CN106133135A - β‑葡聚糖酶变体以及编码它们的多核苷酸 - Google Patents
β‑葡聚糖酶变体以及编码它们的多核苷酸 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106133135A CN106133135A CN201580015031.7A CN201580015031A CN106133135A CN 106133135 A CN106133135 A CN 106133135A CN 201580015031 A CN201580015031 A CN 201580015031A CN 106133135 A CN106133135 A CN 106133135A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- variant
- seq
- beta
- polypeptide
- acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 title claims abstract description 65
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 title claims abstract description 65
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 title claims abstract description 64
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 57
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 55
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 title claims abstract description 21
- FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](OC2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N 0.000 title claims abstract description 18
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 27
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 106
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 99
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 98
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 88
- 101710130006 Beta-glucanase Proteins 0.000 claims description 83
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 72
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 37
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 37
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 18
- 102220534989 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP2_M29V_mutation Human genes 0.000 claims description 9
- 230000006872 improvement Effects 0.000 claims description 8
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 8
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 7
- 102220502190 Serine/threonine-protein kinase NIM1_M29L_mutation Human genes 0.000 claims description 5
- 102220537632 Omega-amidase NIT2_M29D_mutation Human genes 0.000 claims description 4
- 102220137600 rs112862820 Human genes 0.000 claims description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 56
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 107
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 69
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 51
- -1 agate azoles Chemical class 0.000 description 49
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 43
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 41
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 41
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 39
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 39
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 39
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 39
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 37
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 36
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 36
- 230000008859 change Effects 0.000 description 31
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 29
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 28
- 239000002585 base Substances 0.000 description 28
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 25
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 23
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 22
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 21
- 239000000463 material Substances 0.000 description 20
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 20
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 19
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 18
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 18
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 18
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 18
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 18
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 17
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 17
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 16
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 16
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 16
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 16
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 15
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 15
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 15
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 15
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 15
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 15
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 14
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 14
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 14
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 14
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 14
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 14
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 13
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 13
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 13
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 13
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 13
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 12
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 12
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 12
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 12
- 238000004851 dishwashing Methods 0.000 description 12
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 11
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 11
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 11
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 241000499912 Trichoderma reesei Species 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 11
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 11
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 11
- 238000011160 research Methods 0.000 description 11
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 11
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 125000003412 L-alanyl group Chemical group [H]N([H])[C@@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 10
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000004141 Sodium laurylsulphate Substances 0.000 description 10
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 10
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 10
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 10
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 10
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 10
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 9
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 9
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 9
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 9
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 9
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 9
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 9
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 9
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N oxalic acid Substances OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 8
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 8
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 8
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 8
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 8
- 239000006081 fluorescent whitening agent Substances 0.000 description 8
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 8
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 7
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 7
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 7
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 7
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 7
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 description 7
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 7
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 7
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 7
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 7
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 7
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 150000004965 peroxy acids Chemical class 0.000 description 7
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 7
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 7
- 241000351920 Aspergillus nidulans Species 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 6
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 6
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 6
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 6
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 6
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 6
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 6
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YBMRDBCBODYGJE-UHFFFAOYSA-N germanium dioxide Chemical compound O=[Ge]=O YBMRDBCBODYGJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 6
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 6
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 6
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 6
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 6
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 6
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 6
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 6
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 6
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 6
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 6
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 6
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 6
- NSMMFSKPGXCMOE-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2-sulfophenyl)ethenyl]benzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1C=CC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O NSMMFSKPGXCMOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Natural products CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000194103 Bacillus pumilus Species 0.000 description 5
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 5
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 5
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 5
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 241000223258 Thermomyces lanuginosus Species 0.000 description 5
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 5
- 239000010408 film Substances 0.000 description 5
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 150000002924 oxiranes Chemical class 0.000 description 5
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 5
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 5
- WEAPVABOECTMGR-UHFFFAOYSA-N triethyl 2-acetyloxypropane-1,2,3-tricarboxylate Chemical compound CCOC(=O)CC(C(=O)OCC)(OC(C)=O)CC(=O)OCC WEAPVABOECTMGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 4
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 4
- 101000757144 Aspergillus niger Glucoamylase Proteins 0.000 description 4
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 4
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 description 4
- 241000193422 Bacillus lentus Species 0.000 description 4
- 241000345998 Calamus manan Species 0.000 description 4
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 4
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000605909 Fusobacterium Species 0.000 description 4
- 241001480714 Humicola insolens Species 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 4
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 4
- 241000235403 Rhizomucor miehei Species 0.000 description 4
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 4
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 4
- 208000037065 Subacute sclerosing leukoencephalitis Diseases 0.000 description 4
- 206010042297 Subacute sclerosing panencephalitis Diseases 0.000 description 4
- 101710135785 Subtilisin-like protease Proteins 0.000 description 4
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 4
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940054340 bacillus coagulans Drugs 0.000 description 4
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 4
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 4
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 4
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 4
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 4
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 4
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 4
- 235000012950 rattan cane Nutrition 0.000 description 4
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 4
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000004753 textile Substances 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- URAYPUMNDPQOKB-UHFFFAOYSA-N triacetin Chemical compound CC(=O)OCC(OC(C)=O)COC(C)=O URAYPUMNDPQOKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000057234 Acyl transferases Human genes 0.000 description 3
- 108700016155 Acyl transferases Proteins 0.000 description 3
- 102100034044 All-trans-retinol dehydrogenase [NAD(+)] ADH1B Human genes 0.000 description 3
- 101710193111 All-trans-retinol dehydrogenase [NAD(+)] ADH4 Proteins 0.000 description 3
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 3
- 241000235349 Ascomycota Species 0.000 description 3
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 3
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 3
- 241001328122 Bacillus clausii Species 0.000 description 3
- 108700038091 Beta-glucanases Proteins 0.000 description 3
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 3
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 3
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 3
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 3
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 3
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 3
- 241000589565 Flavobacterium Species 0.000 description 3
- 101000759028 Fusarium oxysporum Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 102000048120 Galactokinases Human genes 0.000 description 3
- 108700023157 Galactokinases Proteins 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102220468791 Inositol 1,4,5-trisphosphate receptor type 2_Y167A_mutation Human genes 0.000 description 3
- 102100027612 Kallikrein-11 Human genes 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 125000000570 L-alpha-aspartyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[C@]([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 3
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 3
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 3
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 3
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 3
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 3
- 241000190932 Rhodopseudomonas Species 0.000 description 3
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 3
- 241000187432 Streptomyces coelicolor Species 0.000 description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 description 3
- 241000218636 Thuja Species 0.000 description 3
- 241000202898 Ureaplasma Species 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N WHWLQLKPGQPMY Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N 0.000 description 3
- 108010048241 acetamidase Proteins 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 229940077388 benzenesulfonate Drugs 0.000 description 3
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010089934 carbohydrase Proteins 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 3
