CN107750275A

CN107750275A - α‑淀粉酶变体以及编码它们的多核苷酸

Info

Publication number: CN107750275A
Application number: CN201680026191.6A
Authority: CN
Inventors: C.安德森; V.斯里瓦斯塔瓦; P.巴卢穆里; P.P.查克拉巴尔蒂; S.达拉尔
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 2015-05-08
Filing date: 2016-05-09
Publication date: 2018-03-02
Also published as: WO2016180749A1; US20180312785A1; US20190249119A1; EP3964575A3; AR105416A1; US10316275B2; US11365375B2; EP3294882B1; EP3964575A2; US12018237B2; EP3294882A1; US20220282188A1

Abstract

本发明涉及α‑淀粉酶变体。本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸；包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体、以及宿主细胞；以及使用这些变体的方法。

Description

α-淀粉酶变体以及编码它们的多核苷酸

对序列表的引用

本申请含有计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。

发明背景

技术领域

本发明涉及α-淀粉酶变体、编码这些变体的多核苷酸、产生这些变体的方法以及使用这些变体的方法。

背景技术

α-淀粉酶(α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，E.C.3.2.1)是通过切割内部α-1,4-糖苷键来水解淀粉、糖原和其他相关多糖的一组酶。多年来它一直用于例如衣物洗涤，其中熟知的是α-淀粉酶在去除含淀粉或基于淀粉的污渍中具有有益的效果。然而，在其他商业应用中，该酶已经变得重要，例如在淀粉加工的初始阶段(液化)中、在纺织品退浆中、在酒精生产中和作为洗涤剂组合物中的清洁剂。

近年来，希望改进各种淀粉酶的特性。具体而言，当提及家庭护理业时，主要关注降低衣物洗涤温度以便降低能量消耗的目的。因此，已经为寻求改进的α-淀粉酶变体做了很多努力。

无论如何，仍然需要具有改变的特性，并在各种工业应用中提供改进的性能的α-淀粉酶变体。因此，本发明提供了与其亲本相比具有改进特性的这种进一步改进的α-淀粉酶变体。

发明内容

本发明涉及具有α-淀粉酶活性的亲本多肽的α-淀粉酶变体，其中该变体是具有淀粉酶活性的α-淀粉酶的成熟形式，并且包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置；并且其中在该一个或多个位置处的取代提供α-淀粉酶变体，其针对稳定性的量度具有≥1.0的改进因子，和/或针对比活性的量度具有≥1.0的改进因子。

本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸；包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体、以及宿主细胞；以及产生这些变体的方法。

本发明还涉及改进亲本α-淀粉酶的洗涤性能和/或稳定性的方法。

附图说明

图1显示了在标准A洗涤剂中测试的根据本发明的变体的针对比活性的量度的改进因子(IF)。修饰的各个位置作为X轴给出，并且每个变体的特定IF在Y轴上给出。

图2显示了在标准X洗涤剂中测试的根据本发明的变体的针对比活性的量度的改进因子(IF)。修饰的各个位置作为X轴给出，并且每个变体的特定IF在Y轴上给出。

图3显示了在标准A洗涤剂中测试的根据本发明的变体的针对稳定性的量度的改进因子(IF)。修饰的各个位置作为X轴给出，并且每个变体的特定IF在Y轴上给出。

变体命名规则

出于本发明的目的，使用SEQ ID NO:3中阐明的成熟多肽来确定另一种α-淀粉酶中的相应氨基酸残基。将另一种α-淀粉酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:3中阐明的成熟多肽进行比对，并且基于该比对，使用如在EMBOSS包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件，Rice et al.,2000,Trends Genet.16:276-277[Rice等人，2000，遗传学趋势，16：276-277])(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔(Needle)程序中所实施的尼德尔曼-翁施(Needleman-Wunsch)算法(Needleman and Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443-453[Needleman和Wunsch，1970，分子生物学杂志，48：443-453])来确定与SEQ ID NO:3中阐明的成熟多肽中的任何氨基酸残基相对应的氨基酸位置编号。所使用的参数是空位开始罚分10、空位延伸罚分0.5、以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。

另一种α-淀粉酶中相对应的氨基酸残基的鉴别可以通过使用若干计算机程序(使用其对应的缺省参数)比对多个多肽序列来确定，这些计算机程序包括但不限于MUSCLE(通过对数期望值的多序列比较；3.5版或更新版本；Edgar,2004,Nucleic Acids Research32:1792-1797[Edgar，2004，核酸研究，32：1792-1797])；MAFFT(6.857版或更新版本；Katohand Kuma,2002,Nucleic Acids Research 30:3059-3066[Katoh和Kuma，2002，核酸研究，30：3059-3066]；Katoh et al.,2005,Nucleic Acids Research 33:511-518[Katoh等人，2005，核酸研究，33：511-518]；Katoh and Toh,2007,Bioinformatics 23:372-374[Katoh和Toh，2007，生物信息学，23：372-374]；Katoh et al.,2009,Methods in MolecularBiology 537:39-64[Katoh等人，2009，分子生物学方法，537：39-64]；Katoh and Toh,2010,Bioinformatics 26:1899-1900[Katoh和Toh，2010，生物信息学，26：1899-1900])；以及采用ClustalW的EMBOSS EMMA(1.83版或更新版本；Thompson et al.,1994,NucleicAcids Research 22:4673-4680[Thompson等人，1994，核酸研究，22：4673-4680])。

当其他酶与SEQ ID NO:3中阐明的成熟多肽相背离，这样使得传统的基于序列的比较方法不能检测其相互关系时(Lindahl and Elofsson,2000,J.Mol.Biol.295:613-615[Lindahl和Elofsson，2000，分子生物学杂志，295：613-615])，可使用其他成对序列比较算法。在基于序列的搜索中较高的敏感度可使用搜索程序来获得，这些搜索程序采用多肽家族的概率表现(谱图)来搜索数据库。例如，PSI-BLAST程序通过迭代数据库搜索过程来产生多个谱图，并且能够检测远距离同源物(Atschul et al.,1997,Nucleic Acids Res.25:3389-3402[Atschul等人，1997，核酸研究，25：3389-3402])。如果多肽的家族或超家族具有在蛋白结构数据库中的一个或多个代表，甚至可以实现更高的敏感度。程序如GenTHREADER(Jones,1999,J.Mol.Biol.287:797-815[Jones，1999，分子生物学杂志，287：797-815]；McGuffin and Jones,2003,Bioinformatics 19:874-881[McGuffin和Jones，2003，生物信息学，19：874-881])利用来自多种来源(PSI-BLAST、二级结构预测、结构比对谱以及溶剂化势)的信息作为预测查询序列的结构折叠的神经网络的输入。类似地，Gough et al.,2000,J.Mol.Biol.313:903-919[Gough等人，2000，分子生物学杂志，313：903-919]的方法可以用于比对未知结构的序列与存在于SCOP数据库中的超家族模型。这些比对进而可以用于产生多肽的同源性模型，并且使用出于该目的而开发的多种工具可以评定此类模型的准确度。

对于已知结构的蛋白质，若干工具和资源可用于检索并产生结构比对。例如，蛋白质的SCOP超家族已经在结构上进行比对，并且那些比对是可访问且可下载的。可以使用多种算法如距离比对矩阵(Holm and Sander,1998,Proteins 33:88-96[Holm和Sander，1998，蛋白质，33：88-96])或组合延伸(Shindyalov and Bourne,1998,ProteinEngineering 11:739-747[Shindyalov和Bourne，1998，蛋白质工程，11：739-747])比对两种或更多种蛋白质结构，并且这些算法的实施可以另外用于查询具有感兴趣结构的结构数据库，以便发现可能的结构同源物(例如，Holm and Park,2000,Bioinformatics 16:566-567[Holm和Park，2000，生物信息学，16：566-567])。

在描述本发明的变体中，以下所述的命名法适于方便参考。采用了已接受的IUPAC单字母和三字母的氨基酸缩写。

取代：对于氨基酸取代，使用以下命名法：初始氨基酸、位置、取代氨基酸。因此，在位置226处的苏氨酸被丙氨酸取代表示为“Thr226Ala”或者“T226A”。多个突变由加号(“+”)分开，例如，“Gly205Arg+Ser411Phe”或“G205R+S411F”分别代表在位置205和位置411处甘氨酸(G)被精氨酸(R)取代，并且丝氨酸(S)被苯丙氨酸(F)取代。

缺失：对于氨基酸缺失，使用以下命名法：初始氨基酸、位置、^*。因此，在位置195处的甘氨酸缺失表示为“Gly195*”或者“G195*”。多个缺失由加号(“+”)分开，例如“Gly195^*+Ser411^*”或“G195^*+S411^*”。

插入。对于氨基酸插入，使用以下命名法：初始氨基酸、位置、初始氨基酸、插入氨基酸。因此，在位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸表示为“Gly195GlyLys”或“G195GK”。将多个氨基酸的插入表示为[初始氨基酸、位置、初始氨基酸、插入氨基酸#1、插入氨基酸#2；等]。例如，在位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸和丙氨酸表示为“Glyl95GlyLysAla”或“G195GKA”。

在此类情况下，通过将小写字母添加至在所插入的一个或多个氨基酸残基之前的氨基酸残基的位置编号中来对所插入的一个或多个氨基酸残基进行编号。在以上实例中，该序列因此将是：

亲本：	变体：
		195	195 195a 195b
G	G-K-A

多种修饰：包括多种修饰的变体由加号(“+”)分开，例如“Arg170Tyr+Gly195Glu”或者“R170Y+G195E”代表在位置170和位置195处的精氨酸和甘氨酸分别被酪氨酸和谷氨酸取代。

不同修饰：可以在位置处引入不同的修饰时，这些不同的改变由逗号分开，例如“Arg170Tyr,Glu”代表在位置170处的精氨酸被酪氨酸或谷氨酸取代。因此，“Tyr167Gly,Ala+Arg170Gly,Ala”表示以下变体：“Tyr167Gly+Arg170Gly”、“Tyr167Gly+Arg170Ala”、“Tyr167Ala+Arg170Gly”、和“Tyr167Ala+Arg170Ala”。

具体实施方式

本发明涉及一组序列。为方便起见，将这些序列列于以下；

SEQ ID NO:1是成熟α-淀粉酶(AAI10)的核苷酸序列。

SEQ ID NO:2是包括信号肽在内(即全长)的AAI10的氨基酸序列。

SEQ ID NO:3是成熟AAI10的氨基酸序列。

SEQ ID NO:4是成熟AAI10的氨基酸序列，其包括在对应于SEQ ID NO:3的位置G182和D183的位置的双重缺失。

SEQ ID NO:5是PnMi4490正向引物。

SEQ ID NO:6是PnMi4491正向引物。

本发明的变体

在一方面，本发明涉及具有α-淀粉酶活性的亲本多肽的变体。因此，在具体方面，本发明涉及具有α-淀粉酶活性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，其中所述变体是具有淀粉酶活性的α-淀粉酶的成熟形式，并且包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置；并且其中在该一个或多个位置处的取代提供α-淀粉酶变体，其针对稳定性的量度具有≥1.0的改进因子，和/或针对比活性的量度具有≥1.0的改进因子。

已经显示，与亲本α-淀粉酶相比，根据本发明的包括单取代的变体具有改进的比活性和/或稳定性。

如在此使用的术语“淀粉酶”或“α-淀粉酶”是指能够催化淀粉降解的酶。通常，α-淀粉酶(E.C.3.2.1.1，α-D-(1->4)-葡聚糖葡聚糖水解酶)是以随机顺序切割淀粉分子内的α-D(1->4)O-糖苷键的内作用酶。

如在此使用的术语“淀粉”是指由植物的复杂多糖碳水化合物构成、由直链淀粉和支链淀粉构成的分子式为(C₆H₁₀O₅)_x(其中X可以是任何数字)的任何材料。具体而言，该术语是指基于植物的材料，例如大米、大麦、小麦、玉米、黑麦、马铃薯等。

如在此使用的术语“α-淀粉酶变体”是指具有α-淀粉酶活性的在一个或多个(例如若干个)位置包括修饰(即取代、插入和/或缺失)的多肽。取代意指用不同氨基酸置换占据某一位置的氨基酸；缺失意指去除占据某一位置的氨基酸；并且插入意指在邻接并且紧随占据某一位置的氨基酸之后添加氨基酸，全部如上所定义。本发明的变体具有至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％的如在SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的α-淀粉酶活性。本发明的α-淀粉酶变体包括与SEQID NO:2、3或4中任一项具有至少60％，例如至少65％、例如至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％、例如至少97％、例如至少99％，但小于100％的序列一致性的氨基酸序列。

如在此使用的术语“α-淀粉酶活性”或“淀粉酶活性”是指α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶(E.C.3.2.1.1)的活性，该水解酶构成一组催化淀粉以及其他直链和支链1,4-糖苷寡糖和多糖水解的酶。因此，如在此使用的术语“α-淀粉酶”是指具有α-淀粉酶活性的酶(酶类：EC 3.2.1.1)，其水解大的、经α键连接的多糖(如淀粉和糖原)的α键，产生葡萄糖和麦芽糖。术语“α-淀粉酶”和“淀粉酶”可以互换地使用并且构成本发明范围内的相同含义和目的。出于本发明的目的，根据实例中所述的程序测定α-淀粉酶活性。在一个实施例中，本发明的变体具有SEQ ID NO:3或4的多肽或SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％的α-淀粉酶活性。

如在此使用的术语“亲本α-淀粉酶”是指对其做出改变以产生酶变体的α-淀粉酶。例如，具有如在SEQ ID NO:2、3或4中阐明的氨基酸序列的α-淀粉酶可以是针对本发明的这些变体的亲本。与SEQ ID NO:2、3或4中任一项具有至少65％，例如至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％、例如至少97％、例如至少99％的序列一致性的任何多肽也可以是针对本发明的变体的亲本多肽，例如亲本α-淀粉酶。

亲本α-淀粉酶可以是融合多肽或可切割的融合多肽。此类融合多肽可由一个亲本多肽的子序列和第二亲本多肽的子序列组成。具体而言，融合多肽可由一种α-淀粉酶的A和B结构域以及另一种α-淀粉酶的C结构域组成，并且从而提供亲本多肽以产生本发明的变体。用于产生融合多肽的技术在本领域是已知的，并且包括连接编码多肽的编码序列，这样使得它们在框内并且使得融合多肽的表达处于相同的一个或多个启动子和终止子的控制下。也可以使用内含肽技术构建融合多肽，其中以翻译后方式产生融合多肽(Cooper etal.,1993,EMBO J.12:2575-2583[Cooper等人，1993，欧洲分子生物学学会杂志，12：2575-2583]；Dawson et al.,1994,Science 266:776-779[Dawson等人，1994，科学，266：776-779])。

如在此使用的术语“A结构域”、“B结构域”和“C结构域”是指三个不同的结构域A、B和C，均为α-淀粉酶结构的一部分，参见例如Machius et al.,1995,J.Mol.Biol.246:545-559[Machius等人，1995，分子生物学杂志，246：545-559]。因此，α-淀粉酶(例如亲本多肽和根据本发明的变体)可均包括A、B和C结构域。术语“结构域”意指本身形成完整分子的不同且独立的子结构的多肽区域。α-淀粉酶由携带活性位点残基的β/α-8桶状结构(其记为A结构域)、β-片层3和α-螺旋3之间相当长的环状结构(其记为B结构域)(一起；“A和B结构域”)和C结构域组成，并且在某些情况下还包含碳水化合物结合结构域(例如，WO 2005/001064；Machius等人，见上文)。

α-淀粉酶的结构域可以通过结构分析来确定，如使用结晶学技术。用于确定α-淀粉酶的结构域的可替代方法是通过该α-淀粉酶与另一个已经确定结构域的α-淀粉酶的氨基酸序列的序列比对。与例如已经确定了C-结构域的α-淀粉酶中的C-结构域序列对齐的序列可以视为给定α-淀粉酶的C结构域。

如在此使用的术语“A和B结构域”是指α-淀粉酶的视为一个单元的两个结构域，而C结构域是α-淀粉酶的另一个单元。因而，“A和B结构域”的氨基酸序列被理解为包括“A和B结构域”和其他结构域(如C结构域)的α-淀粉酶的序列的一个序列或序列的一部分。在一个实施例中，亲本α-淀粉酶的A和B结构域对应于如在SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的氨基酸1至397。

如在此使用的术语“C结构域”是指α-淀粉酶的作为一个单元的结构域。α-淀粉酶的“C结构域”对应于SEQ ID NO:3的氨基酸400至485。

融合多肽还可以包括在两种多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，该位点被切割，从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于以下文献中披露的位点：Martin et al.,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.3:568-576[Martin等人，2003，工业微生物学与生物技术杂志，3：568-576]；Svetina et al.,2000,J.Biotechnol.76:245-251[Svetina等人，2000，生物技术杂志，76：245-251]；Rasmussen-Wilson et al.,1997,Appl.Environ.Microbiol.63:3488-3493[Rasmussen-Wilson等人，1997，应用环境微生物学，63：3488-3493]；Ward et al.,1995,Biotechnology 13:498-503[Ward等人，1995，生物技术，13：498-503]；以及Contreras et al.,1991,Biotechnology 9:378-381[Contreras等人，1991，生物技术，9：378-381]；Eaton et al.,1986,Biochemistry 25:505-512[Eaton等人，1986，生物化学，25：505-512]；Collins-Racie et al.,1995,Biotechnology 13:982-987[Collins-Racie等人，1995，生物技术，13：982-987]；Carter et al.,1989,Proteins:Structure,Function,and Genetics 6:240-248[Carter等人，1989，蛋白质：结构、功能和遗传学，6：240-248]；以及Stevens,2003,Drug Discovery World 4:35-48[Stevens，2003，药物发现世界，4：35-48]。

该亲本多肽可以从任何属的微生物获得。出于本发明的目的，如在此结合给定的来源使用的术语“从...中获得”应意指由多核苷酸编码的亲本是由该来源或由其中已经插入来自该来源的多核苷酸的菌株产生的。

将理解的是，对于以上提到的物种，本发明涵盖完全状态和不完全状态(perfectand imperfect states)二者、以及其他分类学等效物，例如无性型，而不管它们已知的物种名称。本领域普通技术人员将容易地识别适当等效物的身份。

这些物种的菌株可以容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得，如美国典型培养物保藏中心(ATCC)、德国微生物菌种保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSMZ)、荷兰菌种保藏中心(CentraalbureauVoor Schimmelcultures，CBS)以及美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(NRRL)。

可以使用以上提到的探针从其他来源，包括从自然界(例如，土壤、堆肥、水等)分离的微生物或直接从自然材料(例如，土壤、堆肥、水等)获得的DNA样品鉴定和获得该亲本多肽。用于直接地从自然生活环境分离微生物和DNA的技术在本领域是熟知的。然后可通过在另一种微生物或混合DNA样本的基因组DNA或cDNA文库中类似地进行筛选来获得编码亲本多肽的多核苷酸。一旦用一种或多种探针检测到编码亲本多肽的多核苷酸，就可以通过使用本领域普通技术人员已知的技术分离或克隆该多核苷酸(参见例如，Sambrook等人，1989，见上文)。

在一个实施例中，该亲本α-淀粉酶包括SEQ ID NO:3或4中阐明的氨基酸序列或由其组成。在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶包括SEQ ID NO:2的成熟多肽或由其组成。具体而言，该亲本α-淀粉酶可以包括SEQ ID NO:2的氨基酸1至485或由其组成。

在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶是如在SEQ ID NO:3中阐明的、含有SEQ IDNO:3的至少350个如至少390个氨基酸残基(例如至少395个以及至少397个氨基酸残基)的片段。

在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶是SEQ ID NO:3的成熟多肽的等位基因变体。

如在此使用的术语“序列一致性”是指两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性。出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件，Rice et al.,2000,Trends Genet.16:276-277[Rice等人，2000，遗传学趋势，16:276-277])(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德尔曼-翁施算法(Needlemanand Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443-453[Needleman和Wunsch，1970，分子生物学杂志，48：443-453])来确定两个氨基酸序列之间的序列一致性。所使用的参数是空位开始罚分10、空位延伸罚分0.5、以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。将标记为“最长一致性”的尼德尔输出(使用-非简化(nobrief)选项获得)用作百分比一致性并且如下进行计算：

(一致的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)

出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件，Rice等人，2000，见上文)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德尔曼-翁施算法(Needleman和Wunsch，1970，见上文)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列一致性。所使用的参数是空位开放罚分10，空位延伸罚分0.5，以及EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版)取代矩阵。将标记为“最长一致性”的尼德尔输出(使用-非简化(nobrief)选项获得)用作百分比一致性并且如下进行计算：

(一致的脱氧核糖核苷酸x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)

如在此使用的术语“融合多肽”是指包括源自超过一种(例如两种、三种或四种)物种的氨基酸序列的多肽。此类融合多肽可通过本领域技术人员所熟知的分子技术产生。本发明的融合多肽具有α-淀粉酶活性。具体而言，本发明的融合多肽包括例如一种α-淀粉酶的A和B结构域，以及来自另一种α-淀粉酶的C结构域。

如在此使用的术语“成熟多肽”和“成熟氨基酸序列”是指在翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。还考虑在术语“成熟多肽”内的是多肽的信号肽已被切除，例如在表达多肽的细胞内的自然成熟过程期间。在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:3的氨基酸序列。本领域已知，宿主细胞可以产生由同一多核苷酸表达的两种或更多种不同成熟多肽(即，具有不同C-末端和/或N-末端氨基酸)的混合物。本领域还已知，不同的宿主细胞不同地加工多肽，并且因此一个表达多核苷酸的宿主细胞当与另一个表达相同多核苷酸的宿主细胞相比时可以产生不同的成熟多肽(例如，具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)。在一个实施例中，成熟多肽包括多达485个氨基酸残基(例如，SEQ ID NO:2的氨基酸1至485)。因此，在一个实施例中，该成熟多肽包括对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的高达486个氨基酸残基。

如在此使用的术语“改进因子”是指计算根据本发明的变体的具体特性的改进的定量方式。改进因子可以根据以下公式确定：

可以使用其他公式来确定改进因子。本领域技术人员知道目前提出的公式以及计算改进因子的替代方法。

根据本发明，1.0的值对应于针对亲本α-淀粉酶观察到的比活性。高于1.0的值指示与亲本α-淀粉酶相比所测试的变体的比活性的改进。因此，≥1.0的任何值指示与亲本α-淀粉酶相比该变体的特性(如比活性)的改进。

类似地，当测量变体在洗涤剂组合物中的稳定性(如热稳定性)时，可以使用术语改进因子。因此，术语改进因子也可以用作变体的稳定性的指标。根据本发明，1.0的值对应于针对亲本α-淀粉酶观察到的稳定性。高于1.0的值指示与亲本α-淀粉酶相比所测试的变体的稳定性的改进。因此，≥1.0的任何值指示与亲本α-淀粉酶相比该变体的稳定性的改进。

如在此使用的术语“稳定性的量度”是指酶稳定性的量度。这些稳定性的量度包括洗涤剂中的稳定性，螯合剂稳定性，pH稳定性，针对蛋白酶、氯化物和/或漂白的稳定性，和热稳定性。

如在此使用的术语“稳定性”是指给定变体的残余活性，其可以通过在优选包括螯合剂如EDTA、EGTA、DTPA、DTMPA、MGDA或HEDP的标准洗涤剂组合物中孵育该变体来确定。因此，残余活性具体涉及“螯合剂稳定性”，即该变体已显示在包括螯合剂的标准洗涤剂中孵育后具有给定的残余活性。例如，如实例部分所示，可以在包括最终浓度为0.1％的EDTA的标准A洗涤剂组合物中测试变体。然后可以在给定温度下给定的孵育时间段之后确定残余活性。例如，通过使用实例部分中描述的EnzCheck或Phadebas测定，可以确定残余活性。可以将给定时间和温度后测试变体的活性与在低温(例如4℃和0℃)下在相同洗涤剂组合物中孵育相同时间段的参照物的活性进行比较。在两种处理之间的差异越少，洗涤剂稳定性越高。可以使用其他含有螯合剂如DTMPA、柠檬酸钠和HEDP的洗涤剂进行类似的测试。类似地，可以按类似的方式测定表面活性剂稳定性。因此，本发明的变体可以优选地具有改进的针对表面活性剂如阴离子表面活性剂和LAS的稳定性，其中表面活性剂稳定性可以通过与上述相同的测定来确定。

如在此使用的术语“改进的储存稳定性”是指给定变体与亲本多肽相比的稳定性，其中在给定时间和温度下储存时测量残余活性。因此，与参照物(如亲本多肽)相比，存储条件下变体的稳定性得到改进。

在一个实施例中，该变体具有改进的热稳定性。

如在此使用的术语“改进的热稳定性”是指与亲本多肽相比，给定变体的稳定性得到改进，其中在升高的温度下孵育给定的时间段后确定稳定性。例如，升高的温度可以为如50℃或更高。

在一个实施例中，通过以下方法确定改进的稳定性，该方法包括以下步骤；

a)分别在标准洗涤剂组合物(如标准A、标准J、标准T、或标准X)中孵育α-淀粉酶变体样品和亲本α-淀粉酶样品一段时间；

b)分别测量变体α-淀粉酶和亲本多肽的活性；并且

c)计算样品的残余活性。

如果在标准粉末洗涤剂(如标准T或标准X)中确定稳定性，则稳定性可优选地通过在所述标准粉末洗涤剂的洗涤溶液中孵育来测量，例如将粉末溶于其中孵育所述变体的水中。

在另外的实施例中，通过以下方法确定改进的稳定性，该方法包括以下步骤；

a)分别在标准洗涤剂组合物(如标准A、标准J、标准T、或标准X)中，在40℃至60℃下孵育α-淀粉酶变体样品和亲本多肽样品2至168hr；

b)分别测量变体α-淀粉酶和亲本多肽的活性；并且

c)将样品的残余活性计算为相对于冷冻对照样品的活性平均值的样品中的活性平均值。

如在此使用的术语“比活性的量度”是指酶活性的量度。这些活性的量度包括在pH8.0、25℃下的洗涤性能和使用合成底物如Phadebas片剂(麦戈尔生命科学公司(MagleLife Sciences))的活性。

如在此使用的术语“比活性”是指在特定条件下每单位时间通过酶制剂转化成产物的底物的摩尔数。比活性表示为单位(U)/mg的蛋白。比活性可以如实例2中所述确定。

如在此使用的术语“洗涤性能”是指酶在例如衣物洗涤或硬表面清洁(如餐具洗涤)期间去除存在于待清洁的物体上的淀粉或含淀粉污渍的能力。术语“洗涤性能”包括通常清洁例如硬表面清洁，如在餐具洗涤中，但还包括在纺织品如衣物上的洗涤性能，并且还包括工业清洁和机构清洁。洗涤性能可以通过计算所谓的强度值来量化，并且可以将结果显示为“改进因子”(IF)。可以如在本文的实例中所述的来确定洗涤性能。

如在此使用的术语“强度值”是指如下洗涤性能，该性能可以被测量为亮度，表达为当用白光照亮时从样品反射的光的强度。当样品被染色时，反射光的强度低于干净样品的反射光强度。因此，反射光的强度可以用于测量洗涤性能，其中更高的强度值与更高的洗涤性能相关。

使用专业平板扫描仪(Kodak iQsmart，柯达(Kodak))进行颜色测量，该扫描仪用于捕获所洗涤纺织品的图像。

为了从扫描的图像中提取光强度值，将来自图像的24-位像素值转化为红、绿以及蓝(RGB)的值。通过将RGB值作为向量相加在一起并然后取所得向量的长度可以计算强度值(Int)：

如在此使用的术语“改进的洗涤性能”是指相对于亲本多肽的洗涤性能，本发明的α-淀粉酶在洗涤性能方面的改进。改进的洗涤性能可以通过比较所谓的强度值以及计算改进因子(IF)来进行测量。改进的洗涤性能是根据“使用自动机械应力测定的α-淀粉酶的洗涤性能”部分并且使用标准洗涤剂J在15℃下确定的。可以使用其他标准洗涤剂，例如标准洗涤剂A、标准洗涤剂X或标准洗涤剂T。

因此，在一个实施例中，通过以下方法确定改进的洗涤性能，该方法包括以下步骤；

a)分别添加α-淀粉酶变体和亲本多肽样品至标准洗涤剂组合物，如标准A、标准J、标准T、或标准X，用上述组合物洗涤淀粉染色的织物；

b)测量当用白光照射时从样品反射的光的强度；并且

c)任选地计算改进因子(IF)，其为α-淀粉酶样品的δ强度与亲本多肽样品的δ强度的比率。

在一个实施例中，通过以下方法确定改进的洗涤性能，该方法包括以下步骤：

a)分别添加α-淀粉酶变体和亲本多肽样品至标准洗涤剂组合物，如标准A、标准J、标准T、或标准X，在15℃和30℃下用上述组合物洗涤淀粉染色的织物20分钟；

b)测量当用白光照射时从样品反射的光的强度；并且

从实例4和图1-3中获得的数据可以看出，每个测试位置的命中均值显示，在其中一个位置具有修饰的许多变体针对至少一个测试条件具有至少1.0的IF，即标准A或标准X中的比活性、或稳定性。

如在此使用的术语“命中均值”是指针对每个测试条件，对于所有产生的具有大于1.0的IF的特定变体测量的改进因子的均值，即在标准A或标准X洗涤剂组合物中测试的比活性或这些变体的稳定性。因此，将针对特定位置中的每个单独变体的改进因子加起来并除以针对该特定位置的变体数目，并且从而提供命中均值。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的取代中的一个或多个，该组由以下各项组成：H1A、H1G、H1V、H1C、H1S、H1L、H2T、H2G、H2L、H2M、H2E、H2P、D3A、D3C、D3R、D3Y、D3W、D3S、D3F、G4D、G4Q、G4R、T5L、T5Q、T5E、T5V、T5G、T5F、T5W、G7F、G7E、G7V、G7D、G7R、G7A、G7L、G7S、G7N、T8A、T8S、I9C、I9M、I9L、M10L、Q11C、Q11L、Q11V、Q11M、Y12V、Y12A、Y12F、F13I、F13Y、E14M、E14L、E14S、E14Q、E14F 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G425V、L426S、L426A、A427V、A427S、T428L、T428N、T428A、T428G、I429V、I429A、M430R、M430L、M430A、M430T、S431A、S431T、S431F、D432Q、D432P、G435E、G435N、G435M、G435I、G435S、G436L、G436M、G436E、G436T、S437G、S437Q、S437L、K438T、W439C、W439H、W439E、W439A、W439R、W439T、W439N、W439T、W439R、W439N、M440L、Y441N、Y441H、Y441Q、Y441K、V442I、444A、R444S、R444L、R444P、R444V、Q445L、Q445S、Q445C、Q445E、Q445R、K446Q、K446G、K446T、K446P、A447G、A447Q、A447E、A447T、A447R、A447S、G448S、G448R、V450A、V450T、V450Q、V450R、W451L、H452A、H452T、H452C、H452G、H452Y、H452R、H452V、D453E、M454R、M454L、M454V、M454Q、M454S、T455L、T455S、G456V、G456R、G456Y、G456K、G456L、N457V、N457I、N457G、N457R、S459E、S459V、S459C、S459P、S459M、S459T、S459Q、S459R、G460S、G460D、G460E、T463C、T463V、T463L、T463D、T463H、T463M、T463A、T463Q、I464V、N465G、N465Q、N465L、N465R、Q466L、Q466C、Q466E、D467V、D467C、W469T、W469M、W469E、W469N、H471Q、F473Y、F473C、F473R、F473E、F473G、F473T、F473V、N475T、N475H、N475G、G476F、G476Y、G476K、G477Q、G477F、G477K、G477L、V481Q、V481S、以及W482F，其中编号是根据SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列，并且其中在该一个或多个位置处的取代提供如下变体，该变体针对稳定性的量度具有≥1.0的IF，和/或针对比活性的量度具有≥1.0的IF。

如在此使用的术语“对应于”是指用来确定序列中的特定氨基酸(其中参考了特定氨基酸序列)的方式。例如出于本发明的目的，当参考特定氨基酸位置时，本领域技术人员能够将另一个氨基酸序列与已经参考的所述氨基酸序列进行比对，以便在所述另一氨基酸序列中确定哪个特定氨基酸可能是感兴趣的。已经在本文其他地方描述了另一氨基酸序列与例如如在SEQ ID NO:3中阐明的序列或本文列出的任何其他序列的比对。可使用可替代的比对方法，并且这些方法为本领域技术人员所熟知。

在一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列具有至少85％，例如至少90％、例如至少95％、例如97％、例如至少98％的序列一致性。在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与SEQ ID NO:4中阐明的氨基酸序列具有至少85％，例如至少90％、例如至少95％、例如97％、例如至少98％的序列一致性。

在一个实施例中，该亲本α-淀粉酶由SEQ ID NO:3或4中阐明的氨基酸序列组成或包括该氨基酸序列。

本发明提供了此类亲本α-淀粉酶的变体。

因此，本发明的变体包括与SEQ ID NO:3和4中阐明的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、例如至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％、例如至少97％、例如至少98％、例如至少99％，但小于100％的序列一致性的氨基酸序列。

根据本发明的变体可以包括除取代之外的其他修饰，例如插入或缺失。这样的修饰也可以被称为“改变”。因此，如在此使用的术语“改变”是指多肽的氨基酸序列内的氨基酸的取代和缺失。术语“改变”和“修饰”可以在本文互换使用。这不应被理解为任何限制，并且因此，除非另有明确说明，否则这些术语构成相同的含义和目的。

在一个实施例中，该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、P18、N19、D20、Q22、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、L34、K35、N36、A37、I39、T40、A41、W43、I44、P45、P46、A47、W48、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、K82、A83、E84、L85、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、D112、F113、E115、R116、V117、A119、V120、E121、V122、N123、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、I137、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、R219、V222、W223、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、I241、K242、F245、M246、W249、L250、H252、R254、G255、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、Y267、W268、K269、N270、D271、G273、A274、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、N296、L297、Q299、A300、S301、S303、S304、G305、N306、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、A325、P336、G337、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、L357、T358、Q361、G362、Y363、Q365、V366、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、R400、H402、F405、D406、H407、W408、V410、T414、R415、E416、N418、A419、H421、G425、A427、T428、I429、M430、S431、G435、G436、S437、W439、M440、V442、R444、Q445、A447、G448、H452、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、N465、D467、W469、H471、F473、N475、G477、以及V481；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，该一个或多个取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.2的改进因子以及任选地针对稳定性的量度的≥1.0的改进因子。

在具体实施例中，该变体包括选自下组的取代中的一个或多个，该组由以下各项组成：H1V、H1G、H1S、H1C、H2T、H2L、H2M、H2E、H2P、H2G、D3A、G4Q、G4D、G4R、T5Q、T5G、T5E、T5V、G7F、G7V、G7E、G7E、G7D、G7R、T8S、I9M、I9L、Q11L、Q11V、Y12V、Y12A、Y12F、F13Y、F13I、E14L、E14M、E14S、W15G、W15S、W15F、N16G、N16Q、P18L、N19G、N19S、N19Y、N19T、N19V、D20R、Q22C、Q22A、Q22N、Q22S、Q22M、Q22T、Q22E、W24F、N25V、N25S、N25G、N25E、N25E、R26L、R26G、R26D、R26M、R26I、R26S、R26W、R26A、R26F、L27A、L27M、H28A、H28E、H28I、N29G、N29C、N29L N30S、N30H、N30L、N30T、N30E、A31S、A31V、Q32D、Q32G、Q32L、Q32A、L34F、L34Y、K35L、K35E、K35W、K35Q、N36R、N36Q、N36A、N36E、A37T、A37S、I39M、I39L、T40E、T40A、A41E、A41N、A41M、A41Q、A41D、W43R、I44T、P45A、P46G、W48G、W48L、W48C、W48I、W48M、W48P、W48Q、W48Y、W48F、G50P、G50S、G50N、T51S、T51G、T51P、T51L、T51C、S52M、S52V、S52I、S52L、Q53V、Q53L、Q53G、N54G、N54K、N54V、D55V、D55I、V56L、V56M、G59E、G59A、A60S、A60W、A60L、A60G、A60T、Y61F、L63V、L63P、L63I、L63H、L63K、Y64W、Y64S、Y64V、Y64I、Y64H、Y64M、Y64C、Y64R、Y64G、Y64L、Y64A、L66M、E68D、F69H、F69W、N70G、N70A、N70T、N70S、N70E、Q71N、Q71E、Q71D、Q71I、Q71V、K72Y、K72R、G73V、G73L、G73E、T74V、T74L、V75T、V75G、R76S、R76G、R76A、T77S、K78L、K78T、K78A、K82A、A83G、A83E、E84D、L85V、R87M、R87A、R87E、A88V、I89H、I89P、I89A、R90L、R90G、S91E、S91A、S91G、L92C、K93W、K93G、K93L、N95L N95W、N95C、N95E、N95S、N95G、G96Q、I97V、Q98C、Q98M Q98T、Q98V、Q98L、V99I、V99L、V99S、V99T、Y100V、Y100F、Y100W、V103G、H107Q、K108V、G109A、G109S、D112E、F113L、F113M、F113V、F113E、F113C、F113D、F113Y、E115A、R116N、R116L、R116I、R116D、R116T、R116G、R116E、R116S、R116C、R116V、R116Q、R116F、V117C、V117L、V117S、V117W、V117A、V117G、V117E、A119Y、V120D、V120L、E121P、E121G、E121V、E121M、E121D、V122E、V122P、V122I、N123G、N123A、N123E、N123W、N123T、N123P、Q125E、Q125T、N126E、N126G、N126A、R127G、R127S、R127C、R127W、R127L、R127V、R127F、R127Y、N128C、N128S、N128E、Q129L、Q129C、Q129E、E130C、V131L、V131E、S132A、S132H、S132P、S132C、S132E、S132D、S132N、G133S、G133T、G133L、G133V、G133I、G133E、G133A、G133DT134V、T134D、T134E、Y135L、Y135V、Y135S、Y135R、Y135T、Y135W、Y135K、Y135G、Y135P、Y135M、Y135D、Y135H、Y135F、Y135E、I137A、I137S、I137G、A139M、A139S、W140Y、W140S、W140AW140H、T141M、T141S、T141C、T141G、G142D、G142E、F143M、F143L、N144C、F145C、F145S、F145A、P146S、P146V、P146C、P146L、G147V、G147P、G147D、G147S、G147I、G147L、G147C、G149C、N150C、N150D、N150E、Q151T、Q151C、Q151L、S153C、F155H、F155T、F155L、K156Y、K156V、K156A、K156D、K156W、K156P、K156E、K156C、K156F、K156Q、K156L、K156S、K156G、W157L、R158M、R158A、R158G、R158Q、R158W、R158L、R158T、R158V、R158E、R158Y、R158S、W159N、W159G、W159T、W159C、W159E、W159D、W159S、W159H、Y160Q、Y160M、Y160T、Y160A、Y160S、Y160V、Y160G、Y160I、Y160L、Y160E、F162M、F162L、F162Y、F162I、D163K、D163A、D163R、D163L、G164S、G164T、G164C、T165L、T165M、T165S、T165G、T165I、D166T、D166N、D166S、W167Y、W167G、W167D、D168M、D168S、D168G、Q169A、Q169L、Q169E、S170A、S170V、R171F、R171S、R171K、R171V、R171A、Q172S、Q172L、Q172E、L173G、L173N、L173M、L173S、L173Y、L173V、L173I、A174G、A174V、N175L、N175V、N175I、N175G、R176E、R176W、R176G、R176M、I177L、I177S、I177G、Y178V、Y178R、Y178K、K179C、K179E、K179S、K179W、K179A、K179G、K179T、K179F、K179L、F180A、F180L、R181K、R181P、R181S、R181V、R181Q、R181E、R181A、R181G、G184L、G184R、G184V、G184D、K185A、K185D、K185N、K185V、K185G、A186C、A186S、A186D、W187G、D188Q、D188G、D188R、D188M、D188L、D188V、W189R、W189A、W189G、W189C、E190D、E190N、E190A、V191M、V191A、D192Q、D192S、T193K、T193V、T193C、T193P、T193S、E194D、E194L、E194Q、N195R、N195A、G196A、G196V、N197G、N197V、N197Y、N197C、N197D、Y198W、D199G、D199S、D199A、Y200W、Y200F、Y200C、Y200V、Y200T、Y200L、Y200A、Y200G、Y200S、M202T、Y203F、Y203G、Y203C、Y203I、Y203Q、Y203H、Y203T、Y203M、Y203S、Y203V、Y203W、Y203L、A204P、A204R、A204C、A204H、A204W、A204F、A204L、A204Y、A204D、A204G、D205C、V206H、V206Q、V206P、M208C、D209E、D209H、D209F、D209Y、D209S、D209M、D209V、H210V、H210A、H210W、H210L、H210G、H210D、H210E、H210N、P211G、P211W、P211C、E212F、E212M、E212D、E212G、E212I、V213W、I214P、N215D、N215V、N215C、L217C、L217P、L217T、L217G、L217S、R219H、R219W、R219S、R219I、R219A、R219M、R219T、R219E、R219Y、R219D、R219C、R219L、V222F、V222C、V222E、W223Y、A225K、N226Q、N226C、T227S、T227M、T227C、T227L、L228A、L228F、N229S、L230S、L230A、L230T、L230V、D231G、F233A、F233L、V238C、V238W、I241L、K242C、K242Y、K242P、K242W、K242G、K242L、K242R、K242S、K242E、K242A、K242Q、F245C、F245V、F245D、F245G、M246L、M246F、W249L、L250T、L250A、H252E、H252W、H252C、R254Q、R254S、G255E、G255L、T257V、G258V、G258C、G258I、G258L、G258P、K259V、K259Q、K259I、K259L、N260E、N260D、N260C、N260W、L261G、L261D、F262Q、F262L、F262E、F262R、F262P、F262V、A263L、A263C、Y267V、Y267L、W268V、K269L、K269W、N270D、N270A、N270M、D271V、D271C、G273W、G273R、G273V、A274S、A274D、A274E、Y278G、Y278S、L279V、L279G、L279Q、S280C、K281L、K281W、K281G、K281A、T282R、T282I、N283V、N283A、W284E、W284C、W284V、W284A、T285E、T285F、T285S、M286D、M286L、S287V、S287Q、S287T、S287E、S287P、S287L、S287W、S287C、A288L、A288Y、V291T、P292A、P292Q、P292R、P292L、L293E、L293T、L293G、H294G、H294A、Y295F、Y295N、N296A、N296Y、N296M、N296F、L297S、L297W、Q299I Q299S、Q299L、Q299R、A300V、S301R、S301Q、S303I、S303E、S304P、G305S、N306V、L312F、L312V、L313S、N314F、N314D、G315I、G315V、T316S、V318C、V318E、V318A、V318L、Q319L、Q319I、Q319A、R320L、R320V、R320C、H321E、H321V、H321C、H321T、P322E、P322C、A325V、A325S、P336M、P336E、P336D、P336R、P336L、G337T、G337C、G337M、G337V、E341C、E341D、E341I、S342G、S342T、S342A、V344S、V344L、Q345K、Q345C、Q345V、Q345I、Q345L、G346H、G346A、G346L、G346N、G346Q、G346V、G346R、W347L、F348Q、F348S、F348C、K349G、K349A、K349Y、K349L、K349S、P350L、350G、P350S、P350Q、L351M、L351S、A352S、A352C、L357C、L357T、L357S、T358V、T358F、T358S、Q361P、Q361R、Q361A、Q361E、Q361V、G362Y、G362R、G362C、G362N、G362M、G362V、Y363Q、Y363I、Y363A、Y363L、Q365D、V366A、Y368M、Y368T、Y368I、Y368L、Y368A、Y368S、Y368Q、Y368V、Y368H、G369K、G369S、G369A、G369E、G369R、G369I、D370A、D370T、Y372S、Y372I、Y372L、Y372G、G373C、G373S、I374Y、P375L、P375A、P375T、S376P、S376W、S376R、S376L、D377C、D377L、D377V、V379F、V379P、V379L、P380L、P380G、P380E、P380A、P380I、P380V、S381N、S381L、S381A、S381I、S381V、Y382I、Y382A、Y382E、Y382V、Y382L、R383G、R383S、R383P、Q384L、Q384H、Q384R、Q384Y、I386T、D387H、D387V、D387Q、D387L、P388G、P388T、P388M、P388W、P388V、L389S、L389H、L390I、L390G、K391Y、K391A、A392I、Q394S、Q394R、Q395N、Q395L、Q395E、Q395K、Q395R、Y396L、A397C、A397G、R400L、R400C、R400K、R400S、R400M、H402V、H402E、H402M、H402A、H402S、H402P、H402Y、H402L、F405C、F405V、F405I、F405P、F405W、F405G、D406E、H407C、H407D、W408R、W408P、W408C、W408Y、W408G、W408D、V410I、V410Q、T414V、T414A、R415F、R415L、E416C、E416V、N418L、N418A、N418C、N418M、N418G、A419E、A419C、A419M、H421V、H421C、H421A、H421R、G425A、A427V、T428G、I429V、I429A、M430R、S431A、G435E、G435N、G436M、G436E、G436L、G436T、S437Q、S437L、W439C、W439H、W439E、W439R、W439N、M440L、V442I、R444A、R444S、R444L、R444V、R444P、Q445L、Q445S、Q445C、Q445E、A447G、A447Q、A447E、A447T、G448S、H452A、H452T、M454R、M454L、M454V、T455S、G456V、G456R、G456Y、N457R、S459V、S459C、S459P、S459M、S459T、S459E、S459Q、G460S、G460D、G460E、T463D、T463H、N465Q、N465L、N465R、D467V、D467C、W469E、W469T、H471Q、F473Y、F473C、F473R、N475T、N475H、G476K、G477Q、G477F、G477K、G477L、V481Q、以及V481S，其中编号是根据SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列，并且其中该一个或多个取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的IF≥1.2以及任选地针对稳定性的量度的IF≥1.0。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H1V、H2T、G7F、G7V、G7E、G7E、G7D、I9M、I9L、Q11L、Q11V、W15G、W15S、N19G、N19S、Q22C、Q22A、W24F、N25V、R26L、H28E、N29G、N30S、A31S、L34Y、K35L、I39L、T40A、A41Q、I44T、W48C、W48I、W48Y、W48F、S52M、S52V、Q53V、Q53L、V56L、G59E、T74V、T74L、V75T、I89A、R90L、S91A、S91G、L92C、N95E、N95S、N95G、I97V、Q98V、Q98L、Y100W、K108V、F113M、F113V、F113E、F113Y、R116Q、V117G、N126G、N126A、N128S、N128E、Q129E、G133A、G133D、A139S、W140H、T141S、T141C、T141G、F143M、F143L、F145A、P146L、Q151L、K156F、K156Q、K156L、K156S、K156G、R158S、T165I、D166S、Q169L、S170A、S170V、R171A、Q172L、Q172E、L173I、A174V、N175G、K179L、R181A、R181G、K185G、A186S、A186D、T193S、Y203W、Y203L、D209S、D209M、D209V、H210N、E212G、E212I、V213W、N215C、L217S、R219L、V222E、N226C、T227L、L228F、K242A、F245G、H252C、T257V、G258P、K259L、N260W、K269W、L279Q、K281A、M286L、P292L、L293T、L293G、Y295F、L297W、Q299S、Q299L、Q299R、N306V、L312F、L312V、G315V、T316S、V318L、R320V、R320C、H321T、P336L、G337V、S342A、V344L、Q345L、G346R、W347L、P350S、P350Q、Q361V、Y363L、Y368H、I374Y、S376R、S376L、V379L、P380V、S381V、S381N、D387Q、D387L、A392I、Q395E、Q395K、Q395R、H402L、F405G、T414A、E416V、N418M、N418G、A419M、S431A、G435N、W439E、W439R、W439N、G456Y、S459E、S459Q、N465L、N465R、以及D467C，其中编号是根据SEQID NO:3中阐明的氨基酸序列，并且其中该一个或多个取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的IF≥1.2以及针对稳定性的量度的IF≥1.0。

在一个实施例中，该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、G4、T5、G7、Q11、F13、E14、W15、N16、P18、N19、D20、Q22、N25、R26、N29、N30、A31、Q32、L34、A41、P46、W48、G50、T51、S52、Q53、D55、V56、G59、A60、Y61、Y64、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、K82、A83、R87、I89、R90、S91、L92、K93、N95、Q98、V99、Y100、H107、K108、G109、D112、F113、E115、R116、V117、A119、V120、E121、V122、N123、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、I137、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、V191、T193、E194、N197、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、D209、H210、P211、E212、N215、L217、R219、W223、N226、V238、I241、K242、F245、G258、K259、N260、F262、A263、K269、N270、D271、G273、A274、Y278、L279、K281、W284、T285、S287、P292、N296、L297、Q299、S301、N306、L312、G315、V318、Q319、R320、H321、P322、A325、P336、G337、E341、S342、V344、G346、F348、K349、P350、L351、Q361、G362、Y363、Y368、G369、D370、Y372、G373、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、Q384、D387、Q394、Q395、A397、R400、H402、H407、W408、V410、R415、N418、H421、S431、G435、G436、W439、M440、Q445、A447、M454、G456、N465、D467、N475、G477、以及V481，其中这些位置对应于SEQID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，该一个或多个取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.4的改进因子以及任选地针对稳定性的量度的≥1.0的改进因子。

