV62二者诱导的ADE。ZKA190-LALA，以及其Fab片段，在高于0.06nM的浓度下降低ADE，表明二者抑制在后附接步骤比如融合时的病毒感染。
实施例10：ZKA190结合至EDIII的保守的和高度可进入区域
为了测定ZKA190表位的残留水平，使用溶液NMR波谱法，如在Bardelli,M.,Livoti,E.,Simonelli,L.,Pedotti,M.,Moraes,A.,Valente,A.P.和Varani,L.(2015).Epitope mapping by solution NMR spectroscopy.J.Mol.Recognit.28,393–400；Simonelli,L.,Beltramello,M.,Yudina,Z.,Macagno,A.,Calzolai,L.和Varani,L.(2010).Rapid structural characterization of human antibody-antigen complexesthrough experimentally validated computational docking.JMol Biol 396,1491–1507；和Simonelli,L.,Pedotti,M.,Beltramello,M.,Livoti,E.,Calzolai,L.,Sallusto,F.,Lanzavecchia,A.和Varani,L.(2013).Rational Engineering of a Human Anti-Dengue Antibody through Experimentally Validated Computational Docking.PLoSONE 8,e55561中描述的。
简言之，在300K下在Bruker Avance 700MHz NMR分光计上记录光谱。对于骨架共振的分配，使用标准三重共振实验(HNCO、HN(CA)CO、HN(CO)CACB、HNCACB)，同时使用HCCH-TOCSY和HBHA(CO)NH实验注释侧链。使用Topspin 2.1(Bruker Biospin)处理所有NMR实验并利用CARA分析。使用CYANA CYANA“noeassign”macro基于手动分配的化学位移自动分配NOESY交叉峰。在CYANA中使用标准模拟退火方案用于结构计算的上距离限制(upper-distance restraint)来源于70ms 15N-和13C-分辨的NOESY光谱。ZIKV EDIII的骨架动力学来源于在600和700MHz分光计上记录的15N驰豫测量。利用CPMG(R2)、反转-恢复(R1)和15N{1H}-稳态NOE的质子检测到的版本。T2系列的延迟设置在0至0.25秒的范围内并且T1系列的延迟设置在0.02至2秒之间。15N{1H}-NOE实验使用5s的驰豫延迟。R1和R2驰豫率来源于使用室内书写(home-written)手稿对测量数据的相应指数函数的最小二乘拟合。使用软件包DYNAMICS以无模型途径分析驰豫数据。使用程序ROTDIF计算来自驰豫数据的总相关事件(8.5ns)。如前面描述执行NMR表位图(Bardelli et al.,2015；Simonelli et al.,2010；2013)。简言之，游离或结合至ZKA190 Fab的标记的EDIII的15NHSQC光谱的覆盖使得EDIII残基(其NMR信号在复合物形成之后改变)的鉴定，表明它们受ZKA190结合影响。通过人工检验和通过化学位移扰动(CSP)鉴定改变，CSP＝((ΔδH)2+(ΔδN/10)2)1/2。NMR样品通常是在20mM磷酸钠，50mM NaCl，pH 6.0中的800μM的[15N,13C]-标记的EDIII。全氘化的(名义上70％)2H、15N EDIII样品被用于具有1:1.1的EDIII:ZKA190 Fab比的NMR表位图；EDIII浓度通常为0.4mM。
由于NMR信号强烈地依赖于局部化学环境，因此复合物形成后的改变鉴定由抗体结合，直接地或通过变构效应影响的抗原残基。通过比较游离和结合的EDIII的NMR光谱(图17A)，由ZKA190影响的残基被映射至EDIII的LR，具体地至BC、DE和FG环，以及至EDI-EDIII铰链的部分(图18A)。这些残基在217种已知的ZIKV毒株之间是几乎相同的，例外是在Uganda 1947隔离群中V341I和E393D的置换(图17D)。这些突变也存在于有效地被ZKA190中和的MR766毒株中(图15A)。未复合的ZIKV结构上的ZKA190表位的分析表明表位是高度可进入的，除了在5倍顶点的FG环以外(图18B和图17C，分子A)。
计算对接随后由NMR来源的表位形成指导和验证的分子动力学模拟以及EDIII诱变表明ZKA190通过特征在于形状和电荷互补性的界面结合(图18B和17E)。对接表明在ZKA190与EDIII上的Fg环之间没有直接接触，这暗示在抗体结合之后其NMR信号的改变来源于变构效应。该概念得到如下事实的支持：重组EDIII中而非其他表位区中的FG环残基的突变不影响ZKA190对EDIII的结合亲和力(图18B和19)。
实施例11：ZKA190中和的机制
ZKA190有效地中和病毒的能力可以涉及细胞粘附或膜融合的抑制。进一步机制可能涉及通过病毒颗粒的交联的病毒灭活。
ZKA190 Fab可以中和ZIKV，虽然不如相应的IgG有效。通过结合至EDI-EDIII连接体，ZKA190(Fab和IgG二者)可以抑制病毒融合至宿主细胞膜需要的DIII的～70度旋转(Bressanelli,S.,Stiasny,K.,Allison,S.L.,Stura,E.A.,Duquerroy,S.,Lescar,J.,Heinz,F.X.和Rey,F.A.(2004).Structure of a flavivirus envelope glycoprotein inits low-pH-induced membrane fusion conformation.Embo J 23,728–738；Modis,Y.,Ogata,S.,Clements,D.和Harrison,S.C.(2004).Structure of the dengue virusenvelope protein aftermembrane fusion.Nature 427,313–319)。可选地，ZKA190可以阻止ZIKV附着至靶细胞。
ZKA190抑制膜融合的能力由共聚焦显微镜分析支持。为此，以7,500细胞/孔将Vero细胞平板接种在24孔板中的12mm直径盖玻片上，并培育过夜。在37℃下在存在或不存在Alexa-488缀合的mAb的中和浓度(0.7μM)下利用ZIKV H/PF/2013(MOI为100)感染细胞3h，利用PBS洗涤，并且在室温下在PBS中利用2％多聚甲醛固定30min。通过在固定前将染料(50nM)添加至细胞持续培育的最后30min利用Lysotracker红(Invitrogen)鉴定酸化的核内体。固定之后是在PBS和50mM甘氨酸中的大量洗涤，最终，使用Vectashield封固剂制备盖玻片用于利用DAPI(Vector Laboratories)显微镜分析荧光。通过共聚焦显微镜使用具有63×/1.4N.A.物镜的Leica TCS SP5显微镜分析样品。利用FIJI软件进行图像分析和处理。
在图20中示出结果。共聚焦显微镜分析表明仅当与ZIKV复合时，ZKA190(Fab或IgG)可以在超过IC50达10,000倍的中和浓度下进入Vero细胞(图20)。
实施例12：EDIII特异性mAb ZKA190的体内表征
为了评估它们的预防和治疗性能，在利用致死剂量的ZIKV毒株MP1751(非洲谱系)攻击的A129小鼠中测试ZKA190和ZKA190-LALA。为了测试它们的预防效力，在病毒攻击之前一天施用ZKA190和ZKA190-LALA。
经由腹膜内(i.p.)途径给5-8周龄的雌性A129小鼠(IFN-α/β受体-/-)和野生型129Sv/Ev小鼠施用500μl体积的在不同剂量的PBS中稀释的mAb(ZKA190、ZKA190-LALA和对照抗体MPE8(Corti,D.,et al.Cross-neutralization of four paramyxoviruses by ahuman monoclonal antibody.Nature501,439-443(2013))。在病毒攻击之前1天或在病毒攻击之后1、2、3或4天施用mAb。利用102pfu ZIKV(毒株MP1751)皮下攻击动物并随访14天。每日监测重量和温度并且每天至少两次记录临床观察值。在攻击后第5天时，将来自每只动物的50μl血液收集入RNA保护管(Qiagen,UK)并在-80℃下冷冻。在研究结束时(攻击后14天)或当动物满足人类端点时，进行尸体剖检，并且收集脑、脾脏、肝脏、肾脏和卵巢的血液和切片用于病毒学分析。
称重来自A129小鼠的组织样品并且使用陶瓷珠和自动化的均化器(Precellys,UK)使用具有30秒间隙的六个6500rpm的5秒周期均匀化入PBS。将200μl的组织匀浆或血液溶液转移入600μL RLT缓冲液(Qiagen,UK)用于使用RNeasy Mini提取试剂盒(Qiagen,UK)进行RNA提取；样品通过QIAshredder(Qiagen,UK)作为初始步骤。ZIKV特异性实时RT-PCR试验被用于检测来自对象动物的病毒RNA。根据Quick等，2017(Quick,J,Grubaugh ND,PullanST,Claro IM,Smith AD,Gangavarapu K,Oliveira G,Robles-Sikisaka R,Rogers TF,Beutler NA,et al.:Multiplex PCR method for MinION and Illumina sequencing ofZika and other virus genomes directly from clinical samples.Nat Protoc 2017,12:1261–1276)采用引物和探针序列，其中内部优化和验证被进行以提供最佳试剂(mastermix)和循环条件。使用SuperScript III Platinum One-step qRT-PCR试剂盒(Life Technologies,UK)进行实时RT-PCR。最终试剂(15μl)由下列组成：10μl的2x反应混合物、1.2μl的PCR级水、0.2μl的50mM MgSO4、1μl的每种引物(都在18μM工作浓度下的ZIKV1086和ZIKV 1162c)、0.8μl的探针(在25μM工作浓度下的ZIKV 1107-FAM)和0.8μl的SSIII酶混合物。将5μl的模板RNA加入试剂，获得20μl的最终反应体积。使用的循环条件为50℃持续10分钟，95℃持续2分钟，接着45个周期的95℃持续10分钟和60℃持续40秒，加40℃持续30秒的最终冷却步骤。在每个60℃步骤的结束时执行使用荧光法的定量分析。在7500Fast平台(Life Technologies,UK)上使用7500软件版本2.0.6运行和分析反应。样品中病毒载量的定量使用定量的RNA寡核苷酸的系列稀释液(Integrated DNA Technologies)执行。寡核苷酸包括基于基因库登录号AY632535.2通过试验靶向的ZIKV RNA的77个碱基并且利用HPLC纯化被合成为250纳摩尔的规模。
在图21、22和23中示出结果。ZKA190和ZKA190-LALA显示为在5、1或0.2mg/kg的浓度下保护小鼠免受死亡和发病(图21A-B)。ZKA190-LALA，和在较小程度上ZKA190，与在0.04mg/kg下的对照组相比延迟死亡率和发病率。血液和器官中的病毒效价与对照抗体-处理的动物相比显著地降低，甚至在低于1μg/ml的血清抗体水平的存在下(图22A-D)。
为了评估ZKA190的治疗潜能，我们在ZIKV感染后的不同时间点下施用ZKA190和ZKA190-LALA。在15mg/kg的剂量下，实现80％-100％的存活率，并且甚至当在感染后四天给予治疗时，发病率大大降低。在所有感染后时间点下的ZKA190和ZKA190-LALA治疗导致与利用对照抗体治疗的动物相比显著降低的病毒效价，其中明显的趋势是较早治疗导致更大的降低(图23A-23C)。值得注意的是，ZKA190-LALA显示当在感染后四天给予mAb时，与ZKA190相比，在第5天时血液中显著降低的降低的抗病毒活性，该结果可能与LALA变体促进包膜的病毒粒子的快速清除的受损能力有关。
序列和SEQ ID编号的表格
Figure GDA0003868052510000931
Figure GDA0003868052510000932
Figure GDA0003868052510000941
Figure GDA0003868052510000942
Figure GDA0003868052510000943
Figure GDA0003868052510000951
Figure GDA0003868052510000952
Figure GDA0003868052510000961
Figure GDA0003868052510000962
Figure GDA0003868052510000963
Figure GDA0003868052510000971
Figure GDA0003868052510000972
Figure GDA0003868052510000981
Figure GDA0003868052510000982
Figure GDA0003868052510000991
Figure GDA0003868052510000992
Figure GDA0003868052510000993
Figure GDA0003868052510001001
Figure GDA0003868052510001002
Figure GDA0003868052510001003
Figure GDA0003868052510001011
Figure GDA0003868052510001012
Figure GDA0003868052510001021
Figure GDA0003868052510001022
Figure GDA0003868052510001023
Figure GDA0003868052510001031
Figure GDA0003868052510001041
Figure GDA0003868052510001042
Figure GDA0003868052510001051
Figure GDA0003868052510001061
Figure GDA0003868052510001071
Figure GDA0003868052510001081
Figure GDA0003868052510001091
Figure GDA0003868052510001092
Figure GDA0003868052510001101
Figure GDA0003868052510001111
Figure GDA0003868052510001121
Figure GDA0003868052510001131
Figure GDA0003868052510001141
Figure GDA0003868052510001151
Figure GDA0003868052510001161
Figure GDA0003868052510001171
Figure GDA0003868052510001181
Figure GDA0003868052510001191
Figure GDA0003868052510001192
Figure GDA0003868052510001201
*黑体强调的序列是CDR区(核苷酸或aa)，并且加下划线的残基是与“种系”序列相比突变的残基。
序列表
<110> 胡默波斯生物医学公司
<120> 特异性地结合至寨卡病毒表位的新型抗体和其用途
<130> HB01P028WO1
<150> PCT/EP2016/066684
<151> 2016-07-13
<160> 407
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA190 CDRH1
<400> 1
Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr Gly
1 5
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA190 CDRH2
<400> 2
Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 3
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA190 CDRH3
<400> 3
Ala Lys Ser Gly Thr Gln Tyr Tyr Asp Thr Thr Gly Tyr Glu Tyr Arg
1 5 10 15
Gly Leu Glu Tyr Phe Gly Tyr
20
<210> 4
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA190 CDRL1
<400> 4
Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr
1 5
<210> 5
<400> 5
000
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA190 CDRL2 长
<400> 6
Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala
1 5
<210> 7
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA190 CDRL3
<400> 7
Gln Gln Tyr Gly Arg Ser Arg Trp Thr
1 5
<210> 8
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA190 VH
<400> 8
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Gly Thr Gln Tyr Tyr Asp Thr Thr Gly Tyr Glu Tyr Arg
100 105 110
Gly Leu Glu Tyr Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
115 120 125
Ser Ser
130
<210> 9
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA190 VL
<400> 9
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Arg Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Arg Ser Arg
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 10
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA190 CDRH1
<400> 10
ggattcacct tcagtaaata tggc 24
<210> 11
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA190 CDRH2
<400> 11
atatcatatg agggaagtaa taaa 24
<210> 12
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA190 CDRH3
<400> 12
gcgaaatcgg ggacccaata ctatgatact actggttatg agtatagggg tttggaatac 60
tttggctac 69
<210> 13
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA190 CDRL1
<400> 13
cagagtgtta gtagcagtta c 21
<210> 14
<400> 14
000
<210> 15
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA190 CDRL2 长
<400> 15
ctcatctatg atgcatccag cagggcc 27
<210> 16
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA190 CDRL3
<400> 16
cagcagtatg gtaggtcaag gtggaca 27
<210> 17
<211> 391
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA190 VH
<400> 17
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aaatatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg agggaagtaa taaatattat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggcagtgt attactgtgc gaaatcgggg 300
acccaatact atgatactac tggttatgag tataggggtt tggaatactt tggctactgg 360
ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca g 391
<210> 18
<211> 325
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA190 VL
<400> 18
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagt agcagttact tagcctggta ccagcagaaa 120
cgtggccagg ctcccaggct cctcatctat gatgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta ggtcaaggtg gacattcggc 300
caagggacca aggtggaaat caaac 325
<210> 19
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA185 CDRH1
<400> 19
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 20
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA185 CDRH2
<400> 20
Phe Asp Pro Ser Asp Ser Gln Thr
1 5
<210> 21
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA185 CDRH3
<400> 21
Ala Arg Arg Tyr Cys Ser Ser Ser Ser Cys Tyr Val Asp Asn
1 5 10
<210> 22
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA185 CDRL1
<400> 22
Ala Leu Pro Asn Lys Phe
1 5
<210> 23
<400> 23
000
<210> 24
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA185 CDRL2 长
<400> 24
Val Ile Tyr Glu Asp Asn Lys Arg Pro
1 5
<210> 25
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA185 CDRL3
<400> 25
Tyr Ser Thr Asp Ser Ser Ser Asn Pro Leu Gly Val
1 5 10
<210> 26
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA185 VH
<400> 26
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Lys Phe Asp Pro Ser Asp Ser Gln Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Tyr Cys Ser Ser Ser Ser Cys Tyr Val Asp Asn Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Ile Phe Ser
115 120
<210> 27
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA185 VL
<400> 27
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Leu Pro Asn Lys Phe Ala
20 25 30
Tyr Trp Tyr Arg Gln Lys Ser Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Glu Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Thr Met Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Val Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr His Cys Tyr Ser Thr Asp Ser Ser Ser Asn Pro
85 90 95
Leu Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 28
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA185 CDRH1
<400> 28
ggatatagtt ttaccagtta ctgg 24
<210> 29
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA185 CDRH2
<400> 29
tttgatccta gtgactctca aacc 24
<210> 30
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA185 CDRH3
<400> 30
gcgagaagat attgtagtag tagtagttgt tatgtggaca at 42
<210> 31
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA185 CDRL1
<400> 31
gcattgccaa ataaattt 18
<210> 32
<400> 32
000
<210> 33
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA185 CDRL2 长
<400> 33
gtcatctatg aggacaacaa acgaccc 27
<210> 34
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA185 CDRL3
<400> 34
tactcaacag acagcagttc taatcccctg ggagta 36
<210> 35
<211> 364
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA185 VH
<400> 35
gaagtgcagc tggtgcagtc cggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaggatc 60
tcctgtaagg gttctggata tagttttacc agttactgga tcacctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggcgaag tttgatccta gtgactctca aaccaactac 180
agcccgtcct tccaaggcca cgtcaccatc tcagttgaca agtccatcag cactgcctac 240
ttgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gagaagatat 300
tgtagtagta gtagttgtta tgtggacaat tggggccagg gaaccctggt caccatcttc 360
tcag 364
<210> 36
<211> 328
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA185 VL
<400> 36
tcctatgagc tgacacagcc accctcggtg tcagtgtccc caggacaaac ggccaggatc 60
acctgctctg gagatgcatt gccaaataaa tttgcttatt ggtaccggca gaagtcaggc 120
caggcccctg ttctggtcat ctatgaggac aacaaacgac cctccgggat ccctgagaga 180
ttctctggct ccagctcagg gacaatggcc accttgacta tcagtggggc ccaggtggag 240
gatgaagctg actaccactg ttactcaaca gacagcagtt ctaatcccct gggagtattc 300
ggcggaggga ccaagctgac cgtcctag 328
<210> 37
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA230 CDRH1
<400> 37
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp Tyr
1 5
<210> 38
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA230 CDRH2
<400> 38
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 39
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA230 CDRH3
<400> 39
Ala Arg Arg Arg Lys Tyr Asp Ser Leu Trp Gly Ser Phe Ala Phe Asp
1 5 10 15
Ile
<210> 40
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA230 CDRL1
<400> 40
Ser Ser Asn Ile Gly Gly Asn Tyr
1 5
<210> 41
<400> 41
000
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA230 CDRL2 长
<400> 42
Leu Ile Cys Ile Asn Asp His Arg Pro
1 5
<210> 43
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA230 CDRL3
<400> 43
Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu Gly Gly Leu Val
1 5 10
<210> 44
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA230 VH
<400> 44
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn His Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Arg Arg Lys Tyr Asp Ser Leu Trp Gly Ser Phe Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 45
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA230 VL
<400> 45
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Gly Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Cys Ile Asn Asp His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Gly Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 46
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA230 CDRH1
