TWI483734B - 針對蘭格漢氏細胞（ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ ｃｅｌｌｓ）之疫苗 - Google Patents

針對蘭格漢氏細胞（ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ ｃｅｌｌｓ）之疫苗 Download PDF

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TWI483734B
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Description

針對蘭格漢氏細胞(LANGERHANS CELLS)之疫苗
本發明大體係關於疫苗領域，且更特定言之，係關於使用高親和力抗蘭格素(anti-Langerin)單株抗體及其融合蛋白來靶向蘭格漢氏細胞(Langerhans cell)並傳遞抗原至蘭格漢氏細胞以便呈現抗原的組合物及方法。
在不限制本發明之範疇的情況下，結合抗原呈現描述本發明之背景。
樹突狀細胞(DC)為專門誘導並維持免疫反應之抗原呈現細胞(APC)且為產生耐受性及免疫性之基礎。DC捕捉抗原並呈現給CD4+ T細胞，該CD4+ T細胞接著決定抗原特異性CD8+ T細胞之數量及品質。DC有多個子集1,2 ，包括骨髓型DC及漿細胞型DC(分別為mDC及pDC)。
與蘭格素相關之先前藥劑包括頒予Duvert-Frances等人之美國專利第6,878,528號中所教示者，包括編碼哺乳動物蘭格漢氏細胞抗原之聚核苷酸，包括命名為蘭格素(Langerin)之經純化哺乳動物DC細胞表面蛋白、編碼蘭格素之核酸及特異性結合蘭格素之抗體。
其他與抗DC相關之藥劑教示於例如Bowdish等人申請之美國專利申請案第20060257412號中，該申請案包括藉由以誘導耐受性之抗原呈現細胞誘導抗原呈現來治療自體免疫疾病的方法。簡言之，此申請案教示，針對抗原呈現細胞之抗體可用於干擾抗原呈現細胞與免疫細胞(包括T細胞)之相互作用。可將肽連接至抗體，從而產生針對該等肽之免疫反應，例如與自體免疫性相關之彼等肽。
本發明包括融合至抗原之重組抗蘭格素抗體，其保留結合於細胞表面蘭格素之能力。在一態樣中，本發明包括小鼠抗蘭格素抗體(mAnti-Langerin antibody)15B10K，其中輕鏈具有核酸(SEQ ID NO.:1)及胺基酸序列(SEQ ID NO.:2)，且重鏈具有核酸(SEQ ID NO.:3)及胺基酸序列(SEQ ID NO.:4)。
在一態樣中，本發明包括小鼠抗蘭格素抗體(mAnti-Langerin antibody)2G3，其中輕鏈具有核酸(SEQ ID NO.:5)及胺基酸序列(SEQ ID NO.:6)，且重鏈具有核酸(SEQ ID NO.:7)及胺基酸序列(SEQ ID NO.:8)。
在一實施例中，本發明包括抗蘭格素融合蛋白之組合物及其製備及使用方法，該融合蛋白包含抗蘭格素抗體或其片段及位於抗蘭格素抗體之羧基端之一或多個癌肽，其中兩個或兩個以上抗原由包含至少一個糖基化位點之一或多個連接肽分開。在一態樣中，抗體片段係選自Fv、Fab、Fab'、F(ab')2 、Fc或ScFv片段。在另一態樣中，抗原為選自以下之癌抗原：
；或
,或或其片段。
在另一態樣中，抗原為選自以下之病毒抗原：
；或
在又一態樣中，一或多個肽連接子係選自：
；或
在另一實施例中，本發明包括一種抗原傳遞載體，其表現抗蘭格素抗體或其片段及位於抗蘭格素抗體之輕鏈、重鏈或輕鏈與重鏈二者之羧基端之兩個或兩個以上癌肽，其中當存在兩個或兩個以上癌肽時，癌肽由包含至少一個糖基化位點之一或多個肽連接子分開。
本發明之又一實施例包括一種增強T細胞反應之方法，該方法包含：以有效量之疫苗免疫需要疫苗接種之個體，該疫苗包含含有抗蘭格素抗體或其部分及一或多個連接至抗蘭格素抗體之羧基端之癌肽的融合蛋白。在一態樣中，癌肽係選自腫瘤相關抗原，該等腫瘤相關抗原選自：CEA、前列腺特異性抗原(PSA)、HER-2/neu、BAGE、GAGE、MAGE 1-4、6及12、MUC(黏蛋白)(例如MUC-1、MUC-2等)、GM2及GD2神經節苷脂、ras、myc、酪胺酸酶、MART(黑素瘤抗原)、MARCO-MART、細胞週期素B1、細胞週期素D、Pmel 17(gp100)、GnT-V內含子V序列(N-乙醯基葡糖胺基轉移酶V內含子V序列)、前列腺Ca psm、前列腺血清抗原(PSA)、PRAME(黑素瘤抗原)、β-索烴素、MUM-1-B(廣泛存在於黑素瘤之突變型基因產物)、GAGE(黑素瘤抗原)1、BAGE(黑素瘤抗原)2-10、c-ERB2(Her2/neu)、EBNA(埃-巴二氏病毒(Epstein-Barr Virus)核抗原)1-6、gp75、人類乳頭狀瘤病毒(HPV)E6及E7、p53、肺抗性蛋白(LRP)、Bcl-2及Ki-67。在另一態樣中，癌肽係選自腫瘤相關抗原，包含來自以下之抗原：白血病及淋巴瘤；神經腫瘤，諸如星形細胞瘤或膠質母細胞瘤；黑素瘤；乳癌；肺癌；頭頸癌；胃腸腫瘤；胃癌；結腸癌；肝癌；胰腺癌；泌尿生殖系統腫瘤，諸如子宮頸癌、子宮癌、卵巢癌、陰道癌、睪丸癌、前列腺癌或陰莖癌；骨腫瘤；血管腫瘤；或唇癌、鼻咽癌、咽癌及口腔癌、食道癌、直腸癌、膽囊癌、膽道癌、喉癌、肺癌及支氣管癌、膀胱癌、腎癌、腦癌及神經系統其他部分之癌症、甲狀腺癌；何傑金氏病(Hodgkin's disease)；非何傑金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)；多發性骨髓瘤；及白血病。
在又一態樣中，抗原為選自例如以下之感染性疾病抗原：來自H1N1流感病毒株之A型流感血球凝集素HA-1、HLA-A201-FluMP(58-66)肽(GILGFVFTL)(SEQ ID NO.: 43)四聚體、禽流感(HA5-1)、來自H1N1流感病毒株之A型流感血球凝集素HA-1(HA1-1)、來自熱纖梭菌(C. thermocellum)之錨定蛋白域(dockerin domain)(doc)、HIV gag p24(gag)，或一串HIV肽(Hipo5)、PSA(KLQCVDLHV)四聚體(SEQ ID NO.: 44)或HIV gag來源之p24-PLA。
本發明之又一實施例為製備抗蘭格素抗原融合蛋白之方法，其包含：在宿主細胞中表現包含抗蘭格素抗體或其片段之融合蛋白，該融合蛋白包含位於抗蘭格素抗體或其片段之羧基端的一或多個癌肽，其中當兩個或兩個以上癌肽由一或多個連接子分開時，至少一個連接子包含糖基化位點；及分離融合蛋白。在一態樣中，進一步分離並純化表現於宿主中之融合蛋白，其中宿主可為真核細胞。
本發明之又一實施例包括一種在活體外擴增抗原特異性T細胞的方法，其包含：自癌症患者分離周邊血液單核細胞(PBMC)；將經分離之PBMC與免疫原性量之α蘭格素-(PL-Ag)x或α蘭格素-(Ag-PL)x疫苗一起培育，其中Ag為腫瘤相關抗原且x為1至20之整數；在有效量之IL-2存在下擴增PBMC；收集細胞；及評估細胞之細胞激素產生，以判定抗癌症特異性T細胞之存在。
又一實施例包括一種藉由包含以下步驟之方法製備之腫瘤相關抗原特異性T細胞：自癌症患者分離周邊血液單核細胞(PBMC)；將經分離之PBMC與免疫原性量之α蘭格素-(PL-Ag)x或α蘭格素-(Ag-PL)x疫苗一起培育，其中Ag為腫瘤相關抗原且x為1至20之整數；在有效量之IL-2存在下擴增PBMC；收集細胞；及評估細胞之細胞激素產生，以判定抗癌症特異性T細胞之存在。
本發明亦包括一種治療性疫苗，其包含含有下式之融合蛋白：Ab-(PL-Ag)x；Ab-(Ag-PL)x；Ab-(PL-Ag-PL)x；Ab-(Ag-PL-Ag)x；Ab-(PL-Ag)x-PL；或Ab-(Ag-PL)x-Ag；其中Ab為抗蘭格素單株抗體或其片段；PL為包含至少一個糖基化位點之至少一個肽連接子；Ag為至少一個感染性疾病抗原；且x為1至20之整數。
在又一實施例中，本發明包括一種在活體外擴增抗原特異性T細胞的方法，其包含：自疑似患有感染之患者分離周邊血液單核細胞(PBMC)；將經分離之PBMC與免疫原性量之α蘭格素-(PL-Ag)x或α蘭格素-(Ag-PL)x疫苗一起培育，其中Ag為感染物之抗原且x為1至20之整數；在有效量之一或多種細胞激素存在下擴增PBMC；收集細胞；及評估細胞之細胞激素產生，以判定抗感染物特異性T細胞之存在。
本發明之另一實施例包括一種藉由包含以下之方法製備之病毒相關抗原特異性T細胞：自疑似患有病毒感染之患者分離周邊血液單核細胞(PBMC)；將經分離之PBMC與免疫原性量之α蘭格素-(PL-Ag)x或α蘭格素-(Ag-PL)x疫苗一起培育，其中Ag為病毒相關抗原且x為1至20之整數；在有效量之一或多種細胞激素存在下擴增PBMC；收集細胞；及評估細胞之細胞激素產生，以判定病毒相關抗原特異性T細胞之存在。
本發明之又一實施例為一種治療性疫苗，其包含含有下式之融合蛋白：Ab-(PL-Ag)x；Ab-(Ag-PL)x；Ab-(PL-Ag-PL)x；Ab-(Ag-PL-Ag)x；Ab-(PL-Ag)x-PL；或Ab-(Ag-PL)x-Ag；其中Ab為抗蘭格素單株抗體或其片段；PL為包含至少一個糖基化位點之至少一個肽連接子；Ag為至少一個病毒抗原；且x為1至20之整數。
本發明提供一種包含至少一個免疫球蛋白輕鏈可變域(VL)之蘭格素結合抗體(15B10)，該可變域包含編碼以下之胺基酸及核酸序列：
；或及其直接相等序列。
因此，本發明提供一種包含含有至少一個免疫球蛋白重鏈可變域(VH)之抗原結合位點的蘭格素結合抗體(15B10)，該可變域包含編碼以下之胺基酸及核酸序列：
；或及其直接相等序列。
本發明提供一種包含至少一個免疫球蛋白輕鏈可變域(VL)之蘭格素結合抗體(2G3)，該可變域包含編碼以下之胺基酸及核酸序列：
；或及其直接相等序列。
因此，本發明提供一種包含含有至少一個免疫球蛋白重鏈可變域(VH)之抗原結合位點的蘭格素結合抗體(2G3)，該可變域包含編碼以下之胺基酸及核酸序列：
；或及其直接相等序列。
在一態樣中，本發明提供一種包含經分離之免疫球蛋白輕鏈之單域蘭格素抗體，該輕鏈包含如上文所定義之輕鏈可變域(VL)。在另一態樣中，本發明提供一種包含經分離之免疫球蛋白重鏈之單域蘭格素結合分子，該重鏈包含如上文所定義之重鏈可變域(VH)。
在另一態樣中，本發明亦提供一種包含輕鏈(VL)可變域之蘭格素結合抗體，其中該蘭格素結合抗體包含至少一個包含以下之抗原結合位點：抗體輕鏈可變域(VL)，其序列中包含獲自編碼以下之胺基酸及核酸序列的高變區：
；或
；或及其直接相等序列。
在另一態樣中，本發明亦提供一種包含重鏈可變域(VH)之胺基酸及核酸序列的蘭格素結合抗體，該重鏈可變域(VH)在序列中包含獲自以下之高變區：
；或
；或及其直接相等序列。
小鼠抗蘭格素15B10K─以下分別為小鼠抗蘭格素15B10抗體cDNA之輕鏈的核苷酸及成熟蛋白質胺基酸序列。可變區殘基加有下劃線。
小鼠抗蘭格素15B10H-LV-hIgG4H-C─以下分別為融合至人類IgG4之小鼠抗蘭格素15B10抗體之重鏈可變區的核苷酸及成熟蛋白質胺基酸序列。可變區殘基加有下劃線。
小鼠抗蘭格素2G3L─以下分別為小鼠抗蘭格素2G3抗體cDNA之輕鏈的核苷酸及成熟蛋白質胺基酸序列。可變區殘基加有下劃線。
小鼠抗蘭格素2G3H─以下分別為小鼠抗蘭格素2G3抗體cDNA之重鏈的核苷酸及成熟蛋白質胺基酸序列。可變區殘基加有下劃線。
在另一實施例中，本發明包括一種包含一或多個選自以下之互補決定區的抗體：
；或其直接相等序列。在一態樣中，抗體經人類化。在另一態樣中，抗體為15B10、2G3或其人類化衍生物。在另一態樣中，本發明包括編碼15B10、2G3抗體或其人類化衍生物的核酸。
為了更完整地理解本發明之特徵及優勢，現參考[實施方式]以及隨附圖式。
雖然下文詳細論述本發明各種實施例之進行及使用，但應瞭解本發明提供許多可在多種特定情形下體現之適用創新性概念。本文所論述之特定實施例僅說明進行及使用本發明之特定方式且不限定本發明之範疇。
為促進理解本發明，下文定義許多術語。本文所定義之術語具有如一般熟習本發明相關領域之技術者通常所理解之含義。諸如「一」及「該」之術語不欲僅指單個實體，而是包括可用於說明之特定實例的一般類別。本文之術語用於描述本發明之特定實施例，但除如申請專利範圍中所述外，其使用並不限定本發明。
樹突狀細胞(DC)之子集。本發明之發明者已發現存在兩種主要DC分化路徑。骨髓路徑產生兩個子集：在諸如皮膚之複層上皮中發現的蘭格漢氏細胞(LC)及在所有其他組織中發現的間質DC(intDC)。漿細胞路徑產生漿細胞型DC(pDC)，其在病毒感染後分泌大量IFNαβ3 且以新穎機制有效地呈現病毒抗原4 (圖1)。DC及其前驅體展示顯著功能可塑性。舉例而言，pDC形成防止入侵病毒之擴增的第一障壁，從而藉由釋放干擾素來充當先天性免疫反應之一部分5,6 。單核細胞可分化成充當清道夫之巨噬細胞或誘導特異性免疫反應之DC7,8 。不同細胞激素偏向於使單核細胞在活體外分化成具有不同表型及功能之DC。因此，當經活化(例如藉由GM-CSF)之單核細胞遇到IL-4時，其產生IL-4DC9-11 。相比之下，在遇到IFNα、TNFα或IL-15後，經活化之單核細胞將分化成IFNDC12-15 、TNFDC8 或IL-15DC16 。此等DC子集中之每一者均具有由細胞表面分子與細胞激素之獨特組合所決定的常見而獨特之生物學功能。舉例而言，儘管IL-4DC為缺乏LC之未成熟細胞之同源群體，但大部分IFNDC表現CD1a及蘭格素8 。
本發明亦包括抗體(或「Ab」)或其片段之變異體及其他修飾形式，例如抗蘭格素融合蛋白(抗體可與「免疫球蛋白」互換使用)。如本文中所使用，術語「抗體或其片段」包括完整抗體或抗體之片段，例如特異性結合於例如蘭格素之免疫球蛋白的Fv、Fab、Fab'、F(ab')2 、Fc及單鏈Fv片段(ScFv)或任何生物學上有效之片段。與非人類抗體相比，人類來源之抗體或人類化抗體在人類中具有較低免疫原性或不具免疫原性，且免疫原性抗原決定基數目較少或不具免疫原性抗原決定基。抗體及其片段一般經選擇以便在人類中具有較低程度之抗原性或不具抗原性。
如本文中所使用，術語「Ag」或「抗原」係指能夠結合於免疫球蛋白分子之抗原結合區或藉由將抗原呈現於主要組織相容性抗原(MHC)細胞蛋白質而引發免疫反應(例如T細胞介導之免疫反應)的物質。如本文中所使用，「抗原」包括(但不限於)抗原性決定子、半抗原及可為肽、小分子、碳水化合物、脂質、核酸或其組合之免疫原。熟練免疫學家將認識到，當論述經加工以便呈現至T細胞之抗原時，術語「抗原」係指作為由MHC呈現至T細胞受體之T細胞抗原決定基之抗原的部分(例如肽片段)。當在B細胞介導之免疫反應的情形下以對「抗原」具特異性之抗體形式使用時，結合於抗體可變域之互補決定區(輕及重)的抗原之部分，亦即結合部分，可為線性或三維抗原決定基。在本發明之上下文中，術語抗原用於兩種情形，亦即，抗體對蛋白質抗原(蘭格素)具特異性，而且帶有一或多個肽抗原決定基用於藉由MHC呈現至T細胞。在某些情況下，由本發明之疫苗或融合蛋白傳遞之抗原在呈現前由抗原呈現細胞內化並進行加工，例如藉由使該抗體或融合蛋白之一或多個部分裂解。
如本文中所使用，術語「抗原性肽」係指被B細胞或T細胞特異性識別之多肽抗原之部分。B細胞經由產生抗體來回應於外來抗原性決定子，而T淋巴細胞介導細胞免疫性。因此，抗原性肽為由抗體識別或在MHC情形下由T細胞受體識別之抗原部分。
如本文中所使用，術語「抗原決定基」係指能夠特異性結合於免疫球蛋白或能夠由主要組織相容性複合體(MHC)蛋白質(例如I類或II類)呈現至T細胞受體之任何蛋白質決定子。抗原決定基決定子一般為適合於MHC分子凹槽內部之5至30個胺基酸長之短肽，該MHC分子將某些胺基酸側基呈現至T細胞受體且在該凹槽中具有某些其他殘基(例如由於該凹槽之特定電荷特徵所致)、肽側基及T細胞受體。一般而言，當解離常數為1 mM、100 nM或甚至10 nM時，抗體特異性結合於抗原。
如本文中所使用，術語「載體」用於兩種不同情形。當在提及疫苗時使用術語「載體」時，載體係用於描述用於引導或傳遞疫苗之抗原性部分的非抗原性部分。舉例而言，抗體或其片段可結合於引發免疫反應之抗原或與該抗原形成融合蛋白。對於細胞疫苗，用於傳遞及/或呈現抗原之載體為抗原呈現細胞，其由載有抗原之細胞傳遞。在某些情況下，細胞載體自身亦可加工並呈現抗原至T細胞，並且活化抗原特異性免疫反應。當用於核酸之情形中時，「載體」係指能夠傳遞且較佳在宿主細胞中表現一或多個相關基因或聚核苷酸序列的構築體。載體之實例包括(但不限於)病毒載體、裸DNA或RNA表現載體、與陽離子型縮合劑締合之DNA或RNA表現載體、囊封於脂質體中之DNA或RNA表現載體，及某些真核細胞(諸如生產細胞)。
本發明之組合物及方法可用於多種肽及/或蛋白質，其中抗體或其片段與肽連接子或「PL」產生穩定及/或可溶性蛋白質。
如本文中所使用，該等組合物及方法使用包含下式之抗蘭格素抗原傳遞載體：Ab-(PL-Ag)x 或Ab-(Ag-PL)x ；其中Ab為抗蘭格素抗體或其片段；PL為包含至少一個糖基化位點之至少一個肽連接子；Ag為至少一個病毒抗原；且x 為1至20之整數。
如本文中所使用，當提及蛋白質時，術語「穩定」及「不穩定」係用於描述肽或蛋白質維持其三維結構及/或活性(穩定)，或者即刻或歷經一定時間失去其三維結構及/或活性(不穩定)。如本文中所使用，術語「不可溶」係指當蛋白質產生於細胞中(例如表現於真核細胞或原核細胞中或活體外之重組蛋白質)時，其在不使用變性條件或試劑(分別例如加熱或化學變性劑)之情況下不溶於溶液中。已發現，本文中教示之抗體或其片段及連接子將不可溶及/或不穩定之抗體融合蛋白與肽轉化成穩定及/或可溶性蛋白質。穩定性相對不穩定性之另一實例為，當在相同溶液中量測時，具有穩定構形之蛋白質域的熔融溫度(Tm )比該蛋白質之不穩定域的熔融溫度高。當在相同溶液中量測時，當Tm 差異為至少約2℃、更佳約4℃、更佳約7℃、更佳約10℃、甚至更佳約15℃、更佳約20℃、甚至更加約25℃且最佳約30℃時，一個域比另一個域穩定。