在具体实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H1V、H1G、H1S、H1C、H2E、H2P、H2G、G4D、G4R、T5E、T5V、G7F、G7V、G7E、G7E、G7D、G7R、Q11V、F13Y、F13I、E14L、E14M、E14S、W15G、W15S、W15F、N16G、N16Q、P18L、N19G、N19S、N19Y、N19T、N19V、D20R、Q22C、Q22A、Q22S、Q22M、Q22T、Q22E、N25V、N25S、N25G、N25E、N25E、R26L、R26G、R26D、R26M、R26I、R26S、R26W、R26A、R26F、N29G、N29L、N30L、N30T、N30E、A31S、A31V、Q32D、Q32G、Q32L、Q32A、L34Y、A41Q、A41D、P46G、W48C、W48I、W48M、W48P、W48Q、W48Y、G50P、G50S、G50N、T51G、T51P、T51L、T51C、S52M、S52V、S52I、S52L、Q53V、Q53L、Q53G、D55V、D55I、V56L、V56M、G59E、G59A、A60S、A60W、A60L、A60G、A60T Y61F、Y64W、Y64S、Y64V、Y64I、Y64H、Y64M、Y64C、Y64R、Y64G、Y64L、Y64A、F69W、N70G、N70A、N70T、N70S、N70E、Q71N、Q71E、Q71D、Q71I、Q71V、K72Y、K72R、G73V、G73L、G73E、T74V、T74L、V75G、R76G、R76A、T77S、K78L、K78T、K78A、K82A、A83E、R87A、R87E、I89H、I89P、I89A、R90L、R90G、S91E、S91A、S91G、L92C、K93W、K93G、K93L、N95W、N95C、N95E、N95S、N95G、Q98C、Q98M、Q98T、Q98L、V99S、V99T、Y100V、Y100F、Y100W、H107Q、K108V、G109A、G109S、D112E、F113L、F113M、F113V、F113E、F113C、F113D、E115A、R116N、R116L、R116I、R116D、R116T、R116G、R116E、R116S、R116C、R116V、R116Q、R116F、V117C、V117L、V117S、V117W、V117A、V117G、V117E、A119Y、V120L、E121P、E121G、E121V、E121M、E121D、V122E、V122P、V122I、N123A、N123E、N123W、N123T、N123P、N126E、N126G、N126A、R127G、R127S、R127C、R127W、R127L、R127V、R127F、R127Y、N128C、N128S、N128E、Q129C、Q129E、E130C、V131L、V131E、S132A、S132H、S132P、S132C、S132E、S132D、G133V、G133I、G133E、G133A、G133D、T134V、T134D、T134E、Y135L、Y135V、Y135S、Y135R、Y135T、Y135W、Y135K、Y135G、Y135P、Y135M、Y135D、Y135E、I137A、I137S、I137G、A139M、A139S、W140Y、W140S、W140A、W140H、T141M、T141S、T141C、T141G、G142D、G142E、F143M、F143L、N144C、F145C、F145S、F145A、P146S、P146V、P146C、P146L、G147V、G147P、G147D、G147S、G147I、G147L、G147C、G149C、N150C、N150D、N150E、Q151T、Q151C、Q151L、S153C、F155H、F155T、F155L、K156Y、K156V、K156A、K156D、K156W、K156P、K156E、K156C、K156F、K156Q、K156L、K156S、K156G、W157L、R158M、R158A、R158G、R158Q、R158W、R158L、R158T、R158V、R158E、R158Y、R158S、W159N、W159G、W159T、W159C、W159E、W159D、Y160Q、Y160M、Y160T、Y160A、Y160S、Y160V、Y160G、Y160I、Y160L、Y160E、F162I、D163K、D163A、D163R、D163L、G164S、G164T、G164C、T165L、T165M、T165S、T165G、T165I、D166T、D166N、D166S、W167Y、W167G、W167D、D168G、Q169A、Q169L、S170A、S170V、R171F、R171S、R171K、R171V、R171A、Q172S、Q172E、L173G、L173N、L173M、L173S、L173Y、L173V、L173I、A174G、A174V、N175V、N175I、N175G、R176E、R176W、R176G、R176M、I177L、I177S、I177G、Y178V、Y178R、Y178K、K179C、K179E、K179S、K179W、K179A、K179G、K179T、K179F、K179L、F180L、R181K、R181P、R181S、R181V、R181Q、R181E、R181A、R181G、G184R、G184V、K185A、K185D、K185N、K185V、K185G、A186C、A186S、A186D、W187G、D188Q、D188G、D188R、D188M、D188L、D188V、W189R、W189A、W189G、W189C、V191M、V191A、T193C、T193P、E194Q、N197C、N197D、D199G、D199S、D199A、Y200W、Y200F、Y200C、Y200V、Y200T、Y200L、Y200A、Y200G、Y200S、M202T、Y203F、Y203G、Y203C、Y203I、Y203Q、Y203H、Y203T、Y203M、Y203S、Y203V、Y203W、Y203L、A204P、A204R、A204C、A204H、A204W、A204F、A204L、A204Y、A204D、A204G、D205C、V206P、D209V、H210V、H210A、H210W、H210L、H210G、H210D、H210E、P211C、E212M、E212D、E212I、N215D、N215V、N215C、L217P、L217T、L217G、L217S、R219H、R219W、R219S、R219I、R219A、R219M、R219T、R219E、R219Y、R219D、R219C、R219L、W223Y、N226Q、L230V、V238C、V238W、I241L、K242C、K242Y、K242P、K242W、K242G、K242L、K242R、K242S、K242E、K242A、K242Q、F245C、F245V、F245D、F245G、G258L、K259I、N260D、N260C、F262Q、F262L、F262E、F262R、F262P、F262V、A263L、A263C、K269L、K269W、N270D、N270A、N270M、D271C、G273V、A274S、A274D、A274E、Y278S、L279G、K281G、W284V、W284A、T285F、T285S、S287V、S287Q、S287T、S287E、S287P、S287L、S287W、S287C、P292R、N296Y、N296M、N296F、L297W、Q299I、S301Q、N306V、L312F、L312V、G315V、V318E、V318A、Q319A、R320C、H321E、H321V、H321C、P322E、P322C、A325V、A325S、P336E、P336D、P336R、P336L、G337M、G337V、E341D、E341I、S342A、V344L、G346V、F348Q、F348S、F348C、K349G、K349A、K349Y、K349L、K349S、P350L、P350G、P350S、P350Q、L351S、Q361A、Q361E、G362Y、G362R、G362C、G362N、G362M、G362V、Y363Q、Y363I、Y363A、Y368I、Y368L、Y368A、Y368S、Y368Q、Y368V、Y368H、G369K、G369S、G369A、G369E、G369R、G369I、D370T、Y372L、Y372G、G373S、S376L、D377L、D377V、V379P、P380I、S381L、S381A、S381I、S381V、Y382A、Y382E、Y382V、Y382L、Q384R、Q384Y、D387V、D387Q、D387L、Q394S、Q394R、Q395R、A397G、R400L、R400C、R400K、R400S、R400M、H402S、H402P、H402Y、H407D、W408R、W408P、W408C、W408Y、W408G、W408D、V410Q、R415F、R415L、N418A、N418C、N418M、N418G、H421C、H421A、H421R、S431A、G435E、G435N、G436T、W439R、W439N、M440L、R444V、R444P、Q445C、Q445E、A447E、A447T、M454V、G456R、S459T、N465Q、N465L、N465R、D467V、N475H、G477Q、G477F、G477K、G477L、以及V481S，其中编号是根据SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列，并且其中该一个或多个取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的IF≥1.4以及任选地针对稳定性的量度的IF≥1.0。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H1V、G7F、G7V、G7E、G7E、G7D、Q11V、W15G、W15S、N19G、N19S、Q22C、Q22A、N25V、R26L、N29G、A31S、L34Y、A41Q、W48C、W48I、W48Y、S52M、S52V、Q53V、Q53L、V56L、G59E、T74V、T74L、I89A、R90L、S91A、S91G、L92C、N95E、N95S、N95G、Q98L、Y100W、K108V、F113M、F113V、F113E、R116Q、V117G、N126G、N126A、N128S、N128E、Q129E、G133A、G133D、A139S、W140H、T141S、T141C、T141G、F143M、F143L、F145A、P146L、Q151L、K156F、K156Q、K156L、K156S、K156G、R158S、T165I、D166S、Q169L、S170A、S170V、R171A、Q172E、L173I、A174V、N175G、K179L、R181A、R181G、K185G、A186S、A186D、Y203W、Y203L、D209V、E212I、N215C、L217S、R219L、K242A、F245G、K269W、L297W、N306V、L312F、L312V、G315V、R320C、P336L、G337V、W439R、W439N、S342A、V344L、P350S、P350Q、Y368H、S376L、S381V、D387Q、D387L、Q395R、N418M、N418G、S431A、G435N、N465L、以及N465R，其中编号是根据SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列，并且其中该一个或多个取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的IF≥1.4以及针对稳定性的量度的IF≥1.0。

在一个实施例中，该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、G7、F13、E14、W15、N16、N19、D20、Q22、R26、N29、N30、A31、Q32、P46、W48、G50、T51、S52、Q53、D55、G59、A60、Y64、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、K78、R90、Y100、H107、K108、G109、D112、F113、R116、V117、A119、E121、N123、N126、R127、N128、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、I137、A139、W140、T141、G142、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、F155、K156、R158、W159、Y160、D163、G164、T165、D166、W167、S170、R171、Q172、L173、R176、Y178、K179、R181、K185、A186、W187、D188、W189、V191、E194、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、H210、N215、L217、R219、W223、V238、K242、F245、G258、F262、K269、N270、A274、T285、S287、N296、L312、V318、H321、P322、A325、G337、E341、S342、K349、P350、Q361、G362、Y368、G369、D377、S381、Q384、D387、R400、W408、R415、N418、G435、Q445、M454、G477、以及V481，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，该一个或多个取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.6的改进因子以及任选地针对稳定性的量度的≥1.0的改进因子。

在具体实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H1C、G7V、G7E、G7E、G7D、F13I、E14L、E14M、E14S、W15S、W15F、N16Q、N19G、N19S、N19V、D20R、Q22A、R26L、R26W、R26A、R26F、N29G、N29L、N30E、A31S、Q32L、Q32A、P46G、W48Y、G50N、T51G、T51P、T51L、T51C、S52V、S52I、S52L、Q53V、Q53L、D55V、D55I、G59A、A60L、A60G、Y64V、Y64I、Y64H、Y64M、Y64C、Y64R、Y64G、Y64L、Y64A、N70S、N70E、Q71I、Q71V、K72R、G73L、G73E、T74V、T74L、V75G、K78T、K78A、R90L、R90G、Y100F、H107Q、K108V、G109A、G109S、D112E、F113E、F113C、F113D、R116I、R116D、R116T、R116G、R116E、R116S、R116C、R116V、R116Q、R116F、V117S、V117W、V117A、V117G、V117E、A119Y、E121G、E121V、E121M、E121D、N123P、N126G、N126A、R127C、R127W、R127L、R127V、R127F、R127Y、N128C、N128E、E130C、V131E、S132H、S132P、S132C、S132E、S132D、G133E、G133D、T134D、T134E、Y135T、Y135W、Y135K、Y135G、Y135P、Y135M、Y135D、I137S、I137G、A139S、W140Y、W140S、W140A、W140H、T141C、T141G、G142E、N144C、F145S、F145A、P146C、P146L、G147I、G147L、G147C、G149C、N150D、N150EQ151T、Q151C、Q151L、F155L、K156V、K156A、K156D、K156W、K156P、K156E、K156C、K156F、K156Q、K156L、K156S、K156G、R158A、R158G、R158Q、R158W、R158L、R158T、R158V、R158E、R158Y、R158S、W159G、W159T、W159C、W159E、W159D、Y160S、Y160V、Y160G、Y160I、Y160L、Y160E、D163L、G164T、G164C、T165G、T165I、D166T、D166N、D166S、W167D、Q169A、Q169L、S170V、R171V、R171A、Q172S、L173V、R176M、Y178R、Y178K、K179C、K179E、K179S、K179W、K179A、K179G、K179T、K179F、R181V、R181Q、R181E、R181G、K185A、K185D、K185N、K185V、K185G、A186D、W187G、D188M、D188L、D188V、W189R、W189A、W189G、W189C、V191M、V191A、E194Q、D199S、D199A、Y200W、Y200F、Y200C、Y200V、Y200T、Y200L、Y200A、Y200G、Y200S、M202T、Y203I、Y203Q、Y203H、Y203T、Y203M、Y203S、Y203V、Y203W、Y203L、A204H、A204W、A204F、A204L、A204Y、A204D、A204G、D205C、H210W、H210L、H210G、H210D、H210E、N215D、N215V、N215C、L217S、R219Y、R219D、R219C、W223Y、V238C、V238W、K242W、K242G、K242L、K242R、K242S、K242E、K242Q、F245C、F245V、F245D、F245G、G258L、F262E、F262R、F262P、F262V、K269L、N270D、N270A、N270M、A274S、A274D、A274E、T285F、T285S、S287W、S287C、N296M、N296F、L312F、L312V、V318A、H321V、H321C、P322C、A325S、G337M、G337V、E341I、S342A、K349A、K349Y、K349L、K349S、P350G、P350Q、Q361E、G362R、G362C、G362N、G362M、G362V、Y368L、Y368A、Y368S、Y368Q、Y368V、G369K、G369S、G369A、G369E、G369R、G369I、D377V、S381L、S381A、S381I、Q384R、Q384Y、D387L、R400M、W408Y、W408G、W408D、R415L、N418G、G435E、G435N、Q445E、M454V、G477Q、G477F、G477K、G477L、以及V481S，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，并且其中该一个或多个取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的IF≥1.6以及任选地针对稳定性的量度的IF≥1.0。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：G7V、G7E、G7E、G7D、W15S、N19G、N19S、Q22A、R26L、N29G、A31S、W48Y、S52V、Q53V、Q53L、T74V、T74L、R90L、K108V、F113E、R116Q、V117G、N126G、N126A、N128E、G133D、A139S、W140H、T141C、T141G、F145A、P146L、Q151L、K156F、K156Q、K156L、K156S、K156G、R158S、T165I、D166S、Q169L、S170V、R171A、R181G K185G、A186D、Y203W、Y203L N215C、L217S、F245G、L312F、L312V、G337V、S342A、P350Q、D387L、N418G、以及G435N，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，并且其中该一个或多个取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的IF≥1.6以及针对稳定性的量度的IF≥1.0。

在另一个实施例中，该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、P18、N19、Q22、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、D112、F113、E115、R116、V117、A119、V120、E121、V122、N123、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、I241、K242、F245、M246、W249、L250、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、G273、A274、E276、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、A325、V326、T327、V329、N331、P336、G337、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、R400、H402、D403、F405、D406、H407、W408、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、S424、G425、A427、T428、I429、M430、S431、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482，其中这些位置对应于如在SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，并且其中该一个或多个取代提供针对在标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.2的IF以及任选地针对稳定性的量度的≥1.0的IF。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H1V、H1G、H1S、H1C、H2L、H2T、H2M、H2E、H2P、H2G、D3C、D3A、G4Q、G4D、T5L、T5Q、T5G、T5E、T5V、G7F、G7R、G7V、G7E、G7E、G7D、T8A、T8S、I9C、I9M、I9L、M10L、Q11C、Q11L、Q11V、Y12V、Y12A、Y12F、F13Y、F13I、E14L、E14M、E14S、W15G、W15F、W15S、N16G、N16Q、P18L、N19Y、N19T、N19G、N19S、N19V、Q22N、Q22C、Q22S、Q22M、Q22T、Q22E、Q22A、W24H、W24F、N25V、N25S、N25G、N25E、N25E、R26G、R26D、R26M、R26I、R26S、R26L、R26W、R26A、R26F、L27A、L27M、H28A、H28E、H28I、N29C、N29G、N29L、N30S、N30H、N30L、N30T、N30E、A31W、A31V、A31S、Q32D、Q32G、Q32L、Q32A、N33F、N33A、N33R、L34F、L34Y、K35L、K35E、K35W、K35Q、N36R、N36Q、N36A、N36E、A37R、A37G、A37T、A37S、G38N、I39L、I39M、T40Q、T40D、T40A、T40E、A41E、A41N、A41M、A41Q、A41D、I42V、I42A、W43R、I44T、P45A、P46G、A47S、A47G、W48G、W48L、W48C、W48I、W48M、W48P、W48Q、W48Y、W48F、G50P、G50S、G50N、T51S、T51G、T51P、T51L、T51C、S52M、S52V、S52I、S52L、Q53G、Q53V、Q53L、N54G、N54K、N54V、D55V、D55I、V56L、V56M、G59E、G59A、A60S、A60W、A60L、A60G、A60T、Y61F、L63V、L63P、L63I、L63H、L63K、Y64W、Y64S、Y64V、、Y64I、Y64H、Y64M、Y64C、Y64R、Y64G、Y64L、Y64A、L66M、E68D、F69H、F69W、N70G、N70A、N70T、N70S、N70E、Q71N、Q71E、Q71D、Q71I、Q71V、K72Y、K72R、G73V、G73L、G73E、T74V、T74L、V75T、V75G、R76S、R76G、R76A、T77A、T77S、K78L、K78T、K78A、T81G、T81W、、T81L、K82A、A83G、A83E、E84F、E84D、L85V、E86L、E86D、R87M、R87A、R87E、A88S、A88G、A88V、I89A、I89H、I89P、R90L、R90G、S91A、S91E、S91G、L92C、K93W、K93G、K93L、N95L、N95E、N95W、N95C、N95S、N95G、G96Q、I97M、I97V、Q98V、Q98L、Q98C、Q98M、Q98T、V99I、V99L、V99S、V99T、Y100W、Y100V、Y100F、V103G、H107Q、K108V、G109A、G109S、D112E、F113M、F113V、F113L、F113C、F113E、F113D、F113Y、E115C、E115A、R116N、R116L、R116I、R116Q、R116D、R116T、R116G、R116E、R116S、R116C、R116V、R116F、V117C、V117L、V117S、V117W、V117A、V117G、V117E、A119Y、V120I、V120D、V120L、E121P、E121G、E121V、E121M、E121D、V122E、V122P、V122I、N123G、N123A、N123E、N123W、N123T、N123P、Q125E、Q125T、N126E、N126G、N126A、R127G、R127S、R127C、R127W、R127L、R127V、R127F、R127Y、N128S、N128E、N128C、Q129L、Q129C、Q129E、E130C、V131L、V131E、S132A、S132H、S132P、S132C、S132E、S132D、A132N、G133S、G133T、G133L、G133A、G133V、G133I、G133E、G133D、T134V、T134D、T134E、Y135L、Y135V、Y135S、Y135R、Y135T、Y135W、Y135K、Y135G、Y135P、Y135M、Y135D、Y135H、Y135E、Y135E、I137A、I137S、I137G、E138A、A139M、A139S、W140Y、W140S、W140H、W140A、T141S、T141M、T141C、T141G、G142D、G142E、F143M、F143L、N144C、F145C、F145S、F145A、P146S、P146V、P146L、P146C、G147V、G147P、G147D、G147S、G147I、G147L、G147C、G149C、N150C、N150D、N150E、Q151L、Q151T、Q151C、S153C、F155H、F155T、F155L、K156Y、K156V、K156A、K156F、K156D、K156Q、K156L、K156S、K156W、K156P、K156E、K156C、K156G、W157L、R158M、R158A、R158G、R158Q、R158S、R158W、R158L、R158T、R158V、R158E、R158Y、W159N、W159G、W159T、W159C、W159E、W159D、W159H、Y160Q、Y160M、Y160T、Y160A、Y160S、Y160V、Y160G、Y160I、Y160L、Y160E、H161C、H161N、F162M、F162L、F162Y、F162I、D163S、D163K、D163A、D163R、D163L、G164S、G164T、G164C、T165L、T165M、T165S、T165G、T165I、D166T、D166S、D166N、W167Y、W167G、W167D、D168M、D168S、D168G、Q169L、S170A、S170V、R171F、R171S、R171K、R171A、R171V、Q172L、Q172E、Q172S、L173I、L173G、L173N、L173M、L173S、L173Y、L173V、A174V、A174G、N175L、N175V、N175I、N175G、R176E、R176W、R176G、R176M、I177L、I177S、I177G、Y178V、Y178R、Y178K、K179L、K179C、K179E、K179S、K179W、K179A、K179G、K179T、K179F、F180A、F180L、R181K、R181P、R181S、R181A、R181V、R181Q、R181G、R181E、G184L、G184R、G184V、G184D、K185A、K185D、K185N、K185G、K185V、A186S、A186C、A186D、W187G、D188Q、D188G、D188R、D188M、D188L、D188V、W189R、W189A、W189G、W189C、E190D、E190N、E190A、V191M、V191A、D192E、D192Q、D192S、T193S、T193K、T193V、T193C、T193P、E194S、E194D、E194L、E194Q、N195R、N195A、G196A、G196V、N197G、N197V、N197Y、N197C、N197D、Y198W、D199G、D199S、D199A、Y200W、Y200F、Y200C、Y200V、Y200T、Y200L、Y200A、Y200G、Y200S、M202T、Y203F、Y203G、Y203C、Y203I、Y203Q、Y203H、Y203W、Y203T、Y203L、Y203M、Y203S、Y203V、A204P、A204R、A204C、A204H、A204W、A204F、A204L、A204Y、A204D、A204G、D205C、V206H、V206Q、V206P、M208R、M208P、M208L、M208C、D209C、D209S、D209M、D209E、D209H、D209F、D209Y、D209V、H210F、H210V、H210A、H210W、H210L、H210G、H210D、H210E、H210N、P211G、P211W、P211C、E212G、E212F、E212M、E212D、E212I、V213C、V213M、V213T、V213G、V213W、I214P、N215D、N215C、N215V、L217V、L217C、L217P、L217T、L217G、L217S、N218S、R219L、R219H、R219W、R219S、R219I、R219A、R219M、R219T、R219E、R219Y、R219D、R219C、V222E、V222F、V222C、W223Y、Y224L、A225K、N226C、N226Q、T227S、T227L、T227M、T227C、L228A、L228F、N229T、N229S、L230S、L230A、L230T、L230V、F233A、F233L、V238C、V238W、I241L、K242A、K242C、K242Y、K242P、K242W、K242G、K242L、K242R、K242S、K242E、K242Q、F245C、F245V、F245D、F245G、M246L、M246F、W249L、L250C、L250W、L250T、L250A、H252C、H252E、H252W、V253A、V253L、V253S、V253W、R254Q、R254S、G255C、G255E、G255L、Q256P、T257V、G258P、G258V、G258C、G258I、G258L、K259L、K259V、K259Q、K259I、N260W、N260E、N260D、N260C、L261G、L261D、F262Q、F262L、F262E、F262R、F262P、F262V、A263L、A263C、V264T、V264L、Y267V、Y267L、W268V、K269W、K269L、N270D、N270A、N270M、D271E、D271V、D271C、G273W、G273R、G273V、A274S、A274D、A274E、E276R、Y278G、Y278S、L279Q、L279V、L279G、S280C、K281L、K281A、K281W、K281G、T282G、T282A、T282C、T282R、T282I、N283G、N283E、N283Q、N283V、N283A、W284T、W284I、W284S、W284E、W284C、W284V、W284A、T285E、T285F、T285S、M286L、M286D、S287V、S287Q、S287T、S287E、S287P、S287L、S287W、S287C、A288L、A288Y、V291T、P292A、P292Q、P292L、P292R、L293A、L293E、L293T、L293G、H294G、H294A、Y295H、Y295S、Y295F、N296A、N296Y、N296M、N296F、L297S、L297W、Y298V、Y298P、Q299S、Q299L、Q299R、Q299I、A300V、S301A、S301R、S301Q、N302I、N302T、N302M、S303I、S303E、S304I、S304P、G305V、G305L、G305S、N306V、Y307F、Y307W、M309L、L312F、L312V、L313S、N314Y、N314F、N314D、G315I、G315V、T316K、T316S、V318C、V318L、V318E、V318A、Q319L、Q319I、Q319A、R320V、R320L、R320C、H321T、H321E、H321V、H321C、P322E、P322C、A325V、A325S、V326I、T327V、T327L、T327S、V329A、V329S、N331C、N331V、N331I、P336M、P336E、P336D、P336L、P336R、G337T、G337C、G337V、G337M、W439R、W439N、E341C、E341D、E341I、S342G、S342T、S342A、V344S、V344L、Q345K、Q345C、Q345V、Q345L、Q345I、G346H、G346A、G346R、G346L、G346N、G346Q、G346V、W347L、F348Q、F348S、F348C、K349G、K349A、K349Y、K349L、K349S、P350S、P350L、P350G、P350Q、L351W、L351M、L351S、A352S、A352C、T355V、T355A、L357C、L357T、L357S、T358V、T358F、E360S、E360D、E360C、Q361V、Q361P、Q361R、Q361A、Q361E、G362Y、G362R、G362C、G362N、G362M、G362V、Y363L、Y363Q、Y363I、Y363A、Q365D、V366L、V366A、Y368M、Y368T、Y368H、Y368I、Y368L、Y368A、Y368S、Y368Q、Y368V、G369K、G369S、G369A、G369E、G369R、G369I、D370A、D370T、Y372S、Y372I、Y372L、Y372G、G373C、G373S、I374Y、P375L、P375A、P375T、S376A、S376N、S376P、S376R、S376W、S376L、D377C、D377L、D377V、V379L、V379F、V379P、P380L、P380V、P380G、P380E、P380A、P380I、S381N、S381V、S381L、S381A、S381I、Y382I、Y382A、Y382E、Y382V、Y382L、R383G、R383S、R383P、Q384A、Q384P、Q384L、Q384H、Q384R、Q384Y、I386T、D387H、D387Q、D387V、D387L、P388G、P388T、P388M、P388W、P388V、L389S、L389H、L390V、L390S、L390F、L390I、L390G、K391L、K391Y、K391A、A392I、Q394S、Q394R、Q395W、Q395E、Q395K、Q395N、Q395L、Q395R、Y396T、Y396L、A397C、A397G、R400L、R400C、R400K、R400S、R400M、H402L、H402V、H402E、H402M、H402A、H402S、H402P、H402Y、D403E、F405G、F405C、F405V、F405I、F405P、F405W、D406E、H407C、H407D、W408R、W408P、W408C、W408Y、W408G、W408D、V410I、V410Q、I411A、I411L、I411V、T414A、T414V、R415F、R415L、E416C、E416V、N418L、N418M、N418A、N418C、N418G、A419M、A419E、A419C、S420E、S420T、S420V、H421V、H421C、H421A、H421R、S424C、S424A、G425A、A427V、T428L、T428N、T428A、T428G、I429V、I429A、M430L、M430R、S431A、G435N、G435E、G436M、G436E、G436L、G436T、S437G、S437Q、S437L、K438T、W439E、W439C、W439H、M440L、Y441N、Y441H、Y441Q、V442I、、R444A、R444S、R444L、R444V、R444P、Q445L、Q445S、Q445C、Q445E、K446G、K446Q、A447G、A447Q、A447E、A447T、G448S、V450T、V450A、H452A、H452T、D453E、M454R、M454L、M454V、T455L、T455S、G456Y、G456V、G456R、N457V、N457I、N457G、N457R、S459E、S459Q、S459V、S459C、S459P、S459M、S459T、G460S、G460D、G460E、T463C、T463V、T463L、T463D、T463H、I464V、N465G、N465L、N465R、N465Q、Q466L、Q466C、Q466E、D467C、D467V、W469M、W469E、W469T、H471Q、F473Y、F473C、F473R、N475T、N475H、G476Y、G477Q、G477F、G477K、G477L、V481Q、V481S、W482F，其中这些位置对应于如在SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，并且其中该一个或多个取代提供针对在标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.2的IF以及任选地针对稳定性的量度的≥1.0的IF。

在一个实施例中，该变体包括在选自下组的一个或多个位置中的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、I9、Q11、F13、E14、N16、N19、Q22、W24、N25、R26、N29、A31、Q32、L34、N36、A37、A41、P45、P46、W48、G50、T51、S52、Q53、G59、A60、Y61、L63、Y64、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K82、R87、I89、R90、S91、L92、K93、N95、Q98、V99、Y100、K108、G109、D112、F113、R116、V117、A119、V120、E121、V122、N123、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、I137、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、F155、K156、R158、W159、Y160、D163、T165、D166、W167、D168、Q169、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、E194、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、H210、E212、N215、L217、R219、W223、N226、L230、V238、I241、K242、K245、R254、G258、N260、F262、A263、K269、N270、D271、A274、L279、K281、N283、W284、T285、S287、P292、L293、N296、Q299、S301、G305、N306、L312、N314、G315、V318、Q319、R320、H321、P322、A325、G337、W439、E341、S342、V344、Q345、G346、F348、K349、P350、L357、E360、Q361、G362、Y363、Y368、G369、Y372、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、Q384、D387、P388、Q394、Q395、A397、R400、H402、W408、V410、R415、N418、H421、G425、S431、G435、G436、W439、R444、Q445、A447、G456、S459、N465、W469、G477、以及V481，其中这些位置对应于如在SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，并且其中该一个或多个位置中的取代提供针对在标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.4的IF以及任选地针对稳定性的量度的至少≥1.0的IF。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的取代中的一个或多个，该组由以下各项组成：H1G、H1C、H2G、D3A、G4D、T5Q、T5E、T5V、G7F、G7E、G7R、G7V、G7E、G7D、I9M、Q11V、F13I、E14M、N16G、N16Q、N19Y、N19T、N19G、N19S、N19V、Q22N、Q22C、Q22S、Q22M、Q22A、W24F、N25G、N25E、N25E、R26G、R26D、R26I、R26S、R26L、R26W、R26A、R26F、N29G、N29L、A31W、A31S、Q32G、Q32L、Q32A、L34Y、N36E、A37G、A41Q、P45A、P46G、W48G、W48C、W48I、W48M、W48P、W48Q、G50S、G50N、T51G、T51C、S52V、S52I、S52L、Q53L、Q53G、Q53V、G59A、A60S、A60W、A60L、A60G、A60T、Y61F、L63V、L63H、L63K、Y64W、Y64S、Y64V、Y64I、Y64H、Y64M、Y64C、Y64R、Y64G、Y64L、Y64A、F69W、N70A、N70T、N70S、N70E、Q71N、Q71D、Q71I、Q71V、K72Y、K72R、G73V、G73L、G73E、T74L、V75G、R76A、T77S、K82A、R87A、I89A、I89P、R90L、R90G、S91A、S91E、S91G、L92C、K93W、K93G、N95W、N95C、N95G、Q98L、Q98C、Q98M、Q98T、V99S、V99T、Y100W、Y100V、Y100F、K108V、G109A、G109S、D112E、F113M、F113V、F113L、F113C、F113E、F113D、R116N、R116L、R116I、R116Q、R116D、R116T、R116G、R116E、R116S、R116C、R116V、R116F、V117C、V117S、V117W、V117A、V117G、V117E、A119Y、V120D、V120L、E121V、E121M、E121D、V122E、N123G、N123A、N123E、N123W、N123T、N123P、N126E、N126G、N126A、R127G、R127S、R127C、R127W、R127L、R127V、R127F、R127Y、N128C、N128S、N128E、Q129E、E130C、V131L、V131E、S132A、S132H、S132P、S132C、S132E、S132D、G133S、G133V、G133I、G133E、G133D、T134V、T134D、T134E、Y135V、Y135S、Y135R、Y135T、Y135W、Y135K、Y135G、Y135P、Y135M、Y135D、Y135H、Y135E、I137A、I137S、I137G、A139S、W140Y、W140H、T141M、T141C、T141G、T141S、G142D、G142E、F143M、N144C、F145C、F145A、P146C、P146L、G147V、G147P、G147D、G147S、G147I、G147L、G147C、G149C、N150C、N150D、N150E、Q151T、Q151L、F155H、F155L、K156Y、K156V、K156A、K156D、K156Q、K156W、K156P、K156E、K156C、K156F、K156L、K156S、K156G、R158M、R158A、R158G、R158Q、R158S、R158W、R158L、R158T、R158V、R158E、R158Y、W159N、W159G、W159T、W159C、W159E、W159D、Y160Q、Y160T、Y160S、Y160V、Y160G、Y160I、Y160L、Y160E、D163S、D163K、D163L、T165M、T165G、T165I、D166S、W167Y、W167D、D168M、D168S、D168G、Q169L、R171F、R171S、R171K、R171V、R171A、Q172S、Q172E、L173G、L173N、L173M、L173S、L173Y、L173V、A174G、N175L、N175V、N175I、N175G、R176E、R176G、R176M、I177G、Y178V、Y178R、Y178K、K179L、K179C、K179E、K179S、K179W、K179A、K179G、K179T、K179F、F180L、R181K、R181P、R181S、R181V、R181Q、R181E、R181A、R181G、G184V、G184D、K185A、K185D、K185N、K185V、K185G、A186C、A186S、A186D、W187G、D188Q、D188G、D188M、D188L、D188V、E194Q、D199G、D199S、D199A、Y200W、Y200F、Y200C、Y200V、Y200T、Y200L、Y200A、Y200G、Y200S、M202T、Y203I、Y203Q、Y203H、Y203T、Y203M、Y203V、Y203L、A204R、A204H、A204W、A204F、A204L、A204Y、A204D、A204G、D205C、H210F、H210A、H210W、H210L、H210G、H210D、H210E、E212F、E212M、E212D、E212G、E212I、N215D、N215V、N215C、L217C、L217P、R219H、R219I、R219M、R219T、R219E、R219Y、R219D、R219C、W223Y、N226Q、N226C、L230V、V238C、V238W、I241L、K242C、K242Y、K242P、K242W、K242G、K242L、K242R、K242S、K242E、K242A、K242Q、F245C、F245V、F245D、F245G、R254Q、R254S、G258L、N260D、F262Q、F262L、F262E、F262R、F262P、F262V、A263L、A263C、K269L、K269W、N270D、N270A、N270M、D271C、A274S、A274D、A274E、L279Q、L279G、K281W、K281G、N283Q、N283V、N283A、W284C、W284V、W284A、T285F、T285S、S287V、S287Q、S287P、S287L、S287W、S287C、P292R、L293G、N296M、N296F、Q299S、Q299I、S301Q、G305V、G305L、N306V、L312F、L312V、N314F、G315I、G315V、V318A、Q319A、R320L、R320C、H321E、H321V、H321C、P322E、P322C、A325V、A325S、G337C、G337V、G337M、E341D、E341I、S342A、V344L、Q345C、G346Q、G346V、F348Q、F348S、F348C、K349L、K349S、P350S、P350L、P350G、P350Q、L357T、E360C、Q361A、Q361E、G362R、G362C、G362N、G362M、G362V、Y363I、Y363A、Y368I、Y368L、Y368V、G369A、G369R、Y372L、Y372G、I374Y、P375T、S376L、D377V、V379F、V379P、V379L、P380G、P380I、S381N、S381L、S381A、S381I、S381V、Y382V、Q384R、Q384Y、D387L、P388W、Q394S、Q394R、Q395R、A397G、R400M、H402L、H402S、H402P、W408P、W408C、W408Y、V410Q、R415L、N418C、N418G、H421R、G425A、S431A、G435N、G435E、G436M、G436E、G436T、W439H、W439R、W439N、R444V、Q445C、Q445E、A447E、A447T、G456R、S459T、N465R、N465Q、W469M、W469E、G477Q、G477F、G477K、G477L、以及V481S，其中这些位置对应于如在SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，并且其中该一个或多个取代提供针对在标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.4的IF以及任选地针对稳定性的量度的≥1.0的IF。

在一个实施例中，该变体包括在选自下组的一个或多个位置中的取代，该组由以下各项组成：G7、F13、N16、N19、R26、N29、A31、P46、G50、T51、S52、Q53、G59、A60、Y64、N70、Q71、K72、G73、T74、R90、K108、G109、F113、R116、V117、A119、E121、V122、N123、N126、R127、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、I137、T141、G142、F143、N144、P146、G147、G149、N150、F155、K156、R158、W159、Y160、D163、T165、W167、D168、Q169、R171、Q172、L173、N175、Y178、K179、R181、K185、A186、W187、D188、E194、Y200、Y203、A204、D205、H210、N215、R219、W223、V238、K242、K245、G258、F262、K269、N270、A274、L279、K281、W284、T285、S287、Q299、L312、H321、A325、G337、E341、S342、F348、K349、P350、Q361、G362、Y368、G369、D377、V379、P380、S381、Q384、V410、N418、G435、Q445、G456、N465、以及G477，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，并且其中该一个或多个位置中的取代提供针对在标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.6的IF以及任选地针对稳定性的量度的≥1.0的IF。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：G7V、G7E、G7D、F13I、N16Q、N19T、N19G、N19S、N19V、R26A、N29G、A31S、P46G、G50N、T51G、T51C、S52I、S52L、Q53L、Q53G、Q53V、G59A、A60S、A60W、A60G、Y64V、Y64M、Y64C、Y64R、Y64G、Y64L、Y64A、N70E、Q71V、K72R、G73L、G73E、T74L、R90G、K108V、G109S、F113V、F113C、F113E、F113D、R116I、R116Q、R116D、R116T、R116G、R116E、R116S、R116C、R116V、R116F、V117A、V117G、V117E、A119Y、E121D、V122E、N123T、N126G、R127W、R127L、R127F、R127Y、E130C、V131L、V131E、S132H、S132P、S132C、S132E、S132D、G133E、G133D、T134V、T134D、T134E、Y135S、Y135T、Y135W、Y135K、Y135G、Y135P、Y135M、Y135D、Y135E、I137S、I137G、T141G、G142D、G142E、N144C、P146C、P146L、G147S、G147L、G149C、N150D、N150E、F155L、K156Y、K156A、K156D、K156Q、K156W、K156P、K156E、K156C、K156F、K156L、K156S、K156G、R158A、R158G、R158Q、R158S、R158W、R158L、R158T、R158V、R158E、R158Y、W159T、W159C、W159E、W159D、Y160S、Y160V、Y160I、Y160L、Y160E、D163L、T165I、W167D、D168G、Q169L、R171V、Q172S、L173V、N175L、N175V、N175I、N175G、Y178K、K179A、K179G、K179T、K179F、R181V、R181Q、R181E、R181G、K185A、K185D、K185N、K185V、K185G、A186S、W187G、D188V、E194Q、Y200C、Y200T、Y200L、Y200A、Y200G、Y200S、Y203M、Y203V、Y203L、A204L、A204D、A204G、D205C、H210F、H210A、H210W、H210L、H210G、H210D、H210E、N215V、R219Y、R219D、R219C、W223Y、V238W、K242R、K242S、K242E、K242A、K242Q、F245D、F245G、G258L、F262Q、F262E、F262R、F262P、F262V、K269L、N270D、N270M、A274E、L279G、K281G、W284A、T285F、S287V、S287W、S287C、Q299I、L312F、L312V、H321V、H321C、A325S、G337V、G337M、E341I、S342A、F348Q、F348S、K349L、K349S、P350L、P350G、Q361E、G362R、G362V、Y368L、Y368V、G369A、D377V、V379P、P380I、S381L、S381A、S381I、Q384Y、V410Q、N418G、G435E、Q445E、G456R、N465R、以及G477L，其中这些位置对应于如在SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，并且其中该一个或多个取代提供针对在标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.6的IF以及任选地针对稳定性的量度的≥1.0的IF。

根据本发明的变体已进一步显示出具有改进的在液体洗涤剂组合物中的稳定性。因此，在一个实施例中，变体具有改进的稳定性，例如改进的储存稳定性。

在一个实施例中，该变体包括在选自下组的一个或多个位置中的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、T5、G7、I9、Q11、E14、W15、N16、V17、N19、Q22、H23、W24、N25、R26、H28、N29、N30、A31、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、I44、A47、W48、K49、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、L63、E68、G73、T74、V75、R76、T77、T81、K82、A83、E84、E86、I89、R90、S91、L92、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、R116、V117、Q118、V120、V122、N123、P124、N126、N128、Q129、V131、G133、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G149、Q151、S153、S154、F155、K156、R158、Y160、H161、T165、D166、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、K179、R181、G184、K185、A186、T193、N195、G196、Y198、Y203、D205、V206、D209、H210、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、N226、T227、L228、D231、F233、V238、H240、K242、S244、F245、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、T257、G258、K259、N260、L261、V264、W268、K269、L272、G273、L275、E276、N277、L279、S280、K281、T285、M286、A288、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Q299、A300、N302、S303、S304、G305、N306、R310、N311、L312、L313、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、S323、V326、T327、F328、V329、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、P350、L351、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、D409、V410、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、M430、S431、D432、G435、W439、Y441、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、M454、G456、S459、T463、N465、D467、F473、N475、G476、以及W482；其中这些位置对应于如在SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的氨基酸位置，并且其中该一个或多个取代提供针对稳定性的量度的≥1.0的IF。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H1V、H1L、H2T、D3R、D3Y、D3W、D3S、D3F、T5L、T5F、T5W、G7F、G7V、G7E、G7E、G7D、G7L、G7A、G7S、G7N、I9M、I9L、Q11L、Q11V、Q11M、E14Q、E14F、W15G、W15S、W15I、W15H、N16R、V17D、V17G、V17E、V17Q、V17A、V17T、V17L、N19G、N19S、Q22C、Q22A、Q22Y、H23W、W24F、N25V、N25R、N25L、N25T、R26L、R26E、H28E、H28R、H28M、H28W、H28K、N29G、N29K、N29V、N29W、N29A、N30S、N30R、A31S、A31G、A31R、N33D、L34Y、K35L、N36V、N36P、N36W、N36T、A37E、G38M、G38Y、G38K、I39L、I39V、T40Q、T40A、T40S、A41Q、I42V、I42L、I44T、I44L、I44V、A47G、A47T、W48C、W48I、W48H、W48A、W48Y、W48F、K49Q、T51A、S52M、S52V、S52C、S52F、S52A、S52D、S52K、S52N、S52E、S52T、Q53V、Q53L、Q53M、N54T、N54L、N54I、D55G、V56L、G59E、G59S、A60V、A60F、L63C、L63G、L63A、E68S、E68M、E68C、E68T、E68V、E68Q、E68Y、G73C T74V、T74L、T74N、V75T、V75E、R76V、T77V、T81G、K82G、A83Q、A83R、A83S、A83F、A83V、E84M、E84W、E86W、E86R、I89A、I89L、R90L、S91A、S91G、S91V、S91T、L92C、L92F、N95E、N95S、N95G、N95D、N95R、G96R、I97V、I97L、Q98V、Q98L、Q98F、Q98W、Q98P、Q98H、V99G、V99E、Y100W、V103A、V103S、V103T、H107M、K108V、G109D、G109F、G110C、A111S、D112V、D112F、D112C、D112K、F113M、F113V、F113E、F113K、F113Y、T114S、T114V、T114L、R116Q、R116K、R116W、V117G、V117I、V117M、Q118V、Q118G、Q118E、Q118F、Q118R、V120C、V120A、V120N、V122L、N123K、N123V、P124R、P124G、N126G、N126A、N126R、N126T、N128S、N128E、N128P、N128G、N128A、Q129E、V131I、G133A、G133D、G133R、Q136E、Q136W、Q136G、I137V、E138A、E138Y、E138T、E138L、A139S、A139G、A139V、A139T、A139P、W140H、T141S、T141C、T141G、G142R、G142A、F143M、F143L、F143I、N144M、N144K、N144G、N144R、F145A、F145N、F145Q、F145T、F145H、P146L、P146M、P146T、G149Y、G149L、G149A、Q151L、Q151I、S153G、S153T、S154M、S154E、S154A、S154V、F155W、K156F、K156Q、K156L、K156S、K156G、K156N、K156T、R158S、Y160W、Y160R、Y160H、H161C、T165I、T165V、T165E、D166S、Q169L、Q169S、Q169V、Q169F、S170A、S170V、S170Q、S170W、S170G、S170F、S170T、S170L、R171A、R171M、Q172L、Q172E、Q172C、Q172R、Q172G、Q172W、L173I、L173A、A174V、A174L、A174M、A174K、N175G、N175S、R176Y、R176M、R176T、R176K、Y178W、K179L、R181A、R181G、R181D、G184D、K185G、A186S、A186D、A186T、A186Q、A186V、A186H、T193S、T193D、T193R、T193G、N195T、N195F、G196P、Y198A、Y198G、Y203W、Y203L、D205R、D205A、D205L、V206A、V206S、V206K、D209S、D209M、D209V、D209Q、D209L、D209I、H210Q、H210N、E212G、E212I、E212Y、E212R、E212C、E212K、V213C、V213W、V213R、V213F、I214V、N215C、N215T、L217S、L217A、L217W、N218S、N218D、N218R、N218L、N218M、R219L、W220L、W220I、W220P、W220E、W220R、W220A、W220S、G221S、G221A、V222E、V222L、W223F、W223L、N226C、N226M、N226E、N226K、N226R、T227L、T227Y、T227R、L228F、L228M、D231P、F233T、F233P、F233M、V238A、H240W、K242A、S244Q、F245G、F245A、R247Y、R247G、R247M、D248G、D248R、W249F、L250C、L250F、L250Y、G251K、G251M、G251Q、H252C、H252T、H252F、H252V、V253A、V253L、T257V、G258P、G258F、G258D、K259L、K259A、K259S、K259D、K259C、N260W、N260S、N260R、N260G、L261T、V264L、W268Y、K269W、K269Q、K269R、L272M、G273E、L275G、L275E、L275A、L275R、L275K、E276L、N277D、L279Q、L279M、S280R、S280E、S280D、K281A、T285W、T285M、T285P、M286L、M286C、A288V、P292L、P292G、L293T、L293G、L293Y、L293Q、H294W、H294Q、H294S、Y295I、Y295A、Y295F、N296S、N296K、N296H、L297W、L297H、Q299S、Q299L、Q299R、Q299A、Q299H、Q299P、A300C、N302S、S303A、S303M、S304G、S304L、S304F、S304A、S304M、G305Q、G305F、G305I、N306V、N306L、N306D、N306S、N306T、R310A、R310T、N311L、N311R、N311C、N311Y、L312F、L312V、L312I、L313M、L313I、G315V、G315T、G315R、G315F、T316S、T316C、T316G、V318L、Q319P、Q319H、Q319D、Q319F、R320V、R320C、R320A、R320S、H321T、H321G、H321R、H321S、S323N、V326G、V326A、V326C、V326T、T327V、T327L、T327Q、T327E、F328M、F328C、V329S、V329C、V329I、T334A、T334S、P336L、P336W、P336S、P336K、G337V、G337F、E338T、E338A、E338H、E341P、E341M、E341F、E341K、E341S、E341T、S342A、V344L、Q345L、Q345W、Q345N、G346R、G346S、W347L、W347R、W347V、W347C、F348P、F348M、P350S、P350Q、P350D、P350E、L351W、L351H、L351Q、A354C、T355L、T355Y、T355F、L357H、T358L、E360G、E360A、E360M、Q361V、Q361G、Q361D、Q361S、Y363L、Y363R、Y363V、Q365M、Q365L、Q365T、Q365C、Q365S、V366I、V366C、F367L、F367S、F367A、Y368H、G369L、Y372A、G373T、G373Q、G373W、G373R、I374Y、I374S、I374M、I374L、P375E、P375S、P375V、P375R、S376R、S376L、S376V、S376I、S376Q、S376F、S376E、S376T、D377S、D377G、D377T、V379L、V379S、P380V、P380Y、S381V、Y382K、Y382R、R383V、Q384S、Q384V、Q384T、Q384G、Q384E、I386L、I386M、I386W、I386V、D387Q、D387L、P388S、P388R、P388K、P388L、L389A、L389V、L389F、L389M、L390V、L390T、L390N、L390H、L390C、K391Q、A392I、A392M、A392T、Q394N、Q394L、Q394T、Q394M、Q395E、Q395K、Q395R、Q395V、Q395S、Q395M、Y396R、Y396W、A397S、Y398S、Y398C、Y398N、Y398K、R400E、R400I、H402L、H402D、H402R、H402T、D403P、D403Q、D403I、Y404K、Y404F、Y404W、F405G、F405A、D406V、D406T、D406M、D406S、D409G、V410L、V410E、T414A、R415A、R415Q、E416V、E416L、E416A、E416Q、N418M、N418G、N418R、N418F、A419M、A419G、A419V、A419L、A419Q、A419R、S420M、H421T、P422Y、P422H、P422D、P422R、S424L、G425V、L426S、L426A、A427S、M430L、M430A、M430T、S431A、S431T、S431F、D432Q、D432P、G435N、G435M、G435I、G435S、W439E、W439A、W439T、W439R、W439N、Y441K、Q445R、K446G、K446T、K446P、A447R、A447S、G448R、V450T、V450Q、V450R、W451L、H452C、H452G、H452Y、H452R、H452V、M454Q、M454S、G456Y、G456K、G456L、S459E、S459Q、S459R、T463M、T463A、T463Q、N465L、N465R、D467C、F473E、F473G、F473T、F473V、N475G、G476F、G476Y、以及W482F，其中编号是根据SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列，并且其中该一个或多个取代提供针对稳定性的量度的IF≥1.0。

在一个实施例中，该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、T5、G7、I9、E14、W15、N16、V17、Q22、H23、W24、N25、R26、H28、N29、N33、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、I44、W48、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、L63、E68、G73、T74、V75、R76、T81、A83、E86、R90、S91、L92、N95、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、R116、V117、Q118、V120、V122、N123、P124、N126、N128、Q129、V131、G133、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G149、Q151、S153、S154、F155、K156、Y160、T165、D166、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、K179、R181、K185、A186、T193、N195、G196、Y198、Y203、D205、V206、D209、H210、E212、V213、I214、N215、L217、N218、W220、G221、W223、N226、T227、L228、D231、F233、V238、H240、K242、S244、R247、D248、L250、G251、H252、T257、G258、K259、N260、L261、K269、L272、G273、L275、E276、N277、L279、K281、T285、M286、A288、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Q299、A300、N302、S303、S304、G305、N306、R310、N311、L312、L313、G315、T316、Q319、R320、H321、T327、T334、P336、E338、E341、S342、V344、G346、W347、F348、P350、L351、A354、T355、T358、E360、Q361、Y363、Q365、F367、Y368、G369、G373、I374、P375、S376、D377、V379、S381、Y382、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、D409、V410、R415、E416、N418、A419、S420、P422、S424、G425、L426、A427、M430、S431、D432、G435、W439、Y441、Q445、K446、A447、V450、H452、M454、G456、S459、F473、以及N475；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，该一个或多个取代提供针对稳定性的量度的≥1.2的改进因子以及任选地针对在标准A和/或标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.0的改进因子。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H1V、H1L、H2T、D3R、D3Y、D3W、D3S、D3F、T5L、T5F、T5W、G7F、G7V、G7E、G7E、G7D、G7L、G7A、I9L、E14Q、W15I、N16R、V17D、V17G、V17E、V17Q、V17A、V17T、V17L、Q22C、Q22A、Q22Y、H23W、W24F、N25V、N25R、N25L、N25T、R26L、R26E、H28E、H28R、H28M、H28W、H28K、N29G、N29V、N29W、N33D、N36V、N36P、N36W、A37E、G38Y、G38K、I39L、I39V、T40Q、T40A、T40S、A41Q、I42L、I44T、W48C、W48I、W48H、W48A、W48Y、W48F、S52M、S52V、S52C、S52F、S52A、S52D、S52K、S52N、S52E、S52T、Q53V、Q53L、Q53M、N54T、N54L、N54I、D55G、V56L、G59E、G59S、A60V、A60F、L63C、L63G、L63A、E68S、E68M、E68C、E68T、E68V、E68Q、E68Y、G73C、T74V、T74L、V75T、V75E、R76V、T81G、A83Q、A83R、A83S、A83F、A83V、E86W、E86R、R90L、S91G、S91T、L92C、N95E、N95S、N95G、N95D、N95R、I97L、Q98V、Q98L、Q98W、Q98P、Q98H、V99G、V99E、Y100W、V103S、V103T、H107M、K108V、G109D、G109F、G110C、A111S、D112F、D112C、D112K、F113M、F113V、F113E、F113K、T114S、T114V、T114L、R116Q、R116K、V117G、V117I、V117M、Q118V、Q118G、Q118E、Q118F、Q118R、V120N、V122L、N123K、N123V、P124R、P124G、N126T、N128S、N128E、N128P、N128G、N128A、Q129E、V131I、G133A、G133D、G133R、Q136E、Q136W、Q136G、I137V、E138A、E138Y、E138T、E138L、A139S、A139G、A139V、A139T、A139P、W140H、T141S、T141C、T141G、G142R、G142A、F143M、F143L、F143I、N144M、N144K、N144G、N144R、F145A、F145N、F145Q、F145T、F145H、P146L、P146M、P146T、G149Y、G149L、G149A、Q151L、S153G、S153T、S154M、S154E、S154A、S154V、F155W、K156F、K156Q、K156L、K156S、K156G、K156N、K156T、Y160H、T165I、D166S、Q169L、Q169S、Q169V、Q169F、S170A、S170V、S170Q、S170W、S170G、S170F、S170T、S170L、R171A、R171M、Q172L、Q172E、Q172C、Q172R、Q172G、Q172W、L173I、L173A、A174V、A174L、A174M、A174K、N175G、N175S、R176Y、R176M、R176T、R176K、K179L、R181A、R181G、R181D、K185G、A186S、A186D、A186T、A186Q、A186V、T193S、T193D、T193R、T193G、N195T、N195F、G196P、Y198G、Y203W、Y203L、D205R、D205A、D205L、V206A、V206S、V206K、D209S、D209M、D209V、D209Q、D209L、D209I、H210N、E212G、E212I、E212Y、E212R、E212C、E212K、V213C、V213W、V213R、V213F、I214V、N215C、N215T、L217S、L217A、L217W、N218S、N218D、N218R、N218L、N218M、W220L、W220I、W220P、W220E、W220R、W220A、W220S、G221A、W223L、N226C、N226M、N226E、N226K、N226R、T227L、T227Y、T227R、L228F、D231P、F233T、F233P、F233M、V238A、H240W、K242A、S244Q、R247Y、R247G、R247M、D248G、D248R、L250C、L250F、L250Y、G251K、G251M、G251Q、H252C、H252T、H252F、H252V、T257V、G258D、K259L、K259A、K259S、K259D、K259C、N260W、N260S、N260R、L261T、K269W、K269Q、K269R、L272M、G273E、L275G、L275E、L275A、L275R、L275K、E276L、N277D、L279Q、L279M、K281A、T285W、T285M、T285P、M286L、M286C、A288V、P292L、P292G、L293T、L293G、L293Y、L293Q、H294W、H294Q、H294S、Y295A、N296S、N296K、N296H、L297W、L297H、Q299S、Q299L、Q299R、Q299A、Q299H、Q299P、A300C、N302S、S303M、S304G、S304L、S304F、S304A、S304M、G305F、G305I、N306V、N306L、N306D、N306S、N306T、R310A、R310T、N311L、N311R、N311C、N311Y、L312F、L312V、L312I、L313M、L313I、G315V、G315T、G315R、G315F、T316S、T316C、T316G、Q319P、Q319H、Q319D、Q319F、R320V、H321T、H321G、H321R、H321S、T327V、T327L、T327E、T334A、T334S、P336L、P336W、P336S、P336K、E338A、E338H、E341P、E341M、E341F、E341K、E341S、S342A、V344L、G346S、W347L、W347R、W347V、W347C、F348M、P350Q、L351W、L351H、L351Q、A354C、T355Y、T355F、T358L、E360G、E360A、E360M、Q361S、Y363L、Y363R、Y363V、Q365S、F367L、F367S、F367A、Y368H、G369L、G373T、G373Q、G373W、G373R、I374Y、I374S、I374M、I374L、P375E、P375S、P375V、P375R、S376R、S376V、S376I、S376Q、S376F、S376E、S376T、D377G、D377T、V379L、V379S、S381V、Y382K、Y382R、Q384S、Q384V、Q384T、Q384G、Q384E、I386W、I386V、D387Q、D387L、P388S、P388R、P388K、P388L、L389A、L389V、L389F、L389M、L390V、L390T、L390N、L390H、L390C、K391Q、A392I、A392M、A392T、Q394N、Q394L、Q394T、Q394M、Q395E、Q395K、Q395R、Y396R、Y396W、A397S、Y398S、Y398C、Y398N、Y398K、R400E、R400I、H402R、H402T、D403I、Y404K、Y404F、Y404W、F405G、F405A、D406S、D409G、V410L、V410E、R415Q、E416V、E416L、E416A、E416Q、N418M、N418G、N418R、N418F、A419M、A419G、A419V、A419L、A419Q、A419R、S420M、P422Y、P422H、P422D、P422R、S424L、G425V、L426S、L426A、A427S、M430L、M430A、M430T、S431A、S431T、S431F、D432Q、D432P、G435N、G435M、G435I、G435S、W439E、W439A、Y441K、Q445R、K446G、K446P、A447S、V450R、H452V、M454Q、M454S、G456Y、S459Q、F473E、F473G、F473T、F473V、以及N475G，其中编号是根据SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列，并且其中该一个或多个取代提供具有针对稳定性的量度的≥1.2的IF以及任选地针对在标准A和/或标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.0的IF的变体。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H1V、H2T、T5L、G7F、G7V、G7E、G7E、G7D、I9L、E14F、Q22C、Q22A、W24F、N25V、R26L、H28E、N29G、N29A、I39L、T40Q、T40A、A41Q、I44T、W48C、W48I、W48Y、W48F、T51A、S52M、S52V、Q53V、Q53L、V56L、G59E、T74V、T74L、V75T、R90L、S91G、L92C、N95E、N95S、N95G、Q98V、Q98L、Y100W、K108V、F113M、F113V、F113E、F113Y、R116Q、V117G、N128S、N128E、Q129E、G133A、G133D、E138A、A139S、W140H、T141S、T141C、T141G、F143M、F143L、F145A、P146L、Q151L、K156F、K156Q、K156L、K156S、K156G、T165I、D166S、Q169L、S170A、S170V、R171A、Q172L、Q172E、L173I、A174V、N175G、K179L、R181A、R181G、G184D、K185G、A186S、A186D、A186H、T193S、Y203W、Y203L、D209S、D209M、D209V、H210N、E212G、E212I、V213C、V213W、N215C、L217S、N218S、N226C、T227L、L228F、K242A、L250C、H252C、T257V、K259L、N260W、N260G、K269W、L279Q、K281A、M286L、P292L、L293T、L293G、Y295F、L297W、Q299S、Q299L、Q299R、N306V、L312F、L312V、G315V、T316S、R320V、H321T、S323N、T327V、T327L、P336L、E341T、S342A、V344L、W347L、P350Q、L351W、Y363L、Y368H、I374Y、S376R、V379L、S381V、D387Q、D387L、L390V、A392I、Q395E、Q395K、Q395R、F405G、E416V、N418M、N418G、A419M、M430L、S431A、G435N、W439E、W439R、W439N、K446G、G456Y、S459Q、以及G476Y，其中编号是根据SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列，并且其中该一个或多个取代提供具有针对稳定性的量度的≥1.2的IF以及针对在标准A和/或标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.0的IF的变体。

在一个实施例中，该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、D3、G7、N16、V17、Q22、H28、N33、N36、T40、W48、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、V75、R76、N95、V99、G109、A111、D112、F113、T114、R116、V117、Q118、V122、N123、P124、N126、N128、V131、Q136、I137、E138、A139、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G149、Q151、S153、S154、K156、Y160、T165、D166、Q169、S170、R171、Q172、A174、R176、R181、K185、A186、T193、N195、Y203、D205、V206、D209、E212、V213、N215、N218、W220、G221、N226、F233、K242、D248、L250、G251、H252、G258、N260、K269、G273、E276、N277、T285、P292、L293、H294、N296、Q299、S304、G305、N306、R310、N311、L312、Q319、R320、H321、T327、T334、P336、E338、E341、G346、W347、L351、A354、Y363、G373、I374、P375、S376、D377、V379、S381、Y382、Q384、P388、L389、L390、Q394、Q395、Y398、R400、H402、Y404、V410、E416、N418、A419、S420、P422、M430、S431、G435、Q445、A447、M454、F473、以及N475；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，该一个或多个取代提供针对稳定性的量度的≥1.5的改进因子以及任选地针对在标准A和/或标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.0的改进因子。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H1V、H1L、D3S、D3F、G7F、G7E、G7A、N16R、V17D、V17G、V17E、V17Q、V17A、V17T、V17L、Q22A、Q22Y、H28E、H28M、H28W、H28K、N33D、N36V、N36P、N36W、T40Q、T40S、W48C、W48I、W48H、W48A、S52M、S52V、S52C、S52F、S52A、S52D、S52K、S52N、S52E、S52T、Q53V、Q53L、Q53M、N54T、N54L、N54I、D55G、V56L、G59E、A60V、A60F、V75T、R76V、N95E、N95S、N95G、N95D、N95R、V99G、V99E、G109D、G109F、A111S、D112K、F113K、T114L、R116Q、R116K、V117G、V117I、V117M、Q118V、Q118G、Q118E、Q118F、Q118R、V122L、N123K、N123V、P124G、N126T、N128S、N128E、N128P、N128G、N128A、V131I、Q136E、Q136W、Q136G、I137V、E138T、E138L、A139S、A139G、A139V、A139T、A139P、T141S、T141G、G142R、G142A、F143L、N144G、N144R、F145A、F145N、F145Q、F145T、F145H、P146L、P146M、P146T、G149Y、G149L、G149A、Q151L、S153T、S154M、S154E、S154A、S154V、K156F、K156L、K156S、K156G、Y160H、T165I、D166S、Q169L、Q169S、Q169V、Q169F、S170A、S170V、S170Q、S170W、S170G、S170F、S170T、S170L、R171A、R171M、Q172L、Q172E、Q172C、Q172R、Q172G、Q172W、A174K、R176Y、R176M、R176T、R176K、K179L、R181A、R181G、R181D、K185G、A186S、A186D、A186T、A186Q、A186V、T193S、T193D、T193R、T193G、N195T、N195F、Y203W、Y203L、D205A、D205L、V206A、V206S、V206K、D209S、D209M、D209V、D209Q、D209L、D209I、E212G、E212I、E212C、E212K、V213W、V213R、V213F、N215C、N215T、N218D、N218R、N218L、N218M、W220L、W220I、W220P、W220E、W220R、W220A、W220S、G221A、N226C、N226M、N226E、N226K、N226R、F233T、F233P、F233M、K242A、D248G、D248R、L250Y、G251K、G251M、G251Q、H252F、H252V、G258D、N260W、N260R、K269W、G273E、E276L、N277D、T285M、T285P、P292L、P292G、L293G、L293Q、H294S、N296H、Q299L、Q299R、Q299P、S304G、S304L、S304F、S304A、S304M、G305F、G305I、N306V、N306L、N306D、N306S、N306T、R310T、N311C、N311Y、L312F、L312V、Q319H、Q319D、Q319F、R320V、H321R、H321S、T327V、T327E、T334S、P336L、P336W、P336S、P336K、E338A、E338H、E341M、E341F、E341K、E341S、G346S、W347L、W347R、W347V、W347C、L351H、L351Q、A354C、Y363R、Y363V、G373Q、G373W、G373R、I374Y、I374S、I374M、I374L、P375E、P375S、P375V、P375R、S376R、S376F、S376E、S376T、D377T、V379L、V379S、S381V、Y382R、Q384E、P388S、P388R、P388K、P388L、L389A、L389V、L389F、L389M、L390V、L390C、Q394N、Q394L、Q394T、Q394M、Q395R、Y398K、R400E、R400I、H402T、Y404F、Y404W、V410E、E416Q、N418M、N418G、N418R、N418F、A419M、A419L、A419Q、A419R、S420M、P422Y、P422H、P422D、P422R、M430L、S431A、S431F、G435S、Q445R、A447S、M454S、F473V、以及N475G，其中编号是根据SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列，并且其中该一个或多个取代提供具有针对稳定性的量度的≥1.5的IF以及任选地针对在标准A和/或标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.0的IF的变体。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H1V、G7F、G7E、Q22A、H28E、T40Q、W48C、W48I、S52M、S52V、Q53V、Q53L、V56L、G59E、V75T、N95E、N95S、N95G、R116Q、V117G、N128S、N128E、A139S、T141S、T141G、F143L、F145A、P146L、Q151L、K156F、K156L、K156S、K156G、T165I、D166S、Q169L、S170A、S170V、R171A、Q172L、Q172E、K179L、R181A、R181G、K185G、A186S、A186D、T193S、Y203W、Y203L、D209S、D209M、D209V、E212G、E212I、V213W、N215C、N226C、K242A、N260W、K269W、P292L、L293G、Q299L、Q299R、N306V、L312F、L312V、R320V、T327V、P336L、W347L、I374Y、S376R、V379L、S381V、L390V、Q395R、N418M、N418G、A419M、M430L、以及S431A，其中编号是根据SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列，并且其中该一个或多个取代提供具有针对稳定性的量度的≥1.5的IF以及针对在标准A和/或标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.0的IF的变体。

在一个实施例中，该变体包括在选自下组的一个或多个位置中的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、T5、G7、I9、Q11、E14、W15、N19、Q22、W24、N25、R26、H28、N29、N30、A31、L34、K35、I39、T40、A41、I42、I44、A47、W48、T51、S52、Q53、V56、G59、T74、V75、I89、R90、S91、L92、N95、I97、Q98、Y100、K108、F113、R116、V117、N126、N128、Q129、G133、A139、W140、T141、F143、F145、P146、Q151、K156、R158、H161、T165、D166、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、K179、R181、G184、K185、A186、T193、Y203、D209、H210、E212、V213、N215、L217、N218、R219、V222、N226、T227、L228、K242、K245、L250、H252、V253、T257、G258、K259、N260、V264、K269、L279、K281、M286、P292、L293、Y295、L297、Q299、N306、L312、G315、T316、V318、R320、H321、S323、T327、V329、P336、G337、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、P350、L351、Q361、Y363、Y368、I374、S376、V379、P380、S381、D387、L390、A392、Q395、H402、F405、T414、E416、N418、A419、M430、S431、G435、W439、K446、V450、G456、S459、N465、G476、以及W482；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，该一个或多个取代提供针对稳定性的量度的≥1.0的改进因子以及针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.0的改进因子。

在具体实施例中，该变体包括选自下组的取代中的一个或多个，该组由以下各项组成：H1V、H2T、T5L、G7F、G7V、G7E、G7E、G7D、I9M、I9L、Q11L、Q11V、E14F、W15G、W15S、N19G、N19S、Q22C、Q22A、W24F、N25V、R26L、H28E、N29G、N29A、N30S、A31S、L34Y、K35L、I39L、T40Q、T40A、A41Q、I42V、I44T、A47G、W48C、W48I、W48Y、W48F、T51A、S52M、S52V、Q53V、Q53L、V56L、G59E、T74V、T74L、V75T、I89A、R90L、S91A、S91G、L92C、N95E、N95S、N95G、I97V、Q98V、Q98L、Y100W、K108V、F113M、F113V、F113E、F113Y、R116Q、V117G、N126G、N126A、N128S、N128E、Q129E、G133A、G133D、E138A、A139S、W140H、T141S、T141C、T141G、F143M、F143L、F145A、P146L、Q151L、K156F、K156Q、K156L、K156S、K156G、R158S、H161C、T165I、D166S、Q169L、S170A、S170V、R171A、Q172L、Q172E、L173I、A174V、N175G、K179L、R181A、R181G、G184D、K185G、A186S、A186D、T193S、Y203W、Y203L、D209S、D209M、D209V、H210N、E212G、E212I、V213C、V213W、N215C、L217S、N218S、R219L、V222E、N226C、T227L、L228F、K242A、F245G、L250C、H252C、V253A、V253L、T257V、G258P、K259L、N260W、N260G、V264L、K269W、L279Q、K281A、M286L、P292L、L293T、L293G、Y295F、L297W、Q299S、Q299L、Q299R、N306V、L312F、L312V、G315V、T316S、V318L、R320V、R320C、H321T、S323N、T327V T327L、V329S、P336L、G337V、S342A、V344L、Q345L、G346R、W347L、P350S、P350Q、L351W、Q361V、Y363L、Y368H、Y372A、I374Y、S376R、S376L、V379L、P380V、S381V、D387Q、D387L、L390V、A392I、Q395E、Q395K、Q395R、H402L、F405G、T414A、E416V、N418M、N418G、A419M、M430L、S431A、G435N、W439E、W439R、W439N、K446G、V450T、G456Y、S459E、S459Q、N465L、N465R、D467C、G476Y、以及W482F，其中编号对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，并且其中这些取代提供具有针对稳定性的量度的≥1.0的IF以及针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.0的IF的变体。

在一个实施例中，该变体包括在选自下组的一个或多个位置中的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、T5、G7、I9、Q11、N19、Q22、W24、N25、R26、H28、N29、N30、A31、L34、K35、I39、T40、A41、I42、I44、A47、W48、T51、S52、Q53、V56、G59、T74、V75、T81、I89、R90、S91、L92、N95、I97、Q98、Y100、K108、F113、R116、V117、N126、N128、Q129、G133、E138、A139、W140、T141、F143、F145、P146、Q151、K156、R158、H161、T165、D166、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、K179、R181、G184、K185、A186、T193、E194、Y203、D209、H210、E212、V213、N215、L217、N218、R219、V222、N226、T227、L228、K242、K245、L250、H252、V253、T257、G258、K259、N260、V264、K269、L279、K281、M286、P292、L293、Y295、L297、Q299、N306、L312、G315、T316、V318、R320、H321、S323、T327、V329、P336、G337、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、P350、Q361、Y363、I374、S376、V379、P380、S381、D387、L390、A392、Q395、H402、F405、E416、N418、A419、S431、G435、W439、K446、V450、G456、S459、N465、D467、G476、以及W482，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，并且其中该一个或多个取代提供针对在标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.0的IF以及针对稳定性的量度的≥1.0的IF。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H1V、H2T、T5L、G7F、G7E、G7V、G7E、G7D、I9M、I9L、Q11L、Q11V、N19G、N19S、Q22C、Q22A、W24F、N25V、R26L、H28E、N29G、N29A、N30S、A31S、L34Y、K35L、I39L、T40A、T40Q、A41Q、I42V、I44T、A47G、W48C、W48I、W48Y、W48F、T51A、S52V、S52M、Q53L、Q53V、V56L、G59E、T74L、T74V、V75T、T81G、I89A、R90L、S91A、S91G、L92C、N95G、N95E、N95S、I97V、Q98V、Q98L、Y100W、K108V、F113M、F113V、F113E、F113Y、R116Q、V117G、N126G、N126A、N128S、N128E、Q129E、G133A、G133D、E138A、A139S、W140H、T141C、T141G、T141S、F143M、F143L、F145A、P146L、Q151L、K156Q、K156F、K156L、K156S、K156G、R158S、H161C、T165I、D166S、Q169L、S170A、S170V、R171A、Q172E、Q172L、L173I、A174V、N175G、K179L、R181A、R181G、G184D、K185G、A186S、A186D、A186H、T193S、Y203L、Y203W、D209S、D209M、D209V、H210N、E212G、E212I、V213C、V213W、N215C、L217S、N218S、R219L、V222E、N226C、T227L、L228F、K242A、F245G、L250C、H252C、V253A、V253L、T257V、G258P、K259L、N260W、V264L、K269W、L279Q、K281A、M286L、P292L、L293T、L293G、Y295F、L297W、Q299S、Q299L、Q299R、N306V、L312F、L312V、G315V、T316S、V318L、R320C、R320V、H321T、S323N、T327L、T327V、V329S、P336L、G337V、S342A、V344L、Q345L、G346R、W347L、P350S、P350Q、Q361V、Y363L、I374Y、S376R、S376L、V379L、P380V、S381V、D387Q、D387L、L390V、A392I、Q395E、Q395K、Q395R、H402L、F405G、E416V、N418M、N418G、A419M、S431A、G435N、W439E、W439R、W439N、K446G、V450T、G456Y、S459Q、N465L、N465R、D467C、G476、以及W482F，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，其中该一个或多个取代提供针对在标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.0的IF以及针对稳定性的量度的≥1.0的IF。

在一个实施例中，该变体包括在选自下组的一个或多个位置中的取代，该组由以下各项组成：H1、G7、Q22、N25、R26、H28、N29、W48、S52、Q53、V56、G59、T74、V75、R90、N95、Q98、K108、F113、R116、V117、N128、Q129、G133、A139、W140、T141、F143、F145、P146、Q151、K156、T165、Q169、S170、R171、Q172、A174、K179、R181、K185、A186、T193、Y203、D209、E212、N215、L217、N226、K242、K259、N260、K269、K281、P292、L293、L297、N306、L312、G315、R320、H321、P336、V344、P350、Y363、Y368、S381、D387、A392、Q395、E416、N418、以及S431；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，该一个或多个取代提供针对稳定性的量度的≥1.3的改进因子以及针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.3的改进因子。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H1V、G7F、G7V、G7E、G7E、Q22A、N25V、R26L、H28E、N29G、W48C、W48I、W48F、S52M、S52V、Q53V、Q53L、V56L、G59E、T74L、V75T、R90L、N95E、N95S、N95G、Q98V、Q98L、K108V、F113V、R116Q、V117G、N128S、N128E、Q129E、G133A、G133D、A139S、W140H、T141S、T141C、T141G、F143M、F143L、F145A、P146L、Q151L、K156F、K156Q、K156L、K156S、K156G、T165I、D166S、Q169L、S170A、S170V、R171A、Q172L、Q172E、A174V、K179L、R181A、R181G、K185G、A186S、A186D、T193S、Y203W、Y203L、D209S、D209M、D209V、E212I、N215C、L217S、N226C、K242A、K259L、N260W、K269W、K281A、P292L、L293T、L293G、L297W、N306V、L312F、L312V、G315V、R320V、H321T、P336L、V344L、P350Q、Y363L、Y368H、S381V、D387L、A392I、Q395K、Q395R、E416V、N418M、N418G、以及S431A，其中编号是根据SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列，并且其中该一个或多个取代提供具有针对稳定性的量度的≥1.3的IF以及针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.3的IF的变体。

在一个实施例中，该变体包括在选自下组的一个或多个位置中的取代，该组由以下各项组成：H1、T5、G7、Q22、N25、R26、N29、W48、S52、Q53、T74、R90、N95、Q98、K108、F113、R116、V117、N128、Q129、G133、A139、W140、T141、F143、F145、P146、Q151、K156、T165、D166、Q169、S170、R171、Q172、A174、K179、R181、K185、A186、Y203、E212、N215、N226、K242、N260、K269、L279、K281、L293、Q299、N306、L312、G315、R320、V344、P350、Y363、I374、V379、S381、D387、A392、Q395、E416、N418、以及S431，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，并且其中该一个或多个位置中的取代提供针对在标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.3的IF以及针对稳定性的量度的≥1.3的IF。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H1V、T5L、G7F、G7E、G7V、G7E、Q22A、N25V、R26L、N29G、W48C、W48I、S52V、S52M、Q53L、Q53V、T74L、R90L、N95G、N95E、N95S、Q98V、Q98L、K108V、F113V、R116Q、V117G、N128S、N128E、Q129E、G133A、G133D、A139S、W140H、T141C、T141G、T141S、F143M、F145A、P146L、Q151L、K156Q、K156F、K156L、K156S、K156G、T165I、D166S、Q169L、S170A、S170V、R171A、Q172E、Q172L、A174V、K179L、R181A、R181G、K185G、A186S、A186D、Y203L、Y203W、E212G、E212I、N215C、N226C、K242A、N260W、K269W、L279Q、K281A、L293T、L293G、Q299S、Q299L、N306V、L312F、L312V、G315V、R320V、V344L、P350Q、Y363L、I374Y、V379L、S381V、D387L、A392I、Q395K、Q395R、E416V、N418M、N418G、以及S431A，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，并且其中该一个或多个取代提供针对在标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.3的IF以及针对稳定性的量度的≥1.3的IF。

在一个实施例中，该变体包括在选自下组的一个或多个位置中的取代，该组由以下各项组成：H1、G7、Q22、S52、Q53、G59、R116、V117、N128、A139、T141、F143、F145、P146、Q151、K156、T165、D166、Q169、S170、R171、R181、K185、A186、Y203、E212、N215、K242、K269、N306、L312、以及N418，其中编号是根据SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列，并且其中该一个或多个位置中的取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的IF≥1.5以及针对稳定性的量度的≥1.5的IF。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H1V、G7E、Q22A、S52V、Q53V、Q53L、G59E、R116Q、V117G、N128S、N128E、A139S、T141S、T141G、F143L、F145A、P146L、Q151L、K156F、K156L、K156S、K156G、T165I、D166S、Q169L、S170A、S170V、R171A、R181A、R181G、K185G、A186S、A186D、Y203W、Y203L、E212I、N215C、K242A、K269W、N306V、L312F、L312V、以及N418G，其中编号是根据SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列，并且其中该一个或多个位置中的取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的IF≥1.5以及针对稳定性的量度的≥1.5的IF。

在一方面，本发明涉及α-淀粉酶变体，其中该变体是具有淀粉酶活性的α-淀粉酶的成熟形式，并且包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：E14、D20、Q22、G59、R116、A119、S132、G133、Y135、K156、R158、W159、Y160、K185、W187、Y202、D236、V238、K242、G337、E341、Y368、G369、D377、Y382、以及K445；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸；并且其中该取代提供选自下组的至少一种改进的特性，该组由以下各项组成：改进的洗涤性能、改进的洗涤剂稳定性和改进的热稳定性。

如在此使用的术语“热稳定性”是指酶在暴露于升高的温度后保留活性的能力。酶(如α-淀粉酶或α-淀粉酶变体)的热稳定性是按以分钟、小时或天(在此期间酶活性在定义条件下损失一半)给出的半衰期(t_1/2)进行测量。半衰期可以通过在暴露于升高的温度(即，受其激发)之后测量残余的α-淀粉酶活性来计算。

在另一方面，本发明涉及α-淀粉酶变体，其中该变体是具有淀粉酶活性的α-淀粉酶的成熟形式，并且包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：E14、D20、Q22、G59、R116、A119、S132、G133、Y135、K156、R158、W159、Y160、K185、W187、Y202、D236、V238、K242、G337、E341、Y368、G369、D377、Y382、以及K445，其中这些位置对应于SEQID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸；并且其中该取代提供了在pH 8.0和25℃下具有针对比活性的量度的≥1.0的改进因子以及针对洗涤剂组合物中的稳定性和热稳定性的量度的≥1.0的改进因子的α-淀粉酶变体。

在一个实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：D377V、W159D、K242E、R158Y、A119Y、D236P、R158E、Y135D、W187G、Y382L、R158V、G369I、G337M、K156G、W159E、Y160E、R158T、G59A、Y202S、K185V、S132D、Q22A、K156E、R116F、K185G、K242S、G133D、G369R、Y382E、D20R、Y368L、E341I、K445E、Y203V、V238W、以及E14M，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置。

在一个实施例中，在该具体位置被取代的氨基酸选自下组，该组由以下各项组成：A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y，条件是被取代的氨基酸与在所述具体位置的天然存在的氨基酸不同。

如在此使用的术语“天然存在的氨基酸”是指在任何修饰之前的亲本α-淀粉酶中(例如在α-淀粉酶的野生型氨基酸序列中)发现的来自A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y的组的任何氨基酸。

在某些实施例中，该变体可以包括在α-淀粉酶的具体环内的成对缺失，其已被发现进一步稳定α-淀粉酶。因此，在一个实施例中，该变体另外包括对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的R181、G182、D183和G184的氨基酸残基的成对缺失，条件是当在对应于R181和/或G184的位置中的氨基酸被取代时，成对缺失在对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的G182和D183的位置。

如在此使用的术语“成对缺失”是指在两个单独的位置中的一种缺失。这样的位置可以彼此相邻，但不限于这样的相邻对。因此，成对缺失也可以是一个氨基酸和另一个氨基酸的缺失，另一个氨基酸可以进一步距第一缺失的下游或上游多达三个氨基酸远。因此，在一个实施例中，该变体包括选自下组的氨基酸残基的成对缺失，该组由以下各项组成：R181+G182、R181+D183、R181+G184、G182+D183、G182+G182、和D183+G184，其中编号是根据SEQID NO:3中阐明的氨基酸序列。

在具体实施例中，成对缺失在与SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的位置G182和D183相对应的位置。

在另外的方面，本发明涉及α-淀粉酶变体，其中所述变体是具有淀粉酶活性的成熟形式，并且包括a)在对应于SEQ ID ID NO:3中阐明的氨基酸序列的位置R181、G182、D183和G184的两个或更多个位置处的缺失和/或取代；和b)在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置。

在一个实施例中，该变体包括a)选自下组的氨基酸残基的成对缺失，该组由以下各项组成：R181+G182、R181+D183、R181+G184、G182+D183、G182+G182、和D183+G184，其中编号是根据SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列，和b)选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H1V、H1L、H1G、H1S、H1C、H2T、H2L、H2M、H2E、H2P、H2G、D3R、D3Y、D3W、D3S、D3F、D3C、D3A、G4Q、G4D、G4R、T5L、T5F、T5W、T5Q、T5G、T5E、T5V、G7F、G7V、G7E、G7E、G7D、G7L、G7A、G7R、G7S、G7N、T8A、T8S、I9C、I9M、I9L、M10L、Q11C、Q11L、Q11V、Q11M、Y12V、Y12A、Y12F、F13Y、F13I、E14Q、E14L、E14M、E14S、E14F、W15G、W15S、W15I、W15F、W15H、N16R、N16G、N16Q、V17D、V17G、V17E、V17Q、V17A、V17T、V17L、P18L、N19G、N19S、N19Y、N19T、N19V、D20R、Q22C、Q22A、Q22Y、Q22N、Q22S、Q22M、Q22T、Q22E、H23W、W24H、W24F、N25V、N25R、N25L、N25T、N25S、N25G、N25E、N25E、R26L、R26E、R26G、R26D、R26M、R26I、R26S、R26W、R26A、R26F、L27A、L27M、H28A、H28E、H28R、H28M、H28W、H28K、H28I、N29G、N29K、N29V、N29W、N29C、N29L、N29A、N30S、N30R、N30H、N30L、N30T、N30E、A31W、A31S、A31G、A31R、A31V、Q32D、Q32G、Q32L、Q32A、N33F、N33A、N33R、N33D、L34F、L34Y、K35L、K35E、K35W、K35Q、N36R、N36Q、N36A、N36E、N36V、N36P、N36W、N36T、A37R、A37G、A37T、A37S、A37E、G38N、G38M、G38Y、G38K、I39M、I39L、I39V、T40D、T40E、T40Q、T40A、T40S、A41E、A41N、A41M、A41Q、A41D、I42A、I42V、I42L、W43R、I44T、I44L、I44V、P45A、P46G、A47S、A47G、A47T、W48G、W48L、W48C、W48I、W48H、W48A、W48M、W48P、W48Q、W48Y、W48F、K49Q、G50P、G50S、G50N、T51S、T51G、T51P、T51L、T51C、T51A、S52M、S52V、S52C、S52F、S52A、S52D、S52K、S52N、S52E、S52T、S52I、S52L、Q53V、Q53L、Q53M、Q53G、N54G、N54K、N54V、N54T、N54L、N54I、N54S、D55G、D55V、D55I、V56L、V56M、V56T、G59E、G59S、G59A、A60V、A60F、A60S、A60W、A60L、A60G、A60T、Y61F、L63V、L63P、L63I、L63H、L63K、L63C、L63G、L63A、Y64W、Y64S、Y64V、Y64I、Y64H、Y64M、Y64C、Y64R、Y64G、Y64L、Y64A、L66M、E68D、E68S、E68M、E68C、E68T、E68V、E68Q、E68Y、F69H、F69W、N70G、N70A、N70T、N70S、N70E、Q71N、Q71E、Q71D、Q71I、Q71V、K72Y、K72R、G73V、G73C、G73L、G73E、T74V、T74L、T74N、V75T、V75E、V75G、R76S、R76G、R76A、R76V、T77A、T77S、T77V、K78L、K78T、K78A、T81W、T81L、T81G、K82A、K82G、A83G、A83E、A83Q、A83R、A83S、A83F、A83V、E84F、E84D、E84M、E84W、L85V、E86L、E86D、E86W、E86R、R87M、R87A、R87E、A88S、A88G、A88V、I89H、I89P、I89A、I89L、R90L、R90G、S91E、S91A、S91G、S91V、S91T、L92C、L92F、K93W、K93G、K93L、N95L、N95W、N95C、N95E、N95S、N95G、N95D、N95R、G96Q、G96R、I97M、I97V、I97L、Q98C、Q98M、Q98T、Q98V、Q98L、Q98F、Q98W、Q98P、Q98H、V99I、V99L、V99S、V99T、V99G、V99E、Y100V、Y100F、Y100W、V103G、V103A、V103S、V103T、H107Q、H107M、K108V、G109A、G109D、G109F、G109S、G110C、A111S、D112V、D112F、D112C、D112K、D112E、F113L、F113M、F113V、F113E、F113K、F113C、F113D、F113Q、F113Y、T114S、T114V、T114L、E115C、E115A、R116N、R116L、R116I、R116D、R116T、R116G、R116E、R116S、R116C、R116V、R116Q、R116K、R116F、R116H、R116W、V117C、V117L、V117S、V117W、V117A、V117G、V117I、V117M、V117E、Q118V、Q118G、Q118E、Q118F、Q118R、A119Y、A119W、V120I、V120D、V120L、V120C、V120A、V120N、E121P、E121G、E121V、E121M、E121D、V122E、V122P、V122L、V122I、V122F、N123G、N123A、N123E、N123W、N123T、N123P、N123K、N123V、P124R、P124G、Q125E、Q125T、N126E、N126G、N126A、N126R、N126T、R127G、R127S、R127C、R127W、R127L、R127V、R127F、R127Y、N128C、N128S、N128E、N128P、N128G、N128A、Q129L、Q129C、Q129E、E130C、V131L、V131E、V131I、S132A、S132H、S132P、S132C、S132E、S132D、A132Q、S132N、G133S、G133T、G133L、G133V、G133I、G133E、G133A、G133D、G133R、T134V、T134D、T134E、Y135L、Y135V、Y135S、Y135R、Y135T、Y135W、Y135K、Y135G、Y135P、Y135M、Y135D、Y135H、Y135F、Y135E、Q136E、Q136W、Q136G、I137A、I137S、I137G、I137V、E138A、E138Y、E138T、E138L、A139M、A139S、A139G、A139V、A139T、A139P、W140Y、W140S、W140A、W140H、T141M、T141S、T141C、T141G、G142D、G142E、G142R、G142A、F143M、F143L、F143I、N144C、N144M、N144K、N144G、N144R、F145C、F145S、F145A、F145N、F145Q、F145T、F145H、P146S、P146V、P146C、P146L、P146M、P146T、G147V、G147P、G147D、G147S、G147I、G147L、G147C、G149C、G149Y、G149L、G149A、N150C、N150D、N150E、Q151T、Q151C、Q151L、A151I、S153C、S153G、S153T、S154M、S154E、S154A、S154V、F155H、F155T、F155L、F155W、K156Y、K156V、K156A、K156D、K156W、K156P、K156E、K156C、K156F、K156Q、K156L、K156S、K156G、K156N、K156T、W157L、R158M、R158A、R158G、R158Q、R158W、R158L、R158T、R158V、R158E、R158Y、R158S、W159N、W159G、W159T、W159C、W159E、W159D、W159S、W159H、Y160Q、Y160M、Y160T、Y160A、Y160S、Y160V、Y160G、Y160I、Y160L、Y160E、Y160W、Y160R、Y160H、H161N、H161C、F162M、F162L、F162Y、F162I、D163S、D163K、D163A、D163R、D163L、G164S、G164T、G164C、T165L、T165M、T165S、T165G、T165I、T165V、T165E、D166T、D166N、D166S、W167Y、W167G、W167D、W167FD168M、D168S、D168G、Q169A、Q169L、Q169S、Q169V、Q169F、Q169E、S170A、S170V、S170Q、S170W、S170G、S170F、S170T、S170L、R171F、R171S、R171K、R171V、R171A、R171M、Q172S、Q172L、Q172E、Q172C、Q172R、Q172G、Q172W、Q172K、L173G、L173N、L173M、L173S、L173Y、L173V、L173I、L173A、L173F、A174G、A174V、A174L、A174M、A174K、A174S、N175L、N175V、N175I、N175G、N175S、R176E、R176W、R176G、R176M、R176Y、R176M、R176T、R176K、I177L、I177S、I177G、Y178V、Y178R、Y178K、Y178W、K179C、K179E、K179S、K179W、K179A、K179G、K179T、K179F、K179L、F180A、F180L、R181K、R181P、R181S、R181V、R181Q、R181E、R181A、R181G、R181D、G184L、G184R、G184V、G184T、G184D、K185A、K185D、K185N、K185V、K185G、A186C、A186S、A186D、A186T、A186Q、A186V、A186N、A186E、A186H、W187G、D188Q、D188G、D188R、D188M、D188L、D188V、W189R、W189A、W189G、W189C、E190D、E190N、E190A、V191M、V191A、D192E、D192Q、D192S、T193K、T193V、T193C、T193P、T193S、T193D、T193R、T193G、E194S、E194D、E194L、E194Q、N195R、N195A、N195T、N195F、G196A、G196V、G196P、N197G、N197V、N197Y、N197C、N197D、Y198W、Y198A、Y198G、D199G、D199S、D199A、Y200W、Y200F、Y200C、Y200V、Y200T、Y200L、Y200A、Y200G、Y200S、M202T、M202L、Y203F、Y203G、Y203C、Y203I、Y203Q、Y203H、Y203T、Y203M、Y203S、Y203V、Y203W、Y203L、A204P、A204R、A204C、A204H、A204W、A204F、A204L、A204Y、A204D、A204G、D205C、D205R、D205A、D205L、V206H、V206Q、V206P、V206A、V206S、V206K、V206L、V206I、V206M、V206F、V206Y、M208R、M2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NO:3中阐明的氨基酸序列。

根据本发明的变体可以进一步包括在一个或多个(例如若干个)其他位置处的一个或多个另外的改变(与如上所述的那些相比)。

这些氨基酸改变可以具有微小性质，即，不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地1-30个氨基酸的小缺失；小氨基或羧基末端延伸，如氨基末端甲硫氨酸残基；高达20-25个残基的小接头肽；或通过改变净电荷或另一功能，例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域，有利于纯化的小的延伸。

保守取代的实例是在下组的范围内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代在本领域是已知的并且例如由H.Neurath and R.L.Hill,1979,In,The Proteins,Academic Press,New York[H.Neurath和R.L.Hill，1979，在蛋白质，学术出版社，纽约]中描述。常见取代是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、以及Asp/Gly。

可替代地，这些氨基酸改变具有如下此种性质：改变多肽的物理化学特性。例如，氨基酸改变可以提高多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变最适pH等。

可以根据本领域已知的程序，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham andWells,1989,Science 244:1081-1085[Cunningham和Wells，1989，科学，244：1081-1085])来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一种技术中，在分子中的每个残基处引入单丙氨酸突变，并测试所得的突变分子的α-淀粉酶活性以鉴定对分子活性关键的氨基酸残基。还参见Hilton et al.,1996,J.Biol.Chem.271:4699-4708[Hilton等人，1996，生物化学杂志，271：4699-4708]。也可结合假定接触位点氨基酸的突变，如通过以下技术例如核磁共振、结晶学、电子衍射、或光亲和标记进行确定，对结构进行物理学分析，从而确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见例如，de Vos et al.,1992,Science 255:306-312[de Vos等人，1992，科学，255：306-312]；Smith et al.,1992,J.Mol.Biol.224:899-904[Smith等人，1992，分子生物学杂志，224：899-904]；Wlodaver et al.,1992,FEBS Lett.309:59-64[Wlodaver等人，1992，欧洲生物化学学会联盟通讯，309：59-64]。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。

在一个实施例中，该变体包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个位置中的修饰。

在一个实施例中，该变体包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个位置处的取代。

在本文披露的任何实施例中，可以如实例[稳定性]中所述确定稳定性，并且可以如实例[比活性]中所述确定比活性，当使用标准A洗涤剂组合物或标准X洗涤剂组合物时。

根据本发明的变体可以由400到485个氨基酸，例如410到485个、425到485个以及440到485个氨基酸组成。

多核苷酸

本发明还涉及编码本发明的变体的多核苷酸。因此，具体而言，本发明涉及编码如下变体的多核苷酸，该变体包括在对应于以下位置的一个或多个位置中的改变：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置。

如在此使用的术语“进行编码的多核苷酸”是指编码具有α-淀粉酶活性的成熟多肽的多核苷酸。在一方面，该多肽编码序列是SEQ ID NO:1中阐明的核苷酸序列。

在一个实施例中，编码根据本发明的变体的多核苷酸与SEQ ID NO:1的多核苷酸具有至少80％，例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％、例如至少96％、例如至少97％、例如至少98％、例如至少99％但小于100％的序列一致性。

核酸构建体

本发明还涉及包括编码本发明的变体的、可操作地连接至一个或多个控制序列上的多核苷酸的核酸构建体，该一个或多个控制序列在与控制序列相容的条件下指导编码序列在适合的宿主细胞中的表达。因此，具体而言，本发明涉及包括编码如下变体的多肽的核酸构建体，该变体包括在对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的位置H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482的一个或多个位置中的改变，其中该多肽为与一个或多个控制序列可操作地连接。

如在此使用的术语“核酸构建体”是指单链或双链的核酸分子，该核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或以本来不存在于自然界中的方式被修饰成包含核酸的区段，或是合成的，该核酸分子包括一个或多个控制序列。核酸包括DNA、RNA、异源双链体和能够编码多肽的合成分子。核酸可以是单链的或双链的，并且可以是化学修饰。术语“核酸”和“多核苷酸”可以互换使用，但构成相同的含义和目的。由于遗传密码是简并的，可以使用多于一个密码子来编码具体的氨基酸，并且本发明的组合物和方法包括编码具体氨基酸序列的核苷酸序列。除非上下文另外指明，否则分别地，核酸以5'至3'方向从左到右书写；氨基酸序列以氨基到羧基方向从左到右书写。

如在此使用的术语“可操作地连接”是指如下的构造，其中，控制序列相对于多核苷酸的编码序列安置在适当位置处，从而使得该控制序列指导该编码序列的表达。

可以按多种方式来操纵该多核苷酸以提供变体的表达。取决于表达载体，在多核苷酸插入载体之前对其进行操纵可以是令人希望的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术在本领域是熟知的。

控制序列可以是启动子，即由宿主细胞识别用于表达该多核苷酸的多核苷酸。启动子包括介导该变体的表达的转录控制序列。该启动子可以是在宿主细胞中显示出转录活性的任何多核苷酸，包括突变型、截短型及杂合型启动子，并且可以是从编码与该宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因获得。

如在此使用的术语“启动子”是指涉及结合RNA聚合酶以启动基因转录的调节序列，并且可以是诱导型启动子或组成型启动子。本领域技术人员将知道适于所用具体核酸构建体的可能的启动子。

表达载体

本发明还涉及包括编码本发明的变体的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。因此，本发明涉及包括以下项的表达载体(任选地重组的)：编码包括在对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的位置H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482的一个或多个位置中的改变的变体的多核苷酸，启动子，以及转录和翻译停止信号。

如在此使用的术语“表达载体”是指线性或环状DNA分子，该分子包括编码变体的多核苷酸并且可操作地连接至提供用于其表达的控制序列。

各种核苷酸和控制序列可以连接在一起以产生重组表达载体，该重组表达载体可以包括一个或多个合宜的限制性位点以允许在这样的位点插入或取代编码该变体的多核苷酸。可替代地，该多核苷酸可以通过将该多核苷酸或包括该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中来表达。在产生该表达载体时，该编码序列位于该载体中，这样使得该编码序列与用于表达的适当控制序列可操作地连接。

重组表达载体可以是可便利地经受重组DNA程序并且可引起多核苷酸表达的任何载体(例如，质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于该载体与有待引入该载体的宿主细胞的相容性。该载体可以是线性的或闭合的环状质粒。

载体可以是自主复制载体，即，作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如，质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。该载体可以包含用于确保自我复制的任何装置。可替代地，该载体可以是这样载体，当它被引入该宿主细胞中时，被整合到基因组中并且与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外，可以使用单一载体或质粒或两个或更多个载体或质粒(这些载体或质粒共同包含待引入到宿主细胞的基因组中的总DNA)或转座子。

该载体优选地包含一个或多个允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的选择性标记。选择性标记是这样一种基因，该基因的产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、重金属抗性、营养缺陷型的原养型等。

本领域技术人员将知道哪种表达载体是最适用于特异性表达系统。因此，本发明不局限于任何特异性表达载体，但是包括编码根据本发明的变体的多核苷酸的任何表达载体被视为本发明的一部分。

宿主细胞

本发明还涉及重组宿主细胞，这些重组宿主细胞包括编码本发明的变体的、可操作地连接至一个或多个控制序列的多核苷酸，该一个或多个控制序列指导本发明的变体的产生。因此，本发明涉及包括以下项的宿主细胞(任选地重组的)：编码包括在对应于SEQ IDNO:3中阐明的氨基酸序列的位置H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482的一个或多个位置中的改变的变体的多核苷酸，其可操作地连接至指导变体产生的一个或多个控制序列。

如在此使用的术语“宿主细胞”是指对于用包括本发明多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行的转化、转染、转导等是易感的任何细胞类型。术语“宿主细胞”包括由于复制期间发生的突变而与亲本宿主细胞不一致的亲本宿主细胞的任何后代。

将包括多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中，这样使得该构建体或载体被维持作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体，如早前所述。宿主细胞的选择在很大程度上将取决于编码该变体的基因及其来源。

宿主细胞可以是在重组产生变体中有用的任何细胞，例如原核细胞或真核细胞。

原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于：芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、海洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属、以及链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于：弯曲杆菌属、大肠杆菌、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属、假单胞菌属、沙门氏菌属、以及脲原体属。

根据本发明的方法

本发明还涉及产生变体的方法，这些方法包括：(a)在适于表达该变体的条件下培养本发明的宿主细胞；并且(b)回收该变体。因此，本发明涉及产生如下变体的方法，该变体包括在对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的位置H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482的一个或多个位置中的改变，其中该方法包括以下步骤：a)在适于表达该变体的条件下培养根据本发明的宿主细胞；并且b)回收该变体。

使用本领域已知的方法在适合于产生该变体的营养培养基中培养这些宿主细胞。例如，可以通过摇瓶培养，或者在适合的培养基中并在允许该变体表达和/或分离的条件下在实验室或工业发酵罐中进行小规模或大规模发酵(包括连续发酵、分批发酵、分批给料发酵或固态发酵)来培养该细胞。培养是使用本领域已知的程序，在适合营养培养基中发生，该培养基包括碳和氮来源及无机盐。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如，在美国典型培养物保藏中心的目录中)制备。如果该变体被分泌到该营养培养基中，则该变体可直接从该培养基中回收。如果该变体没有分泌，则它可从细胞裂解液中回收。

可以使用特异性针对具有α-淀粉酶活性的多肽的本领域已知的方法来检测该变体。这些检测方法包括但不限于：特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，可以使用酶测定来确定该变体的活性。

可以使用本领域已知的方法来回收该变体。例如，可以通过多种常规程序从该营养培养基中回收该变体，这些常规程序包括但不限于：收集、离心、过滤、萃取、喷雾干燥、蒸发、或沉淀。

可以通过本领域已知的多种程序来纯化变体以获得基本上纯的变体，这些程序包括但不限于：色谱法(例如，离子交换色谱、亲和色谱、疏水作用色谱、色谱聚焦、以及尺寸排阻色谱)、电泳程序(例如，制备型等电点聚焦)、差别溶解度(例如，硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE、或萃取(参见例如，Protein Purification,Janson and Ryden,editors,VCH Publishers,New York,1989[蛋白质纯化，Janson和Ryden编辑，VCH出版社，纽约，1989])。

在可替代的方面，没有回收该变体，而是将表达该变体的本发明的宿主细胞用作该变体的来源。

在具体实施例中，产生变体的方法包括以下步骤：a)在对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的位置181、182、183和184的两个或更多个位置处引入缺失和/或取代；并且b)在选自下组的一个或多个位置处引入取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置。

此外，本发明涉及用于获得变体的方法，该方法包括向与SEQ ID NO:4的多肽具有至少80％序列一致性的亲本α-淀粉酶中引入以下各项：

(a)在该亲本α-淀粉酶中的两个或更多个位置的取代和/或缺失，所述位置对应于SEQ ID NO:3的成熟多肽的位置181、182、183和184；和

(b)在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，

其中所得变体与SEQ ID NO:3或4的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％、例如至少97％，但小于100％的序列一致性，其中所述变体具有α-淀粉酶活性；

(c)回收所述变体。

可以使用本领域已知的任何诱变程序来制备这些变体，如定点诱变、合成基因构建、半合成基因构建、随机诱变、改组等。

定点诱变是在编码该亲本的多核苷酸中的一个或多个限定位点处引入一个或多个(例如，若干个)突变的技术。

通过涉及使用包含所希望的突变的寡核苷酸引物的PCR可以体外实现定点诱变。也可以通过盒式诱变进行体外定点诱变，盒式诱变涉及由限制酶在包括编码亲本多肽的多核苷酸的质粒中的位点处切割并且随后将包括突变的寡核苷酸连接在多核苷酸中。通常，消化该质粒与该寡核苷酸的限制酶是相同的，从而允许该质粒的粘性末端以及插入片段彼此连接。参见例如，Scherer and Davis,1979,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76:4949-4955[Scherer和Davis，1979，美国国家科学院院刊，76：4949-4955]；和Barton et al.,1990,Nucleic Acids Res.18:7349-4966[Barton等人，1990，核酸研究，18：7349-4966]。

还可以通过本领域已知的方法体内实现定点诱变。参见例如，美国专利申请公开号2004/0171154；Storici et al.,2001,Nature Biotechnol.19:773-776[Storici等人，2001，自然生物技术，19：773-776]；Kren et al.,1998,Nat.Med.4:285-290[Kren等人，1998，自然医学，4：285-290]；以及Calissano and Macino,1996,FungalGenet.Newslett.43:15-16[Calissano和Macino，1996，真菌遗传学通讯，43：15-16]。

任何定点诱变方法可用于本发明。存在可用于制备变体的很多可商购的试剂盒。本技术领域技术人员非常了解这样的商业试剂盒以及如何使用它们。

合成基因构建需要体外合成设计的多核苷酸分子以编码感兴趣的多肽。基因合成可以利用多种技术来进行，如由Tian等人(2004,Nature 432:1050-1054[2004，自然，432：1050-1054])所述的基于多路微芯片的技术、以及其中在光可编程的微流芯片上合成并组装寡核苷酸的类似技术。

可以做出单个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入并且使用诱变、重组和/或改组的已知方法进行测试，随后进行相关筛选程序，如由Reidhaar-Olson and Sauer,1988,Science 241:53-57[Reidhaar-Olson和Sauer，1988，科学，241：53-57]；Bowie and Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:2152-2156[Bowie和Sauer，1989，美国国家科学院院刊，86：2152-2156]；WO 95/17413；或WO 95/22625披露的那些。可以使用的其他方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如，Lowman et al.,1991,Biochemistry 30:10832-10837[Lowman等人，1991，生物化学，30：10832-10837]；美国专利号5,223,409；WO 92/06204)和区域定向诱变(Derbyshire et al.,1986,Gene 46:145[Derbyshire等人，1986，基因，46：145]；Ner etal.,1988,DNA 7:127[Ner等人，1988，DNA 7：127])。

诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(Ness et al.,1999,Nature Biotechnology 17:893-896[Ness等人，1999，自然生物技术，17：893-896])。编码活性多肽的诱变的DNA分子可以回收自宿主细胞，并且使用本领域的标准方法对其进行迅速测序。这些方法允许迅速确定多肽中单个氨基酸残基的重要性。

通过组合合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组的多个方面来实现半合成基因构建。半合成构建典型地是利用合成的多核苷酸片段的过程结合PCR技术。因此，基因的限定区域可以重新合成，而其他区域可以使用位点特异性诱变引物来扩增，而还有其他区域可以进行易错PCR或非易错PCR扩增。然后可以对多核苷酸子序列进行改组。

本发明还涉及改进具有SEQ ID NO:3或4或与其具有至少65％序列一致性的氨基酸序列的亲本α-淀粉酶的性能(如洗涤性能)的方法，所述方法包括以下步骤：a)在对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的位置181、182、183和184的两个或更多个位置处引入成对缺失和/或取代；并且b)在选自下组的一个或多个位置处引入取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置；所述方法由此提供所述亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，其中所述变体与如在SEQ ID NO:3或4中阐明的氨基酸序列具有至少65％，例如至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％、例如至少97％、例如至少99％，但小于100％的序列一致性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性和与所述亲本α-淀粉酶相比改进的性能，

其中该变体与SEQ ID NO:3或4中阐明的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％，但小于100％的序列一致性，并且其中该变体具有α-淀粉酶活性和与亲本α-淀粉酶相比改进的性能。

在一个实施例中，该变体具有如下亲本多肽的至少50％，例如至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少100％的活性，该亲本多肽具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列。

在一个实施例中，根据Phadebas测定来确定其活性。

α-淀粉酶活性可通过使用Phadebas底物(例如来自麦戈尔生命科学公司，隆德，瑞典)的方法来确定。Phadebas片剂包括互联淀粉聚合物，这些聚合物呈不溶于水的球状微球形式。将蓝色染料共价结合至这些微球。微球中的互联淀粉聚合物以与α-淀粉酶活性成比例的速度降解。当α-淀粉酶降解了淀粉聚合物时，释放的蓝色染料是可溶于水的并且染料浓度可以通过在620nm下测量吸光度来确定。蓝色的浓度与样品中的α-淀粉酶活性成比例。

将有待分析的变体样品稀释于具有所需pH的活性缓冲液中。将两个底物片剂悬浮于5mL活性缓冲液中并且在磁力搅拌器上混合。在混合底物期间，将150μl转移至微量滴定板(MTP)或PCR-MTP。将30μl稀释的淀粉酶样品添加至150μl底物并且混合。37℃下孵育15分钟。通过添加30μl 1M NaOH并且混合来停止反应。在4000xg下离心MTP 5分钟。将100μl转移至新的MTP并且测量620nm下的吸光度。

该α-淀粉酶样品应稀释成使得620nm下的吸光度在0与2.2之间，并且在活性测定的线性范围内。

因此，在一个实施例中，通过以下方法确定活性，该方法包括以下步骤：

a)在37℃下，用染色的直链淀粉底物孵育根据本发明的α-淀粉酶变体15分钟；并且

b)在OD 620nm处测量吸光度。

在另外的实施例中，通过以下方法确定活性，该方法包括以下步骤：

b)离心该样品；

c)将上清液转移至读取器板，并且

在OD 620nm处测量吸光度。

在另一方面，本发明涉及改进具有SEQ ID NO:3或4或与其具有至少65％序列一致性的氨基酸序列的亲本α-淀粉酶的的稳定性(例如在洗涤剂组合物中的稳定性)和热稳定性的方法，所述方法包括以下步骤：a)在对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的位置181、182、183和184的两个或更多个位置处引入成对缺失和/或取代；并且b)在选自下组的一个或多个位置处引入取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置；所述方法由此提供所述亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，其中所述变体与SEQ ID NO:3或4中阐明的氨基酸序列具有至少80％，例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％、例如至少97％、例如至少99％，但小于100％的序列一致性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性和与所述亲本α-淀粉酶相比改进的稳定性。

在一个实施例中，根据Phadebas测定来确定稳定性。

具体而言，稳定性可以根据包括以下步骤的测定来确定：

a)将待测试的变体在洗涤剂组合物如标准A洗涤剂组合物中在43℃下孵育16小时，并且将另一个样品在4℃下孵育16小时，

b)将包括待测试变体的样品加入底物板，

c)测量620nm处的吸光度，并且

d)计算％残余活性，作为在43℃下孵育的样品与在4℃下孵育的样品之间的比率。

稳定性可以通过本领域已知的其他方法来确定。

在一个实施例中，该变体具有如下亲本α-淀粉酶的至少50％，例如至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少100％的活性，该亲本α-淀粉酶具有SEQ ID NO:3或4的氨基酸序列。

发酵液配制品或细胞组合物

本发明还涉及包括本发明的多肽的发酵液配制品或细胞组合物。因此，在一个实施例中，发酵液配制品或细胞组合物包括以下项：编码包括在对应于位置H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482的一个或多个位置中的改变的变体的多核苷酸，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置；编码包括在对应于位置H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482的一个或多个位置中的改变的变体的核酸构建体，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置；或编码包括在对应于位置H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482的一个或多个位置中的改变的变体的表达载体，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置。该发酵液产物可以进一步包括用于发酵过程的另外的成分，例如像细胞(包括，包含用来产生感兴趣的多肽的编码本发明的多肽的基因的宿主细胞)、细胞碎片、生物质、发酵培养基和/或发酵产物。在一些实施例中，该组合物是包含一种或多种有机酸、杀灭的细胞和/或细胞碎片以及培养基的细胞杀灭的全培养液。

如在此使用的术语“发酵液”是指由细胞发酵产生、不经历或经历最低限的回收和/或纯化的制剂。例如，当微生物培养株在允许蛋白质合成(例如，由宿主细胞的酶表达)并且将蛋白质分泌到细胞培养基中的碳受限的条件下孵育生长到饱和时，产生发酵液。发酵液可以包含在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的或分级的内容物。典型地，发酵液是未分级的并且包括用过的培养基以及例如通过离心去除微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，发酵液包含用过的细胞培养基、胞外酶以及有活力的和/或无活力的微生物细胞。

在一个实施例中，该发酵液配制品和细胞组合物包括第一有机酸组分(包括至少一种1-5碳的有机酸和/或其盐)以及第二有机酸组分(包括至少一种6碳或更多碳的有机酸和/或其盐)。在具体实施例中，该第一有机酸组分是乙酸、甲酸、丙酸、其盐，或前述两种或更多种的混合物；并且该第二有机酸组分是苯甲酸、环己烷羧酸、4-甲基戊酸、苯乙酸、其盐，或前述两种或更多种的混合物。

在一个实施例中，该组合物包含一种或多种有机酸，并且任选地进一步包含杀灭的细胞和/或细胞碎片。在一个实施例中，从细胞杀灭的全培养液中去除这些杀灭的细胞和/或细胞碎片，以提供不含这些组分的组合物。

这些发酵液配制品或细胞组合物可以进一步包括防腐剂和/或抗微生物(例如，抑菌)剂，包括但不限于山梨醇、氯化钠、山梨酸钾、以及本领域已知的其他试剂。

该细胞杀灭的全培养液或组合物可以包括在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的内容物。典型地，该细胞杀灭的全培养液或组合物包括用过的培养基以及在微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)生长至饱和、在碳受限的条件下孵育以允许蛋白质合成之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，该细胞杀灭的全培养液或组合物包括用过的细胞培养基、胞外酶和杀灭的丝状真菌细胞。在一些实施例中，可以使用本领域已知的方法来使细胞杀灭的全培养液或组合物中存在的微生物细胞透性化和/或裂解。

如在此描述的全培养液或细胞组合物典型地是液体，但是可以包括不溶性组分，例如杀灭的细胞、细胞碎片、培养基组分和/或一种或多种不溶性酶。在一些实施例中，可以除去不溶性组分，以提供澄清的液体组合物。

可以通过描述于WO 90/15861或WO 2010/096673中的方法生产本发明的全发酵液配制品和细胞组合物。

酶组合物

本发明还涉及包括根据本发明的变体的组合物。因此，本发明涉及包括如下变体的组合物，该变体包括在对应于以下位置的一个或多个位置中的改变：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置。

在一个实施例中，该组合物包括如下变体，该变体包括：

a)在对应于如在SEQ ID ID NO:7或10中阐明的氨基酸序列的位置R181、G182、D183和G184的两个或更多个位置处的缺失和/或取代，和

b)在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置。优选地，这些组合物富含此种变体。如在此使用的术语“富含”是指该组合物的α-淀粉酶活性已经增加，例如，以至少1.1的富集因子。

这些组合物可以包括本发明的变体作为主要酶组分，例如单组分组合物。在另一个实施例中，该组合物另外包括至少一种另外的活性组分。

如在此使用的术语“活性组分”是指本身是活性的任何生物的或非生物的分子。例如，活性组分是酶。

因此，在一个实施例中，另外的活性组分是酶，例如蛋白酶、脂肪酶、纤维素、果胶酸裂合酶和甘露聚糖酶。因此，这些组合物可以包括多种酶活性，如一种或多种(例如，若干种)选自下组的酶，该组由以下各项组成：水解酶、异构酶、连接酶、裂解酶、氧化还原酶或转移酶，例如，α-半乳糖苷酶、α-葡糖苷酶、氨肽酶、淀粉酶、β-半乳糖苷酶、β-葡糖苷酶、β-木糖苷酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、壳多糖酶、角质酶、环糊精葡萄糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、内切葡聚糖酶、酯酶、葡糖淀粉酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、地衣多糖酶(lichinase)、甘露糖苷酶、变聚糖酶、氧化酶、果胶分解酶、过氧化物酶、植酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶或木聚糖酶。

在一个实施例中，该组合物是洗涤剂组合物，如液体或粉末洗涤剂组合物。

在一个实施例中，该组合物是液体衣物或液体餐具洗涤组合物，例如自动餐具洗涤(ADW)液体洗涤剂组合物，或粉末状衣物洗涤，例如皂条，或粉末状餐具洗涤组合物，例如ADW单位剂量洗涤剂组合物。

另外的组分的选择处于本领域技术人员能力范围内并且包含常规的成分，包括下文所述的示例性非限制性组分。对于织物护理，组分的选择可以包括以下考虑：有待清洁的织物的类型、污渍的类型和/或程度、进行清洁时的温度、以及洗涤剂产品的配方。尽管根据具体的功能性对以下提及的组分由通用标题进行分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被普通技术人员所理解，一种组分可以包括另外的功能性。

在本发明的一个实施例中，可以将本发明的变体以对应于以下各项的量添加至洗涤剂组合物中：每升洗涤液体0.001-100mg的蛋白质，例如0.01-100mg的蛋白质，优选是0.005-50mg的蛋白质，更优选是0.01-25mg的蛋白质，甚至更优选是0.05-10mg的蛋白质，最优选是0.05-5mg的蛋白质，并且甚至最优选是0.01-1mg的蛋白质。考虑了术语“蛋白质”在本文中应理解为包括根据本发明的变体。

用于在自动餐具洗涤(ADW)中使用的组合物例如可以包括按该组合物的重量计0.0001％-50％，例如0.001％-20％、例如0.01％-10％、例如0.05-5％的酶蛋白。

用于在洗衣造粒(laundry granulation)中使用的组合物例如可以包括按该组合物的重量计0.0001％-50％，例如0.001％-20％、例如0.01％-10％、例如0.05％-5％的酶蛋白。

用于在洗衣液中使用的组合物例如可以包括按该组合物的重量计0.0001％-10％，例如0.001％-7％、例如0.1％-5％的酶蛋白。

可以使用常规稳定剂稳定本发明的这些变体以及另外的活性组分，例如另外的酶，这些常规稳定剂例如是多元醇(例如丙二醇或甘油)、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物(例如芳香族硼酸酯)，或苯基硼酸衍生物(例如4-甲酰苯基硼酸)，并且可以如在例如WO92/19709和WO 92/19708中所述配制该组合物。

在某些市场中，不同洗涤条件并且就其本身而言，使用不同类型的洗涤剂。这披露于例如EP 1 025 240中。例如，在亚洲(日本)使用低的洗涤剂浓度体系，而美国使用中等洗涤剂浓度体系，并且欧洲使用高的洗涤剂浓度体系。

低的洗涤剂浓度体系包含以下洗涤剂，其中在洗涤水中存在少于约800ppm的洗涤剂组分。日本洗涤剂典型地被认为是低的洗涤剂浓度体系，因为它们具有存在于洗涤水中的大约667ppm的洗涤剂组分。

中等洗涤剂浓度体系包含以下洗涤剂，其中在洗涤水中存在约800ppm与约2000ppm之间的洗涤剂组分。北美洗涤剂通常被认为是中等洗涤剂浓度体系，因为它们具有存在于洗涤水中的大约975ppm的洗涤剂组分。

高的洗涤剂浓度体系包含以下洗涤剂，其中在洗涤水中存在多于约2000ppm的洗涤剂组分。欧洲洗涤剂通常被认为是高的洗涤剂浓度体系，因为在洗涤水中它们具有大约4500-5000ppm的洗涤剂组分。

拉丁美洲洗涤剂通常是高泡沫磷酸盐助洗剂洗涤剂并且在拉丁美洲使用的洗涤剂的范围可以落入中等和高的洗涤剂浓度两者中，因为在洗涤水中它们的洗涤剂组分的范围是从1500ppm至6000ppm。此类洗涤剂组合物都是本发明的实施例。

本发明的变体还可以掺入WO 97/07202中所披露的洗涤剂配制品中，将该专利通过引用结合在此。

在此给出了本发明的组合物的优选用途的实例。该组合物的剂量以及使用该组合物的其他条件可以基于本领域已知的方法来确定。

具体而言，根据本发明的组合物进一步包括螯合剂。

如在此使用的术语“螯合剂”是指如下化学品，这些化学品与某些金属离子形成分子，钝化这些离子，从而使得它们不能与其他要素反应。因此，螯合剂可以被定义为结合剂，其通过形成螯合物抑制化学活性。螯合是在配体与单一中心原子之间形成或存在的两种或更多种单独的结合。配体可以是任何有机化合物、硅酸盐或磷酸盐。在本文上下文中，术语“螯合剂(chelating agent)”包括可与如钙和镁等金属离子形成水溶性复合物的螯合剂(chelant)、螯合剂(chelating agent)、螯合剂(chelating agent)、络合剂(complexingagent)、或螯合剂(sequestering agent)。螯合作用描述螯合配体对金属离子的亲和力相对于类似的一组非螯合配体对相同金属的亲和力的增强。螯合剂具有与金属离子特别是钙(Ca2+)离子的结合能力，并广泛应用于洗涤剂，和一般用于洗涤如洗衣或餐具洗涤的组合物。然而，螯合剂自身呈现出抑制酶活性。在本申请中，术语螯合剂(chelating agent)与“络合剂(complexing agent)”或“螯合剂(chelating agent)”或“螯合剂(chelant)”互换使用。

由于大多数α-淀粉酶具有钙敏感性，螯合剂的存在可影响酶活性。α-淀粉酶的钙敏感性可通过将给定α-淀粉酶在强螯合剂的存在下孵育，并分析该孵育对所述α-淀粉酶的活性的影响来确定。钙敏感性α-淀粉酶会在孵育过程中丧失其活性的主要部分或全部。该螯合剂可以按一定量存在于该组合物中，该量为从0.0001wt％至20wt％，优选地从0.01wt％至10wt％，更优选地从0.1wt％至5wt％。

螯合剂的非限制性实例是EDTA、DTMPA、HEDP、和柠檬酸盐。因此，在一个实施例中，该组合物包括根据本发明的变体和如下螯合剂，如EDTA、DTMPA、HEDP或柠檬酸盐。

如在此使用的术语“EDTA”是指乙二胺四乙酸，其落在“强螯合剂”的定义下。

如在此使用的术语“DTMPA”是指二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)。DTMPA可以抑制碳酸根、硫酸根和磷酸根的结垢。

如在此使用的术语“HEDP”是指羟基-乙烷二膦酸，其落在“强螯合剂”的定义下。

螯合作用(chelate effect或chelating effect)描述螯合配体对金属离子的亲和力相对于类似的一组非螯合配体对相同金属的亲和力的增强。然而，螯合作用的强度可通过多种类型的测定或测量方法确定，由此根据其螯合作用(或强度)对螯合剂进行区分和排位。

在测定中，螯合剂可以通过它们在pH 8.0下将游离钙离子(Ca²⁺)的浓度从2.0mM降低至0.10mM或更少的能力来表征，例如通过使用基于由M.K.Nagarajan et al.,JAOCS,Vol.61,no.9(September 1984),pp.1475-1478[M.K.Nagarajan等人，JAOCS，第61卷，第9期(1984年9月)，第1475-1478页]描述的方法的测试。

供参考，螯合剂与以该螯合剂相等浓度的EDTA在pH下具有将游离钙离子(Ca²⁺)浓度从2.0mM降低至0.10mM的相同能力，则该螯合剂被称为强螯合剂。

本发明的组合物可以处于任何合宜的形式，例如，条、均质片剂、具有两个或更多个层的片剂、具有一个或多个隔室的袋、常规或压型粉末、颗粒、糊剂、凝胶、或常规、压型或浓缩液体。存在多种洗涤剂配制品形式，例如层(相同或不同相)、袋以及用于机械给料装置的形式。

可以将袋配置为单一隔室或多隔室。它可以具有适合保存该组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不允许该组合物从袋中释放出来。袋由封装内体积的水溶性膜制成。可以将所述内体积分为具有袋的室。优选的膜是形成膜或片的聚合材料，优选是聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选的是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混物组合物，该共混物组合物包括可水解降解并且水可溶的聚合物共混物，如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在商品参考号M8630下，如由美国印第安纳州盖里(Gary,Ind.,US)的克里斯克拉夫特工业产品公司(Chris Craft In.Prod.)销售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。这些袋可以包括固体洗衣清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。用于液体组分的室在构成上可以与包含固体的室不同。参考文献：(US2009/0011970A1)。

可以由水可溶的袋中或片剂的不同层中的室来将洗涤剂成分物理地彼此分开。由此可以避免组分之间的负面的储存相互作用。在洗涤溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。

非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，典型地包含按重量计至少20％并且最高达95％的水，例如高达约70％的水、高达约65％的水、高达约55％的水、高达约45％的水、高达约35％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以含有从0-30％的有机溶剂。液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。

另一种组合物形式是呈以下形式：皂条，例如洗衣皂条，并且可以用于手动洗涤衣物、织物和/或纺织品。如在此使用的术语“皂条”是指包括衣物条、皂条、组合条(combobar)、合成条以及洗涤剂条。条的类型通常区别在于它们包含的表面活性剂的类型，并且术语洗衣皂条包括包含来自脂肪酸的皂和/或合成皂的那些。洗衣皂条具有在室温下为固体而非液体、凝胶或粉末的物理形式。如在此使用的术语“固体”是指不随时间显著变化的物理形式，即如果固体物体(如洗衣皂条)被放置在容器里，该固体物体不会为了填充其被放置的容器而发生改变。条是固体时典型地是条的形式但也可能是其他的固体形状例如圆形或椭圆。

该皂条还可以包括络合剂像EDTA和HEDP、香料和/或不同类型的填充剂、表面活性剂例如阴离子型合成表面活性剂、助洗剂、聚合的污垢释放剂、洗涤剂螯合剂、稳定剂、填充剂、染料、着色剂、染料转移抑制剂、烷氧基化的聚碳酸酯、抑泡剂、结构剂、粘合剂、浸出剂、漂白活化剂、粘土去污剂、抗再沉积剂、聚合分散剂、增白剂、织物柔软剂、香料和/或本领域已知的其他化合物。

该皂条可以在常规的洗衣皂条制造设备中进行加工，例如但不限制于：混合器、压条机例如双级真空压条机、挤出机、切割机、标识压模机(logo-stamper)、冷却隧道以及包装机。本发明不局限于通过任何单一方法制备皂条。可以在工艺的不同阶段向肥皂中添加本发明的预混料。例如，可以制备包括肥皂、酶、任选地一种或多种另外的酶、蛋白酶抑制剂、和一价阳离子和有机阴离子的盐的预混料并且然后将该混合物出条。该酶和任选的另外的酶可以作为酶抑制剂(例如蛋白酶抑制剂)例如以固体的形式同时添加。除了混合步骤和出条步骤，该工艺可以进一步包括以下步骤：研磨、挤出、切割、冲压、冷却和/或封装。

用途

本发明进一步涉及根据本发明的变体在清洁过程(例如衣物洗涤或硬表面清洁，包括自动餐具洗涤和工业清洁)中的用途。对于清洁而言重要的污物和污渍由许多不同物质构成，并且已经开发全都具有不同底物特异性的一系列不同的酶用于在涉及衣物和硬表面清洁(例如餐具洗涤)两者中使用。这些酶被认为提供酶洗涤益处，因为与不具有酶的同一过程相比，它们在其应用的清洁过程中特异性地改进污渍去除。本领域已知的去污酶包括以下酶，例如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶。

在一个实施例中，本发明涉及本发明的变体在洗涤剂组合物中用于在清洁硬表面中使用(例如餐具洗涤)，或在洗衣中或用于去污的用途。在另一个实施例中，本发明涉及根据本发明的α-淀粉酶变体在清洁过程(例如衣物洗涤或硬表面清洁，包括但不限于餐具洗涤和工业清洁)中的用途。因此，在一个实施例中，本发明涉及包括在对应于位置H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482的一个或多个位置中的改变的变体在清洁过程如衣物洗涤或硬表面清洁(包括餐具洗涤和工业清洁)中的用途，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置。

在具体实施例中，本发明涉及如下变体在清洁过程如衣物洗涤或硬表面清洁(包括餐具洗涤和工业清洁)中的用途，该变体包括a)在亲本α-淀粉酶中的两个、三个或四个位置处的取代和/或缺失，所述位置对应于SEQ ID NO:4的成熟多肽的位置R181、G182、D183和G184；和

b)在对应于位置H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482的一个或多个位置中的取代，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置。

在本发明的一个实施例中涉及根据本发明的组合物在洗涤剂组合物和在洗涤剂应用中的用途，该组合物包括本发明的变体连同一种或多种表面活性剂以及任选地一种或多种选自以下清单的洗涤剂组分的洗涤剂组合物，该清单包括助水溶剂、助洗剂和共助洗剂、漂白系统、聚合物、织物调色剂和辅料或其任何混合物。

另外的实施例是根据本发明的组合物在洗涤剂组合物和在洗涤剂应用中的用途，该组合物包括本发明的变体连同一种或多种表面活性剂，以及一种或多种选自下组的另外的酶，该组包括蛋白酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶或其任何混合物。

在另一方面，本发明涉及洗衣方法，该方法可用于家用洗衣以及工业洗衣。此外，本发明涉及用于洗涤纺织品(例如织物、服装(garment)、衣服(cloth)等)的方法，其中该方法包括用洗涤溶液处理该纺织品，该洗涤溶液包含洗涤剂组合物以及本发明的α-淀粉酶。可以使用家用或工业洗衣机进行洗衣或可以使用洗涤剂组合物手动地进行洗衣，该洗涤剂组合物包含本发明的葡糖淀粉酶。

在另一方面，本发明涉及餐具洗涤方法，该方法可用于家用餐具洗涤以及工业餐具洗涤。如在此使用的术语“餐具洗涤”是指手动餐具洗涤和自动化餐具洗涤两者。此外，本发明涉及用于洗涤硬表面(例如，用餐工具，如刀、叉、匙；陶器，如盘子、玻璃杯、碗；以及平底锅)的方法，其中该方法包括用洗涤溶液处理该硬表面，该洗涤溶液包含洗涤剂组合物以及本发明的α-淀粉酶变体。可以例如使用家用或工业洗碗机洗涤硬表面或使用洗涤剂组合物手动地洗涤硬表面，该洗涤剂组合物包含本发明的α-淀粉酶、任选地连同一种或多种选自下组的另外的酶，该组包括：蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧酶、过氧化氢酶、甘露聚糖酶、或其任何混合物。

在另外的方面，本发明涉及用于从表面去除污渍的方法，该方法包括使该表面与在洗涤剂组合物中和在洗涤剂应用中的包括本发明的α-淀粉酶连同一种或多种表面活性剂以及任选地一种或多种选自以下清单的洗涤剂组分的组合物接触，该清单包括助水溶剂、助洗剂和共助洗剂、漂白系统、聚合物、织物调色剂和辅料或其任何混合物。另外的方面是用于从表面去除污渍的方法，该方法包括使该表面与在洗涤剂组合物中和在洗涤剂应用中的包括本发明的α-淀粉酶变体连同一种或多种表面活性剂、一种或多种选自下组的另外的酶的组合物接触，该组包括蛋白酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶或其任何混合物。

通过以下实例进一步对本发明进行描述，但不应将其理解为对本发明范围的限制。

实例

实例1：根据本发明的变体的产生

已通过定点诱变产生本发明的变体。

使用由在Pel基因座处含有淀粉酶基因的有机体制备的基因组DNA作为用于产生定点突变体的模板。

使用诱变正向引物和PnMi4490(CAATCCAAGAGAACCCTGATACGGATG-SEQ ID NO:5)反向引物产生约3.8kb片段。该片段与PnMi4491(CGGAACGCCTGGCTGACAACACG-SEQ ID NO:6)正向引物一起用作大引物，得到6kb插入盒。为了通过转化时的双交换实现在Pel基因座中的整合，连同淀粉酶和cat基因，该盒在末端包含上游和下游Pel序列。在含有氯霉素的LB琼脂上进行选择，并且通过淀粉酶基因的DNA测序确认突变。

生成变体库，这些变体具有在选自以下位置的不同位置中的取代：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置。

表1：根据本发明的变体

实例2：变体的比活性

为了确定如在实例2中描述和列出的产生的变体是否具有维持或甚至改进的活性，通过Phadebas测定来评价这些变体。制备以下洗涤剂组合物。

制备标准X(0.175％)：

1:2摩尔比的CaCl2和MgCl2储备溶液，具有6000dH(水硬度)。

称取104.9g的CaCl₂.2H₂O(0.713M)至1升瓶中，并向其中加入500ml I型水并充分搅拌。向其中称取并加入72.5g的MgCl2.6H2O(0.357M)，充分溶解，并且最终体积用I型水补至1000ml。

NaHCO3的0.535M溶液

将44.9g的碳酸氢钠溶解在100ml的I型水中。

具有X离子型表面活性剂的标准X洗涤剂，水硬度为12(12dH)

称取1.75g的标准X洗涤剂(如上所述)并转移到1升瓶中，并向其中加入800ml的I型水并充分混合。向其中加入35mg的X离子型表面活性剂，并充分混合。为了将水硬度调节至12dH，加入2ml的1:2摩尔比的CaCl₂和MgCl₂储备溶液(6000dH)、6ml的NaHCO₃的0.535摩尔溶液，并充分混合。最后将体积补至1000ml，并将混合物搅拌10min。

制备标准A(0.33％)：

4:1摩尔比的CaCl2和MgCl2储备溶液，具有6000dH(水硬度)

称取125.8g的CaCl2.2H2O至1升瓶中，并向其中加入500ml I型水并充分搅拌。向其中称取并加入43.8g的MgCl2.6H2O，并充分溶解，并且最终体积用I型水补至1000ml。

NaHCO3的0.535M溶液

将44.9g的碳酸氢钠溶解在100ml的I型水中。

标准A洗涤剂，水硬度为15(15dH)

称取3.335g的标准A洗涤剂并转移到1升瓶中，并向其中加入865ml的I型水并充分混合。向其中加入7.5ml的0.535M NaHCO₃，充分混合，并且体积用1型水补至1升。为了将水硬度调节至15dH，加入2.5ml的4:1摩尔比的CaCl₂.2H₂O和MgCl₂.6H₂O储备溶液(6000dH)，并将混合物搅拌15min。

底物：Phadebas片剂(麦戈尔生命科学公司)

将1片悬浮于10ml洗涤剂溶液中。

缓冲液：100mM MOPS缓冲液pH 8

实验程序

制备母板：

通过菌落挑取器(K生物系统公司(KBiosystems))从转化的板中挑取菌落并接种在包括TBGly培养基的96孔培养板中生长。使培养物在37℃下生长3天，并通过离心从板中回收上清液。

制备底物板：

通过将1片phadebas溶解在10ml的标准X/标准A洗涤剂中制备底物溶液，并且伴随连续搅拌使用多点仪器(multidrop instrument)将其中的180μl分配到96孔微量滴定板中。

将培养物上清液用缓冲液稀释至100倍，并将20μl经稀释的培养物加入到180μl预分配的底物板中并充分混合。伴随振荡(900rpm)，将该板在25℃下孵育20min。孵育后，允许该板沉降5min。将50ul上清液转移至384孔板中，并测量620nm下的吸光度。通过ELISA使用特异性抗体测定表达的酶的浓度。通过取按浓度计的活性的比率计算比活性，并且命中被鉴定为高于亲本α-淀粉酶的比活性的一切。如下计算改进因子(IF)：[变体的比活性]/[亲本α-淀粉酶的比活性]。

表2：通过上述方法获得的根据本发明的变体的比活性如下(氨基酸取代是指SEQID NO:3)。

针对至少一种标准洗涤剂显示至少1.0的IF的变体被认为当与亲本α-淀粉酶(即具有SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的α-淀粉酶)相比时具有改进的性能。

实例3：变体的稳定性

进一步评价了在实例1中描述和列出的产生的变体在标准洗涤剂中的稳定性。

底物：Phadebas片剂(麦戈尔生命科学公司)

将1片悬浮于10ml洗涤剂溶液中。

测定程序：

将20ul培养物上清液转移至命名为“非应力”和“应力”的两个96孔板中。向其中加入80ul与EDTA混合的洗涤剂，并充分混合。将非应力板在4℃下孵育16小时，并将应力板在43℃下孵育16小时。将非应力和应力样品在缓冲液中稀释20倍。将20μl经稀释的培养物加入到预分配的底物板中并充分混合。伴随振荡(900rpm)，将该板在25℃下孵育20min。孵育后，允许该板沉降5min。将50ul上清液转移至384孔板中，并测量620nm下的吸光度。

稳定性计算为应力和非应力样品之间的比率的％残余活性(％RA＝应力/非应力*100)。改进因子(IF)计算为：变体的％RA/WT的％RA。

表3：所获得的稳定性结果如下列出

具有至少1.0的IF的变体被认为与亲本α-淀粉酶(即具有如在SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的α-淀粉酶)相比具有改进的稳定性。

实例4：变体的命中均值

如可以从图1-3看出，已经产生大量变体并测试了在标准A和标准X洗涤剂组合物中的比活性以及稳定性。具体而言，图1显示了作为变体在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的改进因子(IF)，图2显示了作为变体在标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的IF，并且图3显示了作为变体在标准A洗涤剂组合物中的稳定性的量度的IF。已经计算了已经受修饰的每个位置的命中均值(见表4)。

表4：每个位置的命中均值

如可以从上表看出，针对已经测试了变体的条件(即标准A和/或标准X洗涤剂组合物中的比活性和/或标准A洗涤剂组合物中的稳定性)中的至少一个，每个测试位置的IF至少为1.0。

实例5：本发明的变体的比活性和稳定性

制备标准X(0.175％)：

1:2摩尔比的CaCl2和MgCl2储备溶液，具有6000dH(水硬度)。

NaHCO3的0.535M溶液

将44.9g的碳酸氢钠溶解在100ml的I型水中。

具有X离子型表面活性剂的标准X洗涤剂，水硬度为12(12dH)

制备标准A(0.33％)：

4:1摩尔比的CaCl2和MgCl2储备溶液，具有6000dH(水硬度)

NaHCO3的0.535M溶液

将44.9g的碳酸氢钠溶解在100ml的I型水中。

标准A洗涤剂，水硬度为15(15dH)

底物：Phadebas片剂(麦戈尔生命科学公司)

将1片悬浮于10ml洗涤剂溶液中。

缓冲液：100mM MOPS缓冲液pH 8

实验程序

制备母板：

通过菌落挑取器(K生物系统公司)从转化的板中挑取菌落并接种在包括TBGly培养基的96孔培养板中生长。使培养物在37℃下生长3天，并通过离心从板中回收上清液。

制备底物板：

通过将1片phadebas溶解在10ml的标准X/标准A洗涤剂中制备底物溶液，并且伴随连续搅拌使用多点仪器将其中的180μl分配到96孔微量滴定板中。

本发明的变体的稳定性

底物：Phadebas片剂(麦戈尔生命科学公司)

将1片悬浮于10ml洗涤剂溶液中。

测定程序：

通过上述方法获得的根据本发明的变体的比活性如下示于以下表5中(氨基酸取代是指SEQ ID NO:3)。

表5：本发明的特定变体。

在此描述并且要求保护的本发明不限于在此披露的特定方面的范围，因为这些方面旨在作为本发明若干方面的说明。任何等同方面旨在处于本发明的范围之内。实际上，除在此所示和描述的那些之外，对于本领域普通技术人员而言本发明的不同修改将从前述描述变得清楚。这类修改也旨在落入所附权利要求书的范围内。在有冲突的情况下，以包括定义的本披露为准。

序列表

<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）

<120> α-淀粉酶变体以及编码它们的多核苷酸

<130> 13069-WO-PCT

<160> 6

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 1458

<212> DNA

<213> 芽孢杆菌属物种

<400> 1

catcacgatg ggacgaacgg aacgattatg cagtattttg aatggaacgt tccgaatgat 60

ggacaacatt ggaaccgctt acacaacaac gctcaaaatt taaaaaatgc cggaattaca 120

gcaatctgga ttccacctgc gtggaaagga acgagccaaa atgatgtagg ctacggtgcg 180

tatgaccttt atgaccttgg tgaatttaac caaaaaggaa cggtccgtac gaaatatgga 240

acaaaagcag aattagaacg agcgattcgt tcgttaaagg cgaacgggat tcaagtgtat 300

ggcgatgttg ttatgaacca taaaggcgga gctgatttca ccgagcgtgt tcaagcggtt 360

gaagtgaacc cgcaaaaccg aaaccaagaa gtgtctggca cttatcaaat cgaagcatgg 420

acagggttca attttcctgg acgtggcaat caacattctt cgtttaaatg gcgctggtat 480

catttcgatg ggacggattg ggaccagtct cgccaactcg caaatcgtat ttataagttt 540

agaggagacg gaaaagcatg ggactgggaa gttgacactg aaaatgggaa ctatgattac 600

ttaatgtatg cagacgttga catggatcat ccagaagtga ttaacgaact aaaccgttgg 660

ggcgtctggt acgcgaatac ccttaattta gacggcttcc gactggatgc agtgaaacat 720

attaaattta gcttcatgcg tgattggtta gggcatgttc gcgggcaaac gggcaagaat 780

ctttttgccg ttgcagagta ttggaagaat gacctagggg ctttagaaaa ttatttaagc 840

aaaacaaatt ggacgatgag cgcctttgat gttccgcttc attacaacct ttatcaagcg 900

tcaaatagta gcggaaatta cgacatgaga aacttgttaa atggaacact cgttcaacgt 960

catccgagcc atgcggttac gtttgtcgat aaccacgaca cacagcctgg agaagccctc 1020

gaatcgttcg ttcaaggctg gtttaaacca ctagcttatg caacgattct tacgagagag 1080

caaggctacc cacaagtgtt ttacggcgat tattatggca tcccaagtga cggtgttcca 1140

agctaccgtc aacagatcga cccactttta aaagctcgtc aacaatatgc ttatggtaga 1200

cagcacgatt actttgatca ttgggatgta attggctgga cacgtgaagg aaacgcatct 1260

cacccgaact caggacttgc aaccattatg tctgatggtc caggtggatc aaaatggatg 1320

tatgttggcc gtcagaaagc tggcgaagtg tggcatgaca tgactggaaa ccgcagtggc 1380

actgtgacaa ttaatcaaga cggctgggga cacttttttg tcaacggcgg ctctgtctcc 1440

gtatgggtga aacgataa 1458

<210> 2

<211> 514

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种

<220>

<221> 成熟多肽

<222> (30)..(514)

<400> 2

Met Asn Arg Trp Lys Ala Ala Phe Ser Trp Met Leu Ser Leu Ala Leu

-25 -20 -15

Val Phe Thr Leu Phe Tyr Thr Pro Ser Ser Ala Ser Ala His His Asp

-10 -5 -1 1

Gly Thr Asn Gly Thr Ile Met Gln Tyr Phe Glu Trp Asn Val Pro Asn

5 10 15

Asp Gly Gln His Trp Asn Arg Leu His Asn Asn Ala Gln Asn Leu Lys

20 25 30 35

Asn Ala Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp Lys Gly Thr

40 45 50

Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr Asp Leu Gly

55 60 65

Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr Lys Ala

70 75 80

Glu Leu Glu Arg Ala Ile Arg Ser Leu Lys Ala Asn Gly Ile Gln Val

85 90 95

Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp Phe Thr Glu

100 105 110 115

Arg Val Gln Ala Val Glu Val Asn Pro Gln Asn Arg Asn Gln Glu Val

120 125 130

Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Glu Ala Trp Thr Gly Phe Asn Phe Pro Gly

135 140 145

Arg Gly Asn Gln His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr His Phe Asp

150 155 160

Gly Thr Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Leu Ala Asn Arg Ile Tyr Lys

165 170 175

Phe Arg Gly Asp Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu Asn

180 185 190 195

Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met Asp His Pro

200 205 210

Glu Val Ile Asn Glu Leu Asn Arg Trp Gly Val Trp Tyr Ala Asn Thr

215 220 225

Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys Phe

230 235 240

Ser Phe Met Arg Asp Trp Leu Gly His Val Arg Gly Gln Thr Gly Lys

245 250 255

Asn Leu Phe Ala Val Ala Glu Tyr Trp Lys Asn Asp Leu Gly Ala Leu

260 265 270 275

Glu Asn Tyr Leu Ser Lys Thr Asn Trp Thr Met Ser Ala Phe Asp Val

280 285 290

Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Gln Ala Ser Asn Ser Ser Gly Asn Tyr

295 300 305

Asp Met Arg Asn Leu Leu Asn Gly Thr Leu Val Gln Arg His Pro Ser

310 315 320

His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro Gly Glu Ala

325 330 335

Leu Glu Ser Phe Val Gln Gly Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala Thr

340 345 350 355

Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Gln Val Phe Tyr Gly Asp Tyr

360 365 370

Tyr Gly Ile Pro Ser Asp Gly Val Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Ile Asp

375 380 385

Pro Leu Leu Lys Ala Arg Gln Gln Tyr Ala Tyr Gly Arg Gln His Asp

390 395 400

Tyr Phe Asp His Trp Asp Val Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asn Ala

405 410 415

Ser His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp Gly Pro Gly

420 425 430 435

Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Arg Gln Lys Ala Gly Glu Val Trp

440 445 450

His Asp Met Thr Gly Asn Arg Ser Gly Thr Val Thr Ile Asn Gln Asp

455 460 465

Gly Trp Gly His Phe Phe Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Val Trp Val

470 475 480

Lys Arg

485

<210> 3

<211> 485

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种

<400> 3

His His Asp Gly Thr Asn Gly Thr Ile Met Gln Tyr Phe Glu Trp Asn

1 5 10 15

Val Pro Asn Asp Gly Gln His Trp Asn Arg Leu His Asn Asn Ala Gln

20 25 30

Asn Leu Lys Asn Ala Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp

35 40 45

Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr

50 55 60

Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly

65 70 75 80

Thr Lys Ala Glu Leu Glu Arg Ala Ile Arg Ser Leu Lys Ala Asn Gly

85 90 95

Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp

100 105 110

Phe Thr Glu Arg Val Gln Ala Val Glu Val Asn Pro Gln Asn Arg Asn

115 120 125

Gln Glu Val Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Glu Ala Trp Thr Gly Phe Asn

130 135 140

Phe Pro Gly Arg Gly Asn Gln His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr

145 150 155 160

His Phe Asp Gly Thr Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Leu Ala Asn Arg

165 170 175

Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp

180 185 190

Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met

195 200 205

Asp His Pro Glu Val Ile Asn Glu Leu Asn Arg Trp Gly Val Trp Tyr

210 215 220

Ala Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His

225 230 235 240

Ile Lys Phe Ser Phe Met Arg Asp Trp Leu Gly His Val Arg Gly Gln

245 250 255

Thr Gly Lys Asn Leu Phe Ala Val Ala Glu Tyr Trp Lys Asn Asp Leu

260 265 270

Gly Ala Leu Glu Asn Tyr Leu Ser Lys Thr Asn Trp Thr Met Ser Ala

275 280 285

Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Gln Ala Ser Asn Ser Ser

290 295 300

Gly Asn Tyr Asp Met Arg Asn Leu Leu Asn Gly Thr Leu Val Gln Arg

305 310 315 320

His Pro Ser His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro

325 330 335

Gly Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Gln Gly Trp Phe Lys Pro Leu Ala

340 345 350

Tyr Ala Thr Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Gln Val Phe Tyr

355 360 365

Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Ser Asp Gly Val Pro Ser Tyr Arg Gln

370 375 380

Gln Ile Asp Pro Leu Leu Lys Ala Arg Gln Gln Tyr Ala Tyr Gly Arg

385 390 395 400

Gln His Asp Tyr Phe Asp His Trp Asp Val Ile Gly Trp Thr Arg Glu

405 410 415

Gly Asn Ala Ser His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp

420 425 430

Gly Pro Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Arg Gln Lys Ala Gly

435 440 445

Glu Val Trp His Asp Met Thr Gly Asn Arg Ser Gly Thr Val Thr Ile

450 455 460

Asn Gln Asp Gly Trp Gly His Phe Phe Val Asn Gly Gly Ser Val Ser

465 470 475 480

Val Trp Val Lys Arg

485

<210> 4

<211> 483

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种

<400> 4

His His Asp Gly Thr Asn Gly Thr Ile Met Gln Tyr Phe Glu Trp Asn

1 5 10 15

Val Pro Asn Asp Gly Gln His Trp Asn Arg Leu His Asn Asn Ala Gln

20 25 30

Asn Leu Lys Asn Ala Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp

35 40 45

Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr

50 55 60

Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly

65 70 75 80

Thr Lys Ala Glu Leu Glu Arg Ala Ile Arg Ser Leu Lys Ala Asn Gly

85 90 95

Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp

100 105 110

Phe Thr Glu Arg Val Gln Ala Val Glu Val Asn Pro Gln Asn Arg Asn

115 120 125

Gln Glu Val Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Glu Ala Trp Thr Gly Phe Asn

130 135 140

Phe Pro Gly Arg Gly Asn Gln His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr

145 150 155 160

His Phe Asp Gly Thr Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Leu Ala Asn Arg

165 170 175

Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu

180 185 190

Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met Asp His

195 200 205

Pro Glu Val Ile Asn Glu Leu Asn Arg Trp Gly Val Trp Tyr Ala Asn

210 215 220

Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys

225 230 235 240

Phe Ser Phe Met Arg Asp Trp Leu Gly His Val Arg Gly Gln Thr Gly

245 250 255

Lys Asn Leu Phe Ala Val Ala Glu Tyr Trp Lys Asn Asp Leu Gly Ala

260 265 270

Leu Glu Asn Tyr Leu Ser Lys Thr Asn Trp Thr Met Ser Ala Phe Asp

275 280 285

Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Gln Ala Ser Asn Ser Ser Gly Asn

290 295 300

Tyr Asp Met Arg Asn Leu Leu Asn Gly Thr Leu Val Gln Arg His Pro

305 310 315 320

Ser His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro Gly Glu

325 330 335

Ala Leu Glu Ser Phe Val Gln Gly Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala

340 345 350

Thr Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Gln Val Phe Tyr Gly Asp

355 360 365

Tyr Tyr Gly Ile Pro Ser Asp Gly Val Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Ile

370 375 380

Asp Pro Leu Leu Lys Ala Arg Gln Gln Tyr Ala Tyr Gly Arg Gln His

385 390 395 400

Asp Tyr Phe Asp His Trp Asp Val Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asn

405 410 415

Ala Ser His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp Gly Pro

420 425 430

Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Arg Gln Lys Ala Gly Glu Val

435 440 445

Trp His Asp Met Thr Gly Asn Arg Ser Gly Thr Val Thr Ile Asn Gln

450 455 460

Asp Gly Trp Gly His Phe Phe Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Val Trp

465 470 475 480

Val Lys Arg

<210> 5

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列

<400> 5

caatccaaga gaaccctgat acggatg 27

<210> 6

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列

<400> 6

cggaacgcct ggctgacaac acg 23

Claims

1.一种具有α-淀粉酶活性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，其中所述变体是具有淀粉酶活性的α-淀粉酶的成熟形式，并且包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置；并且其中在该一个或多个位置处的取代提供α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体针对稳定性的量度具有>1.0的改进因子，和/或针对比活性的量度具有≥1.0的改进因子。

2.根据权利要求1所述的α-淀粉酶变体，其中所述亲本α-淀粉酶与SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列具有至少65％，例如至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％、例如97％、例如至少98％的序列一致性。

3.根据前述权利要求中任一项所述的变体，该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、P18、N19、D20、Q22、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、L34、K35、N36、A37、I39、T40、A41、W43、I44、P45、P46、A47、W48、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、K82、A83、E84、L85、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、D112、F113、E115、R116、V117、A119、V120、E121、V122、N123、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、I137、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、R219、V222、W223、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、I241、K242、F245、M246、W249、L250、H252、R254、G255、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、Y267、W268、K269、N270、D271、G273、A274、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、N296、L297、Q299、A300、S301、S303、S304、G305、N306、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、A325、P336、G337、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、L357、T358、Q361、G362、Y363、Q365、V366、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、R400、H402、F405、D406、H407、W408、V410、T414、R415、E416、N418、A419、H421、G425、A427、T428、I429、M430、S431、G435、G436、S437、W439、M440、V442、R444、Q445、A447、G448、H452、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、N465、D467、W469、H471、F473、N475、G477、以及V481；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，该一个或多个取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.2的改进因子以及任选地针对稳定性的量度的≥1.0的改进因子。

4.根据前述权利要求中任一项所述的变体，该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、G4、T5、G7、Q11、F13、E14、W15、N16、P18、N19、D20、Q22、N25、R26、N29、N30、A31、Q32、L34、A41、P46、W48、G50、T51、S52、Q53、D55、V56、G59、A60、Y61、Y64、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、K82、A83、R87、I89、R90、S91、L92、K93、N95、Q98、V99、Y100、H107、K108、G109、D112、F113、E115、R116、V117、A119、V120、E121、V122、N123、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、I137、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、V191、T193、E194、N197、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、D209、H210、P211、E212、N215、L217、R219、W223、N226、V238、I241、K242、F245、G258、K259、N260、F262、A263、K269、N270、D271、G273、A274、Y278、L279、K281、W284、T285、S287、P292、N296、L297、Q299、S301、N306、L312、G315、V318、Q319、R320、H321、P322、A325、P336、G337、E341、S342、V344、G346、F348、K349、P350、L351、Q361、G362、Y363、Y368、G369、D370、Y372、G373、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、Q384、D387、Q394、Q395、A397、R400、H402、H407、W408、V410、R415、N418、H421、S431、G435、G436、W439、M440、Q445、A447、M454、G456、N465、D467、N475、G477、以及V481；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，该一个或多个取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.4的改进因子以及任选地针对稳定性的量度的≥1.0的改进因子。

5.根据前述权利要求中任一项所述的变体，该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、G7、F13、E14、W15、N16、N19、D20、Q22、R26、N29、N30、A31、Q32、P46、W48、G50、T51、S52、Q53、D55、G59、A60、Y64、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、K78、R90、Y100、H107、K108、G109、D112、F113、R116、V117、A119、E121、N123、N126、R127、N128、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、I137、A139、W140、T141、G142、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、F155、K156、R158、W159、Y160、D163、G164、T165、D166、W167、S170、R171、Q172、L173、R176、Y178、K179、R181、K185、A186、W187、D188、W189、V191、E194、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、H210、N215、L217、R219、W223、V238、K242、F245、G258、F262、K269、N270、A274、T285、S287、N296、L312、V318、H321、P322、A325、G337、E341、S342、K349、P350、Q361、G362、Y368、G369、D377、S381、Q384、D387、R400、W408、R415、N418、G435、Q445、M454、G477、以及V481；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，该一个或多个取代提供针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.6的改进因子以及任选地针对稳定性的量度的≥1.0的改进因子。

6.根据权利要求1和2中任一项所述的变体，该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、P18、N19、Q22、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、D112、F113、E115、R116、V117、A119、V120、E121、V122、N123、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、I241、K242、F245、M246、W249、L250、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、G273、A274、E276、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、A325、V326、T327、V329、N331、P336、G337、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、R400、H402、D403、F405、D406、H407、W408、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、S424、G425、A427、T428、I429、M430、S431、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482；其中这些位置对应于如在SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，并且其中该一个或多个取代提供针对在标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.2的IF以及任选地针对稳定性的量度的≥1.0的IF。

7.根据权利要求1和2中任一项所述的变体，该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、T5、G7、I9、E14、W15、N16、V17、Q22、H23、W24、N25、R26、H28、N29、N33、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、I44、W48、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、L63、E68、G73、T74、V75、R76、T81、A83、E86、R90、S91、L92、N95、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、R116、V117、Q118、V120、V122、N123、P124、N126、N128、Q129、V131、G133、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G149、Q151、S153、S154、F155、K156、Y160、T165、D166、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、K179、R181、K185、A186、T193、N195、G196、Y198、Y203、D205、V206、D209、H210、E212、V213、I214、N215、L217、N218、W220、G221、W223、N226、T227、L228、D231、F233、V238、H240、K242、S244、R247、D248、L250、G251、H252、T257、G258、K259、N260、L261、K269、L272、G273、L275、E276、N277、L279、K281、T285、M286、A288、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Q299、A300、N302、S303、S304、G305、N306、R310、N311、L312、L313、G315、T316、Q319、R320、H321、T327、T334、P336、E338、E341、S342、V344、G346、W347、F348、P350、L351、A354、T355、T358、E360、Q361、Y363、Q365、F367、Y368、G369、G373、I374、P375、S376、D377、V379、S381、Y382、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、D409、V410、R415、E416、N418、A419、S420、P422、S424、G425、L426、A427、M430、S431、D432、G435、W439、Y441、Q445、K446、A447、V450、H452、M454、G456、S459、F473、以及N475；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，该一个或多个取代提供针对稳定性的量度的≥1.2的改进因子以及任选地针对在标准A和/或标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.0的改进因子。

8.根据权利要求1、2和6中任一项所述的变体，该变体包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、D3、G7、N16、V17、Q22、H28、N33、N36、T40、W48、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、V75、R76、N95、V99、G109、A111、D112、F113、T114、R116、V117、Q118、V122、N123、P124、N126、N128、V131、Q136、I137、E138、A139、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G149、Q151、S153、S154、K156、Y160、T165、D166、Q169、S170、R171、Q172、A174、R176、R181、K185、A186、T193、N195、Y203、D205、V206、D209、E212、V213、N215、N218、W220、G221、N226、F233、K242、D248、L250、G251、H252、G258、N260、K269、G273、E276、N277、T285、P292、L293、H294、N296、Q299、S304、G305、N306、R310、N311、L312、Q319、R320、H321、T327、T334、P336、E338、E341、G346、W347、L351、A354、Y363、G373、I374、P375、S376、D377、V379、S381、Y382、Q384、P388、L389、L390、Q394、Q395、Y398、R400、H402、Y404、V410、E416、N418、A419、S420、P422、M430、S431、G435、Q445、A447、M454、F473、以及N475；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，该一个或多个取代提供针对稳定性的量度的≥1.5的改进因子以及任选地针对在标准A和/或标准X洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.0的改进因子。

9.根据前述权利要求中任一项所述的变体，该变体包括在选自下组的一个或多个位置中的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、T5、G7、I9、Q11、E14、W15、N19、Q22、W24、N25、R26、H28、N29、N30、A31、L34、K35、I39、T40、A41、I42、I44、A47、W48、T51、S52、Q53、V56、G59、T74、V75、I89、R90、S91、L92、N95、I97、Q98、Y100、K108、F113、R116、V117、N126、N128、Q129、G133、A139、W140、T141、F143、F145、P146、Q151、K156、R158、H161、T165、D166、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、K179、R181、G184、K185、A186、T193、Y203、D209、H210、E212、V213、N215、L217、N218、R219、V222、N226、T227、L228、K242、K245、L250、H252、V253、T257、G258、K259、N260、V264、K269、L279、K281、M286、P292、L293、Y295、L297、Q299、N306、L312、G315、T316、V318、R320、H321、S323、T327、V329、P336、G337、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、P350、L351、Q361、Y363、Y368、I374、S376、V379、P380、S381、D387、L390、A392、Q395、H402、F405、T414、E416、N418、A419、M430、S431、G435、W439、K446、V450、G456、S459、N465、G476、以及W482；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，该一个或多个取代提供针对稳定性的量度的≥1.0的改进因子以及针对在标准A洗涤剂组合物中的比活性的量度的≥1.0的改进因子。

10.根据前述权利要求中任一项所述的变体，该变体包括在选自下组的一个或多个位置中的取代，该组由以下各项组成：H1、G7、Q22、N25、R26、H28、N29、W48、S52、Q53、V56、G59、T74、V75、R90、N95、Q98、K108、F113、R116、V117、N128、Q129、G133、A139、W140、T141、F143、F145、P146、Q151、K156、T165、Q169、S170、R171、Q172、A174、K179、R181、K185、A186、T193、Y203、D209、E212、N215、L217、N226、K242、K259、N260、K269、K281、P292、L293、L297、N306、L312、G315、R320、H321、P336、V344、P350、Y363、Y368、S381、D387、A392、Q395、E416、N418、以及S431；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置，该一个或多个取代提供针对稳定性的量度的≥1.3的改进因子以及针对比活性的量度的≥1.3的改进因子。

11.一种α-淀粉酶变体，其中所述变体是具有淀粉酶活性的α-淀粉酶的成熟形式，并且包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：E14、D20、Q22、G59、R116、A119、S132、G133、Y135、K156、R158、W159、Y160、K185、W187、Y202、D236、V238、K242、G337、E341、Y368、G369、D377、Y382、以及K445，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸；并且其中该取代提供选自下组的至少一种改进的特性，该组由以下各项组成：改进的洗涤性能、改进的洗涤剂稳定性和改进的热稳定性。

12.一种α-淀粉酶变体，其中所述变体是具有淀粉酶活性的α-淀粉酶的成熟形式，并且包括在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：E14、D20、Q22、G59、R116、A119、S132、G133、Y135、K156、R158、W159、Y160、K185、W187、Y202、D236、V238、K242、G337、E341、Y368、G369、D377、Y382、以及K445，其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸；并且其中该取代提供了在pH 8.0和25℃下具有针对比活性的量度的≥1.0的改进因子以及针对在洗涤剂组合物中的稳定性和热稳定性的量度的≥1.0的改进因子的α-淀粉酶变体。

13.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中在该具体位置被取代的氨基酸选自下组，该组由以下各项组成：A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y，条件是被取代的氨基酸与在所述具体位置的天然存在的氨基酸不同。

14.根据前述权利要求中任一项所述的变体，该变体另外包括对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的181、182、183和184的氨基酸残基的成对缺失，条件是当在对应于181和/或184的位置中的氨基酸被取代时，该成对缺失在对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的182和183的位置。

15.一种α-淀粉酶变体，其中所述变体是具有淀粉酶活性的成熟形式，并且包括a)在对应于SEQ ID ID NO:3中阐明的氨基酸序列的位置R181、G182、D183和G184的两个或更多个位置处的缺失和/或取代；和b)在选自下组的一个或多个位置处的取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置。

16.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中所述变体包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个位置处的取代。

17.一种编码根据前述权利要求中任一项所述的变体的多核苷酸。

18.一种包括根据权利要求17所述的多核苷酸的核酸构建体。

19.一种包括根据权利要求17所述的多核苷酸的表达载体。

20.一种宿主细胞，该宿主细胞包括根据权利要求17所述的多核苷酸、根据权利要求18所述的核酸构建体、或根据权利要求19所述的表达载体。

21.一种组合物，该组合物包括根据权利要求1至16中任一项所述的变体。

22.根据权利要求21所述的组合物，该组合物进一步包括至少一种另外的活性组分。

23.根据权利要求22所述的组合物，其中所述另外的活性成分是酶，例如蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、果胶酸裂合酶和甘露聚糖酶。

24.根据权利要求21至23中任一项所述的组合物，该组合物是洗涤剂组合物，如液体洗涤剂组合物或粉末状洗涤剂组合物。

25.根据权利要求21至24中任一项所述的组合物，该组合物是液体衣物洗涤或液体餐具洗涤组合物，例如自动餐具洗涤(ADW)液体洗涤剂组合物，或粉末状衣物洗涤，例如皂条，或粉末状餐具洗涤组合物，例如ADW单位剂量洗涤剂组合物。

26.一种改进具有SEQ ID NO:3或4或与其具有至少65％序列一致性的氨基酸序列的亲本α-淀粉酶的性能如洗涤性能的方法，所述方法包括以下步骤：

a)在对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的位置R181、G182、D183和G184的两个或更多个位置处引入成对缺失和/或取代；并且b)在选自下组的一个或多个位置处引入取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置；所述方法由此提供所述亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，其中所述变体与如在SEQ ID NO:3或4中阐明的氨基酸序列具有至少80％，例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％、例如至少97％、例如至少99％，但小于100％的序列一致性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性和与所述亲本α-淀粉酶相比改进的性能。

27.一种改进具有SEQ ID NO:3或4或与其具有至少65％序列一致性的氨基酸序列的亲本α-淀粉酶的稳定性如在洗涤剂组合物中的稳定性和热稳定性的方法，所述方法包括以下步骤：a)在对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列的位置R181、G182、D183和G184的两个或更多个位置处引入成对缺失和/或取代；并且b)在选自下组的一个或多个位置处引入取代，该组由以下各项组成：H1、H2、D3、G4、T5、G7、T8、I9、M10、Q11、Y12、F13、E14、W15、N16、V17、P18、N19、D20、Q22、H23、W24、N25、R26、L27、H28、N29、N30、A31、Q32、N33、L34、K35、N36、A37、G38、I39、T40、A41、I42、W43、I44、P45、P46、A47、W48、K49、G50、T51、S52、Q53、N54、D55、V56、G59、A60、Y61、L63、Y64、L66、E68、F69、N70、Q71、K72、G73、T74、V75、R76、T77、K78、T81、K82、A83、E84、L85、E86、R87、A88、I89、R90、S91、L92、K93、N95、G96、I97、Q98、V99、Y100、V103、H107、K108、G109、G110、A111、D112、F113、T114、E115、R116、V117、Q118、A119、V120、E121、V122、N123、P124、Q125、N126、R127、N128、Q129、E130、V131、S132、G133、T134、Y135、Q136、I137、E138、A139、W140、T141、G142、F143、N144、F145、P146、G147、G149、N150、Q151、S153、S154、F155、K156、W157、R158、W159、Y160、H161、F162、D163、G164、T165、D166、W167、D168、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、I177、Y178、K179、F180、R181、G184、K185、A186、W187、D188、W189、E190、V191、D192、T193、E194、N195、G196、N197、Y198、D199、Y200、M202、Y203、A204、D205、V206、M208、D209、H210、P211、E212、V213、I214、N215、L217、N218、R219、W220、G221、V222、W223、Y224、A225、N226、T227、L228、N229、L230、D231、F233、V238、H240、I241、K242、S244、F245、M246、R247、D248、W249、L250、G251、H252、V253、R254、G255、Q256、T257、G258、K259、N260、L261、F262、A263、V264、Y267、W268、K269、N270、D271、L272、G273、A274、L275、E276、N277、Y278、L279、S280、K281、T282、N283、W284、T285、M286、S287、A288、V291、P292、L293、H294、Y295、N296、L297、Y298、Q299、A300、S301、N302、S303、S304、G305、N306、Y307、M309、R310、N311、L312、L313、N314、G315、T316、V318、Q319、R320、H321、P322、S323、A325、V326、T327、F328、V329、N331、T334、P336、G337、E338、E341、S342、V344、Q345、G346、W347、F348、K349、P350、L351、A352、A354、T355、L357、T358、E360、Q361、G362、Y363、Q365、V366、F367、Y368、G369、D370、Y372、G373、I374、P375、S376、D377、V379、P380、S381、Y382、R383、Q384、I386、D387、P388、L389、L390、K391、A392、Q394、Q395、Y396、A397、Y398、R400、H402、D403、Y404、F405、D406、H407、W408、D409、V410、I411、T414、R415、E416、N418、A419、S420、H421、P422、S424、G425、L426、A427、T428、I429、M430、S431、D432、G435、G436、S437、K438、W439、M440、Y441、V442、R444、Q445、K446、A447、G448、V450、W451、H452、D453、M454、T455、G456、N457、S459、G460、T463、I464、N465、Q466、D467、W469、H471、F473、N475、G476、G477、V481、以及W482；其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐明的氨基酸序列中的氨基酸位置；所述方法由此提供所述亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，其中所述变体与如在SEQ ID NO:3或4中阐明的氨基酸序列具有至少80％，例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％、例如至少97％、例如至少99％，但小于100％的序列一致性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性和与所述亲本α-淀粉酶相比改进的稳定性。

28.根据权利要求26和27中任一项所述的方法，其中所述变体具有以下亲本α-淀粉酶的至少50％，例如至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少100％的活性，该亲本α-淀粉酶具有SEQ ID NO:3或4的氨基酸序列。

29.根据权利要求1至16中任一项所述的变体在清洁过程如衣物洗涤或包括餐具洗涤和工业清洁的硬表面清洁中的用途。