<400> 46
ggtggctcca tcagtagtga ctac 24
<210> 47
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA230 CDRH2
<400> 47
atctattaca gtgggagcac c 21
<210> 48
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA230 CDRH3
<400> 48
gcgaggagga ggaagtatga ttccctttgg gggagttttg cttttgatat c 51
<210> 49
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA230 CDRL1
<400> 49
agctccaaca tcggaggtaa ttat 24
<210> 50
<400> 50
000
<210> 51
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA230 CDRL2 长
<400> 51
ctcatctgta ttaatgatca ccggccc 27
<210> 52
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA230 CDRL3
<400> 52
gcaacatggg atgacagcct gggtggcctt gta 33
<210> 53
<211> 370
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA230 VH
<400> 53
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccaggc ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcgcag tctctggtgg ctccatcagt agtgactact ggagctggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggagtg gattgggtat atctattaca gtgggagcac caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca cttctccctg 240
aagctgaact ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag gaggaggaag 300
tatgattccc tttgggggag ttttgctttt gatatctggg gccaagggac aatggtcacc 360
gtctcttcag 370
<210> 54
<211> 331
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA230 VL
<400> 54
cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga ggtaattatg tatactggta ccagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctgt attaatgatc accggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca acatgggatg acagcctggg tggccttgta 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta g 331
<210> 55
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA78 CDRH1
<400> 55
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
1 5
<210> 56
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA78 CDRH2
<400> 56
Ile Gly Arg Asn Gly Asp Ser Ile
1 5
<210> 57
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA78 CDRH3
<400> 57
Val Lys Asp Leu Ala Ile Pro Glu Ser Tyr Arg Ile Glu Ala Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 58
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA78 CDRL1
<400> 58
Gln Ser Val Leu Tyr Arg Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 59
<400> 59
000
<210> 60
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA78 CDRL2 长
<400> 60
Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu
1 5
<210> 61
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA78 CDRL3
<400> 61
Gln Gln Tyr Tyr Ser Ser Pro Arg Thr
1 5
<210> 62
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA78 VH
<400> 62
Glu Val Gln Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Ser Cys Ser Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Val Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Arg Asn Gly Asp Ser Ile Tyr Tyr Thr Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Met Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Asp Leu Ala Ile Pro Glu Ser Tyr Arg Ile Glu Ala Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile Val Ser Ala
115 120
<210> 63
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA78 VL
<400> 63
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Arg
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Pro Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Ser Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 64
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA78 CDRH1
<400> 64
ggcttcactt ttagtaacta tgca 24
<210> 65
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA78 CDRH2
<400> 65
atcgggcgca acggggactc tatc 24
<210> 66
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA78 CDRH3
<400> 66
gtgaaagatc tggccatccc cgagtcctac agaattgaag ctgattat 48
<210> 67
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA78 CDRL1
<400> 67
cagtccgtgc tgtaccgctc taacaacaag aattac 36
<210> 68
<400> 68
000
<210> 69
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA78 CDRL2 长
<400> 69
ctgatctatt gggcttcaac ccgggaa 27
<210> 70
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA78 CDRL3
<400> 70
cagcagtact attctagtcc tcgaact 27
<210> 71
<211> 370
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA78 VH
<400> 71
gaggtgcagc tggcagaatc aggcggggga ctggtccagc ctggcggcag cctgacactg 60
tcttgcagtg gatcaggctt cacttttagt aactatgcaa tggtgtgggc aaggcaggct 120
cctgggaagg gactggagta tgtctctggc atcgggcgca acggggactc tatctactat 180
actgatagtg tgaagggccg gttcaccatc agcagagaca atagcaaatc catggtgtac 240
ctgcagatga gctccctgcg aaccgaagac acagcagtgt actattgcgt gaaagatctg 300
gccatccccg agtcctacag aattgaagct gattattggg gacagggcac cctggtcatc 360
gtgagcgccg 370
<210> 72
<211> 340
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA78 VL
<400> 72
gacatcgtga tgacacagtc tccagatagt ctggcagtca gtctggggga gagggccact 60
attaactgca agagctccca gtccgtgctg taccgctcta acaacaagaa ttacctgtct 120
tggtatcagc agaagcccgg acagccccct aaactgctga tctattgggc ttcaacccgg 180
gaaagcggcg tcccagacag attctcaggc agcgggtccg gaacagactt caccctgaca 240
attagccccc tgcaggcaga ggacgtggct gtctactatt gtcagcagta ctattctagt 300
cctcgaactt tcggccaggg gaccaaggtg gaaatcaaac 340
<210> 73
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA64 CDRH1
<400> 73
Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr His
1 5
<210> 74
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA64 CDRH2
<400> 74
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr
1 5
<210> 75
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA64 CDRH3
<400> 75
Ala Arg Met Ser Ser Ser Ile Trp Gly Phe Asp His
1 5 10
<210> 76
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA64 CDRL1
<400> 76
Gln Ser Val Leu Ile Asn
1 5
<210> 77
<400> 77
000
<210> 78
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA64 CDRL2 长
<400> 78
Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala
1 5
<210> 79
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA64 CDRL3
<400> 79
Gln Gln Tyr Asn Asp Trp Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 80
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA64 VH
<400> 80
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
His Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Met Ser Ser Ser Ile Trp Gly Phe Asp His Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 81
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA64 VL
<400> 81
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Leu Ile Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asp Trp Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 82
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA64 CDRH1
<400> 82
ggctacacct tcacagggta tcac 24
<210> 83
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA64 CDRH2
<400> 83
attaacccta attctggcgg gacc 24
<210> 84
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA64 CDRH3
<400> 84
gctcggatga gctcctctat ttggggcttc gatcat 36
<210> 85
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA64 CDRL1
<400> 85
cagtctgtgc tgattaac 18
<210> 86
<400> 86
000
<210> 87
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA64 CDRL2 长
<400> 87
ctgatctatg gagcatcctc cagggct 27
<210> 88
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA64 CDRL3
<400> 88
cagcagtaca atgattggcc ccctatcaca 30
<210> 89
<211> 358
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA64 VH
<400> 89
caggtgcagc tggtccagag cggagcagag gtgaagaaac ccggcgcctc agtgaaggtc 60
agctgcaaag cttccggcta caccttcaca gggtatcaca tcgactgggt gaggcaggca 120
agaggacagg gactggaatg gatgggacgg attaacccta attctggcgg gaccaactac 180
gcccagaagt ttcagggccg agtgactatg accagagaca ccagcatctc cacagcttat 240
atgcagctgt cccggctgag atctgacgat agtgccgtct actattgtgc tcggatgagc 300
tcctctattt ggggcttcga tcattggggg cagggaacac tggtgactgt cagttcag 358
<210> 90
<211> 325
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA64 VL
<400> 90
gagatcgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtcagtca gcccaggaga acgggcaacc 60
ctgtcttgca gagcctccca gtctgtgctg attaacctgg cttggtacca gcagaagcca 120
ggccaggcac cccgactgct gatctatgga gcatcctcca gggctaccgg cattcctgca 180
cgcttcagtg gatcaggaag cggaacagag tttaccctga caatctctag tctgcagtcc 240
gaagacttcg ctgtctacta ttgtcagcag tacaatgatt ggccccctat cacatttggc 300
caggggacta gactggagat caagc 325
<210> 91
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA15 CDRH1
<400> 91
Gly Gly Phe Ile Asn Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 92
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA15 CDRH2
<400> 92
Ile Tyr Lys Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 93
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA15 CDRH3
<400> 93
Ala Arg Asp Pro Tyr Gly Asp Tyr Val Lys Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA15 CDRL1
<400> 94
Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr
1 5 10
<210> 95
<400> 95
000
<210> 96
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA15 CDRL2 长
<400> 96
Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala
1 5
<210> 97
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA15 CDRL3
<400> 97
Met Gln Ala Leu Gln Thr Val Thr
1 5
<210> 98
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA15 VH
<400> 98
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Phe Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Lys Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Met Ser Leu Asp Thr Ser Lys Tyr Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Pro Tyr Gly Asp Tyr Val Lys Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 99
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA15 VL
<400> 99
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Val Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105 110
<210> 100
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA15 CDRH1
<400> 100
ggtggcttca tcaatagtta ctac 24
<210> 101
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA15 CDRH2
<400> 101
atctataaaa gtgggagcac c 21
<210> 102
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA15 CDRH3
<400> 102
gcgagagatc cctacggtga ctacgttaag gcttttgata tt 42
<210> 103
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA15 CDRL1
<400> 103
cagagcctcc tgcatagtaa tggatacaac tat 33
<210> 104
<400> 104
000
<210> 105
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA15 CDRL2 长
<400> 105
ctgatctatt tgggttctaa tcgggcc 27
<210> 106
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA15 CDRL3
<400> 106
atgcaagctc tacaaactgt cact 24
<210> 107
<211> 361
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA15 VH
<400> 107
caggtgcagc tgcaggagtc ggggccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctccggtgg cttcatcaat agttactact ggagctggat ccggcagccc 120
gccgggaagg gactggagtg gattgggcgt atctataaaa gtgggagcac caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatgtca ctagacacgt ccaagtacca gttctccctg 240
aagctgaggt ctgtgaccgc cgctgacacg gccgtgtatt actgtgcgag agatccctac 300
ggtgactacg ttaaggcttt tgatatttgg ggccaaggga caatggtcac cgtctcttca 360
g 361
<210> 108
<211> 334
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA15 VL
<400> 108
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttgaattgg 120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactgtc 300
actttcggcc ctgggaccaa agtggatatc aaac 334
<210> 109
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA25 CDRH1
<400> 109
Gly Phe Thr Phe Arg Ser His Trp
1 5
<210> 110
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA25 CDRH2
<400> 110
Ile Lys Glu Asp Gly Tyr Glu Lys
1 5
<210> 111
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA25 CDRH3
<400> 111
Ala Arg Asp Leu Arg Val Tyr Ser Gly Arg Gly Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 112
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA25 CDRL1
<400> 112
Lys Leu Gly Asp Lys Tyr
1 5
<210> 113
<400> 113
000
<210> 114
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA25 CDRL2 长
<400> 114
Val Ile Tyr Gln Asp Ser Lys Arg Pro
1 5
<210> 115
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA25 CDRL3
<400> 115
Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val
1 5
<210> 116
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA25 VH
<400> 116
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser His
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Glu Asp Gly Tyr Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Arg Val Tyr Ser Gly Arg Gly Phe Asp Pro Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 117
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA25 VL
<400> 117
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala
20 25 30
Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 118
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA25 CDRH1
<400> 118
ggattcacct ttagaagtca ttgg 24
<210> 119
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA25 CDRH2
<400> 119
ataaaggaag atggatatga gaaa 24
<210> 120
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA25 CDRH3
<400> 120
gcgagagatt tgagggtata tagtgggaga ggtttcgacc cc 42
<210> 121
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA25 CDRL1
<400> 121
aaattggggg ataaatat 18
<210> 122
<400> 122
000
<210> 123
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA25 CDRL2 长
<400> 123
gtcatctatc aagatagcaa gcggccc 27
<210> 124
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA25 CDRL3
<400> 124
caggcgtggg acagcagcac tgtggta 27
<210> 125
<211> 364
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA25 VH
<400> 125
gaggtgcagt tggtggagtc tgggggaggc ttggtccggc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttaga agtcattgga tgagttgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtggccaac ataaaggaag atggatatga gaaatactat 180
gtggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga agagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagatttg 300
agggtatata gtgggagagg tttcgacccc tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tcag 364
<210> 126
<211> 319
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA25 VL
<400> 126
tcctatgagc tgactcagcc accctcactg tccgtgtccc caggacagac agccagcatc 60
acctgctctg gagataaatt gggggataaa tatgcttgct ggtatcagca gaagccaggc 120
cagtcccctg tgttggtcat ctatcaagat agcaagcggc cctcagggat ccctgcgcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctatg 240
gatgaggctg actattactg tcaggcgtgg gacagcagca ctgtggtatt cggtggaggg 300
accaagctga ccgtcctag 319
<210> 127
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA35 CDRH1
<400> 127
Gly Gly Ser Ile Ser Thr Gly Gly Tyr Tyr
1 5 10
<210> 128
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA35 CDRH2
<400> 128
Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 129
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA35 CDRH3
<400> 129
Ala Lys Gly Gly Gly Arg Glu Arg Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 130
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA35 CDRL1
<400> 130
Ser Ser Asn Ile Gly Arg Asn Tyr
1 5
<210> 131
<400> 131
000
<210> 132
