BR112018008454B1 - Composição detergente que compreende variantes de amilase e protease, seu uso e métodos para lavar - Google Patents

Composição detergente que compreende variantes de amilase e protease, seu uso e métodos para lavar Download PDF

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Abstract

composição detergente que compreende variantes de amilase e protease. a presente invenção se refere a composições detergentes que compreendem variantes de protease e alfa-amilases ou variantes das mesmas. além disso, a presente invenção se refere a métodos para usar as composições detergentes.

Description

REFERÊNCIA A UMA LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[0001] O presente pedido compreende uma listagem de sequência em forma legível por computador, que é incorporada no presente documento a título de referência.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO CampodaInvenção
[0002] A presente invenção refere-se a composições inovadoras que compreendem variantes de amilase e variantes de protease ou de protease, em que as respectivas variantes exibem modificações em relação à amilase parental e protease parental, respectivamente, em uma ou mais propriedades incluindo: desempenho em lavagem, estabilidade de detergente e/ou estabilidade de armazenamento. As composições da presente invenção são adequadas, por exemplo, como composições detergentes ou de limpeza, tais como composições detergentes para lavar roupas e composições para lavar louça, incluindo composições de lavagem automática de louça e lavagem manual de louça.
Descrição da Técnica Relacionada
[0003] Enzimas têm sido usadas na indústria de detergentes como parte de formulações de lavagem desde há muitas décadas. De um ponto de vista comercial, as alfa- amilases são uma das enzimas mais relevantes em tais formulações, porém, outras enzimas incluindo protease, lipases, amilases adicionais, celulases, hemicelulases ou misturas de enzimas também são usadas frequentemente. A fim de aprimorar o custo e/ou o desempenho de enzimas, há busca constante por enzimas com propriedades alteradas, tais como atividade aumentada a baixas temperaturas, estabilidade aumentada, por exemplo, na presença de queladores, atividade específica aumentada em um determinado pH, dependência de Ca2+ alterada, estabilidade aumentada na presença de outros ingredientes de detergente (por exemplo, alvejante, tensoativos etc.) etc. Por exemplo, alfa-amilases têm sido tipicamente alfa-amilases de Bacillus licheniformis, também conhecidas como Termamyl. Outras alfa-amilases também podem ser usadas.
[0004] As proteases, que são usadas muitas vezes em detergentes, são da família de subtilases. Previamente, esta família foi adicionalmente agrupada em 6 subgrupos diferentes por Siezen RJ e Leunissen JAM, 1997, Protein Science, 6, 501 a 523. Um dentre desses subgrupos é a família Subtilisina que inclui subtilases, tais como BPN' e subtilisina 309 (SAVINASE®, Novozymes A/S), subtilisina Carlsberg (ALCALASE®, Novozymes A/S). Outra protease, TY145, que também é uma subtilase da Bacillus sp. TY145, NCIMB 40339, foi descrita primeiramente no documento no WO 92/17577 (Novozymes A/S) e no pedido posterior WO2004/067737 (Novozymes A/S) que revelam a estrutura tridimensional e o uso de modificação de proteína para alterar a funcionalidade de uma subtilase TY-145.
[0005] As composições detergentes foram descritas, porém, ainda há uma necessidade de composições detergentes aprimoradas, em que as enzimas mantenham a atividade e estabilidade dentro das composições detergentes na presença do componente detergente, tal como o sistema de alvejamento ou queladores. Desse modo, um objetivo da presente invenção é fornecer tais composições detergentes.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0006] A presente invenção se refere a uma composição detergente que compreende (i) pelo menos uma variante de alfa-amilase que compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições 1, 54, 56, 72, 109, 113, 116, 134, 140, 159, 167, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473, 476, ou 477 da SEQ ID NO: 1, em que a dita variante de alfa-amilase tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100%, em relação à SEQ ID NO: 1 e em que a dita variante de alfa- amilase tem atividade de alfa-amilase; e (11) pelo menos uma protease que tem atividade de protease, em que a dita protease é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) uma protease que tem uma identidade de sequência de pelo menos 70%, tal como, pelo menos 75%, tal como pelo menos 80%, tal como pelo menos 85%, tal como pelo menos 90%, tal como pelo menos 95%, tal como pelo menos 98%, tal como pelo menos 99%, tal como 100%, em relação às sequências de SEQ ID NOs: 2, 3, 19, 20 ou 23; (b) uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 171, 173, 175, 179 ou 180 de SEQ ID NO: 2, em que a dita variante de protease tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100%, em relação à SEQ ID NO: 2; (c) uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 32, 33, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 58, 59,60, 61, 62, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 116, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 150, 152, 153, 154, 155, 156, 158, 159, 160, 161, 164, 169, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 197, 198, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, ou 216 em comparação à protease na SEQ ID NO:3, em que a dita variante de protease tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3, (d) uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 9, 15, 27, 42, 52, 55, 56, 59, 60, 66, 74, 85, 97, 99, 101, 102, 104, 116, 118, 154, 156, 157, 158, 161, 164, 176, 179, 182, 185, 188, 198, 199, 200, 203, 206, 210, 211, 212, 216, 230, 232, 239, 242, 250, 253, 255, 256, ou 269, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 3, em que a dita variante de protease tem pelo menos 60% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3 e (e) uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 32, 33, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 61, 62, 63, 64, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 118, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 154, 155, 156, 157, 158, 161, 162, 163, 167, 170, 175, 181, 187, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 203, 204, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, ou 222 em comparação à protease mostrada na SEQ ID NO: 23, em que a dita variante de protease tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[0007] A presente invenção também se refere ao uso da composição detergente de acordo com qualquer uma das modalidades no presente documento descritas em lavagem de roupas, lavagem manual de louça ou lavagem automática de louça.
[0008] A presente invenção também se refere a um método para lavar roupas que compreende lavar um pano com uma composição detergente de acordo com qualquer uma das modalidades descritas no presente documento, de preferência a uma temperatura de 40 °C ou inferior, com mais preferência, a uma temperatura de 30 °C ou inferior ou, com ainda mais preferência, a uma temperatura de 20 °C ou inferior.
[0009] A presente invenção relates também se refere a um método para lavar louça em uma máquina automática de lavar louça com o uso de uma composição detergente, de acordo com as modalidades descritas no presente documento, que compreende as etapas de adicionar a dita composição detergente em um compartimento de composição detergente na dita máquina automática de lavar louça e liberar a dita composição detergente durante um ciclo de lavagem principal.
Visão global da listagem de sequências
[00010] SEQ ID NO: 1 é a sequência de aminoácidos de uma alfa-amilase (AAI10)
[00011] SEQ ID NO: 2 é a sequência de aminoácidos de uma protease (TY145)
[00012] SEQ ID NO: 3 é a sequência de aminoácidos de uma protease (Savinase®)
[00013] SEQ ID NO: 4 é a sequência de aminoácidos de uma lipase (TLL)
[00014] SEQ ID NO: 5 é a sequência de aminoácidos de uma alfa-amilase (AA560)
[00015] SEQ ID NO: 6 é a sequência de aminoácidos de uma alfa-amilase (SP722)
[00016] SEQ ID NO: 7 é a sequência de aminoácidos de uma alfa-amilase (TS23)
[00017] SEQ ID NO: 8 é a sequência de aminoácidos de uma alfa-amilase (Cytophaga sp)
[00018] SEQ ID NO: 9 é a sequência de aminoácidos de uma alfa-amilase (SP707)
[00019] SEQ ID NO: 10 é a sequência de aminoácidos de uma alfa-amilase de fusão (LASB0000)
[00020] SEQ ID NO: 11 é a sequência de aminoácidos de uma alfa-amilase (SP.7-7)
[00021] SEQ ID NO: 12 é a sequência de aminoácidos de uma alfa-amilase (Termamyl)
[00022] SEQ ID NO: 13 é a sequência de aminoácidos de uma alfa-amilase de fusão
[00023] SEQ ID NO: 14 é a sequência de aminoácidos de uma alfa-amilase de fusão (LABM)
[00024] SEQ ID NO: 15 é a sequência de aminoácidos de uma alfa-amilase (KSM-AP1378)
[00025] SEQ ID NO: 16 é a sequência de aminoácidos de uma alfa-amilase (KSM-K36/-K38)
[00026] SEQ ID NO: 17 é a sequência de aminoácidos de uma alfa-amilase (BSG)
[00027] SEQ ID NO: 18 é a sequência de aminoácidos de uma alfa-amilase (BAN)
[00028] SEQ ID NO: 19 é a sequência de aminoácidos de uma protease (Neutrase)
[00029] SEQ ID NO: 20 é a sequência de aminoácidos de uma protease (Metaloprotease)
[00030] SEQ ID NO: 21 é a sequência de aminoácidos de uma variante de protease (Protease 2)
[00031] SEQ ID NO: 22 é a sequência de aminoácidos de uma variante de protease (Protease 3)
[00032] SEQ ID NO: 23 é a sequência de aminoácidos de uma protease (BPN') Definições
[00033] O termo "propriedade aprimorada" quando se refere a uma variante de alfa-amilase no presente documento, se refere a uma característica associada a uma variante de alfa-amilase que é aprimorada em comparação à alfa-amilase parental, por exemplo, uma alfa-amilase parental que tem a sequência de SEQ ID NO: 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou 18, ou em comparação a uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos idêntica da dita variante, porém, não tem a alteração em uma ou mais dentre as ditas posições específicas. Tais propriedades aprimoradas incluem, porém sem limitação, desempenho em lavagem, atividade de alfa-amilase, perfil de atividade térmica, termoestabilidade, perfil de atividade de pH, estabilidade de pH, especificidade de substrato, propriedades de superfície aprimoradas, especificidade de produto, estabilidade aumentada, estabilidade aprimorada sob condições de armazenamento e estabilidade química.
[00034] O termo "atividade de alfa-amilase aprimorada" é definido no presente documento como uma atividade de alfa- amilase alterada (conforme definido acima), por exemplo, por conversão de polissacarídeo aumentada de uma variante de alfa-amilase que exibe uma alteração da atividade em relação (ou em comparação) à atividade da alfa-amilase parental ou em comparação a uma alfa-amilase com SEQ ID NO: 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou 18 ou em relação a uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos idêntica da dita variante de alfa-amilase, porém que, não tem a alterações em uma ou mais dentre as ditas posições especificadas.
[00035] O termo "propriedade aprimorada" quando se refere a uma variante de protease no presente documento significa uma característica associada a uma variante que é aprimorada em comparação ao parental ou em comparação a uma protease com SEQ ID NO: 2, 3, 19, 20 ou 23 ou em comparação a uma protease que tem a sequência de aminoácidos idêntica da dita variante, porém, que não tem as alterações em uma ou mais dentre as ditas posições específicas. Tais propriedades aprimoradas incluem, porém sem limitação, desempenho em lavagem, atividade de protease, perfil de atividade térmica, termoestabilidade, perfil de atividade de pH, estabilidade de pH, especificidade de substrato/cofator, propriedades de superfície aprimoradas, especificidade de produto, estabilidade aumentada, estabilidade aprimorada sob condições de armazenamento e estabilidade química.
[00036] O termo "atividade de protease aprimorada"é definido no presente documento com uma atividade de protease alterada (conforme definido acima), por exemplo, por conversão de proteína aumentada de uma variante de protease que exibe uma alteração da atividade em relação (ou em comparação) à atividade da protease parental ou em comparação a uma protease com SEQ ID NO: 2, 3, 19, 20 ou 23 ou em relação a uma protease que tem a sequência de aminoácidos idêntica da dita protease, porém, que não tem as alterações em uma ou mais dentre as ditas posições específicas.
[00037] O termo "estabilidade" inclui estabilidade de armazenamento e estabilidade durante uso, por exemplo, durante um processo de lavagem e reflete a estabilidade da variante de protease de acordo com a invenção como uma função do tempo, por exemplo, quanta atividade está retida quando a variante de protease é mantida em uma solução, em particular, em uma solução detergente. A estabilidade é influenciada por muitos fatores, por exemplo, pH, temperatura, composição detergente por exemplo, quantidade de adjuvante, tensoativos etc.
[00038] O termo "estabilidade aprimorada" ou "estabilidade aumentada"é definido no presente documento com uma variante que é ou uma variante de protease, variante de lipase ou uma variante de alfa-amilase que exibe uma estabilidade aumentada em soluções, em relação à estabilidade da protease parental, da lipase parental ou da alfa-amilase parental, respectivamente, em relação a uma protease, lipase, ou uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos idêntica da dita variante, porém, não tem as alterações em uma ou mais dentre as ditas posições especificadas ou em relação à SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou 23 dependendo de tal polipeptídeo parental a variante derivou. Os termos "estabilidade aprimorada" e "estabilidade aumentada" incluem "estabilidade química aprimorada", "estabilidade em detergente" ou "estabilidade em detergente aprimorada". A estabilidade de enzima pode ser medida, conforme descrito nos Exemplos.
[00039] O termo "estabilidade química aprimorada"é definido no presente documento como uma enzima variante que exibe retenção de atividade enzimática após um período de incubação na presença de um produto químico ou produtos químicos, ou de ocorrência natural ou sintética, que reduz a atividade enzimática da enzima parental. A estabilidade química aprimorada pode também resultar em variantes que têm mais capacidade para catalisar uma reação na presença de tais químicos. Em um aspecto particular da invenção, a estabilidade química aprimorada é uma estabilidade aprimorada em um detergente, em particular em um detergente líquido. O termo "estabilidade de detergente" ou "estabilidade de detergente aprimorada"é, em particular, uma estabilidade aprimorada da atividade de enzima quando uma enzima variante é misturada em uma formulação de detergente líquido, especialmente em uma formulação de detergente líquido de acordo com a tabela 1 e, em seguida, armazenada a temperaturas entre 15 e 50 °C, por exemplo, 20 °C, 30 °C ou 40 °C por pelo menos uma semana.
[00040] O termo "atividade térmica aprimorada" significa uma variante que exibe um perfil de atividade dependente de temperatura alterada em uma temperatura específica em relação ao perfil de atividade dependente de temperatura do parental ou em relação a um polipeptídeo da SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou 23. O valor da atividade térmica proporciona uma medida da eficácia da variante na intensificação da catálise de uma reação de hidrólise ao longo de uma gama de temperaturas.
[00041] O termo "desempenho em lavagem aprimorado"é definido no presente documento como uma variante que exibe um desempenho em lavagem aprimorado em relação ao desempenho em lavagem da enzima parental, em relação a um polipeptídeo da SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou 23 ou em relação a uma enzima que tem a sequência de aminoácidos idêntica da dita variante, porém, não tem as alterações em uma dentre as ditas posições especificadas, por exemplo, por remoção aprimorada de mancha. O termo "desempenho em lavagem" inclui desempenho de lavagem em lavagem de roupas, porém, também, por exemplo, em lavagem de louça. O desempenho de lavagem pode ser quantificado como descrito sob a definição de "desempenho de lavagem" aqui.
[00042] O termo "pano" ou "vestimenta", conforme usado no presente documento, se refere a qualquer material têxtil. Assim, pretende-se que o termo englobe vestuário, bem como tecidos, fios, fibras, materiais não urdidos, materiais naturais, materiais sintéticos, e qualquer outro material têxtil.
[00043] O termo "têxtil", conforme usado no presente documento, se refere a panos tecidos, assim como a fibras descontínuas e filamentos adequados para conversão ou uso como fios, tecidos, malha e panos não tecidos. O termo abrange fios produzidos a partir de fibras naturais assim sintéticas (por exemplo, fabricadas). O termo, "materiais têxteis" é um termo geral para fibras, intermediários de fio, fio, panos e produtos produzidos a partir de panos (por exemplo, vestimentas e outros artigos).
[00044] O termo "composições detergentes não de tecidos" inclui composições detergentes de superfície não de tecidos, incluindo, porém sem limitação, a composições para limpeza de superfícies duras, tais como composições detergentes de lavagem de louça, composições detergentes orais, composições detergentes de dentaduras, e composições detergentes pessoais.
[00045] O termo "quantidade de enzima eficaz" se refere à quantidade da enzima necessário para alcançar a atividade enzimática exigida na aplicação específica, por exemplo, em uma composição detergente definida. Tais quantidades eficazes já são comprovadas por pessoas de habilidade comum na técnica e se baseiam em muitos fatores, tais como a enzima particular usada, a aplicação de limpeza, a composição específica da composição detergente e a possibilidade de uma composição líquida ou seca (por exemplo, granular, barra) ser exigida e semelhantes. O termo "quantidade eficaz" de uma variante se refere à quantidade da variante descrita anteriormente no presente documento que alcança um nível desejada de atividade enzimática, por exemplo, em uma composição detergente definida. Em uma modalidade, a quantidade eficaz de uma variante de protease é a mesma quantidade eficaz de uma alfa-amilase, tal como uma variante de alfa-amilase. Em outra modalidade, a quantidade eficaz de uma variante de protease é diferente da quantidade eficaz de uma alfa-amilase, tal como uma variante de alfa- amilase, por exemplo, a quantidade eficaz de uma variante de protease pode ser maior ou menor que a quantidade eficaz de uma alfa-amilase, tal como uma variante de alfa-amilase.
[00046] O termo "dureza da água"ou "grau de dureza" ou "dH" ou "°dH" conforme usado no presente documento se refere a graus alemães de dureza. Um grau é definido como 10 miligramas de óxido de cálcio por litro de água.
[00047] O termo "condições de lavagem relevantes"é usado aqui para indicar as condições, particularmente a temperatura de lavagem, tempo, mecânica de lavagem, concentração do detergente, tipo de detergente e dureza da água, realmente usadas em agregados familiares em um segmento do mercado de detergentes.
[00048] O termo "materiais adjuntos" significa qualquer material líquido, sólido ou gasoso selecionado para o tipo particular de composição detergente desejado e a forma do produto (por exemplo,líquido, grânulo, pó, barra, pasta, aspersão, tablete, composição em gel ou em espuma), sendo que esses materiais também são, de preferência, compatíveis com as enzimas usadas na composição. Em algumas modalidades, as composições granulares estão em forma "compacta", enquanto que em outras modalidades, as composições líquidas estão em uma forma "concentrada".
[00049] O termo "enzima de remoção de manchas", conforme usado no presente documento, descreve uma enzima que auxilia na remoção de uma mancha ou sujidade de um tecido ou uma superfície dura. As enzimas de remoção de manchas atuam em substratos específicos, por exemplo, protease em proteína, amilase em amido, lipase e cutinase em lipídeos (gorduras e óleos), pectinase em pectina e hemicelulases em hemicelulose. As manchas são frequentemente deposições de misturas complexas de diferentes componentes que resultam em uma descoloração local do material por elas próprias ou que deixam uma superfície pegajosa no objeto que pode atrair sujidades dissolvidas na água de lavagem, resultando desse modo em descoloração da área manchada. Quando uma enzima atua no seu substrato específico presente em uma mancha, a enzima degrada ou degrada parcialmente o seu substrato auxiliando desse modo a remoção de sujidades e componentes de manchas associados ao substrato durante o processo de lavagem. Por exemplo, quando uma protease atua em uma mancha de grama degrada os componentes proteicos da grama e permite que a cor verde/marrom seja liberada durante a lavagem.
[00050] O termo "quantidade reduzida" significa neste contexto que a quantidade do componente é menor do que a quantidade que seria usada em um processo de referência de outro modo sob as mesmas condições. Em uma modalidade preferencial, a quantidade é reduzida, por exemplo, em pelo menos 5%, tal como pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20% ou conforme descrito de outro modo no presente documento.
[00051] O termo sistema de "baixa concentração de detergente" inclui detergentes em que menos que 800 ppm de componentes detergentes estão presente na água de lavagem. Detergentes asiáticos, por exemplo, japoneses detergentes são considerados tipicamente sistema de baixa concentração de detergente.
[00052] O termo sistema com "média concentração de detergente" inclui detergentes em que entre cerca de 800 ppm e cerca de 2000 ppm de componentes detergentes estão presentes na água de lavagem. Os detergentes norte-americanos são geralmente considerados como sendo sistemas com média concentração de detergente.
[00053] O termo sistema com "elevada concentração de detergente" inclui detergentes em que mais do que cerca de 2000 ppm de componentes detergentes estão presentes na água de lavagem. Os detergentes europeus são geralmente considerados como sendo sistemas com elevada concentração de detergente.
Convenções para Designação de Variantes
[00054] Para efeito da presente invenção, os polipeptídeos revelados na SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou 23 podem ser usados para determinar o resíduo de aminoácido correspondente em outro polipeptídeo. A sequência de aminoácidos de outro polipeptídeo é alinhada com o polipeptídeo revelado na SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou 23 dependendo da possibilidade de uma alfa- amilase, uma protease ou uma lipase e com base no alinhamento, o número de posição de aminoácido correspondente a qualquer resíduo de aminoácido no polipeptídeo revelado na SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou 23 é determinado com o uso do algoritmo de Needleman-Wunsch (Needleman and Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443 a 453) como implementado no programa Needle do pacote EMBOSS (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276 a 277), preferencialmente a versão 5.0.0 ou posterior. Os parâmetros usados são penalidade de abertura de intervalo de 10, penalidade de extensão de intervalo de 0,5, e a matriz de substituição EBLOSUM62 (versão EMBOSS de BLOSUM62).
[00055] A identificação do resíduo de aminoácido correspondente em outra enzima pode ser determinada por um alinhamento de múltiplas sequências de polipeptídeos com o uso de diversos programas de computador incluindo, porém sem limitação, MUSCLE (comparação de múltiplas sequências por log-expectativa; versão 3.5 ou posterior; Edgar, 2004, Nucleic Acids Research 32: 1792 a 1797), MAFFT (versão 6.857 ou posterior; Katoh e Kuma, 2002, Nucleic Acids Research 30: 3.059 a 3.066; Katoh et al., 2005, Nucleic Acids Research 33: 511 a 518; Katoh e Toh, 2007, Bioinformatics 23: 372 a 374; Katoh et al., 2009, métodos in Molecular Biology 537: 39 a 64; Katoh and Toh, 2010, Bioinformatics 26: 1.899 a 1.900), e EMBOSS EMMA empregando ClustalW (1.83 ou posterior; Thompson et al., 1994, Nucleic Acids Research 22: 4.673 a 4.680), usando seus respectivos parâmetros de definição.
[00056] Quando a outra enzima divergiu do polipeptídeo de SEQ ID N°: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou 23 de modo que a comparação com base em sequência tradicional falhe em detecta a relação das mesmas (Lindahl and Elofsson, 2000, J. Mol. Biol. 295: 613 a 615), outros algoritmos de comparação de sequência em pares podem ser usados. Pode ser alcançada maior sensibilidade na pesquisa baseada em sequências usando programas de pesquisa que utilizam representações probabilísticas de famílias (perfis) de polipeptídeos para pesquisar bases de dados. Por exemplo, o programa PSI-BLAST gera perfis através de um processo iterativo de pesquisa de bases de dados e é capaz de detectar homólogos remotos (Atschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25: 3.389 a 3.402). Pode ser alcançada ainda maior sensibilidade se a família ou superfamília para o polipeptídeo tiver um ou mais representantes nas bases de dados de estrutura de proteína. Programas tais como GenTHREADER (Jones, 1999, J. Mol. Biol. 287: 797 a 815; McGuffin e Jones, 2003, Bioinformatics 19: 874 a 881) utilizam informação de uma variedade de fontes (PSI-BLAST, previsão de estrutura secundária, perfis de alinhamentos estruturais, e potenciais de solvatação) como entrada para uma rede neural que prevê a dobragem estrutural para uma sequência de consulta. Semelhantemente, o método de Gough et al., 2000, J. Mol. Biol. 313: 903 a 919, pode ser usado para alinhar uma sequência de estrutura desconhecida com os modelos de superfamília presentes na base de dados SCOP. Esses alinhamentos podem por sua vez ser usados para gerar modelos de homologia para o polipeptídeo, e tais modelos podem ser avaliados quanto à precisão usando uma variedade de ferramentas desenvolvidas para esse propósito.
[00057] Para proteínas de estrutura conhecida estão disponíveis várias ferramentas e recursos para recuperar e gerar alinhamentos estruturais. Por exemplo, as superfamílias SCOP de proteínas foram alinhadas estruturalmente, e esses alinhamentos são acessíveis e transferíveis por download. Duas ou mais estruturas de proteína podem ser alinhadas usando uma variedade de algoritmos tais como a matriz de alinhamento de distância (Holm e Sander, 1998, proteínas33: 88-96) ou extensão combinatorial (Shindyalov e Bourne, 1998, Protein Engineering 11: 739 a 747), e pode ser adicionalmente utilizada implantação destes algoritmos para consultar bases de dados de estruturas com uma estrutura de interesse de modo a descobrir possíveis homólogos estruturais (por exemplo, Holm e Park, 2000, Bioinformatics 16: 566 a 567).
[00058] Uma pessoa versada na técnica tem conhecimento para determinar qual ferramenta de alinhamento deve ser usada quando as posições aminoácido correspondentes precisam ser identificadas. Portanto, contempla-se que qualquer ferramenta de alinhamento que a pessoa versada na técnica considera adequada pode ser usada no contexto da presente invenção.
[00059] Na descrição das variantes de enzima descritas no presente documento, a nomenclatura descrita abaixo é adaptada a título de facilitação de referência. São usadas as abreviaturas aceites de aminoácidos de letra única ou três letras da IUPAC. As posições de aminoácido são indicadas com H1, G109, etc.
[00060] As variantes descritas no presente documento compreendem uma ou mais modificações em comparação ao polipeptídeo parental. Consequentemente, as variantes podem compreendem modificações conservativas, em particular, tais modificações conservativas podem ser substituições conservativas. Os exemplos de substituições conservativas estão dentro dos grupos de aminoácidos básicos (arginina, lisina e histidina), aminoácidos ácidos (ácidos glutâmicos e ácido aspártico), aminoácidos polares (glutamina e asparagina), aminoácidos hidrofóbicos (leucina, isoleucina e valina), aminoácidos aromáticos (fenilalanina, triptófano e tirosina) e pequenos aminoácidos (glicina, alanina, serina, treonina e metionina). Substituições de aminoácidos que não alteram, de modo geral, a atividade específica são conhecidas na técnica e são descritas, por exemplo, por H. Neurath e R.L. Hill, 1979, In, The Proteins, Academic Press, New York. Substituições comuns são Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Asn/Gln, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Tyr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Glu/Gln, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu e Asp/Gly.
[00061] Alternativamente, as mudanças de aminoácido são de natureza tal a ponto de as propriedades fisioquímicas dos polipeptídeos serem alteradas. Por exemplo, as mudanças de aminoácidos podem melhorar a estabilidade térmica do polipeptídeo, alterar a especificidade quanto ao substrato, mudar o pH ideal e semelhantes.
[00062] Substituições: Para uma substituição de aminoácidos é usada a seguinte nomenclatura: Aminoácido original, posição, aminoácido substituído. Consequentemente, a substituição de glicina na posição G109 com alanina é indicada como "Gly109Ala" ou "G109A". Múltiplas mutações são separadas por marcas de adição ("+") ou por vírgulas (","), por exemplo,"Gly109Ala + Leu173Pro" ou "G109A,L173P", que representam substituições nas posições 109 e 173 de glisina (G) com alanina (A) e leucina (L) com prolina (P), respectivamente. Caso mais que um aminoácido possa ser substituído em uma determinada posição, os mesmos podem ser listados ou divididos por uma barra, tal como /. Desse modo, caso tanto Ala quanto Pro de acordo com a invenção possam ser substituídos em vez do aminoácido que ocupa a posição 109, isso é indicado como X109A/P em que o X no presente exemplo indica que diferentes enzimas podem ser parentes, por exemplo, tais como uma alfa-amilase com SEQ ID NO: 1 ou uma alfa-amilase que tem pelo menos 75% de identidade em relação à mesma. Desse modo, em alguns casos, as variantes são representadas como 109A/P ou X109A/P que indicam que os aminoácidos a serem substituídos variam dependendo da enzima parental.
