CN108291178A - 包含淀粉酶变体和蛋白酶变体的洗涤剂组合物 - Google Patents

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CN108291178A CN201680059702.4A CN201680059702A CN108291178A CN 108291178 A CN108291178 A CN 108291178A CN 201680059702 A CN201680059702 A CN 201680059702A CN 108291178 A CN108291178 A CN 108291178A
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Abstract

本发明涉及包含蛋白酶变体以及α‑淀粉酶或其变体的洗涤剂组合物。此外，本发明涉及使用所述洗涤剂组合物的方法。

Description

包含淀粉酶变体和蛋白酶变体的洗涤剂组合物
对序列表的引用
本申请包含计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。
背景技术
技术领域
本发明涉及包含淀粉酶变体和蛋白酶或蛋白酶变体的新颖组合物，其中各自的变体分别在包括以下的一个或多个特性方面展现出相对于亲本淀粉酶和亲本蛋白酶的修改：洗涤性能、洗涤剂稳定性和/或储存稳定性。本发明的这些组合物适合用作例如清洁或洗涤剂组合物，例如衣物洗涤剂组合物和餐具洗涤组合物(包括自动餐具洗涤和手动餐具洗涤组合物)。
相关技术描述
数十年来，酶作为洗涤配制品的部分已经用于洗涤剂工业中。从商业视角看，α-淀粉酶在此类配制品中是最相关的酶之一，但是也经常使用其他酶(包括蛋白酶、脂肪酶、另外的淀粉酶、纤维素酶、半纤维素酶或酶的混合物)。为了改进酶的成本和/或性能，对具有改变的特性的酶进行着持续搜寻，这些改变的特性例如是在低温下增加的活性、在例如螯合剂存在下增加的稳定性、在给定的pH下增加的比活性、改变的Ca2+依赖性、在其他洗涤剂成分(例如漂白剂、表面活性剂等)的存在下增加的稳定性等。例如，α-淀粉酶典型地是来自地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的α-淀粉酶，也称为Termamyl。还可以使用其他α-淀粉酶。
常用于洗涤剂中的蛋白酶来自枯草杆菌酶家族。这个家族先前已经进一步由Siezen RJ和Leunissen JAM，1997，Protein Science[蛋白质科学]，6，501-523分组为6个不同的亚组。这些亚组之一是枯草杆菌蛋白酶家族，其包括枯草杆菌酶(如BPN’)、和枯草杆菌蛋白酶309(诺维信公司(Novozymes A/S))、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg(诺维信公司(Novozymes A/S))。另一种蛋白酶，TY145，其也是来自芽孢杆菌属(Bacillus)物种TY145(NCIMB 40339)的枯草杆菌酶，其首次描述于WO 92/17577(诺维信公司(Novozymes A/S))以及后来描述于申请WO2004/067737(诺维信公司(Novozymes A/S))(披露了TY-145枯草杆菌酶的三维结构和使用蛋白质工程来改变TY-145枯草杆菌酶的功能性)。
已经对洗涤剂组合物进行了描述，但是存在对改进的洗涤剂组合物的持续需要，其中所述酶在洗涤剂组分(例如漂白系统或螯合剂)的存在下在洗涤剂组合物内保持活性和稳定性。因此，本发明的目的是提供这样的洗涤剂组合物。
发明内容
本发明涉及洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含：
(i)至少一种α-淀粉酶变体，其包含在对应于SEQ ID NO:1的位置1、54、56、72、109、113、116、134、140、159、167、169、172、173、174、181、182、183、184、189、194、195、206、255、260、262、265、284、289、304、305、347、391、395、439、469、444、473、476、或477的一个或多个位置处的修饰，其中所述α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:1具有至少75％但小于100％的序列一致性，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；以及
(ii)至少一种具有蛋白酶活性的蛋白酶，其中所述蛋白酶选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:2、3、19、20、或23的序列具有至少70％、如至少75％、如至少80％、如至少85％、如至少90％、如至少95％、如至少98％、如至少99％、如100％的序列一致性的蛋白酶；
(b)包含在对应于SEQ ID NO:2的位置171、173、175、179或180的一个或多个位置处的取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:2具有至少75％但小于100％的序列一致性；
(c)与SEQ ID NO:3中的蛋白酶相比，在对应于位置32、33、48、49、50、51、52、53、54、58、59、60、61、62、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、116、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、150、152、153、154、155、156、158、159、160、161、164、169、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、197、198、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、或216的一个或多个位置处包含取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:3具有至少75％的序列一致性；
(d)包含在对应于位置9、15、27、42、52、55、56、59、60、66、74、85、97、99、101、102、104、116、118、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、198、199、200、203、206、210、211、212、216、230、232、239、242、250、253、255、256、或269的一个或多个位置处的取代的蛋白酶变体，其中编号根据SEQ ID NO:3所述，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:3具有至少60％序列一致性，以及
(e)与SEQ ID NO:23中所示的蛋白酶相比，在对应于位置32、33、49、50、51、52、53、54、55、60、61、62、63、64、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、118、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、152、154、155、156、157、158、161、162、163、167、170、175、181、187、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、203、204、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、或222的一个或多个位置处包含取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:23具有至少75％的序列一致性。
本发明还涉及根据在此所述的实施例中的任何一个的洗涤剂组合物在衣物洗涤、手动餐具洗涤或自动餐具洗涤中的用途。
本发明还涉及进行衣物洗涤的方法，该方法包括用根据在此所述的实施例中的任何一个的洗涤剂组合物洗涤织物，优选地在40℃或更低的温度、或更优选地在30℃或更低的温度、或甚至更优选地在20℃或更低的温度下进行该洗涤。
本发明还涉及使用根据在此所述的实施例中的任何一个的洗涤剂组合物在自动餐具洗涤机中进行餐具洗涤的方法，该方法包括以下步骤：将所述洗涤剂组合物添加在所述自动餐具洗涤机中的洗涤剂组合物室内，并且在主洗涤循环期间释放所述洗涤剂组合物。
序列表综述
SEQ ID NO:1是α-淀粉酶(AAI10)的氨基酸序列
SEQ ID NO:2是蛋白酶(TY145)的氨基酸序列
SEQ ID NO:3是蛋白酶的氨基酸序列
SEQ ID NO:4是脂肪酶(TLL)的氨基酸序列
SEQ ID NO:5是α-淀粉酶(AA560)的氨基酸序列
SEQ ID NO:6是α-淀粉酶(SP722)的氨基酸序列
SEQ ID NO:7是α-淀粉酶(TS23)的氨基酸序列
SEQ ID NO:8是α-淀粉酶(噬细胞菌属物种(Cytophaga sp))的氨基酸序列
SEQ ID NO:9是α-淀粉酶(SP707)的氨基酸序列
SEQ ID NO:10是融合α-淀粉酶(LASB0000)的氨基酸序列
SEQ ID NO:11是α-淀粉酶(SP.7-7)的氨基酸序列。
SEQ ID NO:12是α-淀粉酶(Termamyl)的氨基酸序列
SEQ ID NO:13是融合α-淀粉酶的氨基酸序列
SEQ ID NO:14是融合α-淀粉酶(LABM)的氨基酸序列
SEQ ID NO:15是α-淀粉酶(KSM-AP1378)的氨基酸序列
SEQ ID NO:16是α-淀粉酶(KSM-K36/-K38)的氨基酸序列
SEQ ID NO:17是α-淀粉酶(BSG)的氨基酸序列
SEQ ID NO:18是α-淀粉酶(BAN)的氨基酸序列
SEQ ID NO:19是蛋白酶(中性蛋白酶)的氨基酸序列
SEQ ID NO:20是蛋白酶(金属蛋白酶)的氨基酸序列
SEQ ID NO:21是蛋白酶变体(蛋白酶2)的氨基酸序列
SEQ ID NO:22是蛋白酶变体(蛋白酶3)的氨基酸序列
SEQ ID NO:23是蛋白酶(BPN’)的氨基酸序列
定义
当提及在此的α-淀粉酶变体时，术语“改进的特性”是指与α-淀粉酶变体相关的特征，该α-淀粉酶变体与亲本α-淀粉酶、例如具有SEQ ID NO:1、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、或18的序列的亲本α-淀粉酶相比，或与所述变体具有相同的氨基酸序列但在一个或多个所述指定位置处不具有改变的α-淀粉酶相比有所改进。此类改进的特性包括但不限于：洗涤性能、α-淀粉酶活性、热活性曲线、热稳定性、pH活性曲线、pH稳定性、底物特异性、改进的表面特性、产物特异性、增加的稳定性、在储存条件下的改进的稳定性、以及化学稳定性。
术语“改进的α-淀粉酶活性”在此被定义为例如通过增加的多糖转化而相对于(或相比于)亲本α-淀粉酶、或相比于具有SEQ ID NO:1、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、或18的α-淀粉酶、或相对于与所述α-淀粉酶变体具有相同的氨基酸序列但在一个或多个所述指定位置处不具有改变的α-淀粉酶的活性展示出活性改变的α-淀粉酶变体的改变的α-淀粉酶活性(如上文所定义的)。
当在此提到蛋白酶变体时术语“改进的特性”意指与变体有关的特征，该变体相比于亲本、或相比于具有SEQ ID NO:2、3、19、20、或23的蛋白酶、或相比于与所述变体具有相同的氨基酸序列但在一个或多个所述指定位置不具有改变的蛋白酶有所改进。此类改进的特性包括但不限于：洗涤性能、蛋白酶活性、热活性曲线、热稳定性、pH活性曲线、pH稳定性、底物/辅因子特异性、改进的表面特性、产物特异性、增加的稳定性、在储存条件下的改进的稳定性、以及化学稳定性。
术语“改进的蛋白酶活性”在此被定义为例如通过增加的蛋白质转化而相对于(或相比于)亲本蛋白酶、或相比于具有SEQ ID NO:2、3、19、20、或23的蛋白酶、或相对于与所述蛋白酶变体具有相同的氨基酸序列但在一个或多个所述指定位置不具有改变的蛋白酶的活性展示活性改变的蛋白酶变体的改变的蛋白酶活性(如上文所定义的)。
术语“稳定性”包括储存稳定性和在使用期间(例如在洗涤过程)中的稳定性，并且反应了作为时间函数的根据本发明的蛋白酶变体的稳定性，例如当蛋白酶变体置于溶液中尤其是在洗涤剂溶液中时，保留多少活性。该稳定性受到许多因素的影响，例如pH、温度、洗涤剂组合物，例如助洗剂、表面活性剂的量等。
术语“改进的稳定性”或“增加的稳定性”在此被定义为变体(即蛋白酶变体、脂肪酶变体或α-淀粉酶变体)，其分别相对于亲本蛋白酶、亲本脂肪酶、或亲本α-淀粉酶，相对于与所述变体具有相同的氨基酸序列但在一个或多个所述指定位置处不具有改变的蛋白酶、脂肪酶、或α-淀粉酶，或相对于SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、或23(取决于变体来源于哪个亲本多肽)的稳定性，展示出在溶液中的稳定性增加。术语“改进的稳定性”和“增加的稳定性”包括“改进的化学稳定性”、“洗涤剂稳定性”或“改进的洗涤剂稳定性”。可以如实例中所述测量酶的稳定性。
术语“改进的化学稳定性”在此被定义为变体酶在一种或多种天然存在的或合成的、降低亲本酶的酶活性的化学品存在下孵育一段时间之后表现为保留酶活性。改进的化学稳定性还可使得这些变体在此类化学品存在下能更好地催化反应。在本发明的一个具体方面，改进的化学稳定性是洗涤剂尤其是液体洗涤剂的改进的稳定性。术语“洗涤剂稳定性”或“改进的洗涤剂稳定性”具体地是当将酶变体混合到液体洗涤剂配制品(尤其是根据表1所述的液体洗涤剂配制品)中，然后储存在15℃和50℃之间(例如20℃、30℃、或40℃)的温度下持续至少一周时，酶活性的改进的稳定性。
术语“改进的热活性”意指变体在特定温度下相对于亲本或相对于具有SEQ IDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、或23的多肽的温度依赖性活性曲线展示出改变的温度依赖性活性曲线。热活性值提供了变体在一定温度范围内增强水解反应的催化的效率的测量。
术语“改进的洗涤性能”在此被定义为变体相对于亲本酶、相对于SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、或23的多肽、或相对于与所述变体具有相同的氨基酸序列但在一个或多个所述指定位置处不具有改变的酶的洗涤性能例如通过增加的污渍去除展示出改进的洗涤性能。术语“洗涤性能”包括在衣物洗涤并且例如在餐具洗涤中的洗涤性能。如在此“洗涤性能”定义下所描述的，洗涤性能可以被量化。
如在此使用，术语“织物”或“衣服”是指任何纺织材料。因此，其意图是，该术语涵盖衣服，连同织物、纱线、纤维、非编织材料、天然材料、合成材料以及任何其他纺织材料。
如在此使用，术语“纺织品”是指编织织物，连同适合于转化为或用作纱线、编织、针织以及非编织织物的短纤维和长丝。该术语涵盖从天然以及合成(例如制造的)纤维制成的纱线。术语“纺织材料”是纤维、纱线中间体、纱线、织物以及制自纤维的产品(例如，衣服以及其他物品)的通用术语。
术语“非织物洗涤剂组合物”包括非纺织品表面洗涤剂组合物，包括但不限于用于硬表面清洁的组合物，例如餐具洗涤洗涤剂组合物、口腔洗涤剂组合物、义齿洗涤剂组合物以及个人清洁组合物。
术语“酶的有效量”是指在特定应用中，例如在定义的洗涤剂组合物中达到所需的酶活性所必需的酶的量。此类有效量可以由本领域的普通技术人员容易地确定并且基于多种因素，例如使用的具体酶、清洁应用、洗涤剂组合物的特定组成以及是否需要液体或干燥(例如，颗粒、棒状)组合物等。术语变体的“有效量”是指达到所希望的水平的酶活性(例如在定义的洗涤剂组合物中)的前述变体的量。在一个实例中，蛋白酶变体的有效量是α-淀粉酶，例如α-淀粉酶变体的同等有效量。在另一个实施例中，蛋白酶变体的有效量不同于α-淀粉酶(例如α-淀粉酶变体)的有效量，例如，蛋白酶变体的有效量可以多于或少于α-淀粉酶(例如α-淀粉酶变体)的有效量。
如在此使用的术语“水硬度”或“硬度”(degree of hardness)或“dH”或“°dH”是指德国硬度(German degrees of hardness)。一度被定义为10毫克氧化钙/升水。
在此使用术语“相关洗涤条件”指示在洗涤剂细分市场中实际用于家用的条件，具体是洗涤温度、时间、洗涤力学、洗涤剂浓度、洗涤剂类型以及水硬度。
术语“辅料”意指针对所希望的具体类型的洗涤剂组合物和产品形式(例如，液体、颗粒、粉末、棒状、糊状、喷雾、片剂、凝胶或泡沫组合物)选择的任何液体、固体或气体材料，这些材料也优选地与用于该组合物中的酶可相容。在一些实施例中，颗粒组合物处于“压缩”形式，而在其他实施例中，液体组合物处于“浓缩”形式。
如在此使用的术语“污渍去除酶”描述帮助从织物或硬表面去除污渍或污垢的酶。污渍去除酶对特定底物起作用，例如蛋白酶对蛋白质起作用、淀粉酶对淀粉起作用、脂肪酶和角质酶对脂质(脂肪和油)起作用、果胶酶对果胶起作用并且半纤维素酶对半纤维素起作用。污渍通常是具有不同组分的复杂混合物的沉积物，这导致材料自身局部变色或者在物体上留下粘滞表面，该粘滞表面可以吸引溶解于清洗液中的污垢从而导致玷污的区域变色。当酶对其存在于污渍中的特定底物起作用时，该酶降解或部分降解其底物，从而帮助在洗涤过程中去除与底物相关的污垢和污渍组分。例如，当蛋白酶对草地污渍起作用时，它降解草中的蛋白组分并且允许在洗涤期间释放绿色/棕色。
在此背景下，术语“减少的量”意指在其他方面相同的条件下，该组分的量小于将用于参比过程中的量。在一个优选实施例中，该量被减少例如至少5％，例如至少10％、至少15％、至少20％或如另外在此所述的。
术语“低洗涤剂浓度”体系包括以下洗涤剂，其中在洗涤水中存在少于约800ppm的洗涤剂组分。亚洲(例如，日本)洗涤剂典型地被认为是低洗涤剂浓度体系。
术语“中洗涤剂浓度”体系包括以下洗涤剂，其中在洗涤水中存在约800ppm与约2000ppm之间的洗涤剂组分。北美洲洗涤剂通常被认为是中洗涤剂浓度体系。
术语“高洗涤剂浓度”体系包括以下洗涤剂，其中在洗涤水中存在大于约2000ppm的洗涤剂组分。欧洲洗涤剂通常被认为是高洗涤剂浓度体系。
变体命名惯例
出于本发明的目的，将SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、或23中披露的多肽可以用于确定另一种多肽中对应的氨基酸残基。另一种多肽的氨基酸序列与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、或23中披露的多肽比对(这取决于它是α-淀粉酶、蛋白酶还是脂肪酶)，并且基于该比对，使用如在EMBOSS包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite[EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件]，Rice等人，2000，Trends Genet.[遗传学趋势]，16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔(Needle)程序中所实施的尼德尔曼-翁施(Needleman-Wunsch)算法(Needleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)确定对应于在SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、或23中披露的多肽中的任何氨基酸残基的氨基酸位置编号。使用的参数是缺口开放罚分10、缺口扩展罚分0.5以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。
可以通过使用若干种计算机程序，使用其相应的默认参数比对多个多肽序列来确定在另一种酶中的对应氨基酸残基的鉴定，所述计算机程序包括但不限于MUSCLE(通过对数期望值的多种序列比较；版本3.5或更新版本；Edgar，2004，Nucleic Acids Research[核酸研究]32:1792-1797)、MAFFT(版本6.857或更新版本；Katoh和Kuma，2002，Nucleic AcidsResearch[核酸研究]30:3059-3066；Katoh等人，2005，Nucleic Acids Research[核酸研究]33:511-518；Katoh和Toh，2007，Bioinformatics[生物信息学]23:372-374；Katoh等人，2009，Methods in Molecular Biology[分子生物学方法]537:39-64；Katoh和Toh，2010，Bioinformatics[生物信息学]26:1899-1900)以及采用ClustalW的EMBOSS EMMA(1.83或更新版本；Thompson等人，1994，Nucleic Acids Research[核酸研究]22:4673-4680)。
当其他酶与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、或23的多肽相背离这样使得传统的基于序列的比较方法不能检测其关系时(Lindahl和Elofsson,2000,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]295:613-615)，可以使用其他成对序列比较算法。在基于序列的搜索中较高的敏感度可使用搜索程序来获得，这些搜索程序采用多肽家族的概率表现(谱)来搜索数据库。例如，PSI-BLAST程序通过迭代数据库搜索过程来产生多个谱，并且能够检测远距离同源物(Atschul等人，1997，Nucleic Acids Res.[核酸研究]25:3389-3402)。如果多肽的家族或超家族具有在蛋白结构数据库中的一个或多个代表，甚至可以实现更高的敏感度。程序如GenTHREADER(Jones,1999,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]287:797-815；McGuffin和Jones,2003,Bioinformatics[生物信息学]19:874-881)利用来自多种来源(PSI-BLAST、二级结构预测、结构比对谱和溶剂化势)的信息作为预测查询序列的结构折叠的神经网络的输入。类似地，Gough等人,2000,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]313:903-919的方法可以用于比对未知结构的序列与存在于SCOP数据库中的超家族模型。这些比对进而可以用于产生多肽的同源性模型，并且使用出于该目的而开发的多种工具可以评估此类模型的准确度。
对于已知结构的蛋白质，若干工具和资源可用于检索并产生结构比对。例如，蛋白的SCOP超家族已经在结构上进行比对，并且那些比对是可访问的并且可下载的。可以使用多种算法如距离比对矩阵(Holm和Sander,1998,Proteins[蛋白质]33:88-96)或组合延伸(Shindyalov和Bourne,1998,Protein Engineering[蛋白质工程]11:739-747)比对两种或更多种蛋白质结构，并且这些算法的实施可以另外用于查询具有感兴趣结构的结构数据库，以便发现可能的结构同源物(例如，Holm和Park,2000,Bioinformatics[生物信息学]16:566-567)。
当必须鉴定相应的氨基酸位置时确定使用哪种比对工具是在技术人员的知识范围内。因此，考虑了在本发明的上下文中可以使用本领域技术人员发现适合的任何可用的比对工具。
在描述在此所述的酶变体中，以下所述的命名法适于方便参考。采用公认的IUPAC单字母或三字母氨基酸缩写。氨基酸位置表示为H1、G109等。
在此所述的变体与亲本多肽相比包含一个或多个修饰。因此，变体可以包含保守修饰，具体而言，此类保守修饰可以是保守取代。保守取代的实例是在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质]，学术出版社(Academic Press)，纽约中描述。常见的取代包括：Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Asn/Gln、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Glu/Gln、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu以及Asp/Gly。
可替代地，这些氨基酸改变具有这样一种性质：改变多肽的物理化学特性。例如，氨基酸改变可以改进多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变最适pH等。
取代：对于氨基酸取代，使用以下命名法：初始氨基酸、位置、取代氨基酸。因此，在位置G109处的甘氨酸被丙氨酸取代表示为“Gly109Ala”或“G109A”。多个突变由加号(“+”)或由逗号(“,”)分开，例如“Gly109Ala+Leu173Pro”或“G109A,L173P”表示在位置109和173处的甘氨酸(G)和亮氨酸(L)分别被丙氨酸(A)和脯氨酸(P)取代。如果在给定位置中可以取代多于一种氨基酸，那么将这些氨基酸以分隔号(例如/)列出或分开。因此，如果根据本发明的Ala和Pro两者都可以被取代，代替占据位置109的氨基酸，这被表示为X109A/P，其中本实例中的X表明不同酶可以是亲本，例如像具有SEQ ID NO:1的α-淀粉酶或与其具有至少75％一致性的α-淀粉酶。因此，在一些情况下，将这些变体表示为109A/P或X109A/P，表明将被取代的氨基酸取决于亲本酶而变化。
缺失：对于氨基酸缺失，使用以下命名法：初始氨基酸、位置、*。因此，将在位置181处的精氨酸的缺失表示为“Arg181*”或“R181*”。多个缺失由加号(“+”)或逗号分开，例如“Arg181*+Gly182*”或“R181*+G182*”或“R181*,G182*”。
插入：另外的氨基酸残基的插入，例如像在G#1后插入赖氨酸可以表示为：Gly#1GlyLys或G#1GK。可替代地，另外的氨基酸残基的插入，如在G109后插入赖氨酸可以表示为：*109aL。当插入多于一个氨基酸残基时，例如像在109后插入Lys和Ala，这可以表示为：Gly109GlyLysAla或G109GKA。在此类情况下，还可以通过将小写字母添加到在所插入的一个或多个氨基酸残基之前的氨基酸残基位置编号处来对所插入的一个或多个氨基酸残基进行编号，在这个实例中：*109aK*109bA。
总而言之，取代、缺失和插入在此可以被称为“修饰”。因此，应当理解的是，除非上下文另有说明在此描述的任何变体包括修饰，例如取代、缺失和/或插入。
多个修饰：包含多个修饰的变体由加号(“+”)、分隔号(“/”)或由逗号(“，”)分开，例如，“Gly109Pro+Lys391Ala”或“G109P,K391A”表示在位置109处的甘氨酸和在位置391处的赖氨酸分别如上所述被脯氨酸和丙氨酸取代。
不同修饰：在可以在一个位置上引入不同的修饰的情况下，这些不同的修饰由分隔号(“/”)或由逗号(“，”)分开，例如“Gly109Pro,Lys”或“G109P,K”表示在位置109处的甘氨酸被脯氨酸或赖氨酸取代。因此，“Gly109Pro,Lys+Lys391Ala”表示以下变体：“Gly109Pro+Lys391Ala”、“Gly109Lys+Lys391Ala”或“G109P,K+K391A”。
技术人员会知道，当比对时，任何位置处的原始氨基酸都可以因亲本α-淀粉酶不同而有所不同。因此，应该理解，技术人员能够将任何α-淀粉酶序列与本发明的编号序列(即SEQ ID NO:1)进行比对。然而，不限制本发明的情况下，原始氨基酸被指定为覆盖所有亲本多肽的“X”。因此，应该理解，“X”被列为本发明中氨基酸位置的前缀。其不以任何限制的方式来理解。
具体实施方式
在一个方面，本发明涉及洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含：
(i)至少一种α-淀粉酶变体，其包含在对应于SEQ ID NO:1的位置1、54、56、72、109、113、116、134、140、159、167、169、172、173、174、181、182、183、184、189、194、195、206、255、260、262、265、284、289、304、305、347、391、395、439、469、444、473、476、或477的一个或多个位置处的修饰，其中所述α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:1具有至少75％但小于100％的序列一致性，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；以及
(ii)至少一种具有蛋白酶活性的蛋白酶，其中所述蛋白酶选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:2、3、19、20、或23的序列具有至少70％、如至少75％、如至少80％、如至少85％、如至少90％、如至少95％、如至少98％、如至少99％、如100％的序列一致性的蛋白酶；
(b)包含在对应于SEQ ID NO:2的位置171、173、175、179或180的一个或多个位置处的取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:2具有至少75％但小于100％的序列一致性；
(c)与SEQ ID NO:3中的蛋白酶相比，在对应于位置32、33、48、49、50、51、52、53、54、58、59、60、61、62、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、116、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、150、152、153、154、155、156、158、159、160、161、164、169、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、197、198、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、和216的一个或多个位置处包含取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:3具有至少75％的序列一致性；
(d)包含在对应于位置9、15、27、42、52、55、56、59、60、66、74、85、97、99、101、102、104、116、118、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、198、199、200、203、206、210、211、212、216、230、232、239、242、250、253、255、256、或269的一个或多个位置处的取代的蛋白酶变体，其中编号根据SEQ ID NO:3所述，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:3具有至少60％序列一致性，以及
(e)与SEQ ID NO:23中所示的蛋白酶相比在对应于位置32、33、49、50、51、52、53、54、55、60、61、62、63、64、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、118、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、152、154、155、156、157、158、161、162、163、167、170、175、181、187、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、203、204、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、或222的一个或多个位置处包含取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:23具有至少75％的序列一致性。
已经产生了在使用SEQ ID NO:1用于编号的限定位置处包含一个或多个取代的本发明的洗涤剂组合物的α-淀粉酶变体，并且在如“材料与方法”中所述的标准洗涤剂中测试了其稳定性和性能，并且诸位发明人证明了，相比于具有例如SEQ ID NO:1和14的氨基酸序列但在一个或多个所述指定位置处不具有取代的α-淀粉酶，或相比于具有SEQ ID NO:1的α-淀粉酶，在对应于SEQ ID NO:1或14的多肽中的位置1、54、56、72、109、113、116、134、140、159、167、169、172、173、174、181、182、183、184、189、194、195、206、255、260、262、265、284、289、304、305、347、391、395、439、469、444、473、476、和477中的一个位置处的一个或多个氨基酸的一个或多个取代改进了该洗涤剂稳定性和/或性能。从实例中可以看出，α-淀粉酶变体和蛋白酶变体的组合对污渍去除具有协同作用，即改进的性能。在在此所述的实例之一中，还显示α-淀粉酶变体和蛋白酶变体的组合至少具有与单独测试的变体相同的稳定性。
如在此使用的术语“洗涤剂组合物”是指适合于用作洗涤剂组合物的组合物。确定何时组合物可以被认为是洗涤剂组合物是在技术人员的知识范围内。
术语“α-淀粉酶”意指具有α-淀粉酶活性(即α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶(EC3.2.1.1)的活性)的α-淀粉酶，该α-淀粉酶构成一组催化淀粉和其他直链和支链的1,4-葡糖苷寡糖和多糖的水解的酶。出于在本发明的洗涤剂组合物中存在的α-淀粉酶的目的，可以如在下面实例1中所述确定α-淀粉酶活性。在此描述的这些α-淀粉酶具有SEQ ID NO:1的多肽的蛋白酶活性的至少20％，例如，至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％。术语“α-淀粉酶”和“淀粉酶”可以互换地使用并且构成本发明范围内的相同含义和目的。
如在此使用的，术语“α-淀粉酶变体”是指与“亲本α-淀粉酶”相比，在一个或多个(例如，若干个)位置处包括一个改变(即，取代、插入和/或缺失)的具有α-淀粉酶活性的α-淀粉酶。取代意指将占据一个位置的氨基酸用不同的氨基酸置换；缺失意指去除占据一个位置的氨基酸；并且插入意指在与占据一个位置的氨基酸相邻处添加氨基酸，例如1至10个氨基酸，优选1-3个氨基酸。氨基酸取代可以把天然氨基酸换成另一种天然存在的氨基酸，或换成非天然存在的氨基酸衍生物。这些α-淀粉酶变体具有其衍生自的成熟亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶活性的至少20％，例如，至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％。
如在此使用的术语“α-淀粉酶活性”是指α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶(E.C.3.2.1.1)的活性，该水解酶构成一组催化淀粉以及其他直链和支链1,4-糖苷寡糖-和多糖水解的酶。因此，如在此使用的术语“α-淀粉酶”是指具有α-淀粉酶活性的酶(酶类：EC3.2.1.1)，其水解大的、经α键连接的多糖(如淀粉和糖原)的α键，产生葡萄糖和麦芽糖。出于本发明的目的，根据实例中所述的程序测定α-淀粉酶活性。在一个实施例中，本发明的变体具有SEQ ID NO:1、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、或18的多肽的α-淀粉酶活性的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％。
术语“蛋白酶”在此被定义为水解肽键的酶。它包括属于EC 3.4酶组(包括其13个亚类中的每一个)的任何酶。EC编号参考来自NC-IUBMB的1992年酶命名法[EnzymeNomenclature 1992]，加利福尼亚州圣地亚哥的学术出版社(Academic Press，San Diego，California)，分别包括在Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1994，223，1-5；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1995，232，1-6；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1996，237，1-5；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1997，250，1-6；以及Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1999，264，610-650中出版的增刊1-5。术语“枯草杆菌酶”是指根据Siezen等人，Protein Engng.[蛋白质工程学]4(1991)719-737和Siezen等人，Protein Science[蛋白质科学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶或丝氨酸肽酶是特征为在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的一个亚组。另外，枯草杆菌酶(以及丝氨酸蛋白酶)的特征为除了丝氨酸以外，还具有两个活性位点氨基酸残基，即组氨酸和天冬氨酸残基。枯草杆菌酶可以被划分为6个亚类，即，枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫氨酸抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。术语“蛋白酶活性”意指蛋白质水解活性(EC 3.4)。本发明的蛋白酶是内切肽酶(EC 3.4.21)。出于本发明的目的，根据下面实例1中所描述的程序确定蛋白酶活性。在此描述的这些蛋白酶变体具有SEQ ID NO:2、3、19、20、或23的成熟多肽的蛋白酶活性的至少20％，例如，至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％。
如在此使用的，术语“蛋白酶活性”是指水解肽键的活性。出于本发明的目的，根据实例中所描述的程序确定蛋白酶活性。在一个实施例中，本发明的变体具有SEQ ID NO:2、3、19、20、或23的多肽的α-淀粉酶活性的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％。
如在此使用的，术语“蛋白酶变体”是指相比于其亲本在一个或多个(或一个或若干个)位置处包括改变(即取代、插入和/或缺失(优选取代))的具有蛋白酶活性的蛋白酶，该亲本是与所述变体具有相同的氨基酸序列但在一个或多个所述指定位置处不具有改变的蛋白酶。
术语“变体”意指通过人工修饰的变体。在一个方面，该变体是至少1％纯的，例如至少5％纯的、至少10％纯的、至少20％纯的、至少40％纯的、至少60％纯的、至少80％纯的、和至少90％纯的，如通过SDS-PAGE所确定的。
术语“修饰”在本文其他地方进行描述。该术语是如在此描述的术语“取代”、“插入”和“缺失”的总体名称。
如在此使用的术语“对应于”是指用来确定一个序列中的特定氨基酸(其中参考了特定氨基酸序列)的方式。例如出于本发明的目的，当参考特定氨基酸位置时，本领域技术人员能够将另一个氨基酸序列与已经参考的所述氨基酸序列进行比对，以便在所述另一氨基酸序列中确定哪个特定氨基酸可能是感兴趣的。已经在本文其他地方描述了另一氨基酸序列与例如SEQ ID NO:1、3中所示的序列或在此列出的任何其他序列的比对。可以使用替代性的比对方法，并且这些方法为技术人员所熟知。
如在此使用的，术语“序列一致性”是指两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性，其由参数“序列一致性”所描述。出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite[EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件]，Rice等人，2000，Trends Genet.[遗传学趋势]，16:276-277)(优选3.0.0版或更新版本)的尼德尔(Needle)程序中所实施的尼德尔曼-翁施(Needleman-Wunsch)算法(Needleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列一致性的程度。所用的可选参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5，和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版)替代矩阵。Needle标注的“最长的一致性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比一致性，并且如下计算：
(一致的残基×100)/(比对长度-比对中的空位总数)
优选地，根据本发明的洗涤剂组合物构成包含至少一种α-淀粉酶变体和至少一种蛋白酶变体的组合物，该至少一种α-淀粉酶变体和该至少一种蛋白酶变体分别与亲本α-淀粉酶或蛋白酶相比具有改进的稳定性和/或洗涤性能。
因此，本发明涉及一种洗涤剂组合物，其中该至少一种α-淀粉酶包含在对应于SEQID NO:1的位置1、54、56、72、109、113、116、134、140、159、167、169、172、173、174、181、182、183、184、189、194、195、206、255、260、262、265、284、289、304、305、347、391、395、439、469、444、473、476、或477的位置处的一个或多个氨基酸修饰，其中该α-淀粉酶变体与SEQ IDNO:1、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、或18的亲本α-淀粉酶具有至少75％的序列一致性，例如与SEQ ID NO:1、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、或18的亲本α-淀粉酶具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、但小于100％的序列一致性，并且该至少一种蛋白酶变体包含在对应于SEQ ID NO:2的位置171、173、175、179或180的环中的一个或多个氨基酸的取代，其中该蛋白酶变体与SEQ ID NO:2的亲本蛋白酶具有至少75％的序列一致性，例如与SEQ IDNO:2的亲本蛋白酶具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、但小于100％的序列一致性，或包含在对应于SEQ ID NO:3的位置32、33、48、49、50、51、52、53、54、58、59、60、61、62、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、116、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、150、152、153、154、155、156、158、159、160、161、164、169、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、197、198、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、和216的位置处的一个或多个氨基酸的取代，其中该蛋白酶变体与SEQ IDNO:3的亲本蛋白酶具有至少75％的序列一致性，例如与SEQ ID NO:3的亲本蛋白酶具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、但小于100％的序列一致性，或包含在对应于SEQ ID NO:3的位置9、15、27、42、52、55、56、59、60、66、74、85、97、99、101、102、104、116、118、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、198、199、200、203、206、210、211、212、216、230、232、239、242、250、253、255、256、或269的一个或多个位置处的取代，其中该蛋白酶变体与SEQ IDNO:3的亲本蛋白酶具有至少60％序列一致性，例如与SEQ ID NO:3的亲本蛋白酶具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、但小于100％序列一致性，其中编号根据SEQ ID NO:3所述，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:3具有至少60％的序列一致性，或与SEQ ID NO:23中所示的蛋白酶相比在对应于位置32、33、49、50、51、52、53、54、55、60、61、62、63、64、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、118、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、152、154、155、156、157、158、161、162、163、167、170、175、181、187、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、203、204、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、或222的一个或多个位置处包含取代，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:23具有至少75％序列一致性，例如与SEQ ID NO:23的亲本蛋白酶具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、但小于100％序列一致性。
应当理解，在本发明的上下文中，“α-淀粉酶变体”或“该α-淀粉酶变体”意指“至少一种α-淀粉酶变体”，除非与上下文相矛盾，例如“该一种α-淀粉酶变体”。因此，根据本发明的洗涤剂组合物在所有实施例中将包含至少一种α-淀粉酶变体。这同样适用于蛋白酶或脂肪酶或其任何变体。在具体实施例中，该至少一种α-淀粉酶变体包含在对应于位置1、54、56、72、109、113、116、134、140、159、167、169、172、173、174、181、182、183、184、189、194、195、206、255、260、262、265、284、289、304、305、347、391、395、439、469、444、473、476、或477的二个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或十三个位置处的修饰，其中编号根据SEQ ID NO:1所述。
在一个实施例中，该至少一种α-淀粉酶变体包含选自下组的一个或多个修饰，该组由以下组成：X1*、X1A、X54S、X56T、X72R、X109A、X113Q、X116Q、X116H、X134E、X140Y、X140F、X140H、X159Y、X159F、X159H、X167Y、X167H、X167F、X169E、X172K、X172G、X172N、X173P、X174*、X174S、X181*、X182*、X183*、X184*、X184T、X189Y、X189F、X189H、X189E、X189D、X189Q、X189N、X194D、X194N、X194S、X195F、X206L、X206F、X206Y、X255A、X260G、X260P、X260A、X260G、X260P、X260A、X265G、X284G、X284H、X289H、X304K、X304R、X304Q、X304E、X305K、X305R、X305Q、X305E、X347Y、X347F、X347H、X391A、X395P、X439N、X439Q、X439T、X444Q、X469T、X469N、X473R、X476R、X476Q、X476E、X476K X477K、X477R、X477Q、和X477E，其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的位置。
在具体实施例中，该至少一种α-淀粉酶变体包含以下修饰中的二个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或十三个：X1*、X1A、X54S、X56T、X72R、X109A、X113Q、X116Q、X116H、X134E、X140Y、X140F、X140H、X159Y、X159F、X159H、X167Y、X167H、X167F、X169E、X172K、X172G、X172N、X173P、X174*、X174S、X181*、X182*、X183*、X184*、X184T、X189Y、X189F、X189H、X189E、X189D、X189Q、X189N、X194D、X194N、X194S、X195F、X206L、X206F、X206Y、X255A、X260G、X260P、X260A、X260G、X260P、X260A、X265G、X284G、X284H、X289H、X304K、X304R、X304Q、X304E、X305K、X305R、X305Q、X305E、X347Y、X347F、X347H、X391A、X395P、X439N、X439Q、X439T、X444Q、X469T、X469N、X473R、X476R、X476Q、X476E、X476K X477K、X477R、X477Q、或X477E，其中所述位置的编号根据SEQ ID NO:1所述，并且其中该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体。
在优选的实施例中，该至少一种α-淀粉酶变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置181、182、183或184的两个或更多个位置处的缺失和/或取代，其中该α-淀粉酶变体与SEQID NO:1具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
因此，在一个实施例中，该至少一种α-淀粉酶变体包含在对应于SEQ ID NO:1的181+182；181+183；181+184；182+183；182+184；或183+184的位置处的缺失。
在具体实施例中，该至少一种α-淀粉酶变体包含以下修饰中的一个或多个：X1*、X1A、X54S、X56T、X72R、X109A、X113Q、X116Q、X116H、X134E、X140Y、X140F、X140H、X159Y、X159F、X159H、X167Y、X167H、X167F、X169E、X172K、X172G、X172N、X173P、X174*、X174S、X181*、X182*、X183*、X184*、X184T、X189Y、X189F、X189H、X189E、X189D、X189Q、X189N、X194D、X194N、X194S、X195F、X206L、X206F、X206Y、X255A、X260G、X260P、X260A、X260G、X260P、X260A、X265G、X284G、X284H、X289H、X304K、X304R、X304Q、X304E、X305K、X305R、X305Q、X305E、X347Y、X347F、X347H、X391A、X395P、X439N、X439Q、X439T、X444Q、X469T、X469N、X473R、X476R、X476Q、X476E、X476K X477K、X477R、X477Q、或X477E，和以下成对缺失中的一个：X181*+X182*、X181*+X183*、X181*+X184*、X182*+X183*、X182*+X184*、或X183*+X184*；其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1或14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体。
在一个实施例中，(i)中的α-淀粉酶变体选自由以下组成的组：
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K；
H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K；
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K；
H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K；
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K；
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K；
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K；
H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K；
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K；和
H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中所述α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:1、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18、优选SEQ ID NO:1或14共享至少80％、如至少85％、如至少90％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、但小于100％序列一致性，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性。
在一个实施例中，(i)中的α-淀粉酶变体是SEQ ID NO:1或SWQ ID NO:14的变体，该变体包含以下修饰：
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K；
H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K；
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K；
H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K；
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K；
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K；
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K；
H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K；
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K；和
H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中所述α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:14的多肽共享至少80％、如至少85％、如至少90％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、但小于100％序列一致性，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性。
在具体实施例中，该至少一种α-淀粉酶变体包含修饰H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体。
在具体实施例中，该至少一种α-淀粉酶变体包含修饰H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体。
在具体实施例中，该至少一种α-淀粉酶变体包含修饰H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，其中该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体。
在具体实施例中，该至少一种α-淀粉酶变体包含修饰H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体。
在具体实施例中，该至少一种α-淀粉酶变体包含修饰H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQID NO:1所述，所述α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体。
在具体实施例中，该至少一种α-淀粉酶变体包含修饰H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体。
在具体实施例中，该至少一种α-淀粉酶变体包含修饰H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ IDNO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体。
在具体实施例中，该至少一种α-淀粉酶变体包含修饰H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体。
在具体实施例中，该至少一种α-淀粉酶变体包含修饰H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体。
在具体实施例中，该至少一种α-淀粉酶变体包含修饰H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体。
在一个实施例中，该蛋白酶是上面所列的(a)中的蛋白酶。因此，在一个实施例中，该蛋白酶是与SEQ ID NO:3、4、19、20、或23的序列具有至少70％、如至少75％、如至少80％、如至少85％、如至少90％、如至少95％、如至少98％、如至少99％、如100％的序列一致性的蛋白酶。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:19具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:19具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:19具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ IDNO:19具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ IDNO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:19具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，其中该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:19具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K，其中编号根据SEQID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:19具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:19具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:19具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K(根据SEQ ID NO:1进行编号)，其中该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:19具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:20具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:20具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:20具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ IDNO:20具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ IDNO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:20具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:20具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K，其中编号根据SEQID NO:1所述，其中该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:20具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:20具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:20具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:20具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ IDNO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ IDNO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K，其中编号根据SEQID NO:1所述，其中该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶，该蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在一个具体实施例中，该洗涤剂组合物包含至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体是在对应于SEQ ID NO:2的位置171、173、175、179或180的环中包含一个或多个氨基酸的取代的TY-145(SEQ ID NO:2)变体。在另一个实施例中，根据本发明的洗涤剂组合物的至少一种蛋白酶变体包含在对应于SEQ ID NO:2的位置171、173、175、179或180的二个、三个、四个或五个位置处的取代。一个实施例涉及一种洗涤剂组合物，其中该至少一种蛋白酶变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置171、173、175、179或180的环中的一个或多个氨基酸的取代，其中该变体与SEQ ID NO:2具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％一致性、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在具体实施例中，该蛋白酶是(b)中所述变体，该变体包含在对应于位置171、173、175、179、或180的至少一个位置处的取代，并且其中对应于SEQ ID NO:2的位置171的位置处的氨基酸选自由以下组成的组：W、K、E、D、和N，即X171W、X171K、X171E、X171D和X171N；和/或对应于SEQ ID NO:2的位置173的位置处的氨基酸是P；和/或对应于SEQ ID NO:2的位置175的位置处的氨基酸选自由以下组成的组：A、V、和P，即X175A、X175V、和X175P；和/或对应于SEQ ID NO:2的位置179的位置处的氨基酸选自由以下组成的组：C、V、Q、S、T、E、H、K、M、N、Y、和A，即X179C、X179V、X179Q、X179S、X179T、X179E、X179H、X179K、X179M、X179N、X179Y、和X179A；和/或对应于SEQ ID NO:2的位置180的位置处的氨基酸是Y。
在具体实施例中，(b)中的蛋白酶变体包含选自S173P、S175P或F180Y的取代，其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的位置。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S173P、S175P、或F180Y(根据SEQ ID NO:2进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:2具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％，例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S173P、S175P、或F180Y(根据SEQ ID NO:2进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:2具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％，例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S173P、S175P、或F180Y(根据SEQ ID NO:2进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:2具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％，例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，其中该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S173P、S175P、或F180Y(根据SEQ ID NO:2进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:2具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％，例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ IDNO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S173P、S175P、或F180Y(根据SEQ ID NO:2进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:2具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％，例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S173P、S175P、或F180Y(根据SEQ ID NO:2进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:2具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％，例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K，其中编号根据SEQID NO:1所述，其中该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S173P、S175P、或F180Y(根据SEQ ID NO:2进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:2具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％，例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S173P、S175P、或F180Y(根据SEQ ID NO:2进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:2具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％，例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S173P、S175P、或F180Y(根据SEQ ID NO:2进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:2具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％，例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S173P、S175P、或F180Y(根据SEQ ID NO:2进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:2具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％，例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性。
在一个实施例中，该洗涤剂组合物包含至少一种蛋白酶，该蛋白酶是Savinase(SEQ ID NO:3)蛋白酶。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种SEQ ID NO:3的蛋白酶。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种SEQ ID NO:3的蛋白酶。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种SEQ ID NO:3的蛋白酶。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种SEQ ID NO:3的蛋白酶。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ IDNO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种SEQ ID NO:3的蛋白酶。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种SEQ ID NO:3的蛋白酶。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K，其中编号根据SEQID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种SEQ ID NO:3的蛋白酶。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种SEQ ID NO:3的蛋白酶。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种SEQ ID NO:3的蛋白酶。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种SEQ ID NO:3的蛋白酶。
在一个实施例中，该洗涤剂组合物包含至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体是Savinase(SEQ ID NO:3)变体。该Savinase变体是如下亲本蛋白酶的变体，该亲本蛋白酶与具有SEQ ID NO:3具有至少70％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％一致性、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
因此，在一个实施例中，该蛋白酶是与SEQ ID NO:3中的蛋白酶相比，在对应于位置32、33、48、49、50、51、52、53、54、58、59、60、61、62、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、116、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、150、152、153、154、155、156、158、159、160、161、164、169、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、197、198、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、和216的一个或多个位置处包含修饰的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:3具有至少75％的序列一致性。
在具体实施例中，(c)中的所述蛋白酶变体中的至少一个位置处的修饰选自由以下组成的组：9、15、27、42、52、55、56、59、60、66、74、85、97、99、101、102、104、116、118、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、198、199、200、203、206、210、211、212、216、230、232、239、242、250、253、255、256、和269，其中编号根据SEQ ID NO:3所述。
在优选的实施例中，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：X9E、X9R、X15T、X27R、X42R、X52S、X55P、X56P、X59D、X59E、X60D、X60E、X66A、X74D、X85N、X85R、X97A、X97E、X97D、X99E、X99D、X99G、X99N、X99H、X99M、X101A、X102I、X102N、X104A、X116V、X116R、X154D、X156E、X157S、X157D、X157P、X158E、X161A、X164S、X176E、X179E、X182E、X185N、X188P、X198D、X199I、X200L、X203W、X206G、X210V、X211D、X211Q、X211E、X212D、X212E、X212S、X216S、X216A、X230H、X239R、X242D、X250D、X253D、X255W、X255D、X255E、X256E、X256D、和X269H，其中编号根据SEQ ID NO:3所述。
在进一步优选的实施例中，该蛋白酶变体具有蛋白酶活性并且包含以下取代中的一个或多个：S9R、A15T、V68A、N218D、或Q245R(根据SEQ ID NO:3进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:3具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S9R、A15T、V68A、N218D、或Q245R(根据SEQ ID NO:3进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:3具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S9R、A15T、V68A、N218D、或Q245R(根据SEQ ID NO:3进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:3具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S9R、A15T、V68A、N218D、或Q245R(根据SEQ IDNO:3进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQID NO:3具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S9R、A15T、V68A、N218D、或Q245R(根据SEQ ID NO:3进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:3具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ IDNO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S9R、A15T、V68A、N218D、或Q245R(根据SEQ ID NO:3进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:3具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S9R、A15T、V68A、N218D、或Q245R(根据SEQ IDNO:3进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQID NO:3具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K，其中编号根据SEQID NO:1所述，其中该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S9R、A15T、V68A、N218D、或Q245R(根据SEQ ID NO:3进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:3具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S9R、A15T、V68A、N218D、或Q245R(根据SEQ ID NO:3进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:3具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S9R、A15T、V68A、N218D、或Q245R(根据SEQ ID NO:3进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:3具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S9R、A15T、V68A、N218D、或Q245R(根据SEQ ID NO:3进行编号)，其中该蛋白酶变体是如下亲本蛋白酶的蛋白酶变体，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:3具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在进一步优选的实施例中，该蛋白酶变体具有蛋白酶活性并且选自由以下组成的组：(a)X9R+X15T+X68A+X218D+X245R；(b)X9R+X15T+X68A+X245R；(c)X61E+X194P+X205I+X261D；(d)X61D+X205I+X245R；(e)X61E+X194P+X205I+X261D；(f)X87N+X118V+X128L+X129Q+X130A；(g)X87N+X101M+X118V+X128L+X129Q+X130A；(h)X76D+X87R+X118R+X128L+X129Q+X130A；(i)X22A+X62D+X101G+X188D+X232V+X245R；(j)X103A+X104I；(k)X22R+X101G+X232V+X245R；(l)X103A+X104I+X156D；(m)X103A+X104I+X261E；(n)X62D+X245R；(o)X101N+X128A+X217Q；(p)X101E+X217Q；(q)X101E+X217D；(r)X9E+X43R+X262E；(s)X76D+X43R+X209W；(t)X205I+X206L+X209W；(u)X185E+X188E+X205I；(v)X256D+X261W+X262E；(w)X191N+X209W；(x)X261E+X262E；(y)X261E+X262D；和(z)X167A+X170S+X194P，其中所述位置对应于SEQ IDNO:23的位置，并且该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；并且至少一种蛋白酶变体具有蛋白酶活性并选自由以下组成的组：(a)X9R+X15T+X68A+X218D+X245R；(b)X9R+X15T+X68A+X245R；(c)X61E+X194P+X205I+X261D；(d)X61D+X205I+X245R；(e)X61E+X194P+X205I+X261D；(f)X87N+X118V+X128L+X129Q+X130A；(g)X87N+X101M+X118V+X128L+X129Q+X130A；(h)X76D+X87R+X118R+X128L+X129Q+X130A；(i)X22A+X62D+X101G+X188D+X232V+X245R；(j)X103A+X104I；(k)X22R+X101G+X232V+X245R；(l)X103A+X104I+X156D；(m)X103A+X104I+X261E；(n)X62D+X245R；(o)X101N+X128A+X217Q；(p)X101E+X217Q；(q)X101E+X217D；(r)X9E+X43R+X262E；(s)X76D+X43R+X209W；(t)X205I+X206L+X209W；(u)X185E+X188E+X205I；(v)X256D+X261W+X262E；(w)X191N+X209W；(x)X261E+X262E；(y)X261E+X262D；和(z)X167A+X170S+X194P，其中所述位置对应于SEQ IDNO:23的位置，并且该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；以及至少一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：S9R、A15T、V68A、N218D、或Q245R(根据SEQ ID NO:3进行编号)，其中该蛋白酶变体具有蛋白酶活性并且选自由以下组成的组：(a)X9R+X15T+X68A+X218D+X245R；(b)X9R+X15T+X68A+X245R；(c)X61E+X194P+X205I+X261D；(d)X61D+X205I+X245R；(e)X61E+X194P+X205I+X261D；(f)X87N+X118V+X128L+X129Q+X130A；(g)X87N+X101M+X118V+X128L+X129Q+X130A；(h)X76D+X87R+X118R+X128L+X129Q+X130A；(i)X22A+X62D+X101G+X188D+X232V+X245R；(j)X103A+X104I；(k)X22R+X101G+X232V+X245R；(l)X103A+X104I+X156D；(m)X103A+X104I+X261E；(n)X62D+X245R；(o)X101N+X128A+X217Q；(p)X101E+X217Q；(q)X101E+X217D；(r)X9E+X43R+X262E；(s)X76D+X43R+X209W；(t)X205I+X206L+X209W；(u)X185E+X188E+X205I；(v)X256D+X261W+X262E；(w)X191N+X209W；(x)X261E+X262E；(y)X261E+X262D；和(z)X167A+X170S+X194P，其中所述位置对应于SEQ ID NO:23的位置，并且该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；并且至少一种蛋白酶变体具有蛋白酶活性并选自由以下组成的组：(a)X9R+X15T+X68A+X218D+X245R；(b)X9R+X15T+X68A+X245R；(c)X61E+X194P+X205I+X261D；(d)X61D+X205I+X245R；(e)X61E+X194P+X205I+X261D；(f)X87N+X118V+X128L+X129Q+X130A；(g)X87N+X101M+X118V+X128L+X129Q+X130A；(h)X76D+X87R+X118R+X128L+X129Q+X130A；(i)X22A+X62D+X101G+X188D+X232V+X245R；(j)X103A+X104I；(k)X22R+X101G+X232V+X245R；(l)X103A+X104I+X156D；(m)X103A+X104I+X261E；(n)X62D+X245R；(o)X101N+X128A+X217Q；(p)X101E+X217Q；(q)X101E+X217D；(r)X9E+X43R+X262E；(s)X76D+X43R+X209W；(t)X205I+X206L+X209W；(u)X185E+X188E+X205I；(v)X256D+X261W+X262E；(w)X191N+X209W；(x)X261E+X262E；(y)X261E+X262D；和(z)X167A+X170S+X194P，其中所述位置对应于SEQ ID NO:23的位置，并且该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；并且至少一种蛋白酶变体具有蛋白酶活性并选自由以下组成的组：(a)X9R+X15T+X68A+X218D+X245R；(b)X9R+X15T+X68A+X245R；(c)X61E+X194P+X205I+X261D；(d)X61D+X205I+X245R；(e)X61E+X194P+X205I+X261D；(f)X87N+X118V+X128L+X129Q+X130A；(g)X87N+X101M+X118V+X128L+X129Q+X130A；(h)X76D+X87R+X118R+X128L+X129Q+X130A；(i)X22A+X62D+X101G+X188D+X232V+X245R；(j)X103A+X104I；(k)X22R+X101G+X232V+X245R；(l)X103A+X104I+X156D；(m)X103A+X104I+X261E；(n)X62D+X245R；(o)X101N+X128A+X217Q；(p)X101E+X217Q；(q)X101E+X217D；(r)X9E+X43R+X262E；(s)X76D+X43R+X209W；(t)X205I+X206L+X209W；(u)X185E+X188E+X205I；(v)X256D+X261W+X262E；(w)X191N+X209W；(x)X261E+X262E；(y)X261E+X262D；和(z)X167A+X170S+X194P，其中所述位置对应于SEQ ID NO:23的位置，并且该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ IDNO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；并且至少一种蛋白酶变体具有蛋白酶活性并选自由以下组成的组：(a)X9R+X15T+X68A+X218D+X245R；(b)X9R+X15T+X68A+X245R；(c)X61E+X194P+X205I+X261D；(d)X61D+X205I+X245R；(e)X61E+X194P+X205I+X261D；(f)X87N+X118V+X128L+X129Q+X130A；(g)X87N+X101M+X118V+X128L+X129Q+X130A；(h)X76D+X87R+X118R+X128L+X129Q+X130A；(i)X22A+X62D+X101G+X188D+X232V+X245R；(j)X103A+X104I；(k)X22R+X101G+X232V+X245R；(l)X103A+X104I+X156D；(m)X103A+X104I+X261E；(n)X62D+X245R；(o)X101N+X128A+X217Q；(p)X101E+X217Q；(q)X101E+X217D；(r)X9E+X43R+X262E；(s)X76D+X43R+X209W；(t)X205I+X206L+X209W；(u)X185E+X188E+X205I；(v)X256D+X261W+X262E；(w)X191N+X209W；(x)X261E+X262E；(y)X261E+X262D；和(z)X167A+X170S+X194P，其中所述位置对应于SEQ ID NO:23的位置，并且该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；并且至少一种蛋白酶变体具有蛋白酶活性并选自由以下组成的组：(a)X9R+X15T+X68A+X218D+X245R；(b)X9R+X15T+X68A+X245R；(c)X61E+X194P+X205I+X261D；(d)X61D+X205I+X245R；(e)X61E+X194P+X205I+X261D；(f)X87N+X118V+X128L+X129Q+X130A；(g)X87N+X101M+X118V+X128L+X129Q+X130A；(h)X76D+X87R+X118R+X128L+X129Q+X130A；(i)X22A+X62D+X101G+X188D+X232V+X245R；(j)X103A+X104I；(k)X22R+X101G+X232V+X245R；(l)X103A+X104I+X156D；(m)X103A+X104I+X261E；(n)X62D+X245R；(o)X101N+X128A+X217Q；(p)X101E+X217Q；(q)X101E+X217D；(r)X9E+X43R+X262E；(s)X76D+X43R+X209W；(t)X205I+X206L+X209W；(u)X185E+X188E+X205I；(v)X256D+X261W+X262E；(w)X191N+X209W；(x)X261E+X262E；(y)X261E+X262D；和(z)X167A+X170S+X194P，其中所述位置对应于SEQ ID NO:23的位置，并且该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K，其中编号根据SEQID NO:1所述，其中该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；并且至少一种蛋白酶变体具有蛋白酶活性并选自由以下组成的组：(a)X9R+X15T+X68A+X218D+X245R；(b)X9R+X15T+X68A+X245R；(c)X61E+X194P+X205I+X261D；(d)X61D+X205I+X245R；(e)X61E+X194P+X205I+X261D；(f)X87N+X118V+X128L+X129Q+X130A；(g)X87N+X101M+X118V+X128L+X129Q+X130A；(h)X76D+X87R+X118R+X128L+X129Q+X130A；(i)X22A+X62D+X101G+X188D+X232V+X245R；(j)X103A+X104I；(k)X22R+X101G+X232V+X245R；(l)X103A+X104I+X156D；(m)X103A+X104I+X261E；(n)X62D+X245R；(o)X101N+X128A+X217Q；(p)X101E+X217Q；(q)X101E+X217D；(r)X9E+X43R+X262E；(s)X76D+X43R+X209W；(t)X205I+X206L+X209W；(u)X185E+X188E+X205I；(v)X256D+X261W+X262E；(w)X191N+X209W；(x)X261E+X262E；(y)X261E+X262D；和(z)X167A+X170S+X194P，其中所述位置对应于SEQ ID NO:23的位置，并且该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；并且至少一种蛋白酶变体具有蛋白酶活性并选自由以下组成的组：(a)X9R+X15T+X68A+X218D+X245R；(b)X9R+X15T+X68A+X245R；(c)X61E+X194P+X205I+X261D；(d)X61D+X205I+X245R；(e)X61E+X194P+X205I+X261D；(f)X87N+X118V+X128L+X129Q+X130A；(g)X87N+X101M+X118V+X128L+X129Q+X130A；(h)X76D+X87R+X118R+X128L+X129Q+X130A；(i)X22A+X62D+X101G+X188D+X232V+X245R；(j)X103A+X104I；(k)X22R+X101G+X232V+X245R；(l)X103A+X104I+X156D；(m)X103A+X104I+X261E；(n)X62D+X245R；(o)X101N+X128A+X217Q；(p)X101E+X217Q；(q)X101E+X217D；(r)X9E+X43R+X262E；(s)X76D+X43R+X209W；(t)X205I+X206L+X209W；(u)X185E+X188E+X205I；(v)X256D+X261W+X262E；(w)X191N+X209W；(x)X261E+X262E；(y)X261E+X262D；和(z)X167A+X170S+X194P，其中所述位置对应于SEQ IDNO:23的位置，并且该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；并且至少一种蛋白酶变体具有蛋白酶活性并选自由以下组成的组：(a)X9R+X15T+X68A+X218D+X245R；(b)X9R+X15T+X68A+X245R；(c)X61E+X194P+X205I+X261D；(d)X61D+X205I+X245R；(e)X61E+X194P+X205I+X261D；(f)X87N+X118V+X128L+X129Q+X130A；(g)X87N+X101M+X118V+X128L+X129Q+X130A；(h)X76D+X87R+X118R+X128L+X129Q+X130A；(i)X22A+X62D+X101G+X188D+X232V+X245R；(j)X103A+X104I；(k)X22R+X101G+X232V+X245R；(l)X103A+X104I+X156D；(m)X103A+X104I+X261E；(n)X62D+X245R；(o)X101N+X128A+X217Q；(p)X101E+X217Q；(q)X101E+X217D；(r)X9E+X43R+X262E；(s)X76D+X43R+X209W；(t)X205I+X206L+X209W；(u)X185E+X188E+X205I；(v)X256D+X261W+X262E；(w)X191N+X209W；(x)X261E+X262E；(y)X261E+X262D；和(z)X167A+X170S+X194P，其中所述位置对应于SEQ IDNO:23的位置，并且该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。
在具体实施例中，该洗涤剂组合物包含：至少一种α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含以下修饰：H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:1所述，该α-淀粉酶变体是与SEQ ID NO:1和14具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％序列一致性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体；并且至少一种蛋白酶变体具有蛋白酶活性并选自由以下组成的组：(a)X9R+X15T+X68A+X218D+X245R；(b)X9R+X15T+X68A+X245R；(c)X61E+X194P+X205I+X261D；(d)X61D+X205I+X245R；(e)X61E+X194P+X205I+X261D；(f)X87N+X118V+X128L+X129Q+X130A；(g)X87N+X101M+X118V+X128L+X129Q+X130A；(h)X76D+X87R+X118R+X128L+X129Q+X130A；(i)X22A+X62D+X101G+X188D+X232V+X245R；(j)X103A+X104I；(k)X22R+X101G+X232V+X245R；(l)X103A+X104I+X156D；(m)X103A+X104I+X261E；(n)X62D+X245R；(o)X101N+X128A+X217Q；(p)X101E+X217Q；(q)X101E+X217D；(r)X9E+X43R+X262E；(s)X76D+X43R+X209W；(t)X205I+X206L+X209W；(u)X185E+X188E+X205I；(v)X256D+X261W+X262E；(w)X191N+X209W；(x)X261E+X262E；(y)X261E+X262D；和(z)X167A+X170S+X194P，其中所述位置对应于SEQ ID NO:23的位置，并且该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:23具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、例如至少75％，例如，如至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性。本发明的洗涤剂组合物可以包含其他另外的酶。此类另外的酶可以是α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶或任何其他酶。具体地，该洗涤剂组合物进一步包含一种或多种选自下组的另外的酶，该组是：
(A)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:5具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(B)具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:6具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(C)具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:7具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(D)具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:8具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(E)具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:9具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(F)具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:10具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(G)具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:13具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(H)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:14具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(I)具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:11具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(J)具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:12具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(K)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:15具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(L)具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:16具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(M)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:17具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(N)具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:18具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(O)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的脂肪酶，或其与SEQ ID NO:4具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述脂肪酶变体具有脂肪酶活性，以及
(P)具有SEQ ID NO:2、3、19、20、或23的氨基酸序列的蛋白酶，或其与SEQ ID NO:2、3、19、20、或23具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中该蛋白酶变体具有蛋白酶活性。
如在此使用的，术语“另外的酶”是指可以进一步包括在本发明的洗涤剂组合物中的一组酶。此类酶可以是被认为可用于本发明的洗涤剂组合物中的任何酶。因此，该组酶不限于是与该至少一种α-淀粉酶变体不同的酶，该α-淀粉酶变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置1、54、56、72、109、113、116、134、140、159、167、169、172、173、174、181、182、183、184、189、194、195、206、255、260、262、265、284、289、304、305、347、391、395、439、469、444、473、476、或477的一个或多个位置处的修饰，其中所述α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:1具有至少75％但小于100％的序列一致性，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；并且其中该至少一种蛋白酶选自以下的组：(a)与SEQ ID NO:3、4、19、20、或23的序列具有至少70％、如至少75％、如至少80％、如至少85％、如至少90％、如至少95％、如至少98％、如至少99％、如100％的序列一致性的蛋白酶；(b)包含在对应于SEQ ID NO:2的位置171、173、175、179或180的一个或多个位置处的取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:2具有至少75％但小于100％的序列一致性；以及(c)与SEQ ID NO:3中的蛋白酶相比，在对应于位置32、33、48、49、50、51、52、53、54、58、59、60、61、62、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、116、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、150、152、153、154、155、156、158、159、160、161、164、169、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、197、198、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、和216的一个或多个位置处包含修饰的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:3具有至少75％的序列一致性，是包含在对应于位置9、15、27、42、52、55、56、59、60、66、74、85、97、99、101、102、104、116、118、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、198、199、200、203、206、210、211、212、216、230、232、239、242、250、253、255、256、或269的一个或多个位置处的取代的蛋白酶变体，其中编号根据SEQ ID NO:3所述，其中所述蛋白酶变体与SEQ IDNO:3具有至少60％序列一致性，或与SEQ ID NO:23中所示的蛋白酶相比在对应于位置32、33、49、50、51、52、53、54、55、60、61、62、63、64、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、118、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、152、154、155、156、157、158、161、162、163、167、170、175、181、187、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、203、204、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、或222的一个或多个位置处包含取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:23具有至少75％的序列一致性，但可以是落入前述定义内的另一种变体酶的增添。然而，该组酶(或称为“另外的酶”)可以是蛋白酶、淀粉酶或任何其他酶类的不同变体。
如在此使用的，术语“脂肪酶”是指具有脂肪酶活性的脂肪酶。在此定义的脂肪酶可以是羧酸酯水解酶EC 3.1.1,-，其包括例如EC 3.1.1.3三酰甘油脂肪酶、EC 3.1.1.4磷脂酶A2、EC 3.1.1.5溶血磷脂酶、EC 3.1.1.26半乳糖脂酶、EC 3.1.1.32磷脂酶A1、EC3.1.1.73阿魏酸酯酶的活性。
在一个实施例中，该另外的酶是SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、或18的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，并且其中该α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性。因此，在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶是SEQ ID NO:5的亲本α-淀粉酶的变体。在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:5具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶是SEQ ID NO:6的亲本α-淀粉酶的变体。在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:6具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶是SEQ ID NO:7的亲本α-淀粉酶的变体。在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:7具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶是SEQ ID NO:8的亲本α-淀粉酶的变体。在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:8具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶是SEQ ID NO:9的亲本α-淀粉酶的变体。在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:9具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶是SEQ ID NO:10的亲本α-淀粉酶的变体。在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:10具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶是SEQ ID NO:11的亲本α-淀粉酶的变体。在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:12具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶是SEQ ID NO:12的亲本α-淀粉酶的变体。在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:12具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶是SEQ ID NO:13的亲本α-淀粉酶的变体。在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:13具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶是SEQ ID NO:14的亲本α-淀粉酶的变体。在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:14具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶是SEQ ID NO:15的亲本α-淀粉酶的变体。在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:15具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶是SEQ ID NO:16的亲本α-淀粉酶的变体。在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:16具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶是SEQ ID NO:17的亲本α-淀粉酶的变体。在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:17具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶是SEQ ID NO:18的亲本α-淀粉酶的变体。在一个实施例中，该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:18具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在一个实施例中，该另外的酶是具有SEQ ID NO:4的序列的脂肪酶。在另一个实施例中，该另外的酶是如下亲本脂肪酶的脂肪酶变体，该亲本脂肪酶具有SEQ ID NO:4的序列或与SEQ ID NO:4具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在一个实施例中，该另外的酶是：
(A)包含在以下位置处的一个或多个修饰的α-淀粉酶变体：9、118、149、182、186、195、202、257、295、299、320、323、339、345、和458，其中所述位置对应于SEQ ID NO:5中的位置；
(B)包含在以下位置处的一个或多个修饰的α-淀粉酶变体：140、195、183、184、和206，其中所述位置对应于SEQ ID NO:6中的位置；
(C)包含在以下位置处的一个或多个修饰的α-淀粉酶变体：180、181、243、和475，其中所述位置对应于SEQ ID NO:7中的位置；
(D)包含在以下位置处的一个或多个修饰的α-淀粉酶变体：178、179、187、203、458、459、460、和476，其中所述位置对应于SEQ ID NO:8中的位置；
(E)包含在以下位置202处的修饰的α-淀粉酶变体，其中该位置对应于SEQ ID NO:9中的位置；
(F)包含在以下位置处的一个或多个修饰的α-淀粉酶变体：405、421、422、和428，其中所述位置对应于SEQ ID NO:10中的位置；
(G)包含在以下位置处的一个或多个修饰的α-淀粉酶变体：SEQ ID NO:13的48、49、107、156、181、190、209、和264；以及
(O)包含在以下位置处的一个或多个修饰的脂肪酶变体：SEQ ID NO:4的4、27、33、38、57、58、60、83、86、91、94、96、97、99、111、150、163、210、216、225、227、231、233、249、254、255、256、263、264、265、266、267、和269。
在优选的实施例中，该另外的酶是SEQ ID NO:5的亲本α-淀粉酶的变体。在一个优选的实施例中，该另外的酶是包含在以下位置处的一个或多个修饰的变体：SEQ ID NO:5的9、118、149、182、186、195、202、257、295、299、320、323、339、345、和458，其中该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:5具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。在具体实施例中，该另外的α-淀粉酶包含以下修饰：R118K+D183*+G184*+N195F+R320K+R458K，其中编号根据SEQ ID NO:5所述。在另一个具体实施例中，该另外的酶包含以下修饰：M9L+R118K+G149A+G182T+G186A+D183*+G184*+N195F+M202L+T257I+Y295F+N299Y+R320K+M323T+A339S+E345R+R458K，其中编号根据SEQ ID NO:5所述。
在优选的实施例中，该另外的酶是SEQ ID NO:6的亲本α-淀粉酶的变体。在一个优选的实施例中，该另外的酶是包含在以下位置处的一个或多个修饰的变体：SEQ ID NO:6的140、195、183、184、和206，其中该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:6具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。在具体实施例中，该另外的α-淀粉酶包含以下修饰：W140Y+D183*+G184*+N195F+I206Y，其中编号根据SEQ ID NO:6所述。
在优选的实施例中，该另外的酶是SEQ ID NO:7的亲本α-淀粉酶的变体。在一个优选的实施例中，该另外的酶是包含在以下位置处的一个或多个修饰的变体：SEQ ID NO:7的180、181、243、和475，其中该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:7具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。在具体实施例中，该另外的α-淀粉酶包含以下修饰：R180*+S181*+S243Q+G475K，其中编号根据SEQ ID NO:7所述。
在优选的实施例中，该另外的酶是SEQ ID NO:8的亲本α-淀粉酶的变体。在一个优选的实施例中，该另外的酶是包含在以下位置处的一个或多个修饰的变体：SEQ ID NO:8的178、179、187、203、458、459、460、和476，其中该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:8具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。在具体实施例中，该另外的α-淀粉酶包含以下修饰：R178*+G179*+E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K，其中编号根据SEQ ID NO:8所述。
在优选的实施例中，该另外的酶是SEQ ID NO:9的亲本α-淀粉酶的变体。在一个优选的实施例中，该另外的酶是包含在以下位置处的修饰的变体：SEQ ID NO:9的202，其中该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:9具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。在具体实施例中，该另外的α-淀粉酶包含以下修饰：M202L，其中编号根据SEQ ID NO:9所述。
在优选的实施例中，该另外的酶是SEQ ID NO:10的亲本α-淀粉酶的变体。在一个优选的实施例中，该另外的酶是包含在以下位置处的一个或多个修饰的变体：SEQ ID NO:10的405、421、422、和428，其中该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:10具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。在具体实施例中，该另外的α-淀粉酶包含以下修饰：I405L+A421H+A422P+A428T，其中编号根据SEQ ID NO:10所述。
在优选的实施例中，该另外的酶是SEQ ID NO:13的亲本α-淀粉酶的变体。在一个优选的实施例中，该另外的酶是包含在以下位置处的一个或多个修饰的变体：SEQ ID NO:13的48、49、107、156、181、190、209、和264，其中该另外的α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:13具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。在具体实施例中，该另外的α-淀粉酶包含以下修饰：G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+L201F+A209V+Q264S，其中编号根据SEQ ID NO:10所述。
在优选的实施例中，该另外的酶是SEQ ID NO:4的亲本脂肪酶的脂肪酶变体。在一个优选的实施例中，该另外的酶是包含在以下位置处的一个或多个修饰的变体：SEQ IDNO:4的4、27、33、38、57、58、60、83、86、91、94、96、97、99、111、150、163、210、216、225、227、231、233、249、254、255、256、263、264、265、266、267、和269，其中该脂肪酶变体与SEQ IDNO:4具有至少75％的序列一致性，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、但小于100％的序列一致性。
在进一步优选的实施例中，该另外的酶是SEQ ID NO:4的亲本脂肪酶的脂肪酶变体，其中该脂肪酶变体包含一个或多个选自下组的修饰，该组由以下组成：SEQ ID NO:4的X1C、X2K、X2Y、X4V、X27R、X33K、X33Q、X38A、X54T、X56K、X57G、X58A、X60S、X69R、X83T、X86V、X91A、X91N、X91Q、X91T、X94K、X91R、X96E、X91G、X91L、X91W、X97M、X98E、X98I、X99K、X101D、X111A、X163K、X176L、X210K、X210Q、X210R、X216P、X220F、X225R、X227G、X231R、X233C、X233R、X249R、X254S、X256V、X263Q、X264A、X265T、X266D、X267A、和X269N。
在另一个实施例中，该洗涤剂组合物包含多于一种另外的酶，例如两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种或十种另外的酶。
在一个实施例中，根据本发明的洗涤剂组合物包含两种或更多种酶，例如至少三种酶，更优选地至少四种或五种酶。优选地，这些酶具有不同的底物特异性，例如蛋白质分解活性、淀粉分解活性、脂质分解活性、半纤维素分解活性或果胶溶解活性。
根据本发明的洗涤剂组合物可以包括一种或多种另外的酶，例如碳水化合物活性酶，像碳水化物酶、果胶酶、甘露聚糖酶、淀粉酶、纤维素酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、或蛋白酶、脂肪酶、角质酶、氧化酶(例如漆酶)、和/或过氧化物酶。
一般而言，所选的一种或多种酶的特性应与所选的洗涤剂兼容(即，最适pH、与其他酶和非酶成分的兼容性等)，并且该一种或多种酶应以有效量存在。
适合的纤维素酶包括细菌来源或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。适合的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰刀菌属、梭孢壳属、支顶孢属的纤维素酶，例如披露于US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757以及WO 89/09259中的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰刀菌产生的真菌纤维素酶。
特别适合的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是在EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中描述的纤维素酶。其他实例是例如描述于WO 94/07998、EP 0 531 315、US5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307以及WO99/001544中的那些纤维素酶变体。
其他纤维素酶是具有以下序列的内切-β-1,4-葡聚糖酶，该序列与WO 2002/099091的SEQ ID NO:2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少97％一致性，或家族44木葡聚糖酶，该木葡聚糖酶具有以下序列，该序列与WO 2001/062903的SEQ ID NO:2的位置40-559具有至少60％一致性。
可商购的纤维素酶包括CelluzymeTM和CarezymeTM(诺维信公司(Novozymes A/S))、Carezyme PremiumTM(诺维信公司)、CellucleanTM(诺维信公司)、CellucleanClassicTM(诺维信公司)、CellusoftTM(诺维信公司)、WhitezymeTM(诺维信公司)、ClazinaseTM和Puradax HATM(杰能科国际公司(Genencor International Inc.))以及KAC-500(B)TM(花王株式会社(Kao Corporation))。
适合的甘露聚糖酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学或基因修饰的突变体。该甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性甘露聚糖酶。它可以是一种来自芽孢杆菌属或腐质霉属的野生型，特别是粘琼脂芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌或特异腐质霉。适合的甘露聚糖酶描述在WO 1999/064619中。可商购的甘露聚糖酶是Mannaway(诺维信公司)。
适合的另外的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些，例如植物或微生物来源。优选微生物来源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。它可以是碱性蛋白酶，例如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是S1家族(如胰蛋白酶)或S8家族(如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶可以例如是来自例如家族M4的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶，例如来自M5、M7或M8家族的那些。
术语“枯草杆菌酶”是指根据Siezen等人，Protein Engng.[蛋白质工程学]4(1991)719-737和Siezen等人，Protein Science[蛋白质科学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是通过在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸来表征的蛋白酶的亚组。枯草杆菌酶可以被划分为6个亚类，即，枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫氨酸抗生素(Lantibiotic)肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。
枯草杆菌酶的实例是来源于芽孢杆菌属的那些，例如描述于US 7262042和WO09/021867中的迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌；和描述于WO 89/06279中的枯草杆菌蛋白酶lentus、枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及描述于(WO 93/18140)中的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是描述于WO 92/175177、WO 01/016285、WO 02/026024以及WO 02/016547中的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰刀菌属蛋白酶(描述于WO 89/06270、WO 94/25583和WO 05/040372中)、以及来源于纤维单胞菌属(Cellumonas)的糜蛋白酶(描述于WO 05/052161和WO 05/052146中)。
进一步优选的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶(如在例如WO95/23221中所述)、及其变体(在WO 92/21760、WO 95/23221、EP 1921147以及EP 1921148中描述的)。
金属蛋白酶的实例是如描述于WO 07/044993(杰能科国际公司(Genencor Int.))中的中性金属蛋白酶，例如来源于解淀粉芽孢杆菌的那些。
有用的蛋白酶的实例是于以下各项中描述的变体：WO 92/19729、WO 96/034946、WO 98/20115、WO 98/20116、WO 99/011768、WO 01/44452、WO 03/006602、WO04/03186、WO04/041979、WO 07/006305、WO 11/036263、WO 11/036264，尤其是在以下位置的一个或多个中具有取代的变体：3、4、9、15、27、36、57、68、76、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、160、167、170、194、195、199、205、206、217、218、222、224、232、235、236、245、248、252以及274，使用BPN’编号。更优选地，该蛋白酶变体可以包含以下突变：X3T、X4I、X9R、X15T、X27R、*36D、X68A、X76D、X87S、X87R、*97E、X98S、X99G、X99D、X99A、X99AD、X101G、X101M、X101R、X103A、X104I、X104Y、X104N、X106A、X118V、X118R、X120D、X120N、X123S、X128L、X129Q、X130A、X160D、X167A、X170S、X194P、X195E、X199M、X205I、X217D、X218D、X222S、X232V、X235L、X236H、X245R、X252K、或X274A(使用BPN’编号)。
适合的可商购蛋白酶包括以下列商品名出售的那些：DuralaseTm、DurazymTm、Ultra、Ultra、 Ultra、 Ultra、以及(诺维信公司)，以下列商品名出售的那些：PurafectPreferenzTm、PurafectPurafectPurafectEffectenzTm、以及(丹尼斯克/杜邦公司(Danisco/DuPont))、AxapemTM(吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-Brocases N.V.))、BLAP(序列示于US 5352604的图29中)及其变体(汉高股份(Henkel AG))以及来自花王株式会社(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。
适合的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体酶。实例包括来自嗜热真菌属的脂肪酶，例如如描述于EP 258068和EP305216中的来自疏绵状嗜热丝孢菌(早先命名为疏棉状腐质霉)；来自腐质霉属的角质酶，例如特异腐质霉(WO 96/13580)；来自假单胞菌属的菌株的脂肪酶(这些中的一些现在改名为伯克霍尔德菌属)，例如产碱假单胞菌或类产碱假单胞菌(EP 218272)、洋葱假单胞菌(EP331376)、假单胞菌属菌株SD705(WO 95/06720&WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)；GDSL-型链霉菌属脂肪酶(WO 10/065455)；来自稻瘟病菌的角质酶(WO 10/107560)；来自门多萨假单胞菌的角质酶(US 5,389,536)；来自褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO 11/084412)；嗜热脂肪土芽孢杆菌脂肪酶(WO 11/084417)；来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO 11/084599)；以及来自灰色链霉菌(WO11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)的脂肪酶(WO 12/137147)。
其他实例是脂肪酶变体，例如描述于EP 407225、WO 92/05249、WO 94/01541、WO94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/34450、WO 00/60063、WO 01/92502、WO 07/87508以及WO 09/109500中的那些。
优选的商业化脂肪酶产品包括LipolaseTM、LipexTM；LipolexTM和LipocleanTM(诺维信公司)，Lumafast(来自杰能科公司(Genencor))以及Lipomax(来自吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-Brocades))。
再其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO 10/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO 09/67279)以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(特别是来自亨斯迈纺织品染化有限公司(Huntsman Textile Effects Pte Ltd)的商业产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO 10/100028)。
可以与本发明的变体一起使用的适合的其他淀粉酶可以是α-淀粉酶或葡糖淀粉酶并且可以是细菌或真菌起源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属，例如地衣芽孢杆菌的特定菌株(更详细地描述于GB1,296,839中)获得的α-淀粉酶。
不同的适合的淀粉酶包括具有在WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90％序列一致性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是具有在位置181和182处的缺失和在位置193处的取代的那些。
其他适合的淀粉酶是包含示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％序列一致性的变体。这种杂合α-淀粉酶的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209和Q264。包含示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选变体是具有以下取代的那些：
M197T
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
其他可以使用的淀粉酶是具有WO 08/153815的SEQ ID NO:2、WO 01/66712的SEQID NO:10的淀粉酶或其与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90％序列一致性或与WO 01/66712的SEQ ID NO:10具有90％序列一致性的变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211和264。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ IDNO:2具有90％序列一致性的变体。SEQ ID NO:2的优选变体是具有C末端截短和/或在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和G475。SEQ ID NO:2的更优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E、N225R、N272E、N272R、S243Q、S243A、S243E、S243D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E和G475K，和/或在位置R180和/或S181中具有缺失或在位置T182和/或G183中具有缺失的那些。SEQ IDNO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中这些变体是C-末端截短的并且任选地进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 13184577中的SEQ ID NO:1的淀粉酶或其与SEQID NO:1具有90％序列一致性的变体。SEQ ID NO:1的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：K176、R178、G179、T180、G181、E187、N192、M199、I203、S241、R458、T459、D460、G476和G477。SEQ ID NO:1的更优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代：K176L、E187P、N192FYH、M199L、I203YF、S241QADN、R458N、T459S、D460T、G476K和G477K和/或在位置R178和/或S179中具有缺失或在T180和/或G181中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：
E187P+I203Y+G476K
E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K
其中这些变体任选地进一步包含在位置241处的取代和/或在位置178和/或位置179处的缺失。
另外的适合的淀粉酶是具有WO10104675中的SEQ ID NO:1的淀粉酶或其与SEQ IDNO:1具有90％序列一致性的变体。SEQ ID NO:1的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：N21、D97、V128、K177、R179、S180、I181、G182、M200、L204、E242、G477和G478。SEQ ID NO:1的更优选变体是在以下位置：N21D、D97N、V128I、K177L、M200L、L204YF、E242QA、G477K和G478K中的一个或多个中具有取代和/或在位置R179和/或S180或I181和/或G182处具有缺失的那些。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体是具有取代N21D+D97N+V128I的那些，其中这些变体任选地进一步包括在位置200的取代和/或在位置180和/或位置181的缺失。
其他的合适的淀粉酶是具有在WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的淀粉酶或与SEQID NO:12具有90％序列一致性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO:12的以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K及R458K的变体，以及在选自下组的一个或多个位置中另外具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345和A339，最优选的是在所有这些位置中另外具有取代的变体。
其他的实例是淀粉酶变体，例如在WO2011/098531、WO2013/001078和WO2013/001087中描述的那些。
可商购的淀粉酶是DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM、Stainzyme TM、StainzymePlusTM、NatalaseTM、Liquozyme X和BANTM(来自诺维信公司)，以及RapidaseTM、PurastarTM/EffectenzTM、Powerase、Preferenz S1000、Preferenz S2000、Preferenz S100和PreferenzS110(来自杰能科国际有限公司/杜邦公司(Genencor International Inc./DuPont))。
适合的过氧物酶/氧化酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属(例如来自灰盖鬼伞)的过氧化物酶、及其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602、以及WO98/15257中描述的那些。
可商购的过氧化物酶包括GuardzymeTM(诺维信公司(Novozymes A/S))。
根据本发明的洗涤剂组合物还可以包含另外的酶，例如果胶酸裂合酶(例如PectawashTM)、叶绿素酶等。
该一种或多种洗涤剂酶可以通过添加包括一种或多种酶的单独的添加剂，或通过添加包括所有这些酶的组合添加剂而被包括在根据本发明的洗涤剂组合物中。洗涤剂添加剂，即单独的或组合的添加剂，可以配制成例如颗粒、液体、浆液等。优选的洗涤剂添加剂配制品为颗粒，特别是非尘化颗粒；液体，特别是稳定化液体；或者浆液。
非尘化颗粒可以例如如在US 4,106,991和4,661,452中所披露而产生，并且可以任选地通过本领域已知的方法进行包衣。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，PEG)；具有从16个到50个环氧乙烷单位的乙氧基化壬基酚；具有从12个至20个碳原子并且存在15至80个环氧乙烷单位的乙氧基化脂肪族醇；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、甘油二酯、和甘油三酯。适用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。液体酶制剂可以例如通过根据已确立的方法添加多元醇(例如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸而稳定化。受保护的酶可以根据EP238,216中披露的方法来制备。
在一个实施例中，在蛋白酶变体、α-淀粉酶变体和/或脂肪酶变体中修饰的数目分别为1至30，例如1至20、1至10和1至5，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个修饰。
在一个实施例中，在蛋白酶变体、α-淀粉酶变体和/或脂肪酶变体中修饰的数目分别为1至20，例如1至10和1至5，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个修饰。
在一个实施例中，该α-淀粉酶变体包含进一步的修饰。因此，预期与SEQ ID NO:1、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、和18中列出的任何亲本α-淀粉酶相比，在此所述的每种α-淀粉酶变体可以进一步具有改进的性能和/或改进的稳定性，例如在衣物洗涤或自动餐具洗涤中改进的洗涤性能、和/或改进的储存稳定性。因此，α-淀粉酶变体可以进一步包含在一个或多个(例如，若干个)其他位置的一个或多个另外的取代。因此，在一个实施例中，本发明的洗涤剂组合物的α-淀粉酶变体进一步包含在对应于以下位置的位置处的修饰；
其中编号是根据SEQ ID NO:5。
可以根据本领域中已知的程序，例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells，1989，Science[科学]244：1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且对所得突变体分子的蛋白酶活性进行测试以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见，Hilton等人，1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。酶或其他生物学相互作用的活性位点还可以通过对结构的物理分析来确定，如通过这样的技术确定：如核磁共振、晶体学、电子衍射或光亲和标记，连同对推定的接触位点氨基酸进行突变。参见，例如，de Vos等人，1992，Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人，1992，FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。
在一个实施例中，本发明的洗涤剂组合物包含如在此所述的α-淀粉酶变体和如在此所述的蛋白酶变体，该洗涤剂组合物与包含亲本α-淀粉酶和亲本蛋白酶的洗涤剂组合物相比具有改进的稳定性，该亲本α-淀粉酶和该亲本蛋白酶具有变体的相同的氨基酸序列但不具有在一个或多个所述指定位置处的取代。该稳定性可以通过包括以下步骤的方法来测量：将变体储存在洗涤剂组合物中，在30℃、37℃或室温下(例如25℃)持续例如4周，然后确定这些变体的比活性。可以怎样测量比活性在技术人员的知识范围内。
在本发明的上下文中，已经从亲本酶制备了任何变体，即，α-淀粉酶变体、蛋白酶变体、和脂肪酶变体。这样的亲本酶被定义为包含SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20所列出的氨基酸序列或由其组成的多肽。因此，已经从亲本酶制备这些变体。亲本酶可以通过序列同源性进行鉴定。出于本发明的目的，在这个背景下，通过参数“一致性”描述两个氨基酸序列之间的同源性，两个氨基酸序列之间的一致性程度是使用如上所述的尼德尔曼-翁施算法来确定的。除了氨基酸比对之外，来自程序的结果还计算两个序列之间的“百分比一致性”。
基于这一描述，对于本领域技术人员而言，鉴别在此描述可以如修饰的适合的同源α-淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶是常规的。
基本上同源的亲本变体可以具有一个或多个(若干个)氨基酸取代、缺失和/或插入，在此背景下，术语“一个或多个”与术语“若干个”可互换使用。这些改变优选地具有微小的性质，即，不会显著地影响蛋白或多肽的三维折叠或活性的如上所述的保守氨基酸取代以及其他取代；典型地1至约30个氨基酸的小的缺失；以及小的氨基末端或羧基末端延伸，例如氨基末端甲硫氨酸残基、多达约20-25个残基的小接头肽、或有利于纯化的小的延伸(亲和标记物)，如聚组氨酸段(tract)或蛋白质A(Nilsson等人，1985，EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]4：1075；Nilsson等人，1991，Methods Enzymol.[酶学方法]198：3。通常还参见Ford等人，1991，Protein Expression and Purification[蛋白表达与纯化]2：95-107。
尽管如上所述的这些改变优选地具有微小的性质，但是此类改变还可以是实质的性质，例如均作为氨基末端或羧基末端延伸的多达300个氨基酸或更多个氨基酸的较大的多肽的融合。
亲本酶可以是(a)与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20的成熟多肽具有至少70％序列一致性的多肽。
因此，该亲本α-淀粉酶与SEQ ID NO:1、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、或18的多肽具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％一致性、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性，该亲本α-淀粉酶具有α-淀粉酶活性。
因此，该亲本蛋白酶与SEQ ID NO:2、3、19、或20的多肽具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％一致性、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性，该亲本蛋白酶具有蛋白酶活性。
因此，该亲本脂肪酶与SEQ ID NO:4的多肽具有至少70％，例如至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％一致性、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列一致性，该亲本脂肪酶具有脂肪酶活性。
这些亲本酶可以是杂合的多肽，其中一种多肽的一个区域在另一种多肽的一个区域的N-末端或C-末端处融合并且由此提供融合的亲本酶。术语“融合”和“杂合”在此可互换使用，但是构成相同的含义和目的，并且不应以任何限制的方式理解。
通过将编码另一种多肽的多核苷酸融合于本发明的多核苷酸来产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，且包括连接编码多肽的编码序列使得它们符合读框，而且融合多肽的表达处于相同的启动子和终止子的控制之下。还可使用内含肽技术构建融合多肽，其中在翻译后产生融合多肽(Cooper等人，1993，EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583；Dawson等人，1994，Science[科学]266:776-779)。
融合多肽还可以包括在两种多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，该位点被切割，从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点：Martin等人，2003，J.Ind.Microbiol.Biotechnol.[工业微生物生物技术杂志]3:568-576；Svetina等人，2000，J.Biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251；Rasmussen-Wilson等人,1997,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493；Ward等人，1995，Biotechnology[生物技术]13:498-503；以及Contreras等人，1991，Biotechnology[生物技术]9:378-381；Eaton等人，1986，Biochemistry[生物化学]25:505-512；Collins-Racie等人，1995，Biotechnology[生物技术]13:982-987；Carter等人，1989，Proteins:Structure,Function,and Genetics[蛋白质：结构、功能与遗传学]6:240-248；以及Stevens，2003，Drug Discovery World[世界药物发现]4:35-48。
该亲本酶可以从任何属的有机体中获得。出于本发明的目的，如在此结合一种给定的来源使用的术语“从……中获得”应意指由多核苷酸编码的亲本是由该来源或者由已经插入来自该来源的多核苷酸的菌株产生的。在一个方面，该亲本是胞外分泌的。
存在于根据本发明的洗涤剂组合物中的变体可以通过用于获得具有特定酶活性的变体的方法制备，其中该方法包括以下步骤：(a)在本文所指定的一个或多个(例如，若干个)位置处向亲本酶中引入修饰；和(b)回收该变体。
技术人员将会知道如何准备变体。然而，可以使用本领域已知的任何诱变程序来制备这些变体，例如定点诱变、合成基因构建、半合成基因构建、随机诱变、改组等。
定点诱变是在编码该亲本的多核苷酸中的一个或多个限定位点处引入一个或多个(例如，若干个)突变的技术。
通过涉及使用含有所希望的突变的寡核苷酸引物的PCR可以体外实现定点诱变。也可以通过盒式诱变进行体外定点诱变，所述盒式诱变涉及由限制酶在包含编码亲本的多核苷酸的质粒中的位点处切割并且随后将含有突变的寡核苷酸连接在多核苷酸中。通常，消化该质粒与该寡核苷酸的限制酶是相同的，从而允许该质粒的粘性末端以及插入片段彼此连接。参见例如，Scherer和Davis，1979,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]76:4949-4955；以及Barton等人1990,Nucleic Acids Res.[核酸研究]18:7349-4966。
还可以通过本领域已知的方法在体内实现定点诱变。参见例如，美国专利申请公开号2004/0171154；Storici等人，2001,Nature Biotechnol.[自然生物技术]19:773-776；Kren等人，1998,Nat.Med.[自然医学]4:285-290；以及Calissano和Macino,1996,FungalGenet.Newslett.[真菌遗传学通讯]43:15-16。
任何定点诱变方法可用于本发明。存在许多可以用于制备变体的可商购的试剂盒。
合成基因的构建需要体外合成设计的多核苷酸分子以编码感兴趣的多肽。可以利用多种技术进行基因合成，例如由Tian等人(2004，Nature[自然]，432:1050-1054)所描述的基于多重微芯片的技术、以及其中在光可编程的微流芯片上合成并组装寡核苷酸的类似技术。
使用已知的诱变、重组和/或改组方法、随后进行一个相关的筛选程序可以做出单一或多种氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试，这些相关的筛选程序例如由Reidhaar-Olson和Sauer，1988，Science[科学]241:53-57；Bowie和Sauer，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86：2152-2156；WO 95/17413；或WO 95/22625。其他可以使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人，1991，Biochemistry[生物化学]30:10832-10837；US5,223,409；WO 92/06204)以及区域定向诱变(Derbyshire等人，1986，Gene[基因]46:145；Ner等人，1988，DNA 7:127)。
诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(Ness等人，1999,Nature Biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分子，并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许迅速确定多肽中个体氨基酸残基的重要性。
通过组合合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组的多个方面来实现半合成基因的构建。半合成构建典型地是利用合成的多核苷酸片段的过程结合PCR技术。因此，基因的限定区域可以从头合成，而其他区域可以使用位点特异性诱变引物来扩增，然而还有其他区域可以进行易错PCR或非易错PCR扩增。然后可以对多核苷酸子序列进行改组。
除了酶，根据本发明的洗涤剂组合物可以包含另外的组分。因此，在一个实施例中，该洗涤剂组合物进一步包含至少一种螯合剂；至少一种表面活性剂；至少一种磺化聚合物；至少一种助水溶物；至少一种助洗剂和/或共助洗剂；至少一种香料；和/或至少一种漂白系统。
另外的组分的选择处于技术人员的能力范围内并且包括常规的成分，包括下文所述的示例性非限制性组分。对于织物护理，组分的选择可以包括以下考虑：待清洁的织物的类型、污垢的类型和/或程度、进行清洁时的温度、以及洗涤剂产品的配制。尽管根据具体的功能性对下面提及的组分通过通用标题进行分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被技术人员所理解的，一种组分可以包括另外的功能性。
可以将α-淀粉酶变体和蛋白酶变体以对应于以下各项的量添加至洗涤剂组合物中：每升洗涤液中0.001-100mg的蛋白质，例如0.01-100mg的蛋白质、优选地0.005-50mg的蛋白质、更优选地0.01-25mg的蛋白质、甚至更优选地0.05-10mg的蛋白质、最优选地0.05-5mg的蛋白质、并且甚至最优选地0.01-1mg的蛋白质。
可以将α-淀粉酶变体和蛋白酶变体以对应于以下各项的量添加至洗涤剂组合物中：每克洗涤剂组合物中0.001-100mg的蛋白质，例如0.01-100mg的蛋白质、优选地0.005-50mg的蛋白质、更优选地0.01-25mg的蛋白质、甚至更优选地0.05-10mg的蛋白质、最优选地0.05-5mg的蛋白质、并且甚至最优选地0.01-1mg的蛋白质。
α-淀粉酶变体和蛋白酶变体可以使用稳定剂来稳定，这些稳定剂可以是选自下组，该组包含丙二醇、甘油、糖、糖醇、乳酸、硼酸、硼酸盐、和苯基硼酸衍生物，例如如下的那些：其中在该苯基硼酸衍生物中的残基R是C1-C6烷基基团，并且在这些中，更优选地，CH3、CH3CH2或CH3CH2CH2。该苯基硼酸衍生物中的残基R还可以是氢。苯基硼酸衍生物的一个实例是具有以下式的4-甲酰基苯基硼酸(4-FPBA)：
苯基硼酸衍生物可以另外在苯基环上具有其他化学修饰，并且具体地，它们可以含有一个或多个甲基、氨基、硝基、氯、氟、溴、羟基、甲酰基、乙基、乙酰基、叔丁基、茴香基、苄基、三氟乙酰基、N-羟基琥珀酰亚胺、叔丁氧羰基、苯甲酰基、4-甲基苄基、硫代茴香基(thioanizyl)、硫代甲苯基(thiocresyl)、苄基氧基甲基、4-硝基苯基、苄基氧基羰基、2-硝基苯甲酰基、2-硝基苯基氧硫基、4-甲苯磺酰基、五氟苯基、二苯基甲基、2-氯苄基氧基羰基、2,4,5-三氯苯基、2-溴苄基氧基羰基、9-芴基甲基氧基羰基、三苯基甲基、2,2,5,7,8-五甲基色满-6-磺酰基残基或基团或其组合。所有的稳定剂可以按所有质子化或去质子化形式存在于本发明的洗涤剂组合物中。此外，所有这些化合物(特别是其去质子化形式)可以与阳离子缔合。在这方面优选的阳离子是单价或多价的(特别是二价的)阳离子，特别是Na离子(Na+)、K离子(K+)、Li离子(Li+)、Ca离子(Ca2+)、Mg离子(Mg2+)、Mn离子(Mn2+)和Zn离子(Zn2+)。本发明的洗涤剂组合物可以包含两种或更多种稳定剂，例如像选自下组的那些，该组由以下各项组成：丙二醇、甘油、4-甲酰基苯基硼酸和硼酸盐。一个实例是包含4-甲酰基苯基硼酸和/或硼酸盐的本发明的洗涤剂组合物。该苯基硼酸衍生物可以按从0.00001至5.0wt％、优选地从0.0001至3.0wt％、从0.001至2.0wt％、从0.005至1.0wt％、从0.01至0.5wt％、从0.02至0.3wt％的量包含在洗涤剂组合物中。优选地，该硼酸/硼酸盐是按从0.001至5.5wt.％，并且愈加优选地从0.01至4.5wt.％、从0.05至3.5wt.％和从0.1至3wt.％、0.4至2.49wt.％、0.5至1.5wt.％的量包含在洗涤剂组合物中。添加硼酸盐和4-甲酰基苯基硼酸的一种组合已经被发现是特别有效的，导致在洗涤剂组合物中酶稳定性的高的增加。优选地，在洗涤剂组合物中，硼酸/硼酸盐的含量为从0.001至5.5wt.％，并且愈加优选地从0.075至4.5wt.％、从0.09至3.5wt.％以及从0.1至2.49wt.％，并且苯基硼酸衍生物的含量为从0.001至0.08wt.％，并且愈加优选地至从0.003至0.06wt.％、从0.005至0.05wt.％、从0.007至0.03wt.％、以及从0.009至0.01wt.％。特别优选的是添加1.0至2.0wt％的量的4-甲酰基苯基硼酸组合1.0wt％硼酸盐。
根据本发明的洗涤剂组合物可以包含也可以使用如在WO 2005/105826和WO2009/118375中所述的肽醛或肽酮来稳定的α-淀粉酶变体和蛋白酶变体。根据本发明的洗涤剂组合物的另一个实例涉及包含如在此描述的α-淀粉酶变体和蛋白酶变体的洗涤剂组合物，其中该洗涤剂配制品是如在WO 97/07202(其通过引用特此结合)中所披露的。
根据本发明的洗涤剂组合物的其他组分可以是表面活性剂。因此，根据本发明的洗涤剂组合物可以包含一种或多种表面活性剂，它们可以是阴离子的和/或阳离子的和/或非离子的和/或半极性的和/或兼性离子的、或其混合物。在一个具体实施例中，洗涤剂组合物包含一种或多种非离子型表面活性剂和一种或多种阴离子表面活性剂的混合物。这种或这些表面活性剂典型地以按重量计从约0.1％至60％的水平存在，如约1％至约40％、或约3％至约20％、或约3％至约10％。基于所希望的清洁应用来选择这种或这些表面活性剂，并且包括本领域中已知的任何常规表面活性剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何表面活性剂。
当包含在其中时，所述洗涤剂通常将会包含按重量计从约1％至约40％，例如从约5％至约30％，包括从约5％至约15％、或从约20％至约25％的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，具体地，直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES、也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺酸基琥珀酸或皂的二酯和单酯、及其组合。
当被包括在其中时，洗涤剂组合物将通常包括按重量计从约1％至约40％的阳离子表面活性剂。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、溴化十六烷基三甲基铵(CTAB)、二甲基双十八烷基氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、以及其组合、烷基季铵化合物、烷氧基化的季铵(AQA)。
当被包括在其中时，洗涤剂将通常包含按重量计从约0.2％至约40％的非离子表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，具体地从约1％至约20％、从约3％至约10％，例如从约3％至约5％、或从约8％至约12％。非离子表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(例如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、连同在SPAN和TWEEN商品名下可获得的产品及其组合。
当被包括在其中时，洗涤剂组合物将通常包括按重量计从约1％至约40％的半极性表面活性剂。半极性表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO)(例如烷基二甲基氧化胺)、N-(椰油基烷基)-N,N-二甲基氧化胺和N-(牛油-烷基)-N,N-双(2-羟基乙基)氧化胺、脂肪酸链烷醇酰胺和乙氧基化的脂肪酸链烷醇酰胺及其组合。
当被包括在其中时，洗涤剂组合物将通常包括按重量计从约1％至约40％的兼性离子表面活性剂。兼性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱、烷基二甲基甜菜碱、以及磺基甜菜碱、及其组合。
如在此使用的术语“磺化的聚合物”，是指包含磺酸或磺酸酯官能团的聚合物。
按组合物的重量计，将该聚合物(如果使用的话)以从约0.1％至约20％，优选地从1％至约15％，更优选地从2％至10％的任何适合的量来使用。磺化/羧化的聚合物特别适用于本发明小袋中所包含的组合物中。
在此所述的适合的磺化/羧化的聚合物可以具有如下的重量平均分子量：小于或等于约100,000Da、或小于或等于约75,000Da、或小于或等于约50,000Da、或从约3,000Da至约50,000，优选地从约5,000Da至约45,000Da。
如本文所指出的，该磺化/羧化的聚合物可以包括(a)源自具有通式(I)的至少一种羧酸单体的至少一种结构单元：
其中R1至R4独立地是氢、甲基、羧酸基团或CH2COOH，并且其中可以将该羧酸基团进行中和；(b)任选地，源自具有通式(II)的至少一种非离子单体的一种或多种结构单元：
其中R5是氢、C1至C6烷基、或C1至C6羟烷基，并且X是芳香族的(其中当X是芳香族的时，R5是氢或甲基)抑或者X具有通式(III)：
其中R6是(独立于R5)氢、C1至C6烷基、或C1至C6羟烷基，并且Y是O或N；和源自具有通式(IV)的至少一种磺酸单体的至少一种结构单元：
其中R7是包括至少一个sp2键的基团，A是O、N、P、S或酰胺或酯键，B是单或多环芳基基团或脂肪烃基团，每个t独立地是0或1，并且M+是阳离子。在一个方面，R7是C2至C6烯烃。在另一个方面，R7是乙烯、丁烯或丙烯。
优选的羧酸单体包括以下各项中的一种或多种：丙烯酸、马来酸、衣康酸、异丁烯酸、或丙烯酸的乙氧基化物酯，更优选的是丙烯酸和甲基丙烯酸。优选的磺化的单体包括以下各项中的一种或多种：(甲基)烯丙基磺酸钠、磺酸乙烯酯、苯基(甲基)烯丙基酯磺酸钠、或2-丙烯酰胺-甲基丙磺酸。优选的非离子单体包括以下中的一种或多种：(甲基)丙烯酸甲酯、(甲基)丙烯酸乙酯、(甲基)丙烯酸叔丁酯、甲基(甲基)丙烯酰胺、乙基(甲基)丙烯酰胺、(甲基)丙烯酸叔丁酯、苯乙烯、或[α]-甲基苯乙烯。
优选地，该聚合物包括以下水平的单体：按重量计从约40％至约90％，优选地从约60％至约90％的一种或多种羧酸单体的聚合物；按重量计从约5％至约50％，优选地从约10％至约40％的一种或多种磺酸单体的聚合物；和按重量计任选地从约1％至约30％，优选地从约2％至约20％的一种或多种非离子单体的聚合物。特别优选的聚合物包括按重量计约70％至约80％的至少一种羧酸单体的聚合物和按重量计从约20％至约30％的至少一种磺酸单体的聚合物。
该羧酸优选地是(甲基)丙烯酸。该磺酸单体优选地是以下各项之一：2-丙烯酰胺甲基-1-丙磺酸、2-甲基丙烯酰基氨基-2-甲基-1-丙磺酸、3-甲基丙烯酰基氨基-2-羟基丙磺酸、芳基磺酸、甲芳基磺酸、烯丙氧基苯磺酸、甲烯丙氧基苯磺酸、2-羟基-3-(2-丙烯基氧基)丙磺酸、2-甲基-2-丙烯-l-磺酸、苯乙烯磺酸、乙烯磺酸、丙烯酸3-磺丙酯、甲基丙烯酸3-磺丙酯、丙烯酸磺甲酯、甲基丙烯酸磺甲酯、及其水溶性盐。该不饱和磺酸单体最优选地是2-丙烯酰氨基-2-丙磺酸(AMPS)。
优选的可商购的聚合物包括：由阿尔科化学公司(Alco Chemical)提供的Alcosperse 240、Aquatreat AR 540和Aquatreat MPS；由Rohm&Haas公司提供的Acumer3100、Acumer 2000、Acusol 587G和Acusol 588G；由BF Goodrich公司提供的Goodrich K-798、K-775和K-797；和由ISP技术公司提供的ACP 1042。特别优选的聚合物是由Rohm&Haas公司提供的Acusol 587G和Acusol 588G。
在聚合物中，所有或一些羧酸或磺酸基团可以按中和形式存在，即，一些或所有酸基团中的羧酸和/或磺酸的酸性氢原子可以被金属离子，优选地碱金属离子并且具体地被钠离子替换。
根据本发明的洗涤剂组合物的另一种组分是助水溶剂。
助水溶剂是如下化合物，该化合物在水性溶液中溶解疏水化合物(或相反地，在非极性环境中的极性物质)。典型地，助水溶剂具有亲水和疏水两种特征(所谓的两亲特性，如由表面活性剂已知的)；然而，助水溶剂的分子结构一般不利于自发性自聚集，参见例如通过Hodgdon和Kaler(2007)，Current Opinion in Colloid&Interface Science[胶体和界面科学新见]12：121-128的综述。助水溶剂并不显示临界浓度，高于该浓度就会发生如对表面活性剂而言所发现的自聚集以及脂质形成胶束、薄层或其他很好地定义的中间相。相反，许多助水溶剂显示连续类型的聚集过程，在该过程中聚集物的大小随着浓度增加而增长。然而，很多助水溶剂改变了包含极性和非极性特征的物质的系统(包括水、油、表面活性剂、和聚合物的混合物)的相行为、稳定性、和胶体特性。助水溶剂常规在从药学、个人护理、食品到技术应用的各个产业中应用。助水溶剂在洗涤剂组合物中的使用允许例如更浓的表面活性剂配制品(如在通过去除水而压缩液体洗涤剂的过程中)而不引起不希望的现象，如相分离或高粘度。
因此，根据本发明的洗涤剂组合物可以包含以重量计0-5％，例如约0.5至约5％、或约3％至约5％的助水溶剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何助水溶剂。助水溶剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠及其组合。
洗涤剂组合物的另一组分可以是助洗剂和/或共助洗剂。术语“助洗剂”可以通过M.K.Nagaraja等人，JAOCS，第61卷，第9期(1984年9月)，第1475-1478页中描述的测试来进行分类以便确定在pH 8下将水硬度从溶液中的2.0mM(作为CaCO3)降低至0.10mM所需的最小助洗剂水平。助洗剂可以具体地为与例如钙和镁离子形成水溶性络合物的螯合试剂。如在此使用的术语“螯合试剂(Chelating agent)”或“螯合剂(chelator)”是指与某些金属离子形成分子的化学品，从而使这些离子失活以致于使它们不能与其他元素进行反应，因此是通过形成螯合物而抑制化学活性的一种结合剂。螯合是在配体与单一中心原子之间形成或存在的两种或更多种单独的结合。配体可以是任何有机化合物、硅酸盐或磷酸盐。因此，在一个实施例中，根据本发明的洗涤剂组合物可以包含按重量计约0-65％，例如约5％至约50％的洗涤剂助洗剂或共助洗剂、或其混合物。在餐具清洗洗涤剂中，助洗剂的水平典型地是40％-65％，特别是50％-65％。助洗剂和/或共助洗剂可以具体是形成具有Ca和Mg的水溶性络合物的螫合剂。可以利用本领域中已知的用于在洗衣、ADW和硬表面清洁洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐例如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐例如碳酸钠、可溶性硅酸盐例如偏硅酸钠、层状硅酸盐(例如来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、乙醇胺例如2-氨基乙-1-醇(MEA)、亚氨基二乙醇(DEA)和2,2’,2”-次氮基三乙醇(TEA)和羧甲基菊粉(CMI)、及其组合。
根据本发明的洗涤剂组合物还可以包含按重量计0-65％，例如约5％至约40％的洗涤剂共助洗剂、或其混合物。洗涤剂组合物可以包含单独或与助洗剂组合的共助洗剂，例如沸石助洗剂。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯均聚物或其共聚物，如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐；螯合剂，例如氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和膦酸盐；以及烷基琥珀酸或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨二琥珀酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二琥珀酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二基双(膦酸)(HEDP)、乙二胺四(亚甲基)四(膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基)五(膦酸)(DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨二琥珀酸(IDA)、N-(2-磺甲基)天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、对氨基苯磺酸-N、N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)和磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(羟乙基)-亚乙基二胺三乙酸(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)、及其组合和盐。其他示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 09/102854、US5977053中。
而洗涤剂组合物的另一组分可以是漂白系统。因此，在一个实施例中，根据本发明的洗涤剂组合物可以包含按重量计0-10％，例如约1％至约5％的漂白系统。可以利用本领域中已知的用于在洗衣、ADW和硬表面清洁洗涤剂中使用的任何漂白系统。适合的漂白系统组分包括漂白催化剂、光漂白剂、漂白活化剂、过氧化氢源如过碳酸钠和过硼酸钠、预成型过酸及其混合物。适合的预成型过酸包括但不限于：过氧羧酸及盐、过碳酸及盐、过亚氨酸(perimidic acid)及盐、过氧单硫酸及盐(例如过硫酸氢钾(Oxone(R))，及其混合物。漂白系统的非限制性实例包括与过酸形成漂白活化剂组合的基于过氧化物的漂白体系，其可以包含例如无机盐，包括碱金属盐例如过硼酸盐的钠盐(通常为单水合物或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐。漂白活化剂在此意指与过氧化物漂白剂(像过氧化氢)反应以形成过酸的化合物。以此方式形成的过酸构成活化的漂白剂。有待在此使用的适合漂白活化剂包括属于酯酰胺、酰亚胺或酸酐类别的那些。适合的实例是四乙酰乙二胺(TAED)、3,5,5三甲基己酰氧基苯磺酸钠、双过氧化十二酸、4-(十二烷基氧基)苯磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS)、4-(3,5,5-三甲基己酰氧基)苯磺酸盐(ISONOBS)、四乙酰乙二胺(TAED)和4-(壬酰氧基)苯磺酸盐(NOBS)，和/或WO98/17767中披露的那些。感兴趣的漂白活化剂的具体家族披露于EP 624154中并且该家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酸酯(像特雷森(Triacin))具有以下优点，其是环境友好的，因为其最终降解为柠檬酸和醇。此外，乙酰柠檬酸三乙酯和三醋精在储存时在产品中具有良好的水解稳定性，并且其是有效的漂白活化剂。最后，ATC为洗衣添加剂提供一种良好的助洗能力。可替代地，漂白系统可以包括例如酰胺、酰亚胺、或砜型的过氧酸。漂白系统还可以包括过酸，例如6-(酞酰基氨基)过己酸(PAP)。漂白系统还可以包括漂白催化剂。在一些实施例中，漂白组分可以是选自下组的有机催化剂，该组由以下各项组成：具有下式的有机催化剂：
(iii)及其混合物；其中每个R1独立地是包含从9至24个碳的支链烷基基团或包含从11至24个碳的直链烷基基团，优选地，每个R1独立地是包含从9至18个碳的支链烷基基团或包含从11至18个碳的直链烷基基团，更优选地，每个R1独立地选自下组，该组由以下各项组成：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、正十二烷基、正十四烷基、正十六烷基、正十八烷基、异壬基、异癸基、异十三基和异十五烷基。其他示例性漂白系统描述于例如WO 2007/087258、WO 2007/087244、WO 2007/087259、WO 2007/087242中。合适的光漂白剂可以例如是磺化的酞菁锌。
洗涤剂组合物的另一组分是聚合物。因此，在一个实施例中，根据本发明的洗涤剂组合物包含聚合物。
因此，根据本发明的洗涤剂组合物可以包含按重量计0-10％，例如0.5-5％、2-5％、0.5-2％或0.2-1％的聚合物。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何聚合物。该聚合物可以作为如上文提到的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油污清洁和/或抑泡特性。一些聚合物可以具有多于一种的以上提到的特性和/或多于一种的以下提到的基序(motif)。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(乙烯亚胺)、羧甲基菊糖(CMI)、和聚羧化物(如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物)、疏水修饰的CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚对苯二甲酸乙二酯和聚氧乙烯对苯二甲酸乙二酯的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575中。也考虑了以上提到的聚合物的盐。
洗涤剂组合物的另一组分可以是织物调色剂。因此，在一个实施例中，根据本发明的洗涤剂组合物包含织物调色剂。
根据本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂例如染料或色素，当织物调色剂配制在洗涤剂组合物中时，当所述织物与包含所述洗涤剂组合物的洗液接触时，所述织物调色剂可以沉积到织物上，从而通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色调。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下，因为它们吸收至少一部分可见光光谱，所以织物调色剂改变表面的色彩。适合的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物，并且还可以包括色素。适合的染料包括小分子染料和聚合物染料。适合的小分子染料包括选自下组的小分子染料，该组由落入颜色索引(Colour Index)(C.I.)分类的以下染料组成：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或其混合物，例如于WO 2005/03274、WO 2005/03275、WO 2005/03276和EP 1876226中所描述的(将其通过引用而特此结合)。洗涤剂组合物优选包括从约0.00003wt％至约0.2wt％、从约0.00008wt％至约0.05wt％、或甚至从约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。该组合物可以包括从0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物处于单位剂量袋的形式时，这可以是尤其优选的。适合的调色剂还披露于例如WO 2007/087257、WO 2007/087243中。
还可以利用本领域中已知的用于在洗衣洗涤剂中使用的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括防腐蚀剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂(disintegrant)/崩解试剂(disintegration agent)、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC和/或多元醇如丙二醇)、织物调理剂(包括粘土)、填充剂/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢悬浮剂、软化剂、抑泡剂、晦暗抑制剂以及芯吸剂，单独或组合使用。可以利用本领域中已知的用于在洗衣洗涤剂中使用的任何成分。此类成分的选择完全在技术人员的技术范围内。
根据本发明的洗涤剂组合物还可以包含分散剂。具体而言，粉状洗涤剂可以包含分散剂。适合的水溶性有机材料包括均聚合或共聚合的酸或其盐，其中聚羧酸包含被不多于两个碳原子彼此分开的至少两个羧基。适合的分散剂例如描述于Powdered Detergents[粉末洗涤剂]，Surfactant Science Series[表面活性剂科学系列]，第71卷，马塞尔·德克尔公司(Marcel Dekker,Inc)。根据本发明的洗涤剂组合物还可以包含一种或多种染料转移抑制剂。适合的聚合物染料转移抑制试剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮与N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮以及聚乙烯咪唑或其混合物。当在主题组合物中存在时，染料转移抑制剂可以按该组合物的重量计以从约0.0001％至约10％、从约0.01％至约5％或甚至从约0.1％至约3％的水平存在。根据本发明的洗涤剂组合物还可以优选地包含另外的组分，这些组分可以使正在被清洁的物品着色，例如荧光增白剂或光学增亮剂。当存在时，该增亮剂优选以约0,01％至约0,5％的水平存在。在该组合物中可以使用适合在洗衣洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些：二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯衍生物。荧光增白剂的二氨基芪-磺酸衍生物类型的实例包括以下各项的钠盐：4,4’-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2’-二磺酸盐；4,4’-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2.2’-二磺酸盐；4,4’-双-(2-苯胺基-4(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2’-二磺酸盐，4,4’-双-(4-苯基-2,1,3-三唑-2-基)芪-2,2’-二磺酸盐；4,4’-双-(2-苯胺基-4(1-甲基-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2’-二磺酸盐和2-(二苯乙烯基-4"-萘-1.,2’:4,5)-1,2,3-三唑-2”-磺酸盐。优选的荧光增白剂是可从汽巴-嘉基股份有限公司(Ciba-Geigy AG)(巴塞尔，瑞士)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4’-双-(2-吗啉基-4苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2’-双-(苯基-苯乙烯基)二磺酸盐的二钠盐。还优选的荧光增白剂，是可商购的Parawhite KX，由派拉蒙矿物与化学品公司(ParamountMinerals and Chemicals)，孟买，印度供应。适合使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-烷氨基香豆素。
适合的荧光增白剂水平包括从约0.01wt％、从0.05wt％、从约0.1wt％或甚至从约0.2wt％的较低水平至0.5wt％或甚至0.75wt％的较高水平。根据本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物，这些聚合物帮助从织物(如基于棉布和聚酯的织物)去除污垢，特别是从基于聚酯的织物去除疏水性污垢。污垢释放聚合物可以例如是基于非离子型或阴离子型对苯二甲酸的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接合的共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如Powdered Detergents,Surfactant science seriesvolume 71,Marcel Dekker,Inc[粉状洗涤剂，表面活性剂科学系列，第71卷，第7章，马塞尔德克尔公司]。另一种类型的污垢释放聚合物是包括核心结构和附接至该核心结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油污清洁聚合物。核心结构可以包含聚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构，如WO 2009/087523中详细描述的(将其通过引用而特此结合)。此外，任意接合的共聚物是适合的污垢释放聚合物。适合的接合的共聚物更详细地描述于WO 2007/138054、WO 2006/108856以及WO 2006/113314中(将其通过引用特此结合)。其他污垢释放聚合物是取代的多糖结构，尤其是取代的纤维素结构，如修饰的纤维素衍生物，如EP1867808或WO 2003/040279中描述的那些(将二者都通过引用结合在此)。适合的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺及其混合物。适合的纤维素聚合物包括阴离子修饰的纤维素、非离子修饰的纤维素、阳离子修饰的纤维素、兼性离子修饰的纤维素及其混合物。适合的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素及其混合物。根据本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，例如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物、和乙氧基化的聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下描述的基于纤维素的聚合物还可以用作抗再沉积剂。
其他适合的辅料包括但不限于防缩剂、防皱剂、杀菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物柔软剂、填充剂、泡沫调节剂、助水溶剂、香料、色素、抑泡剂、溶剂、用于液体洗涤剂的结构化剂(structurants)和/或结构弹力剂。
因此，在一个具体实施例中，该洗涤剂组合物进一步包含至少一种螯合剂；至少一种表面活性剂；至少一种磺化聚合物；至少一种助水溶物；至少一种助洗剂和/或共助洗剂；至少一种香料；和/或至少一种漂白系统。
洗涤剂产品的配制
根据本发明的洗涤剂组合物可以处于任何常规形式，例如棒状、均匀的片剂、具有两层或更多层的片剂、常规的或压缩的粉、颗粒、膏、凝胶、或常规的、压缩的或浓缩的液体。
因此，在一个实施例中，根据本发明的洗涤剂组合物是液体衣物洗涤剂组合物、粉末衣物洗涤剂组合物、液体餐具洗涤剂组合物或粉末餐具洗涤剂组合物。
如在此使用的术语“液体衣物洗涤剂组合物”是指处于稳定的液体形式并且用于洗涤织物的方法中的洗涤剂组合物。因此，该洗涤剂组合物被配制为流体形式。
如在此使用的术语“粉末衣物洗涤剂组合物”是指用于洗涤织物的方法中的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物处于固体形式，例如颗粒、非尘颗粒或粉末。
如在此使用的术语“液体餐具洗涤洗涤剂组合物”是指处于稳定的液体形式并且用于餐具洗涤的洗涤剂组合物。餐具洗涤可以是任何种类的餐具洗涤，例如手动餐具洗涤和例如自动餐具洗涤(ADW)。
如在此使用的术语“粉末餐具洗涤洗涤剂组合物”是指处于固体形式例如颗粒状、粉状或紧密单元并且用于餐具洗涤的洗涤剂组合物。粉末餐具洗涤洗涤剂组合物典型地用于自动餐具洗涤中，但是该用途不限于ADW，并且其还可以旨在被用于任何其他种类的餐具洗涤中，例如手动餐具洗涤。
洗涤剂配制品形式：层(相同或不同的相)、袋、与用于机器剂量单位的形式。
袋可以被配置为单个或多个的室。它可以具有适合容持该组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不允许该组合物从袋中释放出来。该袋由水溶性膜制成，它包含了内部体积。所述内部体积可以分成袋的室。优选的薄膜是高分子材料，优选被制成薄膜或薄片的形式的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选的是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混物组合物，其包含可水解降解的和水溶性的聚合物共混物，如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在商品参考号M8630下，如由克里斯克拉夫特工业产品公司(Chris Craft In.Prod.)，盖里，印第安纳州，美国销售)加增塑剂，如甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。袋可以包括固体衣物清洁组合物或部分组分以及/或者液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。用于液体组分的室在构成上可以与包含固体的室不同。参考：(US 2009/0011970 A1)。
可以由水可溶的袋中或片剂的不同层中的室来将洗涤剂成分物理地彼此分开。因此，可以避免组分间的不良的存储相互作用。在洗涤溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。
非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，典型地含有按重量计至少20％并且高达95％的水，如高达约70％的水、高达约65％的水、高达约55％的水、高达约45％的水、高达约35％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包含于水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以含有从0-30％的有机溶剂。
液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。
方法和用途
在一个方面，本发明涉及如在此所述的洗涤剂组合物在衣物洗涤、手动餐具洗涤或自动餐具洗涤中的用途。因此，本发明涉及洗涤剂组合物的用途，该洗涤剂组合物包含：(i)至少一种α-淀粉酶变体，其包含在对应于SEQ ID NO:1的位置1、54、56、72、109、113、116、134、140、159、167、169、172、173、174、181、182、183、184、189、194、195、206、255、260、262、265、284、289、304、305、347、391、395、439、469、444、473、476、或477的一个或多个位置处的修饰，其中所述α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:1具有至少75％但小于100％的序列一致性，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；以及(ii)至少一种具有蛋白酶活性的蛋白酶，其中所述蛋白酶选自由以下组成的组：(a)与SEQ ID NO:2、3、19、20、或23的序列具有至少70％、如至少75％、如至少80％、如至少85％、如至少90％、如至少95％、如至少98％、如至少99％、如100％的序列一致性的蛋白酶；(b)包含在对应于SEQ ID NO:2的位置171、173、175、179或180的一个或多个位置处的取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQID NO:2具有至少75％但小于100％的序列一致性；(c)与SEQ ID NO:3中的蛋白酶相比，在对应于位置32、33、48、49、50、51、52、53、54、58、59、60、61、62、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、116、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、150、152、153、154、155、156、158、159、160、161、164、169、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、197、198、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、和216的一个或多个位置处包含修饰的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ IDNO:3具有至少75％的序列一致性；(d)包含在对应于位置9、15、27、42、52、55、56、59、60、66、74、85、97、99、101、102、104、116、118、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、198、199、200、203、206、210、211、212、216、230、232、239、242、250、253、255、256、或269的一个或多个位置处的取代的蛋白酶变体，其中编号根据SEQ ID NO:3所述，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:3具有至少60％序列一致性，以及(e)与SEQ ID NO:23中所示的蛋白酶相比，在对应于位置32、33、49、50、51、52、53、54、55、60、61、62、63、64、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、118、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、152、154、155、156、157、158、161、162、163、167、170、175、181、187、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、203、204、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、或222的一个或多个位置处包含取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体在衣物洗涤、手动餐具洗涤或自动餐具洗涤中与SEQ ID NO:23具有至少75％的序列一致性。
在一个实施例中，如在此描述的洗涤剂组合物的用途是在衣物洗涤中。
在另一个实施例中，如在此描述的洗涤剂组合物的用途是在自动餐具洗涤中。
根据本发明的洗涤剂组合物可以配制为(例如)手洗或机洗衣物洗涤剂组合物，包括适用于预处理玷污的织物的洗衣添加剂组合物，和漂洗添加的织物软化剂组合物，或配制为用于一般家用硬表面清洁操作的洗涤剂组合物，或配制用于手洗或机洗餐具洗涤操作。因此，在一个实施例中，洗涤剂组合物是液体衣物洗涤剂组合物、粉末衣物洗涤剂组合物、液体餐具洗涤剂组合物、或粉末餐具洗涤剂组合物。
清洁过程或者纺织品保养过程可以例如是衣物洗涤过程、餐具洗涤过程或硬表面(如浴室砖、地板、桌面、排水管、水槽以及脸盆)清洁。衣物洗涤过程可以例如是家庭衣物洗涤，但是它也可以是工业衣物洗涤。用于洗涤织物和/或衣服的过程可以是如下的一个过程，该过程包括用包含洗涤剂组合物和至少一种蛋白酶变体的洗涤溶液处理织物。例如，可以在机器洗涤过程中或者在手动洗涤过程中进行清洁过程或纺织品保养过程。洗涤溶液可以例如是包含洗涤剂组合物的水性洗涤溶液。
经过洗涤、清洁或者纺织品保养过程的织物和/或衣服可以是常规的可洗涤的衣物，例如家庭衣物。优选地，衣物的主要部分是衣服和织物，包括针织品、编织物、斜纹粗棉布、非编织物、毛毡、纱线、以及毛巾布。这些织物可以是基于纤维素的，如天然纤维素，包括棉布、亚麻、亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维；或者人造纤维素(例如，来源于木浆)，包括纤维胶/人造丝、苎麻、醋酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维(lyocell)或其共混物。这些织物还可以是非纤维素基的，如天然聚酰胺，包括羊毛、骆驼毛、羊绒、马海毛、兔毛或丝；或者合成聚合物，如尼龙、芳族聚酰胺、聚酯、丙烯酸、聚丙烯以及斯潘德克斯弹性纤维(spandex)/弹性纤维；或其共混物以及纤维素基和非纤维素基纤维的共混物。共混物的例子是棉和/或人造丝/纤维胶与一种或几种伴随材料的共混物，该伴随材料如羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚乙烯醇纤维、聚氯乙烯纤维、聚亚胺酯纤维、聚脲纤维、芳族聚酰胺纤维)以及含纤维素的纤维(例如人造丝/纤维胶、苎麻、亚麻/亚麻布、黄麻、醋酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。
最近几年，人们对替换洗涤剂中的组分的兴趣逐渐增加，这源于用可再生生物组分如酶和多肽替换石油化学品而不损害洗涤性能。当洗涤剂组合物的组分改变新酶活性或者相比于常用洗涤剂酶(如蛋白酶)具有替代和/或改进的特性的新酶时，需要脂肪酶和淀粉酶来实现与传统洗涤剂组合物比较时类似或改进的洗涤性能。
典型的洗涤剂组合物包括除酶之外的各种组分，这些组分具有不同的作用，一些组分像表面活性剂降低洗涤剂的表面张力，这允许正在被清洁的污渍消散和分散并随后被清洗出来，其他组分像漂白系统通常通过氧化除去颜色并且很多漂白剂还具有强杀菌特性，并且用于消毒和灭菌。而其他组分像助洗剂和螯合剂例如通过从液体中除去金属离子来软化洗涤水。
这些酶组合物可以进一步包括以下各项中的至少一种或多种：表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、衣物洗涤或餐具洗涤中的漂白系统或漂白组分。
表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统和/或漂白组分的量相比于在未添加本发明的蛋白酶变体情况下使用的表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统和/或漂白组分的量可以有所减小。优选地，作为表面活性剂、增效剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统和/或漂白组分的该至少一种组分以以下量存在：比在不添加本发明的蛋白酶变体的情况下组分在系统中的量(如，此组分的常规的量)少1％，如少2％、如少3％、如少4％、如少5％、如少6％、如少7％、如少8％、如少9％、如少10％、如少15％、如少20％、如少25％、如少30％、如少35％、如少40％、如少45％、如少50％。洗涤剂组合物还可以是如下的组合物，该组合物不含至少一种组分，该组分是表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统或漂白组分和/或聚合物。
在一个实施例中，该用途是在低温下，如低于60℃、如低于55℃、如低于50℃、如低于45℃、如低于40℃、如低于35℃、如低于30℃、如低于25℃、如低于20℃、如低于15℃下进行的衣物洗涤或自动餐具洗涤中。
如在此使用的术语“低温”是指5℃-60℃，例如5℃-50℃、优选5℃-40℃、更优选5℃-30℃、更优选5℃-20℃、最优选5℃-15℃，并且特别是5℃-10℃的温度。
在一个实施例中，洗涤剂组合物的用途是在低温下，如低于50℃、如低于45℃、如低于40℃、如低于35℃、如低于30℃、如低于25℃、如低于20℃、如低于15℃下进行的衣物洗涤中。
在另一个实施例中，洗涤剂组合物的用途是在低温下，如低于60℃、如低于55℃、如低于50℃、如低于45℃、如低于40℃、如低于35℃、如低于30℃下进行的自动餐具洗涤中。
洗涤方法
根据本发明的洗涤剂组合物理想地适用于衣物洗涤应用。因此，在一个方面，本发明涉及进行衣物洗涤的方法，该方法包括用如在此描述的洗涤剂组合物洗涤衣服，优选地在40℃或更低的温度、或更优选地在30℃或更低的温度、或甚至更优选地在20℃或更低的温度进行该洗涤。因此，进行衣物洗涤的方法包括用包含以下的洗涤剂组合物洗涤织物，该洗涤剂组合物：(i)至少一种α-淀粉酶变体，其包含在对应于SEQ ID NO:1的位置1、54、56、72、109、113、116、134、140、159、167、169、172、173、174、181、182、183、184、189、194、195、206、255、260、262、265、284、289、304、305、347、391、395、439、469、444、473、476、或477的一个或多个位置处的修饰，其中所述α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:1具有至少75％但小于100％的序列一致性，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；以及(ii)至少一种具有蛋白酶活性的蛋白酶，其中所述蛋白酶选自由以下组成的组：(a)与SEQ ID NO:2、3、19、20、或23的序列具有至少70％、如至少75％、如至少80％、如至少85％、如至少90％、如至少95％、如至少98％、如至少99％、如100％的序列一致性的蛋白酶；(b)包含在对应于SEQ ID NO:2的位置171、173、175、179或180的一个或多个位置处的取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:2具有至少75％但小于100％的序列一致性；(c)与SEQ ID NO:3中的蛋白酶相比，在对应于位置32、33、48、49、50、51、52、53、54、58、59、60、61、62、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、116、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、150、152、153、154、155、156、158、159、160、161、164、169、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、197、198、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、和216的一个或多个位置处包含修饰的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:3具有至少75％的序列一致性，(d)包含在对应于位置9、15、27、42、52、55、56、59、60、66、74、85、97、99、101、102、104、116、118、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、198、199、200、203、206、210、211、212、216、230、232、239、242、250、253、255、256、或269的一个或多个位置处的取代的蛋白酶变体，其中编号根据SEQ ID NO:3所述，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:3具有至少60％序列一致性，以及(e)与SEQ ID NO:23中所示的蛋白酶相比，在对应于位置32、33、49、50、51、52、53、54、55、60、61、62、63、64、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、118、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、152、154、155、156、157、158、161、162、163、167、170、175、181、187、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、203、204、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、或222的一个或多个位置处包含取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:23具有至少75％的序列一致性，优选地在40℃或更低的温度下、或更优选地在30℃或更低的温度下、或甚至更优选地在20℃或更低的温度下进行该洗涤。
这些方法包括用于洗涤织物的方法。该方法包括将有待洗涤的织物与包括一种洗涤剂组合物的清洁洗衣溶液接触的步骤。织物可以包括能够在常规消费者使用条件下被洗涤的任何织物。该溶液优选具有从约5.5至约11.5的pH。可以在溶液中按以下浓度使用组合物：从约100ppm，优选500ppm至约15,000ppm。水温的范围典型地是从约5℃至约95℃，包括约10℃、约15℃、约20℃、约25℃、约30℃、约35℃、约40℃、约45℃、约50℃、约55℃、约60℃、约65℃、约70℃、约75℃、约80℃、约85℃以及约90℃。水与织物之比典型地是从约1:1至约30:1。
在具体实施例中，在以下pH下执行该洗涤方法：从约5.0至约11.5、或者从约6至约10.5、约5至约11、约5至约10、约5至约9、约5至约8、约5至约7、约5.5至约11、约5.5至约10、约5.5至约9、约5.5至约8、约5.5至约7、约6至约11、约6至约10、约6至约9、约6至约8、约6至约7、约6.5至约11、约6.5至约10、约6.5至约9、约6.5至约8、约6.5至约7、约7至约11、约7至约10、约7至约9、或者约7至约8、约8至约11、约8至约10、约8至约9、约9至约11、约9至约10、约10至约11，优选约5.5至约11.5。
在具体实施例中，在以下硬度下执行该洗涤方法：从约0°dH至约30°dH，如约1°dH、约2°dH、约3°dH、约4°dH、约5°dH、约6°dH、约7°dH、约8°dH、约9°dH、约10°dH、约11°dH、约12°dH、约13°dH、约14°dH、约15°dH、约16°dH、约17°dH、约18°dH、约19°dH、约20°dH、约21°dH、约22°dH、约23°dH、约24°dH、约25°dH、约26°dH、约27°dH、约28°dH、约29°dH、约30°dH。在典型欧洲洗涤条件下，硬度是约16°dH，在典型美国洗涤条件下，是约6°dH，并且在典型亚洲洗涤条件下，是约3°dH。
根据本发明的洗涤剂组合物进一步理想地适合用于餐具洗涤应用，例如自动餐具洗涤。因此，在一个方面，本发明涉及一种使用如在此描述的洗涤剂组合物在自动餐具洗涤机中进行餐具洗涤的方法，该方法包括以下步骤：将所述洗涤剂组合物添加在所述自动餐具洗涤机中的洗涤剂组合物室内，并且在主洗涤循环期间释放所述洗涤剂组合物。因此，使用如下洗涤剂组合物在自动餐具洗涤机中进行餐具洗涤的方法，该洗涤剂组合物包含：(i)至少一种α-淀粉酶变体，其包含在对应于SEQ ID NO:1的位置1、54、56、72、109、113、116、134、140、159、167、169、172、173、174、181、182、183、184、189、194、195、206、255、260、262、265、284、289、304、305、347、391、395、439、469、444、473、476、或477的一个或多个位置处的修饰，其中所述α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:1具有至少75％但小于100％的序列一致性，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；以及(ii)至少一种具有蛋白酶活性的蛋白酶，其中所述蛋白酶选自由以下组成的组：(a)与SEQ ID NO:2、3、19、20、或23的序列具有至少70％、如至少75％、如至少80％、如至少85％、如至少90％、如至少95％、如至少98％、如至少99％、如100％的序列一致性的蛋白酶；(b)包含在对应于SEQ ID NO:2的位置171、173、175、179或180的一个或多个位置处的取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ IDNO:2具有至少75％但小于100％的序列一致性；(c)与SEQ ID NO:3中的蛋白酶相比，在对应于位置32、33、48、49、50、51、52、53、54、58、59、60、61、62、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、116、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、150、152、153、154、155、156、158、159、160、161、164、169、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、197、198、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、和216的一个或多个位置处包含修饰的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:3具有至少75％的序列一致性，(d)包含在对应于位置9、15、27、42、52、55、56、59、60、66、74、85、97、99、101、102、104、116、118、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、198、199、200、203、206、210、211、212、216、230、232、239、242、250、253、255、256、或269的一个或多个位置处的取代的蛋白酶变体，其中编号根据SEQ ID NO:3所述，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:3具有至少60％序列一致性，以及(e)与SEQ ID NO:23中所示的蛋白酶相比，在对应于位置32、33、49、50、51、52、53、54、55、60、61、62、63、64、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、118、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、152、154、155、156、157、158、161、162、163、167、170、175、181、187、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、203、204、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、或222的一个或多个位置处包含取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ IDNO:23具有至少75％的序列一致性，该方法包括以下步骤：将所述洗涤剂组合物添加在所述自动餐具洗涤机中的洗涤剂组合物室内，并且在主洗涤循环期间释放所述洗涤剂组合物。
用于在上述方法中使用的组合物可以进一步包含至少一种如以上部分中列出的另外的酶，例如选自下组的酶，该组由以下各项组成：水解酶，例如蛋白酶、脂肪酶和角质酶；碳水化物酶，例如淀粉酶、纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、和果胶酶；或其组合。
通过以下实例进一步描述本发明，所述实例不应理解为对本发明范围的限制。实例
材料与方法
常规分子生物学方法：
除非另外提及，使用标准分子生物学方法进行DNA操纵和转化(Sambrook等人(1989)；Ausubel等人(1995)；Harwood和Cutting(1990))。
用于衣物洗涤的自动机械应力测定(AMSA)
为了评价洗涤性能，使用自动机械应力测定(AMSA)进行衣物洗涤实验。使用AMSA，可以检査大量小体积酶洗涤剂溶液的洗涤性能。AMSA平板具有许多用于测试溶液的缝和盖子，盖子针对所有缝开口强力挤压衣物洗涤样品(有待洗涤的纺织品)。在洗涤时间期间，板、测试溶液、纺织品和盖子剧烈振动从而使测试溶液与纺织品接触并以规则、周期性摆动方式施加机械应力。关于进一步描述，参见WO02/42740，尤其是第23-24页的“特定方法实施例(Special method embodiments)”段落。
将洗涤性能作为所洗涤纺织品颜色的亮度进行测量。亮度也可以表达为当用白光照亮时从样品反射的光的强度。当样品被沾污时，反射光的强度低于干净样品的反射光的强度。因此，反射光的强度可以用于测量洗涤性能。
使用专业平板扫描仪(Kodak iQsmart(柯达公司(Kodak))，Midtager 29，DK-2605(丹麦))进行颜色测量，该扫描仪用于捕获所洗涤纺织品的图像。
为了从扫描的图像中提取光强度值，将来自图像的24-位像素值转化为红、绿以及蓝(RGB)的值。通过将RGB值作为向量进行加和并且然后取所得向量的长度来计算强度值(Int)：
表1a：标准洗涤剂和测试材料的组成
化合物 化合物的含量(％w/w) 活性组分(％w/w)
LAS 12.0 97
AEOS，SLES 17.6 28
大豆脂肪酸 2.8 90
可可脂肪酸 2.8 99
AEO 11.0 100
氢氧化钠 1.8 99
乙醇/丙-2-醇 3.0 90/10
MPG 6.0 98
甘油 1.7 99.5
TEA 3.3 100
甲酸钠 1.0 95
柠檬酸钠 2.0 100
DTMPA(作为Na7盐) 0.5 42
PCA(作为Na盐) 0.5 40
苯氧基乙醇 0.5 99
离子交换水 33.6 ---
通过将CaCl2、MgCl2和NaHCO3(Ca2+:Mg2+:HCO3-＝4:1:7.5)添加至测试系统中将水硬度调节至15°dH。在洗涤之后，将纺织品用自来水冲洗并干燥。
表1b：标准洗涤剂X
化合物 化合物的含量(％w/w) 活性组分(％w/w)
LAS 16.5 91
AEO* 2 99.5
碳酸钠 20 100
(二)硅酸钠 12 82.5
沸石A 15 80
硫酸钠 33.5 100
PCA 1 100
*在没有AEO的情况下混合标准洗涤剂X。在洗涤之前，单独地添加AEO。
通过将CaCl2、MgCl2、以及NaHCO3(Ca2+:Mg2+:HCO3-＝2:1:4.5)添加至测试系统中将水硬度调节至12°dH。在洗涤之后，将纺织品用自来水冲洗并干燥。
表1c：标准洗涤剂O
化合物 化合物的含量(％w/w)
LAS 4
AEOS 8
AOE 4
皂 1
通过将CaCl2、MgCl2、以及NaHCO3(Ca2+:Mg2+:HCO3-＝2:1:4.5)添加至测试系统中将水硬度调节至12°dH。在洗涤之后，将纺织品用自来水冲洗并干燥。
表1d：标准洗涤剂Z
化合物 化合物的含量(％w/w) 活性组分％(％w/w)
LAS 7.0 85.3
皂 1.1 93
AEO* 1.5 99.5
苏打灰 20.1 99.5
含水硅酸钠 10.0 80.1
沸石A 5.0 80
柠檬酸钠 2.0 100
HEDP-Na4 0.2 84
聚丙烯酸酯 1.1 92
硫酸钠 52.0 100
*在没有AEO的情况下混合标准洗涤剂Z。在洗涤之前，单独地添加AEO。
通过将CaCl2、MgCl2、以及NaHCO3(Ca2+:Mg2+:HCO3＝4:1:7.5)添加至测试系统中将水硬度调节至15°dH。在洗涤之后，将纺织品用自来水冲洗并干燥。用4M NaOH调节pH。
表1e：具有漂白剂的标准洗涤剂Z
*在没有AEO的情况下混合标准洗涤剂Z。在洗涤之前，单独地添加AEO。
通过将CaCl2、MgCl2、以及NaHCO3(Ca2+:Mg2+:HCO3＝4:1:7.5)添加至测试系统中将水硬度调节至15°dH。在洗涤之后，将纺织品用自来水冲洗并干燥。用4M NaOH调节pH。
表1f：液体基础洗涤剂配制品(总组合物中的％w/w)
0如在此披露的α-淀粉酶。
1如在此披露的蛋白酶或其在此披露的变体
2其他酶可以包括甘露聚糖酶、果胶裂解酶、脂肪酶、内切葡聚糖酶和纤维素酶。
用于自动餐具洗涤的自动机械应力测定(AMSA)
制备测试溶液，该测试溶液包含水(21°dH)、3.94g/L具有漂白剂的ADW标准洗涤剂或3.45g/L不具有漂白剂的ADW标准洗涤剂(如下所述的)、和本发明的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物的浓度为0.03、0.06、0.12和0.24mg酶蛋白/L(40℃)或0.01、0.03、0.06和0.12mg酶蛋白/L(50℃)。按照如下说明，添加用与洗涤剂组合物中存在的酶相关的污物(如淀粉)玷污的织物(来自试验材料BV中心(邮箱120，3133KT，弗拉尔丁恩，荷兰)的CS-28)，并且将其在40℃和50℃洗涤10或20分钟。在流动自来水下彻底漂洗并且在黑暗中干燥之后，随后测量带有污渍的织物的光强度值作为洗涤性能的量度。具有0mg酶蛋白/L的测试用作空白并且对应于来自洗涤剂的贡献。优选地，在洗涤步骤期间施加机械作用，例如以将洗涤溶液与织物和瓷砖一起振摇、转动或搅拌的形式施加。AMSA洗涤性能实验在下面指定的实验条件下进行：
表2：实验条件
表3：具有漂白剂的ADW标准洗涤剂
化合物 活性成分含量 活性组分级分
MGDA(Trilon M颗粒SG) 20％ 59％
柠檬酸钠 20％ 100％
碳酸钠 20％ 100％
过碳酸钠 10％ 88％
硅酸钠 5％ 80％
硫酸钠 12％ 100％
Acusol 588G 5％ 92％
TAED 3％ 92％
Surfac 23-6.5(液体) 5％ 100％
表4：不具有漂白剂的ADW标准洗涤剂
化合物 活性成分含量 活性组分级分
MGDA(Trilon M颗粒SG) 33％ 59％
柠檬酸钠 20％ 100％
碳酸钠 20％ 100％
硅酸钠 6％ 80％
硫酸钠 12％ 100％
Acusol 588G 5％ 92％
Surfac 23-6.5(液体) 5％ 100％
通过将CaCl2、MgCl2、以及NaHCO3(Ca2+:Mg2+:HCO3-＝4:1:10)添加至测试系统中将水硬度调节至21°dH。在洗涤之后，将纺织品用自来水冲洗并干燥。
洗涤性能可以被测量为亮度，表达为当用白光照亮时从样品反射的光的强度。当样品被沾污时，其反射光的强度低于干净样品的反射光强度。因此，反射光的强度可以用于测量洗涤性能。
使用专业平板扫描仪(EPSON Expression 10000XL,EPSON)进行颜色测量，该扫描仪用于捕获所洗涤纺织品的图像。
为了从扫描图像中提取光强度的值，将来自图像的48×24位彩色像素值转化为红色、绿色和蓝色(RGB)的值。通过将RGB值作为向量进行加和并且然后取所得向量的长度来计算强度值(Int)：
完全自动餐具洗涤(ADW)
按照如下说明，将用例如淀粉玷污的三聚氰胺瓷砖(来自测试材料中心BV(邮箱120，3133KT，弗拉尔丁恩，荷兰)的CS-28)用作测试材料，并使用21°dH的水在40℃和50℃下在设定程序下进行洗涤。在运行机器程序三分钟后，添加洗涤剂和浓度为2.55mg酶/洗涤或5.12mg酶/洗涤的酶。在流动自来水下彻底漂洗并且在黑暗中干燥之后，随后测量带有污渍的瓷砖的光强度值作为洗涤性能的量度。具有0mg酶蛋白/L的测试用作空白并且对应于来自洗涤剂的贡献。完全洗涤性能实验在下面指定的实验条件下进行：
表5：实验条件
表6：具有漂白剂的ADW标准洗涤剂
化合物 活性成分含量 活性组分级分
MGDA(Trilon M颗粒SG) 20％ 59％
柠檬酸钠 20％ 100％
碳酸钠 20％ 100％
过碳酸钠 10％ 88％
硅酸钠 5％ 80％
硫酸钠 12％ 100％
Acusol 588G 5％ 92％
TAED 3％ 92％
Surfac 23-6.5(液体) 5％ 100％
表7：不具有漂白剂的ADW标准洗涤剂
化合物 活性成分含量 活性组分级分
MGDA(Trilon M颗粒SG) 33％ 59％
柠檬酸钠 20％ 100％
碳酸钠 20％ 100％
硅酸钠 6％ 80％
硫酸钠 12％ 100％
Acusol 588G 5％ 92％
Surfac 23-6.5(液体) 5％ 100％
在洗涤之后，将三聚氰胺瓷砖用自来水沖洗并干燥。
将洗涤性能作为反射差来测量。使用用于获取光谱和进行反射差和/或色差计算的Color-Eye 7000(CE7000)进行反射值测量。在460nm处(发光体中没有UV光)测量反射值。
α-淀粉酶活性测定-pNP-G7测定
可以通过使用G7-pNP底物的方法确定α-淀粉酶活性。缩写为4,6-亚乙基(G7)-对硝基苯基(G1)-α,D-麦芽庚糖苷的G7-pNP是一种可以被内切淀粉酶例如α-淀粉酶切割的嵌段寡糖。切割之后，试剂盒中所包括的α-葡糖苷酶进一步消化水解底物以释放自由PNP分子，该分子具有黄颜色并且因而可以通过可见光分光光度法在λ＝405nm(400-420nm)处测量。包含G7-pNP底物和α-葡糖苷酶的试剂盒由Roche/Hitachi制造(目录号11876473)。
试剂：
来自这个试剂盒的G7-pNP底物包含22mM 4,6-亚乙基-G7-pNP和52.4mM HEPES(2-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]-乙磺酸)，pH 7.0。
α-葡糖苷酶试剂包含52.4mM HEPES、87mM NaCl、12.6mM MgCl2、0.075mM CaCl2、>4kU/L的α-葡糖苷酶。
通过将1mLα-葡糖苷酶试剂与0.2mL G7-pNP底物混合，制成底物工作溶液。此底物工作溶液在使用之前立即制成。
稀释缓冲液：50mM MOPS，0.05％(w/v)Triton X100(聚乙二醇对-(1,1,3,3-四甲基丁基)-苯基醚(C14H22O(C2H4O)n(n＝9-10)))，1mM CaCl2，pH 8.0。
程序：
将待分析的淀粉酶样品稀释于稀释缓冲液中以确保稀释样品中的pH是7。通过将20μl稀释的酶样品转移至96孔微量滴定板中并添加80μl底物工作溶液来进行测定。将溶液混合并在室温预温育1分钟并且在OD 405nm经5分钟每20秒测量吸收。
在给定的一组条件下，时间依赖性吸收曲线的斜率(每分钟的吸光度)与所讨论的α-淀粉酶的比活性(活性/mg酶)成正比。淀粉酶样品应稀释至其中斜率为0.4吸光度单位/分钟以下的水平。
α-淀粉酶活性测定-Phadebas活性测定
α-淀粉酶活性还可以通过使用Phadebas底物(例如来自瑞典隆德麦戈尔生命科学(Magle Life Sciences,Lund,Sweden))的方法来确定。Phadebas片剂包括互联淀粉聚合物，这些聚合物呈不溶于水的球状微球形式。将蓝色染料共价结合至这些微球。微球中的互联淀粉聚合物以与α-淀粉酶活性成比例的速度降解。当α-淀粉酶降解了淀粉聚合物时，释放的蓝色染料是可溶于水的并且染料浓度可通过在620nm下测量吸光度来确定。蓝色的浓度与样品中的α-淀粉酶活性成比例。
将待分析的α-淀粉酶样品稀释于具有所希望的pH的活性缓冲液中。将两个底物片剂悬浮于5mL活性缓冲液中并且在磁力搅拌器上混合。在混合底物期间，将150μl转移至微量滴定板(MTP)或PCR-MTP。将30μl稀释的淀粉酶样品添加至150μl底物并混合。在37℃温育15分钟。通过添加30μl 1M NaOH并且混合来停止反应。在4000xg离心MTP 5分钟。将100μl转移至新的MTP并且测量620nm的吸光度。
该α-淀粉酶样品应稀释成使得620nm下的吸光度在0与2.2之间，并且在活性测定的线性范围内。
α-淀粉酶活性测定-Amylazyme活性测定
α-淀粉酶活性还可以通过使用包括已经与乳糖和硬脂酸镁混合并且压片的AZCL-直链淀粉的淀粉酶底物(Amylazyme Test，由梅格泽姆公司(Megazyme)提供的用于谷类和细菌淀粉酶的测定法)的方法来确定。将蓝色染料共价结合至这些微球。微球中的互联直链淀粉聚合物以与α-淀粉酶活性成比例的速度降解。当α-淀粉酶降解了直链淀粉聚合物时，释放的蓝色染料是可溶于水的并且染料浓度可通过在590nm下测量吸光度来确定。蓝色的浓度与样品中的α-淀粉酶活性成比例。
将待分析的α-淀粉酶样品稀释于具有所希望的pH的活性缓冲液中。将两个底物片剂悬浮于5mL活性缓冲液中并且在磁力搅拌器上混合。在混合底物期间，将150μl转移至微量滴定板(MTP)或PCR-MTP。接下来，将25μl稀释的淀粉酶样品添加到150μl底物中并混合。将混合物在37℃下孵育10分钟。通过添加25μl 1M NaOH并且混合来停止反应。将MTP在4000xg离心5分钟，随后将100μl转移至新的MTP，并在590nm处测量吸光度。
蛋白酶活性测定：
1)Suc-AAPF-pNA活性测定：
蛋白水解活性可以通过使用Suc-AAPF-PNA底物的方法来确定。Suc-AAPF-PNA是N-琥珀酰基-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-对硝基苯胺的缩写，并且它是可以被内切蛋白酶切割的一种嵌段肽。在切割后，一个游离PNA分子被释放出来，并且它具有黄颜色并且因此可以通过可见光分光光度法在波长405nm进行测量。该Suc-AAPF-PNA底物由巴亨公司(Bachem)制造(目录号L1400，溶解于DMSO中)。
待分析的蛋白酶样品被稀释在残余活性缓冲液(100mM Tris pH 8.6)中。通过转移60μl的稀释的酶样品至96孔微量滴定板并添加140μl底物工作溶液(0.72mg/ml于100mMTris pH 8.6)中进行该测定。将该溶液在室温混合并且在OD 405nm经5分钟每20秒测量吸收。
在一组给定条件下，时间相关吸收曲线的斜率(每分钟的吸光度)与所讨论的蛋白酶的比活性(活性/mg酶)成正比例。应该将蛋白酶样品稀释至其中斜率为线性的水平。
实例1：制备和测试包含在本发明的洗涤剂组合物中的变体
构建亲本α-淀粉酶(SEQ ID NO:1和14)和亲本蛋白酶(SEQ ID NO:2和3)的定点变体，这些变体在如本文其他地方所限定的区域中包含具体的修饰。使用PCR连同正确地设计的诱变寡核苷酸(其在所得序列中引入所希望的突变)，通过传统的DNA片段克隆制得这些变体(Sambrook等人，Molecular Cloning:A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册]，第2版，冷泉港，1989)。对应于在希望的一个或多个突变位点侧翼的DNA序列合成诱变的寡核苷酸，其由限定插入/缺失/取代的DNA碱基对分离。以此方式，构建并产生下表2a中所列的变体。
变体发酵
可以通过本领域熟知的或如以下的方法进行发酵。将具有相关表达质粒的枯草杆菌菌株划线接种在具有相关抗生素(6μg/ml氯霉素)的LB-琼脂板上，并在37℃下生长过夜。
将菌落转移到500ml摇瓶中补充有相关抗生素的100ml PS-1培养基中，其含有丰富培养基(例如PS-1：100g/L蔗糖(丹尼斯克(Danisco)目录号109-0429)、40g/L大豆壳(大豆粉)、10g/L Na2HPO4.12H2O(默克(Merck)目录号6579)、0.1ml/L普朗尼克(Pluronic)PE6100(BASF 102-3098))。典型地在30℃下在220rpm的振摇下进行4天的培养。通过在4500rpm下离心20-25分钟从发酵液中除去细胞和其他未溶解的材料。然后，过滤出上清液以获得澄清溶液。
实例2：在手动餐具洗涤(MDW)中α-淀粉酶和蛋白酶的组合
为了证明α-淀粉酶变体与蛋白酶变体组合在手动餐具洗涤中的益处，使用下述方法和条件进行实验。
方法概述
将玷污的三聚氰胺瓷砖浸泡在Beromin洗涤剂基础溶液(浓度为0.5g/L)中，该溶液包含指定量的酶并且具有43℃的起始温度持续给定的时间段-典型地是0、15或30分钟。
浸泡后，将给定的瓷砖放置在手动餐具洗涤(MDW)擦洗机中并且擦洗给定的次数-典型地是12、24或32次。
擦洗后，将该瓷砖在流动的自来水下轻轻地冲洗5秒，并且水平横放在室温下干燥至少2h。
干燥后，使用标准的色眼装置(Color Eye apparatus)(麦克贝斯公司(Macbeth)(美国、英国、德国)，供应商：拉尔哥(Largo)，型号：370)测量瓷砖中心的R460值。
玷污的瓷砖
所使用的玷污的瓷砖是标准的玷污的三聚氰胺瓷砖，意在测试餐具洗涤洗涤剂的清洁能力，这些瓷砖在CFT餐具洗涤监控器(CFT Dishwash Monitor)的名下销售。这些瓷砖由测试材料BV中心(弗拉尔丁恩，荷兰)生产。使用由产品编号识别的以下玷污的瓷砖：
·DM-42蓝莓派
·DM-03肉馅土豆馅饼(Shepherd’s Pie)
·DM-75巧克力布丁
MDW擦洗机
使用的MDW擦洗机是由电气化机械装置(常规厨房餐具洗涤海绵被固定在该电气化机械装置的握臂上)组成的AB5000摩擦和耐洗性测试机(TQC热输入质量控制(TQCThermimport Quality Control)，艾瑟尔河畔卡佩勒(Capelle aan den IJssel)，荷兰)。在操作中，使握臂以及因此海绵以可再现的一致方式在玷污的瓷砖上来回来回移动给定的次数，该次数使用并入该擦洗机内的计数器设定。该机器进一步包括一个槽，其中可以安装一个可替换的扁平的玷污的瓷砖(约10cm*12cm*0.5cm)以便其可以与握臂上的海绵接合。在握臂移动循环中的某个位置，使海绵与玷污的瓷砖的表面接触，并且以可再现的方式在玷污的瓷砖上横移。海绵在玷污的瓷砖上产生恒定的压力，像一个人在手动餐具洗涤过程期间清洁给定的玷污的厨房用具的表面那样。在擦洗过程中，有洗涤剂溶液(具有或不具有酶组合物)流到正在被清洁的玷污的瓷砖上。流速为3mL/min并且水硬度为15°dH(Ca2+:Mg2 +:HCO3-＝4:1:7.5)。
酶
所使用的α-淀粉酶是具有以下修饰的SEQ ID NO:14的α-淀粉酶变体：H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K，并且所使用的蛋白酶是下表中所示的剂量中使用的SEQ ID NO:21的蛋白酶(蛋白酶2)。
结果：
所使用的玷污的瓷砖是DM-03肉馅土豆馅饼(表8)、DM-42蓝莓酸奶(表9)、DM-75巧克力布丁(表10)。在洗涤剂上并基于100％洗涤剂剂量给予酶水平。每个测试的变量组合的重复次数为二。污物去除通过使用标准的色眼装置在460nm处测量反射值来评估。
表8：淀粉酶和蛋白酶对DM-03肉馅土豆馅饼去除的效果。4,95+/-0,14的R460值相当于“没有去污”。
表9：淀粉酶和蛋白酶对DM-42蓝莓酸奶去除的效果4,95+/-0,14的R460值相当于“没有去污”。
表10：α-淀粉酶和蛋白酶变体对DM-75巧克力布丁去除的效果4,95+/-0,14的R460值相当于“没有去污”。
实例3：在手动餐具洗涤(MDW)中α-淀粉酶和蛋白酶的组合
实例2中使用的酶在另一种洗涤剂基料中以及在其他瓷砖上进行测试。因此，除了洗涤剂基料为0.6g/L的100％洗涤剂剂量中的W5(商业购买的来自Lidl公司(丹麦)的手动餐具洗涤洗涤剂)，所测试的玷污的瓷砖仅为DM-42蓝莓酸奶，并且所实施的洗涤次数为12和24以外，所进行的方法与实例2相同。
结果：
所使用的玷污的瓷砖是DM-42蓝莓酸奶(表11)。所使用的洗涤剂、α-淀粉酶和蛋白酶如实例2中所述。在洗涤剂上并基于100％洗涤剂剂量给予酶水平。每个测试的变量组合的重复次数为二。污物去除通过使用标准的色眼装置在460nm处测量反射值来评估。
表11：α-淀粉酶和蛋白酶对DM-42蓝莓酸奶去除的效果。4,95+/-0,14的R460值相当于“没有去污”。
实例4：淀粉酶和蛋白酶在MDW中的用途
如实例2中所描述的进行实验，规格如下：
·洗涤剂：手动餐具洗涤基料(从公司(丹麦)获得)
·100％洗涤剂剂量：5/L
·玷污的瓷砖：DM-07肉酱意大利面(Pasta Bolognese)、DM-54有巧克力的燕麦粥、和DM-06烤乳酪(Baked Cheese)
·应用在污物上的擦洗次数：12和32
·对于DM-06烤乳酪，将75g重量放在机器中的海绵上
结果
从该实验中获得的结果示于下表中；表12显示对DM-07肉酱意大利面的效果，表13显示对DM-54有巧克力的燕麦粥的效果，并且表14显示对DM-06烤乳酪的效果。
表12：淀粉酶和蛋白酶对DM-07肉酱意大利面的效果
所示的淀粉酶和蛋白酶的组合的协同效应是“调整的R460”和“预期的R460”之间的差，其被计算为：(调整的R460)–(预期的R460)＝协同作用＝>56.65–45.16＝11.49。
表13：淀粉酶和蛋白酶对DM-54有巧克力的燕麦粥的效果
所示的淀粉酶和蛋白酶的组合的协同效应是“调整的R460”和“预期的R460”之间的差，其被计算为：(调整的R460)–(预期的R460)＝协同作用＝>26.53–8.49＝18.04。
表14：淀粉酶和蛋白酶对DM-06烤乳酪的效果
所示的淀粉酶和蛋白酶的组合的协同效应是“调整的R460”和“预期的R460”之间的差，其被计算为：(调整的R460)–(预期的R460)＝协同作用＝>53.27–45.76＝7.51。
实例5：衣物洗涤Tergo-O-Meter(TOM)试验中的α-淀粉酶和蛋白酶
TOM洗涤是模拟“顶部加载型/立式滚筒(Top-loader/Vertical Drum)”洗衣机洗涤的小规模测试。TOM主要用于在不同洗涤条件下进行的衣物洗涤测试。测试了以下酶(及其组合)；
表15：测试的酶变体
将玷污的小块布样用具有或不具有酶的洗涤剂在TOM设定中洗涤。洗涤后，通过使用Macbeth Color-Eye 7000Remissions分光光度计测量光反射来确定这些小块布样的去污。
方法
通过添加CaCl2和MgCl2将水硬度调节至14°dH(CaCl2:MgCl2＝3:2)，添加所需量的洗涤剂(标准O型，浓度为2g/L)，并将桶中的温度调节至30℃来制备洗涤溶液。在磁力搅拌过程中将洗涤剂溶解15分钟(洗涤溶液在制备后30-60分钟内使用)。
TOM中的水浴中的温度和旋转分别设定为30℃和120rpm。当根据设定调节温度时，将1000mL的洗涤溶液添加到TOM烧杯中。
将小块布样(伊利(Yili)谷物牛奶污渍(由红米、红豆、花生、牛奶组成的自制污渍)和025KC褐色酱(获得自测试材料BV中心(Center For Testmaterials BV)(弗拉尔丁恩，荷兰))、酶(0.188mg EP/L蛋白酶和0.0104mg EP/L或0.0208mg EP/L淀粉酶)、和压载物(多达30g)添加到烧杯中并洗涤20分钟。用5L烧杯中的冷自来水冲洗小块布样10分钟(流动水)。将小块布样分类、平放在滤纸上，前面部位向上，并在室温下干燥过夜。
纺织品/小块布样
从测试材料BV中心(Center for Testmaterials BV)(邮箱120，3133KT，弗拉尔丁恩，荷兰)获得纺织品样品(在此也称为小块布样)025KC(褐色酱)，并如表16中所述制备伊利谷物牛奶小块布样：
表16：伊利谷物牛奶污渍
将伊利谷物牛奶和碳黑溶液混合并搅拌1小时。将600mL混合物装载到小块布样CN42上，并在室温下干燥过夜。
将洗涤性能作为所洗涤的纺织品的颜色的亮度来测量，表示为反射值(REM)。使用Macbeth Color-Eye 7000Remissions分光光度计进行反射测量。测量每个干燥的小块布样。由于来自背景的干扰的风险，在测量反射期间将小块布样置于两层织物的顶部。在460nm处测量反射。不包括UV滤光片。结果作为Δ反射值示于表17和18中。
表17：伊利谷物牛奶污渍的TOM规模洗涤结果
表18：025KC褐色酱污渍的TOM规模洗涤结果
表17和18显示了个体酶的测量的Δ反射值、预期的Δ反射值和实际的Δ反射值。可以看出，淀粉酶和蛋白酶的组合的协同效应是“实际的Δ反射值”和“预期的Δ反射值”之间的差。所有协同作用观察值在Δ反射值上均高于单独的酶。
序列表
<110> 诺维信公司
<120> 包含蛋白酶变体和淀粉酶变体的洗涤剂组合物
<130> 14000-EP-EPA
<160> 23
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 485
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种
<400> 1
His His Asp Gly Thr Asn Gly Thr Ile Met Gln Tyr Phe Glu Trp Asn
1 5 10 15
Val Pro Asn Asp Gly Gln His Trp Asn Arg Leu His Asn Asn Ala Gln
20 25 30
Asn Leu Lys Asn Ala Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Lys Ala Glu Leu Glu Arg Ala Ile Arg Ser Leu Lys Ala Asn Gly
85 90 95
Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Phe Thr Glu Arg Val Gln Ala Val Glu Val Asn Pro Gln Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Val Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Glu Ala Trp Thr Gly Phe Asn
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Gln His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Thr Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Leu Ala Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp
180 185 190
Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met
195 200 205
Asp His Pro Glu Val Ile Asn Glu Leu Asn Arg Trp Gly Val Trp Tyr
210 215 220
Ala Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His
225 230 235 240
Ile Lys Phe Ser Phe Met Arg Asp Trp Leu Gly His Val Arg Gly Gln
245 250 255
Thr Gly Lys Asn Leu Phe Ala Val Ala Glu Tyr Trp Lys Asn Asp Leu
260 265 270
Gly Ala Leu Glu Asn Tyr Leu Ser Lys Thr Asn Trp Thr Met Ser Ala
275 280 285
Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Gln Ala Ser Asn Ser Ser
290 295 300
Gly Asn Tyr Asp Met Arg Asn Leu Leu Asn Gly Thr Leu Val Gln Arg
305 310 315 320
His Pro Ser His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro
325 330 335
Gly Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Gln Gly Trp Phe Lys Pro Leu Ala
340 345 350
Tyr Ala Thr Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Gln Val Phe Tyr
355 360 365
Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Ser Asp Gly Val Pro Ser Tyr Arg Gln
370 375 380
Gln Ile Asp Pro Leu Leu Lys Ala Arg Gln Gln Tyr Ala Tyr Gly Arg
385 390 395 400
Gln His Asp Tyr Phe Asp His Trp Asp Val Ile Gly Trp Thr Arg Glu
405 410 415
Gly Asn Ala Ser His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp
420 425 430
Gly Pro Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Arg Gln Lys Ala Gly
435 440 445
Glu Val Trp His Asp Met Thr Gly Asn Arg Ser Gly Thr Val Thr Ile
450 455 460
Asn Gln Asp Gly Trp Gly His Phe Phe Val Asn Gly Gly Ser Val Ser
465 470 475 480
Val Trp Val Lys Arg
485
<210> 2
<211> 311
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种
<400> 2
Ala Val Pro Ser Thr Gln Thr Pro Trp Gly Ile Lys Ser Ile Tyr Asn
1 5 10 15
Asp Gln Ser Ile Thr Lys Thr Thr Gly Gly Ser Gly Ile Lys Val Ala
20 25 30
Val Leu Asp Thr Gly Val Tyr Thr Ser His Leu Asp Leu Ala Gly Ser
35 40 45
Ala Glu Gln Cys Lys Asp Phe Thr Gln Ser Asn Pro Leu Val Asp Gly
50 55 60
Ser Cys Thr Asp Arg Gln Gly His Gly Thr His Val Ala Gly Thr Val
65 70 75 80
Leu Ala His Gly Gly Ser Asn Gly Gln Gly Val Tyr Gly Val Ala Pro
85 90 95
Gln Ala Lys Leu Trp Ala Tyr Lys Val Leu Gly Asp Asn Gly Ser Gly
100 105 110
Tyr Ser Asp Asp Ile Ala Ala Ala Ile Arg His Val Ala Asp Glu Ala
115 120 125
Ser Arg Thr Gly Ser Lys Val Val Ile Asn Met Ser Leu Gly Ser Ser
130 135 140
Ala Lys Asp Ser Leu Ile Ala Ser Ala Val Asp Tyr Ala Tyr Gly Lys
145 150 155 160
Gly Val Leu Ile Val Ala Ala Ala Gly Asn Ser Gly Ser Gly Ser Asn
165 170 175
Thr Ile Gly Phe Pro Gly Gly Leu Val Asn Ala Val Ala Val Ala Ala
180 185 190
Leu Glu Asn Val Gln Gln Asn Gly Thr Tyr Arg Val Ala Asp Phe Ser
195 200 205
Ser Arg Gly Asn Pro Ala Thr Ala Gly Asp Tyr Ile Ile Gln Glu Arg
210 215 220
Asp Ile Glu Val Ser Ala Pro Gly Ala Ser Val Glu Ser Thr Trp Tyr
225 230 235 240
Thr Gly Gly Tyr Asn Thr Ile Ser Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His
245 250 255
Val Ala Gly Leu Ala Ala Lys Ile Trp Ser Ala Asn Thr Ser Leu Ser
260 265 270
His Ser Gln Leu Arg Thr Glu Leu Gln Asn Arg Ala Lys Val Tyr Asp
275 280 285
Ile Lys Gly Gly Ile Gly Ala Gly Thr Gly Asp Asp Tyr Ala Ser Gly
290 295 300
Phe Gly Tyr Pro Arg Val Lys
305 310
<210> 3
<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 3
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 4
<211> 269
<212> PRT
<213> 疏绵状嗜热丝孢菌
<400> 4
Glu Val Ser Gln Asp Leu Phe Asn Gln Phe Asn Leu Phe Ala Gln Tyr
1 5 10 15
Ser Ala Ala Ala Tyr Cys Gly Lys Asn Asn Asp Ala Pro Ala Gly Thr
20 25 30
Asn Ile Thr Cys Thr Gly Asn Ala Cys Pro Glu Val Glu Lys Ala Asp
35 40 45
Ala Thr Phe Leu Tyr Ser Phe Glu Asp Ser Gly Val Gly Asp Val Thr
50 55 60
Gly Phe Leu Ala Leu Asp Asn Thr Asn Lys Leu Ile Val Leu Ser Phe
65 70 75 80
Arg Gly Ser Arg Ser Ile Glu Asn Trp Ile Gly Asn Leu Asn Phe Asp
85 90 95
Leu Lys Glu Ile Asn Asp Ile Cys Ser Gly Cys Arg Gly His Asp Gly
100 105 110
Phe Thr Ser Ser Trp Arg Ser Val Ala Asp Thr Leu Arg Gln Lys Val
115 120 125
Glu Asp Ala Val Arg Glu His Pro Asp Tyr Arg Val Val Phe Thr Gly
130 135 140
His Ser Leu Gly Gly Ala Leu Ala Thr Val Ala Gly Ala Asp Leu Arg
145 150 155 160
Gly Asn Gly Tyr Asp Ile Asp Val Phe Ser Tyr Gly Ala Pro Arg Val
165 170 175
Gly Asn Arg Ala Phe Ala Glu Phe Leu Thr Val Gln Thr Gly Gly Thr
180 185 190
Leu Tyr Arg Ile Thr His Thr Asn Asp Ile Val Pro Arg Leu Pro Pro
195 200 205
Arg Glu Phe Gly Tyr Ser His Ser Ser Pro Glu Tyr Trp Ile Lys Ser
210 215 220
Gly Thr Leu Val Pro Val Thr Arg Asn Asp Ile Val Lys Ile Glu Gly
225 230 235 240
Ile Asp Ala Thr Gly Gly Asn Asn Gln Pro Asn Ile Pro Asp Ile Pro
245 250 255
Ala His Leu Trp Tyr Phe Gly Leu Ile Gly Thr Cys Leu
260 265
<210> 5
<211> 485
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种
<400> 5
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Lys Asp Lys Gly Ile Ser Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Ile Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Asn Gln Leu Gln Ala Ala Val Asn Ala Leu Lys Ser Asn Gly
85 90 95
Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Ala Thr Glu Met Val Arg Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Val Ser Gly Glu Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Asn Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Lys Leu Asn Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Gly Trp Asp Trp Glu Val Asp
180 185 190
Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met
195 200 205
Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr
210 215 220
Thr Asn Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His
225 230 235 240
Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Ile Asn His Val Arg Ser Ala
245 250 255
Thr Gly Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu
260 265 270
Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val
275 280 285
Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Lys Ser Gly
290 295 300
Gly Asn Tyr Asp Met Arg Gln Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Arg
305 310 315 320
His Pro Met His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro
325 330 335
Glu Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Glu Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala
340 345 350
Tyr Ala Leu Thr Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr
355 360 365
Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Lys Ser
370 375 380
Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Lys Tyr Ala Tyr Gly Arg
385 390 395 400
Gln Asn Asp Tyr Leu Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu
405 410 415
Gly Asn Thr Ala His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp
420 425 430
Gly Ala Gly Gly Asn Lys Trp Met Phe Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly
435 440 445
Gln Val Trp Thr Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ala Gly Thr Val Thr Ile
450 455 460
Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser
465 470 475 480
Ile Trp Val Asn Lys
485
<210> 6
<211> 485
<212> PRT
<213> 盐敏芽孢杆菌（Bacillus halmapalus）
<400> 6
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Arg Asn Arg Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Ser Gln Leu Glu Ser Ala Ile His Ala Leu Lys Asn Asn Gly
85 90 95
Val Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Ala Thr Glu Asn Val Leu Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Ile Ser Gly Asp Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Phe Gln Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp
180 185 190
Ser Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met
195 200 205
Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Arg Trp Gly Glu Trp Tyr
210 215 220
Thr Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His
225 230 235 240
Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Ala
245 250 255
Thr Gly Lys Glu Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu
260 265 270
Gly Ala Leu Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val
275 280 285
Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Gly
290 295 300
Gly Asn Tyr Asp Met Ala Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Gln Lys
305 310 315 320
His Pro Met His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro
325 330 335
Gly Glu Ser Leu Glu Ser Phe Val Gln Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala
340 345 350
Tyr Ala Leu Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr
355 360 365
Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Ser Val Pro Ala Met Lys Ala
370 375 380
Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Asn Phe Ala Tyr Gly Thr
385 390 395 400
Gln His Asp Tyr Phe Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu
405 410 415
Gly Asn Thr Thr His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp
420 425 430
Gly Pro Gly Gly Glu Lys Trp Met Tyr Val Gly Gln Asn Lys Ala Gly
435 440 445
Gln Val Trp His Asp Ile Thr Gly Asn Lys Pro Gly Thr Val Thr Ile
450 455 460
Asn Ala Asp Gly Trp Ala Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser
465 470 475 480
Ile Trp Val Lys Arg
485
<210> 7
<211> 484
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种
<400> 7
Asn Thr Ala Pro Ile Asn Glu Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Asp
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Val Lys Asn Glu Ala Ala
20 25 30
Asn Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Leu Trp Leu Pro Pro Ala Tyr
35 40 45
Lys Gly Thr Ser Gln Ser Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Ile Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Lys Thr Gln Tyr Ile Gln Ala Ile Gln Ala Ala Lys Ala Ala Gly
85 90 95
Met Gln Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asn His Lys Ala Gly Ala Asp
100 105 110
Gly Thr Glu Phe Val Asp Ala Val Glu Val Asp Pro Ser Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Thr Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Thr Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Asn Arg Ile
165 170 175
Tyr Lys Phe Arg Ser Thr Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr
180 185 190
Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Phe Ala Asp Leu Asp Met Asp
195 200 205
His Pro Glu Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Thr Trp Tyr Val
210 215 220
Asn Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile
225 230 235 240
Lys Tyr Thr Phe Phe Pro Asp Trp Leu Thr Tyr Val Arg Asn Gln Thr
245 250 255
Gly Lys Asn Leu Phe Ala Val Gly Glu Phe Trp Ser Tyr Asp Val Asn
260 265 270
Lys Leu His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Ser Met Ser Leu Phe
275 280 285
Asp Ala Pro Leu His Asn Asn Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Ser Gly
290 295 300
Tyr Phe Asp Met Arg Tyr Leu Leu Asn Asn Thr Leu Met Lys Asp Gln
305 310 315 320
Pro Ser Leu Ala Val Thr Leu Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro Gly
325 330 335
Gln Ser Leu Gln Ser Trp Val Glu Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr
340 345 350
Ala Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr Gly
355 360 365
Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Lys Tyr Asn Ile Pro Gly Leu Lys Ser Lys
370 375 380
Ile Asp Pro Leu Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln
385 390 395 400
Arg Asp Tyr Ile Asp His Gln Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly
405 410 415
Ile Asp Thr Lys Pro Asn Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr Asp Gly
420 425 430
Pro Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Lys His Ala Gly Lys
435 440 445
Val Phe Tyr Asp Leu Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Thr Ile Asn
450 455 460
Ala Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Ile
465 470 475 480
Trp Val Ala Lys
<210> 8
<211> 485
<212> PRT
<213> 噬细胞菌属物种
<400> 8
Ala Ala Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Val Pro
1 5 10 15
Asn Asp Gly Gln Gln Trp Asn Arg Leu Arg Thr Asp Ala Pro Tyr Leu
20 25 30
Ser Ser Val Gly Ile Thr Ala Val Trp Thr Pro Pro Ala Tyr Lys Gly
35 40 45
Thr Ser Gln Ala Asp Val Gly Tyr Gly Pro Tyr Asp Leu Tyr Asp Leu
50 55 60
Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr Lys
65 70 75 80
Gly Glu Leu Lys Ser Ala Val Asn Thr Leu His Ser Asn Gly Ile Gln
85 90 95
Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Ala Gly Ala Asp Tyr Thr
100 105 110
Glu Asn Val Thr Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asn Arg Asn Gln Glu
115 120 125
Thr Ser Gly Glu Tyr Asn Ile Gln Ala Trp Thr Gly Phe Asn Phe Pro
130 135 140
Gly Arg Gly Thr Thr Tyr Ser Asn Phe Lys Trp Gln Trp Phe His Phe
145 150 155 160
Asp Gly Thr Asp Trp Asp Gln Ser Arg Ser Leu Ser Arg Ile Phe Lys
165 170 175
Phe Arg Gly Thr Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Ser Ser Glu Asn
180 185 190
Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Tyr Asp His Pro
195 200 205
Asp Val Val Asn Glu Met Lys Lys Trp Gly Val Trp Tyr Ala Asn Glu
210 215 220
Val Gly Leu Asp Gly Tyr Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys Phe
225 230 235 240
Ser Phe Leu Lys Asp Trp Val Asp Asn Ala Arg Ala Ala Thr Gly Lys
245 250 255
Glu Met Phe Thr Val Gly Glu Tyr Trp Gln Asn Asp Leu Gly Ala Leu
260 265 270
Asn Asn Tyr Leu Ala Lys Val Asn Tyr Asn Gln Ser Leu Phe Asp Ala
275 280 285
Pro Leu His Tyr Asn Phe Tyr Ala Ala Ser Thr Gly Gly Gly Tyr Tyr
290 295 300
Asp Met Arg Asn Ile Leu Asn Asn Thr Leu Val Ala Ser Asn Pro Thr
305 310 315 320
Lys Ala Val Thr Leu Val Glu Asn His Asp Thr Gln Pro Gly Gln Ser
325 330 335
Leu Glu Ser Thr Val Gln Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala Phe
340 345 350
Ile Leu Thr Arg Ser Gly Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr Gly Asp Met
355 360 365
Tyr Gly Thr Lys Gly Thr Thr Thr Arg Glu Ile Pro Ala Leu Lys Ser
370 375 380
Lys Ile Glu Pro Leu Leu Lys Ala Arg Lys Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr
385 390 395 400
Gln Arg Asp Tyr Ile Asp Asn Pro Asp Val Ile Gly Trp Thr Arg Glu
405 410 415
Gly Asp Ser Thr Lys Ala Lys Ser Gly Leu Ala Thr Val Ile Thr Asp
420 425 430
Gly Pro Gly Gly Ser Lys Arg Met Tyr Val Gly Thr Ser Asn Ala Gly
435 440 445
Glu Ile Trp Tyr Asp Leu Thr Gly Asn Arg Thr Asp Lys Ile Thr Ile
450 455 460
Gly Ser Asp Gly Tyr Ala Thr Phe Pro Val Asn Gly Gly Ser Val Ser
465 470 475 480
Val Trp Val Gln Gln
485
<210> 9
<211> 485
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种
<400> 9
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Asn Ser Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Lys Ser Lys Gly Ile Thr Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Ser Gln Leu Gln Ala Ala Val Thr Ser Leu Lys Asn Asn Gly
85 90 95
Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Ala Thr Glu Met Val Arg Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Val Thr Gly Glu Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Arg Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Arg Leu Asn Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly His Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp
180 185 190
Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met
195 200 205
Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr
210 215 220
Thr Asn Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His
225 230 235 240
Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Ile Asn His Val Arg Ser Ala
245 250 255
Thr Gly Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu
260 265 270
Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Gln Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val
275 280 285
Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Lys Ser Gly
290 295 300
Gly Asn Tyr Asp Met Arg Asn Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Arg
305 310 315 320
His Pro Ser His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro
325 330 335
Glu Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Glu Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala
340 345 350
Tyr Ala Leu Thr Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr
355 360 365
Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Arg Ser
370 375 380
Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Lys Tyr Ala Tyr Gly Lys
385 390 395 400
Gln Asn Asp Tyr Leu Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu
405 410 415
Gly Asn Thr Ala His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp
420 425 430
Gly Ala Gly Gly Ser Lys Trp Met Phe Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly
435 440 445
Gln Val Trp Ser Asp Ile Thr Gly Asn Arg Thr Gly Thr Val Thr Ile
450 455 460
Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser
465 470 475 480
Ile Trp Val Asn Lys
485
<210> 10
<211> 483
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种
<400> 10
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Asn Ser Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Lys Ser Lys Gly Ile Thr Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Ser Gln Leu Gln Ala Ala Val Thr Ser Leu Lys Asn Asn Gly
85 90 95
Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Ala Thr Glu Met Val Arg Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Val Thr Gly Glu Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Arg Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Arg Leu Asn Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu
180 185 190
Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met Asp His
195 200 205
Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr Thr Asn
210 215 220
Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His Ile Lys
225 230 235 240
Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Ile Asn His Val Arg Ser Ala Thr Gly
245 250 255
Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu Gly Ala
260 265 270
Ile Glu Asn Tyr Leu Gln Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val Phe Asp
275 280 285
Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Lys Ser Gly Gly Asn
290 295 300
Tyr Asp Met Arg Asn Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Arg His Pro
305 310 315 320
Ser His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro Glu Glu
325 330 335
Ala Leu Glu Ser Phe Val Glu Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala
340 345 350
Leu Thr Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr Gly Asp
355 360 365
Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Arg Ser Lys Ile
370 375 380
Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Lys Tyr Ala Tyr Gly Pro Gln His
385 390 395 400
Asp Tyr Leu Asp His Pro Asp Val Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asp
405 410 415
Ser Ser His Pro Lys Ser Gly Leu Ala Thr Leu Ile Thr Asp Gly Pro
420 425 430
Gly Gly Ser Lys Arg Met Tyr Ala Gly Leu Lys Asn Ala Gly Glu Thr
435 440 445
Trp Tyr Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Lys Ile Gly Ser
450 455 460
Asp Gly Trp Gly Glu Phe His Val Asn Asp Gly Ser Val Ser Ile Tyr
465 470 475 480
Val Gln Lys
<210> 11
<211> 485
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种
<400> 11
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Lys Asp Lys Gly Ile Thr Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Asn Gln Leu Gln Ala Ala Val Thr Ala Leu Lys Ser Asn Gly
85 90 95
Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Ala Thr Glu Trp Val Arg Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Val Ser Gly Asp Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Asn Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
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His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Leu Gln Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Gly Trp Asp Trp Glu Val Asp
180 185 190
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195 200 205
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Thr Asn Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His
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Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Thr
245 250 255
Thr Gly Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Ile
260 265 270
Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Ser Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val
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420 425 430
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435 440 445
Gln Val Trp Arg Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ser Gly Thr Val Thr Ile
450 455 460
Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser
465 470 475 480
Ile Trp Val Asn Asn
485
<210> 12
<211> 483
<212> PRT
<213> 地衣芽胞杆菌
<400> 12
Ala Asn Leu Asn Gly Thr Leu Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Met Pro
1 5 10 15
Asn Asp Gly Gln His Trp Arg Arg Leu Gln Asn Asp Ser Ala Tyr Leu
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Phe Asn His Ser Val Phe Asp Val Pro Leu
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
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325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Glu Pro Ile Leu Lys Ala Arg Lys Gln Tyr Ala Tyr Gly Ala Gln His
385 390 395 400
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405 410 415
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<211> 481
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 人工的
<400> 13
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1 5 10 15
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35 40 45
Gln Ala Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr Asp Leu Gly Glu
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Leu Gln Ser Ala Ile Lys Ser Leu His Ser Arg Asp Ile Asn Val Tyr
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<220>
<223> 人工的
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<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种
<400> 15
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<210> 16
<211> 480
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种
<400> 16
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<212> PRT
<213> 嗜热脂肪芽孢杆菌
<400> 17
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180 185 190
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Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys Phe
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Ser Phe Phe Pro Asp Trp Leu Ser Tyr Val Arg Ser Gln Thr Gly Lys
245 250 255
Pro Leu Phe Thr Val Gly Glu Tyr Trp Ser Tyr Asp Ile Asn Lys Leu
260 265 270
His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu Phe Asp Ala
275 280 285
Pro Leu His Asn Lys Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly Gly Ala Phe
290 295 300
Asp Met Arg Thr Leu Met Thr Asn Thr Leu Met Lys Asp Gln Pro Thr
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Pro Arg Lys
<210> 18
<211> 483
<212> PRT
<213> 解淀粉芽孢杆菌
<400> 18
Val Asn Gly Thr Leu Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Thr Pro Asn Asp
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165 170 175
Gly Glu Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Ser Ser Glu Asn Gly Asn
180 185 190
Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Tyr Asp His Pro Asp Val
195 200 205
Val Ala Glu Thr Lys Lys Trp Gly Ile Trp Tyr Ala Asn Glu Leu Ser
210 215 220
Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Ala Lys His Ile Lys Phe Ser Phe
225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
His Phe Asn Leu Gln Ala Ala Ser Ser Gln Gly Gly Gly Tyr Asp Met
290 295 300
Arg Arg Leu Leu Asp Gly Thr Val Val Ser Arg His Pro Glu Lys Ala
305 310 315 320
Val Thr Phe Val Glu Asn His Asp Thr Gln Pro Gly Gln Ser Leu Glu
325 330 335
Ser Thr Val Gln Thr Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala Phe Ile Leu
340 345 350
Thr Arg Glu Ser Gly Tyr Pro Gln Val Phe Tyr Gly Asp Met Tyr Gly
355 360 365
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370 375 380
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385 390 395 400
Asp Tyr Ile Asp His Pro Asp Val Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asp
405 410 415
Ser Ser Ala Ala Lys Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr Asp Gly Pro
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435 440 445
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Asp Gly Trp Gly Glu Phe His Val Asn Asp Gly Ser Val Ser Ile Tyr
465 470 475 480
Val Gln Lys
<210> 19
<211> 300
<212> PRT
<213> 解淀粉芽孢杆菌
<400> 19
Ala Ala Thr Thr Gly Thr Gly Thr Thr Leu Lys Gly Lys Thr Val Ser
1 5 10 15
Leu Asn Ile Ser Ser Glu Ser Gly Lys Tyr Val Leu Arg Asp Leu Ser
20 25 30
Lys Pro Thr Gly Thr Gln Ile Ile Thr Tyr Asp Leu Gln Asn Arg Glu
35 40 45
Tyr Asn Leu Pro Gly Thr Leu Val Ser Ser Thr Thr Asn Gln Phe Thr
50 55 60
Thr Ser Ser Gln Arg Ala Ala Val Asp Ala His Tyr Asn Leu Gly Lys
65 70 75 80
Val Tyr Asp Tyr Phe Tyr Gln Lys Phe Asn Arg Asn Ser Tyr Asp Asn
85 90 95
Lys Gly Gly Lys Ile Val Ser Ser Val His Tyr Gly Ser Arg Tyr Asn
100 105 110
Asn Ala Ala Trp Ile Gly Asp Gln Met Ile Tyr Gly Asp Gly Asp Gly
115 120 125
Ser Phe Phe Ser Pro Leu Ser Gly Ser Met Asp Val Thr Ala His Glu
130 135 140
Met Thr His Gly Val Thr Gln Glu Thr Ala Asn Leu Asn Tyr Glu Asn
145 150 155 160
Gln Pro Gly Ala Leu Asn Glu Ser Phe Ser Asp Val Phe Gly Tyr Phe
165 170 175
Asn Asp Thr Glu Asp Trp Asp Ile Gly Glu Asp Ile Thr Val Ser Gln
180 185 190
Pro Ala Leu Arg Ser Leu Ser Asn Pro Thr Lys Tyr Gly Gln Pro Asp
195 200 205
Asn Phe Lys Asn Tyr Lys Asn Leu Pro Asn Thr Asp Ala Gly Asp Tyr
210 215 220
Gly Gly Val His Thr Asn Ser Gly Ile Pro Asn Lys Ala Ala Tyr Asn
225 230 235 240
Thr Ile Thr Lys Ile Gly Val Asn Lys Ala Glu Gln Ile Tyr Tyr Arg
245 250 255
Ala Leu Thr Val Tyr Leu Thr Pro Ser Ser Thr Phe Lys Asp Ala Lys
260 265 270
Ala Ala Leu Ile Gln Ser Ala Arg Asp Leu Tyr Gly Ser Gln Asp Ala
275 280 285
Ala Ser Val Glu Ala Ala Trp Asn Ala Val Gly Leu
290 295 300
<210> 20
<211> 300
<212> PRT
<213> 枯草芽孢杆菌
<400> 20
Ala Ala Ala Thr Gly Ser Gly Thr Thr Leu Lys Gly Ala Thr Val Pro
1 5 10 15
Leu Asn Ile Ser Tyr Glu Gly Gly Lys Tyr Val Leu Arg Asp Leu Ser
20 25 30
Lys Pro Thr Gly Thr Gln Ile Ile Thr Tyr Asp Leu Gln Asn Arg Gln
35 40 45
Ser Arg Leu Pro Gly Thr Leu Val Ser Ser Thr Thr Lys Thr Phe Thr
50 55 60
Ser Ser Ser Gln Arg Ala Ala Val Asp Ala His Tyr Asn Leu Gly Lys
65 70 75 80
Val Tyr Asp Tyr Phe Tyr Ser Asn Phe Lys Arg Asn Ser Tyr Asp Asn
85 90 95
Lys Gly Ser Lys Ile Val Ser Ser Val His Tyr Gly Thr Gln Tyr Asn
100 105 110
Asn Ala Ala Trp Thr Gly Asp Gln Met Ile Tyr Gly Asp Gly Asp Gly
115 120 125
Ser Phe Phe Ser Pro Leu Ser Gly Ser Leu Asp Val Thr Ala His Glu
130 135 140
Met Thr His Gly Val Thr Gln Glu Thr Ala Asn Leu Ile Tyr Glu Asn
145 150 155 160
Gln Pro Gly Ala Leu Asn Glu Ser Phe Ser Asp Val Phe Gly Tyr Phe
165 170 175
Asn Asp Thr Glu Asp Trp Asp Ile Gly Glu Asp Ile Thr Val Ser Gln
180 185 190
Pro Ala Leu Arg Ser Leu Ser Asn Pro Thr Lys Tyr Asn Gln Pro Asp
195 200 205
Asn Tyr Ala Asn Tyr Arg Asn Leu Pro Asn Thr Asp Glu Gly Asp Tyr
210 215 220
Gly Gly Val His Thr Asn Ser Gly Ile Pro Asn Lys Ala Ala Tyr Asn
225 230 235 240
Thr Ile Thr Lys Leu Gly Val Ser Lys Ser Gln Gln Ile Tyr Tyr Arg
245 250 255
Ala Leu Thr Thr Tyr Leu Thr Pro Ser Ser Thr Phe Lys Asp Ala Lys
260 265 270
Ala Ala Leu Ile Gln Ser Ala Arg Asp Leu Tyr Gly Ser Thr Asp Ala
275 280 285
Ala Lys Val Glu Ala Ala Trp Asn Ala Val Gly Leu
290 295 300
<210> 21
<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 21
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Glu Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Arg Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asp Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Ile Leu Ser Thr Trp Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Asp Thr Trp Glu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 22
<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 22
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Glu Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Arg Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asp Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Glu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 23
<211> 275
<212> PRT
<213> 解淀粉芽孢杆菌
<400> 23
Ala Gln Ser Val Pro Tyr Gly Val Ser Gln Ile Lys Ala Pro Ala Leu
1 5 10 15
His Ser Gln Gly Tyr Thr Gly Ser Asn Val Lys Val Ala Val Ile Asp
20 25 30
Ser Gly Ile Asp Ser Ser His Pro Asp Leu Lys Val Ala Gly Gly Ala
35 40 45
Ser Met Val Pro Ser Glu Thr Asn Pro Phe Gln Asp Asn Asn Ser His
50 55 60
Gly Thr His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly
65 70 75 80
Val Leu Gly Val Ala Pro Ser Ala Ser Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu
85 90 95
Gly Ala Asp Gly Ser Gly Gln Tyr Ser Trp Ile Ile Asn Gly Ile Glu
100 105 110
Trp Ala Ile Ala Asn Asn Met Asp Val Ile Asn Met Ser Leu Gly Gly
115 120 125
Pro Ser Gly Ser Ala Ala Leu Lys Ala Ala Val Asp Lys Ala Val Ala
130 135 140
Ser Gly Val Val Val Val Ala Ala Ala Gly Asn Glu Gly Thr Ser Gly
145 150 155 160
Ser Ser Ser Thr Val Gly Tyr Pro Gly Lys Tyr Pro Ser Val Ile Ala
165 170 175
Val Gly Ala Val Asp Ser Ser Asn Gln Arg Ala Ser Phe Ser Ser Val
180 185 190
Gly Pro Glu Leu Asp Val Met Ala Pro Gly Val Ser Ile Gln Ser Thr
195 200 205
Leu Pro Gly Asn Lys Tyr Gly Ala Tyr Asn Gly Thr Ser Met Ala Ser
210 215 220
Pro His Val Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ile Leu Ser Lys His Pro Asn
225 230 235 240
Trp Thr Asn Thr Gln Val Arg Ser Ser Leu Glu Asn Thr Thr Thr Lys
245 250 255
Leu Gly Asp Ser Phe Tyr Tyr Gly Lys Gly Leu Ile Asn Val Gln Ala
260 265 270
Ala Ala Gln
275

Claims (17)

1.一种洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含：
(i)至少一种α-淀粉酶变体，其包含在对应于SEQ ID NO:1的位置1、54、56、72、109、113、116、134、140、159、167、169、172、173、174、181、182、183、184、189、194、195、206、255、260、262、265、284、289、304、305、347、391、395、439、469、444、473、476或477的一个或多个位置处的修饰，其中所述α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:1具有至少75％但小于100％的序列一致性，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；以及
(ii)至少一种具有蛋白酶活性的蛋白酶，其中所述蛋白酶选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:2、3、19、20或23的序列具有至少70％、如至少75％、如至少80％、如至少85％、如至少90％、如至少95％、如至少98％、如至少99％、如100％的序列一致性的蛋白酶；
(b)包含在对应于SEQ ID NO:2的位置171、173、175、179或180的一个或多个位置处的取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:2具有至少75％但小于100％的序列一致性；
(c)与SEQ ID NO:3中的蛋白酶相比包含在对应于位置32、33、48、49、50、51、52、53、54、58、59、60、61、62、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、116、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、150、152、153、154、155、156、158、159、160、161、164、169、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、197、198、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215或216的一个或多个位置处的修饰的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:3具有至少75％的序列一致性；
(d)包含在对应于位置9、15、27、42、52、55、56、59、60、66、74、85、97、99、101、102、104、116、118、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、198、199、200、203、206、210、211、212、216、230、232、239、242、250、253、255、256或269的一个或多个位置处的取代的蛋白酶变体，其中编号根据SEQ ID NO:3所述，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:3具有至少60％序列一致性，以及
(e)与SEQ ID NO:23中所示的蛋白酶相比在对应于位置32、33、49、50、51、52、53、54、55、60、61、62、63、64、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、118、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、152、154、155、156、157、158、161、162、163、167、170、175、181、187、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、203、204、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221或222的一个或多个位置处包含取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO:23具有至少75％的序列一致性。
2.根据权利要求1所述的洗涤剂组合物，其中所述α-淀粉酶包含选自下组的一个或多个修饰，该组由以下组成：X1*、X1A、X54S、X56T、X72R、X109A、X113Q、X116Q、X116H、X134E、X140Y、X140F、X140H、X159Y、X159F、X159H、X167Y、X167H、X167F、X169E、X172K、X172G、X172N、X173P、X174*、X174S、X181*、X182*、X183*、X184*、X184T、X189Y、X189F、X189H、X189E、X189D、X189Q、X189N、X194D、X194N、X194S、X195F、X206L、X206F、X206Y、X255A、X260G、X260P、X260A、X260G、X260P、X260A、X265G、X284G、X284H、X289H、X304K、X304R、X304Q、X304E、X305K、X305R、X305Q、X305E、X347Y、X347F、X347H、X391A、X395P、X439N、X439Q、X439T、X444Q、X469T、X469N、X473R、X476R、X476Q、X476E、X476K X477K、X477R、X477Q和X477E，其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的位置。
3.根据权利要求1所述的洗涤剂组合物，其中所述至少一种α-淀粉酶变体包含在对应于SEQ ID NO:1的181+182；181+183；181+184；182+183；182+184；或183+184的位置处的缺失。
4.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中(i)中的所述α-淀粉酶变体选自由以下组成的组：
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K；
H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K；
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K；
H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K；
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K；
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K；
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K；
H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K；
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K；和
H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K，其中所述α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:1、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18、优选SEQ ID NO:1或14共享至少80％、如至少85％、如至少90％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、但小于100％的序列一致性，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性。
5.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述蛋白酶是(a)中的所述蛋白酶。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述蛋白酶是(b)中的变体，该变体包含在对应于位置171、173、175、179或180中的至少一个位置处的取代，并且其中对应于SEQ ID NO:2的位置171的位置处的氨基酸选自由以下组成的组：W、K、E、D和N；和/或对应于SEQ ID NO:2的位置173的位置处的氨基酸是P；和/或对应于SEQ ID NO:2的位置175的位置处的氨基酸选自由以下组成的组：A、V和P；和/或对应于SEQ ID NO:2的位置179的位置处的氨基酸选自由以下组成的组：C、V、Q、S、T、E、H、K、M、N、Y和A；和/或对应于SEQ ID NO:2的位置180的位置处的氨基酸是Y。
7.根据权利要求1至4、或6中任一项所述的洗涤剂组合物，其中(b)中的所述蛋白酶变体包含选自S173P、S175P或F180Y的取代，其中所述位置对应于SEQ IDNO:2的位置。
8.根据权利要求1至4中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述蛋白酶变体包含以下取代中的一个或多个：X9E、X9R、X15T、X27R、X42R、X52S、X55P、X56P、X59D、X59E、X60D、X60E、X66A、X74D、X85N、X85R、X97A、X97E、X97D、X99E、X99D、X99G、X99N、X99H、X99M、X101A、X102I、X102N、X104A、X116V、X116R、X154D、X156E、X157S、X157D、X157P、X158E、X161A、X164S、X176E、X179E、X182E、X185N、X188P、X198D、X199I、X200L、X203W、X206G、X210V、X211D、X211Q、X211E、X212D、X212E、X212S、X216S、X216A、X230H、X239R、X242D、X250D、X253D、X255W、X255D、X255E、X256E、X256D或X269H，其中编号根据SEQ ID NO:3所述。
9.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述洗涤剂组合物进一步包含一种或多种选自下组的另外的酶，该组由以下组成:
(A)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:5具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(B)具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:6具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(C)具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:7具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(D)具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:8具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(E)具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:9具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(F)具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:10具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(G)具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:13具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(H)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:14具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(I)具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:11具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(J)具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:12具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(K)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:15具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(L)具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:16具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(M)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:17具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(N)具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的α-淀粉酶，或其与SEQ ID NO:18具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性；
(O)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的脂肪酶，或其与SEQ ID NO:4具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述脂肪酶变体具有脂肪酶活性，以及
(P)具有SEQ ID NO:2、3、19、20或23的氨基酸序列的蛋白酶，或其与SEQ ID NO:2、3、19、20或23具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中所述蛋白酶变体具有蛋白酶活性。
10.根据权利要求9所述的洗涤剂组合物，其中所述另外的酶是：
(A)包含在以下位置处的一个或多个修饰的α-淀粉酶变体：9、118、149、182、186、195、202、257、295、299、320、323、339、345和458，其中所述位置对应于SEQ ID NO:5中的位置；
(B)包含在以下位置处的一个或多个修饰的α-淀粉酶变体：140、195、183、184和206，其中所述位置对应于SEQ ID NO:6中的位置；
(C)包含在以下位置处的一个或多个修饰的α-淀粉酶变体：180、181、243和475，其中所述位置对应于SEQ ID NO:7中的位置；
(D)包含在以下位置处的一个或多个修饰的α-淀粉酶变体：178、179、187、203、458、459、460和476，其中所述位置对应于SEQ ID NO:8中的位置；
(E)包含在以下位置202处的修饰的α-淀粉酶变体，其中所述位置对应于SEQ ID NO:9中的位置；
(F)包含在以下位置处的一个或多个修饰的α-淀粉酶变体：405、421、422和428，其中所述位置对应于SEQ ID NO:10中的位置；
(G)包含在以下位置处的一个或多个修饰的α-淀粉酶变体：SEQ ID NO:13的48、49、107、156、181、190、209和264；
(O)包括在以下位置处的一个或多个修饰的脂肪酶变体：SEQ ID NO:4的4、27、33、38、57、58、60、83、86、91、94、96、97、99、111、150、163、210、216、225、227、231、233、249、254、255、256、263、264、265、266、267和269，以及
(P)具有SEQ ID NO:2、3、19或20的氨基酸序列的蛋白酶，或其与SEQ ID NO:2、3、19或20具有至少75％但小于100％的序列一致性的变体，并且其中该蛋白酶变体具有蛋白酶活性。
11.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述变体中的修饰的数目为1至20，例如1至10和1至5、如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个修饰。
12.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物进一步包含至少一种螯合剂；至少一种表面活性剂；至少一种磺化聚合物；至少一种助水溶物；至少一种助洗剂和/或共助洗剂；至少一种香料；和/或至少一种漂白系统。
13.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述洗涤剂组合物是液体衣物洗涤洗涤剂组合物、粉末衣物洗涤洗涤剂组合物、液体餐具洗涤洗涤剂组合物或粉末餐具洗涤洗涤剂组合物。
14.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物在衣物洗涤、手动餐具洗涤或自动餐具洗涤中的用途。
15.根据权利要求14所述的用途，其中所述用途是在低温，如低于60℃、如低于55℃、如低于50℃、如低于45℃、如低于40℃、如低于35℃、如低于30℃、如低于25℃、如低于20℃、如低于15℃下进行的衣物洗涤或自动餐具洗涤中。
16.一种进行衣物洗涤的方法，所述方法包括使用根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物洗涤织物，优选地在40℃或更低的温度下、或更优选地在30℃或更低的温度下、或甚至更优选地在20℃或更低的温度下进行该洗涤。
17.一种使用根据权利要求1至13中任一项所述的洗涤剂组合物在自动餐具洗涤机中进行餐具洗涤的方法，所述方法包括以下步骤：将所述洗涤剂组合物添加在所述自动餐具洗涤机中的洗涤剂组合物室内，并且在主洗涤循环期间释放所述洗涤剂组合物。
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