CN106103483A - 抗hpv和hpv相关的疾病的新疫苗 - Google Patents

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Abstract

实施方案涉及针对人乳头瘤病毒(HPV)和HPV相关的疾病，包括多种癌症类型的新疫苗。HPV疫苗由抗人树突细胞(DC)表面受体抗体组成，包括CD40和HPV 16和18的E6/7蛋白。所描述的技术不限于制备针对HPV 16‑和HPV 18‑相关的疾病的疫苗，并且能够适用于制备携带来自任何类型的HPV的E6/7的疫苗。所描述的HPV疫苗可以靶向DC、主要和专职性抗原递呈细胞(APC)，并且能够诱导和激活强效的HPV E6/7‑特异性和强力的CD4+和CD8+T细胞反应。HPV疫苗可以用于预防HPV感染和HPV‑相关的疾病，以及用于治疗HPV‑相关的疾病，包括癌症。

Description

抗HPV和HPV相关的疾病的新疫苗
发明背景
本申请要求2014年1月13日提交的第61/926,821号美国临时专利申请和2014年5月23日提交的第62/002,718号美国临时专利申请的优先权的权益，通过引用将两者以其整体并入本文。
本发明是在国立卫生研究院和国家过敏和传染病研究所给予的批准号为U19AI057234的政府支持下完成的。政府对本发明享有一定的权利。
1.发明领域
本发明总体上涉及医药领域。更具体地，其涉及抗人乳头瘤病毒(HPV)和HPV-相关疾病，包括多种类型的癌症的新型的和新颖的疫苗。
2.相关技术的描述
人乳头瘤病毒(HPV)是一种最常见的性传播的病原体。当前的HPV预防性疫苗已在HPV感染的预防中显示出显著的临床效果，但是其在感染的患者和HPV-相关的癌症的治疗中没有显示出效果。HPV感染引发几乎所有的宫颈癌，和许多肛门癌、阴道癌、外阴癌、阴茎癌、口咽(咽喉)癌。因此，很需要针对感染HPV和具有HPV-相关癌症的患者开发安全和有效的疫苗。HPV感染还引起HIV-相关的恶性肿瘤和癌症。
目前的HPV疫苗为由HPV6、11、16和18的衣壳(L1)蛋白制备的重组病毒样颗粒。这些疫苗能够引起强力的抗体应答并且因此能够预防HPV感染。为了抑制病毒复制和消除HPV-相关癌症，疫苗需要刺激强力的T细胞应答，特别是能够杀死病毒感染的细胞的细胞毒性CD8+淋巴细胞(CTL)，接着抑制HPV复制和HPV-相关的肿瘤细胞。
已经测试了几种类型的疫苗模型(包括肽、蛋白和基于DNA的疫苗和由减毒活载体携带的疫苗)，但是这些疫苗尤其在免疫缺陷的患者中在功效性或安全性方面有缺点。这种缺陷使开发抗HPV-关联癌症的安全和强效的免疫治疗疫苗成为必需。
大量的证据得出这样的结论：几乎所有的宫颈癌病例都是由多种HPV类型中的一个小组，尤其是HPV 16型(HPV 16)和HPV 18型(HPV 18)的持续感染引起的。这些类型的HPV还引起一定比例的其他粘膜癌，包括外阴癌、阴道癌、肛门癌、阴茎癌和口咽癌。HPV 16是宫颈的鳞状细胞癌中的主要类型，而HPV 18是第二种最常见的类型，患病率从中/南美的12.6％到南亚的25.7％。此外，HPV 18与快速发展和潜在地更有侵略性的宫颈癌有关。然而，亚临床感染是HPV感染最常见的表现。不同的研究报道在性活跃的成年人中有15％至36％的亚临床感染。
发明概述
本发明公开了包括抗-CD40抗体或其片段的融合蛋白，其包括至少三个来自抗-CD40抗体的互补决定区，至少一个肽接头和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV16型或HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少来自抗-CD40抗体的可变区。所述可变区可以来自轻链或重链。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少来自抗-CD40抗体轻链的可变区和至少来自抗-CD40抗体重链的可变区。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段包括六个来自抗-CD40抗体的CDR。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。在一些实施方案中，所述肽接头或多个肽接头是柔性接头。在一些实施方案中，所述肽接头或多个肽接头包括一个或多个糖基化位点。在一些实施方案中，所述肽接头或多个肽接头是Flexv1(SEQ ID NO:5)和/或f1(SEQ ID NO:6)。在一些实施方案中，所述HPV抗原是E6和E7。在一些实施方案中，所述融合蛋白包括SEQ ID NO:19的序列。在一些实施方案中，所述融合蛋白包括SEQ ID NO:21的序列。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV16型抗原和至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
本发明还公开了包括至少SEQ ID NO：11-13或SEQ ID NO：14-16的氨基酸序列和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原的融合蛋白。在一些实施方案中，所述融合蛋白包括SEQ ID NO：11-13和SEQ ID NO：14-16。在一些实施方案中，E6或E7抗原或多个E6或E7抗原为HPV 16型或HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述融合蛋白还包括肽接头。在一些实施方案中，所述肽接头是柔性接头。在一些实施方案中，所述肽接头包括一个或多个糖基化位点。在一些实施方案中，所述肽接头是Flexv1(SEQ ID NO:5)和/或f1(SEQ ID NO:6)。
本发明还公开了包含任何上述融合蛋白的药物组合物。
本发明还公开了制备任何上述融合蛋白的方法，其包括从表达融合蛋白的重组宿主细胞分离融合蛋白。
本发明还公开了包含树突细胞靶向复合物的组合物，所述树突细胞靶向复合物包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少三个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少来自抗-CD40抗体的可变区。可变区可以来自轻链或重链。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少来自抗-CD40抗体轻链的可变区和至少来自抗-CD40抗体重链的可变区。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段包括六个来自抗-CD40抗体的CDR。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。在一些实施方案中，所述肽接头或多个肽接头是柔性接头。在一些实施方案中，所述肽接头或多个肽接头包括一个或多个糖基化位点。在一些实施方案中，所述肽接头或多个肽接头选自Flexv1(SEQ ID NO:5)或f1(SEQ ID NO:6)。在一些实施方案中，所述HPV抗原是E6和E7。在一些实施方案中，所述融合蛋白包括SEQ ID NO:19的序列。在一些实施方案中，所述融合蛋白包括SEQ ID NO:21的序列。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV16型抗原和至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
在一些实施方案中，所述HPV E6和E7抗原选自SEQ ID NO:1-4。在其他实施方案中，所述HPV E6和E7抗原与SEQ ID NO:1-4的任何组合具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％或其中可推出的任何范围的同一性。在其他实施方案中，所述HPV E6和E7抗原与SEQ ID NO:1-4具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％或其中可推出的任何范围的同一性。在再其他实施方案中，所述HPV E6抗原是SEQ ID NO:1和/或3的50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115或120个或其中可推出的任何范围的连续氨基酸的子集和所述HPV E7抗原是SEQ ID NO:2和/或4的50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、15或120个或其中可推出的任何范围的连续氨基酸的子集。
本发明还公开了包括编码融合蛋白的多核苷酸序列的载体，所述融合蛋白包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括来自抗-CD40抗体的至少三个互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体重链可变区。在一些实施方案中，所述多核苷酸序列编码至少一个HPV 16型E6抗原、至少一个HPV 16型E7抗原或至少一个HPV 18型E6抗原和至少一个HPV 18型E7抗原。在一些实施方案中，所述多核苷酸序列编码包括SEQ ID NO:19的多肽。在一些实施方案中，所述多核苷酸序列编码包括SEQ ID NO:21的多肽。在一些实施方案中，所述多核苷酸序列编码至少一个HPV 16型E6抗原、至少一个HPV 16型E7抗原、至少一个HPV 18型E6抗原和至少一个HPV 18型E7抗原。
本发明还公开了用于预防人乳头瘤病毒(HPV)感染的方法，其包括给予患者包括树突细胞靶向复合物的组合物，所述树突细胞靶向复合物包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少六个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV16型或HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体轻链可变区和抗-CD40抗体重链可变区。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPVE7抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:19。在一些实施方案中，所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:21。在一些实施方案中，所述组合物还包括佐剂。在一些实施方案中，所述方法还包括给予患者不同的HPV疫苗。在一些实施方案中，所述不同的HPV疫苗是GardasilTM或CervarixTM。
本发明还公开了用于治疗人乳头瘤病毒(HPV)感染的方法，其包括给予患者包括树突细胞靶向复合物的组合物，所述树突细胞靶向复合物包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少六个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV16型或HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体轻链可变区和抗-CD40抗体重链可变区。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPVE7抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:19。在一些实施方案中，所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:21。在一些实施方案中，所述方法还包括给予患者不同的HPV治疗。
本发明还公开了用于诱导针对至少一个HPV表位的免疫应答的方法，其包括给予患者包括树突细胞靶向复合物的组合物，所述树突细胞靶向复合物包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少六个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体轻链可变区和抗-CD40抗体重链可变区。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述树突细胞靶向复合物包括SEQID NO:19。在一些实施方案中，所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:21。在一些实施方案中，所述组合物还包括佐剂。在一些实施方案中，所述方法还包括给予患者不同的HPV疫苗。在一些实施方案中，所述不同的HPV疫苗是GardasilTM或CervarixTM。
本发明还公开了用于增强针对至少一个HPV表位的免疫应答的方法，其包括给予患者包括树突细胞靶向复合物的组合物，所述树突细胞靶向复合物包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少六个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体轻链可变区和抗-CD40抗体重链可变区。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述树突细胞靶向复合物包括SEQID NO:19。在一些实施方案中，所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:21。在一些实施方案中，增强免疫应答涉及增强或增加或加强记忆T-细胞。在一些实施方案中，所述方法还包括给予患者不同的HPV治疗。
本发明还公开了用于预防人乳头瘤病毒(HPV)相关的疾病的方法，其包括给予患者包括树突细胞靶向复合物的组合物，所述树突细胞靶向复合物包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少六个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体轻链可变区和抗-CD40抗体重链可变区。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPVE7抗原是HPV 16型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述树突细胞靶向复合物包括SEQ IDNO:19。在一些实施方案中，所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:21。在一些实施方案中，所述组合物还包括佐剂。在一些实施方案中，所述HPV相关的疾病是发育不良、良性肿瘤、癌前肿瘤或癌症。在一些实施方案中，所述HPV相关的疾病是癌症。在一些实施方案中，所述癌症是宫颈癌、外阴癌、阴道癌、阴茎癌、肛门癌、口咽癌、咽喉癌或肺癌。在一些实施方案中，所述方法还包括给予患者不同的HPV疫苗。在一些实施方案中，所述不同的HPV疫苗是GardasilTM或CervarixTM。
本发明还公开了用于治疗人乳头瘤病毒(HPV)相关的疾病的方法，所述方法包括给予患者包括树突细胞靶向复合物的组合物，所述树突细胞靶向复合物包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少六个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体轻链可变区和抗-CD40抗体重链可变区。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV16型抗原，至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:19。在一些实施方案中，所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:21。在一些实施方案中，所述HPV相关的疾病是发育不良、良性肿瘤、癌前肿瘤或癌症。在一些实施方案中，所述HPV相关的疾病是癌症。在一些实施方案中，所述癌症是宫颈癌、外阴癌、阴道癌、阴茎癌、肛门癌、口咽癌、咽喉癌或肺癌。在再另一个实施方案中，所述癌症是头颈癌。在一些实施方案中，所述方法还包括给予患者不同的治疗。在一些实施方案中，所述方法还包括给予患者癌症治疗。
本发明还公开了抑制患者中HPV-感染的细胞的方法，其包括给予患者有效量的组合物，所述组合物包含任何以上的融合蛋白或载体。在一些实施方案中，所述HPV-感染的细胞在肿瘤中。
本发明还公开了减小患有HPV感染的患者中的肿瘤或包括HPV-感染的细胞的肿瘤的尺寸或质量的方法，其包括给予患者有效量的组合物，所述组合物包含任何以上的融合蛋白或载体。在治疗期间或之后，肿瘤的尺寸或质量的减小百分比或肿瘤的消退百分比可以为至少10％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％75％、80％、85％、90％、95％至100％或其中任何可推出的范围。肿瘤的尺寸或质量的减小百分比或肿瘤的消退百分比可以是这样的，其使得肿瘤尺寸缓解不适并改善了患者的生活质量或导致临床上的有利结果，或与临床上的有利结果相关。
本发明公开了延长患有HPV相关的疾病的患者或受试者生存的方法，其包括给予患者包括树突细胞靶向复合物的组合物，所述树突细胞靶向复合物包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少六个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体轻链可变区和抗-CD40抗体重链可变区。在一些实施方案中，所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。在一些实施方案中，所述树突细胞靶向复合物包括SEQID NO:19。在一些实施方案中，所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:21。在一些实施方案中，所述HPV相关疾病是发育不良、良性肿瘤、癌前肿瘤或癌症。在一些实施方案中，所述HPV相关疾病是癌症。在一些实施方案中，所述癌症是宫颈癌、外阴癌、阴道癌、阴茎癌、肛门癌、口咽癌、咽喉癌或肺癌。在再另一个实施方案中，所述癌症是头颈癌。在一些实施方案中，所述方法还包括给予患者不同的治疗。在一些实施方案中，所述方法还包括给予患者癌症治疗。在一些方面，存活被延长的周期为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10天，或其中可推出的任何范围。在一些方面，存活被延长的周期为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10周，或其中可推出的任何范围。在一些方面，存活被延长的周期为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个月，或其中可推出的任何范围。在一些方面，存活被延长的周期为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或30年，或其中可推出的任何范围。
以上公开的任何方法可以使用以上公开的任何融合蛋白、组合物和/或载体实施。
如本文在说明书中所使用的，“一(a)”或“一(an)”可以表示一个或多个。如本文在权利要求(多个权利要求)中所使用的，当与词语“包含(comprising)”一起使用时，词语“一(a)”或“一(an)”可以表示一个或多于一个。
在权利要求中使用术语“或”是用来表示“和/或”，除非明确规定仅指代供选择的方案，或供选择的方案互相排斥，但是本公开内容支持仅指代供选择的方案和“和/或”的定义。如本文所使用的，“另一个”可以表示至少第二个或更多个。
贯穿本申请，术语“约”用于表示这样的值，其包括用于确定数值的装置、方法固有的误差变化或在研究受试者中存在的变化。
本发明的其他目的、特征和优点将由以下详述变得显而易见。然而，应理解的是，虽然详细描述和具体实施例显示本发明的优选实施方案，但是仅以说明的方式给出，这是因为在本发明的精神和范围内的各种变化和修改将基于该详细描述变得对本领域技术人员显而易见。
附图简述
以下附图构成本说明书的一部分，并且被包括以进一步展示本发明的某些方面。结合本文提供的具体实施方案的详述，参照这些附图中的一个或多个，可以更好地理解本发明。
图1：开发重组抗-DC受体-E6/E7疫苗的方案。
图2：蛋白A亲和纯化的融合到HPV 16 E6和E7抗原的抗-DC受体抗体的SDS-PAGE分析。
图3：抗-CD40-HPV16.E6/7能够有效地结合到人血DC。
图4：抗-CD40-HPV16.E6/7能够引起HPV16.E6/7-特异性CD4+和CD8+T-细胞应答。
图5：抗-CD40-HPV16.E6/7能够有效地诱导HPV16.E6/7-特异性CD4+和CD8+T-细胞应答。
图6：在人CD40Tg小鼠中，抗-CD40-HPV16.E6/7能够抑制TC-1肿瘤发展。
图7：佐剂与抗-CD40-HPV16.E6/7共同给予的效果。
图8：在hCD40转基因动物中，CD40HVac加聚IC诱导E6/7-特异性CD8+T细胞。
图9：在hCD40Tg鼠中CD40HVac加聚IC诱导治疗性免疫。(a)存活曲线。每组10只小鼠。(b)TC-1肿瘤发展。每组10只小鼠。
图10：在肿瘤中而不在血液中的E7-特异性四聚体+CD8+T细胞的百分比与肿瘤体积负相关。
图11：诱导E6/7-特异性CD8+T细胞应答时，使用抗-CD40(克隆12E12)制备的CD40HVac比使用抗-CD40(克隆12B6)制备的更有效。
说明性实施方案的描述
如实施例中所描述的，已融合HPV E6和E7抗原的抗-CD40抗体(下文称为“抗-CD40-HPV16.E6/7”)已显示诱导针对所述抗原的强免疫应答(包括强T-细胞应答)。这提供了引起和增强针对HPV抗原的免疫应答的有效率且有效果的方法。此外，抗-CD40-HPV16.E6/7已经与聚IC佐剂组合用于初免-加强(prime-boost)策略以抑制人CD40转基因小鼠中TC-1肿瘤发展。因此，已证明的是所述抗-CD40-HPV16.E6/7能够引发E6/E7-特异性CD8+细胞毒性T淋巴细胞，并且当与聚IC佐剂一起给予时，充当有效的疫苗。
I.核酸
在某些实施方案中，存在编码本文所述的蛋白、多肽或肽的重组核酸。考虑用于方法和组合物的多核苷酸包括编码DC受体或其结合部分的抗体、HPV抗原、接头区域或佐剂的那些。
如本申请中所使用的，术语“多核苷酸”是指重组的或不含总基因组核酸的经分离的核酸分子。术语“多核苷酸”包括寡核苷酸(长度为100个残基或更短的核酸)，重组载体，包括例如质粒、粘粒、噬菌体、病毒等。在某些方面，多核苷酸包括基本上与其天然存在的基因或蛋白编码序列分开的调节序列。多核苷酸可以是单链的(编码或反义)或双链的，并且可以是RNA、DNA(基因组、cDNA或合成的)、其类似物或其组合。另外的编码或非编码序列可以但不是必须存在于多核苷酸内。
在这方面，术语“基因”、“多核苷酸”或“核酸”用来指编码蛋白、多肽或肽的核酸(包括适当的转录、翻译后修饰或定位所需的任何序列)。如本领域技术人员所理解的，该术语包括表达或可以适于表达蛋白、多肽、结构域、肽、融合蛋白和突变体的基因组序列、表达盒、cDNA序列和更小的工程化核酸片段。编码所有或部分多肽的核酸可以包含编码所有或部分这样的多肽的连续核酸序列。还考虑该特定多肽可以由包含具有略微不同的核酸序列，但还编码相同或基本相似的蛋白的变化的核酸编码(参见上文)。
在具体的实施方案中，存在分离的核酸片段和重组载体，HPV抗原，接头区域或包含DC受体抗体或多个DC受体抗体或其片段、HPV抗原(例如来自任何HPV型的E6或E7)和接头区域的融合蛋白，所述重组载体掺入编码结合于DC受体的多肽(例如抗体或其片段)的核酸序列。术语“重组的”可以与多肽或特异性多肽的名称联合使用，并且这一般是指由在体外被操纵的核酸分子产生的多肽或作为这样的分子的复制产物的核酸分子产生的多肽。
无论编码序列自身长度如何，核酸片段可以与其他核酸序列组合，如启动子、多腺苷酸化信号、另外的限制性酶切位点、多克隆位点、其他编码片段等，使得其全长可以变化很大。因此考虑可以采用几乎任意长度的核酸片段，其中总长度优选地受到在预期的重组核酸方案中制备的容易程度和用途的限制。在一些情况下，核酸序列可以编码具有另外的异源编码序列的多肽序列，例如以实现多肽的纯化、转运、分泌、翻译后修饰，或治疗益处如靶向性或功效。如以上所讨论的，标签或其他异源多肽可以添加到修饰的多肽编码序列中，其中“异源的”是指与修饰的多肽不同的多肽。
在某些实施方案中，存在与本文公开的序列具有高同一性的多核苷酸变体；存在使用本文所述的方法(例如，使用标准参数的BLAST分析)与在本文中提供的多核苷酸序列相比，包括至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％或更高的序列同一性的多核苷酸变体，包括其间的所有数值和范围。在某些方面，分离的多核苷酸将包括：编码这样的多肽的核苷酸序列，所述多肽与本文所述的氨基酸序列在序列的全长上具有至少90％，优选为95％及以上的同一性；或与所述分离的多核苷酸互补的核苷酸序列。
载体
多肽可以由核酸分子编码。核酸分子可以是核酸载体的形式。术语“载体”用来指载体核酸分子，异源核酸序列可以插入到所述载体核酸分子中以引入可以在其中复制和表达的细胞。核酸序列可以是“异源的”，这意味着其处在与载体被引入的细胞或与被掺入的核酸不同的环境中，所述核酸序列包括与细胞或核酸中的序列是同源的，但位于宿主细胞或核酸内其不通常出现的位置处的序列。载体包括DNA、RNA、质粒、粘粒、病毒(细菌噬菌体、动物病毒和植物病毒)和人工染色体(例如，YAC)。本领域技术人员将具有完善设备以通过标准重组技术构建载体(例如Sambrook等人,2001；Ausubel等人,1996，将两者通过引用并入本文)。载体可以用于宿主细胞中以产生结合树突细胞受体的抗体或其片段、HPV抗原或多个HPV抗原(例如来自一个或多个HPV类型的E6和/或E7)、接头或多个接头区域、佐剂或多种佐剂、上述蛋白的任何组合或包括上述蛋白的任何组合的融合蛋白或多个融合蛋白。
术语“表达载体”是指包含编码至少一部分能够被转录的基因产物的核酸序列的载体。在一些情况下，RNA分子随后被翻译成蛋白、多肽或肽。表达载体可以包含各种“控制序列”，其是指在特定宿主有机体中的可操作地连接的编码序列的转录和可能的翻译所必需的核酸序列。除了支配转录和翻译的控制序列以外，载体和表达载体还可以包含起到其他作用和在本文中描述的核酸序列。
宿主细胞
如本文所使用的，术语“细胞”、“细胞系”和“细胞培养物”可以互换使用。所有这些术语还包括其子代，其为任意和所有后代。应理解的是，所有子代可以由于有意或无意的突变而不相同。在表达异源核酸序列的语境中，“宿主细胞”是指原核或真核细胞，并且其包括能够复制载体或表达载体编码的异源基因的任意可转化的有机体。宿主细胞可以，并且已经被用作载体或病毒的受体。宿主细胞可以被“转染”或“转化”，这是指借助其将外源性核酸，如重组的蛋白编码序列转移到或引入宿主细胞中的方法。转化的细胞包括原代受试细胞及其子代。
一些载体可以采用控制序列，所述控制序列使其能够在原核和真核细胞两者中复制和/或表达。本领域技术人员将进一步了解这样的条件，在所述条件下孵育所有上述宿主细胞以使其维持并允许载体复制。还了解和已知的是将实现大规模制备载体，以及制备载体编码的核酸及其同源多肽、蛋白或肽的技术和条件。
表达系统
存在许多包括至少部分或所有以上讨论的组合物的表达系统。基于原核生物和/或真核生物的系统可以用于实施方案以产生核酸序列或其同源多肽、蛋白和肽。许多这样的系统是市售的并且是普遍可得的。
昆虫细胞/杆状病毒系统可以产生高水平的异源核酸片段的蛋白表达，如美国专利5,871,986、4,879,236中所述，两者通过引用并入本文，并且可以例如以名称2.0购自和以名称BACPACKTM杆状病毒表达系统购自
除了公开的表达系统以外，表达系统的其他实例包括的完全控制可诱导的哺乳动物表达系统，其涉及合成蜕皮激素可诱导的受体或其pET表达系统，大肠杆菌(E.coli)表达系统。可诱导的表达系统的另一个实例可以得自其携带T-REXTM(四环素调节的表达)系统，使用全长CMV启动子的可诱导的哺乳动物表达系统。还提供了被称为甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)表达系统的酵母表达系统，其被设计用于在甲醇营养型酵母甲醇毕赤酵母中高水平产生重组蛋白。本领域技术人员将懂得如何表达载体，如表达构建体，以产生核酸序列或其同源多肽、蛋白或肽。
II.蛋白质组合物
替换变体通常包含在蛋白内的一个或多个位点处的一个氨基酸与另一个的互换，并且可以被设计为在失去或不失去其他功能或特性的情况下调节多肽的一种或多种特性。替换可以是保守的，即，一个氨基酸被具有相似形状和电荷的氨基酸替代。保守替换在本领域中是熟知的，并且包括例如以下变化：丙氨酸到丝氨酸；精氨酸到赖氨酸；天冬酰胺到谷氨酰胺或组氨酸；天冬氨酸到谷氨酸；半胱氨酸到丝氨酸；谷氨酰胺到天冬酰胺；谷氨酸到天冬氨酸；甘氨酸到脯氨酸；组氨酸到天冬酰胺或谷氨酰胺；异亮氨酸到亮氨酸或缬氨酸；亮氨酸到缬氨酸或异亮氨酸；赖氨酸到精氨酸；蛋氨酸到亮氨酸或异亮氨酸；苯丙氨酸到酪氨酸、亮氨酸或蛋氨酸；丝氨酸到苏氨酸；苏氨酸到丝氨酸；色氨酸到酪氨酸；酪氨酸到色氨酸或苯丙氨酸；和缬氨酸到异亮氨酸或亮氨酸。供选择地，替换可以是非保守的，使得多肽的功能或活性受到影响。非保守变化通常涉及使用化学上不同的残基替换残基，如用极性或带电氨基酸替换非极性或不带电的氨基酸，反之亦然。
蛋白可以是重组的或在体外合成的。供选择地，非重组或重组蛋白可以从细菌分离。还考虑可以在组合物和方法中应用包含这样的变体的细菌。因此，蛋白不需被分离。
在本文中使用的术语“功能上等价的密码子”指代编码相同氨基酸的密码子，如精氨酸或丝氨酸的六个密码子，并且还指代编码生物学上等价的氨基酸的密码子(参见下表)。
密码子表
还应理解氨基酸和核酸序列可以分别包括另外的残基，如另外的N-或C-末端氨基酸或5'或3'序列，并且只要所述序列满足以上阐述的标准，包括保持涉及蛋白表达的生物蛋白活性，就还仍然基本上是如本文公开的序列之一中阐述的。末端序列的添加特别适用于这样的核酸序列，所述核酸序列可以例如包括在编码区域的5'或3'部分侧翼的各种非编码序列。
以下是基于改变蛋白的氨基酸以产生等价或甚至改进的第二代分子的讨论。例如，某些氨基酸可以替换蛋白结构中的其他氨基酸而不明显损失与结构例如抗体的抗原结合区域或底物分子上的结合位点的相互作用的结合能力，或损失在抗原多肽或蛋白中的抗原性。由于相互作用的能力和蛋白性质限定蛋白的生物功能活性，因此可以在蛋白序列中以及在其潜在DNA编码序列中进行某些氨基酸替换，而产生具有类似特性的蛋白。因此，本发明人考虑可以在基因的DNA序列中进行各种改变而不明显损失其生物效用或活性。
在进行这样的改变时，可以考虑氨基酸的亲水指数。本领域中通常了解亲水氨基酸指数在赋予蛋白相互作用的生物功能中的重要性(Kyte和Doolittle,1982)。认可的是氨基酸的相对亲水特征对产生的蛋白的二级结构有贡献，其转而限定蛋白与其他分子的相互作用，所述其他分子例如，酶、底物、受体、DNA、抗体、抗原等。
本领域中还理解类似氨基酸的替换可以基于亲水性有效地进行。通过引用并入本文的美国专利4,554,101叙述了受其邻近氨基酸的亲水性支配的蛋白的最大局部平均亲水性与蛋白的生物特性相关。认为氨基酸可以替代另一个具有相似亲水性值的氨基酸并仍然产生生物学上等价和免疫上等价的蛋白。
如上所述，氨基酸替换一般地基于氨基酸侧链取代基的相对相似性，例如，其疏水性、亲水性、电荷、尺寸等。考虑各种上述特征的示例性的替换是熟知的并且包括：精氨酸和赖氨酸；谷氨酸和天冬氨酸；丝氨酸和苏氨酸；谷氨酰胺和天冬酰胺；以及缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。
考虑在组合物中每毫升有约0.001mg至约10mg总多肽、肽和/或蛋白。因此，组合物中的蛋白(包括融合蛋白)的浓度可以是约、至少约或至多约0.001、0.010、0.050、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0mg/ml或更高(或其中可推出的任何范围)。其中，约、至少约或至多约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100％可以是结合DC受体的抗体或包含结合DC受体的抗体的融合蛋白，并且可以与本文所述的其他HPV抗原、接头区域或佐剂组合使用。
多肽和多肽制备
实施方案涉及用于本文所述的各个方面的多肽、肽和蛋白及其免疫原性片段。例如，分析具体抗体结合DC受体并呈递HPV抗原或将具体抗体用于结合DC受体并呈递HPV抗原。在具体的实施方案中，本文所述的所有或部分蛋白还可以根据常规技术，在溶液中或在固体载体上合成。各种自动合成仪是市售的并且可以根据已知方案使用。参见例如，Stewart和Young,(1984)；Tam等人,(1983)；Merrifield,(1986)；和Barany和Merrifield(1979)，将其各自通过引用并入本文。供选择地，可以采用重组DNA技术，其中编码肽或多肽的核苷酸序列插入到表达载体中，被转化或转染到适合的宿主细胞中并在适合表达的条件下培养。
一个实施方案包括使用基因到细胞的转移，包括微生物，用于制备和/或呈递蛋白。感兴趣的蛋白的基因可以转移到适合的宿主细胞中，接着在适合的条件下培养细胞。可采用编码几乎任何多肽的核酸。本文讨论了重组表达载体和其中包括的元件的生成。供选择地，待产生的蛋白可以是通常由用于蛋白产生的细胞合成的内源性蛋白。
在某些方面，DC受体或受体片段包括蛋白的基本上所有胞外结构域，其与在片段序列的长度上选择的序列具有至少85％的同一性，至少90％的同一性，至少95％的同一性或至少97-99％的同一性，包括其间的所有数值和范围。
免疫原性组合物中还包括融合蛋白，所述融合蛋白由HPV抗原或HPV抗原的免疫原性片段(如E6或E7)组成。HPV抗原可以来自任何类型(如16型或18型)。例如，HPV抗原可以选自单一的HPV类型或HPV类型的组合。HPV抗原或HPV抗原的组合可以来自HPV 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119或120型。供选择地，实施方案还包括HPV蛋白或其免疫原性片段或抗-DC受体抗体或其片段的单个融合蛋白，作为与异源序列的融合蛋白，所述异源序列如T细胞表位或纯化标签的提供者，例如β-半乳糖苷酶，谷胱甘肽-S-转移酶，绿色荧光蛋白(GFP)，表位标签，如FLAG、myc标签，多组氨酸，或病毒表面蛋白，如流感病毒血凝素，或细菌蛋白，如破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM197。
抗体和抗体样分子
在某些方面，可以获得或产生对DC受体具有特异性的一种或多种抗体或抗体样分子(例如，包含抗体CDR结构域的多肽)。这些抗体可以用于本文所述的各种诊断或治疗应用中。
如本文所使用的，术语“抗体”意在泛指任何免疫结合剂，如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE以及保留抗原结合活性的包含抗体CDR结构域的多肽。因此，术语“抗体”用来指具有抗原结合区域的任何抗体样分子，并且包括抗体片段如Fab'，Fab，F(ab')2，单结构域抗体(DAB)，Fv，scFv(单链Fv)和具有抗体CDR、显示CDR的骨架结构域(scaffolding domain)的多肽(例如，anticalin)或纳米抗体。例如，所述纳米抗体可以是来自骆驼科IgG2或IgG3的抗原特异性VHH(例如，重组VHH)，或来自该骆驼科Ig的CDR-显示框架。用于制备和使用各种基于抗体的构建体和片段的技术在本领域中是熟知的。用于制备和表征抗体的手段在本领域中也是熟知的(参见例如Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring HarborLaboratory,1988；通过引用并入本文)。
“微型抗体(mini-antibodies)”或“微抗体(minibodies)”也被考虑用于实施方案。微抗体为sFv多肽链，其包括通过铰链区与sFv分开的在其C末端的低聚结构域(Pack等人,1992)。低聚结构域包括自缔合α-螺旋，例如亮氨酸拉链，其可以通过另外的二硫键被进一步稳定。低聚结构域被设计成与跨膜的矢量折叠相容，跨膜的矢量折叠被认为是促进多肽在体内折叠成功能性结合蛋白的过程。一般地，微抗体使用本领域熟知的重组方法制备。参见例如Pack等人(1992)；Cumber等人(1992)。
实施方案中也考虑抗体样结合模拟肽。Liu等人(2003)描述了“抗体样结合模拟肽”(ABiP)，其为充当简化抗体的肽并且具有更长的血清半衰期以及更方便的合成方法的特定优点。
抗原结合肽，如CDR的供选择的骨架也是可得到的并可以根据实施方案用于生成DC受体结合分子。一般地，本领域技术人员知道如何确定在其上移植至少一种由原始抗体产生的CDR的蛋白骨架的类型。更具体地，已知选择这样的骨架必须满足最大数量的如下标准(Skerra,2000)：良好的系统发育保守性；已知的三维结构(例如，通过晶体学、NMR光谱学或本领域技术人员已知的任意其他技术)；尺寸小；几乎没有或没有转录后修饰；和/或易于制备、表达和纯化。
这样的蛋白骨架的来源可以是但不限于选自以下的结构：纤连蛋白和优选的纤连蛋白III型结构域10、脂质运载蛋白、anticalin(Skerra,2001)、来自金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的蛋白A的结构域B的蛋白Z、硫氧还蛋白A或具有重复基序的蛋白，所述重复基序如“锚蛋白重复序列”(Kohl等人,2003)、“犰狳重复序列”、“富亮氨酸重复序列”和“三十四肽重复序列”。例如，anticalin或脂质运载蛋白衍生物是对各种靶分子具有亲和力和特异性的一类结合蛋白，并且可以用作DC受体-结合分子。这样的蛋白描述于第20100285564号、第20060058510号、第20060088908号、第20050106660号美国公开专利和第WO2006/056464号PCT公开申请中，通过引用将其并入本文。
在某些方面，还可以使用源自毒素和神经元NO合酶(PIN)的蛋白抑制剂的骨架，所述毒素例如来自蝎子、昆虫、植物、软体动物等。
认识到单克隆抗体(MAb)具有某些优点，例如重现性和大规模生产。实施方案包括人、小鼠、猴、大鼠、仓鼠、兔和鸡来源的单克隆抗体。
也考虑“人源化”抗体，如携带人恒定和/或可变区结构域的来自小鼠、大鼠或其他物种的嵌合抗体、双特异性抗体、重组和工程化的抗体及其片段。如本文所使用的，术语“人源化”免疫球蛋白是指包含人框架区和一个或多个来自非人(通常是小鼠或大鼠)免疫球蛋白的CDR的免疫球蛋白。提供CDR的非人免疫球蛋白被称为“供体”，提供框架的人免疫球蛋白被称为“受体”。“人源化抗体”是包含人源化轻链和人源化重链免疫球蛋白的抗体。为了描述一些实施方案的抗体，可以测量抗体分子结合表位的强度，该强度被称为亲和力。抗体的亲和力可以通过测量缔合常数(Ka)或解离常数(Kd)来确定。认为在某些实施方案中有用的抗体可以具有约、至少约或至多约10e6、10e7、10e8、10e9或10e10M或其中可推出的任意范围的缔合常数。类似地，在一些实施方案中，抗体具有约、至少约或至多约10e-6、10e-7、10e-8、10e-9或10e-10M或其中可推出的任意范围的解离常数。针对本文讨论的抗体报告这些数值，并且相同的分析可以用于评价这些抗体的结合特性。
在某些实施方案中，特异性结合于DC受体的多肽能够结合细胞表面上的DC受体并呈递HPV抗原，其能够产生强力的免疫应答。此外，在一些实施方案中，使用的多肽可以提供针对HPV的防护免疫或通过产生强力的免疫应答提供用于HPV的治疗方法。
1.产生抗体的方法
产生抗体(例如，单克隆抗体和/或单克隆抗体)的方法在本领域中是已知的。简言之，通过使用根据实施方案的DC受体多肽或其部分免疫动物并从免疫的动物收集抗血清来制备多克隆抗体。
许多动物物种可以用于制备抗血清。通常，用于制备抗血清的动物为兔、小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠或山羊。动物的选择可以基于操作的简易性、成本或所需的血清量来决定，如本领域技术人员将已知的。应理解的是，还可以通过产生针对目标免疫球蛋白重链和轻链序列的转基因哺乳动物或植物并以可回收的形式由其产生抗体来转基因地制备抗体。就在哺乳动物中的转基因生产而言，抗体可以在山羊、牛或其他哺乳动物的乳汁中产生并从其回收。参见例如第5,827,690号、第5,756,687号、第5,750,172号和第5,741,957号美国专利。
如本领域中还熟知的，具体免疫原组合物的免疫原性可以通过使用免疫应答的非特异性刺激物来提高，所述刺激物被称为佐剂。适合的佐剂包括任何可接受的免疫刺激化合物，如细胞因子、趋化因子、辅因子、毒素、原质团、合成的组合物或编码该佐剂的载体。
可根据实施方案使用的佐剂包括但不限于IL-1、IL-2、IL-4、IL-7、IL-12、-干扰素、GMCSP、BCG、氢氧化铝、MDP化合物如thur-MDP和nor-MDP、CGP(MTP-PE)、脂质A、聚IC、montaninde、GMCSF和单磷酰脂质A(MPL)。还考虑包含在2％鲨烯/吐温80乳液中的从细菌提取的三种组分MPL、海藻糖二霉菌酸酯(TDM)和细胞壁骨架(CWS)的RIBI。甚至可以使用MHC抗原。示例性佐剂可以包括完全弗氏佐剂(包含杀死的结核分支杆菌的免疫应答的非特异性刺激物)、不完全弗氏佐剂和/或氢氧化铝佐剂。
除了佐剂以外，共同给予已显示上调T细胞免疫或下调抑制细胞活性的生物反应调节剂(BRM)可能是理想的。这样的BRM包括但不限于西咪替丁(CIM；1200mg/d)(Smith/Kline，PA)；低剂量的环磷酰胺(CYP；300mg/m2)(Johnson/Mead，NJ)；细胞因子，如-干扰素、IL-2或IL-12或编码涉及免疫辅助功能的蛋白的基因，如B-7。
用于产生抗体的免疫原组合物的量基于免疫原的性质以及用于免疫的动物变化。各种途径可以用于给予免疫原，包括但不限于皮下、肌内、皮内、表皮内、静脉内、瘤内和腹膜内。可以通过在免疫后的不同点对免疫的动物采血样来监测抗体的产生。
Mab可以通过使用熟知技术容易地制备，如在美国专利4,196,265中例示的那些，将其通过引用并入本文。通常，该技术涉及使用选择的免疫原组合物免疫适合的动物，所述免疫原组合物例如纯化的或部分纯化的蛋白、多肽、肽或结构域，其为野生型或突变体组合物。以有效刺激产生抗体的细胞的方式给予免疫组合物。
生成单克隆抗体(MAb)的方法一般按照与制备多克隆抗体相同的路线开始。在一些实施方案中，啮齿动物如小鼠和大鼠用于生成单克隆抗体。在一些实施方案中，兔、绵羊或青蛙细胞用于生成单克隆抗体。大鼠的用途是熟知的并且可以提供某些优点(Goding,1986,pp.60 61)。常规地使用小鼠(例如，BALB/c小鼠)并且一般得到高百分比的稳定融合。
如果需要，可以使用过滤、离心和各种色谱方法如HPLC或亲和色谱进一步纯化通过任一手段产生的MAb。单克隆抗体的片段可以获自通过包括使用酶，如胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化的方法，和/或通过化学还原切割二硫键那样制备的单克隆抗体。供选择地，单克隆抗体片段可以使用自动肽合成仪合成。
还考虑分子克隆方法可以用于产生单克隆抗体。在一个实施方案中，组合免疫球蛋白噬菌体文库由从免疫的动物的脾脏分离的RNA制备，并且使用表达抗原的细胞和对照细胞，通过筛选来选择表达适合抗体的噬菌体。该方法相对于常规杂交瘤技术的优点在于可以在单次循环中产生和筛选多至约104倍的抗体，并且新特异性由H和L链组合产生，这进一步提高了发现合适的抗体的机会。