[00063] Deleções: Para uma deleção de aminoácidos é usada a seguinte nomenclatura: Aminoácido original, posição, *. Consequentemente, a deleção de arginina na posição 181 é projetada como "Arg181*" ou "R181*". Múltiplas deleções são separadas por marcas de adição ("+") ou vírgulas, por exemplo,"Arg181* + Gly182*" ou "R181*+G182*" ou "R181*, G182*".
[00064] Inserções: A inserção de um resíduo de aminoácido adicional, tal como, por exemplo, uma lisina após G#1, pode ser indicada por: Gly#1GlyLys ou G#1GK. Alternativamente, a inserção de um resíduo de aminoácido adicional, tal como lisina após G109 pode ser indicada por: *109aL. Quando mais que de um resíduo de aminoácido é inserido, tal como, por exemplo, uma Lys e Ala, após 109 isso pode ser indicado como: Gly109GlyLysAla ou G109GKA. Em tais casos, o resíduo (ou resíduos) de aminoácido inserido pode ser também numerado pela adição de minúsculas ao número de posição do resíduo de aminoácido precedendo o resíduo de aminoácido inserido, em este exemplo: *109aK *109bA.
[00065] De modo coletivo, substituições, deleções e inserções podem ser denominadas no presente documento de "modificações". Desse modo, deve-se entender que qualquer variante descrita no presente documento compreende modificações, tais como substituições, deleções e/ou inserções salvo quando indicado de outro modo pelo contexto.
[00066] Múltiplas modificações: As variantes que compreendem múltiplas modificações são separadas por marcas de adição ("+"), marcas de barra ("/") ou por vírgulas (","), por exemplo,"Gly109Pro+Lys391Ala" ou "G109P, K391A" que representam uma substituição de glisina na posição 109 e lisina na posição 391 com prolina e alanina, respectivamente conforme descrito acima.
[00067] Modificações diferentes: Quando diferentes modificações podem ser introduzidas em uma posição, as diferentes modificações são separadas por uma divisão ("/"), ou por uma vírgula (","), por exemplo,"Gly109Pro,Lys" ou "G109P, K" representa uma substituição de glisina na posição 109 com prolina ou lisina. Desse modo, "Gly109Pro,Lys + Lys391Ala" indica as seguintes variantes: "Gly109Pro+Lys391Ala", "Gly109Lys+Lys391Ala" ou "G109P,K + K391A".
[00068] A pessoa versada tem ciência de que o aminoácido original em qualquer posição pode variar de uma alfa-amilase parental para outra quando alinhado. Consequentemente, deve-se entender que a pessoa versada pode alinhar qualquer sequência de alfa-amilase com a sequência de numeração, isto é, SEQ ID NO: 1, da presente invenção. No entanto, sem limitação da presente invenção, os aminoácidos originais são indicados com um "X" que cobre todos os parentais de polipeptídeo. Desse modo, deve-se entender que "X" é listado como um prefixo para uma posição aminoácido na presente invenção. Não é para ser entendido como limitante de modo algum.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[00069] Em um aspecto, a presente invenção se refere a uma composição detergente que compreende (i) pelo menos uma variante de alfa-amilase que compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições 1, 54, 56, 72, 109, 113, 116, 134, 140, 159, 167, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473, 476, ou 477 da SEQ ID NO: 1, em que a dita variante de alfa-amilase tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100%, em relação à SEQ ID NO: 1 e em que a dita variante de alfa- amilase tem atividade de alfa-amilase; e (ii) pelo menos uma protease que tem atividade de protease, em que a dita protease é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) uma protease que tem uma identidade de sequência de pelo menos 70%, tal como, pelo menos 75%, tal como pelo menos 80%, tal como pelo menos 85%, tal como pelo menos 90%, tal como pelo menos 95%, tal como pelo menos 98%, tal como pelo menos 99%, tal como 100%, em relação às sequências de SEQ ID NOs: 2, 3, 19, 20 ou 23; (b) uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 171, 173, 175, 179 ou 180 de SEQ ID NO: 2, em que a dita variante de protease tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100%, em relação à SEQ ID NO: 2; (c) uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 32, 33, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 58, 59,60, 61, 62, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 116, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 150, 152, 153, 154, 155, 156, 158, 159, 160, 161, 164, 169, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 197, 198, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, e 216 em comparação à protease na SEQ ID NO:3, em que a dita variante de protease tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3, (d) uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 9, 15, 27, 42, 52, 55, 56, 59, 60, 66, 74, 85, 97, 99, 101, 102, 104, 116, 118, 154, 156, 157, 158, 161, 164, 176, 179, 182, 185, 188, 198, 199, 200, 203, 206, 210, 211, 212, 216, 230, 232, 239, 242, 250, 253, 255, 256 ou 269, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 3, em que a dita variante de protease tem pelo menos 60% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3 e (e) uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 32, 33, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 61, 62, 63, 64, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 118, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 154, 155, 156, 157, 158, 161, 162, 163, 167, 170, 175, 181, 187, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 203, 204, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, ou 222 em comparação à protease mostrada na SEQ ID NO: 23, em que a dita variante de protease tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO:23.
[00070] As variantes de alfa-amilase da composição detergente da presente invenção que compreendem uma ou mais substituições nas posições definidas com o uso da SEQ ID NO: 1 para numeração foram geradas e foram testadas em relação a estabilidade e desempenho em um detergente-modelo, conforme descrito em "Material and methods", e os inventores demonstraram que a uma ou mais substituições de um ou mais aminoácido em uma posição correspondente às posições 1, 54, 56, 72, 109, 113, 116, 134, 140, 159, 167, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473, 476, e 477 no polipeptídeo da SEQ ID NO: 1 ou 14 aprimoraram a estabilidade e/ou desempenho de detergente em comparação a uma alfa-amilase que tem uma sequência de aminoácidos, por exemplo, da SEQ ID NO: 1 e 14, porém, que não tem uma substituição em uma ou mais dentre as ditas posições especificadas ou em comparação a uma alfa-amilase com a SEQ ID NO: 1. Conforme pode ser visto dos exemplos, a combinação de uma variante de alfa-amilase e uma variante de protease tem um efeito sinérgico na remoção de mancha, isto é, desempenho aprimorado. Em um dentre os exemplos descritos no presente documento, também é mostrado que a combinação de uma variante de alfa-amilase e uma variante de protease tem pelo menos a mesma estabilidade como as variantes testadas sozinhas.
[00071] O termo "composição detergente" conforme usado no presente documento, se refere a uma composição adequada para uso como uma composição detergente. A pessoa versada tem conhecimento para determinar quando uma composição pode ser considerada uma composição detergente.
[00072] O termo "alfa-amilase" significa uma alfa- amilase que tem atividade de alfa-amilase, isto é, a atividade de alfa-1,4-glucan-4-glucano-hidrolases, E.C. 3.2.1.1, que constituem um grupo de enzimas, que catalisam hidrólise de amido e outros oligo- e polissacarídeos 1,4- glucosídicos lineares ou ramificados. Para efeito das alfa- amilases presentes nas composições detergentes da presente invenção, a atividade de alfa-amilase pode ser determinada conforme descrito no Exemplo 1 abaixo. As alfa-amilases descritas no presente documento têm pelo menos 20%, por exemplo, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 100% da atividade de protease do polipeptídeo com a SEQ ID NO: 1. Os termos “alfa-amilase” e “amilase” podem ser usados indistintamente e constituem o mesmo significado e propósito dentro do escopo da presente invenção.
[00073] O termo "variante de alfa-amilase", conforme usado no presente documento, se refere a uma alfa-amilase que tem atividade de alfa-amilase que compreende uma alteração, isto é, uma substituição, inserção e/ou deleção, em uma ou mais (por exemplo, diversas) posições em comparação a uma "alfa-amilase parental". Uma substituição significa uma substituição de um aminoácido que ocupa uma posição com um aminoácido diferente; uma deleção significa a remoção de um aminoácido que ocupa uma posição; e uma inserção significa adicionar aminoácidos, por exemplo, 1 a 10 aminoácidos, de preferência, 1 a 3 aminoácidos adjacentes a um aminoácido que ocupa uma posição. As substituições de aminoácido podem trocar um aminoácido nativo para outro aminoácido de ocorrência natural ou para um derivado de aminoácido de ocorrência não natural. As variantes de alfa-amilase têm pelo menos 20%, por exemplo, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 100% da atividade de alfa- amilase da alfa-amilase parental madura da qual os mesmos são derivados.
[00074] O termo “atividade de alfa-amilase”, conforme usado no presente documento, se refere à atividade de alfa- 1,4-glucan-4-glucanoidrolases, E.C. 3.2.1.1, que constituem um grupo de enzimas, catalisando a hidrólise de amido e outros oligo- e polissacarídeos 1,4-glucosídicos lineares e ramificados. Assim, o termo “alfa-amilase”, conforme usado no presente documento, se refere a uma enzima que tem atividade de alfa-amilase (Classe de Enzimas; EC 3.2.1.1) que hidrolisa ligações alfa de grandes polissacarídeos, ligados em alfa, tais como amido e glicogênio, originando glucose e maltose. Para propósitos da presente invenção, a atividade de alfa- amilase é determinada de acordo com o procedimento descrito nos Exemplos. Em uma modalidade, as variantes da presente invenção têm pelo menos 20%, por exemplo, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 100% da atividade de alfa-amilase do polipeptídeo de SEQ ID NOs: 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou 18.
[00075] O termo "protease"é definido no presente documento como uma enzima que hidrolisa ligações peptídicas. O termo inclui qualquer enzima pertencendo ao grupo de enzimas EC 3.4 (incluindo cada uma das suas treze subclasses). O número EC se refere à enzima Nomenclature 1992 de NC-IUBMB, Academic Press, San Diego, Califórnia, incluindo os suplementos 1-5 publicados em Eur. J. Biochem. 1994, 223, 1 a 5; Eur. J. Biochem. 1995, 232, 1 a 6; Eur. J. Biochem. 1996, 237, 1 a 5; Eur. J. Biochem. 1997, 250, 1 a 6; e Eur. J. Biochem. 1999, 264, 610 a 650; respectivamente. O termo "subtilases" refere-se a um subgrupo de serina proteases de acordo com Siezen et al., Protein Engng. 4 (1991) 719 a 737 e Siezen et al. Protein Science 6 (1997) 501 a 523. Serina proteases ou serina peptidases são um subgrupo de proteases caracterizadas por terem uma serina no local ativo, que forma um aduto covalente com o substrato. Adicionalmente, as subtilases (e as serina proteases) são caracterizadas por terem dois resíduos de aminoácidos de local ativo separados da serina, nomeadamente um resíduo de histidina e ácido aspártico. As subtilases podem ser divididas em 6 subdivisões, isto é,a família Subtilisina, a família Termitase, uma família Proteinase K, uma família peptidase lantibiótica, uma família Kexin e uma família Pirolisina. O termo "atividade de protease" significa uma atividade proteolítica (EC 3.4). As proteases da invenção são endopeptidases (EC 3.4.21). Para efeito da presente invenção, a atividade de protease é determinada de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 1 abaixo. As variantes de protease descritas no presente documento têm pelo menos 20%, por exemplo, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 100% da atividade de protease do polipeptídeo com a SEQ ID NO: 2, 3, 19, 20 ou 23.
[00076] O termo "atividade de protease" conforme usado no presente documento, se refere à atividade de hidrólise de ligações de peptídeo. Para efeito da presente invenção, a atividade de protease é determinada de acordo com o procedimento descrito nos Exemplos. Em uma modalidade, as variantes da presente invenção têm pelo menos 20%, por exemplo, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 100% da atividade de alfa-amilase do polipeptídeo de SEQ ID NOs: 2, 3, 19, 20 ou 23.
[00077] O termo "variante de protease", conforme usado no presente documento, se refere a uma protease que tem a atividade de protease que compreende uma alteração, isto é, uma substituição, inserção e/ou deleção, de preferência, substituição, em uma ou mais (ou uma ou diversas) posições em comparação ao parental da mesma que é uma protease que tem a sequência de aminoácidos idêntica da dita variante, porém, não tem as alterações em uma ou mais dentre as ditas posições especificadas.
[00078] O termo "variante" significa uma variante que é modificada à mão pelo homem. Em um aspeto, a variante é pelo menos 1% pura, por exemplo, pelo menos 5% pura, pelo menos 10% pura, pelo menos 20% pura, pelo menos 40% pura, pelo menos 60% pura, pelo menos 80% pura e pelo menos 90% pura, como determinado por SDS-PAGE.
[00079] O termo "modificação" é descrito em outro parágrafo no presente documento. O termo é uma designação global dos termos "substituição", "inserção"e "deleção", conforme descrito no presente documento.
[00080] O termo “correspondendo a”, conforme usado no presente documento, se refere a modo de determinação do aminoácido específico de uma sequência em que é feita referência a uma sequência de aminoácidos específica. Por exemplo, para propósitos da presente invenção, quando as referências são feitas a posições de aminoácidos específicas, a pessoa versada pode alinhar outra sequência de aminoácidos à dita sequência de aminoácidos à qual foi feita referência, de modo a se determinar que um aminoácido específico pode ser de interesse na dita outra sequência de aminoácidos. O alinhamento com outra sequência de aminoácidos com, por exemplo, a sequência como apresentada em SEQ ID NO: 1, 3, ou qualquer outra sequência listada aqui, foi descrito em outro lugar aqui. Métodos de alinhamento alternativos podem ser usados, e são bem conhecidos da pessoa perita.
[00081] O termo "identidade de sequência", conforme usado no presente documento, se refere à capacidade de relação entre duas sequências de aminoácidos ou entre duas sequências de nucleotídeos e é descrito pelo parâmetro de "identidade de sequência". Para propósitos da presente invenção, o grau de identidade de sequências entre duas sequências de aminoácidos é determinado usando o algoritmo de Needleman-Wunsch (Needleman e Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443 a 453) como implementado no programa Needle do pacote EMBOSS (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276 a 277), preferencialmente a versão 3.0.0 ou posterior. Os parâmetros opcionais usados são penalidade de intervalo aberto de 10, penalidade de extensão de intervalo de 0,5, e a matriz de substituição EBLOSUM62 (versão EMBOSS de BLOSUM62). O resultado de Needle identificado “identidade mais longa” (obtido usando a opção -nobrief) é usado como a percentagem de identidade e é calculado como se segue:
[00082] (Resíduos Idênticos x 100)/(Comprimento do Alinhamento - Número Total de Lacunas no Alinhamento)
[00083] De preferência, a composição detergente de acordo com a presente invenção, constitui uma composição que compreende pelo menos uma variante de alfa-amilase e pelo menos uma variante de protease que têm uma estabilidade aprimorada e/ou desempenho em lavagem em comparação à alfa- amilase parental ou protease, respectivamente.
[00084] Desse modo, a invenção se refere a uma composição detergente, em que a pelo menos uma alfa-amilase compreende uma ou mais modificações de aminoácido nas posições correspondente às posições 1, 54, 56, 72, 109, 113, 116, 134, 140, 159, 167, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473, 476, ou 477 da SEQ ID NO: 1, em que a variante de alfa-amilase tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à alfa-amilase parental das SEQ ID NOs: 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou 18, por exemplo, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, porém, menos que 100% de identidade de sequência em relação à alfa-amilase parental das SEQ ID NOs: 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou 18, e a pelo menos uma variante de protease compreende uma substituição de um ou mais aminoácidos no laço correspondente às posições 171, 173, 175, 179 ou 180 da SEQ ID NO: 2, em que a variante de protease tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à protease parental da SEQ ID NO: 2, por exemplo, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, porém, menos que 100% de identidade de sequência em relação à protease parental da SEQ ID NO: 2 ou compreende uma substituição de um ou mais aminoácido nas posições correspondentes a 32, 33, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 58, 59,60, 61, 62, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 116, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 150, 152, 153, 154, 155, 156, 158, 159, 160, 161, 164, 169, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 197, 198, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, e 216 da SEQ ID NO: 3, em que a variante de protease tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à protease parental da SEQ ID NO: 3, por exemplo, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, porém, menos que 100% de identidade de sequência em relação à protease parental da SEQ ID NO: 3 ou compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondente ás posições 9, 15, 27, 42, 52, 55, 56, 59, 60, 66, 74, 85, 97, 99, 101, 102, 104, 116, 118, 154, 156, 157, 158, 161, 164, 176, 179, 182, 185, 188, 198, 199, 200, 203, 206, 210, 211, 212, 216, 230, 232, 239, 242, 250, 253, 255, 256, ou 269 da SEQ ID NO: 3, em que a variante de protease tem pelo menos 60% de identidade de sequência em relação à protease parental da SEQ ID NO: 3, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, porém, menor que 100% de identidade de sequência em relação à protease parental de SEQ ID NO: 3, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 3, em que a dita variante de protease tem pelo menos 60% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3 ou compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 32, 33, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 61, 62, 63, 64, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 116, 134, 140, 159, 167, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473, 476, ou 477 da SEQ ID 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, ou 222 em comparação à protease mostrada na SEQ ID NO: 23, em que a dita variante de protease tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO:23, por exemplo, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, porém, menos que 100% de identidade de sequência em relação à protease parental da SEQ ID NO: 23.
[00085] Deve-se entender que no contexto da presente invenção "uma variante de alfa-amilase" ou "a variante de alfa-amilase" significa "pelo menos uma variante de alfa- amilase", a menos que contraindicado pelo contexto, por exemplo,"a uma variante de alfa-amilase". Desse modo, em todas as modalidades, a composição detergente de acordo com a invenção compreende pelo menos uma variante de alfa-amilase. O mesmo se aplica à protease ou à lipase ou qualquer variante das mesmas. Em uma modalidade particular, a pelo menos uma variante de alfa-amilase compreende uma modificação em dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze, doze ou treze posições correspondentes às posições 1, 54, 56, 72, 109, 113, 116, 134, 140, 159, 167, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473, 476, ou 477, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1.
[00086] Em uma modalidade, a pelo menos uma variante de alfa-amilase compreende uma ou mais modificações selecionadas dentre o grupo que consiste em: X1*, X1A, X54S, X56T, X72R, X109A, X113Q, X116Q, X116H, X134E, X140Y, X140F, X140H, X159Y, X159F, X159H, X167Y, X167H, X167F, X169E, X172K, X172G, X172N, X173P, X174*, X174S, X181*, X182*, X183*, X184*, X184T, X189Y, X189F, X189H, X189E, X189D, X189Q, X189N, X194D, X194N, X194S, X195F, X206L, X206F, X206Y, X255A, X260G, X260P, X260A, X260G, X260P, X260A, X265G, X284G, X284H, X289H, X304K, X304R, X304Q, X304E, X305K, X305R, X305Q, X305E, X347Y, X347F, X347H, X391A, X395P, X439N, X439Q, X439T, X444Q, X469T, X469N, X473R, X476R, X476Q, X476E, X476K, X477K, X477R, X477Q, e X477E em que as posições correspondem às posições da SEQ ID NO: 1.
[00087] Em uma modalidade particular, a pelo menos uma variante de alfa-amilase compreende duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze, doze ou treze das seguintes modificações X1*, X1A, X54S, X56T, X72R, X109A, X113Q, X116Q, X116H, X134E, X140Y, X140F, X140H, X159Y, X159F, X159H, X167Y, X167H, X167F, X169E, X172K, X172G, X172N, X173P, X174*, X174S, X181*, X182*, X183*, X184*, X184T, X189Y, X189F, X189H, X189E, X189D, X189Q, X189N, X194D, X194N, X194S, X195F, X206L, X206F, X206Y, X255A, X260G, X260P, X260A, X260G, X260P, X260A, X265G, X284G, X284H, X289H, X304K, X304R, X304Q, X304E, X305K, X305R, X305Q, X305E, X347Y, X347F, X347H, X391A, X395P, X439N, X439Q, X439T, X444Q, X469T, X469N, X473R, X476R, X476Q, X476E, X476K, X477K, X477R, X477Q, ou X477E, em que numeração das posições é de acordo com a SEQ ID NO: 1, e em que a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14.
[00088] Em uma modalidade preferencial, a pelo menos uma variante de alfa-amilase compreende uma deleção e/ou uma substituição em duas ou mais posições correspondentes às posições 181, 182, 183 ou 184 da SEQ ID NO: 1, em que a variante de alfa-amilase tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1, como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, mas menos do que 100%.
[00089] Desse modo, em uma modalidade, a pelo menos uma variante de alfa-amilase compreende uma deleção nas posições correspondentes a 181+182; 181+183; 181+184; 182+183; 182+184; ou 183+184 da SEQ ID NO:1.
[00090] Em uma modalidade particular, a pelo menos uma variante de alfa-amilase compreende um ou mais dentre asseguintes modificações: X1*, X1A, X54S, X56T, X72R, X109A, X113Q, X116Q, X116H, X134E, X140Y, X140F, X140H, X159Y, X159F, X159H, X167Y, X167H, X167F, X169E, X172K, X172G, X172N, X173P, X174*, X174S, X181*, X182*, X183*, X184*, X184T, X189Y, X189F, X189H, X189E, X189D, X189Q, X189N, X194D, X194N, X194S, X195F, X206L, X206F, X206Y, X255A, X260G, X260P, X260A, X260G, X260P, X260A, X265G, X284G, X284H, X289H, X304K, X304R, X304Q, X304E, X305K, X305R, X305Q, X305E, X347Y, X347F, X347H, X391A, X395P, X439N, X439Q, X439T, X444Q, X469T, X469N, X473R, X476R, X476Q, X476E, X476K, X477K, X477R, X477Q, ou X477E e uma dentre as deleções em pares de X181*+X182*; X181*+X183*; X181*+X184*; X182*+X183*; X182*+X184*; ou X183*+X184*; em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 ou 14.
[00091] Em uma modalidade, a variante de alfa-amilase em (i) é selecionada dentre o grupo que consiste em: H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+ G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K; H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A +G476K; H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+ D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K; H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F +V206L+A265G+K391A+P473R+G476K; H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+ N195F+V206L+K391A+G476K; H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+ G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K; H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+ G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K; H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A +G476K; H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+ K391A+G476K; e H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F +V206L+K391A+G476K, em que a dita variante de alfa-amilase compartilha pelo menos 80%, tal como, pelo menos 85%, tal como, pelo menos 90%, tal como, pelo menos 93%, tal como, pelo menos 94%, tal como, pelo menos 95%, tal como, pelo menos 96%, tal como, pelo menos 97%, tal como, pelo menos 98%, porém, menos que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou 18, de preferência, SEQ ID NO: 1 ou 14, e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa- amilase.
[00092] Em uma modalidade, a variante de alfa-amilase em (i) é uma variante da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 14 que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+ G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K; H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A +G476K; H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+ D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K; H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F +V206L+A265G+K391A+P473R+G476K; H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+ N195F+V206L+K391A+G476K; H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+ G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K; H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+ G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K; H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A +G476K; H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+ K391A+G476K; e H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a dita variante de alfa-amilase compartilha pelo menos 80%, tal como, pelo menos 85%, tal como, pelo menos 90%, tal como, pelo menos 93%, tal como, pelo menos 94%, tal como, pelo menos 95%, tal como, pelo menos 96%, tal como, pelo menos 97%, tal como, pelo menos 98%, porém, menos que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 14, e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase.
[00093] Em uma modalidade particular, a pelo menos uma variante de alfa-amilase compreende as modificações H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L +K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14.
[00094] Em uma modalidade particular, a pelo menos uma variante de alfa-amilase compreende as modificações H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A +G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14.
[00095] Em uma modalidade particular, a pelo menos uma variante de alfa-amilase compreende as modificações H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182* +D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, em que a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14.
[00096] Em uma modalidade particular, a pelo menos uma variante de alfa-amilase compreende as modificações H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F +V206L+A265G+K391A+P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14.
[00097] Em uma modalidade particular, a pelo menos uma variante de alfa-amilase compreende as modificações H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183* +N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14.
[00098] Em uma modalidade particular, a pelo menos uma variante de alfa-amilase compreende as modificações H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S +G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14.
[00099] Em uma modalidade particular, a pelo menos uma variante de alfa-amilase compreende as modificações H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S +G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14.
[000100] Em uma modalidade particular, a pelo menos uma variante de alfa-amilase compreende as modificações H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A +G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14.
[000101] Em uma modalidade particular, a pelo menos uma variante de alfa-amilase compreende as modificações H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+ K391A+G476K, em a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14.
[000102] Em uma modalidade particular, a pelo menos uma variante de alfa-amilase compreende as modificações H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F +V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa- amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14.
[000103] Em uma modalidade, a protease é aquele de (a) listada acima. Consequentemente, em uma modalidade, a protease é uma protease que tem uma identidade de sequência de pelo menos 70%, tal como pelo menos 75%, tal como pelo menos 80%, tal como pelo menos 85%, tal como pelo menos 90%, tal como pelo menos 95%, tal como pelo menos 98%, tal como pelo menos 99%, tal como 100%, em relação às sequências das SEQ ID NOs: 3, 4, 19, 20 ou 23.
[000104] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+ Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 19.
[000105] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende: pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+R116H +A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 19.
[000106] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q +R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+ P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 19.
[000107] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q +Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 19.
[000108] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q +W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 19.
[000109] Em uma modalidade particular, as composições detergentes compreendem; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H +T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+ K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, em que a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa- amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 19.
[000110] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+ R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G 255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 19.
[000111] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+T134E +A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 19.
[000112] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+ G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 19.
[000113] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+W167F +Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 1), em que a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelomenos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 19.
[000114] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+ Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 20.
[000115] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende: pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 20.
[000116] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+ R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P 473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 20.
[000117] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+ Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 20.
[000118] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q +W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal comopelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 20.
[000119] Em uma modalidade particular, as composições detergentes compreendem; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+ R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G 255A+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa- amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 20.
[000120] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A +R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+ G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 20.
[000121] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 20.
[000122] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 20.
[000123] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+ Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 20.
[000124] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+ Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000125] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende: pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000126] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+ R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P 473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000127] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+ Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000128] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q +W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000129] Em uma modalidade particular, as composições detergentes compreendem; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+ R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G 255A+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa- amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000130] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A +R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+ G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000131] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000132] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000133] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+ Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000134] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende pelo menos uma variante de protease que é uma variante de TY-145 (SEQ ID NO: 2) que compreende uma substituição de um ou mais aminoácidos no laço correspondente às posições 171, 173, 175, 179 ou 180 da SEQ ID NO: 2. Em outra modalidade, a pelo menos uma variante de protease da composição detergente de acordo com a invenção compreende uma substituição em duas, três, quatro ou cinco posições correspondentes às posições 171, 173, 175, 179 ou 180 da SEQ ID NO: 2. Uma modalidade se refere a uma composição detergente, em que a pelo menos uma variante de protease compreende uma substituição de um ou mais aminoácidos no laço correspondente às posições 171, 173, 175, 179 ou 180 da SEQ ID NO: 1, em que a variante tem pelo menos 70%, como pelomenos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94% pelo menos 95% de identidade, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, mas menos do que 100%, de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 2.
[000135] Em uma modalidade particular, a protease é uma variante em (b) que compreende uma substituição em pelo menos uma posição correspondente às posições 171, 173, 175, 179 ou 180, e em que o aminoácido na posição correspondente à posição 171 da SEQ ID NO: 2 é selecionado dentre o grupo que consiste em W, K, E, D e N, isto é, X171W, X171K, X171E, X171D e X171N; e/ou o aminoácido na posição correspondente à posição 173 da SEQ ID NO: 2 é P; e/ou o aminoácido na posição correspondente à posição 175 da SEQ ID NO: 2 é selecionado dentre o grupo que consiste em A, V e P, isto é,X175A, X175V e X175P; e/ou o aminoácido na posição correspondente à posição 179 da SEQ ID NO: 2 é selecionado dentre o grupo que consiste em C, V, Q, S, T, E, H, K, M, N, Y e A, isto é, X179C, X179V, X179Q, X179S, X179T, X179E, X179H, X179K, X179M, X179N, X179Y, e X179A; e/ou o aminoácido na posição correspondente à posição 180 da SEQ ID NO: 2 é Y.