如本文中所使用，「聚核苷酸」或「核酸」係指呈單股或雙股形式之脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸之股(包括天然核苷酸之已知類似物)。雙股核酸序列將包括互補序列。聚核苷酸序列可編碼與一或多個連接子形成融合蛋白之免疫球蛋白之可變區及/或恆定區結構域。為供本發明使用，可利用工程改造在位於抗體之重鏈及/或輕鏈之羧基端的位置中引入多選殖位點(MCS)，以允許同框插入用於表現於連接子之間的肽。如本文中所使用，術語「經分離之聚核苷酸」係指基因組、cDNA或合成來源之聚核苷酸或其一些組合。根據其來源，「經分離之聚核苷酸」(1)不與所有或部分自然界中該「經分離之聚核苷酸」所發現於其中之聚核苷酸締合；(2)可操作地連接至在自然界中其並不連接之聚核苷酸；或(3)在自然界中不作為較大序列之一部分存在。熟習此項技術者將認識到，為了設計及實施具有式Ab-(PL-Ag)x 或Ab-(Ag-PL)x 之載體，可使用此項技術中已知之技術在核酸層面進行操縱，諸如John Wiley及Sons在Current Protocols in Molecular Biology,2007中所教示之技術，相關部分係以引用的方式併入本文中。簡言之，可使用聚合酶鏈反應、寡核苷酸或聚合酶鏈反應片段之酶促插入將編碼Ab、Ag及PL之核酸序列插入載體中，該載體可為表現載體。為促進將(PL-Ag)x 或(Ag-PL)x 插入抗體輕鏈、重鏈或二者之羧基端，可用抗體序列對多選殖位點(MCS)之序列進行工程改造。
如本文中所使用，術語「多肽」係指胺基酸之聚合物，而非指特定長度之產物；因此，多肽之定義內包括肽、寡肽及蛋白質。此術語亦並非指或排除多肽之表現後修飾，例如糖基化、乙醯基化、磷酸化及其類似方面。該定義中包括例如含有一或多個胺基酸類似物(包括例如非天然胺基酸等)之多肽、具有經取代鍵聯之多肽、以及此項技術中已知天然存在及非天然存在之其他修飾。術語「結構域」或「多肽域」係指在天然構形中摺疊成單一球形區域且可展現個別結合或功能性質的多肽序列。
「來源於」指定核酸序列之多肽或胺基酸序列係指具有與該序列中所編碼之多肽一致之胺基酸序列的多肽或其部分，其中該部分由至少3至5個胺基酸、較佳至少4至7個胺基酸、更佳至少8至10個胺基酸且甚至更佳至少11至15個胺基酸組成，或在免疫學上可用該序列中所編碼之多肽標識。此術語亦包括自指定核酸序列表現之多肽。
如本文中所使用，「醫藥學上可接受之載劑」係指當與本發明之免疫球蛋白(Ig)融合蛋白組合時，允許Ig保留生物活性且一般不與個體之免疫系統反應的任何物質。實例包括(但不限於)標準醫藥載劑，諸如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳液，諸如油/水乳液，及各種類型之濕潤劑。某些稀釋劑可用於本發明，例如用於氣霧劑或非經腸投藥，其可為磷酸鹽緩衝鹽水或生理(0.85%)鹽水。
本發明提供一種包含至少一個免疫球蛋白輕鏈可變域(VL)之蘭格素結合抗體(15B10)，該可變域包含編碼以下之胺基酸及核酸序列：
；或及其直接相等序列。
因此，本發明提供一種包含含有至少一個免疫球蛋白重鏈可變域(VH)之抗原結合位點的蘭格素結合抗體(15B10)，該可變域包含編碼以下之胺基酸及核酸序列：
；及其直接相等序列。
本發明提供一種包含至少一個免疫球蛋白輕鏈可變域(VL)之蘭格素結合抗體(2G3)，該可變域包含編碼以下之胺基酸及核酸序列：
；或及其直接相等序列。
因此，本發明提供一種包含含有至少一個免疫球蛋白重鏈可變域(VH)之抗原結合位點的蘭格素結合抗體(2G3)，該可變域包含編碼以下之胺基酸及核酸序列：
；及其直接相等序列。
在一態樣中，本發明提供一種包含經分離之免疫球蛋白輕鏈之單域蘭格素抗體，該輕鏈包含如上文所定義之輕鏈可變域(VL)。在另一態樣中，本發明提供一種包含經分離之免疫球蛋白重鏈之單域蘭格素結合分子，該重鏈包含如上文所定義之重鏈可變域(VH)。
在另一態樣中，本發明亦提供一種包含輕鏈(VL)可變域之蘭格素結合抗體，其中該蘭格素結合抗體包含至少一個包含以下之抗原結合位點：抗體輕鏈可變域(VL)，其序列中包含獲自編碼以下之胺基酸及核酸序列的高變區：
；或
；及其直接相等序列。
在另一態樣中，本發明亦提供一種包含重鏈可變域(VH)之胺基酸及核酸序列的蘭格素結合抗體，該重鏈可變域(VH)在序列中包含獲自以下之高變區：
；或
；及其直接相等序列。
除非另外指明，否則任何多肽鏈在本文中均描述為具有起始於N末端且結束於C末端之胺基酸序列。當抗原結合位點包括VH域及VL域時，此等域可位於同一多肽分子上或各域較佳可處於不同鏈上，VH域為免疫球蛋白重鏈或其片段之一部分且VL為免疫球蛋白輕鏈或其片段之一部分。
如本文中所使用，術語「蘭格素結合分子」或「蘭格素結合抗體」係指能夠單獨或與具有一或多個本文教示之VL及VH CDR(在某些情況下，2、3、4、5或全部6個CDR)之其他分子聯合結合於蘭格素抗原的任何分子。結合反應可藉由標準方法(定性檢定)顯示，包括例如藉由阻斷其他分子結合於蘭格素進行測定之生物檢定，或任何種類之結合或活性檢定(例如免疫反應之活化、降低或調節)，其中參考陰性對照測試，在陰性對照測試中使用具有無關特異性但具有相同同型之抗體，例如抗CD25或抗CD80抗體。
本發明亦可製成單鏈抗體，抗體之重鏈可變域與輕鏈可變域經由一種通常包括10至30個胺基酸、較佳15至25個胺基酸之肽連接子共價結合。因此，該結構不包括重鏈及輕鏈之恆定部分，且咸信該小肽間隔基之抗原性應低於一個完整恆定部分。
如本文中所使用，術語「嵌合抗體」係指重鏈或輕鏈或二者之恆定區為人類來源而重鏈及輕鏈二者之可變域為非人類(例如小鼠、倉鼠或大鼠)來源或為人類來源但來源於不同人類抗體的抗體。
如本文中所使用，術語「CDR移植抗體」係指高變互補決定區(CDRs)來源於供體抗體，諸如非人類(例如小鼠)抗體或不同人類抗體，而免疫球蛋白之所有或實質上所有其他部分(例如可變域之保守區，亦即構架區)來源於接受體抗體(在人類化抗體情況下，為人類來源抗體)的抗體。CDR移植抗體在構架區中，例如在鄰近高變區之構架區部分中，可包括供體序列之少許胺基酸。
如本文中所使用，術語「人類抗體」係指重鏈及輕鏈之恆定區及可變區均為人類來源或實質上與人類來源之序列一致而不必來自相同抗體的抗體，且包括由小鼠產生而其中小鼠、倉鼠或大鼠免疫球蛋白之可變及恆定部分基因已經其人類對應物替代之抗體，例如EP 0546073 B1、美國專利第5,545,806號、美國專利第5,569,825號、美國專利第5,625,126號、美國專利第5,633,425號、美國專利第5,661,016號、美國專利第5,770,429號、EP專利第0 438474 B1號及EP專利第0 463151 B1號中一般術語中所描述，相關部分係以引用的方式併入本文中。
本發明之蘭格素結合抗體包括人類化抗體，其包含獲自抗蘭格素15B10或2G3抗體之CDRs。嵌合抗體之一個實例包括重鏈及輕鏈二者之可變域均為人類來源，例如抗蘭格素15B10或2G3抗體之可變域。恆定區結構域較佳亦包含適合之人類恆定區結構域，例如US Department of Health and Human Services,Public Health Service,National Institute of Health之Kabat E. A.等人於「Sequences of Proteins of Immunological Interest」中所描述。
高變區可與任何種類之構架區締合，例如與人類來源之構架區締合。Kabat E. A已描述適合構架區。一重鏈構架為重鏈構架，例如抗蘭格素15B10或2G3抗體之彼等重鏈構架，包括輕鏈構架區FR1L區、FR2L區、FR3L區及FR4L區之序列。以類似方式，抗蘭格素15B10或2G3重鏈構架包括FR1H區、FR2H區、FR3H區及FR4H區之序列。CDR可添加至人類抗體構架中，諸如頒予Rybak等人之7,456,260中所描述者，該專利教示新型人類可變鏈構架區及包含該等構架區之人類化抗體，相關部分及構架序列係以引用的方式併入本文中。為了在基因層面實現移植，本發明亦包括VL區及VH區以及完整抗體及其人類化型式之基礎核酸序列。本發明之核酸序列分別包括抗蘭格素抗體輕鏈及重鏈，以及用於相同胺基酸序列及其在核酸或胺基酸層面上具有85%、90%、95%或100%序列一致性之保守性變型之包括可變密碼子使用的彼等核酸序列。同樣，CDR可個別地、成組地或者2個、3個、4個或5個或全部一起在核酸或胺基酸層面具有85%、90%、95%或100%序列一致性。
通常在非人類系統中，例如在小鼠中發展針對在所有人類中天然發現之蛋白質產生之單株抗體，且因而該等抗體通常為非人類蛋白質。作為此舉之直接結果，由融合瘤產生之異種抗體當投與人類時會引發主要由異種免疫球蛋白之恆定部分介導之不當免疫反應。異種抗體傾向於引發宿主免疫反應，從而限制該等抗體之使用，因為其無法歷經較長時間投與。因此，使用在投與人類時不大可能引發實質異源反應之單鏈抗體、單域抗體、嵌合抗體、CDR移植抗體或尤其人類抗體特別適用。本發明包括在胺基酸序列中具有微小改變之抗體，諸如僅作為具有實質上相同性質之原始蛋白質之等位基因形式的一個、少許或甚至數個胺基酸之缺失、添加或取代。
可在各種檢定中便利地測試對蘭格素與其受體之結合的抑制，包括下文中所描述之該等檢定。術語「達到相同程度」意謂在上文提及之檢定中之一者中，參考物與相等分子在統計基礎上展現基本上相同之蘭格素結合抑制曲線。舉例而言，所用檢定可為藉由本發明之結合分子競爭性抑制蘭格素之結合的檢定。
一般而言，人類抗蘭格素抗體包含以下至少一者：(a)一條輕鏈，其包含具有與15B10或2G3抗體起始於1位胺基酸且結束於107位胺基酸實質上一致之胺基酸序列的可變域及人類輕鏈之恆定部分；及(b)一條重鏈，其包含具有與15B10或2G3抗體實質上一致之胺基酸序列的可變域及人類重鏈之恆定部分。人類重鏈之恆定部分可為γ1、γ2、γ3、γ4、μ、β2或δ或ε型，較佳為γ型，而人類輕鏈之恆定部分可為κ或λ型(其包括λ1、λ2及λ3亞型)但較佳為κ型。可變域及恆定域之一般位置之胺基酸序列在此項技術中熟知，且一般遵循Kabat命名法。
本發明之蘭格素結合分子可藉由重組DNA技術產生。鑒於此，必須構築一或多個編碼該結合分子之DNA分子，置於適當控制序列下，並轉移至適合宿主生物體中以供表現。
因此，以極其一般之方式提供：(i)編碼本發明之單域蘭格素結合分子、本發明之單鏈蘭格素結合分子、本發明之蘭格素結合分子之重鏈或輕鏈或其片段的DNA分子；及(ii)藉由重組方法使用本發明之DNA分子來產生本發明之蘭格素結合分子。
當前技術現狀為此項技術中之熟練工作者可根據本文提供之資訊合成本發明之DNA分子，亦即高變區之胺基酸序列及其編碼DNA序列。一種構築可變域基因之方法描述於例如EPA 239 400中，相關部分係以引用的方式併入本文中。簡言之，選殖編碼MAb之可變域的基因。確定編碼構架區及高變區之DNA區段，並且移除編碼高變區之DNA區段，使得編碼構架區之DNA區段在接合點處與適合限制位點融合在一起。可在適當位置藉由標準程序對DNA分子進行突變誘發來產生限制位點。根據針對15B10或2G3提供之序列(分別為胺基酸及核酸序列)，藉由DNA合成來製備雙股合成CDR卡匣。此等卡匣通常具備黏性末端，以便其可連接於構架之接合點。
不必自生產融合瘤細胞株獲得mRNA來獲得編碼本發明之蘭格素結合分子之DNA構築體。舉例而言，PCT申請案WO 90/07861提供用於藉由重組DNA技術僅考慮關於基因核苷酸序列之書面資訊來產生抗體之完整說明，相關部分係以引用的方式併入本文中。簡言之，該方法包含合成許多寡核苷酸、藉由PCR方法對其進行擴增，及對其進行拼接以提供所要DNA序列。
包含適合啟動子或編碼重鏈及輕鏈恆定部分之基因的表現載體可公開獲得。因此，一旦製備本發明之DNA分子，則其即可便利地轉移至適當表現載體中。編碼單鏈抗體之DNA分子亦可藉由標準方法製備，例如如WO 88/1649中所描述。鑒於上述內容，融合瘤或細胞株寄存不必遵從充分描述之準則。
舉例而言，製備特異性結合於蘭格素之第一DNA構築體及第二DNA構築體。簡言之，第一DNA構築體編碼抗體之輕鏈、其CDR或片段，且包含：a)編碼可變域之第一部分，其替代地包含構架區及高變區，高變區依次為CDR1L、CDR2L及CDR3L，其胺基酸序列見於SEQ ID NO. 45-48中；此第一部分起始於編碼該可變域之第一個胺基酸的密碼子且結束於編碼該可變域之最後一個胺基酸的密碼子；及b)編碼輕鏈恆定部分或其片段的第二部分，其起始於編碼重鏈恆定部分之第一個胺基酸的密碼子且結束於編碼該恆定部分或其片段之最後一個胺基酸的密碼子，接著為終止密碼子。
第一部分編碼具有與15B10或2G3之胺基酸序列實質上一致之胺基酸序列的可變域。第二部分編碼人類重鏈之恆定部分，更佳為人類γ1鏈之恆定部分。此第二部分可為基因組起點之DNA片段(包含內含子)或cDNA片段(不含內含子)。
第二DNA構築體編碼重鏈或其片段，且包含：a)編碼可變域之第一部分，其替代地包含構架區及高變區；高變區為CDR1H及視情況選用之CDR2H及CDR3H，其胺基酸序列見於15B10或2G3之胺基酸序列；此第一部分起始於編碼該可變域之第一個胺基酸的密碼子且結束於編碼該可變域之最後一個胺基酸的密碼子；及b)編碼重鏈恆定部分或其片段之第二部分，其起始於編碼輕鏈恆定部分之第一個胺基酸的密碼子且結束於編碼該恆定部分或其片段之最後一個胺基酸的密碼子，接著為終止密碼子。
第一部分編碼具有與15B10或2G3之胺基酸序列實質上一致之胺基酸序列的可變域。第一部分具有15B10或2G3抗體起始於1位核苷酸且結束於321位核苷酸之核苷酸序列。又，第二部分較佳編碼人類輕鏈之恆定部分，更佳為人類κ鏈之恆定部分。
本發明亦包括蘭格素結合分子，其中CDR1L、CDR2L、CDR3L、CDR1H、CDR2H或CDR3H或構架之一或多個殘基，通常僅少數(例如FR1-4L或H)，自15B10或2G3抗體之殘基改變；藉由例如相應DNA序列之定點突變誘發。本發明包括編碼該等改變之蘭格素結合分子的DNA序列。詳言之，本發明包括蘭格素結合分子，其中CDR1L、CDR2L及/或CDR3L之一或多個殘基已自15B10或2G3抗體之殘基改變，且CDR1H、CDR2H及/或CDR3H之一或多個殘基已自15B10或2G3抗體之殘基改變。
各DNA構築體置於適合控制序列之控制下，特定言之，置於適合啟動子之控制下。可使用任何種類之啟動子，其限制條件為該啟動子適合於DNA構築體將轉移至其中以供表現之宿主生物體。然而，若表現在哺乳動物細胞中進行，則免疫球蛋白基因啟動子可用於B細胞中。第一部分及第二部分可由內含子分開，且強化子宜位於第一部分與第二部分之間的內含子中。存在此種轉錄但並不轉譯之強化子可有助於有效轉錄。在特定實施例中，第一及第二DNA構築體包含例如重鏈人類基因之強化子。
可在細胞培養物或轉殖基因動物中產生所要抗體。適合轉殖基因動物可根據標準方法獲得，該等標準方法包括將置於適合控制序列下的第一及第二DNA構築體微注射至卵中；將如此製備之卵轉移至適當假孕雌性動物中，及選擇表現所要抗體之後代。
本發明亦提供一種能夠在原核或真核細胞株中複製之表現載體，其包含至少一種上文所述之DNA構築體。含有DNA構築體之各表現載體接著轉移至適合宿主生物體中。當DNA構築體獨立地插入兩種表現載體上時，其可獨立地轉移，亦即每個細胞一種類型之載體，或共同轉移，此後者可能較佳。適合宿主生物體可為細菌、酵母或哺乳動物細胞株，此後者較佳。哺乳動物細胞株更佳具有淋巴來源，例如骨髓瘤、融合瘤或正常永生化B細胞，其合宜地不表現任何內源性抗體重鏈或輕鏈。
當於細胞培養物中產生抗體鏈時，DNA構築體必須首先插入單一表現載體中或插入兩個獨立但相容之表現載體中，後者可能較佳。為在哺乳動物中表現，蘭格素結合分子之編碼序列較佳整合於宿主細胞DNA中允許或有利於以高含量表現蘭格素結合分子之基因座中。
在本發明之另一態樣中，提供一種用於產生蘭格素結合分子之方法，該方法包含：(i)培養經如上文所定義之表現載體轉型之生物體；及(ii)自培養物回收蘭格素結合分子。
根據本發明，已發現抗蘭格素15B10或2G3抗體似乎對人類蘭格素之抗原決定基具有結合特異性。因此，最令人驚訝的是，針對此抗原決定基之抗體，例如抗蘭格素15B10或2G3，能夠有效地將抗原傳遞至樹突狀細胞(DC)中。對成熟人類蘭格素之抗原決定基具有結合特異性之抗體，特定言之嵌合抗體及CDR移植抗體及尤其人類抗體；及該等抗體用於DC抗原裝載之用途為新穎的且包括在本發明之範疇內。
為了使用本發明之抗蘭格素抗體來治療適應症，適當劑量固然將視例如欲採用之本文中所揭示之抗體、宿主、投藥模式及所治療病狀的性質及嚴重程度而變化。然而，在預防性使用中，一般在每公斤體重約0.05毫克至約10毫克、更通常每公斤體重約0.1毫克至約5毫克之劑量下獲得令人滿意之結果。用於預防性使用之給藥頻率通常將在約每週一次至約每3個月一次之範圍內，更通常在約每2週一次至約每10週一次之範圍內，例如每4至8週一次。本發明之抗蘭格素抗體可非經腸投與、靜脈內投與至例如肘前靜脈或其他周邊靜脈、肌肉內投與或皮下投與。
本發明之醫藥組合物可以習知方式製造，例如呈凍乾形式。對於即刻投藥，將其溶解於適合水性載劑中，例如無菌注射用水或無菌緩衝生理鹽水。若認為需要製成較大體積之溶液以供藉由輸注而非快速注射來投與，則在調配時宜在鹽水中併入人血清白蛋白或患者自身之肝素化血液。存在過量之該生理惰性蛋白質防止抗體因吸附於與輸注溶液一起使用之容器及管道之壁上而導致損失。若使用白蛋白，則適合濃度為鹽水溶液之0.5重量%至4.5重量%。
本發明之一實施例提供一種免疫共軛物，其包含本發明之人類化抗體(例如人類化抗蘭格素抗體)連接至一或多個效應分子、抗原及/或可偵測標記。效應分子較佳為治療分子，諸如包含一或多個T細胞抗原決定基之一或多個肽、毒素、小分子、細胞激素或趨化因子、酶或放射性標記。
例示性毒素包括(但不限於)假單胞菌外毒素或白喉毒素。小分子之實例包括(但不限於)化學治療化合物，諸如紫杉酚(taxol)、小紅莓(doxorubicin)、依託泊苷(etoposide)及博來黴素(bleiomycin)。例示性細胞激素包括(但不限於)IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6及IL-12、IL-17及IL-25。例示性酶包括(但不限於)RNA酶、DNA酶、蛋白酶、激酶及卡斯蛋白酶(caspase)。例示性放射性同位素包括(但不限於)32 P及125 I。
如本文中所使用，術語「抗原決定基」係指能夠刺激免疫反應之分子或物質。在一實例中，抗原決定基包括(但不限於)多肽及編碼多肽之核酸，其中若多肽被加工並呈現於主要組織相容性複合體(MHC)分子上，則核酸表現為多肽能夠刺激免疫反應。一般而言，抗原決定基包括呈現於細胞表面上之非共價結合於I類或II類MHC之結合凹槽的肽，使得其可與T細胞受體及相應T細胞附屬分子相互作用。
抗原之蛋白水解加工。由MHC呈現於抗原呈現細胞上之抗原決定基為較大肽或蛋白質抗原前驅體之裂解肽或產物。對於MHCI抗原決定基，蛋白質抗原通常由常駐於細胞中之蛋白酶體消化。細胞內蛋白酶體消化產生約3至23個胺基酸長之肽片段，其接著裝載於MHC蛋白上。細胞內或細胞外環境中之其他蛋白水解活性可進一步修整及加工此等片段。MHC II類抗原決定基之加工一般經由來自溶酶體/內體代謝區之細胞內蛋白酶進行。在一實施例中，本發明包括連接至抗蘭格素抗體(或其片段)的預加工肽，該抗蘭格素抗體(或其片段)將該等肽(針對該等肽具有所尋求之增強之免疫反應)直接引導至抗原呈現細胞。
為了鑑別可能有效作為免疫原性化合物之抗原決定基，單獨預測MHC結合為適用的但往往不充分。本發明包括特異性鑑別抗原內之抗原決定基之方法，該等抗原決定基最可能對抗原呈現細胞及反應T細胞之特定來源產生所尋求之免疫反應。
本發明提供用於使用患者自身之抗原呈現細胞及T細胞譜系來鑑別最可能產生所要免疫反應之抗原決定基的快速且容易的檢定。本發明之組合物及方法適用於任何蛋白質序列，從而允許使用者鑑別能夠結合於MHC並適當地呈現至將對抗原反應之T細胞的抗原決定基。因此，本發明不侷限於任何特定目標或醫學病狀，而是涵蓋來自任何適用來源之MHC抗原決定基。
如本文中所使用，術語「鑲飾(veneered)」係指在人類化抗體構架上將獲自非人類抗體(例如小鼠、大鼠或倉鼠)之抗原結合位點或CDR置於人類重鏈及輕鏈保守性結構構架區(FR)中，例如置於輕鏈或重鏈聚核苷酸中，以便將非人類抗體之特異性「移植」至來自例如SEQ ID NO:45-48或編碼彼等序列之核酸的人類構架中，如熟習此項技術者將顯而易知。表現鑲飾抗體之聚核苷酸表現載體可為用於表現重組人類抗體的經轉染哺乳動物細胞，該等重組人類抗體展現非人類抗體之抗原特異性且將經歷增強其表現、穩定性、溶解性或其組合的轉譯後修飾。
抗原。
用於本發明之病毒抗原之實例包括(但不限於)例如HIV、HCV、CMV、腺病毒、反轉錄病毒、小核糖核酸病毒等。反轉錄病毒抗原之非限制性實例諸如來自人類免疫缺乏病毒(HIV)抗原之反轉錄病毒抗原，諸如gag、pol及env基因之基因產物、Nef蛋白、逆轉錄酶及其他HIV組分；肝炎病毒抗原，諸如B型肝炎病毒之S、M及L蛋白質、B型肝炎病毒之前S抗原，及其他肝炎(例如A、B及C型肝炎)病毒組分，諸如C型肝炎病毒RNA；流感病毒抗原，諸如血球凝集素及神經胺酸酶，及其他流感病毒組分；麻疹病毒抗原，諸如麻疹病毒融合蛋白及其他麻疹病毒組分；風疹病毒抗原，諸如蛋白質E1及E2及其他風疹病毒組分；輪狀病毒抗原(rotaviral antigen)，諸如VP7sc及其他輪狀病毒組分；細胞巨大病毒抗原，諸如包膜醣蛋白B及其他細胞巨大病毒抗原組分；呼吸道融合性病毒抗原，諸如RSV融合蛋白、M2蛋白及其他呼吸道融合性病毒抗原組分；單純性疱疹病毒抗原，諸如即刻早期蛋白(immediate early protein)、醣蛋白D及其他單純性疱疹病毒抗原組分；水痘帶狀皰狀病毒抗原，諸如gpI、gpII及其他水痘帶狀皰狀病毒抗原組分；日本腦炎病毒抗原，諸如蛋白質E、M-E、M-E-NS1、NS1、NS1-NS2A、80% E及其他日本腦炎病毒抗原組分；狂犬病病毒抗原，諸如狂犬病醣蛋白、狂犬病核蛋白及其他狂犬病病毒抗原組分。關於病毒抗原之其他實例，請參看Fundamental Virology,第2版,Fields,B. N.及Knipe,D. M.編(Raven Press,New York,1991)。至少一種病毒抗原可為來自腺病毒、反轉錄病毒、小核糖核酸病毒、疱疹病毒、輪狀病毒、漢坦病毒(hantavirus)、冠狀病毒(coronavirus)、披衣病毒(togavirus)、黃病毒(flavirvirus)、彈狀病毒(rhabdovirus)、副黏病毒(paramyxovirus)、正黏病毒(orthomyxovirus)、崩芽病毒(bunyavirus)、沙狀病毒(arenavirus)、里奧病毒(reovirus)、乳頭狀瘤病毒(papilomavirus)、小病毒(parvovirus)、痘病毒(poxvirus)、嗜肝DNA病毒(hepadnavirus)或海綿狀病毒(spongiform virus)之肽。在某些特定非限制性實例中，至少一種病毒抗原為獲自HIV、CMV、A型肝炎、B型肝炎及C型肝炎、流感、麻疹、脊髓灰質炎、天花、風疹；呼吸道融合性病毒、單純性疱疹病毒、水痘帶狀皰狀病毒、埃巴二氏病毒、日本腦炎病毒、狂犬病病毒、流感病毒及/或感冒病毒中之至少一者的肽。
在一態樣中，一或多個抗原肽係選自以下之至少一者：Nef(66-97)：VGFPVTPQVPLRPMTYKAAVDLSHFLKEKGGL(SEQ ID NO.: 31)；Nef(116-145)：HTQGYFPDWQNYTPGPGVRYPLTFGWLYKL(SEQ ID NO.: 32)；Gag p17(17-35)：EKIRLRPGGKKKYKLKHIV(SEQ ID NO.: 33)；Gag p17-p24(253-284)：NPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILD(SEQ ID NO.: 34)；或Pol 325-355(RT 158-188)：AIFQSSMTKILEPFRKQNPDIVIYQYMDDLY(SEQ ID NO.: 35)。在一態樣中，融合蛋白肽由一或多個選自以下之連接子分開：SSVSPTTSVHPTPTSVPPTPTKSSP(SEQ ID NO.: 39)；PTSTPADSSTITPTATPTATPTIKG(SEQ ID NO.: 40)；TVTPTATATPSAIVTTITPTATTKP(SEQ ID NO.: 41)；或TNGS ITVAATAPTVTPTVNAT PSAA(SEQ ID NO.: 42)。
可使用本發明之抗蘭格素抗原疫苗傳遞之抗原目標包括編碼諸如病毒抗原、細菌抗原、真菌抗原或寄生蟲抗原之抗原的基因。病原體包括錐體蟲、條蟲、蛔蟲、蠕蟲、瘧原蟲。可以此方式靶向腫瘤標記，諸如胚胎抗原或前列腺特異性抗原。其他實例包括：HIV env蛋白及B型肝炎表面抗原。出於疫苗接種之目的投與本發明之載體將要求載體相關抗原具有足夠非免疫原性以便能夠長期表現轉殖基因，而針對該轉殖基因之強免疫反應將為所需要的。在某些情況下，可能僅要求偶爾對個體進行疫苗接種，諸如每年一次或兩年一次，並提供針對感染物之長期免疫保護。用於載體中並且最終用為本發明之抗原的生物體、過敏原及核酸及胺基序列之特定實例可見於美國專利第6,541,011號中，相關部分係以引用的方式併入本文中，特定言之，匹配可用於本發明之生物體與特定序列之表。
與本文中所揭示之抗蘭格素抗原疫苗一起使用之細菌抗原包括(但不限於)例如細菌抗原，諸如百日咳毒素、絲狀血球凝集素、黏附素(pertactin)、FI M2、FI M3、腺苷酸環化酶及其他百日咳菌細菌抗原組分；白喉菌細菌抗原，諸如白喉毒素或類毒素及其他白喉菌細菌抗原組分；破傷風細菌抗原，諸如破傷風毒素或類毒素及其他破傷風細菌抗原組分；鏈球菌細菌抗原，諸如M蛋白質及其他鏈球菌細菌抗原組分；革蘭氏陰性桿菌(gram-negative bacilli)細菌抗原，諸如脂多醣及其他革蘭氏陰性細菌抗原組分；結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)細菌抗原，諸如黴菌酸(mycolic acid)、熱休克蛋白65(HSP65)、30 kDa主要分泌蛋白質、抗原85A及其他分枝桿菌抗原組分；幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori bacterial)細菌抗原組分；肺炎球菌細菌抗原，諸如肺炎球菌溶血素(pneumolysin)、肺炎球菌莢膜多醣及其他肺炎球菌細菌抗原組分；流感嗜血桿菌(haemophilus influenza)細菌抗原，諸如莢膜多醣及其他流感嗜血桿菌細菌抗原組分；炭疽細菌抗原，諸如炭疽保護性抗原及其他炭疽細菌抗原組分；立克次體(rickettsiae)細菌抗原，諸如rompA及其他立克次體細菌抗原組分。本文所述之細菌抗原亦包括任何其他細菌、分枝桿菌、黴漿菌、立克次體或披衣菌抗原。部分或完整病原體亦可為：流感嗜血桿菌；惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)；腦膜炎雙球菌(neisseria meningitidis)；肺炎鏈球菌(streptococcus pneumoniae)；淋病雙球菌(neisseria gonorrhoeae)；傷寒血清型沙門桿菌(salmonella serotype typhi)；志賀桿菌(shigella)；霍亂弧菌(vibrio cholerae)；登革熱(DengueFever)；腦炎；日本腦炎(Japanese encephalitis)；萊姆病(lyme disease)；鼠疫耶氏桿菌(Yersinia pestis)；西尼羅河病毒(west nile virus)；黃熱病；兔熱病(tularemia)；肝炎(病毒型；細菌型)；RSV(呼吸道融合性病毒)；HPIV 1及HPIV 3；腺病毒；天花；過敏及癌症。
與本發明之組合物及方法一起使用之真菌抗原包括(但不限於)例如念珠菌真菌抗原組分；組織胞漿菌真菌抗原，諸如熱休克蛋白60(HSP60)及其他組織胞漿菌真菌抗原組分；隱球菌真菌抗原，諸如莢膜多醣及其他隱球菌真菌抗原組分；球孢子菌真菌抗原，諸如小球抗原及其他球孢子菌真菌抗原組分；及癬真菌抗原，諸如發癬菌素(trichophytin)及其他球孢子菌真菌抗原組分。
原蟲及其他寄生蟲抗原之實例包括(但不限於)例如惡性瘧原蟲抗原，諸如裂殖子表面抗原、子孢子表面抗原、環子孢子抗原、配子母細胞/配子表面抗原、血液階段抗原pf 155/RESA及其他瘧原蟲抗原組分；弓形蟲抗原，諸如SAG-1、p30及其他弓形蟲抗原組分；血吸蟲抗原，諸如麩胱甘肽-S-轉移酶、副肌球蛋白及其他血吸蟲抗原組分；利什曼原蟲(leishmania)主抗原及其他利什曼原蟲抗原，諸如gp63、脂磷聚糖(lipophosphoglycan)及其結合蛋白及其他利什原曼蟲抗原組分；及克氏錐蟲(trypanosoma cruzi)抗原，諸如75-77 kDa抗原、56 kDa抗原及其他錐蟲抗原組分。
一般將基於許多因素選擇可使用本發明之抗蘭格素抗原疫苗來靶向之抗原，包括：內化可能性、免疫細胞特異性程度、所靶向免疫細胞之類型、免疫細胞成熟及/或活化程度及其類似因素。在此實施例中，抗體可為單特異性抗體或雙特異性抗體，其包括一個抗蘭格素結合域及一個針對第二抗原之結合域，例如用於樹突狀細胞之細胞表面標記，諸如MHC I類、MHC II類、B7-2、CD18、CD29、CD31、CD43、CD44、CD45、CD54、CD58、CD83、CD86、CMRF-44、CMRF-56、DCIR及/或Dectin-1及其類似物；而在某些情況下，亦不存在CD2、CD3、CD4、CD8、CD14、CD15、CD16、CD19、CD20、CD56及/或CD57。用於抗原呈現細胞之細胞表面標記之實例包括(但不限於)MHC I類、MHC II類、CD45、B7-1、B7-2、IFN-γ受體及IL-2受體、ICAM-1及/或Fcγ受體。用於T細胞之細胞表面標記之實例包括(但不限於)CD3、CD4、CD8、CD14、CD20、CD11b、CD16、CD45及HLA-DR。
細胞表面上用於傳遞之目標抗原包括腫瘤抗原所特有之抗原，通常將來源於腫瘤組織細胞的細胞表面、細胞質、細胞核、細胞器及其類似物。本發明抗體部分之腫瘤目標之實例包括(但不限於)血液學癌症，諸如白血病及淋巴瘤；神經腫瘤，諸如星形細胞瘤或膠質母細胞瘤；黑素瘤；乳癌；肺癌；頭頸癌；胃腸腫瘤，諸如胃癌或結腸癌；肝癌；胰腺癌；泌尿生殖系統腫瘤，諸如子宮頸癌、子宮癌、卵巢癌、陰道癌、睪丸癌、前列腺癌或陰莖癌；骨腫瘤；血管腫瘤；或唇癌、鼻咽癌、咽癌及口腔癌、食道癌、直腸癌、膽囊癌、膽道癌、喉癌、肺癌及支氣管癌、膀胱癌、腎癌、腦癌及神經系統其他部分之癌症、甲狀腺癌；何傑金氏病；非何傑金氏淋巴瘤；多發性骨髓瘤；及白血病。
可使用本發明單獨或組合傳遞至免疫細胞以供抗原呈現之抗原的實例包括腫瘤蛋白質，例如突變型致癌基因；與腫瘤相關之病毒蛋白質；及腫瘤黏蛋白及糖脂。抗原可為與腫瘤相關之病毒蛋白質，該等病毒蛋白質將為來自上文所述病毒類別者。某些抗原可為腫瘤所特有(一個子集為通常不由腫瘤前驅細胞表現之蛋白質)，或可為正常表現於腫瘤前驅細胞中但具有腫瘤所特有之突變的蛋白質。其他抗原包括具有已改變之活性或亞細胞分佈的正常蛋白質之突變型變異體，例如產生腫瘤抗原之基因突變。
用於抗蘭格素融合蛋白疫苗中之腫瘤抗原之特定非限制性實例包括例如CEA、前列腺特異性抗原(PSA)、HER-2/neu、BAGE、GAGE、MAGE 1-4、6及12、MUC(黏蛋白)(例如MUC-1、MUC-2等)、GM2及GD2神經節苷脂、ras、myc、酪胺酸酶、MART(黑素瘤抗原)、Pmel 17(gp100)、GnT-V內含子V序列(N-乙醯基葡糖胺基轉移酶V內含子V序列)、前列腺Ca psm、PRAME(黑素瘤抗原)、β-索烴素、MUM-1-B(廣泛存在於黑素瘤之突變型基因產物)、GAGE(黑素瘤抗原)1、MAGE、BAGE(黑素瘤抗原)2-10、c-ERB2(Her2/neu)、DAGE、EBNA(埃-巴二氏病毒核抗原)1-6、gp75、人類乳頭狀瘤病毒(HPV)E6及E7、p53、肺抗性蛋白(LRP)、Bc1-2及Ki-67、細胞週期素B1、gp100、存活素(Survivin)及NYESO-1。
此外，免疫原性分子可為參與引發及/或傳播自體免疫疾病之自體抗原，其病理學主要歸因於對由相關目標器官、組織或細胞所表現之分子具特異性之抗體的活性，例如SLE或MG。在該等疾病中，可能需要將針對相關抗原之正在進行之抗體介導之(亦即Th2型)免疫反應導向細胞(亦即Th1型)免疫反應。或者，可能需要藉由預防性地誘導針對適當自體抗原之Th1反應來在未患相關自體免疫疾病但懷疑易患相關自體免疫疾病之個體中防止針對自體抗原之Th2反應發作或降低其程度。所關注自體抗原包括(但不限於)：(a)關於SLE，包括Smith蛋白、RNP核糖核蛋白及SS-A及SS-B蛋白；及(b)關於MG，包括乙醯膽鹼受體。一或多種類型自體免疫反應中所涉及之其他各種抗原之實例包括例如內源性激素，諸如促黃體素、卵泡刺激素、睪丸酮、生長激素、促乳素及其他激素。
自體免疫疾病、過敏症及移植排斥反應中所涉及之抗原可用於本發明之組合物及方法中。舉例而言，以下自體免疫疾病或病症中之任何一或多者所涉及的抗原均可用於本發明中：糖尿病、關節炎(包括類風濕性關節炎、青少年類風濕性關節炎、骨關節炎、牛皮癬關節炎)、多發性硬化症、重症肌無力、全身性紅斑狼瘡、自體免疫性甲狀腺炎、皮膚炎(包括異位性皮膚炎及濕疹性皮膚炎)、牛皮癬、修格蘭氏症候群(Sjogren's Syndrome)(包括修格蘭氏症候群繼發性乾燥性角膜結膜炎)、斑形脫髮、因節肢動物叮咬反應所致之過敏反應、克羅恩氏病(Crohn's disease)、口瘡性潰瘍、虹膜炎、結膜炎、角膜結膜炎、潰瘍性結腸炎、哮喘、過敏性哮喘、皮膚紅斑狼瘡、硬皮病、陰道炎、直腸炎、藥疹、麻瘋病逆轉反應、麻風結節性紅斑、自體免疫性葡萄膜炎、過敏性腦脊髓炎、急性壞死性出血性腦病變、特發性雙側進行性感音神經性聽力損失、再生障礙性貧血、純紅血球貧血、特發性血小板減少症、多軟骨炎、韋格納氏肉芽腫(Wegener's granulomatosis)、慢性活動性肝炎、史蒂芬強生症候群(Stevens-Johnson syndrome)、特發性腹瀉、扁平苔癬、克羅恩氏病、葛瑞夫茲氏眼病變(Graves ophthalmopathy)、結節病、原發性膽汁性肝硬化、後段葡萄膜炎(uveitis posterior)及間質性肺纖維化。自體免疫疾病中所涉及之抗原之實例包括麩胺酸脫羧酶65(GAD 65)、天然DNA、髓鞘鹼性蛋白、髓鞘蛋白脂質蛋白、乙醯膽鹼受體組分、甲狀腺球蛋白及促甲狀腺激素(TSH)受體。