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA35 CDRL2 长
<400> 132
Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro
1 5
<210> 133
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA35 CDRL3
<400> 133
Val Ala Trp Asp Asp Ser Arg Ser Gly Phe Val Val
1 5 10
<210> 134
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA35 VH
<400> 134
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Thr Gly
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Lys Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Lys Gly Gly Gly Arg Glu Arg Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 135
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA35 VL
<400> 135
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Arg Asn
20 25 30
Tyr Val Asp Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Glu Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ala Trp Asp Asp Ser Arg
85 90 95
Ser Gly Phe Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 136
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA35 CDRH1
<400> 136
ggtggctcca tcagcactgg tggttactac 30
<210> 137
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA35 CDRH2
<400> 137
atctattaca gtgggaacac c 21
<210> 138
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA35 CDRH3
<400> 138
gcgaaaggag gagggaggga gcgacccttt gactac 36
<210> 139
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA35 CDRL1
<400> 139
agctccaaca tcggaagaaa ttat 24
<210> 140
<400> 140
000
<210> 141
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA35 CDRL2 长
<400> 141
ctcatctata ggaataatca gcggccc 27
<210> 142
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA35 CDRL3
<400> 142
gtagcatggg atgacagccg gagtggtttt gtggta 36
<210> 143
<211> 361
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA35 VH
<400> 143
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc actggtggtt actactggag ctggatccgc 120
cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt ggttacatct attacagtgg gaacacctac 180
tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagttg acacctctaa gaagcagttc 240
tccctgaagc tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgaaagga 300
ggagggaggg agcgaccctt tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
g 361
<210> 144
<211> 334
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA35 VL
<400> 144
cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agaaattatg tagactggta ccagcaactc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gagcgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgta gcatgggatg acagccggag tggttttgtg 300
gtattcggcg gagggaccaa ggtgaccgtc ctag 334
<210> 145
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG1 CH1-CH2-CH3 aa
<400> 145
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 146
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG1 CH1-CH2-CH3 LALA aa
<400> 146
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 147
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG CK aa
<400> 147
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 148
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG CL aa
<400> 148
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
<210> 149
<211> 990
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG1 CH1-CH2-CH3 nucl
<400> 149
gcgtcgacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaacctgt gacggtctcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa 990
<210> 150
<211> 990
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG1 CH1-CH2-CH3 LALA nucl
<400> 150
gcgtcgacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaacctgt gacggtctcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgcgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa 990
<210> 151
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG CK nucl
<400> 151
cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180
agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 152
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG CL nucl
<400> 152
ggtcagccca aggctgcccc ctcggtcact ctgttcccgc cctcctctga ggagcttcaa 60
gccaacaagg ccacactggt gtgtctcata agtgacttct acccgggagc cgtgacagtg 120
gcttggaaag cagatagcag ccccgtcaag gcgggagtgg agaccaccac accctccaaa 180
caaagcaaca acaagtacgc ggccagcagc tatctgagcc tgacgcctga gcagtggaag 240
tcccacagaa gctacagctg ccaggtcacg catgaaggga gcaccgtgga gaagacagtg 300
gcccctacag aatgttca 318
<210> 153
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA10 CDRH1
<400> 153
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Tyr
1 5
<210> 154
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA10 CDRH2
<400> 154
Ile Ser Ser Ser Ser Pro Phe Thr
1 5
<210> 155
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA10 CDRH3
<400> 155
Ala Arg Gly Leu Val Arg Asp Gly Tyr Lys Trp Leu Tyr Phe Phe Asp
1 5 10 15
Tyr
<210> 156
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA10 VH
<400> 156
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Glu Pro Arg Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Pro Phe Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Val Arg Asp Gly Tyr Lys Trp Leu Tyr Phe Phe Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 157
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA18 CDRH1
<400> 157
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly
1 5
<210> 158
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA18 CDRH2
<400> 158
Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 159
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA18 CDRH3
<400> 159
Ala Arg Asp Asp Ser Gly Tyr Ser Glu Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 160
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA18 VH
<400> 160
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Asp Ser Gly Tyr Ser Glu Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 161
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA28 CDRH1
<400> 161
Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn Tyr
1 5
<210> 162
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA28 CDRH2
<400> 162
Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 163
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA28 CDRH3
<400> 163
Ala Arg Trp Ile Asn Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 164
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA28 VH
<400> 164
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Trp Ile Asn Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 165
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA29 CDRH1
<400> 165
Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Ser
1 5
<210> 166
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA29 CDRH2
<400> 166
Ile Ser Pro Arg Ser Thr Thr Ile
1 5
<210> 167
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA29 CDRH3
<400> 167
Ala Arg Glu Asp Cys Thr Asn Gly Val Cys Tyr Arg Val Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 168
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA29 VH
<400> 168
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Pro Arg Ser Thr Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Cys Thr Asn Gly Val Cys Tyr Arg Val Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 169
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA33 CDRH1
<400> 169
Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn Trp
1 5
<210> 170
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA33 CDRH2
<400> 170
Ile Lys Glu Asp Gly Asn Glu Lys
1 5
<210> 171
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA33 CDRH3
<400> 171
Ala Arg Pro Phe His Gln Gly Gly Tyr Ala Tyr Gly Leu Ala Tyr
1 5 10 15
<210> 172
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA33 VH
<400> 172
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Glu Asp Gly Asn Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Phe His Gln Gly Gly Tyr Ala Tyr Gly Leu Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 173
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA39 CDRH1
<400> 173
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ser
1 5
<210> 174
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA39 CDRH2
<400> 174
Ile Ser Pro Ser Ser Ser Thr Ile
1 5
<210> 175
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA39 CDRH3
<400> 175
Ala Arg Glu Tyr Cys Ser Gly Gly Ser Cys Tyr Leu Leu Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 176
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA39 VH
<400> 176
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Pro Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Gln Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Tyr Cys Ser Gly Gly Ser Cys Tyr Leu Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 177
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA43 CDRH1
<400> 177
Gly Gly Ser Ile Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 178
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA43 CDRH2
<400> 178
Ser His Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 179
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA43 CDRH3
<400> 179
Ala Arg Gly Ile Tyr Ser Gly Lys Asn Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 180
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA43 VH
<400> 180
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Tyr Gly Gly Ser Ile Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ser His Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Ser Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Asn Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Ile Tyr Ser Gly Lys Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 181
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA44 CDRH1
<400> 181
Gly Phe Thr Val Ser Thr Ser Tyr
1 5
<210> 182
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA44 CDRH2
<400> 182
Ile Tyr Ser Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 183
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA44 CDRH3
<400> 183
Ala Arg Val Ser Leu Gly Gly Leu Asp Pro
1 5 10
<210> 184
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA44 VH
<400> 184
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Thr Ser
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Tyr Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asn Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Ser Leu Gly Gly Leu Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 185
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA46 CDRH1
<400> 185
Gly Phe Ser Leu Ser Asn Gly Arg Met Gly
1 5 10
<210> 186
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA46 CDRH2
<400> 186
Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys
1 5
<210> 187
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA46 CDRH3
<400> 187
Ala Arg Val Glu Phe Arg Ala Gly Asn Tyr Leu Asp Ser
1 5 10
<210> 188
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA46 VH
<400> 188
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Gly
20 25 30
Arg Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Tyr Tyr Ser Thr Ser
50 55 60
Leu Lys Asn Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Val Glu Phe Arg Ala Gly Asn Tyr Leu Asp Ser Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 189
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA50 CDRH1
<400> 189
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Ser Trp
1 5
<210> 190
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA50 CDRH2
<400> 190
Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr
1 5
<210> 191
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA50 CDRH3
<400> 191
Ala Arg Gln Pro Phe Phe Asp Tyr
1 5
<210> 192
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA50 VH
<400> 192
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Gln Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Ser
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Pro Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 193
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA54 CDRH1
<400> 193
Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr
1 5
<210> 194
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA54 CDRH2
<400> 194
Ile Asn Ala Asn Ser Gly Gly Thr
1 5
<210> 195
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA54 CDRH3
<400> 195
Ala His Ser Asp Ile Val Val Val Pro Ser Asp Asp Tyr Tyr Ala Leu
1 5 10 15
Asp Val
<210> 196
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA54 VH
<400> 196
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Ala Asn Ser Gly Gly Thr Asn Phe Ala Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Trp Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala His Ser Asp Ile Val Val Val Pro Ser Asp Asp Tyr Tyr Ala Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 197
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB18 CDRH1
<400> 197
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 198
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB18 CDRH2
<400> 198
Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr
1 5
<210> 199
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB18 CDRH3
<400> 199
Ala Arg Gln Thr Pro Gly Asp Tyr
1 5
<210> 200
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB18 VH
<400> 200
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Thr Phe Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Met Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Met Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Thr Pro Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 201
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB20 CDRH1
<400> 201
Gly Tyr Phe Phe Thr Arg Tyr Val
1 5
<210> 202
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB20 CDRH2
<400> 202
Ile Asn Thr Asp Asn Gly Ser Thr
1 5
<210> 203
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB20 CDRH3
<400> 203
Ala Arg Gly Thr Gly Arg Asp Gly Tyr Asn Ser Phe Phe Ala Asn
1 5 10 15
<210> 204
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB20 VH
<400> 204
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Phe Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Val Ile Leu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Pro Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asp Asn Gly Ser Thr Arg Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Ser Ser Leu Lys Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Gly Arg Asp Gly Tyr Asn Ser Phe Phe Ala Asn Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Pro
115 120
<210> 205
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB21 CDRH1
<400> 205
Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Ser
1 5
<210> 206
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB21 CDRH2
<400> 206
Ile Asp Thr Asn Ser Gly Asp Thr
1 5
<210> 207
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB21 CDRH3
<400> 207
Ala Arg Asp Arg Glu Arg His Pro Phe Ser Tyr
1 5 10
<210> 208
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB21 VH
<400> 208