[000136] Em uma modalidade particular, a variante de protease em (b) compreende uma substituição selecionada dentre S173P, S175P ou F180Y em que as posições correspondem às posições da SEQ ID NO: 2.
[000137] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E +Q172K+A174*+ G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S173P, S175P ou F180Y (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 2), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 2.
[000138] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende: pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S173P, S175P ou F180Y (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 2), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 2.
[000139] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q +R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+ P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S173P, S175P ou F180Y (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 2), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 2.
[000140] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q +Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, em que a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S173P, S175P ou F180Y (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 2), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 2.
[000141] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+ F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S173P, S175P ou F180Y (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 2), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 2.
[000142] Em uma modalidade particular, as composições detergentes compreendem; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H +T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+ K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S173P, S175P ou F180Y (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 2), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 2.
[000143] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H +T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+ K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S173P, S175P ou F180Y (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 2), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 2.
[000144] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+T134E +A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S173P, S175P ou F180Y (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 2), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 2.
[000145] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S173P, S175P ou F180Y (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 2), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 2.
[000146] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+W167F +Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S173P, S175P ou F180Y (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 2), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 2.
[000147] Em uma modalidade, a composição detergente compreende pelo menos uma protease que é uma protease (SEQ ID NO: 3) Savinase.
[000148] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+ Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease da SEQ ID NO: 3.
[000149] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende: pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+R116H +A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease da SEQ ID NO: 3.
[000150] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+ R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P 473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease da SEQ ID NO: 3.
[000151] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q +Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease da SEQ ID NO: 3.
[000152] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+ W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease da SEQ ID NO: 3.
[000153] Em uma modalidade particular, as composições detergentes compreendem; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+ R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G 255A+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa- amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease da SEQ ID NO: 3.
[000154] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+ T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K 391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease da SEQ ID NO: 3.
[000155] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+T134E +A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease da SEQ ID NO: 3.
[000156] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease da SEQ ID NO: 3.
[000157] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+ Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% , por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99, 2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma protease da SEQ ID NO: 3.
[000158] Em uma modalidade, a composição detergente compreende pelo menos uma variante de protease que é uma variante de (SEQ ID NO: 3) Savinase. A variante de Savinase é uma variante de uma protease parental que tem uma identidade de sequência de pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94% pelo menos 95% de identidade , pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3.
[000159] Desse modo, em uma modalidade, a protease é uma variante de protease que compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições 32, 33, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 58, 59,60, 61, 62, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 116, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 150, 152, 153, 154, 155, 156, 158, 159, 160, 161, 164, 169, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 197, 198, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, e 216 em comparação à protease na SEQ ID NO:3, em que a dita variante de protease tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3.
[000160] Em uma modalidade particular, a modificação em pelo menos uma posição na dita variante de protease em (c) é selecionada dentre o grupo que consiste em: 9, 15, 27, 42, 52, 55, 56, 59, 60, 66, 74, 85, 97, 99, 101, 102, 104, 116, 118, 154, 156, 157, 158, 161, 164, 176, 179, 182, 185, 188, 198, 199, 200, 203, 206, 210, 211, 212, 216, 230, 232, 239, 242, 250, 253, 255, 256, e 269, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 3.
[000161] Em uma modalidade preferencial, a variante de protease compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições; X9E, X9R, X15T, X27R, X42R, X52S, X55P, X56P, X59D, X59E, X60D, X60E, X66A, X74D, X85N, X85R, X97A, X97E, X97D, X99E, X99D, X99G, X99N, X99H, X102N, X104A, X116V, X116R, X154D, X156E, X157S, X157D, X157P, X158E, X161A, X164S, X176E, X179E, X182E, X185N, X188P, X198D, X199I, X200L, X203W, X206G, X210V, X211D, X211Q, X211E, X212D, X212E, X212S, X216S, X216A, X230H, X239R, X242D, X250D, X253D, X255W, X255D, X255E, X256E, X256D, e X269H, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 3.
[000162] Em uma modalidade preferencial adicional, variante de protease tem atividade de protease e compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S9R, A15T, V68A, N218D ou Q245R (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 3), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3.
[000163] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+ Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S9R, A15T, V68A, N218D ou Q245R (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 3), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3.
[000164] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende: pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S9R, A15T, V68A, N218D ou Q245R (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 3), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3.
[000165] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q +R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+ P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S9R, A15T, V68A, N218D ou Q245R (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 3), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3.
[000166] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+ R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G 476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S9R, A15T, V68A, N218D ou Q245R (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 3), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3.
[000167] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q +W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S9R, A15T, V68A, N218D ou Q245R (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 3), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3.
[000168] Em uma modalidade particular, as composições detergentes compreendem; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H +T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+ K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S9R, A15T, V68A, N218D ou Q245R (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 3), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3.
[000169] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H +T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+ K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S9R, A15T, V68A, N218D ou Q245R (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 3), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3.
[000170] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S9R, A15T, V68A, N218D ou Q245R (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 3), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3.
[000171] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S +G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S9R, A15T, V68A, N218D ou Q245R (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 3), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3.
[000172] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+ L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S9R, A15T, V68A, N218D ou Q245R (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 3), em que a variante de protease é uma variante de protease de uma protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3.
[000173] Em uma modalidade preferencial adicional, a variante de protease tem atividade de protease e é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) X9R + X15T + X68A + X218D + X245R; (b) X9R + X15T + X68A + X245R; (c) X61E + X194P + X205I + X261D; (d) X61D + X205I + X245R; (e) X61E + X194P + X205I + X261D; (f) X87N + X118V + X128L + X129Q + X130A; (g) X87N + X101M + X118V + X128L + X129Q + X130A; (h) X76D + X87R + X118R + X128L+ X129Q + X130A; (i) X22A+ X62D + X101G +X188D + X232V + X245R; (j) X103A + X104I, (k) X22R + X101G + X232V + X245R; (l) X103A + X104I + X156D; (m) X103A + X104I + X261E; (n) X62D + X245R; (o) X101N + X128A + X217Q; (p) X101E + X217Q; (q) X101E + X217D; (r) X9E + X43R + X262E; (s) X76D + X43R +X209W; (t) X205I + X206L + X209W; (u) X185E + X188E + X205I; (v) X256D + X261W + X262E; (w) X191N + X209W; (x) X261E + X262E; (y) X261E + X262D; e (z) X167A + X170S + X194P, em que as posições correspondem às posições da SEQ ID NO: 23, e a protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000174] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+ Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease tem atividade de protease e é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) X9R + X15T + X68A + X218D + X245R; (b) X9R + X15T + X68A + X245R; (c) X61E + X194P + X205I + X261D; (d) X61D + X205I + X245R; (e) X61E + X194P + X205I + X261D; (f) X87N + X118V + X128L + X129Q + X130A; (g) X87N + X101M + X118V + X128L + X129Q + X130A; (h) X76D + X87R + X118R + X128L+ X129Q + X130A; (i) X22A+ X62D + X101G +X188D + X232V + X245R; (j) X103A + X104I, (k) X22R + X101G + X232V + X245R; (l) X103A + X104I + X156D; (m) X103A + X104I + X261E; (n) X62D + X245R; (o) X101N + X128A + X217Q; (p) X101E + X217Q; (q) X101E + X217D; (r) X9E + X43R + X262E; (s) X76D + X43R +X209W; (t) X205I + X206L + X209W; (u) X185E + X188E + X205I; (v) X256D + X261W + X262E; (w) X191N + X209W; (x) X261E + X262E; (y) X261E + X262D; e (z) X167A + X170S + X194P, em que as posições correspondem às posições da SEQ ID NO: 23, e a protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000175] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende: pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease que compreende uma ou mais dentre as seguintes substituições: S9R, A15T, V68A, N218D ou Q245R (numeração de acordo com a SEQ ID NO: 3), em que a variante de protease tem atividade de protease e é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) X9R + X15T + X68A + X218D + X245R; (b) X9R + X15T + X68A + X245R; (c) X61E + X194P + X205I + X261D; (d) X61D + X205I + X245R; (e) X61E + X194P + X205I + X261D; (f) X87N + X118V + X128L + X129Q + X130A; (g) X87N + X101M + X118V + X128L + X129Q + X130A; (h) X76D + X87R + X118R + X128L+ X129Q + X130A; (i) X22A+ X62D + X101G +X188D + X232V + X245R; (j) X103A + X104I, (k) X22R + X101G + X232V + X245R; (l) X103A + X104I + X156D; (m) X103A + X104I + X261E; (n) X62D + X245R; (o) X101N + X128A + X217Q; (p) X101E + X217Q; (q) X101E + X217D; (r) X9E + X43R + X262E; (s) X76D + X43R +X209W; (t) X205I + X206L + X209W; (u) X185E + X188E + X205I; (v) X256D + X261W + X262E; (w) X191N + X209W; (x) X261E + X262E; (y) X261E + X262D; e (z) X167A + X170S + X194P, em que as posições correspondem às posições da SEQ ID NO: 23, e a protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000176] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q +R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+ P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease tem atividade de protease e é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) X9R + X15T + X68A + X218D + X245R; (b) X9R + X15T + X68A + X245R; (c) X61E + X194P + X205I + X261D; (d) X61D + X205I + X245R; (e) X61E + X194P + X205I + X261D; (f) X87N + X118V + X128L + X129Q + X130A; (g) X87N + X101M + X118V + X128L + X129Q + X130A; (h) X76D + X87R + X118R + X128L+ X129Q + X130A; (i) X22A+ X62D + X101G +X188D + X232V + X245R; (j) X103A + X104I, (k) X22R + X101G + X232V + X245R; (l) X103A + X104I + X156D; (m) X103A + X104I + X261E; (n) X62D + X245R; (o) X101N + X128A + X217Q; (p) X101E + X217Q; (q) X101E + X217D; (r) X9E + X43R + X262E; (s) X76D + X43R +X209W; (t) X205I + X206L + X209W; (u) X185E + X188E + X205I; (v) X256D + X261W + X262E; (w) X191N + X209W; (x) X261E + X262E; (y) X261E + X262D; e (z) X167A + X170S + X194P, em que as posições correspondem às posições da SEQ ID NO: 23, e a protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000177] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+ R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G 476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease tem atividade de protease e é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) X9R + X15T + X68A + X218D + X245R; (b) X9R + X15T + X68A + X245R; (c) X61E + X194P + X205I + X261D; (d) X61D + X205I + X245R; (e) X61E + X194P + X205I + X261D; (f) X87N + X118V + X128L + X129Q + X130A; (g) X87N + X101M + X118V + X128L + X129Q + X130A; (h) X76D + X87R + X118R + X128L+ X129Q + X130A; (i) X22A+ X62D + X101G +X188D + X232V + X245R; (j) X103A + X104I, (k) X22R + X101G + X232V + X245R; (l) X103A + X104I + X156D; (m) X103A + X104I + X261E; (n) X62D + X245R; (o) X101N + X128A + X217Q; (p) X101E + X217Q; (q) X101E + X217D; (r) X9E + X43R + X262E; (s) X76D + X43R +X209W; (t) X205I + X206L + X209W; (u) X185E + X188E + X205I; (v) X256D + X261W + X262E; (w) X191N + X209W; (x) X261E + X262E; (y) X261E + X262D; e (z) X167A + X170S + X194P, em que as posições correspondem às posições da SEQ ID NO: 23, e a protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000178] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q +W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa- amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease tem atividade de protease e é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) X9R + X15T + X68A + X218D + X245R; (b) X9R + X15T + X68A + X245R; (c) X61E + X194P + X205I + X261D; (d) X61D + X205I + X245R; (e) X61E + X194P + X205I + X261D; (f) X87N + X118V + X128L + X129Q + X130A; (g) X87N + X101M + X118V + X128L + X129Q + X130A; (h) X76D + X87R + X118R + X128L+ X129Q + X130A; (i) X22A+ X62D + X101G +X188D + X232V + X245R; (j) X103A + X104I, (k) X22R + X101G + X232V + X245R; (l) X103A + X104I + X156D; (m) X103A + X104I + X261E; (n) X62D + X245R; (o) X101N + X128A + X217Q; (p) X101E + X217Q; (q) X101E + X217D; (r) X9E + X43R + X262E; (s) X76D + X43R +X209W; (t) X205I + X206L + X209W; (u) X185E + X188E + X205I; (v) X256D + X261W + X262E; (w) X191N + X209W; (x) X261E + X262E; (y) X261E + X262D; e (z) X167A + X170S + X194P, em que as posições correspondem às posições da SEQ ID NO: 23, e a protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000179] Em uma modalidade particular, as composições detergentes compreendem; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H +T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+ K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease tem atividade de protease e é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) X9R + X15T + X68A + X218D + X245R; (b) X9R + X15T + X68A + X245R; (c) X61E + X194P + X205I + X261D; (d) X61D + X205I + X245R; (e) X61E + X194P + X205I + X261D; (f) X87N + X118V + X128L + X129Q + X130A; (g) X87N + X101M + X118V + X128L + X129Q + X130A; (h) X76D + X87R + X118R + X128L+ X129Q + X130A; (i) X22A+ X62D + X101G +X188D + X232V + X245R; (j) X103A + X104I, (k) X22R + X101G + X232V + X245R; (l) X103A + X104I + X156D; (m) X103A + X104I + X261E; (n) X62D + X245R; (o) X101N + X128A + X217Q; (p) X101E + X217Q; (q) X101E + X217D; (r) X9E + X43R + X262E; (s) X76D + X43R +X209W; (t) X205I + X206L + X209W; (u) X185E + X188E + X205I; (v) X256D + X261W + X262E; (w) X191N + X209W; (x) X261E + X262E; (y) X261E + X262D; e (z) X167A + X170S + X194P, em que as posições correspondem às posições da SEQ ID NO: 23, e a protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000180] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H +T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+ K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease tem atividade de protease e é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) X9R + X15T + X68A + X218D + X245R; (b) X9R + X15T + X68A + X245R; (c) X61E + X194P + X205I + X261D; (d) X61D + X205I + X245R; (e) X61E + X194P + X205I + X261D; (f) X87N + X118V + X128L + X129Q + X130A; (g) X87N + X101M + X118V + X128L + X129Q + X130A; (h) X76D + X87R + X118R + X128L+ X129Q + X130A; (i) X22A+ X62D + X101G +X188D + X232V + X245R; (j) X103A + X104I, (k) X22R + X101G + X232V + X245R; (l) X103A + X104I + X156D; (m) X103A + X104I + X261E; (n) X62D + X245R; (o) X101N + X128A + X217Q; (p) X101E + X217Q; (q) X101E + X217D; (r) X9E + X43R + X262E; (s) X76D + X43R +X209W; (t) X205I + X206L + X209W; (u) X185E + X188E + X205I; (v) X256D + X261W + X262E; (w) X191N + X209W; (x) X261E + X262E; (y) X261E + X262D; e (z) X167A + X170S + X194P, em que as posições correspondem às posições da SEQ ID NO: 23, e a protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000181] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa-amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease tem atividade de protease e é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) X9R + X15T + X68A + X218D + X245R; (b) X9R + X15T + X68A + X245R; (c) X61E + X194P + X205I + X261D; (d) X61D + X205I + X245R; (e) X61E + X194P + X205I + X261D; (f) X87N + X118V + X128L + X129Q + X130A; (g) X87N + X101M + X118V + X128L + X129Q + X130A; (h) X76D + X87R + X118R + X128L+ X129Q + X130A; (i) X22A+ X62D + X101G +X188D + X232V + X245R; (j) X103A + X104I, (k) X22R + X101G + X232V + X245R; (l) X103A + X104I + X156D; (m) X103A + X104I + X261E; (n) X62D + X245R; (o) X101N + X128A + X217Q; (p) X101E + X217Q; (q) X101E + X217D; (r) X9E + X43R + X262E; (s) X76D + X43R +X209W; (t) X205I + X206L + X209W; (u) X185E + X188E + X205I; (v) X256D + X261W + X262E; (w) X191N + X209W; (x) X261E + X262E; (y) X261E + X262D; e (z) X167A + X170S + X194P, em que as posições correspondem às posições da SEQ ID NO: 23, e a protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000182] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S +G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease tem atividade de protease e é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) X9R + X15T + X68A + X218D + X245R; (b) X9R + X15T + X68A + X245R; (c) X61E + X194P + X205I + X261D; (d) X61D + X205I + X245R; (e) X61E + X194P + X205I + X261D; (f) X87N + X118V + X128L + X129Q + X130A; (g) X87N + X101M + X118V + X128L + X129Q + X130A; (h) X76D + X87R + X118R + X128L+ X129Q + X130A; (i) X22A+ X62D + X101G +X188D + X232V + X245R; (j) X103A + X104I, (k) X22R + X101G + X232V + X245R; (l) X103A + X104I + X156D; (m) X103A + X104I + X261E; (n) X62D + X245R; (o) X101N + X128A + X217Q; (p) X101E + X217Q; (q) X101E + X217D; (r) X9E + X43R + X262E; (s) X76D + X43R +X209W; (t) X205I + X206L + X209W; (u) X185E + X188E + X205I; (v) X256D + X261W + X262E; (w) X191N + X209W; (x) X261E + X262E; (y) X261E + X262D; e (z) X167A + X170S + X194P, em que as posições correspondem às posições da SEQ ID NO: 23, e a protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23.
[000183] Em uma modalidade particular, a composição detergente compreende; pelo menos uma variante de alfa- amilase que compreende as seguintes modificações: H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+ L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 1, a variante de alfa- amilase é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1 e 14; e pelo menos uma variante de protease tem atividade de protease e é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) X9R + X15T + X68A + X218D + X245R; (b) X9R + X15T + X68A + X245R; (c) X61E + X194P + X205I + X261D; (d) X61D + X205I + X245R; (e) X61E + X194P + X205I + X261D; (f) X87N + X118V + X128L + X129Q + X130A; (g) X87N + X101M + X118V + X128L + X129Q + X130A; (h) X76D + X87R + X118R + X128L+ X129Q + X130A; (i) X22A+ X62D + X101G +X188D + X232V + X245R; (j) X103A + X104I, (k) X22R + X101G + X232V + X245R; (l) X103A + X104I + X156D; (m) X103A + X104I + X261E; (n) X62D + X245R; (o) X101N + X128A + X217Q; (p) X101E + X217Q; (q) X101E + X217D; (r) X9E + X43R + X262E; (s) X76D + X43R +X209W; (t) X205I + X206L + X209W; (u) X185E + X188E + X205I; (v) X256D + X261W + X262E; (w) X191N + X209W; (x) X261E + X262E; (y) X261E + X262D; e (z) X167A + X170S + X194P, em que as posições correspondem às posições da SEQ ID NO: 23, e a protease parental que tem pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, tal como pelo menos 75%, por exemplo, tal como pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23. A composição detergente da presente invenção pode compreender enzimas adicionais. Tais enzimas adicionais podem ser alfa-amilase, protease, lipase, celulase, beta-glucanase ou quaisquer outras enzimas. Em particular, a composição detergente compreende adicionalmente uma ou mais enzimas adicionais selecionadas dentre o grupo que consiste em: (A) uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, ou uma variante da mesma que tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100% em relação à SEQ ID NO: 5, e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase. (B) uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6, ou uma variante da mesma que tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100% em relação à SEQ ID NO: 6, e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase. (C) uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7, ou uma variante da mesma que tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100% em relação à SEQ ID NO: 7, e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase. (D) uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8, ou uma variante da mesma que tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100% em relação à SEQ ID NO: 8, e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase. (E) uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9, ou uma variante da mesma que tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100% em relação à SEQ ID NO: 9, e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase. (F) uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10, ou uma variante da mesma que tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100% em relação à SEQ ID NO: 10, e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase. (G) uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13, ou uma variante da mesma que tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100% em relação à SEQ ID NO: 13, e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase. (H) uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 14, ou uma variante da mesma que tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100% em relação à SEQ ID NO: 14, e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase. (I) uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11, ou uma variante da mesma que tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100% em relação à SEQ ID NO: 11, e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase. (J) uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12, ou uma variante da mesma que tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100% em relação à SEQ ID NO: 12, e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase. (K) uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 15, ou uma variante da mesma que tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100% em relação à SEQ ID NO: 15, e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase. (L) uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 16, ou uma variante da mesma que tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100% em relação à SEQ ID NO: 16, e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase. (M) uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17, ou uma variante da mesma que tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100% em relação à SEQ ID NO: 17, e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase. (N) uma alfa-amilase que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 18, ou uma variante da mesma que tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100% em relação à SEQ ID NO: 18, e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase. (O) uma lipase que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, ou uma variante da mesma que tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100% em relação à SEQ ID NO: 4, e em que a dita variante de lipase tem atividade de lipase, e (P) uma protease que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2, 3, 19, 20 ou 23, ou uma variante da mesma que tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100% em relação à SEQ ID NO: 2, 3, 19, 20 ou 23, e em que a variante de protease tem atividade de protease.
[000184] O termo "enzimas adicionais" conforme usado no presente documento, se refere a um conjunto de enzimas, que pode ser incluído adicionalmente na composição detergente da presente invenção. Tais enzimas podem ser qualquer enzima que cuja utilidade é acreditada na composição detergente da presente invenção. Desse modo, o conjunto de enzimas não se limita às enzimas que são diferentes da pelo menos uma variante de alfa-amilase que compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições 1, 54, 56, 72, 109, 113, 116, 134, 140, 159, 167, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473, 476, ou 477 da SEQ ID NO: 1, em que a dita variante de alfa- amilase tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100%, em relação à SEQ ID NO: 1 e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase; e em que a pelo menos uma protease é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) uma protease que tem uma identidade de sequência de pelo menos 70%, tal como, pelo menos 75%, tal como pelo menos 80%, tal como pelo menos 85%, tal como pelo menos 90%, tal como pelo menos 95%, tal como pelo menos 98%, tal como pelo menos 99%, tal como 100%, em relação às sequências de SEQ ID NOs: 3, 4, 19, 20 ou 23; (b) uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 171, 173, 175, 179 ou 180 da SEQ ID NO: 2, em que a dita variante de protease tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100%, em relação à SEQ ID NO: 2; e (c) uma variante de protease que compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições 32, 33, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 58, 59,60, 61, 62, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 116, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 150, 152, 153, 154, 155, 156, 158, 159, 160, 161, 164, 169, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 197, 198, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, e 216 em comparação à protease na SEQ ID NO:3, em que a dita variante de protease tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3, uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 9, 15, 27, 42, 52, 55, 56, 59, 60, 66, 74, 85, 97, 99, 101, 102, 104, 116, 118, 154, 156, 157, 158, 161, 164, 176, 179, 182, 185, 188, 198, 199, 200, 203, 206, 210, 211, 212, 216, 230, 232, 239, 242, 250, 253, 255, 256, ou 269, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 3, em que a dita variante de protease tem pelo menos 60% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3 ou uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 32, 33, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 61, 62, 63, 64, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 118, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 154, 155, 156, 157, 158, 161, 162, 163, 167, 170, 175, 181, 187, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 203, 204, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, ou 222 em comparação à protease mostrada em SEQ ID NO: 23, em que a dita variante de protease tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23, porém, pode ser a adição da outra enzima variante que é abrangida pela definição mencionada. No entanto, o conjunto de enzimas (ou denominado "as enzimas adicionais") pode ser variantes diferentes de proteases, amilases ou qualquer outra classe de enzima.
[000185] O termo "lipase", conforme usado no presente documento, se refere a uma lipase que tem atividade de lipase. A lipase definida no presente documento pode ser uma hidrolase de éster carboxílico EC 3.1.1 - que inclui atividades, tais como triacilglicerol lipase EC 3.1.1.3, fosfolipase A2 EC 3.1.1.4, lisofofolipase EC 3.1.1.5, galactolipase EC 3.1.1.26, fosfolipase EC 3.1.1.32 A1, feruloil esterase EC 3.1.1.73.
[000186] Em uma modalidade, a enzima adicional é uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou 18, e em que a variante de alfa-amilase tem atividade de alfa- amilase. Desse modo, em uma modalidade, a alfa-amilase adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 5. Em uma modalidade, a variante de alfa-amilase adicional compreende pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 5, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%.
[000187] Em uma modalidade, a alfa-amilase adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 6. Em uma modalidade, a variante de alfa-amilase adicional compreende pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 6, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%.
[000188] Em uma modalidade, a alfa-amilase adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 7. Em uma modalidade, a variante de alfa-amilase adicional compreende pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 7, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%.
[000189] Em uma modalidade, a alfa-amilase adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 8. Em uma modalidade, a variante de alfa-amilase adicional compreende pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 8, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%.
[000190] Em uma modalidade, a alfa-amilase adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 9. Em uma modalidade, a variante de alfa-amilase adicional compreende pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 9, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%.
[000191] Em uma modalidade, a alfa-amilase adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 10. Em uma modalidade, a variante de alfa-amilase adicional compreende pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 10, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%.
[000192] Em uma modalidade, a alfa-amilase adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 11. Em uma modalidade, a variante de alfa-amilase adicional compreende pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 12, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%.
[000193] Em uma modalidade, a alfa-amilase adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 12. Em uma modalidade, a variante de alfa-amilase adicional compreende pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 12, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%.
[000194] Em uma modalidade, a alfa-amilase adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 13. Em uma modalidade, a variante de alfa-amilase adicional compreende pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 13, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%.
[000195] Em uma modalidade, a alfa-amilase adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 14. Em uma modalidade, a variante de alfa-amilase adicional compreende pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 14, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%.
[000196] Em uma modalidade, a alfa-amilase adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 15. Em uma modalidade, a variante de alfa-amilase adicional compreende pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 15, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%.
[000197] Em uma modalidade, a alfa-amilase adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 16. Em uma modalidade, a variante de alfa-amilase adicional compreende pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 16, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%.
[000198] Em uma modalidade, a alfa-amilase adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 17. Em uma modalidade, a variante de alfa-amilase adicional compreende pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 17, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%.
[000199] Em uma modalidade, a alfa-amilase adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 18. Em uma modalidade, a variante de alfa-amilase adicional compreende pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 18, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%.
[000200] Em uma modalidade, a enzima adicional é uma lipase que tem a sequência de SEQ ID NO: 4. Em outra modalidade, a enzima adicional é uma variante de lipase de uma lipase parental que tem a sequência de SEQ ID NO:4 ou que tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 4, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%.
[000201] Em uma modalidade, a enzima adicional de: (A) é uma variante de alfa-amilase que compreende uma ou mais modificações nas seguintes posições: 9, 118, 149, 182, 186, 195, 202, 257, 295, 299, 320, 323, 339, 345, e 458, em que as posições correspondem às posições na SEQ ID NO:5; (B) é uma variante de alfa-amilase que compreende uma ou mais modificações nas seguintes posições: 140, 195, 183, 184 e 206, em que as posições correspondem às posições na SEQ ID NO: 6; (C) é uma variante de alfa-amilase que compreende uma ou mais modificações nas seguintes posições: 180, 181, 243 e 475, em que as posições correspondem às posições em SEQ ID NO: 7; (D) é uma variante de alfa-amilase que compreende uma ou mais modificações nas seguintes posições: 178, 179, 187, 203, 458, 459, 460 e 476, em que as posições correspondem às posições em SEQ ID NO: 8; (E) é uma variante de alfa-amilase que compreende uma modificação na seguinte posição 202, em que a posição corresponde à posição em SEQ ID NO:9; (F) é uma variante de alfa-amilase que compreende uma ou mais modificações nas seguintes posições: 405, 421, 422 e 428, em que as posições correspondem às posições em SEQ ID NO: 10; (G) é uma variante de alfa-amilase que compreende uma ou mais modificações nas seguintes posições: 48, 49, 107, 156, 181, 190, 209 e 264 da SEQ ID NO: 13; e (O) é uma variante de lipase que compreende uma ou mais modificações nas seguintes posições: 4, 27, 33, 38, 57, 58, 60, 83, 86, 91, 94, 96, 97, 99, 111, 150, 163, 210, 216, 225, 227, 231, 233, 249, 254, 255, 256, 263, 264, 265, 266, 267, e 269 da SEQ ID NO: 4.
