CN113874499A - 多肽变体 - Google Patents

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L.H.欧斯特加德
A.H.约翰森
S.丹尼尔森
R.A.帕赫
J.M.詹森
F.W.拉斯穆森
M.古德曼
K.D.蒂德曼
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    • C12Y302/01052—Beta-N-acetylhexosaminidase (3.2.1.52)

Abstract

本发明涉及多肽变体以及用于获得变体的方法。本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸；包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞；以及使用这些变体的方法。

Description

多肽变体
序列表的引用
本申请含有计算机可读形式的序列表，将其通过引用并入本文。
发明背景
技术领域
本发明涉及相对于亲本分散蛋白具有改进特性的新颖分散蛋白变体，这些特性可以包括以下中的一种或多种：洗涤性能、稳定性例如洗涤剂和/或储存稳定性。本发明的变体适合用于在清洁过程和洗涤剂组合物(如洗衣组合物和餐具洗涤组合物(包括手洗和自动餐具洗涤组合物))中使用。本发明还涉及编码这些变体的分离的DNA序列、表达载体、宿主细胞以及用于产生和使用本发明的分散蛋白变体的方法。
背景技术
几十年来，酶一直被用于洗涤剂中，与商业最相关的是分别有效去除蛋白质和淀粉相关污垢的蛋白酶和淀粉酶。但是，大多数与家庭护理有关的污垢是各种有机物的复杂混合物。硬表面和织物暴露于皮肤碎片，例如死细胞、汗液、皮脂、污染以及源自来自环境和来自例如人体的微生物的污渍。复杂的有机污渍(如来自人体皮肤的生物污垢，例如死皮细胞、汗液、皮脂，特别是腋下污垢)由不同的物质(如蛋白质、淀粉、油脂，但也包括例如多糖)组成。因此，去除污渍需要不同的酶活性，具体取决于靶向的特定的污渍。
为了在清洁过程中有用，如衣物洗涤酶这样的分散蛋白需要在洗涤剂组合物中稳定并且与标准洗涤剂组分如表面活性剂、助洗剂、漂白剂等相容。
本发明提供了适合用于洗涤剂(例如用于改进衣物清洁和洗涤/餐具清洗机)的这类酶。
发明内容
本发明涉及分散蛋白变体，这些分散蛋白变体特别适用于洗涤剂和清洁过程，如衣物洗涤和餐具洗涤。
本发明的一个方面涉及分散蛋白变体，该分散蛋白变体在对应于一个或多个以下位置的一个或多个位置处包含改变，优选地取代：SEQ ID NO:1中所示的多肽的2、3、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、140、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、225、227、230、232、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321或323，其中该分散蛋白变体具有氨基己糖苷酶活性优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性，并且其中与具有SEQID NO:1的分散蛋白相比，该变体具有以半衰期改进因子HIF测量的增加的稳定性，优选地热稳定性。
本发明的一个方面涉及分散蛋白变体，该分散蛋白变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含改变，优选地取代：SEQ ID NO:1的多肽的2、3、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、140、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、225、227、230、232、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321和323，其中该分散蛋白变体具有β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性，其中该分散蛋白变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，并且其中与SEQ ID NO:1的分散蛋白相比，该变体具有以半衰期改进因子HIF测量的增加的稳定性，优选地热稳定性。
本发明的一个方面涉及分散蛋白变体，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的至少一个改变：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、V25R、D26M、Y30*、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128C、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207N、D207Q、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、G222D、E224A、E224P、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y282E、Y282N、Y281R、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、和N323R，其中这些位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置，其中该分散蛋白变体具有氨基己糖苷酶活性优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性，优选地其中该在一个或多个位置处的改变产生了分散蛋白变体，与SEQ ID NO:1中所示的多肽相比，该分散蛋白变体具有以至少1.1的改进因子HIF测量的增加的稳定性，优选地热稳定性，并且优选地其中分散蛋白变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
本发明的一个方面涉及用于获得分散蛋白变体的方法，该方法包括：
a)向具有氨基己糖苷酶，优选地β-1,6-N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性的分散蛋白亲本中引入在对应于以下位置的一个或多个位置处的改变，优选地取代：SEQ ID NO:1的多肽的2、3、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、140、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、225、227、230、232、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321或323，
b)并且回收该变体。
本发明的一个方面涉及用于获得分散蛋白变体的方法，该方法包括：
a)向具有1,6-N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性的分散蛋白亲本中引入
在对应于以下位置的一个或多个位置处的改变，优选地取代：SEQ ID NO:1的多肽的2、3、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、140、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、225、227、230、232、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321和323。
b)并且回收该变体。
本发明的一个方面涉及组合物，优选地清洁组合物，其包含根据本发明的变体。
本发明的一个方面涉及清洁物品的方法，该方法包括a)向清洁组合物中添加根据本发明的分散蛋白变体并且b)用该组合物洗涤物品，其中该物品是纺织品或硬表面。
本发明的一个方面涉及用于寻找改进的多肽变体的方法，该方法包括以下步骤：
a)在经选择的，优选地所有多肽位置处产生多样性，从而制备多肽变体(VL)的文库，并且
b)选择具有改进的变体的子文库(VLSub)。
以上方法优选地包括使变体的一些子集经受一种或多种应激条件，并且然后使参考分散蛋白变体不受应激。可以以这种方式比较子集，并选择改进的变体。
本发明的一个方面涉及用于寻找改进的多肽变体的方法，该方法包括以下步骤：
a)在经选择的，优选地所有多肽位置处产生多样性，从而制备多肽变体(VL)的文库，
b)将多肽变体(VL)的文库的一部分暴露于适用于测量目的特性的一种或多种应激条件下，从而产生应激VLS+n和未应激VLUS文库；
c)比较该应激VLS和未应激VLUS文库；并且
d)选择具有改进的变体的子文库(VLSub)。
定义
术语“辅助材料”意指针对希望的特定类型的洗涤剂组合物和产品形式(例如，液体、颗粒、粉末、棒、糊、喷雾、片剂、凝胶、或泡沫组合物)选择的任何液体、固体或气体材料，这些材料还优选地与用于该组合物中的分散蛋白变体酶相容。在一些方面，颗粒组合物处于“压缩”形式，而在其他方面，液体组合物处于“浓缩”形式。
术语“等位基因变体”意指占据同一染色体基因座的基因的两种或更多种替代形式中的任一种。等位基因变异通过突变而自然产生，并且可以导致群体内部的多态性。基因突变可以是沉默的(所编码的多肽无变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
术语“生物膜”意指在表面上，例如纺织品、餐具或硬表面上，细胞彼此粘附在一起的任何群组的微生物。这些粘附细胞通常嵌入细胞外聚合物(EPS)的自生基质中。生物膜EPS是一般由细胞外DNA、蛋白质和多糖组成的聚合物团块。生物膜可以形成在活的或非活的表面上。在生物膜中生长的微生物细胞与同一生物的浮游细胞(相比之下，浮游细胞是可以在液体介质中漂浮或浮游的单个细胞)在生理上是不同的。生活在生物膜中的细菌通常具有与同一物种的自由漂浮细菌显著不同的特性，因为膜的密集并且受保护的环境允许它们以不同方式协作和相互作用。这种环境的一个益处是增加对洗涤剂和抗生素的抗性，因为密集的细胞外基质和细胞的外层保护群落的内部。关于产生衣物洗涤生物膜的细菌可以在以下物种中找到：不动杆菌属物种(Acinetobacter sp.)、气微菌属物种(Aeromicrobiumsp.)、短波单胞菌属物种(Brevundimonas sp.)、微杆菌属物种(Microbacterium sp.)、滕黄微球菌(Micrococcus luteus)、假单胞菌属物种(Pseudomonas sp.)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)以及寡养单胞菌属物种(Stenotrophomonas sp.)。
术语“生物污垢”意指由几种类型的有机材料(如蛋白质、淀粉、油脂，但也包括例如多糖)组成的污渍。
术语“cDNA”意指可以通过从得自原核或真核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子反转录来制备的DNA分子。cDNA缺少可能存在于对应基因组DNA中的内含子序列。初始的初级RNA转录物是mRNA的前体，其要通过一系列的步骤(包括剪接)进行加工，然后呈现为成熟的剪接的mRNA。
术语“进化枝”意指基于追溯至共同祖先的同源性特征聚集在一起的一组多肽。多肽进化枝可以被看作是系统发生树，并且进化枝是由共同祖先及其所有直系后裔组成的一组多肽。形成一组例如系统发生树中所示的进化枝的多肽经常可以享有共同的特性，并且也与不在进化枝中的其他多肽相比在功能上更密切相关。
术语“编码序列”意指直接指明其多肽产物的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由开放阅读框决定，该开放阅读框通常以ATG起始密码子或替代起始密码子(如GTG和TTG)开始，并且以终止密码子(如TAA、TAG和TGA)结束。编码序列可以是DNA、cDNA、合成、或重组的多核苷酸。
术语“控制序列”意指对于表达编码本发明变体的多核苷酸所必需的所有组分。每个控制序列对于编码变体的多核苷酸可以是天然的或外源的，或者彼此可以是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导序列、多腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、以及转录终止子。最少，控制序列包括启动子、以及转录和翻译终止信号。这些控制序列可以提供有接头用于引入有利于将这些控制序列与编码变体的多核苷酸的编码区连接的特异性限制性酶切位点。
关于术语“深度-清洁”意指破坏、或去除有机物质的组分(例如生物污垢或生物膜和EPS，如多糖、PNAG、蛋白质、DNA、污垢)或有机物质中存在的其他组分。
除非另外指明，否则术语“洗涤剂组合物”包括颗粒或粉末形式的通用或重垢洗涤剂，尤其是清洁洗涤剂；液体、凝胶或糊状的通用洗涤剂，尤其是所谓的重垢液体(HDL)类型；液体精细织物洗涤剂；手动餐具洗涤剂或轻垢餐具洗涤剂，尤其是高起泡类型的那些；机器餐具洗涤剂，包括用于供家庭和公共机构使用的不同的片剂、颗粒、液体和冲洗助剂类型；液体清洁剂和消毒剂，包括抗菌手洗类型、清洁条、肥皂条、漱口水、义齿清洁剂、汽车或地毯香波、浴室清洁剂；洗发香波和头发冲洗剂；沐浴凝胶、泡沫浴液；金属清洁剂；以及清洁辅剂(如漂白添加剂)和“去污棒(stain-stick)”或预处理型。就旨在用于玷污的物体清洁的洗涤介质中的混合物而言，使用术语“洗涤剂组合物”和“洗涤剂配制品”。在一些方面，就洗涤织物和/或衣服而言，使用该术语(例如，“衣物洗涤剂”)。在替代方面中，该术语是指其他洗涤剂，如用于清洁餐具、刀具等的那些(例如“餐具洗涤洗涤剂”)。并不旨在使本发明限于任何特定的洗涤剂配制品或组合物。术语“洗涤剂组合物”不旨在限于含有表面活性剂的组合物。其意图是，除根据本发明的变体之外，该术语涵盖了可能含有以下的洗涤剂：例如表面活性剂、助洗剂、螯合剂(chelator)或螯合试剂(chelating agent)、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防腐蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶激活剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂、以及增溶剂。
术语“分散蛋白”和缩写“Dsp”或“Disp”是例如在生物膜、EPS、细胞碎片和其他生物污垢中发现的具有氨基己糖苷酶活性的多肽，EC 3.2.1.-，其催化N-乙酰基-葡糖胺聚合物(聚-N-乙酰葡糖胺，PNAG)的β-1,6-糖苷键的水解。因此，分散蛋白是具有β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性或聚-β-1,6-N-乙酰葡糖胺(PNAG)活性的酶。出于本发明的目的，根据实例3的活性测定中所述的程序确定分散蛋白活性即，β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。在一些方面，与亲本分散蛋白相比，本发明的分散蛋白变体具有改进的分散蛋白活性。在一些方面，本发明的分散蛋白变体与SEQ ID NO:1中所示多肽相比具有至少100％例如至少110％、至少120％、至少130％、至少140％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％、或至少200％的分散蛋白活性或与SEQ ID NO:1中所示多肽相比具有例如从100％至200％的分散蛋白活性。
术语“酶的有效量”是指在特定应用中，例如在定义的洗涤剂组合物中实现所需的酶活性所必需的酶的量。此类有效量由本领域的普通技术人员容易地确定并且基于许多因素，如使用的特定酶、清洁应用、洗涤剂组合物的特定组成、以及是否需要液体或干燥(例如，颗粒、条)组合物等。术语分散蛋白变体的“有效量”是指实现所希望水平的酶活性(例如在定义的洗涤剂组合物中)的前述分散蛋白变体的量。
术语“表达”包括涉及产生变体的任何步骤，包括但不限于：转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。
术语“表达载体”意指包含编码变体的多核苷酸并可操作地连接至提供其表达的另外的核苷酸的线性或环形DNA分子。
术语“织物”涵盖任何纺织材料。因此，其意图是，该术语涵盖衣服，以及织物、纱线、纤维、非编织材料、天然材料、合成材料、以及任何其他纺织材料。
术语“高洗涤剂浓度”系统包括其中大于约2000ppm的洗涤剂组分存在于洗涤水中的洗涤剂。欧洲洗涤剂一般被认为是高洗涤剂浓度系统。
术语“宿主细胞”意指对用包含本发明多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行的转化、转染、转导等易感的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不相同的任何亲本细胞子代。
术语“改进的特性”意指与变体有关的特征，该变体与亲本相比和/或与具有SEQID NO:1的分散蛋白相比、或与具有与所述变体相同的氨基酸序列但在所述指定位置中的两个或更多个处不具有改变的分散蛋白相比有所改进。此类改进的特性包括但不限于稳定性，如洗涤剂稳定性、洗涤性能(例如深度清洁效果，并且该深层清洁效果可以包括但不限于去胶效果(一些有机材料如EPS是粘性的，即胶样的并且使污物粘在材料上))，提高白度，减少恶臭和重新沉积。改进的特性还包括在某些酶(例如蛋白酶稳定性)或物质存在下的改进的稳定性(例如在亚硫酸盐(例如亚硫酸盐稳定性)存在下的稳定性)。
术语“改进的分散蛋白活性”在此被定义为改变的分散蛋白活性，例如通过增加地催化N-乙酰基-葡糖胺聚合物(聚-N-乙酰葡糖胺，PNAG)的β-1,6-糖苷键，即分散蛋白变体相对于(或相比于)亲本分散蛋白变体活性(如与具有SEQ ID NO:1的分散蛋白相比或与所述变体具有相同氨基酸序列但在所述指定位置的一个或多个处不具有改变的分散蛋白相比)显示活性变化。
术语“低洗涤剂浓度”系统包括其中小于约800ppm的洗涤剂组分存在于洗涤水中的洗涤剂。亚洲(例如，日本)洗涤剂典型地被认为是低洗涤剂浓度系统。
术语“改进的洗涤性能”包括但不限于术语“深度清洁效果”。改进的特性，例如与分散蛋白亲本(SEQ ID NO:1中所示的分散蛋白)相比、或者与具有与所述变体相同的氨基酸序列但是在所述指定位置的一个或多个处不具有改变的分散蛋白相比，测量了根据本发明的分散蛋白变体的深度清洁性能。可以将改进的性能例如深度清洁性能表达为染污的小块布样的反射值。在洗涤并冲洗之后，将小块布样摊开铺平并且允许在室温下风干过夜。在洗涤的次日评估所有洗涤的小块布样。使用具有非常小孔径的Macbeth Color Eye 7000反射分光光度计进行小块布样的光反射评估。在入射光中没有UV的条件下进行测量，并提取460nm下的反射率。阳性反应表明污垢被除去。
术语“衣物洗涤”涉及家用衣物洗涤和工业衣物洗涤两者并且意指用含有本发明的清洁或洗涤剂组合物的溶液处理纺织品的过程。衣物洗涤过程可以例如使用例如家用或工业洗衣机进行或可以手动进行。
术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰(如N末端加工、C末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等)之后处于其最终形式的多肽。在一些方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:1的氨基酸1至324。根据本发明使用的成熟多肽的N-末端可以基于EDMAN N-末端测序数据和完整的MS数据经实验证实。在本领域中已知的是，宿主细胞可以产生由相同多核苷酸表达的两种或更多种不同的成熟多肽(即，具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)的混合物。
术语“中洗涤剂浓度”系统包括其中约800ppm与约2000ppm之间的洗涤剂组分存在于洗涤水中的洗涤剂。北美洲洗涤剂一般被认为是中洗涤剂浓度系统。
术语“核酸构建体”意指从天然存在的基因中分离的、或以自然界中不会另外存在的方式被修饰成含有核酸片段的、或合成的单链或双链的核酸分子。当核酸构建体含有表达本发明编码序列所需要的控制序列时，术语核酸构建体与术语“表达盒”是同义的。
术语“非织物洗涤剂组合物”包括非纺织品表面洗涤剂组合物，包括但不限于用于硬质表面清洁的组合物，如餐具洗涤洗涤剂组合物(包括手动餐具洗涤组合物)、口腔组合物、义齿组合物、以及个人清洁组合物。
术语“可操作地连接”意指一种构型，在该构型中控制序列相对于多核苷酸的编码序列放置在适当位置处，这样使得控制序列指导编码序列的表达。
术语“亲本”分散蛋白、分散蛋白亲本或前体分散蛋白可以互换使用。在本发明的上下文中，“亲本分散蛋白”应理解为一种分散蛋白，在该分散蛋白中在氨基酸序列中进行至少一次改变以产生具有与其中进行改变的分散蛋白序列即亲本分散蛋白具有小于100％的同一性的氨基酸序列的分散蛋白变体。因此，亲本是具有与该变体相比相同的氨基酸序列但在这些指定位置中的一个或多个处不具有改变的分散蛋白。应理解的是，在上下文中的“具有相同的氨基酸序列”的表达是相对于100％的序列同一性。在特定方面中，该分散蛋白亲本是与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少61％、至少62％、至少63％、至少64％、至少65％、至少66％、至少67％、至少68％、至少69％、至少70％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6或100％的同一性的分散蛋白。
本文使用的术语“相关洗涤条件”指示在洗涤剂细分市场中实际用于家用的条件，特别地洗涤温度、时间、洗涤力学、洗涤剂浓度、洗涤剂类型以及水硬度。
术语“稳定性”包括储存稳定性和在使用期间(例如在洗涤过程)中的稳定性，并且反应了作为时间函数的根据本发明的分散蛋白变体的稳定性，例如当分散蛋白变体置于溶液中特别是在洗涤剂溶液中时，保留多少活性。稳定性受许多因素影响，例如pH、温度、洗涤剂组合物，例如助洗剂、表面活性剂的量等。如实例2a、2b、3、4、5和6中所述的可以以改进的RA(残留活性)、Tm(熔融温度)或T1/2(半衰期)来测量分散蛋白稳定性。术语“改进的稳定性”或“增加的稳定性”在本文中被定义为变体分散蛋白相对于亲本分散蛋白和/或相对于SEQID NO:1的稳定性显示在溶液中增加的稳定性。“改进的稳定性”和“增加的稳定性”包括洗涤剂稳定性。术语“洗涤剂稳定性”或“改进的洗涤剂稳定性”被定义为与亲本分散蛋白相比洗涤剂(例如清洁组合物)中改进的稳定性。可以通过实例2a、2b、3、4、5和6中所述的RAR(残留活性比)、HIF(半衰期改进因子)或Tm来测量分散蛋白变体改进。
术语“纺织品”是指编织织物，以及适合用于转化为或用作纱线、编织、针织、以及非编织织物的短纤维和长丝。该术语涵盖从天然、以及合成(例如制造的)纤维制成的纱线。术语“纺织材料”是纤维、纱线中间体、纱线、织物、以及从织物制成的产品(例如，衣服以及其他物品)的通用术语。
术语“转录终止子”用于指标记基因结束的基因序列区段或者在基因组DNA上用于转录的操纵子。
术语“变体”意指与亲本或参考多肽相比在一个或多个(例如，几个)位置处包含改变的多肽。改变可以是取代、插入或缺失。取代意指占据一个位置的氨基酸被一个不同的氨基酸置换，缺失意指除去占据一个位置的氨基酸，并且插入意指在与占据一个位置的氨基酸相邻处添加氨基酸，例如1至10个氨基酸，优选1至3个氨基酸。术语“分散蛋白变体”意指具有氨基己糖苷酶，优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性或是对聚β-1,6-N-乙酰葡糖胺(PNAG)有活性，并且与亲本分散蛋白相比(例如与SEQ ID NO:1相比)其在一个或多个(或一个或几个)位置处包含改变(即，取代、插入、和/或缺失)的多肽。术语“分散蛋白活性”意指具有氨基己糖苷酶，优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性或对聚β-1,6-N-乙酰葡糖胺(PNAG)有活性的多肽。本发明的变体例如分散蛋白变体优选地具有SEQ ID NO:1中所示的多肽的至少20％，例如，至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或至少100％的分散蛋白活性。
如本文使用的术语“水硬度”或“硬度”(degree of hardness)或“dH”或“°dH”是指德国硬度(German degrees of hardness)。一度被定义为10毫克氧化钙/升水。
术语“野生型分散蛋白”意指由天然存在的有机体(如在自然界中发现的真菌、细菌、古生菌、酵母、植物或动物)表达的分散蛋白。
变体命名惯例
出于本发明的目的，将SEQ ID NO:1中披露的多肽用于确定另一种分散蛋白中的对应氨基酸残基。将另一种分散蛋白的氨基酸序列与SEQ ID NO:1中所披露的多肽进行比对，并且基于该比对，使用例如如在EMBOSS包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件(TheEuropean Molecular Biology Open Software Suite)，Rice等人,2000，Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch)，1970，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定与SEQ ID NO:1中所披露多肽中的任何氨基酸残基对应的氨基酸位置编号。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版)取代矩阵。
另一种分散蛋白中对应氨基酸残基的鉴定可以使用几种计算机程序使用其对应的缺省参数通过多个多肽序列的比对来确定，这些计算机程序包括但不限于MUSCLE(通过对数-期望的多序列比较；3.5版本或更新版本；Edgar,2004,Nucleic Acids Research[核酸研究]32:1792-1797)、MAFFT(6.857版本或更新版本；Katoh和Kuma,2002,Nucleic AcidsResearch[核酸研究]30:3059-3066；Katoh等人,2005,Nucleic Acids Research[核酸研究]33:511-518；Katoh和Toh,2007,Bioinformatics[生物信息学]23:372-374；Katoh等人,2009,Methods in Molecular Biology[分子生物学方法]537:39-64；Katoh和Toh,2010,Bioinformatics[生物信息学]26:1899-1900)，以及采用ClustalW(1.83或更新版本；Thompson等人,1994,Nucleic Acids Research[核酸研究]22:4673-4680)的EMBOSS EMMA。
当另一种酶与例如SEQ ID NO:1的多肽相背离使得传统的基于序列的比较方法不能检测其相互关系时(Lindahl和Elofsson,2000,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]295:613-615)，可以使用其他成对序列比较算法。在基于序列的搜索中较高的敏感度可使用搜索程序来获得，这些搜索程序利用多肽家族的概率表现(谱)来搜索数据库。例如，PSI-BLAST程序通过迭代数据库搜索过程来产生多个谱，并且能够检测远距离同源物(Atschul等人,1997,Nucleic Acids Res.[核酸研究]25:3389-3402)。如果多肽的家族或超家族具有在蛋白结构数据库中的一个或多个代表，可以实现甚至更高的敏感度。程序例如GenTHREADER(Jones,1999,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]287:797-815；McGuffin和Jones,2003,Bioinformatics[生物信息学]19:874-881)利用来自多种来源(PSI-BLAST、二级结构预测、结构比对谱、以及溶剂化势)的信息作为预测查询序列的结构折叠的神经网络的输入。类似地，Gough等人,2000,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]313:903-919的方法可用于将未知结构的序列与存在于SCOP数据库中的超家族模型进行比对。这些比对进而可以用于产生多肽的同源性模型，并且使用出于该目的而开发的多种工具可以评估此类模型的准确度。
对于已知结构的蛋白质，有几种工具和资源可用于检索并产生结构比对。例如，蛋白的SCOP超家族已在结构上进行比对，并且那些比对是可访问的并且可下载的。可以使用多种算法如距离比对矩阵(Holm和Sander,1998,Proteins[蛋白质]33:88-96)或组合延伸(Shindyalov和Bourne,1998,Protein Engineering[蛋白质工程]11:739-747)比对两种或更多种蛋白质结构，并且这些算法的实施可以另外用于查询具有目的结构的结构数据库，以便发现可能的结构同源物(例如，Holm和Park,2000,Bioinformatics[生物信息学]16:566-567)。
由于取决于所选择的变体亲本，不同的氨基酸可以存在于给定位置，因此在以下定义中用#1、#2等表示氨基酸位置。在描述本发明的变体中，为了便于参考，对以下所述的命名法进行了改编。采用公认的IUPAC单字母或三字母氨基酸缩写。
取代：对于氨基酸取代，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、取代的氨基酸。因此，在位置#1处的缬氨酸被丙氨酸取代被表示为“Val#1Ala”或“V#1A”。多个突变可以由加号(“+”)或逗号(，)分开，例如，“Val#1Ala+“Pro#2Gly”或V#1A,P#2G分别代表在位置#1和#2处的缬氨酸(V)和脯氨酸(P)被丙氨酸(A)和甘氨酸(G)取代。如果在给定位置中可以取代多于一种氨基酸，那么这些氨基酸可以被列于括号内，如[X]或{X}。因此，如果Trp和Lys两者都可以被取代，代替占据位置#1的氨基酸，这可以被表示为X#1{W,K}、X#1[W,K]或X#1[W/K]，其中X表示存在于亲本分散蛋白(例如像SEQ ID NO:1中所示的分散蛋白或与其具有至少60％同一性的分散蛋白)的位置处的氨基酸残基。在一些情况下，这些变体可以表示为#1{W,K}或X#2P，强调待取代的氨基酸取决于亲本而变化。为了方便，当SEQ ID NO:1被用于进行编号时，用SEQ ID NO:1中对应位置中的氨基酸(例如D2V)表示。然而，本领域技术人员将清楚，包含D2V的分散蛋白变体不限于在对应于SEQ ID NO:1的位置2的位置处具有“D”(天冬氨酸)的亲本分散蛋白。在位置2中具有例如天冬酰胺的亲本分散蛋白中，本领域技术人员将翻译突变指定为D2V至N2V。在位置1中亲本分散蛋白具有缬氨酸的情况下，本领域技术人员将认识到，亲本分散蛋白在此位置处没有发生变化。这同样适用于以下描述的缺失和插入。
缺失：对于氨基酸缺失，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、*。因此，在位置#1处的缬氨酸的缺失被表示为“Val#1*”或“V#1*”。多个缺失可以由加号(“+”)或逗号分开，例如“Val#1*+Pro#2*”或“V#1*,P#2*”。
插入：另外的氨基酸残基的插入，例如像在Val#1后插入赖氨酸可以被表示为：Val#1ValLys或V#1VK。可替代地，另外的氨基酸残基的插入，如在V#1后插入赖氨酸可以被表示为：*#1aK。当插入多于一个的氨基酸残基，例如像在#1后插入Lys和Ala时，这种插入可以被表示为：Val#1ValLysGly或V#1VKG。在此类情况下，还可以通过将小写字母添加到在所插入的一个或多个氨基酸残基之前的氨基酸残基位置编号处来对所插入的一个或多个氨基酸残基进行编号，在该实例中：*#1aK*#1bG。
多种改变：包含多种改变的变体可以由加号(“+”)或由逗号(，)分开，例如“Val#1Trp+Pro#2Gly”或“V#1W,P#2G”代表在位置#1和#2处的缬氨酸和脯氨酸分别如上描述的被色氨酸和甘氨酸取代。
不同改变：当可以在一个位置处引入不同的改变时，这些不同的改变由逗号分开，例如“Val#1Trp,Lys”或V#1W,K代表在位置#1处的缬氨酸被色氨酸或赖氨酸取代。因此，“Val#1Trp,Lys+Pro#2Asp”表示以下变体：“Val#1Trp+Pro#2Asp”、“Val#1Lys+Pro#2Asp”或V#1W,K+P#2D。在本发明的上下文中，术语“取代组”是与亲本或参考酶相比包含多于一个突变的变体，例如取代组D2V+Q3L(与SEQ ID NO:1相比)是SEQ ID NO:1的变体，与SEQ ID NO:1相比其包含两个突变D2V+Q3L。
当改变，例如取代组中的突变例如通过逗号或加号“+”分隔时，这意味着组中的所有改变都存在并且选择位于改变(改变组)之间。例如“包含以下取代组中的一个或多个：Q3I+A49W、Q3I+N59E、Q3I+S163P、Q3I+S186R、Q3I+Q215K、Q3I+S225G、Q3I+N227T、Q3I+N252P、Q3I+N267T、Q3I+F276A、Q3I+Y281P、Q3I+K308Q、Q3I+K308E、Q3I+K309E、Q3I+K312Q、Q3I+K312E…
意指在通过逗号分隔的每个取代组之间进行选择。
术语亲本酶包括如参考酶、骨架酶或起始酶等术语并用于表示进行突变(例如取代)的酶。这些术语可以互换使用。
具体用于进化枝的命名法
出于本发明的目的，命名[IV]或[I/V]意指在该位置处的氨基酸可以是异亮氨酸(Ile，I)或缬氨酸(Val，V)。同样，对于如本文所述的其他组合，命名[LVI]和[L/V/I]意指在此位置处的氨基酸可以是亮氨酸(Leu，L)、缬氨酸(Val，V)或异亮氨酸(Ile，I)，并依次类推。除非进一步另有限制，否则氨基酸X被这样定义，使得它可以是20种天然存在氨基酸中的任一种。
具体实施方式
本发明提供了优选地获得自土地芽孢杆菌属(Terribacillus)(特别是嗜糖土地芽孢杆菌(Terribacillus saccharophilus))的新颖分散蛋白。本发明的分散蛋白优选地与具有SEQ ID NO:1的多肽包含至少60％序列同一性，并且与具有SEQ ID NO:1的分散蛋白相比，在至少一个氨基酸位置处包含改变。在一些方面，本发明的分散蛋白变体包含氨基酸序列，该氨基酸序列在等同于SEQ ID NO:1中的位置的位置处包含做出的至少两个氨基酸取代。本发明还涉及用于产生分散蛋白变体的方法。与亲本分散蛋白相比或与SEQ ID NO:1相比，本发明的分散蛋白变体具有至少一个改进的特性。特性包括但不限于：稳定性如；在洗涤剂中的稳定性、储存稳定性、在洗涤中的稳定性和热稳定性、洗涤性能，特别是深层清洁性能、增加的表达水平和恶臭减少。优选地，改进的特性是改进的稳定性，如洗涤剂(例如清洁组合物)中的稳定性。当家庭护理表面(如纺织品)被弄脏时，污渍通常是各种有机物质(如皮肤碎片，例如死细胞、汗液和皮脂、来自外部和来自例如身体的污染)的复杂混合物。此生物污垢由不同的有机污渍(例如蛋白质、淀粉、油脂以及例如多糖)组成。复杂污渍，通常顽固且难以去除。WO 2017/186943(诺维信公司(Novozymes A/S))中描述了分散蛋白在洗衣过程和洗涤剂中的用途，其公开了来自土地芽孢杆菌属的分散蛋白，例如具有SEQ IDNO 1的分散蛋白。分散蛋白已显示非常有效地去除例如洗衣条件下来自纺织品的PNAG(聚-N-乙酰葡糖胺)相关的污渍。然而，当将酶配制成清洁组合物，如洗涤剂时，其活性可能随时间降低，特别是在液体洗涤剂中。显然，优选地，酶在清洁和洗涤剂组合物中在储存期间(储存稳定性)和洗涤过程期间(洗涤中稳定性)稳定。前者可以在加速稳定性试验中测量，其中在应激(例如增加加热)和非应激条件下测试分散蛋白变体，测量残留活性(RA)或半衰期(T1/2)并将其与亲本(或另一参考)的值进行比较。可以将参考或亲本分散蛋白的残留活性比(RAR)或半衰期改进因子(HIF)指定为值1。因此，与亲本或参考分散蛋白相比，具有高于1的RAR或HIF的分散蛋白变体在测量条件下具有改进的稳定性。在本发明的优选的实施例中，与亲本分散蛋白相比，分散蛋白变体具有改进的稳定性并且因此优于最先进的分散蛋白。
分散蛋白变体
本发明的一些方面涉及SEQ ID NO:1的分散蛋白变体或与其具有至少60％同一性的分散蛋白的变体，并且涉及用于产生SEQ ID NO:1的分散蛋白变体或与其具有至少60％同一性的分散蛋白的方法。
在一个方面中，本发明涉及在选自由以下位置组成的列表的一个或多个位置处包含改变的分散蛋白：2、3、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、140、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、225、227、230、232、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321和323，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个方面中，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的一个或多个位置处包含改变：31、33、36、73、75、94、141、144、241、277、294、297、299，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的一个或多个位置处包含改变：2、3、12、15、18、22、23、24、25、30、49、56、57、59、62、63、68、72、74、77、82、90、99、100、106、114、123、124、125、135、138、163、167、170、171、173、174、175、178、179、181、185、186、187、188、189、199、203、204、205、207、210、215、221、225、227、232、235、244、252、256、260、262、263、264、265、267、270、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、288、290、291、296、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321、322和323，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的一个或多个位置处包含改变：3、15、49、59、140、163、186、207、215、218、225、227、232、235、237、252、260、267、272、276、279、281、288、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的一个或多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的两个或更多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的三个或更多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的四个或更多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的五个或更多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的六个或更多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的七个或更多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的八个或更多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的九个或更多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的十个或更多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的十一个或更多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的十二个或更多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的十三个或更多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的十四个或更多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的十五个或更多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的十六个或更多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在选自由以下位置组成的列表的十七个或更多个位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
在一个优选的方面，本发明涉及分散蛋白，该分散蛋白在以下所有位置处包含取代：3、15、49、59、163、186、225、227、232、235、252、260、272、279、281、308、309和312，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有分散蛋白活性并且优选地其中与亲本相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。
术语“包含取代”在本文中意指与起始分散蛋白或亲本相比包含取代。因此，分散蛋白的氨基酸(例如位置3)被另一个氨基酸替代。
在一些方面，该变体与成熟亲本分散蛋白(例如SEQ ID NO:1中所示的分散蛋白)的氨基酸序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在一些优选的方面，分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的改变：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、V25R、D26M、Y30*、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128C、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207N、D207Q、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、G222D、E224A、E224P、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、和N323R，其中该变体具有分散蛋白活性并且其中每个位置对应于SEQ IDNO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)。
在一些优选的方面，改变是取代并且分散蛋白变体包含选自由以下组成的组一个或多个取代：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、V25R、D26M、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N43H、N43L、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117D、S117H、S117N、S117P、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128C、V128L、V128T、D131V、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、D142R、D142W、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207N、D207Q、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215R、Q215M、Q215L、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、G222D、E224A、E224P、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256E、Q256R、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260V、N260W、N260Y、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264C、D264E、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、和N323R，其中该变体具有分散蛋白活性并且其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQID NO:1进行编号)。
一个方面涉及分散蛋白变体，与具有SEQ ID NO:1的分散蛋白相比，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的一个或多个取代：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19K、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23A、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、L24I、V25R、D26M、Y30A、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N34D、N43H、N43L、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80R、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81N、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K103V、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106R、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117D、S117H、S117N、S117P、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124H、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124N、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125H、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128A、V128C、V128D、V128L、V128T、D131V、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138N、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、V140I、D142R、D142W、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150A、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、S163P、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167A、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181K、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185A、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203Q、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207K、D207N、D207Q、D207R、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215K、Q215R、Q215M、Q215L、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、S221N、G222D、E224A、E224P、S225G、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230N、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233D、N233E、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235A、G235W、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251A、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256D、Q256E、Q256R、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260T、N260V、N260W、N260Y、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264C、D264E、D264N、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288P、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308E、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309E、K309G、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312E、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、Y321F和N323R，其中这些位置对应于SEQ ID NO:1的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)，其中该变体与SEQ ID NO:中所示的多肽具有序列同一性，与SEQ ID NO 1具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，并且其中该变体具有分散蛋白，优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
一个方面涉及分散蛋白变体，与具有SEQ ID NO:1的分散蛋白相比，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的一个或多个取代：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、V25R、D26M、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N43H、N43L、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117D、S117H、S117N、S117P、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128C、V128L、V128T、D131V、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、D142R、D142W、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207N、D207Q、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215R、Q215M、Q215L、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、G222D、E224A、E224P、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256E、Q256R、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260V、N260W、N260Y、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264C、D264E、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、和N323R，其中这些位置对应于SEQ ID NO:1的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有序列同一性，与SEQ ID NO 1具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，并且其中该变体具有分散蛋白，优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
在一些优选的方面，改变是取代并且分散蛋白变体包含选自由以下组成的组一个或多个取代：D2V、Q3F、Q3I、S12A、H15Y、T17W、T17E、V18L、K22M、S23I、S23C、S23T、S23L、S23V、S23E、V25R、Y30L、A49W、A49Y、S56T、N59D、N59C、N59E、N59R、N59F、N59W、N59V、N62C、N62D、T63C、N68Q、S72D、S72E、I74L、S77A、I82V、L90F、E99Q、L100S、T114S、T114C、Y123W、Y124I、Y124M、Y124R、Y124V、Y124Q、Y124T、Y124K、D125R、D125C、D125G、D125K、D125Q、Q135M、D138R、D138K、D138Q、L170D、L170K、L170S、L170H、D171E、D171K、D171Y、D171M、D171Q、D171L、I173C、D174W、D174H、D174M、D174N、F175Y、Q178K、I179T、S181T、S181F、S181Q、S181G、S181N、S181C、E185R、E185M、E185V、S186K、S186M、S186R、S186H、K187G、Y188P、E189V、S199C、S199L、A203G、A203E、A203V、N204L、N204Y、N204V、L205I、D207N、D207S、D207C、D207G、S210T、Q215R、T218Q、N227T、N227K、E232D、G235W、S237W、Y244M、Y244C、N252P、N252C、Q256E、N260Q、Q262H、M263Q、D264E、Y265F、N267T、N267S、Y270F、H272M、H272P、H272I、H272V、N273W、K274H、F276A、F276N、F276K、F276C、I278V、S279N、S279D、S279G、D280E、D280C、Y281P、Y282N、H283I、A284T、A284L、A284I、S288K、V290I、K291R、T296C、T303Q、D304M、D304C、L305M、L305N、S306C、K308D、K308A、K308V、K308Q、K308S、K308Y、K308G、K308L、K308T、K308I、K309C、K309L、K309D、K309Q、K309N、K309T、K309A、K309S、K309M、K309H、K312A、K312Q、K312S、K312W、K312L、K312N、E314L、E314V、E314I、L315I、R319A和N323R，其中该变体具有分散蛋白活性，优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性并且其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)。
在一些方面，该变体与成熟亲本分散蛋白(例如SEQ ID NO:1中所示的分散蛋白)的氨基酸序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在一些方面，本发明的变体中的取代的数目是2-20个，例如2-10个和2-5个，如2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、或20个取代。在一个方面，与包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的分散蛋白相比，与SEQ ID NO:1相比的取代总数为3-20，例如至少5至20，至少10至20或例如至少15至20个取代。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置2的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置2的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Val、Leu、Ala、Trp、Arg或Asn取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：D2V、D2L、D2A、D2W、D2R和D2N，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置3的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置3的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Phe、Leu、Val、Tyr、Met、Ile、Pro或Thr取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：Q3F、Q3L、Q3V、Q3Y、Q3M、Q3I、Q3P和Q3T，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置12的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置12的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ala取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代S12A或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置15的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置15的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Tyr或Phe取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代H15Y或H15F或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置17的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置17的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Trp、Val、Arg、Met、Phe、Cys或Glu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：T17W、T17V、T17R、T17M、T17F、T17C和T17E，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置18的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置18的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Leu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代V18L或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置19的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置19的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Pro、Asn、Lys或Asp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：E19P、E19N、E19K和E19D，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置22的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置22的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ala、Val或Met取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：K22A、K22V和K22M，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置23的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置23的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ala、Cys、Glu、Ile、Leu、Arg、Thr或Val取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：S23A、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T和S23V，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置24的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置24的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ile取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代L24I或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置25的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置25的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Arg取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代V25R或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置26的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置26的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Met取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代D26M或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置30的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置30的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置30的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Arg、Val、Asp、Thr、Asn、Met、Ala或Leu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：Y30R、Y30V、Y30D、Y30T、Y30N、Y30M、Y30A和Y30L，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置32的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置32的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Arg、Met或Leu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：G32R、G32M和G32L，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置34的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置34的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代N34D或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置43的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置43的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置43的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Leu或His取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代N43L或N43H或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置44的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置45的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置45的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asp、Leu或Val取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：N45D、N45L和N45V，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置49的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置49的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Trp或Tyr取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代A49W、A49Y或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置52的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置52的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置52的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Met取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代Y52M或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置54的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置54的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asn、Leu或Met取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：G54N、G54L和G54M，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置56的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置56的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Trp或Thr取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代S56W或S56T或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置57的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置57的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Trp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代S57W或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置58的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置58的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asn取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代E58N或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置59的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置59的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Met、Arg、Val或Trp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置60的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置60的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Val取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代T60V或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置62的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置62的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Trp、Gln、His、Cys或Asp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：N62W、N62Q、N62H、N62C和N62D，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置63的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置63的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Val、Leu、Asn、Arg、Asp或Cys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：T63V、T63L、T63N、T63R、T63D和T63C，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置67的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置67的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Leu或Ala取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代K67L或K67A或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置68的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置68的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Leu或Gln取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代N68L或N68Q或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置71的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置71的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Arg、His、Asn、Trp、或Val取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：L71R、L71H、L71N、L71W和L71V，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置72的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置72的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置72的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Thr、Gly、Cys、Met、Phe、Asn、Tyr、Arg、Ile、Asp或Glu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：S72T、S72G、S72C、S72M、S72F、S72N、S72Y、S72R、S72I、S72D和S72E，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置74的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置74的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Leu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代I74L或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置77的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置77的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ala取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代S77A或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置79的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置79的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Val取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代D79V或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置80的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置80的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置80的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asn、Arg、Trp、Leu、Val、Gln或His取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：K80N、K80R、K80W、K80E、K80L、K80V、K80Q和K80H，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置81的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置81的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Gly、Ala、Trp、Leu、Trp、Thr、Val、Arg、Ser或Asn取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：D81G、D81A、D81L、D81W、D81T、D81V、D81R、D81S和D81N，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置82的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置82的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Val取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代I82V或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置90的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置90的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Phe取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代L90F或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置99的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置99的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Gln或Arg取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代E99Q或E99R或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置100的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置100的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ser取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代L100S或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置103的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置103的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Arg、Val或Ala取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：K103R、K103V和K103A，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置104的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置104的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asn或Trp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代K104N或K104W或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置105的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置105的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asn取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代D105N或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置106的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置106的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Tyr、Leu、His、Glu、Trp、Asn、Arg、Met、Asp、Lys、Ala或Gln取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：V106Y、V106L、V106H、V106E、V106W、V106N、V106R、V106M、V106D、V106K、V106A和V106Q，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置107的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置107的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Met、Trp、Leu、Cys、Val、Ala或Thr取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：K107M、K107W、K107L、K107C、K107V、K107A和K107T，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置110的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置110的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Arg、Val或Met取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：N110R、N110V和N110M，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置111的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置111的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Val、Ala、Arg、Asn、Trp、Met、Gln或Glu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：D111V、D111A、D111R、D111N、D111W、D111M、D111Q和D111E，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置113的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置113的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Thr取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代V113T或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置114的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置114的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ser或Cys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代T114S或T114C或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置116的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置116的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asp、Asn或Arg取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含以下取代或由其组成：Y116D、Y116N或Y116R，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置117的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置117的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置117的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asp、His、Asn或Pro取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含以下取代或由其组成：S117D、S117H、S117N或S117P，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置118的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置118的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置118的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ala、Asp、Gly或Leu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含以下取代或由其组成：E118A、E118D、E118G或E118L，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置119的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置119的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Gly或Trp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代E119G或E119W或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置120的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置120的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ile、Leu、Met、Val或Trp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含以下取代或由其组成：T120I、T120L、T120M、T120V或T120W，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置122的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置122的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置122的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Arg或His取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代D122R或D122H或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置123的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置123的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Trp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代Y123W或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置124的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置124的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ile、Met、His、Arg、Val、Gln、Thr、Lys、Leu、Asn、Trp或Cys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：Y124I、Y124M、Y124H、Y124R、Y124V、Y124Q、Y124T、Y124K、Y124L、Y124N、Y124W和Y124C，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置125的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置125的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Arg、Cys、Gly、His、Lys或Gln取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：D125R、D125C、D125G、D125H、D125K和D125Q，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置126的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置126的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Val取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代N126V或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置127的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置127的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Leu、Trp、Gln、Met、Asp、His或Lys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：R127L、R127W、R127Q、R127M、R127D、R127H和R127K，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置128的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置128的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Leu、Asp、Ala、Cys、或Thr取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：V128L、V128D、V128A、V128C和V128T，其中该位置对应于SEQID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置131的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置131的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Val取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代D131V或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置135的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置135的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置135的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Met、Tyr、Ala、Asp、Glu或Lys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：Q135M、Q135Y、Q135A、Q135D、Q135E和Q135K，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置138的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置138的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Met、Val、Leu、Trp、Ser、Arg、Lys、Asn或Gln取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：D138M、D138V、D138L、D138W、D138S、D138R、D138K、D138N和D138Q，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置139的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置139的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Trp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代E139W或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置140的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置140的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ile取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代V140I或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置142的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置142的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Trp或Arg取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代D142W或D142R或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置145的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置145的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置145的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Val、Asn、His或Leu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：Y145V、Y145N、Y145H和Y145L，其中该位置对应于SEQID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置147的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置147的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Leu、Asp、Ala、Val、Gly、Arg、Ser、Met、Thr、Cys或Phe取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：P147L、P147D、P147A、P147V、P147G、P147R、P147S、P147M、P147T、P147C和P147F，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置148的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置148的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Leu、Asp、Ala或Val取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：K148L、K148D、K148A和K148V，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置149的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置149的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asn、Met或Leu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：F149N、F149M和F149L，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置150的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置150的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asn、Arg、Asp、Lys、Mat、His、Trp、Val、Gly、Leu或Ala取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：E150N、E150R、E150D、E150K、E150M、E150H、E150W、E150V、E150Y、E150L和E150A，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置151的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置151的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ala、Pro、Trp、Asp、Leu、Ser、Asn或Cys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：G151A、G151P、G151W、G151D、G151L、G151S、G151N和G151C，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置152的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置152的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asp、Leu或Arg取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：K152D、K152L和K152R，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置163的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置163的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Pro取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代S163P或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置164的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置164的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asp、His、Ser、Glu或Val取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：G164D、G164H、G164S、G164E和G164V，其中该位置对应于SEQID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置167的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置167的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Gln、Ala、Trp、Pro、Asp、Leu、Arg或Glu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：V167Q、V167A、V167W、V167P、V167D、V167L、V167R和V167E，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置168的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置168的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asn取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代H168N或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置170的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置170的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asp、Lys、Ser、His、Asn、Arg、Glu、Phe、Met、Ala、Trp、Tyr、Val、Gln或Pro取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：L170D、L170K、L170S、L170H、L170N、L170R、L170E、L170F、L170M、L170A、L170W、L170Y、L170V、L170Q和L170P，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置171的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置171的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Val、Ala、Trp、Arg、Cys、Glu、Lys、Tyr、Met、Gln或Leu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：D171V、D171A、D171W、D171R、D171C、D171E、D171K、D171Y、D171M、D171Q和D171L，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置173的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置173的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Cys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代I173C或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置174的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置174的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Trp、His、Met、Asn或Val取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：D174W、D174H、D174M、D174N和D174V，其中该位置对应于SEQID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置175的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置175的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Tyr取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代F175Y或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置177的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置177的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Met取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代N177M或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置178的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置178的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置178的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Arg、Trp、Ala或Lys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：Q178R、Q178W、Q178A和Q178K，其中该位置对应于SEQID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置179的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置179的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Thr取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代I179T或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置181的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置181的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Thr、Phe、Gln、Gly、Asn、Cys、Lys、Trp、Val、Asp、Thr或Pro取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：S181T、S181F、S181Q、S181G、S181N、S181C、S181K、S181W、S181V、S181D、S181T和S181P，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置185的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置185的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ala、Arg、Met、Val或Trp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：E185A、E185R、E185M、E185V和E185W，其中该位置对应于SEQID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置186的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置186的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asp、Glu、Asn、Gln、Leu、Trp、Val、Ile、Lys、Met、Arg或His取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：S186D、S186E、S186N、S186Q、S186L、S186W、S186V、S186I、S186K、S186M、S186R和S186H，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置187的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置187的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Gly、Arg、Trp、Val、Cys、Asp或Ser取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：K187G、K187R、K187W、K187V、K187C、K187D和K187S，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置188的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置188的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Pro取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代Y188P或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置189的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置189的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Leu、Val或Trp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：E189V、E189L和E189W，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置199的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置199的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Tyr、Met、Cys或Leu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：S199Y、S199M、S199C和S199L，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置200的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置200的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Trp、Asp、Lys、Arg、Met、Phe、Asn或Leu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：E200W、E200D、E200K、E200R、E200M、E200F、E200N和E200L，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置203的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置203的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Arg、Thr、Pro、Cys、Leu、Ser、Met、Gln、Thr、Asp、Gly、Glu或Val取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：A203R、A203W、A203P、A203C、A203L、A203S、A203M、A203Q、A203T、A203D、A203G、A203E和A203V，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置204的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置204的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Leu、Tyr、Val、Trp或Met取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：N204L、N204Y、N204V、N204W和N204M，其中该位置对应于SEQID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置205的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置205的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ile取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代L205I或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置207的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置207的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Lys、Ser、Cys、Gly、Asn、Val、Arg、Gln、Glu、Trp或Ala取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：D207S、D207C、D207G、D207N、D207V、D207R、D207Q、D207E、D207W、D207K和D207A，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置208的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置208的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ala、Val、Cys、Trp、Asp、Thr、Gln、Gly或Leu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：S208A、S208V、S208C、S208W、S208D、S208T、S208Q、S208G和S208L，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置210的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置210的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Thr取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代S210T或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置215的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置215的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置215的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Lys、Arg、Leu或Met取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：Q215K、Q215R、Q215L和Q215M，其中该位置对应于SEQID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置217的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置217的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Val取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代S217V或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置218的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置218的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Gln、Arg、Ala、Val或Leu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：T218Q、T218R、T218A、T218V和T218L，其中该位置对应于SEQID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置221的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置221的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asn取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代S221N或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置222的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置222的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代G222D或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置224的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置224的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ala或Pro取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代E224A或E224P或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置225的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置225的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Gly取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代S225G或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置227的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置227的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ala、Gln、Arg、Ser、Thr或Lys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含以下取代或由其组成：N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T或N227K，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置230的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置230的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置230的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asn、Arg、Trp或Thr取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：D230N、D230R、D230W和D230T，其中该位置对应于SEQID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置232的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置232的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asp或Val取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代E232D或E232V或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置233的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置233的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Glu、Asp、His、Gln、Arg或Trp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：N233E、N233D、N233H、N233Q、N233R和N233W，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置234的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置234的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Arg取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代W234R或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置235的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置235的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Trp、Ala、Ser、Val、Leu、Met、Asn、His、Glu、Phe、Pro或Ile取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：G235W、G235A、G235S、G235V、G235L、G235M、G235N、G235H、G235E、G235F、G235P和G235I，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置237的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置237的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Trp、Tyr、Gly、Met、Asn或Cys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：S237W、S237Y、S237G、S237M、S237N和S237C，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置244的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置244的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Glu、Met或Cys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：Y244E、Y244M和Y244C，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置249的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置249的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Gln、Arg、Trp、His、Lys或Tyr取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：L249Q、L249R、L249W、L249H、L249K和L249Y，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置251的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置251的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ala、Leu、Arg、Trp或Asn取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：S251A、S251L、S251R、S251W和S251N，其中该位置对应于SEQID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置252的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置252的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Pro或Cys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代N252P或N252C或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置253的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置253的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asp或Trp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代G253D或G253W或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置254的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置254的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ile、Leu、Met或Tyr取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：F254I、F254L、F254M和F254Y，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置256的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置256的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Glu、Arg或Asp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含以下取代或由其组成：Q256E、Q256R或Q256D，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置260的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置260的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置260的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Gln、Leu、Cys、Arg、Met、Lys、Ala、Val、Ile、Thr、Glu、Trp或Tyr取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：N260Q、N260L、N260C、N260R、N260M、N260K、N260A、N260V、N260I、N260T、N260E、N260W和N260Y，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置261的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置261的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ala、Asp、Arg或Trp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：E261A、E261D、E261R和E261W，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置262的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置262的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置262的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被His、Phe、Trp或Tyr取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：Q262H、Q262F、Q262W和Q262Y，其中该位置对应于SEQID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置263的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置263的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Gln、Leu或Lys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：M263Q、M263L和M263K，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置264的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置264的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置264的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Glu、Cys或Asn取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：D264E、D264C和D264N，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置265的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置265的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Phe取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代Y265F或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置267的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置267的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Thr或Ser取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代N267T或N267S或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置268的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置268的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Glu、Arg、Cys或Met取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：W268E、W268R、W268C和W268M，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置270的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置270的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Phe取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代Y270F或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置271的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置271的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Gly或Asp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代A271G或A271D或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置272的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置272的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asp、Met、Pro、Ile、Val或Trp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：H272D、H272M、H272P、H272I、H272V和H272W其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置273的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置273的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Trp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代N273W或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置274的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置274的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被His、Arg或Ala取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：K274H、K274R和K274A，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置276的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置276的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ala、Asn、Lys、Cys、Gly、Leu、Met、Pro、Ser、Val或Trp取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：F276A、F276N、F276K、F276C、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V和F276W，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置278的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置278的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Val、Gln、Ala、Asn或Lys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：I278V、I278Q、I278A、I278N和I278K，其中该位置对应于SEQID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置279的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置279的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Cys、Glu、Asn、Asp或Gly取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：S279C、S279E、S279N、S279D和S279G，其中该位置对应于SEQID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置280的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置280的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Glu或Cys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代D280E或D280C或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置281的位置处的氨基酸缺失，或由其组成。在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置281的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置281的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被His、Ala、Lys、Asn、Cys、Pro或Arg取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：Y281H、Y281A、Y281K、Y281N、Y281C、Y281P和Y281R，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置282的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置282的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asn或Glu取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：Y282N和Y282E，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置283的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置283的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ile取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代H283I或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置284的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置284的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Leu、Ile、Val、Asn、Pro或Thr取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：A284L、A284I、A284V、A284N、A284P和A284T，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置287的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置287的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asn取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代T287N或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置288的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置288的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Pro、Asp、Asn或Lys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：S288P、S288D、S288N和S288K，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置290的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置290的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ile取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代V290I或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置291的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置291的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Arg、Leu或Val取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：K291R、K291L和K291V，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置296的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置296的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Cys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代T296C或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置300的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置300的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asp或Ala取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含取代E300D或E300A或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置301的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置301的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asn、Cys或Arg取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：H301N、H301C和H301R，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置303的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置303的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Gln、Ala、Cys、Lys、Gly、Trp或Arg取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：T303Q、T303A、T303C、T303K、T303G、T303W和T303R，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置304的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置304的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Met或Cys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：D304M和D304C，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置305的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置305的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Met或Asn取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含L305M或L305N或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置306的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置306的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Cys取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含S306C或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置308的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置308的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Asp、Glu、Ala、Val、Gln、Ser、Tyr、Gly、Leu、Thr或Ile取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：K308D、K308E、K308A、K308V、K308Q、K308S、K308Y、K308G、K308L、K308T和K308I，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置309的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置309的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Glu、Gly、Cys、Leu、Asp、Gln、Asn、Thr、Ala、Ser、Met、His或Ile取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：K309E、K309G、K309C、K309L、K309D、K309Q、K309N、K309T、K309A、K309S、K309M、K309H和K309I，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置312的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置312的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Glu、Ala、Gln、Ser、Trp、Leu、Asn或Met取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：K312E、K312A、K312Q、K312S、K312W、K312L、K312N和K312M，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置314的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置314的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Leu、Val或Ile取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代或由其组成：E314L、E314V和E314I，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置315的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置315的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ile或Val取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含L315I或L315V或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置319的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置319的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Ala取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含R319A或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置321的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置321的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Phe取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含Y321F或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在另一方面，该分散蛋白变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置323的位置处的取代，或由其组成。在另一方面，在对应于SEQ ID NO 1的位置323的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val，优选地被Arg取代。在另一方面，该分散蛋白变体包含N323R或由其组成，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置并且其中该变体与SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在一个方面，该变体包含在选自由以下组成的组的位置处的一个或多个取代或由其组成：2、3、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、140、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、225、227、230、232、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321和323，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％的同一性，其具有分散蛋白，优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性，并且此外，与参考酶相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有至少一个改进的特性。
在一个方面，该变体包含在选自由以下组成的组的位置处的一个或多个取代或由其组成：2、3、12、15、17、18、22、23、24、25、30、49、56、57、59、62、63、68、72、74、77、82、90、99、100、106、114、123、124、125、135、138、140、163、167、170、171、173、174、175、178、179、181、185、186、187、188、189、199、203、204、205、207、210、215、218、221、225、227、227、232、235、237、244、252、256、260、262、263、264、265、267、270、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、288、290、291、296、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321、322和323，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％的同一性，其具有分散蛋白，优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性，并且此外，与参考酶相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有至少一个改进的特性。
在一个方面，该变体包含在选自由以下组成的组的位置处的一个或多个取代或由其组成：31、33、36、73、75、94、141、144、241、277、294、297、299，其中该位置对应于SEQ IDNO:1的位置，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％的同一性，其具有分散蛋白，优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性，并且此外，与参考酶相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有至少一个改进的特性。
在一个方面，该变体包含选自由以下组成的组的改变中的一个或多个或由其组成：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19K、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23A、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、L24I、V25R、D26M、Y30*、Y30A、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N34D、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80R、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81N、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K103V、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106R、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124H、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124N、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125H、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128A、V128C、V128D、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138N、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、V140I、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150A、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、S163P、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167A、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181K、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185A、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203Q、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207K、D207N、D207Q、D207R、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215K、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、S221N、G222D、E224A、E224P、S225G、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230N、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233D、N233E、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251A、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256D、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260T、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、D264N、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288P、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308E、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309E、K309G、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312E、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、Y321F和N323R，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％的同一性，其具有分散蛋白，优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性，并且此外，与参考酶相比例如与SEQ ID NO 1相比，该变体具有至少一个改进的特性。
在一个方面，该变体包含选自由以下组成的组的取代中的一个或多个或由其组成：D2V、Q3F、Q3I、S12A、H15Y、T17W、T17E、V18L、K22M、S23I、S23C、S23T、S23L、S23V、S23E、V25R、Y30L、A49W、A49Y、S56T、N59D、N59C、N59E、N59R、N59F、N59W、N59V、N62C、N62D、T63C、N68Q、S72D、S72E、I74L、S77A、I82V、L90F、E99Q、L100S、T114S、T114C、Y123W、Y124I、Y124M、Y124R、Y124V、Y124Q、Y124T、Y124K、D125R、D125C、D125G、D125K、D125Q、Q135M、D138R、D138K、D138Q、L170D、L170K、L170S、L170H、D171E、D171K、D171Y、D171M、D171Q、D171L、I173C、D174W、D174H、D174M、D174N、F175Y、Q178K、I179T、S181T、S181F、S181Q、S181G、S181N、S181C、E185R、E185M、E185V、S186K、S186M、S186R、S186H、K187G、Y188P、E189V、S199C、S199L、A203G、A203E、A203V、N204L、N204Y、N204V、L205I、D207N、D207S、D207C、D207G、S210T、Q215R、T218Q、N227T、N227K、E232D、G235W、S237W、Y244M、Y244C、N252P、N252C、Q256E、Q262H、N260Q、M263Q、D264E、Y265F、N267T、N267S、Y270F、H272M、H272P、H272I、H272V、N273W、K274H、F276A、F276N、F276K、F276C、I278V、S279N、S279D、S279G、D280E、D280C、Y281P、Y282N、H283I、A284T、A284L、A284I、S288K、V290I、K291R、T296C、T303Q、D304M、D304C、L305M、L305N、S306C、K308D、K308A、K308V、K308Q、K308S、K308Y、K308G、K308L、K308T、K308I、K309C、K309L、K309D、K309Q、K309N、K309T、K309A、K309S、K309M、K309H、K312A、K312Q、K312S、K312W、K312L、K312N、E314L、E314V、E314I、L315I、R319A和N323R，其中该位置对应于SEQ ID NO:1的位置，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％的同一性，其具有分散蛋白，优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性，并且此外，与参考酶相比例如与SEQ IDNO 1相比或与SEQ ID NO 15相比，该变体具有至少一个改进的特性。
在一些方面，改进的特性是增加的稳定性，例如改进的洗涤剂稳定性，改进的洗涤稳定性和改进的热稳定性。本发明的一些方面涉及当该分散蛋白变体在相关测定中测试感兴趣的特性时具有高于1的改进因子(例如以HIF测量)的分散蛋白变体，其中该参考分散蛋白的特性被给予1的值。在一些方面，该特性是稳定性，例如储存稳定性。本发明的一些方面涉及当该分散蛋白变体在实例2、3、4、5或6中所述的测定中测试感兴趣的特性时具有高于1的改进因子(例如以HIF测量)的分散蛋白变体，其中该参照分散蛋白的特性被给予1的值。在一些方面，该特性是稳定性，例如储存稳定性。
在一些方面，改进的特性是增加的稳定性，例如改进的洗涤剂稳定性，改进的洗涤稳定性和改进的热稳定性。本发明的一些方面涉及当该分散蛋白变体在相关测定中测试感兴趣的特性时具有高于1的改进因子的分散蛋白变体，其中该参考分散蛋白的特性被给予1的值。在一些方面，该特性是稳定性，例如储存稳定性。
在一些方面，改进的特性是改进的洗涤剂稳定性。
在一些方面，改进的特性是改进的蛋白酶稳定性。
在一些方面，
Figure BDA0003281929810000911
如实例2a和3中所示，在测量条件下当残留活性比定义为与参考分散蛋白相比高于1时，根据本发明的变体得到改进。在一些方面，与参考分散蛋白相比，变体得到改进。
在一些方面，根据本发明的变体相对于参考分散蛋白具有以大于1.0的残留活性比(RAR)测量的改进的稳定性。
可以将本发明的分散蛋白变体的残留活性比(RAR)计算为RA变体/RA参考。如实例2a和3中所示，改进的变体被鉴定为与参考分散蛋白相比具有大于1.0的残留活性比(RAR)的变体。
在一些方面，根据本发明的变体相对于参考分散蛋白具有以大于1.0的半衰期改进因子(HIF)测量的改进的稳定性。
可以将本发明的分散蛋白变体的半衰期改进因子(HIF)计算为T1/2变体/T1/2参考。如实例2b中所示的，改进的变体被鉴定为与参考分散蛋白相比具有大于1.0的半衰期改进因子HIF的变体。根据本发明的改进的改变例如取代是导致改进因子例如HIF或RAR大于1的或是与起始分子(即前体、参考亲本多肽等)相比具有至少一种改进特性的变体。在特别优选的方面，包含根据本发明的改变的分散蛋白变体产生了具有改进的稳定性的分散蛋白变体，其中HIF>1.0。在一些方面，与参考分散蛋白例如SEQ ID NO:1相比或与SEQ ID NO 15相比，根据本发明的变体具有的半衰期改进因子(HIF)至少为：1.1；1.2；1.3；1.4；1.5；1.6；1.7；1.8；1.9；2.0；2.1；2.2；2.3；2.4；2.5；2.6；2.7、2.8；2.9；3.0、3.1；3.2；3.3；3.4；3.5、3.6、3.7、3.8、3.9；4.0、4.1；4.2；4.3；4.4；4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1；5.2；5.3；5.4；5.5、5.6、5.7、5.8、5.9；3.0、6.1；6.2；6.3；6.4；6.5、6.6、6.7、6.8、6.9；7.0、7.1；7.2；7.3；7.4；7.5、7.6、7.7、7.8、7.9；8.0、8.1；8.2；8.3；8.4；8.5、8.6、8.7、8.8、8.9；9.0、9.1；9.2；9.3；9.4；9.5、9.6、9.7、9.8、9.9；10.0、10.1；10.2；10.3；10.4；10.5、10.6、10.7、10.8、10.9；12、15、16、20、25或30。
在优选的方面，根据本发明的突变的组合产生了具有改进的稳定性的分散蛋白变体，其中RAR>1.0。在一些方面，与参考分散蛋白例如SEQ ID NO:1相比或与SEQ ID NO 15相比，根据本发明的变体具有的残留活性比(RAR)至少为：1.1；1.2；1.3；1.4；1.5；1.6；1.7；1.8；1.9；2.0；2.1；2.2；2.3；2.4；2.5；2.6；2.7、2.8；2.9；3.0、3.1；3.2；3.3；3.4；3.5、3.6、3.7、3.8、3.9；4.0、4.1；4.2；4.3；4.4；4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1；5.2；5.3；5.4；5.5、5.6、5.7、5.8、5.9；3.0、6.1；6.2；6.3；6.4；6.5、6.6、6.7、6.8、6.9；7.0、7.1；7.2；7.3；7.4；7.5、7.6、7.7、7.8、7.9；8.0、8.1；8.2；8.3；8.4；8.5、8.6、8.7、8.8、8.9；9.0、9.1；9.2；9.3；9.4；9.5、9.6、9.7、9.8、9.9；10.0、10.1；10.2；10.3；10.4；10.5、10.6、10.7、10.8、10.9；12、15、16、20、25或30。
一个优选的实施例涉及具有改进的稳定性的分散蛋白变体，其中与SEQ ID NO:1相比或与SEQ ID NO 15相比，HIF>1.0。一个优选的实施例涉及一种具有改进的稳定性的分散蛋白变体，其中当如在实例2a中所述的测量时，与SEQ ID NO:1相比或与SEQ ID NO 15相比半衰期改进因子是至少1.5。
一个优选的实施例涉及具有改进的稳定性的分散蛋白变体，其中与SEQ ID NO:1相比或与SEQ ID NO 15相比，RAR>1.0。一个优选的实施例涉及具有改进的稳定性的分散蛋白变体，其中当如在实例2a和3中所述的测量时，与SEQ ID NO:1相比或与SEQ ID NO 15相比残留活性比(RAR)是至少1.5。
一个优选的实施例涉及具有改进的稳定性的分散蛋白变体，其中与SEQ ID NO:1相比，HIF>1.0。一个优选的实施例涉及具有改进的稳定性的分散蛋白变体，其中与SEQ IDNO:1相比或与SEQ ID NO:15相比，该半衰期改进因子(HIF)是至少1.2例如1.5，其中HIF计算为T1/2分散蛋白变体/T1/2参考并且该分散蛋白变体和该参考分散蛋白(例如SEQ ID NO:1或15)的半衰期(T1/2，以分钟计)计算为：20分钟x LN(0.5)/LN(RA)并且每种分散蛋白变体和参考分散蛋白(例如SEQ ID NO:1或15)的残留活性(RA)计算为：斜率(应激样品，56℃持续60min)/斜率(无应激样品，21℃持续60min)，例如如实例2b中所述的。
一个优选的实施例涉及具有改进的稳定性的分散蛋白变体，其中与SEQ ID NO:1相比或与SEQ ID NO 15相比残留活性比(RAR)>1.0。一个优选的实施例涉及具有改进的稳定性的分散蛋白变体，其中与SEQ ID NO:1相比或与SEQ ID NO 15相比残留活性比(RAR)是至少1.2，例如1.5，其中将RAR计算为：
Figure BDA0003281929810000931
如在实例部分中的2a和3所述的。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白变体，与具有SEQ ID NO:1的分散蛋白相比，该分散蛋白变体在选自由以下组成的组的位置处包含改变例如取代：2、3、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、140、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、225、227、230、232、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321和323，其中这些位置对应于SEQ ID NO:1的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽或SEQ ID NO 15中所示的多肽序列具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性，其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性并且其中，与SEQ ID NO:1中所示的多肽序列相比或与SEQ ID NO 15中所示的多肽序列相比，该变体具有如具有改进因子，例如RAR或HIF>1.0所测量的改进的稳定性。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白变体，与具有SEQ ID NO:1的分散蛋白相比，该分散蛋白变体在选自由以下组成的组的位置处包含改变例如取代：2、3、12、15、17、18、22、23、24、25、30、49、56、57、59、62、63、68、72、74、77、82、90、99、100、106、114、123、124、125、135、138、140、163、167、170、171、173、174、175、178、179、181、185、186、187、188、189、199、203、204、205、207、210、215、218、221、225、227、227、232、235、237、244、252、256、260、262、263、264、265、267、270、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、288、290、291、296、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321、322和323，其中这些位置对应于SEQ ID NO:1的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽或SEQ ID NO 15中所示的多肽序列具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性，其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性并且其中与SEQ ID NO:1中所示的多肽序列相比或与SEQID NO 15中所示的多肽序列相比，该变体具有如具有改进因子，例如RAR或HIF>1.0所测量的改进的稳定性。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白变体，与具有SEQ ID NO:1的分散蛋白相比，该分散蛋白变体在选自由以下组成的组的位置处包含改变例如取代：31、33、36、73、75、94、141、144、241、277、294、297、299，其中这些位置对应于SEQ ID NO:1的位置(根据SEQ IDNO:1进行编号)，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽或SEQ ID NO 15中所示的多肽序列具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性，其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性并且其中与SEQ ID NO:1中所示的多肽序列相比或与SEQ ID NO 15中所示的多肽序列相比，该变体具有如具有改进因子，例如RAR或HIF>1.0所测量的改进的稳定性。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白变体，与具有SEQ ID NO:1的分散蛋白相比，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的一个或多个改变例如取代：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19K、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23A、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、L24I、V25R、D26M、Y30*、Y30A、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N34D、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80R、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81N、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K103V、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106R、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124H、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124N、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125H、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128A、V128C、V128D、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138N、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、V140I、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150A、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、S163P、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167A、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181K、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185A、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203Q、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207K、D207N、D207Q、D207R、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215K、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、S221N、G222D、E224A、E224P、S225G、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230N、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233D、N233E、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251A、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256D、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260T、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、D264N、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288P、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308E、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309E、K309G、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312E、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、Y321F和N323R，其中这些位置对应于SEQ ID NO:1的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽或SEQ ID NO 15中所示的多肽序列具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性，其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性并且其中与SEQ ID NO:1中所示的多肽序列相比或与SEQ ID NO 15中所示的多肽序列相比，该变体具有如具有改进因子，例如RAR或HIF>1.0所测量的改进的稳定性。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白变体，与具有SEQ ID NO:1的分散蛋白相比，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的一个或多个改变例如取代：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、V25R、D26M、Y30*、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128C、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207N、D207Q、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、G222D、E224A、E224P、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、和N323R，其中这些位置对应于SEQ ID NO:1的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽或SEQ ID NO 15中所示的多肽序列具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性，其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性并且其中与SEQ ID NO:1中所示的多肽序列相比或与SEQ ID NO 15中所示的多肽序列相比，该变体具有如具有改进因子，例如RAR或HIF>1.0所测量的改进的稳定性。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白变体，与具有SEQ ID NO:1的分散蛋白相比，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的一个或多个改变例如取代：D2V、Q3F、Q3I、S12A、H15Y、T17W、T17E、V18L、K22M、S23I、S23C、S23T、S23L、S23V、S23E、V25R、Y30L、A49W、A49Y、S56T、N59D、N59C、N59E、N59R、N59F、N59W、N59V、N62C、N62D、T63C、N68Q、S72D、S72E、I74L、S77A、I82V、L90F、E99Q、L100S、T114S、T114C、Y123W、Y124I、Y124M、Y124R、Y124V、Y124Q、Y124T、Y124K、D125R、D125C、D125G、D125K、D125Q、Q135M、D138R、D138K、D138Q、L170D、L170K、L170S、L170H、D171E、D171K、D171Y、D171M、D171Q、D171L、I173C、D174W、D174H、D174M、D174N、F175Y、Q178K、I179T、S181T、S181F、S181Q、S181G、S181N、S181C、E185R、E185M、E185V、S186K、S186M、S186R、S186H、K187G、Y188P、E189V、S199C、S199L、A203G、A203E、A203V、N204L、N204Y、N204V、L205I、D207N、D207S、D207C、D207G、S210T、Q215R、T218Q、N227T、N227K、E232D、G235W、S237W、Y244M、Y244C、N252P、N252C、Q256E、N260Q、Q262H、M263Q、D264E、Y265F、N267T、N267S、Y270F、H272M、H272P、H272I、H272V、N273W、K274H、F276A、F276N、F276K、F276C、I278V、S279N、S279D、S279G、D280E、D280C、Y281P、Y282N、H283I、A284T、A284L、A284I、S288K、V290I、K291R、T296C、T303Q、D304M、D304C、L305M、L305N、S306C、K308D、K308A、K308V、K308Q、K308S、K308Y、K308G、K308L、K308T、K308I、K309C、K309L、K309D、K309Q、K309N、K309T、K309A、K309S、K309M、K309H、K312A、K312Q、K312S、K312W、K312L、K312N、E314L、E314V、E314I、L315I、R319A和N323R，其中这些位置对应于SEQ ID NO:1的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)，其中该变体与SEQ IDNO:1中所示的多肽SEQ ID NO 15中所示的多肽序列具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性，其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性并且其中与SEQ ID NO:1中所示的多肽序列相比或与SEQ ID NO 15中所示的多肽序列相比，该变体具有如具有改进因子，例如RAR或HIF>1.0所测量的改进的稳定性。
在一些优选的方面，本发明的分散蛋白变体在选自由以下组成的组的一个或多个位置处包含改变：2、3、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、140、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、225、227、230、232、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321和323，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)并且其中与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ IDNO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该变体具有至少一种改进的特性，优选地该改进的特性是改进的稳定性，其中如实例2a、2b或3中所示的测试稳定性。
在一些优选的方面，本发明的分散蛋白变体在选自由以下组成的组的一个或多个位置处包含改变：2、3、12、15、17、18、22、23、24、25、30、49、56、57、59、62、63、68、72、74、77、82、90、99、100、106、114、123、124、125、135、138、140、163、167、170、171、173、174、175、178、179、181、185、186、187、188、189、199、203、204、205、207、210、215、218、221、225、227、232、235、237、244、252、256、260、262、263、264、265、267、270、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、288、290、291、296、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321、322和323，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)并且其中与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该变体具有至少一种改进的特性，优选地该改进的特性是改进的稳定性，其中如实例2a、2b或3中所示的测试稳定性。
在一些优选的方面，本发明的分散蛋白变体在选自由以下组成的组的一个或多个位置处包含改变：31、33、36、73、75、94、141、144、241、277、294、297、299，其中该变体与SEQID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)并且其中与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该变体具有至少一种改进的特性，优选地该改进的特性是改进的稳定性，其中如实例2a、2b或3中所示的测试稳定性。
在一些优选的方面，本发明的分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的一个或多个改变：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19K、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23A、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、L24I、V25R、D26M、Y30*、Y30A、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N34D、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80R、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81N、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K103V、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106R、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124H、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124N、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125H、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128A、V128C、V128D、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138N、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、V140I、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150A、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、S163P、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167A、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181K、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185A、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203Q、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207K、D207N、D207Q、D207R、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215K、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、S221N、G222D、E224A、E224P、S225G、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230N、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233D、N233E、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251A、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256D、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260T、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、D264N、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288P、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308E、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309E、K309G、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312E、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、Y321F和N323R，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)并且其中，与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该变体具有至少一个改进的特性，优选地该改进的特性是改进的稳定性，其中如实例2a、2b或3中所示的测试稳定性。
在一些优选的方面，本发明的分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的一个或多个改变：D2V、Q3F、Q3I、S12A、H15Y、T17W、T17E、V18L、K22M、S23I、S23C、S23T、S23L、S23V、S23E、V25R、Y30L、A49W、A49Y、S56T、N59D、N59C、N59E、N59R、N59F、N59W、N59V、N62C、N62D、T63C、N68Q、S72D、S72E、I74L、S77A、I82V、L90F、E99Q、L100S、T114S、T114C、Y123W、Y124I、Y124M、Y124R、Y124V、Y124Q、Y124T、Y124K、D125R、D125C、D125G、D125K、D125Q、Q135M、D138R、D138K、D138Q、L170D、L170K、L170S、L170H、D171E、D171K、D171Y、D171M、D171Q、D171L、I173C、D174W、D174H、D174M、D174N、F175Y、Q178K、I179T、S181T、S181F、S181Q、S181G、S181N、S181C、E185R、E185M、E185V、S186K、S186M、S186R、S186H、K187G、Y188P、E189V、S199C、S199L、A203G、A203E、A203V、N204L、N204Y、N204V、L205I、D207N、D207S、D207C、D207G、S210T、Q215R、T218K、T218Q、N227T、N227K、E232D、G235W、S237W、Y244M、Y244C、N252P、N252C、Q256E、N260Q、Q262H、M263Q、D264E、Y265F、N267T、N267S、Y270F、H272M、H272P、H272I、H272V、N273W、K274H、F276A、F276N、F276K、F276C、I278V、S279N、S279D、S279G、D280E、D280C、Y281P、Y282N、H283I、A284T、A284L、A284I、S288K、V290I、K291R、T296C、T303Q、D304M、D304C、L305M、L305N、S306C、K308D、K308A、K308V、K308Q、K308S、K308Y、K308G、K308L、K308T、K308I、K309C、K309L、K309D、K309Q、K309N、K309T、K309A、K309S、K309M、K309H、K312A、K312Q、K312S、K312W、K312L、K312N、E314L、E314V、E314I、L315I、R319A和N323R，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)，并且其中与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该变体具有至少一个改进的特性，优选地该改进的特性是改进的稳定性，其中如实例2a、2b或3中所示的测试稳定性。
在一些优选的方面，本发明的分散蛋白变体在选自由以下组成的组的一个或多个位置处包含改变：2、3、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、140、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、225、227、230、232、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321和323，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中每个改变提供分散蛋白变体，与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该分散蛋白变体具有以至少1.05、如1.08、如1.1、如1.15、如1.2、如1.25、如1.3、如1.4、如1.5、如1.6、如1.7、如1.8、如1.9、如2、如3、如4、如5或如至少10的半衰期改进因子，HIF或残留活性比，RAR测量的稳定性的增加，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)。
在一些优选的方面，本发明的分散蛋白变体在选自由以下组成的组的一个或多个位置处包含改变：2、3、12、15、17、18、22、23、24、25、30、49、56、57、59、62、63、68、72、74、77、82、90、99、100、106、114、123、124、125、135、138、140、163、167、170、171、173、174、175、178、179、181、185、186、187、188、189、199、203、204、205、207、210、215、218、221、225、227、232、235、237、244、252、256、260、262、263、264、265、267、270、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、288、290、291、296、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321、322和323，其中每个取代提供分散蛋白变体，与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该分散蛋白变体具有以至少1.05、如1.08、如1.1、如1.15、如1.2、如1.25、如1.3、如1.4、如1.5、如1.6、如1.7、如1.8、如1.9、如2、如3、如4、如5或如至少10的半衰期改进因子，HIF或残留活性比，RAR测量的稳定性的增加，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQID NO:1进行编号)并且优选地其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
在一些优选的方面，本发明的分散蛋白变体在选自由以下组成的组的一个或多个位置处包含改变：31、33、36、73、75、94、141、144、241、277、294、297、299，其中每个取代提供分散蛋白变体，与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该分散蛋白变体具有以至少1.05、如1.08、如1.1、如1.15、如1.2、如1.25、如1.3、如1.4、如1.5、如1.6、如1.7、如1.8、如1.9、如2、如3、如4、如5或如至少10的半衰期改进因子，HIF或残留活性比，RAR测量的稳定性的增加，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)并且优选地其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
在一些优选的方面，本发明的分散蛋白变体包含一个或多个改变(与SEQ ID NO:1相比)，其中这些改变选自由以下组成的组：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19K、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23A、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、L24I、V25R、D26M、Y30*、Y30A、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N34D、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80R、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81N、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K103V、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106R、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124H、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124N、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125H、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128A、V128C、V128D、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138N、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、V140I、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150A、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、S163P、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167A、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181K、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185A、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203Q、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207K、D207N、D207Q、D207R、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215K、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、S221N、G222D、E224A、E224P、S225G、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230N、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233D、N233E、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251A、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256D、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260T、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、D264N、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288P、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308E、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309E、K309G、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312E、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、Y321F和N323R、其中每个取代提供分散蛋白变体，与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该分散蛋白变体具有以至少1.05、如1.08、如1.1、如1.15、如1.2、如1.25、如1.3、如1.4、如1.5、如1.6、如1.7、如1.8、如1.9、如2、如3、如4、如5或如至少10的半衰期改进因子，HIF或残留活性比，RAR测量的稳定性的增加，其中该变体与SEQ IDNO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)。
在一些优选的方面，本发明的分散蛋白变体包含一个或多个取代(与SEQ ID NO:1相比)，其中这些取代选自由以下组成的组：D2V、Q3F、Q3I、S12A、H15Y、T17W、T17E、V18L、K22M、S23I、S23C、S23T、S23L、S23V、S23E、V25R、Y30L、A49W、A49Y、S56T、N59D、N59C、N59E、N59R、N59F、N59W、N59V、N62C、N62D、T63C、N68Q、S72D、S72E、I74L、S77A、I82V、L90F、E99Q、L100S、T114S、T114C、Y123W、Y124I、Y124M、Y124R、Y124V、Y124Q、Y124T、Y124K、D125R、D125C、D125G、D125K、D125Q、Q135M、D138R、D138K、D138Q、L170D、L170K、L170S、L170H、D171E、D171K、D171Y、D171M、D171Q、D171L、I173C、D174W、D174H、D174M、D174N、F175Y、Q178K、I179T、S181T、S181F、S181Q、S181G、S181N、S181C、E185R、E185M、E185V、S186K、S186M、S186R、S186H、K187G、Y188P、E189V、S199C、S199L、A203G、A203E、A203V、N204L、N204Y、N204V、L205I、D207N、D207S、D207C、D207G、S210T、Q215R、T218Q、S225G、N227T、N227K、E232D、G235W、S237W、Y244M、Y244C、N252P、N252C、Q256E、N260Q、Q262H、M263Q、D264E、Y265F、N267T、N267S、Y270F、H272M、H272P、H272I、H272V、N273W、K274H、F276A、F276N、F276K、F276C、I278V、S279N、S279D、S279G、D280E、D280C、Y281P、Y282N、H283I、A284T、A284L、A284I、S288K、V290I、K291R、T296C、T303Q、D304M、D304C、L305M、L305N、S306C、K308D、K308A、K308V、K308Q、K308S、K308Y、K308G、K308L、K308T、K308I、K309C、K309L、K309D、K309Q、K309N、K309T、K309A、K309S、K309M、K309H、K312A、K312Q、K312S、K312W、K312L、K312N、E314L、E314V、E314I、L315I、R319A和N323R，其中每个取代提供分散蛋白变体，与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该分散蛋白变体具有以至少1.05、如1.08、如1.1、如1.15、如1.2、如1.25、如1.3、如1.4、如1.5、如1.6、如1.7、如1.8、如1.9、如2、如3、如4、如5或如至少10的半衰期改进因子，HIF或残留活性比，RAR测量的稳定性的增加，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)。
在本发明的一些优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含以下取代中的一个或多个：Q3F、Q3I、H15Y、T17W、A49W、N59E、V140I、S163P、S186R、D207N、Q215K、T218Q、S225G、N227T、E232D、G235W、S237W、N252P、N260Q、N267T、H272V、H272P、F276A、S279D、Y281P、S288P、K308Q、K308E、K309E、K312Q、K312E，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)。
本发明的变体优选地包含以下保守基序GXDE中的一个或多个：(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ ID NO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO 11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)，这些保守基序在如下所述的土地芽孢杆菌属进化枝的分散蛋白中共享。如“定义”中所解释的，进化枝包含基于追溯至共同祖先的同源性特征聚集在一起的一组多肽。形成一组例如系统发生树中所示的进化枝的多肽经常享有共同的特性，并且与不在进化枝中的其他多肽相比更密切相关。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白亲本的变体，其中该变体包含一个或多个以下基序：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ IDNO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA](SEQ ID NO 10)、WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)，并且其中该变体在选自由以下位置组成的列表的一个或多个位置处包含改变：2、3、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、140、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、225、227、230、232、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321和323，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中每个改变提供与SEQ ID NO:1中所示的多肽相比具有至少一个改进的特性的分散蛋白变体，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性并且其中每个位置对应于SEQID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)并且优选地其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白亲本的变体，其中该变体包含一个或多个以下基序：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ IDNO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、[WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)，并且其中该变体在选自由以下位置组成的列表的一个或多个位置处包含改变：2、3、12、15、17、18、22、23、24、25、30、49、56、57、59、62、63、68、72、74、77、82、90、99、100、106、114、123、124、125、135、138、140、163、167、170、171、173、174、175、178、179、181、185、186、187、188、189、199、203、204、205、207、210、215、218、221、225、227、232、235、237、244、252、256、260、262、263、264、265、267、270、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、288、290、291、296、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321、322和323，其中每个位置对应于SEQ IDNO:1的多肽的位置，其中每个改变提供分散蛋白变体，与SEQ ID NO:1中所示的多肽相比，该分散蛋白变体具有至少一个改进的特性，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性并且其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)并且优选地其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白亲本的变体，其中该变体包含一个或多个以下基序：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ IDNO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、[WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)，并且其中该变体在选自由以下位置组成的列表的一个或多个位置处包含改变：31、33、36、73、75、94、141、144、241、277、294、297、299，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中每个改变提供与SEQ ID NO:1中所示的多肽相比具有至少一个改进的特性的分散蛋白变体，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性并且其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)并且优选地其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白亲本的变体，其中该变体包含一个或多个以下基序：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ IDNO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、[WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)，其中该变体包含一个或多个改变(与SEQ ID NO:1相比)，其中这些改变选自由以下组成的组：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19K、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23A、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、L24I、V25R、D26M、Y30*、Y30A、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N34D、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80R、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81N、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K103V、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106R、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124H、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124N、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125H、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128A、V128C、V128D、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138N、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、V140I、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150A、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、S163P、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167A、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181K、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185A、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203Q、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207K、D207N、D207Q、D207R、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215K、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、S221N、G222D、E224A、E224P、S225G、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230N、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233D、N233E、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251A、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256D、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260T、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、D264N、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288P、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308E、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309E、K309G、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312E、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、Y321F和N323R，其中每个取代提供与SEQ ID NO:1中所示的多肽相比具有至少一个改进的特性的分散蛋白变体，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性并且其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)并且优选地其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白亲本的变体，其中该变体包含一个或多个以下基序：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ IDNO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、[WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)，其中该变体包含一个或多个改变(与SEQ ID NO:1相比)，其中这些改变选自由以下组成的组：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、V25R、D26M、Y30*、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128C、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207N、D207Q、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、G222D、E224A、E224P、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、和N323R，其中每个取代提供与SEQ ID NO:1中所示的多肽相比具有至少一个改进的特性的分散蛋白变体，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性并且其中每个位置对应于SEQ IDNO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)并且优选地其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白亲本的变体，其中该变体包含一个或多个取代(与SEQ ID NO:1相比)，其中该变体包含一个或多个以下基序：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ ID NO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、[WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO 11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)，其中这些取代选自由以下组成的组：D2V、Q3I、Q3F、S12A、H15Y、T17W、T17E、V18L、K22M、S23I、S23C、S23T、S23L、S23V、S23E、V25R、Y30L、A49W、A49Y、S56T、N59D、N59C、N59E、N59R、N59F、N59W、N59V、N62C、N62D、T63C、N68Q、S72D、S72E、I74L、S77A、I82V、L90F、E99Q、L100S、T114S、T114C、Y123W、Y124I、Y124M、Y124R、Y124V、Y124Q、Y124T、Y124K、D125R、D125C、D125G、D125K、D125Q、Q135M、D138R、D138K、D138Q、L170D、L170K、L170S、L170H、D171E、D171K、D171Y、D171M、D171Q、D171L、I173C、D174W、D174H、D174M、D174N、F175Y、Q178K、I179T、S181T、S181F、S181Q、S181G、S181N、S181C、E185R、E185M、E185V、S186K、S186M、S186R、S186H、K187G、Y188P、E189V、S199C、S199L、A203G、A203E、A203V、N204L、N204Y、N204V、L205I、D207N、D207S、D207C、D207G、S210T、Q215R、T218Q、N227T、N227K、E232D、G235W、S237W、Y244M、Y244C、N252P、N252C、Q256E、N260Q、Q262H、M263Q、D264E、Y265F、N267T、N267S、Y270F、H272M、H272P、H272I、H272V、N273W、K274H、F276A、F276N、F276K、F276C、I278V、S279N、S279D、S279G、D280E、D280C、Y281P、Y282N、H283I、A284T、A284L、A284I、S288K、V290I、K291R、T296C、T303Q、D304M、D304C、L305M、L305N、S306C、K308D、K308A、K308V、K308Q、K308S、K308Y、K308G、K308L、K308T、K308I、K309C、K309L、K309D、K309Q、K309N、K309T、K309A、K309S、K309M、K309H、K312A、K312Q、K312S、K312W、K312L、K312N、E314L、E314V、E314I、L315I、R319A和N323R，其中每个取代提供与SEQ ID NO:1中所示的多肽相比具有至少一个改进的特性的分散蛋白变体，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性并且其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)并且优选地其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白亲本的变体，其中该变体包含一个或多个以下基序：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ IDNO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、[WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)，并且其中该变体在选自由以下位置组成的列表的一个或多个位置处包含改变：2、3、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、140、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、225、227、230、232、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321和323，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中每个取代提供分散蛋白变体，与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该分散蛋白变体具有以至少1.05、如1.08、如1.1、如1.15、如1.2、如1.25、如1.3、如1.4、如1.5、如1.6、如1.7、如1.8、如1.9、如2、如3、如4、如5或如至少10的半衰期改进因子，HIF或残留活性比，RAR测量的稳定性的增加，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性并且优选地其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白亲本的变体，其中该变体包含一个或多个以下基序：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ IDNO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、[WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)，并且其中该变体在选自由以下位置组成的列表的一个或多个位置处包含改变：2、3、12、15、17、18、22、23、24、25、30、49、56、57、59、62、63、68、72、74、77、82、90、99、100、106、114、123、124、125、135、138、140、163、167、170、171、173、174、175、178、179、181、185、186、187、188、189、199、203、204、205、207、210、215、218、221、225、227、232、235、237、244、252、256、260、262、263、264、265、267、270、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、288、290、291、296、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321、322和323，其中每个位置对应于SEQ IDNO:1的多肽的位置，其中每个取代提供分散蛋白变体，与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该分散蛋白变体具有以至少1.05、如1.08、如1.1、如1.15、如1.2、如1.25、如1.3、如1.4、如1.5、如1.6、如1.7、如1.8、如1.9、如2、如3、如4、如5或如至少10的半衰期改进因子，HIF或残留活性比，RAR测量的稳定性的增加，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性并且优选地其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白亲本的变体，其中该变体包含一个或多个以下基序：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ IDNO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、[WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)，并且其中该变体在选自由以下位置组成的列表的一个或多个位置处包含改变：31、33、36、73、75、94、141、144、241、277、294、297、299，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中每个取代提供分散蛋白变体，与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该分散蛋白变体具有以至少1.05、如1.08、如1.1、如1.15、如1.2、如1.25、如1.3、如1.4、如1.5、如1.6、如1.7、如1.8、如1.9、如2、如3、如4、如5或如至少10的半衰期改进因子，HIF或残留活性比，RAR测量的稳定性的增加，其中该变体与SEQ IDNO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性并且优选地其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白亲本的变体，其中该变体包含一个或多个以下基序：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ IDNO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、[WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)，其中该变体包含一个或多个改变(与SEQ ID NO:1相比)，其中这些改变选自由以下组成的组：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19K、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23A、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、L24I、V25R、D26M、Y30*、Y30A、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N34D、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80R、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81N、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K103V、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106R、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124H、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124N、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125H、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128A、V128C、V128D、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138N、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、V140I、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150A、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、S163P、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167A、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181K、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185A、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203Q、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207K、D207N、D207Q、D207R、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215K、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、S221N、G222D、E224A、E224P、S225G、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230N、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233D、N233E、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251A、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256D、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260T、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、D264N、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288P、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308E、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309E、K309G、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312E、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、Y321F和N323R，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中每个取代提供分散蛋白变体，与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该分散蛋白变体具有以至少1.05、如1.08、如1.1、如1.15、如1.2、如1.25、如1.3、如1.4、如1.5、如1.6、如1.7、如1.8、如1.9、如2、如3、如4、如5或如至少10的半衰期改进因子，HIF或残留活性比，RAR测量的稳定性的增加，其中该变体与SEQ IDNO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性并且优选地其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白亲本的变体，其中该变体包含一个或多个以下基序：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ IDNO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、[WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)，其中该变体包含一个或多个改变(与SEQ ID NO:1相比)，其中这些改变选自由以下组成的组：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、V25R、D26M、Y30*、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128C、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207N、D207Q、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、G222D、E224A、E224P、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、和N323R，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中每个取代提供分散蛋白变体，与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该分散蛋白变体具有以至少1.05、如1.08、如1.1、如1.15、如1.2、如1.25、如1.3、如1.4、如1.5、如1.6、如1.7、如1.8、如1.9、如2、如3、如4、如5或如至少10的半衰期改进因子，HIF或残留活性比，RAR测量的稳定性的增加，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性并且优选地其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
本发明的一个优选的方面涉及分散蛋白亲本的变体，其中该变体包含一个或多个以下基序：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ IDNO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、[WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)，其中该变体包含一个或多个改变(与SEQ ID NO:1相比)，其中这些改变选自由以下组成的组：D2V、Q3F、Q3I、S12A、H15Y、T17W、T17E、V18L、K22M、S23I、S23C、S23T、S23L、S23V、S23E、V25R、Y30L、A49W、A49Y、S56T、N59D、N59C、N59E、N59R、N59F、N59W、N59V、N62C、N62D、T63C、N68Q、S72D、S72E、I74L、S77A、I82V、L90F、E99Q、L100S、T114S、T114C、Y123W、Y124I、Y124M、Y124R、Y124V、Y124Q、Y124T、Y124K、D125R、D125C、D125G、D125K、D125Q、Q135M、D138R、D138K、D138Q、L170D、L170K、L170S、L170H、D171E、D171K、D171Y、D171M、D171Q、D171L、I173C、D174W、D174H、D174M、D174N、F175Y、Q178K、I179T、S181T、S181F、S181Q、S181G、S181N、S181C、E185R、E185M、E185V、S186K、S186M、S186R、S186H、K187G、Y188P、E189V、S199C、S199L、A203G、A203E、A203V、N204L、N204Y、N204V、L205I、D207N、D207S、D207C、D207G、S210T、Q215R、T218Q、N227T、N227K、E232D、G235W、S237W、Y244M、Y244C、N252C、Q256E、N260Q、Q262H、M263Q、D264E、Y265F、N267T、N267S、Y270F、H272M、H272P、H272I、H272V、N273W、K274H、F276A、F276N、F276K、F276C、I278V、S279N、S279D、S279G、D280E、D280C、Y281P、Y282N、H283I、A284T、A284L、A284I、S288K、V290I、K291R、T296C、T303Q、D304M、D304C、L305M、L305N、S306C、K308D、K308A、K308V、K308Q、K308S、K308Y、K308G、K308L、K308T、K308I、K309C、K309L、K309D、K309Q、K309N、K309T、K309A、K309S、K309M、K309H、K312A、K312Q、K312S、K312W、K312L、K312N、E314L、E314V、E314I、L315I、R319A和N323R，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中每个取代提供分散蛋白变体，与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该分散蛋白变体具有以至少1.05、如1.08、如1.1、如1.15、如1.2、如1.25、如1.3、如1.4、如1.5、如1.6、如1.7、如1.8、如1.9、如2、如3、如4、如5或如至少10的半衰期改进因子，HIF或残留活性比，RAR测量的稳定性的增加，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性并且优选地其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
本发明的任一种突变的添加已显示提高稳定性。
在一些优选的方面，本发明的分散蛋白变体包含2、3、4、5、6、7、8或9或更多个取代(与SEQ ID NO:1相比)，其中这些取代选自由以下组成的组：D2V、Q3F、Q3I、S12A、H15Y、T17W、T17E、V18L、K22M、S23I、S23C、S23T、S23L、S23V、S23E、V25R、Y30L、A49W、A49Y、S56T、N59D、N59C、N59E、N59R、N59F、N59W、N59V、N62C、N62D、T63C、N68Q、S72D、S72E、I74L、S77A、I82V、L90F、E99Q、L100S、T114S、T114C、Y123W、Y124I、Y124M、Y124R、Y124V、Y124Q、Y124T、Y124K、D125R、D125C、D125G、D125K、D125Q、Q135M、D138R、D138K、D138Q、L170D、L170K、L170S、L170H、D171E、D171K、D171Y、D171M、D171Q、D171L、I173C、D174W、D174H、D174M、D174N、F175Y、Q178K、I179T、S181T、S181F、S181Q、S181G、S181N、S181C、E185R、E185M、E185V、S186K、S186M、S186R、S186H、K187G、Y188P、E189V、S199C、S199L、A203G、A203E、A203V、N204L、N204Y、N204V、L205I、D207N、D207S、D207C、D207G、S210T、Q215R、T218Q、S225G、N227T、N227K、E232D、G235W、S237W、Y244M、Y244C、N252C、Q256E、N260Q、Q262H、M263Q、D264E、Y265F、N267T、N267S、Y270F、H272M、H272P、H272I、H272V、N273W、K274H、F276A、F276N、F276K、F276C、I278V、S279N、S279D、S279G、D280E、D280C、Y281P、Y282N、H283I、A284T、A284L、A284I、S288K、V290I、K291R、T296C、T303Q、D304M、D304C、L305M、L305N、S306C、K308D、K308A、K308V、K308Q、K308S、K308Y、K308G、K308L、K308T、K308I、K309C、K309L、K309D、K309Q、K309N、K309T、K309A、K309S、K309M、K309H、K312A、K312Q、K312S、K312W、K312L、K312N、E314L、E314V、E314I、L315I、R319A和N323R，其中该变体与SEQID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)并且其中，与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该变体具有至少一个改进的特性，优选地该改进的特性是改进的稳定性，其中如实例4和实例5中所述的测试稳定性，优选地其中该变体具有氨基己糖苷酶例如β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
在一些方面，与亲本相比、或与具有SEQ ID NO:1中所示的多肽的分散蛋白相比、或具有与分散蛋白变体同一的氨基酸序列但在指定位置中的2、3、4、5、6、7、8或9或更多个处不具有改变的分散蛋白相比，本发明的分散蛋白变体具有以半衰期改进因子，HIF测量的改进的稳定性。
在一些方面，与亲本相比、或与具有SEQ ID NO:1中所示的多肽的分散蛋白相比、或具有与分散蛋白变体同一的氨基酸序列但在指定位置中的2、3、4、5、6、7、8或9或更多个处不具有改变的分散蛋白相比，本发明的分散蛋白变体具有以残留活性比，RAR测量的改进的稳定性。
在本发明的一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含以下取代中的一个或多个：Q3F、Q3I、H15Y、T17W、A49W、N59E、V140I、S163P、S186R、D207N、Q215K、T218Q、S225G、N227T、E232D、G235W、S237W、N252P、N260Q、N267T、H272V、H272P、S279D、Y281P、S288P、K308Q、K309E或K312Q，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)。
在本发明的一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含以下取代中的一个或多个：Q3I、H15Y、A49W、N59E、S163P、S186R、S225G、N227T、E232D、G235W、N252P、N260Q、H272V、S279D、Y281P、K308Q、K309E或K312Q，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)。
在本发明的一些优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含以下取代组中的一个或多个：Q3I+A49W、Q3I+N59E、Q3I+S163P、Q3I+S186R、Q3I+Q215K、Q3I+S225G、Q3I+N227T、Q3I+N252P、Q3I+N267T、Q3I+F276A、Q3I+Y281P、Q3I+K308Q、Q3I+K308E、Q3I+K309E、Q3I+K312Q、Q3I+K312E、Q3F+A49W、Q3F+N59E、Q3F+S163P、Q3F+S186R、Q3F+Q215K、Q3F+S225G、Q3F+N227T、Q3F+N252P、Q3F+N267T、Q3F+F276A、Q3F+Y281P、Q3F+K308Q、Q3F+K308E、Q3F+K309E、Q3F+K312E、Q3F+K312Q、A49W+N59E、A49W+S163P、A49W+S186R、A49W+Q215K、A49W+S225G、A49W+N227T、A49W+N252P、A49W+N267T、A49W+F276A、A49W+Y281P、A49W+K308Q、A49W+K308E、A49W+K309E、A49W+K312Q、A49W+K312E、N59E+S163P、N59E+S186R、N59E+Q215K、N59E+S225G、N59E+N227T、N59E+N252P、N59E+N267T、N59E+F276A、N59E+Y281P、N59E+K308Q、N59E+K308E、N59E+K309E、N59E+K312Q、N59E+K312E、S163P+S186R、S163P+Q215K、S163P+S225G、S163P+N227T、S163P+N252P、S163P+N267T、S163P+F276A、S163P+Y281P、S163P+K308E、S163P+K308Q、S163P+K309E、S163P+K312Q、S163P+K312E、S186R+Q215K、S186R+S225G、S186R+N227T、S186R+N252P、S186R+N267T、S186R+F276A、S186R+Y281P、S186R+K308E、S186R+K308Q、S186R+K309E、S186R+K312Q、S186R+K312E、Q215K+S225G、Q215K+N227T、Q215K+N252P、Q215K+N267T、Q215K+F276A、Q215K+Y281P、Q215K+K308E、Q215K+K308Q、Q215K+K309E、Q215K+K312Q Q215K+K312E、S225G+N227T、S225G+N252P、S225G+N267T、S225G+F276A、S225G+Y281P、S225G+K308E、S225G+K308Q、S225G+K309E、S225G+K312Q、S225G+K312E、N227T+N252P、N227T+N267T、N227T+F276A、N227T+Y281P、N227T+K308Q、N227T+K308E、N227T+K309E、N227T+K312Q、N227T+K312E、N252P+N267T、N252P+F276A、N252P+Y281P、N252P+K308Q、N252P+K308E、N252P+K309E、N252P+K312Q、N252P+K312E、N267T+F276A、N267T+Y281P、N267T+K308E、N267T+K309E、N267T+K312Q、N267T+K312E、F276A+Y281P、F276A+K308Q、F276A+K308E、F276A+K309E、F276A+K312Q、F276A+K312E、Y281P+K308Q、Y281P+K308E、Y281P+K309E、Y281P+K312Q、Y281P+K312E、K308E+K312Q、K308E+K312E、K308Q+K312Q、K309E+K312Q或K309E+K312E，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少两个取代，其中这些取代或取代组选自由以下组成的组：
F276A+K308E、F276A+K309E、K308E+K309E、K308E+K312E、K309E+K312E、N227T+F276A、N227T+K308E、N227T+K312E、N227T+N252P、N227T+N267T、N252P+F276A、N252P+K308E、N252P+K309E、N252P+N267T、N267T+F276A、N267T+K308E、N267T+K309E、N267T+K312E、Q215K+F276A、Q215K+K308E、Q215K+K309E、Q215K+K312E、Q215K+N227T、Q215K+N252P、Q215K+N267T、S163P+F276A、S163P+K308E、S163P+K309E、S163P+K312E、S163P+N252P、S163P+N267T和S163P+Q215K。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少两个取代，其中这些取代组选自由以下组成的组：Q3I+H15Y、Q3I+A49W、Q3I+N59E、Q3I+S163P、Q3I+S186R、Q3I+S225G、Q3I+N227T、Q3I+E232D、Q3I+G235W、Q3I+N252P、Q3I+N260Q、Q3I+H272V、Q3I+S279D、Q3I+Y281P、Q3I+K308Q、Q3I+K309E、Q3I+K312Q、H15Y+A49W、H15Y+N59E、H15Y+S163P、H15Y+S186R、H15Y+S225G、H15Y+N227T、H15Y+E232D、H15Y+G235W、H15Y+N252P、H15Y+N260Q、H15Y+H272V、H15Y+S279D、H15Y+Y281P、H15Y+K308Q、H15Y+K309E、H15Y+K312Q、A49W+N59E、A49W+S163P、A49W+S186R、A49W+S225G、A49W+N227T、A49W+E232D、A49W+G235W、A49W+N252P、A49W+N260Q、A49W+H272V、A49W+S279D、A49W+Y281P、A49W+K308Q、A49W+K309E、A49W+K312Q、N59E+S163P、N59E+S186R、N59E+S225G、N59E+N227T、N59E+E232D、N59E+G235W、N59E+N252P、N59E+N260Q、N59E+H272V、N59E+S279D、N59E+Y281P、N59E+K308Q、N59E+K309E、N59E+K312Q、S163P+S186R、S163P+S225G、S163P+N227T、S163P+E232D、S163P+G235W、S163P+N252P、S163P+N260Q、S163P+H272V、S163P+S279D、S163P+Y281P、S163P+K308Q、S163P+K309E、S163P+K312Q、S186R+S225G、S186R+N227T、S186R+E232D、S186R+G235W、S186R+N252P、S186R+N260Q、S186R+H272V、S186R+S279D、S186R+Y281P、S186R+K308Q、S186R+K309E、S186R+K312Q、S225G+N227T、S225G+E232D、S225G+G235W、S225G+N252P、S225G+N260Q、S225G+H272V、S225G+S279D、S225G+Y281P、S225G+K308Q、S225G+K309E、S225G+K312Q、N227T+E232D、N227T+G235W、N227T+N252P、N227T+N260Q、N227T+H272V、N227T+S279D、N227T+Y281P、N227T+K308Q、N227T+K309E、N227T+K312Q、E232D+G235W、E232D+N252P、E232D+N260Q、E232D+H272V、E232D+S279D、E232D+Y281P、E232D+K308Q、E232D+K309E、E232D+K312Q、G235W+N252P、G235W+N260Q、G235W+H272V、G235W+S279D、G235W+Y281P、G235W+K308Q、G235W+K309E、G235W+K312Q、N252P+N260Q、N252P+H272V、N252P+S279D、N252P+Y281P、N252P+K308Q、N252P+K309E、N252P+K312Q、N260Q+H272V、N260Q+S279D、N260Q+Y281P、N260Q+K308Q、N260Q+K309E、N260Q+K312Q、H272V+S279D、H272V+Y281P、H272V+K308Q、H272V+K309E、H272V+K312Q、S279D+Y281P、S279D+K308Q、S279D+K309E、S279D+K312Q、Y281P+K308Q、Y281P+K309E、Y281P+K312Q、K308Q+K309E、K308Q+K312Q和K309E+K312Q。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少三个取代，其中这些取代或取代组选自由以下组成的组：
K312E+N227T+F276A、K312E+N227T+K308E、K312E+N227T+K309E、K312E+N227T+K312E、K312E+F276A+K308E、K312E+F276A+K309E、K312E+F276A+K312E、K312E+K308E+K309E、K312E+K308E+K312E、K312E+K309E+K312E、N227T+F276A+K308E、N227T+F276A+K309E、N227T+F276A+K312E、N227T+K308E+K309E、N227T+K308E+K312E、N227T+K309E+K312E、F276A+K308E+K309E、F276A+K308E+K312E、F276A+K309E+K312E、和K308E+K309E+K312E。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少三个取代，其中这些取代组选自由以下组成的组：
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在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少三个取代，其中这些取代或取代组选自由以下组成的组：
F276A+K308E+K309E、F276A+K308E+K312E、F276A+K309E+K312E、K308E+K309E+K312E、N227T+F276A+K309E、N227T+F276A+K312E、N227T+K308E+K309E、N227T+K308E+K312E、N227T+K309E+K312E、N227T+N252P+K308E、N227T+N252P+K309E、N227T+N252P+K312E、N227T+N252P+N267T、N227T+N267T+F276A、N227T+N267T+K308E、N227T+N267T+K309E、N227T+N267T+K312E、N252P+F276A+K308E、N252P+F276A+K309E、N252P+F276A+K312E、N252P+K308E+K309E、N252P+K308E+K312E、N252P+N267T+F276A、N252P+N267T+K308E、N252P+N267T+K309E、N252P+N267T+K312E、N267T+F276A+K308E、N267T+F276A+K309E、N267T+F276A+K312E、N267T+K308E+K309E、N267T+K308E+K312E、N267T+K309E+K312E、Q215K+F276A+K308E、Q215K+F276A+K312E、Q215K+K308E+K312E、Q215K+K309E+K312E、Q215K+N227T+F276A、Q215K+N227T+K308E、Q215K+N227T+K309E、Q215K+N227T+K312E、Q215K+N227T+N252P、Q215K+N227T+N267T、Q215K+N252P+F276A、Q215K+N252P+K309E、Q215K+N252P+K312E、Q215K+N252P+N267T、Q215K+N267T+F276A、Q215K+N267T+K312E、S163P+F276A+K308E、S163P+F276A+K312E、S163P+K308E+K309E、S163P+K308E+K312E、S163P+K309E+K312E、S163P+N227T+F276A、S163P+N227T+K309E、S163P+N227T+N252P、S163P+N227T+N267T、S163P+N252P+F276A、S163P+N252P+K308E、S163P+N252P+K309E、S163P+N252P+K312E、S163P+N252P+N267T、S163P+N267T+K308E、S163P+N267T+K309E、S163P+N267T+K312E、S163P+Q215K+F276A、S163P+Q215K+K308E、S163P+Q215K+K309E、S163P+Q215K+K312E、S163P+Q215K+N227T和S163P+Q215K+N252P。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少四个取代，其中这些取代或取代组选自由以下组成的组：
K312E+N227T+F276A+K308E、K312E+N227T+F276A+K309E、K312E+N227T+F276A+K312E、K312E+N227T+K308E+K309E、K312E+N227T+K308E+K312E、K312E+N227T+K309E+K312E、K312E+F276A+K308E+K309E、K312E+F276A+K308E+K312E、K312E+F276A+K309E+K312E、K312E+K308E+K309E+K312E、N227T+F276A+K308E+K309E、N227T+F276A+K308E+K312E、N227T+F276A+K309E+K312E、N227T+K308E+K309E+K312E、F276A+K308E+K309E+K312E、F276A+K308E+K309E+K312E、N227T+K308E+K309E+K312E和N227T+F276A+K308E+K309E。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少四个取代，其中这些取代组选自由以下组成的组：
K312Q+N227T+S225G+K308Q、K312Q+N227T+S225G+K309E、K312Q+N227T+S225G+K312Q、K312Q+N227T+K308Q+K309E、K312Q+N227T+K308Q+K312Q、K312Q+N227T+K309E+K312Q、K312Q+S225G+K308Q+K309E、K312Q+S225G+K308Q+K312Q、K312Q+S225G+K309E+K312Q、K312Q+K308Q+K309E+K312Q、N227T+S225G+K308Q+K309E、N227T+S225G+K308Q+K312Q、N227T+S225G+K309E+K312Q、N227T+K308Q+K309E+K312Q、S225G+K308Q+K309E+K312Q、S225G+K308Q+K309E+K312Q、N227T+K308Q+K309E+K312Q和N227T+S225G+K308Q+K309E。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少四个取代，其中这些取代或取代组选自由以下组成的组：
N227T+F276A+K308E+K309E、N227T+F276A+K308E+K312E、N227T+F276A+K309E+K312E、N227T+N267T+F276A+K308E、N227T+N267T+F276A+K309E、N227T+N267T+F276A+K312E、和S163P+N227T+F276A+K308E。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少四个取代，其中这些取代组选自由以下组成的组：
N227T+S225G+K308Q+K309E、N227T+S225G+K308Q+K312Q、N227T+S225G+K309E+K312Q、N227T+N267T+S225G+K308Q、N227T+N267T+S225G+K309E、N227T+N267T+S225G+K312Q、和
S163P+N227T+S225G+K308Q。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少五个取代，其中这些取代或取代组选自由以下组成的组：
S163P+Q215K+N227T+N252P+N267T、S163P+Q215K+N227T+N252P+F276A、S163P+Q215K+N227T+N252P+K308E、S163P+Q215K+N227T+N252P+K309E、S163P+Q215K+N227T+N267T+F276A、S163P+Q215K+N227T+N267T+K308E、S163P+Q215K+N227T+N267T+K309E、S163P+Q215K+N227T+F276A+K308E、S163P+Q215K+N227T+F276A+K309E、S163P+Q215K+N227T+K308E+K309E、S163P+Q215K+N252P+N267T+F276A、S163P+Q215K+N252P+N267T+K308E、S163P+Q215K+N252P+N267T+K309E、S163P+Q215K+N252P+F276A+K308E、S163P+Q215K+N252P+F276A+K309E、S163P+Q215K+N252P+K308E+K309E、S163P+Q215K+N267T+F276A+K308E、S163P+Q215K+N267T+F276A+K309E、S163P+Q215K+N267T+K308E+K309E、S163P+Q215K+F276A+K308E+K309E、S163P+N227T+N252P+N267T+F276A、S163P+N227T+N252P+N267T+K308E、S163P+N227T+N252P+N267T+K309E、S163P+N227T+N252P+F276A+K308E、S163P+N227T+N252P+F276A+K309E、S163P+N227T+N252P+K308E+K309E、S163P+N227T+N267T+F276A+K308E、S163P+N227T+N267T+F276A+K309E、S163P+N227T+N267T+K308E+K309E、S163P+N227T+F276A+K308E+K309E、S163P+N252P+N267T+F276A+K308E、S163P+N252P+N267T+F276A+K309E、S163P+N252P+N267T+K308E+K309E、S163P+N252P+F276A+K308E+K309E、S163P+N267T+F276A+K308E+K309E、Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A、Q215K+N227T+N252P+N267T+K308E、Q215K+N227T+N252P+N267T+K309E、Q215K+N227T+N252P+F276A+K308E、Q215K+N227T+N252P+F276A+K309E、Q215K+N227T+N252P+K308E+K309E、Q215K+N227T+N267T+F276A+K308E、Q215K+N227T+N267T+F276A+K309E、Q215K+N227T+N267T+K308E+K309E、Q215K+N227T+F276A+K308E+K309E、Q215K+N252P+N267T+F276A+K308E、Q215K+N252P+N267T+F276A+K309E、Q215K+N252P+N267T+K308E+K309E、Q215K+N252P+F276A+K308E+K309E、Q215K+N267T+F276A+K308E+K309E、N227T+N252P+N267T+F276A+K308E、N227T+N252P+N267T+F276A+K309E、N227T+N252P+N267T+K308E+K309E、N227T+N252P+F276A+K308E+K309E、N227T+N267T+F276A+K308E+K309EN252P+N267T+F276A+K308E+K309E、Q215K+N227T+F276A+K308E+K309E、Q215K+N227T+F276A+K308E+K312E、Q215K+N227T+F276A+K309E+K312E、Q215K+N227T+K308E+K309E+K312E、Q215K+F276A+K308E+K309E+K312E、和N227T+F276A+K308E+K309E+K312E。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少五个取代，其中这些取代组选自由以下组成的组：
S163P+N59E+N227T+N252P+E232D、S163P+N59E+N227T+N252P+S225G、S163P+N59E+N227T+N252P+K308Q、S163P+N59E+N227T+N252P+K309E、S163P+N59E+N227T+E232D+S225G、S163P+N59E+N227T+E232D+K308Q、S163P+N59E+N227T+E232D+K309E、S163P+N59E+N227T+S225G+K308Q、S163P+N59E+N227T+S225G+K309E、S163P+N59E+N227T+K308Q+K309E、S163P+N59E+N252P+E232D+S225G、S163P+N59E+N252P+E232D+K308Q、S163P+N59E+N252P+E232D+K309E、S163P+N59E+N252P+S225G+K308Q、S163P+N59E+N252P+S225G+K309E、S163P+N59E+N252P+K308Q+K309E、S163P+N59E+E232D+S225G+K308Q、S163P+N59E+E232D+S225G+K309E、S163P+N59E+E232D+K308Q+K309E、S163P+N59E+S225G+K308Q+K309E、S163P+N227T+N252P+E232D+S225G、S163P+N227T+N252P+E232D+K308Q、S163P+N227T+N252P+E232D+K309E、S163P+N227T+N252P+S225G+K308Q、S163P+N227T+N252P+S225G+K309E、S163P+N227T+N252P+K308Q+K309E、S163P+N227T+E232D+S225G+K308Q、S163P+N227T+E232D+S225G+K309E、S163P+N227T+E232D+K308Q+K309E、S163P+N227T+S225G+K308Q+K309E、S163P+N252P+E232D+S225G+K308Q、S163P+N252P+E232D+S225G+K309E、S163P+N252P+E232D+K308Q+K309E、S163P+N252P+S225G+K308Q+K309E、S163P+E232D+S225G+K308Q+K309E、N59E+N227T+N252P+E232D+S225G、N59E+N227T+N252P+E232D+K308Q、N59E+N227T+N252P+E232D+K309E、N59E+N227T+N252P+S225G+K308Q、N59E+N227T+N252P+S225G+K309E、N59E+N227T+N252P+K308Q+K309E、N59E+N227T+E232D+S225G+K308Q、N59E+N227T+E232D+S225G+K309E、N59E+N227T+E232D+K308Q+K309E、N59E+N227T+S225G+K308Q+K309E、N59E+N252P+E232D+S225G+K308Q、N59E+N252P+E232D+S225G+K309E、N59E+N252P+E232D+K308Q+K309E、N59E+N252P+S225G+K308Q+K309E、N59E+E232D+S225G+K308Q+K309E、N227T+N252P+E232D+S225G+K308Q、N227T+N252P+E232D+S225G+K309E、N227T+N252P+E232D+K308Q+K309E、N227T+N252P+S225G+K308Q+K309E、N227T+E232D+S225G+K308Q+K309E N252P+E232D+S225G+K308Q+K309E、N59E+N227T+S225G+K308Q+K309E、N59E+N227T+S225G+K308Q+K312Q、N59E+N227T+S225G+K309E+K312Q、N59E+N227T+K308Q+K309E+K312Q、N59E+S225G+K308Q+K309E+K312Q、和N227T+S225G+K308Q+K309E+K312Q。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少五个取代，其中这些取代或取代组选自由以下组成的组：
N227T+N267T+F276A+K308E+K309E、N227T+N267T+F276A+K308E+K312E、N227T+N267T+F276A+K309E+K312E、S163P+N227T+F276A+K308E+K312E、N227T+F276A+K308E+K309E+K312E、N227T+F276A+K308E+K309E+K312E、和N227T+F276A+K308E+K309E+K312E。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少五个取代，其中这些取代组选自由以下组成的组：
N227T+E232D+S225G+K308Q+K309E、N227T+E232D+S225G+K308Q+K312Q、N227T+E232D+S225G+K309E+K312Q、S163P+N227T+S225G+K308Q+K312Q、N227T+S225G+K308Q+K309E+K312Q、N227T+S225G+K308Q+K309E+K312Q、和N227T+S225G+K308Q+K309E+K312Q。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少六个取代，其中这些取代或取代组选自由以下组成的组：
N227T+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、N227T+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、N227T+N252P+F276A+K308E+K309E+K312E、Q215K+N227T+F276A+K308E+K309E+K312E、S163P+N227T+F276A+K308E+K309E+K312E、N227T+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、N227T+N252P+F276A+K308E+K309E+K312E、Q215K+N227T+F276A+K308E+K309E+K312E和S163P+N227T+F276A+K308E+K309E+K312E。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少六个取代，其中这些取代组选自由以下组成的组：
N227T+S225G+S186R+K308Q+K309E+K312Q、N227T+S225G+S186R+K308Q+K309E+K312Q、N227T+N252P+S186R+K308Q+K309E+K312Q、G235W+N227T+S186R+K308Q+K309E+K312Q、S163P+N227T+S186R+K308Q+K309E+K312Q、N227T+S225G+S186R+K308Q+K309E+K312Q、N227T+N252P+S186R+K308Q+K309E+K312Q、G235W+N227T+S186R+K308Q+K309E+K312Q和S163P+N227T+S186R+K308Q+K309E+K312Q。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少七个取代，其中这些取代或取代组选自由以下组成的组：
N227T+N252P+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、Q215K+N227T+N252P+F276A+K308E+K309E+K312E、Q215K+N227T+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、S163P+N227T+N252P+F276A+K308E+K309E+K312E、S163P+N227T+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、S163P+Q215K+N227T+F276A+K308E+K309E+K312E、N227T+N252P+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、Q215K+N227T+N252P+F276A+K308E+K309E+K312E、Q215K+N227T+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、S163P+N227T+N252P+F276A+K308E+K309E+K312E、S163P+N227T+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、和S163P+Q215K+N227T+F276A+K308E+K309E+K312E。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少七个取代，其中这些取代组选自由以下组成的组：
N227T+N252P+S225G+S186R+K308Q+K309E+K312Q、S186R+N227T+N252P+S186R+K308Q+K309E+K312Q、S186R+N227T+S225G+S186R+K308Q+K309E+K312Q、S163P+N227T+N252P+S186R+K308Q+K309E+K312Q、S163P+N227T+S225G+S186R+K308Q+K309E+K312Q、S163P+S186R+N227T+S186R+K308Q+K309E+K312Q、N227T+N252P+S225G+S186R+K308Q+K309E+K312Q、S186R+N227T+N252P+S186R+K308Q+K309E+K312Q、S186R+N227T+S225G+S186R+K308Q+K309E+K312Q、S163P+N227T+N252P+S186R+K308Q+K309E+K312Q、S163P+N227T+S225G+S186R+K308Q+K309E+K312Q、和S163P+S186R+N227T+S186R+K308Q+K309E+K312Q。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少八个取代，其中这些取代选自由以下组成的组：
S163P+Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K308E+K309E、S163P+Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K308E+K312E、S163P+Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K309E+K312E、S163P+Q215K+N227T+N252P+N267T+K308E+K309E+K312E、S163P+Q215K+N227T+N252P+F276A+K308E+K309E+K312E、S163P+Q215K+N227T+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、S163P+Q215K+N252P+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、S163P+N227T+N252P+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、和Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少八个取代，其中这些取代组选自由以下组成的组：
S163P+G235W+N227T+N252P+S186R+N260Q+K308Q+K309E、S163P+G235W+N227T+N252P+S186R+N260Q+K308Q+K312Q、S163P+G235W+N227T+N252P+S186R+N260Q+K309E+K312Q、S163P+G235W+N227T+N252P+S186R+K308Q+K309E+K312Q、S163P+G235W+N227T+N252P+N260Q+K308Q+K309E+K312Q、S163P+G235W+N227T+S186R+N260Q+K308Q+K309E+K312Q、S163P+G235W+N252P+S186R+N260Q+K308Q+K309E+K312Q、S163P+N227T+N252P+S186R+N260Q+K308Q+K309E+K312Q、和G235W+N227T+N252P+S186R+N260Q+K308Q+K309E+K312Q。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少八个取代，其中这些取代或取代组选自由以下组成的组：
Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、S163P+N227T+N252P+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、S163P+Q215K+N227T+N252P+F276A+K308E+K309E+K312E、S163P+Q215K+N227T+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、S163P+N227T+N252P+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、S163P+Q215K+N227T+N252P+F276A+K308E+K309E+K312E和S163P+Q215K+N227T+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少八个取代，其中这些取代组选自由以下组成的组：
S225G+N227T+N252P+S186R+N260Q+K308E+K309E+K312E、S163P+N227T+N252P+S186R+N260Q+K308E+K309E+K312E、S163P+S225G+N227T+N252P+N260Q+K308E+K309E+K312E、S163P+S225G+N227T+S186R+N260Q+K308E+K309E+K312E、S225G+N227T+N252P+S186R+N260Q+K308E+K309E+K312E、S163P+N227T+N252P+S186R+N260Q+K308E+K309E+K312E、S163P+S225G+N227T+N252P+N260Q+K308E+K309E+K312E和S163P+S225G+N227T+S186R+N260Q+K308E+K309E+K312E。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少九个取代，其中这些取代或取代组选自由以下组成的组：
S163P+Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、
Q3F+Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E、
A49W+S163P+Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K309E+K312E、
Q3F+S163P+Q215K+N227T+N252P+N267T+K308E+K309E+K312E、和
A49W+Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少九个取代，其中这些取代组选自由以下组成的组：
S163P+S225G+N227T+N252P+N260Q+S186R+K308Q+K309E+K312Q、
Q3I+S225G+N227T+N252P+N260Q+S186R+K308Q+K309E+K312Q、
A49W+S163P+S225G+N227T+N252P+N260Q+S186R+K309E+K312Q、
Q3I+S163P+S225G+N227T+N252P+N260Q+K308Q+K309E+K312Q、和
A49W+S225G+N227T+N252P+N260Q+S186R+K308Q+K309E+K312Q。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少九个取代，其中这些取代或取代组选自由以下组成的组：
S163P+Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E和
S163P+Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K308E+K309E+K312E。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少九个取代，其中这些取代组选自由以下组成的组：
S163P+S186R+S225G+N227T+G235W+N252P+K308Q+K309E+K312Q和
S163P+S186R+S225G+N227T+G235W+N252P+K308Q+K309E+K312Q。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少八个、至少九个、至少十个或至少十一个取代，其中这些取代或取代组选自由以下组成的组：
Q3F+A49W+Q215K+F276A+K308E+K309E+K312E+N227T+N267T、
Q3F+A49W+Q215K+F276A+K308E+K309E+K312E+N227T+N267T、
Q3F+A49W+Q215K+F276A+K308E+K309E+K312E+N227T+N267T、
Q3F+A49W+Q215K+F276A+K308E+K309E+K312E+N227T+、Q3F+A49W+Q215K+F276A+K308E+K309E+K312E+N267T+、Q3F+A49W+Q215K+F276A+K308E+K309E+N227T+N267T+、Q3F+A49W+Q215K+F276A+K308E+K312E+N227T+N267T+、Q3F+A49W+Q215K+F276A+K309E+K312E+N227T+N267T+、Q3F+A49W+Q215K+K308E+K309E+K312E+N227T+N267T+、Q3F+A49W+F276A+K308E+K309E+K312E+N227T+N267T+、Q3F+Q215K+F276A+K308E+K309E+K312E+N227T+N267T+、A49W+Q215K+F276A+K308E+K309E+K312E+N227T+N267T+和Q3F+A49W+Q215K+F276A+K308E+K309E+K312E+N227T+N267T。
在一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少十一个取代，其中这些取代组选自由以下组成的组：
Q3I+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
Q3I+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+E232D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
Q3I+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+G235W+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
Q3I+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N252P+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
Q3I+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N260Q+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
Q3I+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+H272V+Y281P+K308Q+K309E、
Q3I+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+S279D+Y281P+K308Q+K312Q、
H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+Y281P+K309E+K312Q、
H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+G235W+K308Q+K309E+K312Q、
H15Y+A49W+S163P+S186R+S225G+N227T+Y281P+S288P+K308Q+K309E+K312Q、
H15Y+A49W+S163P+S186R+S225G+N227T+N252P+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
H15Y+A49W+S163P+S186R+S225G+N227T+H272P+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
H15Y+A49W+S163P+S186R+S225G+N227T+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、和
H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+Y281P+K308Q+K312Q。
在本发明的一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代组中的一个：
Q3F+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+N252P+F276A+Y281P+K308E+K309E+K312E；
Q3I+H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+N260Q+N267T+H272V+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q；
Q3I+H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+N260Q+N267T+H272P+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q；
Q3I+H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+G235W+N252P+N260Q+H272V+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312E；
Q3I+H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+G235W+N252P+N260Q+H272V+S279D+Y281P+K308E+K309E+K312Q；
Q3F+H15Y+V140I+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+G235W+N252P+N260Q+N267T+H272V+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q；
Q3F+H15Y+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+N252P+N260Q+N267T+H272V+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q；
Q3F+H15Y+T17W+A49W+N59E+S163P+S186R+T218Q+S225G+N227T+G235W+S237W+N252P+H272P+K308Q+K309E+K312Q；
H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+G235W+N252P+N260Q+H272V+S279D+Y281P+K309E+K312Q；
Q3F+H15Y+T17W+A49W+N59E+S163P+S186R+D207N+T218Q+S225G+N227T+G235W+S237W+N252P+H272P+Y281P+K308Q+K309E+K312Q；
Q3I+H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+G235W+N252P+N260Q+H272V+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q；
H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+N260Q+H272P+S279D+Y281P+S288P+K308Q+K309E+K312Q；和
H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+N260Q+H272P+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)。
在本发明的一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代组中的一个：S186R+N227T+E232D+K308E、
S163P+Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K308Q+K309E+K312E、
S163P+Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K308E+K309E+K312Q、
Q3F+A49W+N59E+S163P+S186R+N227T+E232D+N252P+F276A+S279G+K308E+K309E+K312E、
A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+F276A+S279G+K308E+K309E+K312E、
Q3F+T17W+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+G235W+N252P+H272P+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
A49W+N59E+S163P+S186R+N227T+E232D+N252P+H272V+F276A+S279G+K308E+K309E+K312E、
Q3F+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+N252P+F276A+S279G+K308E+K309E+K312E、
A49W+N59E+S163P+S186R+N227T+E232D+N252P+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+N252P+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+F276A+S279G+K308E+K309E+K312E、
Q3F+S163P+S186R+Q215K+N227T+E232D+N252P+N267T+F276A+S279G+K308E+K309E+K312E、
H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+G235W+N252P+N260Q+H272P+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
Q3F+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+N252P+N267T+F276A+S279G+K308E+K309E+K312E、
H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+N260Q+H272P+S279D+Y281P+S288P+K308Q+K309E+K312Q、
A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+H272V+F276A+S279G+K308E+K309E+K312E、
H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+G235W+N252P+N260Q+H272V+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
S163P+S186R+Q215K+N227T+E232D+N252P+N267T+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+A49W+N59E+S163P+S186R+N227T+E232D+N252P+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+N260Q+H272P+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+N260Q+H272V+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
Q3F+T17W+A49W+N59E+S163P+S186R+D207N+T218Q+S225G+N227T+G235W+N252P+H272P+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
H15Y+T17W+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+G235W+N252P+N260Q+H272V+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
Q3F+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+N252P+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+H272V+F276A+S279G+K308E+K309E+K312E、
A49W+N59E+S163P+S186R+N227T+E232D+N252P+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+N267T+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
H15Y+T17W+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+N260Q+H272V+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
Q3F+S163P+S186R+Q215K+N227T+E232D+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+K308E+K309E+K312E、
Q3I+H15Y+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+G235W+N252P+N260Q+H272V+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+N252P+N267T+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
S163P+Q215K+S225G+N227T+E232D+N252P+N267T+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+K308E+K309E+K312E、
S163P+Q215K+S225G+N227T+E232D+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+K308E+K309E+K312E、
A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+N252P+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+S163P+S186R+Q215K+N227T+E232D+N252P+N267T+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+S163P+Q215K+N227T+E232D+N252P+N267T+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+H15Y+T17W+A49W+N59E+S163P+S186R+T218Q+S225G+N227T+G235W+S237W+N252P+H272P+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
S163P+Q215K+N227T+E232D+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+S163P+Q215K+S225G+N227T+E232D+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+K308E+K309E+K312E、
Q3F+A49W+N59E+S163P+S186R+N227T+E232D+N252P+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+N252P+N267T+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+H15Y+T17W+A49W+N59E+S163P+S186R+D207N+T218Q+S225G+N227T+G235W+S237W+N252P+H272P+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
S163P+Q215K+S225G+N227T+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+S163P+Q215K+N227T+E232D+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+N252P+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
S163P+Q215K+S225G+N227T+E232D+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+N252P+N260Q+N267T+H272P+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
Q3F+S163P+S186R+Q215K+N227T+E232D+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+H15Y+V140I+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+G235W+N252P+N260Q+N267T+H272V+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
Q3F+T17W+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+G235W+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312Q、
Q3F+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312Q、
Q3F+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+N252P+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+H15Y+T17W+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+G235W+N252P+N260Q+N267T+H272V+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
Q3F+S163P+Q215K+S225G+N227T+E232D+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308E+K309E+K312E、
Q3F+H15Y+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+G235W+N252P+N260Q+N267T+H272P+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
Q3F+A49W+N59E+S163P+S186R+S225G+N227T+E232D+G235W+N252P+N260Q+H272P+F276A+S279D+Y281P+K308E+K309E+K312Q、
Q3F+H15Y+T17W+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+N252P+N260Q+N267T+H272V+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
Q3F+H15Y+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+N252P+N260Q+N267T+H272P+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
Q3F+H15Y+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+G235W+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308Q+K309E+K312Q、
Q3F+H15Y+T17W+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+N252P+N267T+H272V+F276A+S279G+Y281P+K308Q+K309E+K312Q和
Q3F+H15Y+A49W+N59E+V140I+S163P+S186R+Q215K+S225G+N227T+E232D+G235W+N252P+N260Q+N267T+H272V+S279D+Y281P+K308Q+K309E+K312Q，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)。
在本发明的一个优选的实施例中，本发明的分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的取代组中的一个：
A49W+F276A+K308E；
A49W+N227T+A269C+Y282C+K308E；
A49W+N227T+F276A；
A49W+N227T+F276A+K308E；
A49W+S186R+N227T+F276A；
A49W+S186R+N227T+F276A+K308E；
A49W+S186R+N227T+K308E；
A49W+Y124R+N227T+F276A+K308E；
A49W+Y124R+S186R+N227T+F276A；
A49W+Y124R+S186R+N227T+F276A+K308E；
A49W+Y124R+S186R+N227T+K308E；
S163P+N227T+F276A+K308E；
S163P+Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A；
S163P+Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K308E；
S163P+Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K309E；
S163P+Q215K+N227T+N252P+N267T+F276A+K312E；
S163P+Q215K+N252P；
S186R+F276A+K308E；
S186R+N227T+F276A；
S186R+N227T+K308E；
Y124R+S186R+N227T+A269C+F276A+Y282C+K308E；和
Y124R+S186R+N227T+F276A+K308E，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)。
以上分散蛋白变体优选地与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
在一个优选的实施例中，该分散蛋白包含SEQ ID NO 17中所示的多肽或与其具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性的多肽。
在一些方面，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的一个或多个取代组：Q3F+A49W、Q3F+N59E、Q3F+S163P、Q3F+S186R、Q3F+Q215K、Q3F+S225G、Q3F+N227T、Q3F+N252P、Q3F+N267T、Q3F+F276A、Q3F+Y281P、Q3F+K308E、Q3F+K309E、Q3F+K312E、A49W+N59E、A49W+S163P、A49W+S186R、A49W+Q215K、A49W+S225G、A49W+N227T、A49W+N252P、A49W+N267T、A49W+F276A、A49W+Y281P、A49W+K308E、A49W+K309E、A49W+K312E、N59E+S163P、N59E+S186R、N59E+Q215K、N59E+S225G、N59E+N227T、N59E+N252P、N59E+N267T、N59E+F276A、N59E+Y281P、N59E+K308E、N59E+K309E、N59E+K312E、S163P+S186R、S163P+Q215K、S163P+S225G、S163P+N227T、S163P+N252P、S163P+N267T、S163P+F276A、S163P+Y281P、S163P+K308E、S163P+K309E、S163P+K312E、S186R+Q215K、S186R+S225G、S186R+N227T、S186R+N252P、S186R+N267T、S186R+F276A、S186R+Y281P、S186R+K308E、S186R+K309E、S186R+K312E、Q215K+S225G、Q215K+N227T、Q215K+N252P、Q215K+N267T、Q215K+F276A、Q215K+Y281P、Q215K+K308E、Q215K+K309E、Q215K+K312E、S225G+N227T、S225G+N252P、S225G+N267T、S225G+F276A、S225G+Y281P、S225G+K308E、S225G+K309E、S225G+K312E、N227T+N252P、N227T+N267T、N227T+F276A、N227T+Y281P、N227T+K308E、N227T+K309E、N227T+K312E、N252P+N267T、N252P+F276A、N252P+Y281P、N252P+K308E、N252P+K309E、N252P+K312E、N267T+F276A、N267T+Y281P、N267T+K308E、N267T+K309E、N267T+K312E、F276A+Y281P、F276A+K308E、F276A+K309E、F276A+K312E、Y281P+K308E、Y281P+K309E、Y281P+K312E、K308E+K309E、K308E+K312E和K309E+K312E，其中每个取代提供分散蛋白变体，与亲本分散蛋白(例如包含具有SEQ IDNO:1中所示的氨基酸序列的多肽的分散蛋白)相比，该分散蛋白变体具有以至少1.05、如1.08、如1.1、如1.15、如1.2、如1.25、如1.3、如1.4、如1.5、如1.6、如1.7、如1.8、如1.9、如2、如3、如4、如5或如至少10的半衰期改进因子，HIF或残留活性比，RAR测量的稳定性的增加，其中该分散蛋白变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置(根据SEQ ID NO:1进行编号)。
在一个特定实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少一个二硫桥。在一个实施例中，本发明的分散蛋白变体包含至少一个二硫桥：A269C-Y282C。
在一个实施例中，该分散蛋白变体包含以下取代中的任一种和二硫桥：
A49W+A269C+F276A+Y282C+K308E、
A49W+N227T+A269C+F276A+Y282C、
A49W+N227T+A269C+F276A+Y282C+K308E、
A49W+S186R+N227T+A269C+F276A+Y282C、
A49W+S186R+N227T+A269C+F276A+Y282C+K308E、
A49W+S186R+N227T+A269C+Y282C+K308E、
A49W+Y124R+N227T+A269C+F276A+Y282C+K308E、
A49W+Y124R+S186R+N227T+A269C+F276A+Y282C、
A49W+Y124R+S186R+N227T+A269C+F276A+Y282C+K308E、
A49W+Y124R+S186R+N227T+A269C+Y282C+K308E、
N227T+A269C+F276A+Y282C+K308E、
S186R+A269C+F276A+Y282C+K308E、
S186R+N227T+A269C+F276A+Y282C、
S186R+N227T+A269C+F276A+Y282C+K308E、
S186R+N227T+A269C+Y282C+K308E或
Y124R+S186R+N227T+A269C+F276A+Y282C+K308E。
优选地，这些分散蛋白变体与SEQ ID NO 1具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性。
分散蛋白变体可以包含以下改变中的任一种：D2E、D2S、D2T、Q3A、Q3*、T17A、E19T、E19H、E19W、E19L、K22R、K22N、K22M、K22S、D26*、S29G、Y30C、Y30S、Y30E、Y30G、N31W、N31G、G32N、N34*、N34M、N43D、N43F、E44N、E44S、E44I、S50C、E51D、Y52F、G54D、G54R、S56D、S56A、S57N、S57L、E58R、E58K、E58W、E58P、N59Q、N59K、N59I、N59G、T60I、T60M、T60R、T60A、N61E、N62K、N62M、N62V、N62G、T63Y、T63I、T63K、K67W、N68M、N68A、L71K、L71Q、L71E、L71D、S72P、A75R、A75W、A75G、A75N、A75M、D79R、D79L、D79N、D79E、D79W、K80I、K80D、K80Y、D81M、D81I、D81*、D81E、K95M、G96A、E99V、E99M、K102A、K102Q、K103D、K103C、K103P、K103T、K103N、K103I、K103S、K104A、K104V、K104*、D105*、V106I、V106P、V106*、V106S、V106F、K107R、K107G、K107N、K107H、K107Q、L108M、N110W、D111L、D111K、D111H、V113*、V113R、D115V、Y116*、Y116E、S117W、S117V、S117R、E118C、E118F、E118H、E119*、E119T、E119Y、E119M、E119H、Y124A、Y124S、Y124K、Y124I、Y124F、D125G、R127V、R127G、V128W、V128L、D131R、D131*、N134R、N134M、Q135H、Q135W、D138A、D138C、D138I、D138E、D138K、D142M、D142L、D142T、D142V、D142*、Y145A、Y145K、Y145R、Y145G、P147I、P147*、P147N、P147E、K148M、K148R、K148G、K148P、K148N、F149Y、F149E、E150I、G151M、G151R、G151V、G151T、G151E、G151F、K152V、K152W、K152S、G164F、G164Q、G164L、G164W、G164R、G164A、G164C、V167N、H168D、H168M、H168A、H168W、H168S、L170I、D171F、D171N、D171M、D174L、D174T、D174A、D174R、N177D、N177*、Q178E、Q178H、S181H、S181M、S181R、S181G、S181F、K184P、K184M、K184D、E185R、E185D、E185N、E185M、S186A、S186H、S186P、K187N、K187F、K187Y、E189M、S199I、S199E、S199N、S199A、S199R、E200Q、E200H、E200I、E200Y、A203N、A203I、N204A、N204Y、D207M、D207L、D207P、D207H、S208M、S208N、S208P、S208R、S217L、S217A、S217R、T218E、T218C、T218K、G222N、G222K、E224G、E224L、D230M、N233I、W234K、W234N、W234F、G235D、S237A、S237T、S237P、Y244V、L249D、L249I、L249T、S251Q、S251K、S251D、S251T、N252T、N252W、N252Y、G253E、G253*、G253R、G253I、G253A、F254T、F254K、F254N、F254V、F254A、F254*、T255E、Q256V、E257D、N260D、N260H、E261N、Q262L、Q262W、Q262H、N267V、W268Q、W268V、A271F、H272*、H272N、H272T、H272S、I278T、D280M、Y282P、Y282D、H283K、A284L、E286D、S288F、S288W、S288A、S288Q、S288E、E300N、E300L、H301L、H301V、H301M、T303D、T303M、T303E、T303N、Q307L、K308A、K308D、K309V、L311M、R319A或R319L，优选地其中这些分散蛋白变体与SEQ ID NO 1具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性。
分散蛋白变体可以包含以下改变中的任一种：N31W
N31G、S50C、N59I、N59Q、G96A、Y124A、V128L、D138A、F149Y、S181H、K184P、K184M、E189M、N204A、D207N、S208A、Q262L、Q262W、H283K、E300N、T303G、T303C或K309V，优选地这些分散蛋白变体与SEQ ID NO 1具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性。
保守取代的实例是在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸、和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸、和缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸、和酪氨酸)、以及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、和甲硫氨酸)。通常不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质],Academic Press[学术出版社],纽约中描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。
可以根据本领域中已知的程序，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且对所得突变型分子的分散蛋白活性进行测试以鉴定对于分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见，Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。也可以结合假定接触位点氨基酸的突变，如通过以下技术例如核磁共振、结晶学、电子衍射或光亲和标记进行确定的对结构进行物理学分析，从而确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见例如，de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。
亲本分散蛋白
优选地，分散蛋白亲本从微生物获得并且该分散蛋白是微生物酶。分散蛋白优选地是真菌或细菌来源的。该分散蛋白亲本优选地获得自土地芽孢杆菌属，例如嗜糖土地芽孢杆菌、哥里土地芽孢杆菌(Terribacillus goriensis)或嗜糖土地芽孢杆菌。
该亲本分散蛋白优选地选自由以下组成的组：
a)多肽，该多肽包含SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列或是与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性的多肽，
b)多肽，该多肽包含SEQ ID NO 2中所示的氨基酸序列或是与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性的多肽，
c)多肽，该多肽包含SEQ ID NO 3中所示的氨基酸序列或是与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性的多肽，
d)多肽，该多肽包含SEQ ID NO 4中所示的氨基酸序列或是与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性的多肽，和
e)多肽，该多肽包含SEQ ID NO 5中所示的氨基酸序列或是与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性的多肽。
亲本分散蛋白优选地属于土地芽孢杆菌进化枝并且包含以下保守基序中的一个或多个：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ ID NO9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、[WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)，
下表中提供了土地芽孢杆菌进化枝的综述。土地芽孢杆菌进化枝包含同源序列。本发明具有成熟氨基酸序列SEQ ID No 1-5的具有氨基己糖苷酶活性的多肽可以使用Needleman-Wunsch算法成对比对(Needleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)。由这种比对导致的百分比同一性示出于以下中。
Figure BDA0003281929810001681
该表示出了本发明的多肽享有密切的序列相关性。包含SEQ ID NO 1、SEQ ID NO2、SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 4和SEQ ID NO 5的氨基酸序列的多肽属于分散素进化枝的亚进化枝。这些多肽具有超过90％的成对序列同一性并且彼此密切相关。
本发明的多肽均位于相同的进化枝(土地芽孢杆菌进化枝)内，并且都具有共同的功能的特征，包括在洗涤剂存在下的清洁特性。在一个方面，这些亲本分散蛋白属于土地芽孢杆菌进化枝并且包含以下基序中的一个或多个：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ ID NO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA](SEQID NO:10)、WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO:11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ IDNO:13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO:14)。
用途和方法
可以将本发明的分散蛋白变体添加至清洁，例如洗涤剂组合物中，并由此成为清洁，例如洗涤剂组合物的组分。
例如，本发明的清洁组合物可以被配制为手洗或机洗衣物洗涤剂组合物，包括适用于预处理有污渍的织物的衣物洗涤添加剂组合物，和冲洗添加型织物软化剂组合物，或被配制为用于一般家用硬表面清洁操作的洗涤剂组合物，或被配制以用于手洗或机洗餐具洗涤操作。
在特定的方面，本发明提供了包含如本文所述的本发明的分散蛋白变体的洗涤剂添加剂。
在例如衣物洗涤和餐具洗涤过程中，可以将清洁组合物用于清洁物品，如纺织品或硬表面。
一个方面涉及清洁物品的方法，该方法包括a)向清洁组合物中添加根据本发明的分散蛋白变体并且b)用该组合物洗涤物品，其中该物品是纺织品或硬表面。
一个方面涉及清洁物品的方法，该方法包括：
a)向清洁组合物中添加在对应于以下位置的一个或多个位置处包含改变，优选地取代的分散蛋白变体：SEQ ID NO:1的多肽的2、3、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、140、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、225、227、230、232、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321或323，其中该分散蛋白变体具有β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性，其中该分散蛋白变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，并且
b)用该组合物洗涤物品，其中该物品是纺织品或硬表面。
一个方面涉及清洁物品的方法，该方法包括：
a)向清洁组合物中添加在对应于以下位置的一个或多个位置处包含改变，优选地取代的分散蛋白变体：SEQ ID NO:1的多肽的31、33、36、73、75、94、141、144、241、277、294、297或299，其中该分散蛋白变体具有β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性，其中该分散蛋白变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，并且
b)用该组合物洗涤物品，其中该物品是纺织品或硬表面。
一个方面涉及清洁物品的方法，该方法包括a)向清洁组合物中添加分散蛋白变体，其中与SEQ ID NO 1中所示的分散蛋白相比，该变体包含选自由以下组成的组的改变中的任一种：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19K、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23A、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、L24I、V25R、D26M、Y30*、Y30A、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N34D、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80R、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81N、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K103V、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106R、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124H、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124N、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125H、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128A、V128C、V128D、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138N、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、V140I、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150A、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、S163P、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167A、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181K、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185A、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203Q、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207K、D207N、D207Q、D207R、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215K、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、S221N、G222D、E224A、E224P、S225G、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230N、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233D、N233E、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251A、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256D、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260T、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、D264N、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288P、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308E、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309E、K309G、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312E、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、Y321F和N323R并且b)用该组合物洗涤物品，其中该物品是纺织品或硬表面。
本发明的分散蛋白变体适合用于在清洁(如衣物)中使用。因此，本发明的一些方面涉及用于洗涤物品的方法，其中该方法包括以下步骤：
a.将物品暴露于包含本发明的分散蛋白变体的洗涤液；
b.完成至少一个洗涤循环；并且
c.任选地冲洗该物品，
其中该物品是纺织品或硬表面。
该液体溶液的pH在1至11的范围内、如在5.5至11的范围内、如在7至9的范围内、在7至8的范围内或在7至8.5的范围内。
该洗涤液可以具有在5℃至95℃范围内、或在10℃至80℃范围内、在10℃至70℃范围内、在10℃至60℃范围内、在10℃至50℃范围内、在15℃至40℃范围内或在20℃至30℃范围内的温度。在一些方面，该洗涤液的温度是30℃。
可以将本发明的分散蛋白变体添加至洗涤液中。
洗涤液中分散蛋白变体酶的浓度典型地在0.00001-1000ppm酶蛋白的范围内、如在0.00004-100ppm酶蛋白的范围内、如在0.00008-100酶蛋白的范围内、在0.0001-100酶蛋白的范围内、在0.0002-100酶蛋白的范围内、在0.0004-100酶蛋白的范围内、在0.0008-100酶蛋白的范围内、在0.001-100ppm酶蛋白的范围内、在0.01-100ppm酶蛋白的范围内、在1-1000ppm酶蛋白的范围内、优选地在0.05-50ppm酶蛋白的范围内、更优选地在0.1-50ppm酶蛋白的范围内、更优选地在0.1-30ppm酶蛋白的范围内、更优选地在0.5-20ppm酶蛋白的范围内、以及最优选地在0.5-10ppm酶蛋白的范围内。
在一些方面，本发明的分散蛋白变体有效预防和/或减少恶臭。存在的复杂的有机污渍(如身体污垢(例如细胞碎片、皮脂)或EPS)附着至例如洗涤物品，该洗涤物品变得粘稠并且因此污垢粘附到粘稠区域。这种衣物上的污垢已经显示出难以通过可商购的洗涤剂组合物来减少。此外，当脏的衣物洗涤物品与不太脏的衣物洗涤物品一起洗涤时，洗涤液中存在的污垢倾向于粘附到衣物洗涤物品(例如通过再沉积)，特别是在衣物洗涤物品如上描述是粘稠的情况下。其结果是，该衣物洗涤物品在洗涤后比洗涤前更“脏”。在一些方面，与亲本分散蛋白相比，本发明的分散蛋白变体具有改进的清洁特性，并且在一些方面，本发明的分散蛋白变体降低了粘性和/或再沉积。
在一些方面，本发明涉及根据本发明的分散蛋白变体用于清洁物品的用途，其中该物品是织物或硬质表面。
此外，本发明涉及根据本发明的分散蛋白变体用于防止和/或减少污垢在物品上的粘附的用途。在一些方面，该物品是纺织品。当该污垢没有粘附到该物品时，该物品显得更干净。因此，本发明进一步涉及根据本发明的分散蛋白变体用于维持或改进该物品白度的用途。
本发明进一步涉及包含根据本发明的分散蛋白变体的洗涤剂组合物，优选地具有洗涤剂辅助剂成分。包含根据本发明的分散蛋白变体的洗涤剂组合物可以用于深度清洁物品、用于防止和/或减少物品的粘性、用于预处理物品上的污渍、用于在洗涤循环过程中防止和/或减少污垢的再沉积、用于防止和/或减少污垢在物品上的粘附、用于维持或改进物品的白度和/或用于防止和/或减少物品的恶臭。
变体的制备
本发明还涉及用于获得分散蛋白变体的方法，与亲本分散蛋白相比例如与SEQ IDNO:1中所示的多肽相比，该分散蛋白变体具有至少一个改进的特性。
本发明的一个方面涉及用于获得分散蛋白变体的方法，该方法包括：
a)在选自由以下组成的组的位置处向亲本分散蛋白中引入一个或多个改变：2、3、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、140、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、225、227、230、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321和323；并且
b)回收该变体，其中该变体具有氨基己糖苷酶，优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
本发明的一个方面涉及用于获得分散蛋白变体的方法，该方法包括：
a)在选自由以下组成的组的位置处向亲本分散蛋白中引入一个或多个改变：2、3、12、15、17、18、22、23、24、25、30、49、56、57、59、62、63、68、72、74、77、82、90、99、100、106、114、123、124、125、135、138、140、163、167、170、171、173、174、175、178、179、181、185、186、187、188、189、199、203、204、205、207、210、215、218、221、225、227、235、237、244、252、256、260、262、263、264、265、267、270、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、288、290、291、296、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321、322和323；并且
b)回收该变体，其中该变体具有氨基己糖苷酶，优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
本发明的一个方面涉及用于获得分散蛋白变体的方法，该方法包括：
a)在选自由以下组成的组的位置处向亲本分散蛋白中引入一个或多个改变：31、33、36、73、75、94、141、144、241、277、294、297、299；以及
b)回收该变体，其中该变体具有氨基己糖苷酶，优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
本发明的一个方面涉及用于获得分散蛋白变体的方法，该方法包括：
a)向亲本分散蛋白中引入选自由以下组成的组的一个或多个改变：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19K、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23A、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、L24I、V25R、D26M、Y30*、Y30A、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N34D、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80R、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81N、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K103V、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106R、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124H、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124N、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125H、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128A、V128C、V128D、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138N、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、V140I、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150A、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、S163P、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167A、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181K、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185A、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203Q、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207K、D207N、D207Q、D207R、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215K、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、S221N、G222D、E224A、E224P、S225G、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230N、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233D、N233E、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251A、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256D、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260T、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、D264N、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288P、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308E、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309E、K309G、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312E、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、Y321F和N323R；并且
b)回收该变体，其中该变体具有氨基己糖苷酶，优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
本发明的一个方面涉及用于获得分散蛋白变体的方法，该方法包括：
a)向亲本分散蛋白中引入选自由以下组成的组的一个或多个取代：D2V、Q3F、Q3I、S12A、H15Y、T17W、T17E、V18L、K22M、S23I、S23C、S23A、S23T、S23L、S23V、S23E、L24I、V25R、Y30A、Y30L、A49W、A49Y、S56T、N59D、N59C、N59E、N59R、N59F、N59W、N59V、N62C、N62D、T63C、N68Q、S72D、S72E、I74L、S77A、I82V、L90F、E99Q、L100S、T114S、T114C、Y123W、Y124I、Y124M、Y124H、Y124R、Y124V、Y124Q、Y124T、Y124K、D125R、D125C、D125G、D125H、D125K、D125Q、Q135M、D138R、D138K、D138N、D138Q、V140I、S163P、L170D、L170K、L170S、L170H、D171E、D171K、D171Y、D171M、D171Q、D171L、I173C、D174W、D174H、D174M、D174N、F175Y、Q178K、I179T、S181T、S181F、S181Q、S181G、S181N、S181C、S181K、E185A、E185R、E185M、E185V、S186K、S186M、S186R、S186H、K187G、Y188P、E189V、S199C、S199L、A203G、A203E、A203V、N204L、N204Y、N204V、L205I、D207N、D207S、D207C、D207G、S210T、Q215K、Q215R、T218Q、S221N、S225G、N227T、N227K、E232D、G235W、S237W、Y244M、Y244C、N252P、N252C、Q256E、Q256D、N260Q、Q262H、M263Q、D264E、Y265F、N267T、N267S、Y270F、H272M、H272P、H272I、H272V、N273I、N273W、K274H、F276A、F276N、F276K、F276C、I278V、S279N、S279D、S279G、D280E、D280C、Y281P、Y282F、Y282N、H283I、A284T、A284L、A284I、S288P、S288K、V290I、K291R、T296C、T303Q、D304M、D304C、L305M、L305N、S306C、K308D、K308E、K308A、K308V、K308Q、K308S、K308Y、K308G、K308L、K308T、K308I、K309E、K309G、K309C、K309L、K309D、K309Q、K309N、K309T、K309A、K309S、K309M、K309H、K312E、K312A、K312Q、K312S、K312W、K312L、K312N、E314L、E314V、E314I、L315I、R319A、Y321F、和N323R；并且
b)回收该变体，其中该变体具有氨基己糖苷酶，优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
与SEQ ID NO:1中所示的多肽相比，该方法优选地包括引入2-20个，例如2-10个和2-5个，如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个改变。
本发明的一些方面涉及用于获得分散蛋白变体的方法，该方法包括向亲本分散蛋白中引入在一个或多个位置处的改变，其中分散蛋白亲本属于土地芽孢杆菌进化枝，并且其中亲本分散蛋白以下基序中的一个或多个：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ ID NO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA](SEQ ID NO:10)、WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO:11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO:13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO:14)。
本发明的一些方面涉及用于获得分散蛋白变体的方法，该方法包括向亲本分散蛋白中引入在一个或多个位置处的改变，其中该亲本分散蛋白选自以下多肽的组：
a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性；
b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:2中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性；
c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性；
d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:4中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性；
e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:5中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性；
一些方面涉及获得分散蛋白变体的方法，其中亲本分散蛋白从土地芽孢杆菌属获得。
一些方面涉及获得分散蛋白变体的方法，其中该分散蛋白亲本与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。
本发明的变体可以通过程序(如以下提到的那些)来制备。
定点诱变是在编码亲本的多核苷酸中的一个或多个限定位点处引入一个或多个(例如，几个)突变的技术。
通过涉及使用含有所希望的突变的寡核苷酸引物的PCR可以体外实现定点诱变。也可以通过盒式诱变进行体外定点诱变，该盒式诱变涉及由限制酶在包含编码亲本的多核苷酸的质粒中的位点处切割并且随后将含有突变的寡核苷酸连接在多核苷酸中。通常，消化质粒和寡核苷酸的限制酶是相同的，从而允许质粒和插入物的粘性末端彼此连接。参见例如，Scherer和Davis,1979,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]76:4949-4955；和Barton等人,1990,Nucleic Acids Res.[核酸研究]18:7349-4966。
还可以通过本领域中已知的方法在体内实现定点诱变。参见例如，美国专利申请公布号2004/0171154；Storici等人,2001,Nature Biotechnol.[自然生物技术]19:773-776；Kren等人,1998,Nat.Med.[自然医学]4:285-290；以及Calissano和Macino,1996,Fungal Genet.Newslett.[真菌遗传学时事通讯]43:15-16。
合成基因构建需要设计的多核苷酸分子的体外合成以编码感兴趣的多肽。基因合成可以利用多种技术来进行，例如由Tian等人(2004,Nature[自然]432:1050-1054)所述的基于多路微芯片的技术、以及其中在光可编程的微流芯片上合成并组装寡核苷酸的类似技术。
使用已知的诱变、重组和/或改组方法，随后进行相关的筛选程序可以做出单或多氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试，该相关的筛选程序如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57；Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；WO 95/17413；或WO 95/22625披露的那些。其他可以使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837；US 5,223,409；WO 92/06204)以及区域定向诱变(Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145；Ner等人,1988,DNA 7:127)。
诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(Ness等人,1999,Nature Biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分子，并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许快速确定多肽中各个氨基酸残基的重要性。
通过组合合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组的多方面来实现半合成基因构建。半合成构建典型地是利用合成的多核苷酸片段的过程结合PCR技术。因此，基因的限定区域可以从头合成，而其他区域可以使用位点特异性诱变引物来扩增，而还有其他区域可以进行易错PCR或非易错PCR扩增。然后可以对多核苷酸子序列进行改组。
可以通过位点饱和文库方法(如“Methods and applications in proteinengineering[蛋白质工程化的方法和应用]”,Rodrigo M.P.Siloto,RandallJ.Weselake.Biocatalysis and Agricultural Biotechnology[生物催化与农业生物技术]1(2012)181-189中所述的)来制备和鉴定这些应用的变体。
酶的稳定可能需要运行位点饱和文库(SSL)筛选活动。SSL文库允许给定氨基酸位置处的所有20个氨基酸，并且通常为蛋白质中的每个氨基酸位置构建文库。因此，对于典型的酶分子，SSL文库的数目典型地以数百计。整个活动往往非常耗时并且需要资源。该过程典型地需要构建文库、铺板、菌落挑选、测序、重新网格化和高通量筛选(HTS)。
筛选本身基于以下原理：当暴露于应激条件(例如，高温、蛋白酶、表面活性剂)下时，观察到蛋白质降解的指数衰减。可以在筛选情况下找到稳定性改进的变体(无论其初始浓度)，因为相比之下，在足够的应激后稳定变体将始终超过参考样品的浓度，前提是有足够灵敏的检测方法可用。浓度可以反映在例如活动测量中。
令人惊讶的是，可以成功地将上述筛选原则扩展到一次性筛选多个变体(针对增加的半衰期)中，即作为单个文库池或变体混合物筛选。第一轮筛选将不鉴定稳定取代本身，但它将根据含有的一种或多种目的变体的可能性基于选择的参数(例如热稳定性，表面活性剂存在下的稳定性)来对许多文库进行优先排序。
例如，筛选的结果可以是由应激和未应激文库之间的活性比率描述的稳定性水平。应激池(和主链(backbone)参考)中活性的实际测量可以以多种方式(从单一的应激结束活性测量到将降解表征为时间或增加应激的函数的多个测量)进行。随着增加地降解池(和主链参考)，文库中一种或多种改进变体的存在将变得越来越重要。因此，在应激过程的后期测量降解水平是很有利的。
将具有最高稳定性水平和优选地高于参考确定的水平的文库，选为最感兴趣的。文库获得的结果是它含有的所有变体的组合作用，并且因此在特定文库中发现改进变体的可能性随其整体稳定性增加。几个因素可以有助于阳性的文库筛选结果，例如小尺寸文库、具有高半衰期的变体、高浓度的稳定变体、敏感的检测方法以允许高应激条件。然后将选择的氨基酸位置的库中含有的变体作为分离的克隆来测试改进的特性。选择位置的数目原则上可以是从1至氨基酸位置总数，但实际上总是显著低于位置总数。
综上所述，筛选变体混合物的方法在筛选蛋白质工程中靶向单一位置的小文库(例如使用NNS或其他退化核苷酸在给定密码子上生成的文库)中特别有用。所述筛选原理可以针对多个不同的小文库(每个代表例如单个位置的全部或部分饱和)进行，从而平行地研究多个位置。这使得可以在单个步骤中快速评估多个位置中命中的潜力。可以优先考虑并进一步研究有希望的位置，从而更快地鉴定命中(稳定的取代)。综上所述，该方法通过显著减少为鉴定稳定取代而需要被筛选的克隆数目来节省时间、劳动力和消耗品。
本发明的方法包括：针对多肽中的每个位置(P)来制备多肽变体(VL)库。通过取代引入多达所有20个可能的氨基酸，导致每个位置特定数目的不同变体。这可以通过熟知的在多肽位置中产生多样性的方法来完成。一些实例包括但不限于NNS掺杂，其中位置1和2处的密码子包含所有四个可能的核酸碱基A(腺嘌呤)、C(胞嘧啶)、G(鸟嘌呤)、T(胸腺嘧啶)，而第三位仅包含C(胞嘧啶)、G(鸟嘌呤)。以这种方式随机引入编码所有20种天然氨基酸的密码子。该方法与从文库中筛选单个克隆的方式不同。发明人发现，文库VL可以直接进行测量，并可以直接从此测量中选择包括改进变体的库。这使得可以选择含有改进的多肽的子文库(VLSub)。对此子集VLSub进行步骤1至4：
1.在琼脂板上进行板克隆，
2.挑取板上生长的每个菌落，
3.在微量滴定板中培养挑取的单个菌落，并且
4.筛选并测序生长的菌落
与正常程序不同，只需要对选定的子集(不是每个位置)进行这四个步骤，例如具有324个位置的多肽为324次。步骤1-4非常耗时。因此，通过限制在步骤1至4中处理的文库数目，本发明的方法显著减少了制成改进变体的时间量。
本发明的一个实施例涉及用于寻找改进的多肽变体的方法，该方法包括以下步骤：
a)在经选择的，优选地所有多肽位置处产生多样性，从而制备多肽变体(VL)的文库，并且
b)选择具有改进的变体的子文库(VLSub)。
如上所述，可以基于不同的标准，例如改进的稳定性、活性等来选择子文库(VLSub)。因此，在一个实施例中，多肽变体VL的文库经历应激条件，例如升高的温度，并且从VL中选择子文库(VLSub)。
本发明的一个实施例涉及用于寻找改进的多肽变体的方法，该方法包括以下步骤：
a)在经选择的，优选地所有多肽位置处产生多样性，从而制备多肽变体(VL)的文库，
b)将多肽变体(VL)的文库的一部分暴露于适用于测量目的特性的一种或多种应激条件下，从而产生应激VLS+n和未应激VLUS文库；
c)比较该应激VLS和未应激VLUS文库；并且
d)选择具有改进的变体的子文库(VLSub)。
其中VLS+n反映可以制成任意数目的文库应激子集，即n≥1。
优选地，子文库经历如上所述的步骤1至4。因此，本发明的一个实施例涉及用于寻找改进的多肽变体的方法，该方法包括以下步骤：
a)在经选择的，优选地所有多肽位置处产生多样性，从而制备多肽变体(VL)的文库，并且
b)选择具有改进的变体的子文库(VLSub)，
c)在琼脂板上进行板选择子文库(VLSub)克隆，
d)挑取板上生长的每个菌落，
e)培养挑取的单个菌落，例如在微量滴定板中
f)通过筛选选择单个改进的变体，并且
g)测序选择的变体以鉴定特定的突变。
本发明的一个实施例涉及用于寻找改进的多肽变体的方法，该方法包括以下步骤：
a)在经选择的，优选地所有多肽位置处产生多样性，从而制备多肽变体(VL)的文库，
b)培养单个文库，例如在微量滴定板中
c)将多肽变体(VL)的文库的一部分暴露于适用于测量目的特性的一种或多种应激条件下，从而产生应激VLS+n和未应激VLUS文库；
d)比较该应激VLS和未应激VLUS文库；并且
e)选择具有改进的变体的子文库(VLSub)
f)在琼脂板上进行板选择子文库(VLSub)克隆，
g)挑取板上生长的每个菌落，
h)培养挑取的单个菌落，例如在微量滴定板中
i)通过筛选选择单个改进的变体，并且
j)测序选择的变体以鉴定特定的突变。
在一个实施例中，该子文库(VLSub)中变体的数目在2-20个多肽变体的范围内、优选的在5-20个多肽变体的范围内、优选的在5-10个多肽变体的范围内、优选的在8-20个多肽变体的范围内或在8-15个多肽变体的范围内。
在一个实施例中，通过使用掺杂引物(doped primer)例如使用如上所述的NNS掺杂来生成多肽变体(VL)文库。在一个实施例中，通过使用掺杂引物，例如使用如上所述的NMS、NKS、NRS、NYS、NWS、NSS、MNS、KNS、RNS、YNS、WNS、SNS、NAS、NCS、NGS、NTS、ANS、CNS、GNS、TNS、NNK、RNS、YHS、AYS、WRS(IUPAC核苷酸代码)掺杂来生成多肽变体(VL)文库。
在一个实施例中，测序文库(VL)以确认多样性。可以使用本领域已知的任何方法(例如如Ravi R.K.,Walton K.,Khosroheidari M.(2018)MiSeq:A Next GenerationSequencing Platform for Genomic Analysis.[MiSeq：用于基因组分析的下一代测序平台]在DiStefano J.(编辑)Disease Gene Identification.[疾病基因鉴定]Methods inMolecular Biology[分子生物学方法],第1706卷.Humana Press[胡玛纳出版社],纽约,NY.中所述的下一代测序(NGS))，通过比较覆盖靶位置的序列读数来确定文库中密码子使用的分布。
多肽优选地是酶，但可以应用于任何蛋白质。该酶可以选自水解酶、异构酶、连接酶、裂解酶、氧化还原酶、或转移酶，例如α-半乳糖苷酶、α-葡糖苷酶、氨肽酶、淀粉酶、β-半乳糖苷酶、β-葡糖苷酶、β-木糖苷酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、几丁质酶、角质酶、环糊精糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、内切葡聚糖酶、酯酶、葡糖淀粉酶、氨基己糖苷酶(例如分散蛋白)、转化酶、漆酶、酯酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、甘露聚糖酶、变聚糖酶(mutanase)、核酸酶(例如DNA酶或RNA酶)、氧化酶、果胶裂解酶、果胶分解酶、过氧化物酶、植酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、蛋白酶、和木聚糖酶。酶优选地是分散蛋白并且优选地变体的混合物是本发明的变体。
目的特性可以是例如稳定性，如热稳定性、洗涤稳定性、洗涤剂稳定性、储存稳定性、二级酶(例如蛋白酶)稳定性、硫化物稳定性等，所有这些都不相互排斥。改进的特性可以是性能或活性，例如如洗涤性能，对特定底物增加的活性。该特性还可以是改进或改变的底物特异性。
一个实施例涉及用于鉴定和选择具有改进的稳定性的变体的方法，该方法包括以下步骤：
a)在经选择的，优选地所有多肽位置处产生多样性，从而制备多肽变体(VL)的文库，
b)将多肽变体(VL)的文库分为两部分，将多肽变体(VL)文库的一半暴露于适用于测量稳定性的一种或多种应激条件下，从而产生应激VLS和未应激VLUS文库；
c)比较该应激VLS和未应激VLUS文库；并且
d)选择具有稳定性改进的多肽的子文库(VLSub)。
如以上“分散蛋白变体”部分中所述，优选地将稳定性测量为半衰期改进因子(HIF)或残留活性比(RAR)。应激条件是优选地升高的温度如高于37℃、高于41℃、高于46℃、或高于50℃。
目的特性也可以是定义为改进的底物转换的活性。在一个实施例中，目的特性是改进的分散蛋白活性，如增加地催化N-乙酰基-葡糖胺聚合物(聚-N-乙酰葡糖胺，PNAG)的β-1,6-糖苷键，即分散蛋白变体相对于(或相比于)亲本分散蛋白变体活性(如与具有SEQID NO:1的分散蛋白相比或与所述变体具有相同氨基酸序列但在所述指定位置的一个或多个处不具有改变的分散蛋白相比)显示改进的活性。
一个实施例涉及用于鉴定和选择具有改进的β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性的变体的方法，该方法包括以下步骤：
a)在经选择的，优选地所有多肽位置处产生多样性，从而制备多肽变体(VL)的文库，
b)将多肽变体(VL)的文库分为两部分，将多肽变体(VL)文库的一半暴露于适用于测量β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性的一种或多种应激条件下，从而产生应激VLS和未应激VLUS文库；
c)比较该应激VLS和未应激VLUS文库；并且
d)选择具有β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性改进的变体的子文库(VLSub)。
技术人员将清楚，术语改进是指与参考多肽(可以是亲本多肽或具有SEQ ID NO 1的多肽)相比，改进的多肽变体。
核酸构建体
本发明还涉及包含编码本发明的分散蛋白变体的多核苷酸的核酸构建体，该多核苷酸可操作地连接至一个或多个控制序列，该一个或多个控制序列在适合的宿主细胞中在与该控制序列相容的条件下指导编码序列的表达。
可用许多方式操纵多核苷酸以提供多肽的表达。取决于表达载体，在多核苷酸插入载体之前对其进行操纵可能是理想的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术是本领域熟知的。
控制序列可为启动子，即，被宿主细胞识别用于表达编码本发明的多肽的多核苷酸的多核苷酸。启动子包含介导多肽的表达的转录控制序列。启动子可以是在宿主细胞中显示转录活性的任何多核苷酸，包括突变型、截短型和杂合型启动子，并且可以获得自编码与宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因。
用于在细菌宿主细胞中指导本发明核酸构建体的转录的适合启动子的实例是从以下基因中获得的启动子：解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、嗜热脂肪芽孢杆菌产麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(Agaisse和Lereclus,1994,Molecular Microbiology[分子微生物学]13:97-107)、大肠杆菌lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(Egon等人,1988,Gene[基因]69:301-315)、天蓝链霉菌琼脂水解酶基因(dagA)和原核β-内酰胺酶基因(Villa-Kamaroff等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:3727-3731)以及tac启动子(DeBoer等人,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USAβ[美国国家科学院院刊]80:21-25)。另外的启动子描述于Gilbert等人,1980,Scientific American[科学美国人]242:74-94中的“Useful proteins from recombinant bacteria[来自重组细菌的有用蛋白质]”；和Sambrook等人,1989，见上文中。串联启动子的实例披露于WO 99/43835中。
用于在丝状真菌宿主细胞中指导本发明多核苷酸的转录的合适启动子的实例是从以下基因中获得的启动子：构巢曲霉(Aspergillus nidulans)乙酰胺酶、黑曲霉(Aspergillus niger)中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉(Aspergillus awamori)葡糖淀粉酶(glaA)、米曲霉(Aspergillus oryzae)TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢(Fusarium venenatum)淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢Daria(WO 00/56900)、镶片镰孢Quinn(WO 00/56900)、米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉(Trichoderma reesei)β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶以及里氏木霉翻译延伸因子，连同NA2-tpi启动子(来自曲霉属中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子，其中已经用来自曲霉属丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替代未翻译的前导序列；非限制性实例包括来自黑曲霉中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子，其中已经用来自构巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替代未翻译的前导序列)；及其突变型、截短型及杂合型启动子。其他启动子在美国专利号6,011,147中描述。
在酵母宿主中，有用的启动子从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇酶(ENO1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3磷酸脱氢酶(ADH1、ADH2/GAP)、酿酒酵母丙糖磷酸异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)、以及酿酒酵母3磷酸甘油酸激酶。Romanos等人,1992,Yeast[酵母]8:423-488描述了酵母宿主细胞的其他有用的启动子。
控制序列也可为由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。该终止子可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的3’末端。在宿主细胞中有功能的任何终止子可用于本发明中。
细菌宿主细胞的优选终止子从以下基因中获得：克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)、和大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)。
用于丝状真菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：构巢曲霉乙酰胺酶、构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶、尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶以及里氏木霉翻译延伸因子。
用于酵母宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇化酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)、以及酿酒酵母甘油醛-3磷酸脱氢酶。对于酵母宿主细胞其他有用的终止子由Romanos等人,1992，见上文描述。
控制序列还可以是启动子下游和基因的编码序列上游的mRNA稳定子区域，其增加该基因的表达。
合适的mRNA稳定子区域的实例是从以下获得的：苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(WO94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(Hue等人,1995,J.Bacteriol.[细菌学杂志]177:3465-3471)。
控制序列也可以是前导序列，即对宿主细胞翻译很重要的mRNA的非翻译区域。该前导子可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的5’末端。可以使用在宿主细胞中有功能的任何前导序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选前导序列从米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶的基因获得。
酵母宿主细胞的合适的前导序列从以下的基因中获得：酿酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α-因子和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。
控制序列还可以是聚腺苷酸化序列，一种可操作地连接至该多核苷酸的3’末端并且当转录时由宿主细胞识别为将聚腺苷酸残基添加至所转录的mRNA的信号的序列。可以使用在宿主细胞中有功能的任何多腺苷酸化序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选多腺苷酸化序列从以下酶的基因获得：构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。
酵母宿主细胞的有用的多聚腺苷酸化序列由Guo和Sherman,1995,Mol.CellularBiol.[分子细胞生物学]15:5983-5990描述。
控制序列还可以是编码与多肽的N末端连接的信号肽并指导多肽进入细胞的分泌途径的信号肽编码区。多核苷酸的编码序列的5’端本身可以含有在翻译阅读框中天然与编码多肽的编码序列区段相连接的信号肽编码序列。可替代地，编码序列的5’端可以含有对于该编码序列是外源的信号肽编码序列。在编码序列不天然地含有信号肽编码序列的情况下，可能需要外源信号肽编码序列。可替代地，外源信号肽编码序列可以单纯地替代天然信号肽编码序列以便增强多肽的分泌。然而，可以使用指导已表达多肽进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。
用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从以下的基因中获得的信号肽编码序列：芽孢杆菌NCIB 11837产麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)和枯草芽孢杆菌prsA。另外的信号肽由Simonen和Palva,1993,MicrobiologicalReviews[微生物评论]57:109-137描述。
用于丝状真菌宿主细胞的有效的信号肽编码序列是从以下酶的基因获得的信号肽编码序列：黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、疏棉状腐质霉脂肪酶和米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶。
用于酵母宿主细胞的有用的信号肽从酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶的基因中获得。其他的有用的信号肽编码序列由Romanos等人(1992，同上)描述。
控制序列还可以是编码位于多肽的N末端的前肽的前肽编码序列。所得的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可通过催化切割或自身催化切割来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。前肽编码序列可以从以下的基因获得：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉漆酶(Myceliophthora thermophila laccase)(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶(Rhizomucor miehei aspartic proteinase)和酿酒酵母α-因子。
在信号肽序列和前肽序列二者均存在的情况下，该前肽序列位于紧邻多肽的N末端且该信号肽序列位于紧邻该前肽序列的N末端。
还可希望的是添加调节序列，这些调节序列调节宿主细胞生长相关的多肽的表达。调节序列的实例是引起基因表达以响应于化学或物理刺激(包括调节化合物的存在)而开启或关闭的那些。原核系统中的调节序列包括lac、tac、和trp操纵子系统。在酵母中，可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中，可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉TAKAα-淀粉酶启动子和米曲霉葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉纤维二糖水解酶I启动子以及里氏木霉纤维二糖水解酶II启动子。调节序列的其他实例是允许基因扩增的那些序列。在真核系统中，这些调节序列包括在甲氨蝶呤存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况中，编码多肽的多核苷酸会与调节序列可操作地连接。
表达载体
本发明还涉及包含编码本发明的分散蛋白变体的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。多个核苷酸和控制序列可连接在一起以产生重组表达载体，该重组表达载体可包括一个或多个便利的限制位点以允许编码该多肽的多核苷酸在此类位点处的插入或取代。可替代地，可以通过将多核苷酸或包含该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中而表达该多核苷酸。在产生表达载体时，编码序列位于载体中，使得编码序列与用于表达的适当控制序列可操作地连接。在另一个方面，已通过核苷酸取代对多核苷酸序列密码子进行修饰，以对应于旨在用于产生本发明多肽的宿主有机体的密码子使用。重组表达载体可以是可以方便地经受重组DNA程序并且可以引起该多核苷酸表达的任何载体(例如，质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于载体与待引入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是直链或闭合环状质粒。
载体可以是自主复制载体，即作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。载体可以含有用于确保自我复制的任何手段。可替代地，载体可以是这样的载体，当它引入宿主细胞中时整合入基因组中并与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外，可以使用单独的载体或质粒或两个或更多个载体或质粒，其共同含有待引入宿主细胞基因组的总DNA，或可以使用转座子。
载体优选地含有允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的一个或多个选择性标记。选择性标记是一种基因，其产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、对重金属抗性、对营养缺陷型的原养型等。
细菌选择性标记的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因、或赋予抗生素抗性(如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、或四环素抗性)的标记。酵母宿主细胞的合适的标记包括但不限于：ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于在丝状真菌宿主细胞中使用的选择性标记包括但不限于adeA(磷酸核糖酰氨基咪唑-琥珀羧胺合酶)、adeB(磷酸核糖酰-氨基咪唑合酶)、amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草丁膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清酸核苷-5’-磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷基转移酶)以及trpC(邻氨基苯甲酸合酶)连同其等同物。优选的用于曲霉细胞中的是构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)bar基因。优选的用于木霉属细胞的是adeA、adeB、amdS、hph以及pyrG基因。
选择性标记可以是如WO 2010/039889中所述的双选择性标记系统。在一些方面，双选择性标记是hph-tk双选择性标记系统。
载体优选地含有允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。
对于整合到宿主细胞基因组中，载体可以依靠编码该多肽的多核苷酸序列或用于通过同源或非同源重组整合到该基因组中的该载体的任何其他元件。可替代地，载体可以含有用于指导通过同源重组而整合入宿主细胞基因组中的一个或多个染色体中的一个或多个精确位置处的另外的多核苷酸。为了增加在精确位置处整合的可能性，整合元件应当含有足够数目的核酸，例如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对和800至10,000个碱基对，这些核酸与对应的靶序列具有高度序列同一性以增强同源重组的概率。整合元件可以是与宿主细胞基因组内的靶序列同源的任何序列。此外，整合元件可以是非编码或编码的多核苷酸。另一方面，载体可以通过非同源重组整合入宿主细胞的基因组中。
为了自主复制，载体可以进一步包含复制起点，该复制起点使得载体在讨论中的宿主细胞中自主复制成为可能。复制起点可以是在细胞中发挥作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”意指使质粒或载体能够在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177、和pACYC184的复制起点，以及允许在芽孢杆菌属中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060、和pAMβ1的复制起点。
用于酵母宿主细胞中的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1与CEN3的组合、及ARS4与CEN6的组合。
在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1和ANS1(Gems等人,1991,Gene[基因]98:61-67；Cullen等人,1987,Nucleic Acids Res.[核酸研究]15:9163-9175；WO00/24883)。可根据WO 00/24883中披露的方法完成AMA1基因的分离和包含该基因的质粒或载体的构建。
可将本发明多核苷酸的多于一个拷贝插入宿主细胞以增加多肽的产生。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或者通过包括与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标记基因可以获得多核苷酸的增加的拷贝数目，其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择包含选择性标记基因的经扩增的拷贝以及由此该多核苷酸的另外的拷贝的细胞。
用于连接以上描述的元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领域的普通技术人员熟知的(参见例如，Sambrook等人,1989，见上文)。
宿主细胞
本发明还涉及重组宿主细胞，这些重组宿主细胞包含可操作地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸，该一个或多个控制序列指导本发明的多肽的产生。将包含多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中，这样使得该构建体或载体作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体维持，如较早前所述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不相同的任何亲本细胞子代。宿主细胞的选择将在很大程度上取决于编码多肽的基因及其来源。
该宿主细胞可以是在本发明多肽的重组产生中有用的任何细胞，例如原核细胞或真核细胞。
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于：芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、大洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属以及链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于：弯曲杆菌属(Campylobacter)、大肠杆菌、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、螺杆菌属(Helicobacter)、泥杆菌属(Ilyobacter)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)、以及脲原体属(Ureaplasma)。
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞，包括但不限于嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚硬芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及苏云金芽孢杆菌细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属细胞，包括但不限于似马链球菌(Streptococcus equisimilis)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、乳房链球菌(Streptococcus uberis)和马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equisubsp.Zooepidemicus)细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞，包括但不限于：不产色链霉菌(Streptomyces achromogenes)、除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)、天蓝链霉菌、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)、以及浅青紫链霉菌(Streptomyces lividans)细胞。
可以通过如下方法实现将DNA引入芽孢杆菌属细胞中：原生质体转化(参见例如，Chang和Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.[分子与普通遗传学]168:111-115)、感受态细胞转化(参见例如，Young和Spizizen,1961,J.Bacteriol.[细菌学杂志]81:823-829，或Dubnau和Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见例如，Shigekawa和Dower,1988,Biotechniques[生物技术]6:742-751)、或接合(参见例如，Koehler和Thorne,1987,J.Bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化(参见例如，Hanahan，1983，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]166:557-580)或电穿孔(参见例如，Dower等人,1988，Nucleic Acids Res.[核酸研究]16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化、电穿孔(参见例如，Gong等人,2004，Folia Microbiol.(Praha)[叶线形微生物学(布拉格)]49：399-405)、接合(参见例如，Mazodier等人,1989，J.Bacteriol.[细菌学杂志]171：3583-3585)或转导(参见例如，Burke等人,2001，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]98：6289-6294)。将DNA引入假单孢菌属细胞中可以通过以下来实现：电穿孔(参见例如，Choi等人,2006,J.Microbiol.Methods[微生物学方法杂志]64:391-397)或接合(参见例如，Pinedo和Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]71:51-57)。将DNA引入链球菌属细胞中可以通过以下来实现：天然感受态(natural competence)(参见例如，Perry和Kuramitsu,1981,Infect.Immun.[感染与免疫]32:1295-1297)、原生质体转化(参见例如，Catt和Jollick，1991，Microbios[微生物学]68:189-207)、电穿孔(参见例如，Buckley等人,1999,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]65:3800-3804)、或接合(参见例如，Clewell,1981,Microbiol.Rev.[微生物学评论]45:409-436)。然而，可以使用本领域已知的将DNA引入宿主细胞中的任何方法。
宿主细胞还可以是真核生物，如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。
宿主细胞可以是真菌细胞。如本文使用的“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)、和接合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和全部有丝分裂孢子真菌(如由Hawksworth等人,在Ainsworth and Bisby’sDictionary of The Fung[安斯沃思和拜斯比真菌词典]，第8版，1995，CAB International[国际应用生物科学中心],University Press[大学出版社],Cambridge，UK[英国剑桥]中定义的)。
真菌宿主细胞可以为酵母细胞。如本文所用的“酵母”包括产子囊酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(Endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于半知菌类(Fungi Imperfecti)(芽孢纲(Blastomycetes))的酵母。由于酵母的分类可能在将来变化，出于本发明的目的，酵母应如Biology and Activities of Yeast[酵母的生物学与活性](Skinner、Passmore和Davenport编，Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9[应用细菌学学会专题论文集系列9],1980)中所描述的那样定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属(Candida)、汉逊酵母属(Hansenula)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、毕赤酵母属(Pichia)、酵母属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)或耶氏酵母属(Yarrowia)细胞，如乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、卡尔酵母(Saccharomyces carlsbergensis)、酿酒酵母、糖化酵母(Saccharomyces diastaticus)、道格拉氏酵母(Saccharomyces douglasii)、克鲁弗酵母(Saccharomyces kluyveri)、诺地酵母(Saccharomyces norbensis)、卵形酵母(Saccharomyces oviformis)或解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
真菌宿主细胞可为丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(Eumycota)和卵菌门的亚门(如由Hawksworth等人,1995，见上文，所定义)的所有丝状形式。丝状真菌通常的特征在于由几丁质、纤维素、葡聚糖、壳聚糖、甘露聚糖和其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延伸来进行的，而碳分解代谢是专性需氧的。相反，酵母(如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding)来进行的，而碳分解代谢可以是发酵性的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢属(Acremonium)、曲霉属(Aspergillus)、短梗霉属(Aureobasidium)、烟管霉属(Bjerkandera)、拟腊菌属(Ceriporiopsis)、金孢子菌属(Chrysosporium)、鬼伞属(Coprinus)、革盖菌属(Coriolus)、隐球菌属(Cryptococcus)、线黑粉菌科(Filibasidium)、镰孢属(Fusarium)、腐质霉属(Humicola)、梨孢菌属(Magnaporthe)、毛霉属(Mucor)、毁丝霉属(Myceliophthora)、新美鞭菌属(Neocallimastix)、脉胞菌属(Neurospora)、拟青霉属(Paecilomyces)、青霉属(Penicillium)、平革菌属(Phanerochaete)、射脉菌属(Phlebia)、瘤胃壶菌属(Piromyces)、侧耳属(Pleurotus)、裂褶菌属(Schizophyllum)、篮状菌属(Talaromyces)、嗜热子囊菌属(Thermoascus)、梭孢壳属(Thielavia)、弯颈霉属(Tolypocladium)、栓菌属(Trametes)、或木霉属(Trichoderma)细胞。
例如，丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管霉(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌(Chrysosporiumkeratinophilum)、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporium merdarium)、租金孢子菌(Chrysosporium pannicola)、女王杜香金孢子菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌(Chrysosporium tropicum)、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolushirsutus)、杆孢状镰孢、谷类镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾谷镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖孢镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、特异腐质霉、疏棉状腐质霉、米黑根毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙脉胞菌、产紫青霉、黄孢平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、射脉菌(Phlebiaradiata)、刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)、埃默森篮状菌、土生梭孢霉、长域毛栓菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉或绿色木霉细胞。
可以将真菌细胞通过涉及原生质体形成、原生质体转化、以及细胞壁再生的方法以本身已知的方式转化。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的适合程序描述于以下文献中：EP 238023,Yelton等人,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]81:1470-1474以及Christensen等人,1988,Bio/Technology[生物/技术]6:1419-1422。用于转化镰孢属物种的适合方法由Malardier等人,1989,Gene[基因]78:147-156和WO 96/00787描述。可以使用由以下文献描述的程序转化酵母：Becker和Guarente,在Abelson,J.N.和Simon,M.I.编辑,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology[酵母遗传学与分子生物学指南],Methods in Enzymology[酶学方法],第194卷,第182-187页,AcademicPress,Inc.[学术出版社有限公司],纽约)；Ito等人,1983,J.Bacteriol.[细菌学杂志]153:163；以及Hinnen等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:1920。
产生方法
本发明还涉及产生本发明的分散蛋白变体的方法，这些方法包括(a)在有益于产生该分散蛋白变体的条件下培养细胞；和任选地(b)回收该分散蛋白变体。在一些方面，该细胞是土地芽孢杆菌细胞。在另一方面，该细胞是嗜糖土地芽孢杆菌、哥里土地芽孢杆菌或嗜糖土地芽孢杆菌细胞。
本发明还涉及产生本发明的分散蛋白变体的方法，这些方法包括(a)在有益于产生该分散蛋白变体的条件下培养本发明的重组宿主细胞；和任选地(b)回收该分散蛋白变体。
宿主细胞是在适合使用本领域已知的方法产生多肽的营养培养基中培养的。例如，可通过摇瓶培养、或在实验室或工业发酵器中小规模或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批或固态发酵)培养细胞，该培养在合适的介质中并且在允许表达和/或分离多肽的条件下进行。使用本领域中已知的程序，培养发生在包含碳和氮来源及无机盐的适合的营养培养基中。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如，在美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)的目录中)制备。如果多肽被分泌到该营养培养基中，那么可以直接从该培养基中回收该多肽。如果多肽不进行分泌，那么其可以从细胞裂解液中进行回收。
可以使用本领域已知的对分散蛋白变体多肽特异的方法检测分散蛋白变体。这些检测方法包括但不限于：特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，可以使用酶测定来确定多肽的活性。
该分散蛋白变体多肽可以使用本领域已知的方法回收。例如，可以通过常规程序从该营养介质中回收该分散蛋白变体多肽，这些常规程序包括但不局限于收集、离心、过滤、萃取、喷雾干燥、蒸发、或沉淀。在一些方面，回收包含该分散蛋白变体的发酵液。
可以通过本领域已知的多种程序纯化多肽，包括但不限于色谱法(例如，离子交换色谱法、亲和色谱法、疏水色谱法、聚焦色谱法、和尺寸排阻色谱法)、电泳程序(例如，制备型等电聚焦电泳)、差异性溶解(例如，硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE、或提取(参见例如，ProteinPurification[蛋白质纯化],Janson和Ryden编辑,VCH Publishers[VCH出版公司],纽约,1989)，以便获得基本上纯的多肽。
在替代方面，不回收多肽，而是将表达多肽的本发明宿主细胞用作变体的来源。
组合物
本发明进一步涉及包含根据本发明的至少一种分散蛋白变体以及优选地洗涤剂辅助剂成分的清洁例如洗涤剂组合物。该洗涤剂组合物可以用于改进深度清洁效果，包括但不限于深度清洁物品、防止和/或减少物品的粘性、用于预处理物品上的污渍、用于在洗涤循环过程中防止和/或减少污垢的再沉积、用于防止和/或减少污垢在物品上的粘附、用于维持或改进物品的白度和用于防止和/或减少物品的恶臭。本发明的分散蛋白变体在粉末和液体洗涤剂中是有用的。
在本发明的一些方面，该洗涤剂辅助剂成分选自下组，该组由以下组成：表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合的分散剂、粘土去污剂/抗再沉积剂、增亮剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物柔软剂、载体、水溶助剂、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、和/或色素。
洗涤剂辅助剂成分可以是表面活性剂。在包含分散蛋白变体的洗涤剂组合物中包括表面活性剂的一个优点是洗涤性能得以改进。在一些方面，洗涤剂辅助剂成分是助洗剂或粘土去污剂/抗再沉积剂。
在一些方面，洗涤剂辅助剂成分是酶。该洗涤剂组合物可以包含一种或多种酶，如以下指定的。该一种或多种酶可以选自下组，该组由以下组成：蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶、核酸酶(例如DNA酶和RNA酶)以及甘露聚糖酶。以下描述了适合用于本发明洗涤剂组合物的特定酶。
该清洁组合物可以被配制为棒，均匀的片剂，以及具有两个或更多个层的片剂，具有一个或多个室的袋，规则的或压缩的粉末，颗粒，膏，凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。该洗涤剂组合物可以是液体洗涤剂、粉末洗涤剂或颗粒洗涤剂。
本发明的一些方面涉及包含分散蛋白的衣物洗涤或清洁组合物，按组合物的重量(wt％)计优选地处于从约0.000001wt％至约1wt％、从约0.0001wt％至约1wt％、从约0.0002wt％至约1wt％、从约0.0005wt％至约1wt％、从约0.001wt％至约1wt％、从约0.002wt％至约1wt％、从约0.005wt％至约1wt％、优选地从约0.01wt％至约0.5wt％、优选地从0.0002wt％至约1wt％的水平。这些量是每单位活性酶的wt％，例如按组合物的重量计从约0.00001wt％至约1wt％的分散蛋白。
具有分散蛋白活性的活性酶的浓度为优选地至少0.00001％、优选地至少0.00002％、优选地至少0.0001wt％、优选地至少0.0002wt％、优选地至少0.001wt％、优选地至少0.002wt％、优选地至少0.005wt％、优选地至少0.01wt％、优选地至少0.02wt％、优选地至少0.05wt％优选地至少0.1wt％的总洗涤剂浓度。
酶量还可以是以ppm(mg/L)活性酶蛋白计。因此，在一个方面，组合物中分散蛋白的量是至少0.00001ppm、0.00002ppm、0.00005ppm、0.0001ppm、0.0002ppm、0.0005ppm、0.001ppm、0.002ppm、0.005ppm、0.01ppm、0.02ppm、0.05ppm、0.1ppm、0.2ppm、0.5ppm、1ppm、2ppm、5ppm、10ppm或至少20ppm的分散蛋白。在一个方面，组合物中分散蛋白的量是从约0.00001ppm至约10ppm的范围内、或在从约0.0001ppm至约2ppm的范围内、或在从约0.001ppm至约2ppm分散蛋白酶的范围内。
在一些方面，该清洁组合物是液体或粉末衣物洗涤剂，适合用于例如在高温和/或高pH下(如在或高于40℃和/或在或高于pH 8下)的洗涤。在一些方面，该洗涤剂组合物是液体或粉末衣物洗涤剂，适合用于例如在低温和/或低pH下(如在或低于20℃和/或pH 6下)的洗涤。该清洁组合物还可以被配制成单位剂量洗涤剂和/或任选具有最少的水或无水的致密洗涤剂。该清洁组合物还可以是餐具洗涤洗涤剂。衣物和餐具洗涤洗涤剂可以是无磷的。
表面活性剂
表面活性剂可以是在如上所述的非离子、阴离子和/或两性离子型表面活性剂中选择的，优选地阴离子或非离子型表面活性剂也可以使用两性离子型表面活性剂。一般而言，优选漂白剂稳定的表面活性剂。优选的阴离子型表面活性剂是硫酸盐表面活性剂以及特别地烷基醚硫酸盐，尤其是C-9-15醇醚硫酸盐、C12-15伯醇乙氧基化物、C8-C16酯硫酸盐和C10-C14酯硫酸盐，如单十二烷基酯硫酸盐。阴离子型表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，特别是直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺酸基琥珀酸的二酯和单酯或脂肪酸的盐(皂)、及其组合。
阴离子型表面活性剂优选地以盐的形式添加至洗涤剂中。在这些盐中的适合阳离子是碱金属离子，如钠、钾和锂以及铵盐，例如(2-羟基乙基)铵、二(2-羟基乙基)铵和三(2-羟基乙基)铵盐。非离子表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、以及以SPAN和TWEEN商品名可获得的产品、及其组合。可商购的非离子型表面活性剂包括来自BASF公司的PlurafacTM、LutensolTM和PluronicTM，来自科宁公司(Cognis)的DehyponTM系列和来自科莱恩特公司(Clariant)的GenapolTM系列。
助洗剂
优选地，助洗剂选自磷酸盐、柠檬酸钠助洗剂、碳酸钠、硅酸钠、铝硅酸钠(沸石)。适合的助洗剂是碱金属或磷酸铵、聚磷酸盐、膦酸盐、聚磷酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、硼酸盐、柠檬酸盐和聚羧酸盐。柠檬酸盐助洗剂，例如柠檬酸及其可溶性盐(特别是钠盐)是聚羧酸盐助洗剂。柠檬酸盐可以与沸石、硅酸盐像BRITESIL类型、和/或层状硅酸盐助洗剂组合使用。助洗剂优选以按重量计约0％-65％(如按重量计约5％至约50％)的量添加。在衣物洗涤剂中，助洗剂的水平典型地为按重量计约40％-65％、特别是按重量计约50％-65％、特别是按重量计从20％至50％。助洗剂和/或共助洗剂可以特别是与Ca和Mg形成水溶性复合物的螯合试剂。可以利用本领域已知的用于在清洁洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐(如三磷酸钠(STP或STPP))、碳酸盐(如碳酸钠)、可溶性硅酸盐(如偏硅酸钠)、层状硅酸盐(例如来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、和(羧甲基)菊粉(CMI)、及其组合。助洗剂的另外的非限制性实例包括柠檬酸盐；螯合剂，如氨基羧酸盐、氨基聚羧酸盐和膦酸盐；以及烷基琥珀酸或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二琥珀酸(EDDS)、甲基甘氨酸-N,N-二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸、N-(2-羟基乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二琥珀酸(IDA)、N-(磺甲基)天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(磺甲基谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及N’-(2-羟基乙基)-亚乙基二胺-N,N,N’-三乙酸(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、及其组合和盐。适合用于本文使用的膦酸酯包括1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA或DTPMP)、次氮基三(亚甲基膦酸)(ATMP或NTMP)、2-膦酰基丁烷-1,2,4-三羧酸(PBTC)、六亚甲基二胺四(亚甲基膦酸)(HDTMP)。该组合物还可以含有按重量计0％-50％，如约5％至约30％的洗涤剂共助洗剂。洗涤剂组合物可以包括单独的共助洗剂，或与助洗剂(例如沸石助洗剂)组合。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)或聚天冬氨酸。另外的示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 09/102854、US 5977053中。在一些方面，该助洗剂是基于非磷的助洗剂，如柠檬酸和/或甲基甘氨酸-N,N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)和/或其盐。在优选的助洗剂包括柠檬酸盐和/或甲基甘氨酸-N,N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)和/或其盐的情况下，该液体组合物还可以是无磷酸盐的。
漂白组分
洗涤剂可以含有按重量计0％-30％，如约1％至约20％的漂白系统。可以利用包含本领域已知的用于在清洁洗涤剂中使用的组分的任何漂白系统。合适的漂白系统组分包括过氧化氢源；过酸源；和漂白催化剂或增效剂。
过氧化氢源：合适的过氧化氢源是无机过酸盐，包括碱金属盐(如过碳酸钠和过硼酸钠(通常是一水合物或四水合物))，以及过氧化氢―尿素(1/1)。
过酸源：过酸可以是(a)直接作为预形成过酸掺入，或(b)从过氧化氢和漂白活化剂(过水解)在洗涤液中原位形成，或(c)从过氧化氢和过水解酶和后者合适的底物(例如酯)在洗涤液中原位形成。
a)合适的预形成过酸包括但不限于过氧羧酸(如过氧苯甲酸)及其环取代的衍生物、过氧-α-萘甲酸、过氧邻苯二甲酸、过氧月桂酸、过氧硬脂酸、ε-邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸[邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸(PAP)]、和邻-羧基苯甲酰氨基过氧己酸；脂族和芳族二过氧二羧酸，如二过氧十二烷二酸，二过氧壬二酸，二过氧癸二酸，二过氧巴西基酸，2-癸基二过氧丁二酸，以及二过氧邻苯二甲酸、-间苯二甲酸和-对苯二甲酸；过亚氨酸；过氧单硫酸；过氧二硫酸；过氧磷酸；过氧硅酸；以及所述化合物的混合物。应理解的是，在一些情况下，所提到的过酸可能最好是作为合适的盐添加，如碱金属盐(例如
Figure BDA0003281929810002021
)或碱土金属盐。
b)合适的漂白活化剂包括属于酯、酰胺、酰亚胺、腈类或酸酐类别的那些，以及适用时，其盐。合适的实例是四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸钠(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸钠、4-(癸酰基氧基)苯甲酸(DOBA)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸钠(NOBS)和/或披露于WO 98/17767中的那些。目的漂白活化剂的特定家族披露于EP 624154中并且在该家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酸酯(像三醋精)具有它们是环境友好的优点。此外，乙酰柠檬酸三乙酯和三醋精在储存时在产品中具有良好的水解稳定性，并且是有效的漂白活化剂。最后，ATC是多功能的，因为在过水解反应中释放的柠檬酸盐可以作为助洗剂起作用。
漂白催化剂和增效剂：该漂白系统还可以包括漂白催化剂或增效剂。可以用于本发明组合物中的漂白催化剂的一些非限制性实例包括草酸锰、乙酸锰、锰胶原、钴-胺催化剂、和锰三氮杂环壬烷(MnTACN)催化剂；特别优选的是锰与1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me3-TACN)或1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me4-TACN)的络合物，特别是Me3-TACN，如双核锰络合物[(Me3-TACN)Mn(O)3Mn(Me3-TACN)](PF6)2、和[2,2',2"-次氮基三(乙烷-1,2-二基氮烷基亚基-κN-甲基亚基)三酚并-κ3O]锰(III)。这些漂白催化剂还可以是其他金属化合物，如铁或钴络合物。
在其中过酸的来源包括在内的一些方面，可以使用具有下式之一的有机漂白催化剂或漂白增效剂：
Figure BDA0003281929810002031
(iii)及其混合物；其中每个R1独立地是含有从9至24个碳的支链烷基基团或含有从11至24个碳的直链烷基基团，优选地每个R1独立地是含有从9至18个碳的支链烷基基团或含有从11至18个碳的直链烷基基团，更优选地每个R1独立地选自由以下组成的组：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。
其他示例性漂白系统描述于例如WO 2007/087258、WO 2007/087244、WO 2007/087259、EP 1867708(维生素K)和WO 2007/087242中。合适的光漂白剂可以例如是磺化的酞菁锌或酞菁铝。
洗涤剂组分的选择可以包括(用于纺织品护理)有待清洁的纺织品的类型、污垢的类型和/或程度、进行清洁时的温度、以及洗涤剂产品的配制的考虑。尽管根据功能性对以下提到的组分由通用标题进行分类，但这并不被解释为限制，因为如将被普通技术人员所理解，一种组分可以包括另外的功能性，包括以下示出的示例性、非限制性组分。
水溶助剂
该洗涤剂组合物可以含有按重量计0％-10％，例如按重量计0％-5％，如约0.5％至约5％、或约3％至约5％的水溶助剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何水溶助剂。水溶助剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠、及其组合。
聚合物
该洗涤剂组合物可以含有按重量计0％-10％，如0.5％-5％、2％-5％、0.5％-2％或0.2％-1％的聚合物。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何聚合物。聚合物可以作为如以上提到的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油污清洁和/或防沫特性。一些聚合物可以具有多于一种的上文提到的性质和/或多于一种的下文提到的基序。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧酸酯(如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物)、疏水修饰的CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)、以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575中。还设想到了上文提到的聚合物的盐。
织物调色剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂，如染料或色素，当配制在洗涤剂组合物中时，当所述织物与洗涤液接触时织物调色剂可以沉积在织物上，该洗涤液包含所述洗涤剂组合物，并且因此通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色彩。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下，当织物调色剂吸收至少部分可见光谱时，它们改变表面的色彩。合适的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物，并且还可以包括颜料。适合的染料包括小分子染料和聚合物染料。适合的小分子染料包括选自由落入颜色索引(Colour Index)(C.I.)分类的以下染料组成的组的小分子染料：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫、和碱性红、或其混合物，例如如WO 2005/03274、WO 2005/03275、WO2005/03276以及EP 1876226(通过援引并入本文)中所描述的。洗涤剂组合物优选地包含从约0.00003wt％至约0.2wt％、从约0.00008wt％至约0.05wt％、或甚至从约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。该组合物可以包含从0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物处于单位剂量袋的形式时，这可以是尤其优选的。适合的调色剂还披露于例如WO2007/087257和WO 2007/087243中。
酶
洗涤剂组合物可以包含一种或多种另外的酶，如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶(例如漆酶)、和/或过氧化酶。
通常，选择的一种或多种酶的特性应当与所选择的洗涤剂相容(即，最适pH，与其他酶成分或非酶成分的相容性等)，并且该一种或多种酶应当以有效量存在。
纤维素酶
合适的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳菌属、枝顶孢属的纤维素酶，例如披露于US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US5,776,757以及WO 89/09259中的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰孢产生的真菌纤维素酶。
尤其合适的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述于EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中的纤维素酶。其他实例是例如描述于WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307和WO 99/001544中的那些纤维素酶变体。
其他纤维素酶是具有与WO 2002/099091的SEQ ID NO:2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少97％同一性的序列的内切-β-1,4-葡聚糖酶或一种家族44木葡聚糖酶，该木葡聚糖酶是一种具有与WO 2001/062903的SEQ ID NO:2的位置40-559具有至少60％同一性的序列的木葡聚糖酶。
可商购的纤维素酶包括CelluzymeTM和CarezymeTM(诺维信公司)、CarezymePremiumTM(诺维信公司)、CellucleanTM(诺维信公司)、Celluclean ClassicTM(诺维信公司)、CellusoftTM(诺维信公司)、WhitezymeTM(诺维信公司)、ClazinaseTM和Puradax HATM(杰能科国际有限公司(Genencor International Inc.))以及KAC-500(B)TM(花王株式会社(Kao Corporation))。
蛋白酶
合适的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些，例如植物或微生物来源。优选微生物来源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。它可以是碱性蛋白酶(例如丝氨酸蛋白酶)或中性蛋白酶(例如金属蛋白酶)。丝氨酸蛋白酶可以例如是S1家族(如胰蛋白酶)或S8家族(如枯草杆菌蛋白酶)的丝氨酸蛋白酶。金属蛋白酶蛋白酶可以例如是来自例如M4家族的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶，如来自M5、M7或M8家族的那些。
术语“枯草杆菌酶”是指根据Siezen等人,Protein Engng.[蛋白质工程]4(1991)719-737和Siezen等人,Protein Science[蛋白质科学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是特征为在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的亚组。枯草杆菌酶可以被划分为6个亚类，即，枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫氨酸抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。
枯草杆菌酶的实例是源自芽孢杆菌属的那些，如描述于US 7262042和WO 09/021867中的迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌；和描述于WO 89/06279中的枯草杆菌蛋白酶lentus、枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及描述于(WO 93/18140)中的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是描述于WO 92/175177、WO 01/016285、WO 02/026024和WO02/016547中的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰孢属(Fusarium)蛋白酶(描述于WO 89/06270、WO 94/25583和WO 05/040372中)，以及来源于纤维单胞菌(Cellumonas)的胰凝乳蛋白酶(描述于WO 05/052161和WO 05/052146中)。
另外的优选的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶(如在例如WO95/23221中所述)、及其变体(在WO 92/21760、WO 95/23221、EP 1921147以及EP 1921148中所述的)。
金属蛋白酶的实例是如WO 07/044993(杰能科国际公司)中所述的中性金属蛋白酶，例如来源于解淀粉芽孢杆菌的那些。
有用的蛋白酶的实例是描述于以下中的变体：WO 92/19729、WO 96/034946、WO98/20115、WO 98/20116、WO 99/011768、WO 01/44452、WO 03/006602、WO 04/03186、WO 04/041979、WO 07/006305、WO 11/036263、WO 11/036264，尤其是在以下位置中的一个或多个处具有取代的变体：3、4、9、15、24、27、42、55、59、60、66、74、85、96、97、98、99、100、101、102、104、116、118、121、126、127、128、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、189、193、198、199、200、203、206、211、212、216、218、226、229、230、239、246、255、256、268和269，其中这些位置对应于WO 2016/001449的SEQ ID NO 1中示出的迟缓芽孢杆菌蛋白酶的位置。更优选的蛋白酶变体可以包含以下突变中的一个或多个：S3T、V4I、S9R、S9E、A15T、S24G、S24R、K27R、N42R、S55P、G59E、G59D、N60D、N60E、V66A、N74D、S85R、A96S、S97G、S97D、S97A、S97SD、S99E、S99D、S99G、S99M、S99N、S99R、S99H、S101A、V102I、V102Y、V102N、S104A、G116V、G116R、H118D、H118N、A120S、S126L、P127Q、S128A、S154D、A156E、G157D、G157P、S158E、Y161A、R164S、Q176E、N179E、S182E、Q185N、A188P、G189E、V193M、N198D、V199I、Y203W、S206G、L211Q、L211D、N212D、N212S、M216S、A226V、K229L、Q230H、Q239R、N246K、N255W、N255D、N255E、L256E、L256D、T268A以及R269H。这些蛋白酶变体优选地是在WO 2016/001449的SEQ ID NO:1中示出的迟缓芽孢杆菌蛋白酶
Figure BDA0003281929810002071
的变体或在WO 2016/001449的SEQ ID NO:2中示出的解淀粉芽孢杆菌蛋白酶(BPN’)的变体。这些蛋白酶变体优选地与WO 2016/001449的SEQ ID NO 1或SEQ ID NO 2中所示多肽具有至少80％的序列同一性。
在一个或多个位置(对应于WO 2004/067737的SEQ ID NO:1的位置171、173、175、179或180)处包含取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与WO 2004/067737的SEQ IDNO:1具有至少75％但小于100％的序列同一性。
合适的可商购蛋白酶包括以下列商品名出售的那些：
Figure BDA0003281929810002081
DuralaseTm、DurazymTm、
Figure BDA0003281929810002082
Ultra、
Figure BDA0003281929810002084
Ultra、
Figure BDA0003281929810002086
Figure BDA0003281929810002087
Ultra、
Figure BDA0003281929810002088
Ultra、
Figure BDA00032819298100020810
Blaze
Figure BDA00032819298100020811
100T、Blaze
Figure BDA00032819298100020812
125T、Blaze
Figure BDA00032819298100020813
150T、
Figure BDA00032819298100020815
和
Figure BDA00032819298100020816
(诺维信公司)，以下列商品名出售的那些：
Figure BDA00032819298100020817
Purafect
Figure BDA00032819298100020818
Purafect
Figure BDA00032819298100020819
ExcellenzP1000TM、Excellenz P1250TM、
Figure BDA00032819298100020821
Preferenz P100TM、Purafect
Figure BDA00032819298100020823
PreferenzP110TM、Effectenz P1000TM、
Figure BDA00032819298100020822
Effectenz P1050TM、Purafect
Figure BDA00032819298100020824
Effectenz P2000TM、
Figure BDA00032819298100020825
Figure BDA00032819298100020826
和
Figure BDA00032819298100020827
(丹斯尼克公司(Danisco)/杜邦公司(DuPont))、AxapemTM(吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-BrocasesN.V.))、BLAP(US 5352604的图29中所示的序列)及其变体(汉高公司(Henkel AG))和来自花王株式会社(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。
脂肪酶和角质酶：
适合的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体酶或蛋白质工程化的突变体酶。实例包括来自嗜热真菌属的脂肪酶，例如，如描述于EP 258068和EP 305216中的来自疏绵状嗜热丝孢菌(早先命名为疏棉状腐质霉)；来自腐质霉属的角质酶，例如特异腐质霉(WO 96/13580)；来自假单胞菌属的菌株的脂肪酶(这些中的一些现在改名为伯克霍尔德菌属)，例如产碱假单胞菌或类产碱假单胞菌(EP 218272)、洋葱假单胞菌(EP 331376)、假单胞菌属菌株SD705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)；GDSL-型链霉菌属脂肪酶(WO 10/065455)；来自稻瘟病菌的角质酶(WO 10/107560)；来自门多萨假单胞菌的角质酶(US 5,389,536)；来自褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO 11/084412)；嗜热脂肪土芽孢杆菌脂肪酶(WO 11/084417)；来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO 11/084599)；以及来自灰色链霉菌(WO11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)的脂肪酶(WO 12/137147)。
其他实例是脂肪酶变体，如EP 407225、WO 92/05249、WO 94/01541、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO97/07202、WO 00/34450、WO 00/60063、WO 01/92502、WO 07/87508以及WO 09/109500中所述的那些。
优选的商业化脂肪酶产品包括LipolaseTM、LipexTM、LipolexTM和LipocleanTM(诺维信公司)、Lumafast(来自杰能科公司(Genencor))、以及Lipomax(来自吉斯特布罗卡德斯公司)。
仍其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO10/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO 09/67279)以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(特别是来自亨斯迈纺织品染化有限公司(Huntsman Textile Effects Pte Ltd)的商业产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO 10/100028)。
淀粉酶
能与本发明的分散蛋白一起使用的合适的淀粉酶可以是α淀粉酶或葡糖淀粉酶并且可以是细菌来源的或真菌来源的。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属、例如地衣芽孢杆菌的特定菌株(更详细地描述于GB 1,296,839中)获得的α-淀粉酶。
适合的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或与SEQ ID NO:1具有90％序列同一性的其变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424中以及WO 99/019467的SEQ ID NO 4中，如在以下位置的一个或多个处具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444。
不同的适合的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或与SEQID NO:6具有90％序列同一性的其变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。
其他适合的淀粉酶是包含WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中所示的从解淀粉芽孢杆菌获得的α-淀粉酶的残基1-33和WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中所示的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％的序列同一性的变体。此杂合α-淀粉酶的优选的变体是在以下位置的一个或多个位置中具有取代、缺失、或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209、和Q264。包含WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中所示的从解淀粉芽孢杆菌获得的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选的变体是具有以下取代的那些：
M197T；
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
另外的合适的淀粉酶是具有WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQID NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置中具有取代、缺失、或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182、或位置H183和G184中具有缺失的那些。
可以使用的额外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQID NO:2或SEQ ID NO:7的那些淀粉酶，或与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQID NO:7具有90％序列同一性的其变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、或SEQID NO:7的优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置中具有取代、缺失、或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和476，使用WO 96/023873的SEQID NO:.2进行编号。更优选的变体是在选自181、182、183、和184的两个位置(如181和182、182和183、或位置183和184)中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304、和476中的一个或多个位置中具有取代的那些。
可以使用的其他淀粉酶是具有WO 08/153815的SEQ ID NO:2、WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的淀粉酶，或与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90％序列同一性的其变体，或与WO 01/66712中的SEQ ID NO:10具有90％的序列同一性的其变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的优选的变体是在以下位置的一个或多个位置中具有取代、缺失、或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211、和264。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或与SEQ IDNO:2具有90％的序列同一性的其变体。SEQ ID NO:2的优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置中具有C-末端截短、和/或取代、缺失、或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444、和G475。SEQ ID NO:2的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置中具有取代的那些：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E、以及G475K，和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183中具有缺失的那些。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中这些变体是C-末端截短的，并且任选地进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
其他适合的淀粉酶是具有WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO:12具有至少90％的序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO:12的以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K和R458K的变体，以及另外在一个或多个选自下组的位置处具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345、和A339，最优选的是额外地在所有这些位置中具有取代的变体。
另外的适合的淀粉酶是包含在对应于SEQ ID NO:1的位置1、54、56、72、109、113、116、134、140、159、167、169、172、173、174、181、182、183、184、189、194、195、206、255、260、262、265、284、289、304、305、347、391、395、439、469、444、473、476、或477的一个或多个位置处的修饰的α-淀粉酶变体，其中该α-淀粉酶变体与WO 2016/180748的SEQ ID NO:13或SEQID NO:14具有至少75％但小于100％的序列同一性。
其他实例是例如描述于WO 2011/098531、WO 2013/001078、以及WO 2013/001087中的那些淀粉酶变体。
可商购的淀粉酶是DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM、StainzymeTM、StainzymePlusTM、NatalaseTM、Liquozyme X和BANTM(来自诺维信公司)，以及RapidaseTM、PurastarTM/EffectenzTM、Powerase以及Preferenz S100(来自杰能科国际公司/杜邦公司)。
过氧化物酶/氧化酶
根据本发明的过氧化物酶是由如由国际生物化学与分子生物学联合会命名委员会(IUBMB)陈述的酶分类EC 1.11.1.7包含的过氧化物酶，或从其获得的表现出过氧化物酶活性的任何片段。
合适的过氧化物酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自拟鬼伞属，例如来自灰盖拟鬼伞(C.cinerea)的过氧化物酶(EP 179,486)，及其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602以及WO 98/15257中所述的那些。
根据本发明的过氧化物酶还包括卤代过氧化物酶，如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶以及展示出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。根据其对卤素离子的特异性将卤代过氧化物酶进行分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化从氯离子形成次氯酸盐。
在一方面，本发明的卤代过氧化物酶是氯过氧化物酶。优选地，卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶，即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。在本发明的优选的方法中，将含钒酸盐的卤代过氧化物酶与氯离子来源组合。
已从许多不同真菌，特别是从暗色丝孢菌(dematiaceous hyphomycete)真菌组中分离出了卤代过氧化物酶，如卡尔黑霉属(Caldariomyces)(例如，煤卡尔黑霉(C.fumago))、链格孢属、弯孢属(例如，疣枝弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis))、内脐蠕孢属、细基格孢属以及葡萄孢属。
还已从细菌如假单胞菌属(例如吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属(例如，金色链霉菌(S.aureofaciens))中分离出了卤代过氧化物酶。
在优选的方面，卤代过氧化物酶可来源于弯孢属，特别是疣枝弯孢(Curvulariaverruculosa)或不等弯孢，如描述于WO 95/27046中的不等弯孢CBS 102.42；或如描述于WO97/04102中的疣枝弯孢CBS 147.63或疣枝弯孢CBS 444.70；或来源于如描述于WO 01/79459中的Drechslera hartlebii、如描述于WO 01/79458中的盐沼小树状霉(Dendryphiella salina)、如描述于WO 01/79461中的Phaeotrichoconis crotalarie、或如描述于WO 01/79460中的Geniculosporium属物种。
根据本发明的氧化酶特别地包含由酶分类EC 1.10.3.2囊括的任何漆酶或获得自其中的展示出漆酶活性的片段、或展示出类似活性的化合物，如儿茶酚氧化酶(EC1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。
优选的漆酶是微生物来源的酶。这些酶可以从植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)获得。
来自真菌的适合实例包括可源自以下的菌株的漆酶：芽孢杆菌属、脉孢菌属(例如，粗糙脉孢菌)、柄孢壳菌属、葡萄孢属、金钱菌属(Collybia)、层孔菌属(Fomes)、香菇属、侧耳属、栓菌属(例如，长绒毛栓菌和变色栓菌)、丝核菌属(例如，立枯丝核菌(R.solani))、拟鬼伞属(例如，灰盖拟鬼伞、毛头拟鬼伞(C.comatus)、弗瑞氏拟鬼伞(C.friesii)、和C.plicatilis)、小脆柄菇属(Psathyrella)(例如，白黄小脆柄菇(P.condelleana))、斑褶菇属(例如，蝶形斑褶菇(P.papilionaceus))、毁丝霉属(例如，嗜热毁丝霉)、Schytalidium(例如，S.thermophilum)、多孔菌属(例如，P.pinsitus)、射脉菌属(例如，射脉侧菌(P.radiata))(WO 92/01046)、或革盖菌属(例如，毛革盖菌(C.hirsutus))(JP 2238885)。
来自细菌的合适的实例包括可来源于芽孢杆菌属的菌株的漆酶。
优选的是从拟鬼伞属或毁丝霉属获得的漆酶；特别是获得自灰盖拟鬼伞的漆酶，如披露于WO 97/08325中；或来源于嗜热毁丝霉，如披露于WO95/33836中。
可以通过添加含有一种或多种酶的单独添加剂、或通过添加含有所有这些酶的组合添加剂而将一种或多种洗涤剂酶包含于洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添加剂，即单独的或组合的添加剂，可以配制成例如颗粒、液体、浆液等。优选的洗涤剂添加剂配制品为颗粒，特别是非尘颗粒；液体，特别是稳定化液体；或者浆液。
无粉尘颗粒例如可以如在US 4,106,991和4,661,452中所披露地产生并且可以任选地通过本领域已知的方法包衣。蜡状包衣材料的实例是具有平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，PEG)；具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚；乙氧基化脂肪醇，其中该醇含有12至20个碳原子，并且其中存在15至80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。适合用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。液体酶制剂可以例如通过根据已确立的方法添加多元醇(如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸而稳定化。受保护的酶可以根据EP 238,216中披露的方法来制备。
分散剂
本发明的洗涤剂组合物还可以含有分散剂。特别地，粉末洗涤剂可以包含分散剂。适合的水溶性有机材料包括均聚的或共聚的酸或其盐，其中聚羧酸包含被不多于两个碳原子彼此分开的至少两个羧基。合适的分散剂例如描述于Powdered Detergents[粉状洗涤剂],Surfactant science series[表面活性剂科学系列],第71卷,马塞尔德克尔公司中。
染料转移抑制剂
本发明的清洁组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。合适的聚合物染料转移抑制剂包括但不局限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮和聚乙烯咪唑或其混合物。当在主题组合物中存在时，染料转移抑制剂可以按该组合物的重量计以从约0.0001％至约10％、从约0.01％至约5％或甚至从约0.1％至约3％的水平存在。
荧光增白剂
优选地，洗涤剂组合物还可以含有另外的组分，这些组分可以给正在清洁的物品着色，如荧光增白剂或光学增亮剂。当存在时，增亮剂的水平优选地为约0.01％至约0.5％。在本发明的组合物中可以使用适合用于在衣物洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些：二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯基衍生物。荧光增白剂的二氨基芪-磺酸衍生物型的实例包括以下的钠盐：4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2.2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2'-二磺酸盐以及5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从汽巴–嘉基股份有限公司(Ciba-Geigy AG)(巴塞尔，瑞士)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4'-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选的是荧光增白剂是可商购的Parawhite KX，由印度孟买的派拉蒙矿物与化学品公司(Paramount Minerals and Chemicals)供应。天来宝CBS-X是4.4'-双-(磺基苯乙烯基)-联苯基二钠盐，也称为二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠盐。适合用于本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-氨烷基香豆素。
合适的荧光增亮剂水平包括从约0.01wt％、从0.05wt％、从约0.1wt％或甚至从约0.2wt％的较低水平至0.5wt％或甚至0.75wt％的较高水平。
污垢释放聚合物
该洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物，这些聚合物帮助从织物(如棉和聚酯基的织物)去除污垢，特别是从聚酯基的织物去除疏水性污垢。污垢释放聚合物可以例如是基于非离子型或阴离子型对苯二甲酸的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如Powdered Detergents[粉状洗涤剂]，Surfactant science series[表面活性剂科学系列]第71卷，第7章，马塞尔·德克尔公司(Marcel Dekker，Inc.)。另一种类型的污垢释放聚合物是包含核心结构和附接至该核心结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物。核心结构可以包含聚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构，如在WO 2009/087523中详细描述的(通过引用并入本文)。此外，随机接枝共聚物是合适的污垢释放聚合物。适合的接枝共聚物更详细地描述于WO 2007/138054、WO 2006/108856以及WO 2006/113314中(通过引用并入本文)。其他污垢释放聚合物是取代的多糖结构，尤其是取代的纤维素结构，如改性纤维素衍生物，如描述于EP1867808或WO 2003/040279中的那些(将二者都通过引用并入本文)。适合的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺、及其混合物。适合的纤维素聚合物包括阴离子修饰的纤维素、非离子修饰的纤维素、阳离子修饰的纤维素、兼性离子修饰的纤维素、及其混合物。适合的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素、及其混合物。
抗再沉积剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物、和乙氧基化的聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下所描述的基于纤维素的聚合物还可以作为抗再沉积剂起作用。
流变改性剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种流变改性剂、结构剂或增稠剂，不同于降粘剂。流变改性剂选自下组，该组由以下组成：非聚合物结晶、羟基功能材料、聚合物流变改性剂，它们为液体洗涤剂组合物的水性液相基质赋予剪切稀化特征。可以通过本领域已知的方法修饰和调整洗涤剂的流变学和粘度，例如，如在EP 2169040中所示。
其他适合的辅料包括但不限于防缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物柔软剂、填料、泡沫调节剂、水溶助剂、香料、色素、抑泡剂、溶剂、以及用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹性剂。
其他材料
还可以利用本领域已知的用于在本发明清洁组合物中使用的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括防腐蚀剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂/崩解试剂、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC、和/或多元醇，如丙二醇)、织物调理剂(包括粘土)、填充剂/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢悬浮剂、软化剂、抑泡剂、晦暗抑制剂、以及芯吸剂，单独或组合使用。可以利用本领域已知的用于在洗涤剂中使用的任何成分。此类成分的选择完全在技术人员的技术范围内。
洗涤剂产品的配制
该洗涤剂组合物可以处于任何常规形式，例如棒，均匀的片剂，具有两个或更多个层的片剂，规则的或压缩的粉末，颗粒，膏，凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。
洗涤剂配制品形式：层(相同或不同的相)、袋、对比用于机器给药单位的形式。
袋可以被配置为单一室或多室。它可以具有适合用于容持该组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不允许该组合物从袋中释放出来。该小袋由水溶性膜制成，它包含了一个内部体积。可以将所述内部体积分成袋的室。优选的膜是聚合物材料，优选地形成膜或薄片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选的是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混物组合物，该共混物组合物包含可水解降解并且水可溶的聚合物共混物，如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在商品参考号M8630下，如由美国印第安纳州盖里(Gary,Ind.,US)的克里斯克拉夫特工业产品公司(Chris Craft In.Prod.)销售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。袋可以包含固体洗衣清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。用于液体组分的隔室在组成上可以与含有固体的隔室不同。参考：(US 2009/0011970 A1)
可以由水溶性袋中的或片剂的不同层中的室来将洗涤剂成分彼此物理分开。因此，可以避免组分间的不良的储存相互作用。在洗涤液中，每个隔室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。
这些形式的定义/特征：
非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，典型地含有按重量计至少20％并且最高达95％的水，如高达约70％的水、高达约65％的水、高达约55％的水、高达约45％的水、高达约35％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚、以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以含有从0％-30％的有机溶剂。
液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。
颗粒洗涤剂配制品
可以如WO 09/092699、EP 1705241、EP 1382668、WO 07/001262、US 6472364、WO04/074419或WO 09/102854中所述地制备颗粒洗涤剂。其他有用的洗涤剂配制品描述于以下中：WO 09/124162、WO 09/124163、WO 09/117340、WO 09/117341、WO 09/117342、WO 09/072069、WO 09/063355、WO 09/132870、WO 09/121757、WO 09/112296、WO 09/112298、WO09/103822、WO 09/087033、WO 09/050026、WO 09/047125、WO 09/047126、WO 09/047127、WO09/047128、WO 09/021784、WO 09/010375、WO 09/000605、WO 09/122125、WO 09/095645、WO09/040544、WO 09/040545、WO 09/024780、WO 09/004295、WO 09/004294、WO 09/121725、WO09/115391、WO 09/115392、WO 09/074398、WO 09/074403、WO 09/068501、WO 09/065770、WO09/021813、WO 09/030632、和WO 09/015951。
WO 2011025615、WO 2011016958、WO 2011005803、WO 2011005623、WO2011005730、WO 2011005844、WO 2011005904、WO 2011005630、WO 2011005830、WO2011005912、WO 2011005905、WO 2011005910、WO 2011005813、WO 2010135238、WO2010120863、WO 2010108002、WO 2010111365、WO 2010108000、WO 2010107635、WO2010090915、WO 2010033976、WO 2010033746、WO 2010033747、WO 2010033897、WO2010033979、WO 2010030540、WO 2010030541、WO 2010030539、WO 2010024467、WO2010024469、WO 2010024470、WO 2010025161、WO 2010014395、WO 2010044905、
WO 2010145887、WO 2010142503、WO 2010122051、WO 2010102861、WO2010099997、WO 2010084039、WO 2010076292、WO 2010069742、WO 2010069718、WO2010069957、WO 2010057784、WO 2010054986、WO 2010018043、WO 2010003783、WO2010003792、
WO 2011023716、WO 2010142539、WO 2010118959、WO 2010115813、WO2010105942、WO 2010105961、WO 2010105962、WO 2010094356、WO 2010084203、WO2010078979、WO 2010072456、WO 2010069905、WO 2010076165、WO 2010072603、WO2010066486、WO 2010066631、WO 2010066632、WO 2010063689、WO 2010060821、WO2010049187、WO 2010031607、WO 2010000636。
共颗粒中酶的配制品
该分散蛋白可以被配制为颗粒，例如，配制为结合一种或多种酶的共颗粒。然后，每种酶将存在于多种颗粒中，这些颗粒确保酶在洗涤剂中的分布更均匀。这还减少了由于不同的粒度而导致的不同酶的物理隔离。用于产生针对洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法披露于IP.com披露内容IPCOM000200739D中。
通过使用共颗粒的酶的配制品的另一个实例披露于WO 2013/188331中，其涉及包含以下的洗涤剂组合物：(a)多酶共颗粒、(b)小于10wt沸石(无水的基础上)；和(c)小于10wt磷酸盐(无水基底)，其中所述酶共颗粒包含从10wt％至98wt％的水分汇组分，并且该组合物另外包含从20wt％至80wt％的洗涤剂水分汇组分。
WO 2013/188331还涉及处理和/或清洁表面(优选地织物表面)的方法，该方法包括以下步骤：(i)使该表面在含水洗涤液中与如在本文要求保护的并且描述的洗涤剂组合物接触，(ii)漂洗和/或干燥该表面。
在以下非限制性段落中进一步描述本发明：
1.一种分散蛋白变体，该分散蛋白变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含改变，优选地取代：SEQ ID NO:1的多肽的2、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、227、230、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321和323，其中该分散蛋白变体具有β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性，其中该分散蛋白变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，并且其中与SEQ ID NO:1的分散蛋白相比，该变体具有以半衰期改进因子HIF测量的增加的稳定性，优选地热稳定性。
2.如段落1所述的变体，该变体包含选自由以下组成的组至少一个改变：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、S12A、H15F、H15Y、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、V25R、D26M、Y30*、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128C、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207N、D207Q、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、G222D、E224A、E224P、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230R、D230T、D230W、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K312A、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、和N323R，其中这些位置对应于SEQ ID NO:1中阐述的氨基酸序列的氨基酸位置；并且其中该在一个或多个位置处的取代产生了分散蛋白变体，该分散蛋白变体具有以至少1.1的改进因子HIF测量的增加的稳定性，优选地热稳定性，并且此外，其中这些变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同一性、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
3.如前述段落中任一项所述的分散蛋白变体，其中该变体获得自土地芽孢杆菌属，优选地嗜糖土地芽孢杆菌、哥里土地芽孢杆菌或嗜糖土地芽孢杆菌。
4.如前述段落中任一项所述的分散蛋白变体，其中该变体包含一个或多个以下基序：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ ID NO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、[WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO 11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)。
5.如前述段落中任一项所述的分散蛋白变体，其中与具有SEQ ID NO:1中所示的或SEQ ID NO:15中所示的多肽序列的分散蛋白相比，该分散蛋白变体具有如具有改进因子，例如RAR或HIF>1.0所测量的改进的稳定性。
6.如前述段落中任一项所述的分散蛋白变体，其中与SEQ ID NO:1相比或与SEQID NO:15相比，该半衰期改进因子(HIF)是至少1.2例如1.5，其中HIF计算为T1/2分散蛋白变体/T1/2参考并且该分散蛋白变体和该参考分散蛋白(例如SEQ ID NO:1或15)的半衰期(T1/2，以分钟计)计算为：20分钟x LN(0.5)/LN(RA)并且每种分散蛋白变体和参考分散蛋白(例如SEQID NO:1或15)的残留活性(RA)计算为：斜率(应激样品，56℃持续60min)/斜率(无应激样品，21℃持续60min)，例如如实例2b中所述的。
7.如前述段落中任一项所述的分散蛋白变体，其中与包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的分散蛋白相比，与SEQ ID NO:1相比的取代总数为3-20，例如至少5至20，至少10至20或例如至少15至20个取代。
8.一种用于获得分散蛋白变体的方法，该方法包括：
a)向具有1,6-N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性的分散蛋白亲本中引入
在对应于以下位置的一个或多个位置处的改变，优选地取代：SEQ ID NO:1的多肽的2、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、227、230、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321和323，
b)并且回收该变体。
9.如段落8所述的方法，该方法包括引入选自由以下组成的组的一个或多个改变：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、S12A、H15F、H15Y、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19K、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23A、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、L24I、V25R、D26M、Y30*、Y30A、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N34D、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80R、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81N、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K103V、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106R、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124H、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124N、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125H、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128A、V128C、V128D、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138N、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150A、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、S163P、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167A、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181K、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185A、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203Q、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207K、D207N、D207Q、D207R、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215K、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、S221N、G222D、E224A、E224P、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230N、D230R、D230T、D230W、N233D、N233E、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251A、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256D、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260T、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、D264N、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308E、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309E、K309G、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K312A、K312E、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、Y321F和N323R。
10.如段落8或9所述的方法，其中与SEQ ID NO:1中所示的多肽相比，该变体包含2-20个，例如2-10和2-5，如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个改变。
11.如段落8至10中任一项所述的方法，其中该分散蛋白亲本获得自土地芽孢杆菌属，优选地嗜糖土地芽孢杆菌、哥里土地芽孢杆菌或嗜糖土地芽孢杆菌。
12.如段落8至11中任一项所述的方法，其中该分散蛋白亲本包含一个或多个以下基序：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ ID NO9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、[WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)。
13.如段落8至12中任一项所述的方法，其中该亲本分散蛋白选自以下多肽的组：
a)多肽，该多肽包含SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列或是与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性的多肽，
b)多肽，该多肽包含SEQ ID NO 2中所示的氨基酸序列或是与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性的多肽，
c)多肽，该多肽包含SEQ ID NO 3中所示的氨基酸序列或是与其具有至少95％、如至少96％、如至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性的多肽，
d)多肽，该多肽包含SEQ ID NO 4中所示的氨基酸序列或是与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性的多肽，和
e)多肽，该多肽包含SEQ ID NO 5中所示的氨基酸序列或是与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性的多肽。
14.一种组合物，优选地清洁组合物，其包含如段落1至7中任一项所述的变体。
15.一种清洁物品的方法，该方法包括a)向该清洁组合物中添加如段落1至7中任一项所述的分散蛋白变体并且b)用该组合物洗涤物品，其中该物品是纺织品或硬表面。
16.一种用于寻找改进的多肽变体的方法，该方法包括以下步骤：
a)在经选择的，优选地所有多肽位置处产生多样性，从而制备多肽变体(VL)的文库，并且
b)选择具有改进的变体的子文库(VLSub)。
17.一种用于寻找改进的多肽变体的方法，该方法包括以下步骤：
a)在经选择的，优选地所有多肽位置处产生多样性，从而制备多肽变体(VL)的文库，
b)将多肽变体(VL)的文库的一部分暴露于适用于测量目的特性的一种或多种应激条件下，从而产生应激VLS+n和未应激VLUS文库；
c)比较该应激VLS和未应激VLUS文库；以及
d)选择具有改进的变体的子文库(VLSub)。
18.如段落16或17中任一项所述的方法，其中该子文库(VLSub)中变体的数目在2-20个多肽变体的范围内、优选的在5-20个多肽变体的范围内、优选的在5-10个多肽变体的范围内、优选的在8-20个多肽变体的范围内或在8-15个多肽变体的范围内。
19.如段落16至18中任一项所述的方法，其中应激条件是优选地升高的温度如高于37℃、高于41℃、高于46℃、或高于50℃。
20.如段落16至19中任一项所述的方法，其中这些多肽变体选自如段落1至7中任一项所述的分散蛋白变体。
方法
测定和洗涤剂组合物
标准洗涤剂A组合物(液体)
成分：12％LAS、11％AEO Biosoft N25-7(NI)、7％AEOS(SLES)、6％MPG(丙二醇)、3％乙醇、3％TEA、2.75％可可皂、2.75％大豆皂、2％甘油、2％氢氧化钠、2％柠檬酸钠、1％甲酸钠、0.2％DTMPA和0.2％PCA(所有的百分数都是w/w(重量百分比％))。
除非另外提及，由如下所述的位点饱和库制成测试的变体。
SSL的构建
针对酶中的每个氨基酸位置构建位点饱和库。将所得的转化体接种到含有6μg/ml氯霉素的LB琼脂板上，并在37℃下生长过夜。第二天，将188个单个菌落从每个SSL中挑取并用于在96孔MTP中接种具有6μg/ml氯霉素的200μl TB-Gly。将板生长过夜，并通过测序来鉴定每个克隆中含有的突变。然后将代表酶中每个位置处的20种可能氨基酸取代中的每种的培养物从生长MTP转移到新的MTP，并将所有这些收集的变体用于筛选。
生长和表达
将从收集的变体的MTP中接种的培养物在深孔板中在37℃下以700rpm振荡生长一天，这些深孔板具有补充有6μg/ml氯霉素的600μl Cal-18(Ostergaard PR,Wilting R,Lassen SF.2010.Identification and characterization of a bacterial glutamicpeptidase.[细菌谷氨酸肽酶的鉴定和表征]BMC Biochem.[BMC生物化学]11:47)。还将野生型作为参考接种在每个微量滴定板上的四个孔中。在生长后，将板离心以沉淀细胞，并针对改进的稳定性来筛选存在于上清液中的变体。
实例
实例1生长和表达
将构建的变体铺板于补充有6μg/ml氯霉素的LB琼脂上，并在37'C下生长一天。生长后，将菌落挑到深孔96孔微孔板或标准96孔微孔板(分别含有补充有6μg/ml的氯霉素的600μl或200ul Cal18-2(Ostergaard PR,Wilting R,Lassen SF.2010.Identificationand characterization of a bacterial glutamic peptidase.[细菌谷氨酸肽酶的鉴定和表征]BMC Biochem.[BMC生物化学]11:47)培养液)的各个孔中。还将野生型分散蛋白(SEQ ID NO 1)作为参考接种在每个微量滴定板上的四个孔中。将深孔微量滴定板在37'C下以700rpm震荡生长一天并将标准96孔微量滴定板在30℃下以225rpm震荡生长3天。
实例2a测验变体的稳定性
pH 8下热稳定性的测量
如上所述，将变体制成位点饱和文库。将如实例1中所述的生长的每个上清液样品在50mM Tris-HCl，pH 8.0中稀释20倍。将样品分成两份：将一份在室温下孵育60分钟(21℃，未应激样品)，而将第二份在PCR仪中在41℃下孵育60分钟(应激样品)。在孵育后，将5μl的样品转移到含有35μl分散蛋白测定溶液(添加0.5mg/ml对硝基苯基-N-乙酰基-β-D-氨基葡糖苷的45mM柠檬酸盐缓冲液pH 5)的384孔MTP中。然后将384孔板在室温下孵育3小时。孵育后，将40μl终止溶液(0.4M Na2CO3)添加到样品中并读取405nm处的吸光度。通过减去无分散蛋白的参考获得的吸光度测量值，针对背景进行测量值校正。将每个分散蛋白变体和参考分散蛋白的残留活性(RA)计算为应激和未应激样品之间背景校正活性的比。随后将这些值用于计算残留活性比(RAR＝RA变体/RA参考)，将该残留活性比用作具有改进稳定性的命中的选择标准。具有改进稳定性的变体将具有RAR>1，因为根据定义，此设置中主链的RAR将为1.0。结果示于表1中。
表1
Figure BDA0003281929810002301
Figure BDA0003281929810002311
表1示出了所有分散蛋白变体都具有改进的RAR，即RAR大于1，并且因此在测试条件下，与不具有以上取代的分散蛋白相比例如与SEQ ID NO1中所示的分散蛋白相比，这些分散蛋白变体更稳定。
实例2b测验变体的稳定性
生长和表达
将构建的变体和用于这些变体的主链在标准96孔微量滴定板(200ul培养液/孔)中生长。用于生长和表达的所使用的培养液是补充有6ug/ml的氯霉素的Cal18-2(Ostergaard PR,Wilting R,Lassen SF.2010.Identification and characterizationof a bacterial glutamic peptidase.[细菌谷氨酸肽酶的鉴定和表征]BMC Biochem.[BMC生物化学]11:47)。使微量滴定板在30℃下以225rpm振荡生长3天。生长后，将板离心并将上清液应激并测定稳定性。关于生长、应激和测定的所有步骤均在96或384孔格式的微量滴定板中完成。
在80％(v/v)标准A+/-1.0％(v/v)蛋白酶存在下的稳定性测量
将上清液在含有1.25％(v/v)蛋白酶(SEQ ID NO 6)的标准A洗涤剂中稀释5倍。混合后，将样品分成两份。将一份在室温下孵育60分钟(21℃，未应激样品)，而将第二份在PCR仪中在56℃下孵育60分钟(应激样品)。在孵育后，在通过转移5ul样品至含有35ul测定溶液(补充有1.0mg/ml对硝基苯基-N-乙酰基-β-D-氨基葡糖苷(西格玛奥德里奇公司(SigmaAldrich))的45mM柠檬酸盐缓冲液pH 5.0)的384孔微量滴定板中来确定未应激和应激样品的活性前，将样品在稀释缓冲液(100mM Tris-HCl，0.01％(v/v)TritonX-100，pH 8.0)中稀释8倍。在室温下孵育12小时后，通过加入40μl终止溶液(0.4M Na2CO3)来终止反应，并读取405nm(A405)处的吸光度。对每个样品，如下计算残留活性(RA)：RA＝A405(应激样品)/A405(未应激样品)。在计算RA前，将所有A405测量值针对空白样品(不存在分散蛋白)的信号校正。将RA用于计算变体和主链的半衰期：半衰期(分钟)＝60(分钟)x Ln(0.5)/每个变体和主链的Ln(RA)。对每个变体，如下计算半衰期改善因子(HIF)：HIF＝半衰期(变体)/半衰期(主链)。具有改进稳定性的变体将具有HIF>1，因为根据定义，此设置中主链的HIF将为1.0。
表2
Figure BDA0003281929810002321
Figure BDA0003281929810002331
Figure BDA0003281929810002341
Figure BDA0003281929810002351
表2示出了所有分散蛋白变体都具有改进的HIF，即HIF大于1，并且因此在测试条件下，与不具有以上改变的分散蛋白相比例如与SEQ ID NO 1中所示的分散蛋白相比，这些分散蛋白变体更稳定。
实例3生成SSL并将所得库作为池筛选
SSL的构建
针对酶中的每个氨基酸位置构建位点饱和库并通过转化体池的测序确认预期的多样性。将生长的转化体池储存在-80℃直至使用。
生长和表达
将从转化体池中接种的培养物在深孔板中在37℃下以700rpm振荡生长一天，这些深孔板具有补充有6μg/ml氯霉素的600μl Cal-18(Ostergaard PR,Wilting R,LassenSF.2010.Identification and characterization of a bacterial glutamicpeptidase.[细菌谷氨酸肽酶的鉴定和表征]BMC Biochem.[BMC生物化学]11:47)。还将野生型作为参考接种在每个微量滴定板上的四个孔中。在生长后，将板离心以沉淀细胞，并针对改进的稳定性来筛选存在于上清液中的变体。
测试分散蛋白变体的稳定性
将每个上清液样品在50mM Tris-HCl，pH 8.0中稀释20倍。将样品分成两部分：将5μl转移到384孔MTP(无应激参考)并将10μl转移到384孔PCR板。将PCR板在PCR仪中在47℃下应激30min，而将未应激的参考板保持在室温(21℃)。孵育后，在使用对硝基苯基-N-乙酰基-β-D-氨基葡糖苷(pNP-NAG)测定所有样品的活性前，将5μl应激样品转移至384孔MTP中。
分散蛋白活性测定
对于分散蛋白活性测量，向制备的含有5μl样品的384孔微量滴定板中添加35μl分散蛋白测定溶液(添加0.5mg/ml对硝基苯基-N-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖的45mM柠檬酸盐缓冲液pH 5)。然后将384孔板在室温下孵育3小时。孵育后，将40μl终止溶液(0.4M Na2CO3)添加到样品中并测量405nm处的吸光度。通过减去无分散蛋白的参考获得的吸光度测量值，针对背景进行获得活性值校正。将每个分散蛋白变体池和参考分散蛋白的残留活性(RA)计算为应激和未应激样品之间背景校正活性的比。随后将这些值用于计算残留活性比(RAR池＝RA池/RA参考)，将该残留活性比用于根据含有一种或多种稳定变体的可能性来对文库进行优先排序。
SSL命中选择
池获得的结果将是池中含有的所有变体的平均值并且因此发现改进候选者的可能性随着比率(RAR池)值更高而显著增加。具有最高比率和高于参考确定的比率(即RAR池>1)的SSL被认为是最感兴趣的。在此特定实例中，选择RAR池>2的六个SSL池来筛选其中所代表的分离克隆之间的改进特性。
铺板、再生、再筛选和测序
将选择的变体池(命中)铺板于补充有6μg/ml氯霉素的LB琼脂上，并在37℃下生长一天。生长后，将菌落挑到深孔96孔深孔板(含有补充有6μg/ml的氯霉素的600μl Cal18-2(Ostergaard PR,Wilting R,Lassen SF.2010.Identification and characterizationof a bacterial glutamic peptidase.[细菌谷氨酸肽酶的鉴定和表征]BMC Biochem.[BMC生物化学]11:47)培养液)的各个孔中。还将分散蛋白(SEQ ID NO 1)作为参考接种在每个微量滴定板上的四个孔中。使微量滴定板在37℃下以700rpm振荡生长一天。在生长后，在47℃下在50mM Tris-HCl，pH 8.0中对上清液施加应激30分钟后，筛选上清液的残留活性。将以下标准用于鉴定收集的数据。无应激参考获得的背景校正活性应至少为0.25。选择命中的标准基于WT获得的RA，将其确定为0.1。如果样本的RA变体/RA参考等于RAR>1，则该样本被视为命中。
表3a.
Figure BDA0003281929810002371
Figure BDA0003281929810002381
表3a示出了具有改进的RAR池，即RAR池大于1的SSL文库的子集，并且因此在测试条件下，与不具有以上取代的分散蛋白相比例如与SEQ ID NO 1中所示的分散蛋白相比，该子集含有给与更多的平均稳定性的取代的混合物。
通过在SSL构建期间使用稳定的酶变体(SEQ ID NO 17)作为模板制成的筛选池来重复以上实验，但残留活性比(RAR)在标准洗涤剂A(存在蛋白酶(SEQ ID NO 16))中测量。结果示于下表3a*中。
表3a*
Figure BDA0003281929810002382
Figure BDA0003281929810002391
通过在SSL构建期间使用(SEQ ID NO 1)作为模板制成的筛选池来重复以上实验，并且残留活性比(RAR)在标准洗涤剂A中测量。结果示于下表3b中。
表3b.
Figure BDA0003281929810002401
表3b示出了具有改进的RAR，即RAR大于1的分散蛋白变体，并且因此在测试条件下，与不具有以上取代的分散蛋白相比例如与SEQ ID NO 1中所示的分散蛋白相比，这些分散蛋白变体更稳定。
通过从使用稳定的酶变体(SEQ ID NO 17)作为模板制成的SSL中筛选选择的位置来重复以上实验，但残留活性比(RAR)在标准洗涤剂A(存在蛋白酶(SEQ ID NO 16))中测量。结果示于下表3b*中。
Figure BDA0003281929810002411
通过在SSL构建期间使用SEQ ID NO 1作为模板制成的筛选池来重复以上实验，并且残留活性比(RAR)在标准洗涤剂A中测量。结果示于下表3c中。
表3c.
Figure BDA0003281929810002412
Figure BDA0003281929810002421
表3c示出了具有改进的RAR，即RAR大于1的分散蛋白变体，并且因此在测试条件下，与不具有以上取代的分散蛋白相比例如与SEQ ID NO 1中所示的分散蛋白相比，这些分散蛋白变体更稳定。
实例4具有1-3个突变的组合变体
生长和表达
将构建的变体和用于变体的主链在标准96孔微量滴定板200ul Cal18-2培养液(Ostergaard PR,Wilting R,Lassen SF.2010.Identification and characterizationof a bacterial glutamic peptidase.[细菌谷氨酸肽酶的鉴定和表征]BMC Biochem.[BMC生物化学]11:47)(补充有6ug/ml的氯霉素的培养液/孔)中生长。使微量滴定板在30℃下以225rpm振荡生长3天。生长后，将板离心并将上清液应激并测定稳定性。关于生长、应激和测定的所有步骤均在96或384孔格式的微量滴定板中完成。
在升高的温度下测量稳定性
将每个上清液样品在应激缓冲液(100mM Tris-HCl，0.01％(v/v)TritonX-100，pH8.0)中稀释10倍。混合后，将样品分成四份并将两个样品在室温下孵育(21℃，未应激样品)并将另外两个样品(应激样品)分别在PCR仪中在41℃和46℃下孵育120分钟。在孵育后，通过转移5ul的每个样品至含有35ul测定溶液(补充有1.0mg/ml对硝基苯基-N-乙酰基-β-D-氨基葡糖苷(西格玛奥德里奇公司(Sigma Aldrich))的45mM柠檬酸盐缓冲液pH 5.0)的384孔微量滴定板中来确定未应激和应激样品的活性。在室温下孵育3小时后，通过加入40μl终止溶液(0.4M Na2CO3)来终止反应，并读取405nm(A405 nm)处的吸光度。对每个样品，如下计算残留活性(RA)：RA＝A405(应激样品)/A405(未应激样品)。在计算RA前，将所有A405nm测量值针对空白样品(不存在分散蛋白)的信号校正。如果RA(变体)>RA(主链)，则变体的稳定性改进。
表4
Figure BDA0003281929810002431
Figure BDA0003281929810002441
Figure BDA0003281929810002451
表4示出了与SEQ ID NO 1相比添加几个取代的作用。显示可以组合单个稳定取代以产生更稳定或与具有少于一个取代的相应变体相当的变体。
实例5具有4-9个突变的组合变体
生长和表达
将构建的变体和用于这些变体的主链在96深孔(600ul培养液/孔)或标准96孔微量滴定板(200ul培养液/孔)中生长。用于生长和表达的所使用的培养液是补充有6ug/ml的氯霉素的Cal18-2(Ostergaard PR,Wilting R,Lassen SF.2010.Identification andcharacterization of a bacterial glutamic peptidase.[细菌谷氨酸肽酶的鉴定和表征]BMC Biochem.[BMC生物化学]11:47)。将板在37℃下以700rpm振荡生长1天(96孔深孔板)或在30℃下以225rpm振荡生长3天(标准96孔微量滴定板)。生长后，将板离心并将上清液应激并测定稳定性。关于生长、应激和测定的所有步骤均在96或384孔格式的微量滴定板中完成。
在0.9g/L标准A+/-0.9％(v/v)蛋白酶存在下的稳定性测量
将每个上清液样品在应激缓冲液(补充有1g/L标准A洗涤剂的100mM Tris-HCl，0.01％(v/v)TritonX-100，pH 8.0)中稀释10倍。在应用蛋白酶应激的情况下，还向应激缓冲液中添加1％(v/v)蛋白酶(SEQ ID NO 7)。混合后，将样品分成在室温(21℃)下孵育的未应激样品和在PCR仪中在选择的应激温度(50℃、51℃、54℃、57℃和/或60℃)下孵育30分钟的应激样品。在孵育后，通过转移5ul的每个样品至含有35ul测定溶液(补充有1.0mg/ml对硝基苯基-N-乙酰基-β-D-氨基葡糖苷(西格玛奥德里奇公司(Sigma Aldrich))的45mM柠檬酸盐缓冲液pH 5.0)的384孔微量滴定板中来确定未应激和应激样品的活性。在室温下孵育3小时后，通过加入40μl终止溶液(0.4M Na2CO3)来终止反应，并读取405nm(A405)处的吸光度。对每个样品，如下计算残留活性(RA)：RA＝A405(应激样品)/A405(未应激样品)。在计算RA前，将所有A405测量值针对空白样品(不存在分散蛋白)的信号校正。将在测试的应激条件下稳定的变体定义为具有比使用的主链更高的RA的变体。
将所有变体均在30min内在0.9g/L标准A洗涤剂中测试。
表5
Figure BDA0003281929810002461
Figure BDA0003281929810002471
表6
Figure BDA0003281929810002472
表7
Figure BDA0003281929810002473
Figure BDA0003281929810002481
表5、6和7示出了与SEQ ID NO 1相比添加几个取代的作用。显示可以组合单个稳定取代以产生比具有少于一个取代的相应变体更大或与其相当的稳定性的变体。
实例6热稳定性测试
生长和表达
将变体如前述实例中所述的生长和表达并如下所述的纯化。
纯化
将培养液离心(26000x g，20min)并且将上清液小心地与沉淀物倾析分开。将上清液通过耐洁(Nalgene)0.2μm过滤装置过滤以便除去剩余的芽孢杆菌属宿主细胞。将0.2μm滤液转移至位于G25葡聚糖凝胶柱(来自GE医疗集团)上的20mM MES/NaOH，pH 6.0。将G25转移溶液施加至在20mM MES/NaOH(pH 6.0)中平衡的SOURCE Q柱(来自GE医疗集团)上。在将柱用平衡缓冲液充分地洗涤之后，将蛋白酶用在相同的缓冲液中的线性NaCl梯度(0→1.0MNaCl)洗脱超过五个柱体积。在洗脱过程中收集级分并通过SDS-PAGE分析收集的级分。将级分(考马斯亮蓝染色后，仅见到一条带)合并为纯化的制剂并且用于另外的实验。
稳定性的测量
将纳米差示扫描荧光法(nDSF)用于确定热稳定性。将nDSF的分散蛋白变体在50mM2-(N-吗啉)乙磺酸(ethansulfonsyre)(MES)、50mM甘氨酸、50mM乙酸(pH 7)或50mM MES、50mM甘氨酸、50mM乙酸(pH7)和x(x＝2或50)g/L标准A(标准洗涤剂A)中稀释至约0.2mg/mL(>10倍稀释)。在96孔微量滴定板中制成样品稀释液并将其转移到384孔微量板中。用于nDSF实验的仪器是带有来自纳米温度公司(Nanotemper)的自动进样器的PrometheusNT.48或Prometheus NT.Plex。对Prometheus NT.48，使用单毛细管(PR-C002)手动加载样品，而使用毛细作用片(PR-AC002)将样品加载到Prometheus NT.Plex中。实验在20℃至95℃间进行，温度梯度为3.3℃/min。使用PR.ThermControl软件从源自信号轨迹的一阶导数的峰值(350/330nm荧光比或330nm荧光)获得解链温度(Tm值)。
表8变体的热稳定性
Figure BDA0003281929810002491
Figure BDA0003281929810002501
Figure BDA0003281929810002511
表8a
Figure BDA0003281929810002512
Figure BDA0003281929810002521
Figure BDA0003281929810002531
Figure BDA0003281929810002541
Figure BDA0003281929810002551
Figure BDA0003281929810002561
表8+8A示出了将本发明中提到的取代添加到SEQ ID NO 1通常增加缓冲系统中和补充有洗涤剂标准A的缓冲液中的Tm(解链温度)值。此处将Tm增加用作变体增加的稳定性的评估。
表9包含二硫桥的变体的热稳定性
Figure BDA0003281929810002562
Figure BDA0003281929810002571
Figure BDA0003281929810002581
表9示出了，对于所有测试变体(碱基突变+/-二硫桥)，添加二硫桥A269C+Y282增加了缓冲系统中和补充有洗涤剂标准A的缓冲液中的Tm(解链温度)值(约2℃-10℃＝ΔTm)。此处将Tm增加用作变体增加的稳定性的评估。
序列表
<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）
<120> 多肽变体
<130> 14861-WO-PCT
<160> 17
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 324
<212> PRT
<213> 食物芽孢杆菌
<400> 1
Gln Asp Gln Glu Lys Gly Ile Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys His Tyr
1 5 10 15
Thr Val Glu Thr Leu Lys Ser Leu Val Asp Glu Ile Ser Tyr Asn Gly
20 25 30
Gly Asn Tyr Val Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Asn Tyr Ala Ile
35 40 45
Ala Ser Glu Tyr Leu Gly Gln Ser Ser Glu Asn Thr Asn Asn Thr Tyr
50 55 60
Leu Thr Lys Asn Glu Leu Leu Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Lys
65 70 75 80
Asp Ile Leu Val Ile Pro Asp Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Lys Gly
85 90 95
Trp Leu Glu Leu Ile Lys Lys Lys Asp Val Lys Leu Tyr Asn Asp Ile
100 105 110
Val Thr Asp Tyr Ser Glu Glu Thr Leu Asp Tyr Tyr Asp Asn Arg Val
115 120 125
Ala Leu Asp Thr Val Asn Gln Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe
130 135 140
Tyr Gln Pro Lys Phe Glu Gly Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp
145 150 155 160
Glu Val Ser Gly Ser Glu Val His Gln Leu Asp Phe Ile Asp Phe Met
165 170 175
Asn Gln Ile Ala Ser Thr Val Lys Glu Ser Lys Tyr Glu Pro Gln Met
180 185 190
Trp Asn Asp Ser Ile Thr Ser Glu Gly Ile Ala Asn Leu Asp Asp Ser
195 200 205
Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Gln Gln Ser Thr Leu Ser Ser Gly Glu Glu
210 215 220
Ser Leu Asn Val Glu Asp Phe Glu Asn Trp Gly Phe Ser Val Tyr Asn
225 230 235 240
Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ser Asn Gly Phe Thr Gln
245 250 255
Glu Asp Ile Asn Glu Gln Met Asp Tyr Met Asn Trp Ala Tyr Ala His
260 265 270
Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr His Ala Val Glu Thr Ser
275 280 285
Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Thr Phe Trp Gly Glu His Ala Thr Asp
290 295 300
Leu Ser Gln Lys Lys Leu Leu Lys Gln Glu Leu Pro Leu Ile Arg His
305 310 315 320
Tyr Leu Asn Leu
<210> 2
<211> 324
<212> PRT
<213> 食物芽孢杆菌
<400> 2
Gln Asp Gln Glu Lys Gly Ile Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr
1 5 10 15
Ser Ile Lys Thr Leu Lys Ala Ile Val Asp Glu Ile Ser Ala Asn Gly
20 25 30
Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Ser Tyr Ala Ile
35 40 45
Ala Ser Glu Phe Leu Gly Gln Asn Ser Glu Asn Pro Asn Ser Ala Tyr
50 55 60
Leu Thr Lys Lys Glu Leu Leu Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg
65 70 75 80
Asn Ile Met Val Ile Pro Asp Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Lys Gly
85 90 95
Trp Leu Asn Ile Met Lys Glu Lys Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Asp Ile
100 105 110
Val Thr Asp Tyr Ser Glu Asp Thr Leu Asp Tyr His Asn Asn Ala Val
115 120 125
Ala Leu Tyr Thr Ala Asn Gln Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe
130 135 140
Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp
145 150 155 160
Glu Val Pro Gly Ser Gly Ala His Gln Thr Asp Phe Ile Arg Phe Met
165 170 175
Asn Gln Ile Ala Lys Thr Ala Lys Ala Ser Asn Tyr Glu Pro Gln Met
180 185 190
Trp Asn Asp Ser Ile Thr Pro Glu Gly Ile Gln Asn Leu Asp Arg Ser
195 200 205
Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys Gln Ser Thr Leu Ser Asn Gly Ala Gln
210 215 220
Ser Leu Asp Val Gln Asp Phe Glu Glu Asn Gly Leu Ser Val Tyr Asn
225 230 235 240
Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ser Thr Arg Phe Thr Gln
245 250 255
Glu Asp Ile Thr Glu Gln Ile Asp Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr
260 265 270
Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr Lys Gln Val Asp Thr Pro
275 280 285
Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Val Phe Trp Gly Glu His Ala Asn Asp
290 295 300
Leu Ser Gln Glu Gly Leu Leu Lys Gln Glu Lys Pro Leu Ile Gln Asn
305 310 315 320
Phe Leu Gly Leu
<210> 3
<211> 324
<212> PRT
<213> 哥里土地芽孢杆菌
<400> 3
Gln Asp Gln Glu Lys Gly Ile Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr
1 5 10 15
Ser Ile Glu Thr Leu Lys Ser Ile Ile Asp Glu Ile Ser Ala Asn Gly
20 25 30
Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Arg Tyr Ala Ile
35 40 45
Ala Ser Glu Phe Leu Gly Gln Asn Gly Glu Asn Pro Asn Ser Thr Tyr
50 55 60
Leu Thr Lys Lys Glu Leu Leu Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg
65 70 75 80
Asp Ile Met Val Ile Pro Asp Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Arg Gly
85 90 95
Trp Leu Asn Ile Met Lys Glu Lys Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Asp Ile
100 105 110
Val Thr Asp Tyr Ser Glu Asp Thr Leu Asp Tyr His Asn Asn Ala Val
115 120 125
Ala Leu Tyr Thr Ala Asn Gln Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe
130 135 140
Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp
145 150 155 160
Glu Val Pro Gly Ser Gly Val His Gln Thr Asp Phe Ile Arg Phe Met
165 170 175
Asn Gln Ile Ala Glu Thr Ala Lys Ala Ser Asn Tyr Lys Pro Gln Met
180 185 190
Trp Asn Asp Ser Ile Thr Pro Glu Gly Ile Gln Asn Leu Asp Arg Ser
195 200 205
Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys Gln Ser Thr Leu Ser Asn Gly Ala Gln
210 215 220
Gly Leu Asp Val Gln Asp Phe Glu Glu Asn Gly Leu Ser Val Tyr Asn
225 230 235 240
Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ala Thr Arg Phe Thr Gln
245 250 255
Glu Asp Ile Thr Glu Gln Ile Asp Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr
260 265 270
Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr Lys Gln Val Asp Thr Ser
275 280 285
Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Val Phe Trp Gly Glu His Ala Asn Asp
290 295 300
Leu Ser Gln Glu Gly Leu Leu Lys Gln Glu Lys Pro Leu Ile Gln Asn
305 310 315 320
Phe Leu Gly Leu
<210> 4
<211> 324
<212> PRT
<213> 食物芽孢杆菌
<400> 4
Lys Asp Gln Glu Lys Gly Ile Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr
1 5 10 15
Ser Ile Gly Thr Leu Lys Ala Ile Val Asp Glu Ile Asn Ala Asn Gly
20 25 30
Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Ser Tyr Ala Ile
35 40 45
Ala Ser Glu Phe Leu Gly Gln Asn Ser Glu Asn Pro Asn Ser Thr Tyr
50 55 60
Leu Thr Lys Lys Glu Leu Leu Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg
65 70 75 80
Asn Ile Met Val Ile Pro Asp Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Lys Gly
85 90 95
Trp Leu Asn Val Met Lys Glu Lys Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Asp Ile
100 105 110
Val Thr Asp Tyr Ser Glu Asp Thr Leu Asp Tyr His Asn Asn Ala Ala
115 120 125
Ala Leu Tyr Thr Ala Asn Gln Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe
130 135 140
Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp
145 150 155 160
Glu Val Pro Gly Ser Gly Ala His Gln Thr Asp Phe Ile Arg Phe Met
165 170 175
Asn Gln Ile Asp Glu Thr Ala Lys Ala Ser Asn Tyr Glu Pro Gln Met
180 185 190
Trp Asn Asp Ser Ile Thr Pro Glu Gly Ile Gln Asn Leu Asp Arg Ser
195 200 205
Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys Gln Ser Thr Leu Ser Ser Gly Ala Gln
210 215 220
Gly Leu Asp Val Gln Asn Phe Glu Glu Lys Gly Phe Ser Val Tyr Asn
225 230 235 240
Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ser Thr Arg Phe Thr Gln
245 250 255
Glu Asp Ile Thr Glu Gln Ile Asp Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr
260 265 270
Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr Lys Gln Val Asp Thr Ser
275 280 285
Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Val Phe Trp Gly Glu His Ala Asn Asp
290 295 300
Leu Ser Gln Glu Gly Leu Leu Glu Gln Glu Lys Pro Leu Ile Gln Asn
305 310 315 320
Phe Leu Ser Leu
<210> 5
<211> 324
<212> PRT
<213> 食物芽孢杆菌
<400> 5
Lys Asp Gln Glu Lys Gly Ile Ser Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr
1 5 10 15
Ser Ile Gly Thr Leu Lys Ala Ile Ile Asp Glu Ile Ser Ala Asn Gly
20 25 30
Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Ser Tyr Ala Ile
35 40 45
Ala Ser Asp Tyr Leu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Pro Asn Asn Thr Tyr
50 55 60
Leu Thr Lys Asn Asp Leu Leu Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg
65 70 75 80
Asn Ile Leu Ile Ile Pro Asp Met Asp Leu Pro Ala His Ser Arg Gly
85 90 95
Trp Leu Glu Leu Met Lys Val Lys Asp Arg Glu Leu Tyr Thr Asp Ile
100 105 110
Val Thr Asp Tyr Ser Asn Glu Thr Leu Asp Tyr His Asn Asn Thr Asp
115 120 125
Ala Leu Asn Thr Ala Asn Gln Leu Leu Asn Glu Ile Leu Glu Leu Phe
130 135 140
Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp
145 150 155 160
Glu Val Pro Gly Ser Glu Ile His Gln Leu Asp Phe Ile Arg Phe Ile
165 170 175
Asn Gln Ile Ala Ser Thr Ala Lys Ala Ser Asn Tyr Ala Pro Gln Met
180 185 190
Trp Asn Asp Ser Ile Thr Ala Glu Gly Ile Gln Asn Leu Asp Lys Ser
195 200 205
Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys Gln Ser Thr Leu Ser Asn Gly Ala Gln
210 215 220
Ser Leu Glu Val Gln Asp Phe Glu Asp Trp Asp Phe Pro Val Tyr Asn
225 230 235 240
Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ser Ile Arg Phe Thr Asp
245 250 255
Glu Asp Ile Thr Glu Gln Met Asn Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr
260 265 270
Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr Lys Ser Val Asp Ala Ser
275 280 285
Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Thr Phe Trp Gly Glu His Ala Thr Asp
290 295 300
Leu Ser Gln Glu Glu Leu Leu Glu Gln Glu Leu Pro Leu Ile Lys Lys
305 310 315 320
Phe Leu Ser Leu
<210> 6
<211> 269
<212> PRT
<213> 克劳氏芽孢杆菌
<400> 6
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asp Gly Glu Gly Ala Ile Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Asp Gly Ala Ser Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Glu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 7
<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 7
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Glu Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Arg Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asp Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Ile Leu Ser Thr Trp Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Asp Thr Trp Glu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 8
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人工合成肽
<220>
<221> 混合
<222> (2)..(2)
<223> X =任何天然氨基酸
<400> 8
Gly Xaa Asp Glu
1
<210> 9
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人工合成肽
<220>
<221> 混合
<222> (1)..(1)
<223> X=Glu（E）或Gln（Q)
<220>
<221> 混合
<222> (2)..(2)
<223> X=Asn（N）或Arg（R）或Ser（S）或His（H）或Ala（A）
<220>
<221> 混合
<222> (3)..(3)
<223> X=Tyr（Y）或Val（V）或Phe（F）或Leu（L）
<220>
<221> 混合
<222> (4)..(4)
<223> X=Ala（A）或Gly（G）或Ser（S）或Thr（T）或Cys（C）
<220>
<221> 混合
<222> (5)..(5)
<223> X=Ile（I）或Val（V）或Leu（L）或Phe（F）
<220>
<221> 混合
<222> (6)..(6)
<223> X=Glu（E）或Ala（A）或Gln（Q）或Tyr（Y）或Asn（N）
<220>
<221> 混合
<222> (7)..(7)
<223> X= Ser（S）或Asn（N）
<400> 9
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 10
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人工合成肽
<220>
<221> 混合
<222> (1)..(1)
<223> X=Val（V）或Ile（I）或Met（M）
<220>
<221> 混合
<222> (2)..(2)
<223> X=Leu（L）或Ile（I）或Val（V）
<220>
<221> 混合
<222> (4)..(4)
<223> X=Gly（G）或Ala（A）或Val（V）
<220>
<221> 混合
<222> (7)..(7)
<223> X=Val（V）或Ile（I）
<220>
<221> 混合
<222> (8)..(8)
<223> X=Phe（P）或Ser（S）或Ala（A）
<400> 10
Xaa Xaa Gly Xaa Asp Glu Xaa Xaa
1 5
<210> 11
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人工合成肽
<220>
<221> 混合
<222> (4)..(4)
<223> X=Ser（S）或Gln（Q）或Arg（R）
<220>
<221> 混合
<222> (5)..(5)
<223> X=Ile（I）或Val（V）或Leu（L）
<220>
<221> 混合
<222> (6)..(6)
<223> X=Thr（T）或Leu（L）或Val（V）或Met（M）
<400> 11
Trp Asn Asp Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 12
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人工合成肽
<400> 12
Gln Ser Thr Leu
1
<210> 13
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人工合成肽
<400> 13
Asn Lys Phe Phe Tyr
1 5
<210> 14
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人工合成肽
<220>
<221> 混合
<222> (4)..(4)
<223> X = Asp（D）或Arg（R）
<400> 14
Asn Leu Asp Xaa Ser
1 5
<210> 15
<211> 324
<212> PRT
<213> 食物芽孢杆菌
<400> 15
Gln Asp Gln Glu Lys Gly Ile Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys His Tyr
1 5 10 15
Thr Val Glu Thr Leu Lys Ser Leu Val Asp Glu Ile Ser Tyr Asn Gly
20 25 30
Gly Asn Tyr Val Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Asn Tyr Ala Ile
35 40 45
Ala Ser Glu Tyr Leu Gly Gln Ser Ser Glu Asn Thr Asn Asn Thr Tyr
50 55 60
Leu Thr Lys Asn Glu Leu Leu Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Lys
65 70 75 80
Asp Ile Leu Val Ile Pro Asp Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Lys Gly
85 90 95
Trp Leu Glu Leu Ile Lys Lys Lys Asp Val Lys Leu Tyr Asn Asp Ile
100 105 110
Val Thr Asp Tyr Ser Glu Glu Thr Leu Asp Tyr Tyr Asp Asn Arg Val
115 120 125
Ala Leu Asp Thr Val Asn Gln Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe
130 135 140
Tyr Gln Pro Lys Phe Glu Gly Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp
145 150 155 160
Glu Val Pro Gly Ser Glu Val His Gln Leu Asp Phe Ile Asp Phe Met
165 170 175
Asn Gln Ile Ala Ser Thr Val Lys Glu Ser Lys Tyr Glu Pro Gln Met
180 185 190
Trp Asn Asp Ser Ile Thr Ser Glu Gly Ile Ala Asn Leu Asp Asp Ser
195 200 205
Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys Gln Ser Thr Leu Ser Ser Gly Glu Glu
210 215 220
Ser Leu Thr Val Glu Asp Phe Glu Asn Trp Gly Phe Ser Val Tyr Asn
225 230 235 240
Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ser Pro Gly Phe Thr Gln
245 250 255
Glu Asp Ile Asn Glu Gln Met Asp Tyr Met Thr Trp Ala Tyr Ala His
260 265 270
Asn Lys Phe Ala Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr His Ala Val Glu Thr Ser
275 280 285
Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Thr Phe Trp Gly Glu His Ala Thr Asp
290 295 300
Leu Ser Gln Glu Glu Leu Leu Glu Gln Glu Leu Pro Leu Ile Arg His
305 310 315 320
Tyr Leu Asn Leu
<210> 16
<211> 271
<212> PRT
<213> 克劳氏芽孢杆菌
<400> 16
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Glu Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Arg Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asp Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Glu Pro Glu Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Pro Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asp Ile Leu Ser Thr Trp Pro Gly Gly Thr Tyr
195 200 205
Ala Val Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Glu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg His His
260 265 270
<210> 17
<211> 324
<212> PRT
<213> 枯草芽孢杆菌
<400> 17
Gln Asp Gln Glu Lys Gly Ile Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys His Tyr
1 5 10 15
Thr Val Glu Thr Leu Lys Ser Leu Val Asp Glu Ile Ser Tyr Asn Gly
20 25 30
Gly Asn Tyr Val Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Asn Tyr Ala Ile
35 40 45
Trp Ser Glu Tyr Leu Gly Gln Ser Ser Glu Glu Thr Asn Asn Thr Tyr
50 55 60
Leu Thr Lys Asn Glu Leu Leu Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Lys
65 70 75 80
Asp Ile Leu Val Ile Pro Asp Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Lys Gly
85 90 95
Trp Leu Glu Leu Ile Lys Lys Lys Asp Val Lys Leu Tyr Asn Asp Ile
100 105 110
Val Thr Asp Tyr Ser Glu Glu Thr Leu Asp Tyr Tyr Asp Asn Arg Val
115 120 125
Ala Leu Asp Thr Val Asn Gln Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe
130 135 140
Tyr Gln Pro Lys Phe Glu Gly Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp
145 150 155 160
Glu Val Pro Gly Ser Glu Val His Gln Leu Asp Phe Ile Asp Phe Met
165 170 175
Asn Gln Ile Ala Ser Thr Val Lys Glu Arg Lys Tyr Glu Pro Gln Met
180 185 190
Trp Asn Asp Ser Ile Thr Ser Glu Gly Ile Ala Asn Leu Asp Asp Ser
195 200 205
Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Gln Gln Ser Thr Leu Ser Ser Gly Glu Glu
210 215 220
Ser Leu Thr Val Glu Asp Phe Glu Asn Trp Gly Phe Ser Val Tyr Asn
225 230 235 240
Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ser Pro Gly Phe Thr Gln
245 250 255
Glu Asp Ile Asn Glu Gln Met Asp Tyr Met Asn Trp Ala Tyr Ala His
260 265 270
Asn Lys Phe Ala Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr His Ala Val Glu Thr Ser
275 280 285
Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Thr Phe Trp Gly Glu His Ala Thr Asp
290 295 300
Leu Ser Gln Glu Glu Leu Leu Glu Gln Glu Leu Pro Leu Ile Arg His
305 310 315 320
Tyr Leu Asn Leu

Claims (23)

1.一种分散蛋白变体，该分散蛋白变体在对应于一个或多个以下位置的一个或多个位置处包含改变，优选地取代：SEQ ID NO:1中所示的多肽的2、3、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、140、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、225、227、230、232、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321或323，其中该分散蛋白变体具有氨基己糖苷酶活性优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性，并且其中与具有SEQ ID NO:1的分散蛋白相比，该变体具有以半衰期改进因子HIF测量的增加的稳定性，优选地热稳定性。
2.一种分散蛋白变体，该分散蛋白变体包含选自由以下组成的组的至少一个改变：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、V25R、D26M、Y30*、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128C、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207N、D207Q、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、G222D、E224A、E224P、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、和N323R，其中这些位置对应于SEQ ID NO:1中所示的多肽的位置，其中该分散蛋白变体具有氨基己糖苷酶活性优选地β-1,6N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性。
3.如权利要求2所述的分散蛋白变体，其中该在一个或多个位置处的改变产生了分散蛋白变体，与SEQ ID NO:1中所示的多肽相比，该分散蛋白变体具有以至少1.1的改进因子HIF测量的增加的稳定性，优选地热稳定性。
4.如前述权利要求中任一项所述的分散蛋白变体，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
5.如前述权利要求中任一项所述的分散蛋白变体，其中该变体获得自土地芽孢杆菌属(Terribacillus)，优选地嗜糖土地芽孢杆菌(Terribacillus saccharophilus)、哥里土地芽孢杆菌(Terribacillus goriensis)或嗜糖土地芽孢杆菌。
6.如前述权利要求中任一项所述的分散蛋白变体，其中该变体包含一个或多个以下基序：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ ID NO 9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、[WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO 11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)。
7.如前述权利要求中任一项所述的分散蛋白变体，其中与具有SEQ ID NO:1中所示的多肽序列的分散蛋白相比，该分散蛋白变体具有以具有改进因子，例如RAR或HIF>1.0测量的改进的稳定性。
8.如前述权利要求中任一项所述的分散蛋白变体，其中与SEQ ID NO:1相比，该半衰期改进因子(HIF)是至少1.2例如1.5，其中HIF计算为T1/2分散蛋白变体/T1/2参考并且该分散蛋白变体和该参考分散蛋白(例如SEQ ID NO:1或15)的半衰期(T1/2，以分钟计)计算为：20分钟x LN(0.5)/LN(RA)并且每种分散蛋白变体和参考分散蛋白(例如SEQ ID NO:1)的残留活性(RA)计算为：斜率(应激样品，56℃持续60min)/斜率(无应激样品，21℃持续60min)，例如如实例2b中所述的。
9.如前述权利要求中任一项所述的分散蛋白变体，其中与包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的分散蛋白相比，与SEQ ID NO:1相比的取代总数为3-20，例如至少5至20、至少10至20或如至少15至20个取代。
10.一种用于获得分散蛋白变体的方法，该方法包括：
a)向具有氨基己糖苷酶，优选地β-1,6-N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性的分散蛋白亲本中引入在对应于以下位置的一个或多个位置处的改变，优选地取代：SEQ ID NO:1的多肽的2、3、12、15、17、18、19、22、23、24、25、26、30、32、34、43、44、45、49、52、54、56、57、58、59、60、62、63、67、68、71、72、74、77、79、80、81、82、90、99、100、103、104、105、106、107、110、111、113、114、116、117、118、119、120、122、123、124、125、126、127、128、131、135、138、139、140、142、145、147、148、149、150、151、152、163、164、167、168、170、171、173、174、175、177、178、179、181、185、186、187、188、189、199、200、203、204、205、207、208、210、215、217、218、221、222、224、225、227、230、232、233、234、235、237、244、249、251、252、253、254、256、260、261、262、263、264、265、267、268、270、271、272、273、274、276、278、279、280、281、282、283、284、287、288、290、291、296、300、301、303、304、305、306、308、309、312、314、315、319、321或323，
b)并且回收该变体。
11.如权利要求10所述的方法，该方法包括引入选自由以下组成的组的一个或多个改变：D2A、D2L、D2N、D2R、D2V、D2W、Q3F、Q3I、Q3L、Q3M、Q3P、Q3V、Q3Y、Q3T、S12A、H15F、H15Y、T17W、T17C、T17E、T17F、T17M、T17R、T17V、V18L、E19D、E19K、E19N、E19P、K22A、K22M、K22V、S23A、S23C、S23E、S23I、S23L、S23R、S23T、S23V、L24I、V25R、D26M、Y30*、Y30A、Y30D、Y30L、Y30M、Y30N、Y30R、Y30T、Y30V、G32L、G32M、G32R、N34D、N43*、N43H、N43L、E44*、N45D、N45L、N45V、A49W、A49Y、Y52*、Y52M、G54L、G54M、G54N、S56T、S56W、S57W、E58N、N59A、N59C、N59D、N59E、N59F、N59M、N59R、N59V、N59W、T60V、N62C、N62D、N62H、N62Q、N62W、T63C、T63D、T63L、T63N、T63R、T63V、K67A、K67L、N68L、N68Q、L71H、L71N、L71R、L71V、L71W、S72*、S72C、S72D、S72E、S72F、S72G、S72I、S72M、S72N、S72R、S72T、S72Y、I74L、S77A、D79V、K80*、K80E、K80H、K80L、K80N、K80Q、K80R、K80V、K80W、D81A、D81G、D81L、D81N、D81R、D81S、D81T、D81V、D81W、I82V、L90F、E99Q、E99R、L100S、K103A、K103R、K103V、K104N、K104W、D105N、V106A、V106D、V106E、V106H、V106K、V106L、V106M、V106N、V106Q、V106R、V106W、V106Y、K107A、K107C、K107L、K107M、K107T、K107V、K107W、N110M、N110R、N110V、D111A、D111E、D111M、D111N、D111Q、D111R、D111V、D111W、V113T、T114C、T114S、Y116D、Y116N、Y116R、S117*、S117D、S117H、S117N、S117P、E118*、E118A、E118D、E118G、E118L、E119G、E119W、T120I、T120L、T120M、T120V、T120W、D122*、D122H、D122R、Y123W、Y124C、Y124H、Y124I、Y124K、Y124L、Y124M、Y124N、Y124Q、Y124R、Y124T、Y124V、Y124W、D125C、D125G、D125H、D125K、D125Q、D125R、N126V、R127D、R127H、R127K、R127L、R127M、R127Q、R127W、V128A、V128C、V128D、V128L、V128T、D131V、Q135*、Q135A、Q135D、Q135E、Q135K、Q135M、Q135Y、D138K、D138L、D138M、D138N、D138Q、D138R、D138S、D138V、D138W、E139W、V140I、D142R、D142W、Y145*、Y145H、Y145L、Y145N、Y145V、P147A、P147C、P147D、P147F、P147G、P147L、P147M、P147R、P147S、P147T、P147V、K148A、K148D、K148L、K148V、F149L、F149M、F149N、E150A、E150D、E150H、E150K、E150L、E150M、E150N、E150R、E150V、E150W、E150Y、G151A、G151C、G151D、G151L、G151N、G151P、G151S、G151W、K152D、K152L、K152R、S163P、G164D、G164E、G164H、G164S、G164V、V167A、V167D、V167E、V167L、V167P、V167Q、V167R、V167W、H168N、L170A、L170D、L170E、L170F、L170H、L170K、L170M、L170N、L170P、L170Q、L170R、L170S、L170V、L170W、L170Y、D171A、D171C、D171E、D171K、D171L、D171M、D171Q、D171R、D171V、D171W、D171Y、I173C、D174H、D174M、D174N、D174V、D174W、F175Y、N177M、Q178*、Q178A、Q178K、Q178R、Q178W、I179T、S181C、S181D、S181F、S181G、S181K、S181N、S181P、S181Q、S181T、S181V、S181W、E185A、E185M、E185R、E185V、E185W、S186D、S186E、S186H、S186I、S186K、S186L、S186M、S186N、S186Q、S186R、S186V、S186W、K187C、K187D、K187G、K187R、K187S、K187V、K187W、Y188P、E189L、E189V、E189W、S199C、S199L、S199M、S199Y、E200D、E200F、E200K、E200L、E200M、E200N、E200R、E200W、A203C、A203D、A203E、A203G、A203L、A203M、A203P、A203Q、A203R、A203S、A203T、A203V、A203W、N204L、N204M、N204V、N204W、N204Y、L205I、D207A、D207C、D207E、D207G、D207K、D207N、D207Q、D207R、D207S、D207V、D207W、S208A、S208C、S208D、S208G、S208L、S208Q、S208T、S208V、S208W、S210T、Q215K、Q215R、Q215M、Q215L、Q215*、S217V、T218A、T218L、T218Q、T218R、T218V、S221N、G222D、E224A、E224P、S225G、N227A、N227Q、N227R、N227S、N227T、N227K、D230*、D230N、D230R、D230T、D230W、E232D、E232V、N233D、N233E、N233H、N233Q、N233R、N233W、W234R、G235W、G235A、G235E、G235F、G235H、G235I、G235L、G235M、G235N、G235P、G235S、G235V、S237C、S237G、S237M、S237N、S237W、S237Y、Y244C、Y244E、Y244M、L249H、L249K、L249Q、L249R、L249W、L249Y、S251A、S251L、S251N、S251R、S251W、N252P、N252C、G253D、G253W、F254I、F254L、F254M、F254Y、Q256D、Q256E、Q256R、N260*、N260A、N260C、N260E、N260I、N260K、N260L、N260M、N260Q、N260R、N260T、N260V、N260W、N260Y、E261*、E261A、E261D、E261R、E261W、Q262*、Q262F、Q262H、Q262W、Q262Y、M263K、M263L、M263Q、D264*、D264C、D264E、D264N、Y265F、N267S、N267T、W268C、W268E、W268M、W268R、Y270F、A271D、A271G、H272D、H272I、H272M、H272P、H272V、H272W、N273W、K274R、K274A、K274H、F276A、F276C、F276K、F276N、F276G、F276L、F276M、F276P、F276S、F276V、F276W、I278A、I278K、I278N、I278Q、I278V、S279C、S279D、S279E、S279G、S279N、D280C、D280E、Y281*、Y281A、Y281C、Y281H、Y281K、Y281N、Y281P、Y281R、Y282E、Y282N、H283I、A284I、A284L、A284N、A284P、A284T、A284V、T287N、S288P、S288D、S288K、S288N、V290I、K291L、K291R、K291V、T296C、E300A、E300D、H301C、H301N、H301R、T303A、T303C、T303G、T303K、T303Q、T303R、T303W、D304C、D304M、L305M、L305N、S306C、K308A、K308D、K308E、K308G、K308I、K308L、K308Q、K308S、K308T、K308V、K308Y、K309A、K309C、K309D、K309E、K309G、K309H、K309L、K309M、K309N、K309Q、K309S、K309T、K309I、K312A、K312E、K312L、K312M、K312N、K312Q、K312S、K312W、E314I、E314L、E314V、L315I、L315V、R319A、Y321F和N323R。
12.如权利要求10或11所述的方法，其中与SEQ ID NO:1中所示的多肽相比，该变体包含2-20个，例如2-10和2-5，如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个改变。
13.如权利要求10至12中任一项所述的方法，其中该分散蛋白亲本获得自土地芽孢杆菌属，优选地嗜糖土地芽孢杆菌、哥里土地芽孢杆菌或嗜糖土地芽孢杆菌。
14.如权利要求10至13中任一项所述的方法，其中该分散蛋白亲本包含一个或多个以下基序：GXDE(SEQ ID NO 8)、[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN](SEQ ID NO9)、[VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]SEQ ID NO 10)、[WND[SQR][IVL][TLVM](SEQ ID NO11)、QSTL(SEQ ID NO 12)、NKFFY(SEQ ID NO 13)或NLD[DR]S(SEQ ID NO 14)。
15.如权利要求10至14中任一项所述的方法，其中该分散蛋白变体与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。
16.如权利要求10至15中任一项所述的方法，其中该亲本分散蛋白选自以下多肽的组：
a)多肽，该多肽包含SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列或是与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性的多肽，
b)多肽，该多肽包含SEQ ID NO 2中所示的氨基酸序列或是与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性的多肽，
c)多肽，该多肽包含SEQ ID NO 3中所示的氨基酸序列或是与其具有至少95％、如至少96％、如至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性的多肽，
d)多肽，该多肽包含SEQ ID NO 4中所示的氨基酸序列或是与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性的多肽，和
e)多肽，该多肽包含SEQ ID NO 5中所示的氨基酸序列或是与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％或100％的序列同一性的多肽。
17.一种组合物，优选地清洁组合物，其包含如权利要求1至9中任一项所述的变体。
18.一种清洁物品的方法，该方法包括a)向该清洁组合物中添加如权利要求1至9中任一项所述的分散蛋白变体并且b)用该组合物洗涤物品，其中该物品是纺织品或硬表面。
19.一种用于寻找改进的多肽变体的方法，该方法包括以下步骤：
a)在经选择的，优选地所有多肽位置处产生多样性，从而制备多肽变体(VL)的文库，并且
b)选择具有改进的变体的子文库(VLSub)。
20.一种用于寻找改进的多肽变体的方法，该方法包括以下步骤：
a)在经选择的，优选地所有多肽位置处产生多样性，从而制备多肽变体(VL)的文库，
b)将多肽变体(VL)的文库的一部分暴露于适用于测量目的特性的一种或多种应激条件下，从而产生应激VLS+n和未应激VLUS文库；
c)比较该应激VLS和未应激VLUS文库；并且
d)选择具有改进的变体的子文库(VLSub)。
21.如权利要求19或20中任一项所述的方法，其中该子文库(VLSub)中变体的数目在2-20个多肽变体的范围内、优选的在5-20个多肽变体的范围内、优选的在5-10个多肽变体的范围内、优选的在8-20个多肽变体的范围内或在8-15个多肽变体的范围内。
22.如权利要求19至21中任一项所述的方法，其中应激条件是优选地升高的温度如高于37℃、高于41℃、高于46℃、或高于50℃。
23.如权利要求19至22中任一项所述的方法，其中这些多肽变体选自如权利要求1至9中任一项所述的分散蛋白变体。
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