KR20230147071A - 아밀라제 변이체 - Google Patents
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Abstract
본 발명에서 새로운 아밀라제 효소가 제공된다. 보다 구체적으로, 유전자 조작된 아밀라제 효소, 상기 효소를 포함하는 조성물, 및 상기 효소 또는 상기 효소를 포함하는 조성물의 제조 및 사용 방법이 제공된다.
Description
본 발명의 분야
본 발명에서 새로운 아밀라제 효소가 제공된다. 보다 구체적으로, 유전자 조작된 아밀라제 효소, 상기 효소를 포함하는 조성물, 및 상기 효소 또는 상기 효소를 포함하는 조성물의 제조 및 사용 방법이 제공된다.
발명의 배경
효소는 석유화학에 대한 지속가능한 대안으로서 다양한 적용에서 점점 더 사용되고 있다. 효소는 생분해성이고, 이미 더 낮은 온도에서 촉매 활성일 수 있으며, 그 결과로 에너지 소비가 감소한다. 특히, 세제 산업에서 효소는 세척 단계에서 세정 효율을 개선시키고 에너지 소비를 감소시키는 세척 제제로 구현된다.
아밀라제는 전분을 가수분해할 수 있는 효소이다. 따라서, 아밀라제는 전분 얼룩의 제거에 사용되어 왔고, 이러한 목적을 위해 세정 조성물에 첨가되어 왔다. 이들 세제 적용에서, 아밀라제는 승온에서 및/또는 세제 및 세척액의 변성 조건 내에서 안정할 것이다. 따라서, 개선된 특성, 특히 개선된 안정성 및 개선된 성능을 갖는 신규 아밀라제 효소에 대한 필요성이 존재한다.
본 발명의 간단한 요약
본 발명은 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서
(i) 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 45, 47, 48, 51, 54, 59, 60, 63, 70, 71, 72, 73, 75, 76, 81, 82, 83, 86, 87, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 103, 106, 108, 109, 113, 114, 115, 116, 117, 119, 120, 123, 125, 126, 128, 129, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 139, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 149, 150, 151, 154, 155, 156, 158, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 169, 170, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 180, 182, 184, 185, 187, 188, 189, 191, 192, 193, 203, 208, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 218, 219, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 230, 231, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 240, 242, 243, 245, 249, 250, 251, 252, 253, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 279, 280, 281, 282, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 304, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 326, 327, 333, 334, 336, 337, 338, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 348, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 370, 372, 375, 376, 378, 379, 381, 382, 383, 384, 385, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 403, 405, 406, 407, 408, 410, 413, 414, 415, 416, 418, 421, 424, 426, 427, 429, 431, 432, 434, 436, 438, 439, 440, 442, 443, 445, 446, 447, 448, 449, 451, 453, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 465, 467, 468, 470, 471, 474, 478, 480 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서의 아미노산 변경, 바람직하게는 삽입, 결실, 치환 또는 그의 조합, 바람직하게는 치환을 포함하고,
(ii) 상기 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 임의의 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 80%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖고,
(iii) 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다.
또한, 본 발명은 상기 알파-아밀라제 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 구축물 또는 발현 벡터 뿐만 아니라 폴리뉴클레오티드, 핵산 구축물 또는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 알파-아밀라제 변이체 및 적어도 1종의 추가의 성분을 포함하는 조성물, 바람직하게는 세제 조성물 (예를 들어, 세탁 세제 조성물 또는 자동 식기 세척 (ADW) 세제 조성물), 뿐만 아니라 이러한 조성물에서의 알파-아밀라제 변이체의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 숙주 세포를 알파-아밀라제 변이체의 발현에 적합한 조건 하에 배양하고; 상기 알파-아밀라제 변이체를 회수하는 것을 포함하는, 알파-아밀라제 변이체를 생산하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 상세한 설명
본 발명은 본 발명의 실시양태의 하기 상세한 설명 및 본원에 포함된 실시예를 참조하여 보다 용이하게 이해될 수 있다.
본 발명이 특정 실시양태와 관련하여 기재될 것이지만, 이러한 기재는 제한적인 의미로 해석되어서는 안된다.
정의
달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 용어는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적인 용법에 따라 이해되어야 한다.
본 발명의 예시적인 실시양태를 상세하게 기재하기 전에, 본 발명을 이해하는 데 중요한 정의가 주어진다. 달리 언급되거나 정의의 성질로부터 명백하지 않는 한, 정의는 본원에 기재된 모든 화합물, 방법 및 용도에 적용된다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 단수 형태는 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한 각각의 복수형을 또한 포함한다.
본 발명의 문맥에서, 용어 "약" 및 "대략"은 관련 기술분야의 통상의 기술자가 해당 특징의 기술적 효과를 여전히 보장하는 것으로 이해할 정확도의 간격을 나타낸다. 상기 용어는 전형적으로, 나타낸 수치로부터 ±20%, 바람직하게는 ±15%, 보다 바람직하게는 ±10%, 보다 더 바람직하게는 ±5%의 편차를 나타낸다.
또한, 상세한 설명 및 청구범위에서 용어 "제1", "제2", "제3" 또는 "(a)", "(b)", "(c)", "(d)" 등은 유사한 요소를 구별하기 위해 사용되고, 반드시 순차적 또는 시간적 순서를 기재하기 위해 사용되는 것은 아니다. 그렇게 사용된 용어는 적절한 상황 하에 상호교환가능하고, 본원에 기재된 본 발명의 실시양태는 본원에 기재되거나 예시된 것 이외의 다른 순서로 작동할 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 용어 "제1", "제2", "제3" 또는 "(a)", "(b)", "(c)", "(d)", "i", "ii" 등이 방법 또는 사용 또는 검정의 단계에 관한 것인 경우에, 상기 또는 하기에 제시된 바와 같이 본 출원에서 달리 나타내지 않는 한, 단계 사이에 시간 또는 시간 간격 일관성이 존재하지 않고, 즉 단계가 동시에 수행될 수 있거나 또는 이러한 단계 사이에 수초, 수분, 수시간, 수일, 수주, 수개월 또는 심지어 수년의 시간 간격이 존재할 수 있다.
본원 전반에 걸쳐, 다양한 간행물이 참조된다. 이들 간행물 모두의 개시내용 및 이들 간행물 내에 인용된 참고문헌은 본 발명이 속하는 최신 기술을 보다 완전히 기재하기 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
용어 "포함하는"은 제한적이지 않은 것으로 이해되어야 한다. 본 발명의 목적상, 용어 "이루어진"은 용어 "포함하는"의 바람직한 실시양태인 것으로 간주된다. 이하에서 군이 적어도 특정 수의 실시양태를 포함하는 것으로 정의되는 경우에, 이는 또한 바람직하게는 이들 실시양태만으로 이루어진 군을 포괄하는 것으로 의도된다.
"모" 서열 ("모 효소" 또는 "모 단백질"로도 불림)은 모 서열의 "변이체"를 생성하는 서열의 변화 (예를 들어, 1개 이상의 아미노산 치환을 도입하는 것에 의함)의 도입을 위한 출발 서열이다. 따라서, 용어 "효소 변이체" 또는 "서열 변이체" 또는 "단백질 변이체"는 각각의 변이체 효소에 대한 기원인 모 효소와 관련하여 사용된다. 따라서, 모 효소는 야생형 효소, 및 추가의 변이체의 개발에 사용되는 야생형 효소의 변이체를 포함한다. 변이체 효소는 그의 아미노산 서열에서 어느 정도 모 효소와 상이하다.
본 발명의 변이체를 기재하는 데 있어서, 허용된 IUPAC 단일 문자 또는 3 문자 아미노산 약어에 따라 사용된 단일 아미노산에 대한 약어가 사용된다.
본원에 사용된 "아미노산 변경"은 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 지칭한다.
"치환"은 원래 아미노산에 이어서 아미노산 서열 내의 위치의 번호, 이어서 치환된 아미노산을 제공함으로써 기재된다. 예를 들어, 위치 120에서의 히스티딘의 알라닌으로의 치환은 "His120Ala" 또는 "H120A"로 지정된다. 치환은 또한 이러한 위치에서의 모체의 아미노산을 특정하지 않으면서 변이체 내의 생성된 아미노산을 단지 명명함으로써, 예를 들어 "X120A" 또는 "120A" 또는 "Xaa120Ala" 또는 "120Ala"로 기재될 수 있다.
"결실"은 원래 아미노산에 이어서 아미노산 서열 내의 위치의 번호, 이어서 *를 제공함으로써 기재된다. 따라서, 위치 150에서의 글리신의 결실은 "Gly150*" 또는 G150*"로 지정된다. 대안적으로, 결실은 예를 들어 "D183 및 G184의 결실"로 나타내어진다.
"삽입"은 원래 아미노산에 이어서 아미노산 서열 내의 위치의 번호, 이어서 원래 아미노산 및 추가의 아미노산을 제공함으로써 기재된다. 예를 들어, 글리신 옆의 리신의 위치 180에서의 삽입은 "Gly180GlyLys" 또는 "G180GK"로 지정된다. 1개 초과의 아미노산 잔기, 예컨대 예를 들어 Gly180 다음에 Lys 및 Ala가 삽입되는 경우에, 이는 Gly180GlyLysAla 또는 G195GKA로 나타내어질 수 있다.
치환 및 삽입이 동일한 위치에서 발생하는 경우에, 이는 S99SD+S99A 또는 간단히 S99AD로 나타내어질 수 있다. 기존 아미노산 잔기와 동일한 아미노산 잔기가 삽입되는 경우에, 명명법에서의 축중성이 발생하는 것이 명백하다. 예를 들어 글리신이 상기 예에서 글리신 뒤에 삽입되는 경우에, 이는 G180GG로 나타내어질 것이다. 다중 변경을 포함하는 변이체는 "+"에 의해 분리되며, 예를 들어 "Arg170Tyr+Gly195Glu" 또는 "R170Y+G195E"는 각각 위치 170 및 195에서의 아르기닌 및 글리신의 티로신 및 글루탐산으로의 치환을 나타낸다. 대안적으로, 다중 변경은 스페이스 또는 콤마에 의해, 예를 들어 각각 R170Y G195E 또는 R170Y, G195E로 분리될 수 있다. 상이한 대안적 변경이 위치에서 도입될 수 있는 경우에, 상이한 변경은 콤마에 의해 분리되며, 예를 들어 각각 "Arg170Tyr, Glu" 및 R170T, E는 위치 170에서의 아르기닌의 티로신 또는 글루탐산으로의 치환을 나타낸다. 특정 위치에서의 대안적인 치환은 X120A,G,H, 120A,G,H, X120A/G/H, 또는 120A/G/H로 또한 나타내어질 수 있다. 대안적으로, 상이한 변경 또는 임의적인 치환은 괄호 내에, 예를 들어 Arg170[Tyr, Gly] 또는 Arg170{Tyr, Gly} 또는 간략하게 R170 [Y, G] 또는 R170 {Y, G}로 나타내어질 수 있다.
"합성" 또는 "인공" 화합물은 시험관내 화학적 및/또는 효소적 합성에 의해 생산된다. 용어 "천연" (또는 자연 발생 또는 야생형 또는 내인성) 세포 또는 유기체 또는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 자연에서 발견되는 바와 같은 (즉, 임의의 인간 개입이 없는) 세포 또는 유기체 또는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 지칭한다. 본 발명의 목적을 위해, "재조합" (또는 트랜스제닉)은 세포 또는 유기체와 관련하여 세포 또는 유기체가 유전자 기술에 의해 인간에 의해 도입된 이종 폴리뉴클레오티드를 함유하는 것을 의미하고, 폴리뉴클레오티드와 관련하여 유전자 기술 / 재조합 DNA 기술에 의해 인간에 의해 야기된 모든 구축물을 포함하는 것을 의미하며, 여기서
(a) 폴리뉴클레오티드의 서열 또는 그의 일부, 또는
(b) 프로모터를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 폴리뉴클레오티드와 작동가능하게 연결된 1개 이상의 유전자 제어 서열
중 어느 하나, 또는
(c) a) 및 b) 둘 다
는 그의 야생형 유전자 환경에 위치하지 않거나 또는 인간에 의해 변형되지 않는다.
용어 "이종" (또는 외인성 또는 외래 또는 재조합 또는 비-천연) 폴리펩티드는 본원에서 숙주 세포에 대해 천연이 아닌 폴리펩티드, 천연 폴리펩티드를 변경시키기 위해 재조합 DNA 기술에 의해 구조적 변형, 예를 들어 결실, 치환 및/또는 삽입이 이루어진 숙주 세포에 대해 천연인 폴리펩티드, 또는 재조합 DNA 기술에 의한 숙주 세포의 DNA 조작 (예를 들어 보다 강한 프로모터)의 결과로서 발현이 정량적으로 변경되거나 발현이 천연 숙주 세포와 상이한 게놈 위치로부터 유도되는 숙주 세포에 대해 천연인 폴리펩티드로서 정의된다. 유사하게, 용어 "이종" (또는 외인성 또는 외래 또는 재조합 또는 비-천연) 폴리뉴클레오티드는 숙주 세포에 대해 천연이 아닌 폴리뉴클레오티드, 천연 폴리뉴클레오티드를 변경시키기 위해 재조합 DNA 기술에 의해 구조적 변형, 예를 들어 결실, 치환 및/또는 삽입이 이루어진 숙주 세포에 대해 천연인 폴리뉴클레오티드, 또는 재조합 DNA 기술에 의한 폴리뉴클레오티드의 조절 요소의 조작 (예를 들어 보다 강한 프로모터)의 결과로서 발현이 정량적으로 변경되는 숙주 세포에 대해 천연인 폴리뉴클레오티드, 또는 숙주 세포에 대해 천연이지만 재조합 DNA 기술에 의한 유전자 조작의 결과로서 그의 천연 유전적 환경 내에 통합되지 않은 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 2개 이상의 폴리뉴클레오티드 서열 또는 2개 이상의 아미노산 서열과 관련하여, 용어 "이종"은 2개 이상의 폴리뉴클레오티드 서열 또는 2개 이상의 아미노산 서열이 서로와의 특이적 조합으로는 자연적으로 발생하지 않는다는 것을 특징화하는 데 사용된다.
변이체 폴리뉴클레오티드 및 변이체 폴리펩티드 서열은 모 서열과 비교 시 그의 서열 동일성에 의해 정의될 수 있다. 서열 동일성은 통상적으로 "% 서열 동일성" 또는 "% 동일성"으로서 제공된다. 서열 동일성의 계산을 위해, 제1 단계에서 서열 정렬이 생성된다. 본 발명에 따르면, 쌍별 글로벌 정렬이 생성되며, 이는 2개의 서열이 그의 완전한 길이에 걸쳐 정렬됨을 의미하고, 이는 통상적으로 정렬 알고리즘으로 불리는 수학적 접근법을 사용함으로써 생성된다.
본 발명에 따르면, 정렬은 문헌 [Needleman and Wunsch (J. Mol. Biol. (1979) 48, p. 443-453)]의 알고리즘을 사용하여 생성된다. 바람직하게는, 프로그램 디폴트 파라미터 (폴리뉴클레오티드: 갭 개방=10.0, 갭 연장=0.5 및 매트릭스=EDNAFULL; 폴리펩티드: 갭 개방=10.0, 갭 연장=0.5 및 매트릭스=EBLOSUM62)를 사용하여, 프로그램 "NEEDLE" (유럽 분자 생물학 개방 소프트웨어 스위트 (EMBOSS))가 본 발명의 목적을 위해 사용된다. 2개의 서열을 정렬한 후, 제2 단계에서, 생성된 정렬로부터 동일성 값이 결정된다. 이러한 목적을 위해, %-동일성은 동일한 잔기의 수를 그의 완전한 길이에 걸쳐 본 발명의 각각의 서열을 나타내는 정렬 영역의 길이로 나누고 100을 곱함으로써 계산된다: %-동일성 = (동일한 잔기 / 그의 완전한 길이에 걸쳐 본 발명의 각각의 서열을 나타내는 정렬 영역의 길이) *100.
2개의 핵산 서열의 퍼센트 동일성을 계산하는 경우, 일부 특이사항을 갖는 2개의 아미노산 서열의 퍼센트 동일성의 계산에 대해서도 동일하게 적용된다. 단백질을 코딩하는 핵산 서열의 경우, 쌍별 정렬은 인트론을 제외한 출발 코돈에서 정지 코돈까지 본 발명의 서열의 코딩 영역의 완전한 길이에 걸쳐 이루어질 것이다. 본 발명의 서열과 비교되는 다른 서열에 존재하는 인트론은 또한 쌍별 정렬을 위해 제거될 수 있다. 그 후, 퍼센트 동일성은 %-동일성 = (동일한 잔기 / 그의 완전한 길이에 걸친 인트론을 제외한 출발 코돈에서 정지 코돈까지의 본 발명의 서열을 나타내는 정렬 영역의 길이) *100에 의해 계산된다. 2개의 서열을 정렬한 후, 제2 단계에서, 생성된 정렬로부터 동일성 값이 결정된다.
또한, 니들만(Needleman) 및 분쉬(Wunsch) 알고리즘 (J. Mol. Biol. (1979) 48, p. 443-453)을 구현하는 핵산 서열에 대한 바람직한 정렬 프로그램은 프로그램 디폴트 파라미터 (갭 개방=10.0, 갭 연장=0.5 및 매트릭스=EDNAFULL)를 사용한 "NEEDLE" (유럽 분자 생물학 개방 소프트웨어 스위트 (EMBOSS))이다.
본 발명의 서열과 동일하거나 유사한 영역을 갖고, % 동일성을 결정하기 위해 본 발명의 서열과 비교될 서열은 예를 들어 NCBI에서 이용가능한 BLAST, BLAST-2와 같은 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 방법 및 프로그램을 사용하여 관련 기술분야의 기술 내에 있는 다양한 방식에 의해 용이하게 확인될 수 있다.
변이체 폴리펩티드는 모 서열과 비교 시 그의 서열 유사성에 의해 정의될 수 있다. 서열 유사성은 통상적으로 "% 서열 유사성" 또는 "%-유사성"으로서 제공된다. % 서열 유사성은 규정된 아미노산 세트가, 예를 들어 그의 크기에 의해, 그의 소수성에 의해, 그의 전하에 의해, 또는 다른 특징에 의해 유사한 특성을 공유한다는 것을 고려한다. 본원에서, 하나의 아미노산과 유사한 아미노산의 교환은 "보존적 돌연변이"로 불릴 수 있다. 본 발명에 따른 유사한 아미노산은 하기와 같이 정의되며, 이는 또한 본 발명에 따른 %-유사성의 결정에 적용될 것이며, 이는 또한 예를 들어 데이터베이스 검색 및 서열 정렬을 위해 가장 많이 사용되는 아미노산 유사성 매트릭스 중 하나인 프로그램 "NEEDLE"에 의해 사용되는 바와 같은 BLOSUM62 매트릭스에 따른다:
보존적 아미노산 치환은 효소와 같은 기능적 단백질의 폴리펩티드 서열의 전장에 걸쳐 발생할 수 있다. 한 실시양태에서, 이러한 돌연변이는 효소의 기능적 도메인에 관련되지 않는다. 한 실시양태에서, 보존적 돌연변이는 효소의 촉매 중심에 관련되지 않는다. 서열 유사성의 계산을 위해, 제1 단계에서 서열 정렬은 상기 기재된 바와 같이 생성된다. 2개의 서열을 정렬한 후, 제2 단계에서, 생성된 정렬로부터 유사성 값이 결정된다. 이러한 목적을 위해, %-유사성은 동일한 잔기의 수 + 유사한 잔기의 수를 그의 완전한 길이에 걸쳐 본 발명의 서열을 나타내는 정렬 영역의 길이로 나누고 100을 곱함으로써 계산된다: %-유사성 = [(동일한 잔기 + 유사한 잔기) / 그의 완전한 길이에 걸쳐 본 발명의 서열을 나타내는 정렬 영역의 길이] *100.
핵산의 경우, 유사한 서열은 또한 각각의 엄격도 조건을 사용한 혼성화에 의해 결정될 수 있다. 용어 "높은 엄격도 조건"은 적어도 100개 뉴클레오티드 길이의 프로브에 대해, 5X SSPE, 0.3% SDS, 200 마이크로그램/ml 전단된 및 변성된 연어 정자 DNA, 및 50% 포름아미드 중에서 42℃에서의 예비혼성화 및 혼성화, 이후에 12 내지 24시간 동안 표준 서던 블롯팅 절차를 따르는 것을 의미한다. 담체 물질을 65℃에서 2X SSC, 0.2% SDS를 사용하여 각각 15분 동안 3회 최종적으로 세척한다. 용어 "매우 높은 엄격도 조건"은 적어도 100개 뉴클레오티드 길이의 프로브에 대해, 5X SSPE, 0.3% SDS, 200 마이크로그램/ml 전단된 및 변성된 연어 정자 DNA, 및 50% 포름아미드 중에서 42℃에서의 예비혼성화 및 혼성화, 이후에 12 내지 24시간 동안 표준 서던 블롯팅 절차를 따르는 것을 의미한다. 담체 물질을 70℃에서 2X SSC, 0.2% SDS를 사용하여 각각 15분 동안 3회 최종적으로 세척한다.
본원에 사용된 용어 아밀라제의 "A 및 B 도메인"은 1개의 단위로서 취해지는 이들 2개의 도메인을 의미하는 반면, C 도메인은 알파-아밀라제의 또 다른 단위이다. 따라서, "A 및 B 도메인"의 아미노산 서열은 "A 및 B 도메인" 및 다른 추가의 도메인 (예컨대, C 도메인)을 포함하는 알파-아밀라제의 서열의 하나의 연속 서열 또는 하나의 부분으로서 이해된다.
본원에 사용된 "단편" 또는 "하위서열"은 폴리뉴클레오티드의 부분 또는 아미노산 서열이다. 용어 "기능적 단편"은 각각 전장 아미노산 서열의 일부만을 포함하지만 여전히 동일하거나 유사한 활성 및/또는 기능을 갖는 임의의 핵산 또는 아미노산 서열을 지칭한다. 바람직하게는, 기능적 단편은 원래 전장 아미노산 서열에 대해 적어도 75% 동일, 적어도 76% 동일, 적어도 77% 동일, 적어도 78% 동일, 적어도 79% 동일, 적어도 80% 동일, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 98.5%, 적어도 99%, 또는 적어도 99.5% 동일하다. 기능적 단편은 각각 원래의 핵산 또는 원래의 아미노산 서열과 비교하여 인접한 핵산 또는 아미노산을 포함한다.
본원에 사용된 "유전자 구축물" 또는 "발현 카세트"는 본원에 기재된 바와 같은 1개 이상의 제어 서열에 (적어도 프로모터에) 작동가능하게 연결된, 발현될 적어도 1개의 관심 서열로 구성된 핵산 분자이다.
본원에 사용된 용어 "벡터"는 또 다른 세포로의 전달을 위한, 또는 주어진 세포 내에서의 안정한 또는 일시적 발현을 위한 외래 폴리뉴클레오티드 서열을 보유하는 데 적합한 임의의 종류의 구축물을 포함한다. 본원에 사용된 용어 "벡터"는 임의의 종류의 클로닝 비히클, 예컨대 비제한적으로 플라스미드, 파지미드, 바이러스 벡터 (예를 들어, 파지), 박테리오파지, 바큘로바이러스, 코스미드, 포스미드, 인공 염색체, 또는 및 관심 특이적 숙주에 특이적인 임의의 다른 벡터를 포괄한다. 외래 폴리뉴클레오티드 서열은 통상적으로 본원에서 "관심 유전자"로 지칭될 수 있는 코딩 서열을 포함한다. 관심 유전자는 숙주 세포의 기원 또는 목적지의 종류에 따라 인트론 및 엑손을 포함할 수 있다.
본원에 지칭된 용어 "도입" 또는 "형질전환"은 전달에 사용된 방법과 상관없이, 외인성 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 전달하는 것을 포괄한다. 즉, 본원에 사용된 용어 "형질전환"은 벡터, 셔틀 시스템 또는 숙주 세포와 독립적이고, 이는 관련 기술분야에 공지된 바와 같은 형질전환의 폴리뉴클레오티드 전달 방법에 관한 것일 뿐만 아니라 (예를 들어, 문헌 [Sambrook, J. et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY] 참조), 이는 임의의 추가의 종류의 폴리뉴클레오티드 전달 방법, 예컨대 비제한적으로 형질도입 또는 형질감염을 포괄한다.
폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 "발현"될 수 있다. 용어 "발현" 또는 "유전자 발현"은 특정 유전자 또는 특정 유전자들 또는 특정 핵산 구축물의 전사를 의미한다. 용어 "발현" 또는 "유전자 발현"은 유전자 또는 유전자들 또는 유전자 구축물의 구조 RNA (예를 들어, rRNA, tRNA) 또는 mRNA로의 전사를 의미하며, 후자의 단백질로의 후속 번역은 수반되거나 수반되지 않는다. 과정은 DNA의 전사 및 생성된 mRNA 생성물의 프로세싱을 포함한다.
재조합 세포는 각각의 야생형 세포와 비교하여 "증가된" 또는 "감소된" 발현을 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 용어 "증가된 발현", "증진된 발현" 또는 "과다발현"은 원래의 야생형 발현 수준 (이는 또한 발현의 부재 또는 측정불가능한 발현일 수 있음)에 부가적인 임의의 형태의 발현을 의미한다. 본원에서 "증가된 발현", "증진된 발현" 또는 "과다발현"에 대한 언급은 대조군 유기체에 비해 유전자 발현의 증가, 및/또는 폴리펩티드를 지칭하는 한, 증가된 폴리펩티드 수준 및/또는 증가된 폴리펩티드 활성을 의미하는 것으로 고려된다. 발현의 증가는 대조군 유기체의 것과 비교하여 선호도가 증가하는 순서로 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 100% 또는 심지어 그 초과일 수 있다.
용어 "정제" 또는 "정제하는"은 적어도 하나의 성분, 예를 들어 관심 단백질을 적어도 또 다른 성분, 예를 들어 발효 브로쓰의 미립자 물질로부터 분리하고, 상이한 구획 또는 상으로 옮기는 과정을 지칭하며, 여기서 상이한 구획 또는 상은 반드시 물리적 장벽에 의해 분리될 필요는 없다. 이러한 상이한 구획의 예는 여과 막 또는 천에 의해 분리된 2개의 구획, 즉 여과물 및 보유물이고; 이러한 상이한 상의 예는 각각 펠릿 및 상청액 또는 케이크 및 여과물이다. 발효 브로쓰로부터 관심 효소를 정제한 후 생성된 용액은 본원에서 "정제된 효소 용액"으로 불린다.
"단백질 제제"는 소수의 성분을 포함하는 임의의 비-복합체 제제를 의미하며, 여기서 성분은 단백질 제제에 포함된 단백질을 안정화시키고/거나 단백질 제제 그 자체의 안정화를 목적으로 한다.
"효소 특성"은 촉매 활성, 기질/보조인자 특이성, 생성물 특이성, 시간 경과에 따른 안정성, 열안정성, pH 안정성 및 화학적 안정성을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. "효소적 활성" 또는 "촉매 활성"은 효소의 밀리그램당 단위 (비활성) 또는 효소의 분자당 분당 형질전환된 기질의 분자 (분자 활성)로서 표현되는, 효소에 의해 발휘되는 촉매 효과를 의미한다. 효소적 활성은 효소 실제 기능에 의해, 예를 들어 펩티드 결합의 가수분해성 절단을 촉매함으로써 단백질분해 활성을 발휘하는 프로테아제, 에스테르 결합의 가수분해성 절단에 의해 지질분해 활성을 발휘하는 리파제, 폴리사카라이드 내의 글리코시드 연결의 가수분해를 수반하는 아밀라제 활성 등에 의해 명시될 수 있다.
본 발명에 따른 용어 "효소 안정성"은 저장 또는 작동 동안 시간의 함수로서의 효소적 활성의 보유에 관한 것이다. 저장 동안 시간의 함수로서의 효소적 활성의 보유는 "저장 안정성"으로 불리며, 본 발명의 문맥 내에서 바람직하다.
시간 경과에 따른 특정 조건 하에 저장되거나 사용된 효소의 촉매 활성에서의 변화를 결정 및 정량화하기 위해, "초기 효소적 활성"을 정의된 조건 하에 제0 시점 (100%) 및 그 후의 특정 시점 (x%)에서 측정한다. 측정된 값의 비교에 의해, 효소적 활성의 잠재적 손실이 그의 정도로 결정될 수 있다. 효소적 활성 손실의 정도는 효소의 안정성 또는 비-안정성을 결정한다. "효소적 활성의 반감기"는 효소적 활성이 그의 초기 값의 절반 (50%)으로 감쇠하는 데 요구되는 시간에 대한 척도이다. "효소적 활성의 반감기"는 조사 중인 챌린지 인자와 관련하여 표현될 수 있고, 예를 들어 효소 열안정성의 경우, T50은 열 처리를 받지 않은 참조 샘플과 비교 시 특정 시간 동안의 열 불활성화 후에 50% 잔류 효소적 활성이 여전히 존재하는 온도를 나타낼 수 있다.
"pH 안정성" 또는 "pH-의존성 활성"은 특정 pH 값에 노출된 후에 효소적 활성을 발휘하는 효소의 능력을 지칭한다.
용어 "열 안정성", "열안정성" 또는 "온도-의존성 활성"은 승온에, 바람직하게는 40℃의 온도에서 14일 동안, 바람직하게는 세제 조성물에서 (바람직하게는, ES1-C 세제에서), 또는 92℃에서 적어도 10분 동안 노출시킨 후에 효소가 촉매 활성 또는 세척 성능을 발휘하는 능력을 지칭한다.
용어 "세제 안정성" 또는 "세제 조성물에서의 저장 하의 안정성"은 세제 조성물 중에서, 바람직하게는 40℃ 또는 50℃의 온도에서 14일 동안 세제 조성물 중에서 (바람직하게는, ES1-C 세제 중에서) 저장 후 촉매 활성 또는 세척 성능을 발휘하는 효소의 능력을 지칭한다.
"개선 지수" (IF)는 특정 특성에서 각각의 모 효소에 대한 효소 변이체의 개선의 정도이다. 각각의 모 효소에 대한 효소 변이체의 개선은 >1.0의 개선 지수 (IF)를 특징으로 한다. 개선 지수는 대안적으로 예를 들어 백분율로 표현될 수 있고, 1.1의 IF는 110%와 같다.
본원에 사용된 효소의 "세척 성능" (본원에서 "세정 성능"으로도 불림)은 세제 조성물의 세정 성능에 대한 효소의 기여, 즉 효소의 성능에 의해 세제 조성물에 부가된 세정 성능을 지칭한다. 용어 "세척 성능"은 본원에서 세탁 및 경질 표면 세정에 대해 유사하게 사용된다. 세척 성능은 관련 세척 조건 하에 비교된다. 용어 "관련 세척 조건"은 세제 시장 부문의 가정에서 실제로 사용되는 조건, 특히 세척 온도, 시간, 세척 역학, 거품 농도, 세제의 유형 및 물 경도를 나타내기 위해 본원에 사용된다. 용어 "개선된 세척 성능"은 관련 세척 조건 하에 얼룩 제거에서 보다 우수한 최종 결과가 수득된다는 것, 또는 중량 기준으로, 상응하는 대조군 조건에 비해 동일한 최종 결과를 수득하는 데 보다 적은 효소가 필요하다는 것을 나타내도록 사용된다.
본원에 사용된 용어 "특이 성능"은 활성 효소의 단위당 특이 얼룩 또는 오염의 세정 및 제거를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 특이 성능은 얼룩 또는 돛, 예컨대 달걀, 달걀 노른자, 우유, 풀, 다진 고기 혈액, 초콜릿 소스, 유아용 식품, 피지 등을 사용하여 결정된다.
"세제 조성물" 또는 "세제 제제" 또는 "세정 제제" 또는 "세제 용액"은 오염된 물질을 세정하기 위해 지정된 조성물을 의미한다. 본 발명에 따른 세제 조성물 및/또는 세제 용액은 상이한 적용, 예컨대 세탁 및 경질 표면 세정을 위한 세제 조성물 및/또는 세제 용액을 포함한다. 용어 "세제 성분"은 세제 조성물 및/또는 세제 용액에 사용될 수 있는 화학물질의 유형을 의미하는 것으로 본원에 정의된다.
본 발명의 세제 제제는 1종 이상의 계면활성제(들)를 포함할 수 있다. "계면활성제" (본원에서 "표면 활성제"와 동의어로 사용됨)는 액체에 첨가될 때 계면에서 그 액체의 특성을 변화시키는 유기 화학물질을 의미한다. 그의 이온 전하에 따라, 계면활성제는 비이온성, 음이온성, 양이온성 또는 양쪽성으로 불린다.
용어 "세제 성분의 유효량"은 효과적인 얼룩 제거 및 효과적인 세정 조건 (예를 들어 pH, 발포의 양)을 제공하는 특정 성분의 양, 시각적 이익 (예를 들어 시각적 증백, 이염 억제)을 효과적으로 제공하는 특정 성분의 양, 및 가공을 효과적으로 보조하는 (가공, 저장 및 사용 동안 물리적 특징을 유지함; 예를 들어 레올로지 개질제, 굴수성제, 건조제) 특정 성분의 양을 포함한다.
용어 "세탁" 또는 "세탁일"은 가정용 세탁 및 산업용 세탁 둘 다에 관한 것이고, 텍스타일 및/또는 직물을 본 발명의 세제 조성물을 함유하는 용액으로 처리하는 공정을 의미한다. 세탁 공정은 가정용 또는 산업용 세탁기와 같은 기술적 장치를 사용하여 수행될 수 있다. 대안적으로, 세탁 공정은 수동으로 수행될 수 있다.
용어 "텍스타일"은 실 (편직 또는 직조에 사용되는 천연 또는 합성 섬유로 제조된 실), 실 중간물, 섬유, 부직 물질, 천연 물질, 합성 물질, 뿐만 아니라 이들 물질로 제조된 직물, 예컨대 가먼트, 의류 및 다른 물품을 포함한 임의의 텍스타일 물질을 의미한다. 본원에 사용된 용어 "직물" (섬유의 직조, 편직 또는 펠팅에 의해 제조된 텍스타일) 또는 "가먼트" (텍스타일로 제조된 임의의 의류 물품)는 또한 보다 넓은 용어 텍스타일을 포함하는 것을 의미한다.
용어 "경질 표면 세정"은 경질 표면의 세정으로서 본원에 정의되며, 여기서 경질 표면은 가정에서의 임의의 경질 표면, 예컨대 바닥, 가구, 벽, 욕실 세라믹, 유리, 커트러리 또는 식기를 포함한 금속성 표면을 포함할 수 있다. 경질 표면 세정의 특정한 형태는 식기 세척, 특히 자동 식기 세척 (ADW)이다.
용어 "식기 세척"은, 예를 들어 수동 또는 자동 식기 세척에 의한 모든 형태의 식기 세척을 지칭한다. 식기를 세척하는 것은 모든 형태의 도기류, 예컨대 플레이트, 컵, 글라스, 보울, 모든 형태의 커트러리, 예컨대 스푼, 나이프, 포크 및 서빙 기구 뿐만 아니라 세라믹, 플라스틱, 예컨대 멜라민, 금속, 자기, 유리 및 아크릴의 세정을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
세정 성능은 관련 세정 조건 하에 평가된다. 본원에서 용어 "관련 세정 조건"은 세탁기, 자동 식기 세척기 또는 수동 세정 공정에서 실제로 사용되는 조건, 특히 세정 온도, 시간, 세정 기계장치, 거품 농도, 세제의 유형 및 물 경도를 지칭한다.
본 발명의 기술 분야에서, 통상적으로 용어 "얼룩"은 세탁, 예를 들어 텍스타일, 직물 또는 섬유에 대한 세정과 관련하여 사용되는 반면, 용어 "오염물"은 통상적으로 경질 표면 세정, 예를 들어 식기 및 커트러리의 세정과 관련하여 사용된다. 그러나, 본원에서 용어 "얼룩" 및 "오염물"은 상호교환가능하게 사용될 것이다.
본원에 사용된 "격리 빌더"는, 빌더가 중성 pH에서 초기에 7°dH 경도 (독일 경도)를 갖는 수용액 중의 모든 칼슘 이온과 조합하기에 충분한 양으로 사용되는 경우에 유의한 양의 침전물이 형성되지 않는다는 점에서 침전 빌더와 상이하다. "강한 빌더"는 4 초과, 특히 5 초과, 6 초과 또는 7 초과의 양이온/킬레이트화제 착물의 로그 안정성 상수 (Log KCa)로 2가 양이온, 예컨대 Ca2+에 강하게 결합할 수 있는 고효율 킬레이트화제로서 분류된다. 안정성 상수는 0.1 M의 이온 강도 및 25℃의 온도에서 결정된다. "강한 격리 빌더"는 상기 언급된 특성 둘 다를 조합한다.
상세한 설명
본 발명에서 새로운 아밀라제 효소가 제공된다. 보다 구체적으로, 모 알파-아밀라제의 변이체, 변이체 알파-아밀라제의 제조 방법, 알파-아밀라제 변이체를 포함하는 조성물, 및 변이체 알파-아밀라제 또는 변이체 알파-아밀라제를 포함하는 조성물의 사용 방법이 제공된다.
알파-아밀라제 변이체
본 발명은 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서
(i) 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 45, 47, 48, 51, 54, 59, 60, 63, 70, 71, 72, 73, 75, 76, 81, 82, 83, 86, 87, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 103, 106, 108, 109, 113, 114, 115, 116, 117, 119, 120, 123, 125, 126, 128, 129, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 139, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 149, 150, 151, 154, 155, 156, 158, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 169, 170, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 180, 182, 184, 185, 187, 188, 189, 191, 192, 193, 203, 208, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 218, 219, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 230, 231, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 240, 242, 243, 245, 249, 250, 251, 252, 253, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 279, 280, 281, 282, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 304, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 326, 327, 333, 334, 336, 337, 338, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 348, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 370, 372, 375, 376, 378, 379, 381, 382, 383, 384, 385, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 403, 405, 406, 407, 408, 410, 413, 414, 415, 416, 418, 421, 424, 426, 427, 429, 431, 432, 434, 436, 438, 439, 440, 442, 443, 445, 446, 447, 448, 449, 451, 453, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 465, 467, 468, 470, 471, 474, 478, 480 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서의 아미노산 변경, 바람직하게는 삽입, 결실, 치환 또는 그의 조합, 바람직하게는 치환을 포함하고,
(ii) 상기 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 임의의 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 60%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖고,
(iii) 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다.
본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 비-자연 발생 아밀라제이다. 바람직하게는, 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 단리된, 합성 및/또는 재조합 알파-아밀라제 변이체이다.
본 발명에 따른 아밀라제는 "전분분해 활성" 또는 "아밀라제 활성"을 갖는다. "전분분해 활성" 또는 "아밀라제 활성"은 폴리사카라이드 내의 글루코시드 연결의 가수분해 능력을 기재한다. 알파-아밀라제 활성은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 알파-아밀라제 활성의 측정을 위한 검정에 의해 결정될 수 있다. 알파-아밀라제 활성을 측정하는 검정의 예는 파데바스(Phadebas) 검정 또는 EPS 검정 ("인피니티 시약")이다. 파데바스 검정에서 알파-아밀라제 활성은 기질로서 파데바스 정제를 사용함으로써 결정된다 (파데바스 아밀라제 시험, 마글 라이프 사이언스(Magle Life Science)에 의해 공급됨). 전분은 알파-아밀라제에 의해 가수분해되어 가용성 청색 단편을 제공한다. 620 nm에서 분광광도계로 측정된, 생성된 청색 용액의 흡광도는 알파-아밀라제 활성의 함수이다. 측정된 흡광도는 주어진 세트의 조건 하에 해당 알파-아밀라제의 비활성 (활성/순수한 알파-아밀라제 단백질의 mg)에 정비례한다.
대안적으로, 알파-아밀라제 활성은 또한 에틸리덴-4-니트로페닐-알파-D-말토헵타오시드 (EPS)를 사용하는 방법에 의해 결정될 수 있다. D-말토헵타오시드는 엔도-아밀라제에 의해 절단될 수 있는 블로킹된 올리고사카라이드이다. 절단 후에, 키트 내에 포함된 알파-글루코시다제는 기질을 소화시켜 황색 컬러를 가지며 이에 따라 405 nm에서 가시 분광광도측정법에 의해 측정될 수 있는 유리 PNP 분자를 유리시킨다. EPS 기질 및 알파-글루코시다제를 함유하는 키트는 예를 들어 로슈 코스툼 바이오테크(Roche Costum Biotech)에 의해 제조된다 (카탈로그 번호 10880078103). 시간 의존성 흡수-곡선의 기울기는 주어진 세트의 조건 하에 해당 알파-아밀라제의 비활성 (효소 mg당 활성)에 정비례한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 모 아밀라제의 전분분해 활성의 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 120%, 적어도 130%, 적어도 140%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200%을 나타낸다. 한 실시양태에서, 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 모 아밀라제와 비교하여 동일하거나 증가된 전분분해 활성을 나타낸다. 바람직하게는, 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 모 아밀라제와 비교하여 증가된 전분분해 활성을 나타낸다.
바람직하게는, 본 발명의 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3에 따른 아밀라제, 또는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3에 대해 적어도 60%의 서열 동일성을 갖는 임의의 알파-아밀라제이며, 가장 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1에 따른 아밀라제이다.
본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 45, 47, 48, 51, 54, 59, 60, 63, 70, 71, 72, 73, 75, 76, 81, 82, 83, 86, 87, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 103, 106, 108, 109, 113, 114, 115, 116, 117, 119, 120, 123, 125, 126, 128, 129, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 139, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 149, 150, 151, 154, 155, 156, 158, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 169, 170, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 180, 182, 184, 185, 187, 188, 189, 191, 192, 193, 203, 208, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 218, 219, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 230, 231, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 240, 242, 243, 245, 249, 250, 251, 252, 253, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 279, 280, 281, 282, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 304, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 326, 327, 333, 334, 336, 337, 338, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 348, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 370, 372, 375, 376, 378, 379, 381, 382, 383, 384, 385, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 403, 405, 406, 407, 408, 410, 413, 414, 415, 416, 418, 421, 424, 426, 427, 429, 431, 432, 434, 436, 438, 439, 440, 442, 443, 445, 446, 447, 448, 449, 451, 453, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 465, 467, 468, 470, 471, 474, 478, 480 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 변경, 바람직하게는 삽입, 결실, 치환, 또는 그의 조합, 가장 바람직하게는 치환을 포함한다.
바람직하게는, 본 발명의 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 임의의 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 따른 아밀라제, 또는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 임의의 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 대해 적어도 60%의 서열 동일성을 갖는 임의의 알파-아밀라제이다. 보다 바람직하게는, 본 발명의 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3에 따른 아밀라제, 또는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3에 대해 적어도 60%의 서열 동일성을 갖는 임의의 알파-아밀라제이며, 가장 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1에 따른 아밀라제이다.
바람직한 실시양태에서, 생성된 아미노산 치환 아미노산 잔기는 상응하는 위치에서 서열식별번호: 3 또는 5의 아미노산 잔기와 동일하지 않다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4, 7, 25, 37, 70, 100, 118, 135, 160, 176, 193, 210, 251, 281, 258, 323, 361, 363, 368, 405, 434, 441, 459, 460, 451 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 변경, 바람직하게는 삽입, 결실, 치환 또는 그의 조합을 포함하며, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다. 보다 특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 25, 100, 135, 176, 193 및 460으로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 변경, 바람직하게는 삽입, 결실, 치환 또는 그의 조합을 포함하며, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다.
바람직하게는, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4, 25, 100, 135, 135, 135, 135, 160, 176, 193, 251, 258, 276, 299, 323, 363, 363, 382, 405, 460 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 변경, 바람직하게는 삽입, 결실, 치환, 또는 그의 조합, 가장 바람직하게는 치환을 포함한다.
바람직하게는, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 45, 47, 48, 51, 54, 59, 60, 63, 70, 71, 72, 73, 75, 76, 81, 82, 83, 86, 87, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 103, 106, 108, 109, 113, 114, 115, 116, 117, 119, 120, 123, 125, 126, 128, 129, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 139, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 149, 150, 151, 154, 155, 156, 158, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 169, 170, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 180, 182, 184, 185, 187, 188, 189, 191, 192, 193, 203, 208, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 218, 219, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 230, 231, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 240, 242, 243, 245, 249, 250, 251, 252, 253, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 279, 280, 281, 282, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 304, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 326, 327, 333, 334, 336, 337, 338, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 348, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 370, 372, 375, 376, 378, 379, 381, 382, 383, 384, 385, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 403, 405, 406, 407, 408, 410, 413, 414, 415, 416, 418, 421, 424, 426, 427, 429, 431, 432, 434, 436, 438, 439, 440, 442, 443, 445, 446, 447, 448, 449, 451, 453, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 465, 467, 468, 470, 471, 474, 478, 480 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함한다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4, 7, 25, 37, 70, 100, 118, 135, 160, 176, 193, 210, 251, 281, 258, 323, 361, 363, 368, 405, 434, 441, 459, 460, 451 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다. 보다 특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 25, 100, 135, 176, 193 및 460으로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다.
바람직하게는, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4, 25, 100, 135, 135, 135, 135, 160, 176, 193, 251, 258, 276, 299, 323, 363, 363, 382, 405, 460 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4, 429 및 459로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4, 25, 116, 176, 225, 251, 320, 400, 405, 408, 410, 418, 429, 446, 449, 458, 459, 460, 471 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4, 25, 176, 251, 405 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4, 6, 10, 12, 13, 14, 15, 17, 20, 21, 22, 23, 24, 27, 28, 32, 34, 36, 38, 39, 42, 45, 47, 51, 70, 75, 76, 83, 89, 92, 95, 96, 99, 100, 108, 115, 154, 156, 164, 191, 192, 213, 215, 221, 222, 223, 226, 233, 234, 236, 237, 240, 245, 249, 268, 271, 277, 282, 285, 288, 289, 290, 297, 301, 308, 309, 312, 326, 327, 333, 336, 338, 341, 343, 348, 351, 352, 353, 355, 356, 358, 366, 367, 370, 376, 379, 381, 389, 392, 399, 413, 424, 426, 429, 432, 436, 440, 442, 443, 448, 451, 453, 456, 459, 463, 468 및 480으로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4, 429 및 459로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4, 10, 12, 13, 14, 15, 17, 20, 21, 23, 24, 27, 34, 36, 38, 39, 42, 45, 47, 51, 89, 92, 99, 100, 108, 115, 164, 191, 192, 213, 221, 222, 223, 233, 234, 236, 237, 240, 245, 249, 268, 271, 282, 288, 289, 290, 297, 301, 308, 309, 312, 326, 327, 333, 336, 338, 341, 343, 348, 351, 352, 353, 355, 356, 358, 366, 367, 370, 376, 379, 381, 389, 392, 413, 424, 426, 429, 432, 440, 442, 443, 448, 451, 453, 456, 468 및 480으로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4 및 429로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
또 다른 특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 25 및 176으로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
또 다른 특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 25, 176 및 186으로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
또 다른 특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4, 25, 176, 186, 251, 405, 439 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
또 다른 특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4, 25, 176, 251, 405, 439 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
또 다른 특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4, 25, 176, 186, 251, 405 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
또 다른 특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4, 25, 176, 251, 405 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
또 다른 특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 위치 4 및 25 또는 25 및 176 또는 176 및 186 또는 186 및 251 또는 251 및 405 또는 405 및 482에서, 바람직하게는 위치 4 및 25 및 176, 또는 25 및 176 및 186, 또는 176 및 186 및 251, 또는 186 및 251 및 405, 또는 251 및 405 및 482에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95% 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
또 다른 특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 116, 181, 225 및 320으로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
또 다른 특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 위치 116 및 181 또는 181 및 225 또는 225 및 320에서, 바람직하게는 위치 116 및 181 및 225, 또는 181 및 225 및 320에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95% 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
대안적 실시양태에서, 본 발명은 모 서열과 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 X9D, X9F, X9K, X9N, X9P, X9Q, X9S, X9T, X9Y, X179G, X181D, X181F, X181H, X181I, X181N, X181Q, X181S, X181T, X181V, X181W, X181Y, X186A, X186C, X186D, X186F, X186H, X186I, X186K, X186L, X186M, X186R, X186V, X186W, X186Y, X190H, X195H, X195K, X195L, X195W, X195Y, X206C, X206H, X206M, X206Y, X244A, X244C, X244D, X244E, X244F, X244G, X244H, X244M, X244N, X244V, X402T X419C, X420D, X420E, X420G, X420H, X420K, X420L, X420Q, X422C, X422N, X422H, X423F, X423M, X423Q, X423S, X428C, X428D, X428E, X428G, X428I, X428K, X428L, X428M, X428N, X428R, X428S, X428V, X428W, X428Y, X430A, X430C, X430D, X430E, X430F, X430G, X430L, X430P, X430Q, X430S, X430T, X430V, X435K, X435P, X435S, X435A, X435D, X437L, X437T, X437W, X441C, X441K, X441L, X441M, X441S, X444H, X444M, X444N, X444R, X444T, X450C, X450D, X450E, X450H, X450L, X450M, X450P, X450Q, X450R, X450T, X452A, X452C, X452E, X452F, X452I, X452K, X452M, X452N, X452T, X454A, X454E, X454K, X454L, X454P, X454S, X454T, X466E, X466W, X469F, X469L, X469Y, X475A, X475K, X475E, X475L, X479I, X479K, X479M, X483F, X483L, X483Q 및 X483R로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하는 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3에 따른 아밀라제, 또는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3에 대해 적어도 60%의 서열 동일성을 갖는 임의의 알파-아밀라제이며, 가장 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1에 따른 아밀라제이다.
바람직하게는, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 하기 기재된 아미노산 위치 (서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따름) 중 1개 이상에서 아미노산 치환을 포함한다. 바람직하게는, 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3에 따른 아밀라제, 또는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3에 대해 적어도 60%의 서열 동일성을 갖는 임의의 알파-아밀라제이며, 가장 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1에 따른 아밀라제이다. 바람직하게는, 언급된 위치에서의 모 알파-아밀라제의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
한 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 9 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X9D, X9F, X9K, X9N, X9P, X9Q, X9S, X9T 또는 X9Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 179 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X179G를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 181 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X181D, X181F, X181H, X181I, X181N, X181Q, X181S, X181T, X181V, X181W 또는 X181Y, 바람직하게는 X181T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 186 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X186A, X186C, X186D, X186F, X186H, X186I, X186K, X186L, X186M, X186R, X186V, X186W 또는 X186Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 190 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X190H를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 195 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X195H, X195K, X195L, X195W 또는 X195Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 206 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X206C, X206H, X206M 또는 X206Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 244 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X244A, X244C, X244D, X244E, X244F, X244G, X244H, X244M, X244N 또는 X244V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 402 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X402T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 419 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X419C를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 420 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X420D, X420E, X420G, X420H, X420K, X420L 또는 X420Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 422 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X422C, X422N 또는 X422H를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 423 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X423F, X423M, X423Q 또는 X423S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 428 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X428C, X428D, X428E, X428G, X428I, X428K, X428L, X428M, X428N, X428R, X428S, X428V, X428W 또는 X428Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 430 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X430A, X430C, X430D, X430E, X430F, X430G, X430L, X430P, X430Q, X430S, X430T 또는 X430V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 435 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X435K, X435P, X435S, X435A 또는 X435D를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 437 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X437L, X437T 또는 X437W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 441 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X441C, X441K, X441L, X441M 또는 X441S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 444 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X444H, X444M, X444N, X444R 또는 X444T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 450 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X450C, X450D, X450E, X450H, X450L, X450M, X450P, X450Q, X450R 또는 X450T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 452 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X452A, X452C, X452E, X452F, X452I, X452K, X452M, X452N 또는 X452T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 454 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X454A, X454E, X454K, X454L, X454P, X454S 또는 X454T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 466 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X466E 또는 X466W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 469 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X469F, X469L 또는 X469Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 475 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X475A, X475K, X475E 또는 X475L을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 479 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X479I, X479K 또는 X479M을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 483 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X483F, X483L, X483Q 또는 X483R을 포함한다.
바람직하게는, 이러한 대안적 실시양태에서, 상기 언급된 위치에서의 모 알파-아밀라제 내의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다. 바람직하게는, 본 발명은 모 서열과 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따른 X181D, X181F, X181H, X181I, X181N, X181Q, X181S, X181T, X181V, X181W, X181Y, X186A, X186C, X186D, X186F, X186H, X186I, X186K, X186L, X186M, X186R, X186V, X186W, X186Y, X195H, X195K, X195L, X195W, X195Y, X206C, X206H, X206M, X206Y, X441C, X441K, X441L, X441M 및 X441S로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하는 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지고, 바람직하게는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3에 따른 아밀라제, 또는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3에 대해 적어도 60%의 서열 동일성을 갖는 임의의 알파-아밀라제이고, 가장 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1에 따른 아밀라제이다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
특히 바람직하게는, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4, 25, 100, 135, 135, 135, 135, 160, 176, 193, 251, 258, 276, 299, 323, 363, 363, 382, 405, 460 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함한다.
바람직하게는, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 H1, H2, N3, G4, T5, N6, G7, T8, M10, Y12, F13, E14, W15, Y16, L17, P18, N19, D20, G21, N22, H23, W24, N25, R26, L27, R28, S29, D30, A31, S32, N33, L34, K35, D36, K37, G38, I39, T40, A41, V42, P45, A47, W48, A51, G59, A60, L63, N70, Q71, K72, G73, V75, R76, T81, R82, N83, Q86, V89, T90, A91, L92, K93, S94, N95, G96, I97, Q98, V99, Y100, V103, N106, K108, G109, A113, T114, E115, W116, V117, A119, S125, N126, N128, Q129, V131, S132, G133, D134, Y135, T136, A139, T141, K142, F143, D144, F145, P146, G147, G149, N150, T151, N154, F155, K156, Y160, H161, F162, G164, V165, Q169, S170, Q172, L173, Q174, N175, R176, G184, D188, V191, Y203, H210, P211, E212, V213, V214, N215, E216, R218, N219, G221, V222, W223, Y224, T225, N226, T227, L230, D231, F233, R234, I235, D236, A237, V238, H240, K242, Y243, F245, W249, L250, T251, H252, V253, N255, T256, T257, K259, M261, F262, A263, V264, A265, W268, N270, I272, G273, A274, E276, L279, S280, W284, N285, H286, S287, V288, F289, D290, V291, P292, L293, H294, Y295, N296, L297, N299, S301, R302, S303, G304, N306, Y307, D308, M309, R310, Q311, I312, F313, N314, G315, V318, Q319, R320, H321, T323, H324, V326, T327, D333, P336, E337, E338, E341, S342, F343, V344, E345, E346, F348, P350, L351, A352, Y353, A354, L355, L357, T358, R359, D360, G362, Y363, P364, V366, F367, Y368, D370, Y372, P375, T376, G378, V379, A381, M382, K383, S384, K385, D387, P388, I389, L390, E391, A392, R393, Q394, K395, Y396, A397, Y398, G399, T400, Q401, D403, L405, D406, H407, P408, V410, W413, T414, R415, E416, D418, H421, S424, L426, A427, L429, S431, G436, K438, W439, M440, V442, G443, N445, N446, A447, G448, E449, W451, D453, T455, G456, N457, Q458, T459, N460, T461, V462, T463, N465, D467, G468, G470, V474, S478, S480, Y482, A119, D163, D271, F180, G182, G258, I177, I275, K185, K269, K281, N224, N260, N277, P322, P434, R118, S365, T193, T282, T356, V120, V317, W187, W189, Y178 및 Y298로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함한다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 G4, N25, K37, N70, Y100, R118, Y135, Y160, R176, T193, H210, T251, K281, G258, T323, Q361, Y363, Y368, L405, P434, E441, T459, N460, T451 및 Y482로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 N25, Y100, Y135, R176, T193 및 N460으로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함하고, 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다.
특히 바람직하게는, 본 발명은 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 G4, N25, Y100, Y135, Y160, R176, T193, T251, G258, E276, N299, T323, Y363, Y363, M382, L405, N460 및 Y482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 치환을 포함한다.
바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 X100D, X100F, X100K, X100L, X103A, X106D, X108A, X109A, X10A, X10C, X10E, X10F, X10L, X10W, X10Y, X113F, X113H, X113M, X113R, X113V, X113W, X113Y, X114A, X114C, X114D, X114E, X114F, X114G, X114H, X114I, X114K, X114L, X114M, X114N, X114Q, X114R, X114S, X114V, X114W, X114Y, X115C, X115D, X115K, X115M, X115N, X115Q, X115R, X115S, X115T, X115V, X116I, X116K, X116L, X116M, X116R, X116T, X117A, X117C, X117D, X117F, X117I, X117N, X117P, X117R, X117W, X117Y, X118A, X118D, X118E, X119H, X119P, X119R, X119S, X119Y, X120E, X120G, X120M, X120S, X120W, X120Y, X123D, X123S, X125A, X125D, X125E, X125F, X125G, X125H, X125K, X125L, X125M, X125N, X125Q, X125R, X125T, X125V, X125W, X125Y, X126D, X128C, X128E, X128L, X128M, X128W, X128Y, X129E, X12N, X12S, X131C, X131I, X131L, X131Q, X131W, X132T, X133A, X133C, X133D, X133E, X133H, X133K, X133N, X133P, X133Q, X133S, X134C, X134E, X134F, X134I, X134L, X134M, X134P, X134T, X134V, X134W, X134Y, X135D, X135E, X135G, X135M, X135N, X135P, X135S, X135T, X135W, X136A, X136C, X136D, X136E, X136F, X136H, X136L, X136M, X136N, X136P, X136W, X139C, X139S, X13A, X13Y, X141V, X142C, X142E, X142F, X142L, X142M, X142Q, X142R, X142W, X142Y, X143F, X144C, X144E, X144G, X144K, X144N, X144Q, X144R, X144S, X144T, X144V, X144Y, X145A, X146C, X146D, X146E, X146F, X146G, X146H, X146K, X146L, X146S, X146T, X146W, X147M, X149E, X14N, X150C, X150E, X150Q, X151C, X151E, X154A, X154Y, X155Y, X156E, X156V, X158H, X158N, X158Y, X15R, X160D, X160E, X160W, X161T, X162V, X163A, X163Q, X163T, X164V, X165S, X165T, X165W, X169A, X169D, X169E, X169S, X169V, X16F, X16R, X170C, X170F, X172A, X172C, X172D, X172K, X172N, X173I, X173Y, X174D, X174E, X174G, X174H, X174M, X174N, X174P, X174S, X174T, X175A, X175G, X175H, X175Q, X176K, X176S, X176T, X177A, X177G, X177K, X177N, X177P, X177R, X177S, X177W, X178F, X17K, X17V, X180M, X180N, X180T, X180W, X182D, X182E, X182N, X182Q, X182S, X185E, X185M, X185N, X187A, X187D, X187M, X187V, X188H, X188T, X188V, X189I, X18F, X18I, X18K, X18M, X18R, X18T, X191F, X191H, X191K, X191M, X191W, X191Y, X192A, X192T, X193D, X193E, X193G, X193V, X19A, X19C, X19D, X19F, X19G, X19H, X19I, X19K, X19L, X19M, X19P, X19Q, X19S, X19T, X19Y, X1R, X1V, X203E, X203R, X208F, X208I, X208Y, X20A, X20C, X20D, X20E, X20F, X20G, X20H, X20K, X20L, X20M, X20N, X20P, X20Q, X20S, X20T, X20V, X20W, X20Y, X210A, X210C, X210D, X210E, X210F, X210M, X210N, X210Q, X210S, X210Y, X211A, X211C, X211D, X211E, X211G, X211H, X211L, X211N, X211Q, X211S, X211T, X211V, X212C, X212D, X212I, X212L, X212W, X213A, X213C, X213M, X213R, X213S, X214E, X214P, X215A, X215D, X215E, X215H, X215W, X216G, X216H, X218A, X218C, X218D, X218E, X218F, X218G, X218H, X218I, X218K, X218L, X218N, X218Q, X218S, X218T, X218V, X218W, X218Y, X219A, X219C, X219D, X219E, X219F, X219G, X219H, X219K, X219M, X219Q, X219R, X219S, X219T, X219W, X219Y, X21E, X21S, X221F, X221N, X222D, X222K, X222S, X222T, X223C, 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X480D, X480E, X480M, X480R, X480Y, X482C, X482T, X482W, X48F, X48I, X48M, X48Y, X4A, X4C, X4K, X4M, X4Q, X4R, X4S, X51Q, X51T, X51V, X54D, X54G, X54Q, X59T, X5A, X5C, X5D, X5E, X5F, X5H, X5I, X5K, X5L, X5M, X5N, X5P, X5Q, X5R, X5V, X5Y, X60T, X63C, X63V, X6A, X6C, X6E, X6F, X6G, X6H, X6K, X6L, X6M, X6P, X6Q, X6S, X6T, X6V, X6W, X6Y, X70F, X70H, X70L, X70M, X70N, X70Y, X71D, X72C, X72D, X72E, X72N, X72T, X73L, X73N, X73Q, X75A, X75G, X75I, X75L, X75P, X75T, X75W, X76C, X76E, X76G, X76L, X76T, X76V, X7C, X7E, X7F, X7H, X7K, X7N, X7P, X7Q, X7R, X7S, X7V, X7W, X7Y, X81H, X81L, X82K, X82M, X83A, X83D, X83E, X83G, X83R, X83S, X86K, X87D, X87R, X89A, X89C, X89F, X89G, X89L, X89M, X89R, X89S, X8A, X8C, X8F, X8I, X8M, X8P, X8S, X8V, X8W, X8Y, X90A, X90D, X90E, X90F, X90G, X90I, X90M, X90N, X90Q, X90R, X90S, X90V, X90Y, X91C, X91D, X91E, X91F, X91G, X91H, X91I, X91K, X91L, X91M, X91N, X91Q, X91S, X91T, X91V, X91W, X91Y, X92D, X92M, X92V, X93K, X93Q, X94A, X94D, X94E, X94K, X94M, X94V, X94Y, X95E, X95I, X95L, X95V, X96K, X96N, X96Q, X97V, X98E, X98G, X98N, X99H, X99K, X99N, X100W 및 X1G로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
바람직하게는, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 하기 기재된 아미노산 위치 (서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따름) 중 1개 이상에서 아미노산 치환을 포함한다. 바람직하게는, 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3에 따른 아밀라제, 또는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3에 대해 적어도 60%의 서열 동일성을 갖는 임의의 알파-아밀라제이며, 가장 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1에 따른 아밀라제이다. 바람직하게는, 언급된 위치에서의 모 알파-아밀라제의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
한 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 100 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X100D, X100F, X100K, X100L 또는 X100W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 103 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X103A를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 106 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X106D를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 108 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X108A를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 109 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X109A를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 10 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X10A, X10C, X10E, X10F, X10L, X10W 또는 X10Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 113 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X113F, X113H, X113M, X113R, X113V, X113W 또는 X113Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 114 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X114A, X114C, X114D, X114E, X114F, X114G, X114H, X114I, X114K, X114L, X114M, X114N, X114Q, X114R, X114S, X114V, X114W 또는 X114Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 115 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X115C, X115D, X115K, X115M, X115N, X115Q, X115R, X115S, X115T 또는 X115V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 116 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X116I, X116K, X116L, X116M, X116R 또는 X116T, 바람직하게는 X116K를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 117 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X117A, X117C, X117D, X117F, X117I, X117N, X117P, X117R, X117W 또는 X117Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 118 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X118A, X118D 또는 X118E를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 119 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X119H, X119P, X119R, X119S 또는 X119Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 120 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X120E, X120G, X120M, X120S, X120W 또는 X120Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 123 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X123D 또는 X123S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 125 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X125A, X125D, X125E, X125F, X125G, X125H, X125K, X125L, X125M, X125N, X125Q, X125R, X125T, X125V, X125W 또는 X125Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 126 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X126D를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 128 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X128C, X128E, X128L, X128M, X128W 또는 X128Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 129 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X129E를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 12 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X12N 또는 X12S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 131 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X131C, X131I, X131L, X131Q 또는 X131W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 132 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X132T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 133 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X133A, X133C, X133D, X133E, X133H, X133K, X133N, X133P, X133Q 또는 X133S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 134 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X134C, X134E, X134F, X134I, X134L, X134M, X134P, X134T, X134V, X134W 또는 X134Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 135 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X135D, X135E, X135G, X135M, X135N, X135P, X135S, X135T 또는 X135W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 136 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X136A, X136C, X136D, X136E, X136F, X136H, X136L, X136M, X136N, X136P 또는 X136W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 139 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X139C 또는 X139S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 13 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X13A 또는 X13Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 141 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X141V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 142 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X142C, X142E, X142F, X142L, X142M, X142Q, X142R, X142W 또는 X142Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 143 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X143F를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 144 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X144C, X144E, X144G, X144K, X144N, X144Q, X144R, X144S, X144T, X144V 또는 X144Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 145 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X145A를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 146 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X146C, X146D, X146E, X146F, X146G, X146H, X146K, X146L, X146S, X146T 또는 X146W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 147 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X147M을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 149 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X149E를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 14 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X14N을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 150 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X150C, X150E 또는 X150Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 151 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X151C, X151E, X154A 또는 X154Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 155 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X155Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 156 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X156E 또는 X156V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 158 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X158H, X158N 또는 X158Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 15 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X15R을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 160 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X160D, X160E 또는 X160W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 161 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X161T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 162 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X162V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 163 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X163A, X163Q 또는 X163T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 164 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X164V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 165 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X165S, X165T 또는 X165W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 169 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X169A, X169D, X169E, X169S 또는 X169V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 16 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X16F 또는 X16R을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 170 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X170C 또는 X170F를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 172 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X172A, X172C, X172D, X172K 또는 X172N을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 173 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X173I 또는 X173Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 174 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X174D, X174E, X174G, X174H, X174M, X174N, X174P, X174S 또는 X174T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 175 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X175A, X175G, X175H 또는 X175Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 176 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X176K, X176S 또는 X176T, 바람직하게는 X176K를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 177 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X177A, X177G, X177K, X177N, X177P, X177R, X177S 또는 X177W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 178 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X178F를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 17 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X17K 또는 X17V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 180 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X180M, X180N, X180T 또는 X180W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 182 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X182D, X182E, X182N, X182Q 또는 X182S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 185 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X185E, X185M 또는 X185N을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 187 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X187A, X187D, X187M 또는 X187V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 188 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X188H, X188T 또는 X188V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 189 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X189I를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 18 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X18F, X18I, X18K, X18M, X18R 또는 X18T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 191 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X191F, X191H, X191K, X191M, X191W 또는 X191Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 192 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X192A 또는 X192T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 193 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X193D, X193E, X193G 또는 X193V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 19 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X19A, X19C, X19D, X19F, X19G, X19H, X19I, X19K, X19L, X19M, X19P, X19Q, X19S, X19T 또는 X19Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 1 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X1R, X1V 또는 X1G를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 203 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X203E 또는 X203R을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 208 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X208F, X208I 또는 X208Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 20 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X20A, X20C, X20D, X20E, X20F, X20G, X20H, X20K, X20L, X20M, X20N, X20P, X20Q, X20S, X20T, X20V, X20W 또는 X20Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 210 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X210A, X210C, X210D, X210E, X210F, X210M, X210N, X210Q, X210S 또는 X210Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 211 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X211A, X211C, X211D, X211E, X211G, X211H, X211L, X211N, X211Q, X211S, X211T 또는 X211V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 212 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X212C, X212D, X212I, X212L 또는 X212W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 213 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X213A, X213C, X213M, X213R 또는 X213S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 214 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X214E 또는 X214P를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 215 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X215A, X215D, X215E, X215H 또는 X215W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 216 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X216G 또는 X216H를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 218 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X218A, X218C, X218D, X218E, X218F, X218G, X218H, X218I, X218K, X218L, X218N, X218Q, X218S, X218T, X218V, X218W 또는 X218Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 219 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X219A, X219C, X219D, X219E, X219F, X219G, X219H, X219K, X219M, X219Q, X219R, X219S, X219T, X219W 또는 X219Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 21 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X21E 또는 X21S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 221 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X221F 또는 X221N을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 222 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X222D, X222K, X222S 또는 X222T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 223 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X223C, X223L, X223V 또는 X223Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 224 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X224F 또는 X224V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 225 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X225A, X225C, X225E, X225F, X225H, X225I, X225N, X225R, X225S 또는 X225Y, 바람직하게는 X225A를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 226 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X226A, X226C, X226D, X226E, X226G, X226H, X226I, X226L, X226M, X226Q, X226R, X226S, X226T, X226V, X226W 또는 X226Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 227 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X227C, X227F, X227G, X227H, X227I, X227K, X227L, X227M, X227R, X227T, X227V, X227W 또는 X227Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 22 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X22A, X22D, X22E, X22F, X22G, X22K, X22L, X22M, X22Q, X22R, X22T, X22W 또는 X22Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 230 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X230A 또는 X230F를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 231 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X231C, X231D 또는 X231N을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 233 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X233C, X233H, X233I, X233M, X233T, X233W 또는 X233Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 234 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X234C를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 235 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X235L, X235M 또는 X235V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 236 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X236Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 237 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X237C 또는 X237I를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 238 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X238A, X238F 또는 X238T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 23 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X23N, X23Q 또는 X23W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 240 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X240M을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 242 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X242M 또는 X242N을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 243 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X243D 또는 X243F를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 245 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X245E, X245H 또는 X245M을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 249 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X249D 또는 X249I를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 24 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X24G를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 250 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X250V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 251 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X251A, X251E, X251F, X251L, X251M, X251S 또는 X251T, 바람직하게는 X251E를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 252 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X252C, X252I 또는 X252S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 253 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X253C, X253G 또는 X253Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 255 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X255D, X255F, X255I, X255T 또는 X255V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 256 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X256C를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 257 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X257L, X257V 또는 X257Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 258 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X258F, X258Q 또는 X258R을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 259 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X259L을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 25 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X25A, X25C, X25D, X25F, X25G, X25H, X25K, X25L, X25M, X25Q, X25S, X25W 또는 X25Y, 바람직하게는 X25H를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 260 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X260H를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 261 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X261R을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 262 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X262C, X262D, X262E, X262H, X262P 또는 X262Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 263 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X263I를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 264 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X264H, X264T 또는 X264W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 265 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X265S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 268 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X268F 또는 X268G를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 269 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X269M을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 26 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X26A, X26D, X26E, X26F, X26L, X26M, X26P, X26S, X26V 또는 X26Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 270 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X270A, X270Q 또는 X270Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 271 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X271S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 272 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X272F, X272G, X272L 또는 X272S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 273 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X273A, X273C, X273D, X273E, X273F, X273H, X273I, X273L, X273M, X273P, X273Q, X273R, X273V, X273W 또는 X273Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 274 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X274F 또는 X274S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 275 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X275V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 276 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X276D, X276K, X276L, X276N, X276R 또는 X276Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 277 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X277D, X277E 또는 X277T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 279 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X279A 또는 X279P를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 27 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X27A, X27D, X27F, X27G, X27H, X27I, X27Q, X27R, X27T 또는 X27V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 280 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X280D, X280F, X280G, X280H, X280I, X280K, X280N, X280R, X280V 또는 X280Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 281 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X281A, X281D, X281E 또는 X281H를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 284 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X284A, X284F, X284H, X284L, X284M, X284N 또는 X284Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 285 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X285G, X285L, X285N 또는 X285P를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 286 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X286Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 287 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X287A, X287D, X287E, X287H 또는 X287T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 288 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X288A, X288K, X288P 또는 X288Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 289 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X289F, X289G, X289R 또는 X289T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 28 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X28C, X28D, X28E, X28F, X28G, X28I, X28K, X28N, X28Q, X28S, X28T 또는 X28V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 290 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X290D, X290M, X290N, X290Q 또는 X290W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 291 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X291D, X291K, X291T 또는 X291Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 292 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X292C, X292D, X292F, X292I, X292L, X292T, X292W 또는 X292Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 293 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X293D, X293E, X293F, X293K 또는 X293R을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 294 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X294G 또는 X294T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 295 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X295F를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 296 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X296A, X296C, X296L 또는 X296Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 297 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X297E, X297F, X297H, X297K, X297M, X297S 또는 X297V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 299 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X299G, X299I, X299K, X299L, X299S 또는 X299Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 29 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X29D, X29E, X29F, X29G, X29H, X29I, X29K, X29L, X29N, X29P, X29Q, X29V, X29W 또는 X29Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 2 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X2I 또는 X2S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 301 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X301F를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 302 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X302H, X302I, X302Q, X302V 또는 X302Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 303 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X303E, X303H, X303I, X303K, X303L, X303M, X303N, X303P, X303R 또는 X303T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 304 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X304A, X304D, X304E, X304H, X304K, X304M, X304N, X304P, X304R, X304T, X304W 또는 X304Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 306 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X306A, X306D, X306E, X306G, X306H, X306I, X306M, X306Q, X306R, X306S, X306T, X306V, X306W 또는 X306Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 307 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X307F 또는 X307M을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 308 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X308S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 309 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X309H, X309L 또는 X309Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 30 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X30A, X30E, X30F, X30G, X30H, X30I, X30K, X30L, X30M, X30Q, X30T, X30W 또는 X30Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 310 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X310A 또는 X310Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 311 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X311A, X311E, X311G, X311H, X311K, X311N, X311R, X311T 또는 X311Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 312 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X312L 또는 X312M을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 313 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X313V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 314 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X314C, X314E, X314K 또는 X314Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 315 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X315A, X315C, X315E, X315H, X315K 또는 X315T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 318 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X318I, X318S 또는 X318T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 319 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X319A, X319D, X319H, X319I, X319K, X319M, X319N, X319P, X319S, X319T 또는 X319W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 31 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X31N, X31Q, X31S, X31T, X31V 또는 X31W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 320 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X320A, X320C, X320D, X320E, X320G, X320H, X320K, X320L, X320N, X320Q, X320S 또는 X320Y, 바람직하게는 X320K를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 321 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X321A, X321E, X321K, X321N, X321T, X321V 또는 X321W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 323 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X323A, X323G, X323K, X323L 또는 X323V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 324 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X324K, X324L, X324M, X324W 또는 X324Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 326 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X326G, X326N, X326S 또는 X326Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 327 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X327C, X327L 또는 X327M을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 32 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X32A, X32D, X32E, X32F, X32H, X32I, X32L, X32M, X32N, X32P, X32Q, X32T 또는 X32W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 333 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X333I를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 334 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X334T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 336 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X336K를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 337 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X337A, X337C, X337F, X337G, X337I, X337K, X337L, X337M, X337N, X337Q, X337R, X337S, X337T, X337V 또는 X337Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 338 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X338G, X338S 또는 X338T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 33 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X33D, X33E, X33H, X33K, X33M, X33Q, X33R 또는 X33Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 341 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X341V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 342 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X342P를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 343 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X343L, X343T, X343W 또는 X343Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 344 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X344I, X344Q 또는 X344V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 345 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X345D, X345G, X345M, X345N, X345Q, X345S 또는 X345T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 346 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X346A, X346C, X346D, X346G, X346H, X346N 또는 X346Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 348 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X348T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 34 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X34H, X34I 또는 X34V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 350 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X350H, X350K 또는 X350P를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 351 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X351A 또는 X351M을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 352 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X352S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 353 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X353H를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 354 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X354I, X354N, X354T 또는 X354Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 355 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X355I 또는 X355M을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 356 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X356I 또는 X356V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 357 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X357A를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 358 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X358I, X358L, X358N, X358P 또는 X358V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 359 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X359E를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 35 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X35A, X35C, X35D, X35G, X35H, X35I, X35L, X35M, X35N, X35P, X35Q, X35R, X35S, X35T, X35V 또는 X35Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 360 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X360A, X360F, X360G, X360I, X360L, X360N, X360Q, X360R, X360S, X360T, X360V 또는 X360Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 362 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X362F, X362K, X362M, X362N, X362T, X362V 또는 X362Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 363 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X363A, X363C, X363D, X363E, X363G, X363H, X363K, X363L, X363M, X363P, X363Q, X363R, X363S, X363T, X363V, X363W 또는 X363Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 364 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X364A, X364C, X364G, X364K, X364L, X364N, X364S, X364T 또는 X364V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 366 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X366I, X366L 또는 X366T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 367 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X367E 또는 X367S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 368 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X368A, X368F, X368L 또는 X368N을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 36 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X36A, X36E, X36G, X36I, X36K, X36M, X36N, X36P, X36Q, X36R, X36S, X36T 또는 X36V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 370 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X370E 또는 X370I를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 372 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X372A, X372C, X372E, X372F, X372H, X372M, X372N 또는 X372Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 375 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X375A, X375D, X375E, X375I, X375K, X375Q, X375R, X375T, X375W 또는 X375Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 376 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X376G, X376I, X376K, X376L, X376M, X376Q, X376R, X376S 또는 X376V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 377 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X377Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 378 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X378C, X378D, X378E 또는 X378R을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 379 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X379A, X379L 또는 X379S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 37 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X37A, X37G, X37M, X37P, X37T, X37V 또는 X37W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 381 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X381E 또는 X381V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 382 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X382A, X382H, X382K, X382L, X382N, X382Q 또는 X382S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 383 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X383C, X383D, X383E, X383H, X383I, X383M, X383N, X383Q, X383R, X383S, X383V 또는 X383Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 384 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X384A, X384C, X384D, X384E, X384F, X384I, X384L, X384M, X384N, X384Q, X384R, X384T, X384V, X384W 또는 X384Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 385 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X385A, X385C, X385D, X385E, X385F, X385G, X385H, X385I, X385L, X385M, X385N, X385P, X385Q, X385R, X385S, X385T, X385V, X385W 또는 X385Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 387 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X387C, X387E 또는 X387N을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 388 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X388E, X388F, X388H, X388I, X388M, X388R 또는 X388V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 389 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X389G, X389H, X389K 또는 X38N을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 390 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X390D, X390F, X390M, X390N, X390P 또는 X390R을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 391 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X391A, X391F, X391G, X391K, X391M, X391N, X391Q, X391S, X391T 또는 X391Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 392 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X392C 또는 X392V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 393 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X393E, X393H, X393P, X393S 또는 X393V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 394 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X394A, X394C, X394E, X394H, X394I, X394L, X394M, X394N, X394R 또는 X394S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 395 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X395A, X395H, X395M 또는 X395V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 396 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X396H 또는 X396P를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 397 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X397D, X397H, X397P 또는 X397S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 398 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X398M을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 399 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X399P를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 39 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X39E 또는 X39K를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 3 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X3A, X3F, X3G, X3I, X3K, X3L, X3Q 또는 X3V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 400 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X400A, X400D, X400E, X400G, X400H, X400I, X400K, X400L, X400M, X400N, X400P, X400Q, X400R, X400S, X400V 또는 X400W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 401 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X401I, X401K, X401M 또는 X401T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 403 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X403N을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 405 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X405C, X405H, X405M, X405T 또는 X405V, 바람직하게는 X405M을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 406 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X406P를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 407 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X407D, X407R 또는 X407S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 408 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X408E, X408I 또는 X408Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 40 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X40I 또는 X40S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 410 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X410H, X410I, X410K, X410L, X410P, X410R 또는 X410Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 413 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X413S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 414 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X414C, X414E 또는 X414S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 415 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X415E 또는 X415I를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 416 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X416S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 418 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X418C, X418N 또는 X418P를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 41 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X41C, X41D, X41E, X41G, X41Q, X41S 또는 X41T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 421 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X421N 또는 X421P를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 424 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X424A를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 426 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X426D 또는 X426W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 427 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X427C, X427F, X427G, X427K, X427Q, X427R, X427S, X427T 또는 X427V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 429 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X429A, X429D, X429E, X429F, X429G, X429I, X429M, X429N, X429P, X429Q, X429S, X429T, X429V 또는 X429W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 42 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X42C, X42I, X42Q 또는 X42V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 431 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X431I를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 434 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X434S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 436 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X436E를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 438 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X438F, X438P 또는 X438Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 439 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X439K, X439C 또는 X439P를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 440 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X440V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 442 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X442Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 443 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X443H 또는 X443T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 445 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X445A, X445C, X445D, X445F, X445G, X445H, X445K, X445M, X445Q, X445R, X445S, X445T 또는 X445V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 446 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X446F, X446I, X446L, X446P, X446Q, X446R, X446V 또는 X446W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 447 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X447V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 448 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X448D, X448E, X448H 또는 X448N을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 449 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X449A, X449F, X449G, X449K, X449L, X449M, X449N, X449P, X449Q, X449R, X449S, X449V, X449W 또는 X449Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 451 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X451L을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 453 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X453G, X453I, X453N, X453P 또는 X453Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 455 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X455L을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 456 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X456L, X456M, X456R, X456S, X456V, X456W 또는 X456Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 457 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X457A, X457C, X457E, X457F, X457G, X457K, X457L, X457M, X457R, X457S, X457T, X457V 또는 X457W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 458 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X458I, X458K, X458V 또는 X458W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 459 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X459C, X459D, X459E, X459I, X459K, X459N, X459Q, X459R, X459V 또는 X459Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 45 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X45G 또는 X45N을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 460 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X460A, X460D, X460E, X460G, X460Q, X460R, X460S, X460T 또는 X460V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 461 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X461A, X461E, X461F, X461K, X461L, X461M, X461N, X461Q, X461R, X461S 또는 X461V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 462 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X462K를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 463 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X463L을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 465 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X465H, X465P, X465R 또는 X465V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 467 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X467A, X467E 또는 X467H를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 468 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X468D 또는 X468H를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 470 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X470A, X470Q 또는 X470T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 471 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X471E를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 474 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X474F, X474H 또는 X474P를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 478 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X478A 또는 X478E를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 47 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X47S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 480 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X480D, X480E, X480M, X480R 또는 X480Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 482 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X482C, X482T 또는 X482W, 바람직하게는 X482W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 48 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X48F, X48I, X48M 또는 X48Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 4 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X4A, X4C, X4K, X4M, X4Q, X4R 또는 X4S, 바람직하게는 X4Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 51 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X51Q, X51T 또는 X51V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 54 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X54D, X54G 또는 X54Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 59 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X59T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 5 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X5A, X5C, X5D, X5E, X5F, X5H, X5I, X5K, X5L, X5M, X5N, X5P, X5Q, X5R, X5V 또는 X5Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 60 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X60T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 63 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X63C 또는 X63V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 6 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X6A, X6C, X6E, X6F, X6G, X6H, X6K, X6L, X6M, X6P, X6Q, X6S, X6T, X6V, X6W 또는 X6Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 70 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X70F, X70H, X70L, X70M, X70N 또는 X70Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 71 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X71D를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 72 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X72C, X72D, X72E, X72N 또는 X72T를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 73 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X73L, X73N 또는 X73Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 75 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X75A, X75G, X75I, X75L, X75P, X75T 또는 X75W를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 76 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X76C, X76E, X76G, X76L, X76T 또는 X76V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 7 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X7C, X7E, X7F, X7H, X7K, X7N, X7P, X7Q, X7R, X7S, X7V, X7W 또는 X7Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 81 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X81H 또는 X81L을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 82 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X82K 또는 X82M을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 83 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X83A, X83D, X83E, X83G, X83R 또는 X83S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 86 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X86K를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 87 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X87D 또는 X87R을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 89 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X89A, X89C, X89F, X89G, X89L, X89M, X89R 또는 X89S를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 8 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X8A, X8C, X8F, X8I, X8M, X8P, X8S, X8V, X8W 또는 X8Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 90 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X90A, X90D, X90E, X90F, X90G, X90I, X90M, X90N, X90Q, X90R, X90S, X90V 또는 X90Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 91 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X91C, X91D, X91E, X91F, X91G, X91H, X91I, X91K, X91L, X91M, X91N, X91Q, X91S, X91T, X91V, X91W 또는 X91Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 92 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X92D, X92M 또는 X92V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 93 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X93K 또는 X93Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 94 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X94A, X94D, X94E, X94K, X94M, X94V 또는 X94Y를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 95 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X95E, X95I, X95L 또는 X95V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 96 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X96K, X96N 또는 X96Q를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 97 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X97V를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 98 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X98E, X98G 또는 X98N을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 변이체 알파-아밀라제는 모 알파-아밀라제와 비교하여 위치 99 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환, 바람직하게는 치환 X99H, X99K 또는 X99N을 포함한다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 X4Q, X7H, X7W, X25H, X25Y, X37M, X70H, X100W, X118D, X135T, X160W, X176K, X193E, X210C, X251E, X281N, X258Q, X323G, X361R, X363E, X363H, X363N, X368F, X405M, X434R, X441Q, X459N, X460G, X451L 및 X482W로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 X25H, X25Y, X100W, X135T, X176K, X193E 및 X460G로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 X4Q, X25H, X100W, X135E, X135T, X135W, X135D, X160W, X176K, X193E, X251E, X258Q, X276R, X299S, X323G, X363E, X363H, X382Q, X405M, X460G 및 X482W로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 X4Q, X25H, X176K, X186E, X251E, X405M 및 X482W로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 X4Q, X25H, X176K, X251E, X405M 및 X482W로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 X116K, X181T, X225A 및 X320K로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 H1G, H1V, H1R, H2S, H2I, N3Q, N3K, N3F, N3G, N3L, G4Q, G4R, G4S, G4K, G4M, G4A, G4C, T5F, T5E, T5M, T5Y, T5R, T5Q, T5K, T5L, T5A, T5V, T5C, T5N, T5H, T5D, T5P, T5I, N6T, N6E, N6A, N6K, N6Q, N6V, N6M, N6G, N6L, N6H, N6W, N6F, N6P, N6S, N6C, N6Y, G7Y, G7S, G7H, G7C, G7Q, G7F, G7P, G7W, G7R, G7K, G7E, G7V, G7N, T8C, T8V, T8F, T8Y, T8P, T8W, T8A, T8S, T8M, T8I, M10W, M10Y, M10L, M10C, M10E, M10F, M10A, Y12N, Y12S, F13A, F13Y, E14N, W15R, Y16F, Y16R, L17K, L17V, P18R, P18M, P18F, P18K, P18T, P18I, N19P, N19L, N19F, N19Y, N19T, N19I, N19Q, N19C, N19H, N19S, N19M, N19K, N19G, N19D, N19A, D20C, D20S, D20L, D20M, D20T, D20D, D20Q, D20F, D20P, D20G, D20V, D20W, D20A, D20Y, D20H, D20K, D20E, G21S, G21E, N22E, N22F, N22A, N22D, N22M, N22T, N22K, N22Y, N22G, N22R, N22Q, N22W, N22L, H23N, H23Q, H23W, W24G, N25H, N25Y, N25K, N25F, N25S, N25C, N25D, N25A, N25G, N25W, N25Q, N25M, N25L, R26S, R26V, R26M, R26A, R26D, R26E, R26F, R26P, R26Y, R26L, L27D, L27I, L27F, L27R, L27G, L27Q, L27V, L27T, L27A, L27H, R28N, R28S, R28F, R28C, R28E, R28T, R28G, R28K, R28D, R28V, R28I, R28Q, S29Y, S29L, S29P, S29W, S29K, S29F, S29N, S29H, S29D, S29V, S29G, S29Q, S29I, D30F, D30I, D30A, D30K, D30W, D30Y, D30M, D30L, D30H, D30Q, D30G, D30E, D30T, A31S, A31V, A31Q, A31T, A31N, A31W, S32T, S32H, S32W, S32F, S32Q, S32I, S32A, S32P, S32E, S32M, S32N, S32D, S32L, N33Y, N33D, N33M, N33Q, N33K, N33R, L34H, L34V, L34I, K35C, K35Y, K35P, K35T, K35M, K35H, K35A, K35V, K35I, K35G, K35Q, K35D, K35N, K35R, K35S, K35L, D36V, D36I, D36T, D36K, D36A, D36S, D36R, D36M, D36E, D36P, D36G, D36N, D36Q, K37P, K37V, K37W, K37A, K37G, G38N, I39E, I39K, T40I, T40S, A41G, A41Q, A41C, A41D, A41E, A41S, A41T, V42Q, V42V, V42I, V42C, P45N, P45G, A47S, W48F, W48I, W48M, A51T, G59T, A60T, L63V, L63C, N70N, N70L, N70M, N70F, N70Y, Q71D, K72T, K72E, K72D, K72N, K72C, G73Q, G73L, G73N, V75A, V75I, V75W, V75P, V75G, V75T, R76G, R76T, R76C, R76V, R76E, R76L, T81H, R82M, R82K, N83G, N83R, N83S, Q86K, V89F, V89A, V89C, V89L, V89G, V89M, V89S, V89R, T90Q, T90F, T90G, T90E, T90A, T90N, T90I, T90R, T90Y, T90V, T90S, T90M, T90D, A91S, A91Y, A91K, A91Q, A91F, A91H, A91T, A91I, A91W, A91N, A91V, A91L, A91C, A91G, A91D, A91E, A91M, L92V, L92M, L92D, K93K, K93Q, S94M, S94K, S94Y, S94D, S94A, S94V, N95V, N95I, N95E, N95L, G96N, G96K, I97V, Q98G, Q98E, Q98N, V99K, V99H, V99N, Y100D, Y100K, Y100L, Y100F, V103A, N106D, K108A, G109A, A113Y, A113H, A113M, A113V, A113F, A113W, A113R, T114D, T114H, T114N, T114W, T114E, T114C, T114G, T114L, T114M, T114Q, T114F, T114A, T114V, T114K, T114S, T114Y, T114R, T114I, E115C, E115K, E115N, E115T, E115M, E115S, E115Q, E115R, E115D, E115V, W116I, W116K, W116M, W116R, X116T, W116L, V117D, V117Y, V117N, V117C, V117R, V117W, V117A, V117I, V117P, V117F, A119Y, A119R, A119P, A119H, S125A, S125K, S125L, S125T, S125R, S125F, S125W, S125Q, S125V, S125Y, S125H, S125N, S125E, S125G, S125M, N126D, N128C, N128L, N128Y, N128E, N128W, N128M, Q129E, V131I, V131C, S132T, G133E, G133P, G133C, G133D, G133Q, G133S, G133H, G133A, G133N, G133K, D134Y, D134W, D134F, D134P, D134E, D134V, D134L, D134M, D134T, D134C, D134I, Y135M, T136D, T136E, T136F, T136M, T136P, T136H, T136C, T136A, T136W, T136L, T136N, A139C, T141V, K142C, K142W, K142Y, K142L, K142M, K142Q, K142F, K142E, K142R, F143F, D144Q, D144C, D144V, D144K, D144T, D144Y, D144E, D144G, D144N, D144S, D144R, F145A, P146C, P146H, P146K, P146T, P146E, P146S, P146D, P146W, P146F, P146L, P146G, G147M, G149E, N150Q, N150E, N150C, T151C, T151E, N154Y, N154A, F155Y, K156V, Y160W, H161T, F162V, G164V, V165W, Q169E, Q169V, S170F, S170C, Q172C, Q172K, Q172A, L173I, L173Y, Q174P, Q174M, Q174E, Q174S, N175G, N175Q, N175H, R176K, R181D, R181F, R181H, R181I, R181N, R181Q, R181S, R181T, R181V, R181W, R181Y, D188V, D188H, V191K, V191H, V191F, V191W, V191Y, Y203E, Y203R, H210D, H210C, H210E, H210N, H210F, H210Y, H210M, H210Q, H210S, H210A, P211N, P211C, P211T, P211E, P211G, P211V, P211Q, P211A, P211H, P211L, P211S, E212W, E212L, E212I, E212D, E212C, V213A, V213S, V213M, V213R, V213C, V214P, V214E, N215E, N215D, N215H, N215W, N215A, E216H, E216G, R218Q, R218E, R218C, R218N, R218F, R218S, R218G, R218K, R218I, R218T, R218D, R218Y, R218H, R218L, R218V, R218A, R218W, N219E, N219Q, N219K, N219T, N219M, N219D, N219F, N219S, N219R, N219A, N219Y, N219H, N219W, N219G, N219C, G221N, G221F, V222S, V222T, V222D, W223V, W223Y, W223L, W223C, Y224V, Y224F, T225A, T225R, T225N, T225E, T225H, T225F, T225C, T225Y, T225I, N226C, N226W, N226I, N226R, N226Y, N226D, N226L, N226M, N226G, N226T, N226Q, N226S, N226A, N226V, N226E, N226H, T227W, T227C, T227T, T227R, T227M, T227K, T227Y, T227V, T227F, T227I, T227H, T227L, T227G, L230A, L230F, D231N, D231C, F233T, F233W, F233H, F233C, F233I, F233Y, F233M, R234C, I235M, I235V, I235L, D236Y, A237C, A237I, V238T, H240M, K242M, Y243F, F245E, F245M, F245H, W249D, W249I, L250V, T251E, T251A, T251L, T251S, T251M, T251F, H252C, H252I, H252S, 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G304M, G304E, G304P, G304W, G304K, G304T, N306M, N306E, N306A, N306G, N306W, N306V, N306S, N306I, N306H, N306T, N306D, N306Q, N306Y, N306R, Y307F, Y307M, D308S, M309H, M309L, M309Q, R310Q, R310A, Q311G, Q311E, Q311H, Q311A, Q311K, Q311T, Q311N, Q311R, Q311Y, I312M, I312L, F313V, N314C, N314Q, G315C, G315A, G315H, G315T, G315E, G315K, V318T, V318S, V318I, Q319K, Q319H, Q319P, Q319A, Q319I, Q319D, Q319M, Q319S, Q319N, Q319T, Q319W, R320G, R320Y, R320L, R320N, R320A, R320D, R320K, R320Q, R320E, R320H, R320C, R320S, H321E, H321W, H321T, H321A, H321N, H321V, H321K, T323K, T323G, H324W, H324K, H324Y, V326Y, V326N, V326G, V326S, T327M, T327C, T327L, D333I, P336K, E337N, E337K, E337M, E337T, E337V, E337Q, E337S, E337R, E337I, E337Y, E337G, E337F, E337A, E337L, E338G, E338T, E338S, E341V, S342P, F343W, F343Y, V344I, V344Q, V344V, E345N, E345T, E345M, E345G, E345S, E345D, E345Q, E346D, E346C, E346H, E346A, E346G, E346Q, E346N, F348T, P350P, P350H, P350K, L351M, L351A, A352S, Y353H, A354Y, A354N, 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L405M, T81L 및 R82C로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 G4Q, G7H, G7W, N25H, N25Y, K37M, N70H, Y100W, R118D, Y135T, Y160W, R176K, T193E, H210C, T251E, K281N, G258Q, T323G, Q361R, Y363E, Y363H, Y363N, Y368F, L405M, P434R, E441Q, T459N, N460G, T451L 및 Y482W로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 N25H, Y100W, Y135T, R176K, T193E 및 N460G로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 G4Q, N25H, Y100W, Y135E, Y135T, Y135W, Y135D, Y160W, R176K, T193E, T251E, G258Q, E276R, N299S, T323G, Y363E, Y363H, M382Q, L405M, N460G 및 Y482W로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 G4Q, N25H, R176K, G186E, T251E, L405M, W439K 및 Y482W로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 G4Q, N25H, R176K, T251E, L405M, W439K 및 Y482W로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 G4Q, N25H, R176K, G186E, T251E, L405M 및 Y482W로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 G4Q, N25H, R176K, T251E, L405M 및 Y482W로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 G4Q, N25H, R176K, G186E, T251E, L405M 및 Y482W로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
바람직하게는, 1개 이상의 아미노산 변경, 바람직하게는 치환은 알파-아밀라제의 표면 상에 위치한 아미노산 위치에서 이루어진다. 바람직하게는, 알파-아밀라제의 표면 상에 위치한 아미노산 위치에서의 1개 이상의 아미노산 변경, 바람직하게는 치환은 서열식별번호: 3의 넘버링에 따른 5, 7, 16, 18, 20, 22, 26, 28, 29, 32, 35, 36, 54, 70, 73, 75, 83, 86, 87, 90, 93, 94, 95, 96, 98, 113, 116, 125, 126, 128, 129, 131, 133, 135, 136, 146, 147, 149, 150, 151, 154, 158, 160, 169, 170, 172, 174, 175, 184, 191, 192, 208, 210, 224, 242, 249, 253, 256, 257, 268, 279, 297, 302, 303, 304, 306, 308, 309, 311, 312, 313, 318, 320, 321, 336, 337, 338, 345, 358, 370, 375, 376, 378, 379, 382, 383, 397, 398, 401, 405, 406, 416, 418, 421, 434, 442, 443, 446, 448, 455, 457, 458, 459, 461, 463, 465, 467, 471 및 474로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, 본 발명의 알파-아밀라제는 알파-아밀라제의 표면 상에 위치한 아미노산 위치에서의 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 알파-아밀라제의 표면 상에 위치한 아미노산 위치에서의 치환은 서열식별번호: 3의 넘버링에 따른 X5F, X5E, X5M, X5Y, X5R, X5Q, X5K, X5L, X5A, X5V, X5C, X5N, X5H, X5D, X5P, X7Y, X7S, X7H, X7C, X7Q, X7F, X7P, X7W, X7R, X7K, X7E, X7V, X7N, X16F, X16R, X18R, X18M, X18F, X18K, X18T, X18I, X20C, X20S, X20L, X20M, X20T, X20D, X20Q, X20F, X20P, X20G, X20V, X20W, X20A, X20Y, X20H, X20K, X20E, X22E, X22F, X22A, X22D, X22M, X22T, X22K, X22Y, X22G, X22R, X22Q, X22W, X22L, X26S, X26V, X26M, X26A, X26D, X26E, X26F, X26P, X26Y, X26L, X28N, X28S, X28F, X28C, X28E, X28T, X28G, X28K, X28D, X28V, X28I, X28Q, X29Y, X29L, X29P, X29W, X29K, X29F, X29N, X29H, X29E, X29D, X29V, X29G, X29Q, X29I, X32T, X32H, X32W, X32F, X32Q, X32I, X32A, X32P, X32E, X32M, X32N, X32D, X32L, X35C, X35Y, X35P, X35T, X35M, X35H, X35A, X35V, X35I, X35G, X35Q, X35D, X35N, X35R, X35S, X35L, X36V, X36I, X36T, X36K, X36A, X36S, X36R, X36M, X36E, X36P, X36G, X36N, X36Q, X54D, X54G, X54Q, X70N, X70L, X70H, X70M, X70F, X70Y, X73Q, X73L, X73N, X75A, X75I, X75W, X75P, X75G, X75L, X75T, X83G, X83R, X83E, X83D, X83A, X83S, X86K, X87D, X87R, X90Q, X90F, X90G, X90E, X90A, X90N, X90I, X90R, X90Y, X90V, X90S, X90M, X90D, X93K, X93Q, X94M, X94K, X94Y, X94D, X94A, X94E, X94V, X95V, X95I, X95E, X95L, X96N, X96Q, X96K, X98G, X98E, X98N, X113Y, X113H, X113M, X113V, X113F, X113W, X113R, X116R, X116T, X116K, X116L, X125A, X125K, X125L, X125T, X125R, X125F, X125W, X125D, X125Q, X125V, X125Y, X125H, X125N, X125E, X125G, X125M, X126D, X128C, X128L, X128Y, X128E, X128W, X128M, X129E, X131I, X131L, X131W, X131C, X133E, X133P, X133C, X133D, X133Q, X133S, X133H, X133A, X133N, X133K, X135M, X135D, X135E, X135T, X135W, X136D, X136E, X136F, X136M, X136P, X136H, X136C, X136A, X136W, X136L, X136N, X146C, X146H, X146K, X146T, X146E, X146S, X146D, X146W, X146F, X146L, X146G, X147M, X149E, X150Q, X150E, X150C, X151C, X151E, X154Y, X154A, X158Y, X158N, X158H, X160W, X160D, X169E, X169A, X169V, X170F, X170C, X172C, X172K, X172D, X172N, X172A, X174P, X174M, X174E, X174D, X174T, X174S, X174H, X175G, X175Q, X175H, X175A, X191K, X191H, X191F, X191W, X191Y, X192A, X192T, X208I, X208Y, X208F, X210D, X210C, X210E, X210N, X210F, X210Y, X210M, X210Q, X210S, X210A, X224V, X224F, X242M, X249D, X249I, X253Y, X253G, X256C, X257Y, X257L, X257V, X268G, X279P, X297M, X297K, X297S, X297H, X297V, X297E, X297F, X302H, X302I, X302Q, X302Y, X302V, X303P, X303M, X303E, X303I, X303R, X303K, X303N, X303L, X303H, X303T, X304H, X304A, X304R, X304Y, X304D, X304N, X304M, X304E, X304P, X304W, X304K, X304T, X306M, X306E, X306A, X306G, X306W, X306V, X306S, X306I, X306H, X306T, X306D, X306Q, X306Y, X306R, X308S, X309H, X309L, X309Q, X311G, X311E, X311H, X311A, X311K, X311T, X311N, X311R, X311Y, X312M, X312L, X313V, X318T, X318S, X318I, X320G, X320Y, X320L, X320N, X320A, X320D, X320K, X320Q, X320E, X320H, X320C, X320S, X321E, X321W, X321T, X321A, X321N, X321V, X321K, X336K, X337N, X337K, X337M, X337T, X337V, X337Q, X337S, X337C, X337R, X337I, X337Y, X337G, X337F, X337A, X337L, X338G, X338T, X338S, X345N, X345T, X345M, X345G, X345S, X345D, X345Q, X358I, X358L, X358N, X358V, X358P, X370E, X370I, X375K, X375A, X375D, X375E, X375R, X375T, X375I, X375W, X375Y, X375Q, X376S, X376G, X376R, X376M, X376K, X376I, X376V, X376Q, X376L, X378E, X378R, X378D, X378C, X379L, X379A, X379S, X382N, X382H, X382Q, X382K, X382A, X382L, X382S, X383R, X383I, X383D, X383V, X383M, X383E, X383N, X383S, X383Q, X383Y, X383C, X383H, X397P, X397D, X397S, X397H, X398M, X401M, X401K, X401T, X401I, X405H, X405V, X405T, X405M, X405C, X406P, X416S, X418C, X418P, X418N, X421P, X421N, X434S, X442Q, X443T, X443H, X446P, X446I, X446V, X446F, X446L, X446R, X446Q, X446W, X448E, X448H, X448N, X448D, X455L, X457K, X457C, X457L, X457S, X457R, X457F, X457T, X457A, X457V, X457W, X457E, X457M, X457G, X458V, X458W, X458I, X458K, X459Q, X459D, X459I, X459K, X459C, X459V, X459E, X459R, X459N, X459Y, X461A, X461R, X461F, X461E, X461S, X461L, X461V, X461M, X461K, X461N, X461Q, X463L, X465P, X465V, X465H, X465R, X467A, X467E, X467H, X471E, X474P, X474H 및 X474F로 이루어진 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 1개 이상의 아미노산 변경, 바람직하게는 치환은 알파-아밀라제의 촉매 중심 근처에, 바람직하게는 알파-아밀라제의 촉매 중심으로부터 20 옹스트롬 미만의 거리에 위치한 아미노산 위치에서 이루어진다. 바람직하게는, 알파-아밀라제의 촉매 중심 근처에, 바람직하게는 알파-아밀라제의 촉매 중심으로부터 20 옹스트롬 미만의 거리에 위치한 아미노산 위치에서의 1개 이상의 아미노산 변경, 바람직하게는 치환은 서열식별번호: 3의 넘버링에 따른 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 51, 54, 59, 60, 71, 72, 73, 76, 109, 123, 125, 126, 172, 173, 174, 175, 176, 192, 193, 203, 234, 236, 237, 238, 240, 268, 270, 333, 334, 337, 338, 341 및 342로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, 본 발명의 알파-아밀라제는 알파-아밀라제의 촉매 중심 근처에, 바람직하게는 알파-아밀라제의 촉매 중심으로부터 20 옹스트롬 미만의 거리에 위치한 아미노산 위치에서 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 알파-아밀라제의 촉매 중심 근처에, 바람직하게는 알파-아밀라제의 촉매 중심으로부터 20 옹스트롬 미만의 거리에 위치한 아미노산 위치에서의 치환은 서열식별번호: 3의 넘버링에 따른 X14N, X15R, X16F, X16R, X17K, X17V, X18R, X18M, X18F, X18K, X18T, X18I, X19P, X19L, X19F, X19Y, X19T, X19I, X19Q, X19C, X19H, X19S, X19M, X19K, X19G, X19D, X19A, X20C, X20S, X20L, X20M, X20T, X20D, X20Q, X20F, X20P, X20G, X20V, X20W, X20A, X20Y, X20H, X20K, X20E, X51V, X51Q, X51T, X54D, X54G, X54Q, X59T, X60T, X71D, X72T, X72E, X72D, X72N, X72C, X73Q, X73L, X73N, X76G, X76T, X76C, X76V, X76E, X76L, X109A, X123D, X123S, X125A, X125K, X125L, X125T, X125R, X125F, X125W, X125D, X125Q, X125V, X125Y, X125H, X125N, X125E, X125G, X125M, X126D, X172C, X172K, X172D, X172N, X172A, X173I, X173Y, X174P, X174M, X174E, X174D, X174T, X174S, X174H, X175G, X175Q, X175H, X175A, X176K, X192A, X192T, X193E, X203E, X203R, X234C, X236Y, X237C, X237I, X238T, X240M, X268G, X270A, X270Y, X333I, X334T, X337N, X337K, X337M, X337T, X337V, X337Q, X337S, X337C, X337R, X337I, X337Y, X337G, X337F, X337A, X337L, X338G, X338T, X338S, X341V 및 X342P로 이루어진 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 1개 이상의 아미노산 변경, 바람직하게는 치환은 알파-아밀라제의 Ca2+-결합 부위 중 하나 근처에, 바람직하게는 알파-아밀라제의 Ca2+-결합 부위 중 하나로부터 10 옹스트롬 미만의 거리에 위치한 아미노산 위치에서 이루어진다. 바람직하게는, 알파-아밀라제의 Ca2+-결합 부위 중 하나 근처에, 바람직하게는 알파-아밀라제의 Ca2+-결합 부위 중 하나로부터 10 옹스트롬 미만의 거리에 위치한 아미노산 위치에서의 1개 이상의 아미노산 변경, 바람직하게는 치환은 서열식별번호: 3의 넘버링에 따른 106, 108, 160, 161, 162, 164, 184, 188, 203, 208, 211, 212, 215, 234, 235, 236, 237, 238, 240, 297, 299, 301, 302, 303, 304, 306, 307, 308, 309, 310, 345, 346, 405, 406, 407, 408, 429, 431 및 474로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, 본 발명의 알파-아밀라제는 알파-아밀라제의 Ca2+-결합 부위 중 하나 근처에, 바람직하게는 알파-아밀라제의 Ca2+-결합 부위 중 하나로부터 10 옹스트롬 미만의 거리에 위치한 아미노산 위치에서 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 알파-아밀라제의 Ca2+-결합 부위 중 하나 근처에, 바람직하게는 알파-아밀라제의 Ca2+-결합 부위 중 하나로부터 10 옹스트롬 미만의 거리에 위치한 아미노산 위치에서의 치환은 서열식별번호: 3의 넘버링에 따른 X106D, X108A, X160W, X160D, X161T, X162V, X164V, X188V, X188H, X203E, X203R, X208I, X208Y, X208F, X211D, X211N, X211C, X211T, X211E, X211G, X211V, X211Q, X211A, X211H, X211L, X211S, X212W, X212L, X212I, X212D, X212C, X215E, X215D, X215H, X215W, X215A, X234C, X235M, X235V, X235L, X236Y, X237C, X237I, X238T, X240M, X297M, X297K, X297S, X297H, X297V, X297E, X297F, X299L, X299G, X299I, X299K, X299S, X299Y, X301F, X302H, X302I, X302Q, X302Y, X302V, X303P, X303M, X303E, X303I, X303R, X303K, X303N, X303L, X303H, X303T, X304H, X304A, X304R, X304Y, X304D, X304N, X304M, X304E, X304P, X304W, X304K, X304T, X306M, X306E, X306A, X306G, X306W, X306V, X306S, X306I, X306H, X306T, X306D, X306Q, X306Y, X306R, X307F, X307M, X308S, X309H, X309L, X309Q, X310Q, X310A, X345N, X345T, X345M, X345G, X345S, X345D, X345Q, X346D, X346C, X346H, X346A, X346G, X346Q, X346N, X405H, X405V, X405T, X405M, X405C, X406P, X407S, X407R, X407D, X408Q, X408E, X408I, X429M, X429D, X429E, X429N, X429T, X429A, X429P, X429W, X429Q, X429S, X429F, X429G, X429I, X429V, X431I, X474P, X474H 및 X474F로 이루어진 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 1 내지 50개, 바람직하게는 1 내지 30개 또는 1 내지 25개의 상기 언급된 임의의 아미노산 변경, 바람직하게는 아미노산 치환을 포함한다. 바람직하게는, 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 상기 언급된 치환 중 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 적어도 19개, 적어도 20개, 적어도 21개, 적어도 22개, 적어도 23개, 적어도 24개, 또는 적어도 25개이지만 50개 미만, 바람직하게는 30개 미만, 바람직하게는 20개 미만을 포함한다.
보다 바람직하게는, 상기 언급된 치환의 수가 1 내지 30개, 바람직하게는 1 내지 25개, 1 내지 20개, 1 내지 15개, 1 내지 10개, 또는 1 내지 5개, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 치환인 알파-아밀라제 변이체. 상기 언급된 치환의 수가 2 내지 30개, 바람직하게는 2 내지 25개, 2 내지 20개, 2 내지 15개, 2 내지 10개, 2 내지 8개, 또는 2 내지 5개인 알파-아밀라제 변이체가 추가로 바람직하다. 상기 언급된 치환의 수가 3 내지 30개, 바람직하게는 3 내지 25개, 3 내지 20개, 3 내지 15개, 3 내지 10개, 3 내지 8개, 또는 3 내지 5개인 알파-아밀라제 변이체가 추가로 바람직하다. 상기 언급된 치환의 수가 4 내지 30개, 바람직하게는 4 내지 25개, 4 내지 20개, 4 내지 15개, 4 내지 10개, 또는 4 내지 8개인 알파-아밀라제 변이체가 추가로 바람직하다. 바람직하게는, 상기 열거된 수의 아미노산 변경, 바람직하게는 치환 이외에, 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1에 나타낸 아미노산 서열로 이루어진다.
바람직하게는, 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3, 또는 서열식별번호: 4에 따른 아밀라제, 또는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3, 또는 서열식별번호: 4에 대해 적어도 60%의 서열 동일성을 갖는 임의의 알파-아밀라제이며, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1에 따른 아밀라제이다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는
X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X482W, X4Q+X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M+X482W, X25H+X176K+X186E+X206Y+X482W, X25H+X186E+X206Y+X405M+X482W, X25H+X186E+X206Y+X482W, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X482W, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X482W, X25H+X176K+X186E+X482W, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X482W, X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W, X25H+X176K+X186E+X206Y, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X206Y+X460G+X482W, X4Q+X25H+X176K+X206Y+X251E+X460G+X482W, X4Q+X25H+X176K+X193E+X251E+X186E+X482W, X4Q+X193E+X206Y+X276R+X186E+X482W, X186E+X25H+X482W, X25H+X193E+X206Y+X251E+X276R+X405M+X186E+X482W, X25H+X251E+X186E+X482W, X25H+X160W+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W, X193E+X206Y+X405M+X186E+X482W, X3I+X356V, X3I+X356I, X83D+X94E, X94D+X125E, X131I+X377Q+X410H, X48F+X94D, X48Y+X116K+X218K, X5L+X218K+X225S, X83E+X116R+X158Y+X181E, X51V+X218K, X83E+X181E, X4Q+X7W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X37M+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, 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X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X100W+X363E, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X100W+X363H, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X258Q, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X258Q+X8A, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X258Q+X281N+X363E, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X258Q+X363H, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X281N, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X181Q+X258Q, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X181Q+X258Q+X281N, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X181Q+X258Q+X363H, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X363E, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X363H, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X363E, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X363H, X25H+X176K+X186E+X206Y, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X363E+X123D, X25H+X176K+X186E+X206Y+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X181Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X181Q+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X181Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X193E+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X193E+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X258Q+X363E+X135C, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X361R, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X281N+X363E+X175D, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X473R, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q+X363E,
X116K+X181T,
X116K+X181T+X225A,
X181T+X225A+X320K, 및
X116K+X181T+X225A+X320K로 이루어진 군으로부터 선택된 치환의 조합을 포함하며,
여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따르고, 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는
X4Q+X25H,
X4Q+X25H+X176K,
X4Q+X25H+X176K+X186E,
X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E,
X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M,
X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X439K,
X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W,
X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X439K+X482W,
X25H+X176K,
X25H+X176K+X186E,
X176K+X186E,
X25H+X176K+X186E+X251E,
X25H+X176K+X186E+X251E+X405M,
X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W,
X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X439K+X482W,
X25H+X176K+X251E+X405M,
X25H+X176K+X251E+X405M+X482W,
X25H+X176K+X251E+X405M+X439K,
X25H+X176K+X251E+X405M+X439K+X482W,
X251E+X405M,
X251E+X405M+X439K,
X251E+X405M+X482W,
X251E+X405M+X439K+X482W,
X405M+X439K,
X405M+X482W,
X405M+X439K+X482W,
X4Q+X25H+X176K+X251E+X405M+X439K, 및
X4Q+X25H+X176K+X251E+X405M+X439K+X482W로 이루어진 군으로부터 선택된 치환의 조합,
바람직하게는 X25H+X176K+X186E, X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W, 또는 X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W, X25H+X176K, X25H+X176K+X251E+X405M+X482W, 또는 X4Q+X25H+X176K+X251E+X405M+X482W, 가장 바람직하게는 X25H+X176K+X186E 또는 X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W를 포함하며,
여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따르고, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
추가의 특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는
X116K+X181T,
X116K+X181T+X225A,
X116K+X181T+X225A+X320K, 및
X181T+X225A+X320K로 이루어진 군으로부터 선택된 치환의 조합, 바람직하게는 X116K+X181T+X225A+X320K를 포함하며,
여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따르고, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는
N25H+R176K+G186E+I206Y+R181Q, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y135T, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+T193E, N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E, G4Q+N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E+L405M, N25H+R176K+G186E+I206Y, N25H+G186E+I206Y+L405M, N25H+G186E+I206Y, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E, G4Q+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+L405M, N25H+R176K+G186E, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y, G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E+L405M, N25H+R176K+G186E+I206Y, G4Q+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+L405M, G4Q+I206Y+N460G, G4Q+N25H+R176K+I206Y+T251E+N460G, G4Q+N25H+R176K+T193E+T251E+G186E, G4Q+T193E+I206Y+E276R+G186E, G186E+N25H, N25H+T193E+I206Y+T251E+E276R+L405M+G186E, N25H+T251E+G186E, N25H+Y160W+R176K+G186E+T251E+L405M, T193E+I206Y+L405M+G186E, N25H+R176K+G186E+I206Y+G258Q+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+R181Q, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+Q359R, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+G258Q, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+G258Q+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+Y135T, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+Y135T+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y135T, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y135T+G258Q, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y135T+G258Q+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y135T+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E+Y482W, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+Y482W, G4Q+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+L405M+Y482W, G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y+Y482W, G4Q+N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E+L405M+Y482W, N25H+G186E+I206Y+L405M+Y482W, N25H+R176K+G186E+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+N460G, G4Q+N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E+N460G, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+N460G+Y482W, G4Q+N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E+N460G+Y482W, N25H+R176K+G186E+N195F+T251E+Y482W, N25H+R176K+G186E+N195F+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+N195F+T251E+Y482W, G4Q+R176K+G186E+T193E+N195F+T251E+L405M+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+N195F+Y482W, G4Q+N25H+R176K+G186E+N195F+T251E+L405M+Y482W, N25H+G186E+N195F+L405M+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+N195F+T251E+N460G, G4Q+N25H+R176K+G186E+N195F+T251E+N460G, N25H+R176K+G186E+T193E+N195F+T251E+N460G+Y482W, 및 G4Q+N25H+R176K+G186E+N195F+T251E+N460G+Y482W로 이루어진 군으로부터 선택된 치환의 조합을 포함하며,
여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따르고, 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는
G4Q+N25H,
G4Q+N25H+R176K,
G4Q+N25H+R176K+G186E,
G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E,
G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+W439K,
G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+Y482W,
G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+W439K+Y482W,
G4Q+N25H+R176K+T251E,
G4Q+N25H+R176K+T251E+L405M+W439K,
G4Q+N25H+R176K+T251E+L405M+Y482W,
G4Q+N25H+R176K+T251E+L405M+W439K+Y482W,
N25H+R176K,
N25H+R176K+G186E,
R176K+G186E,
N25H+R176K+G186E+T251E,
N25H+R176K+G186E+T251E+L405M,
N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+Y482W,
N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+W439K+Y482W,
N25H+R176K+T251E,
N25H+R176K+T251E+L405M,
N25H+R176K+T251E+L405M+Y482W, 및
N25H+R176K+T251E+L405M+W439K+Y482W로 이루어진 군으로부터 선택된 치환의 조합,
바람직하게는 N25H+R176K+G186E, N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+Y482W, G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+Y482W, N25H+R176K, N25H+R176K+T251E+L405M+Y482W, 또는 G4Q+N25H+R176K+T251E+L405M+Y482W, 가장 바람직하게는 N25H+R176K+G186E 또는 G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+Y482W를 포함하며,
여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따르고, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 1 내지 50개의 본원에 언급된 아미노산 변경, 바람직하게는 1 내지 30개, 1 내지 25개, 1 내지 20개, 1 내지 15개, 1 내지 10개, 또는 1 내지 5개, 2 내지 30개, 2 내지 25개, 2 내지 20개, 2 내지 15개, 2 내지 10개, 2 내지 8개, 또는 2 내지 5개, 바람직하게는 3 내지 30개, 3 내지 25개, 3 내지 20개, 3 내지 15개, 3 내지 10개, 3 내지 8개, 또는 3 내지 5개, 바람직하게는 4 내지 30개, 4 내지 25개, 4 내지 20개, 4 내지 15개, 4 내지 10개, 또는 4 내지 8개의 아미노산 변경, 바람직하게는 치환을 갖는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 1 내지 50개의 상기 언급된 아미노산 치환, 바람직하게는 1 내지 30개, 1 내지 25개, 1 내지 20개, 1 내지 15개, 1 내지 10개, 또는 1 내지 5개, 2 내지 30개, 2 내지 25개, 2 내지 20개, 2 내지 15개, 2 내지 10개, 2 내지 8개, 또는 2 내지 5개, 바람직하게는 3 내지 30개, 3 내지 25개, 3 내지 20개, 3 내지 15개, 3 내지 10개, 3 내지 8개, 또는 3 내지 5개, 바람직하게는 4 내지 30개, 4 내지 25개, 4 내지 20개, 4 내지 15개, 4 내지 10개, 또는 4 내지 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어지고, 추가로 1 내지 50개, 바람직하게는 1 내지 30개, 1 내지 25개, 1 내지 20개, 1 내지 15개, 1 내지 10개, 또는 1 내지 5개, 2 내지 30개, 2 내지 25개, 2 내지 20개, 2 내지 15개, 2 내지 10개, 2 내지 8개, 또는 2 내지 5개, 바람직하게는 3 내지 30개, 3 내지 25개, 3 내지 20개, 3 내지 15개, 3 내지 10개, 3 내지 8개, 또는 3 내지 5개, 바람직하게는 4 내지 30개, 4 내지 25개, 4 내지 20개, 4 내지 15개, 4 내지 10개, 또는 4 내지 8개의 보존적 아미노산 교환을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 1 내지 50개의 아미노산 변경, 바람직하게는 1 내지 30개, 1 내지 25개, 1 내지 20개, 1 내지 15개, 1 내지 10개, 또는 1 내지 5개, 2 내지 30개, 2 내지 25개, 2 내지 20개, 2 내지 15개, 2 내지 10개, 2 내지 8개, 또는 2 내지 5개, 바람직하게는 3 내지 30개, 3 내지 25개, 3 내지 20개, 3 내지 15개, 3 내지 10개, 3 내지 8개, 또는 3 내지 5개, 바람직하게는 4 내지 30개, 4 내지 25개, 4 내지 20개, 4 내지 15개, 4 내지 10개, 또는 4 내지 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어지며, 여기서 상기 아미노산 치환은 X100D, X100F, X100K, X100L, X103A, X106D, X108A, X109A, X10A, X10C, X10E, X10F, X10L, X10W, X10Y, X113F, X113H, X113M, X113R, X113V, X113W, X113Y, X114A, X114C, X114D, X114E, X114F, X114G, X114H, X114I, X114K, X114L, X114M, X114N, X114Q, X114R, X114S, X114V, X114W, X114Y, X115C, X115D, X115K, X115M, X115N, X115Q, X115R, X115S, X115T, X115V, X116I, X116K, X116L, X116M, X116R, X116T, X117A, X117C, X117D, X117F, X117I, X117N, X117P, X117R, X117W, X117Y, X118A, X118D, X118E, X119H, X119P, X119R, X119S, X119Y, X120E, X120G, X120M, X120S, X120W, X120Y, X123D, X123S, X125A, X125D, X125E, X125F, X125G, X125H, X125K, X125L, X125M, X125N, X125Q, X125R, X125T, X125V, X125W, X125Y, X126D, X128C, X128E, X128L, X128M, X128W, X128Y, X129E, X12N, X12S, X131C, X131I, X131L, X131Q, X131W, X132T, X133A, X133C, X133D, X133E, X133H, X133K, X133N, X133P, X133Q, X133S, X134C, X134E, X134F, X134I, X134L, X134M, X134P, X134T, X134V, X134W, X134Y, X135D, X135E, X135G, X135M, X135N, X135P, X135S, X135T, X135W, X136A, X136C, X136D, X136E, X136F, X136H, X136L, X136M, X136N, X136P, X136W, X139C, X139S, X13A, X13Y, X141V, X142C, X142E, X142F, X142L, X142M, X142Q, X142R, X142W, X142Y, X143F, X144C, X144E, X144G, X144K, X144N, X144Q, X144R, X144S, X144T, X144V, X144Y, X145A, X146C, X146D, X146E, X146F, X146G, X146H, X146K, X146L, X146S, X146T, X146W, X147M, X149E, X14N, X150C, X150E, X150Q, X151C, X151E, X154A, X154Y, X155Y, X156E, X156V, X158H, X158N, X158Y, X15R, X160D, X160E, X160W, X161T, X162V, X163A, X163Q, X163T, X164V, X165S, X165T, X165W, X169A, X169D, X169E, X169S, X169V, X16F, X16R, X170C, X170F, X172A, X172C, X172D, X172K, X172N, X173I, X173Y, X174D, X174E, X174G, X174H, X174M, X174N, X174P, X174S, X174T, X175A, X175G, X175H, X175Q, X176K, X176S, X176T, X177A, X177G, X177K, X177N, X177P, X177R, X177S, X177W, X178F, X17K, X17V, X180M, X180N, X180T, X180W, X182D, X182E, X182N, X182Q, X182S, X185E, X185M, X185N, X187A, X187D, X187M, X187V, X188H, X188T, X188V, X189I, X18F, X18I, X18K, X18M, X18R, X18T, X191F, X191H, X191K, X191M, X191W, X191Y, X192A, X192T, X193D, X193E, X193G, X193V, X19A, X19C, X19D, X19F, X19G, X19H, X19I, X19K, X19L, X19M, X19P, X19Q, X19S, X19T, X19Y, X1R, X1V, X203E, X203R, X208F, X208I, X208Y, X20A, X20C, X20D, X20E, X20F, X20G, X20H, X20K, X20L, X20M, X20N, X20P, X20Q, X20S, X20T, X20V, X20W, X20Y, X210A, X210C, X210D, X210E, X210F, X210M, X210N, X210Q, X210S, X210Y, X211A, X211C, X211D, X211E, X211G, X211H, X211L, X211N, X211Q, X211S, X211T, X211V, X212C, X212D, X212I, X212L, X212W, X213A, X213C, X213M, X213R, X213S, 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X459E, X459I, X459K, X459N, X459Q, X459R, X459V, X459Y, X45G, X45N, X460A, X460D, X460E, X460G, X460Q, X460R, X460S, X460T, X460V, X461A, X461E, X461F, X461K, X461L, X461M, X461N, X461Q, X461R, X461S, X461V, X462K, X463L, X465H, X465P, X465R, X465V, X467A, X467E, X467H, X468D, X468H, X470A, X470Q, X470T, X471E, X474F, X474H, X474P, X478A, X478E, X47S, X480D, X480E, X480M, X480R, X480Y, X482C, X482T, X482W, X48F, X48I, X48M, X48Y, X4A, X4C, X4K, X4M, X4Q, X4R, X4S, X51Q, X51T, X51V, X54D, X54G, X54Q, X59T, X5A, X5C, X5D, X5E, X5F, X5H, X5I, X5K, X5L, X5M, X5N, X5P, X5Q, X5R, X5V, X5Y, X60T, X63C, X63V, X6A, X6C, X6E, X6F, X6G, X6H, X6K, X6L, X6M, X6P, X6Q, X6S, X6T, X6V, X6W, X6Y, X70F, X70H, X70L, X70M, X70N, X70Y, X71D, X72C, X72D, X72E, X72N, X72T, X73L, X73N, X73Q, X75A, X75G, X75I, X75L, X75P, X75T, X75W, X76C, X76E, X76G, X76L, X76T, X76V, X7C, X7E, X7F, X7H, X7K, X7N, X7P, X7Q, X7R, X7S, X7V, X7W, X7Y, X81H, X81L, X82K, X82M, X83A, X83D, X83E, X83G, X83R, X83S, X86K, X87D, X87R, X89A, X89C, X89F, X89G, X89L, X89M, X89R, X89S, X8A, X8C, X8F, X8I, X8M, X8P, X8S, X8V, X8W, X8Y, X90A, X90D, X90E, X90F, X90G, X90I, X90M, X90N, X90Q, X90R, X90S, X90V, X90Y, X91C, X91D, X91E, X91F, X91G, X91H, X91I, X91K, X91L, X91M, X91N, X91Q, X91S, X91T, X91V, X91W, X91Y, X92D, X92M, X92V, X93K, X93Q, X94A, X94D, X94E, X94K, X94M, X94V, X94Y, X95E, X95I, X95L, X95V, X96K, X96N, X96Q, X97V, X98E, X98G, X98N, X99H, X99K, X99N, X100W 및 X1G로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 X4Q, X25H, X100W, X135E, X135T, X135W, X135D, X160W, X176K, X193E, X251E, X258Q, X276R, X299S, X323G, X363E, X363H, X382Q, X405M, X460G 및 X482W로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 임의로, 알파-아밀라제 변이체는 1 내지 50개, 바람직하게는 1 내지 30개, 1 내지 25개, 1 내지 20개, 1 내지 15개, 1 내지 10개, 또는 1 내지 5개, 2 내지 30개, 2 내지 25개, 2 내지 20개, 2 내지 15개, 2 내지 10개, 2 내지 8개, 또는 2 내지 5개, 바람직하게는 3 내지 30개, 3 내지 25개, 3 내지 20개, 3 내지 15개, 3 내지 10개, 3 내지 8개, 또는 3 내지 5개, 바람직하게는 4 내지 30개, 4 내지 25개, 4 내지 20개, 4 내지 15개, 4 내지 10개, 또는 4 내지 8개의 보존적 아미노산 교환을 추가로 포함한다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는
X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X482W, X4Q+X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M+X482W, X25H+X176K+X186E+X206Y+X482W, X25H+X186E+X206Y+X405M+X482W, X25H+X186E+X206Y+X482W, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X482W, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X482W, X25H+X176K+X186E+X482W, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X482W, X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W, X25H+X176K+X186E+X206Y, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X206Y+X460G+X482W, X4Q+X25H+X176K+X206Y+X251E+X460G+X482W, X4Q+X25H+X176K+X193E+X251E+X186E+X482W, X4Q+X193E+X206Y+X276R+X186E+X482W, X186E+X25H+X482W, X25H+X193E+X206Y+X251E+X276R+X405M+X186E+X482W, X25H+X251E+X186E+X482W, X25H+X160W+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W, X193E+X206Y+X405M+X186E+X482W, X3I+X356V, X3I+X356I, X83D+X94E, X94D+X125E, X131I+X377Q+X410H, X48F+X94D, X48Y+X116K+X218K, X5L+X218K+X225S, X83E+X116R+X158Y+X181E, X51V+X218K, X83E+X181E, X4Q+X7W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X37M+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X25D+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M+X460G, X4Q+X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X460G, X4Q+X25Y+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X118D+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X182D+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X460G, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363H+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363N+X405M, X4Q+X176K+X181D+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X181F+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X181N+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X136E+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X135D+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X135E+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, 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X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X473R, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q+X363E,
X4Q+X25H,
X4Q+X25H+X176K,
X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M,
X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X439K,
X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W,
X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X439K+X482W,
X4Q+X25H+X176K+X251E+X405M,
X4Q+X25H+X176K+X251E+X405M+X439K,
X4Q+X25H+X176K+X251E+X405M+X482W,
X4Q+X25H+X176K+X251E+X405M+X439K+X482W,
X25H+X176K,
X25H+X176K+X186E,
X176K+X186E,
X25H+X176K+X186E+X251E,
X25H+X176K+X186E+X251E+X405M,
X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W,
X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X439K+X482W,
X25H+X176K+X251E,
X25H+X176K+X251E+X405M,
X25H+X176K+X251E+X405M+X482W,
X25H+X176K+X251E+X405M+X439K+X482W,
X116K+X181T,
X116K+X181T+X225A,
X181T+X225A+X320K, 및
X116K+X181T+X225A+X320K로 이루어진 군으로부터 선택된,
바람직하게는
N25H+R176K+G186E+I206Y+R181Q, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y135T, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+T193E, N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E, G4Q+N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E+L405M, N25H+R176K+G186E+I206Y, N25H+G186E+I206Y+L405M, N25H+G186E+I206Y, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E, G4Q+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+L405M, N25H+R176K+G186E, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y, G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E+L405M, N25H+R176K+G186E+I206Y, G4Q+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+L405M, G4Q+I206Y+N460G, G4Q+N25H+R176K+I206Y+T251E+N460G, G4Q+N25H+R176K+T193E+T251E+G186E, G4Q+T193E+I206Y+E276R+G186E, G186E+N25H, N25H+T193E+I206Y+T251E+E276R+L405M+G186E, N25H+T251E+G186E, N25H+Y160W+R176K+G186E+T251E+L405M, T193E+I206Y+L405M+G186E, N25H+R176K+G186E+I206Y+G258Q+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+R181Q, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+Q359R, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+G258Q, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+G258Q+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+Y135T, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+Y135T+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y135T, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y135T+G258Q, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y135T+G258Q+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y135T+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E+Y482W, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+Y482W, G4Q+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+L405M+Y482W, G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y+Y482W, G4Q+N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E+L405M+Y482W, N25H+G186E+I206Y+L405M+Y482W, N25H+R176K+G186E+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+N460G, G4Q+N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E+N460G, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+N460G+Y482W, G4Q+N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E+N460G+Y482W, N25H+R176K+G186E+N195F+T251E+Y482W, N25H+R176K+G186E+N195F+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+N195F+T251E+Y482W, G4Q+R176K+G186E+T193E+N195F+T251E+L405M+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+N195F+Y482W, G4Q+N25H+R176K+G186E+N195F+T251E+L405M+Y482W, N25H+G186E+N195F+L405M+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+N195F+T251E+N460G, G4Q+N25H+R176K+G186E+N195F+T251E+N460G, N25H+R176K+G186E+T193E+N195F+T251E+N460G+Y482W, G4Q+N25H+R176K+G186E+N195F+T251E+N460G+Y482W,
G4Q+N25H,
G4Q+N25H+R176K,
G4Q+N25H+R176K+G186E,
G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E,
G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+W439K,
G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+Y482W,
G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+W439K+Y482W,
G4Q+N25H+R176K+T251E,
G4Q+N25H+R176K+T251E+L405M+W439K,
G4Q+N25H+R176K+T251E+L405M+Y482W,
G4Q+N25H+R176K+T251E+L405M+W439K+Y482W,
N25H+R176K,
N25H+R176K+G186E,
R176K+G186E,
N25H+R176K+G186E+T251E,
N25H+R176K+G186E+T251E+L405M,
N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+Y482W,
N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+W439K+Y482W,
N25H+R176K+T251E,
N25H+R176K+T251E+L405M,
N25H+R176K+T251E+L405M+Y482W,
N25H+R176K+T251E+L405M+W439K+Y482W,
X116K+X181T,
X116K+X181T+X225A,
X116K+X181T+X225A+X320K, 및
X181T+X225A+X320K로 이루어진 군으로부터 선택된, 아미노산 치환의 조합 중 하나,
보다 바람직하게는 X116K+X181T+X225A, X181T+X225A+X320K, X116K+X181T+X225A+X320K, N25H+R176K+G186E, N25H+R176K+G186E, N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+Y482W 또는 G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+Y482W, 가장 바람직하게는 N25H+R176K+G186E, G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+Y482W 또는 X116K+X181T+X225A+X320K를 갖는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다.
바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
본원에 기재된 바와 같은 1개 이상의 아미노산 변경, 바람직하게는 치환을 갖고 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 모 아밀라제의 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95% 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
본원에 기재된 바와 같은 1개 이상의 아미노산 치환을 갖고 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 모 아밀라제의 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95% 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
한 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 15에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 16에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 17에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 18에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 19에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 20에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 21에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 22에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 23에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 24에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 25에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 26에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 27에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 28에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 29에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 30에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 31에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 32에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 33에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 34에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 35에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 36에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 37에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 39에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 40에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 41에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95% 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
보다 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖고 본원에 기재된 아미노산 치환 중 1개 이상을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95% 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95% 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성 또는 서열 유사성을 포함한다.
알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95% 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95% 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 하기를 포함한다:
(a) 서열식별번호: 1에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(b) 서열식별번호: 2에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 아미노산 서열;
(c) 높은 엄격도 조건 하에 하기의 상보체와 혼성화하는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 아미노산 서열:
(i) 서열식별번호: 1의 코딩 서열; 또는
(ii) 서열식별번호: 2에 제시된 폴리뉴클레오티드;
(d) 서열식별번호: 2에 대해 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 아미노산 서열로서, 여기서 폴리뉴클레오티드는 단지 유전자 코드의 변성에 의해 서열식별번호: 2와 추가로 상이한 것인 아미노산 서열, 또는
(e) 아밀라제 활성을 갖는 (a), (b) 또는 (c)의 단편.
특히 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 적어도 91.0%, 적어도 91.5%, 적어도 92.0%, 적어도 92.5%, 적어도 93.0%, 적어도 93.5%, 94.0%, 적어도 94.5%, 적어도 95.0%, 적어도 95.5%, 적어도 96.0%, 적어도 96.5%, 적어도 97.0%, 적어도 97.5%, 적어도 98.0%, 적어도 98.5%, 적어도 99.0%, 적어도 99.5%, 적어도 99.6%, 적어도 99.7%, 적어도 99.8% 또는 적어도 99.9%이지만 100% 미만의 서열 동일성 또는 서열 유사성을 포함한다. 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 적어도 91.0%, 적어도 91.5%, 적어도 92.0%, 적어도 92.5%, 적어도 93.0%, 적어도 93.5%, 94.0%, 적어도 94.5%, 적어도 95.0%, 적어도 95.5%, 적어도 96.0%, 적어도 96.5%, 적어도 97.0%, 적어도 97.5%, 적어도 98.0%, 적어도 98.5%, 적어도 99.0%, 적어도 99.5%, 적어도 99.6%, 적어도 99.7%, 적어도 99.8% 또는 적어도 99.9%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 95.0%, 적어도 95.5%, 적어도 96.0%, 적어도 96.5%, 적어도 97.0%, 적어도 97.5%, 적어도 98.0%, 적어도 98.5%, 적어도 99.0%, 적어도 99.5%, 적어도 99.6%, 적어도 99.7%, 적어도 99.8% 또는 적어도 99.9%이지만 100% 미만의 서열 동일성 또는 서열 유사성을 포함한다.
알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 95.0%, 적어도 95.5%, 적어도 96.0%, 적어도 96.5%, 적어도 97.0%, 적어도 97.5%, 적어도 98.0%, 적어도 98.5%, 적어도 99.0%, 적어도 99.5%, 적어도 99.6%, 적어도 99.7%, 적어도 99.8% 또는 적어도 99.9%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 95.0%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다.
알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, A 및 B 도메인 및 C 도메인을 포함하며, 여기서 A 및 B 도메인의 아미노산 서열은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%, 그러나 100% 미만 동일하고, C 도메인의 아미노산 서열은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%, 그러나 100% 미만 동일하다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 50개, 바람직하게는 1 내지 30개, 바람직하게는 1 내지 25개, 바람직하게는 1 내지 20개, 바람직하게는 1 내지 15개, 바람직하게는 1 내지 10개, 또는 바람직하게는 1 내지 5개의 상기 기재된 아미노산 치환을 갖는, 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 임의의 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 50개, 바람직하게는 1 내지 30개, 바람직하게는 1 내지 25개, 바람직하게는 1 내지 20개, 바람직하게는 1 내지 15개, 바람직하게는 1 내지 10개, 또는 바람직하게는 1 내지 5개의 상기 기재된 아미노산 치환 및 1-50개, 바람직하게는 1-30개, 1-20개, 1-10개, 또는 1-5개의 추가의 아미노산 변경, 바람직하게는 아미노산 치환을 갖는, 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 임의의 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 한 실시양태에서, 이들 1-50개의 추가의 아미노산 치환은 바람직하게는 모 알파-아밀라제의 임의의 기능적 도메인 외부, 바람직하게는 촉매 활성 도메인 외부의 보존적 아미노산 치환이다. 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 상기 기재된 1개 이상의 아미노산 치환 및 1-30개, 1-20개, 1-10개 또는 1-5개의 추가의 아미노산 변경, 바람직하게는 아미노산 치환을 갖는, 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 임의의 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 한 실시양태에서, 이들 1-30개, 1-20개, 1-10개 또는 1-5개의 추가의 아미노산 치환은 바람직하게는 모 알파-아밀라제의 임의의 기능적 도메인 외부, 바람직하게는 촉매 활성 도메인 외부의 보존적 아미노산 치환이다.
바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 상기 기재된 1개 이상의 아미노산 치환 및 촉매 활성 도메인 외부에 1-30개, 1-20개, 1-10개 또는 1-5개의 추가의 아미노산 치환을 갖는, 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 임의의 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 상기 기재된 1개 이상의 아미노산 치환 및 바람직하게는 촉매 활성 도메인 외부의 1-30개, 1-20개, 1-10개 또는 1-5개의 추가의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 임의의 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 50개, 바람직하게는 1 내지 30개, 바람직하게는 1 내지 25개, 바람직하게는 1 내지 20개, 바람직하게는 1 내지 15개, 바람직하게는 1 내지 10개, 또는 바람직하게는 1 내지 5개의 상기 기재된 아미노산 치환을 갖는, 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 50개, 바람직하게는 1 내지 30개, 바람직하게는 1 내지 25개, 바람직하게는 1 내지 20개, 바람직하게는 1 내지 15개, 바람직하게는 1 내지 10개, 또는 바람직하게는 1 내지 5개의 상기 기재된 아미노산 치환 및 1-50개, 바람직하게는 1-30개, 1-20개, 1-10개, 또는 1-5개의 추가의 아미노산 변경, 바람직하게는 아미노산 치환을 갖는, 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 한 실시양태에서, 이들 1-50개의 추가의 아미노산 치환은 바람직하게는 모 알파-아밀라제의 임의의 기능적 도메인 외부, 바람직하게는 촉매 활성 도메인 외부의 보존적 아미노산 치환이다. 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 상기 기재된 1개 이상의 아미노산 치환 및 1-30개, 1-20개, 1-10개 또는 1-5개의 추가의 아미노산 변경, 바람직하게는 아미노산 치환을 갖는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 한 실시양태에서, 이들 1-30개, 1-20개, 1-10개 또는 1-5개의 추가의 아미노산 치환은 바람직하게는 모 알파-아밀라제의 임의의 기능적 도메인 외부, 바람직하게는 촉매 활성 도메인 외부의 보존적 아미노산 치환이다.
바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 상기 기재된 1개 이상의 아미노산 치환 및 촉매 활성 도메인 외부에 1-30개, 1-20개, 1-10개 또는 1-5개의 추가의 아미노산 치환을 갖는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 상기 기재된 1개 이상의 아미노산 치환 및 바람직하게는 촉매 활성 도메인 외부의 1-30개, 1-20개, 1-10개 또는 1-5개의 추가의 보존적 아미노산 치환을 갖는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다.
알파-아밀라제의 구조는 3개의 별개의 도메인 A, B 및 C를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Machius et al., 1995, J. Mol. Bio/. 246: 545-559] 참조). 본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체는 1개 이상의 비-촉매적 CBM (탄수화물-결합 모듈, 탄수화물 결합 도메인으로도 불림, 또는 구체적으로 아밀라제 전분 결합 도메인에 대한 것)을 추가로 포함할 수 있다. CBM은 효소와 기질의 회합을 개선시킬 수 있다. CBM은 C-도메인에 부착된다. 바람직하게는, 본 발명의 아밀라제는 탄수화물 결합 도메인을 포함하지 않는다. 바람직하게는, 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 A, B 및 C 도메인인 3개의 도메인으로만 이루어진다.
본원에 사용된 알파-아밀라제의 "A 및 B 도메인" 또는 "AB 도메인"은 서열식별번호: 3의 아미노산 1-399와 정렬된 아미노산에 상응한다. 본원에 사용된 알파-아밀라제의 "C 도메인"은 서열식별번호: 3의 아미노산 400-485와 정렬된 아미노산에 상응한다.
바람직하게는, 상기 기재된 바와 같은 아미노산 변경, 바람직하게는 삽입, 결실, 치환 또는 그의 조합, 바람직하게는 치환 중 1개 이상을 포함하는 알파-아밀라제 변이체는 상이한 모 아밀라제로부터의 그의 도메인, 특히 그의 AB 도메인 및 그의 C 도메인을 포함하는 하이브리드 아밀라제이다. 알파-아밀라제 변이체는 알파-아밀라제의 C 도메인 또는 그의 부분을 또 다른 알파-아밀라제의 C 도메인 또는 그의 부분으로 치환함으로써 생산될 수 있다. 바람직하게는, 본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체의 A 및 B 도메인은 서열식별번호: 3의 알파-아밀라제의 A 및 B 도메인에 대해 적어도 75% 동일성, 예컨대 적어도 78%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 동일성을 갖는다.
바람직하게는, 본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체의 A 및 B 도메인은 서열식별번호: 6에 대해 적어도 75% 동일성, 바람직하게는 적어도 78%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 동일성을 가지며, 이는 A 및 B 도메인을 형성하는 아미노산 서열이 서열식별번호: 6에 대해 적어도 75% 동일성, 바람직하게는 적어도 78%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖는다는 것을 의미한다.
바람직하게는, 본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체의 C 도메인은 서열식별번호: 5의 알파-아밀라제의 C 도메인에 대해 적어도 75% 동일성, 바람직하게는 적어도 78%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 동일성을 갖는 C 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체의 C 도메인은 서열식별번호: 8에 대해 적어도 75% 동일성, 바람직하게는 적어도 78%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 동일성을 갖는다.
본 발명의 한 실시양태에서, A 및 B 도메인을 형성하는 아미노산 서열은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 75% 동일성, 바람직하게는 적어도 78%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 동일성을 갖고, C 도메인을 형성하는 아미노산 서열은 서열식별번호: 8에 대해 적어도 75% 동일성, 바람직하게는 적어도 78%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 동일성을 갖는다.
본 발명의 한 실시양태에서, A 및 B 도메인을 형성하는 아미노산 서열은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 대해 100% 동일성을 갖고, C 도메인을 형성하는 아미노산 서열은 서열식별번호: 8에 대해 적어도 75% 동일성, 바람직하게는 적어도 78%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 동일성을 갖는다.
본 발명의 한 실시양태에서, A 및 B 도메인을 형성하는 아미노산 서열은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 75% 동일성, 바람직하게는 적어도 78%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 동일성을 갖고, C 도메인을 형성하는 아미노산 서열은 서열식별번호: 8에 대해 100% 동일성을 갖는다.
한 실시양태에서, 본 발명은 A 및 B 도메인 및 C 도메인을 포함하고, A 및 B 도메인의 아미노산 서열이 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 바람직하게는 적어도 78%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%, 또는 100% 동일하고, C 도메인의 아미노산 서열이 서열식별번호: 8의 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 바람직하게는 적어도 78%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%, 또는 100% 동일한 것인, 적어도 2종의 상이한 아밀라제로부터 하이브리드를 제조하는 단계, 및 상기 하이브리드 내로 본원에 기재된 바와 같은 1개 이상의 아미노산 변경을 도입하는 단계를 포함하는, 알파-아밀라제 변이체의 제조 방법에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1 및/또는 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 알파-아밀라제와 비교하여 1개 이상의 개선된 특성을 나타낸다.
바람직하게는, 개선된 특성은 >1.0의 개선 지수 (IF)로서 표현된다. 바람직하게는, 개선된 열안정성 및 개선된 세척 성능을 위해, 개선은 개선 지수로서 표현된다. 바람직하게는, 개선 지수는 1.1 이상, 1.2 이상, 1.3 이상, 1.4 이상, 1.5 이상, 1.6 이상, 1.7 이상, 1.8 이상, 1.9 이상, 또는 2.0 이상이다. 바람직하게는, 세척 성능에 대한 IF는 1.1 이상, 1.2 이상, 또는 1.3 이상이다. 바람직하게는, 열안정성에 대한 IF는 1.1 이상, 1.2 이상, 1.3 이상, 1.5 이상, 또는 2.0 이상이다.
대안적으로, 아밀라제 특성의 개선은 모 알파 아밀라제와 비교한 개선의 백분율로서 나타내어진다. 바람직하게는, 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1과 비교하여 적어도 0.5%, 적어도 1%, 적어도 2%, 적어도 3%, 적어도 5%, 적어도 6%, 적어도 7%, 적어도 8%, 적어도 9%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 120%, 적어도 130%, 적어도 140%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200% 개선된 특성을 나타낸다.
대안적으로, 특히 안정성 개선을 위해, 아밀라제 특성의 개선은 안정성 챌린지 후의 잔류 활성으로서 나타내어진다. 바람직하게는, 저장 안정성은 각각의 저장 조건 하에 저장 후, 바람직하게는 세제 조성물 (바람직하게는 세탁 또는 식기 세척 세제, 바람직하게는 세탁 세제) 중에 저장 후 잔류 활성으로서 나타내어진다. 바람직하게는, 알파-아밀라제 변이체의 잔류 활성은 모 아밀라제와 비교하여 증가된다. 바람직하게는, 알파-아밀라제 변이체의 잔류 활성은 모 아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1 및/또는 3에 제시된 바와 같은 아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1과 비교하여 적어도 0.5%, 적어도 1%, 적어도 2%, 적어도 3%, 적어도 5%, 적어도 6%, 적어도 7%, 적어도 8%, 적어도 9%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 120%, 적어도 130%, 적어도 140%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190% 또는 적어도 200% 개선된다. 모 아밀라제와 비교한 잔류 활성은 또한 변이체의 잔류 활성 대 모 아밀라제의 잔류 활성의 비를 형성함으로써 개선 지수로 전환될 수 있다.
바람직하게는, 개선된 특성은 발현, 활성, 안정성, 열안정성, 비활성, 기질 특이성, pH-의존성 활성, pH 안정성, 산화 안정성, 촉매 효율, 촉매 속도, 화학적 안정성, pH 활성, 저장 조건 하의 안정성, 기질 결합, 기질 절단, 기질 안정성, 표면 특성, 열 활성, Ca2+ 의존성, 세제에서의 성능, 세탁 세제에서의 성능, ADW 세제에서의 성능에서의 증가로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 특성이다. 바람직하게는, 개선된 활성은 개선된 비활성, 기질 특이성, pH-의존성 활성, 촉매 효율, 촉매 속도, pH 활성, 기질 결합, 기질 절단, 열 활성, Ca2+ 의존성, 세척 성능, 세탁 세제의 세척 성능, 및/또는 ADW 세제의 세척 성능이다. 바람직하게는, 개선된 안정성은 개선된 열안정성, 세제 조성물 (바람직하게는 세탁 또는 식기 세척 세제 조성물, 바람직하게는 세탁 세제 조성물)에서의 열안정성, pH 안정성, 산화 안정성, 화학적 안정성, 저장 조건 하에서의 안정성, 기질 안정성 및/또는 열 활성이다. 바람직하게는, 개선된 특성은 개선된 발현, 개선된 용해도, 개선된 열안정성, 세제 조성물에서의 개선된 열안정성, 세제 조성물에서의 저장 하의 개선된 안정성, 및/또는 개선된 성능 세척 성능이다. 바람직하게는, 개선된 특성은 개선된 열안정성, 바람직하게는 세제 조성물에서의 개선된 열안정성, 세제 조성물에서의 저장 하의 개선된 안정성, 및/또는 개선된 세척 성능이다. 바람직하게는, 개선된 특성은 개선된 열안정성, 세제 조성물에서의 개선된 열안정성, 저장 조건 하에서의 개선된 안정성, 바람직하게는 세제 조성물에서의 저장 하에서의 개선된 안정성, 바람직하게는 세탁 세제에서의 저장 하에서의 개선된 안정성 및/또는 ADW 세제에서의 저장 하에서의 개선된 안정성, 개선된 세척 성능, 바람직하게는 세탁 세제의 개선된 세척 성능, 및/또는 ADW 세제의 개선된 세척 성능이다.
본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체는 넓은 온도 범위에 걸쳐 활성일 수 있으며, 여기서 온도는 약 10℃ 내지 약 95℃ 범위 내의 임의의 지점이다. 알파-아밀라제 변이체는 10℃ 내지 55℃, 10℃ 내지 50℃, 10℃ 내지 45℃, 10℃ 내지 40℃, 10℃ 내지 35℃, 10℃ 내지 30℃, 또는 10℃ 내지 25℃의 온도 범위에서 활성일 수 있다. 변이체 폴리펩티드는 20℃ 내지 55℃, 20℃ 내지 50℃, 20℃ 내지 45℃, 20℃ 내지 40℃, 20℃ 내지 35℃, 20℃ 내지 30℃, 또는 20℃ 내지 25℃의 온도 범위에서 활성일 수 있다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 열안정성을 개선시키고, 바람직하게는 세제 조성물 (바람직하게는 세탁 또는 식기 세척 세제 조성물, 바람직하게는 세탁 세제 조성물)에서 개선된 열안정성을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 변이체 폴리펩티드는 모 알파-아밀라제와 비교 시 열안정성을 1℃, 2℃, 3℃, 4℃, 5℃, 6℃, 7℃, 8℃, 9℃, 10℃, 11℃, 12℃, 13℃, 14℃, 15℃, 16℃, 17℃, 18℃, 19℃, 20℃, 또는 그 초과만큼 개선시킨다. 또 다른 실시양태에서, 열안정성 증가는 40℃ 내지 100℃의 온도에서 측정된다. 한 실시양태에서, 열안정성은 40℃, 50℃, 60℃, 70℃, 80℃, 또는 90℃, 바람직하게는 60℃ 또는 70℃에서 개선된다. 또 다른 실시양태에서, 열안정성은 40℃ 내지 90℃, 바람직하게는 60℃ 내지 85℃, 바람직하게는 60℃ 내지 80℃의 온도 범위에서 개선된다.
따라서, 바람직하게는, 개선된 특성은 개선된 안정성, 바람직하게는 열안정성이다. 모 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1과 비교하여 개선된 안정성, 바람직하게는 열안정성을 나타내는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 위치 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 45, 47, 48, 59, 60, 63, 70, 71, 72, 73, 75, 76, 81, 82, 83, 86, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 103, 106, 108, 109, 113, 114, 115, 117, 119, 125, 126, 128, 129, 131, 132, 133, 134, 136, 139, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 149, 150, 151, 154, 155, 156, 160, 161, 162, 164, 165, 170, 172, 173, 174, 175, 176, 184, 188, 191, 203, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 218, 219, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 230, 231, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 240, 242, 243, 245, 249, 250, 251, 252, 253, 255, 256, 257, 259, 261, 262, 263, 264, 265, 268, 270, 272, 273, 274, 276, 279, 280, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 299, 299, 301, 302, 303, 304, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 318, 318, 319, 320, 321, 323, 324, 326, 327, 336, 337, 338, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 348, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 357, 359, 360, 362, 363, 364, 366, 367, 368, 370, 372, 375, 376, 378, 379, 381, 382, 383, 384, 385, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 403, 405, 406, 407, 408, 410, 413, 414, 415, 416, 418, 421, 424, 426, 427, 429, 431, 436, 438, 439, 440, 442, 443, 445, 446, 447, 448, 449, 451, 453, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 465, 467, 468, 470, 474, 478, 480 및 482에 상응하는 1개 이상의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서 아미노산 변경, 바람직하게는 삽입, 결실, 치환 또는 그의 조합, 바람직하게는 치환을 포함하는 아밀라제이다.
바람직하게는, 모 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1과 비교하여 개선된 안정성, 바람직하게는 열안정성을 나타내는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 X1G, X1V, X1R, X2S, X2I, X3Q, X3K, X3F, X3G, X3L, X4Q, X4R, X4S, X4K, X4M, X4A, X4C, X5F, X5E, X5M, X5Y, X5R, X5Q, X5K, X5L, X5A, X5V, X5C, X5N, X5H, X5D, X5P, X5I, X6T, X6E, X6A, X6K, X6Q, X6V, X6M, X6G, X6L, X6H, X6W, X6F, X6P, X6S, X6C, X6Y, X7Y, X7S, X7H, X7C, X7Q, X7F, X7P, X7W, X7R, X7K, X7E, X7V, X7N, X8C, X8V, X8F, X8Y, X8P, X8W, X8A, X8S, X8M, X8I, X10W, X10Y, X10L, X10C, X10E, X10F, X10A, X12N, X12S, X13A, X13Y, X14N, X15R, X16F, X16R, X17K, X17V, X18R, X18M, X18F, X18K, X18T, X18I, X19P, X19L, X19F, X19Y, X19T, X19I, X19Q, X19C, X19H, X19S, X19M, X19K, X19G, X19D, X19A, X20C, X20S, X20L, X20M, X20T, X20D, X20Q, X20F, X20P, X20G, X20V, X20W, X20A, X20Y, X20H, X20K, X20E, X21S, X21E, X22E, X22F, X22A, X22D, X22M, X22T, X22K, X22Y, X22G, X22R, X22Q, X22W, X22L, X23N, X23Q, X23W, X24G, X25H, X25Y, X25K, X25F, X25S, X25C, X25D, X25A, X25G, X25W, X25Q, X25M, X25L, X26S, X26V, X26M, X26A, X26D, X26E, X26F, X26P, X26Y, X26L, X27D, X27I, X27F, X27R, X27G, X27Q, X27V, X27T, X27A, X27H, X28N, X28S, X28F, X28C, X28E, X28T, X28G, X28K, X28D, X28V, X28I, X28Q, X29Y, X29L, X29P, X29W, X29K, X29F, X29N, X29H, X29D, X29V, X29G, X29Q, X29I, X30F, X30I, X30A, X30K, X30W, X30Y, X30M, X30L, X30H, X30Q, X30G, X30E, X30T, X31S, X31V, X31Q, X31T, X31N, X31W, X32T, X32H, X32W, X32F, X32Q, X32I, X32A, X32P, X32E, X32M, X32N, X32D, X32L, X33Y, X33D, X33M, X33Q, X33K, X33R, X34H, X34V, X34I, X35C, X35Y, X35P, X35T, X35M, X35H, X35A, X35V, X35I, X35G, X35Q, X35D, X35N, X35R, X35S, X35L, X36V, X36I, X36T, X36K, X36A, X36S, X36R, X36M, X36E, X36P, X36G, X36N, X36Q, X37P, X37V, X37W, X37A, X37G, X38N, X39E, X39K, X40I, X40S, X41G, X41Q, X41C, X41D, X41E, X41S, X41T, X42Q, X42V, X42I, X42C, X45N, X45G, X47S, X48F, X48I, X48M, X51T, X59T, X60T, X63V, X63C, X70N, X70L, X70M, X70F, X70Y, X71D, X72T, X72E, X72D, X72N, X72C, X73Q, X73L, X73N, X75A, X75I, X75W, X75P, X75G, X75T, X76G, X76T, X76C, X76V, X76E, X76L, X81H, X82M, X82K, X83G, X83R, X83S, X86K, X89F, X89A, X89C, X89L, X89G, X89M, X89S, X89R, X90Q, X90F, X90G, X90E, X90A, X90N, X90I, X90R, X90Y, X90V, X90S, X90M, X90D, X91S, X91Y, X91K, X91Q, X91F, X91H, X91T, X91I, X91W, X91N, X91V, X91L, X91C, X91G, X91D, X91E, X91M, X92V, X92M, X92D, X93K, X93Q, X94M, X94K, X94Y, X94D, X94A, X94V, X95V, X95I, X95E, X95L, X96N, X96K, X97V, X98G, X98E, X98N, X99K, X99H, X99N, X100D, X100K, X100L, X100F, X103A, X106D, X108A, X109A, X113Y, X113H, X113M, X113V, X113F, X113W, X113R, X114D, X114H, X114N, X114W, X114E, X114C, X114G, X114L, X114M, X114Q, X114F, X114A, X114V, X114K, X114S, X114Y, X114R, X114I, X115C, X115K, X115N, X115T, X115M, X115S, X115Q, X115R, X115D, X115V, X116L, X117D, X117Y, X117N, X117C, X117R, X117W, X117A, X117I, X117P, X117F, X119Y, X119R, X119P, X119H, X125A, X125K, X125L, X125T, X125R, X125F, X125W, X125Q, X125V, X125Y, X125H, X125N, X125E, X125G, X125M, X126D, X128C, X128L, X128Y, X128E, X128W, X128M, X129E, X131I, X131C, X132T, X133E, X133P, X133C, X133D, X133Q, X133S, X133H, X133A, X133N, X133K, X134Y, X134W, X134F, X134P, X134E, X134V, X134L, X134M, X134T, X134C, X134I, X135M, X136D, X136E, X136F, X136M, X136P, X136H, X136C, X136A, X136W, X136L, X136N, X139C, X141V, X142C, X142W, X142Y, X142L, X142M, X142Q, X142F, X142E, X142R, X143F, X144Q, X144C, X144V, X144K, X144T, X144Y, X144E, X144G, X144N, X144S, X144R, X145A, X146C, X146H, X146K, X146T, X146E, X146S, X146D, X146W, X146F, X146L, X146G, X147M, X149E, X150Q, X150E, X150C, X151C, X151E, X154Y, X154A, X155Y, X156V, X160W, X161T, X162V, X164V, X165W, X169E, X169V, X170F, X170C, X172C, X172K, X172A, X173I, X173Y, X174P, X174M, X174E, X174S, X174H, X175G, X175Q, X175H, X176K, X188V, X188H, X191K, X191H, X191F, X191W, X191Y, X203E, X203R, X210D, X210C, X210E, X210N, X210F, X210Y, X210M, X210Q, X210S, X210A, X211D, X211N, X211C, X211T, X211E, X211G, X211V, X211Q, X211A, X211H, X211L, X211S, X212W, X212L, X212I, X212D, X212C, X213A, X213S, X213M, X213R, X213C, X214P, X214E, X215E, X215D, X215H, X215W, X215A, X216H, X216G, X218Q, X218E, X218C, X218N, X218F, X218S, X218G, X218K, X218I, X218T, X218D, X218Y, X218H, X218L, X218V, X218A, X218W, X219E, X219Q, X219K, X219T, X219M, X219D, X219F, X219S, X219R, X219A, X219Y, X219H, X219W, X219G, X219C, X221N, X221F, X222S, X222T, X222D, X223V, X223Y, X223L, X223C, X224V, X224F, X225A, X225R, X225N, X225E, X225H, X225F, X225C, X225Y, X225I, X226C, X226W, X226I, X226R, X226Y, X226D, X226L, X226M, X226G, X226T, X226Q, X226S, X226A, X226V, X226E, X226H, X227W, X227C, X227T, X227R, X227M, X227K, X227Y, X227V, X227F, X227I, X227H, X227L, X227G, X230A, X230F, X231N, X231C, X233T, X233W, X233H, X233C, X233I, X233Y, X233M, X234C, X235M, X235V, X235L, X236Y, X237C, X237I, X238T, X240M, X242M, X243F, X245E, X245M, X245H, X249D, X249I, X250V, X251E, X251A, X251L, X251S, X251M, X251F, X252C, X252I, X252S, X253Y, X253G, X255T, X255V, X255D, X255F, X255I, X256C, X257Y, X257L, X257V, X259L, X261R, X262D, X262Y, X262C, X262P, X262E, X262H, X263I, X264T, X264W, X264H, X265S, X268G, X270A, X270Y, X272L, X272G, X273H, X273V, X273L, X273M, X273C, X273D, X273W, X273F, X273A, X273E, X273P, X273Y, X273R, X273I, X274S, X276Y, X276K, X276L, X276D, X279P, X280I, X280V, X280N, X280H, X280Y, X280K, X280R, X284Y, X284A, X284L, X284F, X284H, X284N, X284M, X285N, X285L, X285G, X285P, X286Q, X287E, X287H, X287A, X287D, X287T, X288K, X288P, X288Y, X288A, X289T, X289R, X289G, X289F, X290Q, X290N, X290M, X290D, X290W, X291D, X291Y, X291K, X291T, X292W, X292Y, X292F, X292D, X292L, X292I, X292T, X292C, X293D, X293R, X293K, X293E, X293F, X294T, X294G, X295F, X296Y, X296L, X296C, X296A, X297M, X297K, X297S, X297H, X297V, X297E, X297F, X299L, X299G, X299I, X299K, X299S, X299Y, X301F, X302H, X302I, X302Q, X302Y, X302V, X303P, X303M, X303E, X303I, X303R, X303K, X303N, X303L, X303H, X303T, X304H, X304A, X304R, X304Y, X304D, X304N, X304M, X304E, X304P, X304W, X304K, X304T, X306M, X306E, X306A, X306G, X306W, X306V, X306S, X306I, X306H, X306T, X306D, X306Q, X306Y, X306R, X307F, X307M, X308S, X309H, X309L, X309Q, X310Q, X310A, X311G, X311E, X311H, X311A, X311K, X311T, X311N, X311R, X311Y, X312M, X312L, X313V, X314C, X314Q, X315C, X315A, X315H, X315T, X315E, X315K, X318T, X318S, X318I, X319K, X319H, X319P, X319A, X319I, X319D, X319M, X319S, X319N, X319T, X319W, X320G, X320Y, X320L, X320N, X320A, X320D, X320K, X320Q, X320E, X320H, X320C, X320S, X321E, X321W, X321T, X321A, X321N, X321V, X321K, X323K, X323G, X324W, X324K, X324Y, X326Y, X326N, X326G, X326S, X327M, X327C, X327L, X333I, X336K, X337N, X337K, X337M, X337T, X337V, X337Q, X337S, X337R, X337I, X337Y, X337G, X337F, X337A, X337L, X338G, X338T, X338S, X341V, X342P, X343W, X343Y, X344I, X344Q, X344V, X345N, X345T, X345M, X345G, X345S, X345D, X345Q, X346D, X346C, X346H, X346A, X346G, X346Q, X346N, X348T, X350P, X350H, X350K, X351M, X351A, X352S, X353H, X354Y, X354N, X354T, X354I, X355I, X355M, X357A, X358P, X359E, X360N, X360R, X360S, X360Y, X360V, X360L, X360A, X360I, X360T, X360G, X360F, X362T, X362M, X362V, X362N, X362Y, X362F, X362K, X363M, X363G, X363S, X363V, X363C, X363T, X363H, X363P, X363D, X363L, X363R, X363Q, X363E, X363Y, X363K, X363W, X363A, X364G, X364T, X364S, X364A, X364V, X364C, X364K, X364L, X364N, X366I, X366L, X366T, X367S, X367E, X368N, X368L, X368A, X370E, X370I, X372C, X372H, X372A, X372F, X372M, X372Q, X372N, X372E, X375K, X375A, X375D, X375E, X375R, X375T, X375I, X375W, X375Y, X375Q, X376S, X376R, X376M, X376I, X376V, X376Q, X376L, X378E, X378R, X378D, X378C, X379L, X379A, X379S, X381V, X381E, X382N, X382H, X382Q, X382K, X382A, X382S, X383R, X383I, X383D, X383V, X383M, X383E, X383N, X383S, X383Q, X383Y, X383C, X383H, X384W, X384Y, X384V, X384R, X384N, X384E, X384A, X384D, X384T, X384C, X384F, X384L, X384I, X384M, X384Q, X385G, X385V, X385T, X385Y, X385I, X385D, X385C, X385Q, X385A, X385W, X385L, X385H, X385M, X385N, X385S, X385F, X385E, X385R, X385P, X387N, X387C, X387E, X388R, X388F, X388H, X388V, X388E, X388M, X388I, X389G, X389K, X389H, X390P, X390N, X390R, X390F, X390M, X390D, X391T, X391F, X391S, X391A, X391G, X391M, X391N, X391Y, X391Q, X391K, X392C, X392V, X393V, X393E, X393H, X393S, X393P, X394C, X394L, X394R, X394S, X394A, X394E, X394N, X394M, X394H, X394I, X395V, X395M, X395A, X395H, X396P, X396H, X397P, X397D, X397S, X397H, X398M, X399P, X400L, X400P, X400I, X400S, X400A, X400R, X400Q, X400D, X400K, X400N, X400V, X400W, X400H, X400E, X400G, X400M, X401M, X401K, X401T, X401I, X403N, X405H, X405V, X405T, X405C, X406P, X407S, X407R, X407D, X408Q, X408E, X408I, X410R, X410K, X410I, X410L, X410H, X413S, X414E, X414C, X414S, X415I, X415E, X416S, X418C, X418P, X418N, X421P, X421N, X424A, X426D, X426W, X427Q, X427C, X427F, X427T, X427V, X427G, X427S, X427R, X427K, X429M, X429D, X429E, X429N, X429T, X429A, X429P, X429W, X429Q, X429S, X429F, X429G, X429I, X429V, X431I, X436E, X438P, X438F, X438Y, X439K, X439C, X439P, X440V, X442Q, X443T, X443H, X445M, X445T, X445A, X445G, X445S, X445F, X445R, X445Q, X445C, X445D, X445K, X445H, X445V, X446P, X446I, X446V, X446F, X446L, X446R, X446Q, X446W, X447V, X448E, X448H, X448N, X448D, X449V, X449Y, X449F, X449L, X449P, X449G, X449W, X449M, X449R, X449N, X449K, X449Q, X449S, X449A, X451L, X453G, X453I, X453P, X453Y, X453N, X455L, X456M, X456S, X456Y, X456V, X456L, X456W, X456R, X457K, X457C, X457L, X457S, X457R, X457F, X457T, X457A, X457V, X457W, X457E, X457M, X457G, X458V, X458W, X458I, X458K, X459Q, X459D, X459I, X459K, X459C, X459V, X459E, X459Y, X460E, X460Q, X460S, X460R, X460A, X460T, X460D, X460V, X461A, X461R, X461F, X461E, X461S, X461V, X461M, X461K, X461N, X461Q, X462K, X463L, X465P, X465V, X465H, X465R, X467A, X467E, X467H, X468H, X468D, X470Q, X470T, X470A, X474P, X474H, X474F, X478A, X478E, X480Y, X480M, X480E, X480D, X480R, X482T 및 X482C로 이루어진 아미노산 치환 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)의 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하는 아밀라제이다.
바람직하게는, 개선된 특성은 세제 조성물, 바람직하게는 세탁 세제 조성물에서의 개선된 안정성, 바람직하게는 세제 조성물에서의 개선된 열안정성이다. 바람직하게는, 모 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1과 비교하여 세제 조성물에서 개선된 안정성, 바람직하게는 열안정성을 나타내는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 4, 6, 20, 25, 27, 28, 33, 38, 41, 70, 72, 73, 75, 81, 93, 94, 96, 115, 125, 126, 128, 134, 139, 160, 174, 175, 176, 210, 213, 250, 251, 253, 276, 291, 292, 299, 314, 318, 319, 323, 326, 338, 343, 352, 356, 359, 363, 364, 368, 372, 378, 379, 382, 385, 387, 388, 390, 393, 396, 398, 400, 405, 418, 434, 447, 449, 459, 460, 461 및 465로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환을 포함하는 아밀라제이다.
바람직하게는, 모 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1과 비교하여 세제 조성물에서 개선된 안정성, 바람직하게는 열안정성을 나타내는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 X4Q, X6E, X6H, X20K, X25H, X25Y, X27I, X28V, X33M, X38V, X41C, X70H, X72C, X73C, X75L, X81L, X93Q, X94M, X96Q, X115T, X125K, X125R, X126D, X128C, X134F, X134Y, X139C, X160W, X174H, X175A, X176K, X210C, X210D, X213C, X250I, X251E, X253C, X276R, X291T, X292C, X299S, X314Q, X318L, X319K, X323G, X326Y, X338S, X338T, X343W, X352C, X356V, X359W, X363M, X363S, X364T, X368F, X372C, X378E, X379A, X379R, X382Q, X385W, X387E, X387N, X387S, X388E, X388K, X388Y, X390F, X393Q, X396S, X398G, X400A, X400S, X405M, X418F, X434S, X434R, X447L, X449G, X459N, X460G, X461L, X461A 및 X465H로 이루어진 아미노산 치환 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)의 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하는 아밀라제이다.
바람직하게는, 모 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1과 비교하여 세제 조성물에서 개선된 안정성, 바람직하게는 열안정성을 나타내는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 치환 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)의 조합을 포함하는 아밀라제이다:
X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X482W, X4Q+X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M+X482W, X25H+X176K+X186E+X206Y+X482W, X25H+X186E+X206Y+X405M+X482W, X25H+X186E+X206Y+X482W, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X482W, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X482W, X25H+X176K+X186E+X482W, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X482W, X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W, X25H+X176K+X186E+X206Y, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X206Y+X460G+X482W, X4Q+X25H+X176K+X206Y+X251E+X460G+X482W, X4Q+X25H+X176K+X193E+X251E+X186E+X482W, X4Q+X193E+X206Y+X276R+X186E+X482W, X186E+X25H+X482W, X25H+X193E+X206Y+X251E+X276R+X405M+X186E+X482W, X25H+X251E+X186E+X482W, X25H+X160W+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W, X193E+X206Y+X405M+X186E+X482W, X3I+X356V, X3I+X356I, X83D+X94E, X94D+X125E, X131I+X377Q+X410H, X48F+X94D, X48Y+X116K+X218K, X5L+X218K+X225S, X83E+X116R+X158Y+X181E, X51V+X218K, X83E+X181E, X4Q+X7W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X37M+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X25D+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M+X460G, X4Q+X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X460G, X4Q+X25Y+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X118D+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X182D+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X460G, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363H+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363N+X405M, X4Q+X176K+X181D+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X181F+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X181N+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X136E+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X135D+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X135E+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, 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X25H+X160D+X176K+X186E+X206Y, X25H+X160E+X176K+X186E+X206Y, X25Y+X176K+X186E+X206Y, X87D+X186E+X315K+X420K, X87D+X186E+X226D+X314E+X420E+X461E, X87D+X186E+X226D+X420E, X87D+X186E+X226D+X420E+X461E, X87D+X186E+X314E+X471E, X87D+X186E+X311K+X314E+X420K, X87D+X186E+X160D+X461E, X87R+X186E+X315K+X461R, X87R+X186E+X226D+X471E, X87R+X186E+X226R+X314K+X420K+X461R, X87R+X186E+X226R+X311K+X420K, X87R+X186E+X314K+X315K, X87R+X186E+X311K+X314E, X87R+X186E+X420E+X450R, X87R+X186E+X450R+X452R, X186E+X315K+X420E+X452R, X186E+X226D+X314E+X461E+X471E, X186E+X226D+X314E+X452R, X186E+X226D+X314K+X460D+X471E+X485R, X186E+X226D+X311K+X460D, X186E+X226D+X461E+X471E, X186E+X314E+X460D+X461E, X186E+X314E+X420E+X452R+X461E, X186E+X314K+X450R+X460D, X186E+X460D+X471E+X485R, X186E+X311K+X314K+X452R, X186E+X311K+X461E+X485R, X186E+X311K+X420E+X471E, X186E+X420K+X450R+X471E+X485R, X186E+X420K+X450R+X485R, X186E+X452R+X461E+X471E, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X25H+X176K+X186E+X206Y, 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X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X100W+X363E, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X100W+X363H, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X258Q, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X258Q+X8A, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X258Q+X281N+X363E, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X258Q+X363H, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X281N, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X181Q+X258Q, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X181Q+X258Q+X281N, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X181Q+X258Q+X363H, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X363E, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X363H, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X363E, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X363H, X25H+X176K+X186E+X206Y, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N+X363E, 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X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X473R, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q+X281N+X363E, 및 X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q+X363E.
바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
바람직하게는, 개선된 특성은 개선된 세척 성능이다. 바람직하게는, 모 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1과 비교하여 개선된 세척 성능을 나타내는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 3, 4, 5, 6, 7, 20, 25, 33, 36, 37, 41, 51, 54, 72, 73, 75, 81, 82, 83, 94, 95, 96, 98, 100, 116, 118, 119, 120, 123, 126, 131, 135, 136, 139, 156, 158, 160, 163, 165, 169, 172, 174, 176, 177, 178, 180, 182, 185, 187, 188, 189, 191, 193, 208, 210, 218, 219, 222, 224, 225, 231, 238, 242, 243, 251, 252, 253, 258, 260, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 279, 280, 281, 282, 286, 297, 298, 299, 311, 314, 317, 318, 320, 321, 322, 323, 324, 326, 337, 343, 344, 350, 352, 356, 357, 358, 359, 360, 362, 363, 364, 365, 368, 370, 372, 378, 379, 382, 385, 387, 388, 390, 391, 393, 395, 396, 397, 400, 405, 410, 429, 434, 439, 456, 459, 460, 461, 463 및 465로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서 아미노산 치환을 포함하는 아밀라제이다.
바람직하게는, 모 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1과 비교하여 개선된 세척 성능을 나타내는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 X100W, X116I, X116M, X118A, X118D, X118E, X119S, X120E, X120G, X120M, X120S, X120W, X120Y, X126D, X131Q, X135D, X135E, X135G, X135N, X135N, X135P, X135S, X135T, X135T, X135W, X136E, X139S, X156E, X160D, X160E, X163A, X163Q, X163T, X165S, X165T, X169D, X169S, X174E, X174G, X174H, X174H, X174M, X174N, X176S, X176T, X177A, X177G, X177K, X177N, X177P, X177R, X177S, X177W, X178F, X180M, X180N, X180T, X180W, X182D, X182E, X182N, X182Q, X182S, X185E, X185M, X185N, X187A, X187D, X187M, X187V, X188T, X189I, X191M, X193D, X193E, X193E, X193G, X193V, X193V, X20N, X210D, X219Q, X224F, X231D, X238A, X238F, X242N, X243D, X251T, X252S, X253C, X258F, X258Q, X258Q, X258R, X25D, X25D, X25G, X25Y, X25Y, X260H, X260H, X268F, X269M, X270A, X270Q, X271S, X272F, X272S, X273Q, X274F, X274F, X274F, X275V, X276N, X277D, X277D, X277D, X277E, X277T, X279A, X280D, X280F, X280G, X280K, X280R, X281A, X281D, X281E, X281H, X281H, X281N, X281S, X282V, X282V, X286Q, X297M, X298V, X299S, X299S, X311G, X311W, X314Q, X314Q, X314S, X317M, X318L, X318L, X320A, X321Y, X322K, X323G, X324K, X326Y, X33L, X343W, X344V, X350P, X352C, X356C, X356L, X356V, X356V, X357C, X357F, X358M, X359W, X359W, X359W, X359W, X359W, X360T, X362C, X362M, X363E, X363H, X363M, X363N, X363S, X363Y, X363Y, X364T, X365L, X365L, X365Q, X365Q, X365Y, X368F, X368F, X36H, X36K, X370S, X372C, X372M, X372S, X372T, X372T, X378E, X379R, X37F, X37L, X37M, X37W, X37Y, X382Q, X382Q, X385W, X387E, X387N, X387S, X387S, X388E, X388H, X388K, X390F, X391K, X393Q, X395C, X395M, X396C, X396S, X397S, X400A, X400L, X400S, X405H, X405M, X41C, X41G, X429P, X429P, X434E, X434H, X434R, X434S, X439K, X456S, X459N, X459N, X460G, X460G, X461A, X461L, X461R, X463A, X463V, X465H, X4Q, X5D, X6E, X6H, X6P, X72C, X73C, X73N, X75H, X75I, X75L, X75L, X75T, X7F, X7H, X7W, X81L, X82C, X82L, X83E, X94E, X95A, X96Q, X98A, X98N 및 X98V로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)을 포함하는 아밀라제이다.
바람직하게는, 모 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1과 비교하여 세제 조성물에서 개선된 세척 성능을 나타내는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 치환 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)의 조합을 포함하는 아밀라제이다:
X4Q+X7W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X37M+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M+X460G, X4Q+X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X460G, X4Q+X25Y+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X182D+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X281N+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X460G, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363H+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363N+X405M, X4Q+X176K+X181D+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X181F+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X181N+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X136E+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X135E+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X135W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X160D+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X160E+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X7H+X25H+X176K+X186E+X206Y, X7W+X25H+X176K+X186E+X206Y, X25D+X176K+X186E+X206Y, X25H+X186E+X206Y+X405M+X460G, X25H+X186E+X206Y+X460G, X25H+X37M+X176K+X186E+X206Y, X25H+X118D+X176K+X186E+X206Y, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X460G, X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X460G, X25H+X176K+X186E+X206Y+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X363H, X25H+X176K+X186E+X206Y+X363N, X25H+X176K+X186E+X460G, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X460G, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X460G, X25H+X176K+X181D+X186E+X206Y, X25H+X176K+X181N+X186E+X206Y, X25H+X176K+X181Q+X186E+X206Y, X25H+X136E+X176K+X186E+X206Y, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y, X25H+X135D+X176K+X186E+X206Y, X25H+X135E+X176K+X186E+X206Y, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y, X25H+X135W+X176K+X186E+X206Y, X25H+X160D+X176K+X186E+X206Y, X25H+X160E+X176K+X186E+X206Y, X25Y+X176K+X186E+X206Y, X51Q+X116K+X410I, X51V+X356I, X33E+X54G+X83D+X116T+X337L, X3A+X116K+X172N+X323A+X356V, X3I+X33H+X54D+X208Y+X218E+X320A, X3I+X54D+X116K+X125E+X225A, X3I+X125D+X174D+X222D+X376L+X420D, X3I+X356I, X3I+X356V, X3I+X48Y+X116T, X54D+X116K+X225S+X410Y, X83A+X94E+X158N+X172D+X323A, X83D+X125E, X83E+X181E, X83E+X116R+X158Y+X181E, X169E+X377Q, X158N+X172D, X125D+X225A+X337A+X410H, X29D+X33H+X83D+X125D+X337C+X343W, X29E+X33K+X123D+X208I+X222D+X356V, X94D+X125E, X225A+X376G+X410Y, X5L+X33K+X222D+X320K+X324M+X420E, X5L+X131L+X172K+X225S+X410I+X420E, X5L+X116T+X123D+X208F, X131I+X377Q+X410H, X131L+X320K, X116K+X181T+X225A+X320K, X116K+X125N+X158H+X225S, X116K+X131I+X158H+X174E, X116R+X169E+X420E, X116T+X181Q+X343T, X116T+X125D+X172K+X337A+X410I, X116T+X125E+X131I, X186E+X206Y, X186E+X206Y+X405M, X186E+X206Y+X251E, X186E+X206Y+X251E+X276R+X405M, X186E+X206Y+X251E+X405M, X186E+X206Y+X251E+X323G+X405M, X186E+X206Y+X323G+X405M, X186E+X405M, X186E+X193E+X206Y+X251E, X186E+X251E+X405M, X4Q+X186E+X206Y, X4Q+X186E+X206Y+X405M, X4Q+X186E+X206Y+X251E+X276R, X4Q+X186E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X186E+X206Y+X251E+X323G+X405M, X4Q+X186E+X193E+X206Y+X405M, X4Q+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X25H+X186E+X206Y, X4Q+X25H+X186E+X206Y+X405M, X4Q+X25H+X186E+X206Y+X251E+X323A+X405M, X4Q+X25H+X186E+X206Y+X323G+X405M, X4Q+X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E, X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M, X4Q+X25H+X176K+X206Y+X405M+X460G, X4Q+X25H+X176K+X206Y+X460G, X4Q+X25H+X176K+X206Y+X251E, X4Q+X25H+X176K+X206Y+X251E+X460G, X4Q+X25H+X176K+X206Y+X323G, X4Q+X25H+X160W+X186E+X206Y+X405M, X4Q+X25H+X160W+X186E+X206Y+X251E, X4Q+X25H+X160W+X186E+X206Y+X323G+X405M, X4Q+X25H+X160W+X186E+X405M, X4Q+X25H+X160W+X186E+X193E+X206Y+X276R, X4Q+X25H+X160W+X186E+X323G, X4Q+X25H+X160W+X176K+X186E+X206Y+X251E, X4Q+X25H+X160W+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X25H+X160W+X176K+X186E+X405M, X4Q+X25H+X160W+X176K+X186E+X251E+X405M, X4Q+X25H+X160W+X176K+X206Y, X4Q+X25H+X160W+X176K+X206Y+X251E+X460G, X4Q+X176K+X186E+X206Y+X405M, X4Q+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X276R+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X251E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X323G+X405M, X4Q+X176K+X206Y, X4Q+X176K+X206Y+X405M, X4Q+X176K+X206Y+X405M+X460G, X4Q+X176K+X206Y+X460G, X4Q+X176K+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X206Y+X251E+X405M+X460G, X4Q+X176K+X206Y+X251E+X323A+X460G, X4Q+X160W+X176K+X186E+X206Y+X251E, X4Q+X160W+X176K+X186E+X251E+X405M, X4Q+X160W+X176K+X206Y+X251E+X323G+X405M+X460G, X25H+X186E+X206Y, X25H+X186E+X206Y+X405M, X25H+X186E+X206Y+X251E+X405M, X25H+X186E+X405M, X25H+X186E+X193E+X206Y+X405M, X25H+X176K+X186E, X25H+X176K+X186E+X276R+X323G+X405M, X25H+X176K+X186E+X206Y, X25H+X176K+X186E+X206Y+X276R, X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M, X25H+X176K+X186E+X405M, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X276R+X405M, X25H+X176K+X186E+X251E+X276R, 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X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X363E, X25H+X176K+X181Q+X186E+X206Y, X25H+X176K+X181Q+X186E+X206Y+X363E, X25H+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y+X258Q, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N+X363E, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y+X281N, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y+X281N+X363E, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y+X361R, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y+X363E, X25H+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y, X25H+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X258Q, X25H+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X258Q+X473R, X25H+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X258Q+X281N, X25H+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X258Q+X281N+X363E, X25H+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X363E, X25H+X100W+X176K+X181Q+X186E+X206Y+X363E, X25H+X100W+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y, X25H+X100W+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X258Q+X281N, X25H+X100W+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X100W+X135C+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X206Y, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X206Y+X258Q, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N+X363E, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X206Y+X281N, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X206Y+X281N+X363E, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X206Y+X363E, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X363E, X25H+X100W+X135T+X176K+X181Q+X186E+X206Y, X25H+X100W+X135T+X176K+X181Q+X186E+X206Y+X258Q+X281N, X25H+X100W+X135T+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y, X25H+X100W+X135T+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X258Q, X25H+X100W+X135T+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X363E, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y+X258Q, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N+X363E, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y+X281N, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y+X281N+X363E, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y+X281N+X363E+X415S, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y+X363E, X25H+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X258Q, X25H+X135T+X176K+X181Q+X186E+X206Y+X258Q, X25H+X135T+X176K+X181Q+X186E+X206Y+X258Q+X363E, 및 X25H+X135T+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X258Q+X281N.
바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
바람직하게는, 모 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1과 비교하여 세제 조성물에서 개선된 세척 성능 및/또는 개선된 안정성을 나타내는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 치환 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)의 조합을 포함하는 아밀라제이다:
X4Q+X7W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X37M+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M+X460G, X4Q+X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X460G, X4Q+X25Y+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X182D+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X281N+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X460G, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363H+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363N+X405M, X4Q+X176K+X181D+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X181F+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X181N+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X136E+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X135E+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X135W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X160D+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X160E+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X7H+X25H+X176K+X186E+X206Y, X7W+X25H+X176K+X186E+X206Y, X25D+X176K+X186E+X206Y, X25H+X186E+X206Y+X405M+X460G, X25H+X186E+X206Y+X460G, X25H+X37M+X176K+X186E+X206Y, X25H+X118D+X176K+X186E+X206Y, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X460G, X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X460G, X25H+X176K+X186E+X206Y+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X363H, X25H+X176K+X186E+X206Y+X363N, X25H+X176K+X186E+X460G, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X460G, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X460G, X25H+X176K+X181D+X186E+X206Y, X25H+X176K+X181N+X186E+X206Y, X25H+X176K+X181Q+X186E+X206Y, X25H+X136E+X176K+X186E+X206Y, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y, X25H+X135D+X176K+X186E+X206Y, X25H+X135E+X176K+X186E+X206Y, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y, X25H+X135W+X176K+X186E+X206Y, X25H+X160D+X176K+X186E+X206Y, X25H+X160E+X176K+X186E+X206Y, X25Y+X176K+X186E+X206Y, X51Q+X116K+X410I, X51V+X356I, X33E+X54G+X83D+X116T+X337L, X3A+X116K+X172N+X323A+X356V, X3I+X33H+X54D+X208Y+X218E+X320A, X3I+X54D+X116K+X125E+X225A, X3I+X125D+X174D+X222D+X376L+X420D, X3I+X356I, X3I+X356V, X3I+X48Y+X116T, X54D+X116K+X225S+X410Y, X83A+X94E+X158N+X172D+X323A, X83D+X125E, X83E+X181E, X83E+X116R+X158Y+X181E, X169E+X377Q, X158N+X172D, X125D+X225A+X337A+X410H, X29D+X33H+X83D+X125D+X337C+X343W, X29E+X33K+X123D+X208I+X222D+X356V, X94D+X125E, X225A+X376G+X410Y, X5L+X33K+X222D+X320K+X324M+X420E, X5L+X131L+X172K+X225S+X410I+X420E, X5L+X116T+X123D+X208F, X131I+X377Q+X410H, X131L+X320K, X116K+X181T+X225A+X320K, X116K+X125N+X158H+X225S, X116K+X131I+X158H+X174E, X116R+X169E+X420E, X116T+X181Q+X343T, X116T+X125D+X172K+X337A+X410I, X116T+X125E+X131I, X186E, X186E+X206Y, X186E+X206Y+X405M, X186E+X206Y+X251E, X186E+X206Y+X251E+X276R+X405M, X186E+X206Y+X251E+X405M, X186E+X206Y+X251E+X323G+X405M, X186E+X206Y+X323G+X405M, X186E+X405M, X186E+X193E+X206Y+X251E, X186E+X251E+X405M, X4Q+X186E+X206Y, X4Q+X186E+X206Y+X405M, X4Q+X186E+X206Y+X251E+X276R, X4Q+X186E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X186E+X206Y+X251E+X323G+X405M, X4Q+X186E+X193E+X206Y+X405M, X4Q+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X25H+X186E+X206Y, X4Q+X25H+X186E+X206Y+X405M, X4Q+X25H+X186E+X206Y+X251E+X323A+X405M, X4Q+X25H+X186E+X206Y+X323G+X405M, X4Q+X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E, X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M, X4Q+X25H+X176K+X206Y+X405M+X460G, X4Q+X25H+X176K+X206Y+X460G, X4Q+X25H+X176K+X206Y+X251E, X4Q+X25H+X176K+X206Y+X251E+X460G, X4Q+X25H+X176K+X206Y+X323G, X4Q+X25H+X160W+X186E+X206Y+X405M, X4Q+X25H+X160W+X186E+X206Y+X251E, X4Q+X25H+X160W+X186E+X206Y+X323G+X405M, X4Q+X25H+X160W+X186E+X405M, X4Q+X25H+X160W+X186E+X193E+X206Y+X276R, X4Q+X25H+X160W+X186E+X323G, X4Q+X25H+X160W+X176K+X186E+X206Y+X251E, X4Q+X25H+X160W+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X25H+X160W+X176K+X186E+X405M, X4Q+X25H+X160W+X176K+X186E+X251E+X405M, X4Q+X25H+X160W+X176K+X206Y, X4Q+X25H+X160W+X176K+X206Y+X251E+X460G, X4Q+X176K+X186E+X206Y+X405M, X4Q+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X276R+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X251E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X323G+X405M, X4Q+X176K+X206Y, X4Q+X176K+X206Y+X405M, X4Q+X176K+X206Y+X405M+X460G, X4Q+X176K+X206Y+X460G, X4Q+X176K+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X176K+X206Y+X251E+X405M+X460G, X4Q+X176K+X206Y+X251E+X323A+X460G, X4Q+X160W+X176K+X186E+X206Y+X251E, X4Q+X160W+X176K+X186E+X251E+X405M, X4Q+X160W+X176K+X206Y+X251E+X323G+X405M+X460G, X25H+X186E+X206Y, X25H+X186E+X206Y+X405M, X25H+X186E+X206Y+X251E+X405M, X25H+X186E+X405M, X25H+X186E+X193E+X206Y+X405M, X25H+X176K+X186E, X25H+X176K+X186E+X276R+X323G+X405M, X25H+X176K+X186E+X206Y, X25H+X176K+X186E+X206Y+X276R, X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M, X25H+X176K+X186E+X405M, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X276R+X405M, X25H+X176K+X186E+X251E+X276R, X25H+X176K+X206Y, X25H+X176K+X206Y+X405M, X25H+X176K+X206Y+X460G, X25H+X176K+X206Y+X251E, X25H+X176K+X206Y+X251E+X405M, X25H+X160W+X186E+X206Y, X25H+X160W+X186E+X206Y+X251E, X25H+X160W+X186E+X206Y+X251E+X405M, X25H+X160W+X186E+X206Y+X323G+X405M, X25H+X160W+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M, X25H+X160W+X176K+X186E+X405M, X25H+X160W+X176K+X186E+X193E+X206Y, X25H+X160W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X405M, X25H+X160W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X25H+X160W+X176K+X186E+X251E, X25H+X160W+X176K+X186E+X251E+X405M, X25H+X160W+X176K+X206Y+X251E+X323G+X405M, X176K+X186E+X206Y, X176K+X186E+X206Y+X405M, X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M, X176K+X186E+X405M+X405M, X176K+X186E+X193E+X206Y+X405M, X176K+X186E+X251E+X405M, X176K+X206Y, X176K+X206Y+X405M, X176K+X206Y+X405M+X460G, X176K+X206Y+X460G, X176K+X206Y+X251E, X160W+X186E+X193E+X206Y+X405M, X160W+X176K+X186E+X206Y, X160W+X176K+X186E+X405M, X160W+X176K+X186E+X193E+X206Y, X160W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X405M, X160W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E, X160W+X176K+X206Y+X405M, X160W+X176K+X206Y+X323G+X405M+X460G, X186E+X193E, X4Q+X460G, X208C+X323G, X25H+X186E, X176K+X400A, X457N+X460G+X461L, X160W+X186E, X160W+X186Q, X160W+X434S, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X281N+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X363E+X405M, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X281N+X363E+X405M, X4Q+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X405M, X4Q+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363E+X405M, X4Q+X8A+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X405M, X4Q+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X281N+X405M, X4Q+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X281N+X363E+X405M, X4Q+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X281N+X363H+X405M, X4Q+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X363E+X405M, X4Q+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X363H+X405M, X4Q+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X281N+X405M, X4Q+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X281N+X363H+X405M, X4Q+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363E+X405M, X4Q+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363H+X405M, X4Q+X100W+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X281N+X363E+X405M, X4Q+X100W+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363H+X405M, X4Q+X100W+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X281N+X405M, X4Q+X100W+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X405M, X4Q+X100W+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X363H+X405M, X4Q+X100W+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X281N+X405M, X4Q+X100W+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X100W+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363E+X405M, X4Q+X100W+X135T+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X405M, X4Q+X100W+X135T+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X281N+X405M, X4Q+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X281N+X363E+X405M, X4Q+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X405M, X4Q+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X363H+X405M, X4Q+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X281N+X405M, X4Q+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363E+X405M, X4Q+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X363H+X405M, X4Q+X135T+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X251E+X258Q+X281N+X405M, X4Q+X135T+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X251E+X281N+X363H+X405M, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X363E+XN123D, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X258Q, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X363E, X25H+X176K+X181Q+X186E+X206Y+X363E, X25H+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y+X258Q, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N+X363E, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y+X281N, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y+X281N+X363E, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y+X361R, X25H+X100W+X176K+X186E+X206Y+X363E, X25H+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y, X25H+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X258Q, X25H+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X258Q+X473R, X25H+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X258Q+X281N, X25H+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X258Q+X281N+X363E, X25H+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X100W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X363E, X25H+X100W+X176K+X181Q+X186E+X206Y+X363E, X25H+X100W+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y, X25H+X100W+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X258Q+X281N, X25H+X100W+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X100W+X135C+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X206Y, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X206Y+X258Q, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N+X363E, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X206Y+X281N, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X206Y+X281N+X363E, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X206Y+X363E, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X100W+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X363E, X25H+X100W+X135T+X176K+X181Q+X186E+X206Y, X25H+X100W+X135T+X176K+X181Q+X186E+X206Y+X258Q+X281N, X25H+X100W+X135T+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y, X25H+X100W+X135T+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X258Q, X25H+X100W+X135T+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X363E, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y+X258Q, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N+X363E, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y+X281N, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y+X281N+X363E, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y+X281N+X363E+X415S, X25H+X135T+X176K+X186E+X206Y+X363E, X25H+X135T+X176K+X186E+X193E+X206Y+X258Q, X25H+X135T+X176K+X181Q+X186E+X206Y+X258Q, X25H+X135T+X176K+X181Q+X186E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X135T+X176K+X181Q+X186E+X193E+X206Y+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X482W, X4Q+X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M+X482W, X25H+X176K+X186E+X206Y+X482W, X25H+X186E+X206Y+X405M+X482W, X25H+X186E+X206Y+X482W, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X482W, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X482W, X25H+X176K+X186E+X482W, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X482W, X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W, X4Q+X206Y+X460G+X482W, X4Q+X25H+X176K+X206Y+X251E+X460G+X482W, X4Q+X25H+X176K+X193E+X251E+X186E+X482W, X4Q+X193E+X206Y+X276R+X186E+X482W, X186E+X25H+X482W, X25H+X193E+X206Y+X251E+X276R+X405M+X186E+X482W, X25H+X251E+X186E+X482W, X25H+X160W+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W, 및 X193E+X206Y+X405M+X186E+X482W.
바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
바람직하게는, 개선된 특성은 개선된 발현이다. 바람직하게는, 모 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1과 비교하여 개선된 발현을 나타내는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 4, 6, 20, 25, 27, 28, 37, 70, 72, 75, 81, 94, 96, 160, 175, 176, 193, 276, 277, 299, 323, 368, 372, 382, 400, 405, 434, 459 및 461로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환을 포함하는 아밀라제이다.
바람직하게는, 모 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1과 비교하여 개선된 발현을 나타내는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 X4Q, X6E, X20K, X25H, X25Y, X27I, X28V, X37M, X70H, X72C, X75L, X81L, X94M, X96Q, X160W, X175A, X176K, X193E, X276R, X277D, X299S, X323G, X368F, X372C, X382Q, X400A, X405M, X434S, X459N 및 X461L로 이루어진 아미노산 치환 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)의 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하는 아밀라제이다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
바람직하게는, 개선된 특성은 개선된 용해도이다. 바람직하게는, 모 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1과 비교하여 개선된 용해도를 나타내는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 4, 25, 83, 87, 160, 176, 193, 219, 226, 251, 311, 314, 315, 378, 405, 439, 459, 460, 461 및 471로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 아미노산 치환을 포함하는 아밀라제이다.
바람직하게는, 모 알파-아밀라제와 비교하여, 바람직하게는 서열식별번호: 1과 비교하여 개선된 t 용해도를 나타내는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 X4K, X25H, X83E, X87D, X87R, X160D, X176K, X193E, X219D, X219R, X226R, X226D, X251E, X311K, X314E, X314K, X315K, X378K, X405M, X439K, X459R, X460G, X460D, X461E 및 X471E로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)을 포함하는 아밀라제이다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
또 다른 실시양태에서, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여, 상기 기재된 1개 이상의 아미노산 치환 및 특정 종류의 1개 이상의 추가의 아미노산, 바람직하게는 1개 이상의 추가의 아미노산 변경, 바람직하게는 아미노산 치환을 포함한다.
바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 1-50개의 추가의 아미노산 변경, 바람직하게는 1-35개, 1-31개, 1-30개, 1-20개, 1-15개, 1-10개 또는 1-5개의 아미노산 변경, 바람직하게는 치환을 포함한다.
바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 모 알파-아밀라제와 비교하여 1-4개, 바람직하게는 1-2개의 아미노산 결실을 추가로 포함한다.
한 실시양태에서, 이들 추가의 아미노산 변경은 하기 기재된 바와 같은 보존적 치환 및/또는 치환이다.
바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 9, 130, 179, 181, 186, 190, 195, 202, 206, 244, 402, 419, 420, 422, 423, 428, 430, 435, 441, 444, 450, 452, 454, 466, 469, 473, 475, 476, 479, 483 및 485로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 1개 이상, 바람직하게는 최대 1개, 최대 2개, 최대 3개, 최대 4개, 최대 5개, 최대 6개, 최대 7개, 최대 8개, 최대 9개, 최대 10개, 최대 15개, 최대 20개, 최대 25개, 또는 모든 아미노산의 추가의 변경, 바람직하게는 추가의 치환을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따르고, 여기서 상기 알파-아밀라제 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 1개 이상의 아미노산 치환은 X9D, X9F, X9K, X9L, X9N, X9P, X9Q, X9S, X9T, X9Y, X130V, X179G, X179L, X181D, X181E, X181F, X181H, X181I, X181N, X181Q, X181S, X181T, X181V, X181W, X181Y, X186A, X186C, X186D, X186E, X186F, X186H, X186I, X186K, X186L, X186M, X186N, X186Q, X186R, X186S, X186V, X186W, X186Y, X190H, X195F, X195H, X195K, X195L, X195W, X195Y, X202L, X206C, X206H, X206L, X206M, X206Y, X244A, X244C, X244D, X244E, X244F, X244G, X244H, X244M, X244N, X244Q, X244V, X402T, X419C, X420D, X420E, X420G, X420H, X420K, X420L, X420Q, X422C, X422N, X422H, X423F, X423M, X423Q, X423S, X428A, X428C, X428D, X428E, X428G, X428I, X428K, X428L, X428M, X428N, X428R, X428S, X428V, X428W, X428Y, X430A, X430C, X430D, X430E, X430F, X430G, X430I, X430L, X430P, X430Q, X430S, X430T, X430V, X435E, X435K, X435P, X435R, X435S, X435A, X435D, X437A, X437L, X437T, X437W, X441C, X441D, X441K, X441L, X441M, X441N, X441S, X444E, X444H, X444K, X444M, X444N, X444R, X444T, X450C, X450D, X450E, X450H, X450I, X450L, X450M, X450P, X450Q, X450R, X450T, X452A, X452C, X452E, X452F, X452I, X452K, X452M, X452N, X452R, X452T, X454A, X454E, X454K, X454L, X454M, X454P, X454S, X454T, X466E, X466W, X469F, X469L, X469Y, X473H, X473Q, X473R, X475A, X475K, X475N, X475E, X475L, X476G, X476E, X479A, X479I, X479K, X479M, X483F, X483I, X483L, X483Q, X483R, X485K 및 X485R로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택되고, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치에서의 아미노산 잔기 (즉, X)는 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에서의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응한다.
바람직하게는, 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 181, 186, 195, 206, 441 및 473으로 이루어진 군으로부터 선택된 위치, 바람직하게는 위치 186, 195 또는 206, 보다 바람직하게는 위치 206 또는 195에서의 1개 이상, 바람직하게는 최대 1개, 최대 2개, 최대 3개, 최대 4개, 최대 5개 또는 모든 아미노산의 추가의 변경, 바람직하게는 추가의 치환을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따르고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 X181D, X181E, X181F, X181H, X181I, X181N, X181Q, X181S, X181T, X181V, X181W, X181Y, X186A, X186C, X186D, X186E, X186F, X186H, X186I, X186K, X186L, X186M, X186N, X186Q, X186R, X186S, X186V, X186W, X186Y, X190H, X195F, X195H, X195K, X195L, X195W, X195Y, X206C, X206H, X206L, X206M, X206Y, X441C, X441D, X441K, X441L, X441M, X441N, X441S, X473H, X473Q 및 X473R (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 추가의 치환을 추가로 포함한다.
가장 바람직하게는, 추가의 변경으로서, 바람직하게는 상기 기재된 1개 이상의 추가의 변경과 조합하여, 본원에 기재된 바와 같은 1개 이상의 아미노산 변경, 바람직하게는 치환을 갖고 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 3의 넘버링에 상응하는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산의 결실, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 2개 이상의 아미노산의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에 상응하는 아미노산의 결실을 포함한다. 바람직하게는, 본원에 기재된 바와 같은 1개 이상의 아미노산 변경, 바람직하게는 치환을 갖고 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 위치 183 및 184에 상응하는 1개 이상의 아미노산의 결실, 바람직하게는 위치 183 및 184 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)에 상응하는 2개 모두의 아미노산의 결실을 포함한다. 바람직하게는, 본원에 기재된 바와 같은 1개 이상의 아미노산 변경, 바람직하게는 치환을 갖고 알파-아밀라제 활성을 갖는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체는 R181, G182, D183 및 G184, 바람직하게는 D183* 및 G184*로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상, 바람직하게는 2개 이상, 가장 바람직하게는 2개의 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
바람직하게는, 본 발명은 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서
(i) 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 45, 47, 48, 51, 54, 59, 60, 63, 70, 71, 72, 73, 75, 76, 81, 82, 83, 86, 87, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 103, 106, 108, 109, 113, 114, 115, 116, 117, 119, 120, 123, 125, 126, 128, 129, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 139, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 149, 150, 151, 154, 155, 156, 158, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 169, 170, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 180, 182, 184, 185, 187, 188, 189, 191, 192, 193, 203, 208, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 218, 219, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 230, 231, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 240, 242, 243, 245, 249, 250, 251, 252, 253, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 279, 280, 281, 282, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 304, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 326, 327, 333, 334, 336, 337, 338, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 348, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 370, 372, 375, 376, 378, 379, 381, 382, 383, 384, 385, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 403, 405, 406, 407, 408, 410, 413, 414, 415, 416, 418, 421, 424, 426, 427, 429, 431, 432, 434, 436, 438, 439, 440, 442, 443, 445, 446, 447, 448, 449, 451, 453, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 465, 467, 468, 470, 471, 474, 478, 480 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서의 아미노산 치환을 포함하고,
(ii) 상기 변이체는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 60%, 바람직하게는 적어도 80%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖고,
(iii) 상기 변이체는 R181, G182, D183 및 G184, 바람직하게는 D183* 및 G184*로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상, 바람직하게는 2개 이상, 가장 바람직하게는 2개의 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따르고,
(iv) 임의로 상기 변이체는 본원에 기재된 바와 같은 1개 이상의 추가의 아미노산 치환을 포함하고,
(v) 상기 변이체는 본원에 기재된 바와 같은 개선된 특성을 포함하고,
(vi) 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 모 아밀라제는 서열식별번호: 1이다.
대안적 실시양태에서, 본 발명은 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서
(i) 상기 변이체는 모 서열과 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따른 X9D, X9F, X9K, X9N, X9P, X9Q, X9S, X9T, X9Y, X179G, X181D, X181F, X181H, X181I, X181N, X181Q, X181S, X181T, X181V, X181W, X181Y, X186A, X186C, X186D, X186F, X186H, X186I, X186K, X186L, X186M, X186R, X186V, X186W, X186Y, X190H, X195H, X195K, X195L, X195W, X195Y, X206C, X206H, X206M, X206Y, X244A, X244C, X244D, X244E, X244F, X244G, X244H, X244M, X244N, X244V, X402T X419C, X420D, X420E, X420G, X420H, X420K, X420L, X420Q, X422C, X422N, X422H, X423F, X423M, X423Q, X423S, X428C, X428D, X428E, X428G, X428I, X428K, X428L, X428M, X428N, X428R, X428S, X428V, X428W, X428Y, X430A, X430C, X430D, X430E, X430F, X430G, X430L, X430P, X430Q, X430S, X430T, X430V, X435K, X435P, X435S, X435A, X435D, X437L, X437T, X437W, X441C, X441K, X441L, X441M, X441S, X444H, X444M, X444N, X444R, X444T, X450C, X450D, X450E, X450H, X450L, X450M, X450P, X450Q, X450R, X450T, X452A, X452C, X452E, X452F, X452I, X452K, X452M, X452N, X452T, X454A, X454E, X454K, X454L, X454P, X454S, X454T, X466E, X466W, X469F, X469L, X469Y, X475A, X475K, X475E, X475L, X479I, X479K, X479M, X483F, X483L, X483Q 및 X483R로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환, 바람직하게는 X181D, X181F, X181H, X181I, X181N, X181Q, X181S, X181T, X181V, X181W, X181Y, X186A, X186C, X186D, X186F, X186H, X186I, X186K, X186L, X186M, X186R, X186V, X186W, X186Y, X195H, X195K, X195L, X195W, X195Y, X206C, X206H, X206M, X206Y, X441C, X441K, X441L, X441M 및 X441S로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 본 발명의 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3에 따른 아밀라제, 또는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3에 대해 적어도 60%의 서열 동일성을 갖는 임의의 알파-아밀라제이며, 가장 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1에 따른 아밀라제이고,
(ii) 상기 변이체는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 60%, 바람직하게는 적어도 80%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖고,
(iii) 상기 변이체는 R181, G182, D183 및 G184, 바람직하게는 D183* 및 G184*로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상, 바람직하게는 2개 이상, 가장 바람직하게는 2개의 아미노산의 결실을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따르고,
(iv) 상기 변이체는 본원에 기재된 바와 같은 개선된 특성을 포함하고,
(v) 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는다.
본 발명은 또한 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 13, 17, 22, 23, 27, 28, 32, 36, 42, 51, 70, 75, 83, 89, 92, 95, 96, 154, 192, 215, 222, 226, 233, 245, 277, 282, 285, 288, 297, 312, 338, 341, 343, 353, 355, 356, 376, 379, 381, 389, 429, 432, 442, 451, 459 및 463으로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제와 비교하여 아미노산 변경, 바람직하게는 삽입, 결실, 치환 또는 그의 조합, 가장 바람직하게는 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함한다. 본 발명은 또한 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 13, 17, 23, 27, 36, 42, 51, 89, 92, 192, 215, 222, 233, 245, 277, 282, 288, 297, 312, 338, 341, 343, 353, 355, 356, 376, 379, 381, 389, 429, 432, 442 및 451로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제과 비교하여 아미노산 변경, 바람직하게는 삽입, 결실, 치환 또는 그의 조합, 가장 바람직하게는 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 추가로 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
본 발명은 또한 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 13, 18, 146, 163, 170, 188, 224, 238, 242, 245, 353, 385, 388, 405, 432, 442, 474 및 478로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제과 비교하여 아미노산 변경, 바람직하게는 삽입, 결실, 치환 또는 그의 조합, 가장 바람직하게는 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 어느 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 3, 가장 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%의 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 추가로 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
본 발명은 또한 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 1, 2, 3, 5, 7, 8, 9, 11, 16, 18, 19, 25, 26, 29, 30, 31, 35, 37, 40, 41, 43, 44, 46, 48, 49, 50, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 71, 72, 73, 74, 77, 78, 79, 80, 81, 84, 85, 86, 87, 88, 90, 91, 93, 94, 97, 98, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 151, 152, 153, 155, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 216, 217, 218, 219, 220, 224, 225, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 235, 238, 239, 241, 242, 243, 244, 246, 247, 248, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 269, 270, 272, 273, 274, 275, 276, 278, 279, 280, 281, 283, 284, 286, 287, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 299, 300, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 310, 311, 313, 314, 315, 316, 317, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 328, 329, 330, 331, 332, 334, 335, 337, 339, 340, 342, 344, 345, 346, 347, 349, 350, 354, 357, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 368, 369, 371, 372, 373, 374, 375, 377, 380, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 390, 391, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 425, 427, 428, 430, 431, 433, 434, 435, 437, 438, 439, 441, 444, 445, 446, 447, 449, 450, 452, 454, 455, 457, 458, 460, 461, 462, 464, 465, 466, 467, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 481, 483, 484 및 485로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제과 비교하여 아미노산 변경, 바람직하게는 삽입, 결실, 치환 또는 그의 조합, 가장 바람직하게는 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 181, 186, 195, 206, 441 및 473으로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서, 바람직하게는 위치 186, 195 또는 206에서, 보다 바람직하게는 위치 206 및/또는 195에서 1개 이상, 바람직하게는 최대 1개, 최대 2개, 최대 3개, 최대 4개, 최대 5개, 또는 모든 아미노산의 추가의 변경, 바람직하게는 추가의 치환을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따르고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 X181D, X181E, X181F, X181H, X181I, X181N, X181Q, X181S, X181T, X181V, X181W, X181Y, X186A, X186C, X186D, X186E, X186F, X186H, X186I, X186K, X186L, X186M, X186N, X186Q, X186R, X186S, X186V, X186W, X186Y, X190H, X195F, X195H, X195K, X195L, X195W, X195Y, X206C, X206H, X206L, X206M, X206Y, X441C, X441D, X441K, X441L, X441M, X441N, X441S, X473H, X473Q 및 X473R (서열식별번호:3의 넘버링에 따름)로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 추가의 치환을 추가로 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 추가로 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
본 발명은 또한 알파-아밀라제 활성을 갖는 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체에 관한 것이며, 여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 25, 116, 176, 181, 183, 186, 206, 225, 251, 320, 400, 402, 405, 408, 409, 410, 418, 419, 420, 422, 423, 437, 441, 444, 446, 449, 452, 458, 460, 466, 471, 473, 475, 484 및 485로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제과 비교하여 아미노산 변경, 바람직하게는 삽입, 결실, 치환 또는 그의 조합, 가장 바람직하게는 치환을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일성, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 181, 186, 195, 206, 441 및 473으로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서, 바람직하게는 위치 186, 195 또는 206에서, 보다 바람직하게는 위치 206 및/또는 195에서 1개 이상, 바람직하게는 최대 1개, 최대 2개, 최대 3개, 최대 4개, 최대 5개 또는 모든 아미노산의 추가의 변경, 바람직하게는 추가의 치환을 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따르고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 X181D, X181E, X181F, X181H, X181I, X181N, X181Q, X181S, X181T, X181V, X181W, X181Y, X186A, X186C, X186D, X186E, X186F, X186H, X186I, X186K, X186L, X186M, X186N, X186Q, X186R, X186S, X186V, X186W, X186Y, X190H, X195F, X195H, X195K, X195L, X195W, X195Y, X206C, X206H, X206L, X206M, X206Y, X441C, X441D, X441K, X441L, X441M, X441N, X441S, X473H, X473Q 및 X473R (서열식별번호:3의 넘버링에 따름)로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 추가의 치환을 추가로 포함하고, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184, 바람직하게는 183 및 184, 바람직하게는 D183* 및 G184*에 상응하는 아미노산의 결실을 추가로 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른다.
핵산 구축물
본 발명은 또한 본 발명의 알파-아밀라제 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 바람직하게는, 폴리뉴클레오티드는 특정 숙주 세포, 바람직하게는 바실루스 세포에서의 발현을 개선시키기 위한 코돈-최적화된 폴리뉴클레오티드이다.
추가의 실시양태에서, 본 발명은 또한 높은 엄격도 조건, 바람직하게는 매우 높은 엄격도 조건 하에, (i) 본원에 기재된 성숙 폴리펩티드 코딩 서열 또는 (ii) (i)의 전장 상보체와 혼성화하는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 폴리펩티드에 관한 것이다.
따라서, 본 발명은 또한 하기를 포함하는 핵산, 바람직하게는 단리된, 합성 및/또는 재조합 핵산을 지칭한다:
(a) 서열식별번호: 2에 대해 적어도 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%이지만 100% 미만의 동일성을 가지며, 여기서 핵산 서열은 아밀라제 활성을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 것인 핵산 서열;
(b) 서열식별번호: 1에 대해 적어도 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 동일성을 갖는 폴리펩티드를 코딩하며, 여기서 폴리펩티드는 아밀라제 활성을 갖거나 또는 본원에 기재된 아밀라제 활성을 갖는 임의의 알파-아밀라제 변이체를 코딩하는 것인 핵산 서열;
(c) 높은 엄격도 조건 하에, 바람직하게는 매우 높은 엄격도 조건 하에 하기의 상보체와 혼성화하는 폴리뉴클레오티드:
(i) 서열식별번호: 1의 코딩 서열 또는 본원에 기재된 아밀라제 활성을 갖는 임의의 알파-아밀라제 변이체의 코딩 서열; 또는
(ii) 서열식별번호: 2에 제시된 폴리뉴클레오티드;
(d) 아밀라제 활성을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 (a), (b) 또는 (c)의 단편; 또는
(e) (a) 내지 (d) 중 임의의 것에 완전히 상보적인 핵산 서열;
(f) 단지 유전자 코드의 축중성에 의해 (a) 내지 (e)에 기재된 핵산 서열 중 임의의 것과 상이한 폴리뉴클레오티드.
본 발명은 또한 본원에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 구축물, 바람직하게는 발현 카세트에 관한 것이다.
전형적으로, 발현 카세트는 3개의 요소: 프로모터 서열, 오픈 리딩 프레임, 및 진핵생물에서 통상적으로 폴리아데닐화 부위를 함유하는 3' 비번역 영역을 포함한다. 추가의 조절 요소는 전사 인핸서 및 번역 인핸서를 포함할 수 있다. 인트론 서열은 또한 5' 비번역 영역 (UTR)에 또는 코딩 서열에 부가되어 시토졸에 축적되는 성숙한 메시지의 양을 증가시킬 수 있다. 발현 카세트는 벡터의 일부일 수 있거나, 또는 숙주 세포의 게놈 내로 통합되어 그의 숙주 세포의 게놈과 함께 복제될 수 있다. 발현 카세트는 대체로 발현을 증가 또는 감소시킬 수 있다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 핵산 구축물을 포함하는 발현 벡터를 지칭한다. 발현 벡터는 저카피수 벡터 또는 고카피수 벡터일 수 있다.
본원에 사용된 벡터는 숙주 세포 또는 숙주 세포 소기관 내로의 형질전환 시 외래 폴리뉴클레오티드의 전사 및 번역을 위한 절편을 제공할 수 있다. 이러한 추가의 절편은 조절 뉴클레오티드 서열, 특정 세포 유형에서의 그의 유지 및/또는 복제에 요구되는 1개 이상의 복제 기점, 1개 이상의 선택 마커, 폴리아데닐화 신호, 외래 코딩 서열의 삽입에 적합한 부위, 예컨대 다중 클로닝 부위 등을 포함할 수 있다. 한 예는 벡터가 박테리아 세포에서 에피솜 유전 요소 (예를 들어 플라스미드 또는 코스미드 분자)로서 유지되어야 하는 경우이다. 적합한 복제 기점의 비제한적 예는 f1-ori 및 colE1을 포함한다.
벡터는 예를 들어 박테리아 숙주 세포에서 플라스미드로서 숙주 세포의 게놈 내로 통합되지 않으면서 복제될 수 있거나, 또는 그의 DNA의 일부 또는 전부를 숙주 세포의 게놈 내로 통합시켜 그의 DNA의 복제 및 발현을 유도할 수 있다.
알파-아밀라제 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 표준 재조합 DNA 기술에 의해 벡터 내로 도입될 수 있다. 벡터 내로 도입되면, 코딩 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드는 숙주 세포 또는 숙주 세포 소기관 내로 도입 (형질전환, 형질도입, 형질감염 등)되기에 적합할 수 있다. 숙주 세포 또는 숙주 세포 소기관에서의 폴리뉴클레오티드 서열의 발현에 적합한 클로닝 벡터가 선택될 수 있다.
숙주 세포
본 발명은 또한 본원에 기재된 바와 같은 알파-아밀라제 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 본원에 기재된 바와 같은 핵산 구축물, 또는 본원에 기재된 바와 같은 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 본 발명의 한 실시양태에서, 벡터는 숙주 세포의 형질전환을 위해 사용된다.
본원에 기재된 바와 같은 알파-아밀라제 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 숙주 세포 내로 일시적으로 또는 안정하게 도입될 수 있고, 예를 들어 플라스미드로서 비-통합되어 유지될 수 있다. 대체로 안정한 형질전환은 외래 코딩 서열을 포함하는 핵산의 염색체 내로의 또는 에피솜 (핵 DNA의 별개의 조각)으로서의 통합에 의한 것이다. 통상적으로 일시적 형질전환은 염색체 내로 또는 에피솜으로서 통합되지 않은 외래 핵산 서열을 포함하는 핵산으로 인한 것이다. 대안적으로, 본원에 기재된 바와 같은 알파-아밀라제 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 숙주 게놈에 통합될 수 있다.
숙주 세포 내로의 핵산의 도입은, 예를 들어 비제한적으로, 원형질체 형질전환에 의해 (예를 들어, 문헌 [Chang and Cohen, 1979, Molecular General Genetics 168: 111-115] 참조), 적격 세포를 사용함으로써 (예를 들어, 문헌 [Young and Spizizen, 1961, Journal of Bacteriology 81: 823-829, 또는 Dubnau and Davidoff-Abelson, 1971, Journal of Molecular Biology 56: 209-221] 참조), 전기천공에 의해 (예를 들어, 문헌 [Shigekawa and Dower, 1988, Biotechniques 6: 742-751] 참조), 또는 접합에 의해 (예를 들어, 문헌 [Koehler and Thorne, 1987, Journal of Bacteriology 169: 5271-5278] 참조) 수행될 수 있다. 다양한 유형의 숙주 세포에 대한 특이적 형질전환 프로토콜이 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어, 이. 콜라이 원형질체 형질전환에 대해서는 문헌 [Hanahan, 1983, J. Mol. Biol. 166: 557-580] 참조).
다양한 숙주 세포가 본원에 기재된 핵산 구축물을 발현시키는 데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 유전자 구축물을 포함하는 숙주 세포는 폴리뉴클레오티드를 이러한 숙주 세포 내로 도입하기 위한 본원에 기재된 방법 중 하나에 의해 수득될 수 있다. 본 발명의 숙주 세포는 알파-아밀라제 변이체를 자연적으로 발현하지 않는다. 따라서, 숙주 세포는 재조합 숙주 세포이고; 본원에 기재된 핵산 구축물은 숙주 세포에 대해 이종이다.
한 실시양태에서, 숙주 세포는 원핵생물 또는 진핵생물이다. 또 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 박테리아, 고세균, 진균 세포, 효모 세포 또는 진핵 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 비-인간 숙주 세포이다.
한 실시양태에서, 숙주 세포는 박테리아 세포이다. 박테리아 숙주 세포는 임의의 그람-양성 박테리아 또는 그람-음성 박테리아일 수 있다. 그람-양성 박테리아는 바실루스(Bacillus), 브레비박테리움(Brevibacterium), 코리네박테리움(Corynebacterium), 스트렙토코쿠스(Streptococcus), 스트렙토미세스(Streptomyces), 스타필로코쿠스(Staphylococcus), 엔테로코쿠스(Enterococcus), 락토바실루스(Lactobacillus), 락토코쿠스(Lactococcus), 클로스트리디움(Clostridium), 게오바실루스(Geobacillus) 및 오세아노바실루스(Oceanobacillus)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 그람-음성 박테리아는 에스케리키아(Escherichia), 슈도모나스(Pseudomonas), 살모넬라(Salmonella), 캄필로박터(Campylobacter), 헬리코박터(Helicobacter), 아세토박터(Acetobacter), 플라보박테리움(Flavobacterium), 푸소박테리움(Fusobacterium), 글루코노박터(Gluconobacter)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 구체적 실시양태에서, 박테리아 숙주 세포는 에케리키아 콜라이(Echerichia coli) 세포이다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 박테리아 세포이다. 구체적 실시양태에서, 숙주 세포는 에스케리키아(Escherichia) 또는 바실루스(Bacillus) 속의 것이다.
본 발명의 방법에서, 박테리아 숙주 세포는 임의의 바실루스 세포일 수 있다. 본 발명의 실시에 유용한 바실루스 세포는 바실루스 알칼로필루스(Bacillus alkalophilus), 바실루스 아밀로리퀘파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens), 바실루스 브레비스(Bacillus brevis), 바실루스 시르쿨란스(Bacillus circulans), 바실루스 클라우시이(Bacillus clausii), 바실루스 코아굴란스(Bacillus coagulans), 바실루스 피르무스(Bacillus firmus), 바실루스 라우투스(Bacillus lautus), 바실루스 렌투스(Bacillus lentus), 바실루스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis), 바실루스 메가테리움(Bacillus megaterium), 바실루스 푸밀루스(Bacillus pumilus), 바실루스 스테아로써모필루스(Bacillus stearothermophilus), 바실루스 메틸로트로피쿠스(Bacillus methylotrophicus), 바실루스 세레우스(Bacillus cereus), 바실루스 파라리케니포르미스(Bacillus paralicheniformis), 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 및 바실루스 투린기엔시스(Bacillus thuringiensis) 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 한 실시양태에서, 박테리아 숙주 세포는 바실루스 아밀로리퀘파시엔스, 바실루스 푸밀루스, 바실루스 렌투스, 바실루스 리케니포르미스, 바실루스 스테아로써모필루스 또는 바실루스 서브틸리스 세포이다. 바람직한 실시양태에서, 박테리아 숙주 세포는 바실루스 리케니포르미스 세포, 바실루스 푸밀루스, 또는 바실루스 서브틸리스 세포이다. 바람직하게는, 박테리아 숙주 세포는 바실루스 리케니포르미스 세포이다.
본 발명의 방법에서, 박테리아 숙주 세포는 락토바실루스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실루스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실루스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실루스 불가리쿠스크(Lactobacillus bulgaricusk), 락토바실루스 레우테리(Lactobacillus reuteri), 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 코리네박테리움 글루타미쿰(Corynebacterium glutamicum), 코리네박테리움 아세토글루타미쿰(Corynebacterium acetoglutamicum), 코리네박테리움 아세토아시도필룸(Corynebacterium acetoacidophilum), 코리네박테리움 칼루나에(Corynebacterium callunae), 코리네박테리움 암모니아게네스(Corynebacterium ammoniagenes), 코리네박테리움 써모아미노게네스(Corynebacterium thermoaminogenes), 코리네박테리움 멜라세콜라(Corynebacterium melassecola), 코리네박테리움 에피지엔스(Corynebacterium effiziens), 코리네박테리움 에피시엔스(Corynebacterium efficiens), 코리네박테리움 데세르티(Corynebacterium deserti), 브레비박테리움 플라붐(Brevibacterium flavum), 브레비박테리움 락토페르멘툼(Brevibacterium lactofermentum), 브레비박테리움 디바레카툼(Brevibacterium divarecatum), 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida), 슈도모나스 시린가에(Pseudomonas syringae), 스트렙토미세스 코엘리콜로르(Streptomyces coelicolor), 스트렙토미세스 리비단스(Streptomyces lividans), 스트렙토미세스 알부스(Streptomyces albus), 스트렙토미세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis), 글루코노박터 옥시단스(Gluconobacter oxydans), 글루코노박터 모르비페르(Gluconobacter morbifer), 글루코노박터 타일란디쿠스(Gluconobacter thailandicus), 아세토박터 아세티(Acetobacter aceti), 클로스트리디움 아세토부틸리쿰(Clostridium acetobutylicum), 클로스트리디움 사카로부틸리쿰(Clostridium saccharobutylicum), 클로스트리디움 베이제린크키이(Clostridium beijerinckii), 스트렙토코쿠스 에퀴시밀리스(Streptococcus equisimilis), 스트렙토코쿠스 피오게네스(Streptococcus pyogenes), 스트렙토코쿠스 우베리스(Streptococcus uberis), 스트렙토코쿠스 에퀴 아종(Streptococcus equi subsp.), 주에피데미쿠스(Zooepidemicus) 또는 바스피아 숙시니시프로두센스(Basfia succiniciproducens)일 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 박테리아 숙주 세포는 관심 폴리펩티드의 생산, 회수 또는 적용에 유해할 수 있는 다른 유전자의 변형, 예를 들어 결실 또는 파괴를 추가로 함유할 수 있다. 한 실시양태에서, 박테리아 숙주 세포는 프로테아제-결핍 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 박테리아 숙주 세포, 예를 들어 바실루스 세포는 aprE, mpr, vpr, bpr, 및/또는 epr을 포함하나 이에 제한되지는 않는 세포외 프로테아제 유전자의 파괴 또는 결실을 포함한다. 한 실시양태에서, 박테리아 숙주 세포는 포자를 생산하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 박테리아 숙주 세포, 예를 들어 바실루스 세포는 spoIIAC, sigE 및/또는 sigG의 파괴 또는 결실을 포함한다. 한 실시양태에서, 박테리아 숙주 세포, 예를 들어 바실루스 세포는 서팩틴의 생합성에 관여하는 유전자 중 하나, 예를 들어 srfA, srfB, srfC 및/또는 srfD의 파괴 또는 결실을 포함한다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,958,728을 참조한다. 또 다른 실시양태에서, 박테리아 숙주 세포는 폴리글루탐산의 생합성에 수반되는 유전자 중 하나의 파괴 또는 결실을 포함한다. 관심 폴리펩티드의 생산, 회수 또는 적용에 유해한 amyE 유전자를 포함하나 이에 제한되지는 않는 다른 유전자가 또한 파괴 또는 결실될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 박테리아 숙주 세포는 DH5알파 (인비트로젠(Invitrogen)), DH10B (인비트로젠), 옴니맥스(Omnimax) (인비트로젠), INV110 (인비트로젠), TOP10 (인비트로젠), HB101 (프로메가(Promega)), SURE (스트라타진(Stratagene)), XL1-블루 (스트라타진), TG1 (루시젠), 및 JM109 (NEB)를 포함하나 이에 제한되지는 않는 표준 이. 콜라이 클로닝 숙주 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 박테리아 숙주 세포는 결손 hsd(RI)R-M- 유전자좌, 예컨대 비. 서브틸리스 IG-20 (BGSC 1A436) 또는 결손 hsdRM1 돌연변이, 예컨대 비. 서브틸리스1012 WT (모비텍(Mobitec))를 보유하는 비. 서브틸리스를 포함하나 이에 제한되지는 않는 표준 바실루스 서브틸리스 클로닝 숙주 세포이다.
대안적 추가의 숙주 세포는 아스페르길루스 니거(Aspergillus niger), 아스페르길루스 오리자에(Aspergillus oryzae), 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha), 써모미세스 라누기노수스(Thermomyces lanuginosus), 푸사리움 옥시스포룸(fusarium oxysporum), 푸사리움 헤테로스포룸(Fusarium heterosporum), 피키아 파스토리스(Pichia pastoris) (또한 코마가타엘라 파피이(Komagataella phaffii)로도 공지됨), 미셀리오프토라 써모필레(Myceliopthora thermophile) (C1), 써모텔로미세스 써모필라(Themothelomyces thermophila), 쉬조사카로미세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe), 트리코더마(Trichoderma), 바람직하게는 트리코더마 레에세이(Trichoderma reesei) 및 사카로미세스(Saccharomyces), 바람직하게는 사카로미세스 세레비지아에(Saccharomyces cerevisiae), 또는 리조뮤코르(Rhizomucor)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
제조 방법
본 발명의 또 다른 실시양태는 하기 단계를 포함하는, 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체를 수득하는 방법이며:
a) 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 45, 47, 48, 51, 54, 59, 60, 63, 70, 71, 72, 73, 75, 76, 81, 82, 83, 86, 87, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 103, 106, 108, 109, 113, 114, 115, 116, 117, 119, 120, 123, 125, 126, 128, 129, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 139, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 149, 150, 151, 154, 155, 156, 158, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 169, 170, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 180, 182, 184, 185, 187, 188, 189, 191, 192, 193, 203, 208, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 218, 219, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 230, 231, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 240, 242, 243, 245, 249, 250, 251, 252, 253, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 279, 280, 281, 282, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 304, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 326, 327, 333, 334, 336, 337, 338, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 348, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 370, 372, 375, 376, 378, 379, 381, 382, 383, 384, 385, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 403, 405, 406, 407, 408, 410, 413, 414, 415, 416, 418, 421, 424, 426, 427, 429, 431, 432, 434, 436, 438, 439, 440, 442, 443, 445, 446, 447, 448, 449, 451, 453, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 465, 467, 468, 470, 471, 474, 478, 480 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 모 알파-아밀라제, 바람직하게는 서열식별번호: 1 내로 아미노산 변경, 바람직하게는 삽입, 결실, 치환 또는 그의 조합, 바람직하게는 치환을 도입하는 단계,
b) 임의로, 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 모 알파-아밀라제 내의 2개 이상의 위치에서 상기 위치 R181, G182, D183 및 G184에 결실을 도입하는 단계;
상기 방법은 이로써 상기 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체를 제공하고,
여기서 상기 변이체는 서열식별번호: 1의 폴리펩티드에 대해 아미노산 서열에 대해 적어도 60%의 서열 동일성을 갖고, 상기 알파-아밀라제 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체는 상기 모체에 비해 개선된 특성을 갖는다.
아미노산 변경, 예를 들어 치환 또는 결실을 단백질 서열 내로 도입하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 변이체는 관련 기술분야에 공지된 임의의 돌연변이유발 절차, 예컨대 부위-지정 돌연변이유발, 합성 유전자 구축, 반합성 유전자 구축, 무작위 돌연변이유발, 셔플링 등을 사용하여 제조될 수 있다. 부위-지정 돌연변이유발은 1개 이상의 (여러) 돌연변이가 모체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 내의 1개 이상의 규정된 부위에서 생성되는 기술이다. 부위-지정 돌연변이유발은 목적하는 돌연변이를 함유하는 올리고뉴클레오티드 프라이머의 사용을 수반하는 PCR에 의해 시험관내에서 달성될 수 있다. 부위-지정 돌연변이유발은 또한 모체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드 내의 부위에서의 제한 효소에 의한 절단 및 폴리뉴클레오티드에 돌연변이를 함유하는 올리고뉴클레오티드의 후속 라이게이션을 수반하는 카세트 돌연변이유발에 의해 시험관내에서 수행될 수 있다. 통상적으로, 플라스미드 및 올리고뉴클레오티드를 소화시키는 제한 효소는 동일하여, 플라스미드 및 삽입물의 점착성 말단이 서로 라이게이션되도록 한다. 예를 들어, 문헌 [Scherer and Davis, 1979, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76: 4949-4955; 및 Barton et al., 1990, Nucleic Acids Res. 18: 7349-4966]을 참조한다. 부위-지정 돌연변이유발은 또한 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 생체내에서 달성될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 2004/0171154; 문헌 [Storici et al., 2001, Nature Biotechnol. 19: 773-776; Kren et al., 1998, Nat. Med. 4: 285-290; 및 Calissano and Macino, 1996, Fungal Genet. Newslett. 43: 15-16]을 참조한다. 임의의 부위-지정 돌연변이유발 절차가 본 발명에서 사용될 수 있다. 변이체를 제조하는 데 사용될 수 있는 이용가능한 많은 상업용 키트가 존재한다.
합성 유전자 구축은 관심 폴리펩티드를 코딩하는 설계된 폴리뉴클레오티드 분자의 시험관내 합성을 수반한다. 유전자 합성은 다수의 기술, 예컨대 티안(Tian) 등에 의해 기재된 멀티플렉스 마이크로칩-기반 기술 (2004, Nature 432: 1050-1054) 및 올리고뉴클레오티드를 합성하고 광-프로그램가능한 마이크로유체 칩 상에 조립하는 유사한 기술을 이용하여 수행될 수 있다.
단일 또는 다중 아미노산 치환, 결실, 및/또는 삽입은 돌연변이유발, 재조합, 및/또는 셔플링에 이은 관련 스크리닝 절차, 예컨대 문헌 [Reidhaar-Olson and Sauer, 1988, Science 241: 53-57; Bowie and Sauer, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 2152-2156; WO 95/17413; 또는 WO 95/22625]에 개시된 것의 공지된 방법을 사용하여 이루어지고 시험될 수 있다. 사용될 수 있는 다른 방법은 오류-유발 PCR, 파지 디스플레이 (예를 들어, 문헌 [Lowman et al., 1991, Biochemistry 30: 10832-10837]; 미국 특허 번호 5,223,409; WO 92/06204) 및 영역-지정 돌연변이유발 (Derbyshire et al., 1986, Gene 46: 145; Ner et al., 1988, DNA 7:127)을 포함한다.
돌연변이유발/셔플링 방법은 숙주 세포에 의해 발현된 클로닝된, 돌연변이유발된 폴리펩티드의 활성을 검출하기 위해 고처리량, 자동화 스크리닝 방법과 조합될 수 있다 (Ness et al., 1999, Nature Biotechnology 17: 893-896). 활성 폴리펩티드를 코딩하는 돌연변이유발된 DNA 분자는 숙주 세포로부터 회수될 수 있고, 관련 기술분야의 표준 방법을 사용하여 신속하게 서열분석될 수 있다. 이들 방법은 폴리펩티드 내의 중요한 개별 아미노산 잔기의 신속한 결정을 가능하게 한다.
반합성 유전자 구축은 합성 유전자 구축, 및/또는 부위-지정 돌연변이유발, 및/또는 무작위 돌연변이유발, 및/또는 셔플링의 측면을 조합함으로써 달성된다. 반합성 구축은 PCR 기술과 조합하여 합성되는 폴리뉴클레오티드 단편을 이용하는 프로세스에 의해 전형화된다. 따라서, 유전자의 규정된 영역은 신생 합성될 수 있는 반면, 다른 영역은 부위-특이적 돌연변이유발 프라이머를 사용하여 증폭될 수 있고, 또 다른 영역은 오류-유발 PCR 또는 비-오류 유발 PCR 증폭에 적용될 수 있다. 이어서, 폴리뉴클레오티드 하위서열은 셔플링될 수 있다.
수득된 알파-아밀라제 변이체는 산업적 규모로 생산될 수 있고, 후속적으로 정제될 수 있다. 효소의 산업적 생산은 통상적으로 효소를 발현하는 숙주 세포를 배양함 (발효로도 불림)으로써 수행된다. 적합한 숙주 세포는 본원에 기재되어 있다. 본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체를 코딩하는 핵산 서열은 숙주 세포 내로 형질전환될 수 있고, 이는 후속적으로 숙주 세포가 알파-아밀라제 변이체를 생산하기에 적합한 조건 하에 배양된다. 바람직한 실시양태에서, 알파-아밀라제 변이체는 숙주 세포로부터 정제된다.
따라서, 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는, 알파-아밀라제 변이체를 생산하는 방법에 관한 것이다:
(a) 본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 구축물을 숙주 세포 내로 도입함으로써 본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 이종 핵산 구축물을 포함하는 숙주 세포를 제공하는 단계;
(b) 단계 (a)의 재조합 숙주 세포를 폴리뉴클레오티드의 발현에 전도성인 조건 하에 배양하는 단계; 및
(c) 임의로, 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 알파-아밀라제 변이체를 회수하는 단계.
숙주 세포의 배양은 통상적으로 재조합 세포가 성장하고 목적하는 단백질을 발현하도록 하는 적합한 영양 배지에서 수행된다. 발효 종료시, 발효 브로쓰는 수집되고, 추가로 가공될 수 있으며, 여기서 발효 브로쓰는 액체 분획 및 고체 분획을 포함한다. 관심 효소는 발효 브로쓰로부터 추가로 정제될 수 있다.
본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체는 (발효 브로쓰의 액체 분획 내로) 분비될 수 있거나, 또는 미생물 세포로부터 분비되지 않을 수 있다 (따라서 발효 브로쓰의 세포에 포함됨). 이에 따라, 알파-아밀라제 변이체는 발효 브로쓰의 액체 분획으로부터 또는 세포 용해물로부터 회수될 수 있다. 바람직하게는, 알파-아밀라제 변이체는 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체의 아미노산 서열의 말단에 첨가된 분비 신호 펩티드에 의해, 세포로부터 발효 브로쓰로 분비된다. 알파-아밀라제 변이체의 회수는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법에 의해 달성될 수 있다. 발효 브로쓰로부터의 단백질의 회수에 적합한 방법은 수집, 원심분리, 여과, 추출 및 침전을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 관심 생성물이 발효 브로쓰에서 침전 또는 결정화되거나 또는 적어도 부분적으로 발효 브로쓰의 미립자 물질에 결합하는 경우, 바이오매스로부터 관심 단백질을 방출시키거나 또는 관심 단백질 결정 및 침전물을 가용화시키기 위해 추가의 처리 단계가 필요할 수 있다. US 6,316,240 B1 및 WO 2008/110498 A1은 발효 동안 침전 및/또는 결정화되는 관심 단백질을 발효 브로쓰로부터 회수하는 방법이 기재되어 있다. 목적하는 단백질이 발효 브로쓰의 세포에 포함되는 경우, 세포로부터 관심 생성물의 방출이 필요할 수 있다. 세포로부터의 방출은 예를 들어, 비제한적으로, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 기술, 예를 들어 리소자임 처리, 초음파 처리, 프렌치 프레스 또는 그의 조합을 사용한 세포 용해에 의해 달성될 수 있다.
알파-아밀라제 변이체는 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 발효 브로쓰로부터 정제될 수 있다. 예를 들어, 알파-아밀라제 변이체는 원심분리, 여과, 추출, 분무-건조, 증발 또는 침전을 포함하나 이에 제한되지는 않는 통상적인 절차에 의해 발효 브로쓰로부터 단리될 수 있다. 이어서, 단리된 폴리펩티드는 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환, 친화도, 소수성, 크로마토포커싱, 및 크기 배제), 전기영동 절차 (예를 들어, 정제용 등전 포커싱 (IEF), 차등 용해도 (예를 들어, 황산암모늄 침전), 또는 추출 (예를 들어, 문헌 [Protein Purification, J.-C. Janson and Lars Ryden, editors, VCH Publishers, New York, 1989] 참조)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 관련 기술분야에 공지된 다양한 절차에 의해 추가로 정제될 수 있다. 이어서, 정제된 폴리펩티드는 한외여과 및 증발, 특히 박막 증발을 포함하나 이에 제한되지는 않는 관련 기술분야에 공지된 절차에 의해 농축될 수 있다.
조성물
본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체의 정제된 용액은 추가로 가공되어 알파-아밀라제 함유 조성물, 즉 "알파-아밀라제 변이체 제제"를 형성할 수 있다. 따라서, 본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체 및 적어도 1종의 추가의 성분을 포함하는 조성물이 또한 본원에 청구된다.
알파-아밀라제 변이체 제제는 고체 또는 액체일 수 있다. 단백질 제제는 관련 기술분야에 공지된 기술을 사용하여 수득될 수 있다. 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 고체 효소 제제는 압출 또는 과립화에 의해 수득될 수 있다. 적합한 압출 및 과립화 기술은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들어 WO 94/19444 A1 및 WO 97/43482 A1에 기재되어 있다. 액체 효소 제제는 모두 효소 제제의 총 중량에 대해 0.1 중량% 내지 40 중량%, 0.5 중량% 내지 30 중량%, 1 중량% 내지 25 중량%, 1 중량% 내지 10 중량%, 또는 바람직하게는 1 내지 6 중량% 범위의 효소의 양을 포함할 수 있다.
바람직하게는, 효소 제제는 효소 제제 kg 당 1-100 g의 활성 알파-아밀라제 변이체, 바람직하게는 5-80 g/kg, 5-60 g/kg 또는 10-40 g/kg의 양으로 본 발명의 알파-아밀라제 변이체를 포함한다.
한 실시양태에서, 효소 제제, 특히 액체 효소 제제는 용매, 염, pH 조절제, 보존제, 효소 안정화제 및 증점제로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추가의 화합물을 추가로 포함한다. 용매는 물 및/또는 유기 용매일 수 있다. 본 발명의 수성 효소 제제는 물을 모두 효소 제제의 총 중량에 대해 약 50 중량% 초과, 약 60 중량% 초과, 약 70 중량% 초과, 또는 약 80 중량% 초과의 양으로 포함할 수 있다. 유기 용매는 수혼화성 용매일 수 있다. 유기 용매는 글리세롤, 프로판디올, 폴리프로필렌 글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상일 수 있다.
한 실시양태에서, 아밀라제 제제는 적어도 1종의 보존제를 포함한다. 바람직하게는, 보존제는 보존의 목적을 위해 액체 조성물에 첨가되는 물질을 의미하며, 이는 보다 바람직하게는 제조 공정에서 형성된 액체 조성물에 포함된 보존 특색을 갖는 것으로 공지된 화합물이 용어 보존제로부터 배제된다는 것을 의미한다. 한 실시양태에서, 보존제는 산 형태 또는 그의 염으로서의 2-페녹시에탄올, 글루타르알데히드, 2-브로모-2-니트로프로판-1,3-디올 및 포름산, 및 4,4'-디클로로 2-히드록시디페닐에테르로 이루어진 군으로부터 선택된다. 통상적으로, 본 발명의 액체 조성물은 적어도 1종의 보존제를 10 ppm 미만의 양으로, 예컨대 액체 조성물의 총 중량에 대해 2 ppm 내지 5 중량% 범위의 양으로 포함한다. 바람직하게는, 아밀라제 제제는 보존제를 함유하지 않으며, 이는 보존제가 1 ppm 미만의 양으로 포함됨을 의미한다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 효소 제제는 적어도 1종의 효소 안정화제를 포함할 수 있다. 바람직한 효소 안정화제는 폴리올 (예를 들어, 1,3-프로판디올, 에틸렌 글리콜, 글리세롤, 및 1,2-프로판디올), 염 (예를 들어, CaCl2, MgCl2, NaCl), 포름산, 포르미에이트 (예를 들어, 소듐 포르미에이트), 아세테이트 및 그의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 프로테아제가 존재하는 경우, 바람직하게는 보레이트, 붕산, 보론산 (예를 들어, 4-FPBA와 같은 페닐보론산), 펩티드 알데히드, 펩티드 아세탈, 및 펩티드 알데히드 히드로술파이트 부가물, 바람직하게는 Z-VAL-H 또는 Z-GAY-H와 같은 펩티드 알데히드로부터 선택된 프로테아제 억제제가 첨가될 수 있다.
본 발명의 액체 효소 제제는 잔류 성분, 예컨대 발효 배지로부터 유래된 염, 생산 숙주 세포로부터 유래된 세포 파편, 발효 동안 생산 숙주 세포에 의해 생산된 대사물을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 잔류 성분은 액체 효소 제제에, 모두 수성 효소 제제의 총 중량에 대해 30 중량% 미만, 20 중량% 미만, 10 중량% 미만, 또는 5 중량% 미만의 양으로 포함될 수 있다.
제2 효소
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 알파-아밀라제 변이체를 포함하는 조성물은 알파-아밀라제 변이체와 상이한 1종 이상의 제2 효소를 추가로 포함한다. 바람직하게는, 제2 효소는 옥시도리덕타제, 트랜스퍼라제, 히드롤라제, 리아제, 이소머라제, 리가제, 아미노펩티다제, 아밀라제, 아스파라기나제, 카르보히드라제, 카르복시펩티다제, 카탈라제, 셀룰라제, 키티나제, 큐티나제, 시클로덱스트린 글리코실트랜스퍼라제, 데옥시리보뉴클레아제, 에스테라제, 알파-갈락토시다제, 베타갈락토시다제, 글루코아밀라제, 알파-글루코시다제, 베타-글루코시다제, 히알루론산 신타제, 인버타제, 락카제, 리파제, 만노시다제, 뮤타나제, 옥시다제, 펙틴용해 효소, 퍼옥시다제, 피타제, 폴리페놀옥시다제, 프로테아제, 리보뉴클레아제, 트랜스글루타미나제 및 크실라나제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특히, 제2 효소는 프로테아제, 제2 아밀라제, 리파제, 셀룰라제, 락카제, 만난아제, 펙티나제, 크실라나제, 뉴클레아제, 및 그의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, 제2 효소는 프로테아제와 상이한 아밀라제, 본 발명의 아밀라제, 셀룰라제, 만난아제 및 리파제로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는, 제2 효소는 프로테아제, 만난아제 및 리파제로 이루어진 군으로부터 선택되고, 특히 바람직하게는 프로테아제 또는 만난아제, 가장 바람직하게는 프로테아제, 바람직하게는 서브틸리신 프로테아제이다.
프로테아제
프로테아제는 "프로테아제 활성" 또는 "단백질분해 활성"을 발휘하는 활성 단백질이다. 단백질분해 활성은 규정된 시간 경과에 따른 프로테아제 또는 단백질분해 효소에 의한 단백질의 분해율과 관련된다.
바람직하게는, 알파-아밀라제 변이체와 상이한 제2 효소는 서열식별번호: 10-14 중 임의의 것의 전장 폴리펩티드 서열에 대해 적어도 40 내지 100% 동일성을 갖는 프로테아제이다. 한 실시양태에서, 프로테아제는 서열식별번호: 10, 11, 12, 13 또는 14, 바람직하게는 서열식별번호: 10에 제시된 전장 폴리펩티드 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
바람직하게는, 본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체와 조합되어 사용되는 프로테아제는 서열식별번호: 10에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 하기 위치 3, 4, 9, 15, 24, 27, 33, 36, 57, 68, 76, 77, 87, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 106, 118, 120, 123, 128, 129, 130, 131, 154, 160, 167, 170, 194, 199, 205, 206, 217, 218, 222, 224, 232, 235, 236, 245, 248, 252 및 274 (BPN' 넘버링에 따름) 중 1개 이상에서의 아미노산 치환을 추가로 포함하며, 이는 단백질분해 활성을 갖는다. 한 실시양태에서, 이러한 프로테아제는 위치 Asp32, His64 및 Ser221 (BPN' 넘버링에 따름)에서 돌연변이되지 않는다. 바람직하게는, 본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체와 조합되어 사용되는 프로테아제는 서열식별번호: 10에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 추가로 위치 101 (BPN' 넘버링에 따름)에서 아미노산 글루탐산 (E), 또는 아스파르트산 (D), 또는 아스파라긴 (N), 또는 글루타민 (Q), 또는 알라닌 (A), 또는 글리신 (G), 또는 세린 (S), 바람직하게는 글루탐산 (E)을 갖는 것을 특징으로 하고, 단백질분해 활성을 갖는다. 프로테아제가 서열식별번호: 10에 대해 적어도 80%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖고 위치 101 (BPN' 넘버링에 따름)에서 아미노산 글루탐산 (E)을 갖는 것을 특징으로 하며 단백질분해 활성을 갖는 것이 가장 바람직하다. 프로테아제는 위치 101에서의 아미노산 치환, 예컨대 R101E를 단독으로 또는 위치 3, 4, 9, 15, 24, 27, 33, 36, 57, 68, 76, 77, 87, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 102, 103, 104, 106, 118, 120, 123, 128, 129, 130, 131, 154, 160, 167, 170, 194, 199, 205, 206, 217, 218, 222, 224, 232, 235, 236, 245, 248, 252 및/또는 274 (BPN' 넘버링에 따름)에서의 1개 이상의 치환과 조합하여 포함할 수 있고, 단백질분해 활성을 갖는다. 한 실시양태에서, 상기 프로테아제는 1개 이상의 추가의 치환을 포함한다: (a) 위치 3에서의 트레오닌 (3T), (b) 위치 4에서의 이소류신 (4I), (c) 위치 63에서의 알라닌, 트레오닌 또는 아르기닌 (63A, 63T, 또는 63R), (d) 위치 156에서의 아스파르트산 또는 글루탐산 (156D 또는 156E), (e) 위치 194에서의 프롤린 (194P), (f) 위치 199에서의 메티오닌 (199M), (g) 위치 205에서의 이소류신 (205I), (h) 위치 217에서의 아스파르트산, 글루탐산 또는 글리신 (217D, 217E 또는 217G), (i) (a) 내지 (h)에 따른 2개 이상의 아미노산의 조합. 적합한 프로테아제는 서열식별번호: 10에 대해 적어도 80% 동일할 수 있고, 1개의 아미노산 ((a)-(h)에 따름) 또는 (i)에 따른 조합을 아미노산 101E, 101D, 101N, 101Q, 101A, 101G 또는 101S (BPN' 넘버링에 따름)와 함께 포함하는 것을 특징으로 하며, 단백질분해 활성을 갖는다. 한 실시양태에서, 프로테아제는 서열식별번호: 10에 대해 적어도 80% 동일하고, 돌연변이 R101E, 또는 S3T + V4I + V205I, 또는 S3T + V4I + R101E + V205I 또는 S3T + V4I + V199M + V205I + L217D (BPN' 넘버링에 따름)를 포함하는 것을 특징으로 하며, 단백질분해 활성을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 프로테아제는 서열식별번호: 10에 대해 적어도 80% 동일성을 갖고 S3T + V4I + S9R + A15T + V68A + D99S + R101S + A103S + I104V + N218D (BPN' 넘버링에 따름)를 포함하는 것을 추가로 특징으로 하는 아미노산 서열을 포함하고, 단백질분해 활성을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 프로테아제는 서열식별번호: 10에 대해 적어도 80% 동일하고 R101E, 및 S156D, L262E, Q137H, S3T, R45E,D,Q, P55N, T58W,Y,L, Q59D,M,N,T, G61D,R, S87E, G97S, A98D,E,R, S106A,W, N117E, H120V,D,K,N, S125M, P129D, E136Q, S144W, S161T, S163A,G, Y171L, A172S, N185Q, V199M, Y209W, M222Q, N238H, V244T, N261T,D 및 L262N,Q,D (BPN' 넘버링에 따름)로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환을 포함하는 것을 추가로 특징으로 하는 아미노산 서열을 가질 수 있고, 단백질분해 활성을 갖는다.
리파제
"리파제", "지질분해 효소", "지질 에스테라제"는 모두 EC 클래스 3.1.1의 효소 ("카르복실산 에스테르 히드롤라제")를 지칭한다. 리파제는 리파제 활성 (또는 지질분해 활성; 트리아실글리세롤 리파제, EC 3.1.1.3), 큐티나제 활성 (EC 3.1.1.74; 큐티나제 활성을 갖는 효소는 본원에서 큐티나제로 불릴 수 있음), 스테롤 에스테라제 활성 (EC 3.1.1.13) 및/또는 왁스-에스테르 히드롤라제 활성 (EC 3.1.1.50)을 갖는 활성 단백질을 의미한다. 리파제는 박테리아 또는 진균 기원의 것을 포함한다.
본 발명의 한 측면에서, 적합한 리파제 (성분 (b))는 하기로부터 선택된다: 휴미콜라(Humicola) (동의어 써모미세스(Thermomyces)), 예를 들어 EP 258068, EP 305216, WO 92/05249 및 WO 2009/109500에 기재된 바와 같은 에이치. 라누기노사(H. lanuginosa) (티. 라누기노수스(T. lanuginosus)) 또는 WO 96/13580에 기재된 바와 같은 에이치. 인솔렌스(H. insolens)로부터의 리파제; WO 92/05249에 기재된 바와 같은 리조뮤코르 미에헤이(Rhizomucor miehei)로부터 유래된 리파제; 예를 들어 피. 알칼리게네스(P. alcaligenes) 또는 피. 슈도알칼리게네스(P. pseudoalcaligenes) (EP 218272, WO 94/25578, WO 95/30744, WO 95/35381, WO 96/00292), 피. 세파시아(P. cepacia) (EP 331376), 피. 스투체리(P. stutzeri) (GB 1372034), 피. 플루오레센스(P. fluorescens), 슈도모나스 종 균주 SD705 (WO 95/06720 및 WO 96/27002), 피. 위스콘시넨시스(P. wisconsinensis) (WO96/12012), 슈도모나스 멘도시나(Pseudomonas mendocina) (WO 95/14783), 피. 글루마에(P. glumae) (WO 95/35381, WO 96/00292)로부터의 슈도모나스 균주 (이들 중 일부는 현재 부르크홀데리아(Burkholderia)로 개명됨)로부터의 리파제; 스트렙토미세스 그리세우스(Streptomyces griseus) (WO 2011/150157) 및 에스. 프리스티나에스피랄리스(S. pristinaespiralis) (WO 2012/137147)로부터의 리파제; GDSL-유형 스트렙토미세스 리파제 (WO 2010/065455); WO 2011/084412에 개시된 바와 같은 써모비피다 푸스카(Thermobifida fusca)로부터의 리파제; WO 2011/084417에 개시된 바와 같은 게오바실루스 스테아로써모필루스(Geobacillus stearothermophilus)로부터의 리파제; 예를 들어 WO 00/60063에 개시된 바와 같은 바실루스 리파제, 문헌 [Dartois et al. (1992), Biochemica et Biophysica Acta, 1131, 253-360] 또는 WO 2011/084599에 개시된 바와 같은 비. 서브틸리스(B. subtilis), 비. 스테아로써모필루스(B. stearothermophilus) (JP S64-074992) 또는 비. 푸밀루스(B. pumilus) (WO 91/16422)로부터의 리파제; WO 94/01541에 개시된 바와 같은 칸디다 안타르크티카(Candida antarctica)로부터의 리파제; 슈도모나스 멘도시나(Pseudomonas mendocina)로부터의 큐티나제 (US 5389536, WO 88/09367); 마그나포르테 그리세아(Magnaporthe grisea)로부터의 큐티나제 (WO 2010/107560); WO 90/09446, WO 00/34450 및 WO 01/92502에 개시된 바와 같은 푸사룸 솔라니 피시(Fusarum solani pisi)로부터의 큐티나제; 및 WO 00/34450 및 WO 01/92502에 개시된 바와 같은 휴미콜라 라누기노사(Humicola lanuginosa)로부터의 큐티나제.
이러한 적합한 리파제 변이체는 예를 들어 WO 95/22615, WO 97/04079, WO 97/07202, WO 00/60063, WO 2007/087508, EP 407225 및 EP 260105에 개시된 바와 같은 방법에 의해 개발되는 것이다.
상업적으로 입수가능한 리파제 효소는 상표명 리폴라제(Lipolase)™, 리펙스(Lipex)™, 리폴렉스(Lipolex)™ 및 리포클린(Lipoclean)™ (노보자임스 에이/에스(Novozymes A/S)), 루마패스트(Lumafast) (원래 제넨코어(Genencor)로부터의 것), 프레페렌즈 엘(Preferenz L) (듀폰(DuPont)), 및 리포맥스(Lipomax) (기스트-브로케이즈(Gist-Brocades)/ 현재 DSM) 하에 판매되는 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
한 실시양태에서, 리파제는 진균 트리아실글리세롤 리파제 (EC 클래스 3.1.1.3)로부터 선택된다. 진균 트리아실글리세롤 리파제는 써모미세스 라누기노수스의 리파제로부터 선택될 수 있다. 한 실시양태에서, 써모미세스 라누기노사 리파제는 US 5869438의 서열식별번호: 2의 아미노산 1-269에 따른 트리아실글리세롤 리파제 및 지질분해 활성을 갖는 그의 변이체로부터 선택된다.
써모미세스 라누기노사 리파제는 US 5869438의 서열식별번호: 2의 아미노산 1-269의 전장 폴리펩티드 서열과 비교 시 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 지질분해 활성을 갖는 변이체로부터 선택될 수 있다.
써모미세스 라누기노사 리파제는 US 5869438의 서열식별번호: 2의 아미노산 1-269의 기능적 도메인에 속하지 않는, 보존적 돌연변이만을 포함하는 지질분해 활성을 갖는 변이체로부터 선택될 수 있다. 지질분해 활성을 갖는 이러한 실시양태의 리파제 변이체는 US 5869438의 서열식별번호: 2의 아미노산 1-269의 전장 폴리펩티드 서열과 비교 시 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 유사할 수 있다.
써모미세스 라누기노사 리파제는 US 5869438의 서열식별번호: 2의 아미노산 1-269와 비교 시 하기 아미노산 치환을 포함하는 지질분해 활성을 갖는 변이체로부터 선택될 수 있다: T231R 및 N233R. 상기 리파제 변이체는 US 5869438의 서열식별번호: 2의 아미노산 1-269와 비교 시 하기 아미노산 교환 중 1개 이상을 추가로 포함할 수 있다: Q4V, V60S, A150G, L227G, P256K.
써모미세스 라누기노사 리파제는 US 5869438의 서열식별번호: 2의 아미노산 1-269의 폴리펩티드 서열 내에 아미노산 치환 T231R, N233R, Q4V, V60S, A150G, L227G, P256K를 포함하는 지질분해 활성을 갖는 변이체로부터 선택될 수 있고, US 5869438의 서열식별번호: 2의 아미노산 1-269의 전장 폴리펩티드 서열과 비교 시 적어도 95%, 적어도 96%, 또는 적어도 97% 유사하다.
써모미세스 라누기노사 리파제는 US 5869438의 서열식별번호: 2의 아미노산 1-269 내에 아미노산 치환 T231R 및 N233R을 포함하는 지질분해 활성을 갖는 변이체로부터 선택될 수 있고, US 5869438의 서열식별번호: 2의 아미노산 1-269의 전장 폴리펩티드 서열과 비교 시 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 유사하다.
써모미세스 라누기노사 리파제는 지질분해 활성을 갖는 US 5869438의 서열식별번호: 2의 아미노산 1-269의 변이체일 수 있으며, 여기서 US 5869438의 서열식별번호: 2의 아미노산 1-269의 변이체는 아미노산 치환 T231R 및 N233R을 함유하는 것을 특징으로 한다.
써모미세스 라누기노사 리파제는 WO 2015/01009의 서열식별번호: 1의 아미노산 1-269의 폴리펩티드 서열 내에 아미노산 치환 N11K/A18K/G23K/K24A/V77I/D130A/V154I/V187T/T189Q 또는 N11K/A18K/G23K/K24A/L75R/V77I/D130A/V154I/V187T/T189Q를 포함하는 지질분해 활성을 갖는 변이체로부터 선택될 수 있고, WO 2015/01009의 서열식별번호: 1의 아미노산 1-269의 전장 폴리펩티드 서열과 비교 시 적어도 95%, 적어도 96%, 또는 적어도 97% 유사하다.
아밀라제
본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체와 상이한 아밀라제는 알파- 또는 베타-아밀라제 (각각 EC 3.2.1.1 및 3.2.1.2)로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, 알파-아밀라제 변이체와 상이한 아밀라제는 또한 알파-아밀라제 (EC 3.2.1.1)이다.
본 발명에 따른 아밀라제는 폴리사카라이드 내의 글루코시드 연결의 (엔도)가수분해를 수반하는 "아밀분해 활성" 또는 "아밀라제 활성"을 갖는다. 알파-아밀라제 활성은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 알파-아밀라제 활성의 측정을 위한 검정에 의해 결정될 수 있다.
본 발명의 한 측면에서, 알파-아밀라제 변이체와 상이한 아밀라제는 하기로부터 선택될 수 있다:
· WO 95/10603에 기재된 바와 같은 서열식별번호: 2를 갖는 바실루스 리케니포르미스로부터의 아밀라제. 전분분해 활성을 갖는 하기 위치: 15, 23, 105, 106, 124, 128, 133, 154, 156, 178, 179, 181, 188, 190, 197, 201, 202, 207, 208, 209, 211, 243, 264, 304, 305, 391, 408 및 444에 1개 이상의 치환을 포함하는 적합한 변이체는 WO 95/10603에 기재되어 있다. 변이체는 WO 94/02597, WO 94/018314, WO 97/043424, 및 WO 99/019467의 서열식별번호: 4에 기재되어 있다.
· WO 02/10355에 개시된 바와 같은 서열식별번호: 6을 갖는 비. 스테아로써모필루스로부터의 아밀라제 또는 야생형 서열에 걸쳐 C-말단 절단을 임의로 갖는 아밀라제. 서열식별번호: 6의 적합한 변이체는 위치 181 및/또는 182에서의 결실 및/또는 위치 193에서의 치환을 포함하는 것을 포함한다.
· WO 99/19467에 개시된 바와 같은 서열식별번호: 6을 갖는 바실루스 종.707로부터의 아밀라제. 서열식별번호: 6의 바람직한 변이체는 하기 위치: R181, G182, H183, G184, N195, I206, E212, E216 및 K269 중 1개 이상에서 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 것이다.
· WO 96/23872에 기재된 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 7을 갖는 바실루스 할마팔루스(Bacillus halmapalus)로부터의 아밀라제 (본원에서 SP-722로도 기재됨). 바람직한 변이체는 WO 97/3296, WO 99/194671 및 WO 2013/001078에 기재되어 있다.
· WO 00/22103에 개시된 바와 같은 서열식별번호: 4를 갖는 바실루스 종 DSM 12649로부터의 아밀라제.
· WO 2009/061380에 개시된 바와 같은 서열식별번호: 2를 갖는 바실루스 균주 TS-23으로부터의 아밀라제. 사용될 수 있는 추가의 아밀라제는 WO 2009/061380의 서열식별번호: 2를 갖는 아밀라제 또는 서열식별번호: 2와 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체이다. 서열식별번호: 2의 바람직한 변이체는 하기 위치: Q87, Q98, S125, N128, T131, T165, K178, R180, S181, T182, G183, M201, F202, N225, S243, N272, N282, Y305, R309, D319, Q320, Q359, K444 및 G475 중 1개 이상에서 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 것이다. 서열식별번호: 2의 보다 바람직한 변이체는 하기 위치: Q87E,R, Q98R, S125A, N128C, T131I, T165I, K178L, T182G, M201L, F202Y, N225E,R, N272E,R, 243Q,A,E,D, Y305R, R309A, Q320R, Q359E, K444E 및 G475K 중 1개 이상에서 치환 및/또는 위치 R180 및/또는 S181에서 결실을 갖는 것이다. 서열식별번호: 2의 가장 바람직한 아밀라제 변이체는 N128C + K178L + T182G + Y305R + G475K, N128C + K178L + T182G + F202Y + Y305R + D319T + G475K, S125A + N128C + K178L + T182G + Y305R + G475K 또는 S125A + N128C + T131I + T165I + K178L + T182G + Y305R + G475K의 치환을 갖는 것이며, 여기서 변이체는 임의로 위치 243에서의 치환 및/또는 위치 180 및/또는 181에서의 결실을 추가로 포함한다.
· WO 2013/184577에 개시된 바와 같은 서열식별번호: 1을 갖는 시토파가(Cytophaga) 종으로부터의 아밀라제.
· WO 2010/104675에 개시된 바와 같은 서열식별번호: 1을 갖는 바실루스 메가테리움 DSM 90으로부터의 아밀라제.
· WO 00/60060에 기재된 바와 같은 서열식별번호: 2의 아미노산 1 내지 485를 포함하는 바실루스 종으로부터의 아밀라제.
· 바실루스 아밀로리퀘파시엔스로부터의 아밀라제 또는 그의 변이체, 바람직하게는 WO 2016/092009에 기재된 바와 같은 서열식별번호: 3에 따른 아밀라제로부터 선택된 것.
· WO 2006/002643에 기재된 바와 같은 서열식별번호: 12를 갖는 아밀라제 또는 상기 서열식별번호: 12 내에 치환 Y295F 및 M202LITV를 포함하는 아밀라제 변이체.
· WO 2011/098531에 기재된 바와 같은 서열식별번호: 6을 갖는 아밀라제, 또는 상기 서열식별번호: 6 내의 193 [G,A,S,T 또는 M], 195 [F,W,Y,L,I 또는 V], 197 [F,W,Y,L,I 또는 V], 198 [Q 또는 N], 200 [F,W,Y,L,I 또는 V], 203 [F,W,Y,L,I 또는 V], 206 [F,W,Y,N,L,I,V,H,Q,D 또는 E], 210 [F,W,Y,L,I 또는 V], 212 [F,W,Y,L,I 또는 V], 213 [G,A,S,T 또는 M] 및 243 [F,W,Y,L,I 또는 V]로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 위치에서 치환을 포함하는 아밀라제 변이체.
· WO 2013/001078에 기재된 바와 같은 서열식별번호: 1을 갖는 아밀라제, 또는 상기 서열식별번호: 1 내의 위치 G304, W140, W189, D134, E260, F262, W284, W347, W439, W469, G476 및 G477에 상응하는 2개 이상의 (여러) 위치에서 변경을 포함하는 아밀라제 변이체.
· WO 2013/001087에 기재된 바와 같은 서열식별번호: 2를 갖는 아밀라제, 또는 상기 서열식별번호: 2 내의 W140, W159, W167, Q169, W189, E194, N260, F262, W284, F289, G304, G305, R320, W347, W439, W469, G476 및 G477에 상응하는 위치 중 임의의 것에서 1개 또는 2개 이상의 변형을 임의로 포함하는, 상기 서열식별번호: 2 내의 위치 181+182, 또는 182+183, 또는 183+184의 결실을 포함하는 아밀라제 변이체.
· 예를 들어 WO 2006/066594에 기재된 바와 같은 상기 언급된 아밀라제로부터의 하이브리드 알파-아밀라제인 아밀라제; 다른 아밀라제 예는 WO 2006/066594의 서열식별번호: 6에 제시된 비. 아밀로리퀘파시엔스로부터 유래된 α-아밀라제의 잔기 1 내지 33 및 WO 2006/066594의 서열식별번호: 4에 제시된 비. 리케니포르미스 α-아밀라제의 잔기 36 내지 483을 포함하는 하이브리드 α-아밀라제 또는 그의 90% 서열 동일성을 갖는 변이체이다. 상기 하이브리드 α-아밀라제의 바람직한 변이체는 하기 위치: G48, T49, G107, H156, A181, N190, M197, I201, A209 및 Q264 중 1개 이상에서 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 것이다. WO 2006/066594의 서열식별번호: 6의 잔기 1 내지 33 및 WO 2006/066594의 서열식별번호: 4의 잔기 36 내지 483을 포함하는 하이브리드 α-아밀라제의 가장 바람직한 변이체는 치환 M197T, H156Y + A181T + N190F + A209V + Q264S 또는 G48 + T49 + G107 + H156 + A181 + N190 + I201 + A209 + Q264를 갖는 것이다.
· WO 2014/183920의 서열식별번호: 2에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 A 및 B 도메인 및 WO 2014/183920의 서열식별번호: 6에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 C 도메인을 갖는 WO 2014/183920에 따른 하이브리드 아밀라제, 여기서 하이브리드 아밀라제는 전분분해 활성을 갖고; 바람직하게는 하이브리드 알파-아밀라제는 WO 2014/183920의 서열식별번호: 23에 대해 적어도 95% 동일하고 전분분해 활성을 갖는다.
· WO 2014/183921에 개시된 바와 같은 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 20, 서열식별번호: 23, 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 32 및 서열식별번호: 3에 대해 적어도 75% 동일성을 갖는 A 및 B 도메인, 및 WO 2014/183921의 서열식별번호: 6에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 C 도메인을 갖는 WO 2014/183921에 따른 하이브리드 아밀라제, 여기서 하이브리드 아밀라제는 전분분해 활성을 갖고; 바람직하게는 하이브리드 알파-아밀라제는 WO 2014/183921에 개시된 바와 같은 서열식별번호: 30에 대해 적어도 95% 동일하고 전분분해 활성을 갖는다.
· 다른 아밀라제는 그의 서열식별번호: 1에 대해 적어도 75% 서열 동일성을 갖는 WO 2016/203064의 서열식별번호: 1의 변이체이다. 바람직한 변이체는 서열식별번호: 1의 위치 1, 54, 56, 72, 109, 113, 116, 134, 140, 159, 167, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473, 476 및 477에 상응하는 1개 이상의 위치에서 변형을 포함하는 변이체이며, 여기서 상기 α-아밀라제 변이체는 서열식별번호: 1에 대해 적어도 75%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖는다.
· 아밀라제의 다른 예는 WO 2001/066712의 서열식별번호: 12를 갖는 α-아밀라제 또는 서열식별번호: 12에 대해 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 변이체이다. 바람직한 아밀라제 변이체는 WO 2001/066712의 서열식별번호: 12의 하기 위치: R28, R118, N174; R181, G182, D183, G184, G186, W189, N195, M202, Y298, N299, K302, S303, N306, R310, N314; R320, H324, E345, Y396, R400, W439, R444, N445, K446, Q449, R458, N471, N484 중 1개 이상에서 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 것이다. 특히 바람직한 아밀라제는 D183 및 G184의 결실을 갖고 치환 R118K, N195F, R320K 및 R458K를 갖는 변이체, 및 군: M9, G149, G182, G186, M202, T257, Y295, N299, M323, E345 및 A339로부터 선택된 1개 이상의 위치에서 치환을 추가로 갖는 변이체를 포함하고, 가장 바람직한 변이체는 모든 이들 위치에서 치환을 추가로 갖는다.
한 실시양태에서, 적어도 1종의 아밀라제는 상표명 듀라밀(Duramyl)™, 테르마밀(Termamyl)™, 푼가밀(Fungamyl)™, 스테인자임(Stainzyme)™, 스테인자임 플러스(Stainzyme Plus)™, 나탈라제(Natalase)™, 리쿠오자임(Liquozyme) X 및 BAN™, 앰플리파이(Amplify)™, 앰플리파이 프라임(Amplify Prime)™ (노보자임스 에이/에스로부터의 것), 및 라피다제(Rapidase)™, 퓨라스타(Purastar)™, 파워라제(Powerase)™, 이펙텐즈(Effectenz)™ (듀폰으로부터의 M100), 프레페렌즈(Preferenz)™ (S1000, S110, S210 및 F1000; 듀폰으로부터의 것), 엑셀렌즈(Excellenz)™ (S3300), 프리마그린(PrimaGreen)™ (ALL; 듀폰), 옵티사이즈(Optisize)™ (듀폰) 하에 판매되는 제품을 포함하나 이에 제한되지는 않는 상업적으로 입수가능한 아밀라제로부터 선택된다.
만난아제
본원에 기재된 바와 같은 "만난아제"는 만난 분해 효소의 군으로부터 선택된 효소이다. 만난 분해 효소는 β-만노시다제 (EC 3.2.1.25), 엔도-1,4-β-만노시다제 (EC 3.2.1.78), 및 1,4-β-만노비오시다제 (EC 3.2.1.100)로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, 만난 분해 효소는 본원에서 엔도-β-1,4-D-만난아제, β-만난아제, 또는 만난아제로 불릴 수 있는 효소의 군인 엔도-1,4-β-만노시다제 (EC 3.2.1.78)의 군으로부터 선택된다.
만난아제는 바실루스 유기체로부터 기원하는 만난아제, 예컨대 JP-0304706 [바실루스 종으로부터의 베타-만난아제], JP-63056289 [알칼리성, 열안정성 베타-만난아제], JP-63036774 [알칼리성 pH에서 베타-만난아제 및 베타-만노시다제를 생산하는 바실루스 미생물 FERM P-8856], JP-08051975 [알칼리성 바실루스 종 AM-001로부터의 알칼리성 베타-만난아제], WO 97/11164 [바실루스 아밀로리퀘파시엔스로부터의 만난아제], WO 91/18974 [극한 pH 및 온도에서 활성인 만난아제], WO 97/11164 [바실루스 아밀로리퀘파시엔스로부터의 만난아제], WO 2014/100018 [바실루스 시르쿨란스 또는 바실루스 렌투스 균주 CMG1240으로부터 클로닝된 엔도-(3-만난아제1 (블레만1; US 5,476,775 참조)]에 기재된 것으로부터 선택될 수 있다. 적합한 만난아제는 WO 99/064619에 기재되어 있다.
만난아제는 WO 93/24622에 개시된 것와 같은 트리코더마 유기체로부터 기원하는 만난아제로부터 선택될 수 있다.
만난아제는 상업적으로 입수가능한 만난아제 예컨대 만나웨이(Mannaway)® (노보자임스 A/S) 또는 프레페렌즈® (M100) (듀폰))로부터 선택될 수 있다.
세제 조성물
한 실시양태에서, 본 발명은 세제 조성물에서의 알파-아밀라제 변이체의 용도에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체 및 1종 이상의 세제 성분을 포함하는 세제 조성물에 관한 것이다. 1종 이상의 세제 성분은 본 발명의 알파-아밀라제와 상이한 추가의 효소, 계면활성제, 탈포제, 빌딩제 (빌더), 중합체, 표백 시스템 (표백제), 레올로지 개질제, 굴수성제, 연화제, 건조제, 미백제, 완충제, 보존제, 부식방지 첨가제, 염료 및 향료로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
바람직하게는, 세제의 적어도 1종의 성분은 계면활성제이다. 바람직하게는, 세제의 적어도 1종의 추가의 성분은 본 발명의 알파-아밀라제와 상이한 본원에 기재된 바와 같은 제2 효소이다.
세제 성분은 세제 제제의 최종 적용에서 1종 초과의 기능을 가질 수 있고, 따라서 본원의 구체적 기능의 문맥에서 언급된 임의의 세제 성분은 또한 세제 제제의 최종 적용에서 또 다른 기능을 가질 수 있다. 세제 제제의 최종 적용에서 특정 세제 성분의 기능은 통상적으로 세제 제제 내의 그의 양, 즉 세제 성분의 유효량에 좌우된다. 세제 성분은 목적하는 적용, 예컨대 백색 텍스타일, 유색 텍스타일 및 울의 세탁에 따라 유형 및/또는 세제 제제 중의 양이 다양하다. 선택된 성분(들)은 추가로 세제 제제의 물리적 형태 (액체, 고체, 겔, 파우치에 또는 정제로서 제공됨 등)에 따라 달라진다. 예를 들어 세탁 제제를 위해 선택된 성분(들)은 추가로, 그 자체가 사용된 세탁 온도, 세탁기의 역학 (수직 축 대 수평 축 기계), 세척 사이클 당 물 소비 등 및 물의 평균 경도와 같은 지리적 특징과 같은 측면과 관련된 지역적 관례에 따라 달라진다.
한 실시양태에서, 세제 제제는 2종 초과의 세제 성분의 제제이며, 여기서 적어도 1종의 성분은 얼룩-제거에 효과적이고, 적어도 1종의 성분은 최적의 세정 조건을 제공하는 데 효과적이고, 적어도 1종의 성분은 세제의 물리적 특징을 유지하는 데 효과적이다.
세제 조성물은 액체 또는 고체 세제 조성물 또는 액체 및 고체 세제 조성물의 조합일 수 있다. 액체 세제 조성물은 바람직하게는 겔 세제 조성물이다. 고체 세제 조성물은 비누 바 또는 분말 세제 조성물, 바람직하게는 분말 세제 조성물일 수 있으며, 여기서 분말 세제 조성물은 정제로 압착될 수 있다.
세제 조성물은 단위 용량 또는 다중 용량 조성물일 수 있다. 세제 조성물은 다중-구획 파우치를 포함한 파우치의 형태일 수 있다. 세제 조성물은 가정 관리 및/또는 산업 및 기관 (I&I) 세정에 적합한 세탁 또는 식기 세척 세제 조성물일 수 있다. 세탁 및 식기 세척 조성물 둘 다는 수동 세척 또는 자동 세척 조성물의 형태일 수 있다. 바람직하게는, 식기 세척 조성물은 자동 식기 세척 (ADW)이다.
세제 파우치는, 예를 들어 물 접촉 전에 파우치로부터 조성물의 방출을 허용하지 않으면서 조성물을 보유하기에 적합한 임의의 형태, 형상 및 물질일 수 있다. 파우치는 내부 용적을 둘러싸는 수용성 필름으로 제조된다. 상기 내부 용적은 파우치의 구획으로 나누어질 수 있다. 바람직한 필름은 중합체 물질, 바람직하게는 필름 또는 시트로 형성된 중합체이다. 바람직한 중합체, 공중합체 또는 그의 유도체는 선택된 폴리아크릴레이트, 및 수용성 아크릴레이트 공중합체, 메틸 셀룰로스, 카르복시 메틸 셀룰로스, 소듐 덱스트린, 에틸 셀룰로스, 히드록시에틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스, 말토 덱스트린, 폴리 메타크릴레이트, 가장 바람직하게는 폴리비닐 알콜 공중합체 및 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (HPMC)이다. 바람직하게는 필름 내의 중합체, 예를 들어 PVA의 수준은 적어도 약 60%이다. 바람직한 평균 분자량은 전형적으로 약 20,000 내지 약 150,000일 것이다. 필름은 또한 가수분해 분해성 및 수용성 중합체 블렌드, 예컨대 폴리악티드 및 폴리비닐 알콜 (미국 인디애나주 개리 소재의 크리스 크라프트 인. 프로드.(Chris Craft In. Prod.)에 의해 판매되는 상표 참조 M8630 하에 공지됨) 플러스 글리세롤, 에틸렌 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 소르비톨 및 그의 혼합물과 같은 가소제를 포함하는 블렌드 조성물일 수 있다. 파우치는 고체 세탁 세정 조성물 또는 부분 성분 및/또는 액체 세정 조성물 또는 수용성 필름에 의해 분리된 부분 성분을 포함할 수 있다. 액체 성분을 위한 구획은 고체를 함유하는 구획과 조성이 상이할 수 있다 (예를 들어 US 2009/0011970 참조).
한 실시양태에서, 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체는 세제 조성물 kg당 활성 알파-아밀라제 변이체 1-1000 mg, 바람직하게는 5-500 mg/kg, 5-300 mg/kg, 10-200 mg/kg, 또는 50-200 mg/kg에 상응하는 양으로 세제 조성물에 첨가될 수 있다.
한 실시양태에서, 세제 제제는 5-12의 범위, 바람직하게는 6-11의 범위, 보다 바람직하게는 6-10, 7-9, 및 7.5-8.5로부터 선택된 범위의 pH를 갖는다. 한 실시양태에서, 제제는 세제 제제, 바람직하게는 액체 세제 제제이다.
한 실시양태에서, 본 발명에 따른 세제 제제는 1종 이상의 계면활성제(들)를 포함한다. "계면활성제" (본원에서 "표면 활성제"와 동의어로 사용됨)는 액체에 첨가될 때 계면에서 그 액체의 특성을 변화시키는 유기 화학물질을 의미한다. 그의 이온 전하에 따라, 계면활성제는 비이온성, 음이온성, 양이온성 또는 양쪽성으로 불린다.
본 발명의 세제 조성물은 음이온성 및/또는 양이온성 및/또는 비이온성 및/또는 반-극성 및/또는 쯔비터이온성, 또는 그의 혼합물일 수 있는 1종 이상의 계면활성제를 포함할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 세제 조성물은 적어도 1종의 계면활성제를 포함한다. 특정한 실시양태에서, 본 발명의 세제 조성물은 1종 이상의 비이온성 계면활성제 및 1종 이상의 음이온성 계면활성제의 혼합물을 포함한다. 계면활성제(들)는 전형적으로 약 0.1 내지 60 중량%, 예컨대 1 내지 40 중량%, 3 내지 20 중량% 또는 3 내지 10 중량%의 수준으로 존재한다. 계면활성제(들)는 목적하는 세정 적용을 기초로 선택되고, 관련 기술분야에 공지된 임의의 통상적인 계면활성제(들)를 포함한다. 세제에 사용하기 위한 관련 기술분야에 공지된 임의의 계면활성제가 이용될 수 있다. 계면활성제의 비제한적 예는 문헌 [McCutcheon's 2016 Detergents and Emulsifiers, 및 McCutcheon's 2016 Functional Materials, 둘 다 North American and International Edition, MC Publishing Co, 2016 edition]에 개시되어 있다. 추가의 유용한 예는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 동일한 간행물의 이전 판에 개시되어 있다.
그 안에 포함되는 경우, 세제는 통상적으로 약 1 내지 40 중량%, 예컨대 5 내지 30 중량%, 5 내지 15 중량% 또는 20 내지 25 중량%의 음이온성 계면활성제를 포함할 것이다. 음이온성 계면활성제의 비제한적 예는 술페이트 및 술포네이트, 특히 선형 알킬 벤젠 술포네이트 (LAS), LAS의 이성질체, 분지형 알킬 벤젠 술포네이트 (BABS), 페닐 알칸 술포네이트, 알파-올레핀 술포네이트 (AOS), 올레핀 술포네이트, 알켄 술포네이트, 알칸-2,3-디일비스(술페이트), 히드록시 알칸 술포네이트 및 디술포네이트, 알킬 술페이트 (AS), 예컨대 소듐 도데실 술페이트 (SDS), 지방 알콜 술페이트 (FAS), 1급 알콜 술페이트 (PAS), 알콜 에테르 술페이트 (AES 또는 AEOS 또는 FES, 알콜 에톡시 술페이트 또는 지방 알콜 에테르 술페이트로도 공지됨), 2급 알칸 술포네이트 (SAS), 파라핀 술포네이트 (PS), 에스테르 술포네이트, 술폰화 지방산 글리세롤 에스테르, 메틸 에스테르 술포네이트 (MES)를 포함한 알파-술포 지방산 메틸 에스테르 (알파-SFMe 또는 SES), 알킬- 또는 알케닐 숙신산, 도데세닐/테트라데세닐 숙신산 (DTSA), 아미노산의 지방산 유도체, 술포 숙신산의 디에스테르 및 모노에스테르 또는 비누, 및 그의 조합을 포함한다.
그 안에 포함되는 경우, 세제는 통상적으로 약 0 내지 10 중량%의 양이온성 계면활성제를 포함할 것이다. 양이온성 계면활성제의 비제한적 예는 알킬 디메틸 에탄올아민 쿼트 (ADMEAQ), 세틸 트리메틸 암모늄 브로마이드 (CTAB), 디메틸 디스테아릴 암모늄 클로라이드 (DSDMAC), 및 알킬 벤질 디메틸 암모늄, 알킬 4급 암모늄 화합물, 알콕실화 4급 암모늄 (AQA) 화합물, 및 그의 조합을 포함한다.
그 안에 포함되는 경우, 세제는 통상적으로 약 0.2 내지 40 중량%, 예를 들어 0.5 내지 30 중량%, 특히 1 내지 20 중량%, 3 내지 10 중량%, 3 내지 5 중량% 또는 8 내지 12 중량%의 비이온성 계면활성제를 포함할 것이다. 비이온성 계면활성제의 비제한적 예는 알콜 에톡실레이트 (AE 또는 AEO), 알콜 프로폭실레이트, 프로폭실화 지방 알콜 (PFA), 알콕실화 지방산 알킬 에스테르, 예컨대 에톡실화 및/또는 프로폭실화 지방산 알킬 에스테르, 알킬 페놀 에톡실레이트 (APE), 노닐 페놀 에톡실레이트 (NPE), 알킬 폴리글리코시드 (APG), 알콕실화 아민, 지방산 모노에탄올아미드 (FAM), 지방산 디에탄올 아미드 (FADA), 에톡실화 지방산 모노에탄올아미드 (EFAM), 프로폭실화 지방산 모노에탄올아미드 (PFAM), 폴리히드록시 알킬 지방산 아미드, 또는 글루코사민의 N-아실 N-알킬 유도체 (글루카미드, GA, 또는 지방산 글루카미드, FAGA), 뿐만 아니라 상표명 스판(SPAN) 및 트윈(TWEEN) 하에 입수가능한 제품, 및 그의 조합을 포함한다.
그 안에 포함되는 경우, 세제는 통상적으로 약 0 내지 10 중량%의 반극성 계면활성제를 포함할 것이다. 반극성 계면활성제의 비제한적 예는 아민 옥시드 (AO), 예컨대 알킬 디메틸 아민 옥시드, N-(코코 알킬)-N,N-디메틸 아민 옥시드 및 N-(탈로우-알킬)-N,N-비스-(2-히드록시에틸) 아민 옥시드, 지방산 알칸올 아미드 및 에톡실화 지방산 알칸올 아미드, 및 그의 조합을 포함한다.
그 안에 포함되는 경우, 세제는 통상적으로 약 0 내지 10 중량%의 쯔비터이온성 계면활성제를 포함할 것이다. 쯔비터이온성 계면활성제의 비제한적 예는 베타인, 알킬 디메틸 베타인, 술포 베타인, 및 그의 조합을 포함한다.
본 발명에 따른 세제 제제는 착물화제 (킬레이트 작용제 (킬레이트화제), 격리제), 침전제, 및 칼슘 및 마그네슘과 수용성 착물을 형성할 수 있는 이온 교환 화합물로부터 선택된 1종 이상의 화합물을 포함할 수 있다. 이러한 화합물은 본원에서 "빌더" 또는 "빌딩제"로 불릴 수 있으며, 이러한 화합물을 세제 제제의 최종 적용에서 이러한 기능으로 제한하는 것을 의미하지는 않는다.
한 실시양태에서, 본 발명의 세제 제제는 비-포스페이트 기재 빌더, 예컨대 소듐 글루코네이트, 시트레이트(들), 실리케이트(들), 카르보네이트(들), 포스포네이트(들), 아미노 카르복실레이트(들), 폴리카르복실레이트(들), 폴리술포네이트(들), 및 폴리포스포네이트(들)로부터 선택된 적어도 1종의 빌더를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 세제 제제는 강한 격리 빌더를 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 세제 조성물은 포스페이트를 함유하지 않으며, 이는 포스페이트-기재 빌더를 본질적으로 함유하지 않음을 의미한다. 본원에서, "본질적으로 포스페이트를 함유하지 않는"은 포스페이트 및 폴리포스페이트의 함량이 중량측정법에 의해 결정 시 및 각각의 본 발명의 세제 조성물에 대해, 합하여 10 ppm 내지 1 중량%의 범위인 것을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 세제 제제는 포스포네이트를 포함하며, 여기서 포스포네이트는 바람직하게는 DTPMP 및/또는 HEDP이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 세제 제제는 시트르산의 모노- 및 디알칼리 금속 염, 특히 모노- 및 바람직하게는 트리나트륨 염, 시트르산의 암모늄 또는 치환된 암모늄 염 뿐만 아니라 시트르산 그 자체로부터 선택된 적어도 1종의 "시트레이트"를 포함한다. 시트레이트는 무수 화합물로서 또는 수화물로서, 예를 들어 소듐 시트레이트 2수화물로서 사용될 수 있다. 시트레이트는 모두 세제 제제의 총 중량에 비해 0 중량% 내지 약 20 중량% 범위, 약 0.5 중량% 내지 약 10 중량% 범위, 또는 1 중량% 내지 5 중량% 범위의 총량으로 포함될 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 세제 제제는 세제 제제의 총 중량에 대해 약 1-3% 범위의 시트레이트의 총량을 포함한다.
본 발명의 세제 조성물은 1종 이상의 실리케이트를 포함할 수 있다. 본 발명의 문맥에서 "실리케이트(들)"는 특히 소듐 디실리케이트 및 소듐 메타실리케이트, 알루미노실리케이트, 예컨대 소듐 알루미노실리케이트, 예컨대 제올라이트 A (즉, Na12(AlO2)12(SiO2)12*27H2O), 및 층상 실리케이트, 특히 화학식 알파-Na2Si2O5, 베타-Na2Si2O5, 및 델타-Na2Si2O5의 것을 포함한다.
본 발명의 세제 조성물은 1종 이상의 카르보네이트를 포함할 수 있다. 용어 "카르보네이트(들)"는 알칼리 금속 카르보네이트 및 알칼리 금속 히드로겐 카르보네이트를 포함하고, 나트륨 염이 바람직하다. 소듐 카르보네이트 (Na2CO3)가 특히 적합하다.
본 발명의 세제 조성물은 1종 이상의 포스포네이트를 포함할 수 있다. "포스포네이트"는 2-포스피노부탄-1,2,4-트리카르복실산 (PBTC); 에틸렌디아민테트라(메틸렌포스폰산) (EDTMPA); 1-히드록시에탄-1,1-디포스폰산 (HEDP), CH2C(OH)[PO(OH)2]2; 아미노트리스(메틸렌포스폰산) (ATMP), N[CH2PO(OH)2]3; 아미노트리스(메틸렌포스포네이트), 나트륨 염 (ATMP), N[CH2PO(ONa)2]3; 2-히드록시에틸이미노비스(메틸렌포스폰산), HOCH2CH2N[CH2PO(OH)2]2; 디에틸렌트리아민펜타(메틸렌포스폰산) (DTPMP), (HO)2POCH2N[CH2CH2N[CH2PO(OH)2]2]2; 디에틸렌트리아민펜타(메틸렌포스포네이트), 나트륨 염, C9H(28-x)N3NaxO15P5 (x=7); 헥사메틸렌디아민(테트라메틸렌포스포네이트), 칼륨 염, C10H(28-x)N2KxO12P4 (x=6); 및 비스(헥사메틸렌)트리아민(펜타메틸렌포스폰산), (HO2)POCH2N[(CH2)2N[CH2PO(OH)2]2]2를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 그의 염이 또한 적합할 수 있다.
본 발명의 세제 조성물은 1종 이상의 아미노카르복실레이트를 포함할 수 있다. 적합한 "아미노 카르복실레이트"의 비제한적 예는 디에탄올 글리신 (DEG), 디메틸글리신 (DMG), 니트릴트리아세트산 (NTA), N-히드록시에틸아미노디아세트산, 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA), N-(2히드록시에틸)이미노디아세트산 (HEIDA), 히드록시에틸렌디아민트리아세트산, N-히드록시에틸-에틸렌디아민트리아세트산 (HEDTA), 히드록시에틸렌디아민테트라아세트산, 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DTPA), 및 메틸글리신디아세트산 (MGDA), 글루탐산-디아세트산 (GLDA), 이미노디숙신산 (IDS), 히드록시이미노디숙신산, 에틸렌디아민디숙신산 (EDDS), 아스파르트산-디아세트산, 및 그의 알칼리 금속 염 또는 암모늄 염을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 아스파르트산-N-모노아세트산 (ASMA), 아스파르트산-N,N-디아세트산 (ASDA), 아스파르트산-N-모노프로피온산 (ASMP), N-(2-술포메틸) 아스파르트산 (SMAS), N-(2-술포에틸) 아스파르트산 (SEAS), N-(2-술포메틸) 글루탐산 (SMGL), N-(2-술포에틸) 글루탐산 (SEGL), N-메틸이미노디아세트산 (MIDA), 알파-알라닌-N,N-디아세트산 (알파-ALDA), 세린-N,N-디아세트산 (SEDA), 이소세린-N,N-디아세트산 (ISDA), 페닐알라닌-N,N-디아세트산 (PHDA), 안트라닐산-N,N-디아세트산 (ANDA), 술파닐산-N,N-디아세트산 (SLDA), 타우린-N,N-디아세트산 (TUDA) 및 술포메틸-N,N-디아세트산 (SMDA) 및 그의 알칼리 금속 염 또는 암모늄 염이 추가로 적합하다. 이와 관련하여 사용된 용어 "암모늄 염"은 영구적으로 또는 일시적으로 4급화된 질소 원자를 보유하는 적어도 1개의 양이온을 갖는 염을 지칭한다. 영구적으로 4급화된 적어도 1개의 질소 원자를 보유하는 양이온의 예는 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 디메틸디에틸 암모늄, 및 n-C10-C20-알킬 트리메틸 암모늄을 포함한다. 일시적으로 4급화된 적어도 1개의 질소 원자를 보유하는 양이온의 예는 양성자화 아민 및 암모니아, 예컨대 모노메틸 암모늄, 디메틸 암모늄, 트리메틸 암모늄, 모노에틸 암모늄, 디에틸 암모늄, 트리에틸 암모늄, n-C10-C20-알킬 디메틸 암모늄 2-히드록시에틸암모늄, 비스(2-히드록시에틸) 암모늄, 트리스(2-히드록시에틸)암모늄, N-메틸 2-히드록시에틸 암모늄, N,N-디메틸-2-히드록시에틸암모늄, 특히 NH4 +를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 세제 조성물은 1종 초과의 빌더를 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 세제 조성물은 세제 조성물의 총 중량에 비해 0.2 중량% 미만의 니트릴로트리아세트산 (NTA), 또는 0.01 내지 0.1 중량%의 NTA를 함유한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 세제 조성물은 메틸글리신 디아세테이트 (MGDA), 글루탐산 디아세테이트 (GLDA), 및 그의 각각의 염, 예를 들어 그의 알칼리 (예컨대 나트륨) 염으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노카르복실레이트를 세제 조성물의 총 중량에 대해 0.1 중량% 내지 25.0 중량% 범위, 1.0 중량% 내지 18.0 중량% 범위, 3.0 중량% 내지 15.0 중량% 범위, 3.0 중량% 내지 10.0 중량% 범위, 또는 5.0 중량% 내지 8.0 중량% 범위의 양으로 포함한다.
본 발명의 세제 제제는 1종 이상의 굴수성제를 포함할 수 있다. 1종 이상의 굴수성제는 유기 용매, 예컨대 에탄올, 이소프로판올, 에틸렌 글리콜, 1,2-프로필렌 글리콜, 및 제한 없이 정상 조건 하에 수혼화성인 관련 기술분야에 공지된 추가의 유기 용매로부터 선택될 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 세제 제제는 1,2-프로필렌 글리콜을 모두 세제 제제의 총 중량에 대해 5-10 중량%, 바람직하게는 약 6 중량% 범위의 총량으로 포함한다. 굴수성제의 추가의 비제한적 예는 소듐 벤젠 술포네이트, 소듐 p-톨루엔 술포네이트 (STS), 소듐 크실렌 술포네이트 (SXS), 소듐 쿠멘 술포네이트 (SCS), 소듐 시멘 술포네이트, 아민 옥시드, 알콜 및 폴리글리콜 에테르, 소듐 히드록시 나프토에이트, 소듐 히드록시 나프탈렌 술포네이트, 소듐 에틸 헥실 술페이트, 및 그의 조합을 포함한다.
한 실시양태에서, 세제 조성물은 적어도 1종의 보존제를 포함한다. 바람직하게는, 보존제는 보존의 목적을 위해 액체 조성물에 첨가되는 물질을 의미하며, 이는 보다 바람직하게는 제조 공정에서 형성된 액체 조성물에 포함된 보존 특색을 갖는 것으로 공지된 화합물이 용어 보존제로부터 배제된다는 것을 의미한다. 한 실시양태에서, 보존제는 산 형태 또는 그의 염으로서의 2-페녹시에탄올, 글루타르알데히드, 2-브로모-2-니트로프로판-1,3-디올 및 포름산, 및 4,4'-디클로로 2-히드록시디페닐에테르로 이루어진 군으로부터 선택된다. 통상적으로, 본 발명의 액체 조성물은 적어도 1종의 보존제를 10 ppm 미만의 양으로, 예컨대 액체 조성물의 총 중량에 대해 2 ppm 내지 5 중량% 범위의 양으로 포함한다. 바람직하게는, 액체 조성물은 보존제를 함유하지 않으며, 이는 보존제가 1 ppm 미만의 양으로 포함됨을 의미한다.
세제 제제는 프로테아제, 본 발명의 알파-아밀라제 변이체와 상이한 아밀라제, 셀룰라제, 리파제, 크실라나제, 만난아제, 큐티나제, 에스테라제, 피타제, DNAse, 펙티나제, 펙테이트 리아제, 펙틴분해 효소, 카르보히드라제, 아라비나제, 갈락타나제, 크산타나제, 크실로글루카나제, 락카제, 퍼옥시다제 및 옥시다제로 이루어진 군으로부터 선택된, 본 발명에 따른 알파-아밀라제 변이체 이외의 1종 이상의 다른 효소(들)를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 세제 제제는 적어도 본원에 개시된 바와 같은 프로테아제, 바람직하게는 서열식별번호: 10-14, 바람직하게는 서열식별번호: 10 중 임의의 것에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 프로테아제를 포함한다. 특히 바람직한 추가의 효소는 본원의 다른 곳에 개시되어 있고, 그 설명은 또한 설명의 이러한 부분에 참조로 포함되어 있다.
세제 제제는 칼슘 및/또는 마그네슘 이온의 수용성 공급원을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 세제 제제는 상기 개시된 바와 같은 폴리올 및 수용성 염으로부터 선택된 적어도 1종의 효소 안정화제를 포함한다.
세제 제제는 상기 개시된 바와 같은 붕소 함유 화합물 및 펩티드 안정화제로부터 선택된 적어도 1종의 효소 안정화제를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명은 하나 이상의 단계로 하기를 혼합하는 단계를 포함하는, 액체 세제 제제, 보다 바람직하게는 액체 세탁 세제 제제를 제공하는 방법에 관한 것이다:
(a) 본 발명에 따른 적어도 1종의 알파-아밀라제 변이체, 바람직하게는 아밀라제는 본 발명의 효소 제제 내에 제공됨; 및
(b) 세정 성능에 효과적이거나 또는 세제의 물리적 특징을 유지하는 데 유효한 양으로 존재하는 계면활성제, 빌더 및 굴수성제로부터 선택된 적어도 1종의 세제 성분.
바람직하게는, 세제 조성물은 하기 표 1a에 따른다.
대안적 세제 제제는 하기 표 1b에 따른 세제 조성물이다.
표 1a 및 표 1b에 제시된 세제 제제에 1종 이상의 효소가 본원에 기재된 바와 같이 첨가될 수 있다.
사용 방법
본 발명은 또한 가정 관리 및 I&I 세정을 포함한 세탁 또는 경질 표면 세정과 같은 세정 공정에서의 본원에 기재된 바와 같은 알파-아밀라제 변이체의 용도에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 개선된 세제에서의 알파-아밀라제 안정성 및/또는 세제 조성물의 세척 성능을 제공하기 위한, 본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체를 포함하는 조성물의 용도에 관한 것이다.
따라서 본 발명은 또한 하기를 포함하는 세제 조성물의 사용을 포함하는, 개선된 알파-아밀라제 안정성 및/또는 세척 성능을 갖는 세제 조성물을 제공하는 방법에 관한 것이다:
a) 본원에 기재된 바와 같은 알파-아밀라제 변이체; 및
b) 1종 이상의 세제 성분.
바람직한 실시양태
특히, 본원에서 바람직한 것은 하기이다:
바람직한 실시양태 1.) 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체로서, 여기서
(i) 상기 변이체는 하기를 포함하고:
a) 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 45, 47, 48, 51, 54, 59, 60, 63, 70, 71, 72, 73, 75, 76, 81, 82, 83, 86, 87, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 103, 106, 108, 109, 113, 114, 115, 116, 117, 119, 120, 123, 125, 126, 128, 129, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 139, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 149, 150, 151, 154, 155, 156, 158, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 169, 170, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 180, 182, 184, 185, 187, 188, 189, 191, 192, 193, 203, 208, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 218, 219, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 230, 231, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 240, 242, 243, 245, 249, 250, 251, 252, 253, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 279, 280, 281, 282, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 304, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 326, 327, 333, 334, 336, 337, 338, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 348, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 370, 372, 375, 376, 378, 379, 381, 382, 383, 384, 385, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 403, 405, 406, 407, 408, 410, 413, 414, 415, 416, 418, 421, 424, 426, 427, 429, 431, 432, 434, 436, 438, 439, 440, 442, 443, 445, 446, 447, 448, 449, 451, 453, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 465, 467, 468, 470, 471, 474, 478, 480 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서의 아미노산 치환,
또는
b) 모 서열과 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 X9D, X9F, X9K, X9N, X9P, X9Q, X9S, X9T, X9Y, X179G, X181D, X181F, X181H, X181I, X181N, X181Q, X181S, X181T, X181V, X181W, X181Y, X186A, X186C, X186D, X186F, X186H, X186I, X186K, X186L, X186M, X186R, X186V, X186W, X186Y, X190H, X195H, X195K, X195L, X195W, X195Y, X206C, X206H, X206M, X206Y, X244A, X244C, X244D, X244E, X244F, X244G, X244H, X244M, X244N, X244V, X402T X419C, X420D, X420E, X420G, X420H, X420K, X420L, X420Q, X422C, X422N, X422H, X423F, X423M, X423Q, X423S, X428C, X428D, X428E, X428G, X428I, X428K, X428L, X428M, X428N, X428R, X428S, X428V, X428W, X428Y, X430A, X430C, X430D, X430E, X430F, X430G, X430L, X430P, X430Q, X430S, X430T, X430V, X435K, X435P, X435S, X435A, X435D, X437L, X437T, X437W, X441C, X441K, X441L, X441M, X441S, X444H, X444M, X444N, X444R, X444T, X450C, X450D, X450E, X450H, X450L, X450M, X450P, X450Q, X450R, X450T, X452A, X452C, X452E, X452F, X452I, X452K, X452M, X452N, X452T, X454A, X454E, X454K, X454L, X454P, X454S, X454T, X466E, X466W, X469F, X469L, X469Y, X475A, X475K, X475E, X475L, X479I, X479K, X479M, X483F, X483L, X483Q 및 X483R로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환, 바람직하게는 X181D, X181F, X181H, X181I, X181N, X181Q, X181S, X181T, X181V, X181W, X181Y, X186A, X186C, X186D, X186F, X186H, X186I, X186K, X186L, X186M, X186R, X186V, X186W, X186Y, X195H, X195K, X195L, X195W, X195Y, X206C, X206H, X206M, X206Y, X441C, X441K, X441L, X441M 및 X441S로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환,
또는
c) 모 서열과 비교하여 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 1, 2, 3, 5, 7, 8, 9, 11, 16, 18, 19, 25, 26, 29, 30, 31, 35, 37, 40, 41, 43, 44, 46, 48, 49, 50, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 71, 72, 73, 74, 77, 78, 79, 80, 81, 84, 85, 86, 87, 88, 90, 91, 93, 94, 97, 98, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 151, 152, 153, 155, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 216, 217, 218, 219, 220, 224, 225, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 235, 238, 239, 241, 242, 243, 244, 246, 247, 248, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 269, 270, 272, 273, 274, 275, 276, 278, 279, 280, 281, 283, 284, 286, 287, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 299, 300, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 310, 311, 313, 314, 315, 316, 317, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 328, 329, 330, 331, 332, 334, 335, 337, 339, 340, 342, 344, 345, 346, 347, 349, 350, 354, 357, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 368, 369, 371, 372, 373, 374, 375, 377, 380, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 390, 391, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 425, 427, 428, 430, 431, 433, 434, 435, 437, 438, 439, 441, 444, 445, 446, 447, 449, 450, 452, 454, 455, 457, 458, 460, 461, 462, 464, 465, 466, 467, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 481, 483, 484 및 485로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환,
(ii) 상기 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 임의의 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 91%, 적어도 91.5%, 적어도 92.0%, 적어도 92.5%, 적어도 93.0%, 적어도 93.5%, 94.0%, 적어도 94.5%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 바람직하게는 적어도 95.5%, 적어도 96.0%, 적어도 96.5%, 적어도 97.0%, 적어도 97.5%, 적어도 98.0%, 적어도 98.5%, 적어도 99.0%, 적어도 99.5%, 적어도 99.6%, 적어도 99.7%, 적어도 99.8%, 또는 적어도 99.9%, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖고,
(iii) 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는 것인
알파-아밀라제 변이체.
바람직한 실시양태 2.): 상기 바람직한 실시양태에 있어서, 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제가 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3에 따른 아밀라제 또는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3과 적어도 60%의 서열 동일성을 갖는 임의의 알파-아밀라제이고, 가장 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제가 서열식별번호: 1에 따른 아밀라제이고, 바람직하게는 아미노산 치환의 생성된 아미노산 잔기가 상응하는 위치의 서열식별번호: 3 또는 5의 아미노산 잔기와 동일하지 않은 것인 알파-아밀라제 변이체.
바람직한 실시양태 3.): 상기 바람직한 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 알파-아밀라제 변이체가 상기 언급된 위치에서 1-30개, 바람직하게는 1 내지 25개, 1 내지 20개, 1 내지 15개, 1 내지 10개, 또는 1 내지 5개, 2 내지 30개, 2 내지 25개, 2 내지 20개, 2 내지 15개, 2 내지 10개, 2 내지 8개, 또는 2 내지 5개, 바람직하게는 3 내지 30개, 3 내지 25개, 3 내지 20개, 3 내지 15개, 3 내지 10개, 3 내지 8개, 또는 3 내지 5개, 바람직하게는 4 내지 30개, 4 내지 25개, 4 내지 20개, 4 내지 15개, 4 내지 10개, 또는 4 내지 8개의 아미노산 치환을 포함하는 것인 알파-아밀라제.
바람직한 실시양태 4.): 상기 바람직한 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 알파-아밀라제 변이체가 임의로 모 알파-아밀라제의 1-30개, 1-20개, 1-10개 또는 1-5개의 추가의 보존적 아미노산 치환을, 바람직하게는 임의의 기능적 도메인 외부에, 바람직하게는 촉매 활성 도메인 외부에 추가로 포함하는 것인 알파-아밀라제.
바람직한 실시양태 5.): 상기 바람직한 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 변이체가 A 및 B 도메인 및 C 도메인을 포함하며, 여기서 A 및 B 도메인의 아미노산 서열이 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 그러나 100% 미만 동일하고, C 도메인의 아미노산 서열이 서열식별번호: 8의 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 그러나 100% 미만 동일한 것인 알파-아밀라제.
바람직한 실시양태 6.): 상기 바람직한 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 1개 이상의 아미노산 치환이 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 4, 25, 100, 135, 135, 135, 135, 160, 176, 193, 251, 258, 276, 299, 323, 363, 363, 382, 405, 460 및 482로 이루어진 군으로부터 선택되거나 또는 4, 7, 25, 37, 70, 100, 118, 135, 160, 176, 193, 210, 251, 281, 258, 323, 361, 363, 368, 405, 434, 441, 459, 460, 451 및 482로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 25, 100, 135, 176, 193 및 460으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 알파-아밀라제 변이체.
바람직한 실시양태 7.): 상기 바람직한 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 1개 이상의 아미노산 치환이 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 X100D, X100F, X100K, X100L, X103A, X106D, X108A, X109A, X10A, X10C, X10E, X10F, X10L, X10W, X10Y, X113F, X113H, X113M, X113R, X113V, X113W, X113Y, X114A, X114C, X114D, X114E, X114F, X114G, X114H, X114I, X114K, X114L, X114M, X114N, X114Q, X114R, X114S, X114V, X114W, X114Y, X115C, X115D, X115K, X115M, X115N, X115Q, X115R, X115S, X115T, X115V, X116I, X116K, X116L, X116M, X116R, X116T, X117A, X117C, X117D, X117F, X117I, X117N, X117P, X117R, X117W, X117Y, X118A, X118D, X118E, X119H, X119P, X119R, X119S, X119Y, X120E, X120G, X120M, X120S, X120W, X120Y, X123D, X123S, X125A, X125D, X125E, X125F, X125G, X125H, X125K, X125L, X125M, X125N, X125Q, X125R, X125T, X125V, X125W, X125Y, X126D, X128C, X128E, X128L, X128M, X128W, X128Y, X129E, X12N, X12S, X131C, X131I, X131L, X131Q, X131W, X132T, X133A, X133C, X133D, X133E, X133H, X133K, X133N, X133P, X133Q, X133S, X134C, X134E, X134F, X134I, X134L, X134M, X134P, X134T, X134V, X134W, X134Y, X135D, X135E, X135G, X135M, X135N, X135P, X135S, X135T, X135W, X136A, X136C, X136D, X136E, X136F, X136H, X136L, X136M, X136N, X136P, X136W, X139C, X139S, X13A, X13Y, X141V, X142C, X142E, X142F, X142L, X142M, X142Q, X142R, X142W, X142Y, X143F, X144C, X144E, X144G, X144K, X144N, X144Q, X144R, X144S, X144T, X144V, X144Y, X145A, X146C, X146D, X146E, X146F, X146G, X146H, X146K, X146L, X146S, X146T, X146W, X147M, X149E, X14N, X150C, X150E, X150Q, X151C, X151E, X154A, X154Y, X155Y, X156E, X156V, X158H, X158N, X158Y, X15R, X160D, X160E, X160W, X161T, X162V, X163A, X163Q, X163T, X164V, X165S, X165T, X165W, X169A, X169D, X169E, X169S, X169V, X16F, X16R, X170C, X170F, X172A, X172C, X172D, X172K, X172N, X173I, X173Y, X174D, X174E, X174G, X174H, X174M, X174N, X174P, X174S, X174T, X175A, X175G, X175H, X175Q, X176K, X176S, X176T, X177A, X177G, X177K, X177N, X177P, X177R, X177S, X177W, X178F, X17K, X17V, X180M, X180N, X180T, X180W, X182D, X182E, X182N, X182Q, X182S, X185E, 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X388H, X388I, X388M, X388R, X388V, X389G, X389H, X389K, X38N, X390D, X390F, X390M, X390N, X390P, X390R, X391A, X391F, X391G, X391K, X391M, X391N, X391Q, X391S, X391T, X391Y, X392C, X392V, X393E, X393H, X393P, X393S, X393V, X394A, X394C, X394E, X394H, X394I, X394L, X394M, X394N, X394R, X394S, X395A, X395H, X395M, X395V, X396H, X396P, X397D, X397H, X397P, X397S, X398M, X399P, X39E, X39K, X3A, X3F, X3G, X3I, X3K, X3L, X3Q, X3V, X400A, X400D, X400E, X400G, X400H, X400I, X400K, X400L, X400M, X400N, X400P, X400Q, X400R, X400S, X400V, X400W, X401I, X401K, X401M, X401T, X403N, X405C, X405H, X405M, X405T, X405V, X406P, X407D, X407R, X407S, X408E, X408I, X408Q, X40I, X40S, X410H, X410I, X410K, X410L, X410P, X410R, X410Y, X413S, X414C, X414E, X414S, X415E, X415I, X416S, X418C, X418N, X418P, X41C, X41D, X41E, X41G, X41Q, X41S, X41T, X421N, X421P, X424A, X426D, X426W, X427C, X427F, X427G, X427K, X427Q, X427R, X427S, X427T, X427V, X429A, X429D, X429E, X429F, X429G, X429I, X429M, X429N, X429P, X429Q, X429S, X429T, X429V, X429W, X42C, X42I, X42Q, X42V, X431I, X434S, X436E, X438F, X438P, X438Y, X439K, X439C, X439P, X440V, X442Q, X443H, X443T, X445A, X445C, X445D, X445F, X445G, X445H, X445K, X445M, X445Q, X445R, X445S, X445T, X445V, X446F, X446I, X446L, X446P, X446Q, X446R, X446V, X446W, X447V, X448D, X448E, X448H, X448N, X449A, X449F, X449G, X449K, X449L, X449M, X449N, X449P, X449Q, X449R, X449S, X449V, X449W, X449Y, X451L, X453G, X453I, X453N, X453P, X453Y, X455L, X456L, X456M, X456R, X456S, X456V, X456W, X456Y, X457A, X457C, X457E, X457F, X457G, X457K, X457L, X457M, X457R, X457S, X457T, X457V, X457W, X458I, X458K, X458V, X458W, X459C, X459D, X459E, X459I, X459K, X459N, X459Q, X459R, X459V, X459Y, X45G, X45N, X460A, X460D, X460E, X460G, X460Q, X460R, X460S, X460T, X460V, X461A, X461E, X461F, X461K, X461L, X461M, X461N, X461Q, X461R, X461S, X461V, X462K, X463L, X465H, X465P, X465R, X465V, X467A, X467E, X467H, X468D, X468H, X470A, X470Q, X470T, X471E, X474F, X474H, X474P, X478A, X478E, X47S, X480D, X480E, X480M, X480R, X480Y, X482C, X482T, X482W, X48F, X48I, X48M, X48Y, X4A, X4C, X4K, X4M, X4Q, X4R, X4S, X51Q, X51T, X51V, X54D, X54G, X54Q, X59T, X5A, X5C, X5D, X5E, X5F, X5H, X5I, X5K, X5L, X5M, X5N, X5P, X5Q, X5R, X5V, X5Y, X60T, X63C, X63V, X6A, X6C, X6E, X6F, X6G, X6H, X6K, X6L, X6M, X6P, X6Q, X6S, X6T, X6V, X6W, X6Y, X70F, X70H, X70L, X70M, X70N, X70Y, X71D, X72C, X72D, X72E, X72N, X72T, X73L, X73N, X73Q, X75A, X75G, X75I, X75L, X75P, X75T, X75W, X76C, X76E, X76G, X76L, X76T, X76V, X7C, X7E, X7F, X7H, X7K, X7N, X7P, X7Q, X7R, X7S, X7V, X7W, X7Y, X81H, X81L, X82K, X82M, X83A, X83D, X83E, X83G, X83R, X83S, X86K, X87D, X87R, X89A, X89C, X89F, X89G, X89L, X89M, X89R, X89S, X8A, X8C, X8F, X8I, X8M, X8P, X8S, X8V, X8W, X8Y, X90A, X90D, X90E, X90F, X90G, X90I, X90M, X90N, X90Q, X90R, X90S, X90V, X90Y, X91C, X91D, X91E, X91F, X91G, X91H, X91I, X91K, X91L, X91M, X91N, X91Q, X91S, X91T, X91V, X91W, X91Y, X92D, X92M, X92V, X93K, X93Q, X94A, X94D, X94E, X94K, X94M, X94V, X94Y, X95E, X95I, X95L, X95V, X96K, X96N, X96Q, X97V, X98E, X98G, X98N, X99H, X99K, X99N, X100W 및 X1G로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 것인 알파-아밀라제 변이체.
바람직한 실시양태 8.): 상기 바람직한 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 알파-아밀라제 변이체가 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 2개 이상의 아미노산의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184에 상응하는 아미노산의 결실, 바람직하게는 결실 D183* 및 G184*를 추가로 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른 것인 알파-아밀라제 변이체.
바람직한 실시양태 9.): 상기 바람직한 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 변이체가 상기 모 알파-아밀라제에 비해 1개 이상의 개선된 특성을 나타내며, 바람직하게는 여기서 상기 개선된 특성은 >1.0의 개선 지수 (IF)로서 측정되고, 바람직하게는 개선 지수는 1.2 이상, 바람직하게는 1.3 이상인 알파-아밀라제 변이체.
바람직한 실시양태 10.): 상기 바람직한 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 1개 이상의 아미노산 치환이 X4Q, X25H, X100W, X135E, X135T, X135W, X135D, X160W, X176K, X193E, X251E, X258Q, X276R, X299S, X323G, X363E, X363H, X382Q, X405M, X460G 및 X482W로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택되거나, 또는 1개 이상의 아미노산 치환이 X4Q, X7H, X7W, X25H, X25Y, X37M, X70H, X100W, X118D, X135T, X160W, X176K, X193E, X210C, X251E, X281N, X258Q, X323G, X361R, X363E, X363H, X363N, X368F, X405M, X434R, X441Q, X459N, X460G, X451L 및 X482W로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 1개 이상의 아미노산 치환이 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른 X25H, X25Y, X100W, X135T, X176K, X193E 및 X460G로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 것인 알파-아밀라제 변이체.
바람직한 실시양태 11.): 상기 바람직한 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 상기 변이체가
X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X482W, X4Q+X25H+X176K+X186E+X206Y+X251E+X405M+X482W, X25H+X176K+X186E+X206Y+X482W, X25H+X186E+X206Y+X405M+X482W, X25H+X186E+X206Y+X482W, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X482W, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X482W, X25H+X176K+X186E+X482W, X25H+X176K+X186E+X193E+X206Y+X482W, X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W, X25H+X176K+X186E+X206Y, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X206Y+X460G+X482W, X4Q+X25H+X176K+X206Y+X251E+X460G+X482W, X4Q+X25H+X176K+X193E+X251E+X186E+X482W, X4Q+X193E+X206Y+X276R+X186E+X482W, X186E+X25H+X482W, X25H+X193E+X206Y+X251E+X276R+X405M+X186E+X482W, X25H+X251E+X186E+X482W, X25H+X160W+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W, X193E+X206Y+X405M+X186E+X482W, X3I+X356V, X3I+X356I, X83D+X94E, X94D+X125E, X131I+X377Q+X410H, X48F+X94D, X48Y+X116K+X218K, X5L+X218K+X225S, X83E+X116R+X158Y+X181E, X51V+X218K, X83E+X181E, X4Q+X7W+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, X4Q+X37M+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M, 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X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X363E+X123D, X25H+X176K+X186E+X206Y+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X181Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X181Q+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X181Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X193E+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X193E+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X258Q+X363E+X135C, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X361R, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X281N+X363E+X175D, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X473R, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q+X281N+X363E, 및 X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q+X363E,
X25H+X176K+X251E+X405M,
X25H+X176K+X251E+X405M+X482W,
X25H+X176K+X251E+X405M+X439K,
X25H+X176K+X251E+X405M+X439K+X482W,
X251E+X405M,
X251E+X405M+X439K,
X251E+X405M+X482W,
X251E+X405M+X439K+X482W,
X405M+X439K,
X405M+X482W,
X405M+X439K+X482W,
X4Q+X25H+X176K+X251E+X405M+X439K,
X4Q+X25H+X176K+X251E+X405M+X439K+X482W,
X116K+X181T,
X116K+X181T+X225A,
X181T+X225A+X320K, 및
X116K+X181T+X225A+X320K로 이루어진 군으로부터 선택된,
바람직하게는
X4Q+X25H,
X4Q+X25H+X176K,
X4Q+X25H+X176K+X186E,
X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E,
X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M,
X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X439K,
X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W,
X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X439K+X482W,
X25H+X176K,
X25H+X176K+X186E,
X176K+X186E,
X25H+X176K+X186E+X251E,
X25H+X176K+X186E+X251E+X405M,
X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W, 및
X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X439K+X482W,
X25H+X176K+X251E+X405M,
X25H+X176K+X251E+X405M+X482W,
X25H+X176K+X251E+X405M+X439K,
X25H+X176K+X251E+X405M+X439K+X482W,
X251E+X405M,
X251E+X405M+X439K,
X251E+X405M+X482W,
X251E+X405M+X439K+X482W,
X405M+X439K,
X405M+X482W,
X405M+X439K+X482W,
X4Q+X25H+X176K+X251E+X405M+X439K,
X4Q+X25H+X176K+X251E+X405M+X439K+X482W,
X116K+X181T,
X116K+X181T+X225A,
X116K+X181T+X225A+X320K,
X181T+X225A+X320K, 및
X181T+X225A+X320K로부터 선택된 치환의 조합,
가장 바람직하게는 X116K+X181T+X225A, X116K+X181T+X225A+X320K, X25H+X176K, X25H+X176K+X186E, X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W, 또는 X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W, 가장 바람직하게는 X25H+X176K+X186E, X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W, 또는 X116K+X181T+X225A+X320K를 포함하는 것인 알파-아밀라제 변이체.
바람직한 실시양태 12.): 상기 바람직한 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 명시되지 않은 위치의 아미노산 잔기 (즉, X)가 각각의 위치 (서열식별번호: 3의 넘버링에 따름)의 서열식별번호: 1 또는 3, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 잔기에 상응하는 것인 알파-아밀라제 변이체.
바람직한 실시양태 13.): 상기 바람직한 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 서열식별번호: 3의 넘버링에 따른 결실 D183* 및 G184*를 포함하는 알파-아밀라제 변이체.
바람직한 실시양태 14.): 상기 바람직한 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 9, 130, 179, 181, 186, 190, 195, 202, 206, 244, 402, 419, 420, 422, 423, 428, 430, 435, 441, 444, 450, 452, 454, 466, 469, 473, 475, 476, 479, 483 및 485로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 추가의 아미노산 치환, 바람직하게는 X9D, X9F, X9K, X9L, X9N, X9P, X9Q, X9S, X9T, X9Y, X130V, X179G, X179L, X181D, X181E, X181F, X181H, X181I, X181N, X181Q, X181S, X181T, X181V, X181W, X181Y, X186A, X186C, X186D, X186E, X186F, X186H, X186I, X186K, X186L, X186M, X186N, X186Q, X186R, X186S, X186V, X186W, X186Y, X190H, X195F, X195H, X195K, X195L, X195W, X195Y, X202L, X206C, X206H, X206L, X206M, X206Y, X244A, X244C, X244D, X244E, X244F, X244G, X244H, X244M, X244N, X244Q, X244V, X402T, X419C, X420D, X420E, X420G, X420H, X420K, X420L, X420Q, X422C, X422N, X422H, X423F, X423M, X423Q, X423S, X428A, X428C, X428D, X428E, X428G, X428I, X428K, X428L, X428M, X428N, X428R, X428S, X428V, X428W, X428Y, X430A, X430C, X430D, X430E, X430F, X430G, X430I, X430L, X430P, X430Q, X430S, X430T, X430V, X435E, X435K, X435P, X435R, X435S, X435A, X435D, X437A, X437L, X437T, X437W, X441C, X441D, X441K, X441L, X441M, X441N, X441S, X444E, X444H, X444K, X444M, X444N, X444R, X444T, X450C, X450D, X450E, X450H, X450I, X450L, X450M, X450P, X450Q, X450R, X450T, X452A, X452C, X452E, X452F, X452I, X452K, X452M, X452N, X452R, X452T, X454A, X454E, X454K, X454L, X454M, X454P, X454S, X454T, X466E, X466W, X469F, X469L, X469Y, X473H, X473Q, X473R, X475A, X475K, X475N, X475E, X475L, X476G, X476E, X479A, X479I, X479K, X479M, X483F, X483I, X483L, X483Q, X483R, X485K 및 X485R로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 추가의 아미노산 치환을 추가로 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른 것인 알파-아밀라제 변이체.
바람직한 실시양태 15.): 상기 바람직한 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 치환의 수가 서열식별번호: 1과 비교하여 1 내지 30개, 바람직하게는 1 내지 25개, 1 내지 20개, 1 내지 15개, 1 내지 10개, 또는 1 내지 5개, 2 내지 30개, 2 내지 25개, 2 내지 20개, 2 내지 15개, 2 내지 10개, 2 내지 8개, 또는 2 내지 5개, 바람직하게는 3 내지 30개, 3 내지 25개, 3 내지 20개, 3 내지 15개, 3 내지 10개, 3 내지 8개, 또는 3 내지 5개, 바람직하게는 4 내지 30개, 4 내지 25개, 4 내지 20개, 4 내지 15개, 4 내지 10개, 또는 4 내지 8개인 알파-아밀라제 변이체.
바람직한 실시양태 16.) 상기 바람직한 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 상기 변이체가 서열식별번호: 3의 넘버링에 따른 X100D, X100F, X100K, X100L, X103A, X106D, X108A, X109A, X10A, X10C, X10E, X10F, X10L, X10W, X10Y, X113F, X113H, X113M, X113R, X113V, X113W, X113Y, X114A, X114C, X114D, X114E, X114F, X114G, X114H, X114I, X114K, X114L, X114M, X114N, X114Q, X114R, X114S, X114V, X114W, X114Y, X115C, X115D, X115K, X115M, X115N, X115Q, X115R, X115S, X115T, X115V, X116I, X116K, X116L, X116M, X116R, X116T, X117A, X117C, X117D, X117F, X117I, X117N, X117P, X117R, X117W, X117Y, X118A, X118D, X118E, X119H, X119P, X119R, X119S, X119Y, X120E, X120G, X120M, X120S, X120W, X120Y, X123D, X123S, X125A, X125D, X125E, X125F, X125G, X125H, X125K, X125L, X125M, X125N, X125Q, X125R, X125T, X125V, X125W, X125Y, X126D, X128C, X128E, X128L, X128M, X128W, X128Y, X129E, X12N, X12S, X131C, X131I, X131L, X131Q, X131W, X132T, X133A, X133C, X133D, X133E, X133H, X133K, X133N, X133P, X133Q, X133S, X134C, X134E, X134F, X134I, X134L, X134M, X134P, X134T, X134V, X134W, X134Y, X135D, X135E, X135G, X135M, X135N, X135P, X135S, X135T, X135W, X136A, X136C, X136D, X136E, X136F, X136H, X136L, X136M, X136N, X136P, X136W, X139C, X139S, X13A, X13Y, X141V, X142C, X142E, X142F, X142L, X142M, X142Q, X142R, X142W, X142Y, X143F, X144C, X144E, X144G, X144K, X144N, X144Q, X144R, X144S, X144T, X144V, X144Y, X145A, X146C, X146D, X146E, X146F, X146G, X146H, X146K, X146L, X146S, X146T, X146W, X147M, X149E, X14N, X150C, X150E, X150Q, X151C, X151E, X154A, X154Y, X155Y, X156E, X156V, X158H, X158N, X158Y, X15R, X160D, X160E, X160W, X161T, X162V, X163A, X163Q, X163T, X164V, X165S, X165T, X165W, X169A, X169D, X169E, X169S, X169V, X16F, X16R, X170C, X170F, X172A, X172C, X172D, X172K, X172N, X173I, X173Y, X174D, X174E, X174G, X174H, X174M, X174N, X174P, X174S, X174T, X175A, X175G, X175H, X175Q, X176K, X176S, X176T, X177A, X177G, X177K, X177N, X177P, X177R, X177S, X177W, X178F, X17K, X17V, X180M, X180N, X180T, X180W, X182D, X182E, X182N, X182Q, X182S, X185E, X185M, X185N, X187A, X187D, X187M, X187V, X188H, X188T, X188V, X189I, X18F, X18I, X18K, X18M, X18R, X18T, X191F, X191H, X191K, X191M, X191W, X191Y, X192A, X192T, X193D, X193E, X193G, X193V, X19A, X19C, X19D, X19F, X19G, X19H, X19I, X19K, X19L, X19M, X19P, X19Q, X19S, X19T, X19Y, X1R, X1V, X203E, X203R, X208F, X208I, X208Y, X20A, X20C, X20D, X20E, X20F, X20G, X20H, X20K, X20L, X20M, X20N, X20P, X20Q, X20S, X20T, X20V, X20W, X20Y, X210A, X210C, X210D, X210E, X210F, X210M, X210N, X210Q, X210S, X210Y, X211A, X211C, X211D, X211E, X211G, X211H, X211L, X211N, X211Q, X211S, X211T, X211V, X212C, X212D, X212I, X212L, X212W, X213A, X213C, X213M, X213R, X213S, X214E, X214P, X215A, X215D, X215E, X215H, X215W, X216G, X216H, X218A, X218C, X218D, X218E, X218F, X218G, X218H, X218I, X218K, X218L, X218N, X218Q, X218S, X218T, X218V, X218W, X218Y, X219A, X219C, X219D, X219E, X219F, X219G, X219H, X219K, X219M, X219Q, X219R, X219S, X219T, X219W, X219Y, X21E, X21S, X221F, X221N, X222D, X222K, X222S, X222T, X223C, X223L, X223V, X223Y, X224F, X224V, X225A, X225C, X225E, X225F, X225H, X225I, X225N, X225R, X225S, X225Y, X226A, X226C, X226D, X226E, X226G, X226H, X226I, X226L, X226M, X226Q, X226R, X226S, X226T, X226V, X226W, X226Y, X227C, X227F, X227G, X227H, X227I, X227K, X227L, X227M, X227R, X227T, X227V, X227W, X227Y, X22A, X22D, X22E, X22F, X22G, X22K, X22L, X22M, X22Q, X22R, X22T, X22W, X22Y, X230A, X230F, X231C, X231D, X231N, X233C, X233H, X233I, X233M, X233T, X233W, X233Y, X234C, X235L, X235M, X235V, X236Y, X237C, X237I, X238A, X238F, X238T, X23N, X23Q, X23W, X240M, X242M, X242N, X243D, X243F, X245E, X245H, X245M, X249D, X249I, X24G, X250V, X251A, X251E, X251F, X251L, X251M, X251S, X251T, X252C, X252I, X252S, X253C, X253G, X253Y, X255D, X255F, X255I, X255T, X255V, X256C, X257L, X257V, X257Y, X258F, X258Q, X258R, X259L, X25A, X25C, X25D, X25F, X25G, X25H, X25K, X25L, X25M, X25Q, X25S, X25W, X25Y, X260H, X261R, X262C, X262D, X262E, X262H, X262P, X262Y, X263I, X264H, X264T, X264W, X265S, X268F, X268G, X269M, X26A, X26D, X26E, X26F, X26L, X26M, X26P, X26S, X26V, X26Y, X270A, X270Q, X270Y, X271S, X272F, X272G, X272L, X272S, X273A, X273C, X273D, X273E, X273F, X273H, X273I, X273L, X273M, X273P, X273Q, X273R, X273V, X273W, X273Y, X274F, X274S, X275V, X276D, X276K, X276L, X276N, X276R, X276Y, X277D, X277E, X277T, X279A, X279P, X27A, X27D, X27F, X27G, X27H, X27I, X27Q, X27R, X27T, X27V, X280D, X280F, X280G, X280H, X280I, X280K, X280N, X280R, X280V, X280Y, X281A, X281D, X281E, X281H, X284A, X284F, X284H, X284L, X284M, X284N, X284Y, X285G, X285L, X285N, X285P, X286Q, X287A, X287D, X287E, X287H, X287T, X288A, X288K, X288P, X288Y, X289F, X289G, X289R, X289T, X28C, X28D, X28E, X28F, X28G, X28I, X28K, X28N, X28Q, X28S, X28T, X28V, X290D, X290M, X290N, X290Q, X290W, X291D, X291K, X291T, X291Y, X292C, X292D, X292F, X292I, X292L, X292T, X292W, X292Y, X293D, X293E, X293F, X293K, X293R, X294G, X294T, X295F, X296A, X296C, X296L, X296Y, X297E, X297F, X297H, X297K, X297M, X297S, X297V, X299G, X299I, X299K, X299L, X299S, X299Y, X29D, X29E, X29F, X29G, X29H, X29I, X29K, X29L, X29N, X29P, X29Q, X29V, X29W, X29Y, X2I, X2S, X301F, X302H, X302I, X302Q, X302V, X302Y, X303E, X303H, X303I, X303K, X303L, X303M, X303N, X303P, X303R, X303T, X304A, X304D, X304E, X304H, X304K, X304M, X304N, X304P, X304R, X304T, X304W, X304Y, X306A, X306D, X306E, X306G, X306H, X306I, X306M, X306Q, X306R, X306S, X306T, X306V, X306W, X306Y, X307F, X307M, X308S, X309H, X309L, X309Q, X30A, X30E, X30F, X30G, X30H, X30I, X30K, X30L, X30M, X30Q, X30T, X30W, X30Y, X310A, X310Q, X311A, X311E, X311G, X311H, X311K, X311N, X311R, X311T, X311Y, X312L, X312M, X313V, X314C, X314E, X314K, X314Q, X315A, X315C, X315E, X315H, X315K, X315T, X318I, X318S, X318T, X319A, X319D, X319H, X319I, X319K, X319M, X319N, X319P, X319S, X319T, X319W, X31N, X31Q, X31S, X31T, X31V, X31W, X320A, X320C, X320D, X320E, X320G, X320H, X320K, X320L, X320N, X320Q, X320S, X320Y, X321A, X321E, X321K, X321N, X321T, X321V, X321W, X323A, X323G, X323K, X323L, X323V, X324K, X324L, X324M, X324W, X324Y, X326G, X326N, X326S, X326Y, X327C, X327L, X327M, X32A, X32D, X32E, X32F, X32H, X32I, X32L, X32M, X32N, X32P, X32Q, X32T, X32W, X333I, X334T, X336K, X337A, X337C, X337F, X337G, X337I, X337K, X337L, X337M, X337N, X337Q, X337R, X337S, X337T, X337V, X337Y, X338G, X338S, X338T, X33D, X33E, X33H, X33K, X33M, X33Q, X33R, X33Y, X341V, X342P, X343L, X343T, X343W, X343Y, X344I, X344Q, X344V, X345D, X345G, X345M, X345N, X345Q, X345S, X345T, X346A, X346C, X346D, X346G, X346H, X346N, X346Q, X348T, X34H, X34I, X34V, X350H, X350K, X350P, X351A, X351M, X352S, X353H, X354I, X354N, X354T, X354Y, X355I, X355M, X356I, X356V, X357A, X358I, X358L, X358N, X358P, X358V, X359E, X35A, X35C, X35D, X35G, X35H, X35I, X35L, X35M, X35N, X35P, X35Q, X35R, X35S, X35T, X35V, X35Y, X360A, X360F, X360G, X360I, X360L, X360N, X360Q, X360R, X360S, X360T, X360V, X360Y, X362F, X362K, X362M, X362N, X362T, X362V, X362Y, X363A, X363C, X363D, X363E, X363G, X363H, X363K, X363L, X363M, X363P, 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X429W, X42C, X42I, X42Q, X42V, X431I, X434S, X436E, X438F, X438P, X438Y, X439K, X439C, X439P, X440V, X442Q, X443H, X443T, X445A, X445C, X445D, X445F, X445G, X445H, X445K, X445M, X445Q, X445R, X445S, X445T, X445V, X446F, X446I, X446L, X446P, X446Q, X446R, X446V, X446W, X447V, X448D, X448E, X448H, X448N, X449A, X449F, X449G, X449K, X449L, X449M, X449N, X449P, X449Q, X449R, X449S, X449V, X449W, X449Y, X451L, X453G, X453I, X453N, X453P, X453Y, X455L, X456L, X456M, X456R, X456S, X456V, X456W, X456Y, X457A, X457C, X457E, X457F, X457G, X457K, X457L, X457M, X457R, X457S, X457T, X457V, X457W, X458I, X458K, X458V, X458W, X459C, X459D, X459E, X459I, X459K, X459N, X459Q, X459R, X459V, X459Y, X45G, X45N, X460A, X460D, X460E, X460G, X460Q, X460R, X460S, X460T, X460V, X461A, X461E, X461F, X461K, X461L, X461M, X461N, X461Q, X461R, X461S, X461V, X462K, X463L, X465H, X465P, X465R, X465V, X467A, X467E, X467H, X468D, X468H, X470A, X470Q, X470T, X471E, X474F, X474H, X474P, X478A, X478E, X47S, X480D, X480E, X480M, X480R, X480Y, X482C, X482T, X482W, X48F, X48I, X48M, X48Y, X4A, X4C, X4K, X4M, X4Q, X4R, X4S, X51Q, X51T, X51V, X54D, X54G, X54Q, X59T, X5A, X5C, X5D, X5E, X5F, X5H, X5I, X5K, X5L, X5M, X5N, X5P, X5Q, X5R, X5V, X5Y, X60T, X63C, X63V, X6A, X6C, X6E, X6F, X6G, X6H, X6K, X6L, X6M, X6P, X6Q, X6S, X6T, X6V, X6W, X6Y, X70F, X70H, X70L, X70M, X70N, X70Y, X71D, X72C, X72D, X72E, X72N, X72T, X73L, X73N, X73Q, X75A, X75G, X75I, X75L, X75P, X75T, X75W, X76C, X76E, X76G, X76L, X76T, X76V, X7C, X7E, X7F, X7H, X7K, X7N, X7P, X7Q, X7R, X7S, X7V, X7W, X7Y, X81H, X81L, X82K, X82M, X83A, X83D, X83E, X83G, X83R, X83S, X86K, X87D, X87R, X89A, X89C, X89F, X89G, X89L, X89M, X89R, X89S, X8A, X8C, X8F, X8I, X8M, X8P, X8S, X8V, X8W, X8Y, X90A, X90D, X90E, X90F, X90G, X90I, X90M, X90N, X90Q, X90R, X90S, X90V, X90Y, X91C, X91D, X91E, X91F, X91G, X91H, X91I, X91K, X91L, X91M, X91N, X91Q, X91S, X91T, X91V, X91W, X91Y, X92D, X92M, X92V, X93K, X93Q, X94A, X94D, X94E, X94K, X94M, X94V, X94Y, X95E, X95I, X95L, X95V, X96K, X96N, X96Q, X97V, X98E, X98G, X98N, X99H, X99K, X99N, X100W 및 X1G로 이루어진 아미노산 치환의 군으로부터 선택된 아미노산 치환 중 1개 이상, 바람직하게는 1-30개를 갖는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어지고/거나, 바람직하게는 1-10개의 보존적 아미노산 치환을 추가로 포함하고/거나, 9, 130, 179, 181, 186, 190, 195, 202, 206, 244, 402, 419, 420, 422, 423, 428, 430, 435, 441, 444, 450, 452, 454, 466, 469, 473, 475, 476, 479, 483 및 485로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1-10개의 위치에서 추가의 아미노산 치환, 바람직하게는 X9D, X9F, X9K, X9L, X9N, X9P, X9Q, X9S, X9T, X9Y, X130V, X179G, X179L, X181D, X181E, X181F, X181H, X181I, X181N, X181Q, X181S, X181T, X181V, X181W, X181Y, X186A, X186C, X186D, X186E, X186F, X186H, X186I, X186K, X186L, X186M, X186N, X186Q, X186R, X186S, X186V, X186W, X186Y, X190H, X195F, X195H, X195K, X195L, X195W, X195Y, X202L, X206C, X206H, X206L, X206M, X206Y, X244A, X244C, X244D, X244E, X244F, X244G, X244H, X244M, X244N, X244Q, X244V, X402T, X419C, X420D, X420E, X420G, X420H, X420K, X420L, X420Q, X422C, X422N, X422H, X423F, X423M, X423Q, X423S, X428A, X428C, X428D, X428E, X428G, X428I, X428K, X428L, X428M, X428N, X428R, X428S, X428V, X428W, X428Y, X430A, X430C, X430D, X430E, X430F, X430G, X430I, X430L, X430P, X430Q, X430S, X430T, X430V, X435E, X435K, X435P, X435R, X435S, X435A, X435D, X437A, X437L, X437T, X437W, X441C, X441D, X441K, X441L, X441M, X441N, X441S, X444E, X444H, X444K, X444M, X444N, X444R, X444T, X450C, X450D, X450E, X450H, X450I, X450L, X450M, X450P, X450Q, X450R, X450T, X452A, X452C, X452E, X452F, X452I, X452K, X452M, X452N, X452R, X452T, X454A, X454E, X454K, X454L, X454M, X454P, X454S, X454T, X466E, X466W, X469F, X469L, X469Y, X473H, X473Q, X473R, X475A, X475K, X475N, X475E, X475L, X476G, X476E, X479A, X479I, X479K, X479M, X483F, X483I, X483L, X483Q, X483R, X485K 및 X485R로 이루어진 아미노산 치환의 군으로부터 선택된 1-10개의 추가의 아미노산 치환을 추가로 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른 것인 알파-아밀라제 변이체.
바람직한 실시양태 17.): 상기 바람직한 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 상기 변이체가 표 8-12 중 임의의 것으로부터 선택된, 바람직하게는
서열식별번호: 3의 넘버링에 따른 N25H+R176K+G186E+I206Y+R181Q, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y135T, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+T193E, N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E, G4Q+N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E+L405M, N25H+R176K+G186E+I206Y, N25H+G186E+I206Y+L405M, N25H+G186E+I206Y, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E, G4Q+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+L405M, N25H+R176K+G186E, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y, G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E+L405M, N25H+R176K+G186E+I206Y, G4Q+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+L405M, G4Q+I206Y+N460G, G4Q+N25H+R176K+I206Y+T251E+N460G, G4Q+N25H+R176K+T193E+T251E+G186E, G4Q+T193E+I206Y+E276R+G186E, G186E+N25H, N25H+T193E+I206Y+T251E+E276R+L405M+G186E, N25H+T251E+G186E, N25H+Y160W+R176K+G186E+T251E+L405M, T193E+I206Y+L405M+G186E, N25H+R176K+G186E+I206Y+G258Q+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+R181Q, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+Q359R, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+G258Q, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+G258Q+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+Y135T, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y100W+Y135T+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y135T, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y135T+G258Q, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y135T+G258Q+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y135T+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y363E, N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E+Y482W, N25H+R176K+G186E+I206Y+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+Y482W, G4Q+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+L405M+Y482W, G4Q+N25H+R176K+G186E+T251E+L405M+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y+Y482W, G4Q+N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E+L405M+Y482W, N25H+G186E+I206Y+L405M+Y482W, N25H+R176K+G186E+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+N460G, G4Q+N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E+N460G, N25H+R176K+G186E+T193E+I206Y+T251E+N460G+Y482W, G4Q+N25H+R176K+G186E+I206Y+T251E+N460G+Y482W, N25H+R176K+G186E+N195F+T251E+Y482W, N25H+R176K+G186E+N195F+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+N195F+T251E+Y482W, G4Q+R176K+G186E+T193E+N195F+T251E+L405M+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+N195F+Y482W, G4Q+N25H+R176K+G186E+N195F+T251E+L405M+Y482W, N25H+G186E+N195F+L405M+Y482W, N25H+R176K+G186E+T193E+N195F+T251E+N460G, G4Q+N25H+R176K+G186E+N195F+T251E+N460G, N25H+R176K+G186E+T193E+N195F+T251E+N460G+Y482W, 및 G4Q+N25H+R176K+G186E+N195F+T251E+N460G+Y482W로 이루어진 군으로부터 선택된 치환의 조합을 포함하는 것인 알파-아밀라제 변이체.
바람직한 실시양태 18.): 상기 실시양태 중 어느 하나에 따른 알파-아밀라제 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
바람직한 실시양태 19.): 실시양태 18.)에 따른 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 구축물 또는 발현 벡터.
바람직한 실시양태 20.): 실시양태 18.)에 따른 폴리뉴클레오티드, 실시양태 19.)에 따른 핵산 구축물, 또는 실시양태 19.)에 따른 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포.
바람직한 실시양태 21.): 상기 실시양태에 기재된 알파-아밀라제 변이체를 포함하는 조성물로서, 여기서 조성물이 알파-아밀라제 변이체와 상이한 1종 이상의 제2 효소를 포함하고, 바람직하게는 제2 효소가 프로테아제, 리파제 또는 만난아제, 바람직하게는 만난아제 또는 프로테아제, 특히 바람직하게는 프로테아제, 바람직하게는 서브틸리신 프로테아제, 바람직하게는 서열식별번호: 10-14 중 임의의 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 대해 적어도 60% 서열 동일성을 갖는 서브틸리신 프로테아제이고, 바람직하게는 프로테아제가 BPN' 넘버링에 따른 위치 101에서 글루탐산을 포함하는 것인 조성물.
바람직한 실시양태 22.): 상기 바람직한 실시양태에 기재된 바와 같은 알파-아밀라제 변이체를 포함하는 조성물로서, 여기서 조성물이 바람직하게는 세제 조성물 kg당 활성 알파-아밀라제 변이체 1-1000 mg, 바람직하게는 5-500 mg/kg, 5-300 mg/kg, 10-200 mg/kg 또는 50-200 mg/kg의 양으로 상기 바람직한 실시양태에서의 알파-아밀라제 변이체를 포함하는, 바람직하게는 본 발명의 알파-아밀라제와 상이한 추가의 효소, 계면활성제, 탈포제, 빌딩제 (빌더), 중합체, 표백 시스템 (표백제), 레올로지 개질제, 굴수성제, 연화제, 건조제, 미백제, 완충제, 보존제, 부식방지 첨가제, 염료 및 향료로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 추가의 성분을 포함하는 세제 조성물이고, 바람직하게는 세제의 적어도 1종의 성분이 계면활성제 및/또는 빌더, 바람직하게는 강한 격리 빌더인 조성물.
바람직한 실시양태 23.): 실시양태 21.) 및 22.)에 있어서, 세제 조성물이 액체 또는 고체, 바람직하게는 세탁 세제 조성물 또는 자동 식기 세척 (ADW) 세제 조성물, 바람직하게는 파우치 형태인 조성물.
바람직한 실시양태 24.): 알파-아밀라제 변이체를 생산하는 방법으로서
a. 실시양태 20.)에 따른 상기 숙주 세포를 상기 알파-아밀라제 변이체의 발현에 적합한 조건 하에 배양하는 단계; 및
b. 상기 알파-아밀라제 변이체를 회수하는 단계
를 포함하는 방법.
바람직한 실시양태 25.): 세정 공정, 예컨대 세탁 또는 경질 표면 세정에서의 상기 실시양태에 기재된 바와 같은 알파-아밀라제 변이체의 용도.
바람직한 실시양태 26.): 상기 바람직한 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 1개 이상의 아미노산 치환이 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라:
a) 4, 429 및 459로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
b) 4, 25, 116, 176, 225, 251, 320, 400, 405, 408, 410, 418, 429, 446, 449, 458, 459, 460, 471 및 482로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
c) 4, 25, 176, 251, 405 및 482로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
d) 4, 6, 10, 12, 13, 14, 15, 17, 20, 21, 22, 23, 24, 27, 28, 32, 34, 36, 38, 39, 42, 45, 47, 51, 70, 75, 76, 83, 89, 92, 95, 96, 99, 100, 108, 115, 154, 156, 164, 191, 192, 213, 215, 221, 222, 223, 226, 233, 234, 236, 237, 240, 245, 249, 268, 271, 277, 282, 285, 288, 289, 290, 297, 301, 308, 309, 312, 326, 327, 333, 336, 338, 341, 343, 348, 351, 352, 353, 355, 356, 358, 366, 367, 370, 376, 379, 381, 389, 392, 399, 413, 424, 426, 429, 432, 436, 440, 442, 443, 448, 451, 453, 456, 459, 463, 468 및 480으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
e) 4, 429 및 459로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
f) 4, 10, 12, 13, 14, 15, 17, 20, 21, 23, 24, 27, 34, 36, 38, 39, 42, 45, 47, 51, 89, 92, 99, 100, 108, 115, 164, 191, 192, 213, 221, 222, 223, 233, 234, 236, 237, 240, 245, 249, 268, 271, 282, 288, 289, 290, 297, 301, 308, 309, 312, 326, 327, 333, 336, 338, 341, 343, 348, 351, 352, 353, 355, 356, 358, 366, 367, 370, 376, 379, 381, 389, 392, 413, 424, 426, 429, 432, 440, 442, 443, 448, 451, 453, 456, 468 및 480으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
g) 4 및 429로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
h) 13, 17, 22, 23, 27, 28, 32, 36, 42, 51, 70, 75, 83, 89, 92, 95, 96, 154, 192, 215, 222, 226, 233, 245, 277, 282, 285, 288, 297, 312, 338, 341, 343, 353, 355, 356, 376, 379, 381, 389, 429, 432, 442, 451, 459 및 463으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
i) 13, 17, 23, 27, 36, 42, 51, 89, 92, 192, 215, 222, 233, 245, 277, 282, 288, 297, 312, 338, 341, 343, 353, 355, 356, 376, 379, 381, 389, 429, 432, 442 및 451로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
j) 13, 18, 146, 163, 170, 188, 224, 238, 242, 245, 353, 385, 388, 405, 432, 442, 474 및 478로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
1, 2, 3, 5, 7, 8, 9, 11, 16, 18, 19, 25, 26, 29, 30, 31, 35, 37, 40, 41, 43, 44, 46, 48, 49, 50, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 71, 72, 73, 74, 77, 78, 79, 80, 81, 84, 85, 86, 87, 88, 90, 91, 93, 94, 97, 98, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 151, 152, 153, 155, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 216, 217, 218, 219, 220, 224, 225, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 235, 238, 239, 241, 242, 243, 244, 246, 247, 248, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 269, 270, 272, 273, 274, 275, 276, 278, 279, 280, 281, 283, 284, 286, 287, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 299, 300, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 310, 311, 313, 314, 315, 316, 317, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 328, 329, 330, 331, 332, 334, 335, 337, 339, 340, 342, 344, 345, 346, 347, 349, 350, 354, 357, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 368, 369, 371, 372, 373, 374, 375, 377, 380, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 390, 391, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 425, 427, 428, 430, 431, 433, 434, 435, 437, 438, 439, 441, 444, 445, 446, 447, 449, 450, 452, 454, 455, 457, 458, 460, 461, 462, 464, 465, 466, 467, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 481, 483, 484 및 485로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
k) 25, 116, 176, 181, 183, 186, 206, 225, 251, 320, 400, 402, 405, 408, 409, 410, 418, 419, 420, 422, 423, 437, 441, 444, 446, 449, 452, 458, 460, 466, 471, 473, 475, 484 및 485로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
l) 25 및 176으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
m) 4, 25, 176, 251, 405, 439 및 482로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
n) 25, 176 및 186으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
o) 4, 25, 176, 186, 251, 405, 439 및 482로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
p) 116, 181, 225 및 320으로 이루어진 군으로부터 선택되고,
바람직하게는 25 및 176으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 4, 25, 176, 251, 405, 439 및 482로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 116, 181, 225 및 320으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인
알파-아밀라제 변이체.
실시예
실시예 1
개선된 모 알파-아밀라제
ALBA 아밀라제 (서열식별번호: 3)를 아미노산 G182 및 D183을 결실시킴으로써 변형시켜 아밀라제의 안정성을 증가시켰다. 생성된 아밀라제 변이체는 서열식별번호: 4에 제시된 바와 같은 아밀라제 A이다. 아밀라제 A의 세척 성능을 본원에 기재된 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 아밀라제로서의 역할을 하는 아밀라제 B (서열식별번호: 1에 제시됨)와 마이크로규모 세척 시험 및 라운더로미터(Launderometer)를 사용하여 비교하였다.
마이크로규모 세정 성능 시험을 위해, 아밀라제 A 및 B를 사용하여, 실온에서 물 (15°dH)로 희석된 3.3 g/L ES1-C (상기 표 1b에 기재된 바와 같음) 중에서 세척액에 아밀라제를 0.02, 0.05 및 0.1 ppm으로 첨가하여 60분 동안 오래된 옥수수 전분 얼룩 (CS-126)으로부터 오염을 제거한 후, 흐르는 물 하에 5분 동안 헹구고, 건조시켰다.
세척 성능은 세척된 텍스타일의 색의 명도로서 측정된다. 명도는 또한 백색 광으로 조명시 샘플로부터 반사된 광의 강도로서 표현될 수 있다. 샘플이 얼룩진 경우, 반사광의 강도는 깨끗한 샘플의 강도보다 더 낮다. 또 다른 방식으로 표현하면, 더 깨끗한 샘플은 더 많은 광을 반사할 것이고 더 높은 강도를 가질 것이다. 따라서, 반사광의 강도를 사용하여 세척 성능을 측정할 수 있다. 색 측정은 결과로서 개별 얼룩에 대한 RGB 값의 평균으로 디지털 색 측정으로 이루어진다. 세제 베이스에 대한 값을 빼고, 아밀라제 B의 성능 대 아밀라제 A의 성능의 비를 만들었고, 100% 초과의 값은 아밀라제 A에 의한 성능보다 더 높은 성능을 나타낸다.
하기 표 2에 적어도 2회의 실험의 평균이 주어진다.
동일한 세척 시험을 상기 표 1a의 제제 A에 따른 상이한 세제를 사용하여 실온에서 세척액에 아밀라제를 0.02, 0.05 또는 0.1 ppm으로 첨가하여 60분 동안 수행한 후, 흐르는 물 하에 5분 동안 헹구고, 건조시키고, RGB 값의 평균으로서 반사광의 강도에 대해 측정하였다. 세제 베이스에 대한 값을 빼고, 아밀라제 B의 성능 대 아밀라제 A의 성능의 비를 만들었고, 100% 초과의 값은 아밀라제 A에 의한 성능보다 더 높은 성능을 나타낸다.
하기 표 3에 적어도 2회 실험의 평균이 주어진다.
라운더로미터 세척 시험을 위해, 아밀라제 A 및 B를 사용하여, 40℃에서 물 (15°dH)로 희석된 3.5 g/L 상업용 퍼실 논-바이오(Persil Non-Bio) 중에서 세척액에 아밀라제를 0.02, 0.05 또는 0.1 ppm으로 첨가하여 40분 동안 다양한 오염된 얼룩 (CS-129 오래된 타피오카, EMPA161 목화 전분, CS-26 옥수수 전분, CS-28 쌀 전분, CS-28 타피오카 전분)을 세척한 후, 흐르는 물 하에 5분 동안 헹구고, 건조시키고, RGB 값의 평균으로서 반사광의 강도에 대해 측정하였다. 세제 베이스에 대한 값을 빼고, 아밀라제 B의 성능 대 아밀라제 A의 성능의 비를 만들었고, 100% 초과의 값은 아밀라제 A에 의한 성능보다 더 높은 성능을 나타낸다.
하기 표 4에 적어도 2회의 실험의 평균이 주어진다.
상기 표로부터, 아밀라제 B가 모든 시험된 세제에서 아밀라제 A에 비해 우수하다는 것이 분명해진다.
실시예 2
모 아밀라제의 알파-아밀라제 변이체의 개선된 온도 안정성
보다 안정한 변이체를 열 챌린지 검정을 사용하여 확인하였다. 따라서, 아밀라제 B (실시예 1에서 시험됨; 서열식별번호: 1)의 알파-아밀라제의 단일 돌연변이를 발현하는 바실루스 리케니포르미스의 개별 상청액을 384 웰 플레이트 상에서 100 mM HEPES (pH 8)를 사용하여 희석하였으며, 아밀라제 B는 양성 대조군이었다. 희석물을 2개의 플레이트로 분할하고, 하나의 플레이트는 기준선 활성을 나타내는 8℃에서 저장하고, 다른 플레이트는 챌린지 값을 나타내는 92℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 활성 측정을 위해, 샘플 3 μL를 1.1% 적색 전분 용액 (100 mM HEPES pH 8 중) 27 μL에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 60 μL 빙냉 에탄올 (95%)을 첨가하여 반응을 정지시키고, 원심분리 후에 40 μL의 상청액을 꺼내고, 새로운 384 웰 플레이트에 첨가하였다. 510 nm에서의 흡광도를 기록하였다. 챌린지된 샘플의 흡광도 값을 기준선 샘플에 대한 흡광도 값으로 나눔으로써, 잔류 활성을 계산하였다. 개선 지수는 변이체의 잔류 활성 대 아밀라제 B (서열식별번호: 1)의 잔류 활성의 비이다. 표에서, 모체에 대해 상승된 온도 안정성을 갖는 아밀라제 변이체가 제공된다 (서열식별번호: 3에 따른 넘버링).
결과는 하기 표 5에 주어진다:
실시예 3
아밀라제 B (서열식별번호: 1)에 비해 40℃에서의 상기 표 1a의 제제 A에 따른 세제에서의 서열식별번호: 1의 단일 점 돌연변이의 저장 안정성.
개선된 열 안정성이 또한 세제에서의 상승된 안정성과 관련되는지 여부를 추가로 평가하기 위해, 아밀라제 B (서열식별번호: 1)의 변이체를 세제 중에 제제화하고, 40℃에서 3일 저장 후 그의 잔류 활성에 대해 시험하였다.
액체 세탁 세제에서의 저장은 상기 표 1a의 제제 A에 따른 세제 중에서 아밀라제를 인큐베이션함으로써 수행하였다. 따라서, 아밀라제를 발현하는 바실루스 리케니포르미스로부터의 희석된 상청액 5 μL를 45 μL 세제에 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 인큐베이션하고, 지시된 시점 후에 5 μL의 세제 혼합물을 꺼내고, 45 μL MOPS 완충제 (50 mM, 1 mM CaCl2 pH 7.0으로 보충됨)를 사용하여 희석하였다. 이 혼합물 25 μL에 인피니티 아밀라제 시약 25 μL를 첨가하였다. 활성은 5분에 걸쳐 5 점 MaxV로서 계산된 405 nm에서의 기울기이다. 잔류 활성은 저장 시간 후의 활성을 시점 0에서의 샘플의 활성으로 나눔으로써 계산하였다. 잔류 활성을 참조 아밀라제 B (서열식별번호: 1)의 잔류 활성과 비교하였다.
하기 표 6에서, 아밀라제 B (서열식별번호: 1)에 비해 개선된 잔류 활성을 갖는 돌연변이가 주어진다 (서열식별번호: 3에 따른 넘버링).
표 6: 아밀라제 B (서열식별번호: 1)에 비해 40℃에서의 세제 제제 A에서의 저장 안정성. 챌린지 3일 후의 잔류 활성이 주어진다.
실시예 4
40℃에서 7일 동안 ES1-C 세제에서의 저장 안정성.
개선된 열 안정성이 또한 세제에서의 상승된 안정성과 관련되는지 여부를 추가로 평가하기 위해, 아밀라제 B (서열식별번호: 1)의 변이체를 세제 중에 제제화하고, 40℃에서 7일 저장 후 그의 잔류 활성에 대해 시험하였다.
액체 세탁 세제에서의 저장은 ES1-C (상기 표 1b에 기재된 바와 같음) 세제 중에서 아밀라제를 인큐베이션함으로써 수행하였다. 따라서, 아밀라제를 발현하는 바실루스 리케니포르미스로부터의 희석된 상청액 5 μL를 45 μL 세제에 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 인큐베이션하고, 지시된 시점 후에 5 μL의 세제 혼합물을 꺼내고, 45 μL MOPS 완충제 (50 mM, 1 mM CaCl2 pH 7.0으로 보충됨)를 사용하여 희석하였다. 이 혼합물 25 μL에 인피니티 아밀라제 시약 25 μL를 첨가하였다. 활성은 5분에 걸쳐 5 점 MaxV로서 계산된 405 nm에서의 기울기이다. 잔류 활성은 저장 시간 후의 활성을 시점 0에서의 샘플의 활성으로 나눔으로써 계산하였다. 잔류 활성을 참조 아밀라제 B (서열식별번호: 1)의 잔류 활성과 비교하였다. 하기 표 7에서, 서열식별번호: 1에 비해 개선된 잔류 활성을 갖는 돌연변이가 주어진다 (서열식별번호: 3에 따른 넘버링).
표 7: 아밀라제 B (서열식별번호: 1)에 비해 40℃에서의 세제 ES1-C에서의 저장 안정성. 챌린지 3일 후의 잔류 활성.
실시예 5
안정화 돌연변이의 조합 라이브러리
아밀라제 B (서열식별번호: 1)에서의 돌연변이를 조합하여 아밀라제 B (서열식별번호: 1)에 비해 다중 돌연변이를 갖는 아밀라제를 생성하였다. 개선된 열 안정성이 또한 세제에서의 상승된 안정성과 관련되는지 여부를 추가로 평가하기 위해, 아밀라제 B (서열식별번호: 1)의 변이체를 상기 표 1a의 제제 A에 따라 세제 중에 제제화하고, 지시된 시점 후에 그의 잔류 활성에 대해 시험하였다. 프로테아제의 첨가 하에 또는 첨가 없이 40℃ 또는 50℃에서 저장하였다 (첨가되는 경우에: R101E 돌연변이 (BPN' 넘버링)를 포함하는 바실루스 렌투스로부터의 서브틸리신 프로테아제 (BLAP) 0.3 g/L).
액체 세탁 세제에서의 저장은 세제 중에서 아밀라제를 인큐베이션함으로써 수행하였다. 따라서, 아밀라제를 발현하는 바실루스 리케니포르미스로부터의 희석된 상청액 25 μL를 475 μL 세제에 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 인큐베이션하고, 지시된 시점 후에 10 μL의 세제 혼합물을 꺼내고, 90 μL MOPS 완충제 (50 mM, 1 mM CaCl2 pH 7.0으로 보충됨)를 사용하여 희석하였다. 이 혼합물 50 μL에 인피니티 아밀라제 시약 50 μL를 첨가하였다. 활성은 5분에 걸쳐 5 점 MaxV로서 계산된 405 nm에서의 기울기이다. 잔류 활성은 저장 시간 후의 활성을 시점 0에서의 샘플의 활성으로 나눔으로써 계산하였다. 잔류 활성을 참조 아밀라제 B (서열식별번호: 1)의 잔류 활성과 비교하였다. 하기 표의 넘버링은 서열식별번호: 3에 따른다.
하기 표 8에서, 프로테아제의 존재 하에 40℃에서 저장된, 28일 저장 후의 잔류 활성에 대한 결과가 제시된다.
하기 표 9에서, 프로테아제의 부재 하에 40℃에서 저장된, 세제에서의 7일 저장 후의 잔류 활성에 대한 결과가 제시된다.
하기 표 10에, 프로테아제 (세제 중 프로테아제 0.3 g/L)의 존재 하에 40℃에서 저장된, 세제에서의 7일 저장 후의 잔류 활성에 대한 결과가 제시된다.
하기 표 11에서, 프로테아제의 부재 하에 50℃에서 저장된, 세제에서의 8일 저장 후의 잔류 활성에 대한 결과가 제시된다.
하기 표 12에서, 프로테아제의 부재 하에 40℃에서 저장된, 세제에서의 7일 저장 후의 잔류 활성에 대한 결과가 제시된다.
실시예 6
세척 시험
관심 위치에서 여러 아미노산 치환을 함유하는 아밀라제 B (서열식별번호: 1)의 변이체의 마이크로규모 세척 시험을 위해, 직물로서 CS-126을 사용하여 실시예 1에 기재된 방법을 사용하여 세척 성능에 대해 평가하였다.
하기 표 13은 단일 아미노산 치환을 함유하는 아밀라제 B 변이체에 대한 결과를 기재한다 (서열식별번호: 3에 따른 넘버링).
하기 표 14는 아밀라제 B에 다중 아미노산 치환을 함유하는 아밀라제 B 변이체에 대한 결과를 기재한다 (서열식별번호: 3에 따른 넘버링).
SEQUENCE LISTING
<110> BASF SE
Henkel AG & Co. KGAA
<120> Amylase Variants
<130> 210083
<150> EP21158484.2
<151> 2021-02-22
<150> EP21213738.4
<151> 2021-12-10
<160> 41
<170> BiSSAP 1.3.6 and according WIPO Std. 25
<210> 1
<211> 483
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence
<400> 1
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130 135 140
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Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Thr Thr Gly
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260 265 270
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290 295 300
Tyr Asp Met Arg Gln Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Arg His Pro
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Thr His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro Glu Glu
325 330 335
Ala Leu Glu Ser Phe Val Glu Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala
340 345 350
Leu Thr Leu Thr Arg Asp Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr Gly Asp
355 360 365
Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Lys Ser Lys Ile
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Val Gln Gln
<210> 2
<211> 1449
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence
<400> 2
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ggaaatcatt ggaacagatt gcgctctgat gcaagcaacc ttaaagataa gggcataaca 120
gctgtttgga ttccgccagc atggaaaggc gccagtcaaa acgacgtcgg atatggagcg 180
tacgatctgt atgatttagg cgagtttaat cagaaaggca cagtaagaac gaaatatgga 240
accaggaatc aacttcaggc ggctgtgacg gccctcaagt ctaatggcat tcaggtgtat 300
ggcgacgttg tgatgaacca caaaggagga gctgatgcga cagaatgggt tagagcagtc 360
gaagtaaatc ctagcaatcg aaaccaggag gtgagcggtg attacacaat cgaggcatgg 420
accaaattcg actttcctgg acgtggcaac acacatagta attttaagtg gagatggtat 480
cacttcgatg gcgtagactg ggatcaatct agacagttac agaaccggat ctacaaattt 540
cgcggaaaag gctgggattg ggaagttgat acggagaacg gcaattatga ttacttgatg 600
tacgcagata tcgacatgga tcatccggaa gtggtcaatg agttacgtaa ttggggcgtc 660
tggtacacta acacactggg ccttgacgga ttccgcattg atgcggttaa acatatcaaa 720
tattcgttta cgcgcgactg gttaactcat gtccggaata caacaggcaa gaatatgttt 780
gctgttgcag aattttggaa aaacgatatc ggcgcgattg aaaattatct ttcaaagact 840
aactggaatc attccgtatt cgacgtgcct ttgcactaca acctgtataa tgcgtcgcgc 900
tccggcggta actatgacat gcgacaaatc ttcaacggca cagtcgttca gcgtcacccc 960
acacacgctg ttacatttgt agacaaccat gacagccaac cggaggaagc tcttgaaagc 1020
ttcgtagaag aatggtttaa gcctctggcc tatgcgctga cgcttacgcg ggatcaagga 1080
tacccgagcg tgttttatgg agattactat ggcattccga cgcatggcgt gccagccatg 1140
aaatcaaaaa ttgatccgat actcgaagcc agacaaaaat atgcatatgg tactcaacgg 1200
gattatttgg accatccgga tgtcattggt tggacccgtg aaggagatgg agtacatgct 1260
gactctggct tagccacact gatgtccgat ggtcctggag gctcaaaatg gatggaagtg 1320
ggtaagaaca atgcaggtga agtttggtat gatattaccg gcaatcagac gaatacggtt 1380
actattaata aagatggttg gggacaattt catgtctcag gcggctctgt ctcaatctat 1440
gttcagcag 1449
<210> 3
<211> 485
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence
<400> 3
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence
<400> 4
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340 345 350
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355 360 365
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Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Lys Tyr Ala Tyr Gly Lys Gln Asn
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<210> 5
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence
<400> 5
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20 25 30
Leu Ala Gln Lys Gly Ile Thr Ser Val Trp Ile Pro Pro Ala Tyr Lys
35 40 45
Gly Thr Thr Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr Asp
50 55 60
Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr
65 70 75 80
Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Ile Glu Ala Leu His Lys Gln Asn Ile
85 90 95
Asn Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp Tyr
100 105 110
Thr Glu Thr Val Thr Ala Val Glu Val Asp Arg Asn Asn Arg Asn Ile
115 120 125
Glu Val Ser Gly Asp Tyr Glu Ile Asn Ala Trp Thr Gly Phe Asn Phe
130 135 140
Pro Gly Arg Gly Asp Thr His Ser Asn Phe Lys Trp Lys Trp Tyr His
145 150 155 160
Phe Asp Gly Thr Asp Trp Asp Glu Gly Arg Lys Leu Asn Arg Ile Tyr
165 170 175
Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Ser Ser Glu
180 185 190
Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Leu Asp Phe Asp His
195 200 205
Pro Asp Val Ala Asn Glu Met Lys Asn Trp Gly Thr Trp Tyr Ala Asn
210 215 220
Glu Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Asp
225 230 235 240
His Glu Tyr Leu Arg Asp Trp Val Asn His Val Arg Gln Gln Thr Gly
245 250 255
Lys Glu Met Phe Thr Val Ala Glu Tyr Trp Gln Asn Asp Ile Gln Thr
260 265 270
Leu Asn Asn Tyr Leu Ala Lys Val Asn Tyr Asn Gln Ser Val Phe Asp
275 280 285
Ala Pro Leu His Tyr Asn Phe His Tyr Ala Ser Lys Gly Asn Gly Asn
290 295 300
Tyr Asp Met Arg Asn Ile Leu Asn Gly Thr Val Met Gln Asn His Pro
305 310 315 320
Ala Leu Ala Val Thr Leu Val Glu Asn His Asp Ser Gln Pro Gly Gln
325 330 335
Ser Leu Glu Ser Val Val Ser Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala
340 345 350
Phe Ile Leu Thr Arg Ala Glu Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr Gly Asp
355 360 365
Tyr Tyr Gly Thr Ser Gly Asn Ser Ser Tyr Glu Ile Pro Ala Leu Lys
370 375 380
Asp Lys Ile Asp Pro Ile Leu Met Ala Arg Lys Asn Phe Ala Tyr Gly
385 390 395 400
Thr Gln Arg Asp Tyr Leu Asp His Pro Asp Val Ile Gly Trp Thr Arg
405 410 415
Glu Gly Asp Gly Val His Ala Asp Ser Gly Leu Ala Thr Leu Ile Ser
420 425 430
Asp Gly Pro Gly Gly Ser Lys Trp Met Glu Val Gly Lys Asn Asn Ala
435 440 445
Gly Glu Val Trp Tyr Asp Met Thr Gly Asn Gln Thr Asn Thr Val Thr
450 455 460
Ile Asn Lys Asp Gly Trp Gly Gln Phe His Val Ser Gly Gly Ser Val
465 470 475 480
Ser Ile Tyr Val Gln Gln
485
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<211> 399
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence
<400> 6
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1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Leu Gln Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Gly Trp Asp Trp Glu Val Asp
180 185 190
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195 200 205
Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr
210 215 220
Thr Asn Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His
225 230 235 240
Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Thr
245 250 255
Thr Gly Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Ile
260 265 270
Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Ser Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val
275 280 285
Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Arg Ser Gly
290 295 300
Gly Asn Tyr Asp Met Arg Gln Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Arg
305 310 315 320
His Pro Thr His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro
325 330 335
Glu Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Glu Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala
340 345 350
Tyr Ala Leu Thr Leu Thr Arg Asp Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr
355 360 365
Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Lys Ser
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence
<400> 8
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1 5 10 15
Glu Gly Asp Gly Val His Ala Asp Ser Gly Leu Ala Thr Leu Ile Ser
20 25 30
Asp Gly Pro Gly Gly Ser Lys Trp Met Glu Val Gly Lys Asn Asn Ala
35 40 45
Gly Glu Val Trp Tyr Asp Met Thr Gly Asn Gln Thr Asn Thr Val Thr
50 55 60
Ile Asn Lys Asp Gly Trp Gly Gln Phe His Val Ser Gly Gly Ser Val
65 70 75 80
Ser Ile Tyr Val Gln Gln
85
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Artificial Sequence
<400> 9
Ala Thr Ile Asn Asn Gly Thr Leu Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Ala
1 5 10 15
Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Lys Arg Leu His Thr Asp Ala Gly Asn
20 25 30
Leu Ala Gln Lys Gly Ile Thr Ser Val Trp Ile Pro Pro Ala Tyr Lys
35 40 45
Gly Thr Thr Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr Asp
50 55 60
Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr
65 70 75 80
Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Ile Glu Ala Leu His Lys Gln Asn Ile
85 90 95
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100 105 110
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Glu Val Ser Gly Asp Tyr Glu Ile Asn Ala Trp Thr Gly Phe Asn Phe
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Glu Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Asp
225 230 235 240
His Glu Tyr Leu Arg Asp Trp Val Asn His Val Arg Gln Gln Thr Gly
245 250 255
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Leu Asn Asn Tyr Leu Ala Lys Val Asn Tyr Asn Gln Ser Val Phe Asp
275 280 285
Ala Pro Leu His Tyr Asn Phe His Tyr Ala Ser Lys Gly Asn Gly Asn
290 295 300
Tyr Asp Met Arg Asn Ile Leu Asn Gly Thr Val Met Gln Asn His Pro
305 310 315 320
Ala Leu Ala Val Thr Leu Val Glu Asn His Asp Ser Gln Pro Gly Gln
325 330 335
Ser Leu Glu Ser Val Val Ser Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala
340 345 350
Phe Ile Leu Thr Arg Ala Glu Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr Gly Asp
355 360 365
Tyr Tyr Gly Thr Ser Gly Asn Ser Ser Tyr Glu Ile Pro Ala Leu Lys
370 375 380
Asp Lys Ile Asp Pro Ile Leu Met Ala Arg Lys Asn Phe Ala Tyr Gly
385 390 395 400
<210> 10
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<212> PRT
<213> Bacillus lentus
<400> 10
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
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20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
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50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
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130 135 140
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Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
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Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
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Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
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<211> 275
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<213> Bacillus amyloliquefaciens
<400> 11
Ala Gln Ser Val Pro Tyr Gly Val Ser Gln Ile Lys Ala Pro Ala Leu
1 5 10 15
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20 25 30
Ser Gly Ile Asp Ser Ser His Pro Asp Leu Lys Val Ala Gly Gly Ala
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50 55 60
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65 70 75 80
Val Leu Gly Val Ala Pro Ser Ala Ser Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu
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Ser Gly Val Val Val Val Ala Ala Ala Gly Asn Glu Gly Thr Ser Gly
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Gly Pro Glu Leu Asp Val Met Ala Pro Gly Val Ser Ile Gln Ser Thr
195 200 205
Leu Pro Gly Asn Lys Tyr Gly Ala Tyr Asn Gly Thr Ser Met Ala Ser
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Trp Thr Asn Thr Gln Val Arg Ser Ser Leu Glu Asn Thr Thr Thr Lys
245 250 255
Leu Gly Asp Ser Phe Tyr Tyr Gly Lys Gly Leu Ile Asn Val Gln Ala
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<211> 269
<212> PRT
<213> Bacillus gibsonii
<400> 12
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Thr Gly Ile Ala Gln His Ser Asp Leu Thr Ile Arg Gly Gly Ala Ser
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50 55 60
His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Ile
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Asp Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asn Gly Arg Gly Ser Val Ser Gly Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
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115 120 125
Pro Ser Thr Thr Leu Glu Arg Ala Val Asn Tyr Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Ile Ala Ala Thr Gly Asn Asn Gly Thr Gly Ser Ile Gly
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Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Arg Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Thr Gly Ile Asp Ile
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Val Ala Pro Gly Val Gly Ile Gln Ser Thr Tyr Leu Asn Asn Ser Tyr
195 200 205
Ala Ser Met Pro Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Val
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Asn Ala Thr Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Asn Leu Gly Asn Ser Ser Gln
245 250 255
Phe Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Asp Ala Ala Thr Arg
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<211> 275
<212> PRT
<213> Bacillus pumilus
<400> 13
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Thr Gly Ile His Ala Ala His Pro Asp Leu Asn Val Ala Gly Gly Ala
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Ser Phe Val Pro Ser Glu Pro Asn Ala Thr Gln Asp Phe Gln Ser His
50 55 60
Gly Thr His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asp Asn Thr Ile Gly
65 70 75 80
Val Leu Gly Val Ala Pro Ser Ala Ser Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu
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100 105 110
Trp Ala Val Ala Asn Asn Met Asp Val Ile Asn Met Ser Leu Gly Gly
115 120 125
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130 135 140
Arg Gly Val Val Val Val Ala Ala Ala Gly Asn Ser Gly Ser Phe Gly
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Ser Thr Ser Thr Val Gly Tyr Pro Ala Lys Tyr Asp Ser Thr Ile Ala
165 170 175
Val Ala Asn Val Asn Ser Asn Asn Val Arg Asn Ser Ser Ser Ser Ala
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Gly Pro Glu Leu Asp Val Ser Ala Pro Gly Thr Ser Ile Leu Ser Thr
195 200 205
Val Pro Ser Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Thr Gly Thr Ser Met Ala Ser
210 215 220
Pro His Val Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ile Leu Ser Lys Tyr Pro Asn
225 230 235 240
Leu Ser Thr Ser Gln Val Arg Gln Arg Leu Glu Asn Thr Ala Thr Pro
245 250 255
Leu Gly Asp Ser Phe Tyr Tyr Gly Lys Gly Leu Ile Asn Val Gln Ala
260 265 270
Ala Ser Asn
275
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<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Artificial sequence
<400> 14
Ala Val Pro Ser Thr Gln Thr Pro Trp Gly Ile Lys Ser Ile Tyr Asn
1 5 10 15
Asp Gln Ser Ile Thr Lys Thr Thr Gly Gly Ser Gly Ile Lys Val Ala
20 25 30
Val Leu Asp Thr Gly Val Tyr Thr Ser His Leu Asp Leu Ala Gly Ser
35 40 45
Ala Glu Gln Cys Lys Asp Phe Thr Gln Ser Asn Pro Leu Val Asp Gly
50 55 60
Ser Cys Thr Asp Arg Gln Gly His Gly Thr His Val Ala Gly Thr Val
65 70 75 80
Leu Ala His Gly Gly Ser Asn Gly Gln Gly Val Tyr Gly Val Ala Pro
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Gln Ala Lys Leu Trp Ala Tyr Lys Val Leu Gly Asp Asn Gly Ser Gly
100 105 110
Tyr Ser Asp Asp Ile Ala Ala Ala Ile Arg His Val Ala Asp Glu Ala
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Ser Arg Thr Gly Ser Lys Val Val Ile Asn Met Ser Leu Gly Ser Ser
130 135 140
Ala Lys Asp Ser Leu Ile Ala Ser Ala Val Asp Tyr Ala Tyr Gly Lys
145 150 155 160
Gly Val Leu Ile Val Ala Ala Ala Gly Asn Ser Gly Ser Gly Ser Asn
165 170 175
Thr Ile Gly Phe Pro Gly Gly Leu Val Asn Ala Val Ala Val Ala Ala
180 185 190
Leu Glu Asn Val Gln Gln Asn Gly Thr Tyr Arg Val Ala Asp Phe Ser
195 200 205
Ser Arg Gly Asn Pro Ala Thr Ala Gly Asp Tyr Ile Ile Gln Glu Arg
210 215 220
Asp Ile Glu Val Ser Ala Pro Gly Ala Ser Val Glu Ser Thr Trp Tyr
225 230 235 240
Thr Gly Gly Tyr Asn Thr Ile Ser Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His
245 250 255
Val Ala Gly Leu Ala Ala Lys Ile Trp Ser Ala Asn Thr Ser Leu Ser
260 265 270
His Ser Gln Leu Arg Thr Glu Leu Gln Asn Arg Ala Lys Val Tyr Asp
275 280 285
Ile Lys Gly Gly Ile Gly Ala Gly Thr Gly Asp Asp Tyr Ala Ser Gly
290 295 300
Phe Gly Tyr Pro Arg Val Lys
305 310
<210> 15
<211> 483
<212> PRT
<213> Bacillus sp.
<400> 15
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Arg Asn Arg Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Ser Gln Leu Glu Ser Ala Ile His Ala Leu Lys Asn Asn Gly
85 90 95
Val Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Ala Thr Glu Asn Val Leu Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Ile Ser Gly Asp Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Phe Gln Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Ser Glu
180 185 190
Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met Asp His
195 200 205
Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Arg Trp Gly Glu Trp Tyr Thr Asn
210 215 220
Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His Ile Lys
225 230 235 240
Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Ala Thr Gly
245 250 255
Lys Glu Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu Gly Ala
260 265 270
Leu Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val Phe Asp
275 280 285
Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Gly Gly Asn
290 295 300
Tyr Asp Met Ala Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Gln Lys His Pro
305 310 315 320
Met His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro Gly Glu
325 330 335
Ser Leu Glu Ser Phe Val Gln Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala
340 345 350
Leu Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr Gly Asp
355 360 365
Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Ser Val Pro Ala Met Lys Ala Lys Ile
370 375 380
Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Asn Phe Ala Tyr Gly Thr Gln His
385 390 395 400
Asp Tyr Phe Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asn
405 410 415
Thr Thr His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp Gly Pro
420 425 430
Gly Gly Glu Lys Trp Met Tyr Val Gly Gln Asp Lys Ala Gly Gln Val
435 440 445
Trp His Asp Ile Thr Gly Asn Lys Pro Gly Thr Val Thr Ile Asn Ala
450 455 460
Asp Gly Trp Ala Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Ile Trp
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Val Lys Arg
<210> 16
<211> 485
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial sequence
<400> 16
His His Asp Gly Thr Asn Gly Thr Ile Met Gln Tyr Phe Glu Trp Asn
1 5 10 15
Val Pro Asn Asp Gly Gln His Trp Asn Arg Leu His Asn Asn Ala Gln
20 25 30
Asn Leu Lys Asn Ala Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Lys Ala Glu Leu Glu Arg Ala Ile Arg Ser Leu Lys Ala Asn Gly
85 90 95
Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Phe Thr Glu Arg Val Gln Ala Val Glu Val Asn Pro Gln Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Val Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Glu Ala Trp Thr Gly Phe Asn
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Gln His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Thr Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Leu Ala Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp
180 185 190
Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met
195 200 205
Asp His Pro Glu Val Ile Asn Glu Leu Asn Arg Trp Gly Val Trp Tyr
210 215 220
Ala Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His
225 230 235 240
Ile Lys Phe Ser Phe Met Arg Asp Trp Leu Gly His Val Arg Gly Gln
245 250 255
Thr Gly Lys Asn Leu Phe Ala Val Ala Glu Tyr Trp Lys Asn Asp Leu
260 265 270
Gly Ala Leu Glu Asn Tyr Leu Ser Lys Thr Asn Trp Thr Met Ser Ala
275 280 285
Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Gln Ala Ser Asn Ser Ser
290 295 300
Gly Asn Tyr Asp Met Arg Asn Leu Leu Asn Gly Thr Leu Val Gln Arg
305 310 315 320
His Pro Ser His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro
325 330 335
Gly Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Gln Gly Trp Phe Lys Pro Leu Ala
340 345 350
Tyr Ala Thr Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Gln Val Phe Tyr
355 360 365
Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Ser Asp Gly Val Pro Ser Tyr Arg Gln
370 375 380
Gln Ile Asp Pro Leu Leu Lys Ala Arg Gln Gln Tyr Ala Tyr Gly Thr
385 390 395 400
Gln His Asp Tyr Leu Asp Asn Gln Asp Val Ile Gly Trp Thr Arg Glu
405 410 415
Gly Asp Ser Ala His Ala Gly Ser Gly Leu Ala Thr Val Met Ser Asp
420 425 430
Gly Pro Gly Gly Ser Lys Thr Met Tyr Val Gly Thr Ala His Ala Gly
435 440 445
Gln Val Phe Lys Asp Ile Thr Gly Asn Arg Thr Asp Thr Val Thr Ile
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Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Thr
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485
<210> 32
<211> 481
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial sequence
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Asp Trp Val Asn His Val Arg Glu Lys Thr Gly Lys Glu Met Phe Thr
245 250 255
Val Ala Glu Tyr Trp Gln Asn Asp Leu Gly Ala Leu Glu Asn Tyr Leu
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Asn Lys Thr Asn Phe Asn His Ser Val Phe Asp Val Pro Leu His Tyr
275 280 285
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Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Ser Lys His Pro Leu Lys Ser Val Thr
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Phe Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro Gly Gln Ser Leu Glu Ser Thr
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340 345 350
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Ile Leu Lys Ala Arg Lys Gln Tyr Ala Tyr Gly Ala Gln His Asp Tyr
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Phe Asp His His Asp Ile Val Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asp Ser Ser
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Ala Lys Arg Met Tyr Val Gly Arg Gln Asn Ala Gly Glu Thr Trp His
435 440 445
Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ser Glu Pro Val Val Ile Asn Ser Glu Gly
450 455 460
Trp Gly Glu Phe His Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Ile Tyr Val Gln
465 470 475 480
Arg
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<211> 483
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<213> Bacillus sp.
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85 90 95
Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Phe Thr Glu Arg Val Gln Ala Val Glu Val Asn Pro Gln Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Val Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Glu Ala Trp Thr Gly Phe Asn
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Gln His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Thr Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Leu Ala Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp
180 185 190
Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met
195 200 205
Asp His Pro Glu Val Ile Asn Glu Leu Asn Arg Trp Gly Val Trp Tyr
210 215 220
Ala Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His
225 230 235 240
Ile Lys Phe Ser Phe Met Arg Asp Trp Leu Gly His Val Arg Gly Gln
245 250 255
Thr Gly Lys Asn Leu Phe Ala Val Ala Glu Tyr Trp Lys Asn Asp Leu
260 265 270
Gly Ala Leu Glu Asn Tyr Leu Ser Lys Thr Asn Trp Thr Met Ser Ala
275 280 285
Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Gln Ala Ser Asn Ser Ser
290 295 300
Gly Asn Tyr Asp Met Arg Asn Leu Leu Asn Gly Thr Leu Val Gln Arg
305 310 315 320
His Pro Ser His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro
325 330 335
Gly Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Gln Gly Trp Phe Lys Pro Leu Ala
340 345 350
Tyr Ala Thr Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Gln Val Phe Tyr
355 360 365
Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Ser Asp Gly Val Pro Ser Tyr Arg Gln
370 375 380
Gln Ile Asp Pro Leu Leu Lys Ala Arg Gln Gln Tyr Ala Tyr Gly Arg
385 390 395 400
Gln His Asp Tyr Phe Asp His Trp Asp Val Ile Gly Trp Thr Arg Glu
405 410 415
Gly Asn Ala Ser His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp
420 425 430
Gly Pro Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Arg Gln Lys Ala Gly
435 440 445
Glu Val Trp His Asp Met Thr Gly Asn Arg Ser Gly Thr Val Thr Ile
450 455 460
Asn Gln Asp Gly Trp Gly His Phe Phe Val Asn Gly Gly Ser Val Ser
465 470 475 480
Val Trp Val Lys Arg
485
<210> 41
<211> 485
<212> PRT
<213> Bacillus sp.
<400> 41
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Lys Asp Lys Gly Ile Ser Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Ile Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Asn Gln Leu Gln Ala Ala Val Asn Ala Leu Lys Ser Asn Gly
85 90 95
Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Ala Thr Glu Met Val Arg Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Val Ser Gly Glu Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Asn Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Lys Leu Asn Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Gly Trp Asp Trp Glu Val Asp
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210 215 220
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Ile Trp Val Asn Lys
485
Claims (20)
- 모 알파-아밀라제의 알파-아밀라제 변이체로서, 여기서
(i) 상기 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 25, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 45, 47, 48, 51, 54, 59, 60, 63, 70, 71, 72, 73, 75, 76, 81, 82, 83, 86, 87, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 103, 106, 108, 109, 113, 114, 115, 116, 117, 119, 120, 123, 125, 126, 128, 129, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 139, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 149, 150, 151, 154, 155, 156, 158, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 169, 170, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 180, 182, 184, 185, 187, 188, 189, 191, 192, 193, 203, 208, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 218, 219, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 230, 231, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 240, 242, 243, 245, 249, 250, 251, 252, 253, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 279, 280, 281, 282, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 304, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 326, 327, 333, 334, 336, 337, 338, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 348, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 370, 372, 375, 376, 378, 379, 381, 382, 383, 384, 385, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 403, 405, 406, 407, 408, 410, 413, 414, 415, 416, 418, 421, 424, 426, 427, 429, 431, 432, 434, 436, 438, 439, 440, 442, 443, 445, 446, 447, 448, 449, 451, 453, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 465, 467, 468, 470, 471, 474, 478, 480 및 482로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서의 아미노산 변경을 포함하고,
(ii) 상기 변이체는 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 임의의 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3, 보다 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 60%이지만 100% 미만의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖고,
(iii) 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 가지며, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체에 대한 모 알파-아밀라제는 서열식별번호: 1에 따른 아밀라제인 알파-아밀라제 변이체. - 제1항에 있어서, 상기 변이체가 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 넘버링에 따라 X25H, X25A, X25C, X25D, X25F, X25G, X25K, X25L, X25M, X25Q, X25S, X25W, X25Y, X100D, X100F, X100K, X100L, X103A, X106D, X108A, X109A, X10A, X10C, X10E, X10F, X10L, X10W, X10Y, X113F, X113H, X113M, X113R, X113V, X113W, X113Y, X114A, X114C, X114D, X114E, X114F, X114G, X114H, X114I, X114K, X114L, X114M, X114N, X114Q, X114R, X114S, X114V, X114W, X114Y, X115C, X115D, X115K, X115M, X115N, X115Q, X115R, X115S, X115T, X115V, X116I, X116K, X116L, X116M, X116R, X116T, X117A, X117C, X117D, X117F, X117I, X117N, X117P, X117R, X117W, X117Y, X118A, X118D, X118E, X119H, X119P, X119R, X119S, X119Y, X120E, X120G, X120M, X120S, X120W, X120Y, X123D, X123S, X125A, X125D, X125E, X125F, X125G, X125H, X125K, X125L, X125M, X125N, X125Q, X125R, X125T, X125V, X125W, X125Y, X126D, X128C, X128E, X128L, X128M, X128W, X128Y, X129E, X12N, X12S, X131C, X131I, X131L, X131Q, X131W, X132T, X133A, X133C, X133D, X133E, X133H, X133K, X133N, X133P, X133Q, X133S, X134C, X134E, X134F, X134I, X134L, X134M, X134P, X134T, X134V, X134W, X134Y, X135D, X135E, X135G, X135M, X135N, X135P, X135S, X135T, X135W, X136A, X136C, X136D, X136E, X136F, X136H, X136L, X136M, X136N, X136P, X136W, X139C, X139S, X13A, X13Y, X141V, X142C, X142E, X142F, X142L, X142M, X142Q, X142R, X142W, X142Y, X143F, X144C, X144E, X144G, X144K, X144N, X144Q, X144R, X144S, X144T, X144V, X144Y, X145A, X146C, X146D, X146E, X146F, X146G, X146H, X146K, X146L, X146S, X146T, X146W, X147M, X149E, X14N, X150C, X150E, X150Q, X151C, X151E, X154A, X154Y, X155Y, X156E, X156V, X158H, X158N, X158Y, X15R, X160D, X160E, X160W, X161T, X162V, X163A, X163Q, X163T, X164V, X165S, X165T, X165W, X169A, X169D, X169E, X169S, X169V, X16F, X16R, X170C, X170F, X172A, X172C, X172D, X172K, X172N, X173I, X173Y, X174D, X174E, X174G, X174H, X174M, X174N, X174P, X174S, X174T, X175A, X175G, X175H, X175Q, X176K, X176S, X176T, X177A, X177G, X177K, X177N, X177P, X177R, X177S, X177W, X178F, X17K, X17V, X180M, X180N, X180T, X180W, X182D, X182E, X182N, X182Q, X182S, X185E, X185M, X185N, X187A, X187D, X187M, X187V, X188H, X188T, X188V, X189I, X18F, X18I, X18K, X18M, X18R, X18T, X191F, X191H, X191K, X191M, X191W, X191Y, X192A, X192T, X193D, X193E, X193G, X193V, X19A, X19C, X19D, X19F, X19G, X19H, X19I, X19K, X19L, X19M, X19P, X19Q, X19S, X19T, X19Y, X1R, X1V, X203E, X203R, X208F, X208I, X208Y, X20A, X20C, X20D, X20E, X20F, X20G, X20H, X20K, X20L, X20M, X20N, X20P, X20Q, X20S, X20T, X20V, X20W, X20Y, X210A, X210C, X210D, X210E, X210F, X210M, X210N, X210Q, X210S, X210Y, X211A, X211C, X211D, X211E, X211G, X211H, X211L, X211N, X211Q, X211S, X211T, X211V, X212C, X212D, X212I, X212L, X212W, X213A, X213C, X213M, X213R, X213S, X214E, X214P, X215A, X215D, X215E, X215H, X215W, X216G, X216H, X218A, X218C, X218D, X218E, X218F, X218G, X218H, X218I, X218K, X218L, X218N, X218Q, X218S, X218T, X218V, X218W, X218Y, X219A, X219C, X219D, X219E, X219F, X219G, X219H, X219K, X219M, X219Q, X219R, X219S, X219T, X219W, X219Y, X21E, X21S, X221F, X221N, X222D, X222K, X222S, X222T, X223C, X223L, X223V, X223Y, X224F, X224V, X225A, X225C, X225E, X225F, X225H, X225I, X225N, X225R, X225S, X225Y, X226A, X226C, X226D, X226E, X226G, X226H, X226I, X226L, X226M, X226Q, X226R, X226S, X226T, X226V, X226W, X226Y, X227C, X227F, X227G, X227H, X227I, X227K, X227L, X227M, X227R, X227T, X227V, X227W, X227Y, X22A, X22D, X22E, X22F, X22G, X22K, X22L, X22M, X22Q, X22R, X22T, X22W, X22Y, X230A, X230F, X231C, X231D, X231N, X233C, X233H, X233I, X233M, X233T, X233W, X233Y, X234C, X235L, X235M, X235V, X236Y, X237C, X237I, X238A, X238F, X238T, X23N, X23Q, X23W, X240M, X242M, X242N, X243D, X243F, X245E, X245H, X245M, X249D, X249I, X24G, X250V, X251A, X251E, X251F, X251L, X251M, X251S, X251T, X252C, X252I, X252S, X253C, X253G, X253Y, X255D, X255F, X255I, X255T, X255V, X256C, X257L, X257V, X257Y, X258F, X258Q, X258R, X259L, X260H, X261R, X262C, X262D, X262E, X262H, X262P, X262Y, X263I, X264H, X264T, X264W, X265S, X268F, X268G, X269M, X26A, X26D, X26E, X26F, X26L, X26M, X26P, X26S, X26V, X26Y, X270A, X270Q, X270Y, X271S, X272F, X272G, X272L, X272S, X273A, X273C, X273D, X273E, X273F, X273H, X273I, X273L, X273M, X273P, X273Q, X273R, X273V, X273W, X273Y, X274F, X274S, X275V, X276D, X276K, X276L, X276N, X276R, X276Y, X277D, X277E, X277T, X279A, X279P, X27A, X27D, X27F, X27G, X27H, X27I, X27Q, X27R, X27T, X27V, X280D, X280F, X280G, X280H, X280I, X280K, X280N, X280R, X280V, X280Y, X281A, X281D, X281E, X281H, X284A, X284F, X284H, X284L, X284M, X284N, X284Y, X285G, X285L, X285N, X285P, X286Q, X287A, X287D, X287E, X287H, X287T, X288A, X288K, X288P, X288Y, X289F, X289G, X289R, X289T, X28C, X28D, X28E, X28F, X28G, X28I, X28K, X28N, X28Q, X28S, X28T, X28V, X290D, X290M, X290N, X290Q, X290W, X291D, X291K, X291T, X291Y, X292C, X292D, X292F, X292I, X292L, X292T, X292W, X292Y, X293D, X293E, X293F, X293K, X293R, X294G, X294T, X295F, X296A, 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X320Y, X321A, X321E, X321K, X321N, X321T, X321V, X321W, X323A, X323G, X323K, X323L, X323V, X324K, X324L, X324M, X324W, X324Y, X326G, X326N, X326S, X326Y, X327C, X327L, X327M, X32A, X32D, X32E, X32F, X32H, X32I, X32L, X32M, X32N, X32P, X32Q, X32T, X32W, X333I, X334T, X336K, X337A, X337C, X337F, X337G, X337I, X337K, X337L, X337M, X337N, X337Q, X337R, X337S, X337T, X337V, X337Y, X338G, X338S, X338T, X33D, X33E, X33H, X33K, X33M, X33Q, X33R, X33Y, X341V, X342P, X343L, X343T, X343W, X343Y, X344I, X344Q, X344V, X345D, X345G, X345M, X345N, X345Q, X345S, X345T, X346A, X346C, X346D, X346G, X346H, X346N, X346Q, X348T, X34H, X34I, X34V, X350H, X350K, X350P, X351A, X351M, X352S, X353H, X354I, X354N, X354T, X354Y, X355I, X355M, X356I, X356V, X357A, X358I, X358L, X358N, X358P, X358V, X359E, X35A, X35C, X35D, X35G, X35H, X35I, X35L, X35M, X35N, X35P, X35Q, X35R, X35S, X35T, X35V, X35Y, X360A, X360F, X360G, X360I, X360L, X360N, X360Q, X360R, X360S, X360T, X360V, X360Y, X362F, X362K, X362M, X362N, X362T, X362V, X362Y, X363A, X363C, X363D, X363E, X363G, X363H, X363K, X363L, X363M, X363P, X363Q, X363R, X363S, X363T, X363V, X363W, X363Y, X364A, X364C, X364G, X364K, X364L, X364N, X364S, X364T, X364V, X366I, X366L, X366T, X367E, X367S, X368A, X368F, X368L, X368N, X36A, X36E, X36G, X36I, X36K, X36M, X36N, X36P, X36Q, X36R, X36S, X36T, X36V, X370E, X370I, X372A, X372C, X372E, X372F, X372H, X372M, X372N, X372Q, X375A, X375D, X375E, X375I, X375K, X375Q, X375R, X375T, X375W, X375Y, X376G, X376I, X376K, X376L, X376M, X376Q, X376R, X376S, X376V, X377Q, X378C, X378D, X378E, X378R, X379A, X379L, X379S, X37A, X37G, X37M, X37P, X37T, X37V, X37W, X381E, X381V, X382A, X382H, X382K, X382L, X382N, X382Q, X382S, X383C, X383D, X383E, X383H, X383I, X383M, X383N, X383Q, X383R, X383S, X383V, X383Y, X384A, X384C, X384D, X384E, X384F, X384I, X384L, X384M, X384N, X384Q, X384R, X384T, X384V, X384W, X384Y, X385A, X385C, X385D, X385E, X385F, X385G, X385H, X385I, X385L, X385M, X385N, X385P, X385Q, X385R, X385S, X385T, X385V, X385W, X385Y, X387C, X387E, X387N, X388E, X388F, X388H, X388I, X388M, X388R, X388V, X389G, X389H, X389K, X38N, X390D, X390F, X390M, X390N, X390P, X390R, X391A, X391F, X391G, X391K, X391M, X391N, X391Q, X391S, X391T, X391Y, X392C, X392V, X393E, X393H, X393P, X393S, X393V, X394A, X394C, X394E, X394H, X394I, X394L, X394M, X394N, X394R, X394S, X395A, X395H, X395M, X395V, X396H, X396P, X397D, X397H, X397P, X397S, X398M, X399P, X39E, X39K, X3A, X3F, X3G, X3I, X3K, X3L, X3Q, X3V, X400A, X400D, X400E, X400G, X400H, X400I, X400K, X400L, X400M, X400N, X400P, X400Q, X400R, X400S, X400V, X400W, X401I, X401K, X401M, X401T, X403N, X405C, X405H, X405M, X405T, X405V, X406P, X407D, X407R, X407S, X408E, X408I, X408Q, X40I, X40S, X410H, X410I, X410K, X410L, X410P, X410R, X410Y, X413S, X414C, X414E, X414S, X415E, X415I, X416S, X418C, X418N, X418P, X41C, X41D, X41E, X41G, X41Q, X41S, X41T, X421N, X421P, X424A, X426D, X426W, X427C, X427F, X427G, X427K, X427Q, X427R, X427S, X427T, X427V, X429A, X429D, X429E, X429F, X429G, X429I, X429M, X429N, X429P, X429Q, X429S, X429T, X429V, X429W, X42C, X42I, X42Q, X42V, X431I, X434S, X436E, X438F, X438P, X438Y, X439K, X439C, X439P, X440V, X442Q, X443H, X443T, X445A, X445C, X445D, X445F, X445G, X445H, X445K, X445M, X445Q, X445R, X445S, X445T, X445V, X446F, X446I, X446L, X446P, X446Q, X446R, X446V, X446W, X447V, X448D, X448E, X448H, X448N, X449A, X449F, X449G, X449K, X449L, X449M, X449N, X449P, X449Q, X449R, X449S, X449V, X449W, X449Y, X451L, X453G, X453I, X453N, X453P, X453Y, X455L, X456L, X456M, X456R, X456S, X456V, X456W, X456Y, X457A, X457C, X457E, X457F, X457G, X457K, X457L, X457M, X457R, X457S, X457T, X457V, X457W, X458I, X458K, X458V, X458W, X459C, X459D, X459E, X459I, X459K, X459N, X459Q, X459R, X459V, X459Y, X45G, X45N, X460A, X460D, X460E, X460G, X460Q, X460R, X460S, X460T, X460V, X461A, X461E, X461F, X461K, X461L, X461M, X461N, X461Q, X461R, X461S, X461V, X462K, X463L, X465H, X465P, X465R, X465V, X467A, X467E, X467H, X468D, X468H, X470A, X470Q, X470T, X471E, X474F, X474H, X474P, X478A, X478E, X47S, X480D, X480E, X480M, X480R, X480Y, X482C, X482T, X482W, X48F, X48I, X48M, X48Y, X4A, X4C, X4K, X4M, X4Q, X4R, X4S, X51Q, X51T, X51V, X54D, X54G, X54Q, X59T, X5A, X5C, X5D, X5E, X5F, X5H, X5I, X5K, X5L, X5M, X5N, X5P, X5Q, X5R, X5V, X5Y, X60T, X63C, X63V, X6A, X6C, X6E, X6F, X6G, X6H, X6K, X6L, X6M, X6P, X6Q, X6S, X6T, X6V, X6W, X6Y, X70F, X70H, X70L, X70M, X70N, X70Y, X71D, X72C, X72D, X72E, X72N, X72T, X73L, X73N, X73Q, X75A, X75G, X75I, X75L, X75P, X75T, X75W, X76C, X76E, X76G, X76L, X76T, X76V, X7C, X7E, X7F, X7H, X7K, X7N, X7P, X7Q, X7R, X7S, X7V, X7W, X7Y, X81H, X81L, X82K, X82M, X83A, X83D, X83E, X83G, X83R, X83S, X86K, X87D, X87R, X89A, X89C, X89F, X89G, X89L, X89M, X89R, X89S, X8A, X8C, X8F, X8I, X8M, X8P, X8S, X8V, X8W, X8Y, X90A, X90D, X90E, X90F, X90G, X90I, X90M, X90N, X90Q, X90R, X90S, X90V, X90Y, X91C, X91D, X91E, X91F, X91G, X91H, X91I, X91K, X91L, X91M, X91N, X91Q, X91S, X91T, X91V, X91W, X91Y, X92D, X92M, X92V, X93K, X93Q, X94A, X94D, X94E, X94K, X94M, X94V, X94Y, X95E, X95I, X95L, X95V, X96K, X96N, X96Q, X97V, X98E, X98G, X98N, X99H, X99K, X99N, X100W 및 X1G로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된, 바람직하게는 X4Q, X25H, X100W, X135E, X135T, X135W, X135D, X160W, X176K, X193E, X251E, X258Q, X276R, X299S, X323G, X363E, X363H, X382Q, X405M, X460G 및 X482W로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 변이체가 알파-아밀라제 활성을 갖는 것인 알파-아밀라제 변이체.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 변이체가
X25H+X176K,
X25H+X176K+X186E,
X25H+X176K+X186E+X251E+X405M,
X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X482W,
X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X439K,
X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X439K+X482W,
X25H+X176K+X251E+X405M,
X25H+X176K+X251E+X405M+X482W,
X25H+X176K+X251E+X405M+X439K,
X25H+X176K+X251E+X405M+X439K+X482W,
X176K+X186E,
X251E+X405M,
X251E+X405M+X439K,
X251E+X405M+X482W,
X251E+X405M+X439K+X482W,
X405M+X439K,
X405M+X482W,
X405M+X439K+X482W,
X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X439K,
X4Q+X25H+X176K+X186E+X251E+X405M+X439K+X482W,
X4Q+X25H+X176K+X251E+X405M+X439K,
X4Q+X25H+X176K+X251E+X405M+X439K+X482W,
X116K+X181T+X225A,
X181T+X225A+X320K,
X116K+X181T+X225A+X320K,
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X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X100W+X363E, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X100W+X363H, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X258Q, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X258Q+X8A, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X258Q+X281N+X363E, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X258Q+X363H, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X281N, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X181Q+X258Q, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X181Q+X258Q+X281N, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X181Q+X258Q+X363H, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X363E, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X135T+X363H, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X363E, X4Q+X176K+X186E+X193E+X206Y+X251E+X405M+X363H, X25H+X176K+X186E+X206Y, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X258Q+X363E+X123D, X25H+X176K+X186E+X206Y+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X181Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X181Q+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X181Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X193E+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X193E+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X258Q+X363E+X135C, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X361R, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X281N+X363E+X175D, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X181Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X473R, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X258Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X281N+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X181Q+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X193E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X193E+X258Q+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X193E+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X135T+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X100W+X363E, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q+X281N, X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q+X281N+X363E, 및 X25H+X176K+X186E+X206Y+X135T+X258Q+X363E로 이루어진 군으로부터 선택된 치환의 조합을 포함하며,
여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따르고, 상기 변이체는 알파-아밀라제 활성을 갖는 것인 알파-아밀라제 변이체. - 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 서열식별번호: 1, 3, 4, 또는 서열식별번호: 15-41 중 임의의 것, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%, 바람직하게는 적어도 91% 또는 적어도 95%이지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 알파-아밀라제 변이체.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, A 및 B 도메인 및 C 도메인을 포함하며, 여기서 A 및 B 도메인의 아미노산 서열이 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 그러나 100% 미만 동일하고, C 도메인의 아미노산 서열이 서열식별번호: 8의 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 그러나 100% 미만 동일한 것인 알파-아밀라제 변이체.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 모 알파-아밀라제에 비해, 바람직하게는 서열식별번호: 1 및/또는 서열식별번호: 3에 제시된 모 알파-아밀라제에 비해, 바람직하게는 서열식별번호: 1에 제시된 모 알파-아밀라제에 비해 하나 이상의 개선된 특성을 나타내며, 바람직하게는 알파-아밀라제 변이체가 발현, 활성, 안정성, 열안정성, 비활성, 기질 특이성, pH-의존성 활성, pH 안정성, 산화 안정성, 촉매 효율, 촉매 속도, 화학적 안정성, pH 활성, 저장 조건 하의 안정성, 기질 결합, 기질 절단, 기질 안정성, 표면 특성, 열 활성, Ca2+ 의존성, 세척 성능, 세탁 세제에서의 세척 성능, 및/또는 ADW 세제에서의 세척 성능의 증가를 가지며, 바람직하게는 개선된 특성이 개선된 열안정성, 세제 조성물에서의 저장 하의 개선된 안정성, 및/또는 개선된 세척 성능, 가장 바람직하게는 개선된 열안정성, 바람직하게는 세제 조성물, 바람직하게는 세탁 또는 식기 세척 세제 조성물, 바람직하게는 세탁 세제 조성물에서의 개선된 열안정성인 알파-아밀라제 변이체.
- 제7항에 있어서, 상기 개선된 특성이 >1.0의 개선 지수 (IF)로 표현되고, 바람직하게는 개선 지수가 1.1 이상, 바람직하게는 1.2 이상, 보다 바람직하게는 1.3 이상인 알파-아밀라제 변이체.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 아미노산에서의 결실, 바람직하게는 181, 182, 183 및 184로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 2개 이상의 아미노산의 결실, 바람직하게는 위치 181 및 182, 182 및 183, 또는 183 및 184에 상응하는 아미노산의 결실을 추가로 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른 것인 알파-아밀라제 변이체.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 치환의 수가 서열식별번호: 1과 비교하여 1 내지 30개, 바람직하게는 1 내지 25개, 1 내지 20개, 1 내지 15개, 1 내지 10개, 2 내지 10개, 3 내지 10개, 또는 1 내지 5개, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 치환인 알파-아밀라제 변이체.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체가 X25H, X25A, X25C, X25D, X25F, X25G, X25K, X25L, X25M, X25Q, X25S, X25W, X25Y, X100D, X100F, X100K, X100L, X103A, X106D, X108A, X109A, X10A, X10C, X10E, X10F, X10L, X10W, X10Y, X113F, X113H, X113M, X113R, X113V, X113W, X113Y, X114A, X114C, X114D, X114E, X114F, X114G, X114H, X114I, X114K, X114L, X114M, X114N, X114Q, X114R, X114S, X114V, X114W, X114Y, X115C, X115D, X115K, X115M, X115N, X115Q, X115R, X115S, X115T, X115V, X116I, X116K, X116L, X116M, X116R, X116T, X117A, X117C, X117D, X117F, X117I, X117N, X117P, X117R, X117W, X117Y, X118A, X118D, X118E, X119H, X119P, X119R, X119S, X119Y, X120E, X120G, X120M, X120S, X120W, X120Y, X123D, X123S, X125A, X125D, X125E, X125F, X125G, X125H, X125K, X125L, X125M, X125N, X125Q, X125R, X125T, X125V, X125W, X125Y, X126D, X128C, X128E, X128L, X128M, X128W, X128Y, X129E, X12N, X12S, X131C, X131I, X131L, X131Q, X131W, X132T, X133A, X133C, X133D, X133E, X133H, X133K, X133N, X133P, X133Q, X133S, X134C, X134E, X134F, X134I, X134L, X134M, X134P, X134T, X134V, X134W, X134Y, X135D, X135E, X135G, X135M, X135N, X135P, X135S, X135T, X135W, X136A, X136C, X136D, X136E, X136F, X136H, X136L, X136M, X136N, X136P, X136W, X139C, X139S, X13A, X13Y, X141V, X142C, X142E, X142F, X142L, X142M, X142Q, X142R, X142W, X142Y, X143F, X144C, X144E, X144G, X144K, X144N, X144Q, X144R, X144S, X144T, X144V, X144Y, X145A, X146C, X146D, X146E, X146F, X146G, X146H, X146K, X146L, X146S, X146T, X146W, X147M, X149E, X14N, X150C, X150E, X150Q, X151C, X151E, X154A, X154Y, X155Y, X156E, X156V, X158H, X158N, X158Y, X15R, X160D, X160E, X160W, X161T, X162V, X163A, X163Q, X163T, X164V, X165S, X165T, X165W, X169A, X169D, X169E, X169S, X169V, X16F, X16R, X170C, X170F, X172A, X172C, X172D, X172K, X172N, X173I, X173Y, X174D, X174E, X174G, X174H, X174M, X174N, X174P, X174S, X174T, X175A, X175G, X175H, X175Q, X176K, X176S, X176T, X177A, X177G, X177K, X177N, X177P, X177R, X177S, X177W, X178F, X17K, X17V, X180M, X180N, X180T, X180W, X182D, X182E, X182N, X182Q, X182S, X185E, X185M, X185N, X187A, X187D, X187M, X187V, X188H, X188T, X188V, X189I, X18F, X18I, X18K, X18M, X18R, X18T, X191F, X191H, X191K, X191M, X191W, X191Y, X192A, X192T, X193D, X193E, X193G, X193V, X19A, X19C, X19D, X19F, X19G, X19H, X19I, X19K, X19L, X19M, X19P, X19Q, X19S, X19T, X19Y, X1R, X1V, X203E, X203R, X208F, X208I, X208Y, X20A, X20C, X20D, X20E, X20F, X20G, X20H, X20K, X20L, X20M, X20N, X20P, X20Q, X20S, X20T, X20V, X20W, X20Y, X210A, X210C, X210D, X210E, X210F, X210M, X210N, X210Q, X210S, X210Y, X211A, X211C, X211D, X211E, X211G, X211H, X211L, X211N, X211Q, X211S, X211T, X211V, X212C, X212D, X212I, X212L, X212W, X213A, X213C, X213M, X213R, X213S, X214E, X214P, X215A, X215D, X215E, X215H, X215W, X216G, X216H, X218A, X218C, X218D, X218E, X218F, X218G, X218H, X218I, X218K, X218L, X218N, X218Q, X218S, X218T, X218V, X218W, X218Y, X219A, X219C, X219D, X219E, X219F, X219G, X219H, X219K, X219M, X219Q, X219R, X219S, X219T, X219W, X219Y, X21E, X21S, X221F, X221N, X222D, X222K, X222S, X222T, X223C, X223L, X223V, X223Y, X224F, X224V, X225A, X225C, X225E, X225F, X225H, X225I, X225N, X225R, X225S, X225Y, X226A, X226C, X226D, X226E, X226G, X226H, X226I, X226L, X226M, X226Q, X226R, X226S, X226T, X226V, X226W, X226Y, X227C, X227F, X227G, X227H, X227I, X227K, X227L, X227M, X227R, X227T, X227V, X227W, X227Y, X22A, X22D, X22E, X22F, X22G, X22K, X22L, X22M, X22Q, X22R, X22T, X22W, X22Y, X230A, X230F, X231C, X231D, X231N, X233C, X233H, X233I, X233M, X233T, X233W, X233Y, X234C, X235L, X235M, X235V, X236Y, X237C, X237I, X238A, X238F, X238T, X23N, X23Q, X23W, X240M, X242M, X242N, X243D, X243F, X245E, X245H, X245M, X249D, X249I, X24G, X250V, X251A, X251E, X251F, X251L, X251M, X251S, X251T, X252C, X252I, X252S, X253C, X253G, X253Y, X255D, X255F, X255I, X255T, X255V, X256C, X257L, X257V, X257Y, X258F, X258Q, X258R, X259L, X260H, X261R, X262C, X262D, X262E, X262H, X262P, X262Y, X263I, X264H, X264T, X264W, X265S, X268F, X268G, X269M, X26A, X26D, X26E, X26F, X26L, X26M, X26P, X26S, X26V, X26Y, X270A, X270Q, X270Y, X271S, X272F, X272G, X272L, X272S, X273A, X273C, X273D, X273E, X273F, X273H, X273I, X273L, X273M, X273P, X273Q, X273R, X273V, X273W, X273Y, X274F, X274S, X275V, X276D, X276K, X276L, X276N, X276R, X276Y, X277D, X277E, X277T, X279A, X279P, X27A, X27D, X27F, X27G, X27H, X27I, X27Q, X27R, X27T, X27V, X280D, X280F, X280G, X280H, X280I, X280K, X280N, X280R, X280V, X280Y, X281A, X281D, X281E, X281H, X284A, X284F, X284H, X284L, X284M, X284N, X284Y, X285G, X285L, X285N, X285P, X286Q, X287A, X287D, X287E, X287H, X287T, X288A, X288K, X288P, X288Y, X289F, X289G, X289R, X289T, X28C, X28D, X28E, X28F, X28G, X28I, X28K, X28N, X28Q, X28S, X28T, X28V, X290D, X290M, X290N, X290Q, X290W, X291D, X291K, X291T, X291Y, X292C, X292D, X292F, X292I, X292L, X292T, X292W, X292Y, X293D, X293E, X293F, X293K, X293R, X294G, X294T, X295F, X296A, X296C, X296L, X296Y, X297E, X297F, X297H, X297K, X297M, X297S, X297V, X299G, X299I, X299K, X299L, X299S, X299Y, X29D, X29E, X29F, X29G, X29H, X29I, X29K, X29L, X29N, X29P, X29Q, X29V, X29W, X29Y, X2I, X2S, X301F, X302H, X302I, X302Q, X302V, X302Y, X303E, X303H, X303I, X303K, X303L, X303M, X303N, X303P, X303R, X303T, X304A, X304D, X304E, X304H, X304K, X304M, X304N, X304P, X304R, X304T, X304W, X304Y, X306A, X306D, X306E, X306G, X306H, X306I, X306M, X306Q, X306R, X306S, X306T, X306V, X306W, X306Y, X307F, X307M, X308S, X309H, X309L, X309Q, X30A, X30E, X30F, X30G, X30H, X30I, X30K, X30L, X30M, X30Q, X30T, X30W, X30Y, X310A, X310Q, X311A, X311E, X311G, X311H, X311K, X311N, X311R, X311T, X311Y, X312L, X312M, X313V, X314C, X314E, X314K, X314Q, X315A, X315C, X315E, X315H, X315K, X315T, X318I, X318S, X318T, X319A, X319D, X319H, X319I, X319K, X319M, X319N, X319P, X319S, X319T, X319W, X31N, X31Q, X31S, X31T, X31V, X31W, X320A, X320C, X320D, X320E, X320G, X320H, X320K, X320L, X320N, X320Q, X320S, X320Y, X321A, X321E, X321K, X321N, X321T, X321V, X321W, X323A, X323G, X323K, X323L, X323V, X324K, X324L, X324M, X324W, X324Y, X326G, X326N, X326S, X326Y, X327C, X327L, X327M, X32A, X32D, X32E, X32F, X32H, X32I, X32L, X32M, X32N, X32P, X32Q, X32T, X32W, X333I, X334T, X336K, X337A, X337C, X337F, X337G, X337I, X337K, X337L, X337M, X337N, X337Q, X337R, X337S, X337T, X337V, X337Y, X338G, X338S, X338T, X33D, X33E, X33H, X33K, X33M, X33Q, X33R, X33Y, X341V, X342P, X343L, X343T, X343W, X343Y, X344I, X344Q, X344V, X345D, X345G, X345M, X345N, X345Q, X345S, X345T, X346A, X346C, X346D, X346G, X346H, X346N, X346Q, X348T, X34H, X34I, X34V, X350H, X350K, X350P, X351A, X351M, X352S, X353H, X354I, X354N, X354T, X354Y, X355I, X355M, X356I, X356V, X357A, X358I, X358L, X358N, X358P, X358V, X359E, X35A, X35C, X35D, X35G, X35H, X35I, X35L, X35M, X35N, X35P, X35Q, X35R, X35S, X35T, X35V, X35Y, X360A, X360F, X360G, X360I, X360L, X360N, X360Q, X360R, X360S, X360T, X360V, X360Y, X362F, X362K, X362M, X362N, X362T, X362V, X362Y, X363A, X363C, X363D, X363E, X363G, X363H, X363K, X363L, X363M, X363P, X363Q, X363R, X363S, X363T, X363V, X363W, X363Y, X364A, X364C, X364G, X364K, X364L, X364N, X364S, X364T, X364V, X366I, X366L, X366T, X367E, X367S, X368A, X368F, X368L, X368N, X36A, X36E, X36G, X36I, X36K, X36M, X36N, X36P, X36Q, X36R, X36S, X36T, X36V, X370E, X370I, X372A, X372C, X372E, X372F, X372H, X372M, X372N, X372Q, X375A, X375D, X375E, X375I, X375K, X375Q, X375R, X375T, X375W, X375Y, X376G, X376I, X376K, X376L, X376M, X376Q, X376R, X376S, X376V, X377Q, X378C, X378D, X378E, X378R, X379A, X379L, X379S, X37A, X37G, X37M, X37P, X37T, X37V, X37W, X381E, X381V, X382A, X382H, X382K, X382L, X382N, X382Q, X382S, X383C, X383D, X383E, X383H, X383I, X383M, X383N, X383Q, X383R, X383S, X383V, X383Y, X384A, X384C, X384D, X384E, X384F, X384I, X384L, X384M, X384N, X384Q, X384R, X384T, X384V, X384W, X384Y, X385A, X385C, X385D, X385E, X385F, X385G, X385H, X385I, X385L, X385M, X385N, X385P, X385Q, X385R, X385S, X385T, X385V, X385W, X385Y, X387C, X387E, X387N, X388E, X388F, X388H, X388I, X388M, X388R, X388V, X389G, X389H, X389K, X38N, X390D, X390F, X390M, X390N, X390P, X390R, X391A, X391F, X391G, X391K, X391M, X391N, X391Q, X391S, X391T, X391Y, X392C, X392V, X393E, X393H, X393P, X393S, X393V, X394A, X394C, X394E, X394H, X394I, X394L, X394M, X394N, X394R, X394S, X395A, X395H, X395M, X395V, X396H, X396P, X397D, X397H, X397P, X397S, X398M, X399P, X39E, X39K, X3A, X3F, X3G, X3I, X3K, X3L, X3Q, X3V, X400A, X400D, X400E, X400G, X400H, X400I, X400K, X400L, X400M, X400N, X400P, X400Q, X400R, X400S, X400V, X400W, X401I, X401K, X401M, X401T, X403N, X405C, X405H, X405M, X405T, X405V, X406P, X407D, X407R, X407S, X408E, X408I, X408Q, X40I, X40S, X410H, X410I, X410K, X410L, X410P, X410R, X410Y, X413S, X414C, X414E, X414S, X415E, X415I, X416S, X418C, X418N, X418P, X41C, X41D, X41E, X41G, X41Q, X41S, X41T, X421N, X421P, X424A, X426D, X426W, X427C, X427F, X427G, X427K, X427Q, X427R, X427S, X427T, X427V, X429A, X429D, X429E, X429F, X429G, X429I, X429M, X429N, X429P, X429Q, X429S, X429T, X429V, X429W, X42C, X42I, X42Q, X42V, X431I, 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X98G, X98N, X99H, X99K, X99N, X100W 및 X1G로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상, 바람직하게는 1-30개의 아미노산 치환을 갖는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어지는 것인 알파-아밀라제 변이체.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 9, 130, 179, 181, 186, 190, 195, 202, 206, 244, 402, 419, 420, 422, 423, 428, 430, 435, 441, 444, 450, 452, 454, 466, 469, 473, 475, 476, 479, 483 및 485로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 1개 이상의 위치에서 추가의 아미노산 변경, 바람직하게는 추가의 치환, 바람직하게는 X9D, X9F, X9K, X9L, X9N, X9P, X9Q, X9S, X9T, X9Y, X130V, X179G, X179L, X181D, X181E, X181F, X181H, X181I, X181N, X181Q, X181S, X181T, X181V, X181W, X181Y, X186A, X186C, X186D, X186E, X186F, X186H, X186I, X186K, X186L, X186M, X186N, X186Q, X186R, X186S, X186V, X186W, X186Y, X190H, X195F, X195H, X195K, X195L, X195W, X195Y, X202L, X206C, X206H, X206L, X206M, X206Y, X244A, X244C, X244D, X244E, X244F, X244G, X244H, X244M, X244N, X244Q, X244V, X402T, X419C, X420D, X420E, X420G, X420H, X420K, X420L, X420Q, X422C, X422N, X422H, X423F, X423M, X423Q, X423S, X428A, X428C, X428D, X428E, X428G, X428I, X428K, X428L, X428M, X428N, X428R, X428S, X428V, X428W, X428Y, X430A, X430C, X430D, X430E, X430F, X430G, X430I, X430L, X430P, X430Q, X430S, X430T, X430V, X435E, X435K, X435P, X435R, X435S, X435A, X435D, X437A, X437L, X437T, X437W, X441C, X441D, X441K, X441L, X441M, X441N, X441S, X444E, X444H, X444K, X444M, X444N, X444R, X444T, X450C, X450D, X450E, X450H, X450I, X450L, X450M, X450P, X450Q, X450R, X450T, X452A, X452C, X452E, X452F, X452I, X452K, X452M, X452N, X452R, X452T, X454A, X454E, X454K, X454L, X454M, X454P, X454S, X454T, X466E, X466W, X469F, X469L, X469Y, X473H, X473Q, X473R, X475A, X475K, X475N, X475E, X475L, X476G, X476E, X479A, X479I, X479K, X479M, X483F, X483I, X483L, X483Q, X483R, X485K 및 X485R로 이루어진 아미노산 치환 군으로부터 선택된 1개 이상의 추가의 아미노산 치환을 추가로 포함하며, 여기서 넘버링은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열에 따른 것인 알파-아밀라제 변이체.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 알파-아밀라제 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
- 제12항에 따른 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 구축물 또는 발현 벡터.
- 제12항에 따른 폴리뉴클레오티드, 제13항에 따른 핵산 구축물, 또는 제13항에 따른 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 알파-아밀라제 변이체 및 적어도 1종의 추가의 성분을 포함하는 조성물.
- 제15항에 있어서, 세제 조성물, 바람직하게는 세탁 세제 조성물 또는 자동 식기 세척 (ADW) 세제 조성물인 조성물.
- 제16항에 있어서, 1종 이상의 계면활성제 및/또는 1종 이상의 빌더, 바람직하게는 강한 격리 빌더를 포함하는 조성물.
- 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 언급된 알파-아밀라제 변이체와 상이한 1종 이상의 제2 효소, 바람직하게는 프로테아제, 제2 아밀라제, 리파제, 셀룰라제, 락카제, 만난아제, 펙티나제, 크실라나제 및 뉴클레아제로 이루어진 군으로부터 선택된, 특히 바람직하게는 프로테아제, 만난아제 및 리파제로부터 선택된 1종 이상의 제2 효소, 가장 바람직하게는 프로테아제를 포함하는 조성물.
- 알파-아밀라제 변이체를 생산하는 방법으로서
a. 제14항에 따른 상기 숙주 세포를 상기 알파-아밀라제 변이체의 발현에 적합한 조건 하에 배양하는 단계; 및
b. 상기 알파-아밀라제 변이체를 회수하는 단계
를 포함하는 방법. - 세정 공정, 예컨대 세탁 또는 경질 표면 세정에서의 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 알파-아밀라제 변이체의 용도.
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