CN108347974A - 源自传统发酵食品及具有优异酶生成能力的新颖的菌株及利用其的谷物发酵酶食品的制备方法 - Google Patents

源自传统发酵食品及具有优异酶生成能力的新颖的菌株及利用其的谷物发酵酶食品的制备方法 Download PDF

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Abstract

本申请案涉及一种新颖的解淀粉芽孢杆菌菌株、利用上述菌株的谷物发酵物的制备方法、利用上述菌株制备的谷物发酵物、包括上述谷物发酵物的血栓分解用组成物、消化改善用组成物、肠炎、肠膜弱化或肠损伤的预防、改善或治疗用组成物、或抗氧化用组成物。

Description

源自传统发酵食品及具有优异酶生成能力的新颖的菌株及利 用其的谷物发酵酶食品的制备方法
技术领域
本申请案涉及一种新颖的解淀粉芽孢杆菌菌株、利用上述菌株的谷物发酵物的制备方法、包括上述菌株的谷物发酵物及包括上述菌株或谷物发酵物的血栓分解用组成物、消化改善用组成物；肠炎、肠膜弱化或肠损伤的预防、改善或治疗用组成物、或抗氧化用组成物。
背景技术
酶是作用于体内代谢活动的重要蛋白质，且为发挥化学作用的触媒作用的物质。大致可将酶分为无法于体内产生而需自外部摄取的食品酶、于体内自行产生而发挥助消化作用的消化酶、发挥有助于除消化以外的其他代谢作用的作用的代谢酶。其中，曾有报导指出食品酶可发挥消化吸收作用、分解排出作用、抗炎/抗菌作用、解毒杀菌作用、血液净化作用及细胞复活作用等生理作用(Sin Hyeon Jae、酶治疗、第29-41页、2013)。
酶食品是为了强化酶的此种功能而于食用原料中培养食用微生物以含有大量的酶者、自食品中萃取含酶部分者、或对其等加工所得者的统称。曾报告此种酶食品通过食品本身的酶与微生物的发酵及熟成过程，增加含有通过各种生理活性物质与营养素的生成作用及有益菌的增殖作用而有助于消化吸收的各种微量元素及生理活性物质(Huh，S.H.与Kim，M.H.现代健康与健康食品、1997.Hongikjea press.Korea、第35-36页)。
于前述背景下，本发明人为了开发可用作酶食品的谷物发酵物而进行锐意研究，结果筛选出淀粉及蛋白质分解能力优异的菌株，利用此种菌株制备谷物发酵物，藉此确认各种效果而完成了本申请案。
发明内容
发明欲解决的课题
本申请案的一个目的在于提供一种新颖的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株。
本发明的另一目的在于提供一种谷物发酵物的制备方法，其包括如下步骤：(a)将本申请案的菌株接种至谷物的步骤；及(b)培养上述菌株而获得谷物发酵物的步骤。
本发明的又一目的在于提供一种包括本申请案的菌株的谷物发酵物。
本发明的又一目的在于提供一种包括本申请案的菌株或谷物发酵物的血栓分解用组成物、消化改善用组成物、肠炎、肠膜弱化或肠损伤的预防、改善或治疗用组成物、或抗氧化用组成物、及包括本申请案的菌株或谷物发酵物的食品组成物(例如，酶食品组成物)。
解决课题的手段
作为用以达成上述目的的一个实施方式，本申请案提供一种解淀粉芽孢杆菌BA245菌株(KCTC 12905BP)。
具体而言，本申请案的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株生成活性较强的淀粉及蛋白分解酶而水解作为高分子的碳水化合物及蛋白质来低分子化，藉此不仅将碳水化合物及蛋白质分解成微生物易于利用的糖类而有助于微生物的作用，而且可通过提供经低分子化的肽而明显增加消化吸收率。再者，本申请案的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株利用作为谷物的主要构成成分的碳水化合物活跃地繁育而转化成构成菌体的蛋白质，故而可相对增加酶食品内的粗蛋白含量。通过利用BA245菌株的发酵而膳食纤维的含量也增加，膳食纤维可使排便通畅，且作为肠内有益菌的重要营养素，有助于增加有益菌的数量而营造健康的肠内环境。
本申请案的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株是自源自传统发酵食品的菌株中筛选的淀粉及蛋白质分解酶生成能力最优异的菌株，且为自酒曲分离的菌株。
为了鉴定筛选出的BA245而进行16S rRNA基因碱基序列分析，结果确认到BA245菌株具有序列号1的16S rRNA基因碱基序列，根据上述序列而与公知的菌株进行序列同源性比较及分析系统分类学上的亲缘关系，结果BA245菌株与解淀粉芽孢杆菌表现出99.9％的相似性(图2)，于旋转酶A基因碱基序列的比较中，也判断出与解淀粉芽孢杆菌的亲缘关系最高(参照图3)。
对此，将本申请案的BA245菌株命名为解淀粉芽孢杆菌BA245，根据布达佩斯条约，于2015年9月23日委托韩国典型培养物保藏中心(Korean Collection for TypeCultures，KCTC)而获得了寄存编号KCTC12905BP。
作为另一实施方式，本申请案提供包括如下步骤的谷物发酵物的制备方法：(a)将寄存编号为KCTC12905BP的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株接种至谷物的步骤；及(b)培养上述菌株而获得谷物发酵物的步骤。
若按照步骤对本申请案的制备方法进行说明，则如下。
步骤(a)：将菌株接种至谷物的步骤
可使用于申请案的步骤(a)中的谷物可包括选自由小麦、小麦胚芽、麸壳、白米、玄米、发芽玄米、大麦、燕麦、红米、黑糯米、糯米、米糠、大豆、药豆、黑豆、藜麦、红扁豆及薏苡所构成的族群中的一种以上的谷物。上述谷物可使用粉碎形态、粉末形态或无粉碎过程而直接使用。
具体而言，上述步骤(a)的谷物可包括小麦胚芽及麸壳。于此情形时，相对于谷物为100重量份，小麦胚芽及麸壳可包括40重量份至100重量份、50重量份至100重量份、50重量份至90重量份、50重量份至80重量份或60重量份至80重量份。
更具体而言，于上述步骤(a)中，谷物可还包括选自由燕麦、红扁豆、玄米、糯麦及藜麦所构成的族群中的一种以上的谷物。相比于谷物为100重量份，这些谷物的含量范围可为1重量份至20重量份，具体而言，可为3重量份至10重量份。再者，上述步骤(a)的谷物可为水分含量为30％(体积/重量(v/w))至70％(v/w)的谷物。具体而言，上述水分含量可为30％(v/w)至60％(v/w)、30％(v/w)至50％(v/w)或30％(v/w)至40％(v/w)。于水分含量低于30％的情形时，因水分较少而芽孢杆菌的发酵速度延迟，特别是，因于发酵过程中水分蒸发而于最终发酵后成为芽孢杆菌难以生长的水分含量为20％的程度，故而会不适宜。于水分含量高于70％的情形时，会产生于干燥制程需投用较多的费用的问题。
具体而言，上述水分含量可为谷物本身的水分含量、或通过对以预先含有水分的方式进行预处理所得的谷物或对上述(a)的谷物进一步进行水分处理而具有的水分含量(即，上述步骤(a)的谷物可为经水分处理的谷物)。可向谷物直接喷雾或混合适量的水而实施上述水分处理。
再者，本申请案的谷物发酵物的制备方法于步骤(a)前，可还包括对谷物进行热处理的步骤。即便无热处理步骤，也可于谷物中培养菌株，但通过进行热处理，于杀灭谷物中的杂菌的同时可破坏谷物细胞壁而发挥糊化作用、且使蛋白质改质，藉此可提供可使微生物活跃地繁育的环境，可减少菌株接种量降低成本。上述热处理可利用本技术领域内公知的各种方法，例如可利用蒸汽(steam)或过热蒸汽(superheated steam)执行。具体而言，能够以70℃至140℃的蒸汽进行10分钟至60分钟的蒸煮处理，或以200℃至300℃的过热蒸汽进行数秒至数分的短时间的热处理。更具体而言，能够以70℃至130℃的蒸汽蒸煮20分钟至60分钟，或以80℃至125℃的蒸汽蒸煮20分钟至45分钟。于热处理温度较低或处理时间较短的情形时，杂菌的杀菌效果会下降，无法顺利地进行后续的发酵制程，于热处理温度较高或处理时间变长的情形时，因谷物内的蛋白质改质而发酵效率下降，从而最终制品的质量会下降。
再者，本申请案的谷物发酵物的制备方法于步骤(a)前，可还包括于对谷物进行水分处理后进行热处理的步骤。水分处理与热处理的内容如上。
接着，将寄存编号为KCTC12905BP的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株接种至上述谷物。
于进行上述接种前，可还包括冷却任意热处理的谷物的步骤。可于热处理结束后自然地进行冷却，或可提高冷却速度来防止过热而均匀地进行冷却(例如，利用输送机(conveyor)式放冷机)。具体而言，冷却温度可为30℃至50℃、35℃至45℃或35℃至40℃。
于对谷物接种解淀粉芽孢杆菌BA245菌株时，可直接使用培养上述菌株的预培养液、使用分离的菌株、或使用以冻结干燥等形态粉末化的菌株或其培养物。就BA245菌株的接种量而言，刚刚接种后的菌数可为1×105CFU/g至1×1010CFU/g或1×106CFU/g至1×109CFU/g。于接种量小于1×105CFU/g的情形时，种菌发酵液的消耗量较少，相反地，使谷物发酵所需时间较多，从而具有制品生产所需的发酵时间变长，受到杂菌污染的可能性较高的缺点。相反地，于接种量超出1×1010CFU/g的情形时，可大幅缩短发酵时间，但具有接种用种菌的生产成本增加的缺点。
步骤(b)：培养菌株而获得谷物发酵物的步骤
于实施步骤(a)后，可将本申请案的菌株与谷物一并培养而获得谷物发酵物。如下述实施例所证明，通过将本申请案的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株培养至谷物中，可因上述菌株的优异的淀粉分解酶活性及蛋白分解酶活性而将所获得的谷物发酵物内的蛋白质低分子化来提高消化吸收率，包括膳食纤维等各种有用成分，且具有血栓分解作用、消化改善作用、肠炎、肠膜弱化或肠损伤的预防、改善或治疗作用、或抗氧化作用等有利的活性。
上述培养可为液体培养或固体培养，但具体而言，可为固体培养。培养温度可为20℃至50℃、30℃至45℃或37℃，培养时间可为1小时至48小时、6小时至48小时、6小时至36小时、12小时至36小时、12小时至30小时、18小时至30小时、22小时至26小时或24小时。
培养方法并无特别限定，但例如可使用液体培养槽、转鼓式发酵器(rotary drumfermentor)或托盘发酵器(tray fermentor)进行培养。除上述转鼓式发酵器或托盘发酵器以外，只要为对谷物或其混合物的发酵有用者，则可不限制于其形式而使用于本申请案的方法中，可根据生产规模而选择使用适当的装置。
本申请案的制备方法可还包括对在步骤(b)中获得的谷物发酵物进行干燥及/或粉碎的步骤。可通过本技术领域内公知的各种方法实现上述干燥及/或粉碎，但于过度地于高温下进行干燥的情形时，会杀灭谷物发酵物中的活菌，也会降低酶活性，因此应予以注意。具体而言，应于不会杀灭本申请案的菌株且也保持酶活性的低温下进行干燥，可于低温、例如40℃至75℃或50℃至70℃下，利用低湿度的热风以谷物发酵物中的水分含量成为20％以下或10％以下的方式进行干燥。粉碎过程可根据利用谷物发酵物的目的而粉碎成各种尺寸，作为粉碎方法，例如可利用锤磨机(hammer mill)等。
本申请案的又一实施方式提供一种包括以寄存编号KCTC12905BP寄存的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株的谷物发酵物。
具体而言，上述解淀粉芽孢杆菌BA245菌株可包括其培养物或其破碎物等。上述BA245菌株的内容如上。
再者，本申请案的谷物发酵物可还包括：(a)50重量％至60重量％的碳水化合物；(b)20重量％至30重量％的粗蛋白；(c)50mg/100g至200mg/100g的离胺酸；(d)15mg/100g至150mg/100g异白氨酸；(e)100mg/100g至300mg/100g的白氨酸；(f)10mg/100g至70mg/100g的甲硫氨酸；(g)100mg/100g至300mg/100g的苯丙氨酸；(h)50mg/100g至100mg/100g的色氨酸；及(i)50mg/100g至300mg/100g的缬氨酸。具体而言，本申请案的谷物发酵物可还包括：(j)25重量％至30重量％的膳食纤维；及(k)3mg/100g至80mg/100g的苏氨酸。更具体而言，谷物发酵物中的碳水化合物可为53重量％至60重量％，膳食纤维可为26重量％至29重量％，粗蛋白可为21重量％至25重量％。作为必需氨基酸的苏氨酸可包括40mg/100g至70mg/100g或40mg/100g至60mg/100g、离胺酸包括70mg/100g至150mg/100g或100mg/100g至150mg/100g、异白氨酸包括70mg/100g至120mg/100g或80mg/100g至110mg/100g、白氨酸包括150mg/100g至250mg/100g或170mg/100g至240mg/100g、甲硫氨酸包括30mg/100g至60mg/100g或40mg/100g至50mg/100g、苯丙氨酸为150mg/100g至250mg/100g或170mg/100g至240mg/100g、色氨酸为60mg/100g至90mg/100g或65mg/100g至85mg/100g、及缬氨酸包括150mg/100g至250mg/100g或170mg/100g至240mg/100g。
于上述谷物发酵物中，相对于粗蛋白为100重量份，5Mw(kDa)以下的肽含量可为50重量份至80重量份，30Mw(kDa)以上的肽含量可为5重量份至20重量份。具体而言，相对于粗蛋白100重量份，上述5Mw(kDa)以下的肽含量可为55重量份至70重量份，30Mw(kDa)以上的肽含量可为5重量份至15重量份。
再者，上述谷物发酵物的α-淀粉酶活性可为2000U/g至4000U/g、2000U/g至4000U/g、2300U/g至3500U/g、2500U/g至3500U/g或2500U/g至3000U/g。
再者，上述谷物发酵物的蛋白酶活性可为2000U/g至4000U/g、2500U/g至4000U/g、3000U/g至4000U/g、3500U/g至4000U/g或3700U/g至4000U/g。
本申请案的谷物发酵物可通过作为本申请案的一实施方式的上述谷物发酵物的制备方法而制备。
作为又一实施方式，本申请案提供一种包括本申请案的上述菌株或谷物发酵物的食品组成物。上述食品组成物只要为可食用的食品，则并无特别限定。
具体而言，上述食品组成物可为酶食品。于本申请案中，用语“酶食品”是指为了强化酶的功能而于食用原料中培养食用微生物来含有大量的酶者、自食品中萃取含酶部分者、或对其等进行加工所得者。
本申请案的食品组成物也可包括健康食品组成物。于将本申请案的菌株或谷物发酵物使用于食品或健康食品组成物的情形时，可直接添加本申请案的菌株或谷物发酵物、或与其他食品或食品成分一并使用，可通过通常的方法适当地使用。可根据使用目的(预防、健康或治疗用途)适当地确定本申请案的菌株或谷物发酵物的混合量。上述食品组成物于为可食用的组成物的情形时，可无限制地包括各种组成物。作为食品组成物的例子，有包括肉类、香肠、面包、蛋糕、巧克力、糖果类、点心类、饼干类(饼干、苏打饼干等)、比萨、面类(拉面等)、口香糖类、包括冰淇淋类的乳制品、各种汤类、番茄酱、沙司、肉酱(gravies)、调味酱、饮料、茶、口服液、酒精饮料及维生素复合剂等。
本申请案的食品或健康食品组成物可如通常的饮料般含有多种香味剂或天然碳水化合物等作为添加成分。上述天然碳水化合物为如葡萄糖及果糖的单醣、如麦芽糖及蔗糖的双醣、如糊精及环糊精的多醣、木糖醇、山梨糖醇及赤藻糖醇等糖醇。作为甜味剂，可使用如索马甜、甜菊萃取物的天然甜味剂、或如糖精、阿斯巴甜糖的合成甜味剂等。于本申请案的食品或健康食品组成物每100ml中，上述天然碳水化合物的比率通常为约0.01g至0.20g，具体而言，可为约0.04g至0.10g。
除此之外，本申请案的食品或健康食品组成物可含有多种营养剂、维生素、电解质、风味剂、着色剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增粘剂、pH值调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、酒精、使用于碳酸饮料的碳酸化剂等。除此之外，本申请案的食品或健康食品组成物可含有用以制备天然果汁、果汁饮料及蔬菜饮料的果肉。此种成分可单独使用或组合使用。于本申请案的食品或健康食品组成物每100重量份中，可于0.01重量份至0.20重量份的范围内选择此种添加剂的比率。
作为另一实施方式，本申请案提供一种包括解淀粉芽孢杆菌BA245菌株或包括其的谷物发酵物的血栓分解用组成物、消化改善用组成物、肠炎、肠膜弱化或肠损伤的预防、改善或治疗用组成物、或抗氧化用组成物。
本申请案的用语“预防”是指抑制或延缓目标疾病的发病的所有行为，本申请案的用语“改善”是指减轻或缓和所患疾病的症状及副作用的所有行为。本申请案的用语“治疗”是指使所患疾病的症状及副作用改善、好转或朝向有利方向改变的所有行为。
如下述实施例所证明，具体地确认到本申请案的菌株或谷物发酵物具有纤维蛋白分解活性(实施例8)；改善固体成分的胃排空能力(实施例9)；于急性肠炎动物模型中，改善肠通透性(实施例10)、强化肠膜(实施例11)、治疗肠组织的损伤(实施例12)；以及高抗氧化活性较高(实施例13)。因此，可知本申请案的菌株或谷物发酵物具有血栓分解活性；消化改善活性；肠炎、肠膜弱化或肠损伤的预防、改善或治疗活性；及抗氧化活性；从而可知可用作血栓分解用药品及食品；消化改善用药品及食品；肠炎、肠膜弱化或肠损伤的预防、改善或治疗用药品及食品；或抗氧化用药品及食品(或健康功能食品)。
具体而言，上述血栓分解用组成物可通过血栓分解作用而有效地预防或治疗心肌梗塞、脉血栓症、脑中风、脑梗塞、脑血栓症或脑塞栓症。
本申请案的组成物可根据目标方法而进行口服或非口服(例如，应用于静脉内、皮下、腹腔内或身体局部)，具体而言，可口服。
于本申请案的组成物用作医药组成物的情形时，为了投用，除本申请案的菌株或谷物发酵物以外，可还包括于医药学上可容许的一种以上的载剂。于医药学上可容许的载剂可使用盐水、灭菌水、林格氏液、缓冲盐水、葡萄糖溶液、麦芽糊精溶液、甘油、乙醇及混合这些成分中的一种成分以上而使用，可视需要而添加抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂等其他通常的添加剂。再者，可还添加稀释剂、分散剂、表面活性剂、结合剂及润滑剂而制剂化成如水溶液、悬浮液、乳浊液等的注射用剂型、丸药、胶囊、颗粒或锭剂。进而，可利用糖领域的适当的方法或雷明顿医药科学(22nd)((Remington′s Pharmaceutical Science(22nd))、马克出版公司(Mack Publishing Company)、伊斯顿(Easton PA)中所揭示的方法而根据各疾病或成分来制剂化。
本申请案的医药组成物可单独使用、或与手术、激素治疗、药物治疗及使用生物学反应调节剂的方法并用。
作为又一实施方式，本申请案提供一种包括对需进行投用的个体(subject)投用利用解淀粉芽孢杆菌BA245菌株或上述菌株而制备的谷物发酵物及于医药学上或食品学上容许的载剂的组成物，且治疗、改善或预防因血栓引起的疾病；改善消化功能；预防、改善或治疗肠炎、肠膜弱化或肠损伤；或减少活性氧的方法。可通过根据患者的体重、年龄、性别、健康状态、饮食、投用时间、投用方法、排泄率及疾病的重症程度等而以各种投用量投用本申请案的组成物来实施本申请案的投用。本申请案的谷物发酵物的每日投用量可为约0.0001mg/kg至600mg/kg、或约0.001mg/kg至500mg/kg，每日可分一次或多次投用。再者，本申请案的菌株能够以5×104CFU/ml至5×108CFU/ml或1×106CFU/ml至1×108CFU/ml的量投用，每次可投用30ml至100ml或50ml至100ml，每日可投用一次至四次。
发明效果
(a)本申请案提供一种淀粉分解酶活性及蛋白分解酶活性卓越的新颖的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BA245菌株(KCTC12905BP)、利用上述菌株制备谷物发酵物的方法，包括上述菌株的谷物发酵物、及包括上述菌株或上述谷物发酵物的各种功能性组成物。
(b)于将上述菌株用作种菌而制备谷物发酵物的情形时，上述谷物发酵物因通过碳水化合物及蛋白质的水解实现的低分子化、粗蛋白含量的增加、膳食纤维及必要游离氨基酸的增加等而有效地治疗或预防因血栓引起的疾病、改善消化、肠炎、预防、改善或治疗肠膜弱化或肠损伤、或发挥抗氧化作用。
(c)因此，可提供一种使用谷物发酵物而可有助于营养素摄取、血栓溶解、改善消化、肠健康及抗氧化的高质量的药品及食品(或健康食品)。
附图说明
图1是用以筛选可同时高产淀粉分解酶及蛋白分解酶的菌株的α-淀粉酶平板培养基(图1a)及蛋白酶平板培养基(图1b)的筛选结果。
图2是表示基于16S rRNA基因碱基序列的系统分类学上的亲缘关系的系统发育树(phylogenic tree)。
图3是表示基于适于芽孢杆菌内菌株的系统分类的旋转酶A基因碱基序列的系统分类学上的亲缘关系的系统发育树(phylogenic tree)。
图4是对BA245发酵物的低分子肽的含量与原料及同类菌株BA474进行比较而分析的层析结果。
图5是表示血栓分解活性的纤维蛋白平板分析结果。
图6是表示纤维蛋白分解活性的柱状图。
图7是BA245发酵物为各含量时的肠通透性评估结果。
图8是为了观察肠膜强化程度而表示肠细胞的紧密连接蛋白即密连蛋白(Claudin)(图8a)及紧连蛋白(Occludin)(图8b)的表现程度的结果。
图9是通过对肠进行组织学上观察而确认因摄取BA245发酵物实现的肠上皮损伤的恢复程度的照片。
图10是分别对谷物原料、BA245发酵物及酶食品进行抗氧化活性(自由基消除能力)评估的结果。
具体实施方式
以下，通过实施例而更详细地对本申请案进行说明。这些实施例仅用以更具体地说明本申请案，根据本申请案的主旨，于本申请案所属的领域内具有常识者应明白，本申请案的范围并不限制于这些实施例。
实施例1：高产淀粉分解酶及蛋白分解酶的菌株的筛选
本发明人等人为了分离淀粉分解酶及蛋白分解酶的生成能力优异的菌株，自各种传统的发酵食品(泡菜、酱类、酒曲、传统酒及鱼酱等)中分离约3000种微生物，试图以其中的约1308种食品适宜性芽孢杆菌为中心而寻找淀粉分解酶及蛋白分解酶的表现较高的菌株。
于筛选高产淀粉分解酶及蛋白分解酶的菌株时，在分别含有1％(w/v)可溶性淀粉(Difco，USA)或2％(w/v)脱脂油(Difco，USA)的酵母麦芽(Yeast Malt，YM)琼脂培养基(酵母萃取物(yeast extract)3.0g、麦芽萃取物(malt extract)3.0g、蛋白胨(peptone)5.0g、葡萄糖(dextrose)10.0g、琼脂(agar)20.0g)中，对基质分解而产生的透明环的尺寸进行比较而筛选。
具体而言，于将菌株分别接种至胰蛋白胨大豆肉汤(Tryptone Soya Broth，TSB)培养基(酪蛋白酶消化物(enzymatic digest ofcasein)17.0g、大豆粉酶消化物(enzymatic digest of soybean meal)3.0g、NaCl 5.0g、磷酸氢二钾(dipotassiumphosphate)2.5g、葡萄糖(dextrose)2.5g、于25℃的最终pH值(final pH)：7.3±0.2)后，于37℃、200rpm的条件下培养12小时，以1.0μl为单位将培养液滴定(spotting)至含有可溶性淀粉及脱脂油的YM琼脂培养基。于将上述琼脂培养基于37℃下培养16小时后，测定形成于培养基上的透明环的直径。
其结果显示，1％(w/v)可溶性淀粉培养基的透明环直径为5.85mm，2％(w/v)脱脂油(Difco，USA)培养基的透明环直径为6.14mm，因此将淀粉分解酶活性及蛋白分解酶活性均优异的BA245菌株筛选为用以谷物发酵的菌株(图1a及图1b)。
实施例2：BA245菌株的鉴定
2-1.BA245菌株的16S rRNA基因碱基序列分析
为了鉴定于实施例1中筛选出的BA245菌株，委托韩国种菌协会附属韩国微生物保存中心进行16S RNA基因的碱基序列分析，获得对鉴定而言重要的包括50bp至900bp的碱基序列的1420bp(序列号1)的碱基序列。再者，上述碱基序列于美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information，NCBI)基因库(GenBank)中获得KR535604的寄存编号(Accession number)而登记于资料库。
2-2.通过BA245菌株的16S rRNA基因碱基序列分析进行的系统发育树分析
为了对BA245菌株进行系统分类学上的位置分析，利用登记于基因库的碱基序列数据调查芽孢杆菌属内的位于接近BA245菌株的位置的多种标准菌株的16S rRNA基因碱基序列，利用Bioedit程式(program)(Hall，1999)与Clustal X程式(program)(Thompson etal.，1997)对上述多种标准菌株的碱基序列进行比对。追踪菌株的进化过程的作业利用木村两参数模型(Kimura two-parameter model)(Kimura，1983)，通过MEGA3程式(Program)(Kumar et al.，2004)的邻近归并法(neighbor-joining)及最大简约法(maximumparsimony)等方法确定系统分类学上的位置(图2)。
2-3.根据BA245菌株的旋转酶(gyrase)A(gyrA)基因碱基序列进行的系统发育树分析
利用基于旋转酶A基因碱基序列的系统分类学分析实施BA245菌株的鉴定。
为了分析旋转酶A基因碱基序列，于制备正向引子(序列号2：5′-CAG TCA GGAAATGCG TAC GTC CTT-3′)与反向引子(序列号3：5′-CAA GGT AAT GCT CCA GGC ATT GCT-3′)后，委托Macrogen(股份有限公司)进行碱基序列分析。调查位于接近BA245菌株的位置的多种标准菌株的旋转酶A基因碱基序列，利用Bioedit程式(Hall，1999)与Clustal X程式(Thompson et al.，1997)对上述多种标准菌株的旋转酶A基因碱基序列进行比对。追踪菌株的进化过程的作业利用木村两参数模型(Kimura，1983)，通过MEGA3程式(Kumar et al.，2004)的邻近归并法及最大简约法等方法确定系统分类学上的位置(图3)。
2-4.利用API试剂盒(kit)分析BA245的生化特性
利用使用于芽孢杆菌鉴定的API 50CH(bioMerieux Co.，France)调查解淀粉芽孢杆菌BA245菌株的生化特性。API试剂盒按照制造公司的使用指南而如下所述般操作，将其结果示于以下的表1。
于将解淀粉芽孢杆菌BA245菌株接种至TSB(酪蛋白酶消化物17.0g、大豆粉酶消化物3.0g、NaCl 5.0g、磷酸氢二钾2.5g、葡萄糖2.5g、于25℃的最终pH值：7.3±0.2)液体培养基而于37℃下进行培养后，分株至菌管(Eppendorf)，之后于10,000rpm下离心分离5分钟后回收细胞而利用灭菌盐水(0.85％)清洗一次。细胞于接种至以灭菌蒸馏水悬浮而进行无菌处理的API 50CH培养基的安瓶后，进行移液而均匀地混合，之后以150μl为单位而分株至各试验片的微管。于分株结束后，将API试剂盒于37℃的培养箱中培养24小时至48小时而观察颜色的变化。
[表1]
特性 结果 特性 结果
甘油 + 柳苷 +
赤藻糖醇 - 纤维双糖 +
D-阿拉伯糖 - 麦芽糖 +
L-阿拉伯糖 + 乳糖 +
核糖 + 蜜二糖 (+)
D-木糖 + 蔗糖 +
L-木糖 - 海藻糖 +
核糖醇 - 菊糖 -
甲基-B-D-吡喃木糖苷 - 松三糖 -
半乳糖 (+) 棉子糖 +
葡萄糖 + 淀粉 +
果糖 + 肝糖 +
甘露糖 + 木糖醇 -
山梨糖 - 龙胆二糖 +
鼠李糖 - D-松二糖 (+)
半乳糖醇 - D-来苏糖 -
肌醇 + D-塔格糖 -
甘露醇 + D-海藻糖 -
山梨醇 + L-海藻糖 -
甲基-α-D-吡喃甘露糖苷 - D-阿拉伯糖醇 -
甲基-α-D-葡萄糖苷 + L-阿拉伯糖醇 -
N-乙酰葡糖胺 + 葡糖酸盐 -
苦杏仁苷 + 2-酮基-葡萄糖酸盐 -
熊果苷 + 5-酮基-葡萄糖酸盐 (+)
马栗树皮苷 +
2-5.鉴定结果
综合上述生化特性与系统分类学上的亲缘关系的分析结果，结果将筛选出的上述BA245菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)而命名为解淀粉芽孢杆菌BA245，根据布达佩斯条约，于2015年9月23日委托韩国典型培养物保藏中心(KoreanCollection for Type Cultures，KCTC)而获得寄存编号KCTC12905BP。
实施例3：利用BA245菌株的谷物发酵物的制备
利用于实施例2中筛选出的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株(以下，记载为“BA245菌株”)制备如下所述的谷物发酵物。
首先，于向谷物300g[麸壳；小麦胚芽；燕麦；玄米；藜麦；红扁豆；糯麦；小麦胚芽与麸壳混合谷物(小麦胚芽60重量％与麸壳40重量％)及全谷物混合物(小麦胚芽40重量％、麸壳30重量％、燕麦10重量％、红扁豆5重量％、玄米5重量％、糯麦5重量％与藜麦5重量％，以下，全谷物混合物记为“谷物原料”)分别为300g]添加水分后，在121℃下进行30分钟蒸煮，冷却至40℃以下。接着，将上述BA245菌株分别涂抹至TSB琼脂培养基(酪蛋白酶消化物17.0g、大豆粉酶消化物3.0g、NaCl 5.0g、磷酸氢二钾2.5g、葡萄糖2.5g、琼脂15.0g、于25℃的最终pH值：7.3±0.2)，于37℃下培养12小时而将菌株活化。将活化的菌株以约2铂金环量悬浮于0.8％NaCl杀菌溶液9ml中(于A660mn下稀释成0.2左右)，将上述悬浮液用作种菌。通过如下方式进行正式培养：于将种菌悬浮液1％接种至预先准备的40ml的TSB培养基(酪蛋白酶消化物17.0g，大豆粉酶消化物3.0g、NaCl 5.0g、磷酸氢二钾2.5g、葡萄糖2.5g、于25℃的最终pH值：7.3±0.2)后，在37℃下以180rpm进行振荡培养。
于向将水分含量调整至36％而进行蒸煮所得的谷物中加入培养液30ml(6.0×107cfu/ml)而均匀地混合后，于在37℃下24小时保持恒湿的条件下实施静置培养的固体发酵，藉此制备谷物发酵物。
再者，作为BA245菌株的对照组，使用相当于与BA245菌株同类的菌株即解淀粉芽孢杆菌BA474(以下，记载为“BA474菌株”)，利用上述BA474菌株发酵所得的谷物发酵物以全谷物混合物为原料而使用BA474菌株代替BA245菌株，除此之外，与实施例3相同地实施而制备。
实施例4；淀粉分解酶活性分析
为了对谷物发酵物的淀粉分解酶活性进行分析而进行如下实验。
于60℃的干燥机中，对分别利用实施例3的BA245菌株及BA245菌株进行发酵所得的谷物发酵物进行干燥直至水分含量成为10％以下，之后进行粉碎而用作测定淀粉分解酶活性的试料(以下，根据发酵时所利用的菌株而将各谷物发酵物记载为“BA245发酵物”及“BA474发酵物”，仅将使用全谷物混合物(小麦胚芽40重量％、麸壳30重量％、燕麦10重量％、红扁豆5重量％、玄米5重量％、糯麦5重量％及藜麦5重量％)作为原料的情形以不记载原料的“BA245发酵物”型式记载，于除此以外的将各谷物或小麦胚芽与麸壳混合谷物用作原料的情形时，在“BA245发酵物”后端的括号内记载发酵时所使用的原料)。通过“食品基准及标准”中的酶食品的α-淀粉酶试验方法而测定淀粉分解酶活性。
具体而言，于精确地称取各个试料5.0g而溶于水来调整成100ml后，进行过滤而设为试液，准备两个20ml的试管而分别用作试验用试验管及空白试验用试验管。向试验用试管中加入1％可溶性淀粉溶液5ml、麦克凡氏缓冲液(pH值为6.0)13ml与0.1％氯化钙溶液1ml，以37℃进行加温，加入试液1ml，之后于37℃下放置30分钟而用作试验用反应液。另外，与试验用反应液相同地制备于100℃下加热30分钟而失去活性的试液1ml，将其用作空白试验用反应液。将向上述试验用反应液与空白试验用反应液0.2ml加入碘试液10ml所得者用作试验用液体，以水为对照液而于液体层1cm、波长660nm下测定吸光度。此时，试验用液体的吸光度需较空白试验用液体的吸光度小0.030以上。于显色程度过大而难以进行测定的情形时，稀释试液而进行试验，应用稀释倍数。通过上述相同的碘(I2)溶液的呈色的标准曲线而算出淀粉含量，将α-淀粉酶1单位(Unit)定义为于30分钟内消化10mg的淀粉的酶量。
[表2]
试料 α-淀粉酶(U/g)
BA245发酵物 2762
BA245发酵物(小麦胚芽与麸壳的混合谷物) 2300
BA474发酵物 169
其结果，如表2所示，确认到与作为对照组的BA474发酵物相比，BA245发酵物及BA245发酵物(小麦胚芽与麸壳的混合谷物)的淀粉分解酶活性非常优异。
实施例5：蛋白分解酶活性分析
为了对BA254发酵物的蛋白分解酶活性进行比较，进行如下实验。
于如实施例3所述获得试料后，根据“食品基准及标准”中的酶食品的蛋白酶试验法而进行测定。
于精确地称取试料约5g而溶于水来调整为100ml后，进行过滤而用作试液。将0.6％酪蛋白溶液1ml加入试管，于37℃的恒温水浴中进行加温，之后向其中准确地加入试液1ml而均匀地摇晃混合，之后立即加入至37℃的恒温水浴而准确地反应10分钟，之后向其中加入0.4M三氯乙酸溶液2ml而再次于37℃下放置25分钟，之后进行过滤。将过滤液1ml准确地量取至试验管，加入0.4M碳酸钠溶液5ml及孔蛋白试液(对原液进行三倍稀释所得的液体)1ml而均匀地摇晃混合。于在37℃下放置20分钟后，将显色的液体用作试验用液体。另外，准确地量取试液1ml而加入至试管，于37℃下放置10分钟，之后加入0.4M三氯乙酸溶液2ml进行混合，加入0.6％酪蛋白溶液1ml而于37℃下放置25分钟，之后与试验用液体相同地进行操作而用作空白试验用液体。以水为对照液而于液体层1em、波长660nm下测定吸光度。此时，试验用液体的吸光度需较空白试验用液体的吸光度大0.030以上。于显色程度过大而难以进行测定的情形时，稀释试液而进行试验，应用稀释倍数。利用酪氨酸(tyrosine)制作标准曲线，以测定到的酪氨酸含量为基准而对蛋白酶活性进行比较分析，将蛋白酶1单位定义为于一分钟内生成的酪氨酸的量(以ug表示)。
[表3]
试料 蛋白酶(U/g)
BA245发酵物 3868
BA245发酵物(小麦胚芽与麸壳的混合谷物) 3481
BA474发酵物 106
其结果，如表3所示，确认到与作为对照组的BA474发酵物相比，BA245发酵物的蛋白分解酶活性非常优异。
根据上述实施例3与实施例4的结果，确认到可将BA245有效地用于制备包括发酵效价较高的谷物发酵物的酶食品。
实施例6：低分子量的蛋白质含量的分析
于实施例4中，确认到于利用BA245进行谷物发酵时，制备出蛋白分解酶活性优异的谷物发酵物，为了确认谷物内的蛋白质是否以经水解的肽形态生成或分解为低分子量的蛋白质，对BA245发酵物的各分子量范围的蛋白质含量进行分析。
准确地称取上述实施例3的试料0.1g而以5ml的8M尿素(Urea)进行萃取。于在8,000rpm下进行离心分离10分钟后，仅单独地获取上澄液，之后通过0.22μm的针筒过滤器进行过滤而用作分析试料。注入(injection)量设为25μl，向50mM的NaPO4(pH值为7.2)混合150mM的NaCl而用作移动相(mobile phase)。流速设为0.5ml/min，于214nm的紫外线(Ultraviolet，UV)波长下进行检测(detection)。
其结果，可确认到BA245发酵物的尺寸较小的蛋白质分子侧的峰值面积较谷物原料及BA474发酵物更大，从而蛋白质的密度偏重于中央带侧(图4)。于图4的层析图上，左侧带为分子量较大的蛋白质，中央带为分子量较小的蛋白质，右侧带表示溶剂。将图4的层析图数值化而进行比较的结果如下述表4。
[表4]
根据上述结果，可确认到通过利用BA245的发酵而原料(例如，谷物原料)中的分子量较大的蛋白质水解成分子量较小的蛋白质，水解程度也明显优于BA474。
实施例7：营养成分分析
于利用BA245菌株使谷物发酵时，碳水化合物含量减小、膳食纤维含量增加以及粗蛋白及必需游离氨基酸的含量增加，因此为了确认营养成分增加及营养素吸收率增加，委托韩国功能食品研究院对谷物原料、BA245发酵物、BA474发酵物及三家公司市售的将谷物发酵而成的酶食品[发酵酶的秘密，DAESANG Wellife(以下，记载为“DAESANG”)；种子发酵酶，LG生活健康(以下，记载为“LG”)；FullVita naemomae谷类酶消化物，Orga Whole Food(以下，记载为“PULMUONE”)]进行营养成分分析。
[表5]
[表6]
其结果，如表5及表6所示，确认到与原料相比，利用BA245的谷物发酵物的碳水化合物及糖含量减少、膳食纤维、粗蛋白及必需游离氨基酸增加等而营养成分得到强化，BA245谷物发酵物及BA245谷物发酵物(小麦胚芽与麸壳的混合谷物)于与BA474发酵物及其他酶食品进行比较的结果中，也确认到于营养成分方面更有优势。
实施例8：纤维蛋白分解酶(fibrinolytic enzyme)的活性分析
为了确认BA245发酵物的血栓分解活性，测定谷物原料及BA245发酵物的纤维蛋白分解酶活性。作为对照组，使用胞浆素(plasmin，1U/ml)及据称具有血栓溶解活性的清曲酱(TAEKWANG)、纳豆(PULMUONE，AZUMA及TAKANO)及市售的酶食品(DAESANG；HI-SAENG，Hi-mo(股份有限公司)自然健康事业部)。
于将试料1g混合至9ml的灭菌生理盐水后，使用搅拌机(Wiseshaker，Daihan)以4℃混合30分钟而萃取，于实施离心分离(8000×g，4℃，30分钟)后，进行过滤而将上澄液用作分析试料。
8-1.纤维蛋白平板分析(Fibrin plate assay)
于向完全溶解的2.4％纤维蛋白溶液(pH值为7.0)10ml添加1.5％琼脂糖溶液10mL而进行混合后，立即倒入至培养皿，于室温下放置2小时至3小时以使凝胶完全凝固而制备纤维蛋白平板。于按照直径为4.5mm的孔固定地对制备出的纤维蛋白平板进行冲孔后，将分析试料20μl滴加至各孔而于37℃下培养24小时。为了可清晰地观察到所生成的透明环的尺寸，将0.11M三氯乙酸倒入至纤维蛋白凝胶。
其结果，确认到BA245发酵物与胞浆素相比，表现出220％的血栓分解活性，与清曲酱相比，表现出177％的血栓分解活性，与纳豆相比，分别表现出122％(PULMUONE)、117％(TAKANO)及131％(AZUMA)的血栓分解活性，与酶食品相比，表现出119％(DAESANG)及142％(HI-SAENG)的血栓分解活性(表7及图5)。
[表7]
8-2.纤维蛋白分解活性(Fibrinolytic activity)的分析
向于实施例8中制备的试料0.1ml加入含有10mM的氯化钙的0.1M Tris-HCl缓冲液(pH值为7.8)0.3ml，于30℃的恒温水浴中加温5分钟。于向上述溶液添加1.2％纤维蛋白溶液(pH值为7.8)0.3ml而进行混合后，在30℃下反应10分钟，之后加入0.11M三氯乙酸溶液0.6ml来抑制酶反应而用作试验用液体。另外，向试料0.1ml加入0.1M Tris-HCl缓冲液(pH值为7.8)0.3ml而于30℃的恒温水浴槽中反应10分钟，之后加入0.11M三氯乙酸溶液0.6ml而混合，加入1.2％纤维蛋白溶液(pH值为7.8)0.3ml而用作空白试验用液体。试验用液体与空白试验用液体于进行离心分离(12000rpm，5分钟)后，回收上澄液而于275nm下测定吸光度来定量地对血栓分解酶活性进行比较。
其结果，确认到以BA245发酵的谷物发酵物内的纤维蛋白分解活性最优异，同时也明显高于纳豆(表8及图6)。
[表8]
8-3.BA245菌株的纤维蛋白分解活性分析
为了分析菌株本身的纤维蛋白分解活性，对BA245菌株与自市售的纳豆中分离的3种菌株进行比较。
其结果，如表9所示，确认到BA245菌株的血栓分解酶活性明显优于自市售的纳豆中分离的菌株。
[表9]
试料 纤维蛋白分解活性(FU/g)
BA245菌株 1617
纳豆(PULMUONE)分离菌株 1209
纳豆(TAKANO)分离菌株 1072
纳豆(AZUMA)分离菌株 1098
实施例9：通过供给BA245发酵物而改善固体成分的胃排空能力(gastricemptying)的评估
对各实验组分配10只8周龄的雄性史-道二氏(Sprague-dawley，SD)大鼠，对所有大鼠进行一周的实验膳食及环境适应。于适应后，为了测定胃排空能力，使大鼠节食20小时，但可自由饮水。
实验例1于供给相同的固体成分的条件下，对相同的单位时间的胃排空能力进行评估。具体而言，于实验当天，给SD大鼠口服硫酸钡50％、琼脂糖0.6％、饲料(AIN-93，Dyets)悬浮于水所得的实验膳食3g。实验组共为3组，向对照组供给饲料15％，向实验组供给调配谷物原料5％+饲料10％、BA245发酵物5％+饲料10％所得的膳食，使所供给的固体成分的量相同。于投用40分钟后，摘取胃而测定残留于胃内的膳食的重量来评估胃排空能力(％)。
实验例2是于实际人体中反映服用法的模型，供给相同量的饲料，于还供给BA245发酵物时，对胃排空能力的改善进行清谷，此时人体等效投用量(human equivalent dose)为大鼠基准的6倍。作为对照组，供给饲料15％，实验组分别还供给谷物原料600mg/kg、BA245发酵物600mg/kg。与实验例1相同，投用40分钟后摘取胃而测定残留于胃内的膳食的重量来评估胃排空能力(％)。
其结果，于实验例1中，确认到与单独供给饲料及谷物原料的组相比，于投用BA245发酵物时，胃排空能力显著增加(p＜0.05)(表10)，于实验例2中，确认到与供给谷物原料的组相比，胃排空能力也显著增加(p＜0.05)(表11)。
于临床上，已知胃排空能力为因功能性消化不良而下降的因素，可评估为于连同膳食一并摄取BA245发酵物，可改善消化能力。
[表10]
实验组 胃排空能力(％，±SD)
饲料(15％) 23±20
饲料(10％)+谷物原料(5％) 9±11
饲料(10％)+BA245发酵物(5％) 37±21
[表11]
实验组 胃排空能力(％，±SD)
饲料 23±20
饲料+谷物原料(600mg/kg) 9±11
饲料+BA245发酵物(600mg/kg) 37±21
实施例10：于急性肠炎动物模型中，评估通过摄取BA245发酵物实现的肠通透性的改善
对大鼠投用酒精而制作急性肠炎动物模型，喂食摄取浓度不同的BA245发酵物而测定与摄取量对应的肠功能恢复程度。
使用的动物为8周龄的200g至250g重量的SD大鼠，于聚碳酸酯笼中，以每12小时改变一次的明暗周期进行饲养。于适应1周后，进行自由膳食而根据下述实验设计进行处理。
组1：对照组
组2：乙醇
组3：乙醇+BA245发酵物50mg/kg/day
组4：乙醇+BA245发酵物100mg/kg/day
组5：乙醇+BA245发酵物150mg/kg/day
组6：乙醇+谷物原料100mg/kg/day
组2至组6口服酒精4周而诱发过敏性大肠综合症，使肠功能下降。初期投用量为2g/kg/day。此时，口服的酒精量是每周增加1g/kg/day，于最后的第4周，口服5g/kg/day。于经过4周后，测定肠通透性。
具体而言，通过如下方式测定肠通透性：将于使大鼠牺牲后分离的回肠浸泡至Krebs-Henseleit重碳酸盐缓冲液(KHBB：bicarbonate buffer)，之后缝合肠的一侧末端，向内腔(lumen)注入100μl的荧光异硫氰酸盐(Fluorescein Isothiocyanate，FITC)-葡聚糖(dextran)。缝合肠的剩余的末端而形成8cm的肠袋(gut sac)。于利用KHBB进行清洗后，将肠袋放置至2mL的KHBB中而于37℃下培育20分钟。利用分光光度计(spectrophotometer)于530nm下测定自内腔通过培育液的FITC-葡聚糖的FD-4。以每分钟1cm的量(μg)表示FD-4的通透性。
其结果，确认到通过供给BA245发酵物而因投用酒精增加的肠通透性显著减少，特别是，于每kg投用100mg以上的组中，可确认到恢复至接近正常组(图7)。
实施例11：利用急性肠炎动物模型分析通过摄取BA245发酵物实现的肠膜强化
若因肠膜弱化而导致肠液泄漏时，会诱发浆液性炎症(Serous inflammation)，于实施例10中，为了活用所设计的动物模型定量地测定因酒精增加的肠通透性的恢复程度，对与肠通透性有关的肠细胞的紧密连接蛋白(tight junction protein)进行分析。代表性的参与肠膜的细胞结合的主要紧密连接蛋白为ZO-1、密连蛋白(claudin)、紧连蛋白(occluding)，通过定量反转录聚合酶链反应(quantitative Real Time-PolymeraseChain Reaction，qRT-PCR)分析而测定与各蛋白质对应的基因的表现程度，确认肠细胞间的结合程度而确认发酵物的摄取效应。于萃取核糖核酸(Ribonucleic Acid，RNA)时，利用三赛唑，利用分光光度计(nanodrop spectrophotometer)测定浓度。
其结果，确认到密连蛋白及紧连蛋白的表现与BA245发酵物投用及供给浓度成正比地增加，从而强化肠膜(p＜0.05)(图8a及图8b)。
实施例12：根据肠的组织学上的分析而评估通过摄取BA245发酵物实现的结构损伤缓和程度
活用于实施例10中设计的动物模型执行肠的组织学上的检查。将自各组中取样的肠组织固定至10％福马林溶液，利用乙醇进行脱水，之后固定至石蜡。向4μm厚壁(thicksection)执行苏木精-伊红(hematozylin-Eosin)染色，通过显微镜观察经染色的各个切片。
可确认到若因酒精而肠受损，则肠壁的隐窝(crypt)与绒毛(villus)结构崩解，可于BA245发酵物摄取组、特别是每kg摄取100mg以上的组中观察到恢复至接近正常组织的情况(图9)。
实施例13：BA245发酵物的抗氧化活性测定
已知抗氧化活性可控制因氧化应力诱发的各种疾病(防止脂质及氧化物堆积、酶钝化、细胞老化、动脉硬化、糖尿病、脑中风、癌症、去氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid，DNA)合成减少、成人病及老化等)。对此，对谷物原料、BA245发酵物及市售的两种酶食品(DAESANG及HI-SAENG)进行比较。
具体而言，于以1∶9的比率混合试料与70％乙醇(试料∶70％乙醇＝1∶9)后，使用搅拌机(Wiseshaker，Daihan)于30℃下混合3小时而萃取。于对上述混合物进行离心分离(8000×g，4℃，10分钟)后，单独回收上澄液，反复进行相同的过程而进行萃取，之后对最终回收的上澄液进行过滤。过滤所得的上澄液于使用冻结干燥机将溶剂完全干燥后，将干燥物用作分析试料。
将试料10mg完全溶解至70％乙醇1ml而用作试验液。在将38.5mg的2，2＇-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(2，2′-Azinobis(3-ehtylbenzothiazolin-6-sulfnicAcid)Diammonium Salt，ABTS)与6.6mg的过硫酸钾(Potassium persulfate)分别溶解混合至5ml的蒸馏水以形成ABTS溶液后，在暗室条件下反应12小时至16小时而生成自由基。此后，于734nm下实现0.7±0.02的吸光度而制备ABTS溶液。
于向10μl的试验液加入990μl的ABTS溶液而混合后，在暗室中反应10分钟，之后测定734nm下的吸光度。于将所有实验反复实施3次以上后，求出平均值与标准偏差。
其结果，确认到BA245发酵物的自由基消除能力为43.7％，明显高于谷物原料及市售的酶食品(图10)。藉此，可知利用BA245菌株进行发酵时，抗氧化活性增加，抗氧化活性也优于先前的两种酶食品。
序列表
<110> CJ第一制糖株式会社
<120> 源自传统发酵食品及具有优异酶生成能力的新颖的菌株及利用其的谷物发酵酶食品的制备方法
<130> P16-6180
<141> 2016-10-26
<150> KR 15/0148663
<151> 2015-10-26
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1420
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
agtcgagcgg acagatggga gcttgctccc tgatgttagc ggcggacggg tgagtaacac 60
gtgggtaacc tgcctgtaag actgggataa ctccgggaaa ccggggctaa taccggatgg 120
ttgtttgaac cgcatggttc agacataaaa ggtggcttcg gctaccactt acagatggac 180
ccgcggcgca ttagctagtt ggtgaggtaa cggctcacca aggcgacgat gcgtagccga 240
cctgagaggg tgatcggcca cactgggact gagacacggc ccagactcct acgggaggca 300
gcagtaggga atcttccgca atggacgaaa gtctgacgga gcaacgccgc gtgagtgatg 360
aaggttttcg gatcgtaaag ctctgttgtt agggaagaac aagtgccgtt caaatagggc 420
ggcaccttga cggtacctaa ccagaaagcc acggctaact acgtgccagc agccgcggta 480
atacgtaggt ggcaagcgtt gtccggaatt attgggcgta aagggctcgc aggcggtttc 540
ttaagtctga tgtgaaagcc cccggctcaa ccggggaggg tcattggaaa ctggggaact 600
tgagtgcaga agaggagagt ggaattccac gtgtagcggt gaaatgcgta gagatgtgga 660
ggaacaccag tggcgaaggc gactctctgg tctgtaactg acgctgagga gcgaaagcgt 720
ggggagcgaa caggattaga taccctggta gtccacgccg taaacgatga gtgctaagtg 780
ttagggggtt tccgcccctt agtgctgcag ctaacgcatt aagcactccg cctggggagt 840
acggtcgcaa gactgaaact caaaggaatt gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg 900
tggtttaatt cgaagcaacg cgaagaacct taccaggtct tgacatcctc tgacaatcct 960
agagatagga cgtccccttc gggggcagag tgacaggtgg tgcatggttg tcgtcagctc 1020
gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttgatct tagttgccag 1080
cattcagttg ggcactctaa ggtgactgcc ggtgacaaac cggaggaagg tggggatgac 1140
gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg ctacacacgt gctacaatgg acagaacaaa 1200
gggcagcgaa accgcgaggt taagccaatc ccacaaatct gttctcagtt cggatcgcag 1260
tctgcaactc gactgcgtga agctggaatc gctagtaatc gcggatcagc atgccgcggt 1320
gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacacc acgagagttt gtaacacccg 1380
aagtcggtga ggtaaccttt aggagccagc cgccgaaggt 1420
<210> 2
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cagtcaggaa atgcgtacgt cctt 24
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
caaggtaatg ctccaggcat tgct 24
PCT/RO/134表

Claims (25)

1.一种寄存编号为KCTC12905BP的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株。
2.一种谷物发酵物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)将寄存编号为KCTC12905BP的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株接种至谷物的步骤；及
(b)培养所述菌株而获得谷物发酵物的步骤。
3.如权利要求2所述的谷物发酵物的制备方法，其中所述步骤(a)的所述谷物包括选自由小麦、小麦胚芽、麸壳、白米、玄米、发芽玄米、大麦、燕麦、红米、黑糯米、糯米、米糠、大豆、药豆、黑豆、藜麦、红扁豆及薏苡所构成的族群中的一种以上的谷物。
4.如权利要求2所述的谷物发酵物的制备方法，其中所述步骤(a)的所述谷物包括小麦胚芽及麸壳。
5.如权利要求4所述的谷物发酵物的制备方法，其中相对于所述步骤(a)的所述谷物为100重量份，所述小麦胚芽及所述麸壳的含量范围为40重量份至100重量份。
6.如权利要求4所述的谷物发酵物的制备方法，其中所述步骤(a)的所述谷物还包括选自由燕麦、红扁豆、玄米、糯麦及藜麦所构成的族群中的一种以上的谷物。
7.如权利要求2所述的谷物发酵物的制备方法，其中所述步骤(a)的所述谷物为水分含量为30％(体积/重量)至70％(体积/重量)的谷物。
8.如权利要求2所述的谷物发酵物的制备方法，其于所述步骤(a)前，还包括对所述谷物进行水分处理的步骤。
9.如权利要求2所述的谷物发酵物的制备方法，其于所述步骤(a)前，还包括对所述谷物进行热处理的步骤。
10.如权利要求2所述的谷物发酵物的制备方法，其于所述步骤(a)前，还包括于对谷物进行水分处理后，进行热处理的步骤。
11.如权利要求2所述的谷物发酵物的制备方法，其中于所述步骤(b)中，所述培养为固体培养。
12.如权利要求2所述的谷物发酵物的制备方法，其中于所述步骤(B)中，在20℃至50℃的温度下实施所述培养。
13.一种谷物发酵物，其特征在于，包括寄存编号为KCTC12905BP的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株。
14.如权利要求13所述的谷物发酵物，其通过如权利要求2所述的方法而制备。
15.一种食品组成物，其特征在于，包括如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株或如权利要求13所述的谷物发酵物。
16.如权利要求15所述的食品组成物，其中所述食品组成物为酶食品。
17.一种血栓分解用组成物，其特征在于，包括如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株或如权利要求13所述的谷物发酵物。
18.如权利要求17所述的血栓分解用组成物，其为心肌梗塞、脉血栓症、脑中风、脑梗塞、脑血栓症或脑塞栓症的预防、改善或治疗用组成物。
19.一种消化改善用组成物，其特征在于，包括如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株或如权利要求13所述的谷物发酵物。
20.一种肠炎、肠膜弱化或肠损伤的预防、改善或治疗用组成物，其特征在于，包括如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株或如权利要求13所述的谷物发酵物。
21.一种抗氧化用组成物，其特征在于，包括如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌BA245菌株或如权利要求13所述的谷物发酵物。
22.一种预防、改善或治疗个体的心肌梗塞、脉血栓症、脑中风、脑梗塞、脑血栓症或脑塞栓症的方法，其包括将如权利要求13所述的谷物发酵物投用至有需要的个体的步骤。
23.一种改善个体的消化功能的方法，其包括将如权利要求13所述的谷物发酵物投用至有需要的个体的步骤。
24.一种预防、改善或治疗肠炎、肠膜弱化或肠损伤的方法，其包括：将如权利要求13所述的谷物发酵物投用至有需要的个体的步骤。
25.一种于个体中减少活性氧的方法，其包括：将如权利要求13所述的谷物发酵物投用至有需要的个体的步骤。
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