另一个实施方案涉及制备抗体，例如，见于第6,091,001号美国专利，其描述了使用公开的Cre-介导的位点特异性重组，由包括修饰的免疫球蛋白基因座的细胞的基因组序列产生表达抗体的细胞的方法。所述方法涉及首先使用包含lox位点和靶向序列的同源靶向载体转染产生抗体的细胞，所述靶向序列与待转化为修饰区域的邻近基因组序列的免疫球蛋白基因座的区域的第一DNA序列同源，因此第一lox位点通过位点特异性同源重组插入基因组序列中。然后使用包含第二lox位点的lox靶向载体转染细胞，所述第二lox位点适于Cre介导的与整合lox位点和修饰序列的重组，以将免疫球蛋白基因座的区域转化为修饰区域。该转化通过在体内使lox位点与Cre相互作用来进行，以使修饰序列通过Cre介导的lox位点的位点特异性重组插入基因组序列中。
供选择地，单克隆抗体片段可以使用自动肽合成仪合成或通过在大肠杆菌中表达全长基因或基因片段来合成。
还考虑的是可以针对与特异性、亲和力、半衰期、免疫原性、结合缔合、结合解离有关的特性或与预期治疗或防护作用有关的总体功能特性进一步筛选或优化单克隆抗体。因此，考虑单克隆抗体可以在本文提供的单克隆抗体或人源化抗体的1、2、3、4、5或6个CDR的氨基酸序列中具有1、2、3、4、5、6个或更多个变化。考虑在抗体的轻链或重链可变区的VJ或VDJ区域的CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5或CDR6的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10位上的氨基酸可以具有插入、缺失或使用保守或非保守氨基酸的替换。以上公开了可以被取代或构成替换的那些氨基酸。
在一些实施方案中，全抗体的片段可以发挥结合抗原的功能。结合片段的实例为(i)由VL、VH、CL和CH1结构域构成的Fab片段；(ii)由VH和CH1结构域构成的Fd片段；(iii)由单一抗体的VL和VH结构域构成的Fv片段；(iv)由VH或VL结构域构成的dAb片段(Ward,1989；McCafferty等人,1990；Holt等人,2003)；(v)分离的CDR区域；(vi)F(ab')2片段，包含两个连接的Fab片段的二价片段；(vii)单链Fv分子(scFv)，其中VH结构域和VL结构域通过肽接头连接，其能使两个结构域缔合以形成抗原结合位点(Bird等人,1988；Huston等人,1988)；(viii)双特异性单链Fv二聚体(PCT/US92/09965)和(ix)“双功能抗体”，通过基因融合构建的多价或多特异性片段(WO94/13804；Holliger等人,1993)。Fv、scFv或双功能抗体分子可以通过加入连接VH和VL结构域的二硫桥来稳定(Reiter等人,1996)。还可以制备包含结合到CH3结构域的scFv的微抗体(Hu等人1996)。该段中的引文均通过引用并入。
抗体还包括双特异性抗体。双特异性或双功能抗体形成第二代单克隆抗体，其中两个不同的可变区组合在相同的分子中(Holliger&Winter,1999)。其用途已在诊断领域和治疗领域由其募集新效应子功能或靶向肿瘤细胞表面上的几种分子的能力得到证实。当要使用双特异性抗体时，这些可以是常规的双特异性抗体，其可以以各种方式制造(Holliger等人,1993)，例如以化学方法制备或由杂交的杂交瘤制备，或可以是任意上述双特异性抗体片段。这些抗体可以通过化学方法获得(Glennie等人,1987；Repp等人,1995)或通过体细胞方法获得(Staerz&Bevan,1986)，但同样地通过基因工程技术获得，其使得异源二聚化发生，从而促进寻找到的抗体的纯化过程(Merchand等人，1998)。双特异性抗体的实例包括BiTETM技术的那些，其中可以使用具有不同特异性的两种抗体的结合结构域并直接通过柔性短肽连接。这使两个抗体在短的单一多肽链上组合。可以仅使用可变结构域，在没有Fc区域的情况下构建双功能抗体和scFv，潜在地降低抗独特型反应的作用。在该段中的引文均通过引用并入。
双特异性抗体可以构建为全IgG、双特异性Fab′2、Fab′PEG、双功能抗体或另外为双特异性scFv。此外，两个双特异性抗体可以使用本领域已知的常规方法连接以形成四价抗体。
双特异性双功能抗体与双特异性全抗体不同，由于其可以容易地构建并且在大肠杆菌中表达，因此还可能是特别有用的。具有适合的结合特异性的双功能抗体(和许多其他多肽如抗体片段)可以使用噬菌体展示容易地从文库中选择(WO94/13804)。如果双功能抗体的一条臂保持恒定，例如，具有针对DC受体的特异性，那么可以形成文库，其中另一条臂变化并选择具有合适的特异性的抗体。双特异性全抗体可以通过供选择的工程方法制备，如Ridgeway等人,1996中所述，在此将其通过引用并入。
抗体和多肽缀合物
实施方案提供了针对DC受体的抗体和抗体样分子、连接于至少一种药剂以形成抗体缀合物或有效负载(payload)的多肽和肽。为了提高抗体分子作为诊断剂或治疗剂的功效，通常连接或共价结合或复合至少一种希望的分子或部分。这样的分子或部分可以是但不限于至少一种效应分子或报告分子。效应分子包括具有期望活性的分子，例如细胞毒活性或免疫刺激活性。已连接到抗体的效应分子的非限定性实例包括佐剂、毒素、治疗酶、抗生素、放射标记的核苷酸等。相比之下，报告分子被定义为可以使用分析方法检测的任何部分。已缀合于抗体的报告分子的非限定性实例包括酶、放射性标记、半抗原、荧光标记、磷光分子、化学发光分子、发色团、发光分子、光亲和分子、有色粒子或配体，如生物素。以下美国专利申请通过引用并入，其引用程度为它们公开了抗体、抗体部分、抗原、接头、这样的抗体的具体序列、抗原和接头、佐剂、融合蛋白或治疗性组合物的其他组分、宿主细胞或组合物、树突细胞的来源和树突细胞的培养/活化，和树突细胞的衍生物和来自树突细胞的衍生物，和涉及这样的融合蛋白的使用方法：12/024,036；12/024,897；12/025,010；12/026,095；12/036,138；12/036,158；12/504,463；12/717,778；12/717,789；12/717,804；12/718,365；12/882,052；12/882,052；13/100,684；13/208,993；13/269,951；13/282,112；13/415,564；13/424,582；13/430,206；13/594,397；13/596,526；WO2010/104749；13/465,371；13/397,932；PCT/US13/72217和PCT/US2013/05839。
抗体缀合物的某些实例是其中抗体连接于可检测的标记的那些缀合物。“可检测的标记”是由于其特异性功能特性和/或化学特征而可以被检测的化合物和/或元素，其使用能使其所连接的抗体被检测到和/或需要时被进一步定量。
抗体缀合物包括主要意图用于体外的那些，其中所述抗体连接于在与发色底物接触时将产生有色产物的第二结合配体和/或酶(酶标签)。适合的酶的实例包括但不限于，脲酶、碱性磷酸酶、(辣根)过氧化氢酶或葡萄糖氧化酶。优选的第二结合配体为生物素和/或亲和素和链霉亲和素化合物。这些标记的使用对本领域技术人员是熟知的并描述于例如，美国专利3,817,837、3,850,752、3,939,350、3,996,345、4,277,437、4,275,149和4,366,241；各自通过引用并入本文。
含有叠氮基团的分子也可以用于通过由低密度紫外线产生的反应性氮烯中间体形成与蛋白的共价键(Potter&Haley,1983)。具体地，嘌呤核苷酸的2-和8-叠氮类似物已被用作定点光探针，以确定粗细胞提取物中的核苷酸结合蛋白(Owens&Haley,1987；Atherton等人,1985)。2-和8-叠氮核苷酸已被用于定位纯化蛋白的核苷酸结合结构域(Khatoon等人,1989；King等人,1989；和Dholakia等人,1989)并且可以用作抗体结合剂。
本领域已知几种用于将抗体连接或缀合于其缀合部分的方法。一些连接方法涉及金属螯合复合物的使用，其采用例如连接于抗体的有机螯合剂，如二亚乙基三胺五乙酸酐(DTPA)；亚乙基三胺四乙酸；N-氯-对甲苯磺酰胺；和/或四氯-3-6-二苯基甘脲-3(第4,472,509号和第4,938,948号美国专利，各自通过引用并入本文)。单克隆抗体还可以与酶在偶联剂如戊二醛或高碘酸盐的存在下反应。具有荧光素标记物的缀合物在这些偶联剂的存在下制备或通过与异硫氰酸酯的反应制备。在第4,938,948号美国专利中(通过引用并入本文)，乳腺肿瘤的成像使用单克隆抗体实现，并且可检测的成像部分使用接头如对羟基苯甲亚胺酸甲酯或3-(4-羟基苯基)丙酸-N-琥珀酰亚胺酯结合于抗体。
在一些实施方案中，考虑使用不改变抗体组合位点的反应条件，通过在免疫球蛋白的Fc区域中选择性引入巯基的免疫球蛋白衍生化。公开了根据该方法制备的抗体缀合物显示改善的寿命、特异性和灵敏度(第5,196,066号美国专利，通过引用并入本文)。也已在文献中公开了效应分子或报告分子的位点特异性连接，其中所述报告或效应分子缀合到Fc区域中的糖残基(O'Shannessy等人,1987，通过引用并入本文)。已报导该方法产生在诊断和治疗上有希望的抗体，其目前在临床评价中。
2.树突细胞特异性抗体
在某些方面，用于将HPV抗原靶向树突细胞的抗体为树突细胞特异性抗体，并且结合树突细胞受体或由树突细胞表达的受体。一些可以用于该目的的抗体在本领域中是已知的。
在一些实施方案中，使用抗DCIR抗体将HPV抗原靶向树突细胞。一个实例包括抗树突细胞免疫受体单克隆抗体缀合物，其中所述缀合物包含负载的或化学偶联到抗体的抗原肽。这样的抗体描述于第61/332,465号美国申请中，通过引用并入本文。
在其他实施方案中，使用抗-CD40抗体将HPV抗原靶向树突细胞。用于表达、分泌抗-CD40抗体和使用抗-CD40抗体作为具有一个连接的抗原肽的疫苗和抗原递送载体的组合物和方法描述于WO 2010/104761；公开的所有方法通过引用并入本文。在一些实施方案中，抗-CD40抗体包括来自单克隆抗体12E12、11B6或12B4的重链和轻链可变区。在其他实施方案中，抗-CD40抗体包括来自单克隆抗体12E12、11B6或12B4的重链和轻链CDR。
在某些方面，使用抗-LOX-1抗体将HPV抗原靶向树突细胞。这样的抗体的一个实例可以用于靶向免疫细胞上的LOX-1受体并提高通过表达LOX-1的抗原呈递细胞呈递抗原的效果。这样的LOX-1抗体的实例描述于WO 2008/103953，其内容通过引用并入本文。
在其他方面，使用抗-CLEC-6抗体将HPV抗原靶向树突细胞。这样的抗体的一个实例包括用于提高通过表达CLEC-6的抗原呈递细胞呈递抗原的效果的抗-CLEC-6抗体。这样的抗体描述于WO 2008/103947，其方法和内容通过引用并入本文。
在再另一个实施方案中，使用抗-Dectin-1抗体将HPV抗原靶向树突细胞。提高通过表达Dectin-1的抗原呈递细胞呈递抗原的效果的抗-Dectin-1抗体描述于WO 2008/118587，其内容通过引用并入本文。
在某些方面，肽接头用于连接树突细胞特异性抗体和待呈递的HPV抗原。肽接头可以掺入糖基化位点或引入二级结构。另外，这些接头提高了融合蛋白的表达效率或稳定性，并且因此提高了抗原呈递到树突细胞的效率。这样的接头可以包括：SSVSPTTSVHPTPTSVPPTPTKSSP(SEQ ID NO:6)、PTSTPADSSTITPTATPTATPTIKG(SEQ ID NO:29)、TVTPTATATPSAIVTTITPTATTKP(SEQ ID NO:10)、QTPTNTISVTPTNNSTPTNNSNPKPNP(SEQID NO:5)或TNGSITVAATAPTVTPTVNATPSAA(SEQ ID NO:31)。这些实例和其他讨论于WO2010/104747，将其内容通过引用并入本文。
在其他实施方案中，免疫佐剂直接融合到树突细胞特异性抗体以提高疫苗的功效。在某些方面，免疫佐剂可以是toll样受体(TLR)激动剂。TLR激动剂包括来自肠道沙门氏菌(Salmonella enterica)或霍乱弧菌(Vibrio cholerae)的鞭毛蛋白。TLR激动剂可以对某些TLR类型(即，TLR2、TLR5、TLR7或TLR9激动剂)具有特异性，并且可以以任何组合或作为任何变型存在。这样的免疫佐剂的实例描述于第13/208,993号、第13/415,564号美国申请和WO 2012/021834中，将其所有的内容通过引用并入本文。通过引用将美国公开专利2012/0039,916和2012/023,102并入，引入程度为其公开了不同的TLR激动剂。
在一些实施方案中，包括树突细胞抗体和HPV抗原的组合物和融合蛋白用于治疗HPV相关疾病或HPV相关病理。在一些实施方案中，HPV相关疾病为发育不良、良性肿瘤、癌前肿瘤或癌症(恶性肿瘤)。在一些实施方案中，被发育不良、良性肿瘤、癌前肿瘤或癌症影响的组织或器官为宫颈、外阴、阴道、阴茎、肛门、口咽、头颈、咽喉或肺。在一些具体的实施方案中，HPV相关疾病或HPV相关病理为宫颈上皮内瘤变(CIN)、外阴上皮内瘤变(VIN)、阴茎上皮内瘤变(PIN)、和/或肛门上皮内瘤变(AIN)。在再另一个实施方案中，包括树突细胞抗体和HPV抗原的组合物和融合蛋白用于治疗HPV相关的寻常疣、跖疣、扁平疣、肛门生殖器疣、肛门病变、生殖器癌、疣状表皮发育不良、局部上皮增生(口腔)、口腔乳头状瘤、口咽癌、疣状囊肿或喉乳头状瘤。
III.治疗方法
如上所述，组合物和使用这些组合物的方法可以治疗患有、疑似患有或具有患上与HPV相关的感染或相关疾病的风险的受试者(例如，预防HPV感染或HPV相关疾病或引发对HPV或HPV相关疾病的强力免疫应答或增强对HPV或HPV相关疾病的免疫应答)。
如本文所使用的，短语“免疫应答(immune response)”或与其等同的“免疫性应答(immunological response)”是指在受体患者中针对本发明的蛋白、肽或多肽的体液应答(抗体介导的)、细胞应答(由抗原特异性T细胞或其分泌产物介导的)或体液和细胞应答两者。治疗(treatment)或治疗(therapy)可以是通过给予免疫原诱导的主动免疫应答或通过给予融合蛋白组合物、包含抗体/抗原融合蛋白的免疫原性组合物或蛋白组合物、包含抗体/抗原融合蛋白的材料或敏化的T细胞实现的被动治疗。
出于本说明书和所附权利要求的目的，术语“表位”和“抗原决定子”可互换使用以指代B细胞和/或T细胞应答或识别的抗原上的位点。B细胞表位可由连续氨基酸或通过蛋白的三级折叠而靠近的非连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位通常当暴露于变性溶剂时保留，而通过三级折叠而形成的表位当用变性溶剂处理时通常失去。在独特的空间构象中，表位通常包括至少3个和更多个，通常至少5个或8-10个氨基酸。确定表位的空间构象的方法包括在表位定位方案(1996)中描述的那些方法。对于CD8细胞，T细胞识别约9个氨基酸的连续表位，对于CD4细胞，识别13-15个氨基酸的连续表位。识别表位的T细胞可通过测量抗原依赖性增殖的体外分析确定，如通过在应答表位时通过敏化的T细胞掺入3H-胸腺嘧啶(Bruke等人，1994)、通过抗原依赖性杀伤(细胞毒T淋巴细胞分析，Tigges等人，1996，通过引用并入)或通过细胞因子分泌确定的。
细胞介导的免疫应答的存在可以通过增殖分析(CD4(+)T细胞)或CTL(细胞毒T淋巴细胞)分析确定。体液应答和细胞应答对免疫原的保护或治疗作用的相对贡献可以通过从免疫的同系动物分别分离IgG和T细胞，并且测量在第二受试者中的保护或治疗作用来区分。如本文和权利要求书中所使用的，术语“抗体”或“免疫球蛋白”可互换使用。
任选地，抗体或优选地抗体的免疫部分，可以化学缀合于与其他蛋白的融合蛋白或表达为与其他蛋白的融合蛋白。出于该说明书和所附权利要求书的目的，所有这样的融合蛋白均包括在抗体或抗体的免疫部分的定义中。
在一个实施方案中，方法包括治疗由HPV病原体引起或疑似由HPV病原体引起的疾病或病症。在某些方面，实施方案包括HPV感染，例如从HPV阳性的个体获得的感染的治疗方法。在一些实施方案中，治疗在HPV抗原的存在下给予。此外，在一些实例中，治疗包括给予常用于对抗病毒感染的其他药剂。
治疗组合物以与剂型制剂相容的方式，并且以治疗有效的量给予。待给予的量取决于待治疗的受试者。需要给予的活性成分的精确的量取决于从业人员的判断。用于最初给予和加强的适合的方案也是可变的，但以初始给予接着随后给予作为典型。
应用方式可以差别很大。给予多肽治疗剂的任何常规方法是适用的。认为这些包括在固体生理上可接受的基质上或在生理上可接受的分散体中的口服应用，通过注射经胃肠道外给予等。组合物的剂量将取决于给予途径并根据受试者的尺寸和健康状况变化。
在某些情况下，将希望多次给予组合物，例如，2、3、4、5、6或更多次给予。可以在1、2、3、4、5、6、7、8至5、6、7、8、9、10、11、12周的间隔下给予，包括其间的所有范围。
联合治疗
所述组合物和相关方法，特别是将结合DC受体并递送HPV抗原或多个抗原或肽或多个肽的抗体给予患者/受试者的组合物和相关方法，还可以与传统的抗病毒治疗或抗癌治疗或药物联合使用。这些包括，但不限于进入抑制剂、CCR5受体拮抗剂、核苷逆转录酶抑制剂、核苷酸逆转录酶抑制剂、非核苷逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、整合酶抑制剂和成熟抑制剂。抗癌治疗包括但不限于化学治疗、放射治疗或辐射治疗。
所述组合物和相关方法，特别是将结合DC受体并递送HPV抗原或多个抗原或肽或多个肽的抗体给予患者/受试者的组合物和相关方法，还可以与一种或多种抗癌药物的给予联合使用，这些药物包括但不限于乙酸阿比特龙酯、Abitrexate(甲氨喋呤)、Abraxane(紫杉醇白蛋白稳定纳米颗粒制剂)、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、AC-T、Adcetris(BrentuximabVedotin)、ADE、ado-曲妥珠单抗Emtansine、亚德里亚霉素(盐酸阿霉素)、Adrucil(氟尿嘧啶)、马来酸阿法替尼、Afinitor(依维莫斯)、艾达乐(咪喹莫特)、阿地白介素、阿仑单抗、力比泰(培美曲塞二钠)、Aloxi(盐酸帕洛诺司琼)、Ambochlorin(苯丁酸氮芥)、Amboclorin(苯丁酸氮芥)、氨基乙酰丙酸、阿那曲唑、阿瑞吡坦、阿可达(帕米磷酸二钠)、瑞宁得(阿那曲唑)、阿诺新(依西美坦)、Arranon(奈拉滨)、三氧化二砷、Arzerra(奥法木单抗)、门冬酰胺酶菊欧文氏菌、阿瓦斯汀(贝伐珠单抗)、阿西替尼、阿扎胞苷、BEACOPP、盐酸苯达莫司汀、BEP、贝伐珠单抗、贝沙罗汀、百克沙(托西莫单抗和I 131碘托西莫单抗)、博来霉素、硼替佐米、Bosulif(波舒替尼)、波舒替尼、Brentuximab Vedotin、卡巴他赛、卡博替尼-S-苹果酸盐、CAF、坎帕斯(阿仑单抗)、开普拓(盐酸依立替康)、卡培他滨、CAPOX、卡铂、卡铂-紫杉醇、卡非佐米、CeeNU(环己亚硝脲)、Cerubidine(盐酸柔红霉素)、Cervarix(包括HPV 16和18型的重组L1蛋白的重组HPV二价疫苗)、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、苯丁酸氮芥-泼尼松、CHOP、顺铂、Clafen(环磷酰胺)、克罗拉滨、Clofarex(克罗拉滨)、Clolar(克罗拉滨)、CMF、Cometriq(卡博替尼-S-苹果酸盐)、COPP、COPP-ABV、Cosmegen(放线菌素D)、克唑替尼、CVP、环磷酰胺、Cyfos(异环磷酰胺)、阿糖胞苷、阿糖胞苷、脂质体、赛德萨-U(阿糖胞苷)、Cytoxan(环磷酰胺)、达拉菲尼、氮烯唑胺、达珂(地西他滨)、放线菌素D、达沙替尼、盐酸柔红霉素、地西他滨、地加瑞克、地尼白介素、狄诺塞麦、DepoCyt(阿糖胞苷脂质体)、DepoFoam(阿糖胞苷脂质体)、盐酸右雷佐生、多西紫杉醇、Doxil(盐酸阿霉素脂质体)、盐酸阿霉素、盐酸阿霉素脂质体、Dox-SL(盐酸阿霉素脂质体)、DTIC-Dome(氮烯唑胺)、Efudex(氟尿嘧啶)、Elitek(拉布立酶)、Ellence(盐酸表柔比星)、Eloxatin(奥沙利铂)、艾曲波帕乙醇胺、Emend(阿瑞吡坦)、恩杂鲁胺、盐酸表柔比星、EPOCH、Erbitux(西妥昔单抗)、甲磺酸艾瑞布林、Erivedge(维莫德吉)、盐酸厄洛替尼、Erwinaze(门冬酰胺酶菊欧文氏菌)、Etopophos(磷酸依托泊苷)、依托泊苷、磷酸依托泊苷、Evacet(盐酸阿霉素脂质体)、依维莫斯、Evista(盐酸雷洛昔芬)、依西美坦、Fareston(托瑞米芬)、Faslodex(氟维司群)、FEC、Femara(来曲唑)、非格司亭、Fludara(磷酸氟达拉滨)、磷酸氟达拉滨、Fluoroplex(氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶、Folex(甲氨喋呤)、Folex PFS(甲氨喋呤)、FOLFIRI、FOLFIRI-贝伐珠单抗、FOLFIRI-西妥昔单抗、FOLFIRINOX、FOLFOX、Folotyn(普拉曲沙)、FU-LV、氟维司群、Gardasil(包括HPV6、11、16和18型的重组L1蛋白的重组HPV四价疫苗)、Gazyva(Obinutuzumab)、吉非替尼、盐酸吉西他滨、吉西他滨-顺铂、吉西他滨-奥沙利铂、吉妥珠单抗奥唑米星、Gemzar(盐酸吉西他滨)、阿法替尼(二马来酸阿法替尼)、Gleevec(甲磺酸伊马替尼)、谷卡匹酶、醋酸戈舍瑞林、Halaven(甲磺酸艾瑞布林)、Herceptin(曲妥单抗)、HPV二价疫苗(重组)、HPV四价疫苗(重组)、Hycamtin(盐酸拓扑替康)、替伊莫单抗、依鲁替尼、ICE、Iclusig(盐酸泊那替尼)、Ifex(异环磷酰胺)、异环磷酰胺、Ifosfamidum(异环磷酰胺)、甲磺酸伊马替尼、Imbruvica(依鲁替尼)、咪喹莫特、Inlyta(阿西替尼)、内含子A(重组干扰素α-2b)、131碘托西莫单抗和托西莫单抗、伊匹单抗、Iressa(吉非替尼)、盐酸依立替康、Istodax(罗米地辛)、伊沙匹隆、Ixempra(伊沙匹隆)、Jakafi(磷酸鲁索替尼)、Jevtana(卡巴他赛)、Kadcyla(Ado-曲妥珠单抗Emtansine)、Keoxifene(盐酸雷洛昔芬)、Kepivance(重组角化细胞生长因子)、Kyprolis(卡非佐米)、二甲苯磺酸拉帕替尼、来那度胺、来曲唑、甲酰四氢叶酸钙盐、Leukeran(苯丁酸氮芥)、亮氨酰脯氨酸醋酸盐、Levulan(氨基乙酰丙酸)、Linfolizin(苯丁酸氮芥)、LipoDox(盐酸阿霉素脂质体)、阿糖胞苷脂质体、环己亚硝脲、Lupron(亮氨酰脯氨酸醋酸盐)、LupronDepot(亮氨酰脯氨酸醋酸盐)、LupronDepot-Ped(亮氨酰脯氨酸醋酸盐)、LupronDepot-3Month(亮氨酰脯氨酸醋酸盐)、LupronDepot-4Month(亮氨酰脯氨酸醋酸盐)、Marqibo(硫酸长春新碱脂质体)、Matulane(盐酸异丙胺酰苄肼)、氮芥盐酸盐、甲地孕酮(醋酸甲地孕酮)、醋酸甲地孕酮、Mekinist(曲美替尼)、巯嘌呤、巯乙磺酸钠、Mesnex(巯乙磺酸钠)、Methazolastone(替莫唑胺)、甲氨喋呤、甲氨喋呤LPF(甲氨喋呤)、Mexate(甲氨喋呤)、Mexate-AQ(甲氨喋呤)、丝裂霉素C、Mitozytrex(丝裂霉素C)、MOPP、Mozobil(普乐沙福)、Mustargen(氮芥盐酸盐)、Mutamycin(丝裂霉素C)、Mylosar(阿扎胞苷)、Mylotarg(吉妥单抗)、纳米颗粒紫杉醇(紫杉醇白蛋白稳定纳米颗粒制剂)、Navelbine(酒石酸长春瑞滨)、奈拉滨、Neosar(环磷酰胺)、Neupogen(非格司亭)、Nexavar(甲苯磺酸索拉非尼)、尼洛替尼、Nolvadex(枸橼酸他莫西芬)、Nplate(罗米司亭)、奥滨尤妥珠单抗、奥法木单抗、高三尖杉酯碱、Oncaspar(培加帕酶)、Ontak(地尼白介素)、OEPA、OPPA、奥沙利铂、紫杉醇、紫杉醇白蛋白稳定纳米颗粒制剂、重组角化细胞生长因子、盐酸帕洛诺司琼、帕米膦酸二钠、帕尼单抗、Paraplat(卡铂)、Paraplatin(卡铂)、帕唑帕尼盐酸盐、培加帕酶、聚乙二醇干扰素α-2b、PEG-内含子(Peginterferon e-2b)、培美曲塞二钠、Perjeta(帕妥珠单抗)、帕妥珠单抗、Platinol(顺铂)、Platinol-AQ(顺铂)、普乐沙福、泊马度胺、Pomalyst(泊马度胺)、盐酸泊那替尼、普拉曲沙、泼尼松、盐酸异丙胺酰苄肼、Proleukin(阿地白介素)、Prolia(狄诺塞麦)、Promacta(艾曲波帕乙醇胺)、Provenge(Sipuleucel-T)、Purinethol(巯基嘌呤)、二氯化镭223、盐酸雷洛昔芬、拉布立酶、R-CHOP、R-CVP、重组HPV二价疫苗、重组HPV四价疫苗、重组干扰素α-2b、瑞戈非尼、Revlimid(来那度胺)、Rheumatrex(甲氨喋呤)、Rituxan(利妥昔单抗)、利妥昔单抗、罗米地辛、罗米司亭、Rubidomycin(盐酸柔红霉素)、磷酸鲁索替尼、Sclerosol Intrapleural Aerosol(滑石)、Sipuleucel-T、甲苯磺酸索拉非尼、Sprycel(达沙替尼)、STANFORD V、无菌滑石粉末(滑石)、Steritalc(滑石)、Stivarga(瑞戈非尼)、舒尼替尼苹果酸盐、Sutent(舒尼替尼苹果酸盐)、Sylatron(聚乙二醇干扰素α-2b)、Synovir(沙利度胺)、Synribo(高三尖杉酯碱)、TAC、Tafinlar(达拉非尼)、滑石、枸橼酸他莫西芬、Tarabine PFS(阿糖胞苷)、Tarceva(盐酸厄洛替尼)、Targretin(贝沙罗汀)、Tasigna(尼洛替尼)、Taxol(紫杉醇)、Taxotere(多西紫杉醇)、Temodar(替莫唑胺)、替莫唑胺、替西罗莫司、沙利度胺、Thalomid(沙利度胺)、Toposar(依托泊苷)、盐酸拓扑替康、托瑞米芬、Torisel(替西罗莫司)、托西莫单抗和I 131碘托西莫单抗、Totect(盐酸右雷佐生)、曲美替尼、曲妥单抗、Treanda(盐酸苯达莫司汀)、Trisenox(三氧化二砷)、Tykerb(二甲苯磺酸拉帕替尼)、凡德他尼、VAMP、Vectibix(帕尼单抗)、VeIP、Velban(硫酸长春碱)、Velcade(硼替佐米)、Velsar(硫酸长春碱)、维罗非尼、VePesid(依托泊苷)、Viadur(亮氨酰脯氨酸醋酸盐)、Vidaza(阿扎胞苷)、硫酸长春碱、Vincasar PFS(硫酸长春新碱)、硫酸长春新碱、硫酸长春新碱脂质体、酒石酸长春瑞滨、维莫德吉、Voraxaze(谷卡匹酶)、伏立诺他、Votrient(帕唑帕尼盐酸盐)、Wellcovorin(甲酰四氢叶酸钙盐)、Xalkori(克唑替尼)、Xeloda(卡培他滨)、XELOX、Xgeva(狄诺塞麦)、Xofigo(二氯化镭223)、Xtandi(恩杂鲁胺)、Yervoy(伊匹单抗)、Zaltrap(Ziv-阿柏西普)、Zelboraf(维罗非尼)、Zevalin(替伊莫单抗)、Zinecard(盐酸右雷佐生)、Ziv-阿柏西普、诺雷德(醋酸戈舍瑞林)、唑来膦酸、Zolinza(伏立诺他)、择泰(唑来膦酸)和Zytiga(乙酸阿比特龙酯)。
所述组合物和相关方法，特别是将结合DC受体并递送HPV抗原或多个抗原或肽或多个肽的抗体给予患者/受试者，还可以与给予放射治疗联合使用，所述放射治疗包括但不限于X-射线、伽马射线和带电粒子。该放射可以通过身体外的仪器递送(外束放射治疗)或其可以来自置于体内临近癌症细胞处的放射性物质(内部放射治疗或短距离放射治疗)。内部放射治疗可以是全身性的(例如放射性碘)。外束放射治疗可以包括但不限于三维适形放疗(3D-CRT)、调强放射治疗(IMRT)、图像引导放射治疗(IGRT)、螺旋断层放疗、立体定向放射外科手术(SRS)、体部立体定向放射治疗(SBRT)、质子治疗或其他带电粒子束(如电子束)。内部放射治疗或短距离治疗可以包括间质内短距离治疗，其使用置于肿瘤组织内的放射源并且可以用于递送高于外束放射治疗的剂量，而对正常的组织产生较少的损害。短距离放射治疗可以以低剂量率或高剂量率治疗给予。在另外的实施方案中，短距离放射治疗可以是永久的或临时的。放射治疗可以包括全身性放射治疗。全身性放射治疗可以包括吞咽或注射放射性物质，其包括但不限于任何单剂量、多剂量或联合剂量的放射性碘(131I)、替伊莫单抗131托西莫单抗钐-153-来昔决南和氯化锶-89或任何结合到放射性物质的单克隆。根据不同的实施方案，放射的剂量可以依据待治疗的具体疾病、病症或癌症调整。在一些实施方案中，单剂量或总剂量可以为1-10戈瑞(Gy)、10-20Gy、20-40Gy、40-60Gy或60-80Gy或其中可推出的任何数值或范围。在一些实施方案中，放射治疗或剂量可以是分级的。在一个实施方案中，总剂量可以是每天或每周分级的。在某些实施方案中，每日分级剂量可以为1.8-2Gy。考虑可以将总剂量分级成0.1Gy至10Gy的每日或每周剂量。
在一个方面，考虑所述治疗与抗病毒或抗癌治疗联合使用。供选择地，所述治疗可以在其他药剂治疗之前或之后，间隔数分钟至数周。在其他药剂和/或蛋白或多核苷酸分别给予的实施方案中，一般将确保有效的时期不在每次递送的时间之间终止，以使治疗组合物仍然能够对受试者发挥有利的组合作用。在这样的情况下，考虑可以各自在约12-24h内给予两种形式，更优选地各自在约6-12h内给予两种形式。然而，在一些情况下，可以期望显著延长给予的时期，其中在各自的给予之间中断数天(2、3、4、5、6或7)至数周(1、2、3、4、5、6、7或8)。
在再另一个方面，疫苗可以作为初免/加强免疫策略的部分给予。在本文描述的任何实施方案中，初免疫苗剂量可以使用融合到HPV抗原的DC特异性抗体给予。加强疫苗可以通过使用相同类型或来自不同类型的疫苗的第二疫苗给予。另外的HPV疫苗的实例包括GardasilTM(包括HPV 6、11、16和18型的重组L1蛋白的重组HPV四价疫苗)或CervarixTM(包括HPV 16和18型的重组L1蛋白的重组HPV二价疫苗)。这样的不同的疫苗的另外的实例包括裸DNA疫苗或重组病毒。第二疫苗可以包括除了在第一疫苗中使用的E6或E7抗原以外的另外的HPV抗原。还考虑第二疫苗可以包括HPV蛋白，例如E6或E7蛋白加上直接连接或独立给予的佐剂。
可以采用各种治疗的组合，例如抗病毒或抗癌为“A”，以及包括结合DC受体并递送HPV抗原或肽或其共有肽(consensus peptide)的抗体的抗体疫苗为“B”：
将抗体组合物给予患者/受试者将遵照给予这些化合物的一般方案，考虑组合物的毒性，如果有的话。预期治疗周期将根据需要重复。还考虑各种标准治疗，如水化治疗，可以与描述的治疗组合应用。
通用药物组合物
在一些实施方案中，将药物组合物给予受试者。不同的方面可以涉及给予受试者有效量的组合物。在一些实施方案中，结合DC受体并递送HPV抗原或肽或其共有肽的抗体可以给予患者以保护其免受一个或多个HPV类型的感染或治疗一个或多个HPV类型的感染，或保护其免受一种或多种HPV相关的疾病例如癌症或治疗一种或多种HPV相关的疾病例如癌症。供选择地，编码一种或多种这样的抗体或多肽或肽的表达载体可以作为预防性治疗给予患者。另外地，这样的组合物可以与抗生素、抗病毒或抗癌剂组合给予。这样的组合物一般将溶于或分散在药学上可接受的载体或含水介质中。
术语“药学上可接受的”或“药理学上可接受的”是指当给予动物或人时不产生不利的、过敏性或其他不良反应的分子实体和组合物。如本文所使用的，“药学上可接受的载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌和抗真菌剂、等张剂和吸收延迟剂等。用于药物活性物质的这样的介质和药剂的用途在本领域中是熟知的。除了任何常规介质或药剂与活性成分不相容的情况以外，考虑其用于免疫原性和治疗组合物中。补充的活性成分，如其他抗感染剂和疫苗，也可以加入组合物中。
活性化合物可以配制成用于肠胃外给予，例如，配制成用于经粘膜、静脉内、肌内、皮下、瘤内或甚至腹膜内途径注射。通常地，这样的组合物可以制备成液体溶液或混悬剂；还可以制备适用于在注射前加入液体以制备溶液或混悬剂的固体形式；并且制剂还可以是乳化的。
适用于可注射用途的药物形式包括无菌水溶液或分散体；包括芝麻油、花生油或含水丙二醇的制剂；和用于即时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。在所有情况下，形式必须是无菌的，并且必须是流动的，到其可以容易地注射的程度。其在制造和储存条件下还应当是稳定的，并且必须针对微生物如细菌和真菌的污染作用进行防腐。
蛋白质组合物可以配制成中性形式或盐形式。药学上可接受的盐，包括(由蛋白的游离氨基形成的)酸加成盐和与以下形成的药学上可接受的盐：无机酸，例如盐酸或磷酸；或有机酸，如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等。由游离羧基形成的盐也可以源自：无机碱，例如，氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁；和有机碱，如异丙胺、三甲胺、组氨酸、普鲁卡因等。
药物组合物可以包含溶剂或分散介质，所述溶剂或分散介质包含例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、其适合的混合物和植物油。适当的流动性可以例如通过使用包衣，如卵磷脂，在分散体的情况下通过维持所需粒径，和通过使用表面活性剂来维持。对微生物的作用的预防可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂来实现，例如，尼泊金、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在许多情况下，将优选包括等张剂，例如，糖或氯化钠。可注射的组合物的延长吸收可以通过在组合物中使用延长吸收剂，例如单硬脂酸铝和明胶来实现。
无菌注射液的制备如下：根据需要在具有以上列举的各种其他成分的适合的溶剂中以所需量加入活性化合物，接着是过滤灭菌或等同的步骤。一般地，分散体的制备如下：将各种灭菌的活性成分加入无菌溶媒中，所述无菌溶媒含有基础分散介质和来自以上列举的那些的所需的其他成分。在用于制备无菌注射液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，其产生活性成分的粉末，加上来自其之前的无菌过滤溶液的任何另外希望的成分。
组合物的给予将通常通过任何常规途径。这包括但不限于口服、经鼻或经颊给予。供选择地，给予可以通过原位、皮内、皮下、肌内、腹膜内、瘤内、鼻内或静脉内注射。在某些实施方案中，疫苗组合物可以吸入(例如，美国专利6,651,655，其具体通过引用并入)。这样的组合物将通常作为药学上可接受的组合物给予，其包括生理上可接受的载体、缓冲液或其他赋形剂。
基于预期目标确定治疗或预防组合物的有效量。术语“单位剂量”或“剂量”是指适合在受试者中使用的物理上离散的单位，每个单位包含预定量的组合物，所述预定量的组合物经计算以产生与其给予，即适合的途径和方案相关的以上讨论的期望的应答。根据治疗次数和单位剂量的待给予的量取决于期望的保护。
组合物的精确的量还取决于从业人员的判断，并且对于每个个体是独特的。影响剂量的因素包括受试者的身体和临床状态，给予途径，预期的治疗目标(症状减轻还是治愈)以及具体组合物的效价、稳定性和毒性。
在配制时，溶液将以与剂型相容的方式且以治疗或预防有效的量给予。制剂容易地以各种剂型给予，如上述的可注射的溶液的类型。
IV.实施例
包括以下实施例以展示本发明的优选的实施方案。本领域技术人员将理解遵照本发明人发现的代表性技术的在实施例中公开的技术在本发明的实施中很好地发挥作用，因此可以视为构成用于其实施的优选方式。然而。本领域技术人员根据本发明应理解，在不背离本发明的精神和范围的情况下，在公开的具体实施方案中可以作出许多变化，并且仍然获得相同或相似的结果。
实施例1—抗-DC受体(DCR)和HPV E6和E6融合蛋白的重组融合蛋白
图1给出了本发明人用于开发产生融合到来自HPV 16和18的E6和E7序列的抗-DC受体抗体的表达构建体的方案。该方案确定了编码来自HPV 16和18的E6和E7的抗原盒的顺序，当融合到H链C-末端时，该抗原盒能有效分泌且完整。仅这四条序列就有64种可能的组合，当插入柔性接头序列时有更多个。本发明人的策略为逐步方法，在具有或不具有在前的柔性接头[8个初始构建体]的情况下，从单独的每种抗原开始，然后选择最有效地表达的那些载体用于添加另外的盒。每个构建和测试的周期进行一周。最终的生产CHO-S细胞系的建立耗费另外的8周，包括扩大到适用于疫苗生产的水平以在人类体外和动物体内进行临床研究。
编码抗体重链的瞬态表达载体在C-末端具有框内Nhe I位点并且将编码Spe I-Not I盒的抗原或柔性接头插入到载体Nhe I和Not I位点之间。在这个连接中，载体Nhe I位点丢失，但是每个盒编码新的C末端框内Nhe I位点。因此，另外的抗原或接头盒可以以反复的方式添加。使用匹配的轻链载体将每个新的构建体瞬态转染到293F细胞中，在72小时将分泌的疫苗通过蛋白A亲和分离并使用SDS.PAGE分析。表达良好的构建体是用于添加新盒的优选载体(图1)。
本发明人使用融合到抗体重链C-末端的HPV 16 E6和E7和HPV 18 E6和E7序列工程化表达构建体。当使用匹配的轻链表达载体共转染到293F细胞中时，具有直接融合到抗树突细胞受体抗体重链C-末端密码子的HPV 16或HPV 18 E6或HPV 16或HPV 18 E7序列的构建体不能分泌任何可检测的疫苗(未示出)。然而，掺入柔性接头序列(Flex v1)的类似载体分泌疫苗(图2，第1和第3道)。此外，将HPV E6添加到Flex v1 HPV E7载体的构建体也分泌疫苗，反之亦然(图2，第2和第4道)。这样的疫苗的成功表达不依赖可变区序列。因此，将Flex v1-HPV E6/E7序列转移至建立的载体，用于稳定表达抗-CD40-Flex v1-HPV 16或18E6-HPV 16E7，抗-朗格汉斯蛋白(Langerin)-Flex v1-HPV 16或18 E6-HPV 16E7和在CHO-S细胞中的对照hIgG4-Flex-v1-HPV 16或18 E6-HPV 16E7。
在健康供体的外周血中，抗-CD40-HPV16.E6/7可以有效结合到DC。外周血单核细胞(PBMC)从健康个体的血液获得。在不同量的抗-CD40-HPV16.E6/7或对照IgG4-HPV16.E6/7蛋白的存在下，将PBMC在冰上孵育15分钟。剧烈洗涤细胞，然后使用抗-E6/7抗体染色以检测细胞表面结合的蛋白。如图3所示，抗-CD40-HPV16.E6/7可以有效地结合到人血DC(CD3-CD19-CD14-HLA-DR+CD11c+)。相反地，IgG4-HPV16.E6/7未结合到相同的DC。在健康供体的外周血中，抗-CD40-HPV 18.E6/7也结合到DC(数据未示出)。
抗-CD40-HPV16.E6/7能够有效激活来自HPV-相关的癌症患者的E6/7-特异性记忆CD4+和CD8+T细胞。接下来使用来自HPV-阳性的头颈癌患者的PBMC评价抗-CD40-HPV16.E6/7的体外免疫原性。使用重组HPV16.E6/7蛋白、抗-CD40-HPV16.E6/7或HPV16.E6/7蛋白的肽池负载患者PBMC。在该实验中，在每种蛋白中施加相同摩尔浓度的E6/7以比较表达E6/7-特异性IFNg的CD4+和CD8+T细胞应答的水平。在体外培养7天后，在布雷菲德菌素A的存在下，使用E6/7肽池再刺激PBMC 5小时。然后针对IFNg表达对细胞染色。图4显示在引发IFNg+CD4+和IFNg+CD8+T细胞应答时，抗-CD40-HPV16.E6/7比HPV16.E6/7更有效。使用抗-CD40-HPV16.E6/7引发的HPV16.E6/7-特异性IFNg+CD4+T细胞应答的水平与通过用作阳性对照的肽池引发的水平相似。因此，由抗-DCR和HPV抗原，包括E6/7组成的我们的新疫苗模型在具有HPV-相关的癌症的患者中激活抗原-特异性细胞免疫应答中很有效。此外，这样的HPV抗原(E6和E7)-特异性CD8+CTL预期在患者中有效抑制肿瘤发展并能够导致肿瘤排斥。
在体内，抗-CD40-HPV16.E6/7能够刺激E6/7-特异性CD4+和CD8+T细胞应答。为了测试抗-CD40-HPV16.E6/7疫苗的体内免疫原性，使用人CD40转基因小鼠。在第0天，使用30ug抗-CD40-HPV16.E6/7加聚IC皮下免疫五只动物，然后使用相同的疫苗加强两次。第二次加强后的第七天，从脾脏纯化CD4+和CD8+T细胞，然后使用HPV16.E6/7肽簇1-5之一、无、前列腺特异性抗原(PSA)的肽池或HPV16.E6/7肽池再刺激。图5显示在人CD40转基因小鼠中，抗-CD40-HPV16.E6/7诱导HPV 16 E6/7肽簇2和3-特异性CD4+和簇5-特异性CD8+T细胞应答。重要的是，E6/7-特异性CD8+T细胞应答的水平大于E6/7-特异性CD4+T细胞应答的水平。这表明抗-CD40-HPV16.E6/7疫苗在引发可以杀死HPV-感染的细胞和肿瘤细胞的CD8+CTL中特别有效。图5中的每个点表示使用单只小鼠生成的数据。
在人CD40转基因小鼠中，抗-CD40-HPV16.E6/7能够抑制TC-1肿瘤的发展。在TC-1攻击的人CD40转基因鼠中，测试抗-CD40-HPV16.E6/7加聚IC疫苗的功效。在第0天，使用TC-1肿瘤细胞系皮下攻击两组动物(人CD40+和人CD40-小鼠，每组5只小鼠)。在第6和12天，使用抗-CD40-HPV.E6/7加聚IC免疫动物。评估肿瘤发展并呈现在图6中。到TC-1攻击后的14天，人CD40+和CD40-小鼠两者形成了相似的肿瘤尺寸。在人CD40-动物中，在攻击后TC-1肿瘤快速发展并在第25天达到1000mm3。然而，在人CD40+小鼠中，TC-1肿瘤发展明显延迟。我们的数据证明，抗-CD40-HPV16.E6/7疫苗靶向人CD40，并且因此引发E6/7-特异性CD8+CTL，如图5中示出的，其在动物中抑制TC-1肿瘤进展。
在人CD40转基因鼠中，测试聚IC、聚IC加montanide、GM-CSF加montanide和单独的montanide对抗-CD40-HPV.E6/7疫苗的免疫原性的影响。使用30ug单独的抗-CD40-HPV.E6/7或抗-CD40-HPV16.E6/7与所示的佐剂皮下免疫每组中的四只动物(图7)。7天后，获得来自单个动物的血液，并使用四聚体染色。如以下图表中所示，聚IC能够有效地促进抗-CD40-HPV16.E6/7-特异性CD8+T细胞应答。单独的Montanide或montanide中的GM-CSF不能显著促进E6/7-特异性CD8+T细胞应答。
以下的序列基于人源化的12E12抗人CD40VK2 VH2抗体—蛋白序列是预期的成熟分泌的蛋白序列并且DNA序列包括起始ATG和前导肽区域。供选择地，HPV 18序列可以移植到VK2链的C-末端上，并且通过将其与在VH2 H链上的HPV 16序列组合产生更广谱的疫苗。
HPV 16 E6 见下文 SEQ ID NO:1
HPV 16 E7 见下文 SEQ ID NO:2
HPV 18 E6 见下文 SEQ ID NO:3
HPV 18 E7 见下文 SEQ ID NO:4
Flexv1 见下文 SEQ ID NO:5
f1 见下文 SEQ ID NO:6
h抗-CD40VK2-LV-hIgGK-C 见下文 SEQ ID NO:7
h抗-CD40VH2-LV-hIgG4H-C 见下文 SEQ ID NO:8
抗-CD4012E12轻链可变区 见下文 SEQ ID NO:9
抗-CD4012E12重链可变区 见下文 SEQ ID NO:10
抗-CD40 12E12 CDR1L SASQGISNYLN SEQ ID NO:11
抗-CD40 12E12 CDR2L YTSILHS SEQ ID NO:12
抗-CD40 12E12 CDR3L QQFNKLPPT SEQ ID NO:13
抗-CD40 12E12 CDR1H GFTFSDYYMY SEQ ID NO:14
抗-CD40 12E12 CDR2H YINSGGGSTYYPDTVKG SEQ ID NO:15
抗-CD40 12E12 CDR3H RGLPFHAMDY SEQ ID NO:16
HPV 16 E6
MHQKRTAMFQDPQERPRKLPQLCTELQTTIHDIILECVYCKQQLLRREVGDFAFRDLCIVYRDGNPYAVCDKCLKFYSKISEYRHYCYSVYGTTLEQQYNKPLCDLLIRCINCQKPLCPE
(SEQ ID NO:1)
HPV 16 E7
MHGDTPTLHEYMLDLQPETTDLYGYGQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRAHYNIVTFCCK
(SEQ ID NO:2)
HPV 18 E6
MARFEDPTRRPYKLPDLCTELNTSLQDIEITCVYCKTVLELTEVGEFAFKDLFVVYRDSIPHAACHKCIDFYSRIRELRHYSDSVYGDTLEKLTNTGLYNLLIRCLRCQKPLNP
(SEQ ID NO:3)
HPV 18 E7
MHGPKATLQDIVLHLEPQNEIPVDLLGHGQLSDSEEENDEIDGVNHQHLPARRAEPQRHTMLCMCCK
(SEQ ID NO:4)
Flexv1
QTPTNTISVTPTNNSTPTNNSNPKPNP
(SEQ ID NO:5)
f1
SSVSPTTSVHPTPTSVPPTPTKSSP
(SEQ ID NO:6)
h抗-CD40VK2-LV-hIgGK-C
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQGISNYLNWYQQKPGKAVKLLIYYTSILHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQFNKLPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(SEQ ID NO:7)
h抗-CD40VH2-LV-hIgG4H-C
EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCATSGFTFSDYYMYWVRQAPGKGLEWVAYINSGGGSTYYPDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRGLPFHAMDYWGQGTLVTVSSAKTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
(SEQ ID NO:8)
抗-CD4012E12轻链可变区
DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSILHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTIGNLEPEDIATYYCQQFNKLPPTFGGGTKLEIK
(SEQ ID NO:9)
抗-CD4012E12重链可变区
CEVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCATSGFTFSDYYMYWVRQTPEKRLEWVAYINSGGGSTYYPDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSRLKSEDTAMYYCARRGLPFHAMDYWGQGTSVTVS
(SEQ ID NO:10)
h抗-CD40VK2-LV-hIgGK-C
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQGISNYLNWYQQKPGKAVKLLIYYTSILHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQFNKLPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(SEQ ID NO:17)
h抗-CD40VK2-LV-hIgGK-C DNA序列(包括前导肽区域)
ATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGCGCGCGATGTGATATCCAGATGACACAGAGCCCTTCCTCCCTGTCTGCCTCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACCTGCAGTGCAAGTCAGGGCATTAGCAATTATTTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGGCAAGGCCGTTAAACTCCTGATCTATTACACATCAATTTTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGATTATACCCTCACCATCAGCTCCCTGCAGCCTGAAGATTTCGCCACTTACTATTGTCAGCAGTTTAATAAGCTTCCTCCGACGTTCGGTGGAGGCACCAAACTCGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTATGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
(SEQ ID NO:18)
h抗-CD40VH2-LV-hIgG4H-C-Flex-v1-HPV 16-E6-HPV 16-E7-f1
(粗体且斜体的单下划线序列为HPV 16 E6；粗体且斜体的双下划线序列为HPV 16E7；非粗体且非斜体的单下划线的(Flexv1)和非粗体且非斜体的双下划线的(f1)序列为柔性糖基化接头序列)
(SEQ ID NO:19)
h抗-CD40VH2-LV-hIgG4H-C-Flex-v1-HPV 16-E6-HPV 16-E7-f1 DNA序列
(包括前导肽区域)
ATGGGTTGGAGCCTCATCTTGCTCTTCCTTGTCGCTGTTGCTACGCGTGTCCACTCCGAAGTGAAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGCAGCCCGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAACCTCTGGATTCACTTTCAGTGACTATTACATGTATTGGGTTCGCCAGGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTCGCATACATTAATTCTGGTGGTGGTAGCACCTATTATCCAGACACTGTAAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAAATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACAGCCGTGTATTACTGTGCAAGACGGGGGTTACCGTTCCATGCTATGGACTATTGGGGTCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACGAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAAGCTAGTCAGACCCCCACCAACACCATCAGCGTGACCCCCACCAACAACAGCACCCCCACCAACAACAGCAACCCCAAGCCCAACCCCGCTAGTATGCACCAAAAAAGGACCGCAATGTTTCAGGACCCCCAAGAGAGGCCCCGCAAACTGCCACAACTTTGCACGGAGCTGCAGACAACAATACATGACATCATTCTCGAATGTGTTTACTGTAAGCAGCAGTTGTTGCGAAGAGAAGTGGGAGACTTCGCTTTCAGAGACCTGTGTATCGTATATCGCGATGGCAATCCTTATGCCGTCTGCGATAAATGCCTCAAGTTTTACTCCAAGATCAGCGAGTACCGGCACTACTGTTACTCTGTGTATGGGACTACCCTCGAACAGCAGTATAACAAGCCGCTGTGCGATCTCCTTATCCGGTGCATTAACTGCCAGAAGCCACTGTGTCCTGAGGCTAGTATGCACGGGGATACCCCCACACTCCACGAATACATGCTTGATTTGCAACCTGAAACGACCGACCTGTACGGCTATGGTCAGCTGAATGACTCCAGCGAGGAAGAGGATGAGATTGACGGACCGGCAGGCCAGGCCGAGCCAGACCGGGCTCATTATAACATCGTGACTTTCTGCTGTAAGGCTAGTAGCAGCGTGAGCCCCACCACCAGCGTGCACCCCACCCCCACCAGCGTGCCCCCCACCCCCACCAAGAGCAGCCCCGCTAGCTGA
(SEQ ID NO:20)
h抗-CD40VH2-LV-hIgG4H-C-Flex-v1-HPV 18E6-HPV 18E7-f1
(粗体且斜体的单下划线序列为HPV 18 E6；粗体且斜体的双下划线序列为HPV 18E7；非粗体且非斜体的单下划线的(Flexv1)和非粗体且非斜体的双下划线的(f1)序列为柔性糖基化接头序列)
(SEQ ID NO:21)
h抗-CD40VH2-LV-hIgG4H-C-Flex-v1-HPV 18E6-HPV 18E7-f1 DNA序列
(包括前导肽区域)
ATGGGTTGGAGCCTCATCTTGCTCTTCCTTGTCGCTGTTGCTACGCGTGTCCACTCCGAAGTGAAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGCAGCCCGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAACCTCTGGATTCACTTTCAGTGACTATTACATGTATTGGGTTCGCCAGGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTCGCATACATTAATTCTGGTGGTGGTAGCACCTATTATCCAGACACTGTAAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAAATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACAGCCGTGTATTACTGTGCAAGACGGGGGTTACCGTTCCATGCTATGGACTATTGGGGTCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACGAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAAGCTAGTCAGACCCCCACCAACACCATCAGCGTGACCCCCACCAACAACAGCACCCCCACCAACAACAGCAACCCCAAGCCCAACCCCGCTAGTATGGCCAGATTCGAGGATCCAACACGCCGACCTTACAAATTGCCGGACCTTTGCACGGAGCTGAACACTTCCCTGCAGGACATAGAAATTACCTGCGTCTACTGCAAGACCGTTCTCGAACTGACAGAAGTAGGCGAGTTTGCGTTTAAAGATCTGTTCGTGGTGTATCGGGATAGCATTCCCCACGCAGCTTGTCATAAGTGTATCGACTTCTATTCTAGGATCCGGGAGCTCAGACACTATAGCGATTCCGTGTACGGCGACACACTTGAGAAGCTCACTAACACCGGGCTGTACAACCTCCTGATCCGGTGCTTGAGGTGTCAGAAACCCCTGAATCCTGCTAGTATGCACGGGCCTAAGGCCACACTGCAAGATATTGTCCTCCATCTCGAACCCCAGAATGAGATACCAGTGGACCTTCTGGGCCACGGACAGTTGTCCGATAGCGAGGAGGAAAACGACGAAATCGACGGTGTTAACCACCAGCACTTGCCGGCTCGGAGGGCAGAGCCCCAGAGACATACCATGCTGTGCATGTGTTGCAAAGCTAGTAGCAGCGTGAGCCCCACCACCAGCGTGCACCCCACCCCCACCAGCGTGCCCCCCACCCCCACCAAGAGCAGCCCCGCTAGCTGA
(SEQ ID NO:22)
实施例2—抗-DC受体(DCR)、TLR配体和HPV序列的重组融合蛋白
以下是TLR2配体(三酰化粘连蛋白，在大肠杆菌中表达)的实例，其中在D1前导结构域中的C残基是酯化的，当抗-CD40具有例如融合到在HPV E6/7序列远端的C-末端或L链或H链C-末端的锚定蛋白结构域时，其可以非共价地附着到抗-CD40-HPV疫苗。
D1-6His-粘连蛋白-Nhe-Spe-Not(注意另外的癌症抗原序列可以添加到粘连蛋白结构域的远端)
MKKLLIAAMMAAALAACSQEAKQEVKEAVQAVESDVKDTAMGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMASMDLDAVRIKVDTVNAKPGDTVNIPVRFSGIPSKGIANCDFVYSYDPNVLEIIEIKPGELIVDPNPTKSFDTAVYPDRKMIVFLFAEDSGTGAYAITKDGVFATIVAKVKEGAPNGLSVIKFVEVGGFANNDLVEQKTQFFDGGVNVGDTTEPATPTTPVTTPTTTDDLDAASLIKTSEF
(SEQ ID NO:23)
D1-6His-粘连蛋白-Nhe-Spe-Not DNA序列
ATGAAAAAACTGCTGATTGCCGCCATGATGGCTGCAGCTCTGGCCGCATGCAGCCAGGAAGCCAAACAGGAAGTGAAAGAAGCCGTGCAGGCCGTGGAAAGCGATGTGAAAGATACCGCCATGGGCAGCAGCCATCATCATCATCATCACAGCAGCGGCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATGGCTAGTATGGATCTGGATGCAGTAAGGATTAAAGTGGACACAGTAAATGCAAAACCGGGAGACACAGTAAATATACCTGTAAGATTCAGTGGTATACCATCCAAGGGAATAGCAAACTGTGACTTTGTATACAGCTATGACCCGAATGTACTTGAGATAATAGAGATAAAACCGGGAGAATTGATAGTTGACCCGAATCCTACCAAGAGCTTTGATACTGCAGTATATCCTGACAGAAAGATGATAGTATTCCTGTTTGCGGAAGACAGCGGAACAGGAGCGTATGCAATAACTAAAGACGGAGTATTTGCTACGATAGTAGCGAAAGTAAAAGAAGGAGCACCTAACGGGCTCAGTGTAATCAAATTTGTAGAAGTAGGCGGATTTGCGAACAATGACCTTGTAGAACAGAAGACACAGTTCTTTGACGGTGGAGTAAATGTTGGAGATACAACAGAACCTGCAACACCTACAACACCTGTAACAACACCGACAACAACAGATGATCTAGATGCAGCTAGCTTAATTAAAACTAGTGAATTCTGA
(SEQ ID NO:23)
以下是带有优选的TLR5L鞭毛蛋白结构域的抗-CD40L链的实例(下划线显示)。这将与在C末端带有HPV E6/7抗原的匹配的H链共转染。
h抗-CD40VK2-LV-hIgGK-C-Flgn1-Flgn2
(下划线序列为鞭毛蛋白结构域)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQGISNYLNWYQQKPGKAVKLLIYYTSILHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQFNKLPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECASIERLSSG LRINSAKDDAAGQAIANRFTANIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELAVQSANSTNSQSDLDSI QAEITQRLNEIDRVSGQTQFNGVKVLAQDNTLTIQVGANDGETIDIDLKQINSQTLGLDSLNVQASQPELAEAAAKT TENPLQKIDAALAQVDALRSDLGAVQNRFNSAITNLGNTVNNLSEARSRIEDSDYATEVSNMSRAQILQAS
(SEQ ID NO:24)
h抗-CD40VK2-LV-hIgGK-C-Flgn1-Flgn2 DNA序列
ATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGCGCGCGATGTGATATCCAGATGACACAGAGCCCTTCCTCCCTGTCTGCCTCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACCTGCAGTGCAAGTCAGGGCATTAGCAATTATTTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGGCAAGGCCGTTAAACTCCTGATCTATTACACATCAATTTTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGATTATACCCTCACCATCAGCTCCCTGCAGCCTGAAGATTTCGCCACTTACTATTGTCAGCAGTTTAATAAGCTTCCTCCGACGTTCGGTGGAGGCACCAAACTCGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTATGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTGCTAGTATCGAGCGTCTGTCTTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGTCAGGCGATTGCTAACCGTTTTACCGCGAACATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGTATCTCCATCGCGCAGACCACTGAAGGCGCGCTGAACGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAACTGGCGGTTCAGTCTGCTAACAGCACTAACTCCCAGTCTGACCTCGACTCCATCCAGGCTGAAATCACCCAGCGCCTGAACGAAATCGACCGTGTATCCGGTCAGACTCAGTTCAACGGCGTGAAAGTCCTGGCGCAGGACAACACCCTGACCATCCAGGTTGGTGCCAACGACGGTGAAACTATCGATATCGATCTGAAGCAGATCAACTCTCAGACCCTGGGCCTGGATTCACTGAACGTGCAGGCTAGTCAACCAGAGCTGGCGGAAGCAGCCGCTAAAACCACCGAAAACCCGCTGCAGAAAATTGATGCCGCGCTGGCGCAGGTGGATGCGCTGCGCTCTGATCTGGGTGCGGTACAAAACCGTTTCAACTCCGCTATCACCAACTTGGGCAATACCGTAAACAACCTGTCTGAAGCGCGTAGCCGTATCGAAGATTCCGACTACGCGACCGAAGTTTCCAACATGTCTCGCGCGCAGATTCTGCAGGCTAGCTGA
(SEQ ID NO:25)
以下是融合到DC-靶向抗体H链(在该情况下是抗朗格汉斯蛋白)的类似HPV 18E6/7序列的实例。其反而可以融合到优选的抗CD40抗体的H链以替代HPV 16序列，或融合到HPV 16序列的下游，或融合到抗-CD40L链—在每种情况下制备带有HPV 16和HPV 18序列两者的疫苗。
抗朗格汉斯蛋白15B10H-LV-hIgG4H-C-HPV 18E7-HPV 18E6-f1
(粗体且斜体的单下划线序列是HPV 18 E6；粗体且斜体的双下划线序列是HPV 18E7；非粗体且非斜体的双下划线(f1)序列为柔性糖基化接头序列)
(SEQ ID NO:26)
抗朗格汉斯蛋白15B10H-LV-hIgG4H-C-HPV 18E7-HPV 18E6-f1 DNA序列
ATGGAATGGAGGATCTTTCTCTTCATCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCCCAGGTTCAGCTGCGGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTTACTGACTATGTTATAAGTTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTATCCTGGAAGTGGTTATTCTTTCTACAATGAGAACTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCACCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAACCTACTATAACTACCCTTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAAGCTAGTATGCACGGGCCTAAGGCCACACTGCAAGATATTGTCCTCCATCTCGAACCCCAGAATGAGATACCAGTGGACCTTCTGGGCCACGGACAGTTGTCCGATAGCGAGGAGGAAAACGACGAAATCGACGGTGTTAACCACCAGCACTTGCCGGCTCGGAGGGCAGAGCCCCAGAGACATACCATGCTGTGCATGTGTTGCAAAGCTAGTATGGCCAGATTCGAGGATCCAACACGCCGACCTTACAAATTGCCGGACCTTTGCACGGAGCTGAACACTTCCCTGCAGGACATAGAAATTACCTGCGTCTACTGCAAGACCGTTCTCGAACTGACAGAAGTAGGCGAGTTTGCGTTTAAAGATCTGTTCGTGGTGTATCGGGATAGCATTCCCCACGCAGCTTGTCATAAGTGTATCGACTTCTATTCTAGGATCCGGGAGCTCAGACACTATAGCGATTCCGTGTACGGCGACACACTTGAGAAGCTCACTAACACCGGGCTGTACAACCTCCTGATCCGGTGCTTGAGGTGTCAGAAACCCCTGAATCCTGCTAGTAGCAGCGTGAGCCCCACCACCAGCGTGCACCCCACCCCCACCAGCGTGCCCCCCACCCCCACCAAGAGCAGCCCCGCTAGCTGA
(SEQ ID NO:27)
实施例3—CD40靶向HPV疫苗(CD40 HVac)
在人CD40转基因B6(hCD40Tg)小鼠中，CD40HVac加聚IC诱导E6/7-特异性CD8+CTL。使用在PBS(100μl)中的30μg CD40HVac加50μg聚IC皮下(SC)免疫hCD40Tg和野生型(WT)动物(5只小鼠/组)并且每隔两周加强两次。在分开的试验中，预先确定CD40HVac和聚IC的量。在第二次加强后七天，使用从脾脏纯化的CD8+T细胞进行IFN ELISPOT(图8a)。与WT小鼠相比，hCD40Tg小鼠诱发了增加数量的CD8+IFN+T细胞。本发明人还观察到，hCD40Tg小鼠具有增加的在血液中的E7-特异性CD8+T细胞，如通过四聚体染色所测量的(图8b)。此外，CD40HVac加聚IC在hCD40Tg小鼠中比在WT动物中诱导更高水平的E6/7-特异性CD4+T细胞应答(未示出)。总之，本发明人的结论是CD40HVac在体内靶向人CD40，并且因此能够诱发E6/7-特异性细胞应答。本发明人还发现，尽管在CD40HVac中使用的人源化的抗-CD40抗体具有激动特性，但在hCD40Tg小鼠中，CD40HVac加聚IC(佐剂)在诱发E6/7-特异性T细胞应答方面比单独的CD40HVac更强力(数据未示出)。
CD40HVac加聚IC能够在hCD40Tg动物中增加治疗性免疫。使用HPV E6/7-表达TC-1肿瘤细胞(5x104个)皮下攻击hCD40Tg小鼠(每组10只小鼠)。本发明人证明在TC-1攻击后的第6天，动物荷载可触及的肿瘤。然后，在第6、12、24天，使用30μg CD40HVac加50μg聚IC皮下、肌内(IM)或腹腔内(IP)免疫动物。保持对照组不免疫。图9a显示接受CD40HVac加聚IC的所有动物存活，而所有的对照动物死亡。单独注射聚IC不能提升存活率(数据未示出)。在分开的试验中，我们通过评估肿瘤体积测量TC-1肿瘤的发展(图9b)。所有的对照动物(10只小鼠)形成肿瘤并且在40天内死于TC-1攻击。相反地，CD40HVac加聚IC治疗抑制了肿瘤发展。还注意到的是，一些经治疗的动物形成大肿瘤(200-600mm3)，并且在疫苗接种过程中，这些肿瘤随着时间消退。总之，本发明人的结论是CD40HVac在hCD40Tg小鼠中诱发治疗性免疫。此外，数据表明，免疫的途径是可能影响CD40HVac方案的整体治疗效果的重要因素。
CD8+CTL渗透到肿瘤中是肿瘤消退的关键。使用数量多的TC-1肿瘤细胞(2x105个细胞)皮下攻击人CD40转基因(hCD40Tg)小鼠。然后在第6和12天，使用30μg CD40HVac加50μg聚IC免疫动物。在没有免疫接种的情况下，所有的动物在肿瘤攻击后的25天内死亡。在第60天，评估在肿瘤和血液中的H2-Db(RAHYNIVTF)四聚体+CD8+T细胞的百分比(图10)。四聚体+CD8+T细胞在肿瘤中的百分比(左)与肿瘤体积负相关。在血液(右)或脾脏(未示出)中的四聚体+CD8+T细胞的百分比与肿瘤体积之间没有这样的相关性。因此，抗原特异性CD8+CTL渗透到肿瘤中是肿瘤消退的关键。因此，我们预期通过促进效应细胞渗透到粘膜肿瘤中并保留在粘膜肿瘤内提高CD40HVac的功效。
在诱发HPV16.E6/7-特异性CD8+T细胞应答方面，由抗-CD40(12E12克隆)制备的CD40HVac比由抗-CD40(12B4克隆)制备的CD40HVac更有效。本发明人比较了由抗-CD40 mAb的三个不同克隆(12E12和12B4)制备的重组融合蛋白刺激HPV16.E6/7-特异性CD8+T细胞应答的能力。本发明人使用聚IC作为佐剂。hCD40Tg动物通过皮下注射接受三个剂量的重组融合蛋白(30μg/剂量)加聚IC(50μg/剂量)。在第三次免疫后七天，通过四聚体染色确定E7-特异性CD8+T细胞在血液中的百分比。如在图11a的左侧示出的，在诱导E6/7-特异性CD8+T细胞应答方面，由12E12制备的重组融合蛋白比由12B4克隆制备的那些更有效。通过使用脾细胞的ELISPOT分析，本发明人还发现，在诱发IFNγ+CD8+T细胞应答方面，抗-CD40(12E12)-HPV16.E6/7比抗-CD40(12B6)-HPV16.E6/7更有效(图11b中左侧)。与抗-CD40 mAb的两个克隆融合的HPV16.E6/7产生了类似水平的E6/7-特异性IFN+CD4+T细胞应答(图11b中右侧)。
本文公开并要求保护的所有方法可以依照本发明在不需过度的实验的情况下形成和实施。尽管本发明的组合物和方法已经以优选的实施方案进行描述，但对于本领域技术人员显而易见的是，可以在不背离本发明的构思、精神和范围的情况下，对本文描述的方法和所述方法的步骤或者步骤的顺序进行变化。更具体地，将显而易见的是，某些化学和生理上均相关的药剂可以代替本文所述的药剂，同时实现相同或相似的结果。所有这些对于本领域技术人员而言显而易见的类似替代和修改被视为在由所附权利要求所限定的本发明的精神、范围及构思之内。
参考文献
以下参考文献通过引用特别地并入本文，其能够提供补充本文所描述的示例性程序或其他细节的示例性程序或其他细节。
Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,1988
Atherton等人，1985
Ausubel等人，1996
Barany和Merrifield，1979
Bird等人，1988
Burke等人，1994
Cumber等人，1992
Dholakia等人，1989
Epitope Mapping Protocols(1996)
Glennie等人，1987
Goding,1986,pp.60 61
Holliger等人，1993
Holliger&Winter,1999
Holt等人，2003
Hu等人.1996
Huston等人，1988
Khatoon等人，1989
King等人，1989
Kohl等人，2003
Kyte和Doolittle,1982
Liu等人，2003
McCafferty等人，1990
Merchand等人，1998
Merrifield,1986
O'Shannessy等人，1987
Owens&Haley,1987
Pack,等人，1992
Potter&Haley，1983
Reiter等人，1996
Repp等人，1995
Ridgeway等人，1996
Sambrook等人，2001
Skerra,2000
Skerra,2001
Staerz&Bevan,1986
Stewart和Young,1984
Tam等人，1983
Tigges等人，1996
Ward,1989
美国专利3,817,837
美国专利3,850,752
美国专利3,939,350
美国专利3,996,345
美国专利4,196,265
美国专利4,277,437
美国专利4,275,149
美国专利4,366,241
美国专利4,472,509
美国专利4,554,101
美国专利4,879,236
美国专利4,938,948
美国专利5,196,066
美国专利5,741,957
美国专利5,750,172
美国专利5,756,687
美国专利5,827,690
美国专利5,871,986
美国专利6,091,001
美国专利6,651,655
第2005/0106660号美国公开专利
第2006/0058510号美国公开专利
第2006/0088908号美国公开专利
第2010/0285564号美国公开专利
第2012/0039,916号美国公开专利
第2012/023,102号美国公开专利
第61/332,465号美国临时专利
第12/024,036号美国专利申请
第12/024,897号美国专利申请
第12/025,010号美国专利申请
第12/026,095号美国专利申请
第12/036,138号美国专利申请
第12/036,158号美国专利申请
第12/504,463号美国专利申请
第12/717,778号美国专利申请
第12/717,789号美国专利申请
第12/717,804号美国专利申请
第12/718,365号美国专利申请
第12/882,052号美国专利申请
第12/882,052号美国专利申请
第13/100,684号美国专利申请
第13/208,993号美国专利申请
第13/269,951号美国专利申请
第13/282,112号美国专利申请
第13/415,564号美国专利申请
第13/424,582号美国专利申请
第13/430,206号美国专利申请
第13/594,397号美国专利申请
第13/596,526号美国专利申请
第13/465,371号美国专利申请
第13/397,932号美国专利申请
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Claims (134)

1.一种树突细胞靶向复合物在制备用于治疗或预防人乳头瘤病毒(HPV)相关的疾病的药物中的用途，所述树突细胞靶向复合物包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少六个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。
2.权利要求1所述的用途，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体轻链可变区和抗-CD40抗体重链可变区。
3.权利要求1所述的用途，其中所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。
4.权利要求1至3中任一项所述的用途，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原。
5.权利要求1至3中任一项所述的用途，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
6.权利要求1至3中任一项所述的用途，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPVE7抗原是HPV 18型抗原。
7.权利要求4所述的用途，其中所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:19。
8.权利要求5所述的用途，其中所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:21。
9.权利要求1至8中任一项所述的用途，其中所述组合物还包含佐剂。
10.权利要求1至8中任一项所述的用途，其中所述HPV相关的疾病是发育不良、良性肿瘤、癌前肿瘤或癌症。
11.权利要求10所述的用途，其中所述HPV相关的疾病是癌症。
12.权利要求11所述的用途，其中所述癌症是头颈癌、宫颈癌、外阴癌、阴道癌、阴茎癌、肛门癌、口咽癌、咽喉癌或肺癌。
13.权利要求1至12中任一项所述的用途，其还包括给予患者用于治疗或预防人乳头瘤病毒(HPV)相关的疾病的不同的药物组合物。
14.权利要求13所述的用途，其中所述用于治疗或预防人乳头瘤病毒(HPV)相关的疾病的不同的药物组合物是GardasilTM或CervarixTM。
15.权利要求10所述的用途，其中所述治疗导致癌症相关的肿瘤的尺寸或体积的减小。
16.一种融合蛋白，其包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少三个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。
17.权利要求16所述的融合蛋白，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括至少来自抗-CD40抗体的可变区。
18.权利要求16至17中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括至少来自抗-CD40抗体轻链的可变区。
19.权利要求16至17中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括至少来自抗-CD40抗体重链的可变区。
20.权利要求16至19中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括至少来自抗-CD40抗体轻链的可变区和至少来自抗-CD40抗体重链的可变区。
21.权利要求16所述的融合蛋白，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括六个来自抗-CD40抗体的CDR。
22.权利要求21所述的融合蛋白，其中所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。
23.权利要求16至22中任一项所述的融合蛋白，其中所述肽接头或多个肽接头是柔性接头。
24.权利要求16至23中任一项所述的融合蛋白，其中所述肽接头或多个肽接头包括一个或多个糖基化位点。
25.权利要求16至24中任一项所述的融合蛋白，其中所述肽接头或多个肽接头是Flexv1(SEQ ID NO:5)和/或f1(SEQ ID NO:6)。
26.权利要求16至25中任一项所述的融合蛋白，其中所述HPV抗原是E6和E7。
27.权利要求26所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包括SEQ ID NO:19的序列。
28.权利要求26所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包括SEQ ID NO:21的序列。
29.权利要求16至25中任一项所述的融合蛋白，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原。
30.权利要求16至25中任一项所述的融合蛋白，其中至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
31.权利要求16至25中任一项所述的融合蛋白，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
32.一种融合蛋白，其包括至少SEQ ID NO：11-13或SEQ ID NO：14-16的氨基酸序列和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原。
33.权利要求32所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包括SEQ ID NO：11-13和SEQ IDNO：14-16。
34.权利要求32或33所述的融合蛋白，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV16型或HPV 18型抗原。
35.权利要求32至34中任一项所述的融合蛋白，其还包括肽接头。
36.权利要求35所述的融合蛋白，其中所述肽接头是柔性接头。
37.权利要求36所述的融合蛋白，其中所述肽接头包括一个或多个糖基化位点。
38.权利要求36或37所述的融合蛋白，其中所述肽接头是Flexv1(SEQ ID NO:5)和/或f1(SEQ ID NO:6)。
39.一种药学上可接受的组合物，其包含权利要求16-38中任一项所述的融合蛋白。
40.一种组合物，其包含树突细胞靶向复合物，所述树突细胞靶向复合物包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少三个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。
41.权利要求40所述的组合物，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括至少来自抗-CD40抗体的可变区。
42.权利要求40至41中任一项所述的组合物，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括至少来自抗-CD40抗体轻链的可变区。
43.权利要求40至41中任一项所述的组合物，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括至少来自抗-CD40抗体重链的可变区。
44.权利要求40至43中任一项所述的组合物，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括至少来自抗-CD40抗体轻链的可变区和至少来自抗-CD40抗体重链的可变区。
45.权利要求40所述的组合物，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括六个来自抗-CD40抗体的CDR。
46.权利要求45所述的组合物，其中所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。
47.权利要求40至46中任一项所述的组合物，其中所述肽接头或多个肽接头是柔性接头。
48.权利要求40至47中任一项所述的组合物，其中所述肽接头或多个肽接头包括一个或多个糖基化位点。
49.权利要求40至48中任一项所述的组合物，其中所述肽接头或多个肽接头选自Flexv1(SEQ ID NO:5)或f1(SEQ ID NO:6)。
50.根据权利要求40至49中任一项所述的组合物，其中所述HPV抗原是E6和E7。
51.权利要求50所述的组合物，其中所述融合蛋白包括SEQ ID NO:19的序列。
52.权利要求50所述的组合物，其中所述融合蛋白包括SEQ ID NO:21的序列。
53.权利要求40至49中任一项所述的组合物，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原。
54.权利要求40至49中任一项所述的组合物，其中至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
55.权利要求40至49中任一项所述的组合物，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E6抗原是HPV18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
56.一种制备根据权利要求16至39中任一项所述的融合蛋白的方法，其包括从表达融合蛋白的重组宿主细胞分离融合蛋白。
57.一种载体，其包括编码融合蛋白的多核苷酸序列，所述融合蛋白包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少三个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。
58.权利要求57所述的载体，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体轻链可变区。
59.权利要求57所述的载体，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体重链可变区。
60.权利要求57至59中任一项所述的载体，其中所述多核苷酸序列编码至少一个HPV16型E6抗原、至少一个HPV 16型E7抗原或至少一个HPV 18型E6抗原和至少一个HPV 18型E7抗原。
61.权利要求60所述的载体，其中所述多核苷酸序列编码包括SEQ ID NO:19的多肽。
62.权利要求60所述的载体，其中所述多核苷酸序列编码包括SEQ ID NO:21的多肽。
63.权利要求57至60中任一项所述的载体，其中所述多核苷酸序列编码至少一个HPV16型E6抗原、至少一个HPV 16型E7抗原、至少一个HPV 18型E6抗原和至少一个HPV 18型E7抗原。
64.一种用于预防人乳头瘤病毒(HPV)感染的方法，其包括给予患者包含树突细胞靶向复合物的组合物，所述树突细胞靶向复合物包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少六个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。
65.权利要求64所述的方法，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体轻链可变区和抗-CD40抗体重链可变区。
66.权利要求64所述的方法，其中所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。
67.权利要求64至66中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原。
68.权利要求64至66中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
69.权利要求64至66中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
70.权利要求67所述的方法，其中所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:19。
71.权利要求68所述的方法，其中所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:21。
72.权利要求64至71中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含佐剂。
73.权利要求64至72中任一项所述的方法，还包括给予患者不同的HPV疫苗。
74.权利要求73所述的方法，其中所述不同的HPV疫苗是GardasilTM或CervarixTM。
75.一种用于治疗人乳头瘤病毒(HPV)感染的方法，其包括给予患者包含树突细胞靶向复合物的组合物，所述树突细胞靶向复合物包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少六个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。
76.权利要求75所述的方法，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体轻链可变区和抗-CD40抗体重链可变区。
77.权利要求75所述的方法，其中所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。
78.权利要求75至77中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原。
79.权利要求75至77中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
80.权利要求75至77中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
81.权利要求78所述的方法，其中所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:19。
82.权利要求79所述的方法，其中所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:21。
83.权利要求75至82中任一项所述的方法，其还包括给予患者不同的HPV治疗。
84.一种用于诱导针对至少一个HPV表位的免疫应答的方法，其包括给予患者包含树突细胞靶向复合物的组合物，所述树突细胞靶向复合物包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少六个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。
85.权利要求84所述的方法，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体轻链可变区和抗-CD40抗体重链可变区。
86.权利要求84所述的方法，其中所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。
87.权利要求84至86中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原。
88.权利要求84至86中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
89.权利要求84至86中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
90.权利要求87所述的方法，其中所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:19。
91.权利要求88所述的方法，其中所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:21。
92.权利要求84至91中任一项所述的方法，其中所述组合物还包括佐剂。
93.权利要求84至92中任一项所述的方法，其还包括给予患者不同的HPV疫苗。
94.权利要求93所述的方法，其中所述不同的HPV疫苗是GardasilTM或CervarixTM。
95.一种用于加强针对至少一个HPV表位的免疫应答的方法，其包括给予患者包含树突细胞靶向复合物的组合物，所述树突细胞靶向复合物包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少六个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。
96.权利要求95所述的方法，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体轻链可变区和抗-CD40抗体重链可变区。
97.权利要求95所述的方法，其中所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。
98.权利要求95至97中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原。
99.权利要求95至97中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
100.权利要求95至97中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
101.权利要求98所述的方法，其中所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:19。
102.权利要求99所述的方法，其中所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:21。
103.权利要求95至102中任一项所述的方法，其还包括给予患者不同的HPV治疗。
104.一种用于预防人乳头瘤病毒(HPV)相关的疾病的方法，其包括给予患者包含树突细胞靶向复合物的组合物，所述树突细胞靶向复合物包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少六个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。
105.权利要求104所述的方法，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体轻链可变区和抗-CD40抗体重链可变区。
106.权利要求104所述的方法，其中所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。
107.权利要求104至106中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原。
108.权利要求104至106中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
109.权利要求104至106中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
110.权利要求107所述的方法，其中所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:19。
111.权利要求108所述的方法，其中所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:21。
112.权利要求104至111中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含佐剂。
113.权利要求104至111中任一项所述的方法，其中所述HPV相关的疾病是发育不良、良性肿瘤、癌前肿瘤或癌症。
114.权利要求113所述的方法，其中所述HPV相关的疾病是癌症。
115.权利要求114所述的方法，其中所述癌症是宫颈癌、外阴癌、阴道癌、阴茎癌、肛门癌、口咽癌、咽喉癌或肺癌。
116.权利要求104至115中任一项所述的方法，其还包括给予患者不同的HPV疫苗。
117.权利要求86所述的方法，其中所述不同的HPV疫苗是GardasilTM或CervarixTM。
118.一种用于治疗人乳头瘤病毒(HPV)相关的疾病的方法，其包括给予患者包含树突细胞靶向复合物的组合物，所述树突细胞靶向复合物包括：抗-CD40抗体或其片段，所述抗-CD40抗体或其片段包括至少六个来自抗-CD40抗体的互补决定区；至少一个肽接头；和至少一个人乳头瘤病毒(HPV)E6或E7抗原，其中所述E6或E7抗原或多个E6或E7抗原是HPV 16型或HPV 18型抗原。
119.权利要求118所述的方法，其中所述抗-CD40抗体或其片段包括抗-CD40抗体轻链可变区和抗-CD40抗体重链可变区。
120.权利要求118所述的方法，其中所述抗-CD40抗体或其片段是人源化的。
121.权利要求118至120中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原。
122.权利要求118至120中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
123.权利要求118至120中任一项所述的方法，其中至少一个HPV E6抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E7抗原是HPV 16型抗原，至少一个HPV E6抗原是HPV 18型抗原和至少一个HPV E7抗原是HPV 18型抗原。
124.权利要求121所述的方法，其中所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:19。
125.权利要求122所述的方法，其中所述树突细胞靶向复合物包括SEQ ID NO:21。
126.权利要求118至125中任一项所述的方法，其中所述HPV相关的疾病是发育不良、良性肿瘤、癌前肿瘤或癌症。
127.权利要求118至125中任一项所述的方法，其中所述HPV相关的疾病是癌症。
128.权利要求114所述的方法，其中所述癌症是宫颈癌、外阴癌、阴道癌、阴茎癌、肛门癌、口咽癌、咽喉癌或肺癌。
129.权利要求118至128中任一项所述的方法，其还包括给予患者不同的治疗。
130.权利要求126至128中任一项所述的方法，其还包括给予患者癌症治疗。
131.权利要求127所述的方法，其中所述给予导致癌症相关的肿瘤的尺寸或体积的减小。
132.一种抑制患者中的HPV-感染的细胞的方法，其包括给予患者有效量的包含如权利要求16至39中任一项所述的融合蛋白或权利要求43-49中任一项所述的载体的组合物。
133.权利要求132所述的方法，其中所述HPV-感染的细胞在肿瘤中。
134.权利要求133所述的方法，其中所述给予导致与肿瘤相关的癌症的尺寸或体积的减小。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019028980A1 (zh) * 2017-08-10 2019-02-14 深圳市雅臣智能生物工程有限公司 抗人乳头瘤病毒和抗cd人源化的双靶向抗体及其组合物、制备方法和应用
CN111620955A (zh) * 2020-07-01 2020-09-04 北京康爱瑞浩细胞技术有限公司 一种多靶位复合抗原及其应用
CN113811547A (zh) * 2019-03-27 2021-12-17 国家医疗保健研究所 具有cd40激活特性的重组蛋白
CN114573698A (zh) * 2022-03-16 2022-06-03 沈阳三生制药有限责任公司 一种FcRn抗原结合蛋白及其制备方法和应用
US11926662B2 (en) 2016-09-19 2024-03-12 I-Mab Biopharma (Hangzhou) Co., Ltd. Anti-GM-CSF antibodies and uses thereof

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103415534A (zh) * 2009-03-10 2013-11-27 贝勒研究院 靶向抗原呈递细胞的癌症疫苗
US10561723B2 (en) 2015-07-21 2020-02-18 Theodore C. Marbley Treatment and prevention of anal conditions
JP2019506435A (ja) * 2016-02-27 2019-03-07 エイチピーブイヴァックス, リミテッド ライアビリティー カンパニー.Hpvvax, Llc. ワクチンを使用して癌または皮膚病変を治療するための方法および組成物
CA3042703A1 (en) * 2016-11-07 2018-05-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Development of agonist epitopes of the human papillomavirus
CN109021097A (zh) * 2017-06-08 2018-12-18 艾托金生物医药（苏州）有限公司 一种识别hpv18和/或hpv45的单克隆抗体及其应用
CN110054686A (zh) * 2019-04-17 2019-07-26 深圳市雅臣智能生物工程有限公司 抗广谱HPV-L1、E6/E7-IgY及其小分子抗体以及应用
MX2023007610A (es) * 2020-12-23 2023-07-12 Inst Nat Sante Rech Med Vacuna contra clamidia basada en el direccionamiento del antigeno momp vs4 a las celulas presentadoras de antigeno.
MX2023008986A (es) * 2021-01-29 2023-08-15 Inserm Institut National De La Sante Et De La Rech Medicale Polipeptidos antigenicos de chlamydia trachomatis y usos de los mismos con fines de vacuna.

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995006480A1 (en) * 1993-09-02 1995-03-09 Trustees Of Dartmouth College Methods of prolonged suppression of humoral immunity
CN1646566A (zh) * 2002-04-04 2005-07-27 莱顿大学医学中心 通过4－1bb和/或cd40的体内触发诱导抗肿瘤ctl免疫
CN102770457A (zh) * 2009-03-10 2012-11-07 贝勒研究院 靶向抗原呈递细胞的疫苗

Family Cites Families (150)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2403608A (en) 1940-12-19 1946-07-09 Socony Vacuum Oil Co Inc Method of coking oils
US2609508A (en) 1943-04-24 1952-09-02 Bell Telephone Labor Inc Wave generating circuits
US2489708A (en) 1945-01-12 1949-11-29 United Metal Box Co Inc Shelf support combination and cabinet
US2501008A (en) 1948-08-23 1950-03-21 John G Schramm Safety knob
CH482813A (de) 1967-06-16 1969-12-15 Ciba Geigy Flockulationsbeständige Pigmentpräparate und Verfahren zu deren Herstellung
US3613808A (en) 1968-12-18 1971-10-19 Fmc Corp Article-sorting apparatus with transfer-error-reducing arrangement
NL154598B (nl) 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
US3817837A (en) 1971-05-14 1974-06-18 Syva Corp Enzyme amplification assay
US3939350A (en) 1974-04-29 1976-02-17 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation
US3996345A (en) 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4196265A (en) 1977-06-15 1980-04-01 The Wistar Institute Method of producing antibodies
US4235871A (en) 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4277437A (en) 1978-04-05 1981-07-07 Syva Company Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay
US4366241A (en) 1980-08-07 1982-12-28 Syva Company Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays
US4554101A (en) 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
US4472509A (en) 1982-06-07 1984-09-18 Gansow Otto A Metal chelate conjugated monoclonal antibodies
JPS5938877A (ja) 1982-08-30 1984-03-02 Musashi Eng Kk 紙葉判別方法
US4501728A (en) 1983-01-06 1985-02-26 Technology Unlimited, Inc. Masking of liposomes from RES recognition
US4599231A (en) 1984-03-09 1986-07-08 Scripps Clinic And Research Foundation Synthetic hepatitis B virus vaccine including both T cell and B cell determinants
US4599230A (en) 1984-03-09 1986-07-08 Scripps Clinic And Research Foundation Synthetic hepatitis B virus vaccine including both T cell and B cell determinants
US4879236A (en) 1984-05-16 1989-11-07 The Texas A&M University System Method for producing a recombinant baculovirus expression vector
US4957735A (en) 1984-06-12 1990-09-18 The University Of Tennessee Research Corporation Target-sensitive immunoliposomes- preparation and characterization
US5019369A (en) 1984-10-22 1991-05-28 Vestar, Inc. Method of targeting tumors in humans
US4608251A (en) 1984-11-09 1986-08-26 Pitman-Moore, Inc. LHRH analogues useful in stimulating anti-LHRH antibodies and vaccines containing such analogues
US4601903A (en) 1985-05-01 1986-07-22 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Vaccine against Neisseria meningitidis Group B serotype 2 invasive disease
US4938948A (en) 1985-10-07 1990-07-03 Cetus Corporation Method for imaging breast tumors using labeled monoclonal anti-human breast cancer antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US4902505A (en) 1986-07-30 1990-02-20 Alkermes Chimeric peptides for neuropeptide delivery through the blood-brain barrier
DE3785186T2 (de) 1986-09-02 1993-07-15 Enzon Lab Inc Bindungsmolekuele mit einzelpolypeptidkette.
US4837028A (en) 1986-12-24 1989-06-06 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5750172A (en) 1987-06-23 1998-05-12 Pharming B.V. Transgenic non human mammal milk
US5004697A (en) 1987-08-17 1991-04-02 Univ. Of Ca Cationized antibodies for delivery through the blood-brain barrier
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5055303A (en) 1989-01-31 1991-10-08 Kv Pharmaceutical Company Solid controlled release bioadherent emulsions
US5271961A (en) 1989-11-06 1993-12-21 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Method for producing protein microspheres
US5188837A (en) 1989-11-13 1993-02-23 Nova Pharmaceutical Corporation Lipsopheres for controlled delivery of substances
US5633076A (en) 1989-12-01 1997-05-27 Pharming Bv Method of producing a transgenic bovine or transgenic bovine embryo
ATE356869T1 (de) 1990-01-12 2007-04-15 Amgen Fremont Inc Bildung von xenogenen antikörpern
US5268164A (en) 1990-04-23 1993-12-07 Alkermes, Inc. Increasing blood-brain barrier permeability with permeabilizer peptides
JPH049249A (ja) 1990-04-27 1992-01-14 Kusuda:Kk 塗型剤吹き付け機
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5871746A (en) 1990-12-18 1999-02-16 Institut National De La Sainte Et De La Recherche Medicale (Inserm) Cytotoxic T lymphocyte-inducing lipopeptides and use as vaccines
FR2670787B1 (fr) 1990-12-18 1995-06-23 Pasteur Institut Lipopeptides inducteurs des lymphocytes t cytotoxiques et utilisation comme vaccins.
US5254342A (en) 1991-09-30 1993-10-19 University Of Southern California Compositions and methods for enhanced transepithelial and transendothelial transport or active agents
EP0630234B1 (en) 1992-03-12 1997-06-11 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Controlled release acth containing microspheres
US5534496A (en) 1992-07-07 1996-07-09 University Of Southern California Methods and compositions to enhance epithelial drug transport
DE4233152A1 (de) 1992-10-02 1994-04-07 Behringwerke Ag Antikörper-Enzym-Konjugate zur Prodrug-Aktivierung
JP3720353B2 (ja) 1992-12-04 2005-11-24 メディカル リサーチ カウンシル 多価および多重特異性の結合タンパク質、それらの製造および使用
DE59402827D1 (de) 1993-01-16 1997-06-26 Manfred Dr Schawaller Verfahren zur gewinnung nativer, oligomerer, glykosylierter ektodomänen viraler membranproteine, deren verwendung, insbesondere als impfstoff gegen hiv
JP3801196B2 (ja) 1993-03-09 2006-07-26 ジェンザイム・コーポレイション 乳からの対象化合物の単離
US5514670A (en) 1993-08-13 1996-05-07 Pharmos Corporation Submicron emulsions for delivery of peptides
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
US6040137A (en) 1995-04-27 2000-03-21 Tripep Ab Antigen/antibody specification exchanger
US5888773A (en) 1994-08-17 1999-03-30 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of producing single-chain Fv molecules
US5871986A (en) 1994-09-23 1999-02-16 The General Hospital Corporation Use of a baculovirus to express and exogenous gene in a mammalian cell
US6091001A (en) 1995-03-29 2000-07-18 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
US6440418B1 (en) 1995-11-07 2002-08-27 Idec Pharmaceuticals Corporation Methods of treating autoimmune diseases with gp39-specific antibodies
JPH10308991A (ja) 1997-05-07 1998-11-17 Mitsubishi Electric Corp スピーカー取付構造
DE19742706B4 (de) 1997-09-26 2013-07-25 Pieris Proteolab Ag Lipocalinmuteine
EP1033406A4 (en) 1997-10-27 2005-03-09 Sumitomo Electric Industries INDUCER FOR THE PRODUCTION OF ANTIGEN-SPECIFIC ANTIBODY, EXPRESSION VECTOR CONTAINING THE GENE REQUIRED THEREFOR, AND METHOD FOR INDUCING THE PRODUCTION OF THE ANTIGEN-SPECIFIC ANTIBODY
FR2771640B1 (fr) 1997-12-03 2000-02-11 Inst Nat Sante Rech Med Micelles mixtes de lipopeptides pour l'induction d'une reponse immunitaire et leurs utilisations a des fins therapeutiques
US6541011B2 (en) 1998-02-11 2003-04-01 Maxygen, Inc. Antigen library immunization
US6051228A (en) 1998-02-19 2000-04-18 Bristol-Myers Squibb Co. Antibodies against human CD40
CN1629185B (zh) 1998-04-07 2011-11-02 科里克萨公司 结核杆菌抗原融合蛋白及其应用
WO1999055715A2 (en) 1998-04-28 1999-11-04 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Polysaccharide-antigen conjugates
AU4954899A (en) 1998-06-26 2000-01-17 Trustees Of Dartmouth College Methods and compositions for modulating antigen-specific immunological (humoral)responses by targeting such antigen to apcs in conjunction with anti-cd40 ligan d administration
US6946129B1 (en) 1999-06-08 2005-09-20 Seattle Genetics, Inc. Recombinant anti-CD40 antibody and uses thereof
US7067110B1 (en) 1999-07-21 2006-06-27 Emd Lexigen Research Center Corp. Fc fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens
AU1084901A (en) 1999-10-14 2001-04-23 Martha S. Hayden-Ledbetter Dna vaccines encoding antigen linked to a domain that binds cd40
GB9926084D0 (en) 1999-11-03 2000-01-12 King S College London Recombinant fusion molecules
US6651655B1 (en) 2000-01-18 2003-11-25 Quadrant Technologies Limited Inhaled vaccines
WO2001056602A2 (en) 2000-02-02 2001-08-09 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Cd40 ligand adjuvant for respiratory syncytial virus
US20030059427A1 (en) 2000-04-28 2003-03-27 Force Walker R. Isolation and characterization of highly active anti-CD40 antibody
WO2001083755A2 (en) 2000-04-28 2001-11-08 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Human anti-cd40 antibodies and methods of making and using same
US7560534B2 (en) 2000-05-08 2009-07-14 Celldex Research Corporation Molecular conjugates comprising human monoclonal antibodies to dendritic cells
MXPA02010869A (es) 2000-05-08 2003-04-14 Medarex Inc Anticuerpos monoclonales humanos para celulas dendriticas.
US20030232055A1 (en) 2000-07-31 2003-12-18 Ruslan Medzhitov Innate immune system-directed vaccines
WO2002028481A2 (en) 2000-10-02 2002-04-11 Chiron Corporation Methods of therapy for b-cell malignancies using antagonist anti-cd40 antibodies
US6933123B2 (en) 2001-04-05 2005-08-23 Yao Xiong Hu Peptides from the E2, E6, and E7 proteins of human papilloma viruses 16 and 18 for detecting and/or diagnosing cervical and other human papillomavirus associated cancers
JP4025881B2 (ja) 2001-04-27 2007-12-26 キリンファーマ株式会社 抗ｃｄ４０モノクローナル抗体
EP2011802A3 (en) 2001-04-27 2009-04-15 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Anti-CD40 monoclonal antibody
EP1425040A2 (en) 2001-09-14 2004-06-09 Cytos Biotechnology AG In vivo activation of antigen presenting cells for enhancement of immune responses induced by virus like particles
WO2003029462A1 (en) 2001-09-27 2003-04-10 Pieris Proteolab Ag Muteins of human neutrophil gelatinase-associated lipocalin and related proteins
AU2001298053A1 (en) 2001-09-27 2003-04-14 Pieris Proteolab Ag Muteins of apolipoprotein D
WO2003029296A1 (en) 2001-10-02 2003-04-10 Chiron Corporation Human anti-cd40 antibodies
AR039067A1 (es) 2001-11-09 2005-02-09 Pfizer Prod Inc Anticuerpos para cd40
US20040110226A1 (en) 2002-03-01 2004-06-10 Xencor Antibody optimization
US20080199471A1 (en) 2002-03-01 2008-08-21 Bernett Matthew J Optimized cd40 antibodies and methods of using the same
FR2837104B1 (fr) 2002-03-14 2004-08-06 Dev Des Antigenes Combinatoire Utilisation de melange de lipopeptides pour la fabrication de vaccins
WO2003105782A2 (en) 2002-06-17 2003-12-24 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Specificity grafting of a murine antibody onto a human framework
US8025873B2 (en) 2002-06-20 2011-09-27 Paladin Labs, Inc. Chimeric antigens for eliciting an immune response
US8029803B2 (en) 2002-06-20 2011-10-04 Paladin Labs, Inc. Chimeric antigens for eliciting an immune response
CN100381463C (zh) 2002-09-18 2008-04-16 中国人民解放军免疫学研究所 用于生产治疗用乙型肝炎疫苗或药物的免疫原及其制备方法和用途
US20040146948A1 (en) 2002-10-18 2004-07-29 Centenary Institute Of Cancer Medicine And Cell Biology Compositions and methods for targeting antigen-presenting cells with antibody single-chain variable region fragments
CN1756845A (zh) * 2002-11-12 2006-04-05 A·B·德塞罗斯 腺病毒载体疫苗
JP2004192125A (ja) 2002-12-09 2004-07-08 Mitsue-Links Co Ltd プロジェクトマネジメントシステム及びそれに用いられるデータ構造、並びに、プロジェクトマネジメント方法
GB0228796D0 (en) 2002-12-11 2003-01-15 Adjuvantix Ltd Valency
CA2514270A1 (en) 2003-02-06 2004-08-19 Tripep Ab Antigen/antibody or ligand/receptor glycosylated specificity exchangers
AU2004215489B2 (en) 2003-02-25 2010-07-15 Nykode Therapeutics ASA Modified antibody
AR045563A1 (es) 2003-09-10 2005-11-02 Warner Lambert Co Anticuerpos dirigidos a m-csf
US8277810B2 (en) 2003-11-04 2012-10-02 Novartis Vaccines & Diagnostics, Inc. Antagonist anti-CD40 antibodies
CA2551008C (en) 2003-12-25 2013-10-01 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Anti-cd40 antibody mutants
US7892827B2 (en) 2004-11-26 2011-02-22 Pieris Ag Compound with affinity for the cytotoxic T lymphocyte-associated antigen (CTLA-4)
EP1877087B1 (en) 2005-04-15 2013-02-20 GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Methods and compositions for producing an enhanced immune response to a human papillomavirus immunogen
CA2609269C (en) 2005-05-26 2014-08-05 Seattle Genetics, Inc. Humanized anti-cd40 antibodies and their methods of use
JP2007026135A (ja) 2005-07-19 2007-02-01 Shimizu Corp プログラムマネジメントチャート作成支援システム
CN101300363A (zh) 2005-08-30 2008-11-05 内布拉斯加大学董事会 用于用具有改善的免疫原性的prrsv抗原免疫接种动物的方法和组合物
BRPI0617330A2 (pt) 2005-10-13 2011-07-19 Virexx Medical Corp antìgeno quimérico contendo polipeptìdeo do vìrus da hepatite c e fragmento fc para despertar uma resposta imunológica
JP2009513680A (ja) 2005-10-28 2009-04-02 セントカー・インコーポレーテツド 抗体の生成におけるｂ細胞増殖剤の使用
WO2007103048A2 (en) 2006-03-01 2007-09-13 Regents Of The University Of Colorado Tlr agonist (flagellin)/cd40 agonist/antigen protein and dna conjugates and use thereof for inducing synergistic enhancement in immunity
CN101421306B (zh) * 2006-04-19 2013-09-18 浦项工科大学校产学协力团 用于治疗和预防子宫颈癌的包含hpv多肽和免疫增强肽的组合物
CA2652599C (en) 2006-05-03 2019-09-24 Ross Kedl Cd40 agonist antibody/type1 interferon synergistic adjuvant combination, conjugates containing and use thereof as a therapeutic to enhance cellular immunity
CA2663222C (en) 2006-09-14 2018-01-16 Veveo, Inc. Methods and systems for dynamically rearranging search results into hierarchically organized concept clusters
NZ576855A (en) 2006-10-12 2012-08-31 Forerunner Pharma Res Co Ltd Diagnosis and treatment of cancer using anti-ereg antibody
US20080241139A1 (en) 2006-10-31 2008-10-02 Regents Of The University Of Colorado Adjuvant combinations comprising a microbial tlr agonist, a cd40 or 4-1bb agonist, and optionally an antigen and the use thereof for inducing a synergistic enhancement in cellular immunity
TWI422594B (zh) 2007-02-02 2014-01-11 Baylor Res Inst 經由樹狀細胞去唾液酸糖蛋白受體（ｄｃ-ａｓｇｐｒ）接合抗原呈現細胞之藥劑
CA2715042C (en) 2007-02-02 2021-02-02 Baylor Research Institute Multivariable antigens complexed with targeting humanized monoclonal antibody
WO2008097866A2 (en) 2007-02-02 2008-08-14 Baylor Research Institute Vaccines based on targeting antigen to dcir expressed an antigen-presenting cells
KR20090118981A (ko) 2007-02-23 2009-11-18 베일러 리서치 인스티튜트 Ｃｌｅｃ-6을 통한 사람 항원제시세포의 활성화
US8481314B2 (en) 2007-02-23 2013-07-09 Baylor Research Institute Activation of human antigen-presenting cells through dendritic cell lectin-like oxidized LDL receptor-1 (LOX-1)
NZ579262A (en) 2007-02-23 2012-04-27 Baylor Res Inst Therapeutic applications of activation of human antigen-presenting cells through dectin-1
PT2160401E (pt) 2007-05-11 2014-10-30 Altor Bioscience Corp Moléculas de fusão e variantes de il-15
BRPI0818154A2 (pt) 2007-11-02 2020-10-06 The Johns Hopkins University composições de peptídeo de hpv de multitipo e métodos para o tratamento ou prevenção de infecção por papilomavírus humano
JP5233505B2 (ja) 2008-03-17 2013-07-10 株式会社リコー 共同作業支援装置、共同作業支援システム、共同作業支援方法、プログラムおよび記録媒体
ES2890230T3 (es) 2008-07-16 2022-01-18 Baylor Res Institute Vacuna contra el VIH basada en el direccionamiento de Gag y Nef maximizado a células dendríticas
US20110311525A1 (en) 2008-08-29 2011-12-22 Academisch Ziekenhuis Leiden H.O.D.N. Lumc Delivery of a cd40 agonist to a tumor draining lymph node of a subject
CN103415534A (zh) * 2009-03-10 2013-11-27 贝勒研究院 靶向抗原呈递细胞的癌症疫苗
BRPI1009455A2 (pt) 2009-03-10 2016-03-01 Baylor Res Inst anticorpos anti-c40 e usos dos mesmos
JP5690814B2 (ja) 2009-04-28 2015-03-25 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー 抗原特異的な免疫応答を高めるための組成物及び方法
EP2470561A1 (en) 2009-08-27 2012-07-04 Novo Nordisk A/S Targeting tissue factor to activated platelets
TWI483734B (zh) 2009-09-14 2015-05-11 Baylor Res Inst 針對蘭格漢氏細胞（ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ ｃｅｌｌｓ）之疫苗
EP2509913A2 (en) 2009-12-10 2012-10-17 Antecy B.V. Improved catalytic process for reacting carbon dioxide with hydrogen
GB201003293D0 (en) * 2010-02-26 2010-04-14 Adjuvantix Ltd Cancer vaccine
KR20130036246A (ko) 2010-05-07 2013-04-11 베일러 리서치 인스티튜트 사람 ｃｄ8+ ｔ 세포의 수지상 세포 면역수용체(ｄｃｉｒ)-매개 교차프라이밍
WO2011158019A1 (en) * 2010-06-16 2011-12-22 Adjuvantix Limited Polypeptide vaccine
BR112013002940A2 (pt) 2010-08-13 2019-09-24 Baylor Res Institute adjuvantes de nova vacina baseados no direcionamento dos adjuvantes para os anticorpos diretamente às células que apresentam antígenos
JP5022520B2 (ja) 2010-09-01 2012-09-12 有限会社栄ライト工業所 計画作成支援プログラム及び計画作成支援システム
TW201247706A (en) 2011-03-08 2012-12-01 Baylor Res Inst Novel vaccine adjuvants based on targeting adjuvants to antibodies directly to antigen-presenting cells
WO2012129227A1 (en) 2011-03-22 2012-09-27 Baylor Research Institute Dendritic cells (dcs) targeting for tuberculosis (tb) vaccine
TW201300418A (zh) * 2011-03-25 2013-01-01 Baylor Res Inst 用於抗ｃ型肝炎病毒免疫之組合物及方法
AR088428A1 (es) * 2011-08-25 2014-06-11 Baylor Res Inst Ensayo multiplexado basado en esferas autoensambladas para anticuerpos especificos de antigenos
CN104039833B (zh) 2011-12-21 2018-01-30 瓦西博迪公司 针对hpv的疫苗
US9209965B2 (en) 2014-01-14 2015-12-08 Microsemi Semiconductor Ulc Network interface with clock recovery module on line card

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995006480A1 (en) * 1993-09-02 1995-03-09 Trustees Of Dartmouth College Methods of prolonged suppression of humoral immunity
CN1646566A (zh) * 2002-04-04 2005-07-27 莱顿大学医学中心 通过4－1bb和/或cd40的体内触发诱导抗肿瘤ctl免疫
CN102770457A (zh) * 2009-03-10 2012-11-07 贝勒研究院 靶向抗原呈递细胞的疫苗

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11926662B2 (en) 2016-09-19 2024-03-12 I-Mab Biopharma (Hangzhou) Co., Ltd. Anti-GM-CSF antibodies and uses thereof
WO2019028980A1 (zh) * 2017-08-10 2019-02-14 深圳市雅臣智能生物工程有限公司 抗人乳头瘤病毒和抗cd人源化的双靶向抗体及其组合物、制备方法和应用
CN113811547A (zh) * 2019-03-27 2021-12-17 国家医疗保健研究所 具有cd40激活特性的重组蛋白
CN111620955A (zh) * 2020-07-01 2020-09-04 北京康爱瑞浩细胞技术有限公司 一种多靶位复合抗原及其应用
CN111620955B (zh) * 2020-07-01 2022-11-08 北京康爱瑞浩细胞技术有限公司 一种多靶位复合抗原及其应用
CN114573698A (zh) * 2022-03-16 2022-06-03 沈阳三生制药有限责任公司 一种FcRn抗原结合蛋白及其制备方法和应用
CN114573698B (zh) * 2022-03-16 2023-01-06 沈阳三生制药有限责任公司 一种FcRn抗原结合蛋白及其制备方法和应用

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