過敏症中所涉及之抗原之實例包括花粉抗原，諸如日本柳杉(Japanese cedar)花粉抗原、豚草(ragweed)花粉抗原、黑麥草(ryegrass)花粉抗原；來源於動物之抗原，諸如塵蟎抗原及貓抗原；組織相容性抗原；及青黴素及其他治療性藥物。移植物排斥反應中所涉及之抗原之實例包括欲移植至移植物接受體之移植物的抗原性組分，諸如心臟、肺、肝、胰臟、腎及神經移植物組分。抗原可為適用於治療自體免疫疾病之改變肽配位體。
熟習此項技術者應瞭解，任何蛋白質效應分子之序列均可以實質上不影響效應蛋白之功能優點的方式改變。舉例而言，通常認為甘胺酸與丙胺酸可互換，同樣天冬胺酸與麩胺酸及天冬醯胺酸與麩醯胺酸可互換。熟習此項技術者應認知效應序列之許多不同變異物可編碼具有大致與天然效應物相同活性的效應物。效應分子與抗體可如上文所述藉由化學方式或重組方式共軛。化學修飾包括例如衍化，為使效應分子與抗體彼此直接或經由一種連接化合物連接之目的，藉由蛋白質化學技術中熟知的方法。共價及非共價連接方法均可用於本發明之人類化抗體。
使效應分子連接至抗體之程序將根據欲連接至抗體之部分的化學結構而變化。多肽通常含有多種官能基；例如羧酸(COOH)、游離胺(--NH2 )或巰基(--SH)，其可用於與抗體上之適合官能基反應，以結合效應分子。或者，抗體可經衍化以暴露或連接其他反應性官能基，例如藉由連接許多連接分子中之任一者，諸如可自Pierce Chemical Company，Rockford Ill獲得者。
連接子能夠與抗體及效應分子二者形成共價鍵。適合連接子為熟習此項技術者所熟知，包括(但不限於)直鏈或分支鏈碳連接子、雜環碳連接子或肽連接子。若抗體及效應分子為多肽，則連接子可經由其側基聯接至組成胺基酸(例如經由二硫鍵聯接至半胱胺酸)。然而，在一個較佳實施例中，連接子聯接至末端胺基酸之α碳胺基及羧基。
在一些情況下，需要當免疫共軛物已達到其目標位點時自抗體釋放效應分子。因此，在此等情形下，免疫共軛物將包含可在鄰近目標位點處裂解之鍵聯。可藉由酶促活性或免疫共軛物在目標細胞內部或在鄰近目標位點處經受之條件來促使連接子裂解以自抗體釋放效應分子。當目標位點為腫瘤時，可使用可在腫瘤位點處存在之條件下裂解的連接子(例如當暴露於腫瘤相關酶或酸性pH值時)。
效應分子及本發明抗體之例示性化學修飾亦包括根據熟知方法用聚乙二醇(PEG)衍生化以延長在循環系統中之滯留時間並降低免疫原性(參看例如Lisi,等人,Applied Biochem. 4:19(1982)；Beauchamp,等人,Anal Biochem. 131:25(1982)；及Goodson,等人,Bio/Technology 8:343(1990))。
本發明涵蓋用於主動免疫及被動免疫實施例中之疫苗。可直接由以本文中揭示之方式製備之免疫原性T細胞刺激肽最容易地製備認為適用作疫苗之免疫原性組合物。最終疫苗物質經廣泛透析以移除不需要之小分子量分子，及/或經凍乾以便更容易調配於所要媒劑中。在本發明之某些實施例中，本發明之組合物及方法可用於製造細胞疫苗，例如使用抗體之抗原傳遞性抗蘭格素結合部分來將抗原導向抗原呈現細胞，該細胞接著將抗原「裝載」於MHC蛋白上以供呈現。因此，細胞疫苗為抗原呈現細胞，其已使用本發明之組合物裝載以產生載有抗原之抗原呈現細胞。
當疫苗為抗蘭格素結合蛋白自身時，例如完整抗體或其片段，則此等「活性成分」可使用此項技術中瞭解之方法製成疫苗，例如美國專利第4,608,251號；第4,601,903號；第4,599,231號；第4,599,230號；及第4.578,770號，相關部分係以引用的方式併入本文中。通常，該等疫苗製成注射劑形式，例如製成液體溶液或懸浮液，或製成適合在注射前再懸浮液於液體中之固體形式。製劑亦可經乳化。活性免疫原性成分通常與醫藥學上可接受且與該活性成分相容之賦形劑混合。適合賦形劑為例如水、鹽水、右旋糖、甘油、乙醇或其類似物及其組合。此外，必要時疫苗可含有少量助劑物質，諸如濕潤劑或乳化劑、pH值緩衝劑，或增強疫苗之有效性的佐劑。
該等疫苗係以與給藥調配物相容之方式及治療上有效並具免疫原性之量投與。所投與之量視待治療之個體(包括例如個體免疫系統產生免疫反應之能力)而定。需要投與之細胞或活性成分的精確量取決於醫師之判斷。然而，對於細胞疫苗，適合劑量範圍為約數千個細胞(至數百萬個細胞)。對於標準抗原決定基或抗原決定基傳遞疫苗，則疫苗可為每次疫苗接種數百微克活性成分。用於初始投藥及增強免疫注射之適合方案亦可變化，但通常為初始投藥後進行後續接種或其他投藥。
然而，施用方式可廣泛變化，本文之某些實施例將最可能經靜脈內傳遞或直接於腫瘤或感染位點傳遞。不論如何，用於投與疫苗之任何習知方法均適用。疫苗之劑量將視投藥途徑而定且將視宿主體型而改變。
在許多情況下，將需要多次投與疫苗，例如每週或每隔一週提供4至6次疫苗接種。正常疫苗接種方案通常將以2至12週之間隔或3至6週之間隔進行。可能需要以1至5年，通常3年之間隔進行週期性增強免疫以便維持免疫反應之保護程度或者緩解或再感染之可能性。免疫過程後可進行針對例如T細胞活化、細胞激素分泌或甚至抗體產生之檢定，最通常在活體外進行。此等免疫反應檢定為熟知的，且可見於多種專利中及如本文所教示。
本發明之疫苗視是否使用核酸載體、是否最終經純化之蛋白質或最終疫苗形式而定可以一或多種「單位劑量」提供。單位劑量定義為含有經計算可產生與其投藥(亦即適當路徑及治療方案)相關之所要反應的預定量之治療性組合物。所投與之量及特定途徑及調配物處於熟習臨床技術者之技能範圍內。亦可評估待治療之個體，特定言之，個體免疫系統之狀態及所需保護。單位劑量無需以單一注射形式投與，而是可包括在設定時段內連續輸注。本發明之單位劑量合宜地可以每公斤體重使用之DNA(或每公斤體重使用之蛋白質)來描述，其中投與範圍介於每公斤體重約0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.5、1、10、50、100、1,000或1,000以上毫克/DNA或蛋白質之間。
同樣，所傳遞之抗蘭格素-抗原疫苗之量可自每公斤體重約0.2至約8.0毫克變化。因此，在特定實施例中，可向個體活體內傳遞0.4 mg、0.5 mg、0.8 mg、1.0 mg、1.5 mg、2.0 mg、2.5 mg、3.0 mg、4.0 mg、5.0 mg、5.5 mg、6.0 mg、6.5 mg、7.0 mg及7.5 mg疫苗。所投與疫苗之劑量在很大程度上視所治療個體之體重及身體狀況以及投藥途徑及治療頻率而定。可以介於1 μg至1 mg聚核苷酸至1 μg至100 mg蛋白質範圍內的量投與包括裸聚核苷酸預結合於脂質體或病毒傳遞載體之醫藥組合物。因此，特定組合物可包括介於約1 μg、5 μg、10 μg、20 μg、30 μg、40 μg、50 μg、60 μg、70 μg、80 μg、100 μg、150 μg、200 μg、250 μg、500 μg、600 μg、700 μg、800 μg、900 μg或1,000 μg之間的聚核苷酸或蛋白質獨立結合於1 μg、5 μg、10 μg、20 μg、3.0 μg、40 μg、50 μg、60 μg、70 μg、80 μg、100 μg、150 μg、200 μg、250 μg、500 μg、600 μg、700 μg、800 μg、900 μg、1 mg、1.5 mg、5 mg、10 mg、20 mg、30 mg、40 mg、50 mg、60 mg、70 mg、80 mg、90 mg或100 mg載體。
本發明之抗體可視情況共價或非共價連接至可偵測標記。適合該用途之可偵測標記包括任何可藉由光譜、光化學、生物化學、免疫化學、電、光學或化學方法偵測之組合物。本發明中之適用標記包括磁性珠粒(例如DYNABEADS)、螢光染料(例如異硫氰酸螢光素(fluorescein isothiocyanate)、得克薩斯紅(Texas red)、若丹明(rhodamine)、綠色螢光蛋白及其類似物)、放射性標記(例如3 H、125 I、35 S、14 C或32 P)、酶(例如辣根過氧化酶(horse radish peroxidase)、鹼性磷酸酶及通常用於ELISA中的其他酶)，及比色分析標記，諸如膠體金或彩色玻璃或塑膠(例如聚苯乙烯、聚丙烯、乳膠等)珠粒。
偵測該等標記之方法為熟習此項技術者所熟知。因此，例如，放射性標記可使用感光膠片或閃光計數器偵測，螢光標記可使用用於偵測發光亮度之光偵測器進行偵測。酶標記通常藉由提供酶與受質並且偵測因酶作用於受質產生之反應產物進行偵測；且比色分析標記可藉由簡單地觀測彩色標記來偵測。
本發明之抗體及/或免疫共軛物組合物尤其適用於非經腸投與，諸如靜脈內投與或投與體腔中。用於投與之組合物通常包含抗體及/或免疫共軛物溶解於醫藥學上可接受之載劑(較佳為水性載劑)中之溶液。可使用多種水性載劑，例如緩衝鹽水及其類似物。此等溶液無菌且一般不含不合需要之物質。此等組合物可藉由熟知之習知滅菌技術進行滅菌。組合物可視需要含有醫藥學上可接受之助劑物質以接近生理條件，諸如pH值調節劑及緩衝劑、毒性調節劑及其類似物，例如乙酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、乳酸鈉及其類似物。此等調配物中融合蛋白之濃度可廣泛變化，且將主要基於流體體積、黏度、體重及其類似因素根據所選擇之特定投藥模式及患者之需要進行選擇。
因此，用於靜脈內投與之本發明之典型醫藥免疫共軛物組合物將為約0.1至10毫克/患者/天。可使用0.1至約100毫克/患者/天之劑量。用於製備可投與組合物之實際方法對熟習此項技術者將為已知或顯而易知的，且更詳細地描述於諸如REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCE,第19版,Mack Publishing Company,Easton,Pa.(1995)之出版物中。
可投與本發明之組合物用於進行治療性處理。在治療性應用中，組合物係以足以治癒或至少部分地遏制疾病及其併發症之量投與罹患該疾病之患者。足以實現此目的之量定義為「治療有效量」。有效用於此用途之量將視疾病之嚴重程度及患者之一般健康狀況而定。化合物之有效量為如臨床醫師或其他合格觀察者所記錄提供症狀之主觀減輕或客觀上可識別之改良的量。
視患者需要並容許之劑量及頻率而定，投與組合物之單次或多次投藥。在任何情況下，組合物應提供足量之本發明蛋白質以有效治療患者。劑量較佳一次性投與，但可定期施用直至達成治療結果或副作用表明需中止治療。一般而言，劑量足以治療或改善疾病之症狀或病徵而不會對患者產生不可接受之毒性。
本發明免疫共軛物組合物之控制釋放非經腸調配物可製成植入物、油性注射液或顆粒系統形式。關於蛋白質傳遞系統之廣泛回顧，請參看Banga,A. J.,THERAPEUTIC PEPTIDES AND PROTEINS: FORMULATION,PROCESSING,AND DELIVERY SYSTEMS,Technomic Publishing Company,Inc.,Lancaster,Pa.,(1995)，該文獻係以引用的方式併入本文中。顆粒系統包括微球體、微粒、微膠囊、奈米膠囊、奈米球體及奈米粒子。微膠囊含有治療性蛋白質作為中心核心。在微球體中，治療劑分散在整個粒子中。小於約1 μm之粒子、微球體及微膠囊一般分別稱為奈米粒子、奈米球體及奈米膠囊。毛細血管之直徑為約5 μm，因此僅奈米粒子可經靜脈內投與。微粒之直徑通常為約100 μm且以皮下或肌肉內方式投與。
聚合物可用於本發明免疫共軛物組合物之離子控制釋放。此項技術中已知各種用於控制藥物傳遞之可降解及不可降解之聚合物基質(Langer,R.,Accounts Chem. Res. 26:537-542(1993))。舉例而言，嵌段共聚物泊洛沙姆407(poloxamer 407)在低溫下以黏性但可移動之液體形式存在，但在體溫下形成半固體凝膠；羥基磷灰石已用作蛋白質控制釋放之微載體；及/或脂質體可用於脂質囊封藥物的控制釋放以及藥物靶向。已知許多用於控制傳遞治療性蛋白質之其他系統。參看例如美國專利第5,055,303號、第5,188,837號、第4,235,871號、第4,501,728號、第4,837,028號、第4,957,735號及第5,019,369號、第5,055,303號、第5,514,670號、第5,413,797號、第5,268,164號、第5,004,697號、第4,902,505號、第5,506,206號、第5,271,961號、第5,254,342號及第5,534,496號，各專利之相關部分係以引用的方式併入本文中。
在本發明免疫共軛物之各種用途中包括可藉由融合蛋白之毒性作用消除由特定人類細胞所致之多種疾病病狀。舉例而言，對於本文中所揭示之人類化抗蘭格素_12E12.3F3抗體，免疫共軛物之一個較佳應用為治療表現蘭格素之惡性細胞。例示性惡性細胞包括慢性淋巴細胞性白血病及毛細胞白血病之細胞。
在另一實施例中，本發明提供用於傳遞抗原之套組，例如與一或多個T細胞或B細胞抗原決定基共軛或呈與一或多個T細胞或B細胞抗原決定基之融合蛋白形式的蘭格素或其免疫活性片段。如本文中所使用之「生物樣品」為含有抗原之生物組織或流體的樣品。該等樣品包括(但不限於)來自活組織檢查之組織、血液及血球(例如白血球)。細胞較佳為淋巴細胞，例如樹突狀細胞。生物樣品亦包括組織切片，諸如出於組織學目的而獲取之冷凍切片。生物樣品通常獲自多細胞真核生物，較佳為哺乳動物，諸如大鼠、小鼠、牛、犬、天竺鼠或兔，且更佳為靈長類動物，諸如短尾猴、黑猩猩或人類。樣品最佳來自人類。本發明之抗體亦可在活體內使用，例如作為用於活體內成像之診斷工具。
套組通常包含編碼在羧基端具有一或多個構架部分或多選殖位點之本發明抗體或其片段的核酸序列，在該羧基端可插入一或多個抗原之編碼序列。在一些實施例中，抗體將為人類化抗蘭格素Fv片段，諸如scFv或dsFv片段。此外，套組通常包括揭示本發明抗體之使用方法的說明材料(例如，關於在以樹突狀細胞免疫接種前裝載至樹突狀細胞中，該等樹突狀細胞可為自體樹突狀細胞)。套組亦可包括其他組分以促進該套組所設計用於之特定應用。因此，例如，套組可另外含有偵測標記之方法(例如用於酶標記之酶受質、用於偵測螢光標記之過濾組、適當二次標記，諸如綿羊抗小鼠HRP或其類似物)。套組可另外包括通常用於實施特定方法之緩衝液及其他試劑。該等套組及適當內含物為熟習此項技術者所熟知。
在本發明之另一組用途中，本發明抗體所靶向之免疫共軛物可用於自培養物中之細胞群體清除目標細胞。舉例而言，若特定T細胞群體較佳，則本發明之免疫共軛物可用於增濃具有正進行免疫反應之相反效應的T細胞群體。因此，例如，自患有癌症之患者培養的細胞可藉由向患者提供載有抗原之樹突狀細胞，使用本發明之抗體作為針對會觸發針對癌症、病毒或其他病原體之免疫反應的抗原之靶向部分來清除癌細胞。同樣，免疫共軛物可用於增加調節性T細胞群體或驅動免疫反應朝向或遠離細胞毒性T細胞反應或甚至驅動B細胞反應。
DC子集之不同功能：本發明之發明者已證明，來源於CD34+造血祖細胞之LC與intDC的活化淋巴細胞之能力不同(圖1)。IntDC誘導原始B細胞分化成分泌免疫球蛋白之漿細胞並使CD4+ T細胞分化成濾泡性輔助T細胞(TFH)17,18 ，而LC為尤其有效的細胞毒性CD8+淋巴細胞(CTL)之活化因子。此外，僅間質DC產生IL-10，且其酶促活性不同，該酶促活性可能為選擇將呈現至T細胞之肽的基礎。實際上，不同的酶可能將抗原降解成不同的肽譜系，如針對HIV nef蛋白所示19 。此現象將導致呈現不同的MHC/肽複合物組，且產生迥異的抗原特異性T細胞譜系。Dudziak等人20 已顯示，經由子集特異性凝集素Dectin-1傳遞至DC之抗原差異呈現於MHC II類上，而經由DEC-205呈現者主要在MHC I類上，且此差異為DC子集所固有的。
DC子集在決定CD4+ T細胞反應中起重要作用。極化DC或不同DC子集提供具有決定免疫反應類型(1型相對於2型)之不同信號的T細胞21 。因此，在小鼠中，脾CD8+ DC使原始CD4+ T細胞預致敏以在涉及IL-12之過程中產生Th1細胞激素，而脾CD8+ DC使原始CD4+ T細胞預致敏以產生Th2細胞激素22,23 。此外，來自相同DC之不同信號可誘導不同的T細胞極化，如當用大腸桿菌(Escherichia coli )脂多醣(LPS)活化DC時誘導IL-12產生及Th1細胞極化，但當DC暴露於來自牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis )之LPS時不存在IL-12產生及Th2細胞極化所示24 。經CD40配位體(CD40L)活化之DC經由IL-12依賴性機制啟動Th1反應，而以IL-3及CD40L活化之pDC顯示分泌可忽略量之IL-12且啟動Th2反應25 。Soares等人亦報導，表現不同凝集素之兩個DC子集具有在活體內藉由不同機制不同地影響Th1/Th2平衡之先天傾向。更令人感興趣的是，已發現傳遞相同抗原至相同類型之DC但經由不同DC受體可誘導不同量的CD4+ T細胞反應(參看開篇資料)。因此，兩種DC子集及DC所暴露於之活化信號為決定免疫結果之性質的重要因素。
圖2顯示融合至抗原之重組抗蘭格素抗體保留其結合於細胞表面蘭格素的能力。CHO-S細胞用指導全長人類蘭格素表現之質體穩定轉染。針對蘭格素-CHO細胞滴定純重組抗蘭格素2G3或15B10小鼠V區-人類IgG4嵌合抗體或C端融合至來自禽流感之A型流感血球凝集素HA-1域(HA5-1)、來自H1N1流感病毒株之A型流感血球凝集素HA-1域(HA1-1)、來自熱纖梭菌之錨定蛋白域(doc)、HIV gag p24(gag)、或一串HIV肽(Hipo5)之相同抗體。在冰上培育後，洗滌該等細胞並用抗人類Fc-PE試劑進行處理。再在冰上培育後，洗滌該等細胞，並在FACS陣列儀上分析以測定結合於細胞之螢光素的量(表述為相較於未經轉染之CHO-S細胞的% MFI)。
此資料顯示，添加抗原至H鏈C端不影響抗體與細胞表面蘭格素之結合，並且亦證明此等抗蘭格素抗體可用作將抗原引至帶有人類蘭格素之細胞表面的有效媒劑。
圖3A及3B證明融合至人類前列腺特異性癌抗原之重組抗蘭格素抗體能夠引發來自健康供體之抗原特異性CD4+ T細胞擴增。圖3A比較經由CD40與蘭格素傳遞PSA至DC，誘導產生IFNg之PSA特異性CD4+ T細胞。來自健康供體之CD4+ T細胞與用抗CD40-PSA或抗蘭格素-PSA靶向之IFNDC一起共同培養8天。用PSA(5 μM)之個別肽(59種15聚體肽)刺激細胞。2天後，分析培養物上清液以便量測IFNγ。虛線表示平均值±SD之上限，無肽及反應超過此線視為有效。圖3B顯示對CD4+T細胞進行染色以量測肽特異性細胞內IFNγ+細胞之頻率。
此等資料顯示，帶有癌抗原之抗蘭格素疫苗可使用來自正常個體之免疫細胞在活體外啟動有效抗原特異性抗CD4+ T細胞反應。在此活體外培養系統中，此試劑與基於抗CD40之疫苗同樣有效，此等DC表現兩種受體。在活體內，基於抗蘭格素之疫苗將使抗原僅靶向蘭格漢氏細胞(LC)，且基於最近之研究[Immunity,第29卷，第3期,497-510,2008年9月19日]，LC優先誘導CD4+ T細胞分化，從而分泌T輔助細胞2(Th2)細胞激素，且在預致敏及交叉預致敏原始CD8+ T細胞方面尤其有效，對於引發抗癌CTL反應而言後一種特徵尤其合乎需要。相比之下，抗CD40靶向劑在活體內將抗原傳遞至更多種APC。
圖4證明融合至人類前列腺特異性癌抗原之重組抗蘭格素抗體能夠引起來自前列腺癌患者之抗原特異性CD8+ T細胞擴增。用抗CD40-PSA靶向之DC及靶向DC之抗蘭格素-PSA誘導PSA特異性CD8+ T細胞反應。(a)IFNDC用1 mg mAb融合蛋白與PSA靶向。經純化自體CD8+ T細胞共同培養10天。用抗CD8及PSA(KLQCVDLHV)-四聚體對細胞進行染色。細胞係來自HLA-A*0201陽性前列腺癌患者。PSA四聚體試劑識別帶有可與帶有PSA KLQCVDLHV肽之HLA-A*0201複合物特異性反應之T細胞受體之T細胞。
此等資料顯示，帶有癌抗原之抗蘭格素疫苗可在活體外使用來自前列腺癌之免疫細胞啟動有效抗原特異性抗CD8+ T細胞反應。在此活體外培養系統中，此試劑與基於抗CD40之疫苗同樣有效，此等DC表現兩種受體。在活體內，基於抗蘭格素之疫苗將使抗原僅靶向蘭格漢氏細胞(LC)，且基於最近之研究[Immunity,第29卷，第3期,497-510,2008年9月19日]，LC優先誘導CD4+ T細胞分化，從而分泌T輔助細胞2(Th2)細胞激素，且在預致敏及交叉預致敏原始CD8+ T細胞方面尤其有效，對於引發抗癌CTL反應而言後一種特徵尤其合乎需要。相比之下，抗CD40靶向劑將在活體內將抗原傳遞至更多種APC。
圖5A至圖5C顯示抗蘭格素優先靶向表皮LC。經純化之來自HLA-A201供體之皮膚DC子集(表皮LC、真皮CD1a + DC及CD14+ DC)與8 nM抗蘭格素、IgG4共軛物mAb、游離FluMP一起或在無抗原下培養3小時。經純化之同源CD8+ T細胞與抗原脈衝DC以1:20之DC/T比率一起培養。24小時後，向培養物中添加CD40L(100 ng/ml；R&D)。CD40連接增強DC之交叉呈現。共同培養物在37℃下培育8至10天。在第3天添加IL-2(10 U/ml)。使用HLA-A201-FluMP(58-66)肽(GILGFVFTL)四聚體評估FluMP特異性CD8+ T細胞之反應。
圖5A中之資料：2D FACs曲線顯示FluMP特異性CD8+ T細胞擴增，如藉由特異性HLA-A201-FluMP(58-66)四聚體染色所評估，證明經由抗蘭格素之靶向抗原僅經由LC引起抗原特異性CD8+ T細胞擴增，該方法比其他抗原傳遞方法(諸如游離FluMP)更穩固。一些反應係由真皮CD1a+ DC誘導，與此等細胞能上調培養物中之蘭格素一致。圖5B將資料匯總於圖表中，顯示平均值±sd(N=3)。圖5C與蘭格素-FluMP、對照IgG4-FluMP、游離FluMP一起培養或無抗原下培養人類LC 8天，8天後培養物上清液中之IFN-γ含量。
圖6A至圖6C顯示由人類皮膚DC中蘭格素之差異表現。圖6A展示在分離之人類皮膚DC子集上蘭格素之表現。資料顯示蘭格素侷限表現於人類LC上，而非真皮CD1a+或CD14+DC上。圖6B展示對自3個不同試樣分離之皮膚DC進行之蘭格素之基因表現分析。自以下淘選之移植皮膚mDC子集製備RNA：表皮LC、真皮CD1a+DC及CD14+DC。圖6C展示使用蘭格素及HLA-DR mAb對正常人類皮膚進行免疫螢光染色。
圖7展示抗蘭格素15B10抗體特異性染色人類蘭格漢氏細胞。製備人類上皮薄片，且用經Alexa568[紅色]標記之抗蘭格素15B10及市售抗HLA抗體(標記為綠色)染色。上方影像顯示重疊之紅色及綠色影像，以使此兩種標記之共定位變得醒目。
構築體。
小鼠抗蘭格素15B10K─以下分別為小鼠抗蘭格素15B10抗體cDNA之輕鏈的核苷酸及成熟蛋白質胺基酸序列。可變區殘基加有下劃線。
小鼠抗蘭格素15B10H-LV-hIgG4H-C─以下分別為融合至人類IgG4之小鼠抗蘭格素15B10抗體之重鏈可變區的核苷酸及成熟蛋白質胺基酸序列。可變區殘基加有下劃線。
小鼠抗蘭格素2G3L─以下分別為小鼠抗蘭格素2G3抗體cDNA之輕鏈的核苷酸及成熟蛋白質胺基酸序列。可變區殘基加有下劃線。
小鼠抗蘭格素2G3H-以下分別為小鼠抗蘭格素2G3抗體cDNA之重鏈的核苷酸及成熟蛋白質胺基酸序列。可變區殘基加有下劃線。
C84 rAB-pIRES2[小鼠抗蘭格素2G3H-LV-hIgG4H-C-錨定蛋白]此H鏈-錨定蛋白融合蛋白之編碼區示於下文中。起始及終止密碼子以粗體表示，聯接gctagc限制位點同樣以粗體表示。
C84重鏈之成熟H鏈序列示於下文中。聯接序列AS以粗體表示且錨定蛋白加有下劃線。
C85 rAB-pIRES2[小鼠抗蘭格素2G3H-LV-hIgG4H-C-Flex-FluHA1-1-6xHis]此H鏈-Flu HA1-1融合蛋白之編碼區示於下文中。起始及終止密碼子以粗體表示，聯接gctagc限制位點同樣以粗體表示。
C85重鏈之成熟H鏈序列示於下文中。聯接序列AS以粗體表示且Flu HA1-1加有下劃線。可撓性連接子聯接序列以斜體表示。
C86 rAB-pIRES2[小鼠抗蘭格素2G3H-LV-hIgG4H-C-Flex-FluHA5-1-6xHis]此H鏈-Flu HA5-1融合蛋白之編碼區示於下文中。起始及終止密碼子以粗體表示，聯接gctagc限制位點同樣以粗體表示。
C86重鏈之成熟H鏈序列示於下文中。聯接序列AS以粗體表示且Flu HA5-1加有下劃線。可性撓連接子聯接序列以斜體表示。
C804 rAB-cetHS-嘌呤基[小鼠抗蘭格素2G3H-LV-hIgGK-C-Flex-hPSA]此H鏈-PSA融合蛋白之編碼區示於下文中。起始及終止密碼子以粗體表示，聯接gctagc限制位點同樣以粗體表示。
C804重鏈之成熟H鏈序列示於下文中。聯接序列AS以粗體表示且PSA加有下劃線。可撓性連接子聯接序列以斜體表示。
C87 rAB-pIRES2[小鼠抗蘭格素15B10H-SLAML-V-hIgG4H-Flex-FluHA5-1-6xHis]此H鏈-FluHA5-1融合蛋白之編碼區示於下文中。起始及終止密碼子以粗體表示，聯接gctagc限制位點同樣以粗體表示。
C87重鏈之成熟H鏈序列示於下文中。聯接序列AS以粗體表示且Flu HA5-1加有下劃線。
C88 rAB-pIRES2[小鼠抗蘭格素15B10H-SLAML-V-hIgG4H-C-錨定蛋白]此H鏈-錨定蛋白融合蛋白之編碼區示於下文中。起始及終止密碼子以粗體表示，聯接gctagc限制位點同樣以粗體表示。
C88重鏈之成熟H鏈序列示於下文中。聯接序列AS以粗體表示且錨定蛋白以灰色陰影表示。可撓性連接子聯接序列加有下劃線。
C89 rAB-pIRES2[小鼠抗蘭格素15B10H-SLAML-V-hIgG4H-Flex-FluHAl-1-6xHis]此H鏈-Flu HA1-1融合蛋白之編碼區示於下文中。起始及終止密碼子以粗體表示，聯接gctagc限制位點同樣以粗體表示。
C89重鏈之成熟H鏈序列示於下文中。聯接序列AS以粗體表示且Flu HA1-1加有下劃線。可撓性連接子聯接序列以斜體表示。
C246 rAB-pIRES2[小鼠抗蘭格素15B10H-SLAML-V-hIgG4H-病毒gag]此H鏈-gag融合蛋白之編碼區示於下文中。起始及終止密碼子以粗體表示，聯接gctagc限制位點同樣以粗體表示。
C89重鏈之成熟H鏈序列示於下文中。聯接序列AS以粗體表示且Gag p24加有下劃線。可撓性連接子聯接序列以斜體表示。
C742 rAB-cetHS-嘌呤基[小鼠抗蘭格素15B10H-LV-hIgG4H-C-Flex-hPSA]此H鏈-PSA融合蛋白之編碼區示於下文中。起始及終止密碼子以粗體表示，聯接gctagc限制位點同樣以粗體表示。
C742重鏈之成熟H鏈序列示於下文中。聯接序列AS以粗體表示且PSA加有下劃線。可撓性連接子聯接序列以斜體表示。
C1011 rAB-cetHS-嘌呤基[小鼠抗蘭格素15B10H-LV-hIgG4H-C-Flex-v1-Pep-gag17-f1-gag253-f2-nef116-f3-nef66-f4-po1158]，亦稱作抗蘭格素15B10H-HIPO5。此H鏈-HIV肽融合蛋白之編碼區示於下文中。起始及終止密碼子以粗體表示，聯接gctagc限制位點同樣以粗體表示。
C1011重鏈之成熟H鏈序列示於下文中。聯接序列AS以粗體表示且HIV肽加有下劃線。可撓性連接子聯接序列以斜體表示。
圖8顯示融合至抗原之重組抗蘭格素抗體之結合保留其結合於以人類及非人類靈長類動物(NHP)蘭格素胞外域蛋白修飾之珠粒的能力。具有不同顏色之Luminex珠粒共價連接至已融合至錨定蛋白之纖維素結合蛋白。接著，該等珠粒與已融合至整合素(cohesin)之人類蘭格素胞外域或與已融合至凝集蛋白之NHP(恆河猴(Rhesus macaque))蘭格素胞外域混合。洗滌並混合珠粒，接著用各種純重組抗蘭格素2G3或15B10小鼠V區-人類IgG4嵌合抗體或C末端融合至人類前列腺特異性抗原(PSA)之相同抗體或對照純重組抗CD40 12E12小鼠V區-人類IgG4嵌合抗體之連續稀釋液培育。洗滌後，珠粒與抗人類Fc-PE試劑一起培育，再次洗滌，接著在BioPlex儀上讀取以偵測結合於不同顏色珠粒的螢光素(表述為相對於對各珠粒類型所見之最大信號之% MFI)。
圖9展示融合至來自H1N1流感病毒株之A型流感血球凝集素HA-1之重組抗蘭格素15B10抗體能夠在NHP中引發有效抗原特異性抗體產生。對NHP肌肉內(im)注射10E6 pr8流感病毒且皮下(sc)注射HIV gag p24蛋白(第一次增強免疫)；約2個月後，對NHP再次注射HIV gag p24蛋白(第二次增強免疫)；約6週及4個月後，對NHP皮內(id)注射100 μg抗蘭格素15B10 HA1-1融合蛋白，以聚肌胞(poly IC)作為佐劑，或注射抗DCIR HA1-1融合蛋白與聚肌胞，或注射標準劑量之市售Vaccigrip流感疫苗及10E6 pr8流感病毒。在指定日期，獲取血清樣品並彙集(每組4隻NHP)，且藉由基於珠粒之檢定測試連續稀釋液之HA1-1特異性IgG抗體。資料顯示抗蘭格素-HA1-1疫苗在NHP中產生有效高效價抗HA1-1抗體反應，所觀測到之效價比Vaccigrip對照組之觀測值高1至2個對數。
此等資料顯示，抗蘭格素15B10及2G3重組抗體或連接至癌抗原之該等抗體保持顯著結合於NHP蘭格素，此種性質對於在商業上將此等抗體開發為抗原靶向性疫苗而言極合乎需要[此使得能夠在NHP模型中進行基於機制之臨床前安全性及功效測試]。
圖10顯示抗人類DC受體與抗原之重組融合蛋白在NHP中誘導抗原特異性免疫反應：在第0天用活流感病毒(A/PR8，H1N1)及HIVgag來源之p24-PLA對恆河猴(各組中有4隻動物)進行肌肉內免疫。在第28天，單獨用p24-PLA對動物進行增強免疫。在第77天及第119天，各組動物如圖18(下文)中所述進行免疫。在用HA肽離體刺激後，藉由ELISPOT量測恆河猴中之抗蘭格素-HA1反應-IFN-γ反應。紅色箭頭指示含活流感病毒(A/PR8，H1N1)之預致敏注射液。藍色箭頭指示增強免疫注射液。對照組(4隻動物)用活流感病毒及市售流感疫苗VACCIGRIP與每隻動物100 μg聚肌胞進行肌肉內免疫。實驗組(4隻動物)用抗DCIR-HA1(每隻動物100 μg)與每隻動物100 μg聚肌胞進行皮內增強免疫。以上資料顯示，抗蘭格素-HA1引發有效HA1特異性T細胞反應，如藉由IFNγ ELISPOT所量測。
圖11顯示抗蘭格素G3抗體特異性染色NHP蘭格漢氏細胞。製備恆河猴皮膚切片，且依序用抗蘭格素2G3及經得克薩斯紅標記之山羊抗小鼠試劑染色。細胞核用DAPI[藍色]染色。此顯示，NHPLC之特異性染色證明此抗人類蘭格素抗體與NHP蘭格素之特異性交叉反應性。
15B10.3融合瘤已根據布達佩斯條約(Budapest Treaty)寄存於美國菌種保存中心(U.S. American Type Culture Collection)，且接收寄存編號為PTA-9852；且2G3.6融合瘤接收寄存編號為PTA-9853。
預期本說明書中所討論之任何實施例均可關於本發明之任何方法、套組、試劑或組合物進行實施，且反之亦然。此外，本發明之組合物可用於達成本發明之方法。
應瞭解，本文所述之特定實施例係以說明方式展示而非限制本發明。在不偏離本發明之範疇下，本發明之主要特徵可用於各種實施例。熟習此項技術者僅使用常規實驗即可認識到或能夠確定本文中所述之特定程序的許多相等物。該等相等物視為屬於本發明之範疇且由申請專利範圍涵蓋。
本說明書中提及之所有出版物及專利申請案表明熟習本發明所屬技術者之技術水準。所有出版物及專利申請案均以引用的方式併入本文中，達到如同指明各個別出版物或專利申請案特定且個別地以引用的方式併入本文中之程度。
當在申請專利範圍及/或本說明書中結合術語「包含」使用時，字詞「一」之使用可意謂「一」，但其亦與「一或多」、「至少一」及「一或一以上」之含義一致。除非明確指示僅指替代物或替代物互相排斥，否則在申請專利範圍中使用術語「或」係用於意謂「及/或」，但揭示內容支持僅指替代物以及「及/或」之定義。在本申請案中，術語「約」用於指示值包括確定該值所用之裝置、方法之誤差的固有變化或研究個體間存在之變化。
如本說明書及申請專利範圍中所使用之字詞「包含」、「具有」、「包括」或「含有」為包含性的或開放性的且不排除其他未陳述之要素或方法步驟。
如本文中所用，術語「或其組合」係指在該術語之前所列項目之所有排列及組合。舉例而言，「A、B、C或其組合」意欲包括以下中之至少一者：A、B、C、AB、AC、BC或ABC，且若在特定情形下順序具有重要性，則亦包括BA、CA、CB、CBA、BCA、ACB、BAC或CAB。繼續此實例，明確包括含有一或多個條目或術語之重複的組合，諸如BB、AAA、MB、BBC、AAABCCCC、CBBAAA、CABABB等。熟習此項技術者應理解，除非根據上下文顯而易見，否則通常在任何組合中均不對條目或術語之數目加以限制。
如本文中所使用，近似之字詞，諸如但不限於「約」、「實質」或「實質上」係指條件經如此修飾時應理解為不一定絕對或完全，但將視為足夠接近對一般技術者主張指明該條件存在。該描述可變化之程度將視可規定該變化之程度而變化，且仍使一般技術者認識到修改之特徵仍具有未修改特徵的所需特徵及能力。一般而言，但根據先前論述，本文中由諸如「約」之近似字詞修飾的數值可自所述值變化至少±1%、±2%、±3%、±4%、±5%、±6%、±7%、±10%、±12%或±15%。
根據本發明，可在不過度實驗下進行及實施本文中所揭示及主張之所有組合物及/或方法。雖然已就較佳實施例描述了本發明之組合物及方法，但熟習此項技術者將顯而易知，可在不背離本發明之概念、精神及範疇下，對本文所述之組合物及/或方法，及本文所述方法之步驟或該等步驟之順序施加變化。認為熟習此項技術者顯而易知之所有該等類似替代及修改均處於如所附申請專利範圍所界定之本發明之精神、範疇及概念內。
參考文獻
1. Banchereau J,Steinman RM. Dendritic cells and the control of immunity. Nature. 1998;392:245-252。
2. Pascual V,Banchereau J,Palucka A. The Central Role of Dendritic Cells and Interferon-alpha in SLE. Curr Opin Rheumatol. 2003；已付印。
3. Palucka K,Banchereau J. Dendritic cells: a link between innate and adaptive immunity. J Clin Immunol. 1999;19:12-25。
4. Di Pucchio T,Chatterjee B,Smed-Sorensen A,等人Direct proteasome-independent cross-presentation of viral antigen by plasmacytoid dendritic cells on major histocompatibility complex class I. Nat Immunol. 2008;9:551-557。
5. Kadowaki N,Antonenko S,Lau JY,Liu YJ. Natural interferon alpha/beta-producing cells link innate and adaptive immunity. J Exp Med. 2000;192:219-226。