[000202] Em uma modalidade preferencial, a enzima adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 5. Em uma modalidade preferencial, a enzima adicional é uma variante que compreende uma ou mais modificações nas seguintes posições: 9, 118, 149, 182, 186, 195, 202, 257, 295, 299, 320, 323, 339, 345, e 458 da SEQ ID NO: 5, em que a variante adicional de alfa-amilase tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 5, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%. Em uma modalidade particular, a alfa-amilase adicional compreende as seguintes modificações: R118K+D183*+G184*+N195F+R320K+R458K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 5. Em outra modalidade particular, a enzima adicional compreende as seguintes modificações: M9L+R118K+G149A+G182T+G186A +D183*+G184*+N195F+M202L+T257I+Y295F+N299Y+R320K+M323T+A339S+ E345R+R458K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 5.
[000203] Em uma modalidade preferencial, a enzima adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 6. Em uma modalidade preferencial, a enzima adicional é uma variante que compreende uma ou mais modificações nas seguintes posições: 140, 195, 183, 184 e 206 da SEQ ID NO: 6, em que a variante adicional de alfa-amilase tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 6, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%. Em uma modalidade particular, a alfa-amilase adicional compreende as seguintes modificações: W140Y+D183*+G184*+N195F+I206Y, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 6.
[000204] Em uma modalidade preferencial, a enzima adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 7. Em uma modalidade preferencial, a enzima adicional é uma variante que compreende uma ou mais modificações nas seguintes posições: 180, 181, 243 e 475 da SEQ ID NO: 7, em que a variante adicional de alfa-amilase tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 7, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%. Em uma modalidade particular, a alfa-amilase adicional compreende as seguintes modificações: R180*+S181*+S243Q+G475K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 7.
[000205] Em uma modalidade preferencial, a enzima adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 8. Em uma modalidade preferencial, a enzima adicional é uma variante que compreende uma ou mais modificações nas seguintes posições: 178, 179, 187, 203, 458, 459, 460 e 476 da SEQ ID NO: 8, em que a variante adicional de alfa-amilase tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 8, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%. Em uma modalidade particular, a alfa- amilase adicional compreende as seguintes modificações: R178*+G179*+E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 8.
[000206] Em uma modalidade preferencial, a enzima adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 9. Em uma modalidade preferencial, a enzima adicional é uma variante que compreende uma modificação na seguinte posição: 202 de SEQ ID NO: 9, em que a variante adicional de alfa-amilase tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 9, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%. Em uma modalidade particular, a alfa-amilase adicional compreende a seguinte modificação: M202L, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 9.
[000207] Em uma modalidade preferencial, a enzima adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 10. Em uma modalidade preferencial, a enzima adicional é uma variante que compreende uma ou mais modificações nas seguintes posições: 405, 421, 422 e 428 da SEQ ID NO: 10, em que a variante adicional de alfa-amilase tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 10, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%. Em uma modalidade particular, a alfa-amilase adicional compreende as seguintes modificações: I405L+A421H+A422P+A428T, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 10.
[000208] Em uma modalidade preferencial, a enzima adicional é uma variante de uma alfa-amilase parental da SEQ ID NO: 13. Em uma modalidade preferencial, a enzima adicional é uma variante que compreende uma ou mais modificações nas seguintes posições: 48, 49, 107, 156, 181, 190, 209 e 264 da SEQ ID NO: 13, em que a variante adicional de alfa-amilase tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 13, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%. Em uma modalidade particular, a alfa- amilase adicional compreende as seguintes modificações: G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+L201F+A209V+Q264S, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 10.
[000209] Em uma modalidade preferencial, a enzima adicional é uma variante de lipase de uma lipase parental da SEQ ID NO: 4. Em uma modalidade preferencial, a enzima adicional é uma variante que compreende uma ou mais modificações nas seguintes posições: 4, 27, 33, 38, 57, 58, 60, 83, 86, 91, 94, 96, 97, 99, 111, 150, 163, 210, 216, 225, 227, 231, 233, 249, 254, 255, 256, 263, 264, 265, 266, 267, e 269 da SEQ ID NO: 4 em que a variante de lipase tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 4, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6, porém, menos que 100%.
[000210] Em uma modalidade preferencial adicional, a enzima adicional é uma variante de lipase de uma lipase parental da SEQ ID NO: 4, em que a variante de lipase compreende uma ou mais modificações selecionadas dentre o grupo que consiste em: X1C, X2K, X2Y, X4V, X27R, X33K, X33Q, X38A, X54T, X56K, X57G, X58A, X60S, X69R, X83T, X86V, X91A, X91N, X91Q, X91T, X94K, X91R, X96E, X91G, X91L, X91W, X97M, X98E, X98I, X99K, X101D, X111A, X163K, X176L, X210K, X210Q, X210R, X216P, X220F, X225R, X227G, X231R, X233C, X233R, X249R, X254S, X256V, X263Q, X264A, X265T, X266D, X267A, e X269N da SEQ ID NO: 4.
[000211] Em outra modalidade, a composição detergente compreende mais que uma enzima adicional, tal como duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez enzimas adicionais.
[000212] Em uma modalidade, a composição detergente de acordo com a invenção compreende duas ou mais enzimas, tais como pelo menos três enzimas, com mais preferência, pelo menos quatro ou cinco enzimas. De preferência, as enzimas têm especificidade de substrato diferente, por exemplo, atividade protelítica, atividade amilolítica, atividade lipolítica, atividade hemicelulítica ou atividade pectolítica
[000213] A composição detergente de acordo com a invenção pode compreender uma ou mais enzimas adicionais, tais como enzimas ativas de carbo-hidrato como carbo-hidrase, pectinase, mananase, amilase, celulase, arabinase, galactanase, xilanase ou protease, lipase, uma cutinase, oxidase, por exemplo, uma lacase e/ou peroxidase.
[000214] Em geral, as propriedades da enzima (ou enzimas) selecionada devem ser compatíveis com o detergente selecionado (isto é,pH ótimo, compatibilidade com outros ingredientes enzimáticos e não enzimáticos, etc.), e aenzima (ou enzimas) deve estar presente em quantidades eficazes.
[000215] As celulases adequadas incluem aquelas de origem bacteriana ou fúngica. São incluídos mutantes quimicamente modificados ou com manipulação de proteínas. As celulases adequadas incluem celulases dos gêneros Bacillus, Pseudomonas, Humicola, Fusarium, Thielavia, Acremonium, por exemplo, as celulases fúngicas produzidas a partir de Humicola insolens, Myceliophthora thermophila e Fusarium oxisporum divulgadas nos documentos no U.S. 4.435.307, U.S. 5.648.263, U.S. 5.691.178, U.S. 5.776.757 e WO 89/09259.
[000216] Celulases especialmente adequadas são as celulases alcalinas ou neutras tendo benefícios de cuidados da cor. Exemplos de tais celulases são celulases descritas em EP 0 495 257, EP 0 531 372, WO 96/11262, WO 96/29397, WO 98/08940. Outros exemplos são variantes de celulases tais como aquelas descritas em WO 94/07998, EP 0 531 315, US 5,457,046, US 5,686,593, US 5,763,254, WO 95/24471, WO 98/12307 e WO99/001544.
[000217] Outras celulases são enzima endo-beta-1,4- glucanase tendo uma sequência de pelo menos 97% de identidade com a sequência de aminoácidos da posição 1 à posição 773 de SEQ ID NO:2 de WO 2002/099091 ou uma xiloglucanase da família 44, que é uma enzima xiloglucanase tendo uma sequência de pelo menos 60% de identidade com as posições 40-559 de SEQ ID NO: 2 do documento WO 2001/062903.
[000218] Celulases comercialmente disponíveis incluem Celluzyme™, e Carezyme™ (Novozymes A/S) Carezyme Premium™ (Novozymes A/S), Celluclean™ (Novozymes A/S), Celluclean Classic™ (Novozymes A/S), Cellusoft™ (Novozymes A/S), Whitezyme™ (Novozymes A/S), Clazinase™, e Puradax HA™ (Genencor International Inc.), e KAC-500(B)™ (Kao Corporation).
[000219] Mananases adequadas incluem as de origem bacteriana ou fúngica. São incluídos mutantes quimicamente ou geneticamente modificados. A mananase pode ser uma mananase alcalina da Família 5 ou 26. Pode ser um tipo selvagem de Bacillus ou Humicola, particularmente B. agaradhaerens, B. licheniformis, B. halodurans, B. clausii, ou H. insolens. Mananases adequadas são descritas em WO 1999/064619. Uma mananase comercialmente disponível é Mannaway (Novozymes A/S).
[000220] As proteases adicionais adequadas incluem aquelas de origem bacteriana, fúngica, de planta, viral ou animal, por exemplo, origem vegetal ou microbiana. A origem microbiana é preferencial. São incluídos mutantes quimicamente modificados ou com manipulação de proteínas. Pode ser uma protease alcalina, tal como uma serina protease ou uma metaloprotease. Uma serina protease pode ser por exemplo da família S1, tal como tripsina, ou da família S8 tal como subtilisina. Uma metaloproteases protease pode, por exemplo, ser uma termolisina, por exemplo, da família M4 ou outra metaloprotease, tal como aquela das famílias M5, M7 ou M8.
[000221] O termo "subtilases" se refere a um subgrupo de serina protease de acordo com Siezen et al., Protein Engng. 4 (1991) 719 a 737 e Siezen et al. Protein Science 6 (1997) 501 a 523. As serina proteases são um subgrupo de proteases caracterizadas por terem uma serina no sítio ativo, que forma um aduto covalente com o substrato. As subtilases podem ser divididas em 6 subdivisões, isto é,a família Subtilisina, a família Termitase, uma família Proteinase K, uma família peptidase lantibiótica, uma família Kexin e uma família Pirolisina.
[000222] Exemplos de subtilases são aquelas derivadas de Bacillus tais como Bacillus lentus, B. alkalophilus, B. subtilis, B. amyloliquefaciens, Bacillus pumilus e Bacillus gibsonii descritas em US7262042 e WO09/021867, e subtilisina lentus, subtilisina Novo, subtilisina Carlsberg, Bacillus licheniformis, subtilisina BPN’, subtilisina 309, subtilisina 147 e subtilisina 168 descritas em WO89/06279 e protease PD138 descrita em (WO93/18140). Outras proteases úteis podem ser aquelas descritas em WO92/175177, WO01/016285, WO02/026024 e WO02/016547. Exemplos de proteases tipo tripsina são tripsina (por exemplo, de origem suína ou bovina) e a protease de Fusarium descrita nos documentos nos WO89/06270, WO94/25583 e WO05/040372, e as proteases quimotripsina derivadas de Cellulomonas descritas nos documentos nos WO05/052161 e WO05/052146.
[000223] Uma protease preferencial adicional é a protease alcalina de Bacillus lentus DSM 5483, como descrito por exemplo em WO95/23221, e suas variantes que são descritas em WO92/21760, WO95/23221, EP1921147 e EP1921148.
[000224] Exemplos de metaloproteases são a metaloprotease neutra como descrita em WO07/044993 (Genencor Int.) tais como aquelas derivadas de Bacillus amyloliquefaciens.
[000225] Exemplos de proteases úteis são as variantes descritas em: WO92/19729, WO96/034946, WO98/20115, WO98/20116, WO99/011768, WO01/44452, WO03/006602, WO04/03186, WO04/041979, WO07/006305, WO11/036263, WO11/036264, especialmente as variantes com substituições em uma ou mais das seguintes posições: 3, 4, 9, 15, 27, 36, 57, 68, 76, 87, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 106, 118, 120, 123, 128, 129, 130, 160, 167, 170, 194, 195, 199, 205, 206, 217, 218, 222, 224, 232, 235, 236, 245, 248, 252 e 274 que usam a numeração BPN'. Mais preferencialmente, as variantes de protease podem compreender as mutações: sX3T, X4I, X9R, X15T, X27R, *36D, X68A, X76D, X87S, X87R, *97E, X98S, X99G, X99D, X99A, X99AD, X101G, X101M, X101R, X103A, X104I, X104Y, X104N, X106A, X118V, X118R, X120D, X120N, X123S, X128L, X129Q, X130A, X160D, X167A, X170S, X194P, X195E, X199M, X205I, X217D, X218D, X222S, X232V, X235L, X236H, X245R, X252K, ou X274A (que usam a numeração BPN').
[000226] Enzimas proteases adequadas disponíveis comercialmente incluem aquelas vendidas sob os nomes comerciais Alcalase®, DuralaseTm, DurazymTm, Relase®, Relase® Ultra, Savinase®, Savinase® Ultra, Primase®, Polarzyme®, Kannase®, Liquanase®, Liquanase® Ultra, Ovozyme®, Coronase®, Coronase® Ultra, Neutrase®, Everlase® and Esperase® (Novozymes A/S), os vendidos sob o nome comercial Maxatase®, Maxacal®, Maxapem®, Purafect®, Purafect Prime®, PreferenzTm, Purafect MA®, Purafect Ox®, Purafect OxP®, Puramax®, Properase®, EffectenzTm, FN2®, FN3®, FN4®, Excellase®, Eraser®, Opticlean® e Optimase® (Danisco/DuPont), AxapemTM (Gist-Brocases N.V.), BLAP (sequência mostrada na Figura 29 de US5352604) e variantes deste (Henkel AG) e KAP (subtilisina de Bacillus alkalophilus) de Kao.
[000227] As lipases e cutinases adequadas incluem aquelas de origem bacteriana ou fúngica. São incluídos mutantes quimicamente modificados ou com manipulação de proteínas. Os exemplos incluem lipase de Thermomyces, por exemplo, de T. lanuginosus (denominada anteriormente de Humicola lanuginosa), conforme descrito no documento no EP258068 e no EP305216, cutinase de Humicola, por exemplo, H. insolens (WO96/13580), lipase de cepas de Pseudomonas (algumas das mesmas agora renomeadas como Burkholderia), por exemplo, P. alcaligenes ou P. pseudoalcaligenes (EP218272), P. cepacia (EP331376), cepa de P. sp. SD705 (WO95/06720 & WO96/27002), P. wisconsinensis (WO96/12012), lipases de Streptomyces do tipo GDSL (WO10/065455), cutinase de Magnaporthe grisea (WO10/107560), cutinase de Pseudomonas mendocina (US5,389,536), lipase de Thermobifida fusca (WO11/084412), Geobacillus stearothermophilus lipase (WO11/084417), lipase de Bacillus subtilis (WO11/084599) e lipase de Streptomyces griseus (WO11/150157) e S. pristinaespiralis (WO12/137147).
[000228] Outros exemplos são variantes de lipase tais como aquelas descritas em EP407225, WO92/05249, WO94/01541, WO94/25578, WO95/14783, WO95/30744, WO95/35381, WO95/22615, WO96/00292, WO97/04079, WO97/07202, WO00/34450, WO00/60063, WO01/92502, WO07/87508 e WO09/109500.
[000229] Produtos de lipase comerciais preferenciais incluem LipolaseTM, Lipex™; LipolexTM e LipocleanTM (Novozymes A/S), Lumafast (originalmente da Genencor) e Lipomax (originalmente da Gist-Brocades).
[000230] Ainda outros exemplos são lipases às vezes denominadas de aciltransferases ou peridrolases, por exemplo, aciltransferases com homologia à lipase de Candida antarctica A (WO10/111143), aciltransferase de Mycobacterium smegmatis (WO05/56782), peridrolases da família CE 7 (WO09/67279) e variantes da peridrolase de M. smegmatis, em particular, a variante de S54V usada no produto comercial Gentle Power Bleach da Huntsman Textile Effects Pte Ltd (WO10/100028).
[000231] As amilases adicionais adequadas que podem ser usadas junto das variantes da presente invenção podem ser uma alfa-amilase ou uma glicoamilase e podem ser de origem bacteriana ou fúngica. São incluídos mutantes quimicamente modificados ou com manipulação de proteínas. Amilases incluem, por exemplo, alfa-amilases obtidas de Bacillus, por exemplo, uma cepa especial de Bacillus licheniformis, descrita em mais detalhe em GB 1,296,839.
[000232] Diferentes amilases adicionais incluem amilases tendo SEQ ID NO: 6 em WO 02/010355 ou suas variantes tendo 90% de identidade de sequências com SEQ ID NO: 6. Variantes preferenciais de SEQ ID NO: 6 são aqueles tendo uma deleção nas posições 181 e 182 e uma substituição na posição 193.
[000233] Outras amilases que são adequadas são alfa- amilase híbrida compreendendo os resíduos 1-33 da alfa- amilase derivada de B. amyloliquefaciens mostrada em SEQ ID NO: 6 do documento WO 2006/066594 e os resíduos 36 a 483 da alfa-amilase de B. licheniformis mostrada em SEQ ID NO: 4 em WO 2006/066594 ou variantes tendo 90% de identidade de sequências com a mesma. Variantes preferenciais desta alfa- amilase híbrida são aquelas tendo uma substituição, uma deleção ou uma inserção em uma ou mais das seguintes posições: G48, T49, G107, H156, A181, N190, M197, I201, A209 e Q264. Variantes mais preferenciais da alfa-amilase híbrida compreendendo os resíduos 1-33 da alfa-amilase derivada de B. amyloliquefaciens mostrada em SEQ ID NO: 6 do documento WO 2006/066594 e os resíduos 36 a 483 de SEQ ID NO: 4 são aqueles tendo as substituições: M197T; H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S; ou G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S.
[000234] Outras amilases que podem ser usadas são amilases tendo SEQ ID NO: 2 de WO 08/153815, SEQ ID NO: 10 em WO 01/66712 ou suas variantes tendo 90% de identidade de sequências com SEQ ID NO: 2 de WO 08/153815 ou 90% de identidade de sequências com SEQ ID NO: 10 em WO 01/66712. Variantes preferenciais de SEQ ID NO: 10 em WO 01/66712 são aqueles tendo uma substituição, uma deleção ou uma inserção em uma ou mais das seguintes posições: 176, 177, 178, 179, 190, 201, 207, 211 e 264.
[000235] Amilases adequadas adicionais são amilases tendo SEQ ID NO: 2 de WO 09/061380 ou variantes tendo 90% de identidade de sequências com SEQ ID NO: 2. Variantes preferenciais de SEQ ID NO: 2 são aqueles tendo uma truncação do terminal C e/ou uma substituição, uma deleção ou uma inserção em uma ou mais das seguintes posições: Q87, Q98, S125, N128, T131, T165, K178, R180, S181, T182, G183, M201, F202, N225, S243, N272, N282, Y305, R309, D319, Q320, Q359, K444 e G475. Variantes mais preferenciais de SEQ ID NO: 2 são aquelas que têm uma substituição em uma ou mais das seguintes posições: Q87E,R, Q98R, S125A, N128C, T131I, T165I, K178L, T182G, M201L, F202Y, N225E, N225R, N272E, N272R, S243Q, S243A, S243E, S243D, Y305R, R309A, Q320R, Q359E, K444E e G475K e/ou deleção na posição R180 e/ou S181 ou de T182 e/ou G183. As variantes de amilase mais preferenciais de SEQ ID NO: 2 são aquelas que têm as substituições: N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K; N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K; S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K; ou
[000236] S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475 K , em que as variantes são truncadas a terminação C e, opcionalmente, compreendem adicionalmente uma substituição na posição 243 e/ou uma deleção na posição 180 e/ou posição 181.
[000237] As amilases adequadas adicionais são amilases que têm a SEQ ID NO: 1 do documento no WO13184577 ou variantes que têm 90% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1. As variantes preferenciais de SEQ ID NO: 1 são aquelas que têm uma substituição, uma deleção ou uma inserção em uma ou mais das seguintes posições: K176, R178, G179, T180, G181, E187, N192, M199, I203, S241, R458, T459, D460, G476 e G477. As variantes mais preferenciais de SEQ ID NO: 1 são aquelas que têm uma substituição em uma ou mais das seguintes posições: K176L, E187P, N192FYH, M199L, I203YF, S241QADN, R458N, T459S, D460T, G476K e G477K e/ou deleção na posição R178 e/ou S179 ou de T180 e/ou G181. As variantes de amilase mais preferenciais de SEQ ID NO: 1 são aquelas que têm as substituições: E187P+I203Y+G476K E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K
[000238] em que as variantes também compreendem opcionalmente uma substituição na posição 241 e/ou uma deleção na posição 178 e/ou posição 179.
[000239] As amilases adequadas adicionais são amilases que têm a SEQ ID NO: 1 do documento no WO10104675 ou variantes que têm 90% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1. As variantes preferenciais de SEQ ID NO: 1 são aquelas que têm uma substituição, uma deleção ou uma inserção em uma ou mais das seguintes posições: N21, D97, V128 K177, R179, S180, I181, G182, M200, L204, E242, G477 e G478. As variantes mais preferenciais de SEQ ID NO: 1 são aquelas que têm uma substituição em uma ou mais das seguintes posições: N21D, D97N, V128I, K177L, M200L, L204YF, E242QA, G477K e G478K e/ou deleção na posição R179 e/ou S180 ou de I181 e/ou G182. As variantes de amilase mais preferenciais de SEQ ID NO: 1 são aquelas que têm as substituições: N21D+D97N+V128I, em que as variantes compreendem adicionalmente uma substituição na posição 200 e/ou uma deleção na posição 180 e/ou posição 181.
[000240] Outras amilases adequadas são a alfa-amilase tendo SEQ ID NO: 12 em WO01/66712 ou uma variante tendo pelo menos 90% de identidade de sequências com SEQ ID NO: 12. Variantes de amilases preferenciais são aquelas tendo uma substituição, uma deleção ou uma inserção em uma ou mais das seguintes posições de SEQ ID NO: 12 em WO01/66712: R28, R118, N174; R181, G182, D183, G184, G186, W189, N195, M202, Y298, N299, K302, S303, N306, R310, N314; R320, H324, E345, Y396, R400, W439, R444, N445, K446, Q449, R458, N471, N484. Amilases preferenciais particulares incluem variantes tendo uma deleção de D183 e G184 e tendo as substituições R118K, N195F, R320K e R458K, e uma variante tendo adicionalmente substituições em uma ou mais posições selecionadas do grupo: M9, G149, G182, G186, M202, T257, Y295, N299, M323, E345 e A339, com mais preferência, uma variante que tem adicionalmente substituições em todas essas posições.
[000241] Outros exemplos são variantes de amilase tais como aquelas descritas nos documentos nos WO2011/098531, WO2013/001078 e WO2013/001087.
[000242] As amilases comercialmente disponíveis são DuramylTM, TermamylTM, FungamylTM, Stainzyme TM, Stainzyme PlusTM, NatalaseTM, Liquozyme X and BANTM (from Novozymes A/S), and RapidaseTM , PurastarTM/EffectenzTM, Powerase, Preferenz S1000, Preferenz S2000, Preferenz S100 e Preferenz S110 (do Genencor International Inc./DuPont).
[000243] As peroxidases/oxidases adequadas incluem aquelas de origem vegetal, bacteriana ou fúngica. São incluídos mutantes quimicamente modificados ou com manipulação de proteínas. Os exemplos de peroxidases úteis incluem peroxidases de Coprinus, por exemplo, de C. cinereus, e variantes das mesmas como aquelas descritas nos documentos no WO 93/24618, no WO 95/10602 e WO 98/15257.
[000244] Peroxidases comercialmente disponíveis incluem Guardzyme™ (Novozymes A/S).
[000245] A composição detergente de acordo com a invenção também pode compreender enzimas adicionais, tais como pectato liases, por exemplo, PectawashTM, clorofilases etc.
[000246] A enzima de detergente (ou enzimas de detergente) pode ser incluída na composição detergente de acordo com a invenção adicionando-se aditivos separados que contêm uma ou mais enzimas ou adicionando-se um aditivo combinado que compreendem todas essas enzimas. Um aditivo detergente, isto é,um aditivo separado ou um aditivo combinado, pode ser formulado, por exemplo, como um granulado, líquido, pasta fluida etc. As formulações de aditivo detergente preferenciais são granuladas, em particular, granulados não pó, líquidos, em particular, líquidos ou pastas fluidas estabilizadas.
[000247] Granulados sem formação de poeiras podem ser produzidos, por exemplo, conforme revelado nos documentos no U.S. 4.106.991 e 4.661.452 e podem ser opcionalmente revestidos por métodos conhecidos na técnica. Exemplos de materiais de revestimento cerosos são produtos de poli(óxido de etileno) (polietilenoglicol, PEG) com pesos molares médios de 1.000 a 20.000; nonilfenóis etoxilados tendo de 16 a 50 unidades de óxido de etileno; álcoois graxos etoxilados nos quais o álcool contém de 12 a 20 átomos de carbono e nos quais existem 15 a 80 unidades de óxido de etileno; álcoois graxos; ácidos graxos; e mono- e di- e triglicerídeos de ácidos graxos. Exemplos de materiais de revestimento formadores de filme adequados para aplicação por técnicas de leito fluidizado são dados em GB 1483591. As preparações de enzimas líquidas podem, por exemplo, ser estabilizadas pela adição de um poliol, tal como propilenoglicol, um açúcar ou álcool de açúcar, ácido láctico ou ácido bórico de acordo com métodos estabelecidos. Podem ser preparadas enzimas protegidas de acordo com o método divulgado em EP 238.216.
[000248] Em uma modalidade, o número de modificações nas variantes de protease, alfa-amilase e/ou lipase individualmente é 1 a 30, por exemplo,1 a 20, 1 a 10 e 1 a 5, tal como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, ou 30 modificações.
[000249] Em uma modalidade, o número de modificações na protease, variantes de alfa-amilase e/ou lipase individualmente é 1 a 20, por exemplo,1 a 10 e 1 a 5, tal como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 modificações.
[000250] Em uma modalidade, as variantes de alfa- amilase compreendem modificações adicionais. Consequentemente, contempla-se que cada variante de alfa- amilase descrita no presente documento pode ter adicionalmente um desempenho aprimorado e/ou estabilidade aprimorada, tal como um desempenho em lavagem aprimorado em lavagem de roupa ou em lavagem automatizada de louça e/ou estabilidade de armazenamento aprimorada, em comparação a qualquer uma das alfa-amilases parentais listadas como SEQ ID NO: 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 e 18. Desse modo, as variantes de alfa-amilase podem compreender adicionalmente uma ou mais substituições adicionais em um ou mais (por exemplo, diversas) outras posições. Consequentemente, em uma modalidade, a variante de alfa- amilase da composição detergente da presente invenção compreende adicionalmente uma modificação em posições correspondentes às posições; em que a numeração é de acordo com SEQ ID NO: 5.
[000251] Os aminoácidos essenciais em um polipeptídeo podem ser identificados de acordo com procedimentos conhecidos na técnica, tais como mutagênese sítio-dirigida ou mutagênese de varredura da alanina (Cunningham e Wells, 1989, Science 244: 1.081 a1.085). Em esta última técnica, mutações de alanina únicas são introduzidas em todos os resíduos da molécula, e as moléculas mutantes resultantes são testadas quanto à atividade de protease para se identificarem resíduos de aminoácidos que são críticos para a atividade da molécula. Consultar também, Hilton et al., 1996, J. Biol. Chem. 271: 4.699 a 4.708. O local ativo da enzima ou outra interação biológica também pode ser determinado por análise física da estrutura, como determinado por tais técnicas como ressonância magnética nuclear, cristalografia, difração de elétrons, ou marcação por fotoafinidade, em combinação com mutação de aminoácidos de local de contato putativo. Consultar, por exemplo, de Vos et al., 1992, Science 255: 306 a 312; Smith et al., 1992, J. Mol. Biol. 224: 899 a 904; Wlodaver et al., 1992, FEBS Lett. 309: 59 a 64. A identidade de aminoácidos essenciais também pode ser inferida a partir de um alinhamento com um polipeptídeo relacionado.
[000252] Em uma modalidade, a composição detergente da presente invenção compreende uma variante de alfa-amilase, conforme descrito no presente documento, e uma variante de protease, conforme descrito no presente documento, que tem uma estabilidade aprimorada em comparação a uma composição detergente que compreende uma alfa-amilase parental e uma protease parental que tem a sequência de aminoácidos idêntica das variantes, respectivamente, porém, não tem uma substituição em uma ou mais das ditas modificações especificadas. A estabilidade pode ser medida por um método que compreende as etapas de armazenar a variante em uma composição detergente, por exemplo, por 4 semanas a 30 °C, 37 °C ou temperatura ambiente, tal como 25 °C, seguido pela determinação da atividade específica das variantes. A pessoa versada tem conhecimento de como a atividade específica pode ser medida.
[000253] No contexto da presente invenção, qualquer variante, isto é,uma variante de alfa-amilase, uma variante de protease e uma variante de lipase, foi preparada a partir de uma enzima parental. Tal enzima parental é definida como um polipeptídeo que compreende ou consiste nas sequências de aminoácidos listadas como SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ou 20. Desse modo, as variantes forma preparadas a partir de uma enzima parental. Uma enzima parental pode ser identificada por homologia de sequência. A homologia entre duas sequências de aminoácidos é neste contexto descrita pelo parâmetro "identidade" para propósitos da presente invenção, o grau de identidade entre duas sequências de aminoácidos é determinado usando o algoritmo de Needleman-Wunsch como descrito acima. O resultado da rotina é para além do alinhamento de aminoácidos o cálculo da "Percentagem de Identidade" entre as duas sequências.
[000254] Com base nessa descrição, é rotina para uma pessoa versada na técnica identificar alfa-amilases, proteases, e lipases homólogas adequadas que podem ser modificadas, conforme descrito no presente documento.
[000255] As variantes parentais substancialmente homólogas podem ter uma ou mais (diversas) substituições de aminoácido, deleções e/ou inserções, no presente contexto, o termo "um ou mais"é usado de maneira intercambiável com o termo "diversos". Estas mudanças são preferencialmente de natureza minoritária, isto é, substituições de aminoácidos conservativas conforme descrito acima e outras substituições que não afetam significativamente o dobramento tridimensional ou atividade da proteína ou polipeptídeo; pequenas deleções, tipicamente de um até cerca de 30 aminoácidos; e pequenas extensões amino- ou carboxila-terminais, como um resíduo metionina amino-terminal, um pequeno peptídeo aglutinante de até cerca de 20-25 resíduos, ou uma pequena extensão que facilita a purificação (um marcador de afinidade), como um trato de poli-histidina, ou proteína A (Nilsson et al., 1985, EMBO J. 4: 1.075; Nilsson et al., 1991, métodos Enzymol. 198: 3. Consultar, também, em geral, Ford et al., 1991, Protein Expression and Purification 2: 95 a 107.
[000256] Apesar de as mudanças descritas acima serem preferencialmente de natureza minoritária, tais mudanças também podem ser de natureza substantiva, como fusão de polipeptídeos maiores de até 300 aminoácidos ou mais, ambas extensões amino- ou carboxila-terminais.
[000257] A enzima parental pode ser (a) um polipeptídeo que tem pelo menos 70% de identidade de sequência ao polipeptídeo maduro da SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ou 20.
[000258] Consequentemente, a alfa-amilase parental tem uma identidade de sequência em relação ao polipeptídeo com a SEQ ID NO: 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou 18 de pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%pelo menos 95% de identidade, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100%, que tem atividade de alfa-amilase.
[000259] Consequentemente, a protease parental tem uma identidade de sequência em relação ao polipeptídeo com SEQ ID NO: 2, 3, 19 ou 20 de pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95% de identidade, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100%, que tem atividade de protease.
[000260] Consequentemente, a lipase parental tem uma identidade de sequência em relação ao polipeptídeo com SEQ ID NO: 4 de pelo menos 70%, tal como pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76% pelo menos 77% pelo menos 78% pelo menos 79% pelo menos 80%, pelo menos 81% pelo menos 82% pelo menos 83% pelo menos 84% pelo menos 85%, pelo menos 86% pelo menos 87% pelo menos 88% pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95% de identidade, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, por exemplo, pelo menos 99,1%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,6 ou 100%, que tem atividade de protease.
[000261] As enzimas parentais podem ser um polipeptídeo híbrido no qual uma região de um polipeptídeo é fundida NA terminação N ou a terminação C de uma região de outro polipeptídeo e, desse modo, fornecendo a enzima parental de fusão. Os termos "fusão"e "híbrido"podem ser usados de maneira intercambiável no presente documento, porém, constituem o mesmo significado e propósito e não devem ser entendidos como limitativos.
[000262] Um polipeptídeo de fusão é produzido fundindose um polinucleotídeo que codifica outro polipeptídeo a um polinucleotídeo da presente invenção. As técnicas para produção de polipeptídeos de fusão são conhecidas na técnica e incluem ligação das sequências de codificação codificando os polipeptídeos de modo que fiquem no quadro e que a expressão do polipeptídeo de fusão esteja sob controle do mesmo promotor (ou promotores) e terminador. Os polipeptídeos de fusão também podem ser construídos com o uso da tecnologia de inteína na qual são criados polipeptídeos de fusão pós- translacionalmente (Cooper et al., 1993, EMBO J. 12: 2.575 a 2.583; Dawson et al., 1994, Science 266: 776 a 779).
[000263] Um polipeptídeo de fusão pode compreender adicionalmente um local de clivagem entre os dois polipeptídeos. Após secreção da proteína de fusão, o local é clivado liberando os dois polipeptídeos. Exemplos de locais de clivagem incluem os, porém sem limitação, locais divulgados em Martin et al., 2003, J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 3: 568 a 576; Svetina et al., 2000, J. Biotechnol. 76: 245 a 251; Rasmussen-Wilson et al., 1997, Appl. Environ. Microbiol. 63: 3.488 a 3.493; Ward et al., 1995, Biotechnology 13: 498 a 503; e Contreras et al., 1991, Biotechnology 9: 378 a 381; Eaton et al., 1986, Biochemistry 25: 505 a 512; Collins-Racie et al., 1995, Biotechnology 13: 982 a 987; Carter et al., 1989, Proteins: Structure, Function, and Genetics 6: 240 a 248; e Stevens, 2003, Drug Discovery World 4: 35 a 48.
[000264] A enzima parental pode ser obtida de organismos de qualquer gênero. Para propósitos da presente invenção, o termo "obtido de” conforme usado no presente documento em combinação com uma determinada fonte deverá significar que o parental codificado por um polinucleotídeo é produzido pela fonte ou por uma cepa na qual o polinucleotídeo da fonte foi inserido. Em um aspecto, o parental é secretado extracelularmente.
[000265] As variantes presentes na composição detergente de acordo com a invenção podem ser preparadas por um método para obter uma variante que tem a atividade enzimática específica, em que o método compreende as etapas de: (a) introduzir em uma enzima parental uma modificação em uma ou mais (por exemplo, diversas) posições, conforme especificado no presente documento; e (b) recuperar a variante.
[000266] A pessoa versada sabe como preparar uma variante. No entanto, as variantes podem ser preparadas com o uso de qualquer procedimento de mutagênese conhecido na técnica, tais como mutagênese sítio-dirigida, construção de gene sintética, construção de gene semissintética, mutagênese aleatória, embaralhamento etc.
[000267] A mutagênese sítio-dirigida é uma técnica na qual uma ou mais (por exemplo, várias) mutações são introduzidas em um ou mais locais definidos em um polinucleotídeo codificando o parental.
[000268] A mutagênese sítio-dirigida pode ser alcançada in vitro por PCR envolvendo o uso de iniciadores de oligonucleotídeos contendo a mutação desejada. A mutagênese sítio-dirigida também pode ser realizada in vitro por mutagênese de cassete que envolve a clivagem por uma enzima de restrição em um local no plasmídeo compreendendo um polinucleotídeo codificando o parental e a subsequente ligação de um oligonucleotídeo que contém a mutação no polinucleotídeo. Usualmente, a enzima de restrição que digere o plasmídeo e o oligonucleotídeo é a mesma, permitindo que as extremidades coesivas do plasmídeo e da inserção se liguem umas às outras. Consultar, por exemplo, Scherer and Davis, 1979, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76: 4.949 a 4.955; e Barton et al., 1990, Nucleic Acids Res. 18: 7.349 a 4.966.
[000269] A mutagênese sítio-dirigida também pode ser alcançada in vivo por métodos conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, a Publicação do Pedido de Patente dos no U.S. 2004/0171154; Storici et al., 2001, natureza Biotechnol. 19: 773 a 776; Kren et al., 1998, Nat. Med. 4: 285 a 290; e Calissano e Macino, 1996, Fungal Genet. Newslett. 43: 15 a 16.
[000270] Qualquer procedimento de mutagênese sítio- dirigida na presente invenção pode ser usado. Há muitos kits comerciais disponíveis que podem ser usados para preparar as variantes.
[000271] A construção de genes sintética implica síntese in vitro de uma molécula de polinucleotídeo concebida para codificar um polipeptídeo de interesse. A síntese de genes pode ser realizada utilizando um número de técnicas, tal como a tecnologia à base de microchip em multiplex descrita por Tian et al. (2004, Nature 432: 1.050 a 1.054) e tecnologias semelhantes em que oligonucleotídeos são sintetizados e montados em chipsmicrofluídicos fotoprogramáveis.
[000272] Podem ser feitas e testadas substituições, deleções, e/ou inserções únicas ou múltiplas de aminoácidos usando métodos conhecidos de mutagênese, recombinação, e/ou embaralhamento, seguidos por um procedimento de rastreamento relevante, tal como aqueles divulgados por Reidhaar-Olson e Sauer, 1988, Science 241: 53 a 57; Bowie and Sauer, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 2.152 a 2.156; WO 95/17413; ou WO 95/22625. Outros métodos que podem ser usados incluem PCR propensa a erros, exibição em fagos (por exemplo, Lowman et al., 1991, Biochemistry 30: 10832-10837; US5,223,409; WO 92/06204) e mutagênese região-dirigida (Derbyshire et al., 1986, Gene 46: 145; Ner et al., 1988, DNA 7: 127).
[000273] Os métodos de mutagênese/embaralhamento podem ser combinados com métodos de rastreamento automatizados, de elevada capacidade, para detectar a atividade de polipeptídeos mutagenizados, clonados expressos por células hospedeiras (Ness et al., 1999, Nature Biotechnology 17: 893 a 896). As moléculas de DNA mutagenizadas que codificam polipeptídeos ativos podem ser recuperadas a partir das células hospedeiras e rapidamente sequenciadas com o uso de métodos padrão na técnica. Estes métodos permitem a determinação rápida da importância de resíduos de aminoácidos individuais em um polipeptídeo.
[000274] A construção de genes semissintética é alcançada por combinação de aspectos da construção de genes sintética, e/ou mutagênese sítio-dirigida, e/ou mutagênese aleatória, e/ou embaralhamento. A construção semissintética é tipificada por um processo utilizando fragmentos de polinucleotídeos que são sintetizados, em combinação com técnicas de PCR. Regiões definidas de genes podem assim ser sintetizadas de novo, enquanto outras regiões podem ser amplificadas usando iniciadores mutagênicos sítio- específicos, enquanto ainda outras regiões podem estar sujeitas à amplificação por PCR propensa a erros ou PCR não propensa a erros. As subsequências de polinucleotídeos podem ser depois embaralhadas.
[000275] Além das enzimas, as composições detergentes de acordo com a invenção podem compreender componentes adicionais. Consequentemente, em uma modalidade, a composição detergente compreende adicionalmente pelo menos um agente quelante; pelo menos um tensoativo; pelo menos um polímero sulfonado; pelo menos um hidrótropo; pelo menos um adjuvante e/ou coadjuvante; pelo menos um perfume; e/ou pelo menos um tipo de sistema de alvejamento.
[000276] A escolha de componentes adicionais pode ser feita por uma pessoa versada e inclui ingredientes convencionais, incluindo os componentes não limitantes exemplificados apresentados abaixo. A escolha de componentes pode incluir, para cuidado dos panos, a consideração do tipo de pano a ser limpo, o tipo e/ou grau de sujidade, a temperatura à qual a limpeza é para ter lugar, e a formulação do produto detergente. Embora os componentes mencionados em baixo estejam categorizados por cabeçalho geral de acordo com uma funcionalidade particular, isto não é para ser interpretado como uma limitação, pois um componente pode compreender funcionalidades adicionais como será apreciado pelo perito.
[000277] As variantes de alfa-amilase e de protease podem ser adicionadas a uma composição detergente em uma quantidade correspondente a 0,001 a 100 mg de proteína, tal como 0,01 a 100 mg da proteína, de preferência 0,005 a 50 mg da proteína, com mais preferência 0,01 a 25 mg da proteína, com ainda mais preferência 0,05 a 10 mg da proteína, com máxima preferência 0,05 a 5 mg da proteína e ainda com máxima preferência 0,01 a 1 mg da proteína por litro do líquido de lavagem.
[000278] As variantes de alfa-amilase e de protease podem ser adicionadas a uma composição detergente em uma quantidade correspondente a 0,001 a 100 mg de proteína, tal como 0,01 a 100 mg da proteína, de preferência 0,005 a 50 mg da proteína, com mais preferência 0,01 a 25 mg da proteína, com ainda mais preferência 0,05 a 10 mg da proteína, com máxima preferência 0,05 a 5 mg da proteína e ainda com máxima preferência 0,01 a 1 mg da proteína por litro da composição detergente por grama.
[000279] As variantes de alfa-amilase e de protease podem ser estabilizadas com o uso de agentes estabilizantes, que podem ser selecionados dentre o grupo que contém propilenoglicol, glicerol, um açúcar, um álcool de açúcar, ácido láctico, ácido bórico, derivados de borato e ácido fenilborônico, tais como aqueles em que o resíduo R no derivado de ácido fenilborônico é um grupo C1-C6 alquila e dentre os mesmos, com mais preferência, CH3, CH3CH2 ou CH3CH2CH2.O resíduo R no derivado de ácido fenilborônico também pode ser hidrogênio. Um exemplo de um derivado do ácido fenil borônico é ácido 4-formilfenilborônico (4-FPBA) com a fórmula seguinte:
[000280] Os derivados de ácido fenilborônico podem ter adicionalmente outras modificações químicas no anel fenila e, em particular, os mesmos podem conter um ou mais resíduos ou grupos metila, amino, nitro, cloro, fluoro, bromo, hidroxila, formila, etila, acetila, t-butila, anisila, benzila, trifluoroacetila, N-hidroxisuccinimida, t-butiloxicarbonila, benzoila, 4-metilbenzila, tioanizila, tiocresila, benziloximetila, 4-nitrofenila, benziloxicarbonila, 2- nitrobenzoila, 2-nitrofenilsulfenila, 4-toluenossulfonila, pentafluorofenila, difenilmetila, 2-clorobenziloxicarbonila, 2,4,5-triclorofenila, 2-bromobenziloxicarbonila, 9- fluorenilmetiloxicarbonila, trifenilmetila, 2,2,5,7,8- pentametilcroman-6-sulfonila ou combinações dos mesmos. Todos os agentes estabilizantes podem estar presentes na composição detergente da presente invenção em todas as formas protonadas ou desprotonadas. Adicionalmente, todos esses compostos, em particular suas formas desprotonadas, podem estar associados a cátions. Cátions preferenciais a este respeito são cátions monovalentes ou polivalentes, em particular divalentes, em particular íons de Na (Na+), íons K (K+), íons Li (Li+), íons Ca (Ca2+), íons Mg (Mg2+), íons Mn (Mn2+) e íons Zn (Zn2+). As composições detergentes da presente invenção podem compreender dois ou mais agentes estabilizantes, por exemplo, tais como aqueles selecionados dentre o grupo que consiste em propilenoglicol, glicerol, ácido 4-formilfenil borônico e borato. Um exemplo é uma composição detergente da presente invenção que compreende ácido 4-formilfenil borônico e/ou borato. O derivado do ácido fenilborônico pode estar contido na composição detergente em uma quantidade de 0,00001 até 5,0% em peso, preferencialmente de 0,0001 até 3,0% em peso, de 0,001 até 2,0% em peso, de 0,005 até 1,0% em peso, de 0,01 até 0,5% em peso, de 0,02 até 0,3% em peso. Preferencialmente, o ácido bórico / borato está contido em uma quantidade de 0,001 até 5,5% em peso e cada vez mais preferencialmente de 0,01 até 4,5% em peso, de 0,05 até 3,5 e de 0,1 até 3, 0,4 bis 2,49, 0,5 bis 1,5% em peso na composição detergente. Tem se verificado que a adição de uma combinação de borato e ácido 4-formilfenil borônico é particularmente eficaz, conduzindo a um grande aumento da estabilidade da enzima em composições detergentes. Preferencialmente, o ácido bórico / borato está contido em uma quantidade de 0,001 até 5,5% em peso e cada vez mais preferencialmente de 0,075 até 4,5% em peso, de 0,09 até 3,5 e de 0,1 até 2,49% em peso, e o derivado do ácido fenil borônico está contido em uma quantidade de 0,001 até 0,08% em peso e cada vez mais preferencialmente de 0,003 até 0,06% em peso, de 0,005 até 0,05% em peso, de 0,007 até 0,03% em peso e de 0,009 até 0,01% em peso em uma composição detergente. É particularmente preferencial a adição de ácido 4-formilfenil borônico em uma quantidade de 1,0 até 2,0% em peso em combinação com 1,0% em peso de borato.
[000281] A composição detergente de acordo com a invenção pode compreender variantes de alfa-amilase e de protease que pode ser estabilizada com o uso de aldeídos ou cetonas de peptídeo, tais como descrito nos documentos no WO 2005/105826 e no WO 2009/118375. Outro exemplo de composições detergentes de acordo com a invenção se refere uma composição detergente que compreende alfa-amilase e uma variante de protease, conforme descrito no presente documento, em que a formulação detergente é conforme revelado no documento WO 97/07202, que é incorporada no presente documento a título de referência.
[000282] Outros componentes da composição detergente de acordo com a presente invenção podem ser tensoativos. Desse modo, a composição detergente de acordo com a presente invenção pode compreender um ou mais tensoativos, que podem ser aniônicos e/ou catiônicos e/ou não iônico e/ou semipolar e/ou zwitteriônico ou uma mistura dos mesmos. Em uma modalidade particular, a composição detergente inclui uma mistura de um ou mais tensoativos não iônicos e um ou mais tensoativos aniônicos. O tensoativo (ou tensoativos) está tipicamente presente a um nível de cerca de 0,1% a 60% em peso, tal como cerca de 1% a cerca de 40%, ou cerca de 3% a cerca de 20%, ou cerca de 3% a cerca de 10%. O tensoativo (ou tensoativos) é escolhido com base na aplicação de limpeza desejada e inclui qualquer tensoativo (ou tensoativos) convencional conhecido na técnica. Pode ser utilizado qualquer tensoativo conhecido na técnica para uso em detergentes.
[000283] Quando incluído no mesmo, o detergente conterá normalmente de cerca de 1% a cerca de 40% em peso, tal como de cerca de 5% a cerca de 30%, incluindo de cerca de 5% a cerca de 15%, ou de cerca de 20% a cerca de 25% de um tensoativo aniônico. Exemplos não limitantes de tensoativos aniônicos incluem sulfatos e sulfonatos, em particular, alquilbenzenossulfonatos lineares (LAS), isômeros de LAS, alquilbenzenossulfonatos ramificados (BABS), fenilalcanossulfonatos, alfa-olefinassulfonatos (AOS), sulfonatos de olefina, sulfonatos de alqueno, alcano-2,3-di- ilbis(sulfatos), hidroxialcanossulfonatos e dissulfonatos, sulfatos de alquila (AS) tais como dodecil sulfato de sódio (SDS), sulfatos de álcool graxo (FAS), sulfatos de álcool primário (PAS), etersulfatos de álcool (AES ou AEOS ou FES, também conhecidos como etoxissulfatos de álcool ou éter sulfatos de álcool graxo), alcanossulfonatos secundários (SAS), sulfonatos de parafina (PS), éster sulfonatos, glicerol ésteres de ácido graxo sulfonados, ésteres de metila de ácido graxo alfa-sulfo (alfa-SFMe ou SES) incluindo éster sulfonato de metila (MES), ácido alquil- ou alquenilsuccínico, ácido succínico de dodecenila/tetradecenila (DTSA), derivados de ácido graxo de aminoácidos, diésteres e monoésteres de ácido sulfo-succínico ou sabão, e suas combinações.
[000284] Quando incluída nos mesmos, a composição detergente conterá normalmente de cerca de 1% a cerca de 40% em peso de um tensoativo catiônico. Exemplos não limitativos de tensoativos catiônicos incluem alquildimetiletanolamina quat (ADMEAQ), brometo de cetiltrimetilamônio (CTAB), cloreto de dimetildistearilamônio (DSDMAC) e alquilbenzildimetilamônio e suas combinações, compostos alquila de amônio quaternário, amônio quaternário alcoxilado (AQA).
[000285] Quando incluído nos mesmos, o detergente conterá normalmente de cerca de 0,2% a cerca de 40% em peso de um tensoativo não iônico, por exemplo, de cerca de 0,5% a cerca de 30%, em particular de cerca de 1% a cerca de 20%, de cerca de 3% a cerca de 10%, tal como de cerca de 3% a cerca de 5%, ou de cerca de 8% a cerca de 12%. Os exemplos não limitantes de tensoativos não iônicos incluem etoxilatos de álcool (AE ou AEO), propoxilados de álcool, álcoois graxos propoxilados (PFA), ésteres aquílicos de ácido graxo alcoxilado, tais como ésteres aquílicos de ácido graxo etoxilados e/ou propoxilados, etoxilatos de alquilfenol (APE), etoxilatos de nonilfenol (NPE), alquilpoliglicosídeos (APG), aminas alcoxiladas, monoetanolamida de ácido graxos (FAM), ácido graxo dietanolamidas (FADA), monoetanolamidas de ácido graxo etoxilado (EFAM), monoetanolamida de ácido graxo propoxilado (PFAM), amidas de ácido graxo alquila poli- hidroxi ou derivados de N-acil-N-alquila de glucosamina (glucamidas, GA, ou glucamida de ácido graxo, FAGA), assim como produtos disponíveis sob os nomes comerciais SPAN e TWEEN e combinações dos mesmos.
[000286] Quando incluída nos mesmos, a composição detergente conterá normalmente de cerca de 1% a cerca de 40% em peso de um tensoativo semipolar. Os exemplos não limitantes de tensoativos semipolares incluem óxidos de amina (AO) tais como óxido de alquildimetilamina, óxido de N-(coco alquila)-N,N-dimetilamina e óxido de amina N-(sebo-alquila)- N,N-bis(2-hidroxietila), alcanolamidas de ácido graxo e alcanolamidas de ácido graxo etoxiladas e suas combinações.
[000287] Quando incluída nos mesmos, a composição detergente conterá normalmente de cerca de 1% a cerca de 40% em peso de um tensoativo zwitteriônico. Os exemplos não limitantes de tensoativos zwitteriônicos incluem betaína, alquildimetilbetaína e sulfobetaína e suas combinações.
[000288] O termo "polímero sulfonado", conforme usado no presente documento, se refere a polímeros que contêm ácido sulfônico ou grupos funcionais sulfonato.
[000289] O polímero, caso usado, é usado em qualquer quantidade adequada de cerca de 0,1% a cerca de 20%, de preferência, de 1% a cerca de 15%, com mais preferência de 2% a 10% em peso da composição. Os polímeros sulfonados/carboxilados são particularmente adequados para as composições contidas na bolsa da presente invenção.
[000290] Os polímeros sulfonados/carboxilados descritos no presente documento podem ter um peso molecular por média ponderada menor ou igual a cerca de 100.000 Da ou menor ou igual a cerca de 75.000 Da ou menor ou igual a cerca de 50.000 Da ou de cerca de 3.000 Da a cerca de 50.000, de preferência, de cerca de 5.000 Da a cerca de 45.000 Da.
[000291] Conforme observado no presente documento, os polímeros sulfonados/carboxilados podem compreender (a) pelo menos uma unidade estrutural derivada de pelo menos um monômero de ácido carboxílico que tem a fórmula geral (I): em que R1 a R4são, independentemente, um grupo hidrogênio, metila, ácido carboxílico ou CH2COOH e em que os grupos ácido carboxílico podem ser neutralizados; (b) opcionalmente, uma ou mais unidades estruturais derivadas de pelo menos um monômero não iônico que tem a fórmula geral (II): em que R5 i é hidrogênio, C1 a C6 alquila ou C1 a C6 hidroxialquila, e X é ou aromático (em que R5é hidrogênio ou metila quando X é aromático) ou X é da fórmula geral (III): em que R6é (independentemente de R5) hidrogênio, C1 a C6 alquila ou C1 a C6 hidroxialquila, e Y é O ou N; e pelo menos uma unidade estrutural derivada de pelo menos um monômero de ácido sulfônico que tem a fórmula geral (IV): em que R7é um grupo que compreende pelo menos uma ligação sp2, A é O, N, P, S ou uma aglutinação de amido ou éster, B é um grupo aromático grupo alifático mono- ou policílico ou um, sendo que cada t é independentemente 0 ou 1, e M+é um cátion. Em um aspecto, R7é um C2 a C6 alceno. Em outro aspecto, R7é eteno, buteno ou propeno.
[000292] Os monômeros de ácido carboxílico preferenciais incluem um ou mais dentre o seguinte: ácido acrílico, ácido maleico, ácido itacônico, ácido metacrílico ou ésteres etoxilados de ácidos acrílicos, sendo que os ácidos arílicos e metacrílicos são mais preferenciais. Os monômeros sulfonados preferenciais incluem um ou mais dentre o seguinte: (met)alil sulfonato de sódio, sulfonato de vinila, fenil(met)alil éter sulfonato de sódio ou ácido sulfônico de propano de 2-acrilamido-metila. Os monômeros não iônicos preferenciais incluem um ou mais dentre o seguinte: (met)acrilato de metila, (met)acrilato de etila, (met)acrilato de t-butila, metil(met)acrilamida, etil(met)acrilamida, t-butil(met)acrilamida, estireno ou [alfa]-metil estireno.
[000293] De preferência, o polímero compreende os níveis a seguir de monômeros: de cerca de 40 a cerca de 90%, de preferência, de cerca de 60 a cerca de 90% em peso do polímero de um ou mais monômeros de ácido carboxílico; de cerca de 5 a cerca de 50%, de preferência, de cerca de 10 a cerca de 40% em peso do polímero de um ou mais monômeros de ácido sulfônico; e opcionalmente de cerca de 1% a cerca de 30%, de preferência, de cerca de 2 a cerca de 20% em peso do polímero de um ou mais monômeros não iônico. Um polímero especialmente preferencial compreende cerca de 70% a cerca de 80% em peso do polímero de pelo menos um monômero de ácido carboxílico e de cerca de 20% a cerca de 30% em peso do polímero de pelo menos um monômero de ácido sulfônico.
[000294] O ácido carboxílico é, de preferência ácido (met)acrílico. O monômero de ácido sulfônico é, de preferência, um dentre o seguinte: Ácido 2-acrilamido metil- 1-propanosulfônico, ácido 2-metacrilamido-2-metil-1- propanosulfônico, ácido 3-metacrilamido-2- hidroxipropanosulfônico, ácido alisulfônico, ácido metalisulfônico, ácido aliloxibenzenossulfônico, ácido metaliloxibenzenossulfônico, ácido 2-hidroxi-3-(2- propeniloxi)propanosulfônico, ácido 2-metil-2-propeno-l- sulfônico, estireno ácido sulfônico, vinilácido sulfônico, acrilato de 3-sulfopropila, metacrilato de 3-sulfopropila, sulfometilacrilamida, sulfometilmetacrilamida e sais solúveis em água dos mesmos. O monômero de ácido sulfônico insaturado é, com máxima preferência, ácido 2-acrilamido-2- propanosulfônico (AMPS).
[000295] Os polímeros preferenciais disponíveis comerciais incluem: Alcosperse 240, Aquatreat AR 540 e Aquatreat MPS fornecido por Alco Chemical; Acumer 3100, Acumer 2000, Acusol 587G e Acusol 588G fornecido por Rohm & Haas; Goodrich K-798, K-775 e K-797 fornecido por BF Goodrich; e ACP 1042 fornecido por ISP technologies Inc. Os polímeros particularmente preferenciais são Acusol 587G e Acusol 588G fornecidos por Rohm & Haas.
[000296] Nos polímeros, todos ou alguns dos grupos ácido carboxílico ou sulfônico podem estar presentes em forma neutralizada, isto é, o átomo de hidrogênio ácido do grupo ácido carboxílico e/ou sulfônico em alguns ou todos os grupos ácido pode ser substituído por íons de metal, de preferência, íons de metal alcalino e, em particular, com íons de sódio.
[000297] Ainda outro componente da composição detergente de acordo com a presente invenção são hidrótropos.
[000298] Um hidrótropo é um composto que solubiliza compostos hidrofóbicos em soluções aquosas (ou de forma oposta, substâncias polares em um ambiente não polar). Tipicamente, os hidrótropos têm caráter hidrofílico e hidrofóbico (assim chamadas propriedades anfifílicas como conhecidas dos tensoativos); no entanto, a estrutura molecular dos hidrótropos não favorece geralmente a autoagregação espontânea, consultar por exemplo, revisão por Hodgdon e Kaler (2007), <Italic>Current Opinion in Colloid & Interface Science</Italic> 12: 121 a 128. Os hidrótropos não exibem uma concentração crítica acima da qual a autoagregação ocorre como encontrados em tensoativos e lipídeos que formam mesofases micelares, lamelares e outras bem definidas. Em vez disso, muitos hidrótropos mostram um processo de agregação do tipo contínuo onde os tamanhos dos agregados crescem à medida que a concentração aumenta. No entanto, muitos hidrótropos alteram o comportamento de fase, estabilidade, e propriedades coloidais de sistemas contendo substâncias de caráter polar e não polar, incluindo misturas de água, óleo, tensoativos e polímeros. Os hidrótropos são classicamente usados em várias indústrias desde indústrias farmacêutica, de higiene pessoal, alimentar, a aplicações técnicas. O uso de hidrótropos em composições detergentes permite, por exemplo, formulações de tensoativos mais concentradas (como no processo de compactação de detergentes líquidos por remoção de água) sem induzir fenômenos indesejados tais como separação de fases ou elevada viscosidade.
[000299] Desse modo, a composição detergente de acordo com a presente invenção pode compreender 0 a 5% em peso, tal como cerca de 0,5 a cerca de 5% ou cerca de 3% a cerca de 5%, de um hidrótropo. Pode ser utilizado qualquer hidrótropo conhecido na técnica para uso em detergentes. Os exemplos não limitadores de hidrótropos incluem benzeno sulfonato de sódio, p-tolueno sulfonatos de sódio (STS), xileno sulfonatos de sódio (SXS), cumeno sulfonatos de sódio (SCS), cimeno sulfonato de sódio, óxidos de aminas, álcoois e éteres de poliglicol, hidroxinaftoato de sódio, hidroxinaftaleno sulfonato de sódio, etil-hexil sulfato de sódio e combinações dos mesmos.
[000300] Outro componente de uma composição detergente pode ser adjuvantes e/ou coadjuvantes. O termo "adjuvante" pode ser classificado pelo teste descrito por M.K. Nagaraja et al., JAOCS, Volume 61, no. 9 (Setembro 1984), páginas 1.475 a 1.478 para determinar o nível mínimo do adjuvante exigido para diminuir a dureza da água no pH 8 de 2,0 mM (como CaCO3) para 0,10 mM em uma solução. O adjuvante pode ser particularmente um agente quelante que forma complexos solúveis em água com, por exemplo, íons de cálcio e de magnésio. O termo "agentes quelantes" ou "queladores", conforme usado no presente documento, se refere a produtos químicos que formam moléculas com determinados íons de metal, o que inativa os íons de modo que não possam reagir com outros elementos, se ligando assim ao agente que suprime a atividade química formando-se quelados. A quelação é a formação ou presença de duas ou mais ligações separadas entre um aglutinante e um único átomo central. O aglutinante pode ser qualquer composto orgânico, um silicato ou um fosfato. Desse modo, em uma modalidade, a composição detergente de acordo com a presente invenção pode compreender cerca de 0 a 65% em peso, tal como cerca de 5% a cerca de 50% de um adjuvante detergente ou coadjuvante ou uma mistura do mesmo. Em um detergente de lavagem de louça, o nível de adjuvante é tipicamente 40 a 65%, particularmente 50 a 65%. O adjuvante e/ou o coadjuvante pode ser particularmente um agente de quelação que forma complexos solúveis em água com Ca e Mg. Pode ser usado qualquer adjuvante e/ou coadjuvante conhecido na técnica para uso em detergentes de lavagem de roupa, ADW e limpeza de superfícies duras. Os exemplos não limitantes de adjuvantes incluem zeólitos, difosfatos (pirofosfatos), trifosfatos, tais como trifosfato de sódio (STP ou STPP), carbonatos, tais como carbonato de sódio, silicatos solúveis, tais como metassilicato de sódio, silicatos em camadas (por exemplo, SKS-6 da Hoechst), etanolaminas, tais como 2- aminoetan-1-ol (MEA), iminodietanol (DEA) e 2,2',2"- nitrilotrietanol (TEA) e carboximetilinulina (CMI) e combinações dos mesmos.
[000301] A composição detergente de acordo com a presente invenção também pode compreender 0 a 65% em peso, tal como, cerca de 5% a cerca de 40%, de um coadjuvante de detergente ou uma mistura dos mesmos. A composição detergente pode incluir um coadjuvante sozinho, ou em combinação com um adjuvante, por exemplo um adjuvante de zeólito. Exemplos não limitantes de coadjuvantes incluem homopolímeros de poliacrilatos ou seus copolímeros, tais como poli(ácido acrílico) (PAA) ou copoli(ácido acrílico/ácido maleico) (PAA/PMA). Outros exemplos não limitantes incluem citrato, quelantes, tais como aminocarboxilatos, aminopolicarboxilatos e fosfonatos e ácido alquil- ou alquenilsuccínico. Os exemplos específicos adicionais incluem ácido 2,2',2"- nitrilotriacético (NTA), ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA), ácido dietilenotriaminapentacético (DTPA), ácido iminodissucínico (IDS), ácido etilenodiamina-N,N'-dissucínico (EDDS), ácido metilglicinediacético (MGDA), ácido glutâmico ácido-N,N-diacético (GLDA), 1-hidroxietano-1,1-di-ilbis(ácido fosfônico) (HEDP), etilenodiaminatetracis(metileno)tetracis(ácido fosfônico) (EDTMPA), dietilenotriaminapentacis(metileno)pentacis(ácido fosfônico) (DTPMPA), ácido N-(2-hidroxietil)iminodiacético (EDG), ácido aspártico-N-ácido monoacético (ASMA), ácido aspártico- N,N-ácido diacético (ASDA), ácido aspártico-N- ácido monopropiônico (ASMP), ácido iminodissucínico (IDA), N- (2-sulfometil) ácido aspártico (SMAS), N-(2-sulfoetil) ácido aspártico (SEAS), N-(2-sulfometil) ácido glutâmico (SMGL), N- (2- sulfoetil) ácido glutâmico (SEGL), N-metiliminoácido diacético (MIDA), a-alanina-N,N-ácido diacético (a-ALDA), serina-N,N-ácido diacético (SEDA), isoserina-N,N-ácido diacético (ISDA), fenilalanina-N,N-ácido diacético (PHDA), ácido antranilínico-N,N-ácido diacético (ANDA), ácido sulfanílico-N,N-ácido diacético (SLDA), taurina-N,N-ácido diacético (TUDA) e sulfometil-N,N-ácido diacético (SMDA), N- (hidroxietil)-etilidenediaminatriacetato (HEDTA), dietanolglicina (DEG), Dietilenotriamina Penta (Metileno- ácido-fosfônico) (DTPMP), aminotris(metileno-ácido-fosfônico) (ATMP) e combinações e sais dos mesmos. Os adjuvantes e/ou coadjuvantes exemplificativos adicionais são descritos, por exemplo, no documento WO 09/102854, U.S. 5977053.
[000302] Ainda outro componente da composição detergente podem ser sistemas alvejantes. Desse modo, em uma modalidade, a composição detergente de acordo com a presente invenção pode compreender 0 a 10% em peso, tal como 1% a cerca de 5%, de um sistema de alvejamento. Qualquer sistema de alvejamento conhecido na técnica para uso em lavagem de roupas, ADW e detergentes de limpeza de superfícies duras podem ser utilizados. Componentes de sistema de alvejamento adequados incluem catalisadores de alvejamento, fotoalvejantes, ativadores de alvejamento, fontes de peróxido de hidrogênio tais como percarbonato de sódio e perboratos de sódio, perácidos pré-formados e suas misturas. Perácidos pré- formados adequados incluem, porém sem limitação, ácidos e sais peroxicarboxílicos, ácidos e sais percarbônicos, ácidos e sais perimídicos, ácidos e sais peroximonossulfúricos, por exemplo, Oxone®, e suas misturas. Os exemplos não limitantes de sistemas de alvejamento incluem sistemas de alvejamento à base de peróxido, que podem compreender, por exemplo, um sal inorgânico, incluindo sais de metal alcalino, tais como sais de sódio de perborato (usualmente mono- ou tetra-hidrato), percarbonato, persulfato, perfosfato, sais de persilicato, em combinação com um ativador de alvejamento de formação de perácido. Por ativador alvejante entende-se no presente documento um composto que reage com alvejante peroxigenado, como peróxido de hidrogênio, para formar um perácido. O perácido assim formado constitui a lixívia ativada. Ativadores de alvejamento adequados a serem usados aqui incluem aqueles pertencendo à classe de amidas, imidas ou anidridos de éster. Os exemplos adequados são tetracetil etileno diamina (TAED), 3,5,5-trimetil-hexanoiloxibenzeno sulfonato de sódio, ácido diperoxi dodecanoico, 4- (dodecanoiloxi)benzenossulfonato (LOBS), 4- (decanoiloxi)benzenossulfonato, 4-(decanoiloxi)benzoato (DOBS), 4-(3,5,5-trimetilhexanoiloxi)benzenossulfonato (ISONOBS), tetracetiletilenodiamina (TAED) e 4- (nonanoiloxi)benzenossulfonato (NOBS) e/ou aqueles revelados no documento no WO98/17767. Uma família particular de ação de interesse foi divulgada no documento no EP624154 e particularmente preferencial nessa família é o citrato de acetila e tributila (ATC). ATC ou um triglicérido de cadeia curta como a Triacina tem a vantagem de ser amigo do ambiente, uma vez que acaba por se degradar em ácido cítrico e álcool. Além disso, o citrato de acetila e tributila e a triacetina têm uma boa estabilidade hidrolítica no produto após armazenamento e são um ativador de alvejamento eficaz. Por fim, o ATC proporciona uma boa capacidade adjuvante ao aditivo de lavagem de roupa. Alternativamente, o sistema de alvejamento pode compreender peroxiácidos, por exemplo, do tipo amida, imida ou sulfona. O sistema de alvejamento pode também compreender perácidos, tais como o ácido 6- (ftaloilamino)percaprônico (PAP). O sistema de alvejamento pode incluir também um catalisador de alvejamento. Em algumas modalidades, o componente de alvejamento pode ser um catalisador orgânico selecionado dentre o grupo que consiste em catalisadores orgânicos que têm as seguintes fórmulas: (iii) e suas misturas; em que cada R1é independentemente um grupo alquila ramificado contendo de 9 a 24 carbonos ou um grupo alquila linear contendo de 11 a 24 carbonos, preferencialmente cada R1é independentemente um grupo alquila ramificado contendo de 9 a 18 carbonos ou um grupo alquila linear contendo de 11 a 18 carbonos, mais preferencialmente cada R1é independentemente selecionado do grupo consistindo em 2-propilheptila, 2-butiloctila, 2- pentilnonila, 2-hexildecila, n-dodecila, n-tetradecila, n- hexadecila, n-octadecila, iso-nonila, iso-decila, isotridecila e iso-pentadecila. Outros sistemas alvejantes exemplificativos são descritos, por exemplo, nos documentos no WO2007/087258, WO2007/087244, no WO2007/087259, no WO2007/087242. Os fotoalvejantes adequados podem, por exemplo, ser ftalocianina de zinco sulfonatada.
[000303] Outro componente de uma composição detergente são polímeros. Desse modo, em uma modalidade, a composição detergente de acordo com a invenção compreende um polímero.
[000304] Consequentemente, a composição detergente de acordo com a presente invenção pode compreender 0 a 10% em peso, tal como 0,5 a 5%, 2 a 5%, 0,5 a 2% ou 0,2 a 1% de um polímero, Pode ser utilizado qualquer polímero conhecido na técnica para uso em detergentes. O polímero pode funcionar como um coadjuvante como mencionado acima, ou pode proporcionar propriedades antirredeposição, proteção das fibras, liberação de sujidade, inibição de transferência de corantes, limpeza de gorduras e/ou propriedades antiespumantes. Alguns polímeros podem ter mais do que uma das propriedades acima mencionadas e/ou mais do que um dos motivos mencionados em baixo. Os polímeros exemplificativos incluem (carboximetil)celulose (CMC), poli(álcool de vinila) (PVA), poli(vinilpirrolidona) (PVP), poli(etilenoglicol) ou poli(óxido de etileno) (PEG), poli(etilenoimina) etoxilada, carboximetila inulina (CMI) e policarboxilatos, tais como PAA, PAA/PMA, ácido poliaspártico e copolímeros de ácido de metacrilato de laurila/acrílico, CMC hidrofobicamente modificadas (HM-CMC) e silicones, copolímeros de ácido tereftálico e glicóis oligoméricos, copolímeros de tereftalato de polietileno e tereftalato de polioxieteno (PET-POET), PVP, poli(vinilimidazol) (PVI), poli(vinilpiridin-N-óxido) (PVPO ou PVPNO) e polivinilpirrolidona-vinilimidazol (PVPVI). Os polímeros exemplificativos adicionais incluem policarboxilatos sulfonados, óxido de polietileno e óxido de polipropileno (PEO-PPO) e etoxissulfato diquaternário. Outros polímeros exemplificativos são divulgados em, por exemplo, WO 2006/130575. Sais dos polímeros acima mencionados estão também contemplados.
[000305] Ainda outro componente de composições detergentes podem ser agente de tonalização de pano. Desse modo, em uma modalidade, a composição detergente de acordo com a invenção compreende um agente de tonalizção de pano.
[000306] A composição detergente de acordo com a presente invenção também pode compreender agente de tonalização de pano, tais como corante ou pigmentos que quando formulados em composições detergentes podem ser depositados em um pano quando o dito pano entra em contato com um licor de lavagem que compreende as ditas composições detergentes, alterando assim a tinta do dito através de absorção/reflexão de luz visível. Os agentes de branqueamento fluorescentes emitem pelo menos alguma luz visível. Em contraste, os agentes de matização de tecidos alteram a tonalidade de uma superfície pois absorvem pelo menos uma porção do espectro de luz visível. Agentes de matização de tecidos adequados incluem corantes e conjugados de corante- argila, e podem também incluir pigmentos. Corantes adequados incluem corantes de molécula pequena e corantes poliméricos. Corantes de molécula pequena adequados incluem corantes de molécula pequena selecionados do grupo consistindo em corantes se enquadrando nas classificações do Índice de Cor (C.I.) de Azul Direto, Vermelho Direto, Violeta Direto, Azul Ácido, Vermelho Ácido, Violeta Ácido, Azul Básico, Violeta Básico e Vermelho Básico, ou suas misturas, por exemplo como descrito em WO2005/03274, WO2005/03275, WO2005/03276 e EP1876226 (deste modo incorporados por referência). Uma composição detergente compreende preferencialmente de cerca de 0,00003% em peso a cerca de 0,2% em peso, de cerca de 0,00008% em peso a cerca de 0,05% em peso, ou mesmo de cerca de 0,0001% em peso a cerca de 0,04% em peso de agente de matização de tecido. A composição pode compreender de 0,0001% em peso a 0,2% em peso de agente de matização de tecidos, isto pode ser especialmente preferencial quando a composição está na forma de uma bolsa de dose unitária. Agentes de coloração adequados são também revelados por exemplo em WO 2007/087257, WO2007/087243.
[000307] Podem ser utilizados quaisquer componentes de detergentes conhecidos na técnica para uso em detergentes de lavagem de roupa. Outros componentes de detergente opcionais incluem agentes anticorrosão, agentes antiencolhimento, agentes antirredeposição de sujidades, agentes antipregueamento, bactericidas, ligantes, inibidores de corrosão, agentes desintegrantes/de desintegração, corantes, estabilizantes de enzimas (incluindo ácido bórico, boratos, CMC, e/ou polióis tais como propilenoglicol), condicionadores de tecido incluindo argilas, carga/auxiliares de processamento, agentes de branqueamento fluorescentes/clarificantes óticos, impulsionadores de espuma, reguladores de espuma (solução saponífera), perfumes, agentes de suspensão da sujidade, amaciantes, supressores de solução saponífera, inibidores de escurecimento e agentes de migração ou sozinhos ou em combinação. Pode ser utilizado qualquer ingrediente conhecido na técnica para uso em detergentes de lavagem de roupa. A escolha de tais ingredientes pode ser feita satisfatoriamente pela pessoa versada na técnica
[000308] A composição detergente de acordo com a invenção também pode compreender dispersantes. Em particular, os detergentes em pó podem compreender dispersantes. Materiais orgânicos solúveis em água adequados incluem os ácidos homo- ou copoliméricos ou seus sais, nos quais o ácido policarboxílico compreende pelo menos dois radicais carboxila separados um do outro por não mais do que dois átomos de carbono. Os dispersantes adequados são descritos, por exemplo, em Powdered Detergents, Surfactant sicence series volume 71, Marcel Dekker, Inc. A composição detergente de acordo com a invenção também pode compreender um ou mais agentes de inibição de transferência de corante. Os agentes de inibição de transferência de corante polimérico adequados incluem, porém sem limitação, polímeros de polivinilpirrolidona, polímeros de N-óxido de poliamina, copolímeros de N-vinilpirrolidona e N-vinilimidazol, poliviniloxazolidonas e polivinilimidazois ou misturas dos mesmos. Quando presentes em uma composição em questão, os agentes de inibição de transferência de corantes podem estar presentes a níveis de cerca de 0,0001% a cerca de 10%, de cerca de 0,01% a cerca de 5% ou mesmo de cerca de 0,1% a cerca de 3% em peso da composição. Uma composição detergente, de acordo com a invenção, também pode compreender, de preferência, componentes adicionais que podem tingir artigos que são limpos, tais como agente de branqueamento fluorescente ou clarificantes ópticos. Quando presente, o clarificante está, de preferência, a um nível de cerca de 0,01% a cerca de 0,5%. Qualquer agente de branqueamento fluorescente adequado para uso em uma composição de detergente de lavagem de roupa pode ser usado na composição. Os agentes de branqueamento fluorescente o mais comummente usados são aqueles pertencendo às classes de derivados de ácido diaminoestilbenossulfônico, derivados de diarilpirazolina e derivados de bisfenil-diestirila. Exemplos do tipo derivado de ácido diaminoestilbenossulfônico de agentes de branqueamento fluorescente incluem os sais de sódio de: 4,4'-bis-(2-dietanolamino-4-anilino-s-triazin-6- ilamino)estilbeno-2,2'-dissulfonato; 4,4'-bis-(2,4-dianilino- s-triazin-6-ilamino)estilbeno-2,2'-dissulfonato; 4,4'-bis-(2- anilino-4(N-metil-N-2-hidróxi-etilamino)-s-triazin-6- ilamino)estilbeno-2,2'-dissulfonato, 4,4'-bis-(4-fenil-2,1,3- triazol-2-il)estilbeno-2,2'-dissulfonato; 4,4'-bis-(2- anilino-4(1-metil-2-hidróxi-etilamino)-s-triazin-6- ilamino)estilbeno-2,2'-dissulfonato e 2-(estilbil-4"-nafto- 1,2':4,5)-1,2,3-trizol-2"-sulfonato. Agentes de branqueamento fluorescentes preferenciais são Tinopal DMS e Tinopal CBS disponíveis da Ciba-Geigy AG, Basileia, Suíça. Tinopal DMS é o sal dissódico de dissulfonato de 4,4'-bis-(2-morfolino-4- anilino-s-triazin-6-ilamino)estilbeno. Tinopal CBS é o sal dissódico de dissulfonato de 2,2'-bis-(fenil-estirila). Agentes de branqueamento fluorescentes são também preferencias é os Parawhite KX comercialmente disponíveis, fornecidos pela Paramount Minerals and Chemicals, Mumbai, Índia. Outros fluorescentes adequados para uso incluem as 1- 3-diaril pirazolinas e as 7-alquilaminocumarinas.
[000309] Os níveis de clarificante fluorescente adequados incluem níveis inferiores de cerca de 0,01 a 0,05, de cerca de 0,1 ou mesmo de cerca de 0,2% em peso a níveis superiores de 0,5 ou mesmo 0,75% em peso. A composição detergente de acordo com a invenção também pode compreender um ou mais polímeros de liberação de sujidade que auxiliam a remoção de solos de panos, tais como panos à base de algodão e poliéster, em particular, a remoção de solos hidrofóbicos de panos à base de poliéster. Os polímeros de liberação de sujidade podem ser, por exemplo, polímeros à base de tereftalato não iônicos ou aniônicos, caprolactama de polivinila e copolímeros relacionados, copolímeros de enxerto de vinila, poliamidas de poliéster, consultar, por exemplo, Capítulo 7 em Powdered Detergents, Surfactant science series volume 71, Marcel Dekker, Inc. Outro tipo de polímeros de liberação de sujidade são polímeros de limpeza de gordura alcoxilados anfifílicos que compreendem uma estrutura nuclear e uma pluralidade de grupos alcoxilato fixados a essa estrutura nuclear. A estrutura nuclear pode compreender uma estrutura de polialquilenimina ou uma estrutura de polialcanolamina como descrita em detalhe em WO 2009/087523 (aqui incorporada por referência). Além disso, os copolímeros de enxerto aleatórios são polímeros de liberação de sujidade adequados, copolímeros de enxerto adequados são descritos mais detalhadamente nos documentos no WO 2007/138054, no WO 2006/108856 e no WO 2006/113314 (incorporados no presente documento a título de referência). Outros polímeros de liberação de sujidade são estruturas de polissacarídeos substituídos especialmente estruturas celulósicas substituídas tais como derivados celulósicos tais como aqueles descritos em EP 1867808 ou WO 2003/040279 (ambas são aqui incorporadas por referência). Polímeros celulósicos adequados incluem celulose, éteres de celulose, ésteres de celulose, amidas de celulose e suas misturas. Polímeros celulósicos adequados incluem celulose anionicamente modificada, celulose não ionicamente modificada, celulose cationicamente modificada, celulose zwitterionicamente modificada, e suas misturas. Polímeros celulósicos adequados incluem metilcelulose, carboximetilcelulose, etilcelulose, hidroxietilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, éster de carboximetilcelulose e suas misturas. A composição detergente de acordo com a invenção também pode compreender um ou mais agentes antirredeposição, tais como carboximetilcelulose (CMC), álcool polivinílico (PVA), polivinilpirrolidona (PVP), polioxietileno e/ou polietilenoglicol (PEG), homopolímeros de ácido acrílico, copolímeros de ácido acrílico e ácido maleico e polietilenoiminas. Os polímeros à base de celulose descritos sob polímeros de liberação de sujidade acima podem também funcionar como agentes antirredeposição.
[000310] Outros materiais adjuntos adequados incluem, porém sem limitação, agentes antiencolhimento, agentes antipregueamento, bactericidas, ligantes, veículos, corantes, estabilizantes de enzima, amaciantes de tecido, enchimentos, reguladores de espuma, hidrótropos, perfumes, pigmentos, supressores de espuma, solventes, estruturantes para detergentes líquidos e/ou agentes para elastecer a estrutura.
[000311] Desse modo, em uma modalidade particular, a composição detergente compreende adicionalmente pelo menos um agente quelante; pelo menos um tensoativo; pelo menos um polímero sulfonado; pelo menos um hidrótropo; pelo menos um adjuvante e/ou coadjuvante; pelo menos um perfume; e/ou pelo menos um tipo de sistema de alvejamento.
Formulação de produtos detergentes
[000312] A composição detergente de acordo com a invenção pode estar em qualquer forma conveniente, por exemplo, uma barra, um tablete homogêneo, um tablete que tem duas ou mais camadas, um pó regular ou compacto, um grânulo, uma pasta, um gel ou um líquido regular, compacto ou concentrado.
[000313] Desse modo, em uma modalidade, a composição detergente de acordo com a presente invenção, é uma composição detergente líquida para lavagem de roupas, uma composição detergente em pó para lavagem de roupas, uma composição detergente líquida para lavagem de louça ou uma composição detergente em pó para lavagem de louça.
[000314] O termo "composição detergente líquida para lavagem de roupas", conforme usado no presente documento, se refere a uma composição detergente que está em uma forma de líquido estabilizada e usada em um método para lavar um pano. Desse modo, a composição detergente foi formulada em forma de fluido.
[000315] O termo "composição detergente em pó para lavagem de roupas", conforme usado no presente documento, se refere a uma composição detergente que está em uma forma sólida, tal como um granulado, granulado ou pó, que é usado em um método para lavar um pano.
[000316] O termo "composição detergente líquida para lavagem de louça", conforme usado no presente documento, se refere a uma composição detergente que está em uma forma de líquido estabilizado e usado na lavagem de louça. A lavagem de louça pode ser qualquer tipo de lavagem de louça, tal como lavagem manual de louça e, tais como lavagem automatizada de louça (ADW).
[000317] O termo "composição detergente em pó para lavagem de louça", conforme usado no presente documento, se refere a uma composição detergente que está em uma forma sólida, tal como um granulado, unidade em pó ou compacta e usada em lavagem de louça. Uma composição detergente em pó para lavagem de louça é usada tipicamente em lavagem de louça automatizada, porém, o usado não se limita a tal ADW e também pode estar destinado para uso em qualquer tipo de lavagem de louça, tal como lavagem manual de louça.
[000318] Formas de formulação do detergente: Camadas (fases iguais ou diferentes), Bolsas, versus formas para Unidade de dosagem por máquina.
[000319] As bolsas podem ser configuradas como compartimento único ou múltiplos compartimentos. As mesmas podem ter qualquer forma, formato e material que sejam adequados para reter a composição, por exemplo, sem permitir que a liberação da composição libere a composição da bolsa antes do contato com a água. A bolsa é feita de filme solúvel em água que encerra um volume interno. O referido volume interior pode ser dividido em compartimentos da bolsa. Filmes preferenciais são materiais poliméricos, preferencialmente polímeros que são formados em um filme ou folha. Polímeros, copolímeros ou seus derivados preferenciais são poliacrilatos selecionados, e copolímeros de acrilato solúveis em água, celulose de metila, celulose de carboximetila, dextrina de sódio, celulose de etila, celulose de hidroxietila, celulose de hidroxipropilmetila, maltodextrina, polimetacrilatos ou mais preferencialmente copolímeros de álcool de polivinila e celulose de hidroxipropilmetila (HPMC). Preferencialmente, o nível de polímeros no filme, por exemplo PVA, é pelo menos cerca de 60%. O peso molecular médio preferencial será tipicamente cerca de 20.000 a cerca de 150.000. Os filmes podem ser também de composições de combinação compreendendo combinações de polímeros hidroliticamente degradáveis e solúveis em água, tais como poliactídeo e álcool de polivinila (conhecido sob a Referência comercial M8630 como vendido pela Chris Craft In. Prod. Of Gary, Ind., EUA) mais plastificantes como glicerol, etileno glicerol, propilenoglicol, sorbitol e misturas dos mesmos. As bolsas podem compreender uma composição de limpeza de roupa sólida ou componentes parciais e/ou uma composição de limpeza líquida ou componentes parciais separados pelo filme solúvel em água. O compartimento para componentes líquidos pode ser diferente na composição do que compartimentos contendo sólidos. Ref: (US2009/0011970 A1).
[000320] Os ingredientes de detergentes podem estar separados fisicamente uns dos outros por compartimentos em bolsas dissolvíveis em água ou em diferentes camadas de comprimidos. Desse modo, pode ser evitada interação de armazenamento negativa entre componentes. Diferentes perfis de dissolução de cada um dos compartimentos podem também dar origem a dissolução retardada de componentes selecionados na solução de lavagem.
[000321] Um detergente líquido ou gel, que não seja doseado à unidade, pode ser aquoso, contendo tipicamente pelo menos 20% em peso e até 95% de água, tal como até cerca de 70% de água, até cerca de 65% de água, até cerca de 55% de água, até cerca de 45% de água, até cerca de 35% de água. Outros tipos de líquidos, incluindo, sem limitação, alcanóis, aminas, dióis, éteres e polióis podem ser incluídos em um líquido ou gel aquoso. Um detergente líquido ou em gel aquoso pode conter de 0-30% de solvente orgânico. Um detergente líquido ou em gel pode ser não aquoso.
Métodos e usos
[000322] Em um aspecto, a invenção se refere ao uso da composição detergente, conforme descrito no presente documento, em lavagem de roupa, lavagem manual de louça ou lavagem automática de louça. Consequentemente, a presente invenção se refere ao uso de uma composição detergente que compreende (i) pelo menos uma variante de alfa-amilase que compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições 1, 54, 56, 72, 109, 113, 116, 134, 140, 159, 167, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473, 476, ou 477 da SEQ ID NO: 1, em que a dita variante de alfa-amilase tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100%, em relação à SEQ ID NO: 1 e em que a dita variante de alfa- amilase tem atividade de alfa-amilase; e (ii) pelo menos uma protease que tem atividade de protease, em que a dita protease é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) uma protease que tem uma identidade de sequência de pelo menos 70%, tal como, pelo menos 75%, tal como pelo menos 80%, tal como pelo menos 85%, tal como pelo menos 90%, tal como pelo menos 95%, tal como pelo menos 98%, tal como pelo menos 99%, tal como 100%, em relação às sequências de SEQ ID NOs: 2, 3, 19, 20 ou 23; (b) uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 171, 173, 175, 179 ou 180 da SEQ ID NO: 2, em que a dita variante de protease tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100%, em relação à SEQ ID NO: 2; (c) uma variante de protease que compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições 32, 33, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 58, 59,60, 61, 62, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 150, 152, 153, 154, 155, 156, 158, 159, 160, 161, 164, 169, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 197, 198, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, e 216 em comparação à protease na SEQ ID NO:3, em que a dita variante de protease tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3; (d) a variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 9, 15, 27, 42, 52, 55, 56, 59, 60, 66, 74, 85, 97, 99, 101, 102, 104, 116, 118, 154, 156, 157, 158, 161, 164, 176, 179, 182, 185, 188, 198, 199, 200, 203, 206, 210, 211, 212, 216, 230, 232, 239, 242, 250, 253, 255, 256, ou 269, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 3, em que a dita variante de protease tem pelo menos 60% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3, e (e) uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 32, 33, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 61, 62, 63, 64, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 118, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 154, 155, 156, 157, 158, 161, 162, 163, 167, 170, 175, 181, 187, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 203, 204, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, ou 222 em comparação à protease mostrada na SEQ ID NO: 23, em que a dita variante de protease tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23 em lavagem de roupa, lavagem manual de louça ou lavagem automática de louça.
[000323] Em uma modalidade, o uso da composição detergente, conforme descrito no presente documento, ocorre em lavagem de roupa.
[000324] Em outra modalidade, o uso da composição detergente, conforme descrito no presente documento, ocorre em lavagem automática de louça.
[000325] Uma composição detergente, de acordo com a invenção, pode ser formulada, por exemplo, como uma composição detergente de lavagem de roupa de máquina ou de mão incluindo uma composição aditiva para lavagem de roupa adequada para pré-tratamento de panos machados e uma composição amaciante de pano com enxágue adicionado ou pode ser formulada como uma composição detergente para uso em operações domésticas gerais de limpeza de superfície dura ou pode ser formulada para operações de lavagem de louça de mão ou de máquina. Desse modo, em uma modalidade, a composição detergente é uma composição detergente líquida para lavagem de roupas, uma composição detergente em pó para lavagem de roupas, uma composição detergente líquida para lavagem de louça; ou uma composição detergente em pó para lavagem de louça.
[000326] Um processo de limpeza ou o processo de cuidados têxteis pode ser, por exemplo, um processo de lavagem de roupa, um processo de lavagem de louça ou limpeza de superfícies duras, tais como ladrilhos de banheiro, pisos, topo de mesa, ralos, pias e bacias de lavagem. Os processos de lavagem de roupa podem ser por exemplo lavagem de roupa doméstica, mas podem também ser lavagem de roupa industrial. Um processo para lavagem de tecidos e/ou peças de vestuário pode ser um processo que compreende tratamento de tecidos com uma solução de lavagem contendo uma composição detergente, e pelo menos uma variante de protease. Um processo de limpeza ou um processo de cuidado de têxteis pode, por exemplo, ser levado a cabo em um processo de lavagem à máquina ou em um processo de lavagem manual. A solução de lavagem pode ser por exemplo uma solução de lavagem aquosa contendo uma composição detergente.
[000327] Os tecidos e/ou peças de vestuário sujeitos a processos de lavagem, limpeza ou cuidado de têxteis podem ser roupa lavável convencional, por exemplo roupa de uso doméstico. Preferencialmente, a maior parte da roupa é peças de vestuário e tecidos, incluindo malhas, tecidos, sarjas, não tecidos, feltros, fios e felpa. Os panos podem ser à base de celulose, tais como celulósicos naturais, incluindo algodão, linhaça, linho, juta, rami, sisal ou fibra de coco ou produtos celulósicos feitos pelo homem (por exemplo, oriundos de polpa de madeira) incluindo viscose/raiom, rami, fibras de acetato de celulose (tricel), liocel ou mesclas dos mesmos. Os tecidos podem também não ser à base de celulose tais como poliamidas naturais incluindo lã, camelo, caxemira, mohair, coelho e seda ou polímero sintético tal como náilon, aramida, poliéster, acrílico, polipropileno e spandex/elastano, ou suas combinações, bem como combinação de fibras à base de celulose e que não são à base de celulose. Os exemplos de mesclas são mesclas de algodão e/ou raiom/viscose com um ou mais materiais de acompanhamento, tais como lã, fibras sintéticas (por exemplo, fibras de poliamida, fibras acrílicas, fibras de poliéster, fibras de álcool polivinílico, fibras de cloreto de polivinila, fibras de poliuretano, fibras de poliureia, fibras de aramida) e fibras que contêm celulose (por exemplo, raiom/viscose, rami, linhaça, linho, juta, fibras de acetato de celulose, liocel).
[000328] Os últimos anos tem existido um interesse crescente na substituição de componentes em detergentes, que sejam derivados de petroquímicos, por componentes biológicos renováveis tais como enzimas e polipeptídeos sem comprometer o desempenho de lavagem. Quando os componentes de composições detergentes mudam, são necessárias novas atividades de enzimas ou novas enzimas que têm propriedades alternativas e/ou aprimoradas em comparação às enzimas de detergentes comummente usadas tais como proteases, lipases e amilases para alcançar um desempenho de lavagem semelhante ou aprimorado em comparação às composições detergentes tradicionais.
[000329] Composições detergentes típicas incluem vários componentes além das enzimas, estes componentes têm efeitos diferentes, alguns componentes como os tensoativos diminuem a tensão superficial no detergente, que permite que a mancha sendo limpa seja levantada e dispersa e depois lavada, outros componentes como sistemas de alvejamento removem descoloração frequentemente por oxidação e muitos alvejantes têm também fortes propriedades bactericidas, e são usados para desinfecção e esterilização. Ainda outros componentes como adjuvante e quelador amaciam, por exemplo, a água de lavagem removendo-se a forma de íons de metal do líquido.
[000330] As composições enzimáticas podem compreender adicionalmente pelo menos um ou mais dos seguintes: um tensoativo, um adjuvante, um quelador ou agente quelante, sistema de alvejamento ou componente alvejante em lavagem de roupa ou de louça.
[000331] A quantidade de um tensoativo, um adjuvante, um quelador ou agente de quelação, sistema de alvejamento e/ou componente alvejante pode ser reduzida em comparação à quantidade de tensoativo, adjuvante, quelador ou agente de quelação, sistema de alvejamento e/ou componente alvejante usados sem a variante de protease da invenção adicionada. De preferência, o pelo menos um componente que é um tensoativo, um constituinte, um quelador ou agente de quelação, um sistema de alvejamento e/ou componente alvejante está presente em uma quantidade que é 1% menor, tal como 2% menor, tal como 3% menor, tal como 4% menor, tal como 5% menor, tal como 6% menor, tal como 7% menor, tal como 8% menor, tal como 9% menor, tal como 10% menor, tal como 15% menor, tal como 20% menor, tal como 25% menor, tal como 30% menor, tal como 35% menor, tal como 40% menor, tal como 45% menor, tal como 50% menor que a quantidade do componente no sistema sem a adição de variantes de proteases da invenção, tal como uma quantidade convencional de tal componente. As composições detergentes também podem ser uma composição que está livre de pelo menos um componente que é um tensoativo, um adjuvante, um quelador ou agente quelante, sistema de alvejamento ou componente alvejante e/ou polímero.
[000332] Em uma modalidade, o uso ocorre em lavagem de roupas ou lavagem automática de louça a baixa temperatura, tal como inferior a 60 °C, tal como inferior a 55 °C, tal como inferior a 50°, tal como inferior a 45 °C, tal como inferior a 40 °C, tal como inferior a 35 °C, tal como inferior a 30 °C, tal como inferior a 25 °C, tal como inferior a 20 °C, tal como inferior a 15 °C.
[000333] O termo "baixa temperatura", conforme usado no presente documento, se refere a uma temperatura de 5 a 60 °C, tal como 5 a 50 °C, de preferência 5 a 40 °C, com mais preferência, 5 a 30 °C, com mais preferência, 5 a 20 °C, com máxima preferência, 5 a 15 °C e, em particular, 5 a 10 °C.
[000334] Em uma modalidade, o uso da composição detergente ocorre em lavagem de roupa a baixa temperatura, tal como inferior a 50 °C, tal como inferior a 45 °C, tal como inferior a 40 °C, tal como inferior a 35 °C, tal como inferior a 30 °C, tal como inferior a 25 °C, tal como inferior a 20 °C, tal como inferior a 15 °C.
[000335] Em outra modalidade, o uso da composição detergente ocorre em lavagem automática de louça a baixa temperatura, tal como inferior a 60 °C, tal como inferior a 55 °C, tal como inferior a 50°, tal como inferior a 45 °C, tal como inferior a 40 °C, tal como inferior a 35 °C, tal como inferior a 30 °C.
Método de Lavagem
[000336] A composição detergente de acordo com a invenção é idealmente adequada para uso em aplicações de lavagem de roupa. Desse modo, em um aspecto, a presente invenção se refere a um método para lavar roupas que compreende lavar uma vestimenta com uma composição detergente, conforme descrito no presente documento, de preferência, a uma temperatura de 40 °C ou inferior ou, com mais preferência, a uma temperatura de 30 °C ou inferior ou, com ainda mais preferência, a uma temperatura de 20 °C ou inferior. Consequentemente, o método para lavar roupas compreende lavar um pano com uma composição detergente que compreende (i) pelo menos uma variante de alfa-amilase que compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições 1, 54, 56, 72, 109, 113, 116, 134, 140, 159, 167, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473, 476, ou 477 da SEQ ID NO: 1, em que a dita variante de alfa-amilase tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100%, em relação à SEQ ID NO: 1 e em que a dita variante de alfa- amilase tem atividade de alfa-amilase; e (ii) pelo menos uma protease que tem atividade de protease, em que a dita protease é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) uma protease que tem uma identidade de sequência de pelo menos 70%, tal como, pelo menos 75%, tal como pelo menos 80%, tal como pelo menos 85%, tal como pelo menos 90%, tal como pelo menos 95%, tal como pelo menos 98%, tal como pelo menos 99%, tal como 100%, em relação às sequências de SEQ ID NOs: 2, 3, 19, 20 ou 23; (b) uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 171, 173, 175, 179 ou 180 da SEQ ID NO: 2, em que a dita variante de protease tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100%, em relação à SEQ ID NO: 2; (c) uma variante de protease que compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições 32, 33, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 58, 59,60, 61, 62, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 116, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 150, 152, 153, 154, 155, 156, 158, 159, 160, 161, 164, 169, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 197, 198, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, e 216 em comparação à protease na SEQ ID NO:3, em que a dita variante de protease tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3, (d) a variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 9, 15, 27, 42, 52, 55, 56, 59, 60, 66, 74, 85, 97, 99, 101, 102, 104, 116, 118, 154, 156, 157, 158, 161, 164, 176, 179, 182, 185, 188, 198, 199, 200, 203, 206, 210, 211, 212, 216, 230, 232, 239, 242, 250, 253, 255, 256, ou 269, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 3, em que a dita variante de protease tem pelo menos 60% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3, e (e) uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 32, 33, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 61, 62, 63, 64, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 118, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 154, 155, 156, 157, 158, 161, 162, 163, 167, 170, 175, 181, 187, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 203, 204, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, ou 222 em comparação à protease mostrada na SEQ ID NO: 23, em que a dita variante de protease tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23, de preferência, a uma temperatura de 40 °C ou inferior ou, com mais preferência, a uma temperatura de 30 °C ou inferior ou, com ainda mais preferência, a uma temperatura de 20 °C ou inferior.
[000337] Estes métodos incluem um método para lavagem de um tecido. O método compreende as etapas de contato de um tecido a ser lavado com uma solução de limpeza de roupa compreendendo uma composição detergente. O tecido pode compreender qualquer tecido capaz de ser lavado em condições normais de uso do consumidor. A solução tem preferencialmente um pH de cerca de 5,5 a cerca de 11,5. As composições podem ser empregues a concentrações de cerca de 100 ppm, preferencialmente 500 ppm a cerca de 15.000 ppm em solução. As temperaturas da água variam tipicamente de cerca de 5 °C a cerca de 95 °C, incluindo cerca de 10 °C, cerca de 15 °C, cerca de 20 °C, cerca de 25 °C, cerca de 30 °C, cerca de 35 °C, cerca de 40 °C, cerca de 45 °C, cerca de 50 °C, cerca de 55 °C, cerca de 60 °C, cerca de 65 °C, cerca de 70 °C, cerca de 75 °C, cerca de 80 °C, cerca de 85 °C e cerca de 90 °C. A razão de água em relação a tecido é tipicamente de cerca de 1:1 a cerca de 30:1.
[000338] Em modalidades particulares, o método de lavagem é conduzido a um pH desde cerca de 5,0 até cerca de 11,5, ou desde cerca de 6 até cerca de 10,5, cerca de 5 até cerca de 11, cerca de 5 até cerca de 10, cerca de 5 até cerca de 9, cerca de 5 até cerca de 8, cerca de 5 até cerca de 7, cerca de 5,5 até cerca de 11, cerca de 5,5 até cerca de 10, cerca de 5,5 até cerca de 9, cerca de 5,5 até cerca de 8, cerca de 5,5, até cerca de 7, cerca de 6 até cerca de 11, cerca de 6 até cerca de 10, cerca de 6 até cerca de 9, cerca de 6 até cerca de 8, cerca de 6 até cerca de 7, cerca de 6,5 até cerca de 11, cerca de 6,5 até cerca de 10, cerca de 6,5 até cerca de 9, cerca de 6,5 até cerca de 8, cerca de 6,5 até cerca de 7, cerca de 7 até cerca de 11, cerca de 7 até cerca de 10, cerca de 7 até cerca de 9, ou cerca de 7 até cerca de 8, cerca de 8 até cerca de 11, cerca de 8 até cerca de 10, cerca de 8 até cerca de 9, cerca de 9 até cerca de 11, cerca de 9 até cerca de 10, cerca de 10 até cerca de 11, preferencialmente cerca de 5,5 até cerca de 11,5.
[000339] Em modalidades particulares, o método de lavagem é conduzido a um grau de dureza desde cerca de 0 °dH até cerca de 30 °dH, como cerca de 1 °dH, cerca de 2 °dH, cerca de 3 °dH, cerca de 4 °dH, cerca de 5 °dH, cerca de 6 °dH, cerca de 7 °dH, cerca de 8 °dH, cerca de 9 °dH, cerca de 10 °dH, cerca de 11 °dH, cerca de 12 °dH, cerca de 13 °dH, cerca de 14 °dH, cerca de 15 °dH, cerca de 16 °dH, cerca de 17 °dH, cerca de 18 °dH, cerca de 19 °dH, cerca de 20 °dH, cerca de 21 °dH, cerca de 22 °dH, cerca de 23 °dH, cerca de 24 °dH, cerca de 25 °dH, cerca de 26 °dH, cerca de 27 °dH, cerca de 28 °dH, cerca de 29 °dH, cerca de 30 °dH. Em condições típicas de lavagem europeias, o grau de dureza é cerca de 16 °dH, sob condições de lavagem típicas dos EUA cerca de 6 °dH, e sob condições de lavagem típicas asiáticas, cerca de 3 °dH.
[000340] Uma composição detergente de acordo com a invenção é também adequada idealmente para uso em aplicações de lavagem de louça, tal como lavagem automática de louça. Desse modo, em um aspecto, a presente invenção se refere a um método para lavar louça em uma máquina automática de lavar louça com o uso de uma composição detergente, conforme descrito no presente documento, que compreende as etapas de adicionar a dita composição detergente em um compartimento de composição detergente na dita máquina automática de lavar louça e liberar a dita composição detergente durante um ciclo de lavagem principal. Consequentemente, o método para lavar louça em uma máquina automática de lavar louça com o uso de uma composição detergente que compreende (i) pelo menos uma variante de alfa-amilase que compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições 1, 54, 56, 72, 109, 113, 116, 134, 140, 159, 167, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473, 476, ou 477 da SEQ ID NO: 1, em que a dita variante de alfa- amilase tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100%, em relação à SEQ ID NO: 1 e em que a dita variante de alfa-amilase tem atividade de alfa-amilase; e (ii) pelo menos uma protease que tem atividade de protease, em que a dita protease é selecionada dentre o grupo que consiste em: (a) uma protease que tem uma identidade de sequência de pelo menos 70%, tal como, pelo menos 75%, tal como pelo menos 80%, tal como pelo menos 85%, tal como pelo menos 90%, tal como pelo menos 95%, tal como pelo menos 98%, tal como pelo menos 99%, tal como 100%, em relação às sequências de SEQ ID NOs: 2, 3, 19, 20 ou 23; (b) uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 171, 173, 175, 179 ou 180 da SEQ ID NO: 2, em que a dita variante de protease tem uma identidade de sequência de pelo menos 75%, porém, menor que 100%, em relação à SEQ ID NO: 2; (c) uma variante de protease que compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições 32, 33, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 58, 59,60, 61, 62, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 116, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 150, 152, 153, 154, 155, 156, 158, 159, 160, 161, 164, 169, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 197, 198, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, e 216 em comparação à protease na SEQ ID NO:3, em que a dita variante de protease tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3, (d) uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 9, 15, 27, 42, 52, 55, 56, 59, 60, 66, 74, 85, 97, 99, 101, 102, 104, 116, 118, 154, 156, 157, 158, 161, 164, 176, 179, 182, 185, 188, 198, 199, 200, 203, 206, 210, 211, 212, 216, 230, 232, 239, 242, 250, 253, 255, 256 ou 269, em que a numeração é de acordo com a SEQ ID NO: 3, em que a dita variante de protease tem pelo menos 60% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3, e (e) uma variante de protease que compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondentes às posições 32, 33, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 61, 62, 63, 64, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 118, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 154, 155, 156, 157, 158, 161, 162, 163, 167, 170, 175, 181, 187, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 203, 204, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, ou 222 em comparação à protease mostrada na SEQ ID NO: 23, em que a dita variante de protease tem pelo menos 75% de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 23, que compreende as etapas de adicionar a dita composição detergente em um compartimento de composição detergente na dita máquina automática de lavar louça e liberar a dita composição detergente durante um ciclo de lavagem principal.
[000341] As composições para uso nos métodos descritos acima podem compreender adicionalmente pelo menos uma enzima adicional, conforme apresentado na seção acima, tal como uma enzima selecionada dentre o grupo que consiste em hidrolases, tais como proteases, lipases e cutinases, carbo-hidrases, tais como amilases, celulases, hemicelulases, xilanases e pectinase ou uma combinação das mesmas.
[000342] A presente invenção é descrita adicionalmente pelos exemplos a seguir que não devem ser interpretados como limitantes do escopo da invenção. EXEMPLOS
Materiais e Métodos Métodos gerais de biologia molecular:
[000343] Salvo quando indicado de outro modo, as manipulações e transformações de DNA foram realizadas usando métodos comuns de biologia molecular (Sambrook et al. (1989); Ausubel et al. (1995); Harwood e Cutting (1990).
Ensaio de Tensão Mecânica Automática (Amsa) Para Lavagem de Roupa
[000344] A fim de avaliar o desempenho de lavagem em roupa são realizados experimentos de lavagem, usando o ensaio de tensão mecânica automática (AMSA, do inglês "Automatic Mechanical Stress Assay"). Com o AMSA, o desempenho de lavagem de uma grande quantidade de soluções de pequeno volume de enzima-detergente pode ser examinado. A placa de AMSA tem vários compartimentos para soluções de teste e uma tampa que aperta firmemente a amostra de roupa, o têxtil a ser lavado, contra todas as aberturas dos compartimentos. Durante o tempo de lavagem, a placa, soluções de teste, têxtil e tampa são vigorosamente agitados para colocar a solução de teste em contato com o têxtil e aplicar tensão mecânica de um modo regular, periodicamente oscilante. Para descrição adicional, consultar o documento no WO 02/42740, especialmente o parágrafo "<Italic>Special método modalidades</Italic>" nas páginas 23 e 24.
[000345] O desempenho de lavagem é medido como o brilho da cor do têxtil lavado. O brilho também pode ser expresso como a intensidade da luz refletida a partir da amostra quando iluminada com luz branca. Quando a amostra está manchada, a intensidade da luz refletida é mais baixa do que aquela de uma amostra limpa. Portanto, a intensidade da luz refletida pode ser usada para medir o desempenho de lavagem.
[000346] As medições de cor são feitas com um digitalizador de mesa profissional (Kodak iQsmart, Kodak, Midtager 29, DK-2605 Br0ndby, Dinamarca), que é usado para capturar uma imagem do têxtil lavado.
[000347] Para extrair um valor para a intensidade da luz a partir das imagens digitalizadas, os valores de pixel de 24 bits da imagem são convertidos em valores para vermelho, verde e azul (RGB). O valor de intensidade (Int) é calculado por adição dos valores RGB em conjunto como vetores e depois consideração do comprimento do vetor resultante: Tabela 1a: Composição de detergentes modelo e materiais de teste
[000348] A dureza da água foi ajustada a 15 odH por adição de CaCl2, MgCl2 e NaHCO3 (Ca2+:Mg2+:HCO3- = 4:1:7,5) para o sistema de teste. Após lavagem, os têxteis foram enxaguados em água da torneira e secos. Tabela 1b: Detergente modelo X *detergente-modelo X é misturado sem AEO. AEO é adicionado separadamente antes da lavagem.
[000349] A dureza da água foi ajustada a 12 °dH por adição de CaCl2, MgCl2 e NaHCO3 (Ca2+:Mg2+:HCO3- = 2:1:4,5) para o sistema de teste. Após lavagem, os têxteis foram enxaguados em água da torneira e secos. Tabela 1c: detergente-modelo O
[000350] A dureza da água foi ajustada a 12 °dH por adição de CaCl2, MgCl2 e NaHCO3 (Ca2+:Mg2+:HCO3- = 2:1:4,5) para o sistema de teste. Após lavagem, os têxteis foram enxaguados em água da torneira e secos. Tabela 1d: Detergente-modelo Z *detergente-modelo Z é misturado sem AEO. AEO é adicionado separadamente antes da lavagem.
[000351] A dureza da água foi ajustada a 15 °dH por adição de CaCl2, MgCl2 e NaHCO3 (Ca2+:Mg2+:HCO3- = 4:1:7,5) para o sistema de teste. Após lavagem, os têxteis foram limpos em água canalizada e secos. O pH foi ajustado com NaOH 4 M. Tabela 1e: Detergente-modelo Z com alvejante *detergente-modelo Z é misturado sem AEO. AEO é adicionado separadamente antes da lavagem.
[000352] A dureza da água foi ajustada a 15 °dH por adição de CaCl2, MgCl2 e NaHCO3 (Ca2+:Mg2+:HCO3- = 4:1:7,5) para o sistema de teste. Após lavagem, os têxteis foram limpos em água canalizada e secos. O pH foi ajustado com NaOH 4 M. Tabela 1f: Formulação de detergente de base líquida (% em p/p em composição total) 0 variante de alfa-amilase conforme revelado no presente documento. 1 protease conforme revelado no presente documento ou variante da mesma revelada no presente documento 2 outras enzimas podem incluir mananase, pectato liase, lipase, endoglucanase e celulase. EnsaiodeTensãoMecânicaAutomática(Amsa)ParaLavagem AutomáticadeRoupa
[000353] Uma solução de teste que compreende água (21 °dH), 3,94 g/l de detergente-modelo de ADW com alvejante ou 3,45 g/l de detergente-modelo de ADW sem alvejante, conforme descrito abaixo, e a composição detergente da presente invenção em concentrações de 0,03, 0,06, 0,12 e 0,24 mg de proteína de enzima/l (40 °C) ou 0,01, 0,03, 0,06 e 0,12 mg de proteína de enzima/l (50 °C), é preparada. Os panos manchados com sujidade relevantes para as enzimas presentes na composição detergente, tal como amido (CS-28 do Centro para Materiais de Teste BV, P.O. Box 120, 3133 KT, Vlaardingen, Países-Baixos), são adicionados e lavados por 10 ou 20 minutos a 40 °C e 50 °C, conforme especificado abaixo. Após enxágue abundante sob água da torneira corrente e secagem na escuridão, os valores de intensidade da luz dos tecidos manchados foram subsequentemente medidos como uma medida do desempenho de lavagem. O teste com 0 mg de proteína de enzima/L foi usado como um branco e correspondido à contribuição do detergente. De preferência, a ação mecânica é aplicada durante a etapa de lavagem, por exemplo, na forma de sacudimento, rotação ou agitação da solução de lavagem com os panos e ladrilhos. Os experimentos de desempenho em lavagem de AMSA são conduzidos sob condições experimentais especificadas abaixo: Tabela 2: Condição experimental Tabela 3: Detergente-modelo de ADW com alvejante Tabela 4: Detergente-modelo de ADW sem alvejante
[000354] Dureza da água é ajustada para 21 °dH pela adição de CaCl2, MgCl2 e NaHCO3 (Ca2+:Mg2+:HCO3- = 4:1:10) para o sistema de teste. Após lavagem, os têxteis foram enxaguados em água da torneira e secos.
[000355] O desempenho de lavagem foi medido como o brilho expresso como a intensidade da luz refletida a partir da amostra quando iluminada com luz branca. Quando a amostra estava manchada, a intensidade da luz refletida era mais baixa do que aquela de uma amostra limpa. Portanto, a intensidade da luz refletida pode ser usada para medir o desempenho de lavagem.
[000356] As medições de cor foram feitas com um digitalizador de mesa profissional (EPSON Expression 10000XL, EPSON) usado para capturar uma imagem do têxtil lavado.
[000357] A fim de extrair um valor para a intensidade de luz das imagens digitalizadas, os valores de pixel de cor de 48D24 Bits da imagem foram convertidos em valores para vermelho, verde e azul (RGB). O valor de intensidade (Int) é calculado por adição dos valores RGB em conjunto como vetores e depois consideração do comprimento do vetor resultante:
Lavagem Automática de Louça em Escala Completa (ADW)
[000358] Os ladrilhos de melamina manchados com, por exemplo, amido (CS-28 do Centro para Materiais de Teste BV, P.O. Box 120, 3133 KT, Vlaardingen, Países-Baixos) foram usados como material de teste e lavados em programas definidos a 40 °C e 50 °C com o uso de água com 21 °dH, conforme especificado abaixo. Após três minutos de execução do programa de máquina, o detergente e a enzima em uma concentração de 2,55 mg de enzima/lavagem ou 5,12 mg de enzima/lavagem é adicionado. Após um enxágue preciso sob água canalizada corrente e secagem no escuro, os valores de intensidade de luz dos ladrilhos manchados foram medidos subsequentemente como uma medida para desempenho em lavagem. O teste com 0 mg de proteína de enzima/l é usado como um bloco bruto e correspondeu à contribuição do detergente. Os experimentos de desempenho em lavagem em escala completa são conduzidos sob condições experimentais especificadas abaixo: Tabela 5: Condição experimental Tabela 6: Detergente-modelo de ADW com alvejante Tabela 7: Detergente-modelo de ADW sem alvejante
[000359] Após lavagem, os ladrilhos de melamina são limpos com água canalizada e secos.
[000360] O desempenho em lavagem é medido como diferença em remissão. As medições de remissão foram feitas com um Color-Eye 7000 (CE7000) usado para obter espectros e realizar cálculos de remissão e/ou diferença de cor. A remissão é medida em 460 nm sem luz UV no iluminante.
Ensaio de Atividade de Alfa-Amilase - Ensaio de pNP-G7
[000361] A atividade da alfa-amilase pode ser determinada por um método empregando o substrato G7-pNP. G7- pNP que é uma abreviação para 4,6-etilideno(G7)-p- nitrofenil(Gi)-a,D-malto-heptaosídeo, um oligossacarídeo bloqueado que pode ser clivado por uma endoamilase, tal como uma alfa-amilase. Em seguida da clivagem, a alfa-Glucosidase incluída no kit digere o substrato hidrolisado adicionalmente para liberar uma molécula de PNP livre que tem uma cor amarela e, portanto, pode ser medida por espectrofotometria visível em À= 405 nm (400 a 420 nm.). Os kits contendo substrato G7-pNP e alfa-glucosidase são fabricados pela Roche/Hitachi (cat. N° 11876473).
Reagentes:
[000362] O substrato G7-pNP desse kit contém 22 mM 4,6- etilideno- G7-pNP e 52,4 mM HEPES (ácido 2- [4-(2- hidroxietil)-1-piperazinil]-etanossulfônico), pH 7,0).
[000363] O reagente de alfa-Glucosidase contém 52,4 mM de HEPES, 87 mM de NaCl, 12,6 mM de MgCl2, 0,075 mM de CaCl2, > 4 kU/l alfa-glucosidase).
[000364] A solução de trabalho do substrato é feita por mistura de 1 ml do reagente de alfa-glucosidase com 0,2 ml do substrato G7-pNP. Essa solução de trabalho do substrato é feita imediatamente antes de ser utilizada.
[000365] Tampão de diluição: 50 mM de MOPS, 0,05% (em p/v) de Triton X100 (éter p-(1,1,3,3-tetrametilbutil)- fenílico de polietilenoglicol (C14H22O(C2H4O)n (n = 9-10))), CaCl2 1 mM, pH 8,0.
Procedimento:
[000366] A amostra de amilase a ser analisada é diluída em um tampão de diluição para garantir que o pH na amostra diluída seja 7. O ensaio é realizado transferindo-se 20 µl amostras de enzima diluídas em placa de microtitulação de 96 cavidades e adicionando-se 80 µl de solução de trabalho de substrato. A solução é misturada e pré-incubada por 1 minuto à temperatura ambiente, e a absorção é medida a cada 20 segundos durante 5 minutos a OD 405 nm.
[000367] A coeficiente angular (absorbância por minuto) da curva de absorção dependente do tempo é diretamente proporcional à atividade específica (atividade por mg de enzima) da alfa-amilase em questão sob o conjunto determinado de condições. A amostra de amilase deve ser diluída para um nível em que o coeficiente angular fique abaixo de 0,4 unidade de absorbância por minuto.
Ensaio de Atividade de Alfa-Amilase - Ensaio de Atividade Phadebas
[000368] A atividade de alfa-amilase também pode ser determinada por um método com o uso do substrato Phadebas (por exemplo, de Magle Life Sciences, Lund, Sweden). Um comprimido Phadebas inclui polímeros de amido interligados que estão na forma de microesferas globulares que são insolúveis em água. Um corante azul está covalentemente ligado a estas microesferas. Os polímeros de amido interligados na microesfera são degradados a uma velocidade que é proporcional à atividade de alfa-amilase. Quando a alfa-amilase degrada os polímeros de amido, o corante azul liberado é solúvel em água e a concentração de corante pode ser determinada por medição da absorbância a 620 nm. A concentração de azul é proporcional à atividade de alfa- amilase na amostra.
[000369] A amostra de alfa-amilase a ser analisada é diluída no tempão de atividade com o pH desejado. Dois comprimidos de substrato são suspensos em 5 ml de tampão de atividade e misturados em agitador magnético. Durante a mistura do substrato transferir 150 µl para placa de microtitulação (MTP) ou PCR-MTP. Adicionar 30 µl de amostra de amilase diluída a 150 µl de substrato e misturar. Incubar durante 15 minutos a 37 °C. A reação é parada por adição de 30 µl de NaOH a 1 M e misturar. Centrifugar MTP durante 5 minutos a 4.000 xg. Transferir 100 µl para nova MTP e medir a absorbância a 620 nm.
[000370] A amostra de alfa-amilase deve ser diluída tal que a absorbância a 620 nm esteja entre 0 e 2,2, e esteja dentro da gama linear do ensaio de atividade.
Ensaio de Atividade de Alfa-Amilase - Ensaio de Atividade de Amylazyme
[000371] A atividade de alfa-amilase também pode ser determinada por um método com o uso do substrato de Amylazyme (Teste de Amylazyme Megazyme®, fornecido por Megazyme para o ensaio de amilases cereais e bacterianas) que compreende amilose AZCL, que foi misturado com lactose e estearato de magnésio e formado em tablete. Um corante azul está covalentemente ligado a estas microesferas. Os polímeros de amilose interaglutinados na microsfera são degradas em uma velocidade que é proporcional à atividade de alfa-amilase. Quando a alfa-amilase degrada os polímeros de amido, o corante azul liberado é solúvel em água, e a concentração de corante pode ser determinado medindo-se absorbância a 590 nm. A concentração de azul é proporcional à atividade de alfa- amilase na amostra.
[000372] A amostra de alfa-amilase a ser analisada é diluída no tempão de atividade com o pH desejado. Dois tabletes de substrato são suspensos em 5 ml de tampão de atividade e misturados em um agitador magnético. Durante a misturação do substrato, 150 µl são transferidos a uma placa de microtitulação (MTP) ou PCR-MTP. A seguir, a amostra de amilase diluída de 25 µl é adicionada a 150 µl de substrato e misturada. A mistura é incubada por 10 minutos a 37 °C. A reação é interrompida adicionando-se 25 µl de NaOH 1 M e misturada. A MTP é centrifugada por 5 minutos a 4.000 xg, seguida pela transferência de 100 µl a uma nova MTP, e a absorbância é medida a 590 nm.
Ensaios de atividade de proteases: 1) Ensaio de atividade de Suc-AAPF-pNA:
[000373] A atividade proteolítica pode ser determinada por um método empregando o substrato Suc-AAPF-PNA. Suc-AAPF- PNA é uma abreviatura de N-Succinil-Alanina-Alanina-Prolina- Fenilalanina-p-Nitroanilida, e é um peptídeo bloqueado que pode ser clivado por endo-proteases. Após a clivagem, é liberada uma molécula de PNA livre e tem uma cor amarela e, assim, pode ser medida por espectrofotometria visível ao comprimento de onda de 405 nm. O substrato Suc-AAPF-PNA é fabricado pela Bachem (no. de cat. L1400, dissolvido em DMSO).
[000374] Uma amostra de protease a ser analisada foi diluída em tampão de atividade residual (Tris pH 8,6 100 mM). O ensaio foi realizado transferindo 60 µl de amostras de enzimas diluídas para uma placa de microtitulação de 96 poços e adicionando 140 µl de solução de trabalho de substrato (0,72 mg/ml em Tris 100 mM pH 8,6). A solução foi misturada à temperatura ambiente e a absorção é medida de 20 em 20 segundos ao longo de 5 minutos a OD 405 nm.
[000375] O coeficiente angular (absorbância por minuto) da curva de absorção dependente do tempo é diretamente proporcional à atividade específica (atividade por mg de enzima) da protease em questão no conjunto determinado de condições. A amostra de protease deve ser diluída a um nível em que o coeficiente angular é linear. Exemplo 1: Preparação e teste de variantes compreendidos na composição detergente da presente invenção
[000376] As variantes sítio-dirigidas foram construídas a partir da alfa-amilase parental (SEQ ID NOs: 1 e 14) e das proteases parentais (SEQ ID NOs: 2 e 3) que compreendem modificações específica nas regiões, conforme definido em outro parágrafo no presente documento. As variantes foram preparadas por clonagem tradicional de fragmentos de DNA (Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratori Manual, 2a Edição, Cold Spring Harbor, 1989) usando PCR em conjunto com oligonucleotídeos mutagênicos apropriadamente planejados que introduziram as mutações desejadas na sequência resultante. Foram sintetizados oligos mutagênicos correspondentes à sequência de DNA flanqueando o sítio de mutação desejado, separados pelos pares de bases de DNA definindo as inserções/deleções/substituições. Deste modo, as variantes listadas na tabela 2a embaixo foram construídas e produzidas.
Fermentação de variantes
[000377] A fermentação pode ser realizada por métodos bem conhecidos na técnica ou como se segue. Uma cepa de B. subtilis infectada pelo plasmídeo de expressão relevante aplicada por esfregaço em uma placa de LB-ágar com um antibiótico relevante (6 µg/ml de cloramfenicol) e cresceu de um dia para o outro a 37 °C.
[000378] As colônias foram transferidas ao meio PS-1 de 100 ml suplementados com um antibiótico relevante em um frasco de agitação de 500 ml que contém um meio rico (por exemplo, PS-1: Sacarose a 100 g/l (Danisco n° de cat. 109 a 0429), 40 g/l de soja de massa (farinha de soja), 10 g/l de Na2HPO4.12H2O (Merck n° de cat. 6.579), 0,1 ml/l de PE 6100 Plurônico (BASF 102 a 3.098)). O cultivo leva tipicamente 4 dias a 30 oC agitando a 220 rpm. Células e outro material não dissolvido foram removidos do caldo de fermentação por centrifugação a 4500 rpm durante 20-25 minutos. De seguida, o sobrenadante foi filtrado para se obter uma solução límpida. Exemplo 2: Combinação de alfa-amilase e protease em lavagem manual de louça (MDW)
[000379] A fim de demonstrar o benefício de uma variante de alfa-amilase em combinação com uma variante de protease em lavagem manual de louça, os experimentos forma conduzidos com o uso do método e condições descritos abaixo.
Descrição Geral do Método
[000380] Os ladrilhos de melamina sujos foram encharcados em uma solução-base de Detergente Beromina (concentração de 0,5 g/l) que compreende a quantidade especificada de enzimas e que tem uma temperatura de 43 °C por um determinado período de tempo - tipicamente, 0, 15 ou 30 minutos.
[000381] Após encharcamento, um determinado ladrilho foi colocado na máquina de higienização por lavagem de louça manual (MDW) e higienizado por um número determinado de vezes - tipicamente, 12, 24 ou 32 vezes.
[000382] Após higienização, o azulejo foi gentilmente enxaguado sob água da torneira a correr durante 5 segundos e seco enquanto repousava horizontalmente à temperatura ambiente durante pelo menos 2 h.
[000383] Após a secagem, o valor de R460 no centro do ladrilho foi medido com o uso de um aparelho padrão Color Eye (Macbeth (EUA, U.K., Alemanha), Fornecedor: Largo, Modelo: 370).
Azulejos Sujos
[000384] Os ladrilhos sujos usados foram ladrilhos de melamina sujos padrões destinados para testar o pó de limpeza de detergentes de lavagem de louça, comercializado sob o nome de CFT Dishwash Monitors. Os ladrilhos são produzidos por Center For Testmaterials BV (Vlaardingen, Países-Baixos). Foram usados os seguintes ladrilhos identificados por número de produto: Torta de Framboesa DM-42 Trota de Carne Inglesa DM-03 Pudim de Chocolate DM-75
A máquina de higienização por MDW
[000385] A máquina de higienização por MDW usada foi testador de abrasão e capacidade de lavagem AB5000 (TQC Thermimport Quality Control, Capelle aan den IJssel, Países- Baixos) que consiste em um dispositivo mecânico eletrificado no qual uma esponja de cozinha normal para lavagem de louça foi montada em um braço de retenção. Em operação, o braço de retenção e, por conseguinte, a esponja foram movidos para frente e para trás sobre um ladrilho sujo de maneira uniforme reproduzível por um número determinado de vezes que foi definido com o uso de um contador incorporado na máquina de higienização. A máquina compreende adicionalmente uma ranhura em que um azulejo sujo plano, permutável (aproximadamente 10 cm * 12 cm * 0,5 cm) pode ser montado tal que possa interagir com a esponja no braço de suporte. Em uma determinada posição no ciclo de movimento do braço de retenção, a esponja entra em contato com a superfície do ladrilho sujo e é movido ao longo do ladrilho sujo de maneira reproduzível. A esponja exerce uma pressão constante no ladrilho sujo, o que lembra a maneira como uma pessoa poderia limpar uma determinada peça suja de um faqueiro durante um processo de lavagem manual de louça. Durante o processo de higienização, houve um fluxo de solução detergente com ou sem a composição de enzima no ladrilho sujo que é limpo. A taxa de fluxo foi 3 ml/min, e a dureza da água foi15 °dH (Ca2+:Mg2+:HCO3- = 4:1:7,5).
Enzimas
[000386] A alfa-amilase usada foi uma variante de alfa- amilase da SEQ ID NO: 14 que tem as seguintes modificações; H1* + N54S + V56T + K72R + G109A + F113Q + R116Q + W167F + Q172G + A174S + G182* + D183* + G184T + N195F + V206L + K391A + P473R + G476K , e a protease usada foi a protease da SEQ ID NO: 21 (Protease 2) usada nas dosagens indicadas nas tabelas abaixo.
RESULTADOS:
[000387] Os ladrilhos sujos usados foram Trota de Carne Inglesa DM-03 (Tabela 8), Iogurte de Framboesa DM-42 (Tabela 9), Pudim de Chocolate DM-75 (Tabela 10). Os níveis de enzima foram dosados além do detergente e se basearam na dose de detergente a 100%. O número de repetições para cada combinação estadas de variáveis foi dois. Remoção de sujidade avaliada pela medição de valores de remissão a 460 nm com o uso de um aparelho padrão Color Eye. Tabela 8: Efeito de amilase e protease na remoção de Trota de Carne Inglesa DM-03. Um valor de R460 de 4,95 +/- 0,14 é equivalente a "sem remoção de sujidade". Tabela 9: Efeito de amilase e protease na remoção de Iogurte de Framboesa DM-42. Um valor de R460 de 4,95 +/- 0,14 é equivalente a "sem remoção de sujidade". Tabela 10: Efeito de uma alfa-amilase e de uma variante de protease na remoção de Pudim de Chocolate DM-75. Um valor de R460 de 4,95 +/- 0,14 é equivalente a "sem remoção de sujidade". Exemplo 3: Combinação de alfa-amilase e protease em lavagem manual de louça (MDW)
[000389] As enzimas usadas no Exemplo 2 foram testadas em outro detergente e em outros ladrilhos também. Consequentemente, o método realizado foi idêntico àquele do Exemplo 2 com a expectativa de que a base de detergente fosse W5 (um detergente para lavagem de roupa de mão comprado comercialmente da Lidl, DK) em uma dosagem de detergente a 100% de 0,6 g/l, o ladrilho sujo testado foi somente o iogurte de framboesa DM-42, e o número de higienizações aplicadas foi 12 e 24.
RESULTADOS:
[000390] O ladrilho sujo usado foi o iogurte de framboesa DM-42 (Tabela 11). O detergente, a alfa-amilase e a protease usadas foram conforme descrito no Exemplo 2. Os níveis de enzima foram dosados além do detergente e se basearam na dose de detergente a 100%. O número de repetições para cada combinação estadas de variáveis foi dois. Remoção de sujidade avaliada pela medição de valores de remissão a 460 nm com o uso de um aparelho padrão Color Eye. Tabela 11: Efeito de uma alfa-amilase e de uma protease na remoção de Iogurte de Framboesa DM-42. Um valor de R460 de 4,95 +/- 0,14 é equivalente a "sem remoção de sujidade". Exemplo 4: Uso de amilase e protease em MDW
[000391] O experimento foi realizado, conforme descrito no Exemplo 2, com as seguintes especificações;
[000392] Detergente: base de lavagem manual de louça W5 (obtido junto à Lidl, Dinamarca)
[000393] 100% de dosagem de detergente: 5/l
[000394] Ladrilhos sujos: Macarrão à Bolonhesa DM-07, Mingau de Aveia com chocolate DM-54 e Queijo ao Forno DM-06
[000395] Número de higienizações aplicadas à sujidade: 12 e 32
[000396] Para o Queijo ao Forno DM-06, um peso de 75 g foi colocado na esponja na máquina
Resultados
[000397] Os resultados obtidos do experimento são mostrados nas Tabelas mostradas abaixo; sendo que a Tabela 12 mostra o efeito em Macarrão à Bolonhesa DM-07, a Tabela 13 mostra o efeito em Mingau de Aveia com chocolate DM-54 e a Tabela 14 mostra o efeito em Queijo ao Forno DM-06. Tabela 12: Amilase e protease efeito em Macarrão à Bolonhesa DM-07
[000398] O efeito sinérgico da combinação de amilase e protease mostrado é a diferença entre o "R460 Ajustado" e o "R460 Esperado", que é calculado como: (R460 Ajustado) - (R460 Esperado) = Sinergia => 56,65 - 45,16 = 11,49. Tabela 13: Efeito de amilase e protease em Mingau de Aveia com chocolate DM-54
[000399] O efeito sinérgico da combinação de amilase e protease mostrado é a diferença entre o "R460 Ajustado" e o "R460 Esperado", que é calculado como: (R460 Ajustado) - (R460 Esperado) = Sinergia => 26,53 - 8,49 = 18,04. Tabela 14: Efeito de amilase e protease em Queijo ao Forno DM-06
[000400] O efeito sinérgico da combinação de amilase e protease mostrado é a diferença entre o "R460 Ajustado" e o "R460 Esperado", que é calculado como: (R460 Ajustado) - (R460 Esperado) = Sinergia => 53,27 - 45,76 = 7,51. Exemplo 5: Alfa-amilase e protease em testes em Tergotômetro (TOM) de lavagem de roupa
[000401] A lavagem em TOM é um teste em pequena escala que simula Máquina de lavar roupas com "Carregamento Superior/Tambor Vertical". O TOM é usado principalmente para executar testes de lavagem de roupa usados, sob diferentes condições de lavagem. As enzimas a seguir (e combinações das mesmas) foram testadas; Tabela 15: Variantes de enzima testadas
[000402] Amostras de tecido sujas foram lavadas em um ambiente de TOM com um detergente com ou sem enzimas. Após lavagem, a remoção de sujidade das amostras de tecido foi determinada medindo-se remissão de luz pelo uso de do espectrofotômetro de remissões Macbeth Color-Eye 7000. Método
[000403] A soluções de lavagem foram preparadas ajustando-se a dureza da água a 14 °dH (CaCl2:MgCl2 = 3:2) pela adição de CaCl2 e MgCl2, adicionando-se a quantidade de detergente desejada (Modelo O em uma concentração de 2g/l) e ajustando-se a temperatura a 30 oC nos baldes. O detergente foi dissolvido durante agitação magnética por 15 minutos (solução de lavagem foi usada dentro de 30 a 60 minutos após preparação).
[000404] A temperatura e rotação no banho de água no TOM foram definidas como 30 oC e 120 rpm, respectivamente. Quando a temperatura foi ajustada, de acordo com as definições, 1.000 ml da solução de lavagem foram adicionados aos béqueres de TOM.
[000405] As amostras de tecido (mancha de leite com grãos Yili (uma mancha caseira que consiste em arroz vermelho, soja vermelha, amendoim, leite) e um molho marrom 025KC (obtenível junto ao Centro para Materiais de Teste BV (Vlaardingen, Países-Baixos)), uma enzima (0,188 mg EP/L Protease e 0,0104 mgEP/l ou 0,0208 mgEP/l amilase) e lastro (até 30 g) foram adicionados aos béqueres e lavados por 20 minutos. As amostras de tecido foram enxaguadas em água canalizada fria em um béquer de 5 l por 10 minutos (água corrente). As amostras de tecido foram classificadas, colocadas esticadas em um filtro de papel, com o lado frontal para cima, foram deixadas para secagem de um dia para o outro à temperatura ambiente.
Têxtil/amostras de tecido
[000406] As amostras têxteis (também denominadas de amostras de tecido no presente documento) 025KC (molho marrom) foram obtidas do Centro para Materiais de Teste BV, P.O. Box 120, 3133 KT Vlaardingen, Países-Baixos e amostras de tecido com leite com grãos Yili foram preparadas conforme estabelecido na Tabela 16: Tabela 16: Manha de leite com grãos Yilir
[000407] O leite com grãos Yili e a solução de negro de carbono solução foram misturados e agitados por 1 hora. A mistura de 600 ml foi carregada na amostra de tecido CN42 e deixado para secagem de um dia para o outro à temperatura ambiente.
[000408] O desempenho em lavagem foi medido como o brilho da cor do têxtil lavado expresso de valores de remissão (REM). As medições de remissão foram feitas com o uso de um espectrofotômetro de remissão Macbeth Color-Eye 7000. Cada uma das amostras de tecido secas foi medida. Devido ao risco de interferência do segundo plano, as amostras de tecido foram colocadas no topo de duas camadas do pano durante a medição da remissão. A remissão foi medida a 460 nm. O filtro de UV não está incluído. Os resultados são mostrados como remissão Delta na Tabela 17 e 18. Tabela 17: Resultados das lavagens na escala de TOM de manchas de leite com grãos Yili Tabela 18: Resultados da escala de TOM de malhas de molho marrom 025KC
[000409] As Tabelas 17 e 18 mostram a remissão delta medida para as enzimas individualmente, a remissão delta esperada e a remissão delta real. Conforme pode ser visto, o efeito sinérgico das combinações de amilase e protease mostrado é a diferença entre a "Remissão Delta Real" e a "Remissão Delta Esperada". Todas as observações sinérgicas em remissão delta são maiores do que as enzimas sozinhas.

Claims (15)

1. Composição detergente caracterizada por compreender: (i) pelo menos uma alfa-amilase com atividade de alfa- amilase, em que a sequência de aminoácidos da alfa-amilase consiste na SEQ ID NO: 1 compreendendo um conjunto de modificações selecionado a partir do grupo que consiste em: H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195 F+V206L+K391A+G476K; H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206 L+K391A+G476K; H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S +G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K; H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183 *+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K; H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182* +D183*+N195F+V206L+K391A+G476K; H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V +A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K; H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V +A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473 R+G476K; H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206 L+K391A+G476K; H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L +G255A+K391A+G476K; e H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+ N195F+V206L+K391A+G476K, e (ii) pelo menos uma protease que tem atividade de protease, em que a dita a sequência de aminoácidos da protease consiste na SEQ ID NO: 2.
2. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a dita composição detergente ser uma composição detergente líquida para lavagem de roupas, uma composição detergente em pó para lavagem de roupas, uma composição detergente líquida para lavagem de louça ou uma composição detergente em pó para lavagem de louça.
3. Uso da composição detergente, conforme definido em qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por ser em lavagem de roupas, lavagem manual de louça ou lavagem automática de louça.
4. Uso, de acordo com a reivindicação 3, sendo que o dito uso é caracterizado por ser em lavagem de roupas ou lavagem automática de louça a baixa temperatura, em que a temperatura é inferior a 60 °C.
5. Uso, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por a baixa temperatura ser inferior a 55 °C.
6. Uso, de acordo com a reivindicação 4 ou 5, caracterizado por a baixa temperatura ser inferior a 50 °C.
7. Uso, de acordo com as reivindicações 4 a 6, caracterizado por a baixa temperatura ser inferior a 45 °C.
8. Uso, de acordo com as reivindicações 4 a 7, caracterizado por a baixa temperatura ser inferior a 40 °C.
9. Uso, de acordo com as reivindicações 4 a 8, caracterizado por a baixa temperatura ser inferior a 35 °C.
10. Uso, de acordo com as reivindicações 4 a 9, caracterizado por a baixa temperatura ser inferior a 30 °C.
11. Uso, de acordo com as reivindicações 4 a 10, caracterizado por a baixa temperatura ser inferior a 25 °C.
12. Uso, de acordo com as reivindicações 4 a 11, caracterizado por a baixa temperatura ser inferior a 20 °C.
13. Uso, de acordo com as reivindicações 4 a 12, caracterizado por a baixa temperatura ser inferior a 15 °C.
14. Método para lavar roupas caracterizado por compreender lavar um pano com uma composição detergente, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1-2, preferencialmente a uma temperatura de 40°C ou menos, ou mais preferencialmente a uma temperatura de 30°C ou menos, ou ainda mais preferencialmente a uma temperatura de 20°C ou menos.
15. Método para lavar louça em uma máquina automática de lavar louça com o uso de uma composição detergente, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1-2, caracterizado por compreender as etapas de adicionar a dita composição detergente em um compartimento de composição detergente na dita máquina automática de lavar louça e liberar a dita composição detergente durante um ciclo de lavagem principal.
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