KR20190027382A - 지카 바이러스 에피토프에 특이적으로 결합하는 신규 항체 및 그의 용도 - Google Patents

지카 바이러스 에피토프에 특이적으로 결합하는 신규 항체 및 그의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 ZIKV의 감염의 강력하게 중화하는 항체, 및 그의 항원 결합 단편과 관련된다. 본 발명은 또한 상기 항체 및 항원 결합 단편이 결합하는 항원 부위는 물론, 이러한 항체 및 항체 단편을 암호화 하는 핵산 및 생산하는 불멸화된 B 세포와도 관련된다. 더불어, 본 발명은 ZIKV 감염의 스크리닝은 물론 진단, 방지 및 치료에서의 본 발명의 항체 및 항체 단편의 용도와도 관련된다.

Description

지카 바이러스 에피토프에 특이적으로 결합하는 신규 항체 및 그의 용도
본 발명은 지카 바이러스 (Zika virus, ZIKV) 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편에 관한 것이다. 이러한 항체는 (i) 지카 바이러스 (ZIKV)의 감염을 강력하게 중화 시키거나 (ii) NS1 ZIKV에 대한 것이며 진단용으로 사용할 수 있다. 본 발명은 항체 및 항원 결합 단편이 결합하는 항원 부위뿐만 아니라 항체 및 이러한 항체 및 항체 단편을 생성하는 불멸화 B 세포를 코딩하는 핵산에 관한 것이다. 더불어, 본 발명은 스크리닝 방법 및 ZIKV 감염의 진단, 예방 및 치료에 있어서의 본 발명의 항체 및 항체 단편의 용도에 관한 것이다.
모기-태생 플라비바이러스(flavivirus)인, 지카 바이러스 (ZIKV)는 공중 보건 응급 상황이다. ZIKV는 1947 년에 우간다의 지카(Zika) 숲에서 마카크 원숭이 (macaque) 에게서 처음으로 단리되었고 (G. W. A. Dick, S. F. Kitchen, A. J. Haddow, Zika virus. I. Isolations and serological specificity. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 46, 509-520 (1952)) 그리고 최초의 인간 감염은 나이지리아에서1954 년 보고되었다 F. N. Macnamara, Zika virus: a report on three cases of human infection during an epidemic of jaundice in Nigeria. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 48, 139-145 (1954)). 그 후 ZIKV 감염은 아프리카 및 동남 아시아에서 산발적으로 보고되었으나 (D. Musso, Van Mai Cao-Lormeau, D. J. Gubler, Zika virus: following the path of dengue and chikungunya? The Lancet. 386, 243-244 (2015)), 2007 년에는 미크로네시아에서 (M. R. Duffy et al., Zika virus outbreak on Yap Island, Federated States of Micronesia. N Engl J Med. 360, 2536-2543 (2009)) 2013-14 년 프랑스령 폴리네시아에서, 이 바이러스가 오세아니아 대륙의 다른 국가로 퍼져 나가는 것과 함께 전염병이 보고되었다 (V.-M. Cao-Lormeau, D. Musso, Emerging arboviruses in the Pacific. Lancet. 384, 1571-1572 (2014); D. Musso, E. J. Nilles, V.-M. Cao-Lormeau, Rapid spread of emerging Zika virus in the Pacific area. Clin. Microbiol. Infect. 20, O595-6 (2014)). 2015 년의 브라질 도입 이후, ZIKV는 급속도로 확산되었으며 2016 년 2월 세계 보건기구 (WHO)는 국제 보건 문제의 공중 보건 긴급 사태를 선언하였다 (L. R. Baden, L. R. Petersen, D. J. Jamieson, A. M. Powers, M. A. Honein, Zika Virus. N. Engl. J. Med. 374, 1552-1563 (2016); A. S. Fauci, D. M. Morens, Zika Virus in the Americas - Yet Another Arbovirus Threat. N Engl J Med, 160113142101009 (2016); D. L. Heymann et al., Zika virus and microcephaly: why is this situation a PHEIC? Lancet. 387, 719-721 (2016)). ZIKV 감염의 주요 경로는 Aedes 모기에 물리는 것이지만, 바이러스는 또한 성적으로 (D. Musso et al., Potential sexual transmission of Zika virus. Emerg Infect Dis. 21, 359-361 (2015)) 및 수직 전염될 수 있다 (J. Mlakar et al., Zika Virus Associated with Microcephaly. N Engl J Med. 374, 951-958 (2016)). 대부분의 ZIKV 감염은 증상이 없거나 가벼운 증상만을 야기하지만, ZIKV 감염은 성인에서 길랑-바레 증후군(Guillain-Barr
Figure pct00001
Syndrome)과 같은 신경계 합병증 (V.-M. Cao-Lormeau et al., Guillain-Barr
Figure pct00002
Syndrome outbreak associated with Zika virus infection in French Polynesia: a case-control study. Lancet. 0 (2016), doi:10.1016/S0140-6736(16)00562-6) 및 발달중인 태아의 소두증을 포함한 선천성 기형아 출산을 (G. Calvet, R. S. Aguiar, A. Melo, S. A. Sampaio, Detection and sequencing of Zika virus from amniotic fluid of fetuses with microcephaly in Brazil: a case study. Lancet Infect Dis (2016), doi:10.1016/s1473-3099(16)00095-5; J. Mlakar et al., Zika Virus Associated with Microcephaly. N Engl J Med. 374, 951-958 (2016); E. J. Rubin, M. F. Greene, L. R. Baden, Zika Virus and Microcephaly. N Engl J Med (2016), doi:10.1056/NEJMe1601862), 인간의 신경 전구 세포를 감염시키는 능력을 통해 유발할 수 있다는 증거가 있다 (H. Tang et al., Zika Virus Infects Human Cortical Neural Progenitors and Attenuates Their Growth. Stem Cell, 1-5 (2016)).
ZIKV는 또한 웨스트 나일 바이러스, 뎅기 바이러스, 진드기 매개 뇌염 바이러스, 황열 바이러스 및 뇌염을 야기할 수 있는 몇 가지 다른 바이러스를 포함하는 플라비바이러스 속에 속한다. 플라비바이러스는 이십면체 및 구형 기하학 구조로 둘러 쌓여 있다. 직경은 약 50nm이다. 게놈은 선형 포지티브-센스 RNA 및 비분할, 길이 약 10-11kb 이다. 플라비바이러스의 게놈은 3 개의 구조 단백질 (Capsid, prM 및 Envelope)과 8 개의 비 구조 단백질 (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B, NS5 및 NS5B)을 암호화한다.
플라비바이러스 외피 (flavivirus envelope, E) 단백질은 융합을 매개하고 중화 항체의 주요 표적이지만, 비-구조(non-structural) 단백질 1 (NS1)은 감염된 세포에 의해 분비되고 면역 회피 및 병인에 관여한다 (D. A. Muller, P. R. Young, The flavivirus NS1 단백질: molecular and structural biology, immunology, role in pathogenesis and application as a diagnostic biomarker. Antiviral Res. 98, 192-208 (2013)). 두 가지 최근의 구조 연구는 ZIKV의 E 단백질과 다른 플라비바이러스, 예컨데 뎅기열 바이러스 (dengue virus, DENV), 황열 바이러스 (yellow fever virus, YFV) 및 웨스트 나일 바이러스 (West Nile virus, WNV) 와의 구조적 유사성을 보여 주었지만, 그러나 또한 ZIKV 신경 신경증과 연관될 수 있다는 독특한 특성을 밝혔다 (L. Dai et al., Structures of the Zika Virus Envelope Protein and Its Complex with a Flavivirus Broadly Protective Antibody. Cell Host Microbe (2016), doi:10.1016/j.chom.2016.04.013; D. Sirohi et al., The 3.8 Å resolution cryo-EM structure of Zika virus. Science, aaf5316 (2016)). 유사하게, ZIKV NS1의 구조 분석은 상이한 정전기적 특성에도 불구하고 다른 플라비바이러스의 NS1과 보존된 특징을 밝혔다 (J. Kim et al., Zika virus NS1 structure reveals diversity of electrostatic surfaces among flaviviruses, 1-6 (2016)).
특정 플라비바이러스의 특징적인 현상은 이종 바이러스에 의한 이전 감염에 의해 유발 된 교차 반응 항체의 질병 증강 활성이다. 4 가지 혈청형이 알려진 뎅기열 바이러스 (Dengue virus, DENV)의 경우, 일차 감염이 동일한 혈청형의 재감염으로부터 보호하지만, 다른 혈청형을 가진 재감염시 중증 질환의 발병 위험 인자를 대표한다는 역학적 증거가 있다 (S. B. Halstead, Dengue Antibody-Dependent Enhancement: Knowns and Unknowns. Microbiol Spectr. 2, 249-271 (2014)). 악화된 질병은 들어오는 바이러스를 중화시키지 않고 대신에 Fc 수용체-발현 (FcR +) 세포에 의한 포획을 강화시키는 E 및 prM-특이적 항체에 의해 유발되어, 바이러스 복제 및 교차 반응 기억 T 세포의 활성화를 유도한다. 그 결과로 발생하는 사이토 카인 폭풍은 뎅기 출혈열/뎅기열 쇼크 증후군으로 알려진 가장 심각한 형태의 질병의 기초로 생각된다 (S. B. Halstead, Neutralization and antibody-dependent enhancement of dengue viruses. Adv Virus Res. 60, 421-467 (2003); G. Screaton, J. Mongkolsapaya, S. Yacoub, C. Roberts, New insights into the immunopathology and control of dengue virus infection. Nat Rev Immunol. 15, 745-759 (2015). 심한 뎅기열에서 항체의 역할은 유아에서 모체 항체가 줄어들면 심각한 뎅기열의 발생 위험이 높아진다는 연구 결과에 의해 뒷받침된다 (S. B. Halstead, Neutralization and antibody-dependent enhancement of dengue viruses. Adv Virus Res. 60, 421-467 (2003); S. B. Halstead et al., Dengue hemorrhagic fever in infants: research opportunities ignored. Emerging Infect Dis. 8, 1474-1479 (2002); T. H. Nguyen et al., Dengue hemorrhagic fever in infants: a study of clinical and cytokine profiles. J Infect Dis. 189, 221-232 (2004); A. L. Rothman, Dengue: defining protective versus pathologic immunity. J Clin Invest. 113, 946-951 (2004)).
최근 DENV 외피 단백질에 반응하는 대부분의 항체가 ZIKV와 결합하지만, 주요 선형 융합-루프 에피토프 (fusion-loop epitope, FLE)를 인식하는 항체는 ZIKV를 중화하지 않고 대신 ZIKV 감염의 항체-의존성 증진 (antibody-dependent enhancement, ADE)을 촉진한다는 것이 밝혀졌다 (Dejnirattisai W, Supasa P, Wongwiwat W, Rouvinski A, Barba-Spaeth G, Duangchinda T, Sakuntabhai A, Cao-Lormeau VM, Malasit P, Rey FA, Mongkolsapaya J, Screaton GR: Dengue virus sero-cross-reactivity drives antibody-dependent enhancement of infection with zika virus. Nat Immunol. 2016 Jun 23. doi: 10.1038/ni.3515. [Epub ahead of print]).
게다가, WHO에 따르면, 최근 소아기 감염 및 지카 바이러스 감염과 관련된 잠재적 인 소두증 및 기타 신경계 질환의 증가로 지카 바이러스 감염을 탐지하는 실험실 검사에 대한 수요가 증가하게 되었다. 이러한 내용에서, ZIKV 감염과 다른 플라비바이러스의 감염을 구분하기 위해서는 항체의 높은 특이성이 필요하다. 그러나, 알려진 항-지카 항체는 전형적으로 다른 플라비바이러스에 대해 교차-반응성이어서, ZIKV 감염을 다른 플라비바이러스의 감염과 구별하는데 유용하지 않다.
상기를 고려하여, 본 발명의 목적은 ZIKV 에피토프에 특이적으로 결합하는 신규한 항체를 제공하는 것이다. 본 발명의 목적은 또한 강력한 중화 항-ZIKV 항체를 제공하는 것이다. 이러한 항체는 바람직하게는 지카 바이러스 감염의 항체 의존성 증진 (ADE)에 기여하지 않는다. 본 발명의 목적은 또한 ZIKV 감염의 진단 및 검사에 유용한 고도의 특이성 항-ZIKV 항체 및 이러한 항체를 사용하는 진단 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 근본적인 목적은 청구된 대상에 의해 해결된다.
본 발명이 하기에 상세히 기술되지만, 본 발명은 다양할 수 있으므로, 본 발명은 본 명세서에 기술된 특정 방법, 프로토콜 및 시약에 한정되지 않는다는 것이 이해되어야 한다. 또한 본 명세서에 사용된 용어는 첨부된 청구 범위에 의해서만 제한되는 본 발명의 범위를 제한하려는 의도가 아니라는 것이 이해되어야 한다. 다르게 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.
하기에서, 본 발명의 구성 요소에 대하여 설명한다. 이들 구성 요소는 특정 실시예와 함께 열거되지만, 추가 실시예를 생성하기 위해 임의의 방식으로 및 임의의 수로 조합될 수 있음이 이해되어야 한다. 다양하게 기술된 예시들 및 바람직한 실시예들은 본 발명을 명시적으로 설명된 실시예들로만 한정하도록 해석되어서는 안된다. 본 설명은 명시적으로 기술된 실시예를 임의의 수의 개시된 및/또는 바람직한 요소와 조합하는 실시예를 뒷받침하고 아우르는 것으로 이해되어야 한다. 뿐만 아니라, 본 명세서에서 기술된 모든 구성 요소의 임의의 순열 및 조합은 내용상 달리 나타내지 않는 한 본 명세서의 설명에 의해 개시되는 것으로 고려되어야 한다.
본 명세서 및 후속하는 청구 범위 전체에서, 내용상 달리 요구하지 않는 한, 용어 "포함하다", 및 예컨데 "포함한다" 및 "포함하는"과 같은 변형은 명시된 구성, 정수 또는 단계의 포함을 암시하지만, 다른 명시되지 않은 구성, 정수 또는 단계의 제외는 암시하지 않는다. 용어 "구성하다"는 용어 "포함하다"의 특정 실시 양태이며, 임의의 다른 명시되지 않은 구성, 정수 또는 단계는 제외된다. 본 발명의 내용에서, "포함하다"라는 용어는 "~로 구성된다"라는 용어를 아우른다. 용어 "포함하는"은 따라서 "함유하는" 뿐만 아니라 "구성하는"도 아우르고, 일례로 X를 "포함하는" 조성물은 배타적으로 X로 구성되거나 또는 일례로 X + Y와 같은 다른 것을 포함할 수 있는 조성물을 포함한다.
본 발명을 설명하는 내용에서 (특히 청구항의 내용에서) 사용된 용어 "한(또는 어느, a)"및 "한(an)"및 "그(또는 본, 상기, the)"및 유사한 언급은 본 명세서에서 달리 지시되거나 또는 내용에 분명하게 모순되지 않는 한 단수 및 복수를 모두 포함하는 것으로 해석되어야한다. 여기에서 값 범위의 열거는 단지 범위 내에 속하는 각각의 개별 값을 개별적으로 지칭하는 단축된 방법으로 사용되기 위한 것이다. 본 명세서에서 별도로 지시하지 않는 한, 각각의 개별 값은 본 명세서에서 개별적으로 인용된 것처럼 명세서에 통합된다. 명세서에서 어떠한 언어도 본 발명의 실시에 필수적인 청구되지 않은 요소를 나타내는 것으로 해석되어서는 안된다.
단어 "실질적으로"는 "완전히"를 제외하지 않고, 일례로, Y가 "실질적으로 배제된" 조성물은 Y를 완전히 포함하지 않을 수 있다. 필요하다면, 단어 "실질적으로"는 본 발명의 정의로부터 생략될 수 있다.
수치 x와 관련한 용어 "약"은 x ± 10%를 의미한다.
용어 "질병"은 본 명세서에 사용된 바처럼 용어 "장애" 및 "상태"(의학적 상태에서와 같이)와 일반적으로 동의적으로, 및 상호 교환 가능하게 사용되고, 모두 인간 또는 동물 신체 또는 그의 부분 중 하나의 정상적인 기능을 손상시키는 비정상 상태를 반영하고, 증상은 식별되는 징후 및 증상에 의해 전형적으로 나타나며, 인간 또는 동물의 수명이나 삶의 질의 저하를 야기한다.
본 명세서에 사용된 바처럼, 대상 또는 환자의 "치료"에 대한 언급은 예방(prevention), 방지(prophylaxis), 감쇠(attenuation), 개선(amelioration) 및 요법(therapy)를 포함하는 것으로 의도된다. 용어 "대상" 또는 "환자"는 인간을 포함한 모든 포유 동물을 의미하는 것으로 본 명세서에서 상호 교환적으로 사용된다. 대상의 예로는 인간, 암소, 개, 고양이, 말, 염소(goat), 양, 돼지 및 토끼를 포함한다. 일 구현예에서, 환자는 인간이다.
본 명세서에 사용된 바처럼, 용어 "항원 결합 단편", "단편" 및 "항체 단편"은 항체의 항원 결합 활성을 보유하는 본 발명의 항체의 임의의 단편을 지칭하기 위해 상호 교환적으로 사용된다. 항체 단편의 예로는 단일 사슬 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 또는 scFv가 포함되나, 이에 한정되는 것은 아니다. 더욱이, 용어 "항체"는 본 명세서에 사용된 바처럼 항체 및 그의 항원 결합 단편을 모두 포함한다.
본 명세서에 사용된 바처럼, 용어 "항체"는, 제한됨이 없이, 전체 항체, 항체 단편, 구체적으로 항원 결합 단편, 인간 항체, 키메릭 항체, 인간화 항체, 재조합 항체 및 유전자 조작 항체(변이체 또는 변이체 항체)를 포함하는 다양한 형태의 항체를 발명에 따른 특성이 유지되는 한 아우른다. 인간 항체 및 모노클로날 항체가 바람직하며 특히 인간 모노클로날 항체, 특히 재조합 인간 모노클로날 항체가 바람직하다.
인간 항체는 당해 기술 분야에 잘 알려져있다 (van Dijk, M. A., and van de Winkel, J. G., Curr. Opin. Chem. Biol. 5 (2001) 368-374). 인간 항체는 또한, 면역화시, 내인성 면역 글로불린 생산의 부재하에 완전한 레퍼토리(repertoire) 생산 또는 인간 항체의 선택을 할 수 있는 트랜스제닉 동물 (일례로 : 마우스)에서 생산될 수 있다. 이러한 생식선-돌연변이 마우스에서의 인간 생식선-면역글로불린 유전자 어레이의 전달은 항원 접종시 인간 항체의 생성을 초래할 것이다 (일례로, Jakobovits, A., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 2551-2555; Jakobovits, A., et al., Nature 362 (1993) 255-258; Bruggemann, M., et al., Year Immunol. 7 (1993) 3340 참조). 인간 항체는 또한 파지 디스플레이 라이브러리에서 생산될 수 있다 (Hoogenboom, H. R., and Winter, G., J. Mol. Biol. 227 (1992) 381-388; Marks, J. D., et al., J. Mol. Biol. 222 (1991) 581-597). 콜 등(Cole et al.) 및 보에르너 등(Boerner et al.)의 기술은 또한 인간 단일클론 항체의 제조에 이용 가능하다 (Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); and Boerner, P., et al., J. Immunol. 147 (1991) 86-95). 바람직하게는, 인간 단일클론 항체는 Traggiai E, Becker S, Subbarao K, Kolesnikova L, Uematsu Y, Gismondo MR, Murphy BR, Rappuoli R, Lanzavecchia A. (2004): An efficient method to make human monoclonal antibodies from memory B cells: potent neutralization of SARS coronavirus. Nat Med. 10(8):871-5에 기술된 바와 같이 개선된 EBV-B 세포 불멸화를 사용하여 제조된다. 용어 "인간 항체"는 본 명세서에 사용된 바처럼 또한 본 명세서에 기술된 본 발명에 따른 특성을 생성하기 위해, 예컨데 가변 영역에서, 변형된 그러한 항체를 포함한다. 본 명세서에 사용된 바처럼, 용어 "가변 영역"(경쇄의 가변 영역 (VL), 중쇄의 가변 영역 (VH))은 항체의 항원에의 결합에 직접적으로 관여하는 한 쌍의 경쇄 및 중쇄를 각각 나타낸다.
본 발명의 항체는 임의의 동종형 (isotype) (일례로, IgA, IgG, IgM, 즉 α, γ 또는 μ 중쇄) 일 수 있지만, 바람직하게는 IgG 일 것이다. IgG 동종형 내에서, 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 서브 클래스일 수 있으며, 이에 따라 IgG1이 바람직하다. 본 발명의 항체는 κ 또는 λ경쇄를 가질 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 정제된 항체, 단일 사슬 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 또는 scFv이다.
본 발명의 항체는 따라서 바람직하게는 인간 항체, 모노클로날 항체, 인간 모노클로날 항체, 재조합 항체 또는 정제 항체일 수 있다. 본 발명은 또한 본 발명의 항체의 단편, 특히 항체의 항원-결합 활성을 보유하는 단편을 제공한다. 그러한 단편은, 이에 한정되지 않지만, 단일 사슬 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 또는 scFv를 포함한다. 비록 청구 범위를 포함하는 본 명세서는, 곳에 따라서, 항체의 항원 결합 단편(들), 항체의 단편(들), 변형체(들) 및/또는 유도체(들)를 명시적으로 언급할 수 있지만, 용어 "항체" 또는 "본 발명의 항체"는 모든 범주의 항체, 다시 말해, 항원 결합 단편(들), 항체의 단편(들), 변형체(들) 및 유도체(들)를 포함함이 이해된다.
본 발명의 항체의 단편은 예컨데 펩신 또는 파파인과 같은 효소로의 소화, 및/또는 화학적 환원에 의한 디설파이드 결합의 절단을 포함하는 방법에 의해 항체로부터 수득될 수 있다. 대안적으로, 항체의 단편은 중쇄 또는 경쇄의 서열의 일부의 클로닝 및 발현에 의해 수득될 수 있다. 항체 "단편"은 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편을 포함한다. 본 발명은 또한 본 발명의 항체의 중쇄 및 경쇄로부터 유래된 단일 사슬 Fv 단편 (scFv)을 아우른다. 예를 들면, 본 발명은 본 발명의 항체로부터의 CDR을 포함하는 scFv를 포함한다. 또한, 중쇄 및 경쇄 단량체 및 이량체, 단일 도메인 중쇄 항체, 단일 도메인 경쇄 항체, 및 단일 사슬 항체, 일례로, 중쇄 및 경쇄 가변 도메인이 펩티드 링커에 의해 결합된 단일 사슬 Fv가 포함된다 .
본 발명의 항체 단편은 일가 또는 다가의 상호 작용을 부여할 수 있고 상기한 바와 같은 다양한 구조에 포함될 수있다. 일례를 들면, scFv 분자는 삼가 "트리아바디" 또는 사가 "테트라바디"를 생성하기 위해 합성될 수있다. scFv 분자는 이가 미니 바디를 초래하는 Fc 영역의 도메인을 포함할 수 있다. 더불어, 본 발명의 서열은 본 발명의 서열이 본 발명의 에피토프를 표적으로하고 분자의 다른 영역이 다른 표적에 결합하는 다중 특이적 분자의 성분 일 수있다. 예시적인 분자는, 이에 한정되지 않지만, 이중 특이적 Fab2, 삼중 특이적 Fab3, 이중 특이적 scFv, 및 디아바디를 포함한다 (Holliger and Hudson, 2005, Nature Biotechnology 9 : 1126-1136).
본 발명에 따른 항체는 정제된 형태로 제공될 수 있다. 전형적으로, 항체는 다른 폴리펩타이드가 실질적으로 없는, 일례로, 여기서 조성물의 90% (중량) 미만, 통상적으로 60% 미만 및 보다 통상적으로 50% 미만이 다른 폴리펩타이드로 구성되는 조성물에 존재할 것이다 .
본 발명에 따른 항체는 인간에서 및/또는 비-인간 (또는 이종(heterologous)) 숙주에서, 일례로, 마우스에서 면역 원성일 수 있다. 예를 들면, 항체는 비-인간 숙주에서는 면역 원성이지만, 인간 숙주에서는 아닌 항원 결정기(idiotope)를 가질 수 있다. 인간 사용을 위한 본 발명의 항체는 예컨데 마우스, 염소, 토끼, 래트(rat), 비-영장류 포유 동물 등으로부터 숙주로부터 쉽게 단리되지 못하는 것 및 일반적으로 인간화 또는 이종 마우스(xeno-mice)에 의해 수득될 수 없는 것을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바처럼, "중화 항체"는 숙주에서 감염을 개시 및/또는 영속시키는 병원체의 능력을 중화, 즉 예방, 억제, 감소, 저해 또는 방해할 수 있는 것이다. 용어 "중화 항체" 및 "중화하는 항체" 또는 "중화하는 항체들"은 본 명세서에서 상호 교환 적으로 사용된다. 이들 항체는 단독, 또는 조합으로, 본 명세서에 기술된 것처럼 적당한 제형에 따른 방지제 또는 치료제로서, 활발한 백신접종과 연관되어, 진단 도구로서, 또는 생산 도구로서 사용될 수 있다.
용량(dose)은 종종 체중과 관련하여 표현된다. 따라서, [g, mg, 또는 기타 단위]/kg (또는 g, mg 등)으로 표시되는 용량은, 비록 용어 "체중"이 명시적으로 언급되어 있지 않은 경우라도, 통상적으로 "체중 kg (또는 g, mg 등) 당 " [g, mg, 또는 다른 단위]를 지칭한다.
용어 "특이적으로 결합하는" 및 유사한 언급은 비특이적 부착을 아우르지는 않는다.
용어 "백신"은 본 명세서에 사용된 바처럼 전형적으로 최소한 하나의 항원, 바람직하게는 면역원을 제공하는 예방적 또는 치료적 물질로 이해된다. 항원 또는 면역원은 백신 접종에 적합한 임의의 물질로부터 유래될 수 있다. 예를 들면, 항원 또는 면역원은, 예컨데, 박테리아 또는 바이러스 입자 등과 같은 병원균으로부터, 또는 종양 또는 암 조직으로부터 유래될 수 있다. 항원 또는 면역원은 신체의 적응 면역계를 자극하여 적응 면역 반응을 제공한다. 구체적으로, "항원" 또는 "면역원"은 전형적으로 면역계에 의해, 바람직하게는 적응 면역계에 의해 인식될 수 있고, 일례로 적응 면역 반응의 일부로서 항체 및/또는 항원 특이적 T 세포의 형성에 의해 항원-특이적 면역 반응을 유발할 수 있는 물질을 지칭한다. 전형적으로, 항원은 MHC에 의해 T 세포에 제시될 수 있는 펩타이드 또는 단백질일 수 있거나 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바처럼, "서열 변종"은 (또한 "변종"으로 지칭됨) 기준 서열 내 임의의 변경을 지칭하고, 그로써 기준 서열은 "서열 및 서열목록 번호의 표" (서열 리스팅)에 리스트된 임의의 서열, 즉 서열목록 번호: 1 내지 서열목록 번호: 407이다. 따라서, 용어 "서열 변종"은 뉴클레오티드 서열 변종 및 아미노산 서열 변종을 포함한다. 아주 흥미롭게, 본 명세서에서 지칭되는 서열 변종은 특정 기능적 서열 변종, 즉, 예를 들면, 항체의 생물학적 기능을 유지하는 서열 변종이다. 본 발명의 내용에서 이러한 유지된 생물학적 기능은 바람직하게는 ZIKV 감염의 중화, ZIKV E 단백질에의 항체의 결합 및/또는 ZIKV NS1 단백질에의 항체의 결합이다. 바람직한 서열 변종은 따라서 기준 서열에 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 기능적 서열 변종이다. 문구 "최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 이의 기능적 서열 변종"은, 본 명세서에 사용된 바처럼, (i) 서열 변종이 본 명세서에서 기술된 것처럼 기능적이고 (ii) % 서열 일치성이 높을 수록, 더 바람직한 서열 변종임을 의미한다. 다시 말해서, 문구 "최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 이의 기능적 서열 변종"은, 구체적으로 기능적 서열 변종은 각자의 기준 서열에 최소한 70% 서열 일치성, 바람직하게는 최소한 75% 서열 일치성, 바람직하게는 최소한 80% 서열 일치성, 더 바람직하게는 최소한 85% 서열 일치성, 더 바람직하게는 최소한 88% 서열 일치성, 보다 더 바람직하게는 최소한 90% 서열 일치성, 보다 더 바람직하게는 최소한 92% 서열 일치성, 여전히 더 바람직하게는 최소한 95% 서열 일치성, 여전히 더 바람직하게는 최소한 96% 서열 일치성, 특히 바람직하게는 최소한 97% 서열 일치성, 특히 바람직하게는 최소한 98% 서열 일치성 및 가장 바람직하게는 최소한 99% 서열 일치성을 가지는 것을 의미한다.
용어 "서열 변종"은 구체적으로 기준 서열와 비교하여 돌연변이 및/또는 치환을 포함하는 이러한 변종을 포함한다. Fc 모이어티 서열의 예시적인 변종은, 이에 제한되지 않지만, 위치 CH2 4, CH2 5, 또는 모두에 L 내지 A 치환을 갖는 것을 포함한다.
서열 일치성은 통상적으로 기준 서열 (즉 본 출원에 언급된 서열)의 전체 길이에 관해 계산된다. 일치 백분율은, 본 명세서에 참조된 것처럼, 예를 들면, NCBI에 의해 특정되는 디폴트 파라미터를 사용하는 BLAST를 사용해, 결정될 수 있다 (미국 국립생물공학정보센터(National Center for Biotechnology Information); http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) [Blosum 62 matrix; gap open penalty=11 and gap extension penalty=1].
본 명세서에 사용된 바처럼, "뉴클레오티드 서열 변종"은 기준 서열 내 하나 이상의 뉴클레오티드가 삭제, 또는 치환되거나, 또는 하나 이상의 뉴클레오티드가 기준 뉴클레오티드 서열의 서열 내로 삽입된 변경된 서열을 가진다. 뉴클레오티드는 본 명세서에서 표준 한-글자 지정(A, C, G, 또는 T)에 의해 지칭된다. 유전 부호의 변성(degeneracy)으로 인하여, "뉴클레오티드 서열 변종"은 각자의 기준 아미노산 서열 내 변화, 즉 "아미노산 서열 변종"을 초래하거나 초래하지 않을 수 있다. 바람직한 서열 변종은 아미노산 서열 변종을 초래하지 않는 (침묵 돌연변이), 이러한 뉴클레오티드 서열 변종이지만, 그러나 다른 비-침묵 돌연변이, 구체적으로, 기준 서열에 최소한 80%, 바람직하게는 최소한 90%, 더 바람직하게는 최소한 95% 서열 일치하는, 아미노산 서열을 초래하는 돌연변이 뉴클레오티드 서열도 또한 본 범주 내에 있다.
"아미노산 서열 변종"은 기준 서열 내 하나 이상의 아미노산이 삭제 또는 치환되거나, 또는 하나 이상의 아미노산이 기준 아미노산 서열의 서열 내로 삽입된 변경된 서열을 가진다. 변경의 결과로, 아미노산 서열 변종은 기준 서열에 최소한 80% 일치, 바람직하게는, 최소한 90% 일치, 더 바람직하게는 최소한 95% 일치, 가장 바람직하게는 최소한 99% 일치하는 아미노산 서열을 가진다. 최소한 90% 일치하는 변종 서열은 기준 서열의 100 아미노산 당 변경, 즉 삭제, 삽입 또는 치환의 임의의 조합을 10 개 이하 가진다.
비-보존적 아미노산 치환을 가지는 것이 가능하지만, 치환은 치환된 아미노산이 기준 서열 내 대응 아미노산과 유사한 구조적 또는 화학적 성질을 가지는 보존적 아미노산 치환인 것이 바람직하다. 예를 들자면, 보존적 아미노산 치환은 하나의 지방족 또는 소수성 아미노산, 일례로 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신의 또다른 것과의 치환; 하나의 하이드록실-함유 아미노산, 일례로 세린 및 트레오닌의 또다른 것과의 치환; 하나의 산성 잔기, 일례로 글루탐산의 또다른 것과의 치환; 하나의 아미드-함유 잔기, 일례로 아스파라긴 및 글루타민의 또다른 것과의 교체; 하나의 방향성 잔기, 일례로 페닐알라닌 및 타이로신의 또다른 것과의 교체; 하나의 염기성 잔기, 일례로 라이신, 아르기닌 및 히스티딘의 또다른 것과의 교체; 및 하나의 작은 아미노산, 일례로, 알라닌, 세린, 트레오닌, 메티오닌, 및 글라이신의 또다른 것과의 교체를 포함한다.
아미노산 서열 삽입은 하나의 잔기에서 수 백개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드의 길이에 이르는 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합은 물론, 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 정보제공 분자 또는 효소의 아미노산 서열의 N- 또는 C-말단에 융합을 포함한다.
중요하게, 서열 변종 내 변경은 각자의 기준 서열의 기능성, 현재 사례에서, 일례로, 동일한 에피토프에 결합 및/또는 ZIKV의 감염을 충분히 중화시키는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편의 서열의 기능성을 폐지하지 않는다. 어느 뉴클레오티드 및 아미노산 잔기가, 각자, 이러한 기능성을 폐지하지 않고 치환, 삽입 또는 삭제될 수 있는지를 결정하는 안내는 당해 분야에서 잘 알려진 컴퓨터 프로그램의 사용에 의해 발견된다.
본 명세서에 사용된 바처럼, 지정된 핵산, 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질에서 "유래된" 핵산 서열 또는 아미노산 서열은 핵산, 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질의 기원을 지칭한다. 바람직하게는, 특정 서열로부터 유래된 핵산 서열 또는 아미노산 서열은 그것이 유래된 서열 또는 그의 부분에 필수적으로 일치하는 아미노산 서열을 가지고, 그로써 "필수적으로 일치"는 상기에서 정의되 서열 변종을 포함한다. 바람직하게는, 특정 펩티드 또는 단백질로부터 유래된 핵산 서열 또는 아미노산 서열은 특정 펩티드 또는 단백질 내 대응 도메인로부터 유래된다. 그것에 의해서, "대응"은 구체적으로 동일한 기능성을 지칭한다. 예를 들면, "세포외 도메인"은 (또다른 단백질의) 또다른 "세포외 도메인"에 대응하고, 또는 "막관통 도메인"은 (또다른 단백질의) 또다른 "막관통 도메인"에 대응한다. 펩티드, 단백질 및 핵산의 "대응" 부분은 따라서 당해 분야의 통상의 기술자에게 쉽게 확인가능하다. 마찬가지로, 다른 서열에서 "유래된" 서열은 통상적으로 당해 분야의 통상의 기술자에게 서열 내 그의 기원을 가지는 것으로 쉽게 확인가능하다.
바람직하게는, 또다른 핵산, 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질로부터 유래된 핵산 서열 또는 아미노산 서열은 (이로부터 그것이 유래된) 개시(staring) 핵산, 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질 에 일치할 수 있다. 하지만, 또다른 핵산, 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질로부터 유래된 핵산 서열 또는 아미노산 서열은 또한 (이로부터 그것이 유래된) 개시 핵산, 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질에 관한 하나 이상의 돌연변이를 가질 수 있고, 구체적으로 또다른 핵산, 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질로부터 유래된 핵산 서열 또는 아미노산 서열은 상기 기술된 (이로부터 그것이 유래된) 개시 핵산, 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질처럼 기능적 서열 변종일 수 있다. 예를 들면, 펩티드/단백질에서 하나 이상의 아미노산 잔기는 다른 아미노산 잔기와 치환되거나 또는 하나 이상의 아미노산 잔기가 삽입 또는 삭제가 일어날 수 있다.
본 명세서에 사용된 바처럼, 용어 "돌연변이"는 기준 서열, 일례로 대응 유전자 서열에 비교하여 핵산 서열 내 및/또는 아미노산 서열 내 변화와 관련된다. 돌연변이는, 일례로 유전자 서열에 비교하여, 예를 들면, (자연적으로 발생하는) 신체 돌연변이, 자연발생 돌연변이, 유도된 돌연변이, 일례로 효소, 화학물질 또는 방사선에 의해 유도된, 또는 부위-특이적 돌연변이 (site-directed mutagenesis) (핵산 서열 내 및/또는 아미노산 서열 내 특이적 및 의도적 변화를 만드는 분자 생물학적 방법)에 의해 획득된 돌연변이일 수 있다. 따라서, 용어 "돌연변이" 또는 "돌연변이화"는, 일례로 핵산 서열 내 또는 아미노산 서열 내, 물리적으로 돌연변이를 만드는 것을 또한 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 돌연변이는 하나 이상의 뉴클레오티드 또는 아미노산의 치환, 삭제 및 삽입은 물론 수 개 연속적인 뉴클레오티드 또는 아미노산의 역전(inversion)을 포함한다. 아미노산 서열 내 돌연변이를 도달하기 위하여, 바람직하게는 돌연변이는 (재조합) 돌연변이된 폴리펩티드를 발현하기 위하여 상기 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열 내로 도입될 수 있다. 돌연변이는 일례로, 변경함에 의해, 일례로, 부위-특이적 돌연변이에 의해, 하나의 아미노산을 암호화하는 핵산 분자의 코돈에서 상이한 아미노산을 암호화하는 코돈을 초래, 또는 서열 변종을 합성함에 의해, 일례로, 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 분자의 뉴클레오티드 서열을 알아서 핵산 분자의 하나 이상의 뉴클레오티드의 돌연변이할 필요 없이 폴리펩티드의 변종을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자의 합성을 디자인함에 의해 도달할 수 있다.
본 명세서의 텍스트 전체에 걸쳐 여러 문헌이 인용된다. 본 명세서에 인용된 각 문서 (모든 특허, 특허 출원, 과학 출판물, 제조업체의 사양, 지침 등)는, 상기 또는 다음을 불문하고, 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함된다. 본 명세서의 어느 것도 본 발명이 선행 발명에 의해 그러한 개시보다 시기 적절할 자격이 없다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 안된다.
본 발명은 다양할 수 있기 때문에 본 명세서에 기술된 특정 방법, 프로토콜 및 시약에 제한되지 않는다는 것이 이해되어야 한다. 본 명세서에서 사용된 용어는 특정 실시 예를 설명하기 위한 것이며, 첨부된 청구 범위에 의해서만 제한되는 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아님이 이해되어야 한다. 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.
지카 바이러스 감염을 강력하게 중화시키는 항체
본 발명은, 다른 발견 중에서, 지카 바이러스 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체의 발견 및 단리에 기초한다. 이러한 항체는 (i) 지카 바이러스 외피 (envelope, E) 단백질 또는 ZIKV 사차 에피토프의 항원 부위로 향하면, 지카 바이러스를 중화하는데 매우 강력하거나 (ⅱ) 지카 바이러스 NS1 단백질로 향하면, 지카 바이러스 감염의 진단에 유용하다. 이러한 항체는 지카 바이러스를 중화시키기 위해 소량의 항체 만이 필요하기 때문에 바람직하다. 구체적으로, 현재 지카 바이러스 감염에 대한 예방/치료법은 없다. 본 발명에 따른 항체는 지카 바이러스 감염을 예방 및 치료 또는 감작하는데 매우 효과적이다. 게다가, 지카 바이러스에 대한 항체의 특이성으로 인해, 이들은 ADE를 유도하지 않고 오히려 ADE를 차단한다. 진단에서, 지카-특이적 항체는 지카 바이러스 감염을 다른 플라비바이러스, 예컨데 뎅기 바이러스 감염과 구별하는 중요한 도구를 제공한다.
첫번째 측면에서 본 발명은 지카 바이러스 에피토프에 특이적으로 결합하고 지카 바이러스 감염을 중화시키는, 단리된 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 다시 말해서, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 지카 바이러스의 바이러스 감염력을 감소시킨다.
실험실에서 바이러스 감염력 (또는 "중화")을 연구하고 정량화하기 위해 당해 분야의 기술자는 다양한 표준 "중화 어세이"를 안다. 중화 어세이를 위하여 동물 바이러스는 세포 및/또는 세포주에서 전형적으로 번식한다. 본 발명의 내용에서 중화 어세이가 바람직하고, 여기서 배양된 세포는 검사되는 항체의 존재 (또는 부존재) 하에 고정된 양의 지카 바이러스 (ZIKV)와 인큐베이트된다. 판독정보로 예를 들면, 유동 세포계측법 (flow cytometry)이 사용될 수 있다. 대안적으로, 또한 다른 판독 값, 예컨데 배양 상등액으로 분비된 ZIKV 비-구조 단백질 (예컨데 ZIKV NS1)의 양을 결정하는 것도 생각할 수 있다. 예를 들면, ZIKV 비구조 단백질 1 (NS1) 항원 포착 효소 결합 면역 흡착 측정법 (ELISA)-기반 조직 배양 감염 용량-50 (TCID50) 검사 (TCID50-ELISA)가 지카 바이러스를 적정하기 위한 표준 플라크 분석 - Li J, Hu D-M, Ding X-X, Chen Y, Pan Y-X, Qiu L-W, Che X-Y: 효소-결합 면역 측정법-format tissue culture infectious dose-50 test for titrating dengue virus. PLoS ONE 2011, 6:e22553에 기술된 유사한 방식의 대안으로 사용될 수 있다. 이러한 분석에서, 예를 들면 본 출원서에 기술된 바와 같은 ZIKV NS1-결합 항체가 유리하게 사용될 수 있다.
ZIKV 중화 어세이의 바람직한 구현예에서, 배양된 세포, 예를 들면 베로(Vero) 세포는, 검사되는 항체의 존재 (또는 부존재) 하에, 예를 들면 약 사 일 동안, 고정된 양의 ZIKV와 인큐베이트 된다. 인큐베이션 후에, 세포는 세척되고 부가 배양될 수 있다. 바이러스 감염력을 측정하기 위해, 유동 세포계측법을 사용할 수 있다. 이를 위해, 세포는, 일례로 2% 포름알데히드로 고정되고, 일례로 PBS (인산염 완충 식염수) 1% FCS (태아 송아지 혈청) 0.5% 사포닌으로 투과화하고, 일례로 마우스 항체 4G2로 염색될 수 있다. 세포는 그런 다음, 예컨데 알레사 플루오르(Alexa Fluor)488과 같은 염료에 결합된 염소 항-마우스 IgG와 배양되고 유동 세포계측법에 의해 분석될 수 있다. 대안적으로, 생존 세포는 예를 들면 WST-1 시약 (로슈)을 사용하여 유동 세포 계측에 의해 검출될 수있다. 이러한 중화 분석에 사용되는 바람직한 ZIKV 균주는 ZIKV H/PF/2013이다.
본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 높은 중화 효능을 가진다. 비-항체 대조군에 대비하여 지카 바이러스의 50% 중화를 위해 요구되는 항체의 농도(IC50)는, 예를 들면, 약 3 μg/ml 까지 또는 약 1 μg/ml 까지이다. 바람직하게는, ZIKV의 50% 중화를 위해 요구되는 본 발명의 항체의 농도 (IC50)는 약500 ng/ml 까지, 더 바람직하게는 ZIKV의 50% 중화를 위해 요구되는 본 발명의 항체의 농도 (IC50)는 약 250 ng/ml 까지, 보다 더 바람직하게는 ZIKV의 50% 중화를 위해 요구되는 본 발명의 항체의 농도 (IC50)는 약 150 ng/ml까지이다. 가장 바람직하게는, ZIKV의 50% 중화를 위해 요구되는 본 발명의 항체의 농도 (IC50)는 약100 ng/ml 또는 미만, 일례로 약 90 ng/ml 또는 미만, 약 80 ng/ml 또는 미만, 약 70 ng/ml 또는 미만, 약 60 ng/ml 또는 미만, 약 50 ng/ml 또는 미만, 약 45 ng/ml 또는 미만, 약 40 ng/ml 또는 미만, 약 35 ng/ml 또는 미만, 약 30 ng/ml 또는 미만, 약 25 ng/ml 또는 미만, 약 20 ng/ml 또는 미만 또는, 특히 바람직하게는, 약 15 ng/ml 또는 미만이다. 구체적으로, ZIKV의 50% 중화를 위해 요구되는 본 발명의 항체의 농도 (IC50)는 바람직하게는 약 50 ng/ml 또는 미만이다. 이는 항체의 오직 낮은 농도가 ZIKV의 50% 중화를 위해 요구된다는 것을 의미한다. ZIKV의 50% 중화를 위해 요구되는 본 발명의 항체의 농도 (IC50)는 당해 분야에 알려지거나, 또는 구체적으로, 상기 기술된 표준 어세이를 사용하여 측정될 수 있다.
일반적으로, 항체의 결합은, 당해의 기술자에 잘 알려진, 표준 ELISA (효소-결합 면역 측정법)의 사용에 의해 평가될 수 있다. 예시적인 표준 ELISA는 다음처럼 수행될 수 있다: ELISA 접시는, 항체에의 결합이 검사되는 단백질/복합체/입자 (예를 들면, 하기 개요된 DENV 결합을 위해, DENV E 단백질 및/또는 DENV VLP 이 사용된다)의 충분한 양으로 (일례로, 1 μg/ml), 일례로 PBS에서, 코팅될 수 있다 (일례로, 4℃에서 밤새). 접시는 그런 다음, 일례로 PBS 내 1% w/v 소 혈청 알부민 (BSA) 용액으로 차단되고, 검사되는 항체와 인큐베이션될 수 있다(일례로 약 1.5 시간동안 실온에서). 세척 후, 항체 결합은, 일례로 알카린 포스파타아제에 커플링된 염소-인간 IgG를 사용하여 밝혀질 수 있다. 접시는 그런 다음 세척될 수 있고, 요구되는 기질(일례로, p-NPP)이 추가될 수 있고 접시는, 일례로 405 nm에서 판독될 수 있다. 항체 결합의 상대적 친화성은 포화시 50% 최대 결합에 도달하기 위해 요구되는 mAb의 농도(EC50)를 측정함에 의해 결정될 수 있다. EC50 값은 변수 기울기가 있는 사-매개변수 비선형 회귀를 적용한 결합 곡선의 보간법(interpolation)에 의해 계산될 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 뎅기 바이러스-유사 입자 및/또는 뎅기 외피 단백질에 필수적으로 결합하지 않는다. 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 뎅기 바이러스-유사 입자 및/또는 네 개의 DENV 혈청형 DENV1, DENV2, DENV3 및 DENV4 중 임의의 뎅기 외피 단백질에 필수적으로 결합하지 않는다. 그렇게 함으로써 "필수적으로 결합하지 않는"은 항체, 또는 그의 항원 결합 단편에 대해, 뎅기 바이러스-유사 입자 (DENV VLP) 및/또는 뎅기 외피 단백질 (DENV E 단백질)에 대한 EC50-값이 표준 ELISA에서 102 ng/ml 까지, 바람직하게는 103 ng/ml 까지, 더 바람직하게는 5*103 ng/ml 까지, 보다 더 바람직하게는 8*103 ng/ml 까지, 및 가장 바람직하게는 104 ng/ml 까지에서는 결정되지 않는 것을 의미한다. 다시 말해서, 뎅기 바이러스-유사 입자 (DENV VLP) 및/또는 뎅기 외피 단백질 (DENV E 단백질)에 포화시 50% 최대 결합에 도달하기 위해 요구되는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편의 농도(EC50)는 표준 ELISA 에서 전형적으로 102 ng/ml 초과, 바람직하게는 103 ng/ml 초과, 더 바람직하게는 5*103 ng/ml 초과, 보다 더 바람직하게는 8*103 ng/ml 초과, 및 가장 바람직하게는 104 ng/ml 초과이다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 지카 바이러스 감염의 항체-의존성 증진(ADE)에 기여하지 않는다. 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 지카 바이러스 감염의 항체-의존성 증진 (ADE)을 차단한다.
ADE는, 예를 들면 배양된 세포 또는 세포주, 예컨데 K562 세포를 사용한 유동 세포계측법에 의해 평가될 수 있다. 예를 들면, 실험할 항체 및 ZIKV는 1시간 동안 37℃에서 혼합되고 5000 K562 세포/웰에 추가될 수 있다. 일례로 중화 분석에 대해 상기 상술된 것처럼, 사일 후에, 세포는 고정되고, 투과화되고, 및 m4G2로 염색될 수 있다. 중화 분석에 대해 상기 상술된 것처럼, 감염된 세포의 수는 유동 세포계측법에 의해 결정될 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 항체이다. 또한 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 단일클론 항체, 바람직하게는 인간 단일클론 항체인 것이 바람직하다. 뿐만 아니라, 또한 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 재조합 항체인 것이 바람직하다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, Fc 모이어티를 포함한다. 더 바람직하게는, Fc 모이어티는 인간 기원으로부터, 일례로 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 및/또는 IgG4로부터 유래하고, 그로써 인간 IgG1가 특히 바람직하다.
본 명세서에 사용된 바처럼, 용어 "Fc 모이어티"는 파파인 분할 부위 (일례로, 자연적 IgG 내 잔기 216, 중쇄 불변 영역의 첫 번째 잔기를 114가 되도록 함)의 바로 위쪽 힌지 영역 내에서 시작하여 면역글로불린 중쇄의 C-말단에서 끝나는 면역글로불린 중쇄의 부분으로부터 유래된 서열을 지칭한다. 그에 따라, Fc 모이어티는 완전 Fc 모이어티 또는 그의 부분 (일례로, 도메인) 일 수 있다. 완전 Fc 모이어티는 최소한 힌지 도메인, CH2 도메인, 및 CH3 도메인 (일례로, EU 아미노산 위치 216-446)을 포함한다. 추가적 라이신 잔기 (K)는 때때로 Fc 모이어티의 최외 C-말단에 존재하나, 그러나 종종 성숙 항체로부터 분할된다. Fc 모이어티 내의 각각의 아미노산 위치는 당해 분야에서 인정되는 EU 넘버링 시스템 카밧(Kabat)에 따라 넘버링되었고, 일례로, Kabat et al.에 의한, "Sequences of Proteins of Immunological Interest", U.S. Dept. Health and Human Services, 1983 and 1987에서 참조해라.
바람직하게는, 본 발명의 내용에서 Fc 모이어티는 최소한 하나의: 힌지 (일례로, 상부, 중부, 및/또는 하부 힌지 영역) 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인, 또는 그의 변종, 부분, 또는 단편을 포함한다. 바람직한 구현예에서, Fc 모이어티는 최소한 힌지 도메인, CH2 도메인 또는 CH3 도메인을 포함한다. 더 바람직하게는, Fc 모이어티는 전체 Fc 모이어티이다. Fc 모이어티는 또한 자연적으로-발생한 Fc 모이어티에 관한 하나 이상의 아미노산 삽입, 삭제, 또는 치환을 포함할 수 있다. 예를 들면, 최소한 하나의 힌지 도메인, CH2 도메인 또는 CH3 도메인 (또는 그의 부분)이 삭제될 수 있다. 예를 들면, Fc 모이어티는: (i) CH2 도메인 (또는 그의 부분)에 융합된 힌지 도메인 (또는 그의 부분), (ii) CH3 도메인 (또는 그의 부분)에 융합된 힌지 도메인 (또는 그의 부분), (iii) CH3 도메인 (또는 그의 부분)에 융합된 CH2 도메인 (또는 그의 부분), (iv) 힌지 도메인 (또는 그의 부분), (v) CH2 도메인 (또는 그의 부분), 또는 (vi) CH3 도메인 또는 그의 부분을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다.
Fc 모이어티는 변형될 수 있어 자연적으로 발생한 면역글로불린 분자의 전체 Fc 모이어티로부터의 아미노산 서열은 다양한 반면, 자연적으로-발생한 Fc 모이어티에 의해 부여된 최소한 하나의 선호되는 기능을 보유하는 것은 당해 분야의 통상의 기술자에 이해될 것이다. 이러한 기능은 Fc 수용체 (FcR) 결합, 항체 반감기 조정, ADCC 기능, 단백질 A 결합, 단백질 G 결합, 및 보체 결합을 포함한다. 이러한 기능에 중책인 및/또는 필수적인, 자연적으로 발생한 Fc 모이어티의 부분은 당해 분야의 기술자에게 잘 알려져 있다.
예를 들면, 보체 캐스케이드를 활성화하기 위해 C1q는, 항원성 타겟에 부착된, 최소한 두 개 분자의 IgG1 또는 한 개 분자의 IgM에 결합한다 (Ward, E. S., and Ghetie, V., Ther. Immunol. 2 (1995) 77-94). Burton, D. R.,은 아미노산 잔기 318에서 337을 포함하는 중쇄 영역이 보체 고정에 관여되는 것을 기술하였다 (Mol. Immunol. 22 (1985) 161-206). Duncan, A. R., 및 Winter, G.는 부위 특이적 돌연변이를 사용하여, Glu318, Lys320 및 Lys322이 C1q에 결합 부위를 형성하는 것을 보고하였다 (Nature 332 (1988) 738-740). C1q의 결합에서 Glu318, Lys320 및 Lys322 잔기의 역할은 이들 잔기를 함유하는 짧은 합성 펩티드의 보체 매개된 용해를 억제하는 능력에 의해 추인되었다.
예를 들면, FcR 결합은 (항체의) Fc 모이어와 Fc 수용체 (FcR)의 상호작용에 의해 매개될 수 있고, 이는 조혈 세포에서 특화된 세포 표면 수용체이다. Fc 수용체는 면역글로불린 상과(superfamily)에 속하고, 면역 복합체의 포식작용에 의한 항체-코팅된 병원체의 제거, 및 항체로 코팅된 적혈구 및 다양한 다른 세포 타겟(일례로 종양 세포)의, 항체 의존적 세포 매개 세포독성을 통한, 용해 양자 모두를 매개함을 보여주었다 (ADCC; Van de Winkel, J. G., and Anderson, C. L., J. Leukoc. Biol. 49 (1991) 511-524). FcR은 면역글로불린 클래스에 대한 그들의 특이성으로 정의되고; IgG 항체를 위한 Fc 수용체는 FcγR로, IgE를 위한 것은 FcεR로, IgA를 위한 것은 FcαR 등으로 지칭되고 신생아 Fc 수용체는 FcRn으로 지칭된다. Fc 수용체 결합은 예를 들면 Ravetch, J. V., and Kinet, J. P., Annu. Rev. Immunol. 9 (1991) 457-492; Capel, P. J., et al., Immunomethods 4 (1994) 25-34; deHaas, M., et al., J Lab. Clin. Med. 126 (1995) 330-341; and Gessner, J. E., et al., Ann. Hematol. 76 (1998) 231-248에 기술되어 있다.
자연적 IgG 항체 (FcγR)의 Fc 도메인에 의한 수용체의 교차-결합은 포식작용, 항체-의존적 세포성 세포독성, 및 염증 매개체의 방출은 물론, 면역 복합체 제거 및 항체 생산의 조절을 포함하는 광범위한 작동자 기능을 촉발한다. 그러므로, 수용체 (FcγR)의 교차-결합을 제공하는 Fc 모이어티가 바람직하다. 인간에서, 세 개 클래스의 FcγR이 특징 지어졌고, 이들은: (i) FcγRI (CD64), 이는 단량체 IgG에 높은 친화성으로 결합하고 그리고 대식세포, 단핵구, 호중구 및 호산구에서 발현된다; (ii) FcγRII (CD32), 이는 복합 IgG에 중간 내지 낮은 친화성으로 결합하고, 널리, 구체적으로 백혈구에서 발현되고, 항체-매개 면역에서 핵심 플레이어가 되는 것으로 알려져 있고, 이는 FcγRIIA, FcγRIIB 및 FcγRIIC로 나누어질 수 있고, 이는 면역 시스템 내에서 상이한 기능을 수행하고, 그러나 유사 낮은 친화성으로 IgG-Fc에 결합하고, 이들 수용체의 엑토도메인(ectodomain)은 대단히 동종이다; 및 (iii) FcγRIII (CD16), 이는 IgG에 중간 내지 낮은 친화성으로 결합하고 두 개 형태로 실재한다: NK 세포, 대식세포, 호산구 및 몇몇 단핵구 및 T 세포 및 매개 ADCC에서 발견되는 FcγRIIIA 및 FcγRIIIB, 이는 호중구에서 높게 발현된다. FcγRIIA는 사멸에 관여하는 많은 세포(일례로 대식세포, 단핵구, 호중구)에서 발견되고 사멸 공정을 활성화할 수 있는 것처럼 여겨진다. FcγRIIB는 억제 공정에서 중요한 역할을 하는 것처럼 여겨지고 B-세포, 대식세포에서 및 비만 세포 및 호산구에서 발견된다. 중요하게, 모든 FcγRIIB의 75%가 간에서 발견된다 (Ganesan, L. P. et al., 2012: FcγRIIb on liver sinusoidal endothelium clears small immune complexes. Journal of Immunology 189: 4981-4988). FcγRIIB는, 간에서 LSE로 불리는, 간 시누소이드 내피(Liver Sinusoidal Endothelium), 및 쿠퍼(Kupffer) 세포에서 풍부하게 발현되고 LSEC는 작은 면역 복합체 제거의 주요 부위이다 (Ganesan, L. P. et al., 2012: FcγRIIb on liver sinusoidal endothelium clears small immune complexes. Journal of Immunology 189: 4981-4988).
그에 따라, 본 발명에서 FcγRIIb에 결합할 수 있는 그러한 항체, 및 그의 항원 결합 단편, 예를 들면 FcγRIIb, 구체적으로 Fc 영역에 결합하기 위한 Fc 모이어티를 포함하는 항체, 예컨데, 예를 들면 IgG-유형 항체가 바람직하다. 게다가, Chu, S. Y. et al., 2008: Inhibition of B cell receptor-mediated activation of primary human B cells by coengagement of CD19 and FcgammaRIIb with Fc-engineered antibodies. Molecular Immunology 45, 3926-3933에 의해 기술된 것처럼 돌연변이 S267E 및 L328F를 도입함에 의해 FcγRIIB 결합을 증진하도록 Fc 모이어티를 조작하는 것이 가능하다. 그것에 의해서, 면역 복합체의 제거는 증진될 수 있다 (Chu, S., et al., 2014: Accelerated Clearance of IgE In Chimpanzees Is Mediated By Xmab7195, An Fc-Engineered Antibody With Enhanced Affinity For Inhibitory Receptor FcγRIIb. Am J Respir Crit, American Thoracic Society International Conference Abstracts). 그에 따라, 본 발명의 내용에서, 돌연변이 S267E 및 L328F와 조작된 Fc 모이어티를 포함하는, 구체적으로 Chu, S. Y. et al., 2008: Inhibition of B cell receptor-mediated activation of primary human B cells by coengagement of CD19 and FcgammaRIIb with Fc-engineered antibodies. Molecular Immunology 45, 3926-3933에 의해 기술된, 그러한 항체, 또는 그의 항원 결합 단편이 바람직하다.
B-세포에서 부가 면역글로불린 생산 및 동형 스위칭, 예컨데 말하자면 IgE 클래스를 저지하는 기능을 하는 것으로 여겨진다. 대식세포에서, FcγRIIB은 FcγRIIA를 통해 매개되면서 포식작용을 억제하는 행동을 한다. 호산구 및 비만 세포에서 b 형은 그의 분리된 수용체에의 IgE 결합을 통해 이들 세포의 활성화를 저지하는데 도움될 수 있다.
FcγRI 결합과 관련하여, 자연 IgG 내에서 최소한 하나의 E233-G236, P238, D265, N297, A327 및 P329의 변형은 FcγRI에의 결합을 감소시킨다. IgG1 및 IgG4로 치환된, 위치 233-236의 IgG2 잔기는, FcγRI에의 결합을 103-배까지 감소시키고 항체-민감화 적혈구에 대한 인간 단핵구 반응을 제거하였다 (Armour, K. L., et al. Eur. J. Immunol. 29 (1999) 2613-2624). FcγRII 결합과 관련하여, FcγRIIA에 대한 감소된 결합은 일례로 E233-G236, P238, D265, N297, A327, P329, D270, Q295, A327, R292 및 K414 중 최소한 하나의 IgG 돌연변이에서 발견된다. FcγRIII 결합과 관련하여, FcγRIIIA에 대한 감소된 결합은 일례로 E233-G236, P238, D265, N297, A327, P329, D270, Q295, A327, S239, E269, E293, Y296, V303, A327, K338 및 D376 중 최소한 하나의 돌연변이에서 발견된다. Fc 수용체에 대한 인간 IgG1에서의 결합 부위의 맵핑, 상기 언급된 돌연변이 부위 및 FcγRI 및 FcγRIIA에의 결합을 측정하는 방법은 Shields, R. L., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604에 기술되어 있다.
중대한 FcγRII에의 결합과 관련하여, 자연적 IgG Fc의 두 개 영역이 FcγRII 및 IgG의 상호작용에 결정적인 것으로 나타나고, 다시 말해 (i) IgG Fc의 하부 힌지 부위, 구체적으로 아미노산 잔기 L, L, G, G (234 - 237, EU 넘버링), 및 (ii) IgG Fc의 CH2 도메인의 인접한 영역, 구체적으로 하부 힌지 영역에 인접한 상부 CH2 도메인 내의 루프 및 가닥, 일례로 P331의 영역 내이다 (Wines, B.D., et al., J. Immunol. 2000; 164: 5313 - 5318). 게다가, FcγRI는 IgG Fc의 동일한 부위에 결합하는 것으로 나타나고, 반면에 FcRn 및 단백질 A는 IgG Fc의 상이한 부위에 결합하고, 이는 CH2-CH3 접촉면에 있는 것으로 나타난다 (Wines, B.D., et al., J. Immunol. 2000; 164: 5313 - 5318).
예를 들면, Fc 모이어티는 FcRn 결합 또는 연장된 반감기를 위해 요구되는 것으로 당해 분야에서 알려진 Fc 모이어티의 최소한 부분을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 본 발명의 항체의 Fc 모이어티는 단백질 A 결합을 위해 요구되는 것으로 당해 분야에서 알려진 것의 최소한 부분을 포함하고 및/또는 본 발명의 항체의 Fc 모이어티는 단백질 G 결합을 위해 요구되는 것으로 당해 분야에서 알려진 Fc 분자의 최소한 부분을 포함한다. 바람직하게는, 보유된 기능은 ZIKA 바이러스 감염의 중화이고, 이는 FcγR 결합에 의해 매개되는 것으로 추정된다. 그에 따라, 바람직한 Fc 모이어티는 FcγR 결합을 위해 요구되는 것으로 당해 분야에서 알려진 최소한 부분을 포함한다. 상기 개요된 것처럼, 바람직한 Fc 모이어티는 따라서 최소한 (i) 자연적 IgG Fc의 하부 힌지 부위, 구체적으로 아미노산 잔기 L, L, G, G (234 - 237, EU 넘버링), 및 (ii) 자연적 IgG Fc의 CH2 도메인의 인접한 영역, 구체적으로 하부 힌지 영역에 인접한 상부 CH2 도메인 내의 루프 및 가닥, 일례로 P331의 영역 내, 예를 들면 P331 주변의 자연적 IgG Fc의 상부 CH2 도메인 내 최소한 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 연속적 아미노산의 영역, 일례로 자연적 IgG Fc의 아미노산 320 내지 340 (EU 넘버링)을 포함할 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 Fc 영역을 포함한다. 본 명세서에 사용된 바처럼, 용어 "Fc 영역"은 항체 중쇄의 두 개 이상의 Fc 모이어티에 의해 형성된 면역글로불린의 부분을 지칭한다. 예를 들면, Fc 영역은 단량체 또는 "단일-사슬" Fc 영역 (즉, scFc 영역)일 수 있다. 단쇄 Fc 영역은 단일 폴리펩티드 사슬 내에서 연결된 Fc 모이어티를 포함한다 (일례로, 단일 근접한 핵산 서열에 암호화). 예시적인 scFc 영역은 WO 2008/143954 A2에 개시되어 있다. 바람직하게는, Fc 영역은 이량체(dimeric) Fc 영역이다. "이량체 Fc 영역" 또는 "dcFc" 는 두 개의 분리된 면역글로불린 중쇄의 Fc 모이어티에 의해 형성된 이량체를 지칭한다. 이량체 Fc 영역은 두 개의 일치하는 Fc 모이어티의 동종이량체 (일례로, 자연적으로 발생한 면역글로불린의 Fc 영역) 또는 두 개의 비-일치하는 Fc 모이어티의 이종이량체일 수 있다.
Fc 영역의 Fc 모이어티는 동일한 또는 상이한 클래스 및/또는 서브클래스일 수 있다. 예를 들면, Fc 모이어티는 면역글로불린 (일례로, 인간 면역글로불린) IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 서브클래스로부터 유래될 수 있다. 바람직하게는, Fc 영역의 Fc 모이어티는 동일한 클래스 및 서브클래스이다. 하지만, Fc 영역 (또는 하나 이상의 Fc 영역의 Fc 모이어티)는 또한 키메릭일 수 있고, 그로써 키메라 Fc 영역은 상이한 면역글로불린 클래스 및/또는 서브클래스로부터 유래된 Fc 모이어티를 포함할 수 있다. 예를 들면, 이량체 또는 단일-사슬 Fc 영역의 최소한 두 개의 Fc 모이어티는 상이한 면역글로불린 클래스 및/또는 서브클래스로부터 올 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 키메라 Fc 영역은 하나 이상의 키메라 Fc 모이어티를 포함할 수 있다. 예를 들면, 키메라 Fc 영역 또는 모이어티는 첫 번째 서브클래스 (일례로, IgG1, IgG2, 또는 IgG3 서브클래스)의 면역글로불린으로부터 유래된 하나 이상의 부분을 포함할 수 있는 반면 Fc 영역 또는 모이어티의 나머지는 상이한 서브클래스이다. 예를 들면, Fc 폴리펩티드의 Fc 영역 또는 모이어티는 첫 번째 서브클래스 (일례로, IgG1, IgG2 또는 IgG4 서브클래스)의 면역글로불린으로부터 유래된 CH2 및/또는 CH3 도메인 및 두 번째 서브클래스 (일례로, IgG3 서브클래스)의 면역글로불린으로부터 유래된 힌지 영역을 포함할 수 있다. 예를 들면, Fc 영역 또는 모이어티는 첫 번째 서브클래스 (일례로, IgG4 서브클래스)의 면역글로불린으로부터 유래된 힌지 및/또는 CH2 도메인 및 두 번째 서브클래스 (일례로, IgG1, IgG2, 또는 IgG3 서브클래스)의 면역글로불린으로부터 유래된 CH3 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들면, 키메라 Fc 영역은 첫 번째 서브클래스 (일례로, IgG4 서브클래스)의 면역글로불린으로부터 유래된 Fc 모이어티 (일례로, 전체 Fc 모이어티) 및 두 번째 서브클래스 (일례로, IgG1, IgG2 또는 IgG3 서브클래스)의 면역글로불린으로부터 유래된Fc 모이어티를 포함할 수 있다. 예를 들면, Fc 영역 또는 모이어티는 IgG4 면역글로불린으로부터의 CH2 도메인 및 IgG1 면역글로불린으로부터의 CH3 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들면, Fc 영역 또는 모이어티는 IgG4 분자로부터의 CH1 도메인 및 CH2 도메인 및 IgG1 분자로부터의 CH3 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들면, Fc 영역 또는 모이어티는 항체의 특정 서브클래스로부터의 CH2 도메인의 부분, 일례로, CH2 도메인의 EU 위치 292-340을 포함할 수 있다. 예를 들면, Fc 영역 또는 모이어티는 IgG4 모이어티로부터 유래된 CH2의 위치 292-340의 아미노산 및 IgG1 모이어티로부터 유래된 CH2의 나머지를 포함할 수 있다 (대안적으로, CH2의 292-340은 IgG1 모이어티로부터 유래되고 CH2의 나머지는 IgG4 모이어티로부터 유래될 수 있다).
게다가, Fc 영역 또는 모이어티는 (추가적으로 또는 대안적으로) 예를 들면 키메라 힌지 영역을 포함할 수 있다. 예를 들면, 키메라 힌지는, 일례로 부분적으로, IgG1, IgG2, 또는 IgG4 분자 (일례로, 상부 및 하부 중부 힌지 서열)로부터 및, 부분적으로, IgG3 분자 (일례로, 중부 힌지 서열)로부터 유래될 수 있다. 또다른 실시예에서, Fc 영역 또는 모이어티는, 부분적으로, IgG1 분자로부터 및, 부분적으로, IgG4 분자로부터 유래된 키메라 힌지를 포함할 수 있다. 또다른 실시예에서, 키메라 힌지는 IgG4 분자로부터의 상부 및 하부 힌지 도메인 및 IgG1 분자로부터의 중부 힌지 도메인을 포함할 수 있다. 이러한 키메라 힌지는, 예를 들면, IgG4 힌지 영역의 중부 힌지 도메인 내 EU 위치 228에 프롤린 치환 (Ser228Pro)을 도입함에 의해 만들어질 수 있다. 또다른 구현예에서, 키메라 힌지는 IgG2 항체로부터의 EU 위치 233-236의 아미노산 및/또는 Ser228Pro 돌연변이를 포함할 수 있고, 여기서 힌지의 남는 아미노산은 IgG4 항체로부터 올 수 있다 (일례로, 서열 ESKYGPPCPPCPAPPVAGP의 키메라 힌지). 본 발명에 따른 항체의 Fc 모이어티에 사용될 수 있는, 부가 키메라 힌지는 US 2005/0163783 A1에 기술되어 있다.
본 발명에서 Fc 모이어티, 또는 Fc 영역은, 인간 면역글로불린 서열로부터의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것이 바람직하다 (일례로, 인간 IgG 분자로부터의 Fc 영역 또는 Fc 모이어티로부터). 하지만, 폴리펩티드는 또다른 포유류 종으로부터의 하나 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 예를 들면, 영장류 Fc 모이어티 또는 영장류 결합 부위는 대상 폴리펩티드 내 포함될 수 있다. 대안적으로, 하나 이상의 쥐과 아미노산은 Fc 모이어티 내 또는 Fc 영역 내에 존재할 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체는, 구체적으로 상기 기술된 Fc 모이어티에 더불어, 불변 영역으로부터 유래된 다른 부분, 구체적으로 IgG의 불변 영역으로부터, 바람직하게는 IgG1의 불변 영역으로부터, 더 바람직하게는 인간 IgG1의 불변 영역으로부터의 것을 포함한다. 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체는, 구체적으로 상기 기술된 Fc 모이어티에 더불어, 불변 영역의 모든 다른 부분, 구체적으로 IgG의 불변 영역의 모든 다른 부분, 바람직하게는 IgG1의 불변 영역의 모든 다른 부분, 더 바람직하게는 인간 IgG1의 불변 영역의 모든 다른 부분을 포함한다.
불변 영역의 특별히 바람직한 서열은 서열목록 번호: 145 - 148 에 따른 아미노산 서열 (서열목록 번호: 149 - 152에 따른 핵산 서열)이다. 바람직하게는, IgG1 CH1-CH2-CH3의 아미노산 서열은, 본 명세서에 기술된 것처럼, 서열목록 번호: 145 또는 그의 기능적 서열 변종에 따른다. 보다 더 바람직하게는, IgG1 CH1-CH2-CH3의 아미노산 서열은, 본 명세서에 기술된 것처럼, 서열목록 번호: 146 또는 그의 기능적 서열 변종에 따르고, 여기서 "LALA" 돌연변이는 유지된다.
상기 개요된 것처럼, 특히 바람직한 본 발명에 따른 항체는 인간 IgG1으로부터 (전체) Fc 영역을 포함한다. 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체는, 구체적으로 인간 IgG1으로부터 유래된 (전체) Fc 영역에 더불어 또한 IgG의 불변 영역의 모든 다른 부분, 바람직하게는 IgG1의 불변 영역의 모든 다른 부분, 더 바람직하게는 인간 IgG1의 불변 영역의 모든 다른 부분을 포함한다.
임의의 이론에 구속됨 없이, 지카 바이러스 감염의 항체-의존성 증진 (ADE)은 항체의 Fc 모이어티, 구체적으로, IgG 분자의 중쇄의 Fc 모이어티의, Fc 수용체, 일례로, Fcγ 수용체에의 숙주 세포 상에서 결합에 의해 야기되는 것으로 여겨진다. 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 하나 이상의 Fc 모이어티 내 돌연변이를 포함하는 것이 따라서 바람직한다. 돌연변이(들)은 Fc 수용체 (FcR)에의 항체의 결합, 구체적으로 Fcγ 수용체 (FcγR)에의 항체의 결합을 감소시키는 감소시키는 임의의 돌연변이일 수 있다. 다른 한편으로는, 본 발명에 따른 항체는 (전체) Fc 모이어티/Fc 영역을 포함하는 것이 바람직하고, 여기서 FcRn와의 상호작용/결합은 저하되지 않는다. 그에 따라, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, (i) Fcγ 수용체에의 항체의 결합을 감소시키지만, FcRn과의 상호작용은 저하시지지 않는, Fc 모이어티 내 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 것이 특히 바람직하다. 그러한 돌연변이의 일 예시는 하기 기술된 "LALA" 돌연변이이다.
일반적으로, Fc 수용체에의 항체의 결합은 당해 기술자에게 알려진 다양한 방법, 예컨데 ELISA (Hessell AJ, Hangartner L, Hunter M, Havenith CEG, Beurskens FJ, Bakker JM, Lanigan CMS, Landucci G, Forthal DN, Parren PWHI, et al.: Fc receptor but not complement binding is important in antibody protection against HIV. Nature 2007, 449:101-104; Grevys A, Bern M, Foss S, Bratlie DB, Moen A, Gunnarsen KS, Aase A, Michaelsen TE, Sandlie I, Andersen JT: Fc Engineering of Human IgG1 for Altered Binding to the Neonatal Fc Receptor Affects Fc Effector Functions. 2015, 194:5497-5508) 또는 유동 세포계측법(Perez LG, Costa MR, Todd CA, Haynes BF, Montefiori DC: Utilization of immunoglobulin G Fc receptors by human immunodeficiency virus type 1: a specific role for antibodies against the membrane-proximal external region of gp41. J Virol 2009, 83:7397-7410; Piccoli L, Campo I, Fregni CS, Rodriguez BMF, Minola A, Sallusto F, Luisetti M, Corti D, Lanzavecchia A: Neutralization and clearance of GM-CSF by autoantibodies in pulmonary alveolar proteinosis. Nat Commun 2015, 6:1-9)에 의해 평가될 수 있다.
일반적으로, 본 발명에 따른 항체는 글리코실화될 수 있다. 중쇄의 CH2 도메인에 부착된 N-결합 글리칸은, 일례를 들면, 이들 수용체에 대한 하부 친화성을 갖는 아글리코실화된 항체와 함께, C1q 및 FcR 결합에 영향줄 수 있다. 그에 따라, 본 발명에 따른 항체의 Fc 모이어티의 CH2 도메인은 글리코실화된 잔기가 비-글리코실화된 잔기로 치환된 하나 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. 글리칸 구조는 또한 활성에 영향을 미칠 수 있어 일례로 보체-매개된 세포 죽음에서 차이점이 글리칸의 바이안테나리(biantennary) 사슬의 말단에 갈락토오스 당의 수(0, 1 또는 2)에 따라 보여질 수 있다. 바람직하게는, 항체의 글리칸은 투여 후 인간 면역 반응을 유도하지 않는다.
뿐만 아니라, 본 발명에 따른 항체는 FcR에 대한 그들의 결합 친화성 및/또는 그들의 혈청 반감기를 비변형된 항체와 비교하여 변이시키기 위하여 무작위 아미노산 돌연변이를 중쇄의 CH2 또는 CH3 도메인의 특정 영역 내로 도입함에 의해 변형될 수 있다. 그러한 변형의 예는, 이에 제한되지 않지만, 아미노산 잔기 250, 314, 및 428로 구성된 군으로부터 선택된 중쇄 불변 영역으로부터 최소한 하나의 아미노산의 치환을 함유한다.
특히 바람직하게는, 본 발명의 항체의 Fc 모이어티는 위치 CH2 4, CH2 5, 또는 모두에서의 치환을 포함한다. 일반적으로, 야생형 IgGl 및 IgG3의 CH2의 위치 4 및 5의 아미노산은 류신 ("L")이다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체는 위치 CH2 4, CH2 5, 또는 모두에, L이 아닌 아미노산을 포함한다. 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체는 위치 CH2 4, 또는 CH2 5, 또는 모두에 알라닌 ("A")을 포함한다. 가장 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체는, CH2 L4A 및 CH2 L5A 치환 모두를 포함한다. 이러한 항체는 본 명세서에서 "LALA" 변종으로 지칭된다. 흥미롭게도, 이러한 Fc 모이어티 내 "LALA" 돌연변이는 지카 바이러스 감염의 항체-의존성 증진 (ADE)에서 각자 항체의 기여의 결여를 가져올 뿐만 아니라, 지카 바이러스 감염의 항체-의존성 증진 (ADE)을 차단한다. "LALA" 돌연변이를 포함하는 IgG1 CH1-CH2-CH3의 예시적인 아미노산 서열은 서열목록 번호: 146에 따른다. 그에 따라, IgG1 CH1-CH2-CH3의 아미노산 서열은 바람직하게는, 본 명세서에 기술된 것처럼, 서열목록 번호: 146 또는 그의 기능적 서열 변종에 따르고, 여기서 상기 "LALA" 돌연변이는 유지된다.
바람직하게는, 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 지카 바이러스 외피 단백질의 도메인 III (EDIII, 또한 "DIII"으로 지칭됨)에 결합한다. 다시 말해서, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 지카 바이러스 외피 단백질의 에피토프에 결합하는 것이 바람직하고, 이는 지카 바이러스 외피 단백질 (EDIII)의 도메인 III의 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함한다. ZIKV는, 중심 단백질에 둘러싸진 단일 사슬 RNA를 포함하는, 뉴클레오캡시드 중심(nucleocapsid core)를 함유한다. 뉴클레오캡시드 중심은 "막 단백질" 및 "외피 단백질"과 함께 지질 이중층으로 피막화된다. ZIKV 외피 단백질 (E 단백질)은 우성 항원(dominant antigen) 이다. 외피 단백질의 엑토도메인(ectodomain)은 세 개의 뚜렷한 도메인을 포함한다: E 단백질 도메인 I (EDI), E 단백질 도메인 II (EDII), 및 E 단백질 도메인 III (EDIII). EDIII는 상이한 ZIKV 균주들 사이에서 고도로 보존되어 있다 (상이한 ZIKV 균주들의 EDIII의 아미노산 서열의 정렬에 대해서는 도 12 참조).
그에 따라, 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 더 바람직하게는 단편은 하기 아미노산 서열 (서열목록 번호: 401) 을 갖는 EDIII와 지카 바이러스 외피 단백질 (EDIII)의 도메인 III에 결합한다:
TAAFTFTKXPAEXXHGTVTVEXQYXGXDGPCKXPXQMAVDXQTLTPVGRLITANPVITEXTENSKMMLELDPPFGDSYIVIGXGXKKITHHWHRS
여기서 X는 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있다. 다시 말해서, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 서열목록 번호: 401의 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는, 지카 바이러스 외피 단백질의 에피토프에 결합하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 하기 아미노산 서열 (서열목록 번호: 407)을 갖는 EDIII와 지카 바이러스 외피 단백질 (EDIII)의 도메인 III에 결합하는 것이 또한 바람직하다:
X1GX2X3YSLCTAAFTFTKX4PAEX5X6HGTVTVEX7QYX8GX9DGPCKX10PX11QMAVDX12QTLTPVGRLITANPVITEX13TX14NSKMMLELDPPFGDSYIVIGX15GX16 X17KITHHWHRSG
여기서 X1은 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 K, A, 또는 E;
X2는 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 V, F, 또는 L;
X3은 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 S 또는 F;
X4는 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 I 또는 V;
X5는 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 T 또는 V;
X6는 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 L 또는 D;
X7은 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 V 또는 G;
X8은 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 A 또는 G;
X9는 임의의 (자연적으로 발생하는) R제외한 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 T 또는 A;
X10는 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 V 또는 I;
X11은 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 A 또는 V;
X12는 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 M 또는 T;
X13은 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 S 또는 G;
X14는 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 E 또는 K;
X15는 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 V 또는 I;
X16은 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 E, A, K, 또는 D; 및
X17은 임의의 (자연적으로 발생하는) 아미노산일 수 있고, 바람직하게는 E, A, 또는 K, 더 바람직하게는 K 또는 A이다.
다시 말해서, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 서열목록 번호: 407에 따른 하나 이상의 아미노산 잔기를 함유하는 지카 바이러스 외피 단백질의 에피토프에 결합하는 것이 바람직하다 .
예를 들면, EDIII는 ZIKV H/PF/2013 균주 (Genbank 수탁 번호 KJ776791)의 ZIKV E 단백질의 아미노산 309 부터 아미노산 403까지 연장된다. 그에 따라, 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 가장 바람직하게는 하기 아미노산 서열 (서열목록 번호: 402)을 갖는 EDIII와 지카 바이러스 외피 단백질 (EDIII)의 도메인 III에 결합한다:
TAAFTFTKIPAETLHGTVTVEVQYAGTDGPCKVPAQMAVDMQTLTPVGRLITANPVITESTENSKMMLELDPPFGDSYIVIGVGEKKITHHWHRS.
다시 말해서, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 서열목록 번호: 402의 하나 이상의 아미노산 잔기를 함유하는 지카 바이러스 외피 단백질의 에피토프에 결합하는 것이 바람직하다.
놀랍게도, 본 발명자들은 지카 바이러스 외피 단백질 (EDIII)의 도메인 III 에 결합하는 항체는 지카 바이러스 외피 단백질 (EDI/II)의 도메인 I/II에 결합하는 항체에 대비하여 (i) ZIKV의 증가된 중화 및 (ii) DENV와의 감소된 교차-반응성 (구체적으로 필수적으로 DENV와 교차-반응성 없음)을 보이는 것을 발견하였다.
더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 지카 바이러스 외피 단백질의 에피토프에 결합하고, 이는 EDIII의 측면 리지(lateral ridge, LR)의 하나 이상의 아미노산 잔기 및/또는 EDI-EDIII 힌지 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기를 함유한다. EDIII 측면 리지 및 EDI-EDIII 힌지 영역은 당해 기술자들에게 알려져 있고, 예를 들면, Zhao, H., Fernandez, E., Dowd, K.A., Speer, S.D., Platt, D.J., Gorman, M.J., Govero, J., Nelson, C.A., Pierson, T.C., Diamond, M.S., et al. (2016). Structural Basis of Zika Virus-Specific Antibody Protection. Cell 166(4):1016-27 및 Kostyuchenko VA, Lim EX, Zhang S, Fibriansah G, Ng TS, Ooi JS, Shi J, Lok SM. Structure of the thermally stable Zika virus. Nature. 2016 May 19;533(7603):425-8에 기술되어 있다. 임의의 이론에 구속됨 없이, (i) LR에의 결합은 바이러스의 융합 전이 상태를 포획함에 의해 융합을 억제할 수 있고 (ii) 힌지 및 EDIII에의 결합은 삼량체 융합-후 구조를 형성하는 EDIII의 이동을 저해하여, 그렇게 함으로써 막 융합을 중단시킬 수 있는 것으로 추정된다.
그에 따라, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 ZIKV 의 부착 후(post-attachment) 단계를 억제하는(할 수 있는) 것이 바람직하다. "부착 후"는 전형적으로 (ZIKV에 의해 표적화된 세포의) 세포 막에 ZIKV의 부착 이후에 ZIKV 감염의 임의의 단계를 지칭한다. 예를 들면, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 바람직하게는 막 융합을 예방한다(할 수 있다). 뿐만 아니라, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 ZIKV (입자)의 응집을 야기하는(할 수 있는) 것이 또한 바람직하다. 가장 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 (i) ZIKV의 부착 후 단계를 억제 및 (ii) ZIKV (입자)의 응집을 야기한다(할 수 있다).
항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 ZIKV 감염성 비리온(virion) 상에 표시된 사차 에피토프 결정기에 결합하는 것이 또한 바람직하다. 상당한 중화 활성에도 불구하고, 이러한 항체는 전형적으로, 시험관 내에서, 구체적으로 정제된 형태로 (즉, 비리온, 바이러스-유사 입자 또는 유사체 "외부/없이" ZIKV E 단백질), 표준 ELISA에서 (상기 기술된 바와 같이) 재조합 ZIKV E 단백질에 또는 ZIKV EDIII에 검출할 수 없는 결합을 보인다. 그렇게 함으로써, "검출할 수 없는 결합"은 전형적으로 표준 ELISA에서 최대 10000 ng/ml의 EC50이 검출되지 않는다는 것을 의미한다. 다시 말해서, 표준 ELISA에서 검출할 수 있는 EC50이 10000 ng/ml 이상이면, 이는 "검출할 수 없는 결합"으로 지칭된다.
그러므로, 이러한 항체는 본 명세서에서 "중화-비-E-결합성" (neutralizing-non-E-binding, NNB) 항체로 지칭된다. ZIKV 감염성 비리온에 표시된 사차 에피토프는 전형적으로 입체형태적 에피토프이다. 예를 들면, ZIKV 감염성 비리온에 표시된 사차 에피토프는 두 개의 외피 단백질 단량체의 경계면에서 이량체를 만들면서 형성되거나 ("외피 이량체 에피토프"(envelope dimer epitope); EDE) 또는 이는 이웃하는 이량체를 가로질러 형성될 수 있다 ("헤링-본 에피토프"(herring-bone epitope).
일반적으로, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 바람직하게는 중쇄에 (최소한) 세 개의 상보성 결정 영역 (CDR) 및 경쇄에 (최소한) 세 개의 CDR을 포함한다. 일반적으로, 상보성 결정 영역 (CDR)은 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인에 존재하는 고가변 영역이다. 전형적으로, 항체의 중쇄의 CDR 및 연결된 경쇄는 함께 항원 수용체를 형성한다. 통상적으로, 세 개의 CDR (CDR1, CDR2, 및 CDR3)은 가변 도메인에 비-연속적으로 정렬된다. 항원 수용체는 전형적으로 (두 개의 상이한 폴리펩티드 사슬, 즉 중쇄 및 경쇄의) 두 개의 가변 도메인으로 구성되므로, 각 항원 수용체에 대해 여섯 개의 CDR이 있다 (중쇄: CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3; 경쇄: CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3). 단일 항체 분자는 통상적으로 두 개의 항원 수용체를 가지고 그러므로 열두 개의 CDR을 함유한다. 중쇄 및/또는 경쇄의 CDR은 골격 영역(framework region)에 의해 분리될 수 있고, 그로써 골격 영역 (FR)은가변 도메인 내에서 CDR 보다 덜 "가변"적인 영역이다. 예를 들면, 사슬 (또는 각 사슬, 각각) 은, 세 개의 CDR에 의해 분리된, 네 개의 골격 영역으로 구성될 수 있다.
중쇄에 세 개의 상이한 CDR 및 경쇄에 세 개의 상이한 CDR를 포함하는, 본 발명의 예시적인 항체의 중쇄 및 경쇄의 서열이 결정되었다. CDR 아미노산의 위치는 IMGT 넘버링 시스템에 따라 정의된다 (IMGT: http://www.imgt.org/; cf. Lefranc, M.-P. et al. (2009) 핵산 Res. 37, D1006-D1012)
표 1은 본 발명에 따른 예시적인 항체의 중쇄 CDR (CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3) 및 중쇄 가변 영역 ("VH"로 지칭됨)의 아미노산 서열의 서열목록 번호를 보여준다:
항체 명칭 CDRH1 CDRH2 CDRH3 VH
ZKA190 1 2 3 8
ZKA185 19 20 21 26
ZKA230 37 38 39 44
ZKA78 55 56 57 62
ZKA64 73 74 75 80
ZKA3 237 238 239 240
ZKA4 241 242 243 244
ZKA5 245 246 247 248
ZKA6 249 250 251 252
ZKA7 253 254 255 256
ZKA8 257 258 259 260
ZKA76 261 262 263 264
ZKA117 265 266 267 268
ZKB27 269 270 271 272
ZKB29 273 274 275 276
ZKB34 277 278 279 280
ZKB39 281 282 283 284
ZKB46 285 286 287 288
ZKB53 289 290 291 292
ZKC26 293 294 295 296
ZKD5 297 298 299 300
ZKD7 301 302 303 304
ZKD8 305 306 307 308
ZKD15 309 310 311 312
ZKD16 313 314 315 316
ZKD17 317 318 319 320
ZKD20 321 322 323 324
ZKA134 325 326 327 328
ZKA246 329 330 331 332
ZKA256 333 334 335 336
ZKB42 337 338 339 340
ZKB85 341 342 343 344
ZKB47 345 346 347 348
ZKC6 349 350 351 352
ZKA160 353 354 355 356
ZKA172 357 358 359 360
ZKA174 361 362 363 364
ZKA189 365 366 367 368
ZKA195 369 370 371 372
ZKA215 373 374 375 376
ZKA218 377 378 379 380
ZKB75 381 382 383 384
ZKB83 385 386 387 388
ZKC3 389 390 391 392
ZKC18 393 394 395 396
ZKD1 397 398 399 400
하기 표2는 본 발명에 따른 예시적인 항체의 경쇄 CDR (CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3) 및 경쇄 가변 영역 ("VL"로 지칭됨)의 아미노산 서열의 서열목록 번호를 보여준다:
항체 명칭 CDRL1 CDRL2 CDRL2 long CDRL3 VL
ZKA190 4 5 6 7 9
ZKA185 22 23 24 25 27
ZKA230 40 41 42 43 45
ZKA78 58 59 60 61 63
ZKA64 76 77 78 79 81
따라서 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 표 1 및/또는 표 2에 보여진 최소한 하나의 CDR 서열, VH 서열 및/또는 VL 서열에 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한　90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99%의 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 3, 75, 39, 21, 57, 239, 243, 247, 251, 255, 259, 263, 267, 271, 275, 279, 283, 287, 291, 295, 299, 303, 307, 311, 315, 319, 323, 327, 331, 335, 339, 343, 347, 351, 355, 359, 363, 367, 371, 375, 379, 383, 387, 391, 395, 및 399 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것이 바람직하다.
더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 3, 21, 39, 57 및 75 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된다. 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 3, 21, 39 및 75 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된다. 보다 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 3 또는 서열목록 번호: 75 에 따른; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된다. 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 21 또는 서열목록 번호: 39에 따른; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것이 또한 바람직하다. 가장 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 3 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된다.
더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1 은 서열목록 번호: 1, 19, 37, 55, 73, 237, 241, 245, 249, 253, 257, 261, 265, 269, 273, 277, 281, 285, 289, 293, 297, 301, 305, 309, 313, 317, 321, 325, 329, 333, 337, 341, 345, 349, 353, 357, 361, 365, 369, 373, 377, 381, 385, 389, 393, 및 397 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 2, 20, 38, 56, 74, 238, 242, 246, 250, 254, 258, 262, 266, 270, 274, 278, 282, 286, 290, 294, 298, 302, 306, 310, 314, 318, 322, 326, 330, 334, 338, 342, 346, 350, 354, 358, 362, 366, 370, 374, 378, 382, 386, 390, 394, 및398 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 3, 21, 39, 57, 75, 239, 243, 247, 251, 255, 259, 263, 267, 271, 275, 279, 283, 287, 291, 295, 299, 303, 307, 311, 315, 319, 323, 327, 331, 335, 339, 343, 347, 351, 355, 359, 363, 367, 371, 375, 379, 383, 387, 391, 395, 및 399 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
여전히 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1은 서열목록 번호: 1, 19, 37, 55 및 73 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 2, 20, 38, 56 및 74 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 3, 21, 39, 57 및75 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
보다 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1은 서열목록 번호: 1, 19, 37 및 73 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 2, 20, 38 및 74 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 3, 21, 39 및 75 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
가장 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1은 서열목록 번호: 1 또는 서열목록 번호: 73에 따른; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 2 또는 서열목록 번호: 74에 따른; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 3 또는 서열목록 번호: 75에 따른; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하는 것이 또한 바람직하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1은 서열목록 번호: 19 또는 서열목록 번호: 37에 따른; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 20 또는 서열목록 번호: 38에 따른; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 21 또는 서열목록 번호: 39에 따른; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
특히 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1은 서열목록 번호: 1 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 2 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 3 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하는 것이 또한 바람직하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 CDRL1은 서열목록 번호: 4, 22, 40, 58 및 76 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRL2는 서열목록 번호: 5, 6, 23, 24, 41, 42, 59, 60, 77 및 78 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 CDRL3은 서열목록 번호: 7, 25, 43, 61 및 79 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 CDRL1은 서열목록 번호: 4, 22, 40 및 76 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRL2는 서열목록 번호: 5, 6, 23, 24, 41, 42, 77 및 78 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 CDRL3은 서열목록 번호: 7, 25, 43 및 79 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
보다 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 CDRL1은 서열목록 번호: 4 또는 서열목록 번호: 76에 따른; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRL2는 서열목록 번호: 5, 6, 77 및 78 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 CDRL3은 서열목록 번호: 7 또는 서열목록 번호: 79에 따른; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하는 것이 또한 바람직하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 CDRL1은 서열목록 번호: 22 또는 서열목록 번호: 40에 따른; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRL2 는 서열목록 번호: 23, 24, 41 및42 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 CDRL3은 서열목록 번호: 25 또는 서열목록 번호: 43에 따른; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
가장 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 CDRL1은 서열목록 번호: 4 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRL2는 서열목록 번호: 5 또는 6, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 CDRL3 아미노는 서열목록 번호: 7 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 (i) 서열목록 번호: 1 - 3; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ii) 서열목록 번호: 19 - 21; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iii) 서열목록 번호: 37 - 39; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iv) 서열목록 번호: 55 - 57; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (v) 서열목록 번호: 73 - 75; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (vi) 서열목록 번호: 237 - 239; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (vii) 서열목록 번호: 241 - 243; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (viii) 서열목록 번호: 245 - 247; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ix) 서열목록 번호: 249 - 251; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (x) 서열목록 번호: 253 - 255; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xi) 서열목록 번호: 257 - 259; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xii) 서열목록 번호: 261 - 263; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xiii) 서열목록 번호: 265 - 267; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xiv) 서열목록 번호: 269 - 271; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xv) 서열목록 번호: 273 - 275; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xvi) 서열목록 번호: 277 - 279; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xvii) 서열목록 번호: 281 - 283; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xviii) 서열목록 번호: 285 - 287; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xix) 서열목록 번호: 289 - 291; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xx) 서열목록 번호: 293 - 295; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxi) 서열목록 번호: 297 - 299; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxii) 서열목록 번호: 301 - 303; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxiii) 서열목록 번호: 305 - 307; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxiv) 서열목록 번호: 309 - 311; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxv) 서열목록 번호: 313 - 315; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxvi) 서열목록 번호: 317 - 319; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxvii) 서열목록 번호: 321 - 323; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxviii) 서열목록 번호: 325 - 327; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxix) 서열목록 번호: 329 - 331; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxx) 서열목록 번호: 333 - 335; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxi) 서열목록 번호: 337 - 339; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxii) 서열목록 번호: 341 - 343; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxiii) 서열목록 번호: 345 - 347; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxiv) 서열목록 번호: 349 - 351; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxv) 서열목록 번호: 353 - 355; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxvi) 서열목록 번호: 357 - 359; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxvii) 서열목록 번호: 361 - 363; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxviii) 서열목록 번호: 365 - 367; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxix) 서열목록 번호: 369 - 371; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xl) 서열목록 번호: 373 - 375; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xli) 서열목록 번호: 377 - 379; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xlii) 서열목록 번호: 381 - 383; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xliii) 서열목록 번호: 385 - 387; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xliv) 서열목록 번호: 389 - 391; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xlv) 서열목록 번호: 393 - 395; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; 또는 (xlvi) 서열목록 번호: 397 - 399; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함한다.
그에 따라, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 (i) 서열목록 번호: 1 - 5 및 7; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ii) 서열목록 번호: 1 - 4 및 6 - 7; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iii) 서열목록 번호: 19 - 23 및 25; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iv) 서열목록 번호: 19 - 22 및 24 - 25; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (v) 서열목록 번호: 37 - 41 및 43; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (vi) 서열목록 번호: 37 - 40 및 42 - 43; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (vii) 서열목록 번호: 55 - 59 및 61; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (viii) 서열목록 번호: 55 - 58 및 60 - 61; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ix) 서열목록 번호: 73 - 77 및 79; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; 또는 (x) 서열목록 번호: 73 - 76 및 78 - 79; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 아미노산 서열 및 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는 것이 또한 바람직하다.
더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 (i) 서열목록 번호: 1 - 5 및 7; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ii) 서열목록 번호: 1 - 4 및 6 - 7; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iii) 서열목록 번호: 19 - 23 및 25; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iv) 서열목록 번호: 19 - 22 및 24 - 25; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (v) 서열목록 번호: 37 - 41 및 43; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (vi) 서열목록 번호: 37 - 40 및 42 - 43; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (vii) 서열목록 번호: 73 - 77 및 79; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; 또는 (viii) 서열목록 번호: 73 - 76 및 78 - 79; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 아미노산 서열 및 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함한다.
보다 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 (i) 서열목록 번호: 1 - 5 및 7; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ii) 서열목록 번호: 1 - 4 및 6 - 7; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iii) 서열목록 번호: 73 - 77 및 79; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; 또는 (iv) 서열목록 번호: 73 - 76 및 78 - 79; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 아미노산 서열 및 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함한다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 (i) 서열목록 번호: 19 - 23 및 25; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ii) 서열목록 번호: 19 - 22 및 24 - 25; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iii) 서열목록 번호: 37 - 41 및 43; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; 또는 (vi) 서열목록 번호: 37 - 40 및 42 - 43; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 아미노산 서열 및 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는 것이 또한 바람직하다.
가장 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 (i) 서열목록 번호: 1 - 5 및 7; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; 또는 (ii) 서열목록 번호: 1 - 4 및 6 - 7; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 아미노산 서열 및 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함한다.
더불어, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 (VH) 및, 선택적으로, 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하고, 여기서 상기 중쇄 가변 영역 (VH)은 서열목록 번호: 8, 26, 44, 62, 80, 240, 244, 248, 252, 256, 260, 264, 268, 272, 276, 280, 284, 288, 292, 296, 300, 304, 308, 312, 316, 320, 324, 328, 332, 336, 340, 344, 348, 352, 356, 360, 364, 368, 372, 376, 380, 384, 388, 392, 396, 및 400 중 임의의; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것이 또한 바람직하다.
게다가, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편 comprises (i) 서열목록 번호: 8 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 9 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; (ii) 서열목록 번호: 26 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 27 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; (iii) 서열목록 번호: 44 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 45 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; (iv) 서열목록 번호: 62 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 63 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; 또는 (v) 서열목록 번호: 80 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 81 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열을 포함하는 것이 또한 바람직하다.
더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 (i) 서열목록 번호: 8 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 9 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; (ii) 서열목록 번호: 26 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 27 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; (iii) 서열목록 번호: 44 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 및/또는 서열목록 번호: 45 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; 또는 (iv) 서열목록 번호: 80 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 81 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열을 포함한다.
보다 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 (i) 서열목록 번호: 8 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 9 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; 또는 (ii) 서열목록 번호: 80 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 81 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 (i) 서열목록 번호: 26 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 27 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; 또는 (ii) 서열목록 번호: 44 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 및/또는 서열목록 번호: 45 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열을 포함하는 것이 또한 바람직하다.
가장 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 서열목록 번호: 8 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 9 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열을 포함한다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 gZKA190, gZKA64, gZKA230, gZKA185 또는 gZKA78이고, 바람직하게는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 gZKA190, gZKA64, gZKA230 또는 gZKA185이고, 더 바람직하게는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 gZKA190 또는 gZKA64이고, 및 가장 바람직하게는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 gZKA190이다.
본 발명자들은 본 발명에 따라 단일클론 항체 (mAb) 를 단리하였고, 이들은 본 명세서에서 ZKA190, ZKA64, ZKA230, ZKA185 및ZKA78로 지칭되었다 (cf. 표 1 및2, 실시예 1). 이들 항체, 구체적으로 이들 항체의 VH 및 VL 유전자에 기초하여, 용어 "gZKA190", "gZKA64", "gZKA230", "gZKA185" 및 "gZKA78"는, 본 명세서에 사용된 바처럼, 각자 "일반(generic)" 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 지칭한다.
다시 말해, "gZKA190"은, 서열목록 번호: 1에 따른 CDRH1 아미노산 서열, 서열목록 번호: 2에 따른 CDRH2 아미노산 서열, 서열목록 번호: 3에 따른 CDRH3 아미노산 서열, 서열목록 번호: 4에 따른 CDRL1 아미노산 서열, 서열목록 번호: 5 또는 6에 따른 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열목록 번호: 7 에 따른 CDRL3 아미노산 서열을 가지는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 지칭한다. 상기 중쇄 가변 영역 (VH)은 바람직하게는 서열목록 번호: 8 에 따른 아미노산 서열을 가지고 경쇄 가변 영역 (VL)은 바람직하게는 서열목록 번호: 9 에 따른 아미노산 서열을 가진다.
"gZKA64"은, 서열목록 번호: 73에 따른 CDRH1 아미노산 서열, 서열목록 번호: 74 에 따른 CDRH2 아미노산 서열, 서열목록 번호: 75 에 따른 CDRH3 아미노산 서열, 서열목록 번호: 76 에 따른 CDRL1 아미노산 서열, 서열목록 번호: 77 또는 78 에 따른 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열목록 번호: 79 에 따른 CDRL3 아미노산 서열을 가지는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 지칭한다. 중쇄 가변 영역 (VH)은 바람직하게는 서열목록 번호: 80에 따른 아미노산 서열을 가지고 경쇄 가변 영역 (VL)은 바람직하게는 서열목록 번호: 81 에 따른 아미노산 서열을 가진다.
"gZKA230"은, 서열목록 번호: 37 에 따른 CDRH1 아미노산 서열, 서열목록 번호: 38 에 따른 CDRH2 아미노산 서열, 서열목록 번호: 39 에 따른 CDRH3 아미노산 서열, 서열목록 번호: 40 에 따른 CDRL1 아미노산 서열, 서열목록 번호: 41 또는 42 에 따른 CDRL2 아미노산 서열 및 서열목록 번호: 43 에 따른 CDRL3 아미노산 서열을 가지는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 지칭한다. 중쇄 가변 영역 (VH)은 바람직하게는 서열목록 번호: 44 에 따른 아미노산 서열을 가지고 경쇄 가변 영역 (VL)은 바람직하게는 서열목록 번호: 45 에 따른 아미노산 서열을 가진다.
"gZKA185"은, 서열목록 번호: 19 에 따른 CDRH1 아미노산 서열, 서열목록 번호: 20 에 따른 CDRH2 아미노산 서열, 서열목록 번호: 21에 따른 CDRH3 아미노산 서열, 서열목록 번호: 22 에 따른 CDRL1 아미노산 서열, 서열목록 번호: 23 또는 24 에 따른 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열목록 번호: 25 에 따른 CDRL3 아미노산 서열을 가지는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 지칭한다. 중쇄 가변 영역 (VH) 은 바람직하게는 서열목록 번호: 26에 따른 아미노산 서열을 가지고 경쇄 가변 영역 (VL)은 바람직하게는 서열목록 번호: 27 에 따른 아미노산 서열을 가진다.
"gZKA78"은, 서열목록 번호: 55 에 따른 CDRH1 아미노산 서열, 서열목록 번호: 56에 따른 CDRH2 아미노산 서열, 서열목록 번호: 57 에 따른 CDRH3 아미노산 서열, 서열목록 번호: 58 에 따른 CDRL1 아미노산 서열을 갖는, 서열목록 번호: 59 또는 60 에 따른 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열목록 번호: 61에 따른 CDRL3 아미노산 서열을 가지는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 지칭한다. 중쇄 가변 영역 (VH)은 바람직하게는 서열목록 번호: 62 에 따른 아미노산 서열을 가지고 경쇄 가변 영역 (VL)은 바람직하게는 서열목록 번호: 63에 따른 아미노산 서열을 가진다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 약제 용도를 위한 것이다. 다시 말해서, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 약제의 제조에 사용될 수 있다. 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 지카 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에의 용도를 위한 것이다. 다시 말해서, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 지카 바이러스 감염의 약제의 제조 또는 예방 및/또는 치료에의 용도에 사용될 수 있다. 본 측면은 하기에서 보다 구체적으로 기술된다.
핵산 분자
또다른 측면에서, 본 발명은 또한 상기 기술된 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 분자를 제공한다. 핵산 분자 및/또는 폴리뉴클레오티드의 예는, 일례로, 재조합 폴리뉴클레오티드, 벡터, 올리고뉴클레오티드, RNA 분자 예컨데 rRNA, mRNA, miRNA, siRNA, 또는 tRNA, 또는 DNA 분자 예컨데 cDNA를 포함한다. 본 발명의 항체의 경쇄 또는 중쇄 및 CDR의 일부 또는 전부를 암호화하는 핵산 서열이 바람직하다. 바람직하게는 따라서 경쇄 또는 중쇄의 일부 또는 전부, 구체적으로 본 발명의 예시적인 항체의 VH 및 VL 서열 및 CDR을 암호화하는 핵산 서열이 본 명세서에 제공된다. 표 1 및 2는 본 발명에 따른 예시적인 항체의 CDR 및 VH 및 VL을 암호화하는 핵산 서열을 위한 서열목록 번호를 제공한다.
표 3은 하기에 본 발명에 따른 예시적인 항체의 CDR 및 VH 및 VL을 암호화하는 예시적인 핵산 서열을 위한 서열목록 번호를 제공한다. 유전 부호의 중복성으로 인해, 본 발명은 또한 이들 핵산 서열의 서열 변종 및, 구체적으로 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 그러한 서열 변종을 포함한다.
핵산 분자는 핵산 성분을 포함하는, 바람직하게는 이로 구성되는 분자이다. 용어 핵산 분자는 바람직하게는 DNA 또는 RNA 분자를 지칭한다. 구체적으로, 이는 용어 "폴리뉴클레오티드"와 동의어로 사용된다. 바람직하게는, 핵산 분자는 설탕/포스페이트-중추(backbone)의 포스포디에스테르-결합에 의해 서로 공유적으로 연결된 뉴클레오티드 단량체를 포함하거나 또는 이로 구성되는 중합체이다. 용어 "핵산 분자"는 또한 변형된 핵산 분자, 예컨데 염기-변형된, 설탕-변형된 또는 중추-변형된 등등, DNA 또는 RNA 분자를 아우른다.
표 3은 본 발명에 따른 다섯 개의 예시적인 항체("ZKA190", "ZKA64", "ZKA230", "ZKA185", "ZKA78")의 CDR 및 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)의 예시적인 핵산 서열을 보여준다:
ZKA190 서열목록 번호 핵산 서열
CDRH1 10 ggattcaccttcagtaaatatggc
CDRH2 11 atatcatatgagggaagtaataaa
CDRH3 12 gcgaaatcggggacccaatactatgatactactggttatgagtataggggtttggaatactttggctac
CDRL1 13 cagagtgttagtagcagttac
CDRL2 14 gatgcatcc
CDRL2 long 15 ctcatctatgatgcatccagcagggcc
CDRL3 16 cagcagtatggtaggtcaaggtggaca
VH 17 caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaaatatggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatcatatgagggaagtaataaatattatgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagctgaggacacggcagtgtattactgtgcgaaatcggggacccaatactatgatactactggttatgagtataggggtttggaatactttggctactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcag
VL 18 gaaattgtgttgacgcagtctccaggcaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtgttagtagcagttacttagcctggtaccagcagaaacgtggccaggctcccaggctcctcatctatgatgcatccagcagggccactggcatcccagacaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagactggagcctgaagattttgcagtgtattactgtcagcagtatggtaggtcaaggtggacattcggccaagggaccaaggtggaaatcaaac
ZKA185 서열목록 번호 핵산 서열
CDRH1 28 ggatatagttttaccagttactgg
CDRH2 29 tttgatcctagtgactctcaaacc
CDRH3 30 gcgagaagatattgtagtagtagtagttgttatgtggacaat
CDRL1 31 gcattgccaaataaattt
CDRL2 32 gaggacaac
CDRL2 long 33 gtcatctatgaggacaacaaacgaccc
CDRL3 34 tactcaacagacagcagttctaatcccctgggagta
VH 35 gaagtgcagctggtgcagtccggagcagaggtgaaaaagcccggggagtctctgaggatctcctgtaagggttctggatatagttttaccagttactggatcacctgggtgcgccagatgcccgggaaaggcctggagtggatggcgaagtttgatcctagtgactctcaaaccaactacagcccgtccttccaaggccacgtcaccatctcagttgacaagtccatcagcactgcctacttgcagtggagcagcctgaaggcctcggacaccgccatgtattactgtgcgagaagatattgtagtagtagtagttgttatgtggacaattggggccagggaaccctggtcaccatcttctcag
VL 36 tcctatgagctgacacagccaccctcggtgtcagtgtccccaggacaaacggccaggatcacctgctctggagatgcattgccaaataaatttgcttattggtaccggcagaagtcaggccaggcccctgttctggtcatctatgaggacaacaaacgaccctccgggatccctgagagattctctggctccagctcagggacaatggccaccttgactatcagtggggcccaggtggaggatgaagctgactaccactgttactcaacagacagcagttctaatcccctgggagtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctag
ZKA230 서열목록 번호 핵산 서열
CDRH1 46 ggtggctccatcagtagtgactac
CDRH2 47 atctattacagtgggagcacc
CDRH3 48 gcgaggaggaggaagtatgattccctttgggggagttttgcttttgatatc
CDRL1 49 agctccaacatcggaggtaattat
CDRL2 50 attaatgat
CDRL2 long 51 ctcatctgtattaatgatcaccggccc
CDRL3 52 gcaacatgggatgacagcctgggtggccttgta
VH 53 caggtgcagctgcaggagtcgggcccaggcctggtgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcgcagtctctggtggctccatcagtagtgactactggagctggatccggcagcccccagggaagggactggagtggattgggtatatctattacagtgggagcaccaactacaacccctccctcaagagtcgagtcaccatatcagtagacacgtccaagaaccacttctccctgaagctgaactctgtgaccgctgcggacacggccgtgtattactgtgcgaggaggaggaagtatgattccctttgggggagttttgcttttgatatctggggccaagggacaatggtcaccgtctcttcag
VL 54 cagtctgtgctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatctcttgttctggaagcagctccaacatcggaggtaattatgtatactggtaccagcagctcccaggaacggcccccaaactcctcatctgtattaatgatcaccggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccagtccgaggatgaggctgattattactgtgcaacatgggatgacagcctgggtggccttgtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctag
ZKA78 서열목록 번호 핵산 서열
CDRH1 64 ggcttcacttttagtaactatgca
CDRH2 65 atcgggcgcaacggggactctatc
CDRH3 66 gtgaaagatctggccatccccgagtcctacagaattgaagctgattat
CDRL1 67 cagtccgtgctgtaccgctctaacaacaagaattac
CDRL2 68 tgggcttca
CDRL2 long 69 ctgatctattgggcttcaacccgggaa
CDRL3 70 cagcagtactattctagtcctcgaact
VH 71 gaggtgcagctggcagaatcaggcgggggactggtccagcctggcggcagcctgacactgtcttgcagtggatcaggcttcacttttagtaactatgcaatggtgtgggcaaggcaggctcctgggaagggactggagtatgtctctggcatcgggcgcaacggggactctatctactatactgatagtgtgaagggccggttcaccatcagcagagacaatagcaaatccatggtgtacctgcagatgagctccctgcgaaccgaagacacagcagtgtactattgcgtgaaagatctggccatccccgagtcctacagaattgaagctgattattggggacagggcaccctggtcatcgtgagcgccg
VL 72 gacatcgtgatgacacagtctccagatagtctggcagtcagtctgggggagagggccactattaactgcaagagctcccagtccgtgctgtaccgctctaacaacaagaattacctgtcttggtatcagcagaagcccggacagccccctaaactgctgatctattgggcttcaacccgggaaagcggcgtcccagacagattctcaggcagcgggtccggaacagacttcaccctgacaattagccccctgcaggcagaggacgtggctgtctactattgtcagcagtactattctagtcctcgaactttcggccaggggaccaaggtggaaatcaaac
ZKA64 서열목록 번호 핵산 서열
CDRH1 82 ggctacaccttcacagggtatcac
CDRH2 83 attaaccctaattctggcgggacc
CDRH3 84 gctcggatgagctcctctatttggggcttcgatcat
CDRL1 85 cagtctgtgctgattaac
CDRL2 86 ggagcatcc
CDRL2 long 87 ctgatctatggagcatcctccagggct
CDRL3 88 cagcagtacaatgattggccccctatcaca
VH 89 caggtgcagctggtccagagcggagcagaggtgaagaaacccggcgcctcagtgaaggtcagctgcaaagcttccggctacaccttcacagggtatcacatcgactgggtgaggcaggcaagaggacagggactggaatggatgggacggattaaccctaattctggcgggaccaactacgcccagaagtttcagggccgagtgactatgaccagagacaccagcatctccacagcttatatgcagctgtcccggctgagatctgacgatagtgccgtctactattgtgctcggatgagctcctctatttggggcttcgatcattgggggcagggaacactggtgactgtcagttcag
VL 90 gagatcgtgatgactcagtctccagccaccctgtcagtcagcccaggagaacgggcaaccctgtcttgcagagcctcccagtctgtgctgattaacctggcttggtaccagcagaagccaggccaggcaccccgactgctgatctatggagcatcctccagggctaccggcattcctgcacgcttcagtggatcaggaagcggaacagagtttaccctgacaatctctagtctgcagtccgaagacttcgctgtctactattgtcagcagtacaatgattggccccctatcacatttggccaggggactagactggagatcaagc
바람직하게는, 본 발명에 따른 핵산 분자의 서열은 서열목록 번호: 10 - 18, 28 - 36, 46 - 54, 64 - 72, 및 82 - 90 중 임의의 하나 또는 그의 기능적 서열 변종에 따른 핵산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된다.
본 발명에 따른 핵산 서열은, 본 발명에 따른 (예시적인) 항체에서 사용된 CDR, VH 서열 및/또는 VL 서열을 암호화하는 핵산, 예를 들면 표 3에 보여진 서열과 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한　90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 일치성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 것이 또한 바람직하다.
일반적으로, 핵산 분자는 특정한 핵산 서열을 삽입, 삭제 또는 변경하여 조작될 수 있다. 이러한 조작으로부터의 변화는, 이에 제한되지 않지만, 제한 부위를 도입, 코돈 사용을 수정, 전사 및/또는 번역 조절 서열을 추가 또는 최적화하는, 등등의 변화를 포함한다. 또한 핵산을 변화하여 암호화된 아미노산을 변경하는 것도 가능한다. 예를 들면, 항체의 아미노산 서열 내로 하나 이상의 (일례로, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 등등.) 아미노산 치환, 삭제 및/또는 삽입을 도입하는 것이 유용할 수 있다. 이러한 점 돌연변이는 작동자 기능, 항원-결합 친화성, 번역후 변형, 면역원성, 등등을 변형할 수 있고, 공유기(일례로, 표지)의 부착을 위해 아미노산을 도입할 수 있고 또는 태그를 (일례로, 정제 목적을 위해) 도입할 수 있다. 돌연변이는 특이적 부위에 도입될 수 있거나 또는, 선택에 뒤이어 (일례로, 분자 진화) 무작위로 도입될 수 있다. 사례를 들면, 본 발명의 (예시적인) 항체의 임의의 CDR 영역, VH 서열 및/또는 VL 서열을 암호화하는 하나 이상의 핵산은 암호화된 아미노산 내에 상이한 성질을 도입하도록 무작위로 또는 지향적으로 돌연변이될 수 있다. 이러한 변화는 초기 변화는 보유되고 다른 뉴클레오티드 위치에서의 새로운 변화는 도입되는 반복적 공정의 결과일 수 있다. 더욱이, 비의존적 단계에 도달된 변화는 조합될 수 있다. 암호화된 아미노산에 도입된 상이한 성질은, 이에 제한되지 않지만, 증진된 친화성을 포함할 수 있다.
벡터
본 발명의 범주 내에 벡터, 예를 들면, 본 발명에 따른 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터가 더욱 포함된다. 바람직하게는, 벡터는 상기 기술된 핵산 분자를 포함한다.
용어 "벡터"는 핵산 분자, 바람직하게는 재조합 핵산 분자, 즉 자연적으로 발생하지 않는 핵산 분자를 지칭한다. 벡터는 본 발명의 내용에서 원하는 핵산 서열을 통합하거나 정박하기에 적합하다. 이러한 벡터는 저장 벡터, 발현 벡터, 클로닝 벡터, 이동 벡터 등등일 수 있다. 저장 벡터는 핵산 분자의 편리한 저장을 허용하는 벡터이다. 따라서, 벡터는, 일례로, 본 발명에 따른 원하는 항체 또는 그의 항체 단편에 대응하는 서열을 포함할 수 있다. 발현 벡터는 발현 산물, 예컨데 RNA, 일례로 mRNA, 또는 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질의 생산에 사용될 수 있다. 예를 들면, 발현 벡터는 벡터의 서열 신장의 전사에 필요한 서열, 예컨데 프로모터 서열을 포함할 수 있다. 클로닝 벡터는 전형적으로 클로닝 부위를 함유하는 벡터이고, 이는 벡터 내로 핵산 서열을 통합하는데 사용될 수 있다. 클로닝 벡터는, 일례로, 플라스미드 벡터 또는 박테리오파지 벡터일 수 있다. 이동 벡터는 세포 또는 유기체 내로 이동하는데 적합한 벡터, 예를 들면, 바이러스 벡터일 수 있다. 벡터는 본 발명의 내용에서, 일례로, RNA 벡터 또는 DNA 벡터일 수 있다. 바람직하게는, 벡터는 DNA 분자이다. 예를 들면, 벡터는 본 명세서의 의미에서 클로닝 부위, 선택 마커, 예컨데 항생제 내성 인자, 및 벡터의 증식에 적합한 서열, 예컨데 복제 원점을 포함한다. 바람직하게는, 현재 명세서의 내용에서 벡터는 플라스미드 벡터이다.
세포
부가적 측면에서, 본 발명은 또한 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 발현하는; 및/또는 본 발명에 따른 벡터를 포함하는 세포를 제공한다.
이러한 세포의 예는 이에 제한되지 않지만, 진핵 세포, 일례로, 효모 세포, 동물 세포 또는 식물 세포를 포함한다. 바람직하게는, 세포는 포유류 세포, 더 바람직하게는 포유류 세포주이다. 바람직한 예는 인간 세포, CHO 세포, HEK293T 세포, PER.C6 세포, NS0 세포, 인간 간 세포, 골수종 세포 또는 하이브리도마 세포를 포함한다.
구체적으로, 세포는 본 발명에 따른 벡터로, 바람직하게는 발현 벡터와 함께, 형질주입될 수 있다. 용어 "형질주입"은 핵산 분자, 예컨데 DNA 또는 RNA (일례로 mRNA) 분자의, 세포 내로, 바람직하게는 진핵 세포 내로의 도입을 지칭한다. 본 발명의 내용에서, 용어 "형질주입"은 세포 내로, 바람직하게는 진핵 세포 내로, 예컨데 포유류 세포 내로 핵산 분자를 도입하기 위해 당해 기술자들에게 알려진 임의의 방법을 아우른다. 이러한 방법은, 예를 들면, 전기천공, 일례로 양이온성 지질 및/또는 리포솜에 기초한 리포펙션, 인산칼슘 침전, 형질주입에 기초한 나노입자, 형질주입에 기초한 바이러스, 또는 양이온성 중합체, 예컨데 DEAE-덱스트란 또는 폴리에틸렌이민(polyethylenimine) 등등에 기초한 형질주입을 아우른다. 바람직하게는, 도입은 비-바이러스성이다.
게다가, 본 발명의 세포는, 일례로 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 발현하기 위해, 본 발명에 따른 벡터로 안정적으로 또는 일시적으로 형질주입될 수 있다. 바람직하게는, 세포는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 암호화하는 본 발명에 따른 벡터로 안정적으로 형질주입된다. 대안적으로, 또한 세포는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 암호화하는 본 발명에 따른 벡터로 일시적으로 형질주입되는 것이 바람직하다.
항체의 선택적 추가적 특성
본 발명의 항체는, 예를 들면, 치료 부위에 전달을 위한 약물에 커플링되거나 또는 관심 세포를 포함하는 부위의 이미징을 촉진하는 검출가능한 표지에 커플링될 수 있다. 항체를 약물 및 검출가능한 표지에 커플링하는 방법은, 검출가능한 표지를 사용한 이미징을 위한 방법처럼, 당해 분야에 잘 알려져 있다. 표지된 항체는, 광범위한 표지를 써서, 광범위한 어세이에서 쓰여질 수 있다. 본 발명의 항체와 관심 에피토프 사이의 항체-항원 복합체의 형성의 검출은 검출 가능한 물질의 부착에 의해 촉진될 수 있다. 적합한 검출 수단은 표지의 사용, 예컨데 방사성핵종(radionuclides), 효소, 조효소, 형광물질, 화학발광제, 색소원(chromogen), 효소 기질 또는 보조-인자(co-factors), 효소 억제제, 보조군 복합체(prosthetic group complexes), 자유 라디칼, 입자, 염료, 및 등등을 포함한다. 적합한 효소의 예는 호스래디쉬 퍼록시다아제(horseradish peroxidase), 알카린 포스파타아제(alkaline phosphatase), β-갈락토시다아제(galactosidase), 또는 아세틸콜린에스테라아제(acetylcholinesterase)를 포함하고; 적합한 배합군 복합체의 예는 스트렙타비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴을 포함하고; 적합한 형광 물질의 예는 움벨리페론(umbelliferone), 플루오레세인(fluorescein), 플로오레세인 이소시오시아네이트(fluorescein isothiocyanate), 로다민(rhodamine), 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인(dichlorotriazinylamine fluorescein), 단실 클로라이드(dansyl chloride) 또는 파이코에리스린(phycoerythrin)을 포함하고; 발광 물질의 예는 루미놀(luminol)이다; 생물발광 물질의 예는 루시퍼라아제(luciferase), 루시페린(luciferin), 및 애큐오린(aequorin)을 포함하고; 및 적합한 방사성 물질의 예는125I, 131I, 35S, 또는　3H를 포함한다. 이러한 표지된 시약은 다양한 잘 알려진 어세이, 예컨데 방사선면역측정법, 효소 면역측정법, 일례로, ELISA, 형광 면역측정, 및 등등에서 사용될 수 있다. 표지된 본 발명에 따른 항체는 따라서, 예를 들면 US 3,766,162; US 3,791,932; US 3,817,837; 및 US 4,233,402에 기술된 이러한 어세이에서 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 항체는 치료 모이어티, 예컨데 세포독소, 치료제, 또는 방사성 금속 이온 또는 방사성 동위원소에 접합될 수 있다. 방사성 동위원소의 예는, 이에 제한되지 않지만, I-131, I-123, I-125, Y-90, Re-188, Re-186, At-211, Cu-67, Bi-212, Bi-213, Pd-109, Tc-99, In-111, 및 등등을 포함한다. 이러한 항체 접합체는 주어진 생물학적 반응을 변형하기 위해 사용될 수 있고; 약물 모이어티는 전통적인 화학적 치료제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들면, 약물 모이어티는 원하는 생물학적 활성을 보유하는 단백질 또는 폴리펩티드일 수 있다. 이러한 단백질은, 예를 들면, 독소, 예컨데 아브린(abrin), 리신 A(ricin A), 슈도모나스 외독소(pseudomonas exotoxin), 또는 디프테리아 독소(diphtheria toxin)를 포함할 수 있다.
이러한 치료 모이어티를 항체에 접합하기 위한 테크닉은 잘 알려져 있다. 예를 들면, Arnon et al. (1985) "Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, ed. Reisfeld et al. (Alan R. Liss, Inc.), pp. 243-256; ed. Hellstrom et al. (1987) "Antibodies for Drug Delivery," in Controlled Drug Delivery, ed. Robinson et al. (2d ed; Marcel Dekker, Inc.), pp. 623-653; Thorpe (1985) "Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review," in Monoclonal Antibodies '84: Biological and Clinical Applications, ed. Pinchera et al. pp. 475-506 (Editrice Kurtis, Milano, Italy, 1985); "Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, ed. Baldwin et al. (Academic Press, New York, 1985), pp. 303-316; and Thorpe et al. (1982) Immunol. Rev. 62:119-158를 참조해라.
대안적으로, 항체, 또는 그의 항체 단편은, US 4,676,980에 기술된 것처럼 항체 이형접합체(heteroconjugate)를 형성하기 위해, 두 번째 항체, 또는 그의 항체 단편에 접합될 수 있다. 더불어, 링커는, 일례로, US 4,831,175에 기술된 것처럼, 표지와 본 발명의 항체 사이에 사용될 수 있다. 항체 또는, 그의 항원-결합 단편은 방사성 요오드, 인듐(indium), 이트륨(yttrium), 또는 당해 분야에 알려진 다른 방사성 입자와, 일례로, US 5,595,721에 기술된 것처럼, 직접적으로 표지될 수 있다. 치료는, 일례로,　WO 00/52031; WO 00/52473에 기술된 것처럼, 동시에 또는 순차로 투여되는 접합된 및 비-접합된 항체의 치료의 조합으로 구성될 수 있다.
본 발명의 항체는 또한 고형 지지체에 부착될 수 있다. 추가적으로, 본 발명의 항체, 또는 그의 기능적 항체 단편은, 예를 들면, 그들의 순환 반감기를 증가시키기 위해, 공유적 접합에 의해 화학적으로 변형될 수 있다. 중합체, 및 펩티드에 그들을 부착하는 방법의 예는, US 4,766,106; US　4,179,337; US 4,495,285 및 US 4,609,546에서 보여준다. 몇몇 구현예에서 중합체는 폴리옥시에틸레이티드 폴리올 및 폴리옥시에틸렌 글리콜(PEG)로부터 선택될 수 있다. PEG는 실온에서 수용성이고 다음 일반식을 가진다: R(O-CH2-CH2)nO-R, 여기서 R 은 수소, 또는 예컨데 알킬 또는 알칸올 기 같은 보호기일 수 있다. 바람직하게는, 보호기는1 내지 8 개의 탄소를 가질 수 있다. 예를 들면, 보호기는 메틸이다. 심볼 n은 양의 정수이다. 일 구현예에서 n은 1 내지 1,000이다. 또다른 구현예에서 n은 2 내지 500이다. 바람직하게는, PEG는 1,000 내지 40,000의 평균 분자량을 가지고, 더 바람직하게는 PEG는 2,000 내지 20,000의 분자량을 가지고, 보다 더 바람직하게는 PEG는 3,000 내지 12,000의 분자량을 가진다. 뿐만 아니라, PEG는 최소한 한 개의 하이드록시 기를 가질 수 있고, 예를 들면 PEG는 말단 하이드록시 기를 가질 수 있다. 예를 들면, 이것은 억제제 위에서 자유 아미노 기와 반응하도록 활성화된 말단하이드록시 기이다. 하지만, 반응기의 유형 및 양은 본 발명의 공유적으로 접합된 PEG/항체를 도달하기 위해 달라질 수 있다는 것이 이해될 것이다.
수용성 폴리옥시에틸레이티드 폴리올은 또한 본 발명에서 유용하다. 그들은 폴리옥시에틸레이티드 솔비톨, 폴리옥시에틸레이티드 글루코즈, 폴리옥시에틸레이티드 글리세롤 (POG), 및 등등을 포한한다. 일 구현예에서, POG 가 사용된다. 임의의 이론에 의해 구속됨 없이, 폴리옥시에틸레이티드 글리세롤의 글리세롤 중추는, 예를 들면, 동물 및 인간 내에서 모노-, 디-, 트리글리세라이드로 자연적으로 발생하는 동일한 중추이기 때문에, 이 분지(branching)는 필연적으로 체내에서 외부 물질로 보여지지 않을 것이다. POG는 PEG와 동일한 범위의 분자량을 가질 수 있다. 순환 반감기를 증가시키기 위해 사용될 수 있는 또다른 약물 전달 시스템은 리포솜이다. 리포솜 전달 시스템을 준비하는 방법은 당해 분야의 기술자에게 알려져 있다. 다른 약물 전달 시스템은 당해 분야에 알려져 있고, 예를 들면, Poznansky et al. (1980) 및 Poznansky　(1984)에 참조된 것에 기술되어 있다.
본 발명의 항체는 정제된 형태로 제공될 수 있다. 전형적으로, 항체는 실질적으로 다른 폴리펩티드를 포함하지 않는 조성물 내에 존재할 것이고, 일례로, 여기서 조성물의 90% (중량으로) 미만, 통상적으로 60% 미만 및 더 통상적으로 50% 미만이 다른 폴리펩티드로 구성된다.
본 발명의 항체는 비-인간 (또는 이종) 숙주 내에서, 일례로, 마우스 내에서 면역원성일 수 있다. 구체적으로, 항체는 비-인간 숙주 내에서는 면역원성이지만, 인간 숙주 내에서는 아닌 이디오토프를 가질 수 있다. 구체적으로, 인간 용도를 위한 본 발명의 항체는 예컨데 마우스, 염소, 토끼, 래트, 비-영장류 포유류, 등등과 같은 숙주로부터 쉽게 단리될 수 없고 인간화에 의해 또는 제노-마우스로부터 일반적으로 획득될 수 없는 것들을 포함한다.
항체의 생산
본 발명에 따른 항체는 당해 분야에서 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들면, 하이브리도마 테크놀로지를 사용하여 단일클론 항체를 만들기 위한 일반적인 방법론은 잘 알려져 있다 (Kohler, G. and Milstein, C,. 1975; Kozbar et al. 1983). 일 구현예에서, WO 2004/076677에 기술된 대안적인 EBV 불멸화 방법이 사용된다.
바람직한 방법은 WO 2004/076677에 기술되어 있다. 이 방법에서 본 발명의 항체를 생산하는 B 세포는 EBV 및 다클론 B 세포 활성제와 형질전환된다. 세포 성장 및 분화의 추가적 자극제는 형질전환 단계 동안 효율성을 부가 증진시키기 위해 선택적으로 추가될 수 있다. 이들 자극제는 예컨데 IL-2 및 IL-15 같은 사이토킨일 수 있다. 일 측면에서, IL-2는 불멸화 단계 동안 불멸화의 효율성을 부가 개선하기 위해 추가되지만, 그러나 이의 사용은 필수적이 아니다. 이들 방법을 사용해 생산된 불멸화된 B 세포는 그러고는 당해 분야에 알려진 방법 및 그로부터 단리된 항체를 사용해 배양될 수 있다.
또다른 바람직한 방법은 WO 2010/046775에 기술되어 있다. 이 방법에서 형질 세포는 제한된 수로, 또는 마이크로웰 배양 접시에서 단일 형질 세포로 배양된다. 항체는 형질 세포 배양으로부터 단리될 수 있다. 더욱이, 형질 세포 배양으로부터, RNA는 추출될 수 있고 PCR은 당해 분야에 알려진 방법을 사용해 수행될 수 있다. 항체의 VH 및 VL 영역은 RT-PCR (역전사효소 PCR)에 의해 증폭되고, 서열화되고 발현 벡터로 클로닝될 수 있고 이는 그러고는 HEK293T 세포 또는 다른 숙주 세포 내로 형질주입된다. 발현 벡터 내 핵산의 클로닝, 숙주 세포의 형질주입, 형질주입된 숙주 세포의 배양 및 생산된 항체의 단리는 당해 분야의 기술자에게 알려진 임의의 방법을 사용하여 될 수 있다.
항체는, 원한다면, 여과, 원심분리 및 예컨데 HPLC 또는 친화성 크로마토그래피 같은 다양한 크로마토그래피 방법을 사용해, 부가 정제될 수 있다. 항체, 일례로, 단일클론 항체의 정제를 위한 테크닉은, 약학적-등급 항체를 생산하기 위한 테크닉을 포함하여, 당해 분야에 잘 알려져 있다.
본 발명의 항체의 단편은 효소, 예컨데 펩신 또는 파파인과의 소화를 포함하는 방법에 의해 및/또는 화학적 환원에 의한 이황 결합의 분해에 의해 항체로부터 획득될 수 있다. 대안적으로, 항체의 단편은 중쇄 또는 경쇄의 서열의 일부의 클로닝 및 발현에 의해 획득될 수 있다. 항체 "단편"은 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편을 포함한다. 본 발명은 또한 본 발명의 항체의 중쇄 및 경쇄로부터 유래된 단일-사슬 Fv 단편 (scFv)을 아우른다. 예를 들면, 본 발명은 본 발명의 항체로부터의 CDR을 포함하는 scFv를 포함한다. 또한 중쇄 또는 경쇄 단량체 및 이량체, 단일 도메인 중쇄 항체, 단일 도메인 경쇄 항체는 물론, 단일사슬 항체, 일례로, 그 내에서 펩티드 링커에 의해 중쇄 및 경쇄 가변 도메인이 합쳐지는 단일사슬 Fv도 포함된다.
본 발명의 항체 단편은 일가(monovalent) 또는 다가(multivalent) 상호작용을 전해줄 수 있고 상기 기술된 것처럼 다양한 구조에 함유될 수 있다. 사례를 들면, scFv 분자는 삼가의 "트리아바디" 또는 사가의 "테트라바디"를 생성하기 위해 합성될 수 있다. scFv 분자는 이가의 미니바디를 가져오는 Fc 영역의 도메인을 포함할 수 있다. 더불어, 본 발명의 서열은 본 발명의 서열이 본 발명의 에피토프를 타겟하고 분자의 다른 영역은 다른 타겟에 결합하는 다가특이성 분자의 성분이 될 수 있다. 예시적인 분자는, 이에 제한되지 않지만, 이중특이적 Fab2, 삼중특이적 Fab3, 이중특이적 scFv, 및 디아바디를 포함한다 (Holliger andHudson, 2005, Nature Biotechnology 9: 1126-1136).
분자 생물학의 표준 테크닉이 본 발명의 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 DNA 서열을 제조하기 위해 사용될 수 있다. 원하는 DNA 서열은 올리고뉴클레오티드 합성 기술을 사용해 완전하게 또는 부분적으로 합성될 수 있다. 부위-특이적 돌연변이 및 중합효소 연쇄 반응(PCR) 기술은 적당하게 사용될 수 있다.
임의의 적합한 숙주 세포/벡터 시스템이 본 발명의 항체 분자 또는 그의 단편을 암호화하는 DNA 서열의 발현을 위해 사용될 수 있다. 박테리아, 예를 들면 E. coli, 및 다른 미생물 시스템이, 예컨데 Fab 및 F(ab')2 단편, 및 특별히 Fv 단편 및 단쇄 항체 단편, 예를 들면, 단쇄 Fvs 같은 항체 단편의 발현을 위해, 부분적으로, 사용될 수 있다. 진핵, 일례로, 포유류, 숙주 세포 발현 시스템이, 전체 항체 분자를 포함하는, 더 큰 항체 분자의 생산을 위해 사용될 수 있다. 적합한 포유류 숙주 세포는, 이에 제한되지 않지만, CHO, HEK293T, PER.C6, NS0, 골수종 또는 하이브리도마 세포를 포함한다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체 분자를 암호화하는 DNA로부터의 단백질의 발현을 위해 적합한 상태 하에서 본 발명의 핵산을 암호화하는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 배양하는, 및 항체 분자를 단리하는 단계를 포함하는, 본 발명에 따른 항체 분자의 생산을 위한 공정을 제공한다.
항체 분자는 오직 중쇄 또는 경쇄 폴리펩티드를 포함할 수 있고, 이 경우 오직 중쇄 또는 경쇄 폴리펩티드 코딩 서열은 숙주 세포 형질주입에 사용되는 것이 필요하다. 중쇄 및 경쇄 모두를 포함하는 산물의 생산을 위해, 세포주는 두 개의 벡터, 경쇄 폴리펩티드를 암호화하는 첫 번째 벡터 및 중쇄 폴리펩티드를 암호화하는두 번째 벡터로 형질주입될 수 있다. 대안적으로, 단일 벡터, 경쇄 및 중쇄 폴리펩티드를 암호화하는 서열을 포함하는 벡터가 사용될 수 있다. 대안적으로, 본 발명에 따른 항체는 (i) 숙주 세포 내에서 본 발명에 따른 핵산 서열을 발현하는 단계, 일례로 본 발명에 따른 벡터의 사용에 의해, 및 (ii) 발현된 항체 산물을 단리하는 단계에 의해 생산될 수 있다. 추가적으로, 방법은 (iii) 단리된 항체를 정제하는 단계를 포함할 수 있다. 형질전환 B 세포 및 배양된 형질 세포는 원하는 특이성 및 기능의 항체를 생산하는 것들로 스크리닝될 수 있다.
스크리닝 단계는 임의의 면역어세이, 일례로, ELISA, 조직 또는 세포 (형질주입된 세포를 포함)의 염색에 의해, 중화 어세이에 의해 또는 원하는 특이성 또는 기능을 확인하기 위해 당해 분야에 알려진 많은 다른 방법 중 하나에 의해 실행될 수 있다. 어세이는 하나 이상의 항원의 간단한 인지에 기초하여 선택하거나, 또는 원하는 기능에 추가로 기초하여 선택, 일례로, 단지 항원-결합 항체 보다 중화 항체를 선택, 타겟된 세포의 특징, 예컨데 그들의 신호전달경로, 그들의 모양, 그들의 성장 속도, 다른 세포에 영향 미치는 그들의 능력, 다른 세포에 의한 또는 다른 시약에 의한 또는 상태의 변화에 의한 영향에 대한 그들의 반응, 그들의 분화 상태 등등을 변화시킬 수 있는 항체를 선택할 수 있다.
개별적 형질전환 B 세포 클론은 그러고는 양성 형질전환 B 세포 배양으로부터 생산될 수 있다. 양성 세포의 혼합물로부터 개별적 클론을 분리하기 위한 클로닝 단계는 한계 희석(limiting dilution), 미세조작(micromanipulation), 세포 분류에 의한 단일 세포 침전 또는 당해 분야에 알려진 또다른 방법을 사용해 실행될 수 있다.
배양된 형질 세포로부터의 핵산은 당해 분야에서 알려진 방법을 사용하여 단리, 클론되고 및 HEK293T 세포 또는 다른 알려진 숙주 세포에서 발현될 수 있다.
본 발명의 불멸화된 B 세포 클론 또는 형질주입된 숙주 세포는 다양한 방식으로, 일례로, 단일클론 항체의 급원으로, 관심의 단일클론 항체를 암호화하는 핵산 (DNA 또는 mRNA)의 급원으로, 연구를 위해, 등등에 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 항체를 생산하는 불멸화된 B 기억 세포 또는 형질주입된 숙주 세포를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 발명의 불멸화된 B 세포 클론 또는 배양된 형질 세포는 또한 순차적 재조합 발현을 위한 항체 유전자의 클로닝을 위한 핵산의 급원으로 사용될 수 있다. 재조합 급원으로부터의 발현은, 일례로, 안정성, 재현성, 배양 용이성, 등등의 원인으로, B 세포 또는 하이브리도마로부터의 발현 보다 약학적 목적에서 더 흔하다.
따라서 본 발명은 또한 재조합 세포를 제조하는 방법을 제공하고, 이는 (i) 관심 항체를 암호화하는 B 세포 클론 또는 배양된 형질 세포로부터 하나 이상의 핵산 (일례로, 중쇄 및/또는 경쇄 mRNA)을 획득하는 단계; (ii) 발현 벡터 내로 핵산을 삽입하는 단계 및 (iii) 숙주 세포 내에서 관심 항체의 발현을 허용하기 위해 숙주 세포 내로 벡터를 형질주입하는 단계를 포함한다.
유사하게, 본 발명은 재조합 세포를 제조하는 방법을 제공하고, 이는 (i) 관심 항체를 암호화하는B 세포 클론 또는 배양된 형질 세포로부터 핵산(들)을 시퀀싱하는 단계; 및 (ii) 숙주 세포 내에서 관심 항체의 발현을 허용하기 위해 단계 (i)로부터 얻은 서열 정보를 사용해 숙주 세포 내로 삽입하기 위한 핵산(들)을 제조하는 단계를 포함한다. 핵산은, 그럴 필요는 없지만, 단계 (i) 및 (ii) 사이에, 제한 부위를 도입, 코돈 사용을 변화, 및/또는 전사 및/또는 번역 조절 서열을 최적화하여 조작될 수 있다.
뿐만 아니라, 본 발명은 또한 관심 항체를 암호화하는 하나 이상의 핵산으로 숙주 세포를 형질주입하는 단계를 포함하는 형질주입된 숙주 세포를 제조하는 방법을 제공하고, 여기서 핵산은 본 발명의 불멸화된 B 세포 클론 또는 배양된 형질 세포로부터 유래된 핵산이다. 따라서 먼저 핵산(들)을 제조하고 그러고는 이를 사용해 숙주 세포를 형질주입하는 절차가 상이한 시간에 상이한 사람에 의해 상이한 장소에서 (일례로, 상이한 국가에서) 수행될 수 있다.
본 발명의 이들 재조합 세포는 그러고는 발현 및 배양 목적을 위해 사용될 수 있다. 그들은 특히 대규모 약학적 생산을 위한 항체의 발현에 유용하다. 그들은 또한 약학 조성물의 활성 성분으로 사용될 수 있다. 임의의 적합한 배양 테크닉이 사용될 수 있고, 이에 제한되지 않지만 정치 배양(static culture), 회전병 배양(roller bottle culture), 복수 유체(ascites fluid), 유공 섬유 유형 반응기 카트리지(hollow-fiber type bioreactor cartridge), 모듈라 미니 반응기(modular minifermenter), 교류 탱크(stirred tank), 마이크로캐리어 배양기(microcarrier culture), 세라믹 중심 관류(ceramic core perfusion), 등등을 포함한다.
B 세포 또는 형질 세포로부터 면역글로불린 유전자를 획득하고 시퀀싱하는 방법은 당해 분야에 잘 알려져 있다 (일례로, Kuby Immunology의 Chapter 4, 4th edition, 2000를 참조).
형질주입된 숙주 세포는, 효모 및 동물 세포, 특히 포유류 세포 (일례로, CHO 세포, NS0 세포, 인간 세포 예컨데 PER.C6 또는 HKB-11 세포, 골수종 세포, 또는 인간 간 세포)는 물론, 식물 세포를 포함하는 진핵 세포일 수 있고, 그로써 포유류 세포가 바람직하다. 바람직한 발현 숙주는 본 발명의 항체를, 특히 그들 스스로는 인간에서 면역원성이 아닌 탄수화물 구조로, 글리코실화할 수 있다. 일 구현예에서 형질주입된 숙주 세포는 무-혈청 배지에서 성장할 수 있다. 부가 구현예에서 형질주입된 숙주 세포는 동물-유래 산물의 존재없이 배양물에서 성장할 수 있다. 형질주입된 숙주 세포는 또한 세포주를 제공하기 위해 배양될 수 있다.
본 발명은 또한 관심 항체를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자 (일례로, 중쇄 및 경쇄 유전자)를 제조하는 방법을 제공하고, 이는 (i) 본 발명에 따른 불멸화된 B 세포 클론을 제조하거나 또는 형질 세포를 배양하는 단계; (ii) 관심 항체를 암호화하는 B 세포 클론 또는 배양된 형질 세포 핵산으로부터 획득하는 단계를 포함한다. 더욱이, 본 발명은 관심 항체를 암호화하는 핵산 서열을 획득하는 방법을 제공하고, 이는 (i) 본 발명에 따른 불멸화된 B 세포 클론을 제조하거나 또는 형질 세포를 배양하는 단계; (ii) 관심 항체를 암호화하는 B 세포 클론 또는 배양된 형질 세포로부터 핵산을 시퀀싱하는 단계를 포함한다.
본 발명은 부가로 본 발명의 형질전환 B 세포 클론 또는 배양된 형질 세포로부터 획득된 핵산을 획득하는 단계를 포함하는 관심 항체를 암호화하는 핵산 분자(들)을 제조하는 방법을 제공한다. 따라서 먼저 B 세포 클론 또는 배양된 형질 세포를 획득하고, 그 후 B 세포 클론 또는 배양된 형질 세포로부터 핵산(들)을 획득하는 절차가 상이한 시간에 상이한 사람에 의해 상이한 장소에서 (일례로, 상이한 국가에서) 수행될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 (일례로, 약학적 용도를 위한) 항체를 제조하는 방법을 제공하고, 이는 (i) 관심 항체를 발현하는 선택된 B 세포 클론 또는 배양된 형질 세포로부터 하나 이상의 핵산 (일례로, 중쇄 및 경쇄 유전자)를 획득 및/또는 시퀀싱하는 단계; (ii) 발현 벡터를 제조하기 위해 핵산(들)을 삽입하거나 핵산(들) 서열(들)을 사용하는 단계; (iii) 관심 항체를 발현할 수 있는 숙주 세포를 형질주입하는 단계; (iv) 관심 항체가 발현되는 상태 하에서 형질주입된 숙주 세포를 배양 또는 이차-배양하는 단계; 및, 선택적으로, (v) 관심 항체를 정제하는 단계를 포함한다.
본 발명은 또한, 형질주입된 숙주 세포 집단, 일례로 안정적으로 형질주입된 숙주 세포 집단을, 관심 항체가 발현되는 상태 하에서 배양 또는 이차-배양하고, 선택적으로, 관심 항체를 정제하는 단계를 포함하는 항체를 제조하는 방법을 제공하고, 여기서 상기 형질주입된 숙주 세포 집단은 (i) 상기 기술된 것처럼 제조된B 세포 클론 또는 배양된 형질 세포에 의해 생산된 선택된 관심 항체를 암호화하는 핵산(들)을 제공하는 단계, (ii) 발현 벡터 내로 핵산(들)을 삽입하는 단계, (iii) 관심 항체를 발현할 수 있는 숙주 세포 내로 벡터를 형질주입하는 단계, 및 (iv) 관심 항체를 생산하기 위해 삽입된 핵산을 포함하는 형질주입된 숙주 세포를 배양 또는 이차-배양하는 단계에 의해 제조되었다. 따라서 재조합 숙주 세포를 제조하고 그 후 항체를 발현하기 위해 이를 배양하는 절차가 매우 상이한 시간에 상이한 사람에 의해 상이한 장소에서(일례로, 상이한 국가에서) 수행될 수 있다.
약학 조성물
본 발명은 또한 하나 이상의 다음을 포함하는 약학 조성물을 제공한다:
(i) 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항체 단편;
(ii) 본 발명에 따른 항체, 또는 항체 단편을 암호화하는 핵산;
(iii) 본 발명에 따른 핵산을 포함하는 벡터; 및/또는
(iv) 본 발명에 따른 항체를 발현하거나 또는 본 발명에 따른 벡터를 포함하는 세포.
다시 말해서, 본 발명은 또한 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터 및/또는 본 발명에 따른 세포을 포함하는 약학 조성물을 제공한다
약학 조성물은 바람직하게는 또한 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 및/또는 부형제를 함유할 수 있다. 비록 담체 또는 또는 부형제는 투여를 촉진할 수 있지만, 그 스스로 조성물을 수여받는 개체에 유해한 항체의 생산을 유도해서는 안된다. 유독해서도 안된다. 적합한 담체는 크고, 느리게 대사되는 거대분자, 예컨데 단백질, 폴리펩티드, 리포솜, 폴리사카라이드, 폴리아세트산, 폴리글리콜산, 중합체성 아미노산, 아미노산 공중합체 및 비활성 바이러스 입자일 수 있다. 일반적으로, 본 발명에 따른 약학 조성물 내 약학적으로 허용가능한 담체는 활성 성분 또는 비활성 성분일 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 약학 조성물 내 약학적으로 허용가능한 담체는 지카 바이러스 간염에 대해 활성 성분이 아니다.
약학적으로 허용가능한 염, 예를 들면 무기산 염, 예컨데 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 포스페이트 및 설페이트, 또는 유기산의 염, 예컨데 아세테이트, 프로피오네이트 말로네이트 및 벤조에이트가 사용될 수 있다.
약학 조성물 내 약학적으로 허용가능한 담체는 추가적으로 액체, 예컨데, 물, 염, 글리세롤 및 에탄올을 함유할 수 있다. 추가적으로, 보조 물질, 예컨데 가습제 또는 유화제 또는 pH 완충 물질이 이러한 조성물 내에 존재할 수 있다. 이러한 담체는, 대상에 의한 소화를 위해, 약학 조성물을 정제, 알약, 당의정, 캡슐, 액제, 젤, 시럽, 슬러리 및 현탁액으로 조제될 수 있게 한다.
본 발명의 약학 조성물은 다양한 형태로 제조될 수 있다. 예를 들면, 조성물은 액상 용액 또는 현탁액의 주사제로 제조될 수 있다. 주사 전 액상 입자에 용액, 또는 현탁액에 적합한 고체 형태가 또한 준비될 수 있다 (일례로, 보존제를 함유하는 멸균수로 재구성하기 위한 동결건조된 조성물, 시나지스(Synagis)TM 및 허셉틴(Herceptin)TM 유사). 조성물은 국소 투여를 위해, 일례로, 연고, 크림 또는 분말로 제조될 수 있다. 조성물은 경구 투여를 위해, 일례로, 정제 또는 캡슐, 스프레이, 또는 시럽 (선택적으로 향이 첨가된)으로 제조될 수 있다. 조성물은 폐 투여를 위해, 일례로, 분말 또는 스프레이를 사용해 흡입기로 제조될 수 있다. 조성물은 좌제 또는 질좌제로 제조될 수 있다. 조성물은 비강, 귀 또는 안구 투여를 위해, 일례로, 드롭으로 제조될 수 있다. 조성물은 대상에게 투여하기 직전에 조합된 조성물이 재구성되도록 고안된 키트 형태일 수 있다. 예를 들면, 동결건조된 항체는 멸균수 또는 멸균 완충액과 함께 키트에 제공될 수 있다.
조성물 내 활성 성분은 항체 분자, 항체 단편 또는 그의 변종 및 유도체이고, 구체적으로 조성물 내 활성 성분은 본 발명에 따른 항체 분자, 항체 단편 또는 그의 변종 및 유도체인 것이 바람직하다. 이를 테면, 이는 위장관에서 분해되기 쉬울 수 있다. 따라서, 만약 조성물이 위장관을 이용한 경로로 투여된다면, 조성물은 위장관에서 항체의 분해로부터 항체를 보호하지만 위장관으로부터 일단 흡수되면 항체를 방출하는 물질을 함유할 것이다.
약학적으로 허용가능한 담체의 완전한 논의는 Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, ISBN: 0683306472에서 가능하다.
본 발명의 약학 조성물은 일반적으로 pH 5.5 내지 8.5를 가지고, 몇몇 구현예에서 이는 6 내지 8일 수 있고, 그리고 다른 구현예에서 약 7이다. pH는 완충액의 사용에 의해 유지될 수 있다. 조성물은 멸균 및/또는 발연원이 없을 것이다. 본 조성물은 인간에 대해 등장성이다. 일 구현예에서 본 발명의 약학 조성물은 밀봉된 용기에 공급된다.
본 발명의 범주 내에 조성물은 수 개의 투여의 형태로 존재한다; 형태는, 이에 제한되지 않지만, 비경구 투여에 적합한 이들 형태, 일례로, 주사 또는 주입, 예를 들면 일시 주사 또는 연속적 주입을 포함한다. 산물이 주사 또는 주입을 위한 경우, 오일성 또는 수용성 비히클 내에 현택액, 용액, 에멸젼의 형태를 취할 수 있고, 이는 제형제, 예컨데, 현탁제, 보존제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다. 대안적으로, 항체 분자는 사용 전에 적절한 멸균 액체와의 재구성을 위한 건조 형태일 수 있다. 비히클은 전형적으로, 성분, 예컨데 약학적 활성 성분, 구체적으로 본 발명에 따른 항체를 저장, 운송, 및/또는 투여하기에 적합한 물질인 것으로 이해된다. 예를 들면, 비히클은 약학적 활성 성분, 구체적으로 본 발명에 따른 항체를 저장, 운송, 및/또는 투여하기에 적합한 생리학적으로 허용가능한 액체일 수 있다. 일단 조제되면, 본 발명의 조성물은 대상에게 직접적으로 투여될 수 있다. 일 구현예에서 조성물은 포유류, 일례로, 인간 대상에 투여를 위해 맞추어진다.
이 발명의 약학 조성물은, 이에 제한되지 않지만, 경구, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 복강내, 수막강내, 심실내, 경피, 피부통과, 국소, 피하, 비강내, 장관, 설하, 질내 또는 직장 경로를 포함하는 임의의 수의 경로에 의해 투여될 수 있다. 괴사분사(Hypospray)가 또한 본 발명의 약학 조성물을 투여하는 데 사용될 수 있다. 바람직하게는, 약학 조성물은 경구 투여를 위해, 일례로 정제, 캡슐 및 등등, 국소 투여용, 또는 주사가능제로, 일례로 액상 용액 또는 현탁액으로 제조될 수 있고, 그로써 약학 조성물은 주사가능제인 것이 특히 바람직하다. 주사 전 액상 입자에 용액, 또는 현탁액에 적합한 고체 형태가 또한 바람직하고, 일례로 약학 조성물은 동결건조된 형태이다.
주사, 일례로 정맥내, 피부 또는 피하 주사, 또는 병의 부위에의 주사를 위해, 활성 성분은 바람직하게는 발열원이 없고 적합한 pH, 등장성 및 안정성을 가지는 비경구적으로 사용가능한 수성 용액의 형태일 것이다. 당해 분야의 관련 기술자들, 예를 들면, 등장성 입자, 예컨데 염화 나트륨 주사, 링거(Ringer's) 주사, 락토오즈를 가한 링거(Lactated Ringer's) 주사를 사용하여 적합한 용액을 제조할 수 있다. 보존제, 안정화제, 완충제, 항산화제 및/또는 다른 첨가제가, 필요하면, 포함될 수 있다. 개체에 주어지는 것이 폴리펩티드, 펩티드, 또는 핵산 분자, 본 발명에 따른 다른 약학적으로 유용한 성분인지 무관하게, 투여는 바람직하게는 "방지적 유효량" 또는 "치료적 유효량" (사례에 따라)이고, 이는 개체에 이득을 보여주기에 충분하게 된다. 실제 투여되는 양, 및 투여의 속도 및 시간-경로는 치료되어야 하는 것의 성질 및 심각성에 따라 달라진다. 주사를 위해, 본 발명에 따른 약학 조성물은 예를 들면 사전-충전된 시린지로 제공될 수 있다.
상기 기술된 발명의 약학 조성물은 상기 정의된 것처럼, 이에 제한되지 않지만, 캡슐, 정제, 수성 현탁액 또는 수성 용액을 포함하는, 임의의 경구적으로 허용가능한 복용량 형태로 경구적으로 투여될 수 있다. 경구 용도를 위한 정제의 사례에서, 흔히 사용되는 담체는 락토오즈 및 옥수수 전분을 포함한다. 윤활제, 예컨데 마그네슘 스테아레이트(magnesium stearate)도 또한 전형적으로 추가된다. 캡슐 형태의 경구 투여를 위해, 유용한 희석제는 락토오즈 및 건조된 옥수수전분을 포함한다. 경구 사용을 위해 수성 현탁액이 요구되는 경우에는, 활성 성분, 즉 상기 정의된 것처럼 발명의 운반체 카르고 접합체 분자는 유화제 및 현탁제와 조합된다. 원한다면, 특정의 감미제, 향미제 또는 색소가 또한 추가될 수 있다.
발명의 약학 조성물은 또한, 특별히 치료의 타겟이 국소 적용에 의해 손쉽게 접근 가능한 지역 또는 기관을 포함하는 경우, 일례로 피부 또는 임의의 다른 접근 가능한 상피 조직의 질병을 포함하여 국소적으로 투여될 수 있다. 적합한 국소 제형은 각각의 이들 지역 또는 기관을 위해 손쉽게 제조될 수 있다. 국소 적용을 위해, 발명의 약학 조성물은, 발명의 약학 조성물, 특히 이의 성분을 상기 정의된 것처럼 함유하고, 하나 이상의 담체에 현탁되거나 용해된, 적합한 연고로 제형될 수 있다. 국소 투여를 위한 담체는, 이에 제한되지 않지만, 미네랄 오일, 유동 와셀린(liquid petrolatum), 백색 와셀린(white petrolatum), 프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸린, 폴리옥시프로필렌 성분, 유화 왁스 및 물을 포함한다. 대안적으로, 발명의 약학 조성물은 적합한 로션 또는 크림으로 제형될 수 있다. 본 발명의 내용에서, 적합한 담체는, 이에 제한되지 않지만, 미네랄 오일, 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 세틸 에스테르 왁스(cetyl esters wax), 세테아릴 알코올(cetearyl alcohol), 2-옥틸도데칸올(octyldodecanol), 벤질 알코올 및 물을 포함한다.
용량 치료는 단일 용량 일정 또는 다중 용량 일정일 수 있다. 구체적으로, 약학 조성물은 단일-용령 제품으로 제공될 수 있다. 바람직하게는, 약학 조성물 내의 항체의 양은 - 구체적으로 만약 단일-용량 제품으로 제공되는 경우 - 200 mg을 초과하기 않고, 더 바람직하게는 100 mg을 초과하지 않고, 보다 더 바람직하게는 50 mg을 초과하지 않는다.
예를 들면, 본 발명에 따른 약학 조성물은 매일, 일례로 하루에 한 번 또는 수 번, 일례로 하루에 한 번, 두 번, 세 번 또는 네 번, 바람직하게는 하루에 한 번 또는 두 번, 더 바람직하게 하루에 한 번, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21 일 또는 그 이상 동안, 일례로 1, 2, 3, 4, 5, 6 개월 동안 매일 투여될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 약학 조성물은 매주, 일례로 주마다 한 번 또는 두 번, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21 주 또는 그 이상 동안, 일례로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 개월 동안 매주 또는 2, 3, 4, 또는 5 년 동안 매주 투여될 수 있다. 게다가, 본 발명에 따른 약학 조성물은 바람직하게는 매월, 일례로 월마다 한 번 또는, 더 바람직하게는, 1, 2, 3, 4, 또는 5 년 또는 그 이상 동안 매 격월마다 투여될 수 있다. 또한 투여는 일생 동안 지속되는 것이 바람직하다. 더불어, 또한 하나의 오직 단일 투여는 또한, 구체적으로 특정한 적응증에 대하여, 일례로 비-면역화된 대상에서, 일례로 우연한 노출의 사례에서 지카 바이러스 감염의 예방을 위해 착상될 수 있다. 하지만, 가장 바람직한 치료 일정은 노출후 방지(노출후 방지, PEP)이고, 여기서 하나 이상의 단일 용량이 지카 감염 이후 가능한 빨리 투여된다. 여기서 하나 이상의 단일 용량이 지카 감염을 (즉 지카 감염 이전에, 구체적으로 비-지카-면역화된 대상에서) 예방하기 위해 투여되는, 방지적 환경(prophylactic setting)이 또한 바람직하다.
구체적으로, 단일 용량, 일례로 매일, 매주 또는 매월 용량을 위한, 바람직하게는 매주 용량을 위한, 항체, 또는 그의 항원 결합 단편의 양은, 본 발명에 따른 약학 조성물로, 1 g을 초과하지 않고, 바람직하게는 500 mg을 초과하지 않고, 더 바람직하게는 200 mg을 초과하지 않고, 보다 더 바람직하게는 100 mg을 초과하지 않고, 및 특히 바람직하게는 50 mg을 초과하지 않는 것이 바람직하다.
약학 조성물은 전형적으로 "유효"량의 하나 이상의 본 발명의 항체, 즉 원하는 질병 또는 상태를 치료, 개선, 약화 또는 예방하거나, 또는 검출가능한 치료 효과를 드러내기에 충분한 양을 포함한다. 치료 효과는 또한 병원성능 또는 신체 증상의 감소 또는 약화를 포함한다. 임의의 특정 대상을 위한 정밀한 유효량은 그들의 크기, 중량, 및 건강, 상태의 성질 및 정도, 및 투여를 위해 선택된 치료제 또는 치료제들의 조합에 따라 달라질 것이다. 주어진 상태에 대한 유효량은 일상적인 실험에 의해 결정되며, 임상의의 판단 범위내에 있다. 본 발명을 목적을 위하여, 유효 용량은 일반적으로 이것이 투여되는 개체의 체중 (일례로, kg)에 관련하여 본 발명의 항체로 (일례로 약학 조성물 내 항체의 양으로) 약 0.005 내지 약 100 mg/kg, 바람직하게는 0.0075 내지 약 50 mg/kg, 더 바람직하게는 0.01 내지 약 10 mg/kg, 및 보다 더 바람직하게는 0.02 내지 약 5 mg/kg이 될 것이다.
게다가, 본 발명에 따른 약학 조성물은 또한 추가적 활성 성분을 포함할 수 있고, 이는 부가항체 또는 항체가 아닌 성분일 수 있다. 추가적 활성 성분은 바람직하게는 체크포인트 억제제이다. ZIKV 중화 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 본 명세서에 기술된 것처럼 ZIKV NS1-결합 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을, 본 명세서에 기술된 것처럼 추가적 활성 성분(보조제)로서 조합하는 것이 또한 바람직하다. 그렇게 함으로써, NS1의 병원성 역할은 ZIKV의 중화에 더불어 차단될 수 있다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 하나 이상의 추가적 활성 성분, 일례로 하기 조합 요법의 내용에서 보조제로 기술된 것을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 동일한 약학 조성물 내에서 추가적 활성 성분으로 존재할 수 있거나 또는, 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 첫 번째 약학 조성물에 의해 포함되고 추가적 활성 성분은 첫 번째 약학 조성물과는 상이한 두 번째 약학 조성물에 의해 포함된다. 그에 따라, 만약 한 개 초과의 추가적 활성 성분이 착상되면, 각각의 추가적 활성 성분 및 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 바람직하게는 상이한 약학 조성물에 의해 포함된다. 이러한 상이한 약학 조성물은 조합된/동시적으로 또는 분리된 시간에 또는 분리된 위치에서 (일례로 신체의 분리된 부분) 투여될 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편 및 추가적 활성 성분은 추가적 치료 효과 또는, 바람직하게는, 상승적 치료 효과를 제공한다. 용어 "상승적"은 각각의 활성제의 개별적 효과의 합보다 더 큰 두 개 이상의 활성제의 조합된 효과를 기술하기 위해 사용된다. 따라서, 두 개 이상의 약제의 조합된 효과가 활성 또는 공정의 "상승적 억제"를 초래하는 경우에는, 활성 또는 공정의 억제가 각각의 활성제의 억제 효과의 합보다 더 큰 것을 의도한다. 용어 "상승적 치료 효과"는 두 개 이상의 요법의 조합에서 관찰된 치료 효과가 각각의 개별적 요법에서 관찰되는 개별적 치료 효과의 합보다 더 큰 것을 지칭한다.
gZKA190, gZKA64, gZKA230, gZKA185, gZKA78 에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물이 바람직하다.
일 구현예에서, 본 발명의 조성물은 본 발명의 항체를 포함할 수 있고, 여기서 항체는 조성물 내 총 단백질의 최소한 50% 중량으로 (일례로, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상)으로 만들어질 수 있다. 이러한 조성물 내에서, 항체는 바람직하게는 정제된 형태이다.
본 발명은 또한 (i) 본 발명의 항체를 제조하는; 및 (ii) 정제된 항체를 하나 이상의 약학적으로-허용가능한 담체와 혼합하는 단계를 포함하는 약학 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.
또다른 구현예에서, 약학 조성물을 제조하는 방법은 항체를 하나 이상의 약학적으로-허용가능한 담체와 혼합하는 단계를 포함하고, 여기서 항체는 본 발명의 형질전환 B 세포 또는 배양된 형질 세포로부터 획득된 단일클론 항체이다.
치료적 목적을 위해 항체 또는 B 세포를 전달하는 것의 대안으로, B 세포 또는 배양된 형질 세포로부터 유래된 관심의 단일클론 항체 (또는 그의 비활성 단편)을 암호화하는 핵산 (전형적으로 DNA)을 대상에게 전달하는 것이 가능하고, 그로 인해 핵산은 원하는 치료 효과를 제공하도록 대상 내 정위치에서 발현될 수 있다. 적합한 유전자 요법 및 핵산 전달 벡터는 당해 분야에 알려져 있다.
약학 조성물은, 특히 만약 다중 용량 형태로 포장되는 경우에는, 항균제를 포함할 수 있다. 그들은 세제, 일례로, 트윈 (폴리소르베이트), 예컨데 트윈 80을 포함할 수 있다. 세제는 일반적으로 낮은 수준, 일례로, 0.01% 미만으로 존재한다. 조성물은 또한 독성을 주는 소듐 염 (일례로, 염화 나트륨)을 포함할 수 있다. 예를 들면, 10±2 mg/ml 농도의 염화 나트륨이 전형적이다.
더욱이, 약학 조성물은, 특히 만약 그들이 동결건조되거나 또는 만약 동결건조된 물질로부터 재구성된 물질을 포함하는 경우에는, 당 알코올 (일례로, 만니톨) 또는 다이사카라이드 (일례로, 수크로오즈 또는 트레할로스) 일례로, 대략15-30 mg/ml (일례로, 25 mg/ml)를 포함할 수 있다. 동결건조를 위한 조성물의 pH는 동결건조 전에 5 내지 8, 또는 5.5 내지 7, 또는 대략 6.1 로 조정될 수 있다.
본 발명의 조성물은 또한 하나 이상의 면역 조절제를 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 하나 이상의 면역 조절제는 항원보강제(adjuvant)를 포함한다.
의료적 치료, 키트 및 용도
의료적 치료
부가적 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물의 (i) 지카 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료; 또는 (ii) 지카 바이러스 감염의 진단 용도를 제공한다. 그렇게 함으로써, use of 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편 (및 구체적으로 상기 상술된 이의 바람직한 구현예)의 용도는 (i) 본 명세서에 기술된 것처럼 지카 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료; 또는 (ii) 본 명세서에 기술된 것처럼 지카 바이러스 감염의 진단에서 바람직하다.
진단의 방법은 항체 또는 항체 단편를 샘플과 코팅하는 것을 포함한다. 이러한 샘플은, 예를 들면 단리된 조직 샘플, 예를 들면, 비강 통로, 부비강, 타액선, 폐, 간, 췌장, 신장, 귀, 눈, 태반, 소화관, 심장, 난소, 뇌하수체, 부신, 갑상샘, 뇌, 피부 또는 혈액, 바람직하게는 혈장 또는 혈청으로부터 얻은, 대상으로부터 단리될 수 있다. 본 진단 방법은 또한, 구체적으로 항체 또는 항체 단편의 샘플과의 접촉에 후행하는, 항원/항체 복합체의 검출을 포함한다. 이러한 검출 단계는 전형적으로 실험대에서, 즉 인간 또는 동물 신체에의 어떠한 접촉 없이 수행된다. 검출 방법의 예는 당해 분야의 기술자에게 잘 알려져 있고, 일례로, ELISA (효소-결합 면역 측정법)를 포함한다.
지카 바이러스 감염의 예방은 구체적으로 방지적 환경을 지칭하고, 여기서 상기 대상은 지카 바이러스 감염으로 진단되지 않았거나 (진단이 수행되지 않았거나 또는 진단 결과 음성이었거나) 및/또는 지카 바이러스 감염의 증상은 보이지 않는다. 그에 따라, 지카 바이러스 감염의 예방은 "노출후 방지" (PEP), 즉, 예를 들면 모기 물림 이후 지카 바이러스 영향받은 영역에서 가능한 지카 바이러스 감염 이후 예방적 치료를 포함한다. 지카 바이러스 감염의 예방은 구체적으로 고-위험 대상, 예컨데 임신한 대상에서 및/또는 지카 바이러스 영향받은 영역 내 머무르는 대상 (예컨데 지카 바이러스 영향받은 영역에 사는 대상 또는 지카 바이러스 영향받은 영역에 여행하는 대상)에서 유용하다.
치료적 환경에서, 그에 반해서, 대상은 전형적으로 지카 바이러스에 의해 감염, 지카 바이러스 감염으로 진단 및/또는 지카 바이러스 감염의 증상을 보인다. 아주 흥미롭게, 용어 ZIKV 감염의 "치료" 및 "요법"/"치료적"는 (전체) 치유는 물론 ZIKV 감염의 감쇠를 포함한다.
지카 바이러스 감염의 진단의 바람직한 방법은 본 명세서에 기술된 것처럼, 일례로 본 발명에 따른 중화 항체, 또는 그의 항원 결합 단편 및/또는 본 발명에 따른 ZIKV NS1-결합 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 사용한, 진단 방법이다.
그에 따라, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물은 바람직하게는 지카 바이러스 감염으로 진단된 대상에서 또는 지카 감염의 증상을 보이는 대상에서 지카 바이러스 감염의 치료를 위해 사용된다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물은 무증상 대상에서 지카 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료를 위해 사용되는 것이 또한 바람직하다. 이들 대상은 지카 바이러스 감염으로 진단되거나 진단되지 않을 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물은 임신한 대상에서, 구체적으로 선천성 감염을 예방하기 위하여, 지카 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료를 위해 사용된다. 예를 들면, 이는 HCMV 선천성 감염의 예방에 대해 Nigro G, Adler SP, La Torre R, Best AM, Congenital Cytomegalovirus Collaborating Group: Passive immunization during pregnancy for congenital cytomegalovirus infection; N Engl J Med 2005, 353:1350-1362에 기술된 것처럼 유사한 방식으로 수행될 수 있다.
임의의 이론에 구속됨 없이, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원-결합 단편은 만약 임신한 대상에게, 일례로 (i.v.) 주사 또는 임의의 다른 투여의 경로에 의해 본 명세서에 기술된 것처럼 투여되면, FcRn과의 상호작용을 통해 태반을 통과할 수 있는 것으로 추정된다. 중요하게, 본 명세서에 기술된 것처럼 항체의 "LALA" 변종과 FcRn과의 상호작용은 저하되지 않는다. FcRn은 이미 임신 첫 삼개월에 태반에서 발현되는 것으로 믿어진다.
대안적으로, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원-결합 단편은 또한 양막외(extra-amniotic) 공간으로 투여될 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물은 지카 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료를 위해 사용될 수 있고, 여기서 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 핵산, 벡터, 세포, 또는 약학 조성물은 (가능한) 지카 바이러스 감염 이후 칠일까지, 바람직하게는 (가능한) 지카 바이러스 감염 이후 오일까지, 더 바람직하게는 (가능한) 지카 바이러스 감염 이후 사일까지, 보다 더 바람직하게는 (가능한) 지카 바이러스 감염 이후 삼일까지, 및 가장 바람직하게는 (가능한) 지카 바이러스 감염 이후 하루까지 투여된다. 이러한 치료 일정은 치료적 환경은 물론 방지적 환경, 구체적으로 노출후 방지 (PEP)에서 유용할 수 있다.
PEP에서 전형적으로 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물의 첫번째 투여는 ZIKV 감염 이후 가능한 빨리, 일례로 모기 물림 이후 ZIKV 영향받은 영역이다. 그에 따라, PEP에서 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물의 첫번째 투여는 전형적으로 (가능한) ZIKV 감염 이후, 상기 기술된 것처럼 하루 이상 까지이다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물은 지카 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에 사용되는 것이 또한 바람직하고, 여기서 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 핵산, 벡터, 세포, 또는 약학 조성물은 (가능한) 지카 바이러스 감염 이전 삼 개월까지, 바람직하게는 (가능한) 지카 바이러스 감염 이전 일 개월까지, 더 바람직하게는 (가능한) 지카 바이러스 감염 이전 이 주까지, 보다 더 바람직하게는 (가능한) 지카 바이러스 감염 이전 일 주까지, 및 가장 바람직하게는 (가능한) 지카 바이러스 감염 이전 하루까지 투여된다. 이러한 치료 일정은 구체적으로 방지적 환경을 지칭한다.
일반적으로 - 및 구체적으로 PEP에서 - 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물의 첫번째 투여 이후, 하나 이상의 순차적 투여가, 바람직하게는 단일 용량으로 매일 또는 매 두번째 날마다 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 1, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21 일 동안 뒤따를 수 있다. 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물의 첫번째 투여 이후, 하나 이상의 순차적 투여가, 바람직하게는 단일 용량으로 주당 한번 또는 두번씩 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 1, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21 주 동안 뒤따를 수 있는 것이 또한 바람직하다. 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물의 첫번째 투여 이후, 하나 이상의 순차적 투여가, 바람직하게는 단일 용량으로 매 2 또는 4 주 마다 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 1, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21 주 동안 뒤따를 수 있는 것이 또한 바람직하다. 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물의 첫번째 투여 이후, 하나 이상의 순차적 투여가, 바람직하게는 단일 용량으로 매 두달 또는 네달 마다 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 1, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21 월 동안 뒤따를 수 있는 것이 또한 바람직하다. 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물, 하나 이상의 순차적 투여가, 바람직하게는 단일 용량으로 년간 한번 또는 두번씩 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 년 동안 뒤따를 수 있는 것이 또한 바람직하다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물은 0.005 내지 100 mg/kg 체중의(단일) 용량으로, 바람직하게는 0.0075 내지 50 mg/kg 체중의 (단일) 용량으로, 더 바람직하게는 0.01 내지 10 mg/kg 체중의 (단일) 용량으로, 보다 더 바람직하게는 0.05 내지 5 mg/kg 체중의 (단일) 용량으로, 및 특히 바람직하게는 0.1 내지 1 mg/kg 체중의 (단일) 용량으로 투여된다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물은 경구, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 복강내, 수막강내, 심실내, 경피, 피부통과, 국소, 피하, 비강내, 장관, 설하, 질내 또는 직장 경로를 포함하는 임의의 수의 경로에 의해 투여될 수 있다. 정맥내 투여, 또는 피하 투여 또는 근육내 투여가 바람직하고 정맥내 투여 또는 피하 투여가 더 바람직하다.
임신한 대상에서 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 또한 양막내 또는 외로, 일례로 주사에 의해 투여될 수 있다.
그에 따라, 본 발명은 또한 대상에서 지카 바이러스 감염을 예방 및/또는 치료하는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 이를 필요로 하는 대상에게 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 이 방법의 바람직한 구현예는 상기 (및 하기, 조합 요법에 대해) 기술된 의료적 용도의 바람직한 구현예에 대응한다. 예를 들면, 이 방법은 바람직한 대상은 지카 바이러스 감염으로 진단되거나 또는 지카 바이러스 감염의 증상을 보이는 대상이다. 이 방법에서 또다른 바람직한 대상은 임신한 대상이다.
조합 요법
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물의 본 발명에 따른 방법 및 용도 내 투여는 단독 또는, 구체적으로 ZIKV 감염 예방 및/또는 치료에 유용한 보조제(또한 본 명세서에서 "추가적 활성 성분" 으로 지칭)와의 조합으로 실행될 수 있다.
본 발명은 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물의 투여를 아우르고, 여기서 이것은 ZIKV 감염을 치료 및/또는 예방하기에 유용한 다른 치료 요법 또는 보조제와, 이전에, 동시적으로 또는 순차적으로, 대상에게 투여된다. 상기 보조제와 동시적으로 투여되는 상기 항체, 핵산, 벡터, 세포 또는 약학 조성물은, 동일한 또는 상이한 조성물(들) 내에 동일한 또는 상이한 투여의 경로(들)에 의해 투여될 수 있다.
상기 다른 치료 요법 또는 보조제는, 예를 들면, 체크포인트 억제제일 수 있다.
따라서, 본 발명의 또다른 측면에서 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물은 본 명세서에 기술된 (의료적) 용도를 위해 체크포인트 억제제와 조합으로 투여된다.
바람직한 체크포인트 억제제는 PD-1/PD-L1 및/또는 CTLA4의 차단으로 향하고, 따라서, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 및 항-CTLA4 항체를 함유한다. 따라서, 본 발명에 따른 약학 조성물은 하나 이상의 추가적 활성 성분을 포함할 수 있다.
ZIKV 중화 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 본 명세서에 기술된 것처럼 ZIKV NS1-결합 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을, 본 명세서에 기술된 것처럼 추가적 활성 성분(보조제)로서 조합하는 것이 또한 바람직하다. 그렇게 함으로써, NS1의 병원성 역할은 ZIKV의 중화에 더불어 차단될 수 있다. 그에 따라, ZIKV NS1-결합 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 본 명세서에 기술된 것처럼 바람직한 추가적 활성 성분(보조제)이다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 동일한 약학 조성물 내에서 추가적 활성 성분(보조제)으로 존재할 수 있거나 또는, 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 첫 번째 약학 조성물에 의해 포함되고 추가적 활성 성분(보조제)은 첫 번째 약학 조성물과는 상이한 두 번째 약학 조성물에 의해 포함된다. 그에 따라, 만약 한 개 초과의 추가적 활성 성분(보조제)이 착상되면, 각각의 추가적 활성 성분(보조제) 및 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 바람직하게는 상이한 약학 조성물에 의해 포함된다. 이러한 상이한 약학 조성물은 조합된/동시적으로 또는 분리된 시간에 또는 분리된 위치에서 (일례로 신체의 분리된 부분) 투여될 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편 및 추가적 활성 성분(보조제)은 추가적 치료 효과 또는, 바람직하게는, 상승적 치료 효과를 제공한다. 용어 "상승적"은 각각의 활성제의 개별적 효과의 합보다 더 큰 두 개 이상의 활성제의 조합된 효과를 기술하기 위해 사용된다. 따라서, 두 개 이상의 약제의 조합된 효과가 활성 또는 공정의 "상승적 억제"를 초래하는 경우에는, 활성 또는 공정의 억제가 각각의 활성제의 억제 효과의 합보다 더 큰 것을 의도한다. 용어 "상승적 치료 효과"는 두 개 이상의 요법의 조합에서 관찰된 치료 효과가 각각의 개별적 요법에서 관찰되는 개별적 치료 효과의 합보다 더 큰 것을 지칭한다.
부가 용도 및 키트
부가적 측면에서, 본 발명은 also provides the use of 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물은 항-지카 백신의 질을 모니터링하기 위한 용도를 상기 백신의 항원이 올바른 입체형태의 특이적 에피토프를 함유하는지 확인함에 의해 제공한다. 예컨데 확인되어야 할 항-지카 백신에 포함되는 적합한 항원은 (i) 상기 기술된 ZIKV E 단백질의 도메인 III (EDIII) 또는 (ii) 상기 기술된 사차 ZIKV 에피토프 를 포함하거나 또는 이로 구성되는 ZIKV 외피 단백질 또는 임의의 다른 분자/복합체를 함유한다.
게다가, 본 발명은 또한 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물의 지카 바이러스 감염의 진단 용도를 제공한다.
더불어 또한 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물의 단리된 혈액 샘플 (일례로, 전혈(whole blood), 혈청 및/또는 혈장)이 지카 바이러스에 감염되었는지 결정하는 용도가 제공된다.
상기 기술된 것처럼, 진단의 방법은 항체 또는 항체 단편를 샘플과 코팅하는 것을 포함한다. 이러한 샘플은, 예를 들면 단리된 조직 샘플, 예를 들면, 비강 통로, 부비강, 타액선, 폐, 간, 췌장, 신장, 귀, 눈, 태반, 소화관, 심장, 난소, 뇌하수체, 부신, 갑상샘, 뇌, 피부 또는 혈액, 바람직하게는 혈청 또는 혈장으로부터 얻은, 대상으로부터 단리될 수 있다. 본 진단 방법은 또한, 구체적으로 항체 또는 항체 단편의 샘플과의 접촉에 후행하는, 항원/항체 복합체의 검출을 포함한다. 이러한 검출 단계는 전형적으로 실험대에서, 즉 인간 또는 동물 신체에의 어떠한 접촉 없이 수행된다. 검출 방법의 예는 당해 분야의 기술자에게 잘 알려져 있고, 일례로, ELISA (효소 결합 면역 측정법)를 포함한다.
부가적 측면에서, 본 발명은 또한 최소한 하나의 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 최소한 하나의 본 발명에 따른 핵산, 최소한 하나의 본 발명에 따른 벡터, 최소한 하나의 본 발명에 따른 세포, 및/또는 최소한 하나의 본 발명에 따른 약학 조성물을 포함하는 키트를 제공한다. 더불어, 상기 키트는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 또는 본 발명에 따른 약학 조성물을 투여하기 위한 수단, 예컨데 시린지 또는 관(vessel), 리플렛, 및/또는 상기 기술된 투여되어야 하는 보조제를 포함할 수 있다.
지카 바이러스의 NS1 단백질에의 항체 특이적 결합
부가적 측면에서, 본 발명은 또한 지카 바이러스의 NS1 단백질 (ZIKV)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
ZIKV NS1 단백질 (비-구조 단백질 1)은 세포 내, 분비 및 세포-표면 연관되어 존재하고 구체적으로 분비되는 ZIKV NS1 단백질은 전형적으로 ZIKV 에 감염된 대상의 체액, 예컨데 혈청, 타액, 소변 등등에서 발견된다. 분비 및 세포-표면 연관 NS1은 높게 면역원성이고 항체의 생산을 유발한다. NS1은 ZIKV 감염의 조기 진단에 중요한 바이오마커인 것으로 알려져 있다. 그에 따라, 지카 바이러스의 NS1 단백질 (ZIKV)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 예를 들면 ZIKV 감염의 진단에 유용하다.
일반적으로, 결합은 당해 기술자에 알려진 것처럼 상기 기술된 것처럼 표준 ELISA에 의해 평가될 수 있다. 그렇게 함으로써, 항체 결합의 상대적 친화성은 포화시 50% 최대 결합에 도달하기 위해 요구되는 항체의 농도(EC50)를 측정함에 의해 결정될 수 있다. 바람직하게는, ZIKV NS1 단백질에 대한 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편의 EC50은 50 ng/ml 이하이고, 바람직하게는 상기 EC50 은 25 ng/ml 이하이고, 더 바람직하게는 상기 EC50 은 15 ng/ml 이하이고, 보다 더 바람직하게는 상기 EC50 은 10 ng/ml 이하이고, 및 가장 바람직하게는 상기 EC50 은 5 ng/ml 이하이고, 예컨데 예를 들면 약 2 또는 3 ng/ml이다.
바람직하게는, 지카 바이러스의 NS1 단백질 (ZIKV)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 뎅기 바이러스 (DENV) NS1 단백질에 필수적으로 결합하지 않는다. 그렇게 함으로써 "필수적으로 결합하지 않는"은 항체, 또는 그의 항원 결합 단편에 대해, 뎅기 바이러스 (DENV) NS1 단백질에 대한 EC50-값이 표준 ELISA에서 102 ng/ml 까지, 바람직하게는 103 ng/ml 까지, 더 바람직하게는 5*103 ng/ml 까지, 보다 더 바람직하게는 8*103 ng/ml 까지, 및 가장 바람직하게는 104 ng/ml 까지에서는 결정되지 않는 것을 의미한다. 다시 말해서, 뎅기 바이러스 (DENV) NS1 단백질에 포화시 50% 최대 결합에 도달하기 위해 요구되는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편의 농도(EC50)는 표준 ELISA 에서 전형적으로 102 ng/ml 초과, 바람직하게는 103 ng/ml 초과, 더 바람직하게는 5*103 ng/ml 초과, 보다 더 바람직하게는 8*103 ng/ml 초과, 및 가장 바람직하게는 104 ng/ml 초과이다.
지카 바이러스의 NS1 단백질 (ZIKV)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 황열 바이러스 (YFV) NS1 단백질, 웨스트 나일 바이러스 (WNV) NS1 단백질, 일본 뇌염 바이러스 (Japanese encephalitis virus, JEV) NS1 단백질 및/또는 진드기매개 뇌염 바이러스 (Tick-borne encephalitis virus, TBEV) NS1 단백질에 필수적으로 결합하지 않는 것이 또한 바람직하다. 그렇게 함으로써 "필수적으로 결합하지 않는"은 항체, 또는 그의 항원 결합 단편에 대해, 황열 바이러스 (YFV) NS1 단백질, 웨스트 나일 바이러스 (WNV) NS1 단백질, 일본 뇌염 바이러스 (JEV) NS1 단백질 및/ 진드기매개 뇌염 바이러스 (TBEV) NS1 단백질에 대한 EC50-값이 표준 ELISA에서 102 ng/ml 까지, 바람직하게는 103 ng/ml 까지, 더 바람직하게는 5*103 ng/ml 까지, 보다 더 바람직하게는 8*103 ng/ml 까지, 및 가장 바람직하게는 104 ng/ml 까지에서는 결정되지 않는 것을 의미한다. 다시 말해서, 황열 바이러스 (YFV) NS1 단백질, 웨스트 나일 바이러스 (WNV) NS1 단백질, 일본 뇌염 바이러스 (JEV) NS1 단백질 및/ 진드기매개 뇌염 바이러스 (TBEV) NS1 단백질에 포화시 50% 최대 결합에 도달하기 위해 요구되는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편의 농도(EC50)는 표준 ELISA 에서 전형적으로 102 ng/ml 초과, 바람직하게는 103 ng/ml 초과, 더 바람직하게는 5*103 ng/ml 초과, 보다 더 바람직하게는 8*103 ng/ml 초과, 및 가장 바람직하게는 104 ng/ml 초과이다.
바람직하게는, 지카 바이러스의 NS1 단백질 (ZIKV)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 인간 항체이다. 지카 바이러스의 NS1 단백질 (ZIKV)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 단일클론 항체, 바람직하게는 인간 단일클론 항체인 것이 또한 바람직하다. 뿐만 아니라, 지카 바이러스의 NS1 단백질 (ZIKV)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 재조합 항체인 것이 또한 바람직하다.
바람직하게는, 지카 바이러스의 NS1 단백질 (ZIKV)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, Fc 모이어티를 포함한다. 더 바람직하게는, 지카 바이러스의 NS1 단백질 (ZIKV)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, CH2 L4A 돌연변이, CH2 L5A 돌연변이, 또는 모두를 포함한다. CH2 L4A 돌연변이, CH2 L5A 돌연변이, 또는 모두를 포함하는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편의 구체적인 기술에 따르면, 상기 본 발명에 따른 중화 항체의 내용 내의 Fc 모이어티 및 CH2 L4A 돌연변이, CH2 L5A 돌연변이, 또는 모두에 지칭된다. 대응하는 구체적인 기술은 물론 바람직한 구현예는 그에 따라 지카 바이러스의 NS1 단백질 (ZIKV)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편에 또한 적용된다.
그러나, 지카 바이러스의 NS1 단백질 (ZIKV)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, Fc 모이어티를 포함하지 않는 것이 또한 바람직하다. 구체적으로 지카 바이러스의 NS1 단백질 (ZIKV)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 정제 항체, 정제 항체 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 또는 scFv인 것이 바람직하다. 보다 더 바람직하게는, 지카 바이러스의 NS1 단백질 (ZIKV)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 본 명세서에 기술된 것처럼, 예를 들면 비오티닐화, 예컨데 비오티닐화 Fab, Fab', 또는 F(ab')2 단편처럼 표지된다.
바람직하게는, 지카 바이러스의 NS1 단백질 (ZIKV)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 지카 바이러스 NS1 단백질의 항원 부위 S1 및/또는 항원 부위 S2에 결합한다. 본 발명자들은 놀랍게도 ZIKV NS1 단백질의 항원 부위 S1 및/또는 항원 부위 S2에 결합하는 항-ZIKV NS1 항체가 뎅기 바이러스 NS1 단백질 (DENV NS1)와 교차 반응하지 않는 것을 발견하였다. 항- ZIKV NS1 항체는, ZIKV NS1 단백질의 항원 부위 S1에도 항원 부위 S2에도 결합하지 않고, 그에 반해서, 전형적으로 DENV NS1와 교차-반응한다. 이 놀라운 발견은 ZIKV NS1 상의 항원 부위 S1 및 S2은 ZIKV NS1-특이적 항체를 DENV NS1에 교차-반응하는 항체와 구별하는 데 사용될 수 있는 것을 표시한다.
가장 바람직하게는, 지카 바이러스의 NS1 단백질 (ZIKV)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 지카 바이러스 NS1 단백질의 항원 부위 S2에 결합한다. 항원 부위 S2는 다수 ZIKV 혈통(lineages)에 높게 보존되어 있으나, 이는 다른 플라비바이러스의 NS1 상의 대응 위치와 서열 및 구조에서 동종(homologous)이지 않고, 그렇게 함으로써 ZIKV에 대한 독특한 특이성을 제공한다.
ZIKV NS1 단백질의 항원 부위 S1 및 S2는 본 발명자들에 의해 실시예 3, 도 6에 기술된 것처럼 확인되었다. 항체가 항원 부위 S1 및/또는 S2에 결합하는지 여부는 당해 기술자들에 의해 교차-경쟁 연구(cross-competition studies)를 사용하여 손쉽게 확인될 수 있고, 예를 들면 하기 또는 실시예 3에 기술된, 여기서 상기 gZKA15 (서열목록 번호: 91 - 99)에 따른 S1-특이적 항체 및/또는 gZKA35 (서열목록 번호: 127 - 135)에 따른 S2-특이적 항체는 "이차 항체"로 사용될 수 있다. 이러한 경쟁 분석에서, gZKA15 및/또는 gZKA35와 임의의 경쟁(전체 또는 일부)의 존재는 상기 시험되는 항체가 항원 부위 S1 및/또는 항원 부위 S2에, 각자 결합하는 것을 표시한다.
일반적으로, 경쟁 분석을 위해 단백질-단백질 결합의 특성감별을 위해 상업적으로 사용가능한 시스템, 예컨데 예를 들면 포르테바이오(ForteBio)에 의해 제공되는 "옥텟® RED96 시스템" (Octet® RED96 System)이, 구체적으로 공급자의 지시사항에 따라 사용될 수 있다.
예시적인 경쟁 분석, 일례로 포르테바이오에 의해 제공되는 옥텟® RED96 시스템을 사용해, ZIKV-NS1 단백질 (일례로 PBS 내 2.5 μg/ml로 희석) 은 APS 코팅된 센서-칩의 표면에 (일례로 7-9 분 동안) 고정될 수 있다. 코팅된 바이오센서는 그후 자유 바이오센서 결합 위치를 차단하기 위해 차단 완충액 (일례로, PBS 내 0.1% BSA; 일례로 6분 동안)을 함유하는 웰에 놓여질 수 있다. 코팅된 -바이오센서는 실험할 항체/항체들 (일례로 차단 완충액 내 예를 들면 10 μg/ml로 희석)과 함께 (일례로, 8분 동안) 배양될 수 있다. 실험할 항체 의 결합 후에(단계 1), 바이오센서는 "이차 항체", 일례로 gZKA15 및/또는 gZKA35를 함유하는 웰로 (일례로 8분 동안) 이동되었다 (단계 2). 경쟁, 부분 경쟁 또는 비경쟁은 따라서, 비연합(경쟁), 낮은 연합(부분 경쟁) 또는 (강한) 연합(비경쟁)이 검출되는 것에 따라 단계 2에서 결정될 수 있다.
상기 기술된 것처럼 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 바람직하게는 중쇄 상에 (최소한) 세 개의 상보성 결정 영역(CDR) 및 경쇄 상에 (최소한) 세 개의 CDR을 포함한다. 일반적으로, 상보성 결정 영역 (CDRs)은 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인 내에 존재하는 상위 가변 영역이다. 전형적으로, 항체의 중쇄의 CDR 및 연결된 경쇄가 함께 항원 수용체를 형성한다. 통상적으로, 세 개의CDR (CDR1, CDR2, 및 CDR3)은 가변 도메인 내에 비-연속적으로 배열된다. 항원 수용체는 전형적으로 두 개의 가변 도메인 (on 두 개의 상이한 폴리펩티드 사슬, 즉 중쇄 및 경쇄)로 구성되므로, 각각의 항원 수용체에 여섯 개의 CDR이 있다 (중쇄: CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3; 경쇄: CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3). 단일 항체 분자는 통상적으로 두 개의 항원 수용체를 가지고 그러므로 열 두개의 CDR을 함유한다. 중쇄 및/또는 경쇄 상의 CDR은 프레임워크 영역에 의해 분리될 수 있고, 여기서 프레임워크 영역(FR)은 CDR 보다 더 적게 "가변"인 가변 도메인 내 영역이다. 예를 들면, 사슬 (또는 각각의 사슬, 각자) 은, 세 개의 CDR에 의해 분리된 네 개의 프레임워크 영역으로 구성될 수 있다.
중쇄 상의 세 개의 상이한 CDR 및 경쇄 상의 세 개의 상이한 CDR을 포함하는, 다섯 개의 본 발명의 예시적인 항체의 중쇄 및 경쇄의 서열이 결정되었다. CDR 아미노산의 위치는 IMGT 넘버링 시스템에 따라 정의된다(IMGT: http://www.imgt.org/; cf. Lefranc, M.-P. et al. (2009) 핵산 Res. 37, D1006-D1012).
표 4는 본 발명에 따른 예시적인 항체의 중쇄 CDR (CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3) 및 중쇄 가변 영역 ("VH"로 지칭됨)의 아미노산 서열의 서열목록 번호를 보여준다:
항체 명칭 CDRH1 CDRH2 CDRH3 VH
ZKA15 91 92 93 98
ZKA25 109 110 111 116
ZKA35 127 128 129 134
ZKA10 153 154 155 156
ZKA18 157 158 159 160
ZKA28 161 162 163 164
ZKA29 165 166 167 168
ZKA33 169 170 171 172
ZKA39 173 174 175 176
ZKA43 177 178 179 180
ZKA44 181 182 183 184
ZKA46 185 186 187 188
ZKA50 189 190 191 192
ZKA54 193 194 195 196
ZKB18 197 198 199 200
ZKB20 201 202 203 204
ZKB21 205 206 207 208
ZKB23 209 210 211 212
ZKC29 213 214 215 216
ZKC31 217 218 219 220
ZKC32 221 222 223 224
ZKC33 225 226 227 228
ZKC34 229 230 231 232
ZKD25 233 234 235 236
표 5는 하기 본 발명에 따른 예시적인 항체의 경쇄 CDR (CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3) 및 경쇄 가변 영역 ("VL"로 지칭됨)의 아미노산 서열의 서열목록 번호를 보여준다:
항체 명칭 CDRL1 CDRL2 CDRL2 long CDRL3 VL
ZKA15 94 95 96 97 99
ZKA25 112 113 114 115 116
ZKA35 130 131 132 133 135
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 표 4 및/또는 표 5에 나타난 최소한 하나의 CDR 서열, VH 서열 및/또는 VL 서열에 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것이 따라서 바람직하다.
본 발명에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 93, 111, 129, 155, 159, 163, 167, 171, 175, 179, 183, 187, 191, 195, 199, 203, 207, 211, 215, 219, 223, 227, 231, 및 235 중 임의의; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것이 바람직하다.
더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 93, 111 및 129 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된다. 그렇게 함으로써, 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 93 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것이 바람직하다. 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 111 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것이 또한 바람직하다. 게다가, 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 129 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것이 또한 바람직하다.
가장 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 129, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하는 것이 또한 바람직하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1은 서열목록 번호: 91, 109, 127, 153, 157, 161, 165, 169, 173, 177, 181, 185, 189, 193, 197, 201, 205, 209, 213, 217, 221, 225, 229, 및 233 중 임의의; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 92, 110, 128, 154, 158, 162, 166, 170, 174, 178, 182, 186, 190, 194, 198, 202, 206, 210, 214, 218, 222, 226, 230, 및 234 중 임의의; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 93, 111, 129, 155, 159, 163, 167, 171, 175, 179, 183, 187, 191, 195, 199, 203, 207, 211, 215, 219, 223, 227, 231, 및 235 중 임의의; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
여전히 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1은 서열목록 번호: 91, 109 및 127 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 92, 110 및 128 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 93, 111 및 129 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
보다 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1은 서열목록 번호: 91 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 92 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 93 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
또한 심지어 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1은 서열목록 번호: 109 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 110 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 111 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1은 서열목록 번호: 127 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 128 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 129 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것이 특히 바람직하다.
더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 CDRL1은 서열목록 번호: 94, 112 및 130 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRL2는 서열목록 번호: 95, 96, 113, 114, 131 및 132 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 CDRL3은 서열목록 번호: 97, 115 및 133 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
보다 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 CDRL1은 서열목록 번호: 94 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRL2는 서열목록 번호: 95 또는 96, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 CDRL3 아미노는 서열목록 번호: 97 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 CDRL1은 서열목록 번호: 112 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRL2는 서열목록 번호: 113 또는 114, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 CDRL3 아미노는 서열목록 번호: 115 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것이 또한 심지어 더 바람직하다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
(i) 상기 최소한 하나의 CDRL1은 서열목록 번호: 130 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) 상기 최소한 하나의 CDRL2는 서열목록 번호: 131 또는 132, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(iii) 상기 최소한 하나의 CDRL3 아미노는 서열목록 번호: 133 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것이 특히 바람직하다.
가장 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 (i) 서열목록 번호: 91 - 93; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ii) 서열목록 번호: 109 - 111; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iii) 서열목록 번호: 127 - 129; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iv) 서열목록 번호: 153 - 155; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (v) 서열목록 번호: 157 - 159; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (vi) 서열목록 번호: 161 - 163; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (vii) 서열목록 번호: 165 - 167; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (viii) 서열목록 번호: 169 - 171; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ix) 서열목록 번호: 173 - 175; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (x) 서열목록 번호: 177 - 179; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xi) 서열목록 번호: 181 - 183; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xii) 서열목록 번호: 185 - 187; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xiii) 서열목록 번호: 189 - 191; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xiv) 서열목록 번호: 193 - 195; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xv) 서열목록 번호: 197 - 199; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xvi) 서열목록 번호: 201 - 203; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xvii) 서열목록 번호: 205 - 207; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xviii) 서열목록 번호: 209 - 211; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xix) 서열목록 번호: 213 - 215; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xx) 서열목록 번호: 217 - 219; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxi) 서열목록 번호: 221 - 223; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxii) 서열목록 번호: 225 - 227; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxiii) 서열목록 번호: 229 - 231; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; 또는 (xxiv) 서열목록 번호: 233 - 235; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 (i) 서열목록 번호: 91 - 95 및 97; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ii) 서열목록 번호: 91 - 94 및 96 - 97; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iii) 서열목록 번호: 109 - 113 및 115; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iv) 서열목록 번호: 109 - 112 및 114 - 115; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (v) 서열목록 번호: 127 - 131 및 133; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; 또는 (vi) 서열목록 번호: 127 - 130 및 132 - 133; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 아미노산 서열 및 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는 것이 특히 바람직하다.
가장 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 (i) 서열목록 번호: 127 - 131 및 133; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; 또는 (ii) 서열목록 번호: 127 - 130 및 132 - 133; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 아미노산 서열 및 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 (VH) 및, 선택적으로, 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하고, 여기서 상기 중쇄 가변 영역 (VH)은 서열목록 번호: 98, 116, 134, 156, 160, 164, 168, 172, 176, 180, 184, 188, 192, 196, 200, 204, 208, 212, 216, 220, 224, 228, 232, 및 236 중 임의의; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것이 또한 바람직하다.
가장 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 (i) 서열목록 번호: 98 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 99 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; (ii) 서열목록 번호: 116 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 117 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; 또는 (iii) 서열목록 번호: 134 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 135 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열을 포함한다.
가장 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 서열목록 번호: 134 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 135 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열을 포함한다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 gZKA15, gZKA25, 또는 gZKA35이고, 더 바람직하게는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 gZKA25 또는 gZKA35이고, 보다 더 바람직하게는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 gZKA35이다.
본 발명자들은 본 발명에 따른 단일클론 항체 (mAb)를 단리하였고, 이들은 본 명세서에서 ZKA15, ZKA25 및 ZKA35으로 지칭된다 (cf. 표 4 및 5, 실시예 1). 이들 항체, 구체적으로 이들 항체의 VH 및 VL 유전자에 기초하여, 용어 "gZKA15", "gZKA25" 및 "gZKA35"는, 본 명세서에 사용된 바처럼, 각자 "일반" 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 지칭한다.
다시 말해, "gZKA15"은 서열목록 번호: 91 에 따른 CDRH1 아미노산 서열, 서열목록 번호: 92 에 따른 CDRH2 아미노산 서열, 서열목록 번호: 93 에 따른 CDRH3 아미노산 서열, 서열목록 번호: 94 에 따른 CDRL1 아미노산 서열, 서열목록 번호: 95 또는 96 에 따른 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열목록 번호: 97 에 따른 CDRL3 아미노산 서열을 가지는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 지칭한다. 중쇄 가변 영역 (VH)은 바람직하게는 서열목록 번호: 98 에 따른 아미노산 서열을 가지고 경쇄 가변 영역 (VL)은 바람직하게는 서열목록 번호: 99 에 따른 아미노산 서열을 가진다.
"gZKA25"는 서열목록 번호: 109 에 따른 CDRH1 아미노산 서열, 서열목록 번호: 110 에 따른 CDRH2 아미노산 서열, 서열목록 번호: 111 에 따른 CDRH3 아미노산 서열, 서열목록 번호: 112 에 따른 CDRL1 아미노산 서열, 서열목록 번호: 113 또는 114 에 따른 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열목록 번호: 115 에 따른 CDRL3 아미노산 서열을 가지는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 지칭한다. 중쇄 가변 영역 (VH)은 바람직하게는 서열목록 번호: 116 에 따른 아미노산 서열을 가지고 경쇄 가변 영역 (VL)은 바람직하게는 서열목록 번호: 117 에 따른 아미노산 서열을 가진다.
"gZKA35"는 서열목록 번호: 127 에 따른 CDRH1 아미노산 서열, 서열목록 번호: 128 에 따른 CDRH2 아미노산 서열, 서열목록 번호: 129 에 따른 CDRH3 아미노산 서열, 서열목록 번호: 130 에 따른 CDRL1 아미노산 서열, 서열목록 번호: 131 또는 132 에 따른 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열목록 번호: 133 에 따른 CDRL3 아미노산 서열을 가지는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 지칭한다. The 중쇄 가변 영역 (VH)은 바람직하게는 서열목록 번호: 134 에 따른 아미노산 서열을 가지고 및 경쇄 가변 영역 (VL)은 바람직하게는 서열목록 번호: 135 에 따른 아미노산 서열을 가진다.
"항체의 제조" (상기 섹션 "항체의 제조") 및 "항체의 선택적 추가적 특성" (상기 섹션 "항체의 선택적 추가적 특성")로 지칭되는 상세한 설명은 본 명세서에 기술된 모든 항체, 및 그의 항원 결합 단편에 적용되고, - 즉 이들 섹션은 본 발명에 따른 중화 항체, 및 그의 항원-결합 단편 뿐만 아니라, 본 발명에 따른 NS1-단백질 결합 항체, 및 그의 항원-결합 단편에도 적용된다.
구체적으로, 본 결합 항체발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 표지, 예를 들면 비오티닐화된 것이 바람직하다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 비오티닐화된다.
본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 효소, 예컨데 호스래디쉬 퍼록시다아제 (HRP)에 접합되는 것이 또한 바람직하다. HRP 에의 항체의 접합은, 예를 들면, Wisdom GB. Conjugation of antibodies to horseradish peroxidase. Methods Mol Biol. 2005;295:127-30 또는 Antibodies - a laboratory manual. Edited by Edward A. Greenfield, Second edition 2012, Cold Spring Harbor Laboratory Press, ISBN: 9781936113811에 기술되어 있다.
예를 들면, 본 발명의 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 예를 들면 가측성을 제공하는, 일례로 정량화를 위해 또는 영상화를 촉진하는 검출가능한 표지에 커플링될 수 있다. 표지된 항체는 매우 다양한 분석에서, 구체적으로 면역분석에서, 매우 다양한 표지를 써서 쓰일 수 있다. 바람직한 표지는 방사성핵종, 효소, 조효소, 형광 물질, 화학발광제, 색소원, 효소 기질 또는 보조-인자, 효소 억제제, 보조군 복합체), 자유 라디칼, 입자, 염료 (일례로, 형광 염료, 탄뎀(tandem) 염료), 및 등등을 포함한다. 적합한 효소의 예는 호스래디쉬 퍼록시다아제 (HRP), 알카린 포스파타아제, β-갈락토시다아제, 또는 아세틸콜린에스테라아제를 포함하고; 적합한 배합군 복합체의 예는 스트렙타비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴을 포함하고; 적합한 형광 물질의 예는 움벨리페론, 플루오레세인, 플로오레세인 이소시오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 파이코에리스린을 포함하고; 발광 물질의 예는 루미놀이다; 생물발광 물질의 예는 루시퍼라아제, 루시페린, 및 애큐오린을 포함하고; 및 적합한 방사성 물질의 예는 125I, 131I, 35S, 또는　3H를 포함한다. 이러한 표지된 시약은 다양한 잘 알려진 어세이, 예컨데 방사선면역측정법, 효소 면역측정법, 일례로, ELISA, 형광 면역측정, 및 등등, 바람직하게는 ELISA에서 사용될 수 있다. 표지된 본 발명에 따른 항체는 따라서, 예를 들면 US 3,766,162; US 3,791,932; US 3,817,837; 및 US 4,233,402에 기술된 이러한 어세이에서 사용될 수 있다.
바람직한 표지는 (i) 구체적으로 결합의 차단 분석(Blockade-of-binding assay), 웨스턴 블롯팅, ELISA 및 면역조직화학에서, 상기 기술된 효소, 일례로 호스래디쉬 퍼록시다아제 (HRP) 또는 알카린 포스파타아제; (ii) 구체적으로 ELISA 및 면역조직화학에서, 상기 기술된 보조군 복합체, 일례로 스트렙타비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴; (iii) 구체적으로 면역형광법 및 유동 세포계측법에서, 상기 기술된 형광 물질, 예컨데 형광 염료 및 형광 단백질 (일례로, (증진된) 녹색 형광 단백질 (EGFP); TagBFP, 터키석(Turquoise), 비너스(Venus), KO2, 체리(Cherry), 애플(Apple), Kate2); 및 (iv) 유동 세포계측법에서탄뎀 염료를 함유한다.
바람직하게는, 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 비오티닐화 된다. 비오티닐화는 신속, 특이적이고 비오틴의 작은 크기 때문에 (MW = 244.31 g/mol) 분자의 자연적 기능을 교란할 개연성이 낮다. 비오틴은 극히 높은 친화성, 빠른 속도, 및 높은 특이성으로 스트렙타비딘 및 아비딘에 결합한다. 스트렙타비딘 및 아비딘에의 비오틴-결합은 극단의 열, pH 및 단백질 가수분해에 저항력이 있어, 비오티닐화 분자의 포획을 다양한 환경에서 가능하게 만든다. 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 화학적으로 또는 효소적으로 비오티닐화될 수 있다. 화학적 비오티닐화는 아민의 비특이적 비오티닐화를 산출하는 다양한 접합 화학을 유용한다 (일례로, NHS-커플링은 항체 내 임의의 일차 아민의 비오티닐화를 준다, 하기 참조). 효소적 비오티닐화는 박테리아 비오틴 리가아제의 사용에 의해 특정 서열 내의 특이적 라이신의 비오티닐화를 초래한다.
게다가, 이차 항체, 또는 그의 항체 단편도, 또한 표지로 사용될 수 있다. 이 사안에서, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 이차 항체, 또는 그의 항체 단편에 접합되어, 예를 들면 US 4,676,980에 기술된 항체 이형접합체를 형성한다. 이 사안에서, 이차 항체는 본 명세서에 기술된 것처럼 선택적으로 표지될 수 있다.
표지에 항체 커플링을 위한 방법은 당해 분야에서 잘 알려져 있다. 예를 들면, 항체에서 또는 그의 항원 결합 단편에서, 일차 아민(-NH2)으로 종결하는 라이신의 잔기는 항체에 또는 그의 항원 결합 단편에 표지를 공유적으로 연결하는데 사용될 수 있다. 많은 변종 표지화 절차가 문헌에 기술되어 있다 예를 들면, 표지화 접근(the labelling approach)이 NHS 에스테르, 이종양기능 시약(heterobifunctional reagent), 카르보디이미드(carbodiimide) 및 소듐 페리오데이트(sodium periodate)로 구성된 군에서 선택될 수 있다.
NHS 에스테르는 구체적으로 형광 염료 표지의 경우에 사용될 수 있다. 형광 염료 표지는 내재된 NHS 에스테르 (또한 '숙시니미딜 에스테르'(succinimidyl ester)로 불림)와 함께 표지의 활성화된 형태로 구매될 수 있다. 활성화된 염료는 항체와 또는 그의 항원 결합 단편 (일례로 라이신 기를 통해)과 함께 적절한 환경 하에서 반응될 수 있다. 과도한 반응 염료는 표지된 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 면역분석에 사용될 수 있기 이전에 (일례로 컬럼크로마토그래피에 의해) 제거될 수 있다.
이종양기능 시약은 구체적으로 만약 표지가 단백질 분자 (일례로 HRP, 알카린 포스파타아제, 또는 파이코에리스린)이라면 사용될 수 있다. 이 사안에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편 및 표지는 복합 아민을 가질 수 있다. 이 상황에서 하나의 분자 상의 (일례로 항체 상 또는 그의 항원 결합 단편 상의) 일부 라이신은 새로운 반응 기(X) 및 라이신을 표지 상에 생성하여 또다른 반응 기(Y)를 생성하도록 (또는 반대로) 변형될 수 있다. '이종양기능 시약' 은 그후 Y 기를 도입하기 위해 사용되고, 이는 순차적으로 항체 및 표지가 혼합되어 있는 경우 X 기와 반응하고, 그후 이종이형접합체를 생성한다.
카르보디이미드는, 예컨데 EDC는, 구체적으로 아민-및 카르복실-함유 분자 사이의 공유적 링크를 생성하는 데 사용될 수 있다. 카르보디이미드는 카르복실 기를 활성화하고, 활성화된 중간체는 그후 (일례로 항체 또는 그의 항원 결합 단편 상의 라이신 잔기에 의해 제공된) 아민에 의해 공격받는다. 카르보디이미드는 항체를 구체적으로 카르복실화된 입자 (일례로 라텍스 입자, 자성 비드), 및 다른 카르복실화된 표면, 예컨데 마이크로웰 접시 또는 칩 표면에 접합하는데 사용될 수 있다. 카르보디이미드는 또한 염료 또는 단백질 표지를 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 부착하는데 사용될 수 있다.
소듐 페리오데이트는 구체적으로 호스래디쉬 퍼록시다아제 (HRP)와 표지화를 위해 사용될 수 있다. 페리오데이트는 HRP 분자 상에서 카보하이드레이트 사슬을 활성화하여 알데하이드 기를 생성하고, 항체 또는 그의 항원 결합 단편 상의 라이신과 반응할 수 있다. HRP 자신은 라이신이 거의 없기 때문에, 유의적인HRP 중합화 없이 항체-HRP 접합체를 생성하기에 상대적으로 용이하다.
선택적으로, 링커는, 일례로, US 4,831,175에 기술된 것처럼, 표지 및 본 발명의 항체 사이에 사용될 수 있다. 항체 또는, 그의 항원-결합 단편은 방사능 요오드, 인듐, 이트륨, 또는 다른 방사능 입자 당해 분야에서 알려진, 일례로, US 5,595,721에 기술된 것과 직접적으로 표지될 수 있다.
그에 따라, 본 발명은
(i) 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; 및
(ii) 상기 기술된 표지를 포함하는 복합체를 또한 제공한다.
그에 따라, 이러한 복합체는 바람직하게는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편에 접합된 표지이다. 바람직하게는, 표지 및 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 공유결합된다.
예를 들면, 본 발명에 따른 복합체는 (i) 본 발명에 따른 항체 및 (ii) 펩티드 또는 단백질, 예컨데 형광 펩티드 또는 단백질, 일례로 EGFP인 표지를 포함하는 융합 단백질일 수 있다.
또다른 측면에서, 본 발명은 또한 상기 기술된 본 발명에 따른 항체, 또는, 그의 항원 결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 포함하는 핵산 분자 또는, 구체적으로 본 발명에 따른 복합체가 상기 기술된 융합 단백질인 경우, 상기 기술된 본 발명에 따른 복합체를 제공한다.
핵산 분자 및/또는 폴리뉴클레오티드의 예는, 일례로, 재조합 폴리뉴클레오티드, 벡터, 올리고뉴클레오티드, RNA 분자 예컨데 rRNA, mRNA, miRNA, siRNA, 또는 tRNA, 또는 DNA 분자 예컨데 cDNA를 포함한다.
본 발명의 항체의 경쇄 또는 중쇄 및 CDR의 일부 또는 전부를 암호화하는 핵산 서열이 바람직하다. 바람직하게는 따라서 경쇄 또는 중쇄의 일부 또는 전부, 구체적으로 본 발명의 예시적인 항체의 VH 및 VL 서열 및 CDR을 암호화하는 핵산 서열이 본 명세서에 제공된다. 표 4 및 5는 본 발명에 따른 예시적인 항체의 CDR 및 VH 및 VL을 암호화하는 핵산 서열을 위한 서열목록 번호를 제공한다.
표 6은 하기에 본 발명에 따른 예시적인 항체의 CDR 및 VH 및 VL을 암호화하는 예시적인 핵산 서열을 위한 서열목록 번호를 제공한다. 유전 부호의 중복성으로 인해, 본 발명은 또한 이들 핵산 서열의 서열 변종 및, 구체적으로 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 그러한 서열 변종을 포함한다.
핵산 분자는 핵산 성분을 포함하는, 바람직하게는 이로 구성되는 분자이다. 용어 핵산 분자는 바람직하게는 DNA 또는 RNA 분자를 지칭한다. 구체적으로, 이는 용어 "폴리뉴클레오티드"와 동의어로 사용된다. 바람직하게는, 핵산 분자는 설탕/포스페이트-중추(backbone)의 포스포디에스테르-결합에 의해 서로 공유적으로 연결된 뉴클레오티드 단량체를 포함하거나 또는 이로 구성되는 중합체이다. 용어 "핵산 분자"는 또한 변형된 핵산 분자, 예컨데 염기-변형된, 설탕-변형된 또는 중추-변형된 등등, DNA 또는 RNA 분자를 아우른다.
표 6은 본 발명에 따른 세 개의 예시적인 항체("ZKA15", "ZKA25", "ZKA35")의 CDR 및 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)의 예시적인 핵산 서열을 보여준다:
ZKA15 서열목록 번호 핵산 서열
CDRH1 100 ggtggcttcatcaatagttactac
CDRH2 101 atctataaaagtgggagcacc
CDRH3 102 gcgagagatccctacggtgactacgttaaggcttttgatatt
CDRL1 103 cagagcctcctgcatagtaatggatacaactat
CDRL2 104 ttgggttct
CDRL2 long 105 ctgatctatttgggttctaatcgggcc
CDRL3 106 atgcaagctctacaaactgtcact
VH 107 caggtgcagctgcaggagtcggggccaggactggtgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcactgtctccggtggcttcatcaatagttactactggagctggatccggcagcccgccgggaagggactggagtggattgggcgtatctataaaagtgggagcaccaactacaacccctccctcaagagtcgagtcaccatgtcactagacacgtccaagtaccagttctccctgaagctgaggtctgtgaccgccgctgacacggccgtgtattactgtgcgagagatccctacggtgactacgttaaggcttttgatatttggggccaagggacaatggtcaccgtctcttcag
VL 108 gatattgtgatgactcagtctccactctccctgcccgtcacccctggagagccggcctccatctcctgcaggtctagtcagagcctcctgcatagtaatggatacaactatttgaattggtacctgcagaagccagggcagtctccacagctcctgatctatttgggttctaatcgggcctccggggtccctgacaggttcagtggcagtggatcaggcacagattttacactgaaaatcagcagagtggaggctgaggatgttggggtttattactgcatgcaagctctacaaactgtcactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaac
ZKA25 서열목록 번호 핵산 서열
CDRH1 118 ggattcacctttagaagtcattgg
CDRH2 119 ataaaggaagatggatatgagaaa
CDRH3 120 gcgagagatttgagggtatatagtgggagaggtttcgacccc
CDRL1 121 aaattgggggataaatat
CDRL2 122 caagatagc
CDRL2 long 123 gtcatctatcaagatagcaagcggccc
CDRL3 124 caggcgtgggacagcagcactgtggta
VH 125 gaggtgcagttggtggagtctgggggaggcttggtccggcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttagaagtcattggatgagttgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtggccaacataaaggaagatggatatgagaaatactatgtggactctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaagagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagagatttgagggtatatagtgggagaggtttcgacccctggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcag
VL 126 tcctatgagctgactcagccaccctcactgtccgtgtccccaggacagacagccagcatcacctgctctggagataaattgggggataaatatgcttgctggtatcagcagaagccaggccagtcccctgtgttggtcatctatcaagatagcaagcggccctcagggatccctgcgcgattctctggctccaactctgggaacacagccactctgaccatcagcgggacccaggctatggatgaggctgactattactgtcaggcgtgggacagcagcactgtggtattcggtggagggaccaagctgaccgtcctag
ZKA35 서열목록 번호 핵산 서열
CDRH1 136 ggtggctccatcagcactggtggttactac
CDRH2 137 atctattacagtgggaacacc
CDRH3 138 gcgaaaggaggagggagggagcgaccctttgactac
CDRL1 139 agctccaacatcggaagaaattat
CDRL2 140 aggaataat
CDRL2 long 141 ctcatctataggaataatcagcggccc
CDRL3 142 gtagcatgggatgacagccggagtggttttgtggta
VH 143 caggtgcagctgcaggagtcgggcccaggactggtgaagccttcacagaccctgtccctcacctgcactgtctctggtggctccatcagcactggtggttactactggagctggatccgccagcacccagggaagggcctggagtggattggttacatctattacagtgggaacacctactacaacccgtccctcaagagtcgagttaccatatcagttgacacctctaagaagcagttctccctgaagctgagctctgtgactgccgcggacacggccgtgtattactgtgcgaaaggaggagggagggagcgaccctttgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcag
VL 144 cagtctgtgctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatctcttgttctggaagcagctccaacatcggaagaaattatgtagactggtaccagcaactcccaggaacggcccccaaactcctcatctataggaataatcagcggccctcaggggtccctgagcgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccggtccgaggatgaggctgattattactgtgtagcatgggatgacagccggagtggttttgtggtattcggcggagggaccaaggtgaccgtcctag
바람직하게는, 본 발명에 따른 핵산 분자의 서열은 서열목록 번호: 100 - 108, 118 - 126, 및 136 - 144 중 임의의 하나에 따른 핵산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된다.
본 발명에 따른 핵산 서열은, 본 발명에 따른 (예시적인) 항체에서 사용된 CDR, VH 서열 및/또는 VL 서열을 암호화하는 핵산, 예를 들면 표 6에 보여진 서열과 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한　90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 일치성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 것이 또한 바람직하다.
일반적으로, 핵산 분자는 특정한 핵산 서열을 삽입, 삭제 또는 변경하여 조작될 수 있다. 이러한 조작으로부터의 변화는, 이에 제한되지 않지만, 제한 부위를 도입, 코돈 사용을 수정, 전사 및/또는 번역 조절 서열을 추가 또는 최적화하는, 등등의 변화를 포함한다. 또한 핵산을 변화하여 암호화된 아미노산을 변경하는 것도 가능한다. 예를 들면, 항체의 아미노산 서열 내로 하나 이상의 (일례로, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 등등.) 아미노산 치환, 삭제 및/또는 삽입을 도입하는 것이 유용할 수 있다. 이러한 점 돌연변이는 작동자 기능, 항원-결합 친화성, 번역후 변형, 면역원성, 등등을 변형할 수 있고, 공유기(일례로, 표지)의 부착을 위해 아미노산을 도입할 수 있고 또는 태그를 (일례로, 정제 목적을 위해) 도입할 수 있다. 돌연변이는 특이적 부위에 도입될 수 있거나 또는, 선택에 뒤이어 (일례로, 분자 진화) 무작위로 도입될 수 있다. 사례를 들면, 본 발명의 (예시적인) 항체의 임의의 CDR 영역, VH 서열 및/또는 VL 서열을 암호화하는 하나 이상의 핵산은 암호화된 아미노산 내에 상이한 성질을 도입하도록 무작위로 또는 지향적으로 돌연변이될 수 있다. 이러한 변화는 초기 변화는 보유되고 다른 뉴클레오티드 위치에서의 새로운 변화는 도입되는 반복적 공정의 결과일 수 있다. 더욱이, 비의존적 단계에 도달된 변화는 조합될 수 있다. 암호화된 아미노산에 도입된 상이한 성질은, 이에 제한되지 않지만, 증진된 친화성을 포함할 수 있다.
본 발명의 범주 내에 벡터, 예를 들면, 본 발명에 따른 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터가 더욱 포함된다. 바람직하게는, 벡터는 상기 기술된 핵산 분자를 포함한다.
용어 "벡터"는 핵산 분자, 바람직하게는 재조합 핵산 분자, 즉 자연적으로 발생하지 않는 핵산 분자를 지칭한다. 벡터는 본 발명의 내용에서 원하는 핵산 서열을 통합하거나 정박하기에 적합하다. 이러한 벡터는 저장 벡터, 발현 벡터, 클로닝 벡터, 이동 벡터 등등일 수 있다. 저장 벡터는 핵산 분자의 편리한 저장을 허용하는 벡터이다. 따라서, 벡터는, 일례로, 본 발명에 따른 원하는 항체 또는 그의 항체 단편에 대응하는 서열을 포함할 수 있다. 발현 벡터는 발현 산물, 예컨데 RNA, 일례로 mRNA, 또는 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질의 생산에 사용될 수 있다. 예를 들면, 발현 벡터는 벡터의 서열 신장의 전사에 필요한 서열, 예컨데 프로모터 서열을 포함할 수 있다. 클로닝 벡터는 전형적으로 클로닝 부위를 함유하는 벡터이고, 이는 벡터 내로 핵산 서열을 통합하는데 사용될 수 있다. 클로닝 벡터는, 일례로, 플라스미드 벡터 또는 박테리오파지 벡터일 수 있다. 이동 벡터는 세포 또는 유기체 내로 이동하는데 적합한 벡터, 예를 들면, 바이러스 벡터일 수 있다. 벡터는 본 발명의 내용에서, 일례로, RNA 벡터 또는 DNA 벡터일 수 있다. 바람직하게는, 벡터는 DNA 분자이다. 예를 들면, 벡터는 본 명세서의 의미에서 클로닝 부위, 선택 마커, 예컨데 항생제 내성 인자, 및 벡터의 증식에 적합한 서열, 예컨데 복제 원점을 포함한다. 바람직하게는, 현재 명세서의 내용에서 벡터는 플라스미드 벡터이다.
부가적 측면에서, 본 발명은 또한 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편를 발현하는 ; 및/또는본 발명에 따른 벡터를 포함하는 세포를 제공한다.
이러한 세포의 예는 이에 제한되지 않지만, 진핵 세포, 일례로, 효모 세포, 동물 세포 또는 식물 세포를 포함한다. 바람직하게는, 세포는 포유류 세포, 더 바람직하게는 포유류 세포주이다. 바람직한 예는 인간 세포, CHO 세포, HEK293T 세포, PER.C6 세포, NS0 세포, 인간 간 세포, 골수종 세포 또는 하이브리도마 세포를 포함한다.
구체적으로, 세포는 본 발명에 따른 벡터로, 바람직하게는 발현 벡터와 함께, 형질주입될 수 있다. 용어 "형질주입"은 핵산 분자, 예컨데 DNA 또는 RNA (일례로 mRNA) 분자의, 세포 내로, 바람직하게는 진핵 세포 내로의 도입을 지칭한다. 본 발명의 내용에서, 용어 "형질주입"은 세포 내로, 바람직하게는 진핵 세포 내로, 예컨데 포유류 세포 내로 핵산 분자를 도입하기 위해 당해 기술자들에게 알려진 임의의 방법을 아우른다. 이러한 방법은, 예를 들면, 전기천공, 일례로 양이온성 지질 및/또는 리포솜에 기초한 리포펙션, 인산칼슘 침전, 형질주입에 기초한 나노입자, 형질주입에 기초한 바이러스, 또는 양이온성 중합체, 예컨데 DEAE-덱스트란 또는 폴리에틸렌이민(polyethylenimine) 등등에 기초한 형질주입을 아우른다. 바람직하게는, 도입은 비-바이러스성이다.
게다가, 본 발명의 세포는, 일례로 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 발현하기 위해, 본 발명에 따른 벡터로 안정적으로 또는 일시적으로 형질주입될 수 있다. 바람직하게는, 세포는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 암호화하는 본 발명에 따른 벡터로 안정적으로 형질주입된다. 대안적으로, 또한 세포는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 암호화하는 본 발명에 따른 벡터로 일시적으로 형질주입되는 것이 바람직하다.
부가적 측면에서, 본 발명은 또한 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; 상기 기술된 본 발명에 따른 복합체; 상기 기술된 본 발명에 따른 핵산 분자; 상기 기술된 본 발명에 따른 벡터; 또는 상기 기술된 본 발명에 따른 세포를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편 또는 상기 기술된 본 발명에 따른 복합체를 포함하는 조성물이 바람직하다.
이러한 조성물은 중화 항체의 내용에서 상기 기술된 약학 조성물일 수 있고, 그에따라 상기 기술된 이러한 약학 조성물의 상세한 설명 및 바람직한 구현예는 그에 따라 ZIKV NS1 단백질에 결합하는 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편에 적용된다. 그러나, 조성물은 또한 비-약학 목적, 예컨데 (ZIKV 감염의) 진단에서 또는 분석 목적을 위해 사용될 수 있다.
바람직하게는, 조성물은, 일례로 직접 사용, 일례로 진단 분석을 위한 액체 내 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공하는, 액체 형태일 수 있다. 액체(입자)는 목적, 일례로 분석에 따라 선택될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물은 PBS (인산-완충 식염수) 또는 또다른 완충액을 포함한다. 이러한 완충액은 바람직하게는 생물학적 완충액이고, 상기 조성물은 따라서 MES, BIS-TRIS, ADA, PIPES, ACES, MOPSO, BIS-TRIS 프로판, BES, MOPS, TES, HEPES, DIPSO, TAPSO, 트리즈마(Trizma), POPSO, HEPPS, TRICINE, Gly-Gly, BICINE, HEPBS, TAPS, AMPD, AMPSO, CHES, CAPSO, AMP, CAPS 및 CABS 중 임의를 포함할 수 있다. 상기 조성물은 링거스 액(Ringer's solution)을 포함하는 것이 또한 바람직하다. 상기 조성물은 또한 트리스(Tris), 일례로, 트리스-HCl를 포함한다.
본 발명에 따른 조성물은 또한 세제, 일례로, 트윈(Tween) (폴리소르베이트), 예컨데 트윈 20 또는 트윈 80를 포함할 수 있다. 세제는 바람직하게는 낮은 수준, 일례로, 0.01% 미만으로 존재한다. 조성물은 또한 장력을 주기 위해 소듐 염 (일례로, 소듐 클로라이드) 를 함유할 수 있다. 예를 들면, 농도10±2mg/ml NaCl 이 전형적이다.
더불어, 본 발명에 따른 조성물은 선택적으로 단백질 안정화제, 예컨데 BSA (소 혈청 알부민) 또는 HSA (인간 혈청 알부민)을 포함한다. 본 발명에 따른 조성물에 선택될 수 있는, 단백질 안정화제의 부가적 예는, 일례로 상기 기술된 완충액; 염, 예컨데 소듐 클로라이드; 아미노산, 예컨데 히스티딘, 글라이신, 및 아르기닌; 폴리올/다이사카라이드/폴리사카라이드, 예컨데 트레할로스 및 수크로오즈 (다이사카라이드), 만니톨 및 솔비톨 (당 알코올); 계면활성제, 예컨데 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 및 HSA 또는 BSA 같은 단백질; 중합체, 예컨데 덱스트란 및 폴리에틸렌 글리콜; 및 항산화제를 포함한다.
뿐만 아니라, 본 발명에 따른 조성물은 선택적으로 보존제, 예컨데 소듐 아지드를 포함할 수 있다. 보존제는 전형적으로 미생물 오염을 방지하기 위해 사용된다.
부가적 측면에서, 본 발명은 또한 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 복합체 또는 본 발명에 따른 조성물을 포함하는 키트의 부분을 제공한다.
이러한 키트의 부분은 선택적으로 하나 이상의 하기를 더 포함할 수 있다:
(i) 하나 이상의 용액, 일례로 진단 분석에서, 일례로 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 희석하여 사용되는;
(ii) 리플렛, 일례로 사용 지시사항과 함께;
(iii) 상기 기술된 표지 및, 선택적으로, 표지를 위해 요구되는 용액 및/또는 부가 성분; 및/또는
(iv) 관 또는 기구, 일례로 진단 분석에 유용한, 예를 들면 하나 이상의ELISA 접시.
바람직하게는, 상기 기술된 본 발명에 따른 키트는 색상 발현을 위한 기질을 또한 포함한다. 이러한 기질의 예는, 구체적으로 알카린 포스파타아제를 통한 검출의 경우 p-NPP; 또는 구체적으로 호스-래디쉬 퍼록시다아제 (HRP)를 사용하는 경우 ABTS, TMB 또는 OPD 같은 효소를 함유한다. 선택적으로, 상기 기질은 적합한 완충액, 일례로 본 발명에 따른 조성물의 내용에서 상기 기술된 완충액에 희석될 수 있다. 대안적으로, 상기 기질 및 상기 완충액은 키트 내 분리된 단위로 제공될 수 있다.
표지에 관해, 본 발명에 따른 키트는 또한 효소 접합된 스트렙타비딘, 또는 항체의 결합을 검출하기 위한 다른 시스템을 포함할 수 있다. 예를 들면, 프로브 항체는 뮤린화된(murinized) 형태로 만들어질 수 있고 이 사안에서 결합은 항-마우스 이차적 항체 - 비오티닐화의 도움없이 검출될 수 있다. 항-마우스 이차적 항체는 전형적으로 다클론 및/또는 인간 항체와 반응하지 않도록 교차-흡수된다.
게다가, 본 발명에 따른 키트는 바람직하게는 하나 이상의ELISA 접시를 포함한다. 더 바람직하게는, 이들 ELISA 접시는 ZIKV-NS1 단백질로 사전-코팅된다. 선택적으로, 이러한 사전-코팅된 ELISA-접시는 미리-차단될 수 있다.
지카 바이러스 감염의 진단
부가적 측면에서, 본 발명은 또한, ZIKV NS1 단백질에 결합하는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 복합체, 본 발명에 따른 조성물 또는 본 발명에 따른 키트의 부분의 지카 바이러스 (ZIKV) 감염의 진단의 용도를 제공한다.
지카 바이러스 (ZIKV) 감염의 진단은 전형적으로 생체외, 일례로 진단할 대상의 단리된 샘플에서 수행될 수 있다. 대상의 바람직한 단리된 샘플은 체액의 샘플 및 조직 샘플을 함유한다. 체액의 샘플이 더 바람직하다. ZIKV 감염의 진단을 위한 바람직한 체액은 혈액 (일례로 전혈, 혈장, 혈청), 타액 및 소변을 함유한다. 혈액, 구체적으로 혈장 또는 혈청이, 가장 바람직하다.
그에 따라, 본 발명은 또한, ZIKV NS1 단백질에 결합하는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 복합체, 본 발명에 따른 조성물 또는 본 발명에 따른 키트의 부분의 단리된 (체액의) 샘플, 예컨데 단리된 혈액 샘플이, 지카 바이러스에 감염되었는지를결정하는 용도를 제공한다. 상기 기술된 것처럼 ZIKV 감염의 진단을 위한 바람직한 체액은 혈액 (일례로 전혈, 혈장, 혈청), 타액 및 소변을 함유한다. 혈액, 구체적으로 혈장 또는 혈청이, 더 바람직하다.
지카 바이러스 감염의 진단을 위해, 상이한 진단 분석이 사용될 수 있다. 바람직한 진단 분석은 면역분석이다. 면역분석의 바람직한 예는 ELISA, 면역형광법, 면역조직화학 및 유동 세포계측법을 함유한다. 바람직하게는, 진단은 ELISA를 함유한다. 예를 들면, 표준 ELISA, 샌드위치 ELISA 또는 결합 분석의 차단이 사용될 수 있다.
바람직하게는, 진단 분석은
(i) ZIKV NS1 단백질 자체(의 존재); 및/또는
(ii) 항-ZIKV NS1 항체(의 존재)를
진단할 대상의 (단리된) 샘플에서 검출한다..
바람직하게는, 결합의 차단 분석이 사용된다. 이 분석에서, 진단할 대상으로부터 단리된 샘플 (일례로, 체액의 샘플, 예컨데 혈액 (일례로 전혈, 혈장, 혈청), 타액 및 소변)은 ZIKV NS1 단백질로 코팅된 ELISA 접시에 추가되고 결합을 위해 (예를 들면, 최소한 약 30 분 또는 최소한 약 한 시간 동안) 배양된다. ELISA 접시 후에, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편이 ("프로브 항체"로서) 추가되고, 여기서 본 발명에 따른 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 바람직하게는, 일례로 비오티닐화 또는 호스래디쉬 퍼록시다아제 (HRP)에 접합되어 표지된다. 또다른 배양 시간 이후 (일례로, 최소한 약 1 분, 바람직하게는 최소한 약 3 분, 더 바람직하게는 최소한 약 5 분, 보다 더 바람직하게는 최소한 약 10 분, 가장 바람직하게는 최소한 약 15 분), 본 발명에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 결합의 억제가 결정될 수 있다.
일반적으로, 결합의 억제는 대상의 샘플 내 -ZIKV NS1 항체의 존재를 보여주고, 따라서 대상의 ZIKV 감염을 표시한다. 비-감염된 대상의 샘플에서, 그에 반해서, 전형적으로 결합의 억제는 예상되지 않는다. 벡터, 본 발명의 ZIKV NS1-결합 항체를 사용한 이러한 분석은 다른 플라비바이러스에 이미 감염된 대상에서 양성값을 기록하지 않는다. 플라비바이러스는 전형적으로 ZIKV와 교차-반응하는 많은 수의 항체를 유도한다. 다시 말해서 이 분석은 매우 특이적이고 교차-반응 Ab에 의해 영향받지 않는다.
그에 따라, 본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는 생체-외 지카 바이러스 감염의 진단의 위한 결합의 차단 분석을 제공한다:
(i) 검출할 대상으로부터 단리된 샘플을 ZIKV NS1 단백질이 코팅된 접시에 추가 및 상기 샘플을 상기 접시 상에 배양하는 단계,
(ii) 청구항 제47 항 내지 제75항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편 또는 청구항 제76항에 따른 복합체를 추가하는 단계,
(iii) 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 결합의 결합의 억제를 결정하는 단계.
바람직하게는, 진단할 대상으로부터 상기 단리된 샘플은 혈액, 타액 및 소변으로부터 선택되고; 바람직하게는 상기 샘플은 혈액 샘플, 예컨데 전혈, 혈장 또는 혈청이다.
단계 (ii)에서 추가되는, 항체, 또는 그의 항원-결합 단편은 표지된, 바람직하게는 비오티닐화 또는 호스래디쉬 퍼록시다아제 (HRP)에 접합된 것이 또한 바람직하다.
게다가, 진단할 대상으로부터 상기 단리된 샘플은 바람직하게는, 예를 들면 1:5 - 1:50, 바람직하게는 1 : 5 - 1 : 25, 예컨데 1 : 10로 희석된다.
바람직하게는, 단계 (i) 내 배양 시간은 최소한 5 분, 바람직하게는 최소한 15 분, 더 바람직하게는 최소한 30 분, 보다 더 바람직하게는 최소한 45 분 및 가장 바람직하게는 최소한 60 분이다.
뿐만 아니라 단계 (ii) 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 추가한 후에, 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 1 분, 바람직하게는, 최소한 3 분, 더 바람직하게는 최소한 5 분, 보다 더 바람직하게는 최소한 10 분 및 가장 바람직하게는 최소한 15 분 동안 배양되는 것이 바람직하다.
바람직하게는, 결합 분석의 차단에서 프로브 항체로 사용되는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 본 발명에 따른 바람직한 항체, 또는 그의 항원 결합 단편이다. 예를 들면, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 바람직하게는, 지카 바이러스 NS1 단백질의 항원 부위 S2에 결합하는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편일 수 있다. 가장 바람직하게는, 결합 분석의 차단에서 프로브 항체로 사용되는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, (i) 서열목록 번호: 127 - 131 및 133; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; 또는 (ii) 서열목록 번호: 127 - 130 및 132 - 133; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 아미노산 서열 및 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편이다. 특히 바람직하게는, 결합 분석의 차단에서 프로브 항체로 사용되는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 서열목록 번호: 134 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 135 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열을 포함하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편이다.
예를 들면, 본 발명에 따른 예시적인 비오티닐화 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 결합의 억제는 ZIKV NS1 단백질에 70% 최대 결합을 달성하는 본 발명에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 최적 농도를 결정함에 의해 평가될 수 있다. 예를 들면, ZIKV NS1 단백질에 70% 최대 결합을 달성하는 예시적인 항체 gZKA15, gZKA25 및 gZKA35의 최적 농도는 각자, 38, 17 및 7 ng/ml일 수 있다. 상기 기술된 결합의 차단 분석을 수행한 이후, 기질, 예컨데 p-NPP가 추가될 수 있고 ELISA 접시는 405 nm에서 판독되고 결합의 억제의 백분율이 하기 식 (I)에 의해 계산될 수 있다:
(I) % 억제율 = (1-[(OD 샘플-OD 음성 대조군)/(OD 양성 대조군-OD 음성 대조군)]) × 100
여기서 "% 억제율"은 본 발명에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 ZIKV NS1 단백질의 결합의 억제의 백분율을 지칭한다; "OD 샘플"은 샘플의 흡광도를 지칭한다; "OD 음성 대조군" 은 음성 대조군의 흡광도를 지칭한다; 및 "OD 양성 대조군"은 양성 대조군의 흡광도를 지칭한다.
이 분석은 몇가지 장점, 예컨데 다른 플라비바이러스, 예컨데 DENV 감염으로부터 구별할 수 있게 하는, 임상, 준임상 및 무증상 ZIKV 감염을 집단 수준에서 검출하는 능력을 제공한다. 구체적으로, 본 발명에 따른 진단 분석은 직접 ELISA 결합 분석 보다 높은 정밀도를 제공한다.
게다가, 본 발명은 또한 (단리된 샘플에서) 지카 감염의 (생체외) 진단 방법을 제공하고, 여기서 ZIKV NS1 단백질에 결합하는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 복합체, 본 발명에 따른 조성물 또는 본 발명에 따른 키트의 부분이 단리된 (체액의) 샘플, 예컨데 단리된 혈액 샘플이, 지카 바이러스에 감염되었는지를 결정하는 데 사용된다.
상기 진단 용도의 바람직한 구현예는 또한 진단 방법에 적용된다. 예를 들면, 바람직한 (대상의) 단리된 샘플은 체액의 샘플 및 조직 샘플을 함유한다. 체액의 샘플이 더 바람직하다. ZIKV 감염의 진단의 바람직한 체액은 혈액 (일례로 전혈, 혈장, 혈청), 타액 및 소변을 함유한다. 혈액, 구체적으로 혈장 또는 혈청이, 가장 바람직한다. 게다가, 바람직한 진단 분석은 면역분석이다. 면역분석의 바람직한 예는 ELISA, 면역형광법, 면역조직화학 및 유동 세포계측법을 함유한다. 바람직하게는, 진단은 ELISA를 함유한다. 가장 바람직하게는, 상기 기술된 결합의 차단 분석이 사용된다.
바람직하게는, (단리된 샘플에서) 지카 감염의 (생체외) 진단을 위한 방법은
(i) 단리된 샘플을 ZIKV NS1 단백질에 결합하는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 복합체, 또는 본 발명에 따른 조성물과 접촉하는 단계를 포함한다.
더 바람직하게는, (단리된 샘플에서) 지카 감염의 (생체외) 진단을 위한 방법은 하기:
(o) 검출할 대상으로부터 단리된 샘플 (일례로, 체액의 샘플, 예컨데 혈액 (일례로 전혈, 혈장, 혈청), 타액 및 소변)을 ZIKV NS1 단백질이 코팅된 ELISA 접시에 추가하는 단계;
(i') 본 발명에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 ELISA 접시에 더 추가하는 단계, 여기서 본 발명에 따른 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 바람직하게는 표지화, 일례로 비오티닐화 됨;
(ii) 선택적으로, ELISA 접시를 세척하는 단계; 및
(iii) 본 발명에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 결합의 억제를 결정하는 단계를 포함한다.
부가적 측면에서, 본 발명은 또한 본 발명에 따른 중화 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포, 또는 본 발명에 따른 약학 조성물의 지카 바이러스 감염으로 진단된 대상에서, ZIKV NS1 단백질에 결합하는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 복합체, 본 발명에 따른 조성물, 본 발명에 따른 키트의 부분 또는 본 발명에 따른 ZIKV 진단 방법을 사용함에 의해 ZIKV 감염의 치료 또는 예방에서의 용도를 제공한다.
부가적 측면에서, 본 발명은 또한 지카 바이러스 감염을 예방 및/또는 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 하기:
(i) ZIKV NS1 단백질에 결합하는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 복합체, 본 발명에 따른 조성물, 본 발명에 따른 키트의 부분 또는 본 발명에 따른 ZIKV 진단 방법을 사용함에 의해, 대상에서 지카 바이러스 감염을 진단하는 단계; 및
(ii) 본 발명에 따른 중화 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포, 또는 본 발명에 따른 약학 조성물을 상기 대상에게 투여하는 단계를 포함한다.
바람직하게는, 지카 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료의 이 방법에서, 단계 (i)의 지카 바이러스 감염의 진단은 단리된 (체액의) 샘플, 예컨데 단리된 혈액 샘플에서 생체-외 진단으로 수행된다.
부가적 측면에서, 본 발명은 또한
(i) ZIKV NS1 단백질에 결합하는, 본 발명에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 복합체, 본 발명에 따른 조성물, 또는 본 발명에 따른 키트의 부분; 및
(ii) 본 발명에 따른 중화 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포, 또는 본 발명에 따른 약학 조성물을 포함하는 키트의 부분을 제공한다.
이러한 키트의 부분은 상기 기술된 방법에 특히 유용하다. 이러한 방법 및/또는 이러한 키트의 사용에 의해, ZIKV 감염은 특이적으로 검출될 뿐 아니라 예방 및/또는 치료될 수 있다.
본 발명은, 다른 발견 중에서, 지카 바이러스 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체의 발견 및 단리에 기초한다. 이러한 항체는 (i) 지카 바이러스 엔벨로프 (E) 단백질 또는 지카 사차 에피토프의 항원 부위로 향하면, 지카 바이러스를 중화하는데 매우 강력하거나 (ⅱ) 지카 바이러스 NS1 단백질로 향하면, 지카 바이러스 감염의 진단에 유용하다. 이러한 항체는 지카 바이러스를 중화시키기 위해 소량의 항체 만이 필요하기 때문에 바람직하다. 구체적으로, 현재 지카 바이러스 감염에 대한 예방/치료법은 없다. 본 발명에 따른 항체는 지카 바이러스 감염을 예방 및 치료 또는 감작하는데 매우 효과적이다. 게다가, 지카 바이러스에 대한 항체의 특이성으로 인해, 이들은 ADE를 유도하지 않고 오히려 ADE를 차단한다. 진단에서, 지카-특이적 항체는 지카 바이러스 감염을 다른 플라비바이러스, 예컨데 뎅기 바이러스 감염과 구별하는 중요한 도구를 제공한다.
도 1은 네 개의 ZIKV 면역 제공자 (ZKA, ZKB, ZKC 및 ZKD)로부터 유래된 항체의 ZIKV 및 DENV1-4 의 E 단백질에 대한 및 ZIKV E 단백질의 EDIII-도메인; NNB - 중화, 비-E-단백질 결합 항체에 대한 반응성 (ELISA) 및 ZIKV 및 DENV1 중화 활성을 보여준다.
도 2는 네 개의 ZIKV 면역 제공자 (ZKA, ZKB, ZKC 및 ZKD)로부터 유래된 항체의 ZIKV의 NS1 단백질, DENV1-4 및 다른 플라비바이러스에 대한 반응성 (ELISA)을 보여준다. YFV - 황열 바이러스; WVN - 웨스트나일 바이러스; JEV - 일본 뇌염 바이러스; 및 TBEV - 진드기매개 뇌염 바이러스 (nd, 검출되지 않음).
도 3은 ELISA에 의해 측정된 ZKA190, ZKA78 및 ZKA64 항체의 ZIKV 및 DENV1 E에의 및 ZIKV EDIII 단백질에의 결합을 보여준다.
도 4는 ELISA에 의해 측정된 ZKA185 및 ZKA190 항체의 ZIKV E, DENV1 VLP에의 및 ZIKV EDIII 단백질에의 결합을 보여준다.
도 5는 ELISA에 의해 측정된 ZKA15, ZKA25 및 ZKA35의 ZIKV 및 DENV1-4 NS1 단백질에의 결합을 보여준다.
도 6은 실시예 3의 교차-경쟁 옥텟-블라인딩 스터디를 사용한 ZIKV NS1 단백질 항원 부위 맵핑을 보여준다. (A-B) ZIKV NS1에 특이적인 (A) 또는 DENV NS1 에 교차-반응하는 (B) 24 mAb 상에서 옥텟에 의해 수행된 교차-경쟁 매트릭스. +, 이차적 Ab의 결합의 결여; +/-, 이차적 mAb의 결합의 일부 상실; -, 이차적 mAb의 결합. 취소선 세포, 시험되지 않음. (C) BLI (옥텟) 교차-경쟁을 사용해 정의된 ZIKV NS1-특이적 mAb에 의해 표적된 항원 부위의 지도.
도 7은 실시예 4의 mAb ZKA35를 프로브로 사용하여 ZIKV-면역성 (n=4), DENV-면역성 (n=5) 및 대조군 제공자 (n=48) (1/10 희석)로부터의 혈장 내 ZIKV NS1 검출한 결합 분석의 차단을 보여준다. 혈장 샘플은 그들이NS1 에 결합 (공란 점) 및 비오티닐화 mAb ZKA35가 NS1에 결합하는 것을 억제(채워진점)하는 능력이 시험되었다.
도 8은 실시예5의 베로 세포 상에서 유동-세포계측법에 의해 측정된 ZIKV (H/PF/2013 균주) 및 DENV1에 대비한 ZKA190, ZKA64, ZKA64-LALA, ZKA230 및 ZKA78 항체의 중화 활성을 보여준다 (감염된 세포의 %).
도 9는 실시예 5의 베로 세포 상에서 세포 생존력 판독 (wst-1, 로슈)으로 측정된 ZIKV (H/PF/2013 균주)에 대비한 ZKA190, ZKA64, ZKA185, ZKA230 및 ZKA78 항체의 중화 활성을 보여준다.
도 10은 실시예 6의 증식불허 K562 세포 상에서 유동-세포계측법에 의해 측정된 ZKA190, ZKA64, ZKA64-LALA, ZKA185, ZKA230 및 ZKA78 항체의 ZIKV (H/PF/2013 균주) 에 대한 감염 증진 활성(ADE, 항체-의존성 증진)을 보여준다 (감염된 세포의 %).
도 11은 실시예 6에서 네 개의 ZIKV-면역성 혈장 및 하나의 DENV-면역성 혈장이 K562 세포의 ZIKV 감염을 증진시키는 유사한 능력을 보여준다(상부 패널). 이 ADE 영향은 다섯 개의 면역성 혈장에서 EDIII-특이적 ZKA64-LALA 항체에 의해 완전하게 차단되었다 (하부 패널).
도 12는 2013 이래 아시아 혈통으로부터의 39 ZIKV 균주들의 아미노산 배열을 보여준다(1947에 단리된 아프리카 혈통의 원형(prototypic) 균주 MR766를 함유).
도 13은 실시예 5의 베로 세포 상에서 유동-세포계측법으로 측정된 ZIKV의 세 개의 균주들 (H/PF/2013, MR766 및 MRS_OPY_Martinique_PaRi_2015) 에 대한 ZKA190 및 ZKA190-LALA 항체의 중화 활성을 보여준다 (감염된 세포의 %).
도 14는 실시예 7의 유럽 거주자의 NS1 결합의 차단 분석을 보여준다. 이탈리아 및 스위스에서 수집된 샘플의 BOB 값이 보여진다. ZIKV, 일차적 및 이차적 DENV-, WNV-, 및 CHIKV-감염된 개인으로부터의 샘플 및 스위스로부터 건강한 혈액 제공자로부터의 샘플의 패널의 BOB 값이 플롯되었다.
도 15는 실시예 8의 ZIKV의 네 개의 균주들의 패널에 대해 시험된 ZKA190 및 C8 mAb의 중화 활성을, mAb (A) 의 증가된 양의 존재에서 감염된 베로 세포의 백분율에 의해 결정된 것을 보여준다. IC50 값 (B) 및 통계 (C)를 또한 보여준다. 자료는 최소한 두 개의 독립적인 실험의 대표값이다.
도 16은 실시예 9의 항체 ZKA190에 의한 ZIKV 감염의 중화 및 증진을 보여준다. (A) 베로 세포 상에서 플라크 분석 (좌 패널) 및 형광단(fluorophore)-표지된 항-E 항체를 사용한 감염된 hNPCs의 간접 면역형광법에 의해 (우 패널) 결정된 ZKA190, ZKA190-LALA 및 대조군 mAb의 ZIKV PRVABC59 균주 감염의 중화. (B) ZKA190 및 ZKA190-LALA에 의한 증식불허 K562 세포의 ZIKV 감염의 ADE. (C) 상이한 ZIKV-양성 환자로부터의 혈장 혈청을 연속 희석하며 ZIKV가 사전-배양되는 경우 K562 세포에서 ADE가 유도되었다 (좌 패널). ZKA190 LALA가 ZIKV-혈청 복합체에 추가되는 경우에는, ADE가 억제되었다 (우 패널). (D) DENV-면역 제공자로부터 유래된 prM 교차-반응 mAb (DV62)를 연속 희석하며 ZIKV가 사전-배양되는 경우에는 K562 세포에서 ADE가 유도되었다. ZKA190-LALA는 prM-반응 항체 DV62와 복합체되는 경우 ZIKV의 ADE를 억제하였다. (E) DENV2 혈장의 피크 증진 희석(peak enhancing dilution) (좌 패널) 또는 표시된 mAb의 연속 희석에 의한 항-prM DV62 mAb (우 패널)의 의한 ADE에 대한 영향.
도 17은 실시예 10의 ZKA190 에피토프의 확인 및 ZIKV 균주들 내 그의 보존의 분석을 보여준다. (A) 비표지된 ZKA190 Fab의 부재(검정) 또는 존재(적색)하의 15N-표지된 ZIKV EDIII의 [15N,1H]-HSQC 스펙트럼의 오버레이. 차이점은 항체 결합에 의해 영향받은 EDIII 잔기를 확인한다. (B) ZKV EDIII와 복합체 내에서 ZKA190 Fab의 NMR 에피토프 멥핑. 화학적 이동 섭동 (chemical shift perturbation, CSP, y-axis)은 EDIII 잔기 번호에 대해 플롯된다. 항체 결합에 의해 영향 받는 잔기는 적색이다. (C) NMR 에피토프 맵핑에 의해 확인된 FG 루프 내 잔기는 E 단백질 mol A 내에 부분적으로 감추어져 있으나 mol B 및 C 내에 넓게 노출되어 있다. E 단백질의 EDIII는 청색으로 착색되었다. NMR 에피토프 맵핑에 의해 확인된 잔기는 FG 루프 내 녹색으로 착색된 것들을 제외하고는 자홍색(마젠타)으로 착색되었다. 인접한 E 단백질은 회색 표면으로 보여진다. (D) 2016년 십일월 24일자 ZIKV 리소스 (NCBI) 데이터베이스에서 발견되는 217 ZIKV 균주들로부터의 서열의 분석에 의해 계산된 ZKA190 에피토프 내 아미노산 잔기 보존의 수준. (E) 도킹(docking) 결과의 에피토프 및 파라토프 사이의 전하 상보성을 보여주는 오픈-북 대표값. 에피토프 및 파라토프의 계면은 녹색으로 동그라미쳐져 있다. Fab의 중쇄 및 경쇄의 경계 및 EDIII 상 이의 대응하는 발자국(footprint)은 황색 점선으로 보였다.
도 18은 실시예 10의 NMR 및 도킹(Docking)에 의해 확인된 ZKA190 에피토프를 보여준다. (A) ZIKV EDIII의 12 최저 에너지 NMR 구조의 카툰 대표, ZKA190 결합에 의해 영향받은 잔기는 적색으로 함께. 구조물의 N- 말단에서의 유연성은 명백하다. (B) ZKA190의 모델 : NMR 결과에 의해 입증된 전산 도킹 및 분자 시뮬레이션에 의해 유도된 EDIII 복합체. EDIII (회색) 상에서 NMR로 확인된 에피토프는 적색이다. ZKA190 중쇄 및 경쇄는 각자 어두운 색 및 밝은 녹색으로 착색된다. 돌연변이되었을 때 항체 결합에 영향주거나 주지 않는 EDIII 잔기는 각자 오렌지색과 파란색 스틱으로 표시된다. (C) NMR로 확인된 ZKA190 에피토프 (적색)는 바이러스 표면 (백색)에서 접근 가능하다.
도 19는 실시예 10의 야생형 또는 돌연변이된 EDⅢ 의 ZKA190 IgG에의 결합을 보여준다. SPR 데이터 및 바인딩 동역학이 표시됩니다. 결합에 영향주는 (적색 하이라이트) 또는 주지 않는 EDIII 돌연변이는 도면에 표시되어 보여진다.
도 20은 실시예 11의 공초점 현미경(confocal microscopy) 실험 결과를 보여준다. IC50 값 10,000-배 초과하는 농도의 ZKA190 Fab 또는 전체 IgG와 배양된 ZIKV이 베로 세포에 추가되었다. ZIKV : 항체 복합체는 세포 내부에서 검출되고 (녹색) 엔도솜(endosome) 과 공존한다 (적색, 노란색 오버레이). 엔도솜과 산성 소기관(organelle)은 리소트래커 레드(Lysotracker red)로 표시된다; Alexa-488 접합된 ZKA190은 녹색이다. 핵은 DAPI (청색)로 착색된다.
도 21 은 실시예 12의 ZKA190의 방지 및 치료 효능을 보여준다. (A) ZKA190은 치명적인 용량의 ZIKV 균주 MP17451로 접종한 마우스 ((A)는 A129 및 (B)는 AG129)에 방지적으로 투여되었을 때 ZIKV 감염을 강력하게 예방한다. 실험은 그룹당 N=4-8 마우스를 사용하였다. 카플란-메이어(Kaplan-Meier) 생존 곡선이 보여진다 (A). 유의성은 만텔-콕스 로그-랭크 테스트(Mantel-Cox log-rank test)를 사용하여 결정되었다. 패널 A, 좌측 상단 : 5, 1 및 0.2 mg/kg의 ZKA190 대 대조군(Ctr) mAb, P = 0.0031; 0.04 mg/kg의 ZKA190 대 대조군 mAb, P = 0.0116; 5, 1, 0.2 및 0.04 mg/kg의 ZKA190-LALA 대 대조군 mAb, P = 0.0031. 패널 A, 우측 상단 : 14-15 일 동안 모니터된 마우스의 이환 점수 (두 가지 다른 점수 방법이 사용되었다; (Dowall, S.D., Graham, V.A., Rayner, E., Atkinson, B., Hall, G., Watson, R.J., Bosworth, A., Bonney, L.C., Kitchen, S., and Hewson, R. (2016). A Susceptible Mouse Model for Zika Virus Infection. PLoS Negl Trop Dis 10, e0004658-13) 참조. 패널 A, 하부 패널: 마우스의 체중. 패널 B : ZKA190 또는 ZKA190-LALA가 15 mg/kg으로 ZIKV 감염 후 상이한 시점에 투여되었다. 패널 B, 좌측 상단: 카플란-메이어 생존 곡선이 보여진다. 실험은 그룹당 N = 5 마우스를 사용하였다. 유의성은 만텔-콕스 로그-랭크 테스트를 사용하여 결정되었다. ZKA190 및 ZKA190-LALA의 1 일, 2 일, 3 일 또는 4 일 째 투여 대 대조군, P = 0.0016. 패널 B, 우측 상단: (Dowall et al., 2016)에 따라 14 일 동안 모니터된 마우스의 이환 점수. 마우스는 체중 감소를 위해 14 일 동안 모니터링 되었다 (패널 B, 하부 패널). 대조군 항체는 RSV F 단백질에 특이적인 MPE8이다 (Corti, D., et al. Cross-neutralization of four paramyxoviruses by a human monoclonal antibody. Nature 501, 439-443 (2013)).
도 22는 실시예 12의 ZIKV 균주 MP1741에 대한 항-ZIKV EDIII-특이적 mAb ZKA190의 방지 효능을 보여준다. (A) 5 일째 모든 동물의 혈액 내 바이러스 혈증을 PFU/ml로 측정하여 보여줌. (B) 연구가 끝나 동물이 도살되었을 때 또는 인간 종결점이 충족되었을 때 모든 동물의 혈액 및 혈액 및 표시된 조직에서 5 일째 qPCR에 의해 바이러스 양(viral load)이 게놈 복제수(genomic copies)/ml로 측정되었다. (C) 마우스는 체중 감량을 위해 14 일 동안 모니터링 되었다 (D) 5 일째 혈액 샘플 내 인간 혈청 IgG 농도. 유의성은 비모수 비대응 (nonparametric unpaired) Mann-Whitney U 테스트에 의해 대조군 항체 치료와 비교하여 결정되었다. *p < 0.05; **p < 0.01; ***p<0.001.
도 23은 실시예 12의 항-ZIKV EDIII-특이적 mAb ZKA190의 치효 효능을 보여준다. (A) 바이러스 양(viral load)은 5일 째 모든 동물의 혈액에서 PFU로 측정되었다. (B) 연구가 끝나 동물이 도살되었을 때 또는 인간 종결점이 충족되었을 때 모든 동물의 혈액 및 혈액 및 표시된 조직에서 5 일째 qPCR에 의해 바이러스 양(viral load)이 게놈 복제수(genomic copies)/ml로 측정되었다. 유의성은 비모수 비대응 Mann-Whitney U 테스트에 의해 대조군 항체 치료와 비교하여 결정되었다. *p < 0.05; **p < 0.01. (C) 5일 째 혈액 샘 샘플 내 인간 혈청 IgG 농도.
실시예
본 발명의 예시적인 구현예는 하기 실시예에서 제공된다. 하기 실시예는 단지 예시로서 및 본 발명을 사용하는 통상의 기술자를 돕기 위해서만 제시된다. 실시예는 어떠한 방식으로든 그와 다르게 본 발명의 범위를 제한하려는 의도는 아니다.
실시예 1: ZIKV-특이적 항체의 단리 및 단일클론 항체의 제조
IgG+ 메모리 B 세포를 네 개의 ZIKV-감염된 제공자 (ZKA, ZKB, ZKC 및 ZKD) 의 저온보존된 말초 혈액 단핵 세포 (peripheral blood mononuclear cell, PBMC) 로부터 CD22 마이크로비드 (밀테이 바이오텍(Miltenyi Biotec))를 사용해 단리하고, 이어서 세포 분류에 의해 IgM, IgD 및 IgA를 이동하는 세포를 고갈시켰다. ZIKV-감염된 제공자로부터의 메모리 B 세포를 그후 다중 복제 웰에서 EBV (Epstein Barr Virus) 및 CpG (CpG 올리고디옥시뉴클레오티드 2006) 와 함께 이전에 기술된 바와 같이 불멸화시키고 (Traggiai, E. et al., Nat. Med. 10, 871-875, 2004) 및 배양 상등액을 그후 384-웰 기반한 마이크로-중화 분석 및 결합 분석(ELISA) 을 동시에 사용하여 일차적 스크리닝에서 시험하여 ZIKV NS1 단백질 또는 ZIKV E 단백질에의 그들의 결합을 시험하였다. 결합 분석의 결과는 도 1 (ZIKV E 단백질에 결합) 및 도 2 (ZIKV NS1 단백질에 결합)에 보여준다.
중화 분석은 베로 세포 상에서 수행하였다. 384-웰 접시에서, 감염율 (m.o.i, 감염의 다중도(multiplicity of infection))이 0.35인 결과가 되는 ZIKV H/PF/2013를 상등액과 1 시간 동안37% (5% CO2) 에서 사전-파종된 5'000 베로 세포의 추가 이전에 배양하였다. 이들을 추가 5 일 동안 배양한 후, 상등액을 제거하고 WST-1 시약 (로슈)을 첨가하였다. 양성 배양물을 수집하고 팽창시켰다. 양성 배양물로부터 VH 및 VL 서열을 RT-PCR에 의해 회수하였다. 항체는 (Michel Nussenzweig, Rockefeller University, New York, US에 의해 친절하게 제공된) 인간 IgG1 및 Ig 카파(kappa) 또는 Ig 람다(lambda) 발현 벡터로 필수적으로 기술된 것처럼 클로닝하였다 (Tiller T, Meffre E, Yurasov S, Tsuiji M, Nussenzweig MC, Wardemann H (2008) Efficient generation of monoclonal antibodies from single human B cells by single cell RT-PCR and expression vector cloning. J Immunol Methods 329: 112-124). 단일클론 항체는 EBV-불멸화된 B 세포 또는 293 프리스타일(Freestyle) 세포 (인비트로젠)의 일시적인 형질주입에 의해 생산하였다. B 세포 또는 형질주입된 세포로부터의 상등액을 수집하고, IgG를 단백질 A 또는 단백질 G 크로마토그래피 (GE 헬스케어)에 의해 친화도 정제(affinity purify)하고 PBS에 대해 탈염시켰다.
도 1 은 선택된 ZIKV 중화 항체에 대한 개요를 제공한다 (cf. 그들의 CDR 및 중쇄/경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 표 1 및 2). 도 1의 마지막 두 칼럼은 ZIKV 및 DENV1 (시험한 경우) 의 중화 활성 (IC50)을 제공한다. 다른 칼럼들은 ZIKV E 단백질 (ZIKV E), DENV1 E 단백질 (DENV1 E), DENV2 E 단백질 (DENV2 E), DENV3 E 단백질 (DENV3 E), DENV4 E 단백질 (DENV4 E), DENV1 바이러스-유사 입자 (DENV1 VLP), DENV2 바이러스-유사 입자 (DENV2 VLP), DENV3 바이러스-유사 입자 (DENV3 VLP), DENV4 바이러스-유사 입자 (DENV4 VLP)에 대한, 및 ZIKV E 단백질 (DIII ZKA)의 EDIII-도메인에 대한 항체의 결합 활성 (EC50)을 제공한다.
추가적 항체를 ZIKV NS1 단백질에 결합하는 그들의 능력으로 단리하였다 (cf. 도 2). 양성 배양물을 수집하고 팽창시켰다. 양성 배양물로부터 VH 및 VL 서열을 RT-PCR에 의해 회수하였다. 항체는 (Michel Nussenzweig, Rockefeller University, New York, US에 의해 친절하게 제공된) 인간 IgG1 및 Ig 카파(kappa) 또는 Ig 람다(lambda) 발현 벡터로 필수적으로 기술된 것처럼 클로닝하였다 (Tiller T, Meffre E, Yurasov S, Tsuiji M, Nussenzweig MC, Wardemann H (2008) Efficient generation of monoclonal antibodies from single human B cells by single cell RT-PCR and expression vector cloning. J Immunol Methods 329: 112-124). 단일클론 항체는 EBV-불멸화된 B 세포 또는 293 프리스타일(Freestyle) 세포 (인비트로젠)의 일시적인 형질 감염에 의해 생산되었다. B 세포 또는 형질주입된 세포로부터의 상등액을 수집하고, IgG를 단백질 A 또는 단백질 G 크로마토그래피 (GE 헬스케어)에 의해 친화도 정제하고 PBS에 대해 탈염시켰다.
도 2는 선택된 ZIKV NS1-단백질 결합 항체에 대한 개요를 제공한다 (cf. 그들의 CDR 및 중쇄/경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 표 4 및 5). 다시 말해, 도 2는 ZIKV NS1 단백질 (ZIKV NS1), DENV1 NS1 단백질 (DENV1 NS1), DENV2 NS1 단백질 (DENV2 NS1), DENV3 NS1 단백질 (DENV3 NS1), DENV4 NS1 단백질 (DENV4 NS1), 황열 바이러스 NS1 단백질 (YFV NS1), 웨스트나일 바이러스 NS1 단백질 (WNV NS1), 일본 뇌염 바이러스NS1 단백질 (JEV NS1)에 대한, 및 진드기매개 뇌염 바이러스 NS1 단백질 (TBEV NS1)에 대한 항체의 결합 활성 (EC50)을 제공한다.
실시예 2:항체 ZKA190, ZKA185, ZKA230, ZKA64 및 ZKA78의 특성감별
실시예 1에서, 많은 수의 ZIKV-중화 항체를 확인하였고 및 ZIKV, 구체적으로 ZIKV E 단백질 및 ZIKV EDIII 에 대한 그들의 특이성뿐만 아니라DENV 에 대한 그들의 교차-반응성을 특성감별하였다. 실시예 1에 기술된 항체 ZKA190 (서열목록 번호: 1 - 18), ZKA185 (서열목록 번호: 19 - 36), ZKA230 (서열목록 번호: 37 - 54), ZKA64 (서열목록 번호: 73 - 90) 및 ZKA 78 (서열목록 번호: 55 - 72) 를 선택하였고 ELISA에 의해 ZIKV E 단백질 ("ZIKV"), ZIKV EDIII ("DIIIZI") 에 대해 시험하고 또한 뎅기 바이러스의 E 단백질 (DENV, 혈청형 번호 1)에 대해서 더욱 시험하였다. 이를 위해, 표준 ELISA 를 사용하였다. 간략히, ELISA 접시를 ZIKV E 단백질 1 또는 3 μg/ml로 코팅하고, PBS 내 10% FCS으로 차단하고, 혈청 또는 인간 항체와 배양하고 세척하였다. 결합된 항체는 AP-접합된 염소 항-인간 IgG (서던 바이오테크(Southern Biotech))와의 배양에 의해 검출하였다. 접시를 그후 세척하고, 기질 (p-NPP, 시그마(Sigma))을 추가하고 접시를 405 nm에서 판독하였다. 단일클론 항체 결합의 상대적 친화성은 포화시 50% 최대 결합에 도달하기 위해 요구되는 항체의 농도(EC50)를 측정함에 의해 결정하였다.
결과는 도 3 및 4에 보여준다. 아주 흥미롭게, ZKA64 및 ZKA190는 ZIKV E 및 ZIKV EDIII ("DIII ZI")에 낮은 EC50 값으로 결합하고, 그렇게 함으로써 ZKA64 및 ZKA190은 ZIKV E 단백질의 도메인 III (EDIII)에 결합한다는 것을 나타낸다. ZKA78는 ZIKV E에 결합하지만, ZIKV EDIII에는 아니라서, ZKA78은 ZIKV E에 결합하지만, EDIII 영역을 표적하지 않음을 나타낸다. 그들의 상당한 ZIKV 중화 활성에고 불구하고 (cf. 도 1), 항체 ZKA185 및 ZKA230는 ZIKV E 및 ZIKV EDIII에 대해 어떠한 검출가능한 결합도 보이지 않았다 (도 4). 그에 따라, ZKA185 및 ZKA230은 "중화-비-E-결합" (NNB) 항체로 지칭된다. 이들 NNB 항체는 ZIKV 감염성 비리온 상에 표시되지만 가용성 단백질에는 표시되지 않는 사차 에피토프를 인식하는 것으로 추정된다.
게다가, ZKA190, ZKA185, ZKA230, 및 ZKA64 중 아무것도 DENV E 단백질에 어떠한 검출가능한 결합을 보이지 않았고 (도 1, DENV1-4 혈청형, 및 도 3 및 4), ZKA190, ZKA185, ZKA230, 및 ZKA64는 ZIKV에는 특이적이지만 뎅기 바이러스 에는 교차-반응하지 않는 것을 나타낸다. ZKA78,는 그에 반해서, ZIKV EDI/II에는 결합하지만, ZIKV EDIII에는 결합하지 않는 것으로 추정되고 (cf. 도 3), DENV E 단백질에 결합하여 (도 1 및 3), ZKA78은 ZIKV 및 DENV 모두에 결합하는 교차-반응 항체임을 나타낸다.
그 결과를 더 확인하기 위해, ZIKV E 단백질 결합 항체 ZKA190, ZKA64 및 ZKA78 를 뎅기 바이러스의 E 단백질 (DENV, 혈청형 번호 1 - 4)에 대하여 추가적으로 시험하였다. ZKA64 및 ZKA190은 DENV1-4 E 단백질에 결합하지 않았고, 그렇게 함으로써 ZKA64 및 ZKA190 은 특이적 for ZIKV에 특이적임을 확인하였다. ZKA78는, 그에 반해서, DENV1-4 E에 결합하였고, ZKA78은 ZIKV 및 DENV 모두의 E 단백질에 결합하는 교차-반응 항체임을 확인하였다 (cf. 도 1).
실시예 3: 혈청학적 진단을 위한 ZIKV NS1-특이적 항체의 특성감별
실시예 1에서, 많은 수의 NS1-반응 항체를 확인하였고 및 그후 ZIKV NS1에 대한 그들의 특이성 및 다른 플라비바이러스 NS1 단백질에 대한 교차-반응성을 특성감별하였다 (도 2). 항체 ZKA15 (서열목록 번호: 91 - 108), ZKA25 (서열목록 번호: 109 - 126) 및 ZKA35 (서열목록 번호: 127 - 144) 는 이후 ZIKV NS1 및 DENV1 NS1, DENV2 NS1, DENV3 NS1 및 DENV4 NS1에 대한 결합에 대해 더 특설감별하였다. 이를 위해, 표준 ELISA를 사용하였다. 간략히, ELISA 접시를 ZIKV NS1 단백질 1 μg/ml로 코팅하고, PBS 내 10% FCS으로 차단하고, 혈청 또는 인간 항체와 배양하고 세척하였다. 결합된 항체는 AP-접합된 염소 항-인간 IgG (서던 바이오테크(Southern Biotech))와의 배양에 의해 검출하였다. 접시를 그후 세척하고, 기질 (p-NPP, 시그마(Sigma))을 추가하고 접시를 405 nm에서 판독하였다. 단일클론 항체 결합의 상대적 친화성은 포화시 50% 최대 결합에 도달하기 위해 요구되는 항체의 농도(EC50)를 측정함에 의해 결정하였다.
결과는 도 5에 보여준다. 모든 세 개의 항체 (ZKA15, ZKA25 및 ZKA35)는 ZIKV NS1에 높은 친화성으로 결합하지만 DENV1-4 NS1 항원에는 그렇지 않다(도 5).
ZIKV NS1에의 항체의 결합을 더 연구하기 위해, 바이오층 간섭 경쟁 분석(bio-layer interferometry competition assay) 을 사용하였다. 교차-경쟁 매트릭스를 바이오층 간섭 (BLI; Octet)을 사용해 ZIKV NS1에 특이적인(즉 DENV NS1와 비교차-반응) 13개 항체, 다시 말해 항체 ZKA24, ZKA15, ZKA32, ZKA19, ZKA50, ZKA37, ZKA46, ZKA10, ZKA48, ZKA35, ZKA25, ZKA44, 및 ZKA30 상에서 발생시켰다 (cf. 도 6A). 도 2로부터 검색할 수 있는 바와 같이, 이들 13개 항체 중 어느 것도 DENV NS1에 검출 가능한 결합을 보였다.
경쟁 분석 및 항원 부위 결정은 37℃에서 옥텟 RED96 시스템, 포르테바이오로 결정하였다. ZIKV-NS1 단백질은 PBS 내2.5 μg/ml 로 희석하고 APS 코팅된 센서-칩의 표면에 7-9 분 동안 고정하였다. 코팅된 바이오센서는 자유 바이오센서 결합 위치를 차단하기 위해 차단 완충액 (PBS 내 0.1% BSA)에 6분 동안 놓았다. 코팅된-바이오센서를 그후 ZIKV-NS1에 특이적이고 단일 정제된 mAb 를 차단 완충액 내 10 μg/ml로 희석한 셋트와 8분 동안 배양하였다. 첫번째 셋트의 mAb의 결합 이후 (단계 1), 바이오센서는 상이한 mAb를 함유하는 웰로 8분 동안 이동하였다 (단계 2). 두 번째 mAb와의 연관은 첫 번째 mAb (일례로 비-경쟁)와 대비하여 상이한 항원 부위의 인식 결과를 가져왔다. 경쟁 또는 부분 경쟁은 각각 비연관 또는 낮은 연관이 검출되는 경우 단계 2에서 결정하였다. ZIKV NS1 상의 항원 부위 맵핑을 예측하기 위하여 복수 수행의 경쟁으로 교차-경쟁 매트릭스를 생성하였다.
결과는 도 6A 및 6C에 보여준다. 첫 번째로, 시험된 모든 ZIKV NS1-특이적 항체는 항원 부위(들) S1 및/또는 S2에 결합하였다 (도 6A). 그러나, 몇몇의 항체는 다른 것들과 경쟁하지 않았다. 예를 들면, ZKA15는 ZKA25 및 ZKA35와 및 그와 반대로 결합에 대해 경쟁하지 않았다 (도 6A). 그에 따라, 항체 ZKA15는 항원 부위 S1에 할당되고, 반면 항체 ZKA25 및 ZKA35는 항원 부위 S2 (도 6C)에 할당되었다. 요약하면, 사용된 항체에 기반하여, ZIKV NS1 상의 항원 부위 (S1 및 S2) 를 확인하였다 (도 6C).
추가적으로, ZIKV NS1 단백질 및 DENV NS1 단백질에 교차-결합하는 10개의 항체 (다시 말해, ZKA18, ZKA29, ZKA39, ZKA53, ZKA54, ZKB19, ZKB23, ZKC29, ZKC33, 및 ZKC34; 도 6B)의 ZIKV NS1 상의 항원 부위 S1 및/또는 S2 에의 결합을 분석하였다. 도 2에서 알 수 있듯이 이들 10개의 항체 모두 DENV NS1에 결합함을 보였다. 이들 10개 교차-반응 항체는 상기 (ZIKV NS1-특이적 항체에 대해) 기술된 것처럼 교차-경쟁 분석에서 ZIKV NS1 S1-특이적 항체 ZKA15에 대해 및 ZIKV NS1 S2-특이적 항체 ZKA35에 대해 시험하였다.
결과는 도 6B에 보여준다. 흥미롭게도, 시험된 열 개의 교차-반응 항체 어느 것도 ZIKV NS1 상의 항원 부위(들) S1 및/또는 S2에 대해 ZKA 15 및/또는 ZKA35와 결합을 경쟁하지 않았다 (도 6B). 이들 결과는 ZKA15 및 ZKA35 항원 부위는 NS1 교차-반응 항체에 의해 표적되지 않음을 보여준다. 따라서, NS1 항원 부위 S1 및 S2는 ZIKV-특이적에 의해 표적되지만, 교차-반응 항체에 의해서는 그렇지 않다.
실시예 4: ZIKV 감염의 진단에서의 ZIKV NS1-특이적 항체의 용도
본 실시예에서는, 본 발명의 ZIKV NS1-특이적 항체의 ZIKV 감염의 진단에서의 유용성을 연구하였다. 더 특별히, ZIKV- 또는 DENV-감염된 제공자의 혈장 샘플 내 ZIKV NS1에 대하여 유도된 항재채의 존재 쪼는 부존재를 특이적으로 검출하는 본 발명의 ZIKV NS1-특이적 항체의 용도를 결정하였다.
이를 위해, "결합의 차단" 분석을 사용하였다. 구체적으로, 비오티닐화 항체 ZKA35의 ZIKV NS1에의 결합을 억제하는 ZIKV NS1-반응 혈장 항체의 능력을 측정하였다. 이를 위해, ZIKV NS1-특이적 항체 ZKA35를 EZ-Link NHS-PEO 고상 비오티닐화 키트 (EZ-Link NHS-PEO solid phase biotinylation kit, Pierce)를 사용해 비오티닐화하였다. 표지된 ZKA35로 ZIKV NS1에의 결합을 시험하여 70% 최대 결합에 도달하는 ZKA35의 최적 농도를 결정하였다. ZIKV- (n=4), DENV-면역성 (n=5) 제공자 및 대조군 (n=48) 혈장 (1/10 희석)로부터의 혈장 샘플을 ZIKV NS1로 코팅된 ELISA 접시에 추가하였다. 1시간 이후, 비오티닐화 항-ZIKV NS1 항체 ZKA35를 70% 최대 결합에 도달하는 농도에서 추가하고 혼합물을 실온에서 15 분 동안 배양하였다. 접시를 세척하고, 기질 (p-NPP, 시그마) 을 추가하고 접시를 405 nm에서 판독하였다. 억제율은 하기에 따라 계산하였다: (1-[(OD 샘플-OD 음성 대조군)/ (OD 양성 대조군-OD 음성 대조군)]) Х 100.
결과는 도 7에 보여준다. 아주 흥미롭게, NS1 상의 항원 부위 S2 에의 항체 ZKA35 결합은 오직 ZIKV-면역 제공자로부터의 혈장 샘플에 의해 억제되고, DENV-면역 제공자에 의해서는 그렇지 않았고, 이의 결합은 또한 48 개 대조군 혈장 샘플에 의해 억제되지 않았다 (도 7). 그에 따라, 이 분석은 임상적 및 준-임상적ZIKV 감염을 집단 수준에서 특이적으로 검출하는데 사용될 수 있다.
실시예 5: 본 발명에 따른 항체는 ZIKV 감염을 강력하게 중화한다
단리된 항체 ZKA190, ZKA185, ZKA230, ZKA64 및 ZKA78는 ZIKV 및 DENV1 감염을 생체외 중화하는 그들의 능력을 시험하였다.
항체에 의한 DENV 및 ZIKV 감염의 중화는 미세-중화 유동 세포계측법-기반 분석을 사용하여 측정하였다. 상이한 희석의 항체를 ZIKV (0.35의 MOI) 또는 감쇠된 DENV1 (모두 0.04의 MOI)와 1시간 동안 37℃에서 혼합하고 5000 베로 세포/웰 을 96-웰 평판-바닥 접시에 추가하였다. ZIKV에 대해 사일 및 DENV에 대해 오 일 이후, 세포를 2% 포름알데하이드로 고정하고, PBS 1% FCS 0.5% 사포닌 내에 투과화하고, 마우스 mAb 4G2로 염색하였다. 세포를 알렉사 플루오르488 에 접합된 염소 항-마우스 IgG 와 배양하고 (Jackson Immuno- Research, 115485164) 유동 세포계측법으로 분석하였다. 다른 경우에는 ZIKV 중화 데이터를 WST-1 시약 (로슈)를 사용해 세포 생존력을 측정하여 결정하였다. 중화 역가 (50% 억제 농도 [IC50])는 세포-단독 대조군 웰에 대비하여 감염을 50% 감소시킨 항체 농도로 표현하였다.
결과는 도 8, 9 및 13에 보여준다. EDIII-특이적 mAb ZKA64 및 ZKA190 및 NNB mAb ZKA230은, 각자 93, 9 및 10 ng/ml의 IC50 값으로, ZIKV 중화 (균주 H/PF/2013)에서 매우 강력하였다 (도 8, 상부 패널). 그에 반해서, 교차-반응 항체 ZKA78은 오직 ZIKV 감염성 및교차-중화된 DENV1 감염성을 오직 부분적으로 중화하였다 (도 8, 하부 패널). WST-1 시약으로 측정하는 것처럼 ZIKV-유도 세포 변성 효과를 측정하여 유사한 데이터를 얻었다 (도 9). 이 두 번째 분석에서, NNB 항체 ZKA185도 또한 시험된 항체 패널에 함유되어 가장 강력한 항체 ZKA190 (EDIII-특이 적) 및 ZKA230 (NNB)과 유사한 IC50을 보였다.
울트라-강력 ZKA64 및 ZKA190 항체는, ZIKV H/PH/2013 균주 를 중화시키는 능력에 더불어(본 실시예), 또한 ZIKV 균주들 MR766 및 SPH2015, 각자로부터 유래한 E 단백질 및 EDIII에 결합한다는 것을 주목하는 것이 중요하다 (도 1 및 도 3). ZKA190 및 ZKA190-LALA는 또한 두 개의 추가적 ZIKV 균주들 (MR766 및 MRS_OPY_Martinique_PaRi_2015)를 효과적으로 중화하는 것을 확인하였다 (도 13). 종합하면 결과는 울트라-강력 ZKA64 및 ZKA190 항체는 상이한 유전자형 및 기원 (우간다, 프랑스령 폴리네시아, 마르티니크 및 브라질로부터의 동아프리카 및 아시아)에 속하는 ZIKV 의 복수의 균주들과 교차-반응함을 나타낸다.
실시예 6: "LALA" 돌연변이는 혈청 항체에 의한 ZIKV 감염의 항체-의존성 증진을 억제한다
중화 항체는 또한 증식불허 K562 세포에서 ZIKV의 감염을 증진시키는 그들의 능력에 대해 시험하였다 (항체-의존성 증진 분석, ADE 분석). ADE는 K562 세포를 사용해 유동 기반 분석에 의해 측정하였다. 항체 및 ZIKV H/PF/2013 (MOI 0.175)을 1시간 동안 37℃에서 혼합하고 5000 K562 세포/웰에 추가하였다. 사일 후에, 세포를 고정하고, 투과화하고, m4G2로 염색하였다. 감염된 세포의 수는 유동 세포계측법에 의해 결정하였다.
결과는 도 10에 보여준다. 모든 항체는 증식불허 K562 세포에서 매우 광범위한 농도에서, 베로 세포 상에서 ZIKV 감염을 완전히 중화한 것을 포함하여, ZIKV의 감염을 증진시켰다 (도 10). 아주 흥미롭게, EDIII-특이적 항체 ZKA64 및 ZKA190은 1 μg/ml 초과의 K562 세포의 ZIKV 감염을 완전히 중화한 반면, NNB 항체 ZKA230 응 그러지 못하였고, 이는 유리 바이러스 대 Fc-감마-수용체-내재화 바이러스의 중화의 상이한 메커니즘으로 인한 결과일 수 있다. 그에 반해서, ZIKV 감염성을 오직 부분적으로 중화하는 교차-반응 ZKA78은, K562 세포의 ZIKV 감염를 효과적으로 증진시켰다. 이들 결과는 ZIKV 또는 DENV 감염에 의해 유발된 교차-반응 항체는 이종 ADE를 매개할 수 있음을 보여준다.
이러한 관점에서 ADE 가 또한 면역성 혈청에 의해 유도될 수 있는지 및 이것이 "LALA 변종"으로 전달된 중화 항체에 의해 차단될 수 있는지를 연구하였다. LALA 변종을 얻기 위해, 각각의 중쇄를 부위-특이적 돌연변이를 사용해 자연 류신의 자리에 알라닌을 치환함으로써 CH2 도메인의 아미노산 4 및 5 에서 돌연변이하였다. 상기 기술된 것처럼 (인간 IgG1 항체의) LALA 변종은 Fc-감마-수용체 및 보체에 결합하지 않는다.
ZIKV ADE에서 ZKA64-LALA 항체의 영향을 연구하기 위해, ADE 억제 분석을 사용하였다. ZIKV- 또는 DENV-면역성 혈장을 사용하여 ZIKV의 ADE를 관찰하기 때문에, ZIKV (MOI 0.175) 를 일차적 ZIKV- 또는 DENV-감염된 제공자로부터의 혈장과 30 분 동안 37℃에서 혼합하였다. ZKA64-LALA 항체는 50 μg/ml로 추가하고, 5000 K562 세포/웰과 혼합하고 삼일 동안 배양하였다. 세포는 그후 4G2로 염색하고 유동 세포계측법으로 분석하였다.
결과는 도 11에 보여준다. 상응하는 셋팅에서, 회복중인 환자로부터 수집한 네 개의 ZIKV-면역성 혈장 및 하나의 DENV-면역성 혈장은 K562 세포의 ZIKV 감염을 증진시키는 유사한 능력을 보였고 (도 11, 상부 패널), 이 ADE 효과는 EDIII-특이적 ZKA64-LALA 항체에 의해 완전히 차단되었다 (도 11, 하부 패널).
아주 흥미롭게, ZIKV- 및 DENV-면역성 혈장의 ADE효과는 EDIII-특이적 ZKA64-LALA 항체에 의해 완전히 차단되었다. 단일 EDIII-특이적 LALA 항체의 ADE 차단 능력은 혈청 증진 항체를 능가하는 이의 능력뿐만 아니라 일단 엔도솜에 내재된 바이러스를 중화하는 것과도 연관될 수 있다.
이들 결과는, "LALA" 형태로 개발된, 예컨데 ZKA190, ZKA230, ZKA185 또는 ZKA64 같은, 강력한 중화 항체는, 일례로 임산부에서 및/또는 고 위험 지역에 살고있는 사람들에서, 선천성 ZIKV 감염을 예방하는 방지적 또는 치료적 셋팅으로 사용될 강한 잠재성을 가진다는 것을 나타낸다. LALA 형태의 사용은 위와 같이 ZIKV ADE의 위험을 피하고 또한, 상기 보인 것처럼, 예컨데 이미 DENV에 면역된 환자의 경우처럼 기존재 교차 반응 항체의 ADE를 차단할 수 있다.
실시예 7: ZIKV 감염의 진단을 위한 ZIKV NS1-특이적 항체를 사용한 유럽 거주자로부터의 샘플의 분석
본 실시예는 실시예 4에서 기술된 결합 분석의 차단에 기반한다. ZIKV NS1 BOB 분석의 특이성을 더 평가하기 위해, DENV, WNV 또는 치쿤구니아 바이러스(Chikungunya virus, CHIKV)에 감염된 환자로부터 얻은 큰 셋트의 샘플을 시험하였다.
이를 위해, "결합의 차단" 분석을 사용하였다. 폴리스티렌 접시를 1 μg/ml의 ZIKV NS1로 밤새 코팅하고 1% BSA 함유한 PBS로 1시간 동안 차단하였다. 혈장 또는 혈청 (1:10 희석)를 NS1-코팅된 ELISA 접시에 추가하였다. 이후에, 일례로 1 시간 후에, 동일 부피의 비오티닐화 항-NS1 ZKA35를 추가하고, 그 혼합물을, 일례로 실온에서 15 분 동안 배양하였다. 접시를 세척하고 알카린-포스파타아제-접합된 스트렙타비딘을, 일례로 30 분 동안 추가하였다. 접시를 다시 세척하고 기질을 추가하였다. 억제율은 하기에 따라 계산하였다: (1-[(OD 샘플-OD 음성 대조군)/(OD 양성 대조군 -OD 음성 대조군)]) × 100.
결과는 도 14에 보여준다. 증상 개시 후 10일 초과한 WNV 환자로부터 수집한 32 개 샘플 중 서른 한 개 (96.9 %)가 음성을 기록하였다. 아주 흥미롭게, 유일한 양성은 2016 년에 수집한 샘플로부터 얻었다. 증상 개시 후 10일 초과한 DENV 환자로부터 수집한 27개 샘플 중 두 개는 양성을 기록하였고, 상기 두 개의 양성 샘플은 이차적 DENV 감염으로부터 유래하였다. 더불어, 치쿤구니아 환자 또는 YFV-백신접종 맞은군으로부터 유래한 샘플 중 어느 것도 양성을 기록하지 않았다. 2010년 내지 2016년 동안 수집된 스위스 혈액 제공자로부터의 많은 수의 혈장 샘플 (n=116) 도 또한 시험하였다. 이들 샘플 중 어느 것도 양성을 기록하지 않았다. 얻어진 결과는 NS1 BOB ELISA 분석의 높은 민감도와 특이성을 확인하고 강화시켰다.
실시예 8: 본 발명에 따른 항체는 선행기술 항체 EDE1 mAb C8보다 ZIKV를 더욱 강력하게 중화한다
본 발명에 따른 중화 항체를 선행 기술의 고중화 항-ZIKV 항체와 대비하기 위해, ZKA190의 중화 성능을 선행 기술 고중화 mAb EDE1 C8의 그것과 비교하였다 (Barba-Spaeth G, Dejnirattisai W, Rouvinski A, Vaney MC, Medits I, Sharma A, Simon-Lori
Figure pct00003
re E, Sakuntabhai A, Cao-Lormeau VM, Haouz A, England P, Stiasny K, Mongkolsapaya J, Heinz FX, Screaton GR, Rey FA. Structural basis of potent Zika-dengue virus antibody cross-neutralization. Nature. 2016 Aug 4;536(7614):48-53). 두 항체의 중화는 네 개의 뚜렷한 ZIKV 균주들의 패널에 대해 시험하였다 (H/PF/2013; MR766, MRS-OPY 및 PV10552).
간략히, mAb에 의한 ZIKV 감염의 중화는 미세-중화 유동 세포계측법-기반 분석을 사용하여 측정하였다. 상이한 희석의 mAb를 ZIKV (MOI 0.35)와 1시간 동안 37℃에서 혼합하고 5000 베로 세포/웰 을 96-웰 평판-바닥 접시에 추가하였다. ZIKV에 대해 사일 후에, 세포를 2% 포름알데하이드로 고정하고, 1% 우태아 혈청 (fetal calf serum) (하이클론(Hyclone)) 및 0.5% 사포닌 함유하는 PBS 내에 투과화하고, 마우스 mAb 4G2로 염색하였다. 세포를 알렉사 플루오르488 에 접합된 염소 항-마우스 IgG와 배양하고 (Jackson Immuno- Research, 115485164) 유동 세포계측법으로 분석하였다. 중화 역가 (50% 억제 농도 [IC50])는 바이러스-단독 대조군 웰에 대비하여 감염을 50% 감소시킨 항체 농도로 표현하였다.
결과는 도 15에 보여준다. ZKA190 mAb는 아프리카, 아시아 및 아메리카 균주들을 0.6 내지 8 ng/ml 영역에 이르는 IC50으로 강력하게 중화하였다. 이에 대비하여, 선행 기술 항체 C8는 약 24-배 적은 효과를 보였다.
실시예 9: 항체 ZKA190의 추가 특성감별
항체 ZKA190의 역가를 생체외 및 생체내에서 더 연구하였다. 이를 위해, mAb 를 IgG1 아생형 (wt) 포맷 및 IgG1 Fc-LALA 포맷으로 합성하였다. 간략히, VH 및 VL 서열은 (Michel Nussenzweig, Rockefeller University, New York, NY, USA에 의해 친절하게 제공된) 인간 Igγ1, Igκ 및 Igλ 발현 벡터로, 필수적으로 기술된 것처럼 클로닝하였다 (Tiller T, Meffre E, Yurasov S, Tsuiji M, Nussenzweig MC, Wardemann H: Efficient generation of monoclonal antibodies from single human B 세포 by single cell RT-PCR and expression vector cloning. J Immunol Methods 2008, 329:112-124). 재조합 mAb는 EXPI293 세포 (인비트로젠)의 일시적인 형질주입에 의해 생산하고, 단백질 A 크로마토그래피 (GE 헬스케어)에 의해 정제하고 PBS에 대해 탈염시켰다. LALA 변종을 얻기 위해, 각각의 중쇄를 부위-특이적 돌연변이를 사용해 자연 류신의 자리에 알라닌을 치환함으로써 CH2 도메인의 아미노산 4 및 5 에서 돌연변이하였다. 상기 기술된 것처럼 (인간 IgG1 항체의) LALA 변종은 Fc-감마-수용체 및 보체에 결합하지 않는다.
도 15A에 보여준 및 실시예 8에 기술된 것처럼, ZKA190를 네 개의 ZIKV 균주들의 패널에 대하여 시험하였다. ZKA190 mAb는 아프리카, 아시아 및 아메리카 균주들을 0.004 내지 0.05 nM 영역에서 이르는 IC50으로 강력하게 중화하였다 (도 15A; 0.6 내지 8 ng/ml).
ZIKV는 인간 신경 전구 세포 (human neural progenitor cells, hNPC)를 감염시켜 고조된 세포 독성, 세포-주기의 조절곤란 및 감소된 세포 성장을 이끄는 것을 보였기 때문에, ZKA190 및 ZKA190-LALA 를 hNPCs에서 시험하였다. 이를 위해, 무브먼트 디스오더즈 바이오-뱅크(Movement Disorders Bio-Bank) (뉴롤로지컬 인스티튜트 '카를로 베스타'의 뉴로제네틱스 유닛(Neurogenetics Unit of the Neurological Institute 'Carlo Besta'), 밀란)으로부터 획득한 성인 남성 섬유모세포를 사이토튠-iPS 2.0 센다이(CytoTune-iPS 2.0 Sendai) 키트 (라이프 테크놀로지스(Life Technologies))를 사용해 재프로그램하였다. hiPSCs 는 피더-프리 상태(feeder-free condition)에서 mTeSR1 (스템셀 테크놀로지스(Stem Cell Technologies)) 내에 유지하였다. 배양체(embryoid bodies, EBs)를 발생시키기 위해, 분리된 hiPSCs 저유착 접시 내에, N2 (0.5x) (써모피셔 사이언티픽(ThermoFisher Scientific)), 인간 노진(Noggin) (0.5 mg/ml, R&D 시스템), SB431542 (5 μM, 시그마), Y27632 (10 μM, 밀테이 바이오텍) 및 페니실린/스트렙토마이신 (1%, 시그마) 보충된 mTeSR1에 담았다 (Marchetto MCN, Carromeu C, Acab A, Yu D, Yeo GW, Mu Y, Chen G, Gage FH, Muotri AR: A model for neural development and treatment of Rett syndrome using human induced pluripotent stem cells. Cell 2010, 143:527-539에 기술). 로셋츠(rosettes)를 획득하기 위해, EBs를 10 일 이후 마트리젤-코팅된 접시 (1:100, 마트리젤 성장 인자 감소, 코닝)에 N2 (1:100), 비-필수 아미노산 (1%, 써모피셔 사이언티픽) 및 페니실린/스트렙토마이신 함유 DMEM/F12 (시그마) 내에 플레이팅하였다. 10 일 이후, 세포를 아큐타아제(Accutase) (시그마) 계대시키고 마트리젤 코팅된-플라스크에 DMEM/F12, N2 (0.25%), B27 (0.5%, 써모피셔 사이언티픽), 페니실린/스트렙토마이신 및 FGF2 (20 ng/ml, 써모피셔 사이언티픽) 함유 NPC 배지에 시딩하였다. hNPCs (3x104)를 PRVABC59 균주 감염 3일 이전에 24-웰 접시 내 커버슬립에 플레이팅하였다. 바이러스 스톡을 hNPC 추가하기 1 시간 전에 mAb와 배양하여 0.5의 MOI를 획득하였다. 바이러스 흡착 4 시간 이후, 배양 상등액을 제거하고 mAb를 함유하는 새로운 배지를 재-추가하였다. 감염 후 96 시간에 상등액을 수집하여 베로 세포에서의 플라크 분석에 의해 바이러스 역가를 측정하였다. 세포를 4% 파라포름알데하이드 (PFA, 시그마) 용액 함유 인산-완충 식염수 (PBS, 유로클론(Euroclone))에서 30 분 동안 간접 면역형광법을 위해 고정하였다. 고정된 세포를 0.2% 트리톤(Triton) X-100 (시그마) 및 10% 당나귀 혈청 (시그마)을 함유하는 차단 용액에서 30 분 동안 투과화하고, 4℃에서 일차적 항체와 함께 차단 용액에서 배양하였다. 검출을 위해 하기 항체를 사용하였다: 항-외피 (1:200, 밀리포어(Millipore), MAB10216). 그런다음, 세포를 PBS로 세척하고 1시간 동안 훽스트(Hoechst) 및 항-마우스 알렉사 플루오르-488 이차적 항체 (차단 용액 내 1:1,000, 써모피셔 사이언티픽)와 배양하였다. PBS 세척 이후, 세포를 다시 세척하고 표본화하였다. 결과는 도 16A에 보여준다. ZKA190 및 ZKA190-LALA, 모두 hNPC 내 ZIKV의 감염 및 복제를 충분히 폐지하였다.
다음으로, ADE를 야기하는 ZKA190 및 ZKA190-LALA의 능력을 실시예 6에 기술된 것처럼 K562 세포주에서 시험하였다. 간략히, ADE를 K562 세포를 사용한 유동 기반 분석에 의해 측정하였다. 간략히, ZKA190을 위해, ZKA190 및 ZIKV H/PF/2013 (MOI 0.175)를 1시간 동안 37℃에서 혼합하고 5000 K562 세포/웰에 추가하였다. 사일 후에, 세포를 고정하고, 투과화하고, mAb m4G2으로 염색하였다. 감염된 세포의 수는 유동 세포계측법에 의해 결정하였다. ZKA190-LALA를 위해, ZIKV (MOI 0.175)를 ZIKV-감염된 제공자로터의 혈장과 30 분 동안 37℃에서 혼합하였다. ZKA190-LALA를 50 μg/ml 추가하고, 5000 K562 세포/웰과 혼합하고 삼일 동안 배양하였다. 세포를 그런다음 4G2로 염색하고 유동 세포계측법에 의해 분석하였다. 결과는 도 16B에 보여준다. ZKA190는 ADE를 0.0001 내지 1 nM까지 지지하고; 예상된 것 것처럼, ZKA190-LALA는 어떠한 ADE 활성도 보이지 않았다. 네 개의 ZIKV-면역 제공자로부터의 혈장에 의해 유도된 ADE를 K562 세포에서 억제하는 ZKA190-LALA의 능력 또한 시험하였다. 결과는 도 16C에 보여준다. ZKA190-LALA는 혈장 항체에 의해 유도된 ADE를 완전하게 억제하는 것을 발견하였다 (도 16C).
지배적 항체의 부분으로부터의 항-prM 항체는 플라비바이러스에 대한 인간 면역성 반응 동안 유발하고 감염 생체외 바이러스 감염을 증진시킴을 보여왔다 (Dejnirattisai, W., Jumnainsong, A., Onsirisakul, N., Fitton, P., Vasanawathana, S., Limpitikul, W., Puttikhunt, C., Edwards, C., Duangchinda, T., Supasa, S., et al. (2010). Cross-reacting antibodies enhance dengue virus infection in humans. Science 328, 745-748). K562 세포는 DENV 면역 제공자로부터 유래된 prM 교차-반응 항체 DV62의 연속 희석과 함께 사전-배양하였다 (Beltramello, M., Williams, K.L., Simmons, C.P., Macagno, A., Simonelli, L., Quyen, N.T.H., Sukupolvi-Petty, S., Navarro-Sanchez, E., Young, P.R., de Silva, A.M., et al. (2010). The human immune response to Dengue virus is dominated by highly cross-reactive antibodies endowed with neutralizing and enhancing activity. Cell Host Microbe 8, 271-283). 결과는 도 16D에 보여준다. DV62는 ZIKV prM 단백질과 교차-반응하였고 넓은 범위의 농도에서 ADE를 야기하였다 (도 16D). ZKA190-LALA는 미성숙 또는 부분적으로 미성숙 ZIKV 입자의 항-prM DV62 mAb-유도된 ADE를 충분히 차단할 수 있다(도 16D).
최종적으로, 상이한 농도의 ZKA190, ZKA190-LALA 및 ZKA190 Fab가 인간 항-DENV2 혈장 또는 DV62의 증진 농도의 존재하에 ZIKV의 ADE를 야기 또는 차단하는 능력을 시험하였다. 결과는 도 16E에 보여준다. ZKA190는, 미성숙 및 성숙 비리온 모두의 진입을 촉진하는 그의 능력과 상응하게, 낮은 농도에서 ZIKV 감염의 prM DV62-매개된 ADE를 증가시켰고, 반면에 1.3 nM (i.e., 200 ng/ml) 초과 농도에서 ZKA190는 DENV 혈장 및 mAb DV62 모두에 의해 유도된 ADE를 차단하였다. ZKA190-LALA, 및 Fab 단편도, 0.06 nM 초과 농도에서 ADE를 감소시켰고, 양자 모두 감염 부착-후 단계, 예컨데 융합에서 바이러스를 억제하였음을 나타낸다.
실시예 10: ZKA190는 EDIII 의 보존되고 고 접근가능 영역에 결합한다
ZKA190 에피토프를 잔기 수준에서 결정하기 위해, 용액 NMR 분광법을 Bardelli, M., Livoti, E., Simonelli, L., Pedotti, M., Moraes, A., Valente, A.P., and Varani, L. (2015). Epitope mapping by solution NMR spectroscopy. J. Mol. Recognit. 28, 393-400; Simonelli, L., Beltramello, M., Yudina, Z., Macagno, A., Calzolai, L., and Varani, L. (2010). Rapid structural characterization of human antibody-antigen complexes through experimentally validated computational docking. J Mol Biol 396, 1491-1507; 및 Simonelli, L., Pedotti, M., Beltramello, M., Livoti, E., Calzolai, L., Sallusto, F., Lanzavecchia, A., and Varani, L. (2013). Rational Engineering of a Human Anti-Dengue Antibody through Experimentally Validated Computational Docking. PLoS ONE 8, e55561에 기술된 것처럼 사용하였다.
간략히, 스펙트럼은 브루커 아방스(Bruker Avance) 700 MHz NMR 스텍트로미터에 300 K에서 기록하였다. 골격 공명의 할당을 위해 표준 삼중 공명 실험(HNCO, HN(CA)CO, HN(CO)CACB, HNCACB 을 사용하였고, 반면 곁가지는 HCCH-TOCSY 및 HBHA(CO)NH 실험을 사용해 주석달았다. 모든 NMR 실험은 탑스핀 (Topspin) 2.1 (브루터 바이오스핀(Bruker Biospin))을 사용해 진행하였고 CARA로 분석하였다. NOESY 교차 피크는 CYANA "noeassign" 매크로를 사용해 수동적으로 할당된 화학적 변이에 기초하여 자동으로 할당되었다. 표준 시뮬레이션 어닐링 프로토콜을 사용하는 CYANA의 구조 계산에 사용된 상위 거리 제한은 70ms 15N- 및 13C-분해 NOESY 스펙트럼에서 유도되었다. ZIKV EDIII의 골격 역학은 600MHz 및 700MHz 분광계에서 기록된 15N 이완 측정 값에서 파생되었다. 양성자-검출 버전의 CPMG (R2), 역전 회복 (inversion-recovery, R1) 및 15N{1H}-항정-상태(steady-state) NOE를 활용하였다. T2 시리즈를 위한 지연 셋팅은 0 내지 0.25 초 범위이고 T1 시리즈를 위해서는 0.02 내지 2 초 범위이다. 15N{1H}-NOE 실험은 5 초의 이완 지연을 사용하였다. R1과 R2 이완 속도는 홈-작성 스크립트를 사용해 측정된 데이터에 상응하는 지수 함수의 최소 제곱합에서 유래하였다. 이완 데이터는 소프트웨어 패키지 DYNAMICS를 사용하여 모델-없는 접근법으로 분석하였다. ROTDIF 프로그램을 사용하여 이완 데이터 (8.5 ns)로부터 전체 상관 시간을 계산하였다. NMR 에피토프 맵핑은 종래 기술된 것처럼 수행하였다 (Bardelli et al., 2015; Simonelli et al., 2010; 2013). 간략히, 자유 또는 ZKA190 Fab에 결합된 표지된 EDIII의 15NHSQC 스펙트럼의 오버레이는, 복합체 형성시 그의 NMR 신호가 변화하여 EDIII 잔기의 동정을 가능케 하여, ZKA190 결합에 의해 영향을 받았다는 것을 나타낸다. 변화는 수동 검사와 화학적 이동 섭동 (Chemical Shift Perturbation, CSP)에 의해 확인하였다, CSP=((△δH)2+(△δN/10)2)1/2. NMR 샘플은 전형적으로 20 mM 소듐 포스페이트, 50 mM NaCl, pH 6.0 내 800μM 의 [15N, 13C]-표지된 EDIII 을 사용하였다. 과중수소화 (명목상 70 %) 2H, 15N EDIII 샘플을 EDUI : ZKA190 Fab 비가 1:1.1 인 NMR 에피토프 맵핑을 위해 사용하였다; EDIII 농도는 전형적으로 0.4 mM이었다.
NMR 신호는 국소 화학적 환경에 강하게 의존하기 때문에, 복합체 형성시의 변화는, 직접 또는 알로 스테릭 효과를 통해 항체 결합에 의해 영향을 받는 항원 잔기를 확인한다. 자유 및 결합된 EDIII 의 NMR 스펙트럼을 대비함으로써(도 17A), ZKA190에 의해 영향을 받은 잔기를 EDIII의 LR, 구체적으로 BC, DE 및 FG 루프뿐만 아니라 EDI-EDIII 힌지에 맵핑하였다 (도 18a). 이들 잔기는, 우간다 1947 단리물 내 V341I 및 E393D에서의 치환을 제외하고는, 217 개의 알려진 ZIKV 균주간에 거의 동일하다 (도 17D). 이들 돌연변이는 ZKA190에 의해 효율적으로 중화된 MR766 균주에도 존재한다 (도 15A). 비복합체화된 ZIKV 구조상의 ZKA190 에피토프의 분석은 5-배 정점(vertex)의 FG 루프를 제외하고는 에피토프가 매우 접근 가능하다는 것을 보여 주었다(도 18B 및 17C, 분자 A).
NMR-유도된 에피토프 정보뿐 아니라 EDIII 돌연변이 유발에 의해 유도되고 검증된 분자 역학 시뮬레이션에 뒤따른 전산 도킹은, ZKA190은 모양 및 전하 상보성에 의해 특징 지워지는 계면을 통해 결합한다는 것을 보여주었다 (도 18B 및 17E). 도킹은 ZKA190 및 EDIII 상의 FG 루프 사이에 직접적인 접촉이 없다는 것을 나타내며, 항체 결합시 이의 NMR 신호의 변화가 알로스테릭 효과에 기인함을 제안한다. 이 개념은, 다른 에피토프 영역은 아닌, 재조합 EDIII 내 FG 루프 잔기의 돌연변이가 EDIII에 대한 ZKA190의 결합 친화도에 영향을 미치지 않는다는 사실에 의해 뒷받침된다 (도 18B 및 19).
실시예 11: ZKA190 중화의 메카니즘
바이러스를 효율적으로 중화시키는 ZKA190의 능력은 세포 부착 또는 막 융합의 억제를 관여할 수 있다. 부가 메카니즘은 바이러스 입자의 교차-결합을 통한 바이러스 불활성화를 관여할 수 있다.
ZKA190 Fab는 대응하는 IgG보다 효율적이지는 않지만 ZIKV를 중화시킬 수 있다. EDI-EDIII 링커에의 결합에 의해, ZKA190 (Fab 및 IgG 모두)은 숙주 세포 막에 대한 바이러스 융합에 요구되는 DIII의 ~70도 회전을 억제할 수 있다. (Bressanelli, S., Stiasny, K., Allison, S.L., Stura, E.A., Duquerroy, S., Lescar, J., Heinz, F.X., and Rey, F.A. (2004). Structure of a flavivirus envelope glycoprotein in its low-pH-induced membrane fusion conformation. Embo J 23, 728-738; Modis, Y., Ogata, S., Clements, D., and Harrison, S.C. (2004). Structure of the dengue virus envelope protein after membrane fusion. Nature 427, 313-319). 대안적으로, ZKA190는 표적 세포에의 ZIKV 부착을 예방할 수 있다 .
막 융합을 억제하는 ZKA190의 능력은 공 초점 현미경 분석에 의해 지지된다. 이를 위해, 베로 세포를 24-웰 접시에 12 mm-직경의 커버 슬립 상에 7,500 세포/웰로 플레이팅하고 밤새 배양하였다. 세포를 중화 농도의 Alexa-488 접합 mAb (0.7 μM)의 존재 또는 부재하에 37℃에서 3 시간 동안 ZIKV H/PF/2013 (MOI 100)으로 감염시키고, PBS로 세척하고, PBS 내 2% 파라포름알데하이드로 30 분 동안 실온에서 고정하였다. 산성화된 엔도솜은 리소트래커 적색(Lysotracker red) (인비트로젠)과 함께 염료(50 nM)를 고정 이전에 배양의 마지막 30 분 동안 세포에 추가하여 확인하였다. PBS와 50 mM 글라이신에서 광범위하게 씻어낸 후 고정을 하였고 마지막으로 DAPI (벡터 래브라토리즈(Vector Laboratories))로 형광을 위해 벡타쉴드(Vectashield) 봉입제(mounting medium)를 사용하는 현미경 분석을 위해 커버슬립을 준비하였다. 샘플은 63×/1.4 N.A. 대물렌즈를 가지는 레이카(Leica) TCS SP5 현미경을 사용하여 공초점 현미경으로 분석 하였다. 이미지 분석 및 처리는 FIJI 소프트웨어로 수행하였다.
결과는 도 20에 보여준다. 공초점 현미경 분석은 ZKA190 (Fab 또는 IgG)은 오직 ZIKV와 복합체를 형성할 때만 IC50을 10,000 배까지 초과하는 중화 농도에서 베로 세포에 들어갈 수 있음을 보여준다 (도 20).
실시예 12: EDIII-특이적 mAb ZKA190의 생체내 특성감별
그들의 방지적 및 치료적 특성을 평가하기 위해, ZKA190 및 ZKA190-LALA를 ZIKV 균주 MP1751 (아프리카 계통)의 치사 용량으로 공격한 A129 마우스에서 시험하였다. 그들의 방지적 효능을 시험하기 위해, ZKA190 및 ZKA190-LALA를 바이러스 접종 하루 전에 투여했다.
5-8 주령의 암컷 A129 마우스 (IFN-알파/베타 수용체 -/-) 및 야생형 129Sv/Ev 마우스에 PBS로 희석된 mAb (ZKA190, ZKA190-LALA 및 대조군 항체 MPE8 (Corti, D., et al. Cross-neutralization of four paramyxoviruses by a human monoclonal antibody. Nature 501, 439-443 (2013))를 상이한 용량으로 복강 내 (i.p.) 경로로 500㎕ 부피로 투여하였다. MAb는 바이러스 접종 1 일전 또는 1, 2, 3 또는 4 일 후에 투여하였다. 동물에게 102 pfu ZIKV (균주 MP1751)를 피하 주사로 접종하고 14 일 동안 관찰하였다. 체중과 체온을 매일 모니터링하고 임상 관찰을 최소한 하루에 두 번 기록하였다. 접종 후 5 일째에, 50 μl 의 혈액을 각각의 동물로부터 RNA 프로텍트 튜브 (퀴아젠(Qiagen), 영국)에 수집하고 -80℃에서 동결시켰다. 연구의 종료시에 (접종 후 14 일) 또는 동물이 인간 종점에 도달했을 때, 부검을 실시하고, 바이러스 분석을 위해 혈액 및 뇌, 비장, 간, 신장 및 난소의 절편을 채취하였다.
A129 마우스로부터의 조직 샘플을 칭량하고, 세라믹 비드 및 자동 균질기 (프리 셀리스(Precellys), 영국)를 사용하여 30 초 두번째 간격의 6500 rpm으로 여섯 개의 5초 사이클을 사용하여 PBS로 균질화하였다. RNA 추출을 위해 RNeasy Mini 추출 키트 (Qiagen, UK)를 사용하여 이백 μl의 조직 균질액 또는 혈액 용액을 600 μL RLT 완충액 (퀴아젠, 영국)으로 옮겼다; 샘플을 초기 단계로서 QIAshredder (퀴아젠, 영국)에 통과시켰다. ZIKV 특이적 실시간 RT-PCR 분석을 대상 동물의 바이러스 RNA 검출에 활용하였다. 프라이머 및 프로브 서열은 최적의 마스터믹스와 사이클링 조건을 제공하기 위해 수행된 자체 최적화와 검증과 함께 Quick et al., 2017 (Quick, J, Grubaugh ND, Pullan ST, Claro IM, Smith AD, Gangavarapu K, Oliveira G, Robles-Sikisaka R, Rogers TF, Beutler NA, et al.: Multiplex PCR method for MinION and Illumina sequencing of Zika and other virus genomes directly from clinical samples. Nat Protoc 2017, 12:1261-1276)으로부터 채택하였다. 슈퍼스크립트 III 플라티눔 원-스텝 (SuperScript III Platinum One-step) qRT-PCR 키트 (라이프 테크놀로지스, 영국)을 사용해 실시간 RT-PCR을 수행하였다. 최종 마스터믹스 (15 μl)는, 10 μl의 2x 반응 믹스(Reaction Mix), 1.2 μl의 PCR-등급 수, 0.2 μl의 50 mM MgSO4, 1 μl 의 각각의 프라이머 (ZIKV 1086 및 ZIKV 1162c 모두18 μM 작업 농도), 0.8μl의 프로브 (ZIKV 1107-FAM를 25μM 작업 농도) 및 0.8 μl 의 SSIII 효소 혼합물을 포함하였다. 오 μl의 주형 RNA를 마스터믹스에 추가하고, 20 μl의 최종 반응 부피를 얻었다. 사이클 조건은 50℃에서 10 분, 95℃에서 2 분이고, 이후 95℃에서 10 초, 60℃에서 40 초의 45 사이클을 한 후, 최종 냉각 단계인 40℃에서 30 초의 최종 냉각 단계를 더하였다 . 형광을 이용한 정량 분석은 각 60℃ 단계의 끝에서 수행하였다. 반응은 7500 Fast 플랫폼 (라이프 테크놀로지스, 영국)에서 7500 소프트웨어 버전 2.0.6을 사용하여 실행하고 분석하였다. 샘플 내 바이러스 양의 정량화는 정량화된 RNA 올리고뉴클레오티드 (인테그레이티드 DNA 테크놀로지스 (Integrated DNA Technologies))의 희석 시리즈를 사용하여 수행하였다. 올리고뉴클레오티드는 GenBank accession AY632535.2에 기초한 분석에 의해 표적화된 ZIKV RNA의 77 개 염기를 포함하고, HPLC 정제로 250 nmole 규모로 합성하였다.
결과는 도 21, 22 및 23에 보여준다. ZKA190 및 ZKA190-LALA는 농도 5, 1 또는 0.2 mg/kg 에서 사망 및 이환율로부터 마우스를 보호하는 것을 보여주었다 (도 21A-B). ZKA190-LALA, 및 보다 적게는 ZKA190이, 0.04 mg/kg에서 대조군에 비해 이환율과 사망률을 지연시켰다. 혈청 및 기관에서의 바이러스 역가는 대조군 항체-처리 동물에 대비하여, 심지어 1㎍/ml 미만의 혈청 항체 수준의 존재에서, 유의적으로 감소하였다 (도 22A-D).
ZKA190의 치료 잠재성을 평가하기 위해, 우리는 ZIKV 감염 이후 상이한 시점에서 ZKA190 및 ZKA190-LALA를 투여하였다. 용량 15 mg/kg에서, 80% -100%의 생존율이 달성되었고 감염 후 사 일 동안 처리 받았을 때 이환율이 유의적으로 감소하였다 (도 21E-G). ZKA190 및 ZKA190-LALA 처리는 감염 후 모든 시점에서, 대조군 항체로 처리한 동물에 비해, 조기 치료로 더 큰 감소 경향과 함께, 바이러스 역가가 현저히 감소하였다 (그림 23A-21C). 아주 흥미롭게, ZKA190-LALA는 감염 후 사 일 동안 mAb를 준 경우 ZKA190과 비교하여 혈액 제 5 일 샘플에서 유의하게 감소된 항 바이러스 활성, 코팅된 비리온의 신속한 제거를 촉진하는 LALA 변종의 능력 손상과 연관될 수 있다는 결과를 보여주었다.
서열 및 서열목록번호의 표
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* 굵게 강조 표시된 서열은 CDR 영역 (뉴클레오타이드 또는 aa)이고 밑줄친 잔기는 "생식세포"(germline)서열과 대비하여 돌연변이된 잔기이다.
<110> Humabs BioMed SA <120> NOVEL ANTIBODIES SPECIFICALLY BINDING TO ZIKA VIRUS EPITOPES AND USES THEREOF <130> HB01P028WO1 <150> PCT/EP2016/066684 <151> 2016-07-13 <160> 407 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA190 CDRH1 <400> 1 Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr Gly 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA190 CDRH2 <400> 2 Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys 1 5 <210> 3 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA190 CDRH3 <400> 3 Ala Lys Ser Gly Thr Gln Tyr Tyr Asp Thr Thr Gly Tyr Glu Tyr Arg 1 5 10 15 Gly Leu Glu Tyr Phe Gly Tyr 20 <210> 4 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA190 CDRL1 <400> 4 Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr 1 5 <210> 5 <400> 5 000 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA190 CDRL2 long <400> 6 Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA190 CDRL3 <400> 7 Gln Gln Tyr 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240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta ggtcaaggtg gacattcggc 300 caagggacca aggtggaaat caaac 325 <210> 19 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA185 CDRH1 <400> 19 Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp 1 5 <210> 20 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA185 CDRH2 <400> 20 Phe Asp Pro Ser Asp Ser Gln Thr 1 5 <210> 21 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA185 CDRH3 <400> 21 Ala Arg Arg Tyr Cys Ser Ser Ser Ser Cys Tyr Val Asp Asn 1 5 10 <210> 22 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA185 CDRL1 <400> 22 Ala Leu Pro Asn Lys Phe 1 5 <210> 23 <400> 23 000 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA185 CDRL2 long <400> 24 Val Ile Tyr Glu Asp Asn Lys Arg Pro 1 5 <210> 25 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA185 CDRL3 <400> 25 Tyr Ser Thr Asp Ser Ser Ser Asn Pro Leu Gly Val 1 5 10 <210> 26 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA185 VH <400> 26 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gattgggtat atctattaca gtgggagcac caactacaac 180 ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca cttctccctg 240 aagctgaact ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag gaggaggaag 300 tatgattccc tttgggggag ttttgctttt gatatctggg gccaagggac aatggtcacc 360 gtctcttcag 370 <210> 54 <211> 331 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA230 VL <400> 54 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga ggtaattatg tatactggta ccagcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctgt attaatgatc accggccctc aggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240 tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca acatgggatg acagcctggg tggccttgta 300 ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta g 331 <210> 55 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA78 CDRH1 <400> 55 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala 1 5 <210> 56 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA78 CDRH2 <400> 56 Ile Gly Arg Asn Gly Asp Ser Ile 1 5 <210> 57 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aaccgaagac acagcagtgt actattgcgt gaaagatctg 300 gccatccccg agtcctacag aattgaagct gattattggg gacagggcac cctggtcatc 360 gtgagcgccg 370 <210> 72 <211> 340 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA78 VL <400> 72 gacatcgtga tgacacagtc tccagatagt ctggcagtca gtctggggga gagggccact 60 attaactgca agagctccca gtccgtgctg taccgctcta acaacaagaa ttacctgtct 120 tggtatcagc agaagcccgg acagccccct aaactgctga tctattgggc ttcaacccgg 180 gaaagcggcg tcccagacag attctcaggc agcgggtccg gaacagactt caccctgaca 240 attagccccc tgcaggcaga ggacgtggct gtctactatt gtcagcagta ctattctagt 300 cctcgaactt tcggccaggg gaccaaggtg gaaatcaaac 340 <210> 73 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA64 CDRH1 <400> 73 Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr His 1 5 <210> 74 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA64 CDRH2 <400> 74 Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr 1 5 <210> 75 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA64 CDRH3 <400> 75 Ala Arg Met Ser Ser Ser Ile Trp Gly Phe Asp His 1 5 10 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Ser 115 120 <210> 361 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA174 CDRH1 <400> 361 Gly Gly Ser Met Ser Asn Ser Tyr Tyr His 1 5 10 <210> 362 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA174 CDRH2 <400> 362 Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr 1 5 <210> 363 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA174 CDRH3 <400> 363 Ala Arg Asn Pro Val Phe Asn Pro Leu Thr Leu Thr His Asp Ala Phe 1 5 10 15 Asp Ile <210> 364 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA174 VH <400> 364 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Met Ser Asn Ser 20 25 30 Tyr Tyr His Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Asn Pro Val Phe Asn Pro Leu Thr Leu Thr His Asp Ala 100 105 110 Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 365 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA189 CDRH1 <400> 365 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 366 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA189 CDRH2 <400> 366 Ile Ser Gly Ser Gly Asp Asn Thr 1 5 <210> 367 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA189 CDRH3 <400> 367 Ala Lys Trp Pro Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Glu Ser Tyr Phe 1 5 10 15 Asp Pro <210> 368 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA189 VH <400> 368 Gly Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Gln Pro Gly Lys 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Leu Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Trp Pro Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Glu Ser Tyr Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 369 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA195 CDRH1 <400> 369 Gly Tyr Asn Phe Pro Ser Tyr Trp 1 5 <210> 370 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA195 CDRH2 <400> 370 Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr 1 5 <210> 371 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA195 CDRH3 <400> 371 Ala Arg Ala Asp Cys Arg Ser Thr Ser Cys Tyr Leu Val Phe Glu 1 5 10 15 <210> 372 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA195 VH <400> 372 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Asp Ser Gly Tyr Asn Phe Pro Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Thr Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Asp Cys Arg Ser Thr Ser Cys Tyr Leu Val Phe Glu Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 373 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA215 CDRH1 <400> 373 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp 1 5 <210> 374 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA215 CDRH2 <400> 374 Ile Asp Pro Ser Asp Ser His Thr 1 5 <210> 375 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA215 CDRH3 <400> 375 Ala Arg His Ala Leu Pro Asn Tyr Phe Asp Ser 1 5 10 <210> 376 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA215 VH <400> 376 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser His Thr Asp Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Ala Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Ala Leu Pro Asn Tyr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 377 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA218 CDRH1 <400> 377 Gly Phe Pro Phe Ser Ser Tyr Trp 1 5 <210> 378 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA218 CDRH2 <400> 378 Ile Asn Ser Asp Gly Arg Asn Thr 1 5 <210> 379 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA218 CDRH3 <400> 379 Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Tyr Asp Ser Ser Gly Cys Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 380 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKA218 VH <400> 380 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Pro Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val 35 40 45 Ser Arg Ile Asn Ser Asp Gly Arg Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Tyr Asp Ser Ser Gly Cys Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 381 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKB75 CDRH1 <400> 381 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala 1 5 <210> 382 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKB75 CDRH2 <400> 382 Ile Ser Gly Thr Gly Gly Ser Thr 1 5 <210> 383 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKB75 CDRH3 <400> 383 Ala Lys Asp Ser Ala Ser Arg Gly Gly Tyr Cys Ser Gly Gly Val Cys 1 5 10 15 Tyr Leu Asn Pro Gly His His Asp Tyr 20 25 <210> 384 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKB75 VH <400> 384 Glu Val Gln Val Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Leu Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Ile Ser Gly Thr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Ser Ala Ser Arg Gly Gly Tyr Cys Ser Gly Gly Val Cys 100 105 110 Tyr Leu Asn Pro Gly His His Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 115 120 125 Thr Val Ser Ser 130 <210> 385 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKB83 CDRH1 <400> 385 Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr Trp 1 5 <210> 386 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKB83 CDRH2 <400> 386 Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr 1 5 <210> 387 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKB83 CDRH3 <400> 387 Ala Arg Leu Arg Gly Ser Leu Tyr Cys Ser Gly Gly Arg Cys Tyr Ser 1 5 10 15 Val Pro Gly Glu Thr Pro Asn Trp Phe Asp Pro 20 25 <210> 388 <211> 134 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKB83 VH <400> 388 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Trp Ser Ile Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Lys Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Arg Gly Ser Leu Tyr Cys Ser Gly Gly Arg Cys Tyr Ser 100 105 110 Val Pro Gly Glu Thr Pro Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr 115 120 125 Leu Val Thr Val Ser Ser 130 <210> 389 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKC3 CDRH1 <400> 389 Gly Gly Ser Ile Thr Ser Tyr Tyr 1 5 <210> 390 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKC3 CDRH2 <400> 390 Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr 1 5 <210> 391 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKC3 CDRH3 <400> 391 Ala Arg Val Gly Gly Ala Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 392 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKC3 VH <400> 392 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Val Gly Gly Ala Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 393 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKC18 CDRH1 <400> 393 Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr Ala 1 5 <210> 394 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKC18 CDRH2 <400> 394 Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr 1 5 10 <210> 395 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKC18 CDRH3 <400> 395 Ser Arg Asp His Thr Gly Thr Thr Tyr Ala Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 396 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKC18 VH <400> 396 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile 65 70 75 80 Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ser Arg Asp His Thr Gly Thr Thr Tyr Ala Phe Asp Ile Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Gln 115 120 <210> 397 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKD1 CDRH1 <400> 397 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly 1 5 <210> 398 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKD1 CDRH2 <400> 398 Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys 1 5 <210> 399 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKD1 CDRH3 <400> 399 Ala Arg Asp Arg Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Val Gly Tyr Tyr Tyr Gly 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 400 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZKD1 VH <400> 400 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Arg Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Val Gly Tyr Tyr Tyr Gly 100 105 110 Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 401 <211> 95 <212> PRT <213> Zika virus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(14) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (60) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (83) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (85) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 401 Thr Ala Ala Phe Thr Phe Thr Lys Xaa Pro Ala Glu Xaa Xaa His Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Val Glu Xaa Gln Tyr Xaa Gly Xaa Asp Gly Pro Cys Lys 20 25 30 Xaa Pro Xaa Gln Met Ala Val Asp Xaa Gln Thr Leu Thr Pro Val Gly 35 40 45 Arg Leu Ile Thr Ala Asn Pro Val Ile Thr Glu Xaa Thr Glu Asn Ser 50 55 60 Lys Met Met Leu Glu Leu Asp Pro Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val 65 70 75 80 Ile Gly Xaa Gly Xaa Lys Lys Ile Thr His His Trp His Arg Ser 85 90 95 <210> 402 <211> 95 <212> PRT <213> Zika virus <400> 402 Thr Ala Ala Phe Thr Phe Thr Lys Ile Pro Ala Glu Thr Leu His Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Val Glu Val Gln Tyr Ala Gly Thr Asp Gly Pro Cys Lys 20 25 30 Val Pro Ala Gln Met Ala Val Asp Met Gln Thr Leu Thr Pro Val Gly 35 40 45 Arg Leu Ile Thr Ala Asn Pro Val Ile Thr Glu Ser Thr Glu Asn Ser 50 55 60 Lys Met Met Leu Glu Leu Asp Pro Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val 65 70 75 80 Ile Gly Val Gly Glu Lys Lys Ile Thr His His Trp His Arg Ser 85 90 95 <210> 403 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ZIKV-NS1 forward primer <400> 403 tggagttcaa ctgacggtcg 20 <210> 404 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ZIKV-NS1-reverse primer <400> 404 taccccgaac ccatgatcct 20 <210> 405 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Gapdh- forward primer <400> 405 ggcaagttca aaggcacagt c 21 <210> 406 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Gapdh-reverse primer <400> 406 caccagcatc accccattt 19 <210> 407 <211> 104 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ZIKV EDIII generic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid, preferably K, A, or E <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid, preferably V, F, or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid, preferably S or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid, preferably I or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid, preferably T or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid, preferably L or D <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid, preferably V or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid, preferably A or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid except R, preferably T or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid, preferably V or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid, preferably A or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (49) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid, preferably M or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (68) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid, preferably S or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (70) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid, preferably E or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (91) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid, preferably V or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (93) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid, preferably E, A, K, or D <220> <221> MISC_FEATURE <222> (94) <223> X may be any (naturally occurring) amino acid, preferably E, A, or K, more preferably K or A <400> 407 Xaa Gly Xaa Xaa Tyr Ser Leu Cys Thr Ala Ala Phe Thr Phe Thr Lys 1 5 10 15 Xaa Pro Ala Glu Xaa Xaa His Gly Thr Val Thr Val Glu Xaa Gln Tyr 20 25 30 Xaa Gly Xaa Asp Gly Pro Cys Lys Xaa Pro Xaa Gln Met Ala Val Asp 35 40 45 Xaa Gln Thr Leu Thr Pro Val Gly Arg Leu Ile Thr Ala Asn Pro Val 50 55 60 Ile Thr Glu Xaa Thr Xaa Asn Ser Lys Met Met Leu Glu Leu Asp Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val Ile Gly Xaa Gly Xaa Xaa Lys Ile 85 90 95 Thr His His Trp His Arg Ser Gly 100

Claims (109)

  1. 지카 바이러스 에피토프에 특이적으로 결합하고 지카 바이러스 감염을 중화하는, 단리된 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  2. 제1항에 있어서, 지카 바이러스의 50% 중화를 위해 요구되는 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편의 농도 (IC50)가 약 1 μg/ml 까지, 바람직하게는 약 500 ng/ml 까지, 더 바람직하게는 약 250 ng/ml 까지, 보다 더 바람직하게는 약 100 ng/ml 까지 및 가장 바람직하게는 약 50 ng/ml 까지인 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 뎅기 바이러스-유사 입자 및/또는 뎅기 외피 단백질에 필수적으로 결합하지 않는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 지카 바이러스 감염의 항체-의존성 증진에 기여하지 않는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  5. 제1항 내지 제4항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 항체인 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  6. 제1항 내지 제5항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 단일클론 항체, 바람직하게는 인간 단일클론 항체, 더 바람직하게는 재조합 인간 단일클론 항체인 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  7. 제1항 내지 제6항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 IgG 유형, 바람직하게는 IgG1 유형인 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  8. 제1항 내지 제7항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 Fc 모이어티를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  9. 제8항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 Fc 모이어티 내 돌연변이를 포함하고, 상기 돌연변이는 수용체에의 항체의 결합을 감소시키는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  10. 제8항 또는 제9항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 CH2 L4A 돌연변이, CH2 L5A 돌연변이, 또는 모두를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  11. 제1항 내지 제10항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 지카 바이러스 외피 단백질의 도메인 III 에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  12. 제11항에 있어서, 지카 바이러스 외피 단백질의 도메인 III은 서열목록 번호: 401 또는 407에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  13. 제12항에 있어서, 지카 바이러스 외피 단백질의 도메인 III 은 서열목록 번호: 402 에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  14. 제1항 내지 제13항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 지카 바이러스 외피 단백질의 에피토프에 결합하고, 이는 EDIII의 측면 리지 (LR) 의 하나 이상의 아미노산 잔기 및/또는 EDI-EDIII 힌지 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기를 함유하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  15. 제14항에 있어서, 상기 지카 바이러스 외피 단백질의 에피토프는 EDIII의 측면 리지 (LR) 하나 이상의 아미노산 잔기 및 EDI-EDIII 힌지 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기를 함유하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  16. 제1항 내지 제10항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 ZIKV 감염성 비리온에 표시된 사차 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  17. 제1항 내지 제16항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 ZIKV의 부착후 단계를 억제할 수 있는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  18. 제17항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 막 융합을 예방할 수 있는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  19. 제1항 내지 제18항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 ZIKV (입자)의 응집을 야기할 수 있는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  20. 제1항 내지 제19항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 3, 75, 39, 21, 57, 239, 243, 247, 251, 255, 259, 263, 267, 271, 275, 279, 283, 287, 291, 295, 299, 303, 307, 311, 315, 319, 323, 327, 331, 335, 339, 343, 347, 351, 355, 359, 363, 367, 371, 375, 379, 383, 387, 391, 395, 및 399 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  21. 제20항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 3, 75, 39, 21 및 57 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  22. 제21항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 3 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  23. 제1항 내지 제22항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
    (i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1은 서열목록 번호: 1, 19, 37, 55, 73, 237, 241, 245, 249, 253, 257, 261, 265, 269, 273, 277, 281, 285, 289, 293, 297, 301, 305, 309, 313, 317, 321, 325, 329, 333, 337, 341, 345, 349, 353, 357, 361, 365, 369, 373, 377, 381, 385, 389, 393, 및 397 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
    (ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 2, 20, 38, 56, 74, 238, 242, 246, 250, 254, 258, 262, 266, 270, 274, 278, 282, 286, 290, 294, 298, 302, 306, 310, 314, 318, 322, 326, 330, 334, 338, 342, 346, 350, 354, 358, 362, 366, 370, 374, 378, 382, 386, 390, 394, 및 398 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
    (iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 3, 21, 39, 57, 75, 239, 243, 247, 251, 255, 259, 263, 267, 271, 275, 279, 283, 287, 291, 295, 299, 303, 307, 311, 315, 319, 323, 327, 331, 335, 339, 343, 347, 351, 355, 359, 363, 367, 371, 375, 379, 383, 387, 391, 395, 및 399 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  24. 제23항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
    (i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1은 서열목록 번호: 1, 19, 37, 55 및 73 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
    (ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 2, 20, 38, 56 및 74 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
    (iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 3, 21, 39, 57 및 75 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  25. 제24항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
    (i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1은 서열목록 번호: 1 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
    (ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 2 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
    (iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 3 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  26. 제1항 내지 제25항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
    (i) 상기 최소한 하나의 CDRL1은 서열목록 번호: 4, 22, 40, 58 및 76 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
    (ii) 상기 최소한 하나의 CDRL2는 서열목록 번호: 5, 6, 23, 24, 41, 42, 59, 60, 77 및 78 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
    (iii) 상기 최소한 하나의 CDRL3 아미노는 서열목록 번호: 7, 25, 43, 61 및 79 중 임의의 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  27. 제26항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
    (i) 상기 최소한 하나의 CDRL1은 서열목록 번호: 4 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
    (ii) 상기 최소한 하나의 CDRL2는 서열목록 번호: 5 또는 6, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
    (iii) 상기 최소한 하나의 CDRL3 아미노는 서열목록 번호: 7 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  28. 제20항 내지 제27항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, (i) 서열목록 번호: 1 - 3; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ii) 서열목록 번호: 19 - 21; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iii) 서열목록 번호: 37 - 39; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iv) 서열목록 번호: 55 - 57; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (v) 서열목록 번호: 73 - 75; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (vi) 서열목록 번호: 237 - 239; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (vii) 서열목록 번호: 241 - 243; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (viii) 서열목록 번호: 245 - 247; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ix) 서열목록 번호: 249 - 251; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (x) 서열목록 번호: 253 - 255; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xi) 서열목록 번호: 257 - 259; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xii) 서열목록 번호: 261 - 263; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xiii) 서열목록 번호: 265 - 267; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xiv) 서열목록 번호: 269 - 271; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xv) 서열목록 번호: 273 - 275; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xvi) 서열목록 번호: 277 - 279; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xvii) 서열목록 번호: 281 - 283; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xviii) 서열목록 번호: 285 - 287; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xix) 서열목록 번호: 289 - 291; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xx) 서열목록 번호: 293 - 295; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxi) 서열목록 번호: 297 - 299; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxii) 서열목록 번호: 301 - 303; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxiii) 서열목록 번호: 305 - 307; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxiv) 서열목록 번호: 309 - 311; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxv) 서열목록 번호: 313 - 315; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxvi) 서열목록 번호: 317 - 319; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxvii) 서열목록 번호: 321 - 323; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxviii) 서열목록 번호: 325 - 327; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxix) 서열목록 번호: 329 - 331; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxx) 서열목록 번호: 333 - 335; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxi) 서열목록 번호: 337 - 339; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxii) 서열목록 번호: 341 - 343; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxiii) 서열목록 번호: 345 - 347; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxiv) 서열목록 번호: 349 - 351; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxv) 서열목록 번호: 353 - 355; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxvi) 서열목록 번호: 357 - 359; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxvii) 서열목록 번호: 361 - 363; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxviii) 서열목록 번호: 365 - 367; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxxix) 서열목록 번호: 369 - 371; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xl) 서열목록 번호: 373 - 375; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xli) 서열목록 번호: 377 - 379; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xlii) 서열목록 번호: 381 - 383; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xliii) 서열목록 번호: 385 - 387; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xliv) 서열목록 번호: 389 - 391; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xlv) 서열목록 번호: 393 - 395; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; 또는 (xlvi) 서열목록 번호: 397 - 399; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른, CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  29. 제28항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, (i) 서열목록 번호: 1 - 5 및 7; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ii) 서열목록 번호: 1 - 4 및 6 - 7; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iii) 서열목록 번호: 19 - 23 및 25; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iv) 서열목록 번호: 19 - 22 및 24 - 25; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (v) 서열목록 번호: 37 - 41 및 43; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (vi) 서열목록 번호: 37 - 40 및 42 - 43; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (vii) 서열목록 번호: 55 - 59 및 61; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (viii) 서열목록 번호: 55 - 58 및 60 - 61; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ix) 서열목록 번호: 73 - 77 및 79; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; 또는 (x) 서열목록 번호: 73 - 76 및 78 - 79; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른, CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 아미노산 서열 및 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  30. 제29항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, (i) 서열목록 번호: 1 - 5 및 7; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; 또는 (ii) 서열목록 번호: 1 - 4 및 6 - 7; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른, CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 아미노산 서열 및 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  31. 제1항 내지 제30항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 중쇄 가변 영역 (VH) 및, 선택적으로, 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하고, 여기서 상기 중쇄 가변 영역 (VH)은 서열목록 번호: 8, 26, 44, 62, 80, 240, 244, 248, 252, 256, 260, 264, 268, 272, 276, 280, 284, 288, 292, 296, 300, 304, 308, 312, 316, 320, 324, 328, 332, 336, 340, 344, 348, 352, 356, 360, 364, 368, 372, 376, 380, 384, 388, 392, 396, 및 400 중 임의의; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  32. 제1항 내지 제31항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, (i) 서열목록 번호: 8 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 9 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; (ii) 서열목록 번호: 26 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 27 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; (iii) 서열목록 번호: 44 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 및/또는 서열목록 번호: 45 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; (iv) 서열목록 번호: 62 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 63 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; 또는 (v) 서열목록 번호: 80 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 81 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  33. 제32항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 서열목록 번호: 8 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 9 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  34. 제32항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 gZKA190, gZKA64, gZKA230, gZKA185 또는 gZKA78, 바람직하게는 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 gZKA190, gZKA64, gZKA230 또는 gZKA185, 더 바람직하게는 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 gZKA190 또는 gZKA64, 및 가장 바람직하게는 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 gZKA190인 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  35. 상기 청구항 중 임의에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 정제 항체, 단일 사슬 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 또는 scFv인 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  36. 약제 용도를 위한, 상기 청구항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  37. 지카 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료 용도를 위한, 상기 청구항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  38. 상기 청구항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 분자.
  39. 제38항에 있어서, 폴리뉴클레오티드 서열은 서열목록 번호: 10 - 18, 28 - 36, 46 - 54, 64 - 72, 및 82 - 90 중 임의의; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 핵산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 핵산 분자.
  40. 청구항 제38항 또는 제39항에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  41. 청구항 제1항 내지 제35항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 발현하는; 또는 청구항 제40항에 따른 벡터를 포함하는 세포.
  42. 청구항 제1항 내지 제35항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 청구항 제38항 및 제39항에 따른 핵산, 청구항 제40항에 따른 벡터 및/또는 청구항 제41항에 따른 세포를 포함하는 약학 조성물.
  43. 제42항에 있어서, 약학적으로 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체를 더 포함하는 약학 조성물.
  44. 제42항 또는 제43항에 있어서, 단일-용량-제품으로 제공되는 약학 조성물.
  45. 제42항 내지 제44항 중 임의의 항에 있어서, 청구항 제1항 내지 제20항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편의 양이, 500 mg 초과하지 않는, 바람직하게는 200 mg 초과하지 않는, 더 바람직하게는 100 mg 초과하지 않는, 및 보다 더 바람직하게는 50 mg 초과하지 않는 약학 조성물.
  46. (i) 지카 바이러스 감염 예방 또는 치료; 또는 (ii) 지카 바이러스 감염의 진단 용도를 위한, 청구항 제1항 내지 제37항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 청구항 제38항 내지 제39항 중 임의의 항에 따른 핵산, 청구항 제40항에 따른 벡터, 청구항 제41항에 따른 세포, 또는 청구항 제42항 내지 제45항 중 임의의 항에 따른 약학 조성물.
  47. 지카 바이러스 감염으로 진단된 대상에서 또는 지카 감염의 증상을 보이는 대상에서 지카 바이러스 감염의 예방 또는 치료하는 청구항 제46항에 따른 용도를 위한, 청구항 제1항 내지 제37항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 청구항 제38항 및 제39항 중 임의의 항에 따른 핵산, 청구항 제40항에 따른 벡터, 청구항 제41항에 따른 세포, 또는 청구항 제42항 내지 제45항 중 임의의 항에 따른 약학 조성물.
  48. 무증상 대상에서 청구항 제46항에 따른 용도를 위한, 청구항 제1항 내지 제37항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 청구항 제38항 및 제39항 중 임의의 항에 따른 핵산, 청구항 제40항에 따른 벡터, 청구항 제41항에 따른 세포, 또는 청구항 제42항 내지 제45항 중 임의의 항에 따른 약학 조성물.
  49. 임신한 대상에서 청구항 제46항 내지 제48항 중 임의의 항에 따른 용도를 위한, 청구항 제1항 내지 제37항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 청구항 제38항 및 제39항 중 임의의 항에 따른 핵산, 청구항 제40항에 따른 벡터, 청구항 제41항에 따른 세포, 또는 청구항 제42항 내지 제45항 중 임의의 항에 따른 약학 조성물.
  50. 청구항 제46항 내지 제49항 중 임의의 항에 따른 용도를 위한, 여기서 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 핵산, 벡터, 세포, 또는 약학 조성물이 (가능한) 지카 바이러스 감염 이후 칠일 까지, 바람직하게는 (가능한) 지카 바이러스 감염 이후 오일 까지, 더 바람직하게는 (가능한) 지카 바이러스 감염 이후 사일 까지, 보다 더 바람직하게는 (가능한) 지카 바이러스 감염 이후 삼일 까지, 및 가장 바람직하게는 (가능한) 지카 바이러스 감염 이후 하루 까지 투여되는, 청구항 제1항 내지 제37항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 청구항 제38항 및 제39항 중 임의의 항에 따른 핵산, 청구항 제40항에 따른 벡터, 청구항 제41항에 따른 세포, 또는 청구항 제42항 내지 제45항 중 임의의 항에 따른 약학 조성물.
  51. 청구항 제46항 내지 제50항 중 임의의 항에 따른 용도를 위한, 여기서 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 핵산, 벡터, 세포, 또는 약학 조성물은 체크포인트 억제제와 조합하여 투여되는, 청구항 제1항 내지 제37항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 청구항 제38항 및 제39항 중 임의의 항에 따른 핵산, 청구항 제40항에 따른 벡터, 청구항 제41항에 따른 세포, 또는 청구항 제42항 내지 제45항 중 임의의 항에 따른 약학 조성물.
  52. 청구항 제46항 내지 제51항 중 임의의 항에 따른 용도를 위한, 여기서 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 핵산, 벡터, 세포, 또는 약학 조성물은 (단일) 용량 0.005 내지 100 mg/kg으로, 바람직하게는 (단일) 용량 0.0075 내지 50 mg/kg으로, 더 바람직하게는 (단일) 용량 0.01 내지 10 mg/kg으로, 보다 더 바람직하게는 (단일) 용량 0.05 내지 5 mg/kg으로, 및 특히 바람직하게는 (단일) 용량 0.1 내지 1 mg/kg으로 투여되는, 청구항 제1항 내지 제37항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 청구항 제38항 및 제39항 중 임의의 항에 따른 핵산, 청구항 제40항에 따른 벡터, 청구항 제41항에 따른 세포, 또는 청구항 제42항 내지 제45항 중 임의의 항에 따른 약학 조성물.
  53. 항-지카 백신의 질을 상기 백신의 항원이 특이적 에피토프를 정확한 입체형태로 함유하는지 확인하여 모니터링하기 위한, 청구항 제1항 내지 제37항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 청구항 제38항 및 제39항 중 임의의 항에 따른 핵산, 청구항 제40항에 따른 벡터, 청구항 제41항에 따른 세포, 또는 청구항 제42항 내지 제45항 중 임의의 항에 따른 약학 조성물의 용도.
  54. 지카 바이러스 감염의 진단에서의, 청구항 제1항 내지 제37항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 청구항 제38항 및 제39항 중 임의의 항에 따른 핵산, 청구항 제40항에 따른 벡터, 청구항 제41항에 따른 세포, 또는 청구항 제42항 내지 제45항 중 임의의 항에 따른 약학 조성물의 용도.
  55. 청구항 제1항 내지 제37항 중 임의의 항에 따른 최소한 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 청구항 제38항 및 제39항 중 임의의 항에 따른 최소한 하나의 핵산, 청구항 제40항에 따른 최소한 하나의 벡터, 청구항 제41항에 따른 최소한 하나의 세포, 또는 청구항 제42항 내지 제45항 중 임의의 항에 따른 최소한 하나의 약학 조성물을 포함하는 키트의 부분.
  56. 청구항 제1항 내지 제37항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 청구항 제38항 및 제39항 중 임의의 항에 따른 핵산, 청구항 제40항에 따른 벡터, 청구항 제41항에 따른 세포, 또는 청구항 제42항 내지 제45항 중 임의의 항에 따른 약학 조성물을 그를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 지카 바이러스 감염을 예방 및/또는 치료하는 방법.
  57. 제56항에 있어서, 상기 대상은 지카 바이러스 감염으로 진단되거나 또는 지카 바이러스 감염의 증상을 보이는 것인 방법.
  58. 제56항 또는 제57항에 있어서, 상기 대상은 임신한 것인 방법.
  59. 지카 바이러스의 NS1 단백질에 특이적으로 결합하는, 단리된 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  60. 제59항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 뎅기 바이러스 (DENV) NS1 단백질에 필수적으로 결합하지 않는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  61. 제59항 또는 제60항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 황열 바이러스 (YFV) NS1 단백질, 웨스트 나일 바이러스 (WNV) NS1 단백질, 일본 뇌염 바이러스 (JEV) NS1 단백질 및/또는 진드기매개 뇌염 바이러스 (TBEV) NS1 단백질에 필수적으로 결합하지 않는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  62. 제59항 내지 제61항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 항체인 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  63. 제59항 내지 제62항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 단일클론 항체, 바람직하게는 인간 단일클론 항체, 더 바람직하게는 재조합 인간 단일클론 항체인 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  64. 제59항 내지 제63항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 IgG 유형, 바람직하게는 IgG1 유형인 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  65. 제59항 내지 제64항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 Fc 모이어티를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  66. 제65항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 CH2 L4A 돌연변이, CH2 L5A 돌연변이, 또는 모두를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  67. 제59항 내지 제64항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 Fc 영역, 구체적으로 Fc 모이어티을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  68. 제59항 내지 제67항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 정제 항체, 단일 사슬 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 또는 scFv인 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  69. 제59항 내지 제68항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 비오티닐화된, 예컨데 비오티닐화된 Fab, Fab', 또는 F(ab')2 단편인 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  70. 제59항 내지 제69항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 지카 바이러스 NS1 단백질의 항원 부위 S1에 및/또는 항원 부위 S2에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  71. 제70항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 지카 바이러스 NS1 단백질의 항원 부위 S2에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  72. 제59항 내지 제71항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 93, 111, 129, 155, 159, 163, 167, 171, 175, 179, 183, 187, 191, 195, 199, 203, 207, 211, 215, 219, 223, 227, 231, 및 235 중 임의의; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  73. 제72항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 93, 111 및 129 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  74. 제73항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 최소한 하나의 CDR, 바람직하게는 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은, 서열목록 번호: 129, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  75. 제59항 내지 제74항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
    (i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1은 서열목록 번호: 91, 109, 127, 153, 157, 161, 165, 169, 173, 177, 181, 185, 189, 193, 197, 201, 205, 209, 213, 217, 221, 225, 229, 및 233 중 임의의; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
    (ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 92, 110, 128, 154, 158, 162, 166, 170, 174, 178, 182, 186, 190, 194, 198, 202, 206, 210, 214, 218, 222, 226, 230, 및 234 중 임의의; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
    (iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 93, 111, 129, 155, 159, 163, 167, 171, 175, 179, 183, 187, 191, 195, 199, 203, 207, 211, 215, 219, 223, 227, 231, 및 235 중 임의의; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  76. 제75항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
    (i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1은 서열목록 번호: 91, 109 및 127 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
    (ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 92, 110 및 128 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
    (iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 93, 111 및 129 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  77. 제76항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
    (i) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH1은 서열목록 번호: 127, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
    (ii) 상기 최소한 하나의 CDRH2는 서열목록 번호: 128, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
    (iii) 상기 최소한 하나의 중쇄 CDRH3은 서열목록 번호: 129, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  78. 제59항 내지 제77항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
    (i) 상기 최소한 하나의 CDRL1은 서열목록 번호: 94, 112 및 130 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
    (ii) 상기 최소한 하나의 CDRL2는 서열목록 번호: 95, 96, 113, 114, 131 및 132 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함; 및/또는
    (iii) 상기 최소한 하나의 CDRL3은 서열목록 번호: 97, 115 및 133 중 임의의, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  79. 제78항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 하나의 CDRH1, 최소한 하나의 CDRH2 및 최소한 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 및 최소한 하나의 CDRL1, 최소한 하나의 CDRL2 및 최소한 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서
    (i) 상기 최소한 하나의 CDRL1은 서열목록 번호: 130, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고;
    (ii) 상기 최소한 하나의 CDRL2는 서열목록 번호: 131 또는 132, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
    (iii) 상기 최소한 하나의 CDRL3은 서열목록 번호: 133, 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  80. 제60항 내지 제79항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, (i) 서열목록 번호: 91 - 93; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ii) 서열목록 번호: 109 - 111; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iii) 서열목록 번호: 127 - 129; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iv) 서열목록 번호: 153 - 155; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (v) 서열목록 번호: 157 - 159; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (vi) 서열목록 번호: 161 - 163; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (vii) 서열목록 번호: 165 - 167; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (viii) 서열목록 번호: 169 - 171; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ix) 서열목록 번호: 173 - 175; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (x) 서열목록 번호: 177 - 179; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xi) 서열목록 번호: 181 - 183; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xii) 서열목록 번호: 185 - 187; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xiii) 서열목록 번호: 189 - 191; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xiv) 서열목록 번호: 193 - 195; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xv) 서열목록 번호: 197 - 199; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xvi) 서열목록 번호: 201 - 203; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xvii) 서열목록 번호: 205 - 207; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xviii) 서열목록 번호: 209 - 211; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xix) 서열목록 번호: 213 - 215; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xx) 서열목록 번호: 217 - 219; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxi) 서열목록 번호: 221 - 223; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxii) 서열목록 번호: 225 - 227; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (xxiii) 서열목록 번호: 229 - 231; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; 또는 (xxiv) 서열목록 번호: 233 - 235; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른, CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  81. 제80항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, (i) 서열목록 번호: 91 - 95 및 97; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (ii) 서열목록 번호: 91 - 94 및 96 - 97; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iii) 서열목록 번호: 109 - 113 및 115; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (iv) 서열목록 번호: 109 - 112 및 114 - 115; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; (v) 서열목록 번호:127 - 131 및 133; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; 또는 (vi) 서열목록 번호: 127 - 130 및 132 - 133; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른, CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 아미노산 서열 및 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  82. 제81항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, (i) 서열목록 번호: 127 - 131 및 133; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른; 또는 (ii) 서열목록 번호: 127 - 130 및 132 - 133; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른, CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 아미노산 서열 및 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  83. 제59항 내지 제82항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 중쇄 가변 영역 (VH) 및, 선택적으로, 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하고, 여기서 상기 중쇄 가변 영역 (VH)은 서열목록 번호: 98, 116, 134, 156, 160, 164, 168, 172, 176, 180, 184, 188, 192, 196, 200, 204, 208, 212, 216, 220, 224, 228, 232, 및 236 중 임의의; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  84. 제59항 내지 제83항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, (i) 서열목록 번호: 98 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 99 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; (ii) 서열목록 번호: 116 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 117 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열; 또는 (iii) 서열목록 번호: 134 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 135 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  85. 제84항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 서열목록 번호: 134 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 중쇄 가변 영역 (VH) 아미노산 서열 및/또는 서열목록 번호: 135 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 경쇄 가변 영역 (VL) 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  86. 제84항 또는 제85항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 gZKA15, gZKA25, 또는 gZKA35, 바람직하게는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 gZKA35인 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  87. 제59항 내지 제86항 중 임의의 항에 있어서, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 표지된, 예를 들면 비오티닐화 또는 호스래디쉬 퍼록시다아제 (HRP)에 접합된 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편.
  88. (i) 청구항 제59항 내지 제87항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편 ; 및
    (ii) 표지를 포함하는 복합체.
  89. 청구항 제59항 내지 제87항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편 또는 청구항 제88항에 따른 복합체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 포함하는 핵산 분자.
  90. 제89항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드 서열은 서열목록 번호: 100 - 108, 118 - 126, 및 136 - 144 중 임의의; 또는 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 88%, 최소한 90%, 최소한 92%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 일치성을 갖는 그의 기능적 서열 변종에 따른 핵산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는 핵산 분자.
  91. 청구항 제89항 또는 제90항에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  92. (i) 청구항 제59항 내지 제87항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편 또는 청구항 제88항에 따른 복합체를 발현하는; 또는 (ii) 청구항 제91항에 따른 벡터를 포함하는 세포.
  93. 청구항 제59항 내지 제87항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; 청구항 제88항에 따른 복합체; 청구항 제89항 또는 제90항에 따른 핵산 분자; 청구항 제91항에 따른 벡터; 및/또는 청구항 제92항에 따른 세포를 포함하는 조성물.
  94. 청구항 제59항 내지 제87항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; 청구항 제88항에 따른 복합체; 청구항 제89항 또는 제90항에 따른 핵산 분자; 청구항 제91항에 따른 벡터; 청구항 제92항에 따른 세포; 및/또는 청구항 제93항에 따른 조성물을 포함하는 키트의 부분.
  95. (생체-외) 지카 바이러스 감염의 진단에서의, 청구항 제59항 내지 제87항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; 청구항 제88항에 따른 복합체; 청구항 제89항 또는 제90항에 따른 핵산 분자; 청구항 제91항에 따른 벡터; 청구항 제92항에 따른 세포; 청구항 제93항에 따른 조성물; 및/또는 청구항 제94항에 따른 키트의 부분의 용도.
  96. 단리된 (체액의) 샘플, 예컨데 단리된 혈액 샘플이, 지카 바이러스에 감염되었는지를 결정하는, 청구항 제59항 내지 제87항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; 청구항 제88항에 따른 복합체; 청구항 제89항 또는 제90항에 따른 핵산 분자; 청구항 제91항에 따른 벡터; 청구항 제92항에 따른 세포; 청구항 제93항에 따른 조성물; 및/또는 청구항 제94항에 따른 키트의 부분의 용도.
  97. 청구항 제95항 또는 제96항 중 임의의 항에 있어서, 결합의 차단 분석이 사용되는 용도.
  98. 하기 단계를 포함하는 생체-외 지카 바이러스 감염의 진단을 위한 결합의 차단 분석 :
    (i) 진단할 대상으로부터 단리된 샘플을 ZIKV NS1 단백질이 코팅된 접시에 추가하고 상기 접시상에 상기 샘플을 배양하는 단계,
    (ii) 청구항 제59항 내지 제87항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편 또는 청구항 제88항에 따른 복합체를 추가하는 단계,
    (iii) 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 결합의 결합의 억제를 결정하는 단계.
  99. 제98항에 있어서, 상기 진단할 대상으로부터 단리된 샘플은 혈액, 타액 및 소변으로부터 선택되고; 바람직하게는 샘플은 혈액 샘플, 예컨데 전혈, 혈장 또는 혈청인 결합의 차단 분석.
  100. 제98항 또는 제99항에 있어서, 상기 단계 (ii)에서 추가되는 항체, 또는 그의 항원-결합 단편은, 표지된, 바람직하게는 비오티닐화 또는 호스래디쉬 퍼록시다아제 (HRP)에 접합된 결합의 차단 분석.
  101. 제98항 내지 제100항 중 임의의 항에 있어서, 상기 진단할 대상으로부터 단리된 샘플은 희석된, 예를 들면 1:5 - 1:50, 바람직하게는 1 : 5 - 1 : 25, 예컨데 1 : 10로 희석된 결합의 차단 분석.
  102. 제98항 내지 제101항 중 임의의 항에 있어서, 상기 단계 (i)의 배양 시간은 최소한 5 분, 바람직하게는 최소한 15 분, 더 바람직하게는 최소한 30 분, 보다 더 바람직하게는 최소한 45 분 및 가장 바람직하게는 최소한 60 분인 결합의 차단 분석.
  103. 제98항 내지 제102항 중 임의의 항에 있어서, 상기 단계 (ii)에서 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 추가한 이후, 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은, 최소한 1 분, 바람직하게는, 최소한 3 분, 더 바람직하게는 최소한 5 분, 보다 더 바람직하게는 최소한 10 분 및 가장 바람직하게는 최소한 15 분 동안 배양하는 결합의 차단 분석.
  104. 청구항 제59항 내지 제87항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; 청구항 제88항에 따른 복합체; 청구항 제89항 또는 제90항에 따른 핵산 분자; 청구항 제91항에 따른 벡터; 청구항 제92항에 따른 세포; 청구항 제93항에 따른 조성물; 및/또는 청구항 제94항에 따른 키트의 부분이, 단리된 (체액의) 샘플, 예컨데 단리된 혈액 샘플이 지카 바이러스에 감염되었는지를 결정하는데 사용되는, (생체-외) 지카 바이러스 감염의 진단을 위한 방법.
  105. 청구항 제59항 내지 제87항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; 청구항 제88항에 따른 복합체; 청구항 제89항 또는 제90항에 따른 핵산 분자; 청구항 제91항에 따른 벡터; 청구항 제92항에 따른 세포; 청구항 제93항에 따른 조성물; 및/또는 청구항 제94항에 따른 키트의 부분; 및/또는 청구항 제104항에 따른 방법을 사용함에 의해, 지카 바이러스 감염으로 진단된 대상에서, 청구항 제34항 내지 제40항에 따른 용도를 위한, 청구항 제1항 내지 제25항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 청구항 제26항 내지 제27항 중 임의의 항에 따른 핵산, 청구항 제28항에 따른 벡터, 청구항 제29항에 따른 세포, 및/또는 청구항 제30항 내지 제33항 중 임의의 항에 따른 약학 조성물.
  106. 하기 단계를 포함하는, 지카 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료 방법:
    (i) 청구항 제59항 내지 제87항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; 청구항 제88항에 따른 복합체; 청구항 제89항 또는 제90항에 따른 핵산 분자; 청구항 제91항에 따른 벡터; 청구항 제92항에 따른 세포; 청구항 제93항에 따른 조성물; 및/또는 청구항 제94항에 따른 키트의 부분를 사용함에 의해 지카 바이러스 감염을 진단하는 단계; 및
    (ii) 청구항 제1항 내지 제37항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 청구항 제38항 또는 제39항에 따른 핵산, 청구항 제40항에 따른 벡터, 청구항 제41항에 따른 세포, 및/또는 청구항 제42항 내지 제45항 중 임의의 항에 따른 약학 조성물을 상기 대상에게 투여하는 단계.
  107. 제106항에 있어서, 상기 단계 (i)의 지카 바이러스 감염을 진단하는 단계는 단리된 (체액의) 샘플, 예컨데 단리된 혈액 샘플 상에서 생체-외 진단으로 수행되는 지카 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료 방법.
  108. 제94항에 있어서, 상기 단계 (i)의 지카 바이러스 감염을 진단하는 단계는 청구항 제98항 내지 제103항 중 임의의 항에 따른 결합의 차단 분석으로 수행되는 지카 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료 방법.
  109. (i) 청구항 제59항 내지 제87항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; 청구항 제88항에 따른 복합체; 청구항 제89항 또는 제90항에 따른 핵산 분자; 청구항 제91항에 따른 벡터; 청구항 제92항에 따른 세포; 청구항 제93항에 따른 조성물; 및/또는 청구항 제94항에 따른 키트의 부분; 및
    (ii) 청구항 제1항 내지 제37항 중 임의의 항에 따른 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 청구항 제38항 내지 제39항 중 임의의 항에 따른 핵산, 청구항 제40항에 따른 벡터, 청구항 제41항에 따른 세포, 및/또는 청구항 제42항 내지 제45항 중 임의의 항에 따른 약학 조성물을 포함하는 키트의 부분.
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