6. Fonteneau JF,Gilliet M,Larsson M,等人Activation of influenza virus-specific CD4+ and CD8+ T cells: a new role for plasmacytoid dendritic cells in adaptive immunity.Blood. 2003;101:3520-3526。
7. Randolph GJ,Beaulieu S,Lebecque S,Steinman RM,Muller WA. Differentiation of monocytes into dendritic cells in a model of transendothelial trafficking. Science. 1998;282:480-483。
8. Chomarat P,Dantin C,Bennett L,Banchereau J,Palucka AK. TNF skews monocyte differentiation from macrophages to dendritic cells. J Immunol. 2003;171:2262-2269。
9. Romani N,Gruner S,Brang D,等人Proliferating dendritic cell progenitors in human blood. J Exp Med. 1994;180:83-93。
10. Sallusto F,Lanzavecchia A. Efficient presentation of soluble antigen by cultured human dendritic cells is maintained by granulocyte/macrophage colony-stimulating factor plus interleukin 4 and downregulated by tumor necrosis factor a. J Exp Med. 1994;179:1109-1118。
11. Peters JH,Xu H,Ruppert J,Ostermeier D,Friedrichs D,Gieseler RK. Signals required for differentiating dendritic cells from human monocytes in vitro. Adv Exp Med Biol. 1993;329:275-280。
12. Paquette RL,Hsu NC,Kiertscher SM,等人Interferon-alpha and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor differentiate peripheral blood monocytes into potent antigen-presenting cells. J Leukoc Biol. 1998;64:358-367。
13. Luft T,Jefford M,Luetjens P,等人Functionallydistinct dendritic cell(DC)populations induced by physiologic stimuli: prostaglandin E(2)regulates the migratory capacity of specific DC subsets. Blood. 2002;100:1362-1372。
14. He B,Xu W,Santini PA,等人Intestinal bacteria trigger T cell-independent immunoglobulin A(2)class switching by inducing epithelial-cell secretion of the cytokine APRIL.Immunity. 2007;26:812-826。
15. Blanco P,Palucka AK,Gill M,Pascual V,Banchereau J. Induction of dendritic cell differentiation by IFN-alpha in systemic lupus erythematosus. Science. 2001;294:1540-1543。
16. Mohamadzadeh M,Berard F,Essert G,等人Interleukin 15 skews monocyte differentiation into dendritic cells with features of Langerhans cells. J Exp Med. 2001;194:1013-1020。
17. Caux C,Massacrier C,Vanbervliet B,等人CD34+hematopoietic progenitors from human cord blood differentiate along two independent dendritic cell pathways in response to granulocyte-macrophage colony-stimulating factor plus tumor necrosis factor alpha: II. Functional analysis. Blood. 1997;90:1458-1470。
18. Caux C,Vanbervliet B,Massacrier C,等人CD34+hematopoietic progenitors from human cord blood differentiate along two independent dendritic cell pathways in response to GM-CSF+TNF alpha. J Exp Med. 1996; 184:695-706。
19. Seifert U, Maranon C, Shmueli A，等人An essential role for tripeptidyl peptidase in the generation of an MHC class I epitope. Nat Immunol. 2003; 4:375-379。
20. Dudziak D, Kamphorst AO, Heidkamp GF，等人Differential antigen processing by dendritic cell subsets in vivo. Science. 2007; 315:107-111。
21. Shortman K, Liu YJ. Mouse and human dendritic cell subtypes. Nature Rev Immunol. 2002; 2:151-161。
22. Maldonado-Lopez R, De Smedt T, Michel P，等人CD8alpha+ and CD8alpha- subclasses of dendritic cells direct the development of distinct T helper cells in vivo. J Exp Med. 1999; 189:587-592。
23. Pulendran B, Smith JL, Caspary G，等人Distinct dendritic cell subsets differentially regulate the class of immune response in vivo. Proc Natl Acad Sci. 1999; 96;1036-1041。
24. Pulendran B, Kumar P, Cutler CW, Mohamadzadeh M, Van Dyke T, Banchereau J. Lipopolysaccharides from distinct pathogens induce different classes of immune responses in vivo. J Immunol. 2001; 167:5067-5076。
25. Rissoan MC, Soumelis V, Kadowaki N，等人Reciprocal control of T helper cell and dendritic cell differentiation. Science. 1999; 283:1183-1186。
圖1顯示存在兩種主要DC分化路徑。骨髓路徑產生兩個子集：在諸如皮膚之複層上皮中發現的蘭格漢氏細胞(LC)及在所有其他組織中發現的間質DC(intDC)。
圖2顯示融合至抗原之重組抗蘭格素抗體保留結合於細胞表面蘭格素之能力(對CHO穩定蘭格素轉染物進行之FACS蘭格素2G3抗體)。
圖3A及圖3B顯示融合至人類前列腺特異性癌抗原之重組抗蘭格素抗體能夠引起來自健康供體之抗原特異性CD4+ T細胞擴增：(圖3A)比較經由CD40及蘭格素將PSA傳遞至DC以誘導產生IFNγ之PSA特異性CD4+ T細胞，且(圖3B)顯示對CD4+ T細胞進行染色以量測肽特異性細胞內IFNγ+細胞之頻率。
圖4顯示融合至人類前列腺特異性癌抗原之重組抗蘭格素抗體能夠引起來自前列腺癌患者之抗原特異性CD8+ T細胞擴增。
圖5A至圖5C顯示抗蘭格素優先靶向表皮LC：(圖5A)之2D FACs曲線顯示FluMP特異性CD8+ T細胞擴增，如藉由特異性HLA-A201-FluMP四聚體染色所評估；(圖5B)將圖5A中所示之資料匯總於圖表中，顯示平均值±sd(N=3)；且(圖5C)：與蘭格素-FluMP、對照IgG4-FluMP、游離FluMP一起培養人類LC或在無抗原下培養8天，8天後培養物上清液中之IFN-γ含量。
圖6A至圖6C顯示人類皮膚DC中蘭格素之差異表現：(圖 6A)展示在經分離之人類皮膚DC子集上蘭格素之表現；(圖6B)展示對自3個不同試樣分離之皮膚DC進行蘭格素之基因表現分析；且(圖6C)展示使用蘭格素及HLA-DR mAb對正常人類皮膚進行免疫螢光染色。
圖7展示抗蘭格素抗體(15B10)特異性地染色人類蘭格漢氏細胞(人類上皮薄片；DR-FITC抗蘭格素15B10-Alexa568；共焦63倍物鏡)。
圖8展示抗蘭格素抗體針對非人類靈長類動物目標之結合結果(基於珠粒之多重ELISA：人類相對於NHP蘭格素胞外域)。
圖9展示融合至來自H1N1流感病毒株之A型流感血球凝集素HA-1之重組抗蘭格素15B10抗體能夠在NHP中激發有效抗原特異性抗體產生(基於珠粒之抗原特異性IgG檢定)。
圖10展示抗人類DC受體與抗原之重組融合蛋白在NHP中誘導抗原特異性免疫反應。
圖11展示抗蘭格素G3抗體特異性地染色NHP蘭格漢氏細胞。
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(無元件符號說明)

Claims (28)

  1. 一種抗蘭格素(anti-Langerin)融合蛋白，其包含抗蘭格素抗體或其片段及位於該抗蘭格素抗體之羧基端的一或多個癌肽，其中當存在兩個或兩個以上抗原時，該等抗原由一或多個包含至少一個糖基化位點之連接肽分開，其中該抗蘭格素抗體或其片段包含：來自ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ ID NO.：45)之三個互補決定區及來自SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.：46)之三個互補決定區；或來自VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.：47)之三個互補決定區及來自SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.：48)之三個互補決定區。
  2. 如請求項1之融合蛋白，其中該抗體片段係選自Fv、Fab、Fab'、F(ab')2 、Fc或ScFv片段。
  3. 如請求項1之融合蛋白，其中該抗原為選自以下之癌抗原：MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWV(SEQ ID NO.：9)；LTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHD(SEQ ID NO.：10)； LMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVIS(SEQ ID NO.：11)；NDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERP(SEQ ID NO.：12)；SLYTKVVHYRKWIKDTIVANP(SEQ ID NO.：13)；IMDQVPFSV(SEQ ID NO.：14)；ITDQVPFSV(SEQ ID NO.：15)；YLEPGPVTV(SEQ ID NO.：16)；YLEPGPVTA(SEQ ID NO.：17)；KTWGQYWQV(SEQ ID NO.：18)； (SEQ ID NO.：19)；(SEQ ID NO.：20)；PLTFALQLHDPSGYLAEADLSYTWDFGDSSGTLISRAXVVTHTYLEPGPVTAQVVLQAAIPLTSCGSSPVPAS(SEQ ID NO.：21)；GTTDGHRPTAEAPNTTAGQVPTTEVVGTTPGQAPTAEPSGTTSVQVPTTEVISTAPVQMPTAESTGMTPEKVPVSEVMGTTLAEMSTPEATGMTPAEVSIVVLSGTTAA(SEQ ID NO.：22)；QVTTTEWVETTARELPIPEPEGPDASSIMSTESITGSLGPLLDGTATLRLVKRQVPLDCVLYRYGSFSVTLDIVQ(SEQ ID NO.：23)；GIESAEILQAVPSGEGDAFELTVSCQGGLPKEACMEISSPGCQPPAQRLCQPVLPSPACQLVLHQILKGGSGTYCLNVSLADTNSLAVVSTQLIVPGILLTGQEAGLGQ(SEQ ID NO.：24)；MEMKILRALNFGLGRPLPLHFLRRASKIGEVDVEQHTLAKYLMELTMLDY(SEQ ID NO.：25)； DWLVQVQMKFRLLQETMYMTVSIIDRFMQNNCVPKK(SEQ ID NO.：26).MEHQLLCCEVETIRRAYPDANLLNDRVLRAMLKAEETCAPSVSYFKCV(SEQ ID NO.：27)；QKEVLPSMRKIVATWMLEVCEEQKCEEEVFPLAMNYLDRFLSLEPVKKSRLQLLGATCMFVASKMKETIPLTAEKLCIYTDNSIRPEELLQMELL(SEQ ID NO.：28)；LVNKLKWNLAAMTPHDFIEHFLSKMPEAEENKQIIRKHAQTFVALCATDVKFISNPPSMV(SEQ ID NO.：29)；或AAGSVVAAVQGLNLRSPNNFLSYYRLTRFLSRVIKCDPDCLRACQEQIEALLESSLRQAQQNMDPKAAEEEEEEEEEVDLACTPTDVRDVDI(SEQ ID NO.：30)，或其片段。
  4. 如請求項1之融合蛋白，其中該抗原為選自以下之病毒抗原：VGFPVTPQVPLRPMTYKAAVDLSHFLKEKGGL(SEQ ID NO.：31)；HTQGYFPDWQNYTPGPGVRYPLTFGWLYKL(SEQ ID NO.：32)；EKIRLRPGGKKKYKLKHIV(SEQ ID NO.：33)；NPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILD(SEQ ID NO.：34)；AIFQSSMTKILEPFRKQNPDIVIYQYMDDLY(SEQ ID NO.：35)； (SEQ ID NO.：36)； (SEQ ID NO.：37)；或 (SEQ ID NO.：38)
  5. 如請求項1之融合蛋白，其中該一或多個肽連接子係選自：SSVSPTTSVHPTPTSVPPTPTKSSP(SEQ ID NO.：39)；PTSTPADSSTITPTATPTATPTIKG(SEQ ID NO.：40)；TVTPTATATPSAIVTTITPTATTKP(SEQ ID NO.：41)；或TNGSITVAATAPTVTPTVNATPSAA(SEQ ID NO.：42)。
  6. 一種抗原傳遞載體，其表現抗蘭格素抗體或其片段及位於該抗蘭格素抗體之輕鏈、重鏈、或輕鏈與重鏈二者之羧基端之兩個或兩個以上癌肽，其中當存在兩個或兩個以上癌肽時，該等癌肽由一或多個包含至少一個糖基化位點之肽連接子分開，且其中該抗蘭格素抗體或其片段包含：來自ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ ID NO.：45)之三個互補決定區及來自SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.：46)之三個互補決定區；或來自VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.：47)之三個互補決定區及來自SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.：48)之三個互補決定區。
  7. 如請求項6之載體，其中該等癌肽係選自腫瘤相關抗原，該等腫瘤相關抗原選自：CEA、前列腺特異性抗原 (PSA)、HER-2/neu、BAGE、GAGE、MAGE 1-4、6及12、MUC(黏蛋白)(例如MUC-1、MUC-2等)、GM2及GD2神經節苷脂、ras、myc、酪胺酸酶、MART(黑素瘤抗原)、MARCO-MART、細胞週期素(cyclin)B1、細胞週期素D、Pmel 17(gp100)、GnT-V內含子V序列(N-乙醯基葡糖胺基轉移酶V內含子V序列)、前列腺Ca psm、前列腺血清抗原(PSA)、PRAME(黑素瘤抗原)、β-索烴素(catenin)、MUM-1-B(黑素瘤廣泛存在之突變基因產物)、GAGE(黑素瘤抗原)1、BAGE(黑素瘤抗原)2-10、c-ERB2(Her2/neu)、EBNA(埃-巴氏病毒(Epstein-Barr Virus)核抗原)1-6、gp75、人類乳頭狀瘤病毒(HPV)E6及E7、p53、肺抗性蛋白(LRP)、Bcl-2及Ki-67。
  8. 如請求項6之載體，其中該等癌肽係選自腫瘤相關抗原，包含來自以下之抗原：白血病及淋巴瘤；神經腫瘤，諸如星形細胞瘤或膠質母細胞瘤；黑素瘤；乳癌；肺癌；頭頸癌；胃腸腫瘤；胃癌；結腸癌；肝癌；胰腺癌；泌尿生殖系統腫瘤，諸如子宮頸癌、子宮癌、卵巢癌、陰道癌、睪丸癌、前列腺癌或陰莖癌；骨腫瘤；血管腫瘤；或唇癌、鼻咽癌、咽癌及口腔癌、食道癌、直腸癌、膽囊癌、膽道癌、喉癌、肺癌及支氣管癌、膀胱癌、腎癌、腦癌及神經系統其他部分之癌症、甲狀腺癌；何傑金氏病(Hodgkin's disease)；非何傑金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)；多發性骨髓瘤；及白血病。
  9. 如請求項6之載體，其中該等抗原係選自：H1N1流感病 毒株之A型流感血球凝集素HA-1、HLA-A201-FluMP(58-66)肽(GILGFVFTL)四聚體、禽流感(HA5-1)、H1N1流感病毒株之A型流感血球凝集素HA-1(HA1-1)、熱纖梭菌(C.thermocellum)之錨定蛋白域(dockerin domain)(doc)、HIV gag p24(gag)，或一串HIV肽(Hipo5)、PSA(KLQCVDLHV)-四聚體，或HIV gag衍生之p24-PLA。
  10. 一種融合蛋白之用途，該融合蛋白包含抗蘭格素抗體或其片段及連接至該抗蘭格素抗體之羧基端的一或多個癌肽，該融合蛋白係用於製造增強T細胞反應之藥物，其中該抗蘭格素抗體或其片段包含：來自ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ ID NO.：45)之三個互補決定區及來自SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.：46)之三個互補決定區；或來自VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.：47)之三個互補決定區及來自SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.：48)之三個互補決定區。
  11. 如請求項10之用途，其中該等癌肽係選自腫瘤相關抗原，該等腫瘤相關抗原選自：CEA、前列腺特異性抗原(PSA)、HER-2/neu、BAGE、GAGE、MAGE 1-4、6及12、MUC(黏蛋白)(例如MUC-1、MUC-2等)、GM2及GD2 神經節苷脂、ras、myc、酪胺酸酶、MART(黑素瘤抗原)、MARCO-MART、細胞週期素B1、細胞週期素D、Pmel 17(gp100)、GnT-V內含子V序列(N-乙醯基葡糖胺基轉移酶V內含子V序列)、前列腺Ca psm、前列腺血清抗原(PSA)、PRAME(黑素瘤抗原)、β-索烴素、MUM-1-B(黑素瘤廣泛存在之突變基因產物)、GAGE(黑素瘤抗原)1、BAGE(黑素瘤抗原)2-10、c-ERB2(Her2/neu)、EBNA(埃-巴氏病毒核抗原)1-6、gp75、人類乳頭狀瘤病毒(HPV)E6及E7、p53、肺抗性蛋白(LRP)、Bcl-2及Ki-67。
  12. 如請求項10之用途，其中該等癌肽係選自腫瘤相關抗原，包含來自以下之抗原：白血病及淋巴瘤；神經腫瘤，諸如星形細胞瘤或膠質母細胞瘤；黑素瘤；乳癌；肺癌；頭頸癌；胃腸腫瘤；胃癌；結腸癌；肝癌；胰腺癌；泌尿生殖系統腫瘤，諸如子宮頸癌、子宮癌、卵巢癌、陰道癌、睪丸癌、前列腺癌或陰莖癌；骨腫瘤；血管腫瘤；或唇癌、鼻咽癌、咽癌及口腔癌、食道癌、直腸癌、膽囊癌、膽道癌、喉癌、肺癌及支氣管癌、膀胱癌、腎癌、腦癌及神經系統其他部分之癌症、甲狀腺癌；何傑金氏病；非何傑金氏淋巴瘤；多發性骨髓瘤；及白血病。
  13. 如請求項10之用途，其中該等抗原係選自：H1N1流感病毒株之A型流感血球凝集素HA-1、HLA-A201-FluMP(58-66)肽(GILGFVFTL)四聚體、禽流感(HA5-1)、H1N1流感 病毒株之A型流感血球凝集素HA-1(HA1-1)、熱纖梭菌之錨定蛋白域(doc)、HIV gag p24(gag)，或一串HIV肽(Hipo5)、PSA(KLQCVDLHV)-四聚體，或HIV gag衍生之p24-PLA。
  14. 一種製備抗蘭格素-抗原融合蛋白之方法，該方法包含：在宿主細胞中表現包含抗蘭格素抗體或其片段之融合蛋白，該融合蛋白包含位於該抗蘭格素抗體或其片段之羧基端的一或多個癌肽，其中當存在兩個或兩個以上癌肽時，該等癌肽由一或多個連接子分開，至少一個連接子包含一個糖基化位點，其中該抗蘭格素抗體或其片段包含：來自ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ ID NO.：45)之三個互補決定區及來自SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.：46)之三個互補決定區；或來自VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.：47)之三個互補決定區及來自SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.：48)之三個互補決定區；及分離該融合蛋白。
  15. 如請求項14之方法，其中表現於該宿主中之該融合蛋白進一步分離及純化。
  16. 如請求項14之方法，其中該宿主為真核細胞。
  17. 如請求項14之方法，其中該等癌肽係選自腫瘤相關抗原，該等腫瘤相關抗原選自：CEA、前列腺特異性抗原(PSA)、HER-2/neu、BAGE、GAGE、MAGE 1-4、6及12、MUC相關蛋白(黏蛋白)(例如MUC-1、MUC-2等)、GM2及GD2神經節苷脂、ras、myc、酪胺酸酶、MART(黑素瘤抗原)、MARCO-MART、細胞週期素B1、細胞週期素D、Pmel 17(gp100)、GnT-V內含子V序列(N-乙醯基葡糖胺基轉移酶V內含子V序列)、前列腺Ca psm、前列腺血清抗原(PSA)、PRAME(黑素瘤抗原)、β-索烴素、MUM-1-B(黑素瘤廣泛存在之突變基因產物)、GAGE(黑素瘤抗原)1、BAGE(黑素瘤抗原)2-10、c-ERB2(Her2/neu)、EBNA(埃-巴氏病毒核抗原)1-6、gp75、人類乳頭狀瘤病毒(HPV)E6及E7、p53、肺抗性蛋白(LRP)、Bcl-2及Ki-67。
  18. 如請求項14之方法，其中該等癌肽係選自腫瘤相關抗原，包含來自以下之抗原：白血病及淋巴瘤；神經腫瘤，諸如星形細胞瘤或膠質母細胞瘤；黑素瘤；乳癌；肺癌；頭頸癌；胃腸腫瘤；胃癌；結腸癌；肝癌；胰腺癌；泌尿生殖系統腫瘤，諸如子宮頸癌、子宮癌、卵巢癌、陰道癌、睪丸癌、前列腺癌或陰莖癌；骨腫瘤；血管腫瘤；或唇癌、鼻咽癌、咽癌及口腔癌、食道癌、直腸癌、膽囊癌、膽道癌、喉癌、肺癌及支氣管癌、膀胱癌、腎癌、腦癌及神經系統其他部分之癌症、甲狀腺 癌；何傑金氏病；非何傑金氏淋巴瘤；多發性骨髓瘤；及白血病。
  19. 如請求項14之方法，其中該等癌肽係選自以下之至少一者：MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWV(SEQ ID NO.：9)；LTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHD(SEQ ID NO.：10)；LMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVIS(SEQ ID NO.：11)；NDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERP(SEQ ID NO.：12)；SLYTKVVHYRKWIKDTIVANP(SEQ ID NO.：13)；IMDQVPFSV(SEQ ID NO.：14)；ITDQVPFSV(SEQ ID NO.：15)；YLEPGPVTV(SEQ ID NO.：16)；YLEPGPVTA(SEQ ID NO.：17)；KTWGQYWQV(SEQ ID NO.：18)； (SEQ ID NO.：19)；(SEQ ID NO.：20)；PLTFALQLHDPSGYLAEADLSYTWDFGDSSGTLISRAXVVTHTYLEPGPVTAQVVLQAAIPLTSCGSSPVPAS(SEQ ID NO.：21)； GTTDGHRPTAEAPNTTAGQVPTTEVVGTTPGQAPTAEPSGTTSVQVPTTEVISTAPVQMPTAESTGMTPEKVPVSEVMGTTLAEMSTPEATGMTPAEVSIVVLSGTTAA(SEQ ID NO.：22)；QVTTTEWVETTARELPIPEPEGPDASSIMSTESITGSLGPLLDGTATLRLVKRQVPLDCVLYRYGSFSVTLDIVQ(SEQ ID NO.：23)；GIESAEILQAVPSGEGDAFELTVSCQGGLPKEACMEISSPGCQPPAQRLCQPVLPSPACQLVLHQILKGGSGTYCLNVSLADTNSLAVVSTQLIVPGILLTGQEAGLGQ(SEQ ID NO.：24)；MEMKILRALNFGLGRPLPLHFLRRASKIGEVDVEQHTLAKYLMELTMLDY(SEQ ID NO.：25)；DWLVQVQMKFRLLQETMYMTVSIIDRFMQNNCVPKK(SEQ ID NO.：26).MEHQLLCCEVETIRRAYPDANLLNDRVLRAMLKAEETCAPSVSYFKCV(SEQ ID NO.：27)；QKEVLPSMRKIVATWMLEVCEEQKCEEEVFPLAMNYLDRFLSLEPVKKSRLQLLGATCMFVASKMKETIPLTAEKLCIYTDNSIRPEELLQMELL(SEQ ID NO.：28)；LVNKLKWNLAAMTPHDFIEHFLSKMPEAEENKQIIRKHAQTFVALCATDVKFISNPPSMV(SEQ ID NO.：29)；或AAGSVVAAVQGLNLRSPNNFLSYYRLTRFLSRVIKCDPDCLRACQEQIEALLESSLRQAQQNMDPKAAEEEEEEEEEVDLACTPTDVRDVDI(SEQ ID NO.：30)，或其片段。
  20. 一種在活體外擴增抗原特異性T細胞之方法，該方法包含：自癌症患者分離周邊血液單核細胞(PBMCs)；將該等分離之PBMCs與免疫原性量之α蘭格素-(PL-Ag)x 或α蘭格素-(Ag-PL)x 疫苗一起培育，其中「α蘭格素」代表抗蘭格素抗體或其片段，且該抗蘭格素抗體或其片段包含：來自ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ ID NO.：45) 之三個互補決定區及來自SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.：46)之三個互補決定區；或來自VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.：47)之三個互補決定區及來自SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.：48)之三個互補決定區；其中Ag為腫瘤相關抗原且x 為1至20之整數；在有效量之IL-2存在下擴增該等PBMCs；收集該等細胞；及評估該等細胞之細胞激素(cytokine)產生以判定抗癌特異性T細胞之存在。
  21. 一種腫瘤相關抗原特異性T細胞，其係由包含以下之方法製備：自癌症患者分離周邊血液單核細胞(PBMCs)；將該等分離之PBMCs與免疫原性量之α-蘭格素-(PL-Ag)x 或α-蘭格素-(Ag-PL)x 疫苗一起培育，其中「α蘭格素」代表抗蘭格素抗體或其片段，且該抗蘭格素抗體或其片段包含：來自ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ ID NO.：45)之三個互補決定區及來自SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSL TSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.：46)之三個互補決定區；或來自VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.：47)之三個互補決定區及來自SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.：48)之三個互補決定區；其中Ag為腫瘤相關抗原且x 為1至20之整數；在有效量之IL-2存在下擴增該等PBMCs；收集該等細胞；及評估該等細胞之細胞激素產生以判定腫瘤相關抗原特異性T細胞之存在。
  22. 一種治療性疫苗，其包含融合蛋白，包含下式：Ab-(PL-Ag)x；Ab-(Ag-PL)x；Ab-(PL-Ag-PL)x；Ab-(Ag-PL-Ag)x；Ab-(PL-Ag)x-PL；或Ab-(Ag-PL)x-Ag；其中Ab為抗蘭格素單株抗體或其片段，且該抗蘭格素抗體或其片段包含：來自ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ ID NO.：45)之三個互補決定區及來自SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.：46)之三個互補決定區；或來自VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.：47)之三個互補決定區及來自SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQA PGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.：48)之三個互補決定區；PL為至少一個包含至少一個糖基化位點之肽連接子；Ag為至少一個傳染病抗原；且x為1至20之整數。
  23. 一種在活體外擴增抗原特異性T細胞之方法，該方法包含：自疑似患有感染之患者分離周邊血液單核細胞(PBMCs)；將該等分離之PBMCs與免疫原性量之α蘭格素-(PL-Ag)x 或α蘭格素-(Ag-PL)x 疫苗一起培育，其中「α蘭格素」代表抗蘭格素抗體或其片段，且該抗蘭格素抗體或其片段包含：來自ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ ID NO.：45)之三個互補決定區及來自SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.：46)之三個互補決定區；或來自VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.：47)之三個互補決定區及來自SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.：48)之三個互補決定區；其中Ag為傳染物之抗原且x 為1至20之整數；在有效量之一或多種細胞激素存在下擴增該等PBMCs； 收集該等細胞；及評估該等細胞之細胞激素產生以判定抗傳染物特異性T細胞之存在。
  24. 一種病毒相關抗原特異性T細胞，其係由包含以下之方法製備：自疑似患有病毒感染之患者分離周邊血液單核細胞(PBMCs)；將該等分離之PBMCs與免疫原性量之α-蘭格素-(PL-Ag)x 或α-蘭格素-(Ag-PL)x 疫苗一起培育，其中「α蘭格素」代表抗蘭格素抗體或其片段，且該抗蘭格素抗體或其片段包含：來自ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ ID NO.：45)之三個互補決定區及來自SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.：46)之三個互補決定區；或來自VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.：47)之三個互補決定區及來自SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.：48)之三個互補決定區；其中Ag為病毒相關抗原且x 為1至20之整數；在有效量之一或多種細胞激素存在下擴增該等PBMCs； 收集該等細胞；及評估該等細胞之細胞激素產生以判定病毒相關抗原特異性T細胞的存在。
  25. 一種治療性疫苗，其包含融合蛋白，包含下式：Ab-(PL-Ag)x；Ab-(Ag-PL)x；Ab-(PL-Ag-PL)x；Ab-(Ag-PL-Ag)x ；Ab-(PL-Ag)x-PL；或Ab-(Ag-PL)x-Ag；其中Ab為抗蘭格素單株抗體或其片段，且該抗蘭格素抗體或其片段包含：來自ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ ID NO.：45)之三個互補決定區及來自SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.：46)之三個互補決定區；或來自VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.：47)之三個互補決定區及來自SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.：48)之三個互補決定區；PL為至少一個包含至少一個糖基化位點之肽連接子；Ag為至少一個病毒抗原；且x為1至20之整數。
  26. 一種抗體，其包含來自ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ ID NO.：45)之三個互補決定區及來自SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGK ATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.：46)之三個互補決定區；或來自VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.：47)之三個互補決定區及來自SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.：48)三個互補決定區。
  27. 如請求項26之抗體，其中該抗體經人類化。
  28. 一種經分離及純化之核酸，其包含SEQ ID NO：49、51、53或55或其人類化衍生物。
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Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2010222929B2 (en) 2008-07-16 2013-07-25 Baylor Research Institute Antigen presenting cell targeted anti-viral vaccines
US9562104B2 (en) 2009-03-10 2017-02-07 Baylor Research Institute Anti-CD40 antibodies
DK2406289T3 (en) 2009-03-10 2017-05-01 Baylor Res Inst ANTIGEN PRESENTING CELL TARGETED ANTIVIRUS VACCINES
US20110081343A1 (en) 2009-09-14 2011-04-07 Baylor Research Institute Vaccines directed to langerhans cells
KR20130036246A (ko) 2010-05-07 2013-04-11 베일러 리서치 인스티튜트 사람 ｃｄ8+ ｔ 세포의 수지상 세포 면역수용체(ｄｃｉｒ)-매개 교차프라이밍
WO2012129227A1 (en) * 2011-03-22 2012-09-27 Baylor Research Institute Dendritic cells (dcs) targeting for tuberculosis (tb) vaccine
TW201300418A (zh) * 2011-03-25 2013-01-01 Baylor Res Inst 用於抗ｃ型肝炎病毒免疫之組合物及方法
AR088428A1 (es) * 2011-08-25 2014-06-11 Baylor Res Inst Ensayo multiplexado basado en esferas autoensambladas para anticuerpos especificos de antigenos
US9574013B2 (en) 2012-12-07 2017-02-21 Vanderbilt University Antibodies against factor XII and uses thereof
CN105555303A (zh) 2013-06-28 2016-05-04 贝勒研究院 用于多发性硬化症的树突细胞asgpr靶向免疫治疗剂
BR112016008806A2 (pt) * 2013-11-01 2017-10-03 Pfizer Vetores para expressão de antígenos associados à próstata
AU2015204503B2 (en) 2014-01-13 2020-07-09 Baylor Research Institute Novel vaccines against HPV and HPV-related diseases
EP3282014B1 (en) * 2015-02-12 2023-09-06 Tohoku University Cancer cell-specific anti-podocalyxin antibody and method for producing same
WO2017120280A1 (en) * 2016-01-06 2017-07-13 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Antigen targeting to porcine langerin
CN109219445B (zh) 2016-04-01 2022-08-26 上海煦顼技术有限公司 嵌合抗原受体修饰细胞治疗癌症的应用
US10654934B2 (en) 2016-04-01 2020-05-19 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Use of chimeric antigen receptor modified cells to treat cancer
US11162945B2 (en) * 2016-04-11 2021-11-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for detecting single T cell receptor affinity and sequence
US10610585B2 (en) 2017-09-26 2020-04-07 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods and compositions for treating and preventing HIV
BR112020014610A8 (pt) * 2018-01-18 2021-04-06 Humboldt Univ Zu Berlin uso de um veículo para direcionamento molecular, uso de uma composição, métodos para a entrega de carga direcionada e para identificar uma dose apropriada, composição farmacêutica, composição para diagnóstico, kit médico e vacina
JP2023528017A (ja) 2020-05-26 2023-07-03 アンセルム（アンスティチュート・ナシオナル・ドゥ・ラ・サンテ・エ・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・メディカル） 重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２）ポリペプチドおよびワクチン目的でのその使用
CN111850004B (zh) * 2020-07-27 2022-04-22 齐鲁工业大学 一种活性提高的纤维小体对接蛋白突变体36740及应用
EP4244253A1 (en) 2020-11-12 2023-09-20 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Antibodies conjugated or fused to the receptor-binding domain of the sars-cov-2 spike protein and uses thereof for vaccine purposes
MX2023007610A (es) 2020-12-23 2023-07-12 Inserm Institut National De La Sante Et De La Rech Medicale Vacuna contra clamidia basada en el direccionamiento del antigeno momp vs4 a las celulas presentadoras de antigeno.
JP2024504195A (ja) 2021-01-29 2024-01-30 アンセルム（アンスティチュート・ナシオナル・ドゥ・ラ・サンテ・エ・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・メディカル） クラミジア・トラコマチス抗原性ポリペプチドおよびワクチン目的のためのその使用
TWI815572B (zh) * 2021-09-27 2023-09-11 美商圖策智能科技有限公司 特定病毒的突變耐受表位的推估方法及系統
WO2023088968A1 (en) 2021-11-17 2023-05-25 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Universal sarbecovirus vaccines
CN117343178A (zh) * 2022-07-04 2024-01-05 王昭 一种结合人cd207的抗体、抗人cd207的嵌合抗原受体及其应用
WO2024074571A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Dc-targeting vaccine against nipah virus infection

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7247615B2 (en) * 2001-11-30 2007-07-24 United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Peptide agonists of prostate-specific antigen and uses therefor

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6685930B1 (en) * 1991-03-27 2004-02-03 Tanox, Inc. Methods and substances for recruiting therapeutic agents to solid tumors
WO1994004679A1 (en) * 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
CA2408594A1 (en) 2000-05-08 2001-11-15 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to dendritic cells
US7560534B2 (en) * 2000-05-08 2009-07-14 Celldex Research Corporation Molecular conjugates comprising human monoclonal antibodies to dendritic cells
CN1239701C (zh) 2000-05-19 2006-02-01 梨树化学株式会社 抗表皮生长因子受体的人源化抗体
WO2004091543A2 (en) * 2003-03-04 2004-10-28 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Method of treating autoimmune disease by inducing antigen presentation by tolerance inducing antigen presenting cells
US7309491B2 (en) * 2003-04-11 2007-12-18 Antigenics Inc. Heat shock protein-based vaccines and immunotherapies
WO2005037190A2 (en) * 2003-09-03 2005-04-28 Dendritherapeutics, Inc. Multiplex vaccines
KR20170086700A (ko) * 2005-04-08 2017-07-26 아르고스 쎄라퓨틱스 인코포레이티드 수지상 세포 조성물 및 방법
MX2009008143A (es) * 2007-02-02 2009-10-20 Baylor Res Inst Antienos multivariables acomplejados con anticuerpo monoclonal humanizado de apuntamiento.
NZ585556A (en) * 2007-11-07 2012-07-27 Celldex Therapeutics Inc Antibodies that bind human dendritic and epithelial cell 205 (dec-205)
KR20110036618A (ko) * 2008-07-16 2011-04-07 베일러 리서치 인스티튜트 극대화된 Ｇａｇ 및 Ｎｅｆ를 수지상 세포에 표적화시킴을 기본으로 하는 ＨＩＶ 백신
DK2406289T3 (en) * 2009-03-10 2017-05-01 Baylor Res Inst ANTIGEN PRESENTING CELL TARGETED ANTIVIRUS VACCINES
US20110081343A1 (en) 2009-09-14 2011-04-07 Baylor Research Institute Vaccines directed to langerhans cells

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7247615B2 (en) * 2001-11-30 2007-07-24 United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Peptide agonists of prostate-specific antigen and uses therefor

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Christina L. van Broekhoven.," Targeting Dendritic Cells with Antigen-Containing Liposomes : A Highly Effective Procedure for Induction of Antitumor Immunity and for Tumor Immunotherapy." Cancer Res 2004, 64, 4357-4365 摘要 *
Jacques Banchereau.," Immune and Clinical Responses in Patients with Metastatic Melanoma to CD34 + Progenitor-derived Dendritic Cell Vaccine." Cancer Res 2001, 61, 6451-6458 摘要、第6453頁右欄第3段、表1 *
MICHAEL N. ROBERTSON.," Efficient Antigen Presentation to Cytotoxic T Lymphocytes by Cells Transduced with a Retroviral Vector Expressing the HIV-1 Nef Protein."AIDS RESEARCH AND HUMAN RETROVIRUSES 1993, 9(12), 1217-1223 表1 *

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