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Ser Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Ala Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Thr Asn Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Glu Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Arg Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Glu Arg His Pro Phe Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 209
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB23 CDRH1
<400> 209
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Asp Tyr Ser
1 5 10
<210> 210
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB23 CDRH2
<400> 210
Ile Thr His Ser Gly Thr Thr
1 5
<210> 211
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB23 CDRH3
<400> 211
Ala Arg His Phe Gly Trp Phe Asp Pro
1 5
<210> 212
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB23 VH
<400> 212
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ser Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Asp Tyr Ser Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Thr His Ser Gly Thr Thr Tyr Phe Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Arg Ser Arg Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Val Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Phe Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 213
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC29 CDRH1
<400> 213
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Glu Tyr Phe
1 5 10
<210> 214
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC29 CDRH2
<400> 214
Ile His Asn Arg Gly Asn Thr
1 5
<210> 215
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC29 CDRH3
<400> 215
Ala Arg Gly Gly Gly Asp Leu Val Val Val Pro Asp Ser Ile Trp Asp
1 5 10 15
Tyr Tyr Gly Met Asp Val
20
<210> 216
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC29 VH
<400> 216
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Glu Tyr Phe Trp Thr Trp Ile Arg Gln His Pro Lys Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile His Asn Arg Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Ser Ile Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn His Leu
65 70 75 80
Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Gly Gly Asp Leu Val Val Val Pro Asp Ser Ile Trp
100 105 110
Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
115 120 125
Ser Ser
130
<210> 217
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC31 CDRH1
<400> 217
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Gly Tyr His
1 5 10
<210> 218
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC31 CDRH2
<400> 218
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 219
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC31 CDRH3
<400> 219
Ala Arg Asp Arg Ser Glu Pro Gly Glu Tyr His Tyr Tyr Tyr Tyr Ala
1 5 10 15
Met Asp Val
<210> 220
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC31 VH
<400> 220
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Gly Tyr His Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Arg Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Ser Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Arg Ser Glu Pro Gly Glu Tyr His Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 221
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC32 CDRH1
<400> 221
Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn Tyr
1 5
<210> 222
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC32 CDRH2
<400> 222
Ile Tyr Ser Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 223
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC32 CDRH3
<400> 223
Ala Arg Gly Lys Lys Gly Asn Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 224
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC32 VH
<400> 224
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Tyr Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Lys Lys Gly Asn Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Val
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 225
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC33, CDRH1
<400> 225
Gly Asp Ser Ile Ser Ser Arg Thr Phe Ser
1 5 10
<210> 226
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC33 CDRH2
<400> 226
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 227
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC33 CDRH3
<400> 227
Ala Arg Arg Asn Ala Glu Phe Phe Ser Phe Trp Ser Tyr Tyr Gly Met
1 5 10 15
Asp Val
<210> 228
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC33 VH
<400> 228
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Ile Ser Ser Arg
20 25 30
Thr Phe Ser Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Val Gly His Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Arg Asn Ala Glu Phe Phe Ser Phe Trp Ser Tyr Tyr Gly
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly His Gly Thr Ala Val Ile Val Ser Ser
115 120 125
<210> 229
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC34 CDRH1
<400> 229
Gly Gly Ser Ile Asn Ser Gly Gly Tyr Tyr
1 5 10
<210> 230
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC34 CDRH2
<400> 230
Ile Leu His Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 231
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC34 CDRH3
<400> 231
Ala Arg Ala Gly Asp Tyr Tyr Ser Gly Tyr Val Pro Pro Glu Tyr
1 5 10 15
<210> 232
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC34 VH
<400> 232
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Asn Ser Gly
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Val Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Leu His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Asn Ile Phe Val Asp Thr Ser Glu Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Phe
85 90 95
Cys Ala Arg Ala Gly Asp Tyr Tyr Ser Gly Tyr Val Pro Pro Glu Tyr
100 105 110
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 233
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD25 CDRH1
<400> 233
Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn Tyr
1 5
<210> 234
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD25 CDRH2
<400> 234
Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 235
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD25 CDRH3
<400> 235
Ala Arg Phe Gly Gly Asn Pro Ser Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 236
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD25 VH
<400> 236
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Phe Gly Gly Asn Pro Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 237
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA3 CDRH1
<400> 237
Gly Phe Ile Phe Ser Asn Tyr Ala
1 5
<210> 238
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA3 CDRH2
<400> 238
Ile Gly Gly Lys Gly Asp Ser Ile
1 5
<210> 239
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA3 CDRH3
<400> 239
Val Lys Asp Leu Ala Val Leu Glu Ser Asp Arg Leu Glu Val Asp Gln
1 5 10 15
<210> 240
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA3 VH
<400> 240
Glu Val Gln Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Gly Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Val Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Gly Lys Gly Asp Ser Ile Tyr His Ile Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Arg Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Arg Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Asp Leu Ala Val Leu Glu Ser Asp Arg Leu Glu Val Asp Gln
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile Val Ser Ala
115 120
<210> 241
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA4 CDRH1
<400> 241
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Val
1 5
<210> 242
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA4 CDRH2
<400> 242
Thr Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 243
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA4 CDRH3
<400> 243
Ala Arg Gly Pro Val Pro Tyr Trp Ser Gly Glu Ser Tyr Ser Gly Ala
1 5 10 15
Tyr Phe Asp Phe
20
<210> 244
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA4 VH
<400> 244
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Val Thr Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Pro Val Pro Tyr Trp Ser Gly Glu Ser Tyr Ser Gly Ala
100 105 110
Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 245
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA5 CDRH1
<400> 245
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Tyr
1 5
<210> 246
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA5 CDRH2
<400> 246
Met Ser Ser Ser Glu Thr Ile Lys
1 5
<210> 247
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA5 CDRH3
<400> 247
Ala Arg Ser Gly Ile Glu Thr Val Ala Gly Ser Ile Asp Tyr Tyr Gly
1 5 10 15
Met Asp Val
<210> 248
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA5 VH
<400> 248
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ser Tyr Met Ser Ser Ser Glu Thr Ile Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Ile Glu Thr Val Ala Gly Ser Ile Asp Tyr Tyr Gly
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly His Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 249
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA6 CDRH1
<400> 249
Asp Phe Thr Val Ser Asn Tyr Ala
1 5
<210> 250
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA6 CDRH2
<400> 250
Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 251
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA6 CDRH3
<400> 251
Ala Thr Gly Val Thr Met Phe Gln Gly Ala Gln Thr Asn Ala Glu Tyr
1 5 10 15
Leu His Tyr
<210> 252
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA6 VH
<400> 252
Gln Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Asp Phe Thr Val Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gly Val Thr Met Phe Gln Gly Ala Gln Thr Asn Ala Glu Tyr
100 105 110
Leu His Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Leu Val Thr Ile Ser Ser
115 120 125
<210> 253
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA7 CDRH1
<400> 253
Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Gly
1 5
<210> 254
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA7 CDRH2
<400> 254
Val Ser Gly Asp Gly Ser Ser Thr
1 5
<210> 255
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA7 CDRH3
<400> 255
Val Lys Asp Phe Trp Ser Gly Asp Gln Ser Leu Glu Ser Asp Phe
1 5 10 15
<210> 256
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA7 VH
<400> 256
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Gly Met Val Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Leu
35 40 45
Ser Gly Val Ser Gly Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu His Met Ser Arg Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Asp Phe Trp Ser Gly Asp Gln Ser Leu Glu Ser Asp Phe Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 257
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA8 CDRH1
<400> 257
Gly Phe Thr Phe Ser Ala His Ala
1 5
<210> 258
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA8 CDRH2
<400> 258
Ile Ser Arg Asn Glu Asp Tyr Thr
1 5
<210> 259
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA8 CDRH3
<400> 259
Val Lys Asp Phe Gly Thr Ser Pro Gln Thr Asp Phe
1 5 10
<210> 260
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA8 VH
<400> 260
Asp Glu Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Val Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ala His
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Arg Asn Glu Asp Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Arg Arg Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Asp Phe Gly Thr Ser Pro Gln Thr Asp Phe Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Ala Val Ser Ser
115
<210> 261
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA76 CDRH1
<400> 261
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Phe
1 5
<210> 262
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA76 CDRH2
<400> 262
Ile Ser Ser Thr Gly Ser Tyr Lys
1 5
<210> 263
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA76 CDRH3
<400> 263
Ala Arg Pro Phe His Ser Glu Tyr Thr Tyr Gly Leu Asp Ala Phe Asp
1 5 10 15
Ile
<210> 264
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA76 VH
<400> 264
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Phe Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ser Tyr Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Ser Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Phe Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Phe His Ser Glu Tyr Thr Tyr Gly Leu Asp Ala Phe Asp
100 105 110
Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 265
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA117 CDRH1
<400> 265
Gly Gly Ser Ile Arg Arg Thr Asn Ser Tyr
1 5 10
<210> 266
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA117 CDRH2
<400> 266
Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 267
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA117 CDRH3
<400> 267
Ala Arg Leu Asn Asp Gly Ser Thr Val Thr Thr Ser Ser Tyr Phe Asp
1 5 10 15
Tyr
<210> 268
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA117 VH
<400> 268
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Arg Thr
20 25 30
Asn Ser Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Thr Thr Gly Lys Gly Leu Gln
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Phe Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asp His Phe
65 70 75 80
Ser Leu Glu Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Leu Asn Asp Gly Ser Thr Val Thr Thr Ser Ser Tyr Phe
100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 269
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB27 CDRH1
<400> 269
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser Trp
1 5
<210> 270
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB27 CDRH2
<400> 270
Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr
1 5
<210> 271
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB27 CDRH3
<400> 271
Ala Arg His Asp Tyr Ser Val Ser Glu Asn Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 272
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB27 VH
<400> 272
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Ile Gly Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Asn Ser Leu Arg Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Asp Tyr Ser Val Ser Glu Asn Gly Met Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 273
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB29 CDRH1
<400> 273
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Thr
1 5
<210> 274
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB29 CDRH2
<400> 274
Ile Ser Tyr Asp Gly Ser His Lys
1 5
<210> 275
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB29 CDRH3
<400> 275
Ala Arg Arg Ser Tyr Ser Ile Ser Cys Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 276
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB29 VH
<400> 276
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser His Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asp Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Ser Tyr Ser Ile Ser Cys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Ile Ser Ser
115
<210> 277
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB34 CDRH1
<400> 277
Gly Phe Thr Phe Ser Arg Ser Gly
1 5
<210> 278
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB34 CDRH2
<400> 278
Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 279
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB34 CDRH3
<400> 279
Ala Lys Asp Leu Thr Met Val Arg Gly Val His Tyr Tyr Tyr Tyr Val
1 5 10 15
Met Asp Val
<210> 280
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB34 VH
<400> 280
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Ser
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ser Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Leu Thr Met Val Arg Gly Val His Tyr Tyr Tyr Tyr Val
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 281
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB39 CDRH1
<400> 281
Gly Tyr Thr Phe Asp Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 282
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB39 CDRH2
<400> 282
Ile Asn Pro His Arg Gly Gly Thr
1 5
<210> 283
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB39 CDRH3
<400> 283
Val Arg Asp Gln Tyr Cys Asp Gly Gly Asn Cys Tyr Gly Ile His Gln
1 5 10 15
Pro His Tyr Gly Met Asp Val
20
<210> 284
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB39 VH
<400> 284
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro His Arg Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ile Met Thr Leu Asp Met Ser Ile Ser Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Arg Ile Thr Ser Asp Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Gln Tyr Cys Asp Gly Gly Asn Cys Tyr Gly Ile His Gln
100 105 110
Pro His Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
115 120 125
Ser Ser
130
<210> 285
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB46 CDRH1
<400> 285
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 286
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB46 CDRH2
<400> 286
Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr
1 5
<210> 287
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB46 CDRH3
<400> 287
Ala Arg Arg Glu Tyr Ser Ser Ser Ser Gly Gln Glu Asp Trp Phe Asp
1 5 10 15
Pro
<210> 288
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB46 VH
<400> 288
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Tyr Ser Ser Ser Ser Gly Gln Glu Asp Trp Phe Asp
100 105 110
Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 289
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB53 CDRH1
<400> 289
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 290
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB53 CDRH2
<400> 290
Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Arg
1 5
<210> 291
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB53 CDRH3
<400> 291
Ala Arg His Val Glu Gln Leu Pro Ser Ser Gly Tyr Phe Gln His
1 5 10 15
<210> 292
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB53 VH
<400> 292
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Val Glu Gln Leu Pro Ser Ser Gly Tyr Phe Gln His Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 293
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC26 CDRH1
<400> 293
Gly Phe Ile Phe Ser Asp Phe Tyr
1 5
<210> 294
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC26 CDRH2
<400> 294
Ile Gly His Asp Gly Ser Tyr Ile
1 5
<210> 295
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC26 CDRH3
<400> 295
Ala Arg Ala His Gly Gly Phe Arg His
1 5
<210> 296
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC26 VH
<400> 296
Gln Val Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asp Phe
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Gly His Asp Gly Ser Tyr Ile Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe
65 70 75 80
Leu Arg Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala His Gly Gly Phe Arg His Trp Gly Gln Gly Thr Val Val
100 105 110
Ala Val Ser Pro
115
<210> 297
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD5 CDRH1
<400> 297
Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Gly
1 5
<210> 298
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD5 CDRH2
<400> 298
Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 299
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD5 CDRH3
<400> 299
Ala Arg Asp Arg Asp His Tyr Asp Leu Trp Asn Ala Tyr Thr Phe Asp
1 5 10 15
Tyr
<210> 300
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD5 VH
<400> 300
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asp Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Ala Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Asp His Tyr Asp Leu Trp Asn Ala Tyr Thr Phe Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 301
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD7 CDRH1
<400> 301
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
1 5
<210> 302
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD7 CDRH2
<400> 302
Ile Ser Tyr Asp Val Ser Asp Lys
1 5
<210> 303
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD7 CDRH3
<400> 303
Ala Gly Gly Pro Leu Gly Val Val Val Ile Lys Pro Ser Asn Ala Glu
1 5 10 15
His Phe His His
20
<210> 304
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD7 VH
<400> 304
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Val Ser Asp Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ala Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Gly Pro Leu Gly Val Val Val Ile Lys Pro Ser Asn Ala Glu
100 105 110
His Phe His His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 305
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD8 CDRH1
<400> 305
Gly Phe Thr Phe Ile Asn Tyr Ala
1 5
<210> 306
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD8 CDRH2
<400> 306
Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 307
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD8 CDRH3
<400> 307
Ala Thr Asp Ala Asp Ala Tyr Gly Asp Ser Gly Ala Asn Phe His Tyr
1 5 10 15
<210> 308
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD8 VH
<400> 308
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ile Asn Tyr
20 25 30
Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Thr Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asp Ala Asp Ala Tyr Gly Asp Ser Gly Ala Asn Phe His Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 309
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD15 CDRH1
<400> 309
Asp Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Phe Ser
1 5 10
<210> 310
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD15 CDRH2
<400> 310
Ile Tyr Ser Ser Gly Asp Thr
1 5
<210> 311
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD15 CDRH3
<400> 311
Ala Arg Ala His Thr Pro Thr Ser Lys Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Ala Met
1 5 10 15
Asp Val
<210> 312
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD15 VH
<400> 312
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ser Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Ala Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Gly Phe Ser Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Leu Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Tyr Ile Tyr Ser Ser Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Gln Gly Arg Val Thr Met Ser Val Asp Ile Phe Arg Ser Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Met Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Ala His Thr Pro Thr Ser Lys Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Ala
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 313
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD16 CDRH1
<400> 313
Gly Phe Thr Phe Ser Asp His Phe
1 5
<210> 314
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD16 CDRH2
<400> 314
Ser Arg Asn Lys Pro Asn Ser Tyr Thr Thr
1 5 10
<210> 315
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD16 CDRH3
<400> 315
Ala Lys Val Gly Gly Cys Tyr Gly Gly Asp Cys His Val Glu Asn Asp
1 5 10 15
Tyr
<210> 316
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD16 VH
<400> 316
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
20 25 30
Phe Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ser Arg Asn Lys Pro Asn Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Lys Ala
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Gln Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Lys Val Gly Gly Cys Tyr Gly Gly Asp Cys His Val Glu
100 105 110
Asn Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 317
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD17 CDRH1
<400> 317
Gly Phe Ile Phe Ser Asp Tyr Ala
1 5
<210> 318
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD17 CDRH2
<400> 318
Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Ser Arg
1 5
<210> 319
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD17 CDRH3
<400> 319
Ala Arg Gly Tyr Cys Ser Ser Gly Thr Cys Phe Ser Thr Asn Ala Glu
1 5 10 15
Tyr Phe His Pro
20
<210> 320
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD17 VH
<400> 320
Gln Val Gln Met Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Ser Arg Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met His Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Cys Ser Ser Gly Thr Cys Phe Ser Thr Asn Ala Glu
100 105 110
Tyr Phe His Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Ala Thr Ile Ser Ser
115 120 125
<210> 321
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD20 CDRH1
<400> 321
Gly Phe Thr Phe Ser Asp His Phe
1 5
<210> 322
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD20 CDRH2
<400> 322
Ser Arg Asn Lys Pro Asn Ser Tyr Thr Thr
1 5 10
<210> 323
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD20 CDRH3
<400> 323
Ala Arg Val Gly Gly Cys Asn Gly Gly Asp Cys His Val Glu Asn Asp
1 5 10 15
Tyr
<210> 324
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD20 VH
<400> 324
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
20 25 30
Phe Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ser Arg Asn Lys Pro Asn Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Gln Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Val Gly Gly Cys Asn Gly Gly Asp Cys His Val Glu
100 105 110
Asn Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 325
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA134 CDRH1
<400> 325
Gly Gly Thr Phe Ser Ala Tyr Ala
1 5
<210> 326
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA134 CDRH2
<400> 326
Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Ala
1 5
<210> 327
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA134 CDRH3
<400> 327
Ala Arg Ser Asp Ile Val Ser Thr Thr Arg Gly Tyr His His Tyr Gly
1 5 10 15
Met Asp Val
<210> 328
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA134 VH
<400> 328
Gln Val His Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ala Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Val Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Asp Ile Val Ser Thr Thr Arg Gly Tyr His His Tyr Gly
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 329
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA246 CDRH1
<400> 329
Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 330
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA246 CDRH2
<400> 330
Ile Asn Pro Tyr Ser Gly Gly Thr
1 5
<210> 331
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA246 CDRH3
<400> 331
Ala Arg Gly Phe Thr Met Ile Ser Asp Arg Glu Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 332
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA246 VH
<400> 332
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Tyr Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
His Gly Arg Val Thr Val Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Gly Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Thr Met Ile Ser Asp Arg Glu Phe Asp Pro Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 333
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA256 CDRH1
<400> 333
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Trp
1 5
<210> 334
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA256 CDRH2
<400> 334
Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys
1 5
<210> 335
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA256 CDRH3
<400> 335
Ala Arg Asp Pro Gly Tyr Asp Asp Phe Trp Ser Gly Ser Tyr Ser Gly
1 5 10 15
Ser Phe Asp Ile
20
<210> 336
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA256 VH
<400> 336
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Val Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Pro Gly Tyr Asp Asp Phe Trp Ser Gly Ser Tyr Ser Gly
100 105 110
Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 337
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB42 CDRH1
<400> 337
Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr Gly
1 5
<210> 338
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB42 CDRH2
<400> 338
Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Lys Lys
1 5
<210> 339
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB42 CDRH3
<400> 339
Val Lys Tyr Gly Glu Arg Ile Asn Gly Tyr Ser Asp Pro Phe Asp His
1 5 10 15
<210> 340
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB42 VH
<400> 340
Gln Val Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Phe Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr His Cys
85 90 95
Val Lys Tyr Gly Glu Arg Ile Asn Gly Tyr Ser Asp Pro Phe Asp His
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 341
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB85 CDRH1
<400> 341
Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr Ala
1 5
<210> 342
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB85 CDRH2
<400> 342
Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro
1 5
<210> 343
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB85 CDRH3
<400> 343
Ala Arg Val Ile Val Pro Tyr Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 344
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB85 VH
<400> 344
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Pro Glu Trp Val
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Val Leu Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Ile Val Pro Tyr Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 345
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB47 CDRH1
<400> 345
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Tyr
1 5
<210> 346
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB47 CDRH2
<400> 346
Ile Asn Pro Ser Gly Gly Pro Thr
1 5
<210> 347
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB47 CDRH3
<400> 347
Ala Arg Asp Gln Tyr Gly Gly Tyr Ala Arg Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 348
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB47 VH
<400> 348
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Gln Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Pro Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gln Tyr Gly Gly Tyr Ala Arg Tyr Gly Met Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 349
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC6 CDRH1
<400> 349
Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr
1 5
<210> 350
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC6 CDRH2
<400> 350
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr
1 5
<210> 351
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC6 CDRH3
<400> 351
Ala Arg Val Ser Asp Trp Gly Phe Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 352
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC6 VH
<400> 352
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Thr Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Gly Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Ser Asp Trp Gly Phe Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Gln
115
<210> 353
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA160 CDRH1
<400> 353
Gly Gly Ser Ile Thr Ser Tyr Ser
1 5
<210> 354
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA160 CDRH2
<400> 354
Ile Phe Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 355
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA160 CDRH3
<400> 355
Ala Arg Asp Gln Thr Met Pro Val Trp Val Gly Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 356
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA160 VH
<400> 356
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Ser Tyr
20 25 30
Ser Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Phe Tyr Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asp Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Arg Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gln Thr Met Pro Val Trp Val Gly Gly Met Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 357
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA172 CDRH1
<400> 357
Gly Tyr Ile Phe Thr Arg Tyr Trp
1 5
<210> 358
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA172 CDRH2
<400> 358
Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr
1 5
<210> 359
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA172 CDRH3
<400> 359
Ala Arg Gln Glu Thr Ala Arg Glu Asp Gly Met Ala Val
1 5 10
<210> 360
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA172 VH
<400> 360
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Lys
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Glu Thr Ala Arg Glu Asp Gly Met Ala Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 361
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA174 CDRH1
<400> 361
Gly Gly Ser Met Ser Asn Ser Tyr Tyr His
1 5 10
<210> 362
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA174 CDRH2
<400> 362
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 363
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA174 CDRH3
<400> 363
Ala Arg Asn Pro Val Phe Asn Pro Leu Thr Leu Thr His Asp Ala Phe
1 5 10 15
Asp Ile
<210> 364
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA174 VH
<400> 364
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Met Ser Asn Ser
20 25 30
Tyr Tyr His Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asn Pro Val Phe Asn Pro Leu Thr Leu Thr His Asp Ala
100 105 110
Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 365
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA189 CDRH1
<400> 365
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 366
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA189 CDRH2
<400> 366
Ile Ser Gly Ser Gly Asp Asn Thr
1 5
<210> 367
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA189 CDRH3
<400> 367
Ala Lys Trp Pro Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Glu Ser Tyr Phe
1 5 10 15
Asp Pro
<210> 368
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA189 VH
<400> 368
Gly Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Gln Pro Gly Lys
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Leu Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Trp Pro Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Glu Ser Tyr Phe
100 105 110
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 369
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA195 CDRH1
<400> 369
Gly Tyr Asn Phe Pro Ser Tyr Trp
1 5
<210> 370
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA195 CDRH2
<400> 370
Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr
1 5
<210> 371
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA195 CDRH3
<400> 371
Ala Arg Ala Asp Cys Arg Ser Thr Ser Cys Tyr Leu Val Phe Glu
1 5 10 15
<210> 372
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA195 VH
<400> 372
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Asp Ser Gly Tyr Asn Phe Pro Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asp Cys Arg Ser Thr Ser Cys Tyr Leu Val Phe Glu Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 373
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA215 CDRH1
<400> 373
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 374
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA215 CDRH2
<400> 374
Ile Asp Pro Ser Asp Ser His Thr
1 5
<210> 375
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA215 CDRH3
<400> 375
Ala Arg His Ala Leu Pro Asn Tyr Phe Asp Ser
1 5 10
<210> 376
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA215 VH
<400> 376
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser His Thr Asp Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Ala Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Ala Leu Pro Asn Tyr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 377
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA218 CDRH1
<400> 377
Gly Phe Pro Phe Ser Ser Tyr Trp
1 5
<210> 378
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA218 CDRH2
<400> 378
Ile Asn Ser Asp Gly Arg Asn Thr
1 5
<210> 379
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA218 CDRH3
<400> 379
Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Tyr Asp Ser Ser Gly Cys Phe Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 380
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKA218 VH
<400> 380
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Pro Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Asn Ser Asp Gly Arg Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Tyr Asp Ser Ser Gly Cys Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 381
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB75 CDRH1
<400> 381
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
1 5
<210> 382
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB75 CDRH2
<400> 382
Ile Ser Gly Thr Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 383
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB75 CDRH3
<400> 383
Ala Lys Asp Ser Ala Ser Arg Gly Gly Tyr Cys Ser Gly Gly Val Cys
1 5 10 15
Tyr Leu Asn Pro Gly His His Asp Tyr
20 25
<210> 384
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB75 VH
<400> 384
Glu Val Gln Val Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Leu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Gly Thr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Ala Ser Arg Gly Gly Tyr Cys Ser Gly Gly Val Cys
100 105 110
Tyr Leu Asn Pro Gly His His Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
115 120 125
Thr Val Ser Ser
130
<210> 385
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB83 CDRH1
<400> 385
Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr Trp
1 5
<210> 386
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB83 CDRH2
<400> 386
Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr
1 5
<210> 387
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB83 CDRH3
<400> 387
Ala Arg Leu Arg Gly Ser Leu Tyr Cys Ser Gly Gly Arg Cys Tyr Ser
1 5 10 15
Val Pro Gly Glu Thr Pro Asn Trp Phe Asp Pro
20 25
<210> 388
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKB83 VH
<400> 388
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ser Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Trp Ser Ile Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Lys Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Arg Gly Ser Leu Tyr Cys Ser Gly Gly Arg Cys Tyr Ser
100 105 110
Val Pro Gly Glu Thr Pro Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Leu Val Thr Val Ser Ser
130
<210> 389
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC3 CDRH1
<400> 389
Gly Gly Ser Ile Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 390
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC3 CDRH2
<400> 390
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 391
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC3 CDRH3
<400> 391
Ala Arg Val Gly Gly Ala Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 392
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC3 VH
<400> 392
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Gly Gly Ala Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 393
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC18 CDRH1
<400> 393
Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr Ala
1 5
<210> 394
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC18 CDRH2
<400> 394
Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr
1 5 10
<210> 395
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC18 CDRH3
<400> 395
Ser Arg Asp His Thr Gly Thr Thr Tyr Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 396
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKC18 VH
<400> 396
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ser Arg Asp His Thr Gly Thr Thr Tyr Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Gln
115 120
<210> 397
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD1 CDRH1
<400> 397
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly
1 5
<210> 398
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD1 CDRH2
<400> 398
Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 399
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD1 CDRH3
<400> 399
Ala Arg Asp Arg Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Val Gly Tyr Tyr Tyr Gly
1 5 10 15
Met Asp Val
<210> 400
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZKD1 VH
<400> 400
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Val Gly Tyr Tyr Tyr Gly
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 401
<211> 95
<212> PRT
<213> 寨卡病毒
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (13)..(14)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(22)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (25)..(25)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (27)..(27)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (33)..(33)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (35)..(35)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (41)..(41)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (60)..(60)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (83)..(83)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (85)..(85)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 401
Thr Ala Ala Phe Thr Phe Thr Lys Xaa Pro Ala Glu Xaa Xaa His Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Val Glu Xaa Gln Tyr Xaa Gly Xaa Asp Gly Pro Cys Lys
20 25 30
Xaa Pro Xaa Gln Met Ala Val Asp Xaa Gln Thr Leu Thr Pro Val Gly
35 40 45
Arg Leu Ile Thr Ala Asn Pro Val Ile Thr Glu Xaa Thr Glu Asn Ser
50 55 60
Lys Met Met Leu Glu Leu Asp Pro Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val
65 70 75 80
Ile Gly Xaa Gly Xaa Lys Lys Ile Thr His His Trp His Arg Ser
85 90 95
<210> 402
<211> 95
<212> PRT
<213> 寨卡病毒
<400> 402
Thr Ala Ala Phe Thr Phe Thr Lys Ile Pro Ala Glu Thr Leu His Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Val Glu Val Gln Tyr Ala Gly Thr Asp Gly Pro Cys Lys
20 25 30
Val Pro Ala Gln Met Ala Val Asp Met Gln Thr Leu Thr Pro Val Gly
35 40 45
Arg Leu Ile Thr Ala Asn Pro Val Ile Thr Glu Ser Thr Glu Asn Ser
50 55 60
Lys Met Met Leu Glu Leu Asp Pro Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val
65 70 75 80
Ile Gly Val Gly Glu Lys Lys Ile Thr His His Trp His Arg Ser
85 90 95
<210> 403
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZIKV-NS1 正向引物
<400> 403
tggagttcaa ctgacggtcg 20
<210> 404
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ZIKV-NS1-反向引物
<400> 404
taccccgaac ccatgatcct 20
<210> 405
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Gapdh- 正向引物
<400> 405
ggcaagttca aaggcacagt c 21
<210> 406
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Gapdh-反向引物
<400> 406
caccagcatc accccattt 19
<210> 407
<211> 104
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ZIKV EDIII generic
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> X可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地K、A或E
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> X可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地V、F或L
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> X可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地S或F
<220>
<221> misc_feature
<222> (17)..(17)
<223> X可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地I或V
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> X可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地T或V
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(22)
<223> X可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地L或D
<220>
<221> misc_feature
<222> (30)..(30)
<223> X可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地V或G
<220>
<221> misc_feature
<222> (33)..(33)
<223> X可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地A或G
<220>
<221> misc_feature
<222> (35)..(35)
<223> X可以是除了R之外的任何(天然存在的)氨基酸，优选地T或 A
<220>
<221> misc_feature
<222> (41)..(41)
<223> X可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地V或I
<220>
<221> misc_feature
<222> (43)..(43)
<223> X可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地A或V
<220>
<221> misc_feature
<222> (49)..(49)
<223> X可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地M或T
<220>
<221> misc_feature
<222> (68)..(68)
<223> X可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地S或G
<220>
<221> misc_feature
<222> (70)..(70)
<223> X可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地E或K
<220>
<221> misc_feature
<222> (91)..(91)
<223> X可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地V或I
<220>
<221> misc_feature
<222> (93)..(93)
<223> X可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地E、A、K或D
<220>
<221> misc_feature
<222> (94)..(94)
<223> X可以是任何(天然存在的)氨基酸，优选地E、A或K，更优选地K或A
<400> 407
Xaa Gly Xaa Xaa Tyr Ser Leu Cys Thr Ala Ala Phe Thr Phe Thr Lys
1 5 10 15
Xaa Pro Ala Glu Xaa Xaa His Gly Thr Val Thr Val Glu Xaa Gln Tyr
20 25 30
Xaa Gly Xaa Asp Gly Pro Cys Lys Xaa Pro Xaa Gln Met Ala Val Asp
35 40 45
Xaa Gln Thr Leu Thr Pro Val Gly Arg Leu Ile Thr Ala Asn Pro Val
50 55 60
Ile Thr Glu Xaa Thr Xaa Asn Ser Lys Met Met Leu Glu Leu Asp Pro
65 70 75 80
Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val Ile Gly Xaa Gly Xaa Xaa Lys Ile
85 90 95
Thr His His Trp His Arg Ser Gly
100

Claims (34)

1.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性地结合至寨卡病毒表位并中和寨卡病毒感染，其中所述抗体或其抗原结合片段包括根据SEQ ID NO:1-5和7的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列以及CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述抗体或其抗原结合片段不结合至登革热病毒样颗粒。
3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述抗体或其抗原结合片段不结合至登革热包膜蛋白。
4.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述抗体或其抗原结合片段不促进寨卡病毒感染的抗体依赖性增强。
5.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述抗体或其抗原结合片段是人抗体。
6.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体。
7.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述抗体或其抗原结合片段是IgG。
8.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述抗体或其抗原结合片段包括Fc部分。
9.根据权利要求8所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述抗体或其抗原结合片段包括Fc部分中的突变，所述突变降低抗体与Fc受体的结合。
10.根据权利要求8或9所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述抗体或其抗原结合片段包括CH2 L4A突变、CH2 L5A突变、或二者。
11.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述抗体或其抗原结合片段可以抑制ZIKV的后附接步骤。
12.根据权利要求11所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述抗体或其抗原结合片段可以阻止膜融合。
13.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述抗体或其抗原结合片段可以引起ZIKV的聚集。
14.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述抗体或其抗原结合片段包括根据SEQ ID NO:8的重链可变区氨基酸序列或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体，和/或根据SEQ ID NO:9的轻链可变区氨基酸序列，或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的其功能序列变体。
15.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述抗体或其抗原结合片段是纯化抗体。
16.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述抗体或其抗原结合片段是Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFv。
17.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其用作药物。
18.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其用于预防和/或治疗寨卡病毒感染。
19.一种核酸分子，其包括编码根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸。
20.一种载体，其包括根据权利要求19所述的核酸分子。
21.一种细胞，其表达根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，或包括根据权利要求20所述的载体。
22.一种药物组合物，其包括根据权利要求1-16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求19所述的核酸、根据权利要求20所述的载体和/或根据权利要求21所述的细胞。
23.根据权利要求22所述的药物组合物，其进一步包括药学上可接受的赋形剂、稀释剂或运载体。
24.根据权利要求22所述的药物组合物，其作为单剂量产品被提供。
25.根据权利要求22所述的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合片段的量不超过500mg。
26.根据权利要求1-16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求19所述的核酸、根据权利要求20所述的载体、根据权利要求21所述的细胞、或根据权利要求22所述的药物组合物在制备用于(i)预防或治疗寨卡病毒感染；或(ii)诊断寨卡病毒感染的药物中的用途。
27.根据权利要求26所述的用途，其中所述寨卡病毒感染的预防或治疗在诊断患有寨卡病毒感染的对象中或在显示寨卡感染的症状的对象中进行。
28.根据权利要求26所述的用途，其中所述用途用于无症状对象。
29.根据权利要求26所述的用途，其中所述用途用于怀孕对象。
30.根据权利要求26所述的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段、所述核酸、所述载体、所述细胞、或所述药物组合物在寨卡病毒感染或可能的寨卡病毒感染后被施用至多七天。
31.根据权利要求26所述的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段、所述核酸、所述载体、所述细胞、或所述药物组合物与限制点抑制剂组合施用。
32.根据权利要求26所述的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段、所述核酸、所述载体、所述细胞、或所述药物组合物以0.005至100mg/kg的剂量被施用。
33.根据权利要求1-16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段用于通过检查抗寨卡疫苗的抗原包含正确构象的特定表位来监测所述疫苗的质量的用途。
34.一种组分试剂盒，其包括至少一种根据权利要求1-16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、至少一种根据权利要求19所述的核酸、至少一种根据权利要求20所述的载体、至少一种根据权利要求21所述的细胞、或至少一种根据权利要求22所述的药物组合物。
CN201780042888.7A 2016-07-13 2017-07-12 特异性地结合至寨卡病毒表位的新型抗体和其用途 Active CN109563157B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211721078.3A CN116199775A (zh) 2016-07-13 2017-07-12 特异性地结合至寨卡病毒表位的新型抗体和其用途

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EPPCT/EP2016/066684 2016-07-13
PCT/EP2016/066684 WO2018010789A1 (en) 2016-07-13 2016-07-13 Novel antibodies specifically binding to zika virus epitopes and uses thereof
PCT/EP2017/067581 WO2018011283A1 (en) 2016-07-13 2017-07-12 Novel antibodies specifically binding to zika virus epitopes and uses thereof

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211721078.3A Division CN116199775A (zh) 2016-07-13 2017-07-12 特异性地结合至寨卡病毒表位的新型抗体和其用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109563157A CN109563157A (zh) 2019-04-02
CN109563157B true CN109563157B (zh) 2023-01-17

Family

ID=56413654

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211721078.3A Pending CN116199775A (zh) 2016-07-13 2017-07-12 特异性地结合至寨卡病毒表位的新型抗体和其用途
CN201780042888.7A Active CN109563157B (zh) 2016-07-13 2017-07-12 特异性地结合至寨卡病毒表位的新型抗体和其用途

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211721078.3A Pending CN116199775A (zh) 2016-07-13 2017-07-12 特异性地结合至寨卡病毒表位的新型抗体和其用途

Country Status (31)

Country Link
US (3) US11117954B2 (zh)
EP (2) EP4342911A1 (zh)
JP (2) JP7252888B2 (zh)
KR (1) KR102595764B1 (zh)
CN (2) CN116199775A (zh)
AU (1) AU2017297757B2 (zh)
BR (1) BR112018074456A2 (zh)
CA (1) CA3024374A1 (zh)
CL (2) CL2019000067A1 (zh)
CO (1) CO2019001111A2 (zh)
CR (1) CR20190066A (zh)
DK (1) DK3484915T5 (zh)
DO (2) DOP2019000006A (zh)
EA (1) EA201990243A1 (zh)
EC (1) ECSP19009170A (zh)
ES (1) ES2959883T3 (zh)
FI (1) FI3484915T3 (zh)
HR (1) HRP20231196T1 (zh)
HU (1) HUE063272T2 (zh)
IL (1) IL262710B2 (zh)
LT (1) LT3484915T (zh)
MX (1) MX2019000526A (zh)
MY (1) MY190553A (zh)
PE (1) PE20190398A1 (zh)
PH (1) PH12018502348A1 (zh)
PL (1) PL3484915T3 (zh)
SG (1) SG11201809879WA (zh)
SI (1) SI3484915T1 (zh)
UA (1) UA126381C2 (zh)
WO (2) WO2018010789A1 (zh)
ZA (1) ZA201807467B (zh)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11946017B2 (en) 2016-07-13 2024-04-02 Evonik Operations Gmbh Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
MY191894A (en) 2016-10-13 2022-07-18 Nat Univ Singapore Antibodies that bind zika virus envelope protein and uses thereof
WO2019042555A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Humabs Biomed Sa MULTISPECIFIC ANTIBODIES SPECIFICALLY BINDING TO ZIKA VIRUS EPITOPES AND USES THEREOF
EP3527664A1 (en) 2018-02-15 2019-08-21 Evonik Degussa GmbH Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
JP2019152666A (ja) * 2018-03-02 2019-09-12 富士レビオ株式会社 ジカウイルスを検出する方法及びキット
CA3098373A1 (en) 2018-04-24 2019-10-31 The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. Potent zika virus-specific and cross-neutralizing monoclonal antibodies to zika and dengue viruses following zikv infection or vaccination
RU2760575C1 (ru) 2018-05-15 2021-11-29 Эвоник Оперейшнс Гмбх Способ выделения липидов из содержащей липиды биомассы с помощью гидрофобного диоксида кремния
US11976253B2 (en) 2018-05-15 2024-05-07 Evonik Operations Gmbh Method of isolating lipids from a lysed lipids containing biomass by emulsion inversion
WO2020061159A1 (en) * 2018-09-20 2020-03-26 Vanderbilt University Human antibodies to zika virus
WO2020078568A1 (en) 2018-10-19 2020-04-23 Humabs Biomed Sa Antibodies and methods for treatment of lyssavirus infection
WO2020092564A1 (en) * 2018-10-31 2020-05-07 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Human antibodies targeting zika virus ns1, ns1 polypeptides and uses thereof
JP7463366B2 (ja) * 2018-11-20 2024-04-08 タケダ ワクチン，インコーポレイテッド 新規の抗ジカウイルス抗体及びその使用
WO2020245663A1 (en) * 2019-06-01 2020-12-10 Institut Pasteur Nanobody-based ns1 assay for the specific diagnosis of acute zika virus infection
US20230085393A1 (en) * 2019-11-19 2023-03-16 Vanderbilt University Human antibodies that neutralize zika virus and methods of use therefor
CN111100201B (zh) * 2019-12-31 2021-09-28 武汉班科生物技术股份有限公司 针对寨卡病毒囊膜蛋白的鼠源单克隆抗体
CN111138534B (zh) * 2019-12-31 2021-09-28 武汉班科生物技术股份有限公司 寨卡病毒囊膜蛋白的鼠源单克隆抗体
JP7471555B2 (ja) * 2020-02-20 2024-04-22 国立感染症研究所長 フラビウイルス交差中和抗体及び医薬組成物
JP2023526493A (ja) 2020-05-20 2023-06-21 タケダ ワクチン，インコーポレイテッド ジカウイルス特異的抗体の検出方法
WO2021236225A1 (en) 2020-05-20 2021-11-25 Takeda Vaccines, Inc. Method for detection of zika virus specific antibodies
US20230204567A1 (en) 2020-05-20 2023-06-29 Takeda Vaccines, Inc. Method for determining the potency of antigens
WO2022001803A1 (zh) * 2020-06-28 2022-01-06 神州细胞工程有限公司 一种降低病毒ade效应的方法
EP4313102A2 (en) * 2021-04-01 2024-02-07 A2 Biotherapeutics, Inc. Polypeptides targeting hla-a*11 and methods of use thereof
CN112921124B (zh) * 2021-04-08 2021-09-28 广东创晟控股集团有限公司 一种快速检测病毒的试剂盒

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154600B (nl) 1971-02-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen.
US3817837A (en) 1971-05-14 1974-06-18 Syva Corp Enzyme amplification assay
US3766162A (en) 1971-08-24 1973-10-16 Hoffmann La Roche Barbituric acid antigens and antibodies specific therefor
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4233402A (en) 1978-04-05 1980-11-11 Syva Company Reagents and method employing channeling
JPS5896026A (ja) 1981-10-30 1983-06-07 Nippon Chemiphar Co Ltd 新規ウロキナ−ゼ誘導体およびその製造法ならびにそれを含有する血栓溶解剤
EP0098110B1 (en) 1982-06-24 1989-10-18 NIHON CHEMICAL RESEARCH KABUSHIKI KAISHA also known as JAPAN CHEMICAL RESEARCH CO., LTD Long-acting composition
US4766106A (en) 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4831175A (en) 1986-09-05 1989-05-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Backbone polysubstituted chelates for forming a metal chelate-protein conjugate
US5595721A (en) 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
MY133346A (en) 1999-03-01 2007-11-30 Biogen Inc Kit for radiolabeling ligands with yttrium-90
US20020102208A1 (en) 1999-03-01 2002-08-01 Paul Chinn Radiolabeling kit and binding assay
US7785799B2 (en) 2002-08-16 2010-08-31 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods related to flavivirus envelope protein domain III antigens
AU2004215125B2 (en) 2003-02-26 2011-01-06 Institute For Research In Biomedicine Monoclonal antibody production by EBV transformation of B cells
WO2005000898A2 (en) 2003-06-27 2005-01-06 Biogen Idec Ma Inc. Use of hydrophobic-interaction-chromatography or hinge-region modifications for the production of homogeneous antibody-solutions
CN101802197A (zh) 2007-05-14 2010-08-11 比奥根艾迪克Ma公司 单链FC（ScFc）区、包含其的结合多肽及与其相关的方法
DK2350128T3 (da) 2008-10-22 2014-12-01 Inst Research In Biomedicine Fremgangsmåder til fremstilling af antistoffer fra plasmaceller
CA2901358C (en) * 2013-03-15 2022-07-26 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Flavivirus neutralizing antibodies and methods of use thereof
JP2019511221A (ja) 2016-03-11 2019-04-25 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ 弱毒化された生ジカウイルスワクチン
WO2017181098A2 (en) * 2016-04-15 2017-10-19 Visterra, Inc. Antibody molecules to zika virus and uses thereof
TW201815821A (zh) 2016-07-18 2018-05-01 美商再生元醫藥公司 抗茲卡病毒抗體及使用方法
PT3658557T (pt) 2017-07-28 2024-09-11 Nimbus Lakshmi Inc Inibidores de tyk2 e usos dos mesmos

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Structural basis of potent Zika-dengue virus antibody cross-neutralization;Giovanna Barba-Spaeth,et al.;《Nature》;20160623;第536卷(第7614期);摘要、第48-52页 *
Structures of the Zika Virus Envelope Protein and Its Complex with a Flavivirus Broadly Protective Antibody;Lianpan Dai,et al.;《Cell Host & Microbe》;20160502;第19卷(第5期);第696-704页 *
孕妇感染寨卡病毒与新生儿小头畸形症有关;严延生等;《中国人兽共患病学报》;20160215(第02期);第107页右栏 *

Also Published As

Publication number Publication date
MY190553A (en) 2022-04-27
MX2019000526A (es) 2019-05-02
SI3484915T1 (sl) 2024-02-29
EP3484915A1 (en) 2019-05-22
IL262710A (en) 2018-12-31
SG11201809879WA (en) 2018-12-28
WO2018010789A1 (en) 2018-01-18
CL2021002994A1 (es) 2022-09-09
CN109563157A (zh) 2019-04-02
HRP20231196T1 (hr) 2024-01-19
HUE063272T2 (hu) 2024-01-28
ZA201807467B (en) 2024-04-24
EP3484915B1 (en) 2023-08-16
AU2017297757A1 (en) 2018-11-22
DOP2019000006A (es) 2019-03-31
FI3484915T3 (fi) 2023-11-15
AU2017297757B2 (en) 2024-06-13
PH12018502348A1 (en) 2019-03-25
IL262710B2 (en) 2024-05-01
JP2019533425A (ja) 2019-11-21
JP2023062036A (ja) 2023-05-02
ES2959883T3 (es) 2024-02-28
JP7252888B2 (ja) 2023-04-05
EA201990243A1 (ru) 2019-07-31
US11117954B2 (en) 2021-09-14
ECSP19009170A (es) 2019-02-28
PE20190398A1 (es) 2019-03-13
CR20190066A (es) 2019-09-10
KR20190027382A (ko) 2019-03-14
KR102595764B1 (ko) 2023-10-30
IL262710B1 (en) 2024-01-01
DOP2021000026A (es) 2021-07-30
WO2018011283A1 (en) 2018-01-18
US20210363227A1 (en) 2021-11-25
CO2019001111A2 (es) 2019-08-20
LT3484915T (lt) 2023-10-10
PL3484915T3 (pl) 2024-03-25
US11912757B2 (en) 2024-02-27
CA3024374A1 (en) 2018-01-18
UA126381C2 (uk) 2022-09-28
CN116199775A (zh) 2023-06-02
US20190256582A1 (en) 2019-08-22
DK3484915T5 (da) 2024-09-02
CL2019000067A1 (es) 2019-07-26
US20210355198A1 (en) 2021-11-18
DK3484915T3 (da) 2023-10-09
BR112018074456A2 (pt) 2019-03-19
EP4342911A1 (en) 2024-03-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109563157B (zh) 特异性地结合至寨卡病毒表位的新型抗体和其用途
CN111592594B (zh) 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用
KR20200042499A (ko) 지카 바이러스 에피토프에 특이적으로 결합하는 다중특이적 항체 및 이의 용도
CN115380046B (zh) SARS-CoV-2中和抗体及其制备和应用
CN107880121B (zh) 中和rsv、mpv和pvm的抗体和其应用
CN106795223A (zh) 针对Fcγ受体IIB及Fcε受体的新型抗体
KR20140012131A (ko) 인플루엔자의 치료 및 진단을 위한 조성물 및 방법
CN114989292B (zh) 一种抗SARS-CoV-2全人源化单克隆抗体及应用
EA043940B1 (ru) Мультиспецифические антитела, специфичные в отношении эпитопов вируса зика, и их применение
EA046175B1 (ru) Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом вируса зика, их получение и применения
BR122024006890A2 (pt) Anticorpo isolado, ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, molécula de ácido nucleico, vetor, célula, composição farmacêutica, uso dos mesmos, kit de partes, bem como ensaio de bloqueio de ligação para diagóstico in vitro de infecção por zika vírus

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40006233

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant