KR102159380B1 - 항산화 활성과 프로바이오틱스 특성을 갖는 바실러스 아밀로리퀴페시언스 srcm101439 균주 및 이의 용도 - Google Patents

항산화 활성과 프로바이오틱스 특성을 갖는 바실러스 아밀로리퀴페시언스 srcm101439 균주 및 이의 용도 Download PDF

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정수지
류명선
정도연
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재단법인 발효미생물산업진흥원
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Abstract

본 발명은 세포외 효소 분비능, 혈전분해 활성 및 항산화 활성이 있는 바실러스 아밀로리퀴페시언스(Bacillus amyloliquefaciens) SRCM101439 균주에 관한 것으로, 본 발명의 바실러스 아밀로리퀴페시언스 SRCM101439 균주는 정장제 및 장류 제조를 위한 스타터 균주 등의 관련 산업 분야에 매우 유용하게 이용될 수 있다.

Description

항산화 활성과 프로바이오틱스 특성을 갖는 바실러스 아밀로리퀴페시언스 SRCM101439 균주 및 이의 용도{Bacillus amyloliquefaciens SRCM101439 strain having antioxidant activity and probiotics property and uses thereof}
본 발명은 항산화 활성과 프로바이오틱스 특성을 갖는 바실러스 아밀로리퀴페시언스 SRCM101439 균주 및 이의 용도에 관한 것이다.
프로바이오틱스란 체내에 들어가서 건강에 좋은 효과를 주는 살아있는 균을 말한다. 지금까지 알려져 있는 대부분의 프로바이오틱스는 우리가 흔히 유산균이라고 알고 있는 종류가 거의 대부분이다. 프로바이오틱스로 인정받기 위해서는 위산 및 담즙산에서 죽지 않고 소장까지 도달하여 장에서 증식하고 정착하여야 하며 장관 내에서 유익한 효과를 나타내어야 하고 독성이 없으며 병원성이 없어야 한다. 최근 과민성 대장 증후군이나 항생제로 인한 설사, 염증성 장질환, 변비 등과 같은 대장 질환의 영역에서 점차 프로바이오틱스의 사용을 시도해보는 추세이다. 과민성 대장 증후군이나 항생제로 인한 설사의 일부에서 장내세균총의 조성에 변화를 일으키는 항생제 사용이나 감염성 장염을 앓은 과거력이 관련되어 있다. 따라서 이러한 경우에 프로바이오틱스를 이용하여 장내세균총을 정상적으로 회복시키고자 하는 시도를 하고 있다. 대표적인 프로바이오틱스로서 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.) 유산균이 있다. 락토바실러스 속 미생물은 동형 또는 이형발효를 하는 젖산 간균으로서 사람을 포함한 동물의 장관 및 유제품이나 채소의 발효과정에서 흔히 볼 수 있다. 락토바실러스 속 미생물은 장내 pH를 산성으로 유지시켜 대장균(E. coli)이나 클로스트리디움(Clostridium)과 같은 유해균의 번식을 억제하고 설사와 변비를 개선할 뿐만 아니라 비타민 합성, 항암 작용, 혈청 콜레스테롤 저하 등의 역할을 하는 것으로 알려져 있다.
프로바이오틱스로서 필요한 특성은 안전성, 기능적 측면(생존성, 정착성, 서식성, 항미생물제 생성능, 면역 촉진능, 항유전독성 활성, 병원성 세균의 억제능), 기술적 측면(관능적 특성, 안정성, 박테리오파지 저항성, 제조과정 중의 생존성) 및 GRAS(Generally Recognized As Safe) 미생물이다. 프로바이오틱스는 항생제와는 반대되는 특성을 가지고 있는데, 항생제가 미생물이 생산하는 대사 산물로서 소량으로 다른 미생물의 발육을 억제하거나 사멸시키는 물질이라면 프로바이오틱스는 균들의 공생, 상생의 능력을 이용하여 면역기능을 증진시키고 유해 미생물의 성장을 저해하는 등의 효과를 나타낸다. 이러한 면역 증진 기능을 지닌 기능성 물질 및 프로바이오틱스는 현재 오남용으로 사회적 문제가 되고 있는 항생제의 대체 물질로서 이용이 가능하다.
한편, 한국등록특허 제1219572에는 '효소 활성 및 항균 활성을 갖는 저영양 바실러스 아밀로리큐파시엔스 Ｂ4-4 균주'에 대해 개시하고 있고, 한국공개특허 제2019-0052438호에는 '바실러스 세레우스에 대한 항균 활성 및 바이오제닉 아민 생성 저해 활성을 가지는 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 NY12-2 균주 및 이를 포함한 조성물'에 대해 개시하고 있다. 하지만, 본 발명의 '항산화 활성과 프로바이오틱스 특성을 갖는 바실러스 아밀로리퀴페시언스 SRCM101439 균주 및 이의 용도'에 대해 아직까지 개시된 바가 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명에서는 3종의 세포외 효소 분비능, 혈전분해 활성 및 항산화 활성이 있고, hblC , nheA , entFM , cytK , ces 및 bceT인 독소 유전자를 보유하지 않는 바실러스 아밀로리퀴페시언스(Bacillus amyloliquefaciens) SRCM101439 균주(KCCM12267P)를 분리하였다. 본 발명의 바실러스 아밀로리퀴페시언스 SRCM101439 균주는 상기와 같은 프로바이오틱스 특징을 가지므로, 정장제로 유용하게 사용될 수 있으며, 또한 품질 좋은 장류 제조를 위한 스타터 균주로도 사용이 가능함을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 세포외 효소 분비능, 혈전분해 활성 및 항산화 활성이 있는, 기탁번호가 KCCM12267P인 바실러스 아밀로리퀴페시언스(Bacillus amyloliquefaciens) SRCM101439 균주를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 포함하는 프로바이오틱스 제제를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 함유하는 장류 제조용 스타터(starter) 조성물을 제공한다.
본 발명의 바실러스 아밀로리퀴페시언스(Bacillus amyloliquefaciens) SRCM101439 균주(KCCM12267P)는 셀룰라제, 아밀라제 및 β-글루코시다아제(β-glucosidase)인 세포외 효소 분비능, 혈전분해 활성 및 항산화 활성이 있으므로, 정장제 및 장류 제조를 위한 스타터 균주 등의 관련 산업 분야에 매우 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명에서 분리한 바실러스 아밀로리퀴페시언스(Bacillus amyloliquefaciens) SRCM101439 균주의 16S rRNA의 염기서열을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명에서 분리한 바실러스 아밀로리퀴페시언스 SRCM101439 균주의 계통도를 나타낸 것이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 세포외 효소 분비능, 혈전분해 활성 및 항산화 활성이 있는, 기탁번호가 KCCM12267P인 바실러스 아밀로리퀴페시언스(Bacillus amyloliquefaciens) SRCM101439 균주를 제공한다.
본 발명에서는 전통장류로부터 균주를 분리하였고, 그 중 세포외 효소 분비능, 혈전분해 활성 및 항산화 활성이 있는 바실러스 아밀로리퀴페시언스(Bacillus amyloliquefaciens) 균주를 확인하였으며, 이를 바실러스 아밀로리퀴페시언스(Bacillus amyloliquefaciens) SRCM101439 균주로 동정하여 한국미생물보존센터(KCCM)에 2018년 05월 28일에 기탁하였다(기탁번호: KCCM12267P).
본 발명의 바실러스 아밀로리퀴페시언스 SRCM101439 균주(KCCM12267P)에 있어서, 상기 분비 가능한 효소는 셀룰라제(cellulase), 아밀라제(amylase) 및 β-글루코시다아제(β-glucosidase)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 포함하는 프로바이오틱스 제제를 제공한다.
상기 프로바이오틱스 제제는 당업계에 공지된 방법에 따라 다양한 제형과 방법으로 제조 및 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 바실러스 아밀로리퀴페시언스 SRCM101439 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물은 약제학적 분야에서 통상적으로 사용되는 담체와 혼합하여 산제(powder), 액제(liquids and solutions), 정제(tablet), 캡슐(capsule), 시럽(syrup), 현탁제(suspension) 또는 과립제(granule) 등의 형태로 제조되어 투여될 수 있다. 상기 담체로는 예를 들어, 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소 및 향료 등일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 투여 용량은 체내에서의 활성성분의 흡수도, 불활성률, 배설속도, 피투여자의 연령, 성별, 축종, 상태 및 질병의 중증 정도 등에 따라 적절히 선택할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 프로바이오틱스 제제를 포함하는 식품을 제공한다.
본 발명의 상기 프로바이오틱스 제제는 세포외 효소 분비능, 혈전분해 활성 및 항산화 활성이 있는 바실러스 아밀로리퀴페시언스 SRCM101439 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 포함한다.
본 발명의 상기 프로바이오틱스를 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 프로바이오틱스를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 프로바이오틱스는 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 혼합양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 혼합양은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 프로바이오틱스를 첨가할 수 있는 식품의 예로는 빵, 캔디류, 스낵류, 과자류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함한다.
또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 함유하는 장류 제조용 스타터(starter) 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 장류 제조용 스타터(starter)란 장류 제조를 위해 발효에 관여하는 미생물을 포함하는 제제 또는 조성물을 의미한다. 장류 제조 시에 첨가함으로써 발효된 장류에서 생장할 수 있는 미생물 또는 우점종으로 생장할 수 있는 미생물을 제공하기 위하여 사용된다. 상기 장류 발효용 스타터를 사용하여 장류를 제조하는 경우, 상기 장류 발효용 스타터에 포함된 미생물에 의하여, 장류의 품질을 일정하게 조절하거나, 특정한 목적, 일 예로 장류에서 이취를 발생시키지 않거나, 감소시키는 목적 또는 장류에서 구수한 맛이나 단맛을 강화시키기 위한 목적을 달성할 수 있다.
본 발명의 균주를 배양하는 방법은 당업계에 통상적으로 이용되는 방법에 따라 배양할 수 있으며, 특별한 방법에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 균주를 배양하는 단계에서 얻어지는 상기 균주 또는 상기 균주의 배양물 또는 상기 균주의 배양액의 농축액을 첨가제로 사용할 경우, 상기 균주 또는 상기 균주의 배양물 또는 상기 균주의 배양액의 농축액을 그대로 첨가하거나 다른 첨가제를 함께 사용할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 균주 또는 이의 배양액을 스타터(starter) 균주로 이용하여 장류를 제조하는 방법을 제공한다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
재료 및 방법
균주 분리 및 배양 조건
전라북도 순창군 11개 면에서 전통적인 방법으로 제조한 메주 시료 약 180 여 종을 유산균 분리를 위한 근원 시료로 사용하였다. 각각의 시료 1g을 9mL의 멸균생리식염수(0.85% NaCl)에 넣어 십진법으로 희석한 후 MRS 아가 배지(DifcoTM, MI, USA)에 100㎕를 도말하여 37℃에서 48시간 동안 배양하였다. 각각의 배양한 미생물을 집락형태가 상이한 균주를 선별하여 순수 분리하였으며, 선별 균주는 10% 스킴 밀크 보존액에 재부유하고 -80℃에서 보관하여 사용하였다.
선별 균주의 동정
선별 균주의 동정을 위해 균체는 한천 고체배지로부터 회수하였으며, 이들의 DNA는 Qiuagen QIAamp DNA mini kit를 사용하여 추출하였다. 16S rRNA 유전자는 두 개의 알려진 유니버설 프라이머를 사용하여 증폭하였다. 두 유니버설 프라이머의 염기서열은 다음과 같다. 먼저, 정방향 프라이머는 27F 프라이머 5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'(서열번호 2), 역방향 프라이머는 1492R 프라이머 5'-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3'(서열번호 3)이다. PCR 반응의 조건은 다음과 같다. DNA의 변성(denaturation) 95℃ 1분, 프라이머의 결합(annealing) 60℃ 1분, DNA 나선의 합성 72℃에서 1분 또는 2분의 과정을 35회 반복하는 조건을 사용하였으며, 반응이 끝난 PCR 산물은 1% 아가로스 겔(5㎕, X-gal 30mg/mL)에서 전기영동 한 후 밴드를 확인한 후 증폭이 확인된 PCR 산물은 코스모진텍(주)에 의뢰하여 16S rRNA 유전자의 서열분석을 실시하였다.
세포외 효소의 활성측정
선별 균주가 균체 외로 방출하는 세포외 효소들 중 단백질, 섬유소 및 전분 분해효소의 활성을 측정하기 위하여 각 효소와 특이적으로 반응할 기질 성분이 포함된 고체 평판배지를 각각 제조하였다. 단백질 분해효소(protease)의 활성은 Vermelho 등의 방법에 따라 2% 스킴 밀크에 1.5% 아가를 첨가하여 스킴 밀크 아가 배지를 제조하였으며, 섬유소 분해효소(cellulase)의 활성은 Teather와 Wood의 방법에 따라 1% CMC(carboxylmethyl cellulose)에 1.5% 아가를 첨가하여 CMC 아가 배지를 제조하였다. 또한, 전분 분해효소(amylase)의 활성을 확인하기 위하여 1% 가용성 전분과 1.5% 아가를 첨가한 전분 아가 배지를 제조하였고, 웰 확산(well diffusion) 방법을 이용하여 효소활성을 측정하기 위하여 각각의 배지에 8mm의 구멍을 뚫었다. 선별 균주 배양액은 13,000rpm로 10분간 원심 분리하여 상등액을 취하고, 0.45㎛ 멤브레인 필터로 제균한 뒤 100㎕씩 각각의 세포외 효소 활성 측정 배지의 구멍에 분주하여 25℃에서 24시간 동안 반응시킨 후 웰 주위로 생기는 환의 크기를 측정하였다. 셀룰라제 활성의 경우에 0.1% 콩고 레드 시약(Sigma-aldrich, MO, USA)으로 염색하고, 1M NaCl로 세척한 뒤 생기는 환의 크기를 관찰하였으며, 아밀라제 활성의 경우에는 반응 후 루골 용액(Lugol's solution)으로 염색한 뒤 생기는 환의 크기를 측정하였다.
혈전분해효소 활성 측정
식품의약품안전처 독성연구소 혈전용해제의 효능검색 방법(Fibrin plate 방법, Astrup and Mullertz, 1952)을 변형하여 혈전분해 활성분석에 사용하였다. 100 unit/㎖ 트롬빈 용액을 90mm 페트리 디쉬에 200㎕ 분주하고 0.5% 피브리노겐 용액(in PBS buffer, pH7.4) 10㎖과 1.0% 아가로스 용액 10㎖을 순서대로 분주하고 잘 혼합하여 평판 피브린 플레이트를 제조하였다. 선별된 균주는 LB 액체배지에서 37℃, 24시간 동안 진탕 배양하여 15,000×g로 10분간 원심분리 후 상등액을 취하고 0.45㎛ 멤브레인 필터로 제균한 뒤 피브린 플레이트에 6mm hole에 각각 분주하였다. 37℃에서 20시간 반응 후 생긴 투명한 환의 지름을 측정하여 혈전분해 활성을 확인하였다.
선별 균주의 바실러스 세레우스( Bacillus cereus ) 독소 유전자 분석을 통한 안전성 분석
선별 균주의 식품 내 안전성 여부를 확인하기 위해, 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)가 생성하는 6개의 설사형 독소 및 구토형 독소 유전자를 보유하고 있는 지를 확인하기 위해 PCR 방법을 이용하여 동정하였다. PCR(Veriti 96-well Thermal Cycler, Life technologies)은 코젠 바이오텍의 PowerChekTM 바실러스 세레우스 Toxin 6-plex Detection Kit를 사용하여 조사하였으며, 6개의 독소 유전자(hblC, nheA , entFM , cytK , ces 및 bceT)를 대상으로 본 발명의 선별 균주의 보유 여부를 조사하였다.
먼저, PCR 반응을 위한 혼합물은 키트 매뉴얼에 따라 실시하였으며, PCR 반응 조건은 95℃에서 10분 1회 초기변성 후, DNA 증폭을 위해 95℃ 30초간 변성, 60℃에서 30초간 결합, 72℃에서 30초간 증폭 과정을 35회 실시하였고, 마지막으로 72℃에서 10분간 증폭을 1회 실시하였다. PCR 산물은 0.5% TAE 버퍼에 0.5㎍/mL SG(SYBR green)가 포함된 1.0% 아가로스 겔로 전기영동 한 후 UV 트랜스일루미네이터(Gel documentation, Bio-Rad)를 이용하여 밴드를 확인하여 독소 유전자의 보유 여부를 확인하였다.
항산화 활성 분석
항산화 활성은 DPPH 자유 라디칼 소거능으로 확인하였다. 100μM의 DPPH(2,2diphenyl1picrylhydrazyl, Sigma-aldrich) 에탄올 용액 1mL에 200㎕의 배양 상등액을 가하여 실온에서 30분간 반응시킨 후 UV/VIS 분광광도계(SPECORD200,Analytic jena, Jena, Germany)로 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조구로는 MRS 배지를 사용하였으며, 하기 식을 활용하여 DPPH 자유 라디칼 소거능을 산출하였다.
DPPH 자유 라디칼 소거능(%)=[1-(A/B)×100]
A : Absorbance of DPPH solution with sample at 517nm
B : Absorbance of DPPH solution without sample at 517nm
β-글루코시다아제(β-glucosidase) 활성 분석
β-글루코시다아제 활성을 측정하기 위해 LB 액체 배지에 에스쿨린 철 아가(Esculin Iron agar)를 혼합하여 LB-EI배지를 제조하였다. 선별 균주를 LB-EI 배지에 접종하여 30℃에서 24시간 배양한 후 콜로니 주변의 색의 변화로 β-글루코시다아제 활성을 확인하였다.
실시예 1. SRCM101439의 동정
선별된 SRCM101439 균주의 동정을 위해 16S rRNA 유전자 염기서열(서열번호 1, 도 1)을 분석하였으며, 결과를 기반으로 BLAST(https://blastncbinlmnihgov/) 검색 결과 SRCM101439 균주는 바실러스 아밀로리퀴페시언스(Bacillus amyloliquefaciens)로 판명되었으며, 염기서열을 이용하여 Eztaxon serve에 서 표준 균주와 상동성을 분석한 결과 SRCM101439 균주는 바실러스 아밀로리퀴페시언스 15535와 유사성이 높게 나타났으며, 16S rRNA 염기서열을 토대로 하여 계통수(phylogenetic tree)를 작성하였다. 최종적으로 바실러스 아밀로리퀴페시언스 SRCM101439로 명명하였으며, 2018년 05월 28일자로 한국미생물보존센터(KCCM, Korean Culture Center of Microorganisms)에 기탁하여 KCCM12267P를 부여받았다.
실시예 2. 세포외 효소의 활성 측정
미생물이 생성하는 다양한 효소들은 발효과정을 통해 콩이 가지는 단백질, 지질, 이소플라본 등을 아미노산, 지방산, 이소플라본 아글리콘 등으로 분해하여 발효식품의 풍미를 향상시키고 기능성을 가지는 2차 대사산물을 생성한다고 알려져 있다. 대표적인 세포 외 분비 효소로 당분의 감미성분 등에 관여하는 아밀라아제와 대두 단백질을 가수분해하여 구수한 맛 성분인 아미노산, 폴리펩티드 등을 생성하는 프로테아제, 식물세포벽의 주 구성 성분인 셀룰로오스를 분해하여 장내 이용성을 향상시키는 셀룰라제의 활성을 선별한 균주를 대상으로 확인한 결과, 하기 표 1에 개시한 바와 같이, SRCM101439 균주는 전분 및 섬유소 분해효소인 셀룰라아제 및 아밀라아제의 활성이 우수하였으며, 특히 셀룰라제의 활성이 매우 높은 균주로 나타났다.
세포외 효소 활성 검정
균주명 동정 효소화성(diameter, mm)
프로테아제 셀룰라제 아밀라제
SRCM101439 B. amyloliquefaciens - 2.1 1.1
SRCM101352 B. amyloliquefaciens - 1.9 1.1
SRCM101374 B. subtilis - 1.4 1.4
-; 반응 없음
실시예 3. 혈전분해효소 활성 측정
동물성 식품의 섭취량 증가로 혈전증과 같은 성인병이 증가하고 있다. 이러한 문제로 인해 혈전분해 효소의 활성을 확인하기 위하여 피브린 플레이트 방법을 이용하였다. 혈전분해 활성을 비교한 결과, SRCM101439 균주는 1.93cm의 활성을 가지고 있는 것으로 확인할 수 있었다(표 2). 부작용이 많은 혈전용해제를 대신한 새로운 혈전용해제에 대한 연구가 활발하며 특히 발효식품에 대한 관심이 높아지는 추세에 SRCM101439 균주를 이용한 혈전용해제 대체에 새로운 가능성을 보여 주었다.
혈전분해 활성 분석
균주명 동정 혈전분해 활성
(halo size(cm), Mean±SD)
SRCM101439 B. amyloliquefaciens 1.93
SRCM101352 B. amyloliquefaciens 1.21
SRCM101374 B. subtilis 1.12
실시예 4. 바실러스 세레우스 독소 유전자 분석을 통한 안전성 분석
선별 균주에 대하여 식품 유해균인 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)의 설사형 독소 및 구토형 독소 유전자 보유 여부를 확인하여 균주의 안전성을 확인하였다. PCR 분석을 통하여 바실러스 세레우스 독소 유전자 6종에 대하여 확인한 결과, SRCM101439 균주는 6종의 독소를 생성하는 유전자가 없는 것으로 나타나 식중독에 대한 안전성을 지니고 있어 식품 및 식품첨가제 등과 같은 다양한 응용 분야에 이용 가능함을 확인하였다(표 3).
바실러스 세레우스 독소 유전자 보유 여부 확인
균주명 동정 독소 유전자
hblA,C,D nheA,B,C entFM cytK ces bceT
SRCM 101439 B. amyloliquefaciens ND ND ND ND ND ND
SRCM 101352 B. amyloliquefaciens ND NQ ND ND ND ND
SRCM 101374 B. subtilis ND ND ND NQ ND ND
ND; 미검출
실시예 5. 항산화 활성 측정
DPPH에 의한 자유 라디칼 소거능을 측정하여 항산화 활성을 분석하였다. 항산화 활성의 경우 체내 다양한 반응에 의해 생성되는 과산화물음이온(superoxide anion), 과산화수소(hydrogen peroxide), 히드록실기 라디칼(hydroxyl radical) 등과 같은 활성산소는 생체 효소 및 단백질의 산화적 손상을 일으키게 되어 유전자의 손상과 발암 등을 유발한다. 따라서 선별 균주를 대상으로 항산화 활성을 분석한 결과, 하기 표 4에 개시한 바와 같이 SRCM101439 균주가 29.46%로 항산화 활성이 가장 높음을 확인하였다(표 4).
항산화 활성 확인
균주명 동정 DPPH 라디칼 소거 활성(%, Mean)
SRCM101439 B. amyloliquefaciens 29.46
SRCM101352 B. amyloliquefaciens 24.59
SRCM101374 B. subtilis 26.20
실시예 6. β-글루코시다아제(β-glucosidase) 활성 측정
β-글루코시다아제는 배당체 화합물을 유리시키는 효소로 알려져 있으며, 대두를 이용한 발효 식품에는 대표적인 물질이 이소플라본이다. 전통발효식품에 주로 존재하는 대두 이소플로본 배당체인 제니스틴과 다이드진의 체내 흡수를 위해 비배당체 형태로 전환하는 생물전환 공정에 활용가능성을 갖는 β-글루코시다제 활성 확인하였다. 그 결과, SRCM101439 균주가 β-글루코시다제의 활성이 우수한 것으로 확인되었다(표 5).
β-글루코시다아제 활성 확인
균주명 동정 β-글루코시다아제 활성
SRCM101439 B. amyloliquefaciens ++
SRCM101352 B. amyloliquefaciens +
SRCM101374 B. subtilis -
++++: > 2.0, +++: 1.5~1.9, ++: 1.0~1.4, -: <1.0.
한국미생물보존센터(국외) KCCM12267P 20180528
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Claims (4)

  1. 세포외 효소 분비능, 혈전분해 활성 및 항산화 활성이 있는, 기탁번호가 KCCM12267P인 바실러스 아밀로리퀴페시언스(Bacillus amyloliquefaciens) SRCM101439 균주로서,
    상기 세포외 효소는 셀룰라제(cellulase), 아밀라제(amylase) 및 β-글루코시다아제(β-glucosidase)인 것을 특징으로 하는 균주.
  2. 삭제
  3. 제1항의 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 포함하는 프로바이오틱스 제제.
  4. 제1항의 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 함유하는 장류 제조용 스타터(starter) 조성물.
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