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 3
- 238000007046 ethoxylation reaction Methods 0.000 description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000578 graft copolymer Polymers 0.000 description 3
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 229920000847 nonoxynol Polymers 0.000 description 3
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 3
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 3
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 3
- 229920002006 poly(N-vinylimidazole) polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 102220052102 rs35524245 Human genes 0.000 description 3
- 102220087235 rs864622622 Human genes 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 235000019832 sodium triphosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 238000006277 sulfonation reaction Methods 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- HFDVRLIODXPAHB-UHFFFAOYSA-N 1-tetradecene Chemical compound CCCCCCCCCCCCC=C HFDVRLIODXPAHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LIPJWTMIUOLEJU-UHFFFAOYSA-N 2-(1,2-diamino-2-phenylethenyl)benzenesulfonic acid Chemical compound NC(=C(C=1C(=CC=CC1)S(=O)(=O)O)N)C1=CC=CC=C1 LIPJWTMIUOLEJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IEORSVTYLWZQJQ-UHFFFAOYSA-N 2-(2-nonylphenoxy)ethanol Chemical compound CCCCCCCCCC1=CC=CC=C1OCCO IEORSVTYLWZQJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XWSGEVNYFYKXCP-UHFFFAOYSA-N 2-[carboxymethyl(methyl)amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CN(C)CC(O)=O XWSGEVNYFYKXCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YGUMVDWOQQJBGA-VAWYXSNFSA-N 5-[(4-anilino-6-morpholin-4-yl-1,3,5-triazin-2-yl)amino]-2-[(e)-2-[4-[(4-anilino-6-morpholin-4-yl-1,3,5-triazin-2-yl)amino]-2-sulfophenyl]ethenyl]benzenesulfonic acid Chemical compound C=1C=C(\C=C\C=2C(=CC(NC=3N=C(N=C(NC=4C=CC=CC=4)N=3)N3CCOCC3)=CC=2)S(O)(=O)=O)C(S(=O)(=O)O)=CC=1NC(N=C(N=1)N2CCOCC2)=NC=1NC1=CC=CC=C1 YGUMVDWOQQJBGA-VAWYXSNFSA-N 0.000 description 2
- 241001019659 Acremonium <Plectosphaerellaceae> Species 0.000 description 2
- 102220466243 Acyl-coenzyme A thioesterase MBLAC2_R170A_mutation Human genes 0.000 description 2
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 108010037870 Anthranilate Synthase Proteins 0.000 description 2
- 101100163849 Arabidopsis thaliana ARS1 gene Proteins 0.000 description 2
- 201000002909 Aspergillosis Diseases 0.000 description 2
- 241001513093 Aspergillus awamori Species 0.000 description 2
- 208000036641 Aspergillus infections Diseases 0.000 description 2
- 101000690713 Aspergillus niger Alpha-glucosidase Proteins 0.000 description 2
- 101900318521 Aspergillus oryzae Triosephosphate isomerase Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 2
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 description 2
- 108700003918 Bacillus Thuringiensis insecticidal crystal Proteins 0.000 description 2
- 241000193747 Bacillus firmus Species 0.000 description 2
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 2
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 description 2
- 241000193764 Brevibacillus brevis Species 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 2
- 108010008885 Cellulose 1,4-beta-Cellobiosidase Proteins 0.000 description 2
- 241000146399 Ceriporiopsis Species 0.000 description 2
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000233652 Chytridiomycota Species 0.000 description 2
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 2
- 244000251987 Coprinus macrorhizus Species 0.000 description 2
- 235000001673 Coprinus macrorhizus Nutrition 0.000 description 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 2
- 108010001682 Dextranase Proteins 0.000 description 2
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 2
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 2
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 2
- 241000567178 Fusarium venenatum Species 0.000 description 2
- 241000626621 Geobacillus Species 0.000 description 2
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 description 2
- 101100369308 Geobacillus stearothermophilus nprS gene Proteins 0.000 description 2
- 101100080316 Geobacillus stearothermophilus nprT gene Proteins 0.000 description 2
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 2
- 102220477021 Hexokinase-4_S411F_mutation Human genes 0.000 description 2
- 241000223198 Humicola Species 0.000 description 2
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 125000003440 L-leucyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000002842 L-seryl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 2
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 2
- STECJAGHUSJQJN-USLFZFAMSA-N LSM-4015 Chemical compound C1([C@@H](CO)C(=O)OC2C[C@@H]3N([C@H](C2)[C@@H]2[C@H]3O2)C)=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-USLFZFAMSA-N 0.000 description 2
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 description 2
- 241000235087 Lachancea kluyveri Species 0.000 description 2
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 2
- 241000226677 Myceliophthora Species 0.000 description 2
- 241000187480 Mycobacterium smegmatis Species 0.000 description 2
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 2
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 description 2
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241001072230 Oceanobacillus Species 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 241000233654 Oomycetes Species 0.000 description 2
- 241000178960 Paenibacillus macerans Species 0.000 description 2
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 2
- 244000252132 Pleurotus eryngii Species 0.000 description 2
- 235000001681 Pleurotus eryngii Nutrition 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 2
- 235000003534 Saccharomyces carlsbergensis Nutrition 0.000 description 2
- 241001123227 Saccharomyces pastorianus Species 0.000 description 2
- 101100097319 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) ala1 gene Proteins 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000194048 Streptococcus equi Species 0.000 description 2
- 241000194054 Streptococcus uberis Species 0.000 description 2
- 241000187392 Streptomyces griseus Species 0.000 description 2
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 2
- 108010056079 Subtilisins Proteins 0.000 description 2
- 102000005158 Subtilisins Human genes 0.000 description 2
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 2
- KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-N Terephthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 241000222355 Trametes versicolor Species 0.000 description 2
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 2
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 229910021536 Zeolite Inorganic materials 0.000 description 2
- 241000758405 Zoopagomycotina Species 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 2
- 101150078331 ama-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 2
- 229940005348 bacillus firmus Drugs 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M benzenesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 102220429571 c.382G>A Human genes 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- MMCOUVMKNAHQOY-UHFFFAOYSA-N carbonoperoxoic acid Chemical compound OOC(O)=O MMCOUVMKNAHQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000012219 cassette mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 2
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000002361 compost Substances 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 239000004020 conductor Substances 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 150000005690 diesters Chemical class 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 2
- PMPJQLCPEQFEJW-GNTLFSRWSA-L disodium;2-[(z)-2-[4-[4-[(z)-2-(2-sulfonatophenyl)ethenyl]phenyl]phenyl]ethenyl]benzenesulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1\C=C/C1=CC=C(C=2C=CC(\C=C/C=3C(=CC=CC=3)S([O-])(=O)=O)=CC=2)C=C1 PMPJQLCPEQFEJW-GNTLFSRWSA-L 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- NFDRPXJGHKJRLJ-UHFFFAOYSA-N edtmp Chemical compound OP(O)(=O)CN(CP(O)(O)=O)CCN(CP(O)(O)=O)CP(O)(O)=O NFDRPXJGHKJRLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 2
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 108010091371 endoglucanase 1 Proteins 0.000 description 2
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 108010061330 glucan 1,4-alpha-maltohydrolase Proteins 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 239000001087 glyceryl triacetate Substances 0.000 description 2
- 235000013773 glyceryl triacetate Nutrition 0.000 description 2
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 150000003949 imides Chemical class 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 2
- 239000004337 magnesium citrate Substances 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 2
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 2
- 238000005497 microtitration Methods 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 2
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- RZJRJXONCZWCBN-UHFFFAOYSA-N octadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC RZJRJXONCZWCBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 108010087558 pectate lyase Proteins 0.000 description 2
- HWGNBUXHKFFFIH-UHFFFAOYSA-I pentasodium;[oxido(phosphonatooxy)phosphoryl] phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O HWGNBUXHKFFFIH-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 229960003330 pentetic acid Drugs 0.000 description 2
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 2
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N phthalocyanine Chemical compound N1C(N=C2C3=CC=CC=C3C(N=C3C4=CC=CC=C4C(=N4)N3)=N2)=C(C=CC=C2)C2=C1N=C1C2=CC=CC=C2C4=N1 IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 2
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 2
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 102220277192 rs1223476490 Human genes 0.000 description 2
- 102220278863 rs1395998044 Human genes 0.000 description 2
- 102220285717 rs1555461680 Human genes 0.000 description 2
- 102220026086 rs397518426 Human genes 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 2
- 229940048842 sodium xylenesulfonate Drugs 0.000 description 2
- QUCDWLYKDRVKMI-UHFFFAOYSA-M sodium;3,4-dimethylbenzenesulfonate Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1C QUCDWLYKDRVKMI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- MZSDGDXXBZSFTG-UHFFFAOYSA-M sodium;benzenesulfonate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 MZSDGDXXBZSFTG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 229940115922 streptococcus uberis Drugs 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- BGHCVCJVXZWKCC-UHFFFAOYSA-N tetradecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC BGHCVCJVXZWKCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 229960002622 triacetin Drugs 0.000 description 2
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003641 trioses Chemical class 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 2
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 description 2
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- LLSHAMSYHZEJBZ-BYPYZUCNSA-N (2s)-2-(2-sulfoethylamino)butanedioic acid Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NCCS(O)(=O)=O LLSHAMSYHZEJBZ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- UWRLZJRHSWQCQV-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-(2-sulfoethylamino)pentanedioic acid Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NCCS(O)(=O)=O UWRLZJRHSWQCQV-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- VKZRWSNIWNFCIQ-WDSKDSINSA-N (2s)-2-[2-[[(1s)-1,2-dicarboxyethyl]amino]ethylamino]butanedioic acid Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NCCN[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VKZRWSNIWNFCIQ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- OCUSNPIJIZCRSZ-ZTZWCFDHSA-N (2s)-2-amino-3-methylbutanoic acid;(2s)-2-amino-4-methylpentanoic acid;(2s,3s)-2-amino-3-methylpentanoic acid Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O.CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O.CC(C)C[C@H](N)C(O)=O OCUSNPIJIZCRSZ-ZTZWCFDHSA-N 0.000 description 1
- DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N (2s)-4-hydroxy-2-(propylamino)butanoic acid Chemical compound CCCN[C@H](C(O)=O)CCO DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- VXWBQOJISHAKKM-UHFFFAOYSA-N (4-formylphenyl)boronic acid Chemical compound OB(O)C1=CC=C(C=O)C=C1 VXWBQOJISHAKKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N (4r,7s,10s,13s,16r)-16-acetamido-13-(1h-imidazol-5-ylmethyl)-10-methyl-6,9,12,15-tetraoxo-7-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14-tetrazacycloheptadecane-4-carboxamide Chemical compound N1C(=O)[C@@H](NC(C)=O)CSSC[C@@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CC1=CN=CN1 FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- OSSNTDFYBPYIEC-UHFFFAOYSA-N 1-ethenylimidazole Chemical compound C=CN1C=CN=C1 OSSNTDFYBPYIEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- URDCARMUOSMFFI-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(2-hydroxyethyl)amino]acetic acid Chemical compound OCCN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O URDCARMUOSMFFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MEZSUYVBKMPDRF-UHFFFAOYSA-N 2-[carboxymethyl(ethoxy)amino]acetic acid Chemical compound CCON(CC(O)=O)CC(O)=O MEZSUYVBKMPDRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- POAOYUHQDCAZBD-UHFFFAOYSA-N 2-butoxyethanol Chemical compound CCCCOCCO POAOYUHQDCAZBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AOQMMJFQHIAXPX-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxynaphthalene-1-carboxylic acid;sodium Chemical compound [Na].C1=CC=C2C(C(=O)O)=C(O)C=CC2=C1 AOQMMJFQHIAXPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MXRGSJAOLKBZLU-UHFFFAOYSA-N 3-ethenylazepan-2-one Chemical compound C=CC1CCCCNC1=O MXRGSJAOLKBZLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHKLKWCYGIBEQF-UHFFFAOYSA-N 4-(1,3-benzothiazol-2-ylsulfanyl)morpholine Chemical compound C1COCCN1SC1=NC2=CC=CC=C2S1 MHKLKWCYGIBEQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GBLIGNUYGOFIKS-UHFFFAOYSA-N 4-[2-(3,5-dioxopiperazin-1-yl)ethyl]piperazine-2,6-dione Chemical compound C1C(=O)NC(=O)CN1CCN1CC(=O)NC(=O)C1 GBLIGNUYGOFIKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710163881 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Proteins 0.000 description 1
- HUYJTJXLNBOVFO-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxynaphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C(S(O)(=O)=O)C2=CC(O)=CC=C21 HUYJTJXLNBOVFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150104118 ANS1 gene Proteins 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010013043 Acetylesterase Proteins 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100510736 Actinidia chinensis var. chinensis LDOX gene Proteins 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 241000222518 Agaricus Species 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000220433 Albizia Species 0.000 description 1
- 102100034035 Alcohol dehydrogenase 1A Human genes 0.000 description 1
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 1
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 1
- 241000534414 Anotopterus nikparini Species 0.000 description 1
- 101100345345 Arabidopsis thaliana MGD1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710152845 Arabinogalactan endo-beta-1,4-galactanase Proteins 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 102000004580 Aspartic Acid Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010017640 Aspartic Acid Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000035101 Aspartic proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005502 Aspartic proteases Proteins 0.000 description 1
- 241001225321 Aspergillus fumigatus Species 0.000 description 1
- 241001480052 Aspergillus japonicus Species 0.000 description 1
- 101900127796 Aspergillus oryzae Glucoamylase Proteins 0.000 description 1
- 241000223651 Aureobasidium Species 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 101000775727 Bacillus amyloliquefaciens Alpha-amylase Proteins 0.000 description 1
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 description 1
- 241001328119 Bacillus gibsonii Species 0.000 description 1
- 101000695691 Bacillus licheniformis Beta-lactamase Proteins 0.000 description 1
- 108010029675 Bacillus licheniformis alpha-amylase Proteins 0.000 description 1
- 101000740449 Bacillus subtilis (strain 168) Biotin/lipoyl attachment protein Proteins 0.000 description 1
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 1
- 102100030981 Beta-alanine-activating enzyme Human genes 0.000 description 1
- 241000222478 Bjerkandera adusta Species 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- WTEJQBARPJSNLZ-UHFFFAOYSA-N C(C(=O)N)(=O)O.P Chemical compound C(C(=O)N)(=O)O.P WTEJQBARPJSNLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QLYHVLWJJRLFJQ-UHFFFAOYSA-N CCC(CCCCC)(CC)P(O)(O)=O.OCC Chemical compound CCC(CCCCC)(CC)P(O)(O)=O.OCC QLYHVLWJJRLFJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100327917 Caenorhabditis elegans chup-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N Carbamic acid Chemical compound NC(O)=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 1
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 1
- 229920002160 Celluloid Polymers 0.000 description 1
- 241000186221 Cellulosimicrobium cellulans Species 0.000 description 1
- 102100037633 Centrin-3 Human genes 0.000 description 1
- 241001466517 Ceriporiopsis aneirina Species 0.000 description 1
- 241001646018 Ceriporiopsis gilvescens Species 0.000 description 1
- 241001277875 Ceriporiopsis rivulosa Species 0.000 description 1
- 241000524302 Ceriporiopsis subrufa Species 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- RKWGIWYCVPQPMF-UHFFFAOYSA-N Chloropropamide Chemical compound CCCNC(=O)NS(=O)(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 RKWGIWYCVPQPMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000985909 Chrysosporium keratinophilum Species 0.000 description 1
- 241001674013 Chrysosporium lucknowense Species 0.000 description 1
- 241001556045 Chrysosporium merdarium Species 0.000 description 1
- 241001674001 Chrysosporium tropicum Species 0.000 description 1
- 241000355696 Chrysosporium zonatum Species 0.000 description 1
- 108090000227 Chymases Proteins 0.000 description 1
- 102000003858 Chymases Human genes 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241001478240 Coccus Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000222511 Coprinus Species 0.000 description 1
- 241001290175 Coriolopsis trogii Species 0.000 description 1
- 241000222356 Coriolus Species 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- 244000241257 Cucumis melo Species 0.000 description 1
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 description 1
- 241001559589 Cullen Species 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 101100342470 Dictyostelium discoideum pkbA gene Proteins 0.000 description 1
- RPNUMPOLZDHAAY-UHFFFAOYSA-N Diethylenetriamine Chemical class NCCNCCN RPNUMPOLZDHAAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150015836 ENO1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001063191 Elops affinis Species 0.000 description 1
- 101710147028 Endo-beta-1,4-galactanase Proteins 0.000 description 1
- 241000178951 Endomyces Species 0.000 description 1
- 235000002756 Erythrina berteroana Nutrition 0.000 description 1
- 101100385973 Escherichia coli (strain K12) cycA gene Proteins 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 241000223195 Fusarium graminearum Species 0.000 description 1
- 101150108358 GLAA gene Proteins 0.000 description 1
- 241000146398 Gelatoporia subvermispora Species 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 101100001650 Geobacillus stearothermophilus amyM gene Proteins 0.000 description 1
- 101000892220 Geobacillus thermodenitrificans (strain NG80-2) Long-chain-alcohol dehydrogenase 1 Proteins 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 101150009006 HIS3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100295959 Halobacterium salinarum (strain ATCC 700922 / JCM 11081 / NRC-1) arcB gene Proteins 0.000 description 1
- 101100246753 Halobacterium salinarum (strain ATCC 700922 / JCM 11081 / NRC-1) pyrF gene Proteins 0.000 description 1
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 1
- 101000780443 Homo sapiens Alcohol dehydrogenase 1A Proteins 0.000 description 1
- 101000773364 Homo sapiens Beta-alanine-activating enzyme Proteins 0.000 description 1
- 101000880522 Homo sapiens Centrin-3 Proteins 0.000 description 1
- 101000882901 Homo sapiens Claudin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 235000003332 Ilex aquifolium Nutrition 0.000 description 1
- 241000209027 Ilex aquifolium Species 0.000 description 1
- 241000411968 Ilyobacter Species 0.000 description 1
- 102220624340 Interferon alpha-8_A15T_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 101710172072 Kexin Proteins 0.000 description 1
- 241001138401 Kluyveromyces lactis Species 0.000 description 1
- 241000824268 Kuma Species 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 125000001176 L-lysyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 125000000769 L-threonyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](O[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 125000003798 L-tyrosyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C(O[H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000003580 L-valyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- 101710098556 Lipase A Proteins 0.000 description 1
- 241000222065 Lycoperdon Species 0.000 description 1
- 101710099648 Lysosomal acid lipase/cholesteryl ester hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 102100026001 Lysosomal acid lipase/cholesteryl ester hydrolase Human genes 0.000 description 1
- 101150068888 MET3 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001344131 Magnaporthe grisea Species 0.000 description 1
- 241001330975 Magnaporthe oryzae Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000012901 Milli-Q water Substances 0.000 description 1
- 229910016978 MnOx Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001661345 Moesziomyces antarcticus Species 0.000 description 1
- BHDBNLIGFKUDSQ-UHFFFAOYSA-N N(C(C(=O)O)CC(=O)O)C(C(=O)O)CC(=O)O.C(CCC(=O)O)(=O)O Chemical compound N(C(C(=O)O)CC(=O)O)C(C(=O)O)CC(=O)O.C(CCC(=O)O)(=O)O BHDBNLIGFKUDSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 241000221960 Neurospora Species 0.000 description 1
- 241000221961 Neurospora crassa Species 0.000 description 1
- 101100022915 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cys-11 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090000913 Nitrate Reductases Proteins 0.000 description 1
- 241001597008 Nomeidae Species 0.000 description 1
- 239000006057 Non-nutritive feed additive Substances 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100037214 Orotidine 5'-phosphate decarboxylase Human genes 0.000 description 1
- 108010055012 Orotidine-5'-phosphate decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N Orthosilicate Chemical compound [O-][Si]([O-])([O-])[O-] BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241001236817 Paecilomyces <Clavicipitaceae> Species 0.000 description 1
- 241000194109 Paenibacillus lautus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- SCKXCAADGDQQCS-UHFFFAOYSA-N Performic acid Chemical compound OOC=O SCKXCAADGDQQCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000222393 Phanerochaete chrysosporium Species 0.000 description 1
- 241000222397 Phlebia radiata Species 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000222350 Pleurotus Species 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 229920002504 Poly(2-vinylpyridine-N-oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 229920000805 Polyaspartic acid Polymers 0.000 description 1
- 241000768494 Polymorphum Species 0.000 description 1
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 101710194948 Protein phosphatase PhpP Proteins 0.000 description 1
- 240000004350 Prunus spinosa Species 0.000 description 1
- 235000010829 Prunus spinosa Nutrition 0.000 description 1
- 241000168225 Pseudomonas alcaligenes Species 0.000 description 1
- 241000589755 Pseudomonas mendocina Species 0.000 description 1
- 241000589630 Pseudomonas pseudoalcaligenes Species 0.000 description 1
- 241000577556 Pseudomonas wisconsinensis Species 0.000 description 1
- 101710081551 Pyrolysin Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 101100394989 Rhodopseudomonas palustris (strain ATCC BAA-98 / CGA009) hisI gene Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000204893 Saccharomyces douglasii Species 0.000 description 1
- 241001407717 Saccharomyces norbensis Species 0.000 description 1
- 241000222480 Schizophyllum Species 0.000 description 1
- 241000235346 Schizosaccharomyces Species 0.000 description 1
- 101100022918 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) sua1 gene Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004115 Sodium Silicate Substances 0.000 description 1
- 239000004902 Softening Agent Substances 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 241000264435 Streptococcus dysgalactiae subsp. equisimilis Species 0.000 description 1
- 241000120569 Streptococcus equi subsp. zooepidemicus Species 0.000 description 1
- 101100309436 Streptococcus mutans serotype c (strain ATCC 700610 / UA159) ftf gene Proteins 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- 101100370749 Streptomyces coelicolor (strain ATCC BAA-471 / A3(2) / M145) trpC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001518258 Streptomyces pristinaespiralis Species 0.000 description 1
- 102000004523 Sulfate Adenylyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010022348 Sulfate adenylyltransferase Proteins 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228341 Talaromyces Species 0.000 description 1
- 241001540751 Talaromyces ruber Species 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000203780 Thermobifida fusca Species 0.000 description 1
- 108090001109 Thermolysin Proteins 0.000 description 1
- 241001313536 Thermothelomyces thermophila Species 0.000 description 1
- 241001494489 Thielavia Species 0.000 description 1
- 241001149964 Tolypocladium Species 0.000 description 1
- 241000222354 Trametes Species 0.000 description 1
- 241000222357 Trametes hirsuta Species 0.000 description 1
- 241000217816 Trametes villosa Species 0.000 description 1
- 241000223260 Trichoderma harzianum Species 0.000 description 1
- 241000223261 Trichoderma viride Species 0.000 description 1
- 101710152431 Trypsin-like protease Proteins 0.000 description 1
- 102220470553 Tryptase delta_Q87E_mutation Human genes 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150050575 URA3 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000409279 Xerochrysium dermatitidis Species 0.000 description 1
- 241000235015 Yarrowia lipolytica Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588902 Zymomonas mobilis Species 0.000 description 1
- FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N [4,6-bis(cyanoamino)-1,3,5-triazin-2-yl]cyanamide Chemical compound N#CNC1=NC(NC#N)=NC(NC#N)=N1 FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920006243 acrylic copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010045649 agarase Proteins 0.000 description 1
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 1
- AOADSHDCARXSGL-ZMIIQOOPSA-M alkali blue 4B Chemical compound CC1=CC(/C(\C(C=C2)=CC=C2NC2=CC=CC=C2S([O-])(=O)=O)=C(\C=C2)/C=C/C\2=N\C2=CC=CC=C2)=CC=C1N.[Na+] AOADSHDCARXSGL-ZMIIQOOPSA-M 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000006177 alkyl benzyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005277 alkyl imino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005466 alkylenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 101150069003 amdS gene Proteins 0.000 description 1
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000001166 anti-perspirative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001153 anti-wrinkle effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003213 antiperspirant Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 101150009206 aprE gene Proteins 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 101150008194 argB gene Proteins 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 229940091771 aspergillus fumigatus Drugs 0.000 description 1
- 238000005844 autocatalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 101150103518 bar gene Proteins 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N benzo-alpha-pyrone Natural products C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000188 beta-D-glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000003139 biocide Substances 0.000 description 1
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 150000001642 boronic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005282 brightening Methods 0.000 description 1
- HKPHPIREJKHECO-UHFFFAOYSA-N butachlor Chemical compound CCCCOCN(C(=O)CCl)C1=C(CC)C=CC=C1CC HKPHPIREJKHECO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 102220350531 c.80A>G Human genes 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 229920003086 cellulose ether Polymers 0.000 description 1
- 229920003174 cellulose-based polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- 229940097572 chloromycetin Drugs 0.000 description 1
- 238000011098 chromatofocusing Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 229940011182 cobalt acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000007797 corrosion Effects 0.000 description 1
- 238000005260 corrosion Methods 0.000 description 1
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- NSFKBZXCXCJZDQ-UHFFFAOYSA-N cumene;sodium Chemical compound [Na].CC(C)C1=CC=CC=C1 NSFKBZXCXCJZDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 101150005799 dagA gene Proteins 0.000 description 1
- 238000005202 decontamination Methods 0.000 description 1
- 230000003588 decontaminative effect Effects 0.000 description 1
- 238000005034 decoration Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002050 diffraction method Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000004316 dimethyl dicarbonate Substances 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- REZZEXDLIUJMMS-UHFFFAOYSA-M dimethyldioctadecylammonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC REZZEXDLIUJMMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-N diphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(O)=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- VUJGKADZTYCLIL-YHPRVSEPSA-L disodium;5-[(4-anilino-6-morpholin-4-yl-1,3,5-triazin-2-yl)amino]-2-[(e)-2-[4-[(4-anilino-6-morpholin-4-yl-1,3,5-triazin-2-yl)amino]-2-sulfonatophenyl]ethenyl]benzenesulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(\C=C\C=2C(=CC(NC=3N=C(N=C(NC=4C=CC=CC=4)N=3)N3CCOCC3)=CC=2)S([O-])(=O)=O)C(S(=O)(=O)[O-])=CC=1NC(N=C(N=1)N2CCOCC2)=NC=1NC1=CC=CC=C1 VUJGKADZTYCLIL-YHPRVSEPSA-L 0.000 description 1
- VTIIJXUACCWYHX-UHFFFAOYSA-L disodium;carboxylatooxy carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)OOC([O-])=O VTIIJXUACCWYHX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- DUYCTCQXNHFCSJ-UHFFFAOYSA-N dtpmp Chemical compound OP(=O)(O)CN(CP(O)(O)=O)CCN(CP(O)(=O)O)CCN(CP(O)(O)=O)CP(O)(O)=O DUYCTCQXNHFCSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102220500059 eIF5-mimic protein 2_S54V_mutation Human genes 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 108010091384 endoglucanase 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010092450 endoglucanase Z Proteins 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- IIWMSIPKUVXHOO-UHFFFAOYSA-N ethyl hexyl sulfate Chemical compound CCCCCCOS(=O)(=O)OCC IIWMSIPKUVXHOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000028023 exocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000675 fabric finishing Substances 0.000 description 1
- 239000002979 fabric softener Substances 0.000 description 1
- 235000019387 fatty acid methyl ester Nutrition 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000009962 finishing (textile) Methods 0.000 description 1
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 1
- 238000005243 fluidization Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000010437 gem Substances 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 1
- YCOZIPAWZNQLMR-UHFFFAOYSA-N heptane - octane Natural products CCCCCCCCCCCCCCC YCOZIPAWZNQLMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 102000057593 human F8 Human genes 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000001841 imino group Chemical group [H]N=* 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009655 industrial fermentation Methods 0.000 description 1
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 1
- 230000017730 intein-mediated protein splicing Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000010977 jade Substances 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 238000004900 laundering Methods 0.000 description 1
- PBOSTUDLECTMNL-UHFFFAOYSA-N lauryl acrylate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOC(=O)C=C PBOSTUDLECTMNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TWNIBLMWSKIRAT-VFUOTHLCSA-N levoglucosan Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2CO[C@@H]1O2 TWNIBLMWSKIRAT-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- SXQCTESRRZBPHJ-UHFFFAOYSA-M lissamine rhodamine Chemical compound [Na+].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1S([O-])(=O)=O SXQCTESRRZBPHJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101150039489 lysZ gene Proteins 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- HIQXJRBKNONWAH-UHFFFAOYSA-N methylidenephosphane Chemical compound P=C HIQXJRBKNONWAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 108010020132 microbial serine proteinases Proteins 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- DUWWHGPELOTTOE-UHFFFAOYSA-N n-(5-chloro-2,4-dimethoxyphenyl)-3-oxobutanamide Chemical compound COC1=CC(OC)=C(NC(=O)CC(C)=O)C=C1Cl DUWWHGPELOTTOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YVJGIGDFHMIDFH-FTWQHDNSSA-N n-[(2s,3r,4r,5r,6r)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-2-methoxyoxan-3-yl]-5-(dimethylamino)naphthalene-1-sulfonamide Chemical compound CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1NS(=O)(=O)C1=CC=CC2=C(N(C)C)C=CC=C12 YVJGIGDFHMIDFH-FTWQHDNSSA-N 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N n-hexanoic acid Natural products CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 101150095344 niaD gene Proteins 0.000 description 1
- 108020001162 nitroreductase Proteins 0.000 description 1
- 125000001400 nonyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- SNQQPOLDUKLAAF-UHFFFAOYSA-N nonylphenol Chemical class CCCCCCCCCC1=CC=CC=C1O SNQQPOLDUKLAAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150105920 npr gene Proteins 0.000 description 1
- 101150017837 nprM gene Proteins 0.000 description 1
- 230000000474 nursing effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 101150019841 penP gene Proteins 0.000 description 1
- JRKICGRDRMAZLK-UHFFFAOYSA-L peroxydisulfate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O JRKICGRDRMAZLK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000005342 perphosphate group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- JTJMJGYZQZDUJJ-UHFFFAOYSA-N phencyclidine Chemical compound C1CCCCN1C1(C=2C=CC=CC=2)CCCCC1 JTJMJGYZQZDUJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HXITXNWTGFUOAU-UHFFFAOYSA-N phenylboronic acid Chemical class OB(O)C1=CC=CC=C1 HXITXNWTGFUOAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M phosphonate Chemical compound [O-]P(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid Substances OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- XKJCHHZQLQNZHY-UHFFFAOYSA-N phthalimide Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NC(=O)C2=C1 XKJCHHZQLQNZHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052615 phyllosilicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 229920003227 poly(N-vinyl carbazole) Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 108010064470 polyaspartate Proteins 0.000 description 1
- 229920005646 polycarboxylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 description 1
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000004300 potassium benzoate Substances 0.000 description 1
- HDMGAZBPFLDBCX-UHFFFAOYSA-M potassium;sulfooxy sulfate Chemical compound [K+].OS(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O HDMGAZBPFLDBCX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N protonated dimethyl amine Natural products CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150108007 prs gene Proteins 0.000 description 1
- 101150086435 prs1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150070305 prsA gene Proteins 0.000 description 1
- 101150054232 pyrG gene Proteins 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 229940047431 recombinate Drugs 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000033458 reproduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 102200131574 rs11556620 Human genes 0.000 description 1
- 102220036452 rs137882485 Human genes 0.000 description 1
- 102200065573 rs140660066 Human genes 0.000 description 1
- 102200118280 rs33918343 Human genes 0.000 description 1
- 102220243297 rs374524755 Human genes 0.000 description 1
- 102200128586 rs397508464 Human genes 0.000 description 1
- 102220047008 rs587776405 Human genes 0.000 description 1
- 102220289974 rs757282628 Human genes 0.000 description 1
- 102220123717 rs759057581 Human genes 0.000 description 1
- 102200025035 rs786203989 Human genes 0.000 description 1
- 102220099575 rs878853725 Human genes 0.000 description 1
- 101150025220 sacB gene Proteins 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012807 shake-flask culturing Methods 0.000 description 1
- 101150091813 shfl gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940045872 sodium percarbonate Drugs 0.000 description 1
- NTHWMYGWWRZVTN-UHFFFAOYSA-N sodium silicate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Si]([O-])=O NTHWMYGWWRZVTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052911 sodium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- AXMCIYLNKNGNOT-UHFFFAOYSA-N sodium;3-[[4-[(4-dimethylazaniumylidenecyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)-[4-[ethyl-[(3-sulfophenyl)methyl]amino]phenyl]methyl]-n-ethylanilino]methyl]benzenesulfonate Chemical compound [Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](C)C)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S(O)(=O)=O)=C1 AXMCIYLNKNGNOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCNRQYHSJVEIGH-ASTDGNLGSA-M sodium;5-benzo[e]benzotriazol-2-yl-2-[(e)-2-phenylethenyl]benzenesulfonate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC(N2N=C3C4=CC=CC=C4C=CC3=N2)=CC=C1\C=C\C1=CC=CC=C1 PCNRQYHSJVEIGH-ASTDGNLGSA-M 0.000 description 1
- YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M sodium;oxidooxy(oxo)borane Chemical compound [Na+].[O-]OB=O YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000007614 solvation Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 1
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 150000003457 sulfones Chemical class 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001117 sulphuric acid Substances 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- BHTRKEVKTKCXOH-LBSADWJPSA-N tauroursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 BHTRKEVKTKCXOH-LBSADWJPSA-N 0.000 description 1
- OFVLGDICTFRJMM-WESIUVDSSA-N tetracycline Chemical compound C1=CC=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@@]4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O OFVLGDICTFRJMM-WESIUVDSSA-N 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 229940095068 tetradecene Drugs 0.000 description 1
- 150000004685 tetrahydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OHOTVSOGTVKXEL-UHFFFAOYSA-K trisodium;2-[bis(carboxylatomethyl)amino]propanoate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)C(C)N(CC([O-])=O)CC([O-])=O OHOTVSOGTVKXEL-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 101150016309 trpC gene Proteins 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 101150052264 xylA gene Proteins 0.000 description 1
- 101150110790 xylB gene Proteins 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
- C11D3/16—Organic compounds
- C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
- C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
- C11D3/38636—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase containing enzymes other than protease, amylase, lipase, cellulase, oxidase or reductase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
- C11D3/16—Organic compounds
- C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
- C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
- C11D3/16—Organic compounds
- C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
- C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
- C11D3/38645—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase containing cellulase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
- C11D3/16—Organic compounds
- C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
- C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
- C11D3/38681—Chemically modified or immobilised enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2437—Cellulases (3.2.1.4; 3.2.1.74; 3.2.1.91; 3.2.1.150)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
- C12N9/244—Endo-1,3(4)-beta-glucanase (3.2.1.6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01004—Cellulase (3.2.1.4), i.e. endo-1,4-beta-glucanase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01006—Endo-1,3(4)-beta-glucanase (3.2.1.6)
Abstract
本发明涉及β‑葡聚糖酶变体。本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸;包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体、以及宿主细胞;以及使用这些变体的方法。
Description
序列表的引用
本申请包括计算机可读形式的序列表,将其通过引用结合在此。
发明背景
发明领域
本发明涉及β-葡聚糖酶变体、编码这些变体的多核苷酸、产生这些变体的方法以及使用这些变体的方法。
相关领域描述
β-葡聚糖大量发现于燕麦片和谷物中,并且因此是衣服和餐具洗涤应用中待解决的相关底物。多种芽孢杆菌属物种,像例如,解淀粉芽孢杆菌表达β-葡聚糖酶,但是这些酶通常对粉末和ADW洗涤剂中存在的漂白剂是敏感的。
本发明提供了与其亲本相比具有改进的特性的β-葡聚糖酶变体。
发明概述
本发明涉及β-葡聚糖酶变体,这些变体在与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的位置M29和/或M180对应的一个或多个位置处包括取代,其中这些变体具有β-葡聚糖酶活性并且其中该变体与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的成熟多肽具有至少60%但小于100%的序列一致性。
本发明还涉及包括这些变体的组合物。
此外,本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸,包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞;以及生产这些变体的方法。
本发明还涉及洗涤织物或纺织品或硬表面清洁的方法,包括使用本发明变体的自动化餐具洗涤(ADW)。
本发明还涉及包括本发明变体的洗涤剂组合物。
附图简要说明
图1示出了多个芽孢杆菌属β-葡聚糖酶的多重比对:凝结芽孢杆菌β-葡聚糖酶(UNIPROT:H9N813)、萎缩芽孢杆菌β-葡聚糖酶(UNIPROT:I4XBF1)、特基拉芽孢杆菌β-葡聚糖酶(UNIPROT:K00A689)、枯草芽孢杆菌亚种纳豆芽孢杆菌β-葡聚糖酶(UNIPROT:D4G3N4)、短小芽孢杆菌β-葡聚糖酶(UNIPROT:B4AIH9)、地衣芽孢杆菌β-葡聚糖酶(UNIPROT:Q84GK1)、和SEQ ID NO:2。
定义
β-葡聚糖酶:术语“β-葡聚糖酶”意指催化β-葡聚糖中连接两个葡糖基残基的β-1,3或β-1,4-键水解的内切β-1,3-1,4-葡聚糖酶活性(EC 3.2.1.4.)。出于本发明的目的,根据实例中所述的程序确定β-葡聚糖酶活性。在一方面,本发明的变体与具有SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的序列的多肽具有至少20%,例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少100%的β-葡聚糖酶活性。β-葡聚糖酶活性适当地可以使用大麦β-葡聚糖作为底物,优选地使用染色的β-葡聚糖作为底物,例如被雷玛唑亮蓝R染料染色的高度纯化的、低黏稠度大麦1,3-1,4-β-葡聚糖来测量。用于确定β-葡聚糖酶活性的优选测定披露于实例1中。
等位基因变体:术语“等位基因变体”意指占据同一染色体基因座的基因的两种或更多种可替代形式中的任一种。等位基因变异由突变天然产生,并且可以导致群体内的多态性。基因突变可以是沉默的(在所编码的多肽中没有改变)或可编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
cDNA:术语“cDNA”意指可以通过从得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子进行反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。早先的初始RNA转录本是mRNA的前体,其在呈现为成熟的剪接的mRNA之前要经一系列的步骤进行加工,包括剪接。
编码序列:术语“编码序列”意指直接指明变体的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由开放阅读框架决定,该开放阅读框架从起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可以是基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。
控制序列:术语“控制序列”意指对于表达编码本发明的变体的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该变体的多核苷酸来说可以是原生的(即,来自相同基因)或者外源的(即,来自不同基因),或者相对于彼此是原生的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导子、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、以及转录终止子。至少,控制序列包括启动子,以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将这些控制序列与编码变体的多核苷酸的编码区连接的特异性限制酶切位点的目的,这些控制序列可以提供有多个接头。
表达:术语“表达”包括涉及变体产生的任何步骤,包括但不限于,转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰以及分泌。
表达载体:术语“表达载体”意指线性或环状DNA分子,该分子包括编码变体的多核苷酸并且该多核苷酸可操作地与提供用于其表达的控制序列相连接。
片段:术语“片段”意指从成熟多肽的氨基和/或羧基末端缺失一个或多个(例如,若干个)氨基酸的多肽;其中该片段具有β-葡聚糖酶活性。
高严格条件:术语“高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言,遵循标准DNA印迹程序,在42℃下在5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和50%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。载体材料最终使用2X SSC、0.2%SDS,在65℃下洗涤三次,每次15分钟。
宿主细胞:术语“宿主细胞”意指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间发生的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。
改进的特性:术语“改进的特性”意指与一种变体相关的相对于亲本有所改进的特征。此类改进的性质包括但不限于:催化效率、催化速率、化学稳定性、氧化稳定性、pH活性、pH稳定性、比活性、在贮存条件下的稳定性、底物结合、底物裂解、底物特异性、底物稳定性、表面性质、热活性、和热稳定性。优选地,与亲本β-葡聚糖酶相比,本发明变体相关的改进的性质是改进的氧化稳定性。
分离的:术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质,(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质,该物质至少部分地从与其本质上相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除;(3)相对于天然发现的物质通过人工修饰的任何物质;或(4)通过相对于与其天然相关联的其他组分增加该物质的量而修饰的任何物质(例如,编码该物质的基因的多个拷贝;比与编码该物质的基因天然相关联的启动子更强的启动子的使用)。分离的物质可以存在于发酵液样品中。
低严格条件:术语“低严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言,遵循标准DNA印迹程序,在42℃下在5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和25%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。载体材料最终使用2X SSC、0.2%SDS,在50℃下洗涤三次,每次15分钟。
成熟多肽:根据本发明,术语成熟多肽在通常含义中被理解为由生物体,如宿主微生物产生的活性多肽。通常,编码分泌酶的基因编码全长多肽,该全长多肽包括分泌期间去除的信号序列和与活性酶的蛋白质序列对应的成熟多肽。例如,解淀粉芽孢杆菌β-葡聚糖酶基因编码具有SEQ ID NO:1中示出的序列的全长多肽和形成具有SEQ ID NO:3中示出的序列的活性酶的成熟多肽。对应地,枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶基因编码具有SEQ ID NO:2中示出的序列的全长多肽和形成具有SEQ ID NO:4中示出的序列的活性酶的成熟多肽。
中严格条件:术语“中严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言,遵循标准DNA印迹程序,在42℃下在5X SSPE、0.3%SDS、200微克/mL剪切并变性的鲑鱼精子DNA和35%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。载体材料最终使用2X SSC、0.2%SDS,在55℃下洗涤三次,每次15分钟。
中-高严格条件:术语“中-高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言,遵循标准DNA印迹程序,在42℃下在5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA以及35%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。载体材料最终使用2X SSC、0.2%SDS,在60℃下洗涤三次,每次15分钟。
核酸构建体:术语“核酸构建体”意指单链或双链的核酸分子,该核酸分子是从天然存在的基因中分离的,或以本来不存在于自然界中的方式被修饰成含有核酸的区段,或是合成的,该核酸分子包括一个或多个控制序列。
可操作地连接:术语“可操作地连接”意指如下的构造,其中,控制序列相对于多核苷酸的编码序列安置在适当位置,从而使得该控制序列指导该编码序列的表达。
亲本或亲本β-葡聚糖酶:术语“亲本”或“亲本β-葡聚糖酶”意指进行变化以产生本发明的酶变体的β-葡聚糖酶。该亲本可以是天然存在的(野生型)多肽或其变体或片段。
序列一致性:用参数“序列一致性”来描述两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性。
出于本发明的目的,使用如在EMBOSS包(EMBOSS:欧洲分子生物学开放软件套件(The European Molecular Biology Open Software Suite),赖斯(Rice)等人,2000,遗传学趋势(Trends Genet.)16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔(Needle)程序中所实施的尼德尔曼-翁施(Needleman-Wunsch)算法(尼德尔曼(Needleman)和翁施(Wunsch),1970,分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列一致性。所使用的参数是空位开放罚分10,空位延伸罚分0.5,以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版)取代矩阵。尼德尔标注的“最长的一致性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比一致性,并且计算如下:
(一致的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
出于本发明的目的,使用如在EMBOSS包(EMBOSS:欧洲分子生物学开放软件套件,赖斯(Rice)等人,2000,见上文)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德尔曼-翁施算法(尼德尔曼(Needleman)和翁施(Wunsch),1970,见上文)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列一致性。所使用的参数是空位开放罚分10,空位延伸罚分0.5,以及EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版)取代矩阵。尼德尔标注的“最长的一致性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比一致性,并且计算如下:
(一致的脱氧核糖核苷酸x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
变体:术语“变体”意指在一个或多个(例如,若干个)位置处包括改变(即,取代、插入和/或缺失)的具有β-葡聚糖酶活性的多肽。取代意指将占据某位置的氨基酸用不同的氨基酸替代;缺失意指去除占据一个位置的氨基酸;并且插入意指在邻接并且紧随占据一个位置的氨基酸之后添加一个氨基酸。本发明的变体与具有SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的序列的多肽具有至少20%,例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少100%的β-葡聚糖酶活性。
野生型β-葡聚糖酶:术语“野生型”β-葡聚糖酶酶意指由天然存在的微生物(如在自然界中发现的细菌、酵母或丝状真菌)表达的β-葡聚糖酶。
餐具洗涤组合物:术语“餐具洗涤组合物”是指用于清洁硬表面的所有形式的组合物。本发明不局限于任何具体类型的餐具洗涤组合物或任何具体洗涤剂。
硬表面清洁:在此将术语“硬表面清洁”定义为清洁硬表面,其中硬表面可以包括地板、桌子、墙壁、屋顶等,连同硬物体的表面,例如汽车(汽车洗涤)和餐具(餐具洗涤)。餐具洗涤包括但不限于,清洁盘子、杯子、玻璃杯、碗、用餐工具(例如匙、刀、叉)、上菜用具、陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃及丙烯酸酯。
改进的洗涤性能:在此将术语“改进的洗涤性能”定义为如下(变体)酶,该酶展示出蛋白酶变体的洗涤性能相对于亲本蛋白酶变体的洗涤性能的变化,例如增加的去污。术语“洗涤性能”包括在衣物洗涤并且例如在餐具洗涤中的洗涤性能。
洗涤性能:术语“洗涤性能”被用作酶在例如洗涤或硬表面清洁过程中除去存在于有待清洁的物体上的污渍的能力。
变体命名规则
出于本发明的目的,使用在SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中披露的多肽来确定另一种β-葡聚糖酶中的相应的氨基酸残基。将另一种β-葡聚糖酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中披露的多肽进行比对,并且基于该比对,使用尼德曼-翁施算法(尼德曼和翁施,1970,分子生物学杂志48:443-453)来确定与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中所披露的多肽的任何氨基酸残基相对应的氨基酸位置编号,该算法如EMBOSS软件包(EMBOSS:欧洲分子生物学开放软件套件,赖斯等人,2000,遗传学趋势16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔(Needle)程序所实施的。所使用的参数是空位开放罚分10,空位延伸罚分0.5,以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版)取代矩阵。
另一种β-葡聚糖酶中相对应的氨基酸残基的鉴别可以通过使用若干计算机程序使用其对应的缺省参数比对多个多肽序列来确定,这些计算机程序包括但不限于MUSCLE(通过对数期望值的多序列比较;3.5版或更新版本;埃德加(Edgar),2004,核酸研究(Nucleic Acids Research)32:1792-1797);MAFFT(6.857版或更新版本;加藤(Katoh)和库玛(Kuma),2002,核酸研究30:3059-3066;加藤等人,2005,核酸研究33:511-518;加藤和朝都(Toh),2007,生物信息学(Bioinformatics)23:372-374;加藤等人,2009,分子生物学中的方法(Methods in Molecular Biology)537:_39-64;加藤和朝都,2010,生物信息学26:_1899-1900);以及采用ClustalW的EMBOSS EMMA(1.83版或更新版本;汤普森等人,1994,核酸研究22:4673-4680)。
当其他酶与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽相背离使得传统的基于序列的比较方法不能检测其关系时(林达尔(Lindahl)和埃洛弗松(Elofsson),2000,分子生物学杂志)295:613-615),可应用其他成对序列比较算法。在基于序列的搜索中的更大灵敏度可以使用搜索程序来获得,这些搜索程序利用多肽家族的概率表示(特征曲线)来搜索数据库。例如,PSIBLAST程序通过迭代数据库搜索过程来产生多个特征曲线并且能够检测远距离同源物(阿特休尔(Atschul)等人,1997,核酸研究25:3389-3402)。如果多肽的家族或超家族在蛋白结构数据库中具有一个或多个代表,则可以实现甚至更大的灵敏度。程序如GenTHREADER(琼斯(Jones),1999,分子生物学杂志287:797-815;麦古芬(McGuffin)和琼斯,2003,生物信息学19:874-881)利用来自不同来源(PSIBLAST、二级结构预测、结构比对谱、以及溶剂化势)的信息作为预测查询序列的结构折叠的神经网络的输入。类似地,高夫(Gough)等人,2000,分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)313:903-919的方法可以用于比对未知结构的序列与存在于SCOP数据库中的超家族模型。这些比对进而可以用于产生多肽的同源性模型,并且使用出于该目的而开发的多种工具可以评定此类模型的准确度。
对于已知结构的蛋白,若干工具和资源可用于检索并产生结构比对。例如,蛋白的SCOP超家族已经在结构上进行比对,并且那些比对是可访问的并且可下载的。使用多种算法(例如距离比对矩阵(赫尔姆(Holm)和桑德尔(Sander),1998,蛋白杂志(Proteins)33:88-96)或者组合扩展(辛迪亚洛夫(Shindyalov)和伯恩(Bourne),1998,蛋白质工程学11:739-747))可以比对两个或更多个蛋白结构,并且可以另外地利用这些算法的实施来随所感兴趣的结构查询结构数据库以便发现可能的结构同源物(例如,赫尔姆和帕克(Park),2000,生物信息学16:566-567)。
在描述本发明的变体中,以下所述的命名法适于方便参考。采用了已接受的IUPAC单个字母和三字母的氨基酸缩写。
取代。对于氨基酸取代,使用以下命名法:初始氨基酸、位置、取代氨基酸。因此,在位置226处的苏氨酸被丙氨酸取代表示为“Thr226Ala”或者“T226A”。多个突变由加号(“+”)分开,例如,“Gly205Arg+Ser411Phe”或“G205R+S411F”代表分别在位置205和位置411处甘氨酸(G)被精氨酸(R)取代,并且丝氨酸(S)被苯丙氨酸(F)取代。
缺失。对于氨基酸缺失,使用以下命名法:初始氨基酸、位置、*。因此,在位置195处的甘氨酸缺失表示为“Gly195*”或“G195*”。多个缺失由加号(“+”)分开,例如“Gly195*+Ser411*”或“G195*+S411*”。
插入。对于氨基酸插入,使用以下命名法:初始氨基酸、位置、初始氨基酸、插入氨基酸。因此,在位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸被表示为“Gly195GlyLys”或“G195GK”。多个氨基酸的插入被表示为[初始氨基酸,位置,初始氨基酸,插入氨基酸#1、插入氨基酸#2;等]。例如,在位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸和丙氨酸被表示为“Glyl95GlyLysAla”或“G195GKA”。
在此类情况下,通过将小写字母添加至在所插入的一个或多个氨基酸残基之前的氨基酸残基的位置编号中来对所插入的一个或多个氨基酸残基进行编号。在以上实例中,该序列因此将是:
亲本: | 变体: |
195 | 195 195a 195b |
G | G-K-A |
多种改变。包括多种改变的变体由加号(“+”)分开,例如“Arg170Tyr+Gly195Glu”或者“R170Y+G195E”代表在位置170和位置195处的精氨酸和甘氨酸分别被酪氨酸和谷氨酸取代。
不同的改变。可以在一个位置上引入不同的变化时,这些不同的变化由一个逗号分开,例如“Arg170Tyr,Glu”代表在位置170上的精氨酸被酪氨酸或谷氨酸取代。因此,“Tyr167Gly,Ala+Arg170Gly,Ala”表示以下变体:
“Tyr167Gly+Arg170Gly”、“Tyr167Gly+Arg170Ala”、“Tyr167Ala+Arg170Gly”、和“Tyr167Ala+Arg170Ala”。
发明详细说明
本发明涉及分离的β-葡聚糖酶变体,该变体在与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的位置M29和/或M180对应的一个或多个位置处包括取代,其中该变体具有β-葡聚糖酶活性。
变体
本发明还提供了β-葡聚糖酶变体,该变体在与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中位置M29和/或M180对应的一个或多个位置处包括取代,其中该变体具有β-葡聚糖酶活性。
在一个实施例中,这种改变是取代。
在一个实施例中,该变体与该亲本β-葡聚糖酶的氨基酸序列具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%但小于100%的序列一致性。
在另一个实施例中,该变体与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽具有至少60%,例如,至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、如至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%但小于100%的序列一致性。
在一方面,在本发明的变体中的变化数目是1至20个,例如1至10个和1至5个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或者10个变化。
在另一方面,变体在与位置M29和/或M180对应的一个或多个位置处包括取代。在另一方面,变体在与位置M29和M180对应的两个位置处包括取代。
在另一方面,该变体在对应于位置M29的位置处包括取代或由其组成。在另一方面,在与位置M29对应的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val,优选地被Ala、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、Leu、Ser、Trp、Tyr、或Val,更优选地被Val、Gly、Asn、Ser或Cys取代。在另一方面,该变体包括SEQID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的取代M29Y或N或由其组成。
在另一方面,该变体包括在与位置M180对应的位置处的取代或由其组成。在另一方面,在与位置M180对应的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val,优选地被Ala、Arg、Cys、Gln、Glu、His、Leu、Phe、Pro、Ser、Thr或Tyr,更优选地被Leu、His或Arg取代。在另一方面,该变体包括SEQID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的取代M180H或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置M29和M180的位置处包括取代或由其组成,例如以上所述的那些。
在另一方面,该变体包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的取代M29V+M180L、H、T或由其组成。
在另一方面,该变体包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的取代M29A+M180F或由其组成。
在另一方面,该变体包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的取代M29G+M180L、R、H、C或由其组成。
在另一方面,该变体包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的取代M29S+M180Y、A、L或由其组成。
在另一方面,该变体包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的取代M29E+M180L或由其组成。
在另一方面,该变体包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的取代M29W+M180S或由其组成。
在另一方面,该变体包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的取代M29N+M180F、Q或由其组成。
在另一方面,该变体包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的取代M29C+M180E、P或由其组成。
在另一方面,该变体包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的取代M29Q+M180R或由其组成。
在另一方面,该变体包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的取代M29L+M180T或由其组成。
这些变体可进一步地包括在一个或更多个(例如,若干个)其他位置上的一个或多个另外的改变。
氨基酸改变可以具有次要性质,即不显著影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入;典型地1-30个氨基酸的小缺失;小的氨基或羧基末端延伸,如氨基末端蛋氨酸残基;至多20-25个残基的小接头肽;或通过改变净电荷或另一功能来促进纯化的小延伸,如多组氨酸序列(poly histidine tract)、抗原性表位或结合结构域。
保守取代的实例是在下组的范围内:碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及蛋氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.诺伊拉特(Neurath)和R.L.希尔(Hill),1979,在蛋白质(The Proteins),学术出版社(Academic Press),纽约中描述。常见取代是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、以及Asp/Gly。
可替代地,氨基酸改变具有这样的性质:改变多肽的物理化学特性。例如,氨基酸改变可以改进多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变最适pH等。
可以根据本领域中已知的程序,如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(坎宁汉(Cunningham)和威尔斯(Wells),1989,科学(Science)244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中,在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变,并且对所得突变体分子的β-葡聚糖酶活性进行测试以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参看希尔顿(Hilton)等人,1996,生物化学杂志(J.Biol.Chem.)271:4699-4708。也可结合假定接触位点氨基酸的突变,如通过以下技术例如核磁共振、结晶学、电子衍射、或光亲和标记进行确定,对结构进行物理学分析,从而确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见,例如德·沃斯(de Vos)等人,1992,科学(Science)255:306-312;史密斯(Smith)等人,1992,分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)224:899-904;Wlodaver等人,1992,欧洲生物化学学会联盟通讯(FEBS Lett.)309:59-64。还可以从与相关多肽的比对推断鉴别必需氨基酸。
在一个实施例中,与亲本酶相比,该变体具有改进的氧化稳定性。
在一个实施例中,变体与母体酶相比具有改进的热稳定性。
亲本β-葡聚糖酶
该亲本β-葡聚糖酶可以是在与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的M29和M180对应的至少一个位置处具有蛋氨酸残基的芽孢杆菌属β-葡聚糖酶。这两种蛋氨酸在芽孢杆菌属β-葡聚糖酶中具有广泛的保守性,对一些碱性芽孢杆菌属β-葡聚糖酶也是一样,该碱性芽孢杆菌属β-葡聚糖酶与SEO ID NO:3或SEQ ID NO:4具有低一致性,例如,低至约50%的一致性或甚至更低序列一致性。然而,在浸麻芽孢杆菌β-葡聚糖酶中,仅发现了M180,而于位置29处发现缬氨酸。在来自浸麻芽孢杆菌的β-葡聚糖酶和具有SEQ ID NO:3的来自解淀粉芽孢杆菌的β-葡聚糖酶之间的一致性是约73%,计算为成熟蛋白质之间的一致性。
根据本发明,优选的亲本β-葡聚糖酶包括解淀粉芽孢杆菌β-葡聚糖酶,该解淀粉芽孢杆菌β-葡聚糖酶具有SEQ ID NO:1中示出的全长氨基酸序列和SEQ ID NO:3中示出的成熟序列;和枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶,该枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶具有SEQ ID NO:2中示出的全长序列和SEQ ID NO:4中示出的成熟序列。
根据本发明,其他适合的亲本β-葡聚糖酶包括:凝结芽孢杆菌β-葡聚糖酶(UNIPROT:H9N813)、萎缩芽孢杆菌β-葡聚糖酶(UNIPROT:I4XBF1)、特基拉芽孢杆菌β-葡聚糖酶(UNIPROT:K00A689)、枯草芽孢杆菌亚种纳豆芽孢杆菌β-葡聚糖酶(UNIPROT:D4G3N4)、短小芽孢杆菌β-葡聚糖酶(UNIPROT:B4AIH9)和地衣芽孢杆菌β-葡聚糖酶(UNIPROT:Q84GK1)。图1示出了这些β-葡聚糖酶与SEQ ID NO:2的比对,并且很明显序列是高度同源的并且在与SEQ ID NO:3或4的位置M29和M180对应的位置处都包含蛋氨酸残基,并且还考虑到任何这些潜在亲本β-葡聚糖酶中的一个或这些蛋氨酸的取代。
亲本β-葡聚糖酶可以是(a)与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽;或(b)由如下多核苷酸编码的多肽,该多核苷酸在低严格条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列,(ii)或其全长互补体杂交。
在另一方面,该亲本包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的氨基酸序列或由其组成。在另一方面,该亲本包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的成熟多肽或由其组成。在另一方面,该亲本包括SEQ ID NO:1的氨基酸26至239或SEQ ID NO:2的氨基酸29至242或由其组成。
在另一方面,该亲本是SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的、包含至少180个氨基酸残基、例如至少200个氨基酸残基以及至少210个氨基酸残基的一个片段。
在另一个实施例中,该亲本是SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的一个等位基因变体。
可以使用SEQ ID NO:4的多肽或其片段来设计核酸探针以根据本领域熟知的方法来鉴别并克隆对来自不同属或种的菌株的亲本进行编码的DNA。具体地,可以遵循标准DNA印迹程序,使用此类探针与感兴趣的细胞的基因组DNA或cDNA杂交,以便鉴定和分离其中的对应基因。这样的探针可以大大短于整个序列,但是长度应该为至少15个,例如至少25个、至少35个或至少70个核苷酸。优选地,核酸探针的长度为至少100个核苷酸,例如长度为至少200个核苷酸、至少300个核苷酸、至少400个核苷酸、至少500个核苷酸、至少600个核苷酸、至少700个核苷酸、至少800个核苷酸、或至少900个核苷酸。DNA和RNA探针二者均可使用。典型地将探针进行标记,用于检测相应的基因(例如,用32P、3H、35S、生物素或抗生物素蛋白)。本发明涵盖此类探针。
可以针对与上文所述的探针杂交并编码亲本的DNA来筛选由这类其他菌株制备的基因组DNA或cDNA文库。来自这类其他菌株的基因组DNA或其他DNA可以通过琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳,或其他分离技术来分离。来自文库的DNA或分离的DNA可转移到并固定在硝酸纤维素或其他适合的载体材料上。为了鉴定与编码SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或其子序列的核苷酸序列杂交的克隆或DNA,将载体材料用于DNA印迹中。
出于本发明的目的,杂交表明该多核苷酸在非常低至非常高严格条件下与一种标记的核酸探针杂交,该探针对应于(i)SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽编码序列;(ii)其全长互补体;或(iii)其子序列。在这些条件下与该核酸探针杂交的分子可以使用例如X射线薄膜或本领域中已知的任何其他检测手段进行检测。
在一个方面中,该核酸探针是编码SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽;其成熟多肽;或其片段的多核苷酸。
多肽可以是杂合多肽,其中一个多肽的区域融合在另一多肽的区域的N末端或C末端。
亲本可以是融合多肽或可切割的融合多肽,其中另一种多肽在本发明多肽的N末端或C末端处融合。通过将编码另一多肽的多核苷酸融合到本发明的多核苷酸而产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术在本领域是已知的,并且包括连接编码多肽的编码序列,这样使得它们在框内并且使得融合多肽的表达处于相同的一个或多个启动子和终止子的控制下。融合多肽还可以使用内含肽技术来构建,其中融合多肽在翻译后产生(库珀(Cooper)等人,1993,欧洲分子生物学学会杂志(EMBO J.)12:2575-2583;道森(Dawson)等人,1994,科学(Science)266:776-779)。
融合多肽可以在两种多肽之间进一步包括切割位点。在融合蛋白分泌之时,该位点被切割,从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于以下各项中披露的位点:马丁(Martin)等人,2003,工业微生物学与生物技术杂志(J.Ind.Microbiol.Biotechnol.)3:568-576;斯韦蒂纳(Svetina)等人,2000,生物技术杂志(J.Biotechnol.)76:245-251;拉斯马森(Rasmussen)-威尔逊(Wilson)等人,1997,应用与环境微生物学(Appl.Environ.Microbiol.)63:3488-3493;华德(Ward)等人,1995,生物技术(Biotechnology)13:498-503;以及孔特拉斯(Contreras)等人,1991,生物技术9:378-381;伊顿(Eaton)等人,1986,生物化学(Biochemistry)25:505-512;柯林斯(Collins)-莱斯(Racie)等人,1995,生物技术13:982-987;卡特(Carter)等人,1989,蛋白:结构、功能和遗传学(Proteins:Structure,Function,and Genetics)6:240-248;以及史蒂文斯(Stevens),2003,世界药物发现(Drug Discovery World)4:35-48。
该亲本可以从任何属类的微生物中获得。出于本发明的目的,如在此结合一种给定的来源使用的术语“从...中获得”应意指由多核苷酸编码的亲本是由该来源或由其中已经插入来自该来源的多核苷酸的一种菌株产生的。在一方面,该亲本是胞外分泌的。
该亲本可以是一种细菌β-葡聚糖酶。例如,该亲本可以是革兰氏阳性细菌多肽,如芽孢杆菌属(Bacillus)、梭状芽孢杆菌属(Clostridium)、肠球菌属(Enterococcus)、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)、或链霉菌属(Streptomyces)β-葡聚糖酶,或者革兰氏阴性细菌多肽,如弯曲杆菌属(Campylobacter)、大肠杆菌(E.coli)、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、螺杆菌属(Helicobacter)、泥杆菌属(Ilyobacter)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)、或脲原体属(Ureaplasma)β-葡聚糖酶。
在一个方面中,该亲本是嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、或苏云金芽孢杆菌β-葡聚糖酶。
在另一个方面中,该亲本是马链球菌、化脓链球菌、乳房链球菌、或马链球菌兽疫亚种β-葡聚糖酶。
在另一个方面中,该亲本是不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌、或浅青紫链霉菌β-葡聚糖酶。
将理解的是,对于以上提到的物种而言,本发明涵盖完全状态和不完全状态(perfect and imperfect states)二者、以及其他分类学等效物,例如无性型,而不管它们已知的物种名称是什么。本领域普通技术人员将容易地识别适当等效物的身份。
这些物种的菌株可以容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得,如美国典型培养物保藏中心(ATCC)、德国微生物菌种保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH,DSMZ)、荷兰菌种保藏中心(CentraalbureauVoor Schimmelcultures,CBS)以及美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(NRRL)。
可以使用以上提到的探针从其他来源,包括从自然界(例如,土壤、堆肥、水等)分离的微生物或直接从自然材料(例如,土壤、堆肥、水等)获得的DNA样品鉴定和获得该亲本。用于直接地从自然生活环境分离微生物和DNA的技术是本领域中熟知的。然后可通过在另一种微生物或混合DNA样本的基因组DNA或cDNA文库中类似地进行筛选来获得编码亲本的多核苷酸。一旦已经用一种或多种探针检测了编码一种亲本的一种多核苷酸后,可以将多核苷酸通过利用本领域普通技术人员已知的技术来分离或克隆(参见例如萨姆布鲁克等人,1989,同上)。
变体的制备
本发明还涉及用于获得具有β-葡聚糖酶活性的变体的方法,该方法包括:(a)在与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的位置M29和/或M180对应的位置处引入亲本β-葡聚糖酶取代,其中该变体具有β-葡聚糖酶活性;并且(b)回收该变体。
可以使用本领域已知的任何诱变程序来制备这些变体,例如定点诱变、合成基因构建、半合成基因构建、随机诱变、改组等。
定点诱变是在编码该亲本的多核苷酸中的一个或多个限定位点处引入一个或多个(例如,若干个)突变的技术。
通过使用涉及含有所希望的突变的寡核苷酸引物的PCR可以体外实现定点诱变。也可以通过盒式诱变进行体外定点诱变,所述盒式诱变涉及由限制酶在包括编码亲本的多核苷酸的质粒中的位点处切割并且随后将含有突变的寡核苷酸连接在多核苷酸中。通常,消化该质粒与该寡核苷酸的限制酶是相同的,以允许该质粒的粘性末端以及插入片段彼此连接。参见,例如谢勒(Scherer)和戴维斯(Davis),1979,美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)76:4949-4955;和巴顿(Barton)等人,1990,核酸研究(NucleicAcids Res.)18:7349-4966。
还可以通过本领域已知的方法体内实现定点诱变。参见,例如,美国专利申请公开号2004/0171154;斯道瑞希(Storici)等人,2001,自然生物技术(Nature Biotechnol.)19:773-776;卡伦(Kren)等人,1998,自然医学(Nat.Med.)4:285-290;以及凯利萨诺(Calissano)和马奇诺(Macino),1996,真菌遗传学简讯(Fungal Genet.Newslett.)43:15-16。
在本发明中可以使用任何定点诱变程序。存在可用于制备变体的很多可商购的试剂盒。
合成基因构建需要体外合成一种设计的多核苷酸分子以编码一种所感兴趣的多肽。基因合成可以利用多种技术来进行,如由田(Tian)等人(2004,自然(Nature)432:1050-1054)所述的基于多路微芯片的技术、以及其中在光可编程的微流芯片上合成并组装寡核苷酸的类似技术。
可以做出单个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入并且使用诱变、重组和/或改组的已知方法进行测试,随后进行相关筛选程序,如由里德哈尔-奥尔森(Reidhaar-Olson)和萨奥尔(Sauer),1988,科学(Science)241:53-57;博维(Bowie)和萨奥尔,1989,美国科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)86:2152-2156;WO 95/17413;或WO 95/22625所披露的那些。可以使用的其他方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如,罗曼(Lowman)等人,1991,生物化学(Biochemistry)30:10832-10837;美国专利号5,223,409;WO 92/06204)和区域定向诱变(德比舍尔(Derbyshire)等人,1986,基因(Gene)46:145;Ner等人,1988,DNA 7:127)。
可以结合诱变/改组方法与高通量自动化筛选方法来检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(内斯(Ness)等人,1999,自然生物技术(Nature Biotechnology)17:893-896)。编码活性多肽的诱变的DNA分子可以回收自宿主细胞,并且使用本领域的标准方法对其进行迅速测序。这些方法允许迅速确定多肽中单个氨基酸残基的重要性。
通过组合合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组的多个方面来实现半合成基因构建。半合成构建典型地是,利用合成的多核苷酸片段的过程结合PCR技术。因此,基因的限定的区域可以从头合成,而其他区域可以使用位点特异性诱变引物来扩增,而还有其他区域可以经受易错PCR或非易错PCR扩增。然后可以对多核苷酸子序列进行改组。
多核苷酸
本发明还涉及编码本发明的变体的分离的多核苷酸。
核酸构建体
本发明还涉及包括编码本发明的变体的、可操作地连接至一个或多个控制序列上的多核苷酸的核酸构建体,该一个或多个控制序列在与控制序列相容的条件下指导编码序列在适合的宿主细胞中的表达。
可以按多种方式来操纵该多核苷酸以提供变体的表达。取决于表达载体,在其插入载体以前操纵多核苷酸可以是希望的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术是本领域熟知的。
控制序列可以是启动子,即由宿主细胞识别用于表达该多核苷酸的多核苷酸。启动子包含介导该变体的表达的转录控制序列。启动子可以是在宿主细胞中显示出转录活性的任何多核苷酸,包括突变型、截短型及杂合型启动子,并且可以是由编码与该宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因获得。
在细菌宿主细胞中,适合指导本发明的核酸构建体转录的启动子的实例是获得自以下各项的启动子:解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、嗜热脂肪芽孢杆菌麦芽淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(阿盖斯(Agaisse)和里瑞克拉斯(Lereclus),1994,分子微生物学(MolecularMicrobiology)13:97-107)、大肠杆菌lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(埃贡(Egon)等人,1988,基因)69:301-315),天蓝链霉菌琼脂酶基因(dagA)、和原核β-内酰胺酶基因(维拉-卡玛诺夫(Villa-Kamaroff)等人,1978,美国国家科学院院刊75:3727-3731)、连同tac启动子(德波尔(DeBoer)等人,1983,美国国家科学院院刊80:21-25)。另外的启动子描述于“来自重组细菌的有用蛋白(Useful proteins from recombinant bacteria)”,吉尔伯特(Gilbert)等人,1980,科学美国人(Scientific American),242:74-94;以及萨姆布鲁克(Sambrook)等人,1989,同上。串联启动子的实例披露在WO 99/43835中。
用于指导本发明的核酸构建体在丝状真菌宿主细胞中的转录的合适启动子的实例是从以下各项的基因获得的启动子:构巢曲霉乙酰胺酶、黑曲霉中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉葡糖淀粉酶(glaA)、米曲霉TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖孢镰刀菌胰蛋白酶样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢菌淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢菌Daria(Fusarium venenatum Daria)(WO 00/56900)、镶片镰孢Quinn(Fusarium venenatum Quinn)(WO 00/56900)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶IV、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉β-木糖苷酶,以及NA2tpi启动子(修饰的启动子,其来自曲霉属中性α-淀粉酶基因,其中未翻译的前导序列由曲霉属丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替代;非限制性实例包括修饰的启动子,其来自黑曲霉中性α-淀粉酶的基因,其中未翻译的前导序列由构巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替代);以及其突变型启动子、截短型启动子、以及杂合型启动子。
在酵母宿主中,有用的启动子获得自以下各项的基因:酿酒酵母烯醇酶(ENO1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母醇去氢酶/甘油醛-3-磷酸去氢酶(ADH1、ADH2/GAP)、酿酒酵母丙糖磷酸异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)、以及酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。罗马诺斯(Romanos)等人,1992,酵母(Yeast)8:423-488描述了酵母宿主细胞的其他有用的启动子。
控制序列还可以是由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。该终止子序列被可操作地连接至编码该变体的多核苷酸的3’-末端。可以使用在宿主细胞中具有功能的任何终止子。
用于细菌宿主细胞的优选终止子是从克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)以及大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)的基因获得。
丝状真菌宿主细胞的优选终止子是从以下各项的基因中获得的:构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡萄糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖孢镰刀菌胰蛋白酶样蛋白酶。
用于酵母宿主细胞的优选终止子是从酿酒酵母烯醇化酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)、以及酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶的基因获得。罗马诺斯(Romanos)等人,1992,同上,描述了酵母宿主细胞的其他有用的终止子。
控制序列还可以是启动子下游和基因的编码序列上游的mRNA稳定子区,其增加该基因的表达。
适合的mRNA稳定区的实例是从以下获得的:苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(WO 94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(化(Hue)等人,1995,细菌学杂志(Journal ofBacteriology)177:3465-3471)。
该控制序列还可以是前导序列,一种对宿主细胞翻译很重要的非翻译mRNA区域。前导子序列可操作地连接至编码该变体的多核苷酸的5’端。在宿主细胞中起作用的任何前导子都可以使用。
用于丝状真菌宿主细胞的优选前导序列是从米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶的基因获得。
酵母宿主细胞的适合的前导子是从以下各项的基因中获得的:酿酒酵母烯醇酶(ENO 1)、酿酒酵母3磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α-因子、和酿酒酵母醇去氢酶/甘油醛-3磷酸去氢酶(ADH2/GAP)。
该控制序列还可以是一种多腺苷酸化序列,即被可操作地连接至该变体编码序列的3’-末端并且当转录时由宿主细胞识别成将多腺苷酸残基添加到所转录的mRNA上的一个信号的一种序列。可以使用在宿主细胞中起作用的任何多腺苷酸化序列。
丝状真菌宿主细胞的优选多腺苷酸化序列是从以下各项的基因中获得的:构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡萄糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖孢镰刀菌胰蛋白酶样蛋白酶。
对于酵母宿主细胞有用的多腺苷酸化序列在郭(Guo)和谢尔曼(Sherman),1995,分子细胞生物学(Mol.Cellular Biol.)15:5983-5990中得以描述。
该控制序列还可以是信号肽编码区,编码与变体的N端连接的信号肽,并且引导该变体进入细胞的分泌通路。该多核苷酸的编码序列的5’-末端可以固有地包含信号肽编码序列,该信号肽编码序列在翻译阅读框中与编码该变体的编码序列的区段天然地连接在一起。可替代地,该编码序列的5’末端可以包含对于该编码序列来说是外来的信号肽编码序列。在编码序列不天然地包含信号肽编码序列的情况下,可能需要外源信号肽编码序列。可替代地,外源信号肽编码序列可以简单地置换天然信号肽编码序列,以便增加变体的分泌。然而,可以使用指导表达的变体进入宿主细胞的分泌通路的任何信号肽编码序列。
用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从以下各项的基因获得的信号肽编码序列:芽孢杆菌属NCIB 11837产麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)以及枯草芽孢杆菌prsA。西蒙纳(Simonen)和帕尔瓦(Palva),1993,微生物学评论(Microbiological Reviews)57:109-137描述了另外的信号肽。
用于丝状真菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从以下各项的基因中获得的信号肽编码序列:黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、柔毛腐质霉脂肪酶以及米黑毛霉天冬氨酸蛋白酶。
对于酵母宿主细胞有用的信号肽获得自以下项的基因:酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶。罗马诺斯(Romanos)等人,1992,同上,描述了其他有用的信号肽编码序列。
该控制序列还可以是编码位于变体的N末端处的前肽的一个前肽编码序列。生成的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可以通过从该多肽原上催化切割或自动催化切割前肽而被转化成活性多肽。前肽编码序列可以从以下各项的基因获得:枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉漆酶(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、以及酿酒酵母α-因子。
在信号肽序列和前肽序列二者都存在的情况下,该前肽序列定位成紧邻该变体的N末端并且该信号肽序列定位成紧邻该前肽序列的N末端。
还令人希望的可以是添加相对于宿主细胞的生长来调节该变体的表达的调节序列。调节系统的实例是响应于化学或物理刺激而引起基因的表达开启或关闭的那些,包括调控化合物的存在。在原核系统中的调节系统包括lac、tac、以及trp操纵基因系统。在酵母中,可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中,可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉TAKAα-淀粉酶启动子、以及米曲霉葡糖淀粉酶启动子。调节序列的其他实例是允许基因扩增的那些。在真核系统中,这些调控序列包括在甲氨蝶呤存在下被扩增的二氢叶酸还原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况下,编码该变体的多核苷酸将与该调节序列可操作地连接。
表达载体
本发明还涉及包括编码本发明的变体的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。不同的核苷酸和控制序列可以连接在一起以产生重组表达载体,这一重组表达载体可以包括一个或多个便利的限制酶切位点以允许在这些位点处插入或取代编码该变体的多核苷酸。可替代地,该多核苷酸可以通过将该多核苷酸或包括该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中来表达。在产生该表达载体时,该编码序列位于该载体中,这样使得该编码序列与该供表达的适当控制序列可操作地连接。
重组表达载体可以是可便利地经受重组DNA程序并且可引起多核苷酸表达的任何载体(例如,质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于该载体与有待引入该载体的宿主细胞的相容性。该载体可以是线性的或闭合的环状质粒。
载体可以是自主复制载体,即,作为染色体外实体存在的载体,其复制独立于染色体复制,例如,质粒、染色体外元件、微染色体、或人工染色体。该载体可包含任何用以保证自我复制的要素。可替代地,该载体可以是这样载体,当它被引入该宿主细胞中时,被整合到基因组中并且与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外,可以使用单一载体或质粒或两个或更多个载体或质粒(这些载体或质粒共同含有待引入到宿主细胞的基因组中的总DNA)或转座子。
该载体优选包含一个或多个允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的选择性标记。选择性标记是这样一种基因,该基因的产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、重金属抗性、营养缺陷型的原养型等。
细菌性选择性标记的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因,或赋予抗生素抗性(例如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素或四环素抗性)的标记。用于酵母宿主细胞的适合的标记包括但不限于ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1、以及URA3。用于在丝状真菌宿主细胞中使用的选择性标记包括但不限于amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草胺膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清苷-5’磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷基转移酶)、以及trpC(邻氨基苯甲酸合酶),连同其等效物。优选在曲霉属细胞中使用的是构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌bar基因。
载体优选含有允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。
对于整合到该宿主细胞基因组中,该载体可以依靠编码该变体的多核苷酸序列或者用于通过同源或非同源重组整合到该基因组中的该载体的任何其他元件。可替代地,该载体可以包含用于指导通过同源重组而整合到宿主细胞基因组中的一个或多个染色体中的一个或多个精确位置处的另外的多核苷酸。为了增加在精确位置整合的可能性,这些整合元件应包含足够数量的核酸,例如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对、以及800至10,000个碱基对,这些碱基对与对应的靶序列具有高度的序列一致性以提高同源重组的可能性。这些整合元件可以是与宿主细胞的基因组内的靶序列同源的任何序列。此外,这些整合元件可以是非编码多核苷酸或编码多核苷酸。另一个方面,该载体可以通过非同源重组整合到宿主细胞的基因组中。
对于自主复制,该载体可以进一步包括使该载体能够在所讨论的宿主细胞中自主复制的复制起点。复制起点可以是在细胞中起作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点(origin of replication)”或“质粒复制子(plasmid replicator)”意指使得质粒或载体可在体内复制的多核苷酸。
细菌的复制起点的实例是允许在大肠杆菌内进行复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177、以及pACYC184以及允许在芽孢杆菌内进行复制的pUB110、pE194、pTA1060、以及pAMβ1的复制起点。
用于在酵母宿主细胞中使用的复制起点的实例是2微米复制起点ARS1、ARS4、ARS1与CEN3的组合、以及ARS4与CEN6的组合。
在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1和ANS1(格姆斯(Gems)等人,1991,基因(Gene)98:61-67;卡伦(Cullen)等人,1987,核酸研究(Nucleic Acids Res.)15:9163-9175;WO 00/24883)。AMA1基因的分离和包含该基因的质粒或载体的构建可以根据披露于WO 00/24883中的方法来完成。
可以将本发明的多核苷酸的多于一个的拷贝插入到一个宿主细胞中以增加变体的产生。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或通过包括一个与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标记基因可以获得多核苷酸的增加的拷贝数目,其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择包含选择性标记基因的经扩增的拷贝的细胞、以及由此该多核苷酸的另外的拷贝。
用于连接上述元件以构建本发明的重组表达载体的程序对于本领域普通技术人员而言是熟知的(参见,例如萨拉布鲁克(Sambrook)等人,1989,同上)。
宿主细胞
本发明还涉及重组宿主细胞,这些重组宿主细胞包括编码本发明的变体的、可操作地连接至一个或多个控制序列的多核苷酸,该一个或多个控制序列指导本发明的变体的产生。将包括多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中,这样使得该构建体或载体被维持作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体,如早前所述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制过程中发生的突变与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。宿主细胞的选择在很大程度上将取决于编码该变体的基因及其来源。
宿主细胞可以是在重组产生一个变体中有用的任何细胞,例如一个原核细胞或一个真核细胞。
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括,但不限于芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、葡萄球菌属、链球菌属和链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括,但不限于弯曲杆菌属、大肠杆菌、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟球菌属、假单胞菌属、沙门菌属和脲原体属。
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌的细胞,包括但不限于嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、以及苏云金芽孢杆菌的细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属的细胞,包括但不限于似马链球菌、酿脓链球菌、乳房链球菌和马链球菌兽瘟亚种的细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌细胞,包括但不局限于不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌以及浅青紫链霉菌细胞。
将DNA引入芽孢杆菌属细胞中可通过以下来实现:原生质体转化(参见例如,张(Chang)和科恩(Cohen),1979,分子遗传学与基因组学(Mol.Gen.Genet.)168:111-115)、感受态细胞转化(参见,例如,杨格(Young)和斯皮宰曾(Spizizen),1961,细菌学杂志(J.Bacteriol.)81:823-829;或杜拜努(Dubnau)以及大卫杜夫-阿贝尔森(Davidoff-Abelson),1971,分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)56:209-221)、电穿孔(参见,例如,茂川(Shigekawa)和道尔(Dower),1988,生物技术(Biotechniques)6:742-751)、或者接合(参见,例如克勒(Koehler)和索恩(Thorne),1987,细菌学杂志(J.Bacteriol.)169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞中可通过以下来实现:原生质体转化(参见,例如,哈纳汗(Hanahan),1983,分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)166:557-580)或电穿孔(参见,例如,道尔(Dower)等人,1988,核酸研究(Nucleic Acids Res.)16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中可通过以下来实现:原生质体转化、电穿孔(参见,例如,贡(Gong)等人,2004,叶线形微生物学(Folia Microbiol.)(布拉格(Praha))49:399-405)、接合(参见,例如,马佐迪耶(Mazodier)等人,1989,细菌学杂志(J.Bacteriol.)171:3583-3585)、或转导(参见,例如,伯克(Burke)等人,2001,美国科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)98:6289-6294)。将DNA引入假单孢菌属细胞中可通过以下来实现:电穿孔(参见,例如,蔡(Choi)等人,2006,微生物学方法杂志(J.Microbiol.Methods)64:391-397)或接合(参见,例如,皮内多(Pinedo)和斯梅茨(Smets),2005,应用与环境微生物学(Appl.Environ.Microbiol.)71:51-57)。将DNA引入链球菌属细胞中可通过以下来实现:天然感受态(参见,例如,佩里(Perry)和藏满(Kuramitsu),1981,感染与免疫(Infect.Immun.)32:1295-1297)、原生质体转化(参见,例如,凯特(Catt)和乔力克(Jollick),1991,微生物学(Microbios)68:189-207)、电穿孔(参见,例如,巴克利(Buckley)等人,1999,应用与环境微生物学(Appl.Environ.Microbiol.)65:3800-3804)、或者接合(参见,例如,克莱威尔(Clewell),1981,微生物学评论(Microbiol.Rev.)45:409-436)。然而,可以使用本领域已知的用于将DNA引入宿主细胞中的任何方法。
宿主细胞还可以是真核细胞,如哺乳动物、昆虫、植物、或真菌细胞。
宿主细胞可以是真菌细胞。如在此使用的“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)、以及接合菌门(Zygomycota)、连同卵菌门(Oomycota)和全部有丝分裂孢子真菌(如由霍克斯沃思(Hawksworth)等人在安斯沃思和拜斯比真菌词典(Ainsworth and Bisby’s Dictionary of The Fungi),第8版,1995,国际应用生物科学中心(CAB International),大学出版社(University Press),英国剑桥(Cambridge,UK)中进行定义的)。
该真菌宿主细胞可以是酵母细胞。如在此使用的“酵母”包括产子嚢酵母(内孢霉目)、产担子酵母和属于半知菌类(芽孢纲)的酵母。由于酵母的分类在将来可能有变化,出于本发明的目的,酵母应如酵母生物学和活动性(Biology and Activities of Yeast)(斯金纳(Skinner)、帕斯莫尔(Passmore)、以及达文波特(Davenport)编辑,应用细菌学学会讨论会(Soc.App.Bacteriol.Symposium)系列第9期,1980)所述地进行定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属、汉逊酵母属、克鲁弗酵母属、毕赤酵母属、酵母属、裂殖酵母属、或亚罗酵母属细胞,例如乳酸克鲁弗酵母、卡氏酵母(Saccharomycescarlsbergensis)、酿酒酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母(Saccharomyces douglasii)、克鲁费酵母(Saccharomyces kluyveri)、诺地酶母(Saccharomyces norbensis)、卵形酵母、或亚罗解脂酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
真菌宿主细胞可以是丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(Eumycota)和卵菌门的亚门(如由霍克斯沃思(Hawksworth)等人,1995,见上文所定义)的所有丝状形式。丝状真菌通常的特征在于由壳多糖、纤维素、葡聚糖、壳聚糖、甘露聚糖、以及其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延伸,而碳分解代谢是专性需氧的。相反,酵母(如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding),而碳分解代谢可以是发酵的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢霉属、曲霉属、短梗霉属、烟管菌属、拟蜡菌属、金孢子菌属、鬼伞菌属、革盖菌属、隐球菌属、线黑粉酵母属、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属、毛霉属、毁丝霉属、新美鞭菌属、脉孢菌属、拟青霉属、青霉菌属、平革菌属、白腐菌属、瘤胃壶菌属、侧耳属、裂褶菌属、踝节菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属、或木霉属的细胞。
例如,丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管菌(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡孔菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporium merdarium)、租金孢子菌、昆士兰金孢子菌、热带金孢子菌、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolus hirsutus)、杆孢状镰孢、谷类镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾谷镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、特异腐质霉、柔毛腐质霉、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙链孢菌、产紫青霉菌、黄孢原毛平革菌、射脉菌(Phlebia radiata)、刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)、土生梭孢壳、长域毛栓菌(Trametesvillosa)、变色栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉或绿色木霉细胞。
可以将真菌细胞通过涉及原生质体形成、原生质体转化、以及细胞壁再生的方法以本身已知的方式转化。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的适合程序在EP 238023和约尔顿(Yelton)等人,1984,美国科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)81:1470-1474、以及克里斯滕森(Christensen)等人,1988,生物/技术(Bio/Technology)6:1419-1422中描述。用于转化镰孢属物种的适合方法由马拉迪尔(Malardier)等人,1989,基因(Gene)78:147-156、以及WO 96/00787描述。可以使用由如以下文献描述的程序转化酵母:贝克尔(Becker)和瓜伦特(Guarente),在阿贝尔森(Abelson),J.N.和西蒙(Simon),M.I.编,酵母遗传学与分子生物学指南,酶学方法(Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology,Methodsin Enzymology),第194卷,第182-187页,学术出版社有限公司(Academic Press,Inc.),纽约;伊藤(Ito)等人,1983,细菌学杂志153:163;以及哈尼恩(Hinnen)等人,1978,美国国家科学院院刊75:1920。
生产方法
本发明还涉及产生变体的方法,这些方法包括:(a)在适于表达该变体的条件下培养本发明的宿主细胞;并且(b)回收该变体。
所述宿主细胞使用本领域已知的方法在适合于产生所述变体的营养培养基中培养。例如,可以通过摇瓶培养,或者在适合的培养基中并在允许该变体表达和/或分离的条件下在实验室或工业发酵罐中进行小规模或大规模发酵(包括连续发酵、分批发酵、分批给料发酵或固态发酵)来培养该细胞。该培养是使用本领域中已知的程序,在适合的营养培养基中发生,该培养基包括碳和氮来源及无机盐。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如,在美国典型培养物保藏中心的目录中)制备。如果该变体被分泌到该营养培养基中,则该变体可直接从该培养基中回收。如果该变体没有分泌,则它可从细胞裂解液中回收。
可以使用本领域已知的对这些变体特异的方法检测这些变体。这些检测方法包括但不限于,特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如,可以使用酶测定来确定该变体的活性。
可以使用本领域已知的方法来回收该变体。例如,可以通过多种常规程序从该营养培养基中回收该变体,这些常规程序包括但不局限于收集、离心、过滤、萃取、喷雾干燥、蒸发、或沉淀。
可以通过本领域已知的多种程序来纯化该变体,以获得基本上纯的变体,这些程序包括,但不局限于色谱法(例如,离子交换色谱、亲和色谱、疏水作用色谱、色谱聚焦、以及尺寸排阻色谱)、电泳程序(例如,制备型等电点聚焦)、有差别的溶解(例如,硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE、或萃取(参见,例如蛋白纯化(Protein Purification),詹森(Janson)和赖登(Ryden)编辑,VCH出版社(VCH Publishers),纽约,1989)。
在一个替代方面,没有回收该变体,而是将表达该变体的本发明的宿主细胞用作该变体的来源。
组合物
洗涤剂组合物
在一个实施例中,本发明针对洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物包含结合一种或多种额外的清洁组合物组分的本发明的酶。另外的组分的选择在普通技术人员技术内并且包括常规成分,包括以下列出的示例性、非限制性组分。
本发明的酶
在本发明的一个实施例中,可以将本发明的多肽以对应于以下的量添加至一种洗涤剂组合物中:每升的洗涤液0.001-200mg的蛋白,例如0.005-100mg的蛋白,优选0.01-50mg的蛋白,更优选0.05-20mg的蛋白,甚至更优选0.1-10mg的蛋白。
用于在自动洗碗机(ADW)中使用的组合物例如可以包括按该组合物的重量计0.0001%-50%,例如0.001%-30%,例如0.01%-20%,例如0.5%-15%的酶蛋白。
用于在洗衣造粒(laundry granulation)中使用的组合物例如可以包含按该组合物的重量计0.0001%-50%,例如0.001%-20%,例如0.01%-10%,例如0.05%-5%的酶蛋白。
用于在洗衣液中使用的组合物例如可以包括按该组合物的重量计0.0001%-10%,例如0.001%-7%,例如0.1%-5%的酶蛋白。
可以使用常规稳定剂稳定本发明的清洁剂组合物的一种或多种酶,这些常规稳定剂例如是多元醇,例如丙二醇或甘油、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物,例如芳香族硼酸酯,或苯基硼酸衍生物,例如4-甲酰苯基硼酸,并且可以如在例如WO 92/19709和WO 92/19708中所述配置该组合物。
本发明的多肽还可以结合到WO 97/07202中所披露的洗涤剂配制品中,通过引用将其结合在此。
表面活性剂
洗涤剂组合物可以包括一种或多种表面活性剂,它们可以是阴离子的和/或阳离子的和/或非离子的和/或半极性的和/或兼性离子的或其混合物。在一个具体实施例中,洗涤剂组合物包括一种或多种非离子型表面活性剂和一种或多种阴离子表面活性剂的混合物。表面活性剂典型地以按重量计大约0.1%至60%、例如约1%至约40%、或约3%至约20%、或约15%至约20%的水平存在。基于所希望的清洁应用来选择这种或这些表面活性剂,并且这种或这些表面活性剂包括本领域中已知的任何一种或多种常规表面活性剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何表面活性剂。适合的表面活性剂包括例如以下中描述的那些。
当包含在其中时,所述去污剂通常将会含有按重量计约0.1%至约40%,例如约0.1%至约20%,包括约0.5%至约15%,或约2.5%至约10%的阴离子型表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐,具体地说是直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES,也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺酸基琥珀酸或皂的二酯和单酯、及其组合。
当被包括在其中时,洗涤剂将通常包含按重量计从约0%至约10%的阳离子表面活性剂。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂酰氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物及其组合。
当被包括在其中时,洗涤剂将通常包含按重量计从约0.2%至约40%的非离子型表面活性剂,例如从约0.5%至约30%,特别是从约1%至约20%、从约3%至约10%,例如从约3%至约5%、或从约8%至约12%。非离子型表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA),烷氧基化的脂肪酸烷基酯(例如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯),烷基酚乙氧基化物(APE),壬基酚乙氧基化物(NPE),烷基多糖苷(APG),烷氧基化胺,脂肪酸单乙醇酰胺(FAM),脂肪酸二乙醇酰胺(FADA),乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM),丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM),多羟基烷基脂肪酸酰胺,或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA),或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA)),连同在SPAN和TWEEN商品名下可获得的产品及其组合。
当被包括在其中时,洗涤剂将通常包含按重量计从约0%至约10%的半极性表面活性剂。半极性型表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO)例如烷基二甲基氧化胺、N-(椰油烷基)-N,N-二甲基氧化胺和N-(牛脂-烷基)-N,N-双(2-羟乙基)氧化胺、脂肪酸链烷醇酰胺和乙氧基化脂肪酸链烷醇酰胺、及其组合。
当被包括在其中时,洗涤剂将通常包含按重量计从约0%至约10%的兼性离子表面活性剂。兼性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱、烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱及其组合。
助水溶剂
助水溶剂是如下化合物,该化合物在水性溶液中溶解疏水化合物(或相反地,在非极性环境中的极性物质)。一般地,助水溶物具有亲水和疏水两种特征(如由表面活性剂已知的所谓的两亲性质);然而,助水溶物的分子结构一般不利于自发性自聚集,参见例如通过霍奇登(Hodgdon)和卡勒(Kaler)(2007),胶体&界面科学新见(Current Opinion inColloid&Interface Science)12:121-128的综述。助水溶剂并不显示临界浓度,高于该浓度就会发生如对表面活性剂而言所发现的自聚集以及脂质形成胶束、薄层或其他很好地定义的中间相。很多助水溶剂反而示出连续型聚集过程,其中聚集体的大小随着浓度增加而增长。然而,很多助水溶剂改变了包括极性和非极性特征的物质的系统(包括水、油、表面活性剂、和聚合物的混合物)的相行为、稳定性、和胶体特性。经典地从制药、个人护理、食品跨行业至技术应用使用助水溶剂。助水溶剂在洗涤剂组合物中的使用允许例如更浓的表面活性剂配制品(如在通过除去水而压缩液体洗涤剂的过程中)而不引起不希望的现象,例如相分离或高粘度。
去污剂可以含有按重量计0-5%、例如约0.5%-约5%或约3%-约5%的助水溶物。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何助水溶剂。助水溶物的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、异丙苯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基硫酸钠及其组合。
助洗剂和共助洗剂
洗涤剂组合物可以包含按重量计约0-65%,例如约5%至约45%的洗涤剂助洗剂或共助洗剂或其混合物。在洗涤餐具洗涤剂中,助洗剂的水平典型地是40%-65%,特别是50%-65%。助洗剂和/或共助洗剂可以具体是形成具有Ca和Mg的水溶性复合物的螯合剂。可以利用本领域中已知的用于在衣物或餐具洗涤洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共-助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐例如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐例如碳酸钠、可溶性硅酸盐例如硅酸钠、层状硅酸盐(例如,来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、乙醇胺例如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA,也称为亚氨基二乙醇)、三乙醇胺(TEA,也称为2,2’,2”-次氨基三乙醇)、以及羧甲基菊粉(CMI)及其组合。
洗涤剂组合物还可以包含按重量计0-20%,例如约5%至约10%的洗涤剂共助洗剂或其混合物。洗涤剂组合物可以单独地包括一种共助洗剂,或与一种助洗剂,例如沸石助洗剂组合。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物,例如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐,螯合剂,例如氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和膦酸盐,以及烷基-或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二丁二酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二丁二酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二丁二酸(iminodisuccinic acid)(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)-亚乙基二胺-N,N’,N’-三乙酸盐(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)、及其组合和盐。其他示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 09/102854、US 5977053中
漂白系统
该洗涤剂可以包含按重量计0-50%,例如约0.1%至约25%的漂白系统。可以利用本领域中已知的用于在衣物或餐具洗涤洗涤剂中使用的任何漂白系统。合适的漂白体系组分包括漂白催化剂、光漂白剂、漂白活化剂、过氧化氢来源例如过碳酸钠和过硼酸钠、预形成的过酸及其混合物。适合的预成型过酸包括但不限于:过氧羧酸及盐,过碳酸及盐,过亚氨酸(perimidic acid)及盐,过氧单硫酸及盐(例如过硫酸氢钾(Oxone(R)),及其混合物。漂白体系的非限制性实例包括与过酸形成漂白活化剂组合的基于过氧化物的漂白体系,其可以包含例如无机盐,包括碱金属盐例如过硼酸盐的钠盐(通常为单或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐。术语漂白活化剂在此意指一种与过氧化物漂白剂(像过氧化氢)反应以形成过酸的化合物。以此方式形成的过酸构成活化的漂白剂。有待在此使用的适合漂白活化剂包括属于酯酰胺、酰亚胺或酸酐类别的那些。适合的实例是四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰)氧基]苯磺酸钠(ISONOBS)、二过氧月桂酸、4-(十二酰基氧基)苯磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS)、4-(壬酰基氧基)-苯磺酸盐(NOBS)、和/或披露于WO 98/17767中的那些。感兴趣的漂白活化剂的具体家族披露于EP 624154中并且在那个家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酸酯(像三醋汀)具有以下优点,它是环境友好的,因为它最终降解为柠檬酸和醇。此外,乙酰柠檬酸三乙酯和三醋汀在储存时在产品中具有良好的水解稳定性,并且它是一种有效的漂白活化剂。最后,ATC为洗衣添加剂提供一种良好的助洗能力。可替代地,漂白系统可以包括例如酰胺、酰亚胺或砜型的过氧酸。漂白系统还可以包括过酸,例如6-(邻苯二甲酰亚胺基)过氧己酸(PAP)。漂白系统还可以包括漂白催化剂。在一些实施例中,漂白组分可以是选自下组的有机催化剂,该组由以下各项组成:具有下式的有机催化剂:
(iii)及其混合物;其中每个R1独立地是含有9至24个碳的支链烷基或含有11至24个碳的直链烷基,优选地,每个R1独立地是含有9至18个碳的支链烷基或含有11至18个碳的直链烷基,更优选地,每个R1独立地选自2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、正十二烷基、正十四烷基、正十六烷基、正十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基和异十五烷基。其他示例性漂白系统描述于例如WO 2007/087258、WO 2007/087244、WO 2007/087259以及WO 2007/087242中。适合的光漂白剂可以,例如,是磺化锌酞菁,MnOx;Mn-TACN;Co、Cu、Mn和Fe二吡啶基胺和相关络合物;五胺乙酸钴(III)和相关络合物。
聚合物
洗涤剂可以包含按重量计0-20%,例如0.5%-20%、3%-10%、2%-5%、0.5%-2%或0.2%-1%的聚合物。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何聚合物。聚合物可以作为如以上提到的共助洗剂起作用,或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油污清洁和/或防沫特性。一些聚合物可以具有多于一种的以上提到的特性和/或多于一种的以下提到的基序(motif)。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧化物,例如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物、疏水改性CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸乙二酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575中。也考虑了以上提到的聚合物的盐。
织物调色剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂,例如染料或色素,当配制在洗涤剂组合物中时,当所述织物与一种洗涤液接触时织物调色剂可以沉积在织物上,该洗涤液包括所述洗涤剂组合物,并且因此通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色彩。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下,因为它们吸收至少一部分可见光光谱,所以织物调色剂改变表面的色彩。适合的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物,并且还可以包括色素。适合的染料包括小分子染料和聚合物染料。适合的小分子染料包括选自下组的小分子染料,该组由落入颜色索引(Colour Index)(C.I.)分类的以下染料组成:直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或其混合物,例如描述于WO 2005/03274、WO 2005/03275、WO 2005/03276和EP 1876226中(将其通过引用而特此结合)。洗涤剂组合物优选包括从约0.00003wt%至约0.2wt%、从约0.00008wt%至约0.05wt%、或甚至从约0.0001wt%至约0.04wt%的织物调色剂。该组合物可以包括从0.0001wt%至0.2wt%的织物调色剂,当该组合物处于单位剂量袋的形式时,这可以是特别优选的。适合的调色剂还披露于例如WO 2007/087257和WO 2007/087243中。
防沫剂
本发明的洗涤剂组合物可以进一步包括一种或多种防沫剂,例如,硅酮油和石蜡油。
在本发明的一个实施例中,该洗涤剂组合物包括在约0.05%w/w至0.5%w/w的范围内的防沫剂。
另外的酶
洗涤剂添加剂连同洗涤剂组合物可以包括一种或多种[另外的]酶,例如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、碳水化合物分解酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶,例如漆酶、和/或过氧化物酶。
一般而言,一种或多种所选酶的特性应与选定的洗涤剂相容(即,最适pH,与其他酶和非酶成分的相容性,等等),并且该一种或多种酶应以有效量存在。
纤维素酶:适合的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的变体。适合的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳属、枝顶孢属的纤维素酶,例如,从在US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US5,776,757以及WO 89/09259中披露的特异腐质霉、嗜热毁丝霉(Myceliophthorathermophila)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)产生的真菌纤维素酶。
特别适合的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述于EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中的纤维素酶。其他实例为纤维素酶变体,例如在WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307以及PCT/DK 98/00299中描述的那些。
可商购的纤维素酶包括CelluzymeTM、和CarezymeTM(诺维信公司(Novozymes A/S))、ClazinaseTM、和Puradax HATM(杰能科国际有限公司(Genencor InternationalInc.))、以及KAC-500(B)TM(花王株式会社(Kao Corporation))。
蛋白酶:适合的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物起源的那些,例如植物或微生物起源。微生物来源是优选的。包括化学修饰的或蛋白质工程化的变体。它可以是碱性蛋白酶,例如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是S1家族(如胰蛋白酶)或S8家族(如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶可以例如是来自例如家族M4的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶,例如来自M5、M7或M8家族的那些。
术语“枯草杆菌酶”是指根据斯艾森(Siezen)等人,蛋白质工程学(ProteinEngng.)4(1991)719-737和斯艾森等人,蛋白质科学(Protein Science)6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是特征为在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的一个亚组。枯草杆菌酶可以划分为6个亚部,即,枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。
枯草杆菌酶的实例是来源于芽孢杆菌属的那些,如描述于US 7262042和WO 09/021867中的迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌;和描述于WO 89/06279中的枯草杆菌蛋白酶迟缓(lentus)、枯草杆菌蛋白酶诺和(Novo)、枯草杆菌蛋白酶嘉士伯(Carlsberg)、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及描述于(WO 93/18140)中的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是描述于WO 92/175177、WO 01/016285、WO 02/026024以及WO 02/016547中的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰孢菌蛋白酶(描述于WO 89/06270、WO 94/25583和WO 05/040372中),以及衍生自纤维单胞菌(Cellumonas)的胰凝乳蛋白酶(描述于WO 05/052161和WO 05/052146中)。
进一步优选的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶(如在例如WO95/23221中所述)、及其变体(在WO 92/21760、WO 95/23221、EP 1921147以及EP 1921148中描述的)。
金属蛋白酶的实例是如描述于WO 07/044993(杰能科国际公司(Genencor Int.))中的中性金属蛋白酶,例如来源于解淀粉芽孢杆菌的那些。
有用的蛋白酶的实例是于以下各项中的变体:WO 92/19729、WO 96/034946、WO98/20115、WO 98/20116、WO 99/011768、WO 01/44452、WO 03/006602、WO 04/03186、WO 04/041979、WO 07/006305、WO 11/036263、WO 11/036264,尤其是在以下位置的一个或多个中具有取代的变体:3、4、9、15、27、36、57、68、76、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、160、167、170、194、195、199、205、206、217、218、222、224、232、235、236、245、248、252以及274,使用BPN’编号。更优选地,这些枯草杆菌酶变体可以包含以下突变:S3T、V4I、S9R、A15T、K27R、*36D、V68A、N76D、N87S,R、*97E、A98S、S99G,D,A、S99AD、S101G,M,R S103A、V104I,Y,N、S106A、G118V,R、H120D,N、N123S、S128L、P129Q、S130A、G160D、Y167A、R170S、A194P、G195E、V199M、V205I、L217D、N218D、M222S、A232V、K235L、Q236H、Q245R、N252K、T274A(使用BPN’编号)。
适合的可商购蛋白酶包括以下列商品名出售的那些:DuralaseTm、DurazymTm、Ultra、Ultra、 Ultra、 Ultra、和(诺维信公司),以下列商品名出售的那些: PurafectPreferenzTm、PurafectPurafectPurafect EffectenzTm、以及(丹尼斯克/杜邦公司(Danisco/DuPont))、AxapemTm(吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-Brocases N.V.))、BLAP(序列示于US 5352604的图29中)及其变体(汉高股份(Henkel AG))以及来自花王株式会社(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。
脂肪酶和角质酶:适合的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白工程化的突变体酶。实例包括来自嗜热真菌属的脂肪酶,例如如描述于EP258068和EP 305216中的来自疏绵状嗜热丝孢菌(早先命名为疏棉状腐质霉);来自腐质霉属的角质酶,例如特异腐质霉(WO 96/13580);来自假单胞菌属的菌株的脂肪酶(这些中的一些现在改名为伯克霍尔氏菌属),例如产碱假单胞菌或类产碱假单胞菌(EP 218272)、洋葱假单胞菌(EP 331376)、假单胞菌属菌株SD705(WO 95/06720&WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012);GDSL-型链霉菌属脂肪酶(WO 10/065455);来自稻瘟病菌的角质酶(WO 10/107560);来自门多萨假单胞菌的角质酶(US 5,389,536);来自褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO 11/084412);嗜热脂肪土芽孢杆菌脂肪酶(WO 11/084417);来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO 11/084599);以及来自灰色链霉菌(WO 11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)的脂肪酶(WO 12/137147)。
其他实例是脂肪酶变体,例如描述于EP 407225、WO 92/05249、WO 94/01541、WO94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/34450、WO 00/60063、WO 01/92502、WO 07/87508以及WO 09/109500中的那些。
优选的商业化脂肪酶产品包括LipolaseTM、LipexTM;LipolexTM和LipocleanTM(诺维信公司),Lumafast(最初来自杰能科公司(Genencor))以及Lipomax(最初来自吉斯特-博克德斯公司(Gist-Brocades))。
再其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶,例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO 10/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO 09/67279)以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(特别是来自亨斯迈纺织品染化有限公司(Huntsman Textile Effects Pte Ltd)的商业产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO 10/100028)。
淀粉酶:可以用于本发明的配制品的适合的淀粉酶可以是α-淀粉酶或葡糖淀粉酶并且可以具有细菌或真菌来源。包括化学修饰的或蛋白质工程化的变体。淀粉酶包括例如获得自芽孢杆菌属的α-淀粉酶,例如GB 1,296,839中更详细描述的地衣芽孢杆菌具体株系的α-淀粉酶。
适合的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ IDNO:3具有90%序列一致性的变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424以及WO 99/019467的SEQ ID NO:4中,例如在一个或多个以下位置中具有取代的变体:15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408以及444。
不同的适合的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90%序列一致性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。
其他适合的淀粉酶是包括示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90%序列一致性的变体。这一杂合α-淀粉酶的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209以及Q264。包括示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选变体是具有以下取代的那些:
M197T;
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S;或
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
适合的另外的淀粉酶是具有WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQID NO:6具有90%序列一致性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216以及K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182或位置H183和G184中具有缺失的那些。
可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQID NO:2或SEQ ID NO:7的那些或其与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:7具有90%序列一致性的变体。使用WO 96/023873的SEQ ID 2用于编号,SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304以及476。更优选的变体是在选自181、182、183和184的两个位置,例如181和182、182和183、或位置183和184具有缺失的那些。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304以及476的一个或多个中具有取代的那些。
可以使用的其他淀粉酶是具有WO 08/153815中的SEQ ID NO:2、WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的淀粉酶或其与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90%序列一致性或与WO01/66712中的SEQ ID NO:10具有90%序列一致性的变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:176、177、178、179、190、201、207、211以及264。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 09/061380中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQID NO:2具有90%序列一致性的变体。SEQ ID NO:2的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有C-末端的截短和/或取代、缺失或插入的那些:Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444以及G475。SEQ ID NO:2的更优选变体是在一个或多个以下位置中具有取代的那些:Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E以及G475K和/或位置R180和/或S181或T182和/或G183的缺失。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些:
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K;
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K;
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K;或
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K,其中这些变体是C-末端截短的并且任选地进一步在位置243处包括取代和/或在位置180和/或位置181处包括缺失。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 13184577中的SEQ ID NO:1的淀粉酶或其与SEQID NO:1具有90%序列一致性的变体。SEQ ID NO:1的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:K176、R178、G179、T180、G181、E187、N192、M199、I203、S241、R458、T459、D460、G476和G477。SEQ ID NO:1的更优选变体是以下位置:K176L、E187P、N192FYH、M199L、I203YF、S241QADN、R458N、T459S、D460T、G476K和G477K中的一个或多个中具有取代和/或在位置R179和/或S180或I181和/或G182中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些:
E187P+I203Y+G476K
E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K
其中这些变体任选地进一步在位置241处包括取代和/或在位置178和/或位置179处包括缺失。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 10104675中的SEQ ID NO:1的淀粉酶或其与SEQID NO:1具有90%序列一致性的变体。SEQ ID NO:1的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:N21、D97、V128K177、R179、S180、I181、G182、M200、L204、E242、G477和G478。SEQ ID NO:1的更优选变体是以下位置:N21D、D97N、V128I K177L、M200L、L204YF、E242QA、G477K和G478K中的一个或多个中具有取代和/或在位置R179和/或S180或I181和/或G182中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些:
N21D+D97N+V128I
其中这些变体任选地进一步在位置200处包括取代和/或在位置180和/或位置181处包括缺失。
其他适合的淀粉酶是具有WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO:12具有至少90%序列一致性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO:12的以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:R28,R118,N174;R181,G182,D183,G184,G186,W189,N195,M202,Y298,N299,K302,S303,N306,R310,N314;R320,H324,E345,Y396,R400,W439,R444,N445,K446,Q449,R458,N471,N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有R118K、N195F、R320K及R458K的取代的变体,以及另外在选自下组的一个或多个位置中具有取代的变体:M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345以及A339,最优选的是另外在所有这些位置中具有取代的变体。
其他实例是例如描述于WO 2011/098531、WO 2013/001078、WO 13184577、WO10104675、WO 2013/063460和WO 2013/001087中的那些淀粉酶变体。
可商购的淀粉酶是DuramylTM、特妙淀粉酶TM、FungamylTM、StainzymeTM、StainzymePlusTM、NatalaseTM、Liquozyme X及BANTM(来自诺维信公司),以及RapidaseTM、PurastarTM/EffectenzTM、Powerase、Preferenz S1000、Preferenz S100及Preferenz S110(来自杰能科国际有限公司/杜邦公司(Genencor International Inc./DuPont))。
在一个优选的实施例中,本发明的洗涤剂组合物包括本发明的β-葡聚糖酶和氧化稳定的α-淀粉酶,如WO 94/18314和WO 94/02597中披露的淀粉酶,如与WO 01/66712中SEQID NO:12具有至少90%序列一致性并且具有与M202对应的位置的取代或缺失的变体。
过氧化物酶/氧化酶:适合的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属,例如来自灰盖鬼伞的过氧化物酶,及其变体,如在WO 93/24618、WO 95/10602、以及WO 98/15257中描述的那些。
可商购的过氧化物酶包括GuardzymeTM(诺维信公司)。
该一种或多种洗涤剂酶可以通过添加包含一种或多种酶的单独的添加剂,或通过添加包括所有这些酶的组合添加剂而被包括于洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添加剂,即独立添加剂或组合添加剂,可以被配制为,例如颗粒、液体、浆料等。优选的洗涤剂添加剂配制品是颗粒,尤其是非尘颗粒;液体,尤其是稳定化的液体;或浆料。
非尘颗粒可以例如如在US 4,106,991和4,661,452中所披露而产生,并且可以任选地通过本领域已知的方法进行涂层。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇,PEG);具有16-50个环氧乙烷单位的乙氧基化壬基酚;具有15至80个环氧乙烷单位的乙氧基化脂肪族醇,其中醇含有12至20个碳原子;脂肪醇;脂肪酸;以及脂肪酸的单-和双-和三甘油酯。适用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。液体酶制剂可以例如通过根据已确立的方法添加多元醇(如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸而稳定化。受保护的酶可以根据EP 238,216中披露的方法制备。
辅料
还可以使用本领域中已知用于衣物、餐具或专业清洗(如工业和机构(I&I)配制品)洗涤剂中的任何洗涤剂成分。其他任选的洗涤剂组分包括防腐剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、载体、崩解剂(disintegrant)/崩解试剂(disintegration agent)、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC和/或多元醇如丙二醇)、织物柔软剂、织物整理剂(包括粘土)、填充剂/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(泡)调节剂、助水溶物、香料、颜料、溶剂、污垢助悬剂、软化剂、液体洗涤剂的结构剂、结构弹力剂、抑泡剂、晦暗抑制剂以及芯吸剂,单独或组合使用。可以利用本领域中已知的用于在衣物或餐具洗涤剂中使用的任何成分。此类成分的选择完全在普通技术人员的技术内。
分散剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包含分散剂。具体地说,粉状洗涤剂可以包括分散剂。适合的水溶性有机材料包括均聚合或共聚合的酸或其盐,其中聚羧酸包括至少两个羧基,这两个羧基被不超过两个碳原子彼此分开。适合的分散剂例如描述于粉状洗涤剂,表面活性剂科学系列,第71卷中,马塞尔·德克尔公司(Marcel Dekker)。
染料转移抑制剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。合适的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮与N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮以及聚乙烯咪唑或其混合物。当存在于主题组合物中时,染料转移抑制剂可以按组合物重量计的以下水平存在:从约0.0001%至约10%、从约0.01%至约5%或甚至从约0.1%至约3%。
荧光增白剂-本发明的洗涤剂组合物还将优选地包含另外的组分,这些组分可以给正清洁的物品着色,例如荧光增白剂或光学增亮剂。其中增亮剂优选以约0.01%至约0.5%的水平存在。在本发明的组合物中可以使用适合用于在衣物洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些:二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯基衍生物。二氨基芪-磺酸衍生物类型的荧光增白剂的实例包括以下的钠盐:4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-均-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-均-三嗪-6-基氨基)芪-2.2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-均-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2'-二磺酸盐以及5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从汽巴-嘉基股份有限公司(Ciba-Geigy AG)(巴塞尔,瑞士)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4'-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选荧光增白剂,是可商购的Parawhite KX,由派拉蒙矿物与化学(Paramount Minerals and Chemicals),孟买,印度供应。适合用于在本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-烷氨基香豆素。
适合的荧光增亮剂水平包括从约0.01wt%、从0.05wt%、从约0.1wt%或甚至从约0.2wt%的较低水平至0.5wt%或甚至0.75wt%的较高水平。
污垢释放聚合物-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物,这些污垢释放聚合物帮助从织物,例如棉或聚酯基织物上除去污垢,特别是从聚酯基织物上除去疏水污垢。污物释放聚合物可以例如是非离子型或阴离子型对苯二甲酸基聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺,参见例如粉状洗涤剂,表面活性剂科学系列第71卷第7章,马塞尔·德克尔公司(Marcel Dekker,Inc.)。另一种类型的污物释放聚合物是包括一个芯结构和连接至该芯结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油污清洁聚合物。核心结构可以包括聚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构,如WO2009/087523中详细描述的(将其通过引用而特此结合)。此外,随机接枝共聚物是适合的污物释放聚合物。适合的接枝共聚物更详细地描述于WO 2007/138054、WO 2006/108856和WO2006/113314中(将其通过引用而特此结合)。其他污物释放聚合物是取代的多糖结构,尤其是取代的纤维素结构,例如改性纤维素衍生物,例如EP 1867808或WO 2003/040279中描述的那些(将二者都通过引用而特此结合)。适合的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺及其混合物。适合的纤维素聚合物包括阴离子改性的纤维素、非离子改性的纤维素、阳离子改性的纤维素、兼性离子改性的纤维素及其混合物。适合的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素及其混合物。
抗再沉积剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂,例如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚环氧乙烷和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸与马来酸的共聚物以及乙氧基化聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下描述的纤维素基聚合物还可以用作抗再沉积剂。
洗涤剂产品的配制品
本发明的洗涤剂组合物可以处于任何常规形式,例如条、均匀的片剂、具有两个或更多个层的片剂、具有一个或多个室的袋、规则的或压缩的粉末、颗粒、膏、凝胶、或规则的、压缩的或浓缩的液体。
洗涤剂配制品形式:层(相同或不同的相)、袋、对比用于机器配量单位的形式。
袋可以被配置为单个或多个的室。它可以具有适合容持该组合物的任何形式、形状和材料,例如在与水接触之前,不允许该组合物从袋中释放出来。袋由封装内体积的水溶性膜制成。可以将所述内体积分为具有袋的室。优选的膜是形成膜或片的聚合材料,优选是聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯,最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地,在膜中的聚合物(例如PVA)的水平是至少约60%。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物,该共混组合物包括可水解降解并且水可溶的聚合物共混物,例如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考M8630下,如由美国印第安纳州的MonoSolLLC公司销售)加增塑剂,像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。这些袋可以包括固体衣物清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。用于液体组分的室在组成上可以与包括固体的室不同。参考文献:(US 2009/0011970A1)。
可以由水可溶的袋中或片剂的不同层中的室来将洗涤剂成分物理地彼此分开。由此可以避免组分之间的负面的存储相互作用。在洗涤溶液中,每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。
非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的,典型地包含按重量计至少20%并且高达95%的水,例如高达约70%的水、高达约65%的水、高达约55%的水、高达约45%的水、高达约35%的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以包含从0-30%的有机溶剂。
液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。
本发明进一步由以下段落定义:
1.一种β-葡聚糖酶变体,在与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的位置M29和/或M180对应的一个或多个位置处包括取代,其中该变体具有β-葡聚糖酶活性,并且其中该变体与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的成熟多肽具有至少60%,例如,至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但是小于100%的序列一致性。
2.如段落1所述的变体,该变体是亲本β-葡聚糖酶的变体,该亲本β-葡聚糖酶选自下组,该组由以下各项组成:
a.与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽具有至少60%的序列一致性的多肽;
b.SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的、具有β-葡聚糖酶活性的片段。
3.如段落1-2中任一项所述的变体,其中该亲本β-葡聚糖酶包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽或由其组成。
4.如段落1-4中任一项所述的变体,其中该亲本β-葡聚糖酶是SEQ ID NO:3或SEQID NO:4的多肽的片段,其中该片段具有β-葡聚糖酶活性。
5.如段落1-4中任一项所述的变体,其中改变的个数是1-20,例如1-10和1-5,如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个改变。
6.如段落1-5中任一项所述的变体,该变体在与位置M29对应的位置处包括取代,其中该取代氨基酸选自以下项:Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val,优选以下项:Ala、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、Leu、Ser、Trp、Tyr或Val,优选以下项:Val、Gly、Asn、Ser或Cys。
7.如段落1-6中任一项所述的变体,该变体在与位置M180对应的位置处包括取代,其中该取代氨基酸选自以下项:Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val,优选以下项:Ala、Arg、Cys、Gln、Glu、His、Leu、Phe、Pro、Ser、Thr或Tyr,优选以下项:Leu、His或Arg。
8.如段落1-7中任一项所述的变体,该变体包括选自以下项的取代或由其组成:
M29V+M180L;
M29A+M180F;
M29Y;
M29V+M180H;
M29G+M180L;
M29N;
M29G+M180R;
M29S+M180Y;
M29G+M180H;
M29E+M180L;
M180H;
M29W+M180S;
N29N+M180F;
N29S+M180A;
N29C+M180L;
M29V+M180T;
M29Q+M180R;
M29L+M180T;
M29G+M180C;
N29N+M180Q;及
M29L+M180A。
9.如段落1-8中任一项所述的变体,该变体相对于亲本具有改进的特性,其中该改进的特性是增加的氧化稳定性。
10.一种组合物,该组合物包含如段落1-9中任一项所述的变体。
11.如段落10所述的组合物,是洗涤剂组合物,优选地是用于ADW的洗涤剂组合物。
12.如段落11所述的组合物,进一步包括选自蛋白酶和淀粉酶中的另外的酶。
13.如段落1-9中任一项所述的变体用于衣物和硬表面清洁,如ADW的用途。
14.一种编码如段落1-9中任一项所述的变体的多核苷酸。
15.一种包含如段落14所述的多核苷酸的核酸构建体。
16.一种包含如段落14所述的多核苷酸的表达载体。
17.一种包含如段落14所述的多核苷酸的宿主细胞。
18.一种产生β-葡聚糖酶变体的方法,该方法包括:
a.在适合于表达该变体的条件下培养根据段落17所述的宿主细胞;并且
b.回收该变体。
19.一种用于获得β-葡聚糖酶变体的方法,该方法包括在与SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:4的多肽的位置M29和/或M180对应的一个或多个位置处引入亲本β-葡聚糖酶取代,其中该变体具有β-葡聚糖酶活性;并且回收该变体。
20.如段落19所述的方法,其中该亲本与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少60%的序列一致性。
21.如段落18-19所述的方法,其中该亲本β-葡聚糖酶从或可从芽孢杆菌属获得。
通过以下实例进一步描述本发明,但不应将其理解为对本发明范围的限制。
实例
实施例1:β-葡聚糖酶活性的确定
在微量滴定板(MTP)形式测定中使用高纯度的低粘度barlet 1,3-1,4-β-葡聚糖测量活性,将该barlet 1,3-1,4-β-葡聚糖用由麦格梅公司(Megazyme),威克洛,爱尔兰提供的表格形式中的雷玛唑亮蓝R染料染色。
该测定在100mM B&R缓冲液(pH 7.5)中进行,该缓冲液是根据H.T.S.布里顿(Britton)和R.A.罗宾逊(Robinson),化学学会会刊(J.Chemn.Soc.)1931,1456-1462来制备的。
1.在B&R-缓冲液中稀释样品,以达到线性范围内的活性(即,在项目9下所测量的吸光度应当处于0.1至1.0范围内)
2.制备底物:1个片剂于包含0,24mM CaCl2、Brij(pH 7,5)的5ml B&R-缓冲液中
3.在不断搅拌下,转移130μl底物至96个PCR管中。保持其冷却
4.添加20μl稀释的酶。盖帽并且颠倒2-3次来混合
5.在热循环仪中,在40℃下孵育10min
6.添加75μl的NaOH 1M,密封这些管并且颠倒2-3次来混合
7.在2500rpm下离心5min
8.将100μl转移至新的微量滴定板
9.在590nm下测量吸光度
实例2:文库的生成和预筛选
枯草芽孢杆菌(3O5S)和地衣芽孢杆菌(1GBG)β-葡聚糖酶的底物是公开可得的,并且与来自解淀粉芽孢杆菌的β-葡聚糖酶具有96%的一致性。这些适用于制备解淀粉芽孢杆菌β-葡聚糖酶(BA-BG)的3D模型,其然后可以用于设计变体。鉴定两种保守的蛋氨酸(M29,M180),粘合其侧链并且因此该氧化不稳定硫原子进入到底物结合裂缝、紧挨着活性侧链残基。这些蛋氨酸的任一种或两者的氧化将影响底物结合并且因此导致活性和/或稳定性的减少。因此建议单独或组合地取代M29和M180,例如,在小文库内:在漂白剂存在下,应当针对稳定性筛选M29X+M180X。
用M29X和M180X(其中X可以是任何氨基酸)的变化,通过NNS掺入蛋氨酸密码子制备文库,这样使得获得扩展两个位置的PCR片段。通过PCR使用针对葡聚糖酶基因具有特异性的引物并且与M29X-M180X片段、和针对上部和下部果胶酸裂解酶基因具有特异性引物重叠来制备上部和下部整合片段。通过三重SOE(重叠延伸拼接)PCR方法使用针对上部和下部果胶酸裂解酶基因具有特异性的引物来构建葡聚糖酶基因表达盒,并且将衍生的PCR片段转移至适合的枯草芽孢杆菌宿主中,其中通过同源重组到果胶酸裂解酶(pel)基因座表达构建体被整合到枯草芽孢杆菌染色体中。将编码氯霉素乙酰转移酶的基因用作标记物(如描述于狄代丽柯森(Diderichsen)等人,1993,质粒(Plasmid)30:312-315中)。通过对构建体的DNA序列进行DNA测序分析抗氯霉素的克隆。
实例3:文库的小筛选
针对β-葡聚糖酶活性和稳定性从LB-淀粉板筛选100个克隆,其包括WT BA-BG(来自解淀粉芽孢杆菌的野生型β-葡聚糖酶)作为参考。
将具有变体、和来自解淀粉芽孢杆菌的β-葡聚糖酶(作为参比)、以及缓冲液(作为盲样)的1MTP-板在120μl Med-F培养基中,在220rpm和37℃下,在具有湿度控制的振动器中孵育3天。
将该上清液在缓冲液(100mM BR,0.24mM CaCl2,pH 7.5)中稀释100倍,并且用洗涤剂/漂白剂溶液以1:1进行第二次稀释。制备两个相同的样品。
一个样品保存在4℃下直到使用,同时将另一个样品在40℃下,在PCR-机中加热20分钟,来评估变体的稳定性。
在头90个克隆中,我们发现具有活性和高残余活性两者的13个变体。测序这些变体中的六个,具有如下结果:
4℃ | 40℃ | RA% | 突变 |
0.873 | 0.343 | 39 | 野生型 |
0.201 | 0.178 | 89 | M29V+M180L |
0.187 | 0.1721 | 92 | M29A+M180F |
0.246 | 0.222 | 90 | M29Y |
0.213 | 0.188 | 88 | M29V+M180H |
0.205 | 0.160 | 78 | M29G+M180L |
0.359 | 0.299 | 83 | M29N |
这6种测序的变体在位置M29和M180处都具有突变的独特组合。
Med-F发酵培养基
洗涤剂/漂白剂溶液:0,8g/100ml溶液是由无磷漂白剂洗涤剂,0,08g(10%)percagonat(DC01596)(漂白剂)+0,032g(4%)TAED(漂白活化剂)制成,并且使用Milli-Q水补充至100ml。从Difco公司或默克公司(Merck)购买化学品。每次实验新鲜制备洗涤剂/漂白剂。
实例4:文库的第二次筛选
从M29X+M180X文库的另一个转变,在包含洗涤剂的漂白剂中针对稳定性测试约140个变体。测序这些中的19个克隆,得到16个独特序列。
发现具有改进稳定性的变体序列的大变化示出了,M29和M180的任意取代和这些取代的组合是有益的。
在此描述并且要求保护的本发明不限于在此披露的特定方面的范围,因为这些方面旨在作为本发明若干方面的说明。预期任何等效方面都处于本发明的范围内。实际上,除在此所示和描述的那些之外,本发明的不同修改对于本领域普通技术人员而言从前述描述将变得清楚。此类修改也旨在落入所附权利要求书的范围内。在有冲突的情况下,以包括定义的本披露为准。
Claims (15)
1.一种β-葡聚糖酶变体,在与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的位置M29和/或M180对应的一个或多个位置处包括取代,其中该变体具有β-葡聚糖酶活性,并且其中该变体与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的成熟多肽具有至少60%,例如,至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但是小于100%的序列一致性。
2.如权利要求1所述的变体,该变体是选自下组的亲本β-葡聚糖酶的变体,该组由以下各项组成:
a.与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽具有至少60%的序列一致性的多肽;
b.SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽的、具有β-葡聚糖酶活性的片段。
3.如权利要求1-2中任一项所述的变体,其中该亲本β-葡聚糖酶包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽或由其组成。
4.如权利要求1-3中任一项所述的变体,其中该亲本β-葡聚糖酶是SEQ ID NO:3或SEQID NO:4的多肽的片段,其中该片段具有β-葡聚糖酶活性。
5.如权利要求1-4中任一项所述的变体,其中改变的个数是1-20,例如1-10和1-5,如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个改变。
6.如权利要求1-5中任一项所述的变体,该变体在与位置M29对应的位置处包括取代,其中该取代氨基酸选自以下项:Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val,优选以下项:Ala、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、Leu、Ser、Trp、Tyr或Val,优选以下项:Val、Gly、Asn、Ser或Cys。
7.如权利要求1-6中任一项所述的变体,该变体在与位置M180对应的位置处包括取代,其中该取代氨基酸选自以下项:Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val,优选以下项:Ala、Arg、Cys、Gln、Glu、His、Leu、Phe、Pro、Ser、Thr或Tyr,优选以下项:Leu、His或Arg。
8.如权利要求1-7中任一项所述的变体,该变体包括选自以下项的取代或由其组成:
M29V+M180L;
M29A+M180F;
M29Y;
M29V+M180H;
M29G+M180L;
M29N;
M29G+M180R;
M29S+M180Y;
M29G+M180H;
M29E+M180L;
M180H;
M29W+M180S;
N29N+M180F;
N29S+M180A;
N29C+M180L;
M29V+M180T;
M29Q+M180R;
M29L+M180T;
M29G+M180C;
N29N+M180Q;及
M29L+M180A。
9.如权利要求1-8中任一项所述的变体,该变体相对于亲本具有改进的特性,其中该改进的特性是增加的氧化稳定性。
10.一种组合物,该组合物包含如权利要求1-9中任一项所述的变体。
11.如权利要求10所述的组合物,是洗涤剂组合物,优选地是用于ADW的洗涤剂组合物。
12.一种编码如权利要求1-9中任一项所述的变体的多核苷酸。
13.一种包含如权利要求12所述的多核苷酸的核酸构建体。
14.一种包含如权利要求12所述的多核苷酸的表达载体。
15.一种包含如权利要求12所述的多核苷酸的宿主细胞。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP14162025.2 | 2014-03-27 | ||
EP14162025 | 2014-03-27 | ||
PCT/EP2015/056556 WO2015144824A1 (en) | 2014-03-27 | 2015-03-26 | Beta-glucanase variants and polynucleotides encoding same |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106133135A true CN106133135A (zh) | 2016-11-16 |
CN106133135B CN106133135B (zh) | 2020-06-09 |
Family
ID=50389276
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201580015031.7A Active CN106133135B (zh) | 2014-03-27 | 2015-03-26 | β-葡聚糖酶变体以及编码它们的多核苷酸 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10035976B2 (zh) |
EP (1) | EP3122875B1 (zh) |
CN (1) | CN106133135B (zh) |
WO (1) | WO2015144824A1 (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112204137A (zh) * | 2018-04-19 | 2021-01-08 | 诺维信公司 | 稳定化的纤维素酶变体 |
CN112272701A (zh) * | 2018-04-19 | 2021-01-26 | 诺维信公司 | 稳定化的纤维素酶变体 |
Families Citing this family (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PL3387125T3 (pl) * | 2015-12-07 | 2023-01-09 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Kompozycje do mycia naczyń zawierające polipeptydy posiadające aktywność beta-glukanazy oraz ich zastosowania |
JP2019504625A (ja) * | 2016-01-29 | 2019-02-21 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | β−グルカナーゼ変異体およびこれをコードするポリヌクレオチド |
WO2017174769A2 (en) | 2016-04-08 | 2017-10-12 | Novozymes A/S | Detergent compositions and uses of the same |
CN109312319B (zh) | 2016-05-09 | 2023-05-16 | 诺维信公司 | 具有改善的性能的变体多肽及其用途 |
CA3058092A1 (en) | 2017-05-08 | 2018-11-15 | Novozymes A/S | Mannanase variants and polynucleotides encoding same |
CA3058095A1 (en) | 2017-05-08 | 2018-11-15 | Novozymes A/S | Mannanase variants and polynucleotides encoding same |
US20200255813A1 (en) * | 2017-07-09 | 2020-08-13 | Igc Bio, Inc. | Pross optimized enzymes |
WO2019068713A1 (en) | 2017-10-02 | 2019-04-11 | Novozymes A/S | POLYPEPTIDES HAVING MANNANASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES ENCODING THESE POLYPEPTIDES |
US11732221B2 (en) | 2017-10-02 | 2023-08-22 | Novozymes A/S | Polypeptides having mannanase activity and polynucleotides encoding same |
EP3701001A1 (en) | 2017-10-24 | 2020-09-02 | Novozymes A/S | Compositions comprising polypeptides having mannanase activity |
WO2019185726A1 (en) | 2018-03-29 | 2019-10-03 | Novozymes A/S | Mannanase variants and polynucleotides encoding same |
US20220169953A1 (en) * | 2019-04-03 | 2022-06-02 | Novozymes A/S | Polypeptides having beta-glucanase activity, polynucleotides encoding same and uses thereof in cleaning and detergent compositions |
EP4097226A1 (en) | 2020-01-31 | 2022-12-07 | Novozymes A/S | Mannanase variants and polynucleotides encoding same |
WO2021152123A1 (en) | 2020-01-31 | 2021-08-05 | Novozymes A/S | Mannanase variants and polynucleotides encoding same |
WO2023225459A2 (en) | 2022-05-14 | 2023-11-23 | Novozymes A/S | Compositions and methods for preventing, treating, supressing and/or eliminating phytopathogenic infestations and infections |
WO2023247348A1 (en) | 2022-06-21 | 2023-12-28 | Novozymes A/S | Mannanase variants and polynucleotides encoding same |
KR20240029583A (ko) * | 2022-08-24 | 2024-03-06 | 씨제이제일제당 (주) | 글루카나제 활성을 갖는 변이체 폴리펩티드 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1299404A (zh) * | 1997-07-30 | 2001-06-13 | 亨克尔两合股份公司 | 含葡聚糖酶的洗涤剂 |
WO2005003319A2 (en) * | 2003-07-02 | 2005-01-13 | Diversa Corporation | Glucanases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015527065A (ja) | 2012-08-03 | 2015-09-17 | デュポン ニュートリション バイオサイエンシス エーピーエス | 酵素 |
-
2015
- 2015-03-26 WO PCT/EP2015/056556 patent/WO2015144824A1/en active Application Filing
- 2015-03-26 US US15/126,510 patent/US10035976B2/en active Active
- 2015-03-26 CN CN201580015031.7A patent/CN106133135B/zh active Active
- 2015-03-26 EP EP15712373.8A patent/EP3122875B1/en active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1299404A (zh) * | 1997-07-30 | 2001-06-13 | 亨克尔两合股份公司 | 含葡聚糖酶的洗涤剂 |
WO2005003319A2 (en) * | 2003-07-02 | 2005-01-13 | Diversa Corporation | Glucanases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
EMBL: "Uniparc-UPI0001A48A5D", 《DATABASE UNIPARC》 * |
RACHINGER M.等: "Endo-1,3-1,4glucanase", 《DATABASE UNIPROT》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112204137A (zh) * | 2018-04-19 | 2021-01-08 | 诺维信公司 | 稳定化的纤维素酶变体 |
CN112272701A (zh) * | 2018-04-19 | 2021-01-26 | 诺维信公司 | 稳定化的纤维素酶变体 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US10035976B2 (en) | 2018-07-31 |
US20170081615A1 (en) | 2017-03-23 |
EP3122875B1 (en) | 2020-11-25 |
WO2015144824A1 (en) | 2015-10-01 |
EP3122875A1 (en) | 2017-02-01 |
CN106133135B (zh) | 2020-06-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10450553B2 (en) | Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same | |
CN106133135A (zh) | β‑葡聚糖酶变体以及编码它们的多核苷酸 | |
CN106414729A (zh) | α‑淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 | |
CN105992820A (zh) | 具有蛋白酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸 | |
CN106795507A (zh) | 蛋白酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 | |
CN105209614A (zh) | 具有α淀粉酶活性的多肽 | |
CN105209613A (zh) | 具有α淀粉酶活性的多肽 | |
CN107109390A (zh) | 蛋白酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 | |
CN107002059A (zh) | 蛋白酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 | |
CN107002060A (zh) | 蛋白酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 | |
CN107002061A (zh) | 蛋白酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 | |
CN105358684A (zh) | 蛋白酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 | |
CN105358685A (zh) | 蛋白酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 | |
CN105874067A (zh) | 枯草杆菌酶变体以及编码它们的多核苷酸 | |
CN105209612A (zh) | 洗涤剂组合物 | |
CN104903443A (zh) | α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 | |
CN105264058A (zh) | α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 | |
CN105579580A (zh) | α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 | |
CN106459939A (zh) | 脂肪酶变体以及编码它们的多核苷酸 | |
CN106459944A (zh) | α‑淀粉酶变体 | |
CN106103708A (zh) | 具有α淀粉酶活性的多肽 | |
CN105829531A (zh) | α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 | |
CN116323932A (zh) | 具有改善的溶解度的蛋白酶变体 | |
CN107429203A (zh) | 包含蛋白酶变体和淀粉酶变体的洗涤剂组合物 | |
US10287562B2 (en) | Alicyclobacillus variants and polynucleotides encoding same |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |