CN105934435A - 用作ATR激酶抑制剂的2-氨基-6-氟-N-[5-氟-吡啶-3-基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺化合物，其制备，不同的固体形式，及其放射性标记的衍生物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用作ATR蛋白激酶抑制剂的化合物。本发明涉及包含本发明化合物的药学上可接受的组合物；使用本发明化合物治疗各种疾病、疾患和病症的方法；制备本发明化合物的方法；本发明化合物的制备中间体；和本发明化合物的固体形式。本发明化合物具有式I‑A或I‑B，其中变量是如本文定义的。

Description

用作ATR激酶抑制剂的2-氨基-6-氟-N-[5-氟-吡啶-3-基]吡 唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺化合物，其制备，不同的固体形 式，及其放射性标记的衍生物

背景技术

ATR(“ATM和Rad3相关”)激酶是一种参与DNA损伤细胞应答的蛋白激酶。ATR激酶作用于ATM(“共济失调性毛细血管扩张突变”)激酶和很多其他蛋白质，以调节细胞对于DNA损伤的应答，普遍称之为DNA损伤应答(“DDR”)。DDR刺激DNA修复，促进存活，并且通过激活细胞周期检查点而stalls细胞周期进程，这为修复提供了时间。若没有DDR，细胞对于DNA损伤更敏感得多，容易受诸如DNA复制等内源性细胞过程或者常用于癌症疗法的外源性DNA伤害事件诱导而死于DNA损伤。

健康细胞能够依赖于不同蛋白质宿主进行DNA修复，包括DDR激酶ATR。在有些情况下，这些蛋白质能够通过功能性激活多余的DNA修复过程而代偿彼此。与之相反，很多癌细胞在一些它们的DNA修复过程中隐匿了缺损，例如ATM信号传递，因此显示出对于它们剩余的完整DNA修复蛋白的巨大依赖性，包括ATR。

另外，很多癌细胞表达活化了的致癌基因或者缺乏关键的肿瘤抑制物，这能够使这些癌细胞倾向于DNA复制期失调，继而导致DNA损伤。ATR已被暗示为一种响应于破坏了的DNA复制的DDR关键组分。其结果是，这些癌细胞的存活比健康细胞更加依赖于ATR活性。相应地，ATR抑制剂可以用于癌症治疗，单用或者与DNA损伤剂联用，因为它们关闭了就很多癌细胞的细胞存活而言比健康正常细胞更重要的DNA修复机制。

事实上，ATR功能的破坏(例如由于基因缺失)已被显示在有和没有DNA损伤剂的存在下都促进癌细胞死亡。这提示了ATR抑制剂作为单一成分和作为辐射疗法或遗传毒性化学疗法的强力增敏剂都可能是有效的。

基于这些原因，癌症治疗需要开发强效的和选择性ATR抑制剂，作为单一成分或者作为与辐射疗法或遗传毒性化学疗法的组合疗法。进而，可能需要一种适应大规模合成并且在目前已知方法的基础上有所改进的ATR抑制剂合成途径。

利用文献已知的多种方法能够表达和分离ATR肽(例如参见etal,PNAS 99:10,pp6673-6678,May 14,2002；另见Kumagai et al.Cell 124,pp943-955,March 10,2006；Unsal-Kacmaz et al.Molecular and Cellular Biology,Feb 2004,p1292-1300；和Hall-Jackson et al.Oncogene 1999、18,6707-6713)。

附图说明

图1a:XRPD化合物I-I乙醇溶剂化物

图2a:TGA化合物I-1·乙醇溶剂化物

图3a:DSC化合物I-1·乙醇溶剂化物

图4a:化合物I-1·乙醇溶剂化物的固体形式¹³C NMR光谱(12.5kHz旋转)

图5a:化合物I-1·乙醇溶剂化物的固体形式¹⁹F NMR光谱(12.5kHz旋转)

图1b:XRPD化合物I-1·水合物I

图2b:TGA化合物I-1·水合物I

图3b:DSC化合物I-1·水合物I

图4b:XRPD化合物I-1·水合物II

图5b:化合物I-1·水合物II的固体形式¹³C NMR光谱(11kHz旋转)

图6b:化合物I-1·水合物II的固体形式¹⁹F NMR光谱(11kHz旋转)

图1c:XRPD化合物I-I无水形式A

图2c:TGA化合物I-I无水形式A

图3c:DSC化合物I-I无水形式A

图4c:基于单晶X-射线分析的化合物I-1·无水形式A构象图

图5c:显示化合物I-1·无水形式A堆叠顺序的构象图

图6c:化合物I-1·无水形式A的固体形式¹³C NMR光谱(12.5kHz旋转)

图7c:化合物I-1·无水形式A的固体形式¹⁹F NMR光谱(12.5kHz旋转)

图1d:XRPD化合物I-1·无水形式B

图2d:TGA化合物I-1·无水形式B

图3d:DSC化合物I-1·无水形式B

图4d:化合物I-1·无水形式B的固体形式¹³C NMR光谱(12.5kHz旋转)

图5d:化合物I-1·无水形式B的固体形式¹⁹F NMR光谱(12.5kHz旋转)

图1e:XRPD化合物I-1·无水形式C

图2e:TGA化合物I-1·无水形式C

图3e:DSC化合物I-1·无水形式C

图4e:化合物I-1·无水形式C的固体形式¹³C NMR光谱(12.5kHz旋转)

图5e:化合物I-1·无水形式C的固体形式¹⁹F NMR光谱(12.5kHz旋转)

图1f:XRPD化合物I-1·非晶型

图2f:DSC化合物I-1·非晶型

图3f:化合物I-1·非晶型的固体形式¹³C NMR光谱(12.5kHz旋转)

图4f:化合物I-1·非晶型的固体形式¹⁹F NMR光谱(12.5kHz旋转)

图1g:XRPD化合物I-1·DMSO溶剂化物

图2g:TGA化合物I-1·DMSO溶剂化物

图3g:DSC化合物I-1·DMSO溶剂化物

图1h:XRPD化合物I-1·DMAC溶剂化物

图2h:TGA化合物I-1·DMAC溶剂化物

图3h:DSC化合物I-1·DMAC溶剂化物

图1i:XRPD化合物I-1·丙酮溶剂化物

图2i:TGA化合物I-1·丙酮溶剂化物

图3i:DSC化合物I-1·丙酮溶剂化物

图1j:XRPD化合物I-1·异丙醇溶剂化物

图2j:TGA化合物I-1·异丙醇溶剂化物

图3j:DSC化合物I-1·异丙醇溶剂化物

发明内容

本发明涉及ATR抑制剂的固体形式、包括ATR抑制剂的组合物、以及氘化ATR抑制剂。本发明也涉及制备用作ATR激酶抑制剂的化合物的方法和中间体，例如氨基-吡唑并嘧啶衍生物和相关分子。氨基-吡唑并嘧啶衍生物可用作ATR抑制剂，也可用于制备ATR抑制剂。

本发明在一方面提供制备式I-A化合物的方法：

另一方面包含制备式I-1化合物的方法：

本发明在另一方面包含式I-B化合物：

或其药学上可接受的盐或衍生物，其中：

每个Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹¹、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹独立地是氢或氘；其条件是至少一个Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹¹、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘；

每个X¹、X²、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷、X⁸和X⁹独立地选自¹²C或¹³C；

X³独立地选自-¹²C(O)-或-¹³C(O)-。

本发明另外一方面提供式I-1化合物的固体形式：

本文公开的一些实施方式一般性涉及组合物，它可以包括有效量的化合物I-1或化合物I-1的多晶无水形式A(下称“形式A”)或者上述化合物的药学上可接受的盐。

本文公开的其他实施方式一般性涉及制备本文所述这类组合物(例如可以包括有效量的化合物I-1或形式A或者上述化合物的药学上可接受的盐的组合物)的方法。本文还公开的其他实施方式一般性涉及利用本文所述组合物治疗癌症的方法。

本文公开的一些实施方式一般性涉及本文所述组合物(例如可以包括有效量的化合物I-1或形式A或者上述化合物的药学上可接受的盐的组合物)在制造治疗癌症的药物中的用途。

本发明的其他方面阐述如下。

发明的详细说明

出于本申请的目的，将被理解的是术语实施方式、实施例和方面可互换使用。

方法

本发明的另一方面包含制备式I-A化合物的方法：

包含使式6化合物：

在适合于生成酰胺键的条件下反应，其中：

R¹独立地选自氟、氯或–C(J¹)₂CN；

J¹独立地选自H或C_1-2烷基；或者

两次出现的J¹与它们所连接的碳原子一起构成3－4元可选被取代的碳环；

R²独立地选自H；卤素；-CN；NH₂；C_1-2烷基，可选地被0－3次出现的氟取代；或者C_1-3脂族链，其中该脂族链的至多两个亚甲基单元可选地被–O-、-NR-、-C(O)-或-S(O)_n代替；

R³独立地选自H；卤素；C_1-4烷基，可选地被1－3次出现的卤素取代；C_3-4环烷基；-CN；或者C_1-3脂族链，其中该脂族链的至多两个亚甲基单元可选地被–O-、-NR-、-C(O)-或-S(O)_n代替；

R⁴独立地选自Q¹或C_1-10脂族链，其中该脂族链的至多四个亚甲基单元可选地被–O-、-NR-、-C(O)-或-S(O)_n-代替；每个R⁴可选地被0－5次出现的J^Q取代；或者

R³和R⁴与它们所键合的原子一起构成5－6元芳族或非芳族环，具有0－2个选自氧、氮或硫的杂原子；由R³和R⁴构成的环可选地被0－3次出现的J^Z取代；

Q¹独立地选自3－7元完全饱和、部分不饱和或芳族单环的环，该3－7元环具有0－3个选自氧、氮或硫的杂原子；或者7－12元完全饱和、部分不饱和或芳族二环的环，具有0－5个选自氧、氮或硫的杂原子；

J^z独立地选自C_1-6脂族基、＝O、卤代基或→O；

J^Q独立地选自–CN；卤素；＝O；Q²；或者C_1-8脂族链，其中该脂族链的至多三个亚甲基单元可选地被–O-、-NR-、-C(O)-或-S(O)_n-代替；每次出现的J^Q可选地被0－3次出现的J^R取代；或者

两次出现在同一原子上的J^Q与它们所连接的该原子一起构成3－6元环，具有0－2个选自氧、氮或硫的杂原子；其中由两次出现的J^Q构成的该环可选地被0－3次出现的J^X取代；或者

两次出现的J^Q与Q¹一起构成6－10元饱和或部分不饱和的桥连环系；

Q²独立地选自3－7元完全饱和、部分不饱和或芳族单环的环，具有0－3个选自氧、氮或硫的杂原子；或者7－12元完全饱和、部分不饱和或芳族二环的环，具有0－5个选自氧、氮或硫的杂原子；

J^R独立地选自–CN；卤素；＝O；→O；Q³；或者C_1-6脂族链，其中该脂族链的至多三个亚甲基单元可选地被–O-、-NR-、-C(O)-或-S(O)_n-代替；每个J^R可选地被0－3次出现的J^T取代；或者

两次出现在同一原子上的J^R与它们所连接的该原子一起构成3－6元环，具有0－2个选自氧、氮或硫的杂原子；其中由两次出现的J^R构成的该环可选地被0－3次出现的J^X取代；或者

两次出现的J^R与Q²一起构成6－10元饱和或部分不饱和的桥连环系；

Q³是3－7元完全饱和、部分不饱和或芳族单环的环，具有0－3个选自氧、氮或硫的杂原子；或者7－12元完全饱和、部分不饱和或芳族二环的环，具有0－5个选自氧、氮或硫的杂原子；

J^X独立地选自-CN；＝O；卤素；或者C_1-4脂族链，其中该脂族链的至多两个亚甲基单元可选地被–O-、-NR-、-C(O)-或-S(O)_n-代替；

J^T独立地选自卤代基、-CN；→O；＝O；-OH；C_1-6脂族链，其中该脂族链的至多两个亚甲基单元可选地被–O-、-NR-、-C(O)-或-S(O)_n-代替；或者3－6元非芳族环，具有0－2个选自氧、氮或硫的杂原子；每次出现的J^T可选地被0－3次出现的J^M取代；或者

两次出现在同一原子上的J^T与它们所连接的该原子一起构成3－6元环，具有0－2个选自氧、氮或硫的杂原子；或者

两次出现的J^T与Q³一起构成6－10元饱和或部分不饱和的桥连环系；

J^M独立地选自卤代基或C_1-6脂族基；

J是H或Cl；

n是0、1或2；

R独立地选自H或C_1-4脂族基。

出于本申请的目的，将被理解的是若两次出现的J^Q与Q¹一起构成桥连环系，则两次出现的J^Q连接于Q¹的分开的原子。另外，若两次出现的J^R与Q²一起构成桥连环系，则两次出现的J^R连接于Q²的分开的原子。而且，若两次出现的J^T与Q³一起构成桥连环系，则两次出现的J^T连接于Q³的分开的原子。

将被本领域技术人员理解的是→O中的箭头代表配位键。

反应条件

在一些实施例中，适合于生成酰胺键的条件包含在非质子溶剂中，在加热下，使式6化合物与取代的3-氨基吡啶反应。在其他实施例中，非质子溶剂选自NMP、可选被取代的吡啶或DMF。在另一种实施方式中，非质子溶剂是可选被取代的吡啶。在其他实施方式中，反应温度为至少80℃。在另一种实施方式中，反应温度为至少100℃。

在另一种实施方式中，上述方法进一步包含制备式6化合物：

通过使式5化合物：

在适合于生成活化酯的条件下反应，其中R¹和J是如本文定义的。

在一些实施方式中，适合于生成活化酯的条件包含在有机碱的存在下，使式5化合物与酰胺偶联剂反应。在其他实施方式中，有机碱是脂族胺。在其他实施方式中，有机碱独立地选自三乙胺或DIPEA。在一种或多种实施方式中，酰胺偶联剂独立地选自TBTU、TCTU、HATU、T3P或COMU。在另一种实施方式中，酰胺偶联剂独立地选自TBTU或TCTU。在另一种实施方式中，酰胺偶联剂是TCTU。

本发明的另一方面包含制备式I-A化合物的方法：

包含使式5化合物：

在适合于生成酰胺键的条件下反应，其中R¹、R²、R³和R⁴是如本文定义的。

本发明另外一方面包含制备式5化合物的方法：

通过使式4化合物：

在适合的水解条件下反应，其中R¹是如本文定义的。

在一些实施方式中，适合的水解条件包含在金属催化剂的存在下，使式4化合物与硅烷反应。在其他实施方式中，硅烷是苯基硅烷。在另一种实施方式中，金属催化剂是钯催化剂。在另外一种实施方式中，钯催化剂是Pd(PPh₃)₄。在另一种实施方式中，适合的水解条件包含在金属催化剂的存在下，使式4化合物与4-甲基苯亚磺酸盐反应。

在其他的实施方式中，适合的水解条件包含使式4化合物与碱水溶液反应。在一些实施方式中，碱水溶液选自LiOH、NaOH或KOH。

本发明的另一方面包含制备式4化合物的方法：

通过使式3化合物：

在适合于生成嘧啶环的缩合条件下反应。

在一些实施方式中，适合于生成嘧啶环的缩合条件包含在溶剂的存在下，使式3化合物与1,3-二亲电物反应。在另一种实施方式中，1,3-二亲电物选自1,3-二醛或3-(二乙氨基)-丙-2-烯醛。在其他的实施方式中，溶剂选自DMF或DMSO。在其他实施方式中，1,3-二亲电物是从被保护的1,3-二亲电物就地生成的。在另一种实施方式中，1,3-二亲电物是在磺酸的存在下从缩酮生成的。在另外一种实施方式中，磺酸是PTSA。

本发明的另一方面包含制备式3化合物的方法：

通过使式2化合物：

在适合于生成吡唑环的缩合条件下反应。

在一些实施方式中，适合于生成吡唑环的缩合条件包含在非质子溶剂中，在碱性条件下，使式2化合物与肼或水合肼反应。在另一种实施方式中，非质子溶剂是DMF。在另外一种实施方式中，碱性条件包含在乙酸钾或乙酸钠的存在下使式2化合物反应。

本发明另外一方面包含制备式2化合物的方法：

通过使式1化合物：

在适合的阴离子缩合条件下反应。

在一些实施方式中，适合的阴离子缩合条件包含1)在溶剂的存在下，使式1化合物与碱反应，生成式1化合物的阴离子；和2)使式1化合物的阴离子与三氯乙腈反应。在其他的实施方式中，碱是乙酸钾。在另外一种实施方式中，溶剂是醇。在其他实施方式中，溶剂是异丙醇。

本发明的一种实施方式包含制备式I-A化合物的方法：

包含使式9化合物：

在适合于生成嘧啶环的条件下反应，其中R¹、R²、R³和R⁴是如本文定义的。

在一些实施方式中，适合于生成嘧啶环的缩合条件包含在溶剂的存在下，使式9化合物与1,3-二亲电物反应。在另一种实施方式中，1,3-二亲电物选自1,3-二醛或3-(二乙氨基)-丙-2-烯醛。在其他的实施方式中，溶剂选自DMF或DMSO水溶液。在其他实施方式中，1,3-二亲电物是从被保护的1,3-二亲电物就地生成的。在另一种实施方式中，1,3-二亲电物是在磺酸的存在下从缩酮生成的。在另外一种实施方式中，磺酸是PTSA。

本发明的另一种实施方式包含制备式9化合物的方法：

通过使式8化合物：

在适合于生成吡唑环的缩合条件下反应。

在一些实施方式中，适合于生成吡唑环的缩合条件包含1)在溶剂的存在下，使式8化合物与碱反应，生成式8化合物的阴离子；2)使该阴离子与三氯乙腈反应；和3)在非质子溶剂中，使来自2)的产物与肼或水合肼反应。在另一种实施方式中，非质子溶剂是NMP或DMF。在一些实施方式中，碱选自乙酸钠或乙酸钾。

另外一种实施方式包含制备式8化合物的方法：

通过使式7化合物：

在适合于生成酰胺键的条件下反应。

在一些实施例中，适合于生成酰胺键的条件包含在非质子溶剂和有机碱的存在下，使式7化合物与取代的3-氨基吡啶以及酰胺偶联剂反应。在其他实施例中，非质子溶剂选自NMP或DMF。在另一种实施方式中，有机碱是脂族胺。在其他的实施方式中，有机碱独立地选自三乙胺或DIPEA。在另外一种实施方式中，酰胺偶联剂独立地选自TBTU或TCTU。

化合物I-1的合成

本发明的另一方面提供制备式I-1化合物的方法：

包含使式30化合物：

与式25化合物：

在适合于生成酰胺键的条件下反应的步骤。

本发明的其他实施方式提供制备式30化合物的方法：

通过使式28化合物：

在适合于生成羧酸的去保护条件下反应。

另一种实施方式提供制备式28化合物的方法：

通过使式6a*化合物：

与式27化合物：

在适合于生成酰胺键的条件下反应。

在一些实施方式中，适合于生成酰胺键的条件包含在酰胺偶联伴侣、非质子溶剂和碱的存在下，使式30化合物与式25化合物反应。在其他实施方式中，非质子溶剂独立地选自NMP、DMF或四氢呋喃。在其他的实施方式中，非质子溶剂是四氢呋喃。在另一种实施方式中，碱是脂族胺。在另外一种实施方式中，碱是DIPEA。在一些实施方式中，酰胺偶联伴侣独立地选自CDI、TBTU或TCTU。在一种或多种实施方式中，酰胺偶联伴侣是TCTU。在另外一种实施方式中，酰胺偶联伴侣是CDI。

在其他实施方式中，适合的去保护条件包含在溶剂的存在下，使式28化合物与酸反应。在一些实施方式中，酸是HCl。在另一种实施方式中，溶剂是1,4-二噁烷。

在另外一种实施方式中，适合于生成酰胺键的条件包含在非质子溶剂中，在加热下，使式6a*化合物与式27化合物反应。在其他的实施方式中，非质子溶剂独立地选自NMP、吡啶或DMF。在另一种实施方式中，非质子溶剂是吡啶。在一些实施方式中，反应是在至少80℃的温度下进行的。

本发明的另一方面提供制备式27化合物的方法：

包含使式26化合物：

在适合于生成胺的条件下反应的步骤。

在一些实施方式中，适合于生成胺的条件包含在本领域技术人员已知的Buchwald-Hartwig胺化条件下，使式27化合物反应。

另外一种实施方式提供制备式26化合物的方法：

通过1)使式化合物18：

在适合的卤素交换条件下反应，生成式32化合物

和

2)使式32化合物：

与式22化合物：

在适合的置换条件下反应。

在一些实施方式中，适合的卤素交换条件包含在非质子溶剂和相转移催化剂的存在下，使式18化合物与氟化钾反应。在其他实施方式中，非质子溶剂独立地选自DMSO、DMF或环丁砜。在其他的实施方式中，相转移催化剂是Me₄NCl。在其他的实施方式中，适合的置换条件包含在碱的存在下，使式32化合物与式22化合物反应。在另一种实施方式中，碱是脂族胺。在一些实施方式中，脂族胺是DIPEA。

本发明的其他实施方式提供制备式18化合物的方法：

通过使式31化合物：

在适合的卤化条件下反应。

在一些实施方式中，适合的卤化条件包含1)使式31化合物与碱反应生成阴离子；和2)使该阴离子与氯化剂反应。在另外一种实施方式中，碱是LDA。在另一种实施方式中，氯化剂是1,1,1,2,2,2-六氯乙烷。

本发明的一些实施方式提供制备式I-1化合物的方法：

包含使式33化合物：

与式25化合物：

在适合于生成酰胺键的条件下反应的步骤。

在一些实施方式中，适合于生成酰胺键的条件包含在酰胺偶联伴侣、非质子溶剂和碱的存在下，使式33化合物与式25化合物反应。在其他实施方式中，非质子溶剂独立地选自NMP、DMF或四氢呋喃。在其他的实施方式中，非质子溶剂是四氢呋喃。在另一种实施方式中，碱是脂族胺。在另外一种实施方式中，碱是DIPEA。在一些实施方式中，酰胺偶联伴侣独立地选自TBTU或TCTU。在一种或多种实施方式中，酰胺偶联伴侣是TCTU。

另外一种实施方式提供制备式化合物33的方法：

包含使式28化合物：

在适合的去保护条件下反应的步骤。

在一些实施方式中，适合于裂解叔丁基酯的去保护条件包含在溶剂的存在下，使式28化合物与酸反应。在一种实施方式中，酸选自但不限于甲磺酸(优选)、PTSA、TFA或HCl。在其他的实施方式中，溶剂选自但不限于1,4-二噁烷或乙腈。在另一种实施方式中，溶剂是乙腈。

另一种实施方式提供制备式4a化合物的方法：

包含如下步骤：

a)使式35化合物：

其中R°是C_1-6脂族基，

在酸性条件下反应，生成式36化合物：

b)使式36化合物与亲电氟化剂反应，生成式38化合物：

c)使式38化合物与式3化合物：

在适合的缩合条件下反应，生成式4a化合物。

在一些实施方式中，R°独立地选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基和戊基。在其他的实施方式中，R°独立地选自甲基或乙基。

在另一种实施方式中，亲电氟化剂是1-(氯甲基)-4-氟-1,4-重氮化二环[2.2.2]辛烷双四氟硼酸盐。在其他实施方式中，亲电氟化剂是氟气。

在另外一种实施方式中，适合的缩合条件包含在溶剂和加热的存在下，使式38化合物与式3化合物反应。在一些实施方式中，溶剂选自DMF或DMSO。

另外一种实施方式提供制备式I-1化合物的方法：

包含如下步骤：

a)使式6a*化合物：

与式27化合物：

在适合的酰胺键生成条件下反应，生成式28化合物：

b)使用适合的钯螯合剂纯化式28化合物；

c)使式28化合物在适合的去保护条件下反应，生成式30化合物

和

d)使式30化合物与式25化合物：

在适合的酰胺键生成条件下反应，生成式I-1化合物。

在一些实施方式中，适合的钯螯合剂独立地选自丙烷-1,2-二胺；乙烷-1,2-二胺；乙烷-1,2-二胺；丙烷-1,3-二胺；四甲基乙二胺；乙二醇；1,3-双(二苯膦基)丙烷；1,4-双(二苯膦基)丁烷；和1,2-双(二苯膦基)乙烷/Pr-1,2-二胺。在其他的实施方式中，适合的钯螯合剂是丙烷-1,2-二胺。

另一种实施方式提供制备式28化合物的方法：

包含如下步骤：

a)使式5a化合物

在适合的卤化条件下反应，生成式34化合物：

其中X是卤素；

b)使式34化合物与式27化合物：

在适合的酰胺键生成条件下反应，生成式28化合物。

在一些实施方式中，X独立地选自氟或氯。在另一种实施方式中，X是氯。在一些实施方式中，适合的卤化条件包含在溶剂的存在下，使式5a化合物与卤化剂和碱反应。在另外一种实施方式中，卤化剂是SOCl₂。在一些实施方式中，碱是三乙胺。在其他的实施方式中，溶剂是DCM。

本发明的另外一方面提供制备式I-1化合物的方法：

包含如下步骤：

a)使式5a化合物

在适合的卤化条件下反应，生成式34化合物：

其中X是卤素；

b)使式34化合物与式27化合物：

在适合的酰胺键生成条件下反应，生成式28化合物：

c)使式28化合物在适合的去保护条件下反应，生成式30化合物

d)使式30化合物与式25化合物：

在适合的酰胺键生成条件下反应，生成式I-1化合物。

氘化化合物

在另一种实施方式中，可以向化合物I-1引入同位素，通过选择含有同位素原子的构件(可商购或者可以按照本领域技术人员已知的方法制备)，再衔接成与未标记材料所报道相似的顺序。

本发明的另一方面提供式I-B化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

每个Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹¹、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹独立地是氢或氘；其条件是至少一个Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹¹、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘；

每个X¹、X²、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷、X⁸和X⁹独立地选自¹²C或¹³C；

X³独立地选自-¹²C(O)-或-¹³C(O)-。

下列被标记的构件都是可商购的，它们能够用在制备式I-B化合物的合成途径中：

2,2,3,3,5,5,6,6-八氘代哌嗪；

2,3,5,6-四-¹³C-哌嗪；

2,2,3,3,4,5,5,6,6-九氘代哌啶-4-羧酸；

1、2-二¹³C-2-氰基乙酸；

1-¹³C-2-氰基(¹³C)乙酸乙基酯；

2-¹³C-2-氰基(¹³C)乙酸乙基酯。

其他可以用在制备式I-B化合物的合成途径中的被标记的构件也是本领域技术人员已知的。这些可以包括但不限于下列被标记的构件：

2-¹³C-氧杂环丁烷-3-酮；

3-¹³C-氧杂环丁烷-3-酮；

2,2,3,3-四氘代哌嗪；

2,2,5,5-四氘代哌嗪；

4-氘代哌啶-4-羧酸乙基酯；

2-氰基(¹³C)乙酸；

1-¹³C-2-氰基乙酸；

2-¹³C-2-氰基乙酸；

1-氘代-3-(二乙氨基)-2-氟丙烯醛；

在一种或多种实施方式中，Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘，Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰和Y¹¹独立地选自氢或氘。在另一种实施方式中，Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘，Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰和Y¹¹是氢。

在另外一种实施方式中，X¹、X²、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷、X⁸和X⁹是¹²C；X³是-¹²C(O)-。在其他的实施方式中，X¹、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷、X⁸和X⁹是¹²C；X³是-¹³C(O)-；X²是¹³C。

在一些实施方式中，Y¹¹、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘，Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹和Y¹⁰独立地选自氢或氘。在其他实施方式中，Y¹¹、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘，Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹和Y¹⁰是氢。

在另外一种实施方式中，Y²、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘，Y¹、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰和Y¹¹独立地选自氢或氘。在本发明的另一方面，Y²、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘，Y¹、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰和Y¹¹是氢。

在一些实施方式中，Y¹²、Y¹³、Y¹⁸和Y¹⁹是氘，Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹¹、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶和Y¹⁷是氢或氘。在其他的实施方式中，Y¹²、Y¹³、Y¹⁸和Y¹⁹是氘，Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹¹、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶和Y¹⁷是氢。

在一种或多种实施方式中，Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰和Y¹¹是氘，Y¹、Y²、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹独立地选自氘或氢。在另一种实施方式中，Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰和Y¹¹是氘，Y¹、Y²、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氢。

在另外一种实施方式中，Y²和Y¹¹是氘，Y1、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘或氢。在其他实施方式中，Y²和Y¹¹是氘，Y¹、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氢。

在一些实施方式中，Y²是氘，Y¹、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹¹、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘或氢。在另一种实施方式中，Y²是氘，Y¹、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹¹、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氢。

在其他的实施方式中，X¹、X²、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷和X⁸是¹²C；X³是-¹²C(O)-；X⁹是¹³C。在另一种实施方式中，X¹、X²、X⁸和X⁹是¹²C；X³是-¹²C(O)-；X⁴、X⁵、X⁶和X⁷是¹³C。在另外一种实施方式中，X²、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷、X⁸和X⁹是¹²C；X³是-¹²C(O)-；X¹是¹³C。在其他实施方式中，X²、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷和X⁹是¹²C；X³是-¹³C(O)-；X¹和X⁸是¹³C。

在一些实施方式中，Y¹¹是氘，Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹独立地选自氢或氘。在另一种实施方式中，Y¹¹是氘，Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氢。

在另外一种实施方式中，X¹、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷、X⁸和X⁹是¹²C；X³是-¹²C(O)-；X²是¹³C。

在另一种实施例中，本发明的式I-B化合物呈现在表1中。将被本领域技术人员领会的是，本发明化合物可以呈现为不同的互变异构形式。

表1

固体形式

本发明的另一方面提供式I-1化合物的固体形式：

其中该形式选自由化合物I-1·乙醇溶剂化物、化合物I-1·水合物I、化合物I-1·水合物II、化合物I-1·无水形式A、化合物I-1·无水形式B、化合物I-1·无水形式C、化合物I-1·DMSO溶剂化物、化合物I-1·DMAC溶剂化物、化合物I-1·丙酮溶剂化物和化合物I-1·异丙醇溶剂化物组成的组。

化合物I-1·乙醇溶剂化物

在本发明的一些方面，固体形式是化合物I-1·乙醇溶剂化物。在本发明的另一方面，固体形式是结晶性化合物I-1·乙醇溶剂化物。在其他的实施方式中，结晶性化合物I-1·乙醇溶剂化物的化合物I-1与乙醇之比为约1:0.72。在本发明的另一方面，结晶性化合物I-1·乙醇溶剂化物的特征在于在约166℃至约219℃的温度范围内失重约5.76％。在本发明的另外一方面，结晶性化合物I-1·乙醇溶剂化物的特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约17.2、19.7、23.8、24.4和29.0度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。在其他实施方式中，结晶性化合物I-1·乙醇溶剂化物的特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1a所示相同。在其他的实施方式中，结晶性化合物I-1·乙醇溶剂化物的特征在于在C¹³ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于175.4±0.3ppm、138.0±0.3ppm、123.1±0.3ppm、57.8±0.3ppm、44.0±0.3ppm和19.5±0.3ppm。在另外一种实施方式中，结晶性化合物I-1·乙醇溶剂化物的特征在于在F¹⁹ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于-136.0±0.3ppm和-151.6±0.3ppm。

化合物I-1·水合物I

在本发明的一些方面，固体形式是化合物I-1·水合物I。在本发明的另一方面，固体形式是结晶性化合物I-1·水合物I。在其他的实施方式中，结晶性化合物I-1·水合物I的化合物I-1与H₂O之比为约1:4.5。在另外一种实施方式中，结晶性化合物I-1·水合物I的特征在于在约25℃至约100℃的温度范围内失重约14.56％。在其他实施方式中，结晶性化合物I-1·水合物I的特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约6.5、12.5、13.7、18.8和26.0度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。在另一种实施方式中，结晶性化合物I-1·水合物I的特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1b所示相同。

化合物I-1·水合物II

在本发明的一些方面，固体形式是化合物I-1·水合物II。在本发明的另一方面，固体形式是结晶性化合物I-1·水合物II。在其他实施方式中，结晶性化合物I-1·水合物II的特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约10.1、11.3、11.9、20.2和25.1度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。在其他的实施方式中，结晶性化合物I-1·水合物II的特征在于在C¹³ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于177.0±0.3ppm、158.2±0.3ppm、142.9±0.3ppm、85.1±0.3ppm、58.9±0.3ppm和31.9±0.3ppm。在另外一种实施方式中，结晶性化合物I-1·水合物II的特征在于在F¹⁹ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于-138.0±0.3ppm和-152.7±0.3ppm。

化合物I-1·无水形式A

在一种实施方式中，固体形式是化合物I-1·无水形式A。在另一种实施方式中，固体形式是结晶性化合物I-1·无水形式A。在其他的实施方式中，结晶性化合物I-1·无水形式A的特征在于在约25℃至约265℃的温度范围内失重约0.96％。在其他实施方式中，结晶性化合物I-1·无水形式A的特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约6.1、12.2、14.5、22.3和31.8度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。在另外一种实施方式中，结晶性化合物I-1·无水形式A的特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1c所示相同。在其他的实施方式中，结晶性化合物I-1·无水形式A的特征在于在C¹³ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于175.9±0.3ppm、138.9±0.3ppm、74.1±0.3ppm、42.8±0.3ppm和31.5±0.3ppm。在另外一种实施方式中，结晶性化合物I-1·无水形式A的特征在于在F¹⁹ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于-136.8±0.3ppm和-155.7±0.3ppm。一种实施方式描述了制备化合物I-1·无水形式A的方法，包含搅拌含有化合物I-1·乙醇溶剂化物和适合的有机溶剂的混悬液。在另一种实施方式中，适合的有机溶剂是四氢呋喃。本发明的另一方面描述了制备化合物I-1·无水形式A的方法，包含搅拌含有化合物I-1·无水形式、异丙醇和水的混悬液。在一些实施方式中，混悬液被加热至约65℃与约80℃之间。在另外一种实施方式中，混悬液被加热至约70℃与约75℃之间。在其他实施方式中，化合物I-1·无水形式A的特征在于化合物I-1的晶形具有单斜晶系、P2_1/c中心对称空间群和下列晶胞参数:

α＝90°

β＝107.22(3)°

γ＝90°。

化合物I-1·无水形式B

本文所用的“无水形式B”表示化合物I-1的THF溶剂化物。在一些实施方式中，固体形式是化合物I-1·无水形式B。在另一种实施方式中，固体形式是结晶性化合物I-1·无水形式B。在另外一种实施方式中，结晶性化合物I-1·无水形式B的特征在于在约25℃至约175℃的温度范围内失重约2.5％。在其他实施方式中，化合物I-1·无水形式B的特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约7.2,8.3、12.9、19.5和26.6度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。在其他的实施方式中，结晶性化合物I-1·无水形式B的特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1d所示相同。在其他的实施方式中，结晶性化合物I-1·无水形式B的特征在于在C¹³ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于173.4±0.3ppm、164.5±0.3ppm、133.5±0.3ppm、130.8±0.3ppm、67.7±0.3ppm、45.3±0.3ppm和25.9±0.3ppm。在另外一种实施方式中，结晶性化合物I-1·无水形式B的特征在于在F¹⁹ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于-138.0±0.3ppm和-153.5±0.3ppm。

化合物I-1·无水形式C

在一些实施方式中，固体形式是化合物I-1·无水形式C。在另一种实施方式中，固体形式是结晶性化合物I-1·无水形式C。在其他实施方式中，结晶性化合物I-1·无水形式C的特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约6.8、13.4、15.9、30.9和32.9度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。在其他的实施方式中，结晶性化合物I-1·无水形式C的特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1e所示相同。在其他的实施方式中，结晶性化合物I-1·无水形式C的特征在于在C¹³ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于175.2±0.3ppm、142.5±0.3ppm、129.6±0.3ppm、73.5±0.3ppm、54.0±0.3ppm和46.7±0.3ppm。在另外一种实施方式中，结晶性化合物I-1·无水形式C的特征在于在F¹⁹ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于-131.2±0.3ppm和-150.7±0.3ppm。

化合物I-1·非晶型

在一些实施方式中，固体形式是化合物I-1·非晶型。在另一种实施方式中，固体形式是结晶性化合物I-1·非晶型。在其他的实施方式中，结晶性化合物I-1·非晶型的特征在于在C¹³ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于173.8±0.3ppm、144.2±0.3ppm、87.5±0.3ppm、45.6±0.3ppm和29.5±0.3ppm。在另外一种实施方式中，结晶性化合物I-1·非晶型的特征在于在F¹⁹ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于-137.7±0.3ppm和-153.1±0.3ppm。

化合物I-1·DMSO溶剂化物

在一种实施方式中，固体形式是化合物I-1·DMSO溶剂化物。在另一种实施方式中，固体形式是结晶性化合物I-1·DMSO溶剂化物。在其他的实施方式中，结晶性化合物I-1·DMSO溶剂化物的化合物I-1与DMSO之比为约1:1。在另外一种实施方式中，结晶性化合物I-1·DMSO溶剂化物的特征在于在约146℃至约156℃的温度范围内失重约12.44％。在一些实施方式中，结晶性化合物I-1·DMSO溶剂化物的特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约8.9、14.8、16.5、18.6、20.9、22.2和23.4度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。在其他实施方式中，化合物I-1·DMSO溶剂化物的特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1g所示相同。

化合物I-1·DMAC溶剂化物

在一些实施方式中，固体形式是化合物I-1·DMAC溶剂化物。在另一种实施方式中，固体形式是结晶性化合物I-1·DMAC溶剂化物。在其他实施方式中，结晶性化合物I-1·DMAC溶剂化物的化合物I-1与DMAC之比为约1:1.3。在另外一种实施方式中，结晶性化合物I-1·DMAC溶剂化物的特征在于在约85℃至约100℃的温度范围内失重约17.76％。在其他的实施方式中，化合物I-1·DMAC溶剂化物的特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约6.0,15.5、17.7、18.1、20.4和26.6度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。在一些实施方式中，化合物I-1·DMAC溶剂化物的特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1h所示相同。

化合物I-1·丙酮溶剂化物

在一种或多种实施方式中，固体形式是化合物I-1·丙酮溶剂化物。在另一种实施方式中，固体形式是结晶性化合物I-1·丙酮溶剂化物。在另外一种实施方式中，结晶性化合物I-1·丙酮溶剂化物的化合物I-1与丙酮之比为约1:0.44。在其他的实施方式中，化合物I-1·丙酮溶剂化物的特征在于在约124℃至约151℃的温度范围内失重约4.55％。在一些实施方式中，化合物I-1·丙酮溶剂化物的特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约8.9、15.5、15.8、16.7、22.3、25.7和29.0度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。在其他实施方式中，化合物I-1·丙酮溶剂化物的特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1i所示相同。

化合物I-1·异丙醇溶剂化物

在一种实施方式中，固体形式是化合物I-1·异丙醇溶剂化物。在另一种实施方式中，固体形式是结晶性化合物I-1·异丙醇溶剂化物。在其他的实施方式中，结晶性化合物I-1·异丙醇溶剂化物的化合物I-1与异丙醇之比为约1:0.35。在另外一种实施方式中，化合物I-1·异丙醇溶剂化物的特征在于在约136℃至约180℃的温度范围内失重约3.76％。在一些实施方式中，化合物I-1·异丙醇溶剂化物的特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约6.9、17.1、17.2、19.1、19.6、23.7、24.4和28.9度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。在另一种实施方式中，化合物I-1·异丙醇溶剂化物的特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1j所示相同。

制剂

本文公开的一些实施方式一般性涉及组合物，它可以包括有效量的化合物I-1或其药学上可接受的盐和一种或多种赋形剂。化合物I-1据信是一种ATR抑制剂，描述在WO2014/089379中，全文引用在此作为参考。

化合物I-1和形式A能够以游离形式或盐形式存在。那些药学上可接受的盐能够为医学目的用于施用化合物I-1或形式A。非药学上可接受的盐能够用于制造、分离、纯化和/或分开化合物I-1、形式A和/或其一种或多种中间体的立体异构物。

本文所用的术语“药学上可接受的盐”表示这样一种化合物，在恰当的医学判断范围内，它们适合用在人类和低等动物中，没有不适当的副作用，例如毒性、刺激性、变态反应等，并且与合理的利益/风险比相称。可以使用各种药学上可接受的盐。例如，公开在S.M.Berge等,J.Pharmaceutical Sciences,1977,66,1-19中的那些盐，引用在此作为参考。本文所述化合物的药学上可接受的盐包括从适合的无机和有机酸和碱衍生的那些。本文所述化合物(例如化合物I-1)的盐可以是在最终的化合物分离和纯化期间就地制备的。

如上所述，化合物I-1可以存在不同的多晶物(即“固体形式”)。多型现象是化合物存在一种以上不同的结晶或“多晶”种类的能力，其中每一种类在晶格中具有不同的分子排列。每种不同的结晶种类是一种“多晶型”。每种多晶型具有相同的化学式，不过由于不同的晶格排列，表现不同的物理性质。多晶型可以借助分析方法表征，例如X-射线粉末衍射(XRPD)图、热重分析(TGA)、差示扫描量热(DSC)、熔点和/或本领域已知的其他技术。

本文所述形式A可以是纯净形式或者与其他物质的混合物。其他物质的实例例如包括化合物I-1的其他形式(例如非晶形物、其他多晶物、溶剂化物和水合物)；化合物I-1的其他非对映体；和/或除化合物I-1以外的其他物质。

因而，在一些实施方式中，组合物可以包括有效量的纯形式A。本文所用的“纯”形式A超过95％(w/w)(其中w/w是形式A重量/化合物I-1重量(其中化合物I-1重量为形式A重量+化合物I-1的所有其他形式重量))，例如超过98％(w/w)、超过99％(w/w％)、超过99.5％(w/w％)或超过99.9％(w/w％)。在一些实施方式中，组合物可以包括有效量的形式A，含量为至少95％(w/w％)、至少97％(w/w％)或至少99％(w/w％)，不含化合物I-1的任意其他非对映体。在一些实施方式中，组合物可以包括有效量的形式A，含量为至少95％(w/w％)、至少97％(w/w％)或至少99％(w/w％)，不含化合物I-1的任意其他多晶型和非晶形物。

在一些实施方式中，组合物可以包括形式A与一种或多种其他形式的化合物I-1。其他形式的化合物I-1例如包括水合物、溶剂化物、非晶形物、其他多晶物或其组合。

在一些实施方式中，组合物可以包括化合物I-1或形式A(或上述化合物的药学上可接受的盐)，含量范围为痕量(0.1％)至100％(w/w％)，相对于组合物总重量而言。在一些实施方式中，组合物可以包括少于约50％的化合物I-1或形式A，相对于组合物总重量而言(其中总重量包括化合物I-1或形式A的重量)。例如，组合物可以包括化合物I-1或形式A，含量范围选自0.1％-0.5％、0.1％-1％、0.1％-2％、0.1％-5％、0.1％-10％、0.1％-20％、0.1％-30％、0.1％-40％和0.1％-<50％(w/w％)，相对于组合物总重量而言(其中总重量包括化合物I-1或形式A的重量)。在其他实施方式中，组合物可以包括等于或大于约50％的化合物I-1或形式A，相对于组合物总重量而言(其中总重量包括化合物I-1或形式A的重量)。例如，组合物可以包括至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％(w/w)的化合物I-1或形式A，相对于组合物总重量而言(其中总重量包括化合物I-1或形式A的重量)。在一些实施方式中，组合物可以包括化合物I-1或形式A，含量范围为约1wt％至约50wt％、约5wt％至约40wt％、约5wt％至约25wt％或约5wt％至约15wt％的化合物I-1或形式A，相对于组合物总重量而言(其中总重量包括化合物I-1或形式A的重量)。

本文所用的“赋形剂”在这里使用本领域技术人员所理解的通用含义，包括一种或多种惰性物质，在组合物中包括它们以向组合物提供但不限于主体、一致性、稳定性、粘合能力、润滑性、崩解能力等。赋形剂的实例包括填充剂、粘合剂、崩解剂、湿润剂、润滑剂、助流剂、保湿剂和吸收剂。

在一些实施方式中，组合物可以包括化合物I-1或形式A和一种或多种其他组分，选自一种或多种填充剂、一种或多种粘合剂、一种或多种崩解剂、一种或多种湿润剂和一种或多种润滑剂。在一些实施方式中，组合物可以包括一种或多种填充剂，含量范围为约10wt％至约95wt％；约25wt％至约90wt％；约50wt％至约90wt％；或约70wt％至约90wt％的填充剂，以组合物总重量计(其中总重量包括一种或多种填充剂的重量)。在一些实施方式中，组合物可以包括一种或多种润滑剂，含量范围为约0.1wt％至约10wt％、约0.5wt％至约7wt％或约1wt％至约5wt％的润滑剂，以组合物总重量计(其中总重量包括一种或多种润滑剂的重量)。在一些实施方式中，组合物可以包括一种或多种崩解剂，含量范围为约1wt％至约15wt％、约1wt％至约10wt％或约1wt％至约7wt％的崩解剂，以组合物总重量计(其中总重量包括一种或多种崩解剂的重量)。

适合于包括在内的湿润剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂和填充剂可以是与组合物成分相容的，例如它们实质上不降低活性药物成分的化学稳定性。

术语“湿润剂”在这里使用本领域技术人员所理解的通用含义，包括表面活性剂，例如非离子表面活性剂和阴离子表面活性剂。湿润剂能够增强组合物的溶解性。示范性表面活性剂包括月桂基硫酸钠(SLS)、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸(例如TWEEN^TM)、山梨聚糖脂肪酸酯(例如)、十二烷基苯磺酸钠(SDBS)、二辛基磺基琥珀酸钠(Docusate)、二氧胆酸钠盐(DOSS)、山梨聚糖单硬脂酸酯、山梨聚糖三硬脂酸酯、N-月桂酰肌氨酸钠、油酸钠、肉豆蔻酸钠、硬脂酸钠、棕榈酸钠、Gelucire 44/14、乙二胺四乙酸(EDTA)、维生素E d-α生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)、卵磷脂、MW 677-692、谷氨酸单钠单水合物、Labrasol、PEG 8辛酸/癸酸甘油酯、Transcutol、二乙二醇单乙基醚、Solutol HS-15、聚乙二醇/羟基硬脂酸酯、牛磺胆酸、聚氧丙烯与聚氧乙烯共聚物(例如泊洛沙姆类，商品名例如L61、F68、F108和F127)、饱和聚乙二醇化甘油酯多库酯钠、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、聚氧乙烯20硬脂基醚、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚乙二醇化氢化蓖麻油、脂肪酸的山梨聚糖酯、维生素E或母育酚衍生物、维生素E TPGS、生育酚酯、卵磷脂、磷脂及其衍生物、硬脂酸、油酸、油醇、鲸蜡醇、单与二甘油酯、脂肪酸的丙二醇酯、脂肪酸的甘油酯、乙二醇棕榈硬脂酸酯、聚氧甘油酯、丙二醇单辛酸酯、丙二醇单月桂酸酯、聚甘油油酸酯和其任意组合。月桂基硫酸钠是阴离子表面活性剂；聚氧丙烯与聚氧乙烯共聚物是非离子表面活性剂。聚氧丙烯与聚氧乙烯共聚物的具体实例包括泊洛沙姆类，例如聚氧丙烯分子量1,800g/mol和聚氧乙烯含量80％的泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)。

术语“粘合剂”在这里使用本领域技术人员所理解的通用含义，包括在活性成分(例如化合物I-1或形式A)造粒时使用的成分，其中粘合剂保持活性成分与一种或多种非活性成分在一起。示范性粘合剂包括聚乙烯吡咯烷酮类(PVPs)、预胶化淀粉、淀粉、微晶纤维素、改性纤维素(例如羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)和羟乙基纤维素(HEC))和其任意组合。PVP类普遍以“K值”表征，它是聚合组合物粘性的量度。PVP类可以商购(例如Tokyo Chemical Industry Co.,Ltd.)，商品名K12、K17、K25、K30、K60和K90。PVP类的具体实例包括可溶性喷雾干燥的PVP。PVP类可以具有3,000道尔顿至4,000道尔顿的平均分子量，例如平均分子量4,000道尔顿的K12。PVP使用湿润或干燥状态均可。

术语“填充剂”(或“稀释剂”)在这里使用本领域技术人员所理解的通用含义，包括微晶纤维素(例如PH 101)、乳糖、山梨糖醇、纤维素、磷酸钙、淀粉、糖类(例如甘露糖醇、蔗糖等)、葡萄糖、麦芽糊精、山梨糖醇、木糖醇、粉化纤维素、硅化微晶纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、甲基羟乙基纤维素、预胶化淀粉、磷酸氢钙、硫酸钙、碳酸钙和其任意组合。填充剂的具体实例包括微晶纤维素和乳糖。微晶纤维素的具体实例包括可商购的系列，例如粒径200目超过70％且粒径65目小于10％的微晶纤维素(例如PH 101)。乳糖的具体实例是乳糖单水合物。

术语“崩解剂”在这里使用本领域技术人员所理解的通用含义，能够增强组合物的分散。崩解剂的实例包括交联羧甲基纤维素钠、淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉)、淀粉乙醇酸钠、交联聚维酮、微晶纤维素、藻酸钠、藻酸钙、藻酸、预胶化淀粉、纤维素及其衍生物、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、大豆多糖、瓜耳胶、离子交换树脂、基于食物酸和碱性碳酸盐组分的泡腾系统、碳酸氢钠和其任意组合。崩解剂的具体实例包括交联羧甲基纤维素钠(例如)和淀粉乙醇酸钠。

术语“润滑剂”在这里使用本领域技术人员所理解的通用含义，能够改善组合物的压缩和抛射，例如通过硬模压制机。示范性润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸(硬脂精)、氢化油、硬脂基富马酸钠、月桂基硫酸钠、滑石、脂肪酸、硬脂酸钙、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、脂肪醇、脂肪酸酯、甘油山嵛酸酯、矿物油、植物油、亮氨酸、苯甲酸钠和其任意组合。润滑剂的具体实例是硬脂基富马酸钠。

本领域技术人员理解，被描述为湿润剂、粘合剂、填充剂、崩解剂和润滑剂的具体化合物可以充当一种或多种目的。例如，微晶纤维素可以用作崩解剂和填充剂。

在一些实施方式中，组合物可以包括化合物I-1或形式A，含量范围为约5wt％至约50wt％，以组合物总重量计；和一种或多种填充剂，含量范围为约10wt％至约90wt％，以组合物总重量计。在其他实施方式中，组合物可以包括化合物I-1或形式A，含量范围为约5wt％至约50wt％，以组合物总重量计；一种或多种填充剂，含量范围为约10wt％至约90wt％，以组合物总重量计；和一种或多种崩解剂，含量范围为约1wt％至约15wt％，以组合物总重量计。在其他的实施方式中，组合物可以包括化合物I-1或形式A，含量范围为约5wt％至约50wt％，以组合物总重量计；一种或多种填充剂，含量范围为约10wt％至约90wt％，以组合物总重量计；一种或多种崩解剂，含量范围为约1wt％至约15wt％，以组合物总重量计；和一种或多种润滑剂，含量范围为约0.1wt％至约10wt％，以组合物总重量计。

在一些实施方式中，组合物可以包括化合物I-1或形式A，含量范围为约5wt％至约20wt％，以组合物总重量计；一种或多种润滑剂，含量范围为约1wt％至约5wt％，以组合物总重量计；一种或多种崩解剂，含量范围为约1wt％至约10wt％，以组合物总重量计；和一种或多种填充剂，含量范围为约70wt％至约90wt％，以组合物总重量计。在其他实施方式中，组合物可以包括化合物I-1或形式A，含量范围为约5wt％至约15wt％，以组合物总重量计；一种或多种润滑剂，含量范围为约1wt％至约5wt％，以组合物总重量计；一种或多种崩解剂，含量范围为约1wt％至约5wt％，以组合物总重量计；和一种或多种填充剂，含量范围为约70wt％至约90wt％，以组合物总重量计。

在一些实施方式中，组合物可以包括化合物I-1或形式A，含量为约10wt％，以组合物总重量计，乳糖单水合物，含量为约28wt％，以组合物总重量计，Avicel PH-101(微晶纤维素)，含量为约55wt％，以组合物总重量计，Ac-Di-Sol(交联羧甲基纤维素钠)，含量为约5wt％，以组合物总重量计，和硬脂基富马酸钠，含量为约3wt％，以组合物总重量计。

在一些实施方式中，组合物可以进一步包括一种或多种助流剂(或“流动助剂”)。助流剂通过减少粒子间摩擦和凝聚，增强组合物的流动性质。示范性助流剂包括胶质二氧化硅、滑石和其任意组合。助流剂的具体实例是非晶型胶质二氧化硅，平均粒径为0.2－0.3微米，例如M5P。助流剂的量可以各异。例如，助流剂的含量范围可以为约0.1wt％至约3wt％，或者约0.1wt％至约1wt％，以组合物总重量计(其中总重量包括一种或多种助流剂的重量)。

在一些实施方式中，本文所述组合物可以进一步包括包衣。

在一些实施方式中，本文所述组合物可以是固体剂型，例如片剂。

本文所述一些实施方式涉及制备本文所述组合物的方法。在一些实施方式中，一种方法可以包括提供包括化合物I-1或形式A和一种或多种填充剂的混合物，以形成组合物。在其他实施方式中，一种方法可以包括提供包括化合物I-1或形式A、润滑剂、崩解剂和填充剂的混合物，以形成组合物。润滑剂、崩解剂和填充剂的实例、包括具体实例各自独立地如本文所述。

在一些实施方式中，一种方法可以包括结合化合物I-1或形式A和一种或多种第一赋形剂，形成混合物；混合该混合物(包括化合物I-1或形式A和一种或多种第一赋形剂)与一种或多种第二赋形剂。在一些实施方式中，第一赋形剂可以包括如下一种或多种：一种或多种填充剂、一种或多种崩解剂和一种或多种润滑剂。在一些实施方式中，第二赋形剂可以包括如下一种或多种：一种或多种崩解剂和一种或多种润滑剂。

在其他实施方式中，制备本文所述组合物的方法可以包括：i)结合化合物I-1或形式A与一种或多种第一赋形剂，后者可以包括一种或多种填充剂、一种或多种崩解剂和一种或多种润滑剂，和ii)混合来自i)的混合物与一种或多种第二赋形剂，后者可以包括一种或多种崩解剂和一种或多种润滑剂，以形成组合物。在一些实施方式中，一种或多种第一赋形剂可以包括一种或多种填充剂，含量范围为约70wt％至约90wt％，一种或多种崩解剂，含量范围为约1wt％至约15wt％，和一种或多种润滑剂，含量范围为约1wt％至约5wt％，各自以组合物总重量计，第二赋形剂可以包括一种或多种润滑剂，含量范围为约0.5wt％至约5wt％，和一种或多种崩解剂，含量范围为约0.5wt％至约5wt％，各自以组合物总重量计。

在一些实施方式中，制备本文所述组合物的方法可以包括：i)通过结合化合物I-1或形式A与第一赋形剂，后者可以包括一种或多种填充剂、一种或多种崩解剂和一种或多种润滑剂，提供化合物I-1或形式A的颗粒；和ii)混合得自i)的化合物I-1或形式A颗粒与第二赋形剂，后者可以包括一种或多种崩解剂和一种或多种润滑剂，以及可选的一种或多种填充剂，以形成组合物。在一些实施方式中，第一赋形剂可以包括一种或多种填充剂，含量范围为约70wt％至约90wt％，一种或多种崩解剂，含量范围为约0.5wt％至约5wt％，和第一润滑剂，含量范围为约1％至约5％，各自以组合物总重量计；第二赋形剂可以包括一种或多种第二润滑剂，含量范围为约0.5wt％至约5wt％，和一种或多种崩解剂，含量范围为约0.5wt％至约5wt％，各自以组合物总重量计。适合的润滑剂、崩解剂和填充剂的实例、包括具体实例如本文所述。

在一些实施方式中，制备本文所述组合物的方法可以包括使化合物I-1或形式A过筛；混合化合物I-1或形式A的颗粒与一种或多种填充剂、一种或多种崩解剂和一种或多种润滑剂；和掺合所得颗粒与一种或多种崩解剂和一种或多种润滑剂。

在一些实施方式中，制备本文所述组合物的方法可以包括压制包括化合物I-1或形式A的颗粒通过压片机，形成包括化合物I-1或形式A的片剂。

在一些实施方式中，可以包括化合物I-1或形式A的片剂(例如压片后所得片剂)可以被包膜衣。

本文所述组合物可以进一步包括除前述以外的一种或多种药学上可接受的载体。本文所用的“药学上可接受的”表示是惰性的，不会不恰当地抑制化合物的生物活性。药学上可接受的载体应当是生物相容性的，例如在向对象施用后无毒、无炎性、无免疫原性或者没有其他不需要的反应或副作用。进而，可以采用标准药物制剂技术来整合上述一种或多种药学上可接受的载体。

能够充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包括但不限于离子交换剂；矾土；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白(例如人血清白蛋白)；缓冲物质(例如磷酸盐或甘氨酸)；饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物；水；盐或电解质(例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠或锌盐)；硅胶；三硅酸镁；聚丙烯酸酯；蜡类；聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物；甲基纤维素；羟丙基甲基纤维素；羊毛脂；糖类，例如葡萄糖；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉化黄芪胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，例如可可脂和栓剂用蜡；油类，例如花生油、棉籽油、葵花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，例如丙二醇或聚乙二醇；酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；其他无毒的生物相容性润滑剂；着色剂；释放剂；甜味剂；矫味剂；芳香剂；防腐剂；按照药剂师的判断，组合物中还可以存在吸附剂和抗氧化剂。

本文所述一些实施方式涉及抑制或降低对象ATR活性的方法，可以包括向该对象施用本文所述的组合物，它含有有效量的化合物I-1或形式A或者上述化合物的药学上可接受的盐。

本文所述其他实施方式涉及治疗对象癌症的方法，可以包括向该对象施用本文所述的组合物，它含有有效量的化合物I-1或形式A或者上述化合物的药学上可接受的盐。

本文所述其他的实施方式涉及本文所述组合物在治疗癌症药物制造中的用途，该组合物含有有效量的化合物I-1或形式A或者上述化合物的药学上可接受的盐。

在一些实施方式中，本文所述组合物中实质上全部重量的化合物I-1可以是形式A。

在一些实施方式中，本文所述组合物中至少90％重量的化合物I-1可以是形式A。

在一些实施方式中，本文所述组合物中至少95％重量的化合物I-1可以是形式A。

在一些实施方式中，本文所述组合物中至少98％重量的化合物I-1可以是形式A。

在一些实施方式中，本文所述组合物中至少99％重量的化合物I-1可以是形式A。

本文所述组合物可以对人和其他动物口服、直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(作为粉剂、软膏或滴剂)、颊部、作为口腔或鼻腔喷雾等方式施用。本文所用的术语“肠胃外”包括但不限于皮下、静脉内、肌内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输液技术。在一些实施方式中，本文所述组合物可以被口服、腹膜内和/或静脉内施用。

任意口服可接受的剂型包括但不限于胶囊、片剂、水悬液或溶液。在片剂的情况下，适用的载体包括但不限于乳糖和玉米淀粉。可以加入润滑剂，例如硬脂酸镁，和/或湿润剂。在使用水悬液时，活性成分可以结合有乳化和/或悬浮剂。如果需要的话，可以包括甜味剂、矫味剂、着色剂和/或芳香剂。

口服施用的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳剂、微乳、溶液、悬液、糖浆和酏剂。除了活性化合物以外，液体剂型可以含有惰性赋形剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄基酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(例如棉籽油、花生油、玉米油、胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨聚糖脂肪酸酯及其混合物。

口服施用固体剂型包括胶囊(例如软与硬填充的明胶胶囊)、片剂、丸剂、粉剂和颗粒。在这类固体剂型中，活性化合物可以混合有至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体，例如柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或a)填充剂，例如淀粉、乳糖、奶糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸，b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)保湿剂，例如甘油，d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶解延迟剂，例如石蜡，f)吸收加速剂，例如季铵化合物，g)湿润剂，例如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯，h)吸收剂，例如高岭土和膨润土，和i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和它们的混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包括缓冲剂。

片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒可以制备有包衣和外壳，例如肠溶衣和药物制剂领域已知的其他包衣。它们可以可选地含有不透明剂，并且也可以是这样一种组合物，能够仅仅或者优先在肠道的某一部位释放活性成分，可选地以延迟的方式。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡类。活性化合物可以与一种或多种赋形剂为微囊包封的形式。

无菌的可注射形式可以是水性或油性悬液。可以按照已知技术配制可注射制备物，使用适合的分散或湿润剂和悬浮剂。无菌的可注射制备物可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬液或乳液，例如在丙二醇中的溶液。可以采用的可接受的媒介物和溶剂是水、林格氏溶液U.S.P.和等渗氯化钠溶液。另外，可以采用无菌的不挥发油作为溶剂或悬浮介质。为此，可以采用任意品牌的不挥发油，包括合成的单或二甘油酯。脂肪酸，例如油酸及其甘油酯衍生物，可用于注射剂的制备，因为它们是天然的药学上可接受的油，例如橄榄油或蓖麻油，尤其它们的聚氧乙基化版本。这些油溶液或悬液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或相似的分散剂，它们普遍用于配制药学上可接受的剂型，包括乳液和悬液。

可注射制剂可以被灭菌，例如通过细菌保留滤器过滤，或者掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂，在临使用前溶解或分散在无菌水或其他无菌可注射介质中。

局部或透皮施用剂型包括软膏、糊剂、霜剂、洗剂、凝胶、粉剂、溶液、喷雾、吸入剂和贴剂。可以在无菌条件下将活性组分与药学上可接受的载体混合，并且可以包括任意防腐剂和/或缓冲剂。可以配制眼科制剂、滴耳剂和滴眼剂。通过将化合物溶解或分散在适当的介质中，可以制备这类剂型。还可以使用吸收增强剂，以增加化合物流入皮肤。通过提供速率控制膜或者将化合物分散在聚合物基质或凝胶中，可以控制速率。

或者，活性化合物及其药学上可接受的组合物还可以借助鼻用气雾剂或吸入法施用。按照药物制剂领域熟知的技术制备这类组合物，并且可以被制成盐水溶液，采用苄醇或其他适合的防腐剂、增强生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他常规的增溶或分散剂。

在本文所述的固体、液体和其他剂型中可以包括表面活性剂，例如吐温、司盘和其他乳化剂或生物利用度增强剂。

本文所述组合物可以被配制在单位剂型中。术语“单位剂型”表示物理上离散的单位，适合作为接受治疗对象的单一剂量，每个单位含有经过计算产生所需治疗效果的预定量的活性物质，可选地组合有适合的药物载体。单位剂型可以提供单次每日剂量或多次每日剂量之一(例如约1至4次或多次每天)。在使用多次每日剂量时，每一剂量的单位剂型可以是相同或不同的。活性化合物在单位剂型中的量将依赖于例如所治疗的宿主和特定的施用模式，例如从0.01mg/kg体重/剂至100mg/kg体重/剂不等。

在一些实施方式中，本文所述组合物可以是固体剂型的形式。在一些实施方式中，本文所述组合物可以是片剂的形式。在其他的实施方式中，组合物可以是100mg片或500mg片的形式。

将被领会的是，治疗用所需活性化合物(例如化合物I-1或形式A)的量将不仅因所选择的特定化合物，而且因施用途径、需要治疗的病症属性和对象的年龄与条件而异，最终将取决于主治医师或兽医。不过一般而言，适合的剂量将在约0.1至约100mg/kg体重每剂的范围内，例如在0.5至50mg/kg/剂的范围内，例如在1至10mg/kg/剂的范围内。

在一些实施方式中，本文所述组合物可以施用的量为约5mg至约100mg化合物I-1或形式A或者上诉化合物的药学上可接受的盐每剂。

在一些实施方式中，本文所述组合物可以施用的量为：

a)约5mg化合物I-1或形式A或者上诉化合物的药学上可接受的盐每剂；

b)约10mg化合物I-1或形式A或者上诉化合物的药学上可接受的盐每剂；

c)约20mg化合物I-1或形式A或者上诉化合物的药学上可接受的盐每剂；

d)约30mg化合物I-1或形式A或者上诉化合物的药学上可接受的盐每剂；

e)约50mg化合物I-1或形式A或者上诉化合物的药学上可接受的盐每剂；

f)约60mg化合物I-1或形式A或者上诉化合物的药学上可接受的盐每剂；

g)约80mg化合物I-1或形式A或者上诉化合物的药学上可接受的盐每剂；或者

h)约100mg化合物I-1或形式A或者上诉化合物的药学上可接受的盐每剂。

在一些实施方式中，本文所述组合物可以在禁食状态中施用(例如对象没有进食食物或液体达至少8小时，水除外)。在其他实施方式中，本文所述组合物可以在进食状态中施用(例如与食物一起或者在进食后1小时内)。

化合物用途

本发明在一方面提供ATR激酶抑制剂化合物或组合物，因而可用于治疗对象的疾病、病症或疾患或者减轻严重性，其中该疾病、病症或疾患牵涉有ATR。

本发明的另一方面提供可用于治疗以过度或异常细胞增殖为特征的疾病、疾患和病症的化合物或组合物。这类疾病包括增殖性或过度增殖性疾病。增殖性和过度增殖性疾病的实例非限制性地包括癌症和骨髓增殖性疾患。

在一些实施方式中，所述化合物选自I-1或形式A。在其他实施方式中，所述组合物包括化合物I-1或形式A。术语“癌症”包括但不限于下列癌症。口部癌症：口腔癌、唇癌、舌癌、嘴癌、咽癌；心脏癌症：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；肺部癌症：非小细胞肺癌、支气管癌症(鳞状细胞癌或表皮样癌、未分化小细胞癌、未分化大细胞癌、腺癌)、肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨瘤性错构瘤、间皮瘤；胃肠癌症：食道癌症(鳞状细胞癌、喉癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃癌症(癌瘤、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺癌症(导管腺癌、胰岛素瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、血管活性肠肽瘤)、小肠癌症(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、纤维神经瘤、纤维瘤)、大肠癌症(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)、结肠癌、结肠-直肠癌、结肠直肠癌；直肠癌；泌尿生殖道癌症：肾癌症(腺癌、维耳姆斯瘤[肾胚细胞瘤]、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道癌症(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、前列腺癌症(腺癌、肉瘤)、睾丸癌症(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤)；肝脏癌症：肝细胞瘤(肝细胞癌)、胆管癌、肝胚细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞性腺瘤、血管瘤、胆道癌；骨癌症：成骨肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤、脊索瘤、骨软骨纤维瘤(osteochronfroma)(骨软骨性外生骨疣)、良性软骨瘤、成软骨细胞瘤、软骨粘液纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞瘤；神经 系统癌症：颅骨癌症(骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄瘤、畸形性骨炎)、脑膜癌(脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质瘤病)、脑癌(星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、生殖细胞瘤[松果体瘤]、多形性成胶质细胞瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、成视网膜细胞瘤、先天性肿瘤)、脊髓神经纤维瘤、脑膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤)；妇科癌症：子宫癌症(子宫内膜癌)、宫颈癌症(宫颈癌、肿瘤前宫颈非典型增生)、卵巢癌症(卵巢癌[浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类癌瘤]、粒层-卵泡膜细胞瘤、塞-莱二氏细胞瘤、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴癌症(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑素瘤)、阴道癌症(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄样肉瘤(胚胎性横纹肌肉瘤)、输卵管癌症(癌瘤)、乳腺癌；血液学癌症：血液癌症(骨髓性白血病[急性和慢性]、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓增殖性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓发育异常综合征)、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤[恶性淋巴瘤]、毛细胞癌症；淋巴障碍；皮肤癌症：恶性黑素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西氏肉瘤、角化棘皮瘤、发育不良痣、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤、牛皮癣；甲状腺癌症：乳头状甲状腺癌、滤泡性甲状腺癌、未分化甲状腺癌、髓样甲状腺癌、2A型多发性内分泌腺瘤、2B型多发性内分泌腺瘤、家族性髓样甲状腺癌、嗜铬细胞瘤、副神经节瘤；以及肾上腺癌症：成神经细胞瘤。

在一些实施方式中，癌症选自肺或胰腺的癌症。在其他实施方式中，癌症选自肺癌、头颈癌、胰腺癌、胃癌或脑癌。在其他的实施方式中，癌症选自非小细胞肺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、胆道癌、头颈癌、膀胱癌、结肠直肠癌、成胶质细胞瘤、食道癌、乳腺癌、肝细胞癌或卵巢癌。

在一些实施方式中，癌症是肺癌。在其他实施方式中，肺癌是非小细胞肺癌或小细胞肺癌。在另一种实施方式中，癌症是非小细胞肺癌。在另外一种实施方式中，非小细胞肺癌是鳞状非小细胞肺癌。

因此，如本文所提供的术语“癌细胞”包括受任意如上所鉴定的病症之一侵害的细胞。在一些实施方式中，癌症选自结肠直肠癌、甲状腺癌或乳腺癌。在其他实施方式中，癌症是三阴性乳腺癌。

术语“骨髓增殖性疾患”包括如下疾患，例如真性红细胞增多症、血小板增多症、伴有骨髓纤维变性的骨髓组织化生、高嗜酸性粒细胞综合征、青少年粒单核细胞白血病、全身性肥大细胞病和造血功能障碍，特别是急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性早幼粒细胞性白血病(APL)和急性淋巴细胞性白血病(ALL)。

组合疗法

本发明的另一方面针对在有需要的对象中治疗癌症的方法，包含施用本发明化合物或组合物或者其药学上可接受的盐和附加治疗剂。在一些实施方式中，所述方法包含先后或共同施用化合物或组合物(或者其药学上可接受的盐)和附加治疗剂。

本文所用的术语“组合”或“共同施用”可以互换使用，表示一种以上疗法的使用(例如一种或多种治疗剂)。该术语的使用不限制向对象施用疗法(例如治疗剂)的顺序或者每种治疗剂的剂量方案。

在一些实施方式中，所述附加治疗剂是抗癌剂。在其他实施方式中，所述附加治疗剂是DNA-损伤剂。在其他的实施方式中，所述附加治疗剂选自辐射疗法、化学疗法或者其他通常与辐射疗法或化学疗法组合使用的成分，例如放射增敏剂和化学增敏剂。在其他的实施方式中，所述附加治疗剂是电离辐射。

正如本领域技术人员将知晓的，放射增敏剂是能够与辐射疗法组合使用的成分。放射增敏剂的工作方式各不相同，包括但不限于使癌细胞更敏感于辐射疗法，与辐射疗法协同提供改善的协同效果，累加作用于辐射疗法，或者保护周围的健康细胞免受辐射疗法损伤。同样，化学增敏剂是能够与化学疗法组合使用的成分。类似地，化学增敏剂的工作方式各不相同，包括但不限于使癌细胞更敏感于化学疗法，与化学疗法协同提供改善的协同效果，累加作用于化学疗法，或者保护周围的健康细胞免受化学疗法损伤。

可以与本发明化合物或组合物组合使用的DNA-损伤剂的实例包括但不限于铂化 剂，例如顺铂、卡铂、奈达铂、沙铂以及其他衍生物；Topo I抑制剂，例如托泊替康、伊立替康/SN38、鲁比替康以及其他衍生物；抗代谢物，例如叶酸家族(甲氨蝶呤、培美曲塞及相关物)；嘌呤拮抗剂和嘧啶拮抗剂(硫鸟嘌呤、氟达拉滨、克拉屈滨、阿糖胞苷、吉西他滨、6-巯嘌呤、5-氟尿嘧啶(5FU)及相关物)；烷化剂，例如氮芥类(环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、双氯乙基甲胺、异环磷酰胺及相关物)；亚硝基脲类(例如卡莫司汀)；三氮烯类(达卡巴嗪、替莫唑胺)；烷基磺酸酯类(例如白消安)；丙卡巴肼和氮丙啶类；抗生素，例如羟基脲、蒽环类(多柔比星、柔红霉素、表柔比星以及其他衍生物)；蒽二酮类(米托蒽醌及相关物)；链霉菌家族(博来霉素、丝裂霉素C、放线菌素)；和紫外光。

在一些实施方式中，附加治疗剂是电离辐射。在其他实施方式中，附加治疗剂是顺铂或卡铂。在其他的实施方式中，附加治疗剂是依托泊苷。在其他的实施方式中，附加治疗剂是替莫唑胺。在其他的实施方式中，附加治疗剂是伊立替康/SN38。

在某些实施方式中，附加治疗剂选自如下一种或多种：顺铂、卡铂、伊立替康/SN38、吉西他滨、依托泊苷、替莫唑胺或电离辐射。

其他可以与本发明化合物和组合物组合使用的疗法或抗癌剂包括手术、辐射疗法(仅举几例，有γ-辐射疗法、中子束辐射疗法、电子束辐射疗法、质子疗法、近距离辐射疗法以及全身性放射性同位素等等)、内分泌疗法、生物反应调节剂(干扰素、白细胞介素以及肿瘤坏死因子(TNF)等等)、高温和冷冻疗法、减弱任何不良影响的药剂(例如止吐剂)，以及其他经过批准的化学治疗药物，包括但不限于本文所列的DNA-损伤剂、纺锤体毒素(长春碱、长春新碱、长春瑞滨、紫杉醇)、鬼臼毒素(依托泊苷、伊立替康、托泊替康)、亚硝基脲(卡莫司汀、洛莫司汀)、无机离子(顺铂、卡铂)、酶类(天冬酰胺酶)，以及激素类(他莫昔芬、亮丙瑞林、氟他米特以及甲地孕酮)、Gleevec^TM、阿霉素、地塞米松以及环磷酰胺。

本发明化合物或组合物还可以与任意下列治疗剂组合用于治疗癌症：阿巴瑞克(abarelix)(Plenaxis)；阿地白介素(aldesleukin)阿地白介素阿仑单抗(Alemtuzumabb)阿利维A酸(alitretinoin)别嘌呤醇六甲蜜胺(altretamine)氨磷汀(amifostine)阿那曲唑(anastrozole)三氧化二砷天冬酰胺酶阿扎胞苷(azacitidine)贝伐单抗(bevacuzimab)蓓萨罗丁(bexarotene)胶囊蓓萨罗丁凝胶剂博来霉素硼替佐米(bortezomib)静脉用白消安口服用白消安卡普睾酮(calusterone)卡培他滨(capecitabine)卡铂卡莫司汀( )；卡莫司汀以聚苯丙生(Polifeprosan)20为载体的卡莫司汀植入膜剂(Gliadel)；塞来考昔西妥昔单抗苯丁酸氮芥顺铂克拉屈滨氯法拉滨(clofarabine)环磷酰胺环磷酰胺(Cytoxan)；环磷酰胺(Cytoxan)；阿糖胞苷阿糖胞苷脂质体达卡巴嗪更生霉素(dactinomycin)、放线菌素D达依泊汀α(Darbepoetin alfa)柔红霉素脂质体柔红霉素，道诺霉素(daunomycin)柔红霉素，道诺霉素地尼白介素2(Denileukin diftitox)右雷佐生(dexrazoxane)多烯紫杉醇(docetaxel)多柔比星(Adriamycin)；多柔比星多柔比星(Adriamycin PFS)；多柔比星脂质体丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)丙酸屈他雄酮(masterone)；钠钾镁钙葡葡糖注射液(Elliott's B Solution)(Elliott's B)；表柔比星阿法依泊汀(Epoetin alfa)埃罗替尼(erlotinib)雌莫司汀(estramustine)磷酸依托泊苷依托泊苷，VP-16依西美坦(exemestane)非格司亭(Filgrastim)氟尿苷(floxuridine)(动脉内)氟达拉滨氟尿嘧啶，5-FU氟维司群(fulvestrant)吉非替尼(gefitinib)吉西他滨吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)(Zoladex)；乙酸戈舍瑞林乙酸组胺瑞林(histrelin acetate)(Histrelin)；羟基脲替伊莫单抗(Ibritumomab Tiuxetan)伊达比星(idarubicin)异环磷酰胺甲磺酸伊马替尼(imatinib甲磺酸盐)干扰素α2a(Roferon)；干扰素α-2b(Intron)；伊立替康来那度胺(lenalidomide)来曲唑(letrozole)亚叶酸(leucovorin) 醋酸亮丙瑞林左旋咪唑(levamisole)洛莫司汀，CCNU双氯乙基甲胺，氮芥乙酸甲地孕酮美法仑，L-PAM巯嘌呤，6-MP美司钠(mesna)美司钠(Mesnex)；甲氨蝶呤甲氧沙林(methoxsalen)丝裂霉素C米托坦(mitotane)米托蒽醌苯丙酸诺龙(nandrolone phenpropionate)奈拉滨(nelarabine)诺莫单抗(Nofetumomab)奥普瑞白介素(Oprelvekin)奥沙利铂(oxaliplatin)紫杉醇紫杉醇紫杉醇蛋白结合粒子帕利夫明(palifermin)帕米膦酸盐(pamidronate)培加酶(pegademase)(Adagen(Pegademase Bovine))；培加帕酶(pegaspargase)培非格司亭(Pegfilgrastim)培美曲塞二钠(pemetrexeddisodium)喷司他丁(pentostatin)哌泊溴烷(pipobroman)普卡霉素(plicamycin)、光神霉素(mithramycin)卟吩姆钠(porfimer sodium)丙卡巴肼奎纳克林(quinacrine)拉布立酶(Rasburicase)利妥昔单抗(Rituximab)沙格司亭(sargramostim)沙格司亭索拉非尼(sorafenib)链脲霉素(streptozocin)马来舒尼替尼(sunitinib maleate)滑石他莫昔芬替莫唑胺替尼泊苷(teniposide)、VM-26睾内酯硫鸟嘌呤，6-TG噻替派(thiotepa)托泊替康托瑞米芬(toremifene)托西莫单抗(Tositumomab)托西莫单抗/I-131托西莫单抗曲妥珠单抗(Trastuzumab)维甲酸(tretinoin)，ATRA尿嘧啶氮芥(Uracil Mustard)；戊柔比星(valrubicin)长春碱长春新碱长春瑞滨唑来膦酸盐(zoledronate)和伏立诺他(vorinostat)

关于最新癌症疗法的综合性论述，参见http://www.nci.nih.gov/、http://www.fda.gov/cder/cancer/druglistframe.htm上的FDA批准的肿瘤药物列表和The MerckManual第十七版1999年，全部内容引用在此作为参考。

另一种实施方式提供施用本发明化合物或组合物与抑制或调控碱基切除修复蛋白的附加治疗剂。在一些实施方式中，碱基切除修复蛋白选自UNG、SMUG1、MBD4、TDG、OGG1、MYH、NTH1、MPG、NEIL1、NEIL2、NEIL3(DNA葡糖基转移酶)；APE1、APEX2(AP核酸内切酶)；LIG1、LIG3(DNA连接酶I和III)；XRCC1(LIG3附件)；PNK、PNKP(多核苷酸激酶和磷酸酶)；PARP1、PARP2(多(ADP-核糖)聚合酶)；PolB、PolG(聚合酶)；FEN1(核酸内切酶)或Aprataxin。在其他实施方式中，碱基切除修复蛋白选自PARP1、PARP2或PolB。在其他的实施方式中，碱基切除修复蛋白选自PARP1或PARP2。在一些实施方式中，治疗剂选自Olaparib(也称AZD2281或KU-0059436)、Iniparib(也称BSI-201或SAR240550)、Veliparib(也称ABT-888)、Rucaparib(也称PF-01367338)、CEP-9722、INO-1001、MK-4827、E7016、BMN673或AZD2461。

治疗方法

本发明在一方面涉及抑制患者ATR激酶活性的方法，该方法包含向该患者施用本文所述化合物或包含所述化合物的组合物。在一些实施方式中，所述方法用于治疗或预防选自增殖性和过度增殖性疾病的病症，例如癌症。

在一些实施方式中，癌症选自本文所述的癌症。在一些实施方式中，所述癌症是肺癌、头颈癌、胰腺癌、胃癌或脑癌。在其他实施方式中，癌症选自肺或胰腺的癌症。

在其他的实施方式中，癌症选自非小细胞肺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、胆道癌、头颈癌、膀胱癌、结肠直肠癌、成胶质细胞瘤、食道癌、乳腺癌、肝细胞癌或卵巢癌。

在一些实施方式中，肺癌是小细胞肺癌，附加治疗剂是顺铂和依托泊苷。在其他实施例中，肺癌是非小细胞肺癌，附加治疗剂是吉西他滨和顺铂。在其他的实施方式中，非小细胞肺癌是鳞状非小细胞肺癌。在另一种实施方式中，癌症是乳腺癌，附加治疗剂是顺铂。在其他实施方式中，癌症是三阴性乳腺癌。

在某些实施方式中，化合物或药学上可接受的组合物的“有效量”是有效治疗所述疾病的量。按照本发明的方法，可以使用有效治疗所述疾病或减轻严重性的任意量和任意施用途径来施用化合物和组合物。

一方面提供抑制患者ATR的方法，包含施用本文所述化合物或组合物。另一种实施方式提供治疗癌症的方法，包含向患者施用本文所述化合物或组合物，其中各变量是如本文所定义的。

另一种实施方式提供治疗胰腺癌的方法，通过施用本文所述化合物或组合物与另一种已知胰腺癌治疗剂的组合。本发明在一方面包括施用本文所述化合物或组合物与吉西他滨的组合。在一些实施方式中，胰腺癌包含下列细胞系之一：PSN-1、MiaPaCa-2或Panc-1。按照另一方面，癌症包含下列原发性肿瘤系之一：Panc-M或MRC5。

本发明的另一方面包括施用本文所述化合物或组合物与辐射疗法的组合。另外一方面提供消除辐射-诱发的G2/M检查点的方法，通过施用本文所述化合物或组合物与辐射治疗的组合。

另一方面提供治疗胰腺癌的方法，通过向胰腺癌细胞施用本文所述化合物或组合物与一种或多种癌症疗法的组合。在一些实施方式中，将化合物或组合物与化学辐射、化学疗法和/或辐射疗法组合。正如本领域技术人员将理解的，“化学辐射”表示既包括化学疗法(例如吉西他滨)也包括辐射的治疗制度。在一些实施方式中，化学疗法是吉西他滨。

另一个方面提供增加胰腺癌细胞对选自吉西他滨或辐射疗法的癌症疗法的敏感性的方法，通过施用本文所述化合物或组合物与癌症疗法的组合。

在一些实施方式中，癌症疗法是吉西他滨。在其他实施方式中，癌症疗法是辐射疗法。在另外一种实施方式中，癌症疗法是化学辐射。

另一方面提供抑制胰腺癌细胞中Chk1(Ser 345)磷酸化的方法，包含在用吉西他滨(100nM)和/或辐射(6Gy)治疗后向胰腺癌细胞施用本文所述化合物或组合物。

另一方面提供破坏损伤-诱发的细胞周期检查点的方法，通过向癌细胞施用本文所述化合物或组合物与辐射疗法的组合。

另一方面提供抑制癌细胞中同源重组修复DNA损伤的方法，通过施用本文所述化合物或组合物与如下一种或多种治疗的组合：化学辐射、化学疗法和辐射疗法。

在一些实施方式中，化学疗法是吉西他滨。

另一方面提供抑制癌细胞中同源重组修复DNA损伤的方法，通过施用本文所述化合物或组合物与吉西他滨和辐射疗法的组合。

本发明的另一方面提供治疗非小细胞肺癌的方法，包含向患者施用本文所述化合物或组合物与如下一种或多种附加治疗剂的组合：顺铂或卡铂、依托泊苷和电离辐射。一些实施方式包含向患者施用本文所述化合物与顺铂或卡铂、依托泊苷和电离辐射的组合。在一些实施方式中，该组合是顺铂、依托泊苷和电离辐射。在其他实施方式中，该组合是卡铂、依托泊苷和电离辐射。

另一种实施方式提供促进癌细胞中细胞死亡的方法，包含向患者施用本文所述化合物或者包含所述化合物的组合物。

另外一种实施方式提供防止癌细胞中DNA损伤的细胞修复的方法，包含向患者施用本文所述化合物或者包含所述化合物的组合物。另外一种实施方式提供防止癌细胞中由DNA损伤所致细胞修复的方法，包含向患者施用本文所述化合物或者包含所述化合物的组合物。

另一种实施方式提供使细胞敏感于DNA损伤剂的方法，包含向患者施用本文所述化合物或者包含所述化合物的组合物。

在一些实施方式中，针对具有ATM信号级联放大缺陷的癌细胞使用该方法。在一些实施方式中，所述缺陷是如下一种或多种的表达或活性改变：ATM、p53、CHK2、MRE11、RAD50、NBS1、53BP1、MDC1、H2AX、MCPH1/BRIT1、CTIP或SMC1。在其他实施方式中，所述缺陷是如下一种或多种的表达或活性改变：ATM、p53、CHK2、MRE11、RAD50、NBS1、53BP1、MDC1或H2AX。按照另一种实施方式，针对癌症、癌细胞或者表达DNA损伤性致癌基因的细胞使用该方法。

在另一种实施方式中，细胞是表达DNA损伤性致癌基因的癌细胞。在一些实施方式中，所述癌细胞具有如下一种或多种的表达或活性改变K-Ras、N-Ras、H-Ras、Raf、Myc、Mos、E2F、Cdc25A、CDC4、CDK2、Cyclin E、Cyclin A和Rb。

按照另一种实施方式，针对癌症、癌细胞或者具有参与碱基切除修复的蛋白质(“碱基切除修复蛋白”)缺陷的细胞使用该方法。本领域已知有很多方法检测肿瘤是否具有碱基切除修复缺陷。例如，可以对肿瘤样品进行每个碱基切除修复基因(例如UNG、PARP1或LIG1)的基因组DNA或mRNA产物测序，以确定是否存在预期会调控基因产物功能或表达的突变(Wang等人，Cancer Research(《癌症研究》)，第52卷，第4824页，1992年)。除了突变失活以外，肿瘤细胞还可以通过超甲基化其启动子区，引起基因表达减少，来调控DNA修复基因。这最常使用甲基化-特异性聚合酶链反应(PCR)来进行评估，以量化有关碱基切除修复基因启动子上的甲基化水平。碱基切除修复基因启动子甲基化作用分析是可商购的(http://www.sabiosciences.com/dna_methylation_product/HTML/ME AH-421A.html)。

最后，利用标准技术，例如定量逆转录酶-偶联聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法(IHC)，分别直接量化每个基因mRNA和蛋白产物的水平，能够评估碱基切除修复基因的表达水平(Shinmura等人，Carcinogenesis(《癌发生》)，第25卷，第2311页，2004年；Shinmura等人，Journal of Pathology(《病理学杂志》)，第225卷，第414页，2011年)。

在一些实施方式中，碱基切除修复蛋白是UNG、SMUG1、MBD4、TDG、OGG1、MYH、NTH1、MPG、NEIL1、NEIL2、NEIL3(DNA葡糖基转移酶)；APE1、APEX2(AP核酸内切酶)；LIG1、LIG3(DNA连接酶I和III)；XRCC1(LIG3附件)；PNK、PNKP(多核苷酸激酶和磷酸酶)；PARP1、PARP2(多(ADP-核糖)聚合酶)；PolB、PolG(聚合酶)；FEN1(核酸内切酶)或Aprataxin。

在一些实施方式中，碱基切除修复蛋白是PARP1、PARP2或PolB。在其他实施方式中，碱基切除修复蛋白是PARP1或PARP2。

上述方法(基因序列、启动子甲基化和mRNA表达)也可以用来表征其他有关基因或蛋白质的状态(例如表达或突变)，如由肿瘤表达的DNA-损伤性致癌基因或细胞ATM信号级联放大缺陷。

另外一种实施方式提供本文所述化合物或组合物作为辐射增敏剂或化学增敏剂的用途。

其他的实施方式提供本文所述化合物或组合物作为治疗癌症的单一成分(单一疗法)的用途。在一些实施方式中，本文所述化合物或组合物用于治疗患有DNA-损伤应答(DDR)缺陷癌症的患者。在其他实施方式中，所述缺陷是ATM、p53、CHK2、MRE11、RAD50、NBS1、53BP1、MDC1或H2AX的突变或缺失。

术语

术语“对象”、“宿主”或“患者”包括动物和人(例如男性或女性，例如儿童、青少年或成人)。优选地，“对象”、“宿主”或“患者”是人。

本发明化合物包括本文一般描述的那些，进一步如本文公开的种类、小类和品种所阐述。本文所用的下列定义应当适用，另有指示除外。出于本发明的目的，化学元素是按照《元素周期表》CAS版、《化学与物理手册》第75版鉴定的。另外，有机化学的一般原理参见《有机化学》Thomas Sorrell,University Science Books,Sausalito:1999，和《March高等有机化学》第5版,Ed.:Smith,M.B.and March,J.,John Wiley&Sons,New York:2001，全部内容引用在此作为参考。

如本文所述，指定的原子数范围包括其中的任意整数。例如，具有1－4个原子的基团可能具有1、2、3或4个原子。

如本文所述，本发明化合物可以可选地被一个或多个取代基取代，例如本文一般阐述的，或者如本发明特定种类、小类或品种所例证的。将被领会的是，措辞“可选被取代”与措辞“取代或未取代”可互换使用。一般而言，术语“取代的”无论前面是否有术语“可选地”均表示用指定取代基的自由基代替给定结构中的氢自由基。除非另有指示，可选被取代的基团可以该基团的每一个可取代的位置上具有取代基，并且当任意给定的结构中一个以上位置可以被一个以上选自指定组的取代基所取代时，在每个位置上的取代基可以是相同或不同的。本发明所预想的取代基组合优选地是生成稳定的或化学上可行的化合物的那些。

除非另有指示，从环中心画出的键所连接的取代基意味着该取代基可以键合于环中任意位置。在如下例子i中，例如，J^w可以键合于吡啶基环上任意位置。就二环而言，贯穿两个环画出的键表明该取代基可以键合于二环任意位置。在如下例子ii中，例如，J^w可以键合于5元环(例如在氮原子上)和6元环。

本文所用的术语“稳定的”表示这样的化合物，在经受了能够对它们进行制备、检测、回收、纯化以及用于本文所公开的一个或多个目的的条件时实质上没有变化。在一些实施方式中，稳定的化合物或化学上可行的化合物是当在没有水分或其他化学反应性条件存在的情况下，在40℃或更低温度下保持至少一周时实质上没有变化者。

本文所用的术语“配价键”被定义为基于分子间相互作用生成的配位键，其中之一充当在所生成的配合物中共享的电子对供体，另一个充当受体。

本文所用的术语“脂族”或“脂族基团”意指直链(即无支链)、支链或环状的取代或未取代的烃链，其是完全饱和的或者含有一个或多个与分子其余部分具有单个连接点的不饱和单元。

除非另有指示，脂族基团含有1－20个脂族碳原子。在一些实施方式中，脂族基团含有1－10个脂族碳原子。在其他实施方式中，脂族基团含有1－8个脂族碳原子。在其他的实施方式中，脂族基团含有1－6个脂族碳原子，并且在其他的实施方式中，脂族基团含有1－4个脂族碳原子。脂族基团可以是直链或支链的、取代或未取代的烷基、链烯基或炔基。具体实例包括但不限于甲基、乙基、异丙基、正丙基、仲丁基、乙烯基、正丁烯基、乙炔基和叔丁基。脂族基团也可以是环状的，或者具有直链或支链基团与环状基团的组合。这些类型的脂族基团的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、-CH₂-环丙基、CH₂CH₂CH(CH₃)-环己基。

术语“脂环族”(或者“碳环”或“碳环基”)表示单环C₃-C₈烃或二环C₈-C₁₂烃，其是完全饱和的或者含有一个或多个不饱和单元，但不是芳族的，其与分子其余部分具有单个连接点，其中所述二环环系中任意单独的环具有3－7个成员。脂环族基团的实例包括但不限于环烷基和环烯基。具体实例包括但不限于环己基、环丙基和环丁基。

本文所用的术语“杂环”、“杂环基”或“杂环的”表示非芳族的单环、二环或三环环系，其中一个或多个环成员是独立选择的杂原子。在一些实施方式中，“杂环”、“杂环基”或“杂环的”基团具有三至十四个环成员，其中一个或多个环成员是独立选自氧、硫、氮或磷的杂原子，并且系统中每个环含有3至7个环成员。

杂环的实例包括但不限于3-1H-苯并咪唑-2-酮、3-(1-烷基)-苯并咪唑-2-酮、2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-四氢噻吩基、3-四氢噻吩基、2-吗啉代、3-吗啉代、4-吗啉代、2-硫代吗啉代、3-硫代吗啉代、4-硫代吗啉代、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、1-四氢哌嗪基、2-四氢哌嗪基、3-四氢哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、1-吡唑啉基、3-吡唑啉基、4-吡唑啉基、5-吡唑啉基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、2-噻唑烷基、3-噻唑烷基、4-噻唑烷基、1-咪唑烷基、2-咪唑烷基、4-咪唑烷基、5-咪唑烷基、二氢吲哚基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、苯并硫杂环戊烷、苯并二噻烷和1,3-二氢-咪唑-2-酮。

环状基团(例如脂环族和杂环)可以是线性稠合、桥连或螺环的。

术语“杂原子”表示一个或多个氧、硫、氮、磷或硅(包括氮、硫、磷或硅的任意氧化形式；任意碱性氮的季铵化形式；或者杂环的可取代氮，例如N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或NR⁺(如在N-取代的吡咯烷基中))。

本文所用的术语“不饱和的”意味着基团具有一个或多个不饱和单元。正如本领域技术人员将知晓的，不饱和基团可以是部分不饱和的或完全不饱和的。部分不饱和基团的实例包括但不限于丁烯、环己烯和四氢吡啶。完全不饱和基团可以是芳族、反芳族或非芳族的。完全不饱和基团的实例包括但不限于苯基、环辛四烯、吡啶基、噻吩基和1-甲基吡啶-2(1H)-酮。

本文所用的术语“烷氧基”或“硫代烷基”表示经由氧(“烷氧基”)或硫(“硫代烷基”)原子连接的如前文所定义的烷基。

术语“卤代烷基”、“卤代链烯基”、“卤代脂族基”和“卤代烷氧基”表示被一个或多个卤原子取代的烷基、链烯基或烷氧基，视情况而定。该术语包括全氟化烷基，例如–CF₃和-CF₂CF₃。

术语“卤素”、“卤代基”和“卤”表示F、Cl、Br或I。

单独或者作为如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”等较大基团中的一部分使用的术语“芳基”表示具有总共五至十四个环成员的单环、二环和三环环系，其中该系统中至少一个环是芳族的，并且其中该系统中每个环均含有3至7个环成员。术语“芳基”可以与术语“芳环”互换使用。

单独或者作为如“杂芳烷基”或“杂芳基烷氧基”等较大基团中的一部分使用的术语“杂芳基”表示具有总共五至十四个环成员的单环、二环和三环环系，其中该系统中至少一个环是芳族的，该系统中至少一个环含有一个或多个杂原子，并且其中该系统中每个环均含有3至7个环成员。术语“杂芳基”可与术语“杂芳基环”或术语“杂芳族的”互换使用。杂芳基环的实例包括但不限于2-呋喃基、3-呋喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、苯并咪唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、N-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、哒嗪基(例如3-哒嗪基)、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、四唑基(例如5-四唑基)、三唑基(例如2-三唑基和5-三唑基)、2-噻吩基、3-噻吩基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基(例如2-吲哚基)、吡唑基(例如2-吡唑基)、异噻唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,3-三唑基、1,2,3-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、嘌呤基、吡嗪基、1,3,5-三嗪基、喹啉基(例如2-喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基)和异喹啉基(例如1-异喹啉基、3-异喹啉基或4-异喹啉基)。

应当理解，术语“杂芳基”包括某些类型的杂芳基环，它们存在两种不同形式之间的平衡。更具体地说，例如，诸如氢化吡啶和吡啶酮(以及同样的，羟基嘧啶和嘧啶酮)之类的品种意在涵盖于“杂芳基”的定义内。

本文所用的术语“保护基团”和“保护性基团”可互换使用，表示用于暂时封闭具有多个反应位点的化合物中的一个或多个所需官能团的试剂。在某些实施方式中，保护基团具有如下一种或多种、优选全部特征：a)被选择性地加至官能团，生成受保护的底物，收率良好；b)对于在一个或多个其他反应性位点发生的反应稳定；以及c)可被不攻击所再生的去保护官能团的试剂选择性地移除，收率良好。正如本领域技术人员将理解的，在一些情况下，这些试剂不攻击化合物中的其他反应性基团。在其他情况下，这些试剂也可以与化合物中的其他反应性基团反应。保护基团的实例详见Greene,T.W.,Wuts,P.G,“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”,Third Edition,John Wiley&Sons,New York:1999(和该书的其他版本)，其全部内容引用在此作为参考。本文所用的术语“氮保护基团”表示用于暂时封闭多官能化合物中一个或多个所需氮反应性位点的试剂。优选的氮保护基团还具备如上保护基团所示例的特征，某些示范性氮保护基团也详见Greene,T.W.,Wuts,P.G,“Protective Groups in Organic Synthesis”,Third Edition,John Wiley&Sons,NewYork:1999第7章，其全部内容引用在此作为参考。

在一些实施方式中，烷基或脂族链的亚甲基单元可选地被另一原子或基团代替。这类原子或基团的实例包括但不限于氮、氧、硫、-C(O)-、-C(＝N-CN)-、-C(＝NR)-、-C(＝NOR)-、-SO-和-SO₂-。这些原子或基团可以组合生成更大的基团。这类更大基团的实例包括但不限于-OC(O)-、-C(O)CO-、-CO₂-、-C(O)NR-、-C(＝N-CN)、-NRCO-、-NRC(O)O-、-SO₂NR-、-NRSO₂-、-NRC(O)NR-、-OC(O)NR-和-NRSO₂NR-，其中R是例如H或C_1-6脂族基。应当理解，这些基团可以经由单键、双键或叁键键合于脂族链的亚甲基单元。经由双键键合于脂族链的可选代替(氮原子，在这种情况下)的实例是-CH₂CH＝N-CH₃。在一些情况下，尤其是在末端上，可选的代替可以经由叁键键合于脂族基团。一种实例将是CH₂CH₂CH₂C≡N。应当理解，在这种情形中，末端氮不键合于另一原子。

还应当理解，术语“亚甲基单元”也可以表示支链或取代的亚甲基单元。例如，在异丙基部分[-CH(CH₃)₂]中，氮原子(例如NR)代替第一引用的“亚甲基单元”将得到二甲胺[-N(CH₃)₂]。在这类情形中，本领域技术人员将理解，氮原子将不具有任意额外与之键合的原子，并且来自“NR”的“R”在这种情况下将不存在。

除非另有指示，可选的代替生成化学上稳定的化合物。可选的代替能够发生在链内和/或链的任一端；也就是在连接点和/或在末端。两个可选的代替也可以在链内彼此相邻，只要其导致化学上稳定的化合物即可。例如，C₃脂族基团可以可选地被2个氮原子代替生成–C–N≡N。可选的代替还可以完全代替链中的所有碳原子。例如，C₃脂族基团可以可选地被-NR-、-C(O)-和-NR-代替生成-NRC(O)NR-(脲)。

除非另有指示，如果代替发生在末端上，那么代替原子与末端上的氢原子结合。例如，如果-CH₂CH₂CH₃的亚甲基单元可选地被-O-代替，那么所得化合物可能是-OCH₂CH₃、-CH₂OCH₃或-CH₂CH₂OH。应当理解，如果末端原子不含有任何自由价电子，那么在末端上也不需要氢原子(例如-CH₂CH₂CH＝O或-CH₂CH₂C≡N)。

除非另有指示，本文描绘的结构也旨在包括该结构的所有同分异构(例如，对映异构、非对映异构、几何异构、构象异构和旋转异构)形式。例如，每个不对称中心的R与S构型、(Z)与(E)双键异构体和(Z)与(E)构象异构体都包括在本发明内。正如本领域技术人员将理解的，取代基能够围绕任何可旋转键自由地旋转。例如，画为的取代基也代表

因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及这些化合物的对映体、非对映体、几何、构象和旋转混合物均在本发明范围之内。

除非另有指示，本发明化合物的所有互变异构形式均在本发明范围之内。

在本发明化合物中，任何未被具体命名为特定同位素的原子旨在代表该原子的任意稳定的同位素。除非另有规定，当一个位置被具体命名为“H”或“氢”时，该位置被理解为具有天然丰度同位素组成的氢。也除非另有规定，当一个位置被具体命名为“D”或“氘”时，该位置被理解为具有高丰度的氘，其丰度比0.015％的天然氘丰度大至少3340倍(也就是结合有至少50.1％的氘)。

“D”和“d”都表示氘。

另外，除非另有指示，本文描绘的结构也意在包括仅在一个或多个同位素富集原子的存在方面有区别的化合物。例如，具有本发明结构、除了氢被氘或氚代替或者碳被¹³C-或¹⁴C-富集碳代替以外的化合物在本发明范围之内。这类化合物例如可用作生物测定法中的分析工具或探针。

本文所用的术语“结晶”表示在晶格中具有特殊的晶格分子排列和/或构象的固体。

本文所用的术语“非晶型”表示由紊乱的分子排列组成、并且不具备可分辨的晶格的固体形式。

本文所用的术语“溶剂化物”表示结晶性固体加合物，含有化学计量或非化学计量数量的结合在晶体结构内的溶剂。如果所结合的溶剂是水，这类加合物被称为“水合物”。

缩写

使用下列缩写：

DMSO 二甲基亚砜

DCM 二氯甲烷

ATP 三磷酸腺苷

TFA 三氟乙酸

¹HNMR 质子核磁共振

HPLC 高效液相色谱

LCMS 液相色谱-质谱

Rt 保留时间

MTBE 甲基叔丁基醚

XRPD X-射线粉末衍射

DSC 差示扫描量热

TGA 热重分析

RT 室温

NMP N-甲基-2-吡咯烷酮

Bp 沸点

DMF 二甲基甲酰胺

PTSA 对-甲苯磺酸

DIPEA N,N-二异丙基乙胺

HOBT 羟基苯并三唑

HATU 1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐

TBTU 2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐

T3P 丙基膦酸酐

COMU 1-[(1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代乙叉氨基氧基)-二甲氨基-吗啉代)]脲鎓六氟磷酸盐

TCTU [(6-氯苯并三唑-1-基)氧基-(二甲氨基)亚甲基]-二甲基-铵四氟硼酸盐

HBTU O-苯并三唑-N,N,N’,N’-四甲基-脲鎓-六氟磷酸盐

ECDI 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺

LDA 二异丙基氨基锂

CDI 1,1'-羰基二咪唑

方法

本文所述方法和化合物可用于制造含有氨基吡唑并嘧啶核心的ATR抑制剂。本文流程所示一般合成程序可用于生成广泛的化学产物，能够用于药物化合物的制造。

流程A

本发明化合物可以按照类似于流程A所描绘的方法合成。

步骤1

可商购的烯丙基氰基乙酸酯1的阴离子可以与例如三氯乙腈反应，得到中间体2。在阴离子缩合步骤，可商购的烯丙基氰基乙酸酯1的阴离子可以用碱生成，例如乙酸钾，适当的溶剂例如醇(例如异丙醇)。阴离子然后与三氯乙腈在室温下反应。

步骤2

中间体2然后与肼反应生成二氨基吡唑3。在吡唑生成步骤，中间体2与肼(或其水合物)在非质子溶剂中反应，例如DMF，得到二氨基吡唑3。反应发生在碱性条件下(例如在乙酸钾或AcONa的存在下)，并加热(例如≥110℃)，以确保完全环化。

步骤3

中间体3可以进一步与二亲电偶联伴侣缩合，生成嘧啶4a-c。在嘧啶生成步骤，中间体3与1,3-二亲电物(例如1,3-二醛或3-(二烷基氨基)-丙-2-烯醛)在各种类型溶剂(例如DMF或DMSO/水)中反应，得到二环核心4a-c。若亲电中心之一或之二被保护/屏蔽(例如醛被屏蔽为缩酮)，需要引入磺酸(例如PTSA)，以释放反应性官能团。

步骤4

烯丙基酯的去保护，例如经由水解，得到羧酸5a-c。在去保护步骤，使化合物4a-c受到本领域技术人员已知的水解条件作用。例如，在催化量钯(例如Pd(PPh₃)₄)的存在下，将4a-c用苯基硅烷或4-甲基苯亚磺酸盐处理，生成对应的羧酸5a-c。或者，化合物4a-c可以用碱水(例如NaOH、LiOH或KOH)处理，生成酸5a-c。

步骤5

在活化酯生成步骤，使羧酸5a-c与本领域技术人员已知的酰胺偶联剂反应。适合的酰胺偶联伴侣包括但不限于TBTU、TCTU、HATU、T3P和COMU。若选择适当的偶联剂，能够在室温下、在有机碱的存在下，例如脂族胺(例如三乙胺、DIPEA)，快速进行反应(～1hr)，得到活化酯6a-c。例如，若使用酰胺偶联剂TBTU[J＝H]或TCTU[J＝Cl]，通过过滤反应混合物容易得到化合物6a-c。

在酰胺键生成之前生成活化酯6a-c以制备I-A一般是优选的，不过5a-c直接转化为本发明的式I-A化合物也是可能的。也可以采用作为替代选择的活化酯(分离或就地生成)，它们将为本领域技术人员所知(例如使用CDI、TBTU、TCTU、HATU、T3P、COMU偶联剂)。

步骤6

在酰胺键生成步骤，活化酯6a-c可以与取代或未取代的3-氨基吡啶反应，得到本发明的式I-A化合物。酰胺偶联的反应条件一般是在非质子溶剂中(例如NMP、吡啶、DMF等)，并加热(例如≥90℃)。3-氨基吡啶可以进一步在酰胺键生成之后被官能化。

或者，可以合并上述两个步骤：羧酸5a-c可以用作酰胺键生成的起始点，就地生成活化酯，使用与上述那些相同的酰胺偶联剂。按照类似于上述的方式分离本发明化合物I-A。

流程B

或者，本文公开的化合物可以按照类似于流程B描绘的方法制备。

步骤1

酰胺8可以容易地从可商购的氰基乙酸7制备。在酰胺键生成步骤，氰基乙酸7可以与取代的3-氨基吡啶反应，得到本发明化合物8。酰胺偶联的反应条件一般是在非质子溶剂中(例如DCM、NMP、DMF等)，在有机碱的存在下，例如脂族胺(例如三乙胺或DIPEA)，酰胺偶联剂是本领域技术人员已知的，例如EDCI、TBTU、COMU、T3P等。

步骤2

在吡唑生成步骤，在适当的溶剂中，例如醇(例如乙醇)，可以用碱(例如钾或钠的乙酸盐)生成氰基酰胺8的阴离子。阴离子然后与三氯乙腈在室温下反应。所得固体可以过滤收集之，然后与肼(或其水合物)在非质子溶剂中反应，例如DMF或NMP，得到二氨基吡唑9，后者进一步与二亲电偶联伴侣缩合，生成本发明式I-A化合物的嘧啶部分。

步骤3

在嘧啶生成步骤，中间体9与1,3-二亲电物(例如1,3-二醛或3-(二烷基氨基)-丙-2-烯醛)在各种类型溶剂(例如iPrOH/水、DMF或DMSO/水)中反应，得到所需产物I-A。若亲电中心之一或之二被保护/屏蔽(例如醛被屏蔽为缩酮)，需要引入磺酸(例如PTSA)，以释放反应性官能团。

制备例和实施例

所有可商购的溶剂和试剂按收到的原样使用。利用CEM Discovery微波进行微波反应。在例如Combiflash^RCompanion^TM系统上进行快速色谱，用0至100％EtOAc/石油醚梯度洗脱。也采用其他本领域已知的方法进行快速色谱。使样品预吸附在二氧化硅上。按照规定，在Berger Minigram SFC机器上进行超临界流体色谱(SFC)。利用Bruker AvanceIII 500仪器记录全部¹H NMR，频率500MHz。在Waters SQD质谱计上分析MS样品，在阳和阴离子模式中操作电喷电离。利用色谱向质谱计引入样品。所有最终产物的纯度均≥95％，在实验细节中另有指定除外。在Waters Acquity UPLC系统上测量HPLC纯度，系统带有WatersSQD MS仪器，配备有Waters UPLC BEH C8 1.7μm,2.1x 50mm柱和Vanguard BEH C8 1.7μm,2.1x 5mm保护柱。

本文所用的术语“Rt(min)”表示HPLC保留时间，以分钟计，与化合物有关。除非另有指示，用于获得所报道的保留时间的HPLC方法如下所述：

HPLC方法

仪器：Waters Acquity UPLC-MS；

柱：Waters UPLC BEH C8 1.7μm,2.1x 50mm，带有Vanguard BEH C8 1.7μm,2.1x5mm保护柱；

柱温：45℃；

移动相A:10mM甲酸铵水溶液:乙腈95:5,pH 9；

移动相B:乙腈；

检测：210-400nm；

梯度：0-0.40min:2％B,0.40-4.85min:2％B至98％B,4.85-4.90min:98％B至2％B,4.90-5.00min:保持在2％B；

流速：0.6mL/分钟。

制备例1:烯丙基3,5-二氨基-1H-吡唑-4-羧酸酯

步骤1:烯丙基3-氨基-4,4,4-三氯-2-氰基丁-2-烯酸酯2

向KOAc(589.4g,6.006mol)的异丙醇(3L)溶液加入烯丙基氰基乙酸酯(429.4g,403.2mL,3.432mol)，使反应混合物冷却至5℃。逐份50mL加入三氯乙腈(495.5g,3.432mol)，维持温度低于15℃。然后使反应混合物升温至20℃，搅拌3hr。加入水(～4L)以溶解无机物，沉淀出所需产物。混合物搅拌20分钟，在真空下过滤分离固体。将该固体过滤，用水洗涤(2x 0.5L)，在40℃真空烘箱中干燥过夜，得到烯丙基3-氨基-4,4,4-三氯-2-氰基丁-2-烯酸酯2，为米白色粉末(787g,85％)。

步骤2:烯丙基3,5-二氨基-1H-吡唑-4-羧酸酯3

在0℃下，向烯丙基3-氨基-4,4,4-三氯-2-氰基-丁-2-烯酸酯2(619g,2.297mol)与KOAc(676.3g,6.891mol)的DMF(2.476L)悬液历经15min缓慢加入水合肼(172.5g,167.6mL,3.446mol)。反应混合物然后在环境温度下搅拌2hr，在此阶段¹H NMR显示原料完全耗尽。反应混合物然后在110℃下加热过夜，再自然冷却至环境温度，搅拌另外48hr。使混合物通过烧结玻璃漏斗过滤以除去沉淀出来的固体，在减压下蒸发滤液，得到稠厚的液体。加入DCM(大约2L)，再次过滤混合物以除去额外沉淀出来的固体。使滤液通过1kg硅胶塞纯化(DCM/MeOH梯度作为洗脱剂)，除去溶剂，得到橙色固体，将其悬浮在乙腈中，在约70℃下加热直至固体溶解，此时使溶液自然冷却至环境温度，然后至2℃。在真空下过滤分离所生成的沉淀，用冷MeCN(～50mL)洗涤，在真空烘箱中干燥至恒重，得到标题化合物，为米白色粉末(171.2g,41％)。

制备例2a:1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯

步骤1:烯丙基2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯4a

向烯丙基3,5-二氨基-1H-吡唑-4-羧酸酯3(42.72g,234.5mmol)的DMSO(270.8mL)/水(270.8mL)悬液加入p-TsOH水合物(46.72g,245.6mmol)和3-(二异丙氨基)-2-氟-丙-2-烯醛(描述在Tetrahedron Letters,33(3),357-60；1992中)(38.69g,223.3mmol)。反应混合物加热至100℃达3hr，在此期间有固体从溶液中缓慢沉淀出来。使橙色悬液自然冷却至RT过夜。过滤固体，用水洗涤，在真空下干燥，得到烯丙基2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯4a，为沙色固体(45.05g,85％收率)。

在替代方法中，烯丙基2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯4a可以经由如下一般流程C-1合成。

流程C-1

反应1

双乙缩醛保护的丙二醛(中间体35)可以在酸性条件下去保护，生成中间体36。在一些实施方式中，酸性条件可以利用酸来生成，酸独立地选自HCl、H₂SO₄、MeSO₂H、TFA、HBF₄或pTSA，适合的溶剂例如水。优选地，用在该反应中的酸选自pTSA或MeSO₂H。R°优选地是C_1-6脂族基团。在一些实施方式中，R°选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或戊基。在其他的实施方式中，R°选自甲基或乙基。

反应2

中间体36可以与亲电氟化剂反应，生成中间体38。在一些实施方式中，亲电氟化剂独立地选自1-(氯甲基)-4-氟-1,4-重氮化二环[2.2.2]辛烷双四氟硼酸盐N-氟苯磺酰胺、取代的1-氟吡啶鎓盐或氟气。

反应3

中间体38可以与中间体3在适合的缩合条件下反应，生成中间体4a。在一些实施方式中，适合的缩合条件可以包括使中间体38与中间体3在溶剂的存在下反应，并加热，得到4a的二环核心。反应可以发生在各种类型的溶剂中，例如水、DMSO/水或DMF。

在一种实例中，利用流程C-2所述方法生成中间体4a。

流程C-2

将1,1,3,3-四甲氧基丙烷35a(20g,121.8mmol)溶于水(200ml)。加入对-甲苯磺酸一水合物水合物(23.17g,121.8mmol)，将混合物在19-20℃下搅拌90分钟。分批加入1-(氯甲基)-4-氟-1,4-重氮化二环[2.2.2]辛烷双四氟硼酸盐37(Selectfluor,1.4eqv,60.4g,170.5mmol)。加入是吸热的(20.1℃至19.4℃)，不过一旦加入完成，温度开始缓慢上升(历经45分钟温度升至25.4℃)。selectfluor历经1hr溶解。混合物在环境温度下搅拌18hr。此后混合物是均质的。历经5分钟缓慢加入DMSO(150ml)。加入是放热的，在加入期间温度从20.4℃升至34.2℃。混合物然后开始冷却。将所得混合物搅拌45分钟。然后分批加入化合物3(21.4g,115.7mmol)。加入不是放热的。混合物加热至85℃达4hr(Lc/Ms图样在2hr和4hr时间点是等同的)。然后使所搅拌的混合物自然冷却至环境温度过夜。所得反应混合物呈浆状。向所得浆状物缓慢加入水(150ml)。温度从20.4℃升至21.5℃。将浆状物搅拌2hr，然后过滤分离产物。将滤饼用水洗涤，在烧结物上干燥至米色固体(15.5g)。产物进一步在40℃真空烘箱中干燥20hr。得到混合物4a，为米色固体(13.5g,50％收率)。HPLC纯度97.7％面积；¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ4.83(2H,d),5.29(1H,d),5.49(1H,d),6.04-6.14(1H,m),6.57(2H,brs),8.80(1H,m),9.40(1H,m)；19F NMR(500MHz,DMSO-d6)δ–153.1。

步骤2:2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸5a

向烯丙基2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯4a(45g,190.5mmol)的DCM(1.35L)悬液加入苯基硅烷(41.23g,46.96mL,381.0mmol)，随后加入Pd(PPh₃)₄(8.805g,7.620mmol)。将反应在室温下搅拌2hr 30min。过滤反应混合物，固体用DCM洗涤，得到浅黄色固体(43.2g)。将该固体进一步在DCM(225mL)中在RT下研磨45min，然后过滤，在真空下干燥过夜，得到2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸5a，为浅黄色固体(37.77g,100％收率)。

在替代方法中，将钠-4-甲基苯亚磺酸盐(无水,1.2eqv,22.6g,127mmol)悬浮在无水DMSO(20vol,500ml)中。在氮气氛下使所搅拌的混合物升温至30℃。一旦完全溶解，加入Pd(PPh₃)₄(2mol％,2.4g,2.1mmol)。混合物在25-30℃下搅拌10min，此后呈现混浊的黄色溶液。分批加入烯丙基2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯4a(25g,105.8mmol)，维持温度在25-30℃。一旦加入完成，搅拌该云状溶液，直至根据HPLC判断反应完全(2-3hr)。加入底物15分钟后生成重沉淀。随着反应进行，混合物变得更稠厚。反应混合物用水(125ml)稀释，缓慢加入2M HCl(66ml)，维持温度在25-30℃。将浆状物搅拌30分钟，然后过滤。过滤是缓慢的(2hr)。将所得固体用水洗涤，然后在烧结物上干燥。将固体在DCM(8vol)中混悬1hr。将固体过滤(快速过滤)，用DCM洗涤。将固体在氯仿(8vol)中重新混悬1hr。过滤固体，在烧结物上干燥。进一步在50℃真空烘箱中干燥24hr。得到产物5a，为米白色固体(18.6g,85％)；¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.14(1H,brs),9.31(1H,dd),8.69(1H,m),6.47(2H,brS)；19F NMR(500MHz,DMSO-d6)δ-153.65；MS(ES+)197.1。

步骤3:1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯6a

向2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸5a(20g,102.0mmol)的氯仿(300mL)悬液加入Et₃N(11.35g,15.63mL,112.2mmol)。将悬液搅拌～5min，然后加入(苯并三唑-1-基氧基-二甲基氨基-亚甲基)-二甲基-铵四氟化硼(32.75g,102.0mmol)。将悬液加热至60℃达1hr，然后使稠厚悬液自然冷却至RT。过滤所得悬液，用氯仿(200mL)洗涤，在真空下干燥过夜，得到标题化合物6a，为浅黄色粉末(32.5g,88％)。

制备例2b:(6-氯苯并三唑-1-基)-2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯

在配备有搅拌杆、冷凝器、氮管线和Hanna温度探针的2.5L三颈烧瓶中，装入2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸5a(60g,305.9mmol)、氯仿(900.0mL)和三乙胺(32.44g,44.68mL,320.6mmol)。历经5min分批加入[(6-氯苯并三唑-1-基)氧基-(二甲氨基)亚甲基]-二甲基-铵(四氟化硼离子(1))(87.00g,244.7mmol)(完全加入后内部降温从22.7至21.5℃)。混合物在60℃(内部温度)下加热2hr，仍为奶油色悬液。冷却混合物至室温，然后过滤收集固体，用氯仿充分洗涤(直至滤液基本无色)，抽吸干燥，得到产物6a*，为奶油色固体(82.2g,77％收率)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.55(dd,1H),8.91(d,1H),8.22(dd,1H),8.09(dd,1H),7.57(dd,1H)and 6.87(s,2H).MS(ES+)348.1。

在替代方法中，将2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸5a(30g,153mmol)混悬在乙腈(540ml)中。加入三乙胺(22.5ml,153mmol)，随后加入[(6-氯苯并三唑-1yl)氧基-(二甲氨基)亚甲基]-二甲基铵四氟硼酸盐(TCTU,54.4g,153mmol)。混合物在室温下搅拌2hr。过滤分离产物，滤饼用乙腈洗涤(2x 60ml)。得到产物，为褐色固体(49.3g,93％)；¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.55(dd,1H),8.91(d,1H),8.22(dd,1H),8.09(dd,1H),7.57(dd,1H)and 6.87(s,2H)；19F NMR(500MHz,DMSO-d6)δ-150.1；MS(ES+)348.1。

制备例3:1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基2-氨基-6-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯

步骤1:2-氨基-6-氯-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯4b

向烯丙基3,5-二氨基-1H-吡唑-4-羧酸酯3(1g,5.489mmol)的DMF(5mL)悬液加入(Z)-2-氯-3-二甲基氨基-亚丙-2-烯基]-二甲基-铵六氟磷酸盐(1.683g,5.489mmol)，随后加入三乙胺(722.1mg,994.6μL,7.136mmol)。反应混合物加热至60℃达4hr，在此期间有固体缓慢从溶液中沉淀出来。使褐色悬液自然冷却至RT。过滤固体，用水洗涤，在真空下干燥，得到烯丙基2-氨基-6-氯-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯4b，为褐色固体(1.092g,72％收率)。

步骤2:2-氨基-6-氯-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸5b

向烯丙基2-氨基-6-氯-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯4b(1g,3.96mmol)的DCM(15mL)悬液加入苯基硅烷(856.6mg,0.9756mL,7.916mmol)，随后加入Pd(PPh₃)₄(182.9mg,0.1583mmol)。反应混合物在室温下搅拌7hr。过滤反应混合物，固体用DCM洗涤，得到浅黄色固体(43.2g)。在RT下将该固体进一步在DCM(225mL)中研磨45min，然后过滤，在真空下干燥过夜，得到2-氨基-6-氯-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸5b，为黄色固体(791m,94％收率)。

步骤3:1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基2-氨基-6-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯6b

向2-氨基-6-氯-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸5b(1.51g,7.103mmol)的氯仿(15.1mL)溶液加入TBTU四氟化硼(2.737g,8.524mmol)和TEA(862.5mg,1.188mL,8.524mmol)。反应混合物在50℃下搅拌一小时。过滤所得悬液，固体在乙酸乙酯中研磨，得到标题化合物6b，为黄色固体(2.05g,88％)。

制备例4:1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基2-氨基-6-(氰基甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯

步骤1:烯丙基2-氨基-6-(氰基甲基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯4c

向烯丙基3,5-二氨基-1H-吡唑-4-羧酸酯3(63.49g,348.5mmol)在DMSO(340mL)与水(340mL)混合物中的悬液加入3-(二甲氧基甲基)-4,4-二甲氧基-丁烷腈(按照如下制备例5制备)(85g,418.2mmol)，随后加入对-甲苯磺酸水合物(1)(11.27g,59.24mmol)。反应混合物加热至85℃，搅拌过夜。用冰浴冷却反应混合物。混合物用EtOAc(680mL)和饱和NaHCO₃水溶液(1.36L)稀释。过滤沉淀，用水、再用水与EtOAc混合物冲洗。褐色固体在真空下干燥，得到烯丙基2-氨基-6-(氰基甲基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯4c，为褐色固体(55.94g,62％收率)。

步骤2:2-氨基-6-(氰基甲基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸5c

向烯丙基2-氨基-6-(氰基甲基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯4c(10.2g,39.65mmol)的DCM(350mL)悬液加入苯基硅烷(8.581g,9.773mL,79.3mmol)，随后加入Pd(PPh₃)₄(1.5g,1.298mmol)。反应混合物在室温下搅拌2hr。反应混合物过滤，固体用DCM洗涤，在真空下干燥，得到2-氨基-6-(氰基甲基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸5c，为黄色固体(8.61g,100％收率)。

步骤3:1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基2-氨基-6-(氰基甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯6c

向2-氨基-6-(氰基甲基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸5c(5.11g,23.53mmol)的DCM(51mL)溶液加入TBTU四氟化硼(9.067g,28.24mmol)和TEA(2.858g,3.937mL,28.24mmol)。反应混合物在室温下搅拌一小时。将所得悬液过滤，固体在热氯仿中研磨，得到标题化合物6c，为米色固体(6.59g,84％)。

实施例1:2-氨基-6-氟-N-[5-氟-4-[4-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羰基]-1- 哌啶基]-3-吡啶基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(化合物I-1)的合成

步骤1:叔丁基1-[3-[(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基)氨基]-5-氟-4-吡啶基]哌啶-4-羧酸酯28

将(6-氯苯并三唑-1-基)2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯6a*(44.02g,126.6mmol)与叔丁基1-(3-氨基-5-氟-4-吡啶基)哌啶-4-羧酸酯27(按照制备例7b制备)(34g,115.1mmol)在吡啶(510.0mL)中的混合物在内部95℃下加热过夜(18hr.)。混合物冷却至室温(有产物沉淀)，然后加入乙醇(340.0mL)，在室温下搅拌10min。过滤收集黄色固体，用乙醇充分洗涤，抽吸干燥，然后在高真空管上干燥1hr，得到产物28，为黄色固体(32.5g 56％收率)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.45(s,1H),9.58(s,1H),9.51(dd,1H),8.72(dd,1H),8.25(d,1H),6.81(s,2H),3.15–2.93(m,4H),2.55–2.47(屏蔽信号,1H),2.02–1.91(m,4H),1.47(s,9H).MS(ES+)474.2。

步骤2:1-[3-[(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基)氨基]-5-氟-4-吡啶基]哌啶-4-羧酸三氟乙酸盐29

向叔丁基1-[3-[(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基)氨基]-5-氟-4-吡啶基]哌啶-4-羧酸酯28(69.7g,147.2mmol)在DCM(348.5mL)与三乙基硅烷(18.83g,25.87mL,161.9mmol)中的悬液加入TFA(151.1g,102.1mL,1.325mol)(混合物在最初加入TFA时析出固体，然后在完全加入后溶解)。将所得橙色溶液在室温下搅拌过夜。加入额外的TFA(16.78g,11.34mL,147.2mmol)，将混合物在室温下搅拌2hr。然后将混合物在40℃下加热20min，使反应完成。在真空中浓缩混合物，加入氯仿(300mL)，再次在真空中浓缩混合物，得到橙色固体悬液。混合物在DCM(大约200mL)中研磨，搅拌20min，然后过滤收集固体，用少量DCM洗涤，抽吸干燥，得到黄色固体。在真空中浓缩滤液，将残余物重新混悬在DCM(大约50mL)中，搅拌20min，然后过滤收集固体，用少量DCM洗涤，抽吸干燥，得到黄色固体，与第一批固体合并。将固体在真空下干燥过夜，得到所需产物29，为黄色固体(82.8g,96％).¹HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.44(s,1H),9.59(s,1H),9.50(dd,1H),8.84(dd,1H),8.33(d,1H),3.13–3.10(m,4H),2.57–2.47(屏蔽信号,1H)and 2.08–1.93(m,4H).MS(ES+)418.1。

步骤3:1-[3-[(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基)氨基]-5-氟-4-吡啶基]哌啶-4-羧酸盐酸盐30

向1-[3-[(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基)氨基]-5-氟-4-吡啶基]哌啶-4-羧酸(三氟乙酸)29(73g,124.7mmol)的NMP(662.7mL)溶液加入氯化氢(4M 1,4-二噁烷溶液)(37.40mL of 4M,149.6mmol)。几秒钟后生成黄色沉淀。混合物在室温下搅拌20min，然后过滤收集固体，用少量NMP、再用MTBE洗涤，抽吸干燥，得到纯产物30，为浅黄色固体(59.7g,定量收率).MS(ES+)418.1。

步骤4:2-氨基-6-氟-N-[5-氟-4-[4-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-3-吡啶基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(化合物I-1)

向黄色的1-[3-[(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基)氨基]-5-氟-4-吡啶基]哌啶-4-羧酸(氢氯酸)30(59.7g,131.5mmol)的NMP(477.6mL)悬液加入DIPEA(50.99g,68.72mL,394.5mmol)，然后加入[(6-氯苯并三唑-1-基)氧基-(二甲氨基)亚甲基]-二甲基-铵(四氟化硼离子(1))(51.44g,144.7mmol)。几分钟后形成黄色悬液。混合物在室温下搅拌30min，然后加入1-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪25(按照如下制备例8制备)(26.18g,184.1mmol)。奶油色/黄褐色悬液变为橙色溶液(放热从23.9至29.4℃)。将烧瓶放置在冰/水浴上，直至内部温度为24℃，然后除去冰浴，之后内部温度稳定在24℃。

将溶液在室温下搅拌30min，然后在冰/盐/水浴上冷却至10℃，再逐份100mL缓慢加入水(1.015L)。在加入下一100mL水之前，等待放热至17℃与20℃之间(内部)，然后自然冷却至10与15℃之间。重复操作直至加入全部的水。一旦放热停止，除去冰/盐/水浴，将混合物在环境温度下搅拌20min(形成稠厚的黄色/奶油色悬液)。通过烧结漏斗过滤收集固体，用水充分洗涤，然后抽吸干燥10min。除去真空，在烧结漏斗上将固体混悬在水中，然后重新施加真空，固体抽吸干燥过夜，然后在40℃<10mBar真空烘箱中干燥24hr。

将固体(54.5g)悬浮在乙醇(545mL,10vol eq.)中，在回流下加热2hr，然后冷却至室温经过2hr。过滤收集固体，用少量乙醇洗涤，抽吸干燥1hr，得到产物，为淡黄色固体。将固体放置在23.5℃<10mBar真空烘箱中过夜，得到I-1的乙醇溶剂化物固体形式，为淡黄色固体(51g,64％收率)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.64(s,1H),9.67(s,1H),9.48(dd,1H),9.26(dd,1H),8.26(d,1H),6.79(s,2H),4.55(t,2H),4.47(t,2H),4.34(t,0.7H),3.61(dt,4H),3.48–3.41(m,2.5H),3.22–3.17(m,2H),3.05–3.03(m,2H),3.99–2.93(m,1H),2.28(dt,4H),2.17–2.10(m,2H),1.74(d,2H),1.07(t,2H).MS(ES+)542.3。

实施例2:2-氨基-6-氟-N-[5-氟-4-[4-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羰基]-1- 哌啶基]-3-吡啶基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(化合物I-1)的替代合成途径

步骤1:叔丁基1-(3-(2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-5-氟吡啶-4-基)哌啶-4-羧酸酯28

将6-氯-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯6a*(45g,129.4mmol)和叔丁基1-(3-氨基-5-氟吡啶-4-基)哌啶-4-羧酸酯27(按照制备例7b制备，如下所述)(40.1g,135.9mmol)混悬在吡啶(675ml)中。混合物在95℃氮下加热，直至反应完全(根据HPLC分析检测)。混合物冷却，滴加乙醇(450ml)。混合物过滤，滤饼用乙醇洗涤(2x 70ml)。湿饼干燥，得到产物28，为黄色结晶性固体(47.7g,78％)；¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ10.45(s,1H),9.58(s,1H),9.51(dd,1H),8.72(dd,1H),8.25(d,1H),6.81(s,2H),3.15–2.93(m,4H),2.55–2.47(屏蔽信号,1H),2.02–1.91(m,4H),1.47(s,9H)；19F NMR(500MHz,DMSO-d6)δ–153.5,-136.3；MS(ES+)474.2。

在替代实施方式中，利用类似于下文的程序，可以在进行步骤2之前纯化中间体28：

步骤1a:叔丁基1-[3-[(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基)氨基]-5-氟-4-吡啶基]哌啶-4-羧酸酯28的纯化

将叔丁基1-[3-[(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基)氨基]-5-氟-4-吡啶基]哌啶-4-羧酸酯28(530g；1.12moles)加入到NMP(5.3L)与1,2-二氨基丙烷(249g；3.36moles)的混合物中，所得稀薄悬液在20-25℃下搅拌15小时。向该悬液加入乙醇(10.4L)，在20-25℃下搅拌4小时。过滤收集结晶性金色固体，用乙醇洗涤(2x 2.6L)，抽吸干燥，然后在35-40℃真空烘箱中干燥24小时，得到28，为结晶性金色固体(479g；90％).¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ10.45(s,1H),9.57(s,1H),9.49(dd,1H),8.71(d,1H),8.24(d,1H),6.79(s,2H),3.44–3.33(m,1H),3.34–3.20(m,4H),3.07(dt,4H),2.01–1.89(m,4H),1.46(s,9H).¹⁹F NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ-136.3,-153.4。

步骤2:1-(3-(2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-5-氟吡啶-4-基)哌啶-4-羧酸盐酸盐30

将叔丁基1-(3-(2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-5-氟吡啶-4-基)哌啶-4-羧酸酯28(36g,76mmol)悬浮在HCl的1,4-二噁烷溶液(4M,670ml)中。向快速搅拌的浆状物滴加水(36ml)。在氮下搅拌混合物，直至反应完全(根据HPLC分析检测)。混合物用1,4-二噁烷(180ml)稀释，过滤。滤饼用TBME洗涤(2x 72ml)。湿饼干燥，得到淡褐色固体(盐酸盐,32.7g,95％)；¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ10.34(s,1H),9.53-9.49(m,2H),8.82(m,1H),8.50(m,1H),3.13–3.22(m,4H),2.57–2.47(屏蔽信号,1H)and 2.08–1.93(m,4H)；19F NMR(500MHz,DMSO-d6)δ–152.9,-133.8；MS(ES+)418.1。

步骤3:2-氨基-6-氟-N-[5-氟-4-[4-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-3-吡啶基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(化合物I-1·非晶型)

向1-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪25(525mg,3.69mmol)的THF(12ml)溶液加入DIPEA(1.72ml,9.91mmol)，随后加入1-(3-(2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-5-氟吡啶-4-基)哌啶-4-羧酸(盐酸盐,1.5g,3.3mmol)。加入[(6-氯苯并三唑-1-基)氧基-(二甲氨基)亚甲基]-二甲基-铵四氟硼酸盐(TCTU,1.29g,3.64mmol)，在氮下搅拌混合物，直至反应完成(根据HPLC分析检测)。混合物冷却，滴加水(24ml)。使混合物自然升温至环境温度，搅拌3hr，然后过滤。洗涤滤饼(3x 3ml)。湿饼在40℃真空(带有氮流)下干燥。得到化合物I-1的非晶形物(1.54g,86％)；¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.64(s,1H),9.67(s,1H),9.48(dd,1H),9.26(dd,1H),8.26(d,1H),6.79(s,2H),4.55(t,2H),4.47(t,2H),4.34(t,0.7H),3.61(dt,4H),3.48–3.41(m,2.5H),3.22–3.17(m,2H),3.05–3.03(m,2H),3.99–2.93(m,1H),2.28(dt,4H),2.17–2.10(m,2H),1.74(d,2H),1.07(t,2H)；19F NMR(500MHz,DMSO-d6)δ–152.8,-136.1；MS(ES+)542.3。

化合物I-1·非晶型可以利用上文实施例2,步骤3的替代方法制备。

在另一实例中，化合物I-1·非晶型是如下制备的，将N,N-二异丙基乙基胺(461uL；342mg；2.64mmol)加入到1-[3-[(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基)氨基]-5-氟吡啶-4-基]哌啶-4-羧酸盐酸盐30(1.00g；2.20mmol；LR)的THF(20mL)悬液中。加入1,1'-羰基二咪唑(CDI)(430mg；2.65mmol)，混合物在40-50℃下加热。额外加入1,1'-羰基二咪唑(CDI)(213mg总计；1.31mmol)，混合物加热，直至反应完成(根据HPLC分析检测)。加入1-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪25(375mg；2.64mmol)，混合物在55-60℃下加热，直至反应完成(根据HPLC分析检测)。反应冷却至20-25℃。加入水Water(40mL)和2M NaOH(aq)(551uL)，悬液搅拌5－10分钟。过滤收集固体，用水洗涤(2x 5mL)，抽吸干燥，然后在45-50℃真空烘箱中干燥16小时，得到I-1，为黄色固体(869mg；73％)。

制备例5:叔丁基1-(3-(2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-5-氟吡 啶-4-基)哌啶-4-羧酸酯(化合物28)的替代合成途径

步骤1:2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰氯34

向2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸5a(500mg,2.55mmol)的二氯甲烷(7.5mL)悬液加入三乙胺(409uL,297mg,2.93mmol)。加入亚硫酰氯(205uL,334mg,2.80mmol)，混合物在35-40℃下加热达2小时。混合物冷却至环境温度，在环境温度下搅拌直至反应完成(根据HPLC监测)。过滤收集固体，用二氯甲烷洗涤(2x 1mL)，抽吸干燥，得到产物34，为米色固体(465mg,85％)；¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.30(dd,J＝4.9、2.7Hz,1H),8.68(d,J＝2.7Hz,1H)；19F NMR(500MHz,DMSO-d6)δ-154.1。

步骤2:叔丁基1-(3-(2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-5-氟吡啶-4-基)哌啶-4-羧酸酯28

将2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰氯34(100mg,0.466mmol)和叔丁基1-(3-氨基-5-氟吡啶-4-基)哌啶-4-羧酸酯27(138mg,0.466mmol)混悬在吡啶(1.5mL)中。混合物加热至90-100℃达16小时。混合物冷却，加入乙醇(3mL)。混合物搅拌1－2小时，过滤，滤饼用乙醇(0.5mL)洗涤。抽吸干燥固体，得到产物28(162mg,73％).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.45(s,1H),9.57(s,1H),9.50(dd,J＝4.8、2.5Hz,1H),8.71(d,J＝2.5Hz,1H),8.24(d,J＝2.5Hz,1H),6.80(s,2H),3.07(dd,J＝6.5,3.3Hz,4H),2.11–1.80(m,4H),1.46(s,9H)；19F NMR(500MHz,DMSO-d6)δ-136.8,-153.9；MS(ES+)474.2。

实施例3:2-氨基-6-氟-N-[5-氟-4-[4-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羰基]-1- 哌啶基]-3-吡啶基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(化合物I-1)的替代合成途径

步骤1:叔丁基1-(3-(2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-5-氟吡啶-4-基)哌啶-4-羧酸酯28

将6-氯-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯6a*(45g,129.4mmol)和叔丁基1-(3-氨基-5-氟吡啶-4-基)哌啶-4-羧酸酯27(按照制备例7b制备，如下所述)(40.1g,135.9mmol)混悬在吡啶(675ml)中。混合物在95℃氮下加热，直至反应完全(根据HPLC分析检测)。混合物冷却，滴加乙醇(450ml)。混合物过滤，滤饼用乙醇洗涤(2x 70ml)。湿饼干燥，得到产物28，为黄色结晶性固体(47.7g,78％)；¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ10.45(s,1H),9.58(s,1H),9.51(dd,1H),8.72(dd,1H),8.25(d,1H),6.81(s,2H),3.15-2.93(m,4H),2.55–2.47(屏蔽信号,1H),2.02–1.91(m,4H),1.47(s,9H)；19F NMR(500MHz,DMSO-d6)δ–153.5,-136.3；MS(ES+)474.2。

步骤2:1-[3-[(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基)氨基]-5-氟-4-吡啶基]哌啶-4-羧酸甲磺酸盐33

将甲磺酸(274uL；406mg；4.22mmol)加入到叔丁基1-[3-[(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基)氨基]-5-氟-4-吡啶基]哌啶-4-羧酸酯28(1.00g；2.11mmol)的乙腈(15mL)悬液中，混合物加热至75-80℃达16小时。过滤收集固体，用乙腈洗涤(2x 2mL)，在真空下干燥，得到1-[3-[(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基)氨基]-5-氟-4-吡啶基]哌啶-4-羧酸甲磺酸盐33(0.94g；87％).¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),9.58(s,1H),9.49(dd,1H),8.83(d,1H),8.32(d,1H),6.85(bs,2H),3.11(dt,4H),2.31(s,3H),1.99(m,4H)；¹⁹F NMR(500MHz,DMSO-d6)δ-135.5,-153.1；MS(ES+)418.1。

步骤3:2-氨基-6-氟-N-[5-氟-4-[4-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-3-吡啶基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(化合物I-1非晶型)

将N,N-二异丙基乙基胺(51uL；38mg；0.29mmol)加入到1-[3-[(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基)氨基]-5-氟-4-吡啶基]哌啶-4-羧酸甲磺酸盐(50mg；0.097mmol)与1-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪(15mg；0.11mmol)的THF(1.00mL)悬液中。加入[(6-氯苯并三唑-1-基)氧基-(二甲氨基)亚甲基]-二甲基-铵四氟硼酸盐(TCTU,36.3mg；0.10mmol)，混合物在氮下搅拌直至反应完成(根据HPLC分析检测)。向悬液加入水(2mL)，搅拌5小时。过滤收集固体，用水洗涤(2x 200uL)，抽吸干燥，然后在45-50℃真空烘箱中干燥24小时，得到I-1，为淡黄色固体(31mg；59％)。

制备例6:丁烷腈中间体的制备

步骤1:3-(二甲氧基甲基)-4,4-二甲氧基丁烷腈11

将2-(二甲氧基甲基)-3,3-二甲氧基-丙烷-1-醇10(Journal of theAmericanChemical Society(1973),95(26),8741)(92g,473.7mmol)溶于无水THF(920mL)，混合物用冰浴冷却。立即加入三乙胺(143.8g,198.1mL,1.421mol)，随后历经1hr滴加甲磺酰氯(59.69g,40.33mL,521.1mmol)，保持内部温度低于5℃。反应混合物搅拌1hr，然后自然升温至室温。混合物用乙酸乙酯(920mL)和水(920mL)稀释。发生分层，分离有机层，用饱和NaHCO₃溶液、再用盐水洗涤。有机层经MgSO₄干燥，过滤，蒸发，得到[2-(二甲氧基甲基)-3,3-二甲氧基丙基]甲磺酸酯，为橙色的油(125.31g,97％)，直接使用无需进一步纯化。

历经10分钟将氰化四乙基铵(142.3g,910.8mmol)滴加到[2-(二甲氧基甲基)-3,3-二甲氧基丙基]甲磺酸酯(124g,455.4mmol)的MeCN(1.24L)溶液中。反应混合物在室温下搅拌72hr，然后在乙酸乙酯(1.24L)与水(1.24L)之间分配。发生分层，分离有机层，用盐水洗涤。有机层经MgSO₄干燥，过滤，蒸发，得到3-(二甲氧基甲基)-4,4-二甲氧基丁烷腈11，为深褐色油(86.1g)。

步骤2:3-(二甲氧基甲基)-4,4-二甲氧基-2-甲基丁烷腈12a和3-(二甲氧基甲基)-4,4-二甲氧基-2,2-二甲基丁烷腈13a

在-75℃下向3-(二甲氧基甲基)-4,4-二甲氧基-丁烷腈11(250mg,1.205mmol)的THF(3mL)溶液加入碘甲烷(513.1mg,225.0μL,3.615mmol)的THF(1ml)溶液。然后加入(双(三甲基甲硅烷基)氨基)钠的THF溶液(1.808mL,2M,3.615mmol)，保持温度低于-60℃。加入厚，反应混合物在-75℃下搅拌2hr，然后缓慢用饱和NH₄Cl水溶液(5ml)淬灭。混合物用水和乙醚稀释，分层。有机层用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，在真空中浓缩，得到黄色的油，通过硅胶色谱纯化，用石油醚:EtOAc梯度100:0至80:20洗脱。在真空中浓缩溶剂，得到澄清的油(194mg)。NMR证实该油是80％单甲基化合物12a与20％双甲基化合物13a的混合物。该混合物直接用于后续步骤。

步骤3:3-(二甲氧基甲基)-2-乙基-4,4-二甲氧基丁烷腈12b和3-(二甲氧基甲基)-2-二乙基-4,4-二甲氧基丁烷腈13b

在类似于上文制备例6步骤2的程序中使用乙基碘代替甲基碘，分离单取代的化合物12b与二取代的化合物13b的混合物，直接用于后续步骤。

制备例7a:叔丁基1-(3-氨基-5-氟-4-吡啶基)哌啶-4-羧酸酯的合成

步骤1:叔丁基1-(3-溴-5-氟-4-吡啶基)哌啶-4-羧酸酯26

将配备有温度计、冷凝器、氮管线和顶置搅拌器的3L法兰瓶在40℃(外部)下加热，然后装入环己醇(750mL)、碳酸二钠(129.8g,1.225mol)、3-溴-4-氯-5-氟-吡啶(氢氯酸18)(137.5g,556.8mmol)和叔丁基哌啶-4-羧酸酯(123.8g,668.2mmol)，用环己醇(350mL)冲洗。混合物加热至120℃内部温度过夜(18hr.)。反应混合物从烤盘上移去，自然冷却至室温。加入水(687.5mL)和EtOAc(687.5mL)，搅拌10min，然后转移至分液漏斗。加入额外的EtOAc(1.238L)，混合，除去水相。有机相进一步用水(687mL)洗涤，除去水相，收集有机相。合并水相，用EtOAc(687.5mL)反萃取，除去水层，合并有机相与其他有机物。在真空中浓缩有机物(水浴温度＝60℃，真空降至2mBar)，得到粘性褐色的油。

将Oil溶于25％EtOAc/汽油，然后通过短硅胶垫，用25％EtOAc/汽油洗脱，直至不再有产物出来。在真空中浓缩滤液，得到褐色的油127.1g。产物通过ISCO companion再纯化(1.5Kg Silica,在DCM中载入,0至20％EtOAc/汽油洗脱)，合并产物级分，在真空中浓缩，得到所需产物26，为淡黄色至奶油色固体(98g,49％收率)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.47(s,1H),8.41(d,1H),3.39–3.36(m,2H),3.12(tt,2H),2.49–2.43(m,1H),1.91–1.87(m,2H),1.71–1.64(m,2H)and 1.43(s,9H).MS(ES+)361.0。

步骤2:叔丁基1-(3-氨基-5-氟-4-吡啶基)哌啶-4-羧酸酯27

向叔丁基1-(3-溴-5-氟-4-吡啶基)哌啶-4-羧酸酯26(98g,272.8mmol)、二苯甲酮亚胺(59.34g,54.94mL,327.4mmol)与Cs₂CO₃(177.8g,545.6mmol)的1,4-二噁烷(1.274L)溶液加入磷配位基Xantphos(15.78g,27.28mmol)和Pd₂(dba)₃(12.49g,13.64mmol)。混合物在95℃氮下搅拌过夜。混合物冷却至室温，然后在EtOAc(1000mL,10vol eq.)与水(490mL,5vol eq.)之间分配，混合，分离有机层。有机物进一步用水(1x 250mL)、盐水(250mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，在真空中浓缩，得到粗产物，为深红色粘性的油，185.3g。

将所得产物油(185.3g)溶于THF(882.0mL)，加入HCl(545.5mL,2M,1.091mol)。所得混合物在室温下搅拌20min。在真空中除去THF，然后加入额外的(HCl(2M)(588.0mL)。水相用EtOAc(294.0mL)洗涤两次。在萃取期间在有机相和水相中都生成大量黄色沉淀，过滤收集来自有机相和水相的固体，抽吸干燥。将混合的有机与水性滤液加入到分液漏斗中，用2M HCl萃取(2x 200mL)。合并所有水相加收集在烧结物上的固体(产物)，得到悬液。使用2MNaOH调解pH至6，用DCM萃取(3x 600mL)。合并有机物，干燥(MgSO₄)，过滤，在真空中浓缩，得到淡橙色蜡状固体112.2g。将该固体混悬在MeCN(200mL)中，搅拌10min，然后过滤收集固体，用少量MeCN洗涤，抽吸干燥，得到产物27，为白色固体(66.8g,83％收率)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.82(d,1H),7.63(d,1H),5.22(s,2H),3.11–3.00(m,2H),2.91(tt,2H),2.36(tt,1H),1.88–1.83(m,2H),1.79–1.71(m,2H),1.43(s,9H).MS(ES+)297.1。

流程7b:合成叔丁基1-(3-氨基-5-氟-4-吡啶基)哌啶-4-羧酸酯的替代途径

步骤1:3-溴-4-氯-5-氟吡啶盐酸盐18

将二异丙基胺(101.2g,140.2mL,1.000mol)的四氢呋喃(1.148L)溶液冷却至-25℃与-20℃之间。以这样一种速率加入丁基锂(2.5M己烷溶液)(400mL,2.5M,1.000mol)，以维持反应温度低于-20℃(加入时间20分钟)。混合物然后历经1小时自然升温至4℃，然后再冷却至-78℃。历经40分钟加入3-溴-5-氟-吡啶(153.0g,869.6mmol)的四氢呋喃(382.5mL)溶液。混合物搅拌90分钟，然后历经40分钟滴加1,1,1,2,2,2-六氯乙烷(205.9g,869.6mmol)的四氢呋喃(350.0mL)溶液。一旦加入完全，混合物自然升温至环境温度过夜。混合物冷却至0℃，然后转移至冷水(2L)中，搅拌20min，然后加入MTBE(2.5L)，剧烈搅拌30min，然后转移至分液漏斗，分离有机层。水层转移回到反应容器，进一步用MTBE(2.5L)萃取，剧烈搅拌10min，然后转移至分液漏斗，分离有机层。合并有机物，干燥(MgSO₄)，过滤，浓缩成褐色的油。将该油溶于戊烷(500ml)和乙醚(300ml)。缓慢加入HCl(2M乙醚溶液)(434.8mL,2M,869.6mmol)，同时搅拌。一旦完全加入，混合物搅拌20min，然后过滤收集固体，用乙醚洗涤，在真空下干燥1hr，得到产物18，为米色固体(148.9g,69％)；¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.77(2H,s)；19F NMR(500MHz,DMSO-d6)δ-124.8；MS 210.8。

步骤2:叔丁基1-(3-溴-5-氟吡啶-4-基)哌啶-4-羧酸酯26

将3-溴-4-氯-5-氟-吡啶盐酸盐18(62g,251.1mmol)悬浮在DCM(600mL)中，搅拌。混合物在冰浴中冷却，缓慢加入氢氧化钠(276.2mL,1M,276.2mmol)。所得混合物搅拌1小时。混合物发生相分离。加入更多的DCM/水以帮助相分离。一些柏油状粒子留在水相中。有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，浓缩。残余物用庚烷研磨。庚烷溶液通过弗罗里硅土垫过滤，用庚烷洗脱。滤液浓缩成油，固化。得到41g游离碱。

将充分搅拌的3-溴-4-氯-5-氟吡啶游离碱(55g,0.26mol)、氟化钾(31g,0.53mol)与Me₄NCl(5.8g,53mmol)在DMSO(400mL)中的混合物加热至130℃达2小时。反应混合物冷却至室温，加入叔丁基哌啶-4-羧酸酯盐酸盐22(66g,0.30mol)和DIPEA(65g,0.50mol)。反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂。残余物在DCM/水之间分配。有机层用水洗涤(3x)，经Na₂SO₄干燥，经硅胶过滤，使用DCM作为洗脱剂。蒸发滤液，得到叔丁基1-(3-溴-5-氟吡啶-4-基)哌啶-4-羧酸酯26(61g,65％)，为浅黄色固体；¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.47(s,1H),8.41(d,1H),3.39–3.36(m,2H),3.12(tt,2H),2.49–2.43(m,1H),1.91–1.87(m,2H),1.71–1.64(m,2H)and 1.43(s,9H)；19F NMR(500MHz,DMSO-d6)δ-135.2；MS(ES+)361.0。

步骤3:叔丁基1-(3-氨基-5-氟吡啶-4-基)哌啶-4-羧酸酯27

将叔丁基1-(3-溴-5-氟吡啶-4-基)哌啶-4-羧酸酯26(800g,2.23mol)溶于1,4-二噁烷(7.5L)。一次性加入二苯甲酮亚胺(484g,2.67mol)，随后加入碳酸铯(1.45kg,4.45mol)、磷配位基Xantphos(129g,223mmol)和Pd₂(dba)₃(102g,111mmol)。加入额外的1,4-二噁烷(2.9L)，混合物在氮下加热至95℃，直至反应完全(根据HPLC分析检测)。混合物冷却至20℃，加入乙酸乙酯(8L)和水(4L)。分离有机相，用水(4L)和盐水(3.5L)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤。滤液浓缩成褐色的油(1.3Kg)。将该油溶于2-甲基四氢呋喃(7.2L)，在20℃下加入2M HCl，混合物搅拌30分钟。分离水层，有机层用2M HCl(1.2L)萃取。合并水层，用2MNaOH(5.4L,pH 8-9)中和。产物萃取到2-甲基四氢呋喃中(14L再2x 5L)。合并萃取液，用水(1.6L)洗涤，有机溶液浓缩。将残余物混悬在乙腈(2L)中，过滤，干燥。得到产物27，为白色固体(568.7g,86.5％)；1H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ7.82(d,1H),7.63(d,1H),5.22(s,2H),3.11–3.00(m,2H),2.91(tt,2H),2.36(tt,1H),1.88–1.83(m,2H),1.79–1.71(m,2H),1.43(s,9H)；19F NMR(500MHz,DMSO-d6)δ–140.0；MS(ES+)297.1。

制备例8:叔丁基哌啶-4-羧酸酯的合成

步骤1:1-苄基-4-叔丁基哌啶-1,4-二羧酸酯21

在5L法兰瓶中装入1-苄氧基羰基哌啶-4-羧酸20(200g,759.6mmol)的DCM(500.0mL)溶液，随后加入额外的DCM(2.000L)、叔丁醇(140.8g,181.7mL,1.899mol)和DMAP(46.40g,379.8mmol)。混合物在冰/盐/水浴上冷却(内部-3.4℃)。历经15min滴加3-(乙基亚氨基亚甲基氨基)-N,N-二甲基-丙烷-1-胺(氢氯酸(1))(145.6g,759.6mmol)，加液漏斗用DCM(500.0mL)冲洗。混合物在冰浴上搅拌2hr。然后除去冰浴(内部3℃)，自然升温至室温过夜。混合物用5％柠檬酸(2x 500mL)、饱和NaHCO₃(500mL)、水(500mL)洗涤，有机物经MgSO₄干燥，然后过滤，在真空中浓缩，得到产物21，为粘性浅黄色油，放置后变为白色固体(246.1g,101％).¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.40–7.31(m,5H),5.08(s,2H),3.90(dt,2H),2.93(br s,2H),2.43(tt,1H),1.80–1.76(m,2H)和1.45–1.37(m,11H).

步骤2:叔丁基哌啶-4-羧酸酯22

在氮下向3L烧瓶装入湿钯碳Degussa(10％Pd,50％水)(8.120g,76.30mmol)，再装入EtOAc(1.706L)。混合物经由N₂/真空循环脱气(3x)，然后加入1-苄基-4-叔丁基哌啶-1,4-二羧酸酯21(243.7g,763.0mmol)的EtOAc(243.7mL)溶液。混合物在氢气氛下搅拌过夜。补充氢，混合物搅拌另外3.5hr。加入甲醇(60mL)以帮助沉淀溶解，然后通过硅藻土过滤，用甲醇充分洗涤。滤液在真空中浓缩，得到褐色的油，轻微悬浮有白色固体，138.6g。过滤除去固体，用少量EtOAc洗涤。滤液在真空中浓缩，得到所需产物，为浅褐色油(129g,91％).¹HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ2.88(dt,2H),2.44(td,2H),2.23(tt,1H),1.69–1.64(m,2H)和1.41–1.33(m,11H)。

制备例9:1-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪的合成

步骤1:苄基4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸酯24

将苄基哌嗪-1-羧酸酯23(27.3mL,142.2mmol)溶于无水THF(313.1mL)，加入氧杂环丁烷-3-酮(12.29g,10.93mL,170.6mmol)。所得溶液在冰浴中冷却。历经30min逐份加入NaBH(Oac)₃(59.99g,284.4mmol)，加入约四分之一。混合物除去冰浴，自然升温至室温，然后继续历经30min逐份加入NaBH(Oac)₃。完全加入后，观察到放热从22℃缓慢至32℃，混合物随后在冰浴上冷却，直至达到内部22℃。除去冰浴，反应混合物的内部温度稳定在22℃。混合物在室温下搅拌过夜。

所得白色悬液淬灭以加入2M碳酸钠溶液(大约150mL)(pH＝8)，在减压下浓缩以除去THF。产物然后用EtOAc萃取(3x 250mL)。合并有机物，经MgSO₄，过滤，在减压下浓缩，得到产物24，为白色固体(32.7g 83％收率)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.39–7.30(m,5H),5.07(s,2H),4.52(t,2H),4.42(t,2H),3.43–3.39(m,5H)and 2.22(t,4H).MS(ES+)276.8。

步骤2:1-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪25

在氮下，在1L烧瓶中加入Pd(OH)₂(1.661g,2.366mmol)。加入MeOH(130.8mL)和EtOAc(261.6mL)，混合物经由真空/氮循环脱气(3x)。然后加入苄基4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸酯24(32.7g,118.3mmol)，混合物在氢气氛下搅拌过周末。混合物通过硅藻土垫过滤，用EtOAc再用甲醇充分洗涤。滤液在真空中浓缩，得到产物25，为橙色的油1(8.1g,定量收率).¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ4.51(t,2H),4.41(t,2H),3.36–3.30(屏蔽信号,1H),2.69(t,4H)and 2.14(br s,4H)。

实施例4:2-氨基-6-氟-N-(5-氟-4-(4-(2,2,3,3,5,5,6,6-八氘代-哌嗪-1-羰基) 哌啶-1-基)-3-吡啶基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(化合物I-2)和2-氨基-6-氟-N-(5- 氟-4-(4-(2,2,3,3,5,5,6,6-八氘代-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羰基)哌啶-1-基)-3- 吡啶基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(化合物I-3)的合成

步骤1:叔丁基1-(3-(2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-5-氟吡啶-4-基)哌啶-4-羧酸酯28

将(6-氯苯并三唑-1-基)2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯6a*(41.69g,119.9mmol)与叔丁基1-(3-氨基-5-氟-4-吡啶基)哌啶-4-羧酸酯27(32.2g,109.0mmol)在吡啶(483mL)中的混合物在90℃加热12h。反应冷却至RT，加入EtOH(322mL)，混合物在RT下搅拌10min。过滤收集固体，用乙醇充分洗涤，抽吸干燥，得到28，为黄色固体(33g,64％).

步骤2:1-(3-(2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-5-氟吡啶-4-基)哌啶-4-羧酸29

向叔丁基1-[3-[(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基)氨基]-5-氟-4-吡啶基]哌啶-4-羧酸酯28(69.7g,147.2mmol)的DCM(348.5mL)悬液加入三乙基硅烷(18.83g,25.87mL,161.9mmol)，随后加入TFA(151.1g,102.1mL,1.325mol)。所得溶液在RT下搅拌12h。混合物在真空中浓缩，得到橙色固体，在DCM(200mL)中研磨20min。过滤收集固体，用少量DCM洗涤，抽吸干燥，得到所需的三氟乙酸盐产物，为黄色固体(75.2g,96％).

向1-[3-[(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基)氨基]-5-氟-4-吡啶基]哌啶-4-羧酸三氟乙酸盐(73g,124.7mmol)的NMP(662.7mL)溶液加入氯化氢(4M二噁烷溶液)(37.4mL,4M,149.6mmol)。反应在RT下搅拌20min，然后过滤收集固体，用少量NMP再用MTBE洗涤，抽吸干燥，得到纯产物盐酸盐29，为浅黄色固体。

步骤3:2-氨基-6-氟-N-(5-氟-4-(4-(2,2,3,3,5,5,6,6-八氘代-哌嗪-1-羰基)哌啶-1-基)-3-吡啶基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(化合物I-2)

将(苯并三唑-1-基氧基-二甲基氨基-亚甲基)-二甲基-铵三氟硼酸盐(127.3mg,0.3966mmol)加入到1-[3-[(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基)氨基]-5-氟-4-吡啶基]哌啶-4-羧酸盐酸盐29(150mg,0.3305mmol)、2,2,3,3,5,5,6,6-八氘哌嗪(155.6mg,1.652mmol)与Et₃N(83.6mg,115.2μL,0.8262mmol)在DMF(5mL)中的混合物中。反应混合物在RT下搅拌18h。粗混合物经过制备型HPLC纯化，得到I-2，为白色固体(114mg,48％)。

步骤4:2-氨基-6-氟-N-(5-氟-4-(4-(2,2,3,3,5,5,6,6-八氘代-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羰基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(化合物I-3)

将三乙酰氧基硼氢化钠(24.67mg,0.1164mmol)加入到氧杂环丁烷-3-酮(7.271mg,0.1009mmol)、2-氨基-6-氟-N-(5-氟-4-(4-(2,2,3,3,5,5,6,6-八氘代-哌嗪-1-羰基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺13(56mg,0.07761mmol)与乙酸(13.98mg,13.24μL,0.2328mmol)的DMF(2mL)溶液中。反应混合物在RT下搅拌18h。溶液用甲醇和水淬灭，粗混合物经过制备型HPLC纯化，得到所需产物I-3(20mg,46％).¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.64(s,1H),9.67(s,1H),9.48(dd,1H),9.26(dd,1H),8.26(d,1H),6.79(s,2H),4.55(t,2H),4.47(t,2H),3.63(m,1H),3.20(m,2H),3.15(m,2H),2.95(m,1H),2.10(m,2H),1.74(d,2H)；ES+550.4。

化合物分析数据

化合物I-1的固体形式

已经制备了化合物I-1的各种固体形式，包括盐、溶剂化物、水合物和无水形式。本发明的固体形式可用于癌症治疗药物的制造。一种实施方式提供本文所述固体形式治疗癌症的用途。在一些实施方式中，癌症是三阴性乳腺癌、胰腺癌、小细胞肺癌、结肠直肠癌、卵巢癌或非小细胞肺癌。另一种实施方式提供药物组合物，包含本文所述固体形式和药学上可接受的载体。

申请人这里描述了大量新颖的化合物I-1的固体形式。每种固体形式的名称和化学计量学提供在下表2中：

表2

实施例	形式	化学计量学
			实施例5	化合物I-1·乙醇溶剂化物	1:0.72
实施例6a	化合物I-1·水合物I	1:4.5
			实施例6b	化合物I-1·水合物II	-------
实施例7	化合物I-1·无水形式A	N/A
			实施例8	化合物I-1·无水形式B	-------
实施例9	化合物I-1·无水形式C	N/A
			实施例10	化合物I-1·非晶型	N/A
实施例11	化合物I-1·DMSO溶剂化物	1:1
			实施例12	化合物I-1·DMAC溶剂化物	1:1.3
实施例13	化合物I-1·丙酮溶剂化物	1:0.44
			实施例14	化合物I-1·异丙醇溶剂化物	1:0.35

ssNMR实验方法

在配备有Bruker-Biospin 4mm HFX探针的Bruker-Biospin 400MHz Advance III宽孔光谱仪上获得固态NMR光谱。将样品装到4mm ZrO₂转子中(约70mg或更小，取决于样品可用性)。采用典型12.5kHz的幻角自旋(MAS)速度。将探针头部的温度设定为275K以使自旋过程中的摩擦生热效应最小化。使用¹H MAS T₁饱和恢复松弛实验来测量质子弛豫时间，以便建立¹³C交叉极化(CP)MAS实验的适当再循环延迟。将¹³C CPMAS实验的再循环延迟调整为比所测量的¹H T₁弛豫时间长至少1.2倍，以使碳光谱信噪比最大化。将¹³C CPMAS实验的CP接触时间设定为2毫秒。采用具有线性坡度(从50％到100％)的CP质子脉冲。针对外部参考样品(甘氨酸)使Hartmann-Hahn匹配最佳化。氟光谱使用质子去耦MAS设置，恢复延迟设定为所测量的¹⁹F T₁弛豫时间的大约5倍。使用质子去耦19F MAS T₁饱和恢复松弛试验测定氟的弛豫时间。用通过约100kHz的场强度去耦的SPINAL 64获得碳光谱和氟光谱。化学位移以高磁场共振设定为29.5ppm的金刚烷的外部标准为参考。

实施例5:化合物I-1(乙醇溶剂化物)

化合物I-1乙醇溶剂化物可以按照实施例1,步骤4所述方法制备。

化合物I-1(乙醇溶剂化物)的XRPD

利用配备有Empyrean管源和PIXcel 1D检测器(PANalytical,The Netherlands)的PANalytical衍射计，在室温下以反射模式记录化合物I-1·乙醇溶剂化物的XRPD图。以45kV的电压和40mA的电流操作X射线发生器。将粉末样品置于硅支架中。记录跨越3°－39°2θ范围的数据，步长0.013°，停留时间121s每步。图1a显示样品的X-射线粉末衍射图，这是结晶性药物物质所特有的。

表3a描绘了化合物I-1·乙醇溶剂化物的代表性XRPD峰：

表3a:代表性XRPD峰

化合物I-1(乙醇溶剂化物)的热分析

利用Discovery TGA(TA Instruments Trios)进行化合物I-1·乙醇溶剂化物的热重分析，以确定重量损失百分比与温度的关系。将样品(8.338mg)加入到预称重的铝盘上，从环境温度加热至310℃，速率20℃/min。在图2a中见到的TGA结果显示，在166℃(起始)与219℃(终点)之间重量损失多达5.76％。该重量损失相当于大约0.72摩尔当量的乙醇。随后在290℃见到的重量损失是熔化/降解的结果。

化合物I-1(乙醇溶剂化物)的差示扫描量热法

利用TA Instrument DSC Q2000测量化合物I-1·乙醇溶剂化物的差示扫描量热法。在预留针孔的铝密封盘中称重样品(1.84mg)，从环境温度加热至300℃，速率20℃/min。在图3a中见到的DSC结果显示有169℃(起始)下的去溶剂化吸热，随后有258℃(起始)下的单一熔化吸热。

化合物I-1(乙醇溶剂化物)的ssNMR

化合物I-1·乙醇溶剂化物的固态¹³C NMR光谱如图4a所示。表3b提供有关峰的化学漂移。

表3b:化合物I-1(乙醇溶剂化物)的固态¹³C NMR光谱

化合物I-1·乙醇溶剂化物的固态¹⁹F NMR光谱如图5a所示。表3c提供有关峰的化学漂移。

表3c:化合物I-1(乙醇溶剂化物)的固态¹⁹F NMR光谱

实施例6a:化合物I-1(水合物I)

将按照实施例1步骤4所述方法制备的化合物I-1·乙醇溶剂化物(1000mg)混悬在水(20mL)，在室温下4天。将悬液离心，分离残留固体，在35℃真空烘箱中干燥过夜，得到化合物I-1·水合物I，为黄色粉末。

化合物I-1(水合物I)的XRPD

利用配备有密封管源和Hi-Star面积检测器(Bruker AXS,Madison,WI,AssetV012842)的Bruker D8Discover衍射计，在室温下以反射模式记录化合物I-1·水合物I的XRPD图。以40kV的电压和35mA的电流操作X射线发生器。将粉末样品置于镍支架中。登记两种框架，暴露时间各为120秒。随后整合3.5°－39°2θ范围的数据，步长0.02°，融合为一个连续的图样。图1b显示样品的X-射线粉末衍射图，这是结晶性药物物质所特有的。

表4a描绘了化合物I-1·水合物I的代表性XRPD峰：

表4a:代表性XRPD峰

化合物I-1(水合物I)的热分析

利用TA Instrument TGA Q5000(Asset V014258)进行化合物I-1·水合物I的热重分析，以确定重量损失百分比与时间的关系。将样品(7.380mg)加入到预称重的铝盘上，从环境温度加热至350℃，速率10℃/min。在图2b中见到的TGA结果显示，在达到100℃时有大量初始重量损失，随后在熔化/降解之前有少量额外的重量损失。初始重量损失14.56％，相当于大约4.5摩尔当量的水。熔化/降解的起始温度为292℃。

化合物I-1(水合物I)的差示扫描量热法

利用TA Instrument DSC Q200(Asset V005642)测量化合物I-1·水合物I的差示扫描量热法。在预留针孔的铝密封盘中称重样品(5.598mg)，从环境温度加热至350℃，速率10℃/min。在图3b中见到的DSC结果显示有广义的初始吸热事件，相当于脱水作用，随后熔化成非晶形物。熔化后在125℃Tg，在180℃重结晶，在257℃熔化，最终在278℃熔化/降解。

实施例6b:化合物I-1(水合物II)

将按照实施例1步骤4所述方法制备的化合物I-1·乙醇溶剂化物(1000mg)混悬在水(20mL)，在室温下4天。将悬液离心，分离残留固体，得到化合物I-1·水合物II，为黄色糊状物。

化合物I-1(水合物II)的XRPD

利用配备有密封管源和Hi-Star面积检测器(Bruker AXS,Madison,WI,AssetV012842)的Bruker D8Discover衍射计，在室温下以反射模式记录化合物I-1·水合物II的XRPD图。以40kV的电压和35mA的电流操作X射线发生器。将粉末样品置于镍支架中。登记两种框架，暴露时间各为120秒。随后整合3.5°－39°2θ范围的数据，步长0.02°，融合为一个连续的图样。图4b显示样品的X-射线粉末衍射图，这是结晶性药物物质所特有的。

表4b描绘了化合物I-1·水合物II的代表性XRPD峰：

表4b:代表性XRPD峰

化合物I-1(水合物II)的ssNMR

化合物I-1·水合物II的固态¹³C NMR光谱如图5b所示。表4c提供有关峰的化学漂移。

表4c:化合物I-1(水合物II)的固态¹³C NMR光谱

化合物I-1·水合物II的固态¹⁹F NMR光谱如图6b所示。表4d提供有关峰的化学漂移。

表4d:化合物I-1(水合物II)的固态¹⁹F NMR光谱

实施例7:化合物I-1(无水形式A)

将按照实施例1步骤4所述方法制备的化合物I-1·乙醇溶剂化物(1000mg)混悬在THF(20mL)中，在室温下72hr。将悬液离心，分离残留固体，在35℃真空烘箱中干燥过夜，得到化合物I-1·无水形式A(“形式A”)，为黄色粉末。

在替代方法中，将按照实施例2步骤3方法制备的化合物I-1·非晶形物(15.1g；0.028mol)悬浮在2-丙醇(300mL)与水(100mL)的混合物中。混合物搅拌，加热至70-75℃，趁热过滤。所得澄清滤液加热，蒸馏，溶剂用2-丙醇代替，直至内容物温度达到82.5℃。所得悬液历经10小时冷却至15℃，搅拌另外5小时。过滤收集固体，抽吸干燥1小时，然后在60℃真空烘箱中干燥20小时，得到化合物I-1·无水形式A(13.9g；92％)。

可以采用多种其他溶剂制备化合物I-1·无水形式A。下表5a总结了方法。

表5a:用于制备形式A的溶剂

化合物I-1(无水形式A)的XRPD

利用配备有密封管源和Hi-Star面积检测器(Bruker AXS,Madison,WI,AssetV012842)的Bruker D8Discover衍射计，在室温下以反射模式记录化合物I-1·无水形式A的XRPD图。以40kV的电压和35mA的电流操作X射线发生器。将粉末样品置于镍支架中。登记两种框架，暴露时间各为120秒。随后整合3.5°－39°2θ范围的数据，步长0.02°，融合为一个连续的图样。图1c显示样品的X-射线粉末衍射图，这是结晶性药物物质所特有的。

表5b描绘了化合物I-1·无水形式A的代表性XRPD峰：

表5b:代表性XRPD峰

化合物I-1(无水形式A)的热分析

利用TA Instrument TGA Q5000(Asset V014258)进行化合物I-1·无水形式A的热重分析，以确定重量损失百分比与时间的关系。将样品(7.377mg)加入到预称重的铝盘上，从环境温度加热至350℃，速率10℃/min。在图2c中见到的TGA结果显示，在熔化或热降解之前观察到非常微小的重量损失。从环境温度到265℃，重量损失为0.96％。降解的起始温度为292℃。

化合物I-1(无水形式A)的差示扫描量热法

利用TA Instrument DSC Q2000(Asset V014259)测量化合物I-1·无水形式A的差示扫描量热法。在预留针孔的铝密封盘中称重样品(3.412mg)，从环境温度加热至350℃，速率10℃/min。在图3c中见到的DSC结果显示在262℃有单一的吸热熔化事件。在熔化事件期间含有两个不同的峰，间隔约1℃。

含有无水形式A的活性片剂的组成和制备

形式A10mg片的组成

活性形式A10mg片的干法造粒和压片掺合制剂组成如表5c和5d所述。片剂的总组成说明如表5e所述。

表5c:形式A(10mg)颗粒内掺合物

表5d:形式A(10mg)片的组成

表5e:形式A(10mg)片的总组成

形式A50mg片的组成

活性形式A50mg片的干法造粒和压片掺合制剂组成如表5f和5g所述。片剂的总组成说明如表5h所述。

表5f:形式A(50mg)颗粒内掺合物

表5g:形式A(50mg)片的组成

表5h:形式A(50mg)片的总组成

制备形式A10mg和50mg片的方法

步骤I.预造粒混合：

使形式A通过装配有24R圆孔筛和圆边型叶轮的锥形磨，叶轮转速1500rpm。使乳糖一水合物、微晶纤维素和颗粒内交联羧甲基纤维素钠通过#30目筛。经过锥形磨的形式A和过筛的组分然后在26rpm下掺合10分钟。手动使硬脂基富马酸钠通过60目筛，然后加入到掺合物中，在26rpm下掺合各物料达3分钟。抽取样品进行掺合均匀性分析。

步骤II.干法造粒：

在Gerteis Minipactor上将掺合物干法造粒。使掺合物通过装配有光滑表面与滚花表面组合压辊的辊式压制机，辊速2rpm，辊压5KN/cm，辊间距离2mm。经过压制的粉末然后用便携型磨辊造粒，通过1mm筛，磨速80rpm。

步骤III.最终掺合：

手动使颗粒外交联羧甲基纤维素钠和硬脂基富马酸钠分别通过30目和60目筛。颗粒外交联羧甲基纤维素钠与干颗粒在32rpm下掺合5分钟。然后向主体混合物加入颗粒外硬脂基富马酸钠，在32rpm下混合3分钟。抽取样品进行掺合均匀性分析。将掺合物密封在硬二次容器内的双层低密度聚乙烯袋中，防止刺穿。

步骤IV.压片：

压片机(Piccola D-8Rotatory Press)经过部分加工(8处分之2处)，10mg强度加工成0.25”标准凹圆，50mg强度加工成0.568”x 0.2885”囊片。转塔速率为25－35rpm。片剂方法内控制测试包括平均重量、个体重量和硬度，如表5i所示。

表5i:形式A(10mg和50mg)压片方法内控制说明

形式A的晶体制备

使形式A从DCM/庚烷混合物中重结晶，缓慢蒸发溶剂。选择0.10x 0.02x 0.02mm的无色针形晶体，在室温下在Bruker APEX II CCD衍射计上用Cu Kα辐射进行衍射实验。用直接法解析结构，用SHELXTL软件包修正。

形式A晶体实验：

晶体显示单斜晶系具有P2_1/c中心对称空间群。晶格参数为 α＝90°，β＝107.22(3)°，γ＝90°，修正得到R因子为6.9％。基于单晶X-射线分析的化合物I-1·无水形式A构象图如图4c和5c所示。化合物I-1·无水形式A呈现有序的不对称单位(图4c)。如图5c所示，化合物I-1·无水形式A分子沿b-轴形成一-二维链，被胺与吡啶基团之间的分子间氢键所稳定。多条链堆积在三维空间中，层间间隔大约

表5j:形式A的晶体数据

几何学:利用全协方差矩阵估计全部的esd(两个l.s.平面之间的二面角中的esd除外)。在估计距离、角度和扭转角中的esd时分别考虑晶胞esd；晶胞参数中esd之间的相关性仅仅用在它们受晶体对称性限定的时候。晶胞esd的近似(各向同性)处理用于估计牵涉l.s.平面的esd。

表5k:形式A晶体的数据收集参数

数据收集:Apex II；晶胞修正:Apex II；数据还原:Apex II；用于解析结构的程序:SHELXS97(Sheldrick,1990)；用于修正结构的程序:SHELXL97(Sheldrick,1997)；分子图形:Mercury；用于准备出版材料的软件:publCIF。

表5m:形式A晶体的修正参数

修正：F²对ALL反射的修正。加权R-因子wR和fit S的良好性是基于F²的，常规R-因子R是基于F的，就阴性F²的F设置为零。F²>2sigma(F²)的阈值表达仅仅用于计算R-因子(gt)等，与选择用于修正的反射不相关。基于F²的R因子在统计学上比基于F大两倍，基于ALL数据的R-因子甚至更大。

化合物I-1(无水形式A)的ssNMR

化合物I-1·无水形式A的固态¹³C NMR光谱如图6c所示。表5n提供有关峰的化学漂移。

表5n:形式A的固态¹³C NMR光谱

化合物I-1·无水形式A的固态¹⁹F NMR光谱如图7c所示。表5p提供有关峰的化学漂移。

表5p:形式A的固态¹⁹F NMR光谱

实施例8:化合物I-1(无水形式B)

将按照实施例2步骤3所述方法制备的化合物I-1·非晶型(3.50g)置于250mL 3-颈烧瓶中，加入THF(70mL)，在环境温度下利用顶置搅拌器搅拌过夜(例如至少12hr)。悬液在真空下过滤(直径4.25cm Whatman滤纸)，用THF(7mL)洗涤，在真空下抽干约35分钟，得到相当硬的黄色固体(2.25g)。在35℃真空下干燥固体过夜，失水良好，得到1.921g化合物I-1·无水形式B，为黄色固体。

化合物I-1(无水形式B)的XRPD

利用配备有密封管源和Hi-Star面积检测器(Bruker AXS,Madison,WI,AssetV012842)的Bruker D8Discover衍射计，在室温下以反射模式记录化合物I-1·无水形式B的XRPD图。以40kV的电压和35mA的电流操作X射线发生器。将粉末样品置于镍支架中。登记两种框架，暴露时间各为300秒。随后整合3.5°－39°2θ范围的数据，步长0.02°，融合为一个连续的图样。图1d显示样品的X-射线粉末衍射图，这是结晶性药物物质所特有的。

表6a描绘了化合物I-1·无水形式B的代表性XRPD峰：

表6a:代表性XRPD峰

化合物I-1(无水形式B)的热分析

利用TA Instrument TGA Q500(Asset V014840)进行化合物I-1·无水形式B的热重分析，以确定重量损失百分比与时间的关系。将样品(2.728mg)加入到预称重的铂盘上，从环境温度加热至350℃，速率10℃/min。在图2d中见到的TGA结果显示，在达到175℃时两个不同的重量损失事件总计2.5％。熔化/降解的起始温度为284℃。

化合物I-1(无水形式B)的差示扫描量热法

利用TA Instrument DSC Q2000(Asset V012390)测量化合物I-1·无水形式B的差示扫描量热法。在预留针孔的铝密封盘中称重样品(2.125mg)，从30℃加热至350℃，速率3℃/min，每60秒调控±1℃。在图3d中见到的DSC结果显示，在177℃发生放热事件(同样有晶体结构的轻微重排)，在257℃发生吸热性熔化，在258℃重结晶，然后在280℃发生最终的熔化/降解。

化合物I-1(无水形式B)的ssNMR

化合物I-1·无水形式B的固态¹³C NMR光谱如图4d所示。表6b提供有关峰的化学漂移。

表6b:B物的固态¹³C NMR光谱

化合物I-1·无水形式B的固态¹⁹F NMR光谱如图5d所示。表6c提供有关峰的化学漂移。

表6c:B物的固态¹⁹F NMR光谱

实施例9:化合物I-1(无水形式C)

将按照实施例8所述方法制备的化合物I-1·无水形式B(～15mg)加入到预留针孔的铝密封盘中，经由DSC加热至265℃，速率5℃/min(3盘，各～5mg)，得到化合物I-1·无水形式C，为深黄色粉末。

化合物I-1(无水形式C)的XRPD

利用配备有密封管源和Hi-Star面积检测器(Bruker AXS,Madison,WI,AssetV012842)的Bruker D8Discover衍射计，在室温下以反射模式记录化合物I-1·无水形式C的XRPD图。以40kV的电压和35mA的电流操作X射线发生器。将粉末样品置于镍支架中。登记两种框架，暴露时间各为120秒。随后整合3.5°－39°2θ范围的数据，步长0.02°，融合为一个连续的图样。图1e显示样品的X-射线粉末衍射图，这是结晶性药物物质所特有的。

表7a描绘了化合物I-1·无水形式C的代表性XRPD峰：

表7a:代表性XRPD峰

化合物I-1(无水形式C)的热分析

利用TA Instrument TGA Q500(Asset V014840)进行化合物I-1·无水形式C的热重分析，以确定重量损失百分比与时间的关系。将样品(3.363mg)加入到预称重的铂盘上，从环境温度加热至350℃，速率10℃/min。在图2e中见到的TGA结果显示，在熔化/降解之前没有明显的重量损失事件。熔化/降解的起始温度为292℃。

化合物I-1(无水形式C)的差示扫描量热法

利用TA Instrument DSC Q2000(Asset V012390)测量化合物I-1·无水形式C的差示扫描量热法。在预留针孔的铝密封盘中称重样品(4.100mg)，从30℃加热至350℃，速率3℃/min，每60秒调控±1℃。在图3e中见到的DSC结果显示，在281℃发生单一的吸热性熔化/降解事件。

ssNMR

化合物I-1·无水形式C的固态¹³C NMR光谱如图4e所示。表7b提供有关峰的化学漂移。

表7b:C物的固态¹³C NMR光谱

化合物I-1·无水形式C的固态¹⁹F NMR光谱如图5e所示。表7c提供有关峰的化学漂移。

表7c:C物的固态¹⁹F NMR光谱

实施例10:化合物I-1(非晶形物)

按照上文实施例2步骤3或实施例3步骤3所述方法制备化合物I-1·非晶形物。

化合物I-1(非晶形物)的XRPD

利用配备有Empyrean Cu管源和PIXcel 1D检测器(PANalytical,TheNetherlands)的PANalytical衍射计，在室温下以反射模式记录化合物I-1·非晶形物的XRPD图。以45kV的电压和40mA的电流操作X射线发生器。将粉末样品置于硅支架中。记录跨越3°－39°2θ范围的数据，步长0.013°，停留时间0.5s每步。图1f显示样品的X-射线粉末衍射图，这是非晶型药物物质所特有的。

化合物I-1(非晶形物)的差示扫描量热法

利用TA Instrument DSC Q2000测量化合物I-1·非晶形物的差示扫描量热法。在铝制非密封盘中称重样品(2.61mg)，采用调控模式从环境温度加热至350℃，加热速率2℃/min，调控幅度±0.5℃，时间60s。在图2f中见到的DSC结果显示，在128℃(起始)发生玻璃化转变(Tg)，热容变化为0.3J/(g.℃)。玻璃化转变之后是174℃(起始)的结晶放热，继而是250℃的熔化/降解事件。

化合物I-1(非晶型)的ssNMR

化合物I-1·非晶形物的固态¹³C NMR光谱如图3f所示。表8a提供有关峰的化学漂移。

表8a:非晶形物的固态¹³C NMR光谱

化合物I-1·非晶型的固态¹⁹F NMR光谱如图4f所示。表8b提供有关峰的化学漂移。

表8b:非晶形物的固态¹⁹F NMR光谱

实施例11:化合物I-1(DMSO溶剂化物)

将按照实施例7所述方法制备的化合物I-1·无水形式A(10.0g；18.47mmol)悬浮在DMSO(200mL)中，加热至55℃。混合物趁热过滤。将热的滤液在洁净的烧瓶中搅拌，冷却至20－25℃，然后搅拌另外2小时。过滤收集固体，用DMSO(10mL)洗涤，抽吸干燥，然后在40－45℃真空烘箱中干燥14小时，得到化合物I-1·DMSO溶剂化物(7.23g；63％).¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.63(s,1H),9.66(s,1H),9.47(dd,1H),9.24(dd,1H),8.24(d,1H),6.78(s,2H),4.54(t,2H),4.46(t,2H),3.60(dt,4H),3.43(m,1H),3.18(m,2H),2.97(m,3H),2.54(s,6H),2.26(dt,4H),2.12(qd,2H),1.73(d,2H)；19F NMR(500MHz,DMSO-d6)δ-136.1,-152.8。

化合物I-1(DMSO溶剂化物)的XRPD

利用配备有Empyrean管源和PIXcel 1D检测器(PANalytical,The Netherlands)的PANalytical衍射计，在室温下以反射模式记录化合物I-1·DMSO溶剂化物的XRPD图。以45kV的电压和40mA的电流操作X射线发生器。将粉末样品置于硅支架中。记录跨越3°－39°2θ范围的数据，步长0.013°，停留时间121s每步。图1g显示样品的X-射线粉末衍射图，这是结晶性药物物质所特有的。

表9描绘了化合物I-1·DMSO溶剂化物的代表性XRPD峰：

表9:代表性XRPD峰

化合物I-1(DMSO溶剂化物)的热分析

利用Discovery TGA(TA Instruments Trios)进行化合物I-1·DMSO溶剂化物的热重分析，以确定重量损失百分比与温度的关系。将样品(3.26mg)加入到预称重的铝盘上，从环境温度加热至350℃，速率10℃/min。在图2g中见到的TGA结果显示，在146℃(起始)与156℃(终点)之间重量损失多达12.44％。该重量损失相当于大约1摩尔当量的DMSO。然后在254℃(起始)与262℃(终点)之间见到0.52％的第二重量损失。随后在304℃见到的重量损失是熔化/降解的结果。

化合物I-1(DMSO溶剂化物)的差示扫描量热法

利用TA Instrument DSC Q2000测量化合物I-1·DMSO溶剂化物的差示扫描量热法。在预留针孔的铝密封盘中称重样品(1.77mg)，从环境温度加热至350℃，速率10℃/min。在图3g中见到的DSC结果显示有143℃(起始)下的去溶剂化吸热，随后有258℃(起始)下的单一熔化吸热。

实施例12:化合物I-1(DMAC溶剂化物)

将按照实施例7所述方法制备的化合物I-1·无水形式A(100mg；0.18mmol)悬浮在DMAC(2000uL)中，在20－25℃下搅拌20小时。过滤收集固体，用DMAC(500uL)洗涤，抽吸干燥，然后在40－50℃真空烘箱中干燥，得到化合物I-1·DMAC溶剂化物(84mg).¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ10.62(s,1H),9.66(s,1H),9.46(dd,1H),9.26–9.22(m,1H),8.24(d,1H),6.77(s,2H),4.54(t,2H),4.46(t,2H),3.66–3.54(m,4H),3.43(p,1H),3.18(tt,2H),2.94(s,8H),2.78(s,4H),2.26(dt,4H),2.12(qd,2H),1.96(s,4H),1.76–1.69(m,2H)。

化合物I-1(DMAC溶剂化物)的XRPD

利用配备有Empyrean管源和PIXcel 1D检测器(PANalytical,The Netherlands)的PANalytical衍射计，在室温下以反射模式记录化合物I-1·DMAC溶剂化物的XRPD图。以45kV的电压和40mA的电流操作X射线发生器。将粉末样品置于硅支架中。记录跨越3°－39°2θ范围的数据，步长0.013°，停留时间121s每步。图1h显示样品的X-射线粉末衍射图，这是结晶性药物物质所特有的。

表10描绘了化合物I-1·DMAC溶剂化物的代表性XRPD峰：

表10:代表性XRPD峰

化合物I-1(DMAC溶剂化物)的热分析

利用Discovery TGA(TA Instruments Trios)进行化合物I-1·DMAC溶剂化物的热重分析，以确定重量损失百分比与温度的关系。将样品(5.12mg)加入到预称重的铝盘上，从环境温度加热至350℃，速率10℃/min。在图2h中见到的TGA结果显示，在85℃(起始)与100℃(终点)之间重量损失多达17.76％。该重量损失相当于大约1.3摩尔当量的DMAC。随后在306℃见到的重量损失是熔化/降解的结果。

化合物I-1(DMAC溶剂化物)的差示扫描量热法

利用TA Instrument DSC Q2000测量化合物I-1·DMAC溶剂化物的差示扫描量热法。在预留针孔的铝密封盘中称重样品(1.93mg)，从环境温度加热至350℃，速率10℃/min。在图3h中见到的DSC结果显示有81℃(起始)下的去溶剂化吸热，随后有261℃(起始)下的单一熔化吸热。

实施例13:化合物I-1(丙酮溶剂化物)

将按照上文实施例2步骤3所述方法制备的化合物I-1·非晶型(100mg；0.18mmol)悬浮在丙酮(2000uL)中，搅拌22小时。过滤收集化合物I-1·丙酮溶剂化物。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ10.63(s,1H),9.66(s,1H),9.46(dd,1H),9.24(dd,1H),8.24(d,1H),6.78(s,2H),4.54(t,2H),4.46(t,2H),3.65–3.54(m,4H),3.43(p,1H),3.19(tt,2H),3.06–2.90(m,3H),2.26(dt,4H),2.18–2.05(m,3H),1.72(d,2H)。

化合物I-1(丙酮溶剂化物)的XRPD

利用配备有Empyrean管源和PIXcel 1D检测器(PANalytical,The Netherlands)的PANalytical衍射计，在室温下以反射模式记录化合物I-1·丙酮溶剂化物的XRPD图。以45kV的电压和40mA的电流操作X射线发生器。将粉末样品置于硅支架中。记录跨越3°－39°2θ范围的数据，步长0.013°，停留时间121s每步。图1i显示样品的X-射线粉末衍射图，这是结晶性药物物质所特有的。

表11描绘了化合物I-1·丙酮溶剂化物的代表性XRPD峰：

表11:代表性XRPD峰

化合物I-1(丙酮溶剂化物)的热分析

利用Discovery TGA(TA Instruments Trios)进行化合物I-1·丙酮溶剂化物的热重分析，以确定重量损失百分比与温度的关系。将样品(2.45mg)加入到预称重的铝盘上，从环境温度加热至350℃，速率10℃/min。在图2i中见到的TGA结果显示有1.46％的初始重量损失。然后在124℃(起始)与151℃(终点)之间见到更大的4.55％重量损失，这相当于大约0.44摩尔当量的丙酮。随后在302℃见到的重量损失是熔化/降解的结果。

化合物I-1(丙酮溶剂化物)的差示扫描量热法

利用TA Instrument DSC Q2000测量化合物I-1·丙酮溶剂化物的差示扫描量热法。在预留针孔的铝密封盘中称重样品(1.42mg)，从环境温度加热至350℃，速率10℃/min。在图3i中见到的DSC结果显示有136℃(起始)下的去溶剂化吸热，随后有166℃(起始)下的熔化吸热。继而发生175℃下的即时重结晶放热。然后在259℃下记录到另一次熔化吸热。这也随后发生261℃下的重结晶放热。在279℃观察到最终的熔化吸热。

实施例14:化合物I-1(异丙醇溶剂化物)

将按照上文实施例2步骤3所述方法制备的化合物I-1·非晶型(100mg；0.18mmol)悬浮在2-丙醇(2000uL)中，在20－25℃下搅拌22小时。过滤收集化合物I-1·异丙醇溶剂化物。

化合物I-1(异丙醇溶剂化物)的XRPD

利用配备有Empyrean管源和PIXcel 1D检测器(PANalytical,The Netherlands)的PANalytical衍射计，在室温下以反射模式记录化合物I-1·异丙醇溶剂化物的XRPD图。以45kV的电压和40mA的电流操作X射线发生器。将粉末样品置于硅支架中。记录跨越3°－39°2θ范围的数据，步长0.013°，停留时间121s每步。图1j显示样品的X-射线粉末衍射图，这是结晶性药物物质所特有的。

表12描绘了化合物I-1·异丙醇溶剂化物的代表性XRPD峰：

表12:代表性XRPD峰

化合物I-1(异丙醇溶剂化物)的热分析

利用Discovery TGA(TA Instruments Trios)进行化合物I-1·异丙醇溶剂化物的热重分析，以确定重量损失百分比与温度的关系。将样品(3.39mg)加入到预称重的铝盘上，从环境温度加热至300℃，速率10℃/min。在图2j中见到的TGA结果显示，在136℃(起始)与180℃(终点)之间重量损失多达3.76％。该重量损失相当于大约0.35摩尔当量的IPA。随后在278℃见到的重量损失是熔化/降解的结果。

化合物I-1(异丙醇溶剂化物)的差示扫描量热法

利用TA Instrument DSC Q2000测量化合物I-1·异丙醇溶剂化物的差示扫描量热法。在T-零铝盘中称重样品(1.03mg)，从环境温度加热至320℃，速率10℃/min。在图3j中见到的DSC结果显示有135℃(起始)下的广义的去溶剂化吸热，随后有258℃(起始)下的单一熔化吸热。

实施例15:细胞ATR抑制测定法：

可使用免疫荧光显微镜测定法来检测羟基脲处理的细胞中ATR底物组蛋白H2AX的磷酸化来筛选化合物抑制细胞内ATR的能力。以14,000个细胞/孔将HT29细胞涂布接种于96孔黑色成像板(BD 353219)中的McCoy’s5A培养基(西格玛公司(Sigma)M8403)中，该培养基补充有10％胎牛血清(JRH生物科学公司(JRH Biosciences)12003)、1:100稀释的青霉素/链霉素溶液(西格玛公司P7539)和2mM L-谷氨酰胺(西格玛公司G7513)，让其在37℃下在5％CO₂中贴壁过夜。然后将化合物以3倍连续稀释液从25μM的终浓度开始添加至细胞培养基，将细胞在37℃下在5％CO₂中温育。15分钟后，添加羟基脲(西格玛公司H8627)至终浓度为2mM。

在用羟基脲处理45分钟后，在PBS中洗涤细胞，在稀释于PBS中的4％甲醛(Polysciences公司18814)中固定10分钟，用PBS中的0.2％Tween-20(洗涤缓冲液)洗涤，并且在PBS中的0.5％Triton X-100中透化10分钟，全部在室温下进行。然后将细胞在洗涤缓冲液中洗涤一次，在室温下于在洗涤缓冲液中稀释的10％山羊血清(西格玛公司G9023)(封闭缓冲液)中封闭30分钟。为检测H2AX磷酸化水平，然后将细胞于室温下在一抗(小鼠单克隆抗磷酸化组蛋白H2AX Ser139抗体；Upstate 05-636)中温育1小时，该一抗在封闭缓冲液中1:250稀释。然后将细胞在洗涤缓冲液中洗涤五次，接着在二抗(山羊抗小鼠Alexa Fluor488缀合抗体；Invitrogen A11029)和Hoechst染料(Invitrogen H3570)的混合物中于室温下暗处温育1小时，该二抗和Hoechst染料在洗涤缓冲液中分别1:500和1:5000稀释。然后将细胞用洗涤缓冲液洗涤五次，最后将100μl PBS添加至每个孔中，然后成像。

使用BD Pathway 855Bioimager和Attovision软件(BD生物科学公司(BDBiosciences)，1.6/855版)针对Alexa Fluor 488和Hoechst强度对细胞进行成像，以分别定量磷酸化的H2AX Ser139和DNA染色。然后使用BD Image Data Explorer软件(BD生物科学公司，2.2.15版)对各孔计算20倍放大倍数下9个图像的剪辑画面中磷酸化Η2ΑΧ阳性细胞核的百分比。将磷酸化Η2ΑΧ阳性细胞核定义为目的Hoechst阳性区，其含有的AlexaFluor 488强度是未用羟基脲处理的细胞中平均Alexa Fluor 488强度的1.75倍。最后将H2AX阳性细胞核的百分比对每种化合物的浓度作图并且使用Prism软件(GraphPad Prism，用于Macintosh的3.0cx版，GraphPad Software公司，美国加利福尼亚州圣地亚哥(SanDiego California,USA))测定胞内ATR抑制的IC50。

本文所述的化合物也可根据本领域已知的其他方法进行测试(参见Sarkaria等 人，“Inhibition of ATM and ATR Kinase Activities by the RadiosensitizingAgent,Caffeine(“辐射敏化剂咖啡因对ATM和ATR激酶活性的抑制”)：Cancer Research(《癌症研究》)，第59卷，第4375-5382页，1999年；Hickson等人，“Identification andCharacterization of a Novel and Specific Inhibitor of the Ataxia-Telangiectasia Mutated Kinase ATM”(“毛细血管扩张性共济失调突变激酶ATM的新型和特异性抑制剂的鉴定和表征”)，Cancer Research(《癌症研究》)，第64卷，第9152-9159页，2004年；Kim等人，“Substrate Specificities and Identification of PutativeSubstrates of ATM Kinase Family Members”(“ATM激酶家族成员的推定底物的底物特异性和鉴定”)，The Journal of Biological Chemistry(《生物化学杂志》)，第274卷，第53期，第37538-37543页，1999年；以及Chiang等人，“Determination of the catalyticactivities of mTOR and other member s of the phosphoinositide-3-kinase-related kinase family”(“磷酸肌醇-3-激酶相关激酶家族的mTOR和其他成员的催化活性的测定”)，Methods Mol.Biol.(《分子生物学方法》)，第281卷，第125-141页，2004年)。

实施例16:ATR抑制测定法：

可使用放射性磷酸盐掺入测定法筛选化合物抑制ATR激酶的能力。测定法在50mMTris/HCl(pH 7.5)、10mM MgCl₂和1mM DTT的混合物中进行。底物终浓度为10μM[γ-33P]ATP(3mCi 33P ATP/mmol ATP，珀金埃尔默公司(Perkin Elmer))和800μM目标肽(ASELPASQPQPFSAKKK)。

在存在5nM全长ATR的情况下在25℃进行测定。制备含有除ATP和目的测试化合物之外的全部上面列出的试剂的测定储备缓冲溶液。将13.5μL储备溶液放入96孔板中，然后添加2μL含有测试化合物的连续稀释液的DMSO储备溶液(通常从3倍连续稀释液的15μM终浓度开始)，一式两份(DMSO终浓度为7％)。将板在25℃预温育10分钟，通过添加15μL[γ-33P]ATP(终浓度10μM)起始反应。

24小时后通过添加30μL含有2mM ATP的0.1M磷酸终止反应。用100μL 0.2Μ磷酸预处理multiscreen磷酸纤维素滤膜96孔板(密理博公司(Millipore)，目录号MAPHN 0B50)，然后添加45μL终止测定混合物。用5×200μL 0.2M磷酸洗涤板。干燥后，将100μL Optiphase‘SuperMix’液体闪烁混合物(cocktail)(珀金埃尔默公司(Perkin Elmer))添加到孔中，然后进行闪烁计数(1450Microbeta液体闪烁计数器，Wallac公司)。

在除去全部数据点的平均背景值后，使用Prism软件包(GraphPad Prism，用于Macintosh的3.0cx版，GraphPad Software公司，美国加利福尼亚州的圣地亚哥)从对初始比率数据的非线性回归分析计算Ki(app)数据。

一般而言，本发明混合物就抑制ATR而言是有效的。化合物I-1和I-3抑制ATR的Ki值低于1μM。

实施例17:顺铂增敏测定法

可使用96小时细胞活力(MTS)测定法来筛选化合物增加HCT116结肠直肠癌细胞对顺铂的敏感性的能力。将对顺铂的ATM信号传导存在缺陷的HCT116细胞(参见Kim等人，Oncogene(《致癌基因》)，第21卷，第3864页，2002年；另参见Takemura等人，JBC(《生物化学杂志》)，第281卷，第30814页，2006年)以470个细胞/孔涂布接种于96孔聚苯乙烯板(Costar公司3596)的150μl McCoy’s 5A培养基(西格玛公司M8403)中，该培养基补充有10％胎牛血清(JRH生物科学公司12003)、1:100稀释的青霉素/链霉素溶液(西格玛公司P7539)和2mML-谷氨酰胺(西格玛公司G7513)，并让其在37℃下于5％CO₂中贴壁过夜。然后将化合物和顺铂二者以从10μM最高终浓度开始的2倍连续稀释液作为一整套浓度同时添加至细胞培养基，最终细胞体积为200μl，然后将细胞在37℃下在5％CO₂中温育。96小时后，将40μl MTS试剂(普洛麦格公司(Promega)G358a)添加至每个孔，并将细胞在37℃下在5％CO₂中温育1小时。最后，用SpectraMax Plus 384读出器(分子仪器公司(Molecular Devices))在490nm测量吸光度并可报道将单独的顺铂的IC50降低至少3倍(至1个小数位)所需的化合物浓度。

一般而言，本发明化合物就增敏癌细胞于顺铂而言是有效的。化合物I-1和I-3的顺铂增敏值<0.2μM。

实施例18:单一药剂HCT116活性

可使用96小时细胞活力(MTS)测定法筛选化合物的对抗HCT116结肠直肠癌细胞的单一药剂活性。将HCT116以470个细胞/孔涂布接种于96孔聚苯乙烯板(Costar公司3596)的150μl McCoy’s 5A培养基(西格玛公司M8403)中，该培养基补充有10％胎牛血清(JRH生物科学公司12003)、1:100稀释的青霉素/链霉素溶液(西格玛公司P7539)和2mM L-谷氨酰胺(西格玛公司G7513)，并让其在37℃下于5％CO₂中贴壁过夜。然后将化合物以从10μM最高终浓度开始的2倍连续稀释液作为一整套浓度添加至细胞培养基，最终细胞体积为200μl，然后将细胞在37℃下在5％CO₂中温育。96小时后，将40μl MTS试剂(普洛麦格公司G358a)添加至每个孔，并将细胞在37℃下在5％CO₂中温育1小时。最后，用SpectraMax Plus 384读出器(分子仪器公司)在490nm测量吸光度并且可以计算IC50值。

实施例19:ATR-配合物抑制测定法

利用放射性磷酸盐结合测定法，在伴侣蛋白ATRIP、CLK2和TopBP1的存在下筛选化合物抑制ATR激酶的能力。测定是在50mM Tris/HCl(pH 7.5)、10mM MgCl₂与1mM DTT的混合物中进行的。最终的底物浓度为10μM[g-33P]ATP(3.5μCi 33P ATP/nmol ATP,PerkinElmer,Massachusetts,USA)和800μM目标肽(ASELPASQPQPFSAKKK,Isca Biochemicals,Cambridgeshire,UK)。

在25℃下，在4nM全长ATR、40nM全长ATRIP、40nM全长CLK2和600nM TopBP1(A891-S1105)的存在进行测定。制备酶储备缓冲溶液，含有上文列举的全部试剂，目标肽、ATP和有关供试化合物除外。将这种酶储备液在25℃下预温育30分钟。将8.5μL酶储备溶液置于96孔平板中，随后加入5μl目标肽和2μL DMSO储备液，后者含有连续稀释的供试化合物(通常始于1.5μM的最终浓度，以2.5倍连续稀释)，一式两份(最终DMSO浓度7％)。将平板在25℃下预温育10分钟，加入15μL[g-33P]ATP(最终浓度10μM)引发反应。

20小时后加入含有2mM ATP的30μL 0.3M磷酸终止反应。将96孔磷酸纤维素滤板(Multiscreen HTS MAPHNOB50,Merck-Millipore,Massachusetts,USA)用100μL 0.1M磷酸预处理，然后加入45μL已终止反应的测定混合物。平板用5x 200μL 0.1M磷酸洗涤。干燥后，向小孔加入50μL Optiphase‘SuperMix’液体闪烁鸡尾酒试剂(Perkin Elmer,Massachusetts,USA)，然后进行闪烁计数(Wallac 1450Microbeta Liquid ScintillationCounter,Perkin Elmer,Massachusetts,USA)。

除去全部数据点的平均背景值之后，利用Prism软件包(GraphPad Prism version6.0c for Macintosh,GraphPad Software Inc.,San Diego,USA)从原始速率数据的非线性回归分析计算Ki(app)数据。

尽管我们已经描述了本发明的许多实施方式，不过显然，可以改变我们的基础实例以提供采用本发明化合物、方法和方法的其他实施方式。因此，将被领会的是，本发明的范围由随附权利要求而非本文已借助实例来呈现的具体实施方式加以限定。

Claims (141)

1.式I-B化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

每个Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹¹、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹独立地是氢或氘；其条件是至少一个Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹¹、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘；

每个X¹、X²、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷、X⁸和X⁹独立地选自¹²C或¹³C；且

X³独立地选自-¹²C(O)-或-¹³C(O)-。

2.权利要求1的化合物，其中Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘，且Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰和Y¹¹独立地选自氢或氘。

3.权利要求2的化合物，其中Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘，且Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰和Y¹¹是氢。

4.权利要求3的化合物，其中：

X¹、X²、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷、X⁸和X⁹是¹²C；

X³是-¹²C(O)-。

5.权利要求3的化合物，其中：

X¹、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷、X⁸和X⁹是¹²C；

X³是-¹³C(O)-；且

X²是¹³C。

6.权利要求1的化合物，其中Y¹¹、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘，且Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹和Y¹⁰独立地选自氢或氘。

7.权利要求6的化合物，其中Y¹¹、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘，且Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹和Y¹⁰是氢。

8.权利要求1的化合物，其中Y²、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘，且Y¹、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰和Y¹¹独立地选自氢或氘。

9.权利要求8的化合物，其中Y²、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘，且Y¹、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰和Y¹¹是氢。

10.权利要求1的化合物，其中Y¹²、Y¹³、Y¹⁸和Y¹⁹是氘，且Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹¹、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶和Y¹⁷是氢或氘。

11.权利要求10的化合物，其中Y¹²、Y¹³、Y¹⁸和Y¹⁹是氘，且Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹¹、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶和Y¹⁷是氢。

12.权利要求1的化合物，其中Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰和Y¹¹是氘，且Y¹、Y²、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹独立地选自氘或氢。

13.权利要求12的化合物，其中Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰和Y¹¹是氘，且Y¹、Y²、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氢。

14.权利要求1的化合物，其中Y²和Y¹¹是氘，且Y¹、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘或氢。

15.权利要求14的化合物，其中Y²和Y¹¹是氘，且Y¹、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氢。

16.权利要求1的化合物，其中Y²是氘，且Y¹、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹¹、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氘或氢。

17.权利要求16的化合物，其中Y²是氘，且Y¹、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹¹、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氢。

18.权利要求17的化合物，其中：

X¹、X²、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷和X⁸是¹²C；

X³是-¹²C(O)-；且

X⁹是¹³C。

19.权利要求17的化合物，其中：

X¹、X²、X⁸和X⁹是¹²C；

X³是-¹²C(O)-；且

X⁴、X⁵、X⁶和X⁷是¹³C。

20.权利要求17的化合物，其中：

X²、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷、X⁸和X⁹是¹²C；

X³是-¹²C(O)-；且

X¹是¹³C。

21.权利要求17的化合物，其中：

X²、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷和X⁹是¹²C；

X³是-¹³C(O)-；且

X¹和X⁸是¹³C。

22.权利要求1的化合物，其中Y¹¹是氘，且Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹独立地选自氢或氘。

23.权利要求21的化合物，其中Y¹¹是氘，且Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵、Y⁶、Y⁷、Y⁸、Y⁹、Y¹⁰、Y¹²、Y¹³、Y¹⁴、Y¹⁵、Y¹⁶、Y¹⁷、Y¹⁸和Y¹⁹是氢。

24.权利要求22的化合物，其中：

X¹、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷、X⁸和X⁹是¹²C；

X³是-¹²C(O)-；且

X²是¹³C。

25.权利要求1－24任意一项的化合物，选自如下：

26.式I-1化合物的固体形式：

其中该形式选自由化合物I-1乙醇溶剂化物、化合物I-1水合物I、化合物I-1水合物II、化合物I-1无水形式A、化合物I-1无水形式B、化合物I-1无水形式C、化合物I-1DMSO溶剂化物、化合物I-1DMAC溶剂化物、化合物I-1丙酮溶剂化物或化合物I-1异丙醇溶剂化物组成的组。

27.权利要求26的固体形式，其中该形式是化合物I-1乙醇溶剂化物。

28.权利要求26的固体形式，其中该形式是结晶性化合物I-1乙醇溶剂化物。

29.权利要求28的固体形式，其中结晶性化合物I-1乙醇溶剂化物的化合物I-1与乙醇之比为约1:0.72。

30.权利要求28的固体形式，其特征在于在约166℃至约219℃的温度范围内失重约5.76％。

31.权利要求28的固体形式，其特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约17.2、19.7、23.8、24.4和29.0度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。

32.权利要求28的固体形式，其特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1a所示相同。

33.权利要求28的固体形式，其特征在于在C¹³ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于175.4±0.3ppm、138.0±0.3ppm、123.1±0.3ppm、57.8±0.3ppm、44.0±0.3ppm和19.5±0.3ppm。

34.权利要求28的固体形式，其特征在于在F¹⁹ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于-136.0±0.3ppm和-151.6±0.3ppm。

35.权利要求26的固体形式，其中该形式是化合物I-1·水合物I。

36.权利要求26的固体形式，其中该形式是结晶性化合物I-1·水合物I。

37.权利要求36的固体形式，其中结晶性化合物I-1·水合物I的化合物I-1与H₂O之比为约1:4.5。

38.权利要求36的固体形式，其特征在于在约25℃至约100℃的温度范围内失重约14.56％。

39.权利要求36的固体形式，其特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约6.5、12.5、13.7、18.8和26.0度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。

40.权利要求36的固体形式，其特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1b所示相同。

41.权利要求26的固体形式，其中该形式是化合物I-1·水合物II。

42.权利要求26的固体形式，其中该形式是结晶性化合物I-1·水合物II。

43.权利要求42的固体形式，其特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约10.1、11.3、11.9、20.2和25.1度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。

44.权利要求42的固体形式，其特征在于在C¹³ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于177.0±0.3ppm、158.2±0.3ppm、142.9±0.3ppm、85.1±0.3ppm、58.9±0.3ppm和31.9±0.3ppm。

45.权利要求42的固体形式，其特征在于在F¹⁹ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于-138.0±0.3ppm和-152.7±0.3ppm。

46.权利要求26的固体形式，其中该形式是化合物I-1·无水形式A。

47.权利要求26的固体形式，其中该形式是结晶性化合物I-1·无水形式A。

48.权利要求47的固体形式，其特征在于在约25℃至约265℃的温度范围内失重约0.96％。

49.权利要求47的固体形式，其特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约6.1、12.2、14.5、22.3和31.8度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。

50.权利要求47的固体形式，其特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1c所示相同。

51.权利要求47的固体形式，其特征在于在C¹³ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于175.9±0.3ppm、138.9±0.3ppm、74.1±0.3ppm、42.8±0.3ppm和31.5±0.3ppm。

52.权利要求47的固体形式，其特征在于在F¹⁹ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于-136.8±0.3ppm和-155.7±0.3ppm。

53.权利要求26的固体形式，其中该形式是化合物I-1·无水形式B。

54.权利要求26的固体形式，其中该形式是结晶性化合物I-1·无水形式B。

55.权利要求54的固体形式，其特征在于在约25℃至约175℃的温度范围内失重约2.5％。

56.权利要求54的固体形式，其特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约7.2,8.3、12.9、19.5和26.6度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。

57.权利要求54的固体形式，其特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1d所示相同。

58.权利要求54的固体形式，其特征在于在C¹³ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于173.4±0.3ppm、164.5±0.3ppm、133.5±0.3ppm、130.8±0.3ppm、67.7±0.3ppm、45.3±0.3ppm和25.9±0.3ppm。

59.权利要求42的固体形式，其特征在于在F¹⁹ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于-138.0±0.3ppm和-153.5±0.3ppm。

60.权利要求26的固体形式，其中该形式是化合物I-1·无水形式C。

61.权利要求26的固体形式，其中该形式是结晶性化合物I-1·无水形式C。

62.权利要求61的固体形式，其特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约6.8、13.4、15.9、30.9和32.9度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。

63.权利要求61的固体形式，其特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1e所示相同。

64.权利要求61的固体形式，其特征在于在C¹³ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于175.2±0.3ppm、142.5±0.3ppm、129.6±0.3ppm、73.5±0.3ppm、54.0±0.3ppm和46.7±0.3ppm。

65.权利要求61的固体形式，其特征在于在F¹⁹ssNMR光谱中具有一个或多个峰，对应于-131.2±0.3ppm和-150.7±0.3ppm。

66.权利要求26的固体形式，其中该形式是化合物I-1·DMSO溶剂化物。

67.权利要求26的固体形式，其中该形式是结晶性化合物I-1·DMSO溶剂化物。

68.权利要求67的固体形式，其中结晶性化合物I-1·DMSO溶剂化物的化合物I-1与DMSO之比为约1:1。

69.权利要求67的固体形式，其特征在于在约146℃至约156℃的温度范围内失重约12.44％。

70.权利要求67的固体形式，其特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约8.9、14.8、16.5、18.6、20.9、22.2和23.4度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。

71.权利要求67的固体形式，其特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1g所示相同。

72.权利要求26的固体形式，其中该形式是化合物I-1·DMAC溶剂化物。

73.权利要求26的固体形式，其中该形式是结晶性化合物I-1·DMAC溶剂化物。

74.权利要求75的固体形式，其中结晶性化合物I-1·DMAC溶剂化物的化合物I-1与DMAC之比为约1:1.3。

75.权利要求75的固体形式，其特征在于在约85℃至约100℃的温度范围内失重约17.76％。

76.权利要求75的固体形式，其特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约6.0,15.5、17.7、18.1、20.4和26.6度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。

77.权利要求75的固体形式，其特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1h所示相同。

78.权利要求26的固体形式，其中该形式是化合物I-1·丙酮溶剂化物。

79.权利要求26的固体形式，其中该形式是结晶性化合物I-1·丙酮溶剂化物。

80.权利要求79的固体形式，其中结晶性化合物I-1·丙酮溶剂化物的化合物I-1与丙酮之比为约1:0.44。

81.权利要求79的固体形式，其特征在于在约124℃至约151℃的温度范围内失重约4.55％。

82.权利要求79的固体形式，其特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约8.9、15.5、15.8、16.7、22.3、25.7和29.0度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。

83.权利要求79的固体形式，其特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1i所示相同。

84.权利要求26的固体形式，其中该形式是化合物I-1·异丙醇溶剂化物。

85.权利要求26的固体形式，其中该形式是结晶性化合物I-1·异丙醇溶剂化物。

86.权利要求85的固体形式，其中结晶性化合物I-1·异丙醇溶剂化物的化合物I-1与异丙醇之比为约1:0.35。

87.权利要求85的固体形式，其特征在于在约136℃至约180℃的温度范围内失重约3.76％。

88.权利要求85的固体形式，其特征在于在利用Cu Kα放射获得的X-射线粉末衍射图中，在约6.9、17.1、17.2、19.1、19.6、23.7、24.4和28.9度表现一个或多个峰，以2-θ±0.2表示。

89.权利要求85的固体形式，其特征在于X-射线粉末衍射图实质上与图1j所示相同。

90.组合物，包含：

a)化合物I-1或其药学上可接受的盐，其中化合物I-1是由下列结构式代表的：

和

b)一种或多种赋形剂。

91.权利要求90的组合物，其中一种或多种赋形剂包含一种或多种选自由一种或多种填充剂、一种或多种湿润剂、一种或多种润滑剂和一种或多种崩解剂组成的组。

92.权利要求90或91的组合物，其中一种或多种赋形剂包含一种或多种填充剂。

93.权利要求92的组合物，其中一种或多种填充剂的含量范围为约10wt％至约88wt％，以组合物总重量计。

94.权利要求92或93的组合物，其中一种或多种填充剂选自由甘露糖醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、麦芽糊精、山梨糖醇、木糖醇、粉化纤维素、微晶纤维素、硅化微晶纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、甲基羟乙基纤维素、淀粉、预胶化淀粉、磷酸氢钙、硫酸钙和碳酸钙组成的组。

95.权利要求94的组合物，其中一种或多种填充剂选自微晶纤维素和乳糖。

96.权利要求90－95任意一项的组合物，其中一种或多种赋形剂包含一种或多种崩解剂。

97.权利要求96的组合物，其中一种或多种崩解剂的含量范围为约1wt％至约15wt％，以组合物总重量计。

98.权利要求96或97的组合物，其中一种或多种崩解剂选自由交联羧甲基纤维素钠、藻酸钠、藻酸钙、藻酸、淀粉、预胶化淀粉、淀粉乙醇酸钠、交联聚维酮、纤维素及其衍生物、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、大豆多糖、瓜耳胶、离子交换树脂、基于食物酸和碱性碳酸盐组分的泡腾系统和碳酸氢钠组成的组。

99.权利要求98的组合物，其中一种或多种崩解剂是交联羧甲基纤维素钠。

100.权利要求90－99任意一项的组合物，其中一种或多种赋形剂包含一种或多种润滑剂。

101.权利要求100的组合物，其中一种或多种润滑剂的含量范围为约0.1wt％至约10wt％，以组合物总重量计。

102.权利要求100或101的组合物，其中一种或多种润滑剂选自由滑石、脂肪酸、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、月桂基硫酸钠、硬脂基富马酸钠、氢化油、脂肪醇、脂肪酸酯、甘油山嵛酸酯、矿物油、植物油、亮氨酸、苯甲酸钠及其组合组成的组。

103.权利要求102的组合物，其中一种或多种润滑剂是硬脂基富马酸钠。

104.权利要求90－103任意一项的组合物，包含：

a)化合物I-1，含量范围为约5wt％至约50wt％，以组合物总重量计；

b)一种或多种润滑剂，含量范围为约0.1wt％至约10wt％，以组合物总重量计；

c)一种或多种崩解剂，含量范围为约1wt％至约15wt％，以组合物总重量计；和

d)一种或多种填充剂，含量范围为约10wt％至约90wt％，以组合物总重量计。

105.权利要求90－104任意一项的组合物，包含：

a)化合物I-1，含量为约10wt％，以组合物总重量计；

b)乳糖一水合物，含量为约28wt％，以组合物总重量计；

c)Avicel PH-101(微晶纤维素)，含量为约55wt％，以组合物总重量计；

d)Ac-Di-Sol(交联羧甲基纤维素钠)，含量为约5wt％，以组合物总重量计；和

e)硬脂基富马酸钠，含量为约3wt％，以组合物总重量计。

106.权利要求90－105任意一项的组合物，其中实质上全部重量的化合物I-1是形式A。

107.权利要求106的组合物，其中至少90％重量的化合物I-1是形式A。

108.权利要求107的组合物，其中至少95％重量的化合物I-1是形式A。

109.权利要求108的组合物，其中至少98％重量的化合物I-1是形式A。

110.化合物I-1的晶形，具有单斜晶系、P2_1/c中心对称空间群和下列晶胞参数：

α＝90°

β＝107.22(3)°

γ＝90°。

111.制备化合物I-1·无水形式A的方法，包含搅拌含有化合物I-1·乙醇溶剂化物和四氢呋喃的混悬液。

112.制备化合物I-1·无水形式A的方法，包含搅拌含有化合物I-1·非晶型、异丙醇和水的混悬液。

113.权利要求112的方法，其中混悬液被加热至约65℃与约80℃之间。

114.权利要求115的方法，其中混悬液被加热至约70℃与约75℃之间。

115.制备式4a化合物的方法：

包含如下步骤：

d)使式35化合物：

其中R°是C_1-6脂族基，

在酸性条件下反应，生成式36化合物：

e)使式36化合物与亲电氟化剂反应，生成式38化合物：

f)使式38化合物与式3化合物：

在适合的缩合条件下反应，生成式4a化合物。

116.权利要求115的方法，其中R°独立地选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基和戊基。

117.权利要求116的方法，其中R°独立地选自甲基或乙基。

118.权利要求115的方法，其中亲电氟化剂是1-(氯甲基)-4-氟-1,4-重氮化二环[2.2.2]辛烷双四氟硼酸盐。

119.权利要求115的方法，其中亲电氟化剂是氟气。

120.权利要求115的方法，其中适合的缩合条件包含使式38化合物与式3化合物在溶剂的存在下反应。

121.权利要求120的方法，其中溶剂选自DMF或DMSO。

122.制备式I-1化合物的方法：

包含如下步骤：

e)使式6a*化合物：

与式27化合物：

在适合的酰胺键生成条件下反应，生成式28化合物：

f)使用适合的钯螯合剂纯化式28化合物；

g)使式28化合物在适合的去保护条件下反应，生成式30化合物

h)使式30化合物与式25化合物：

在适合的酰胺键生成条件下反应，生成式I-1化合物。

123.权利要求122的方法，其中适合于生成酰胺键的条件包含使式30化合物与式25化合物在酰胺偶联伴侣、非质子溶剂和碱的存在下反应。

124.权利要求123的化合物，其中非质子溶剂独立地选自NMP、DMF或四氢呋喃。

125.权利要求124的方法，其中非质子溶剂是四氢呋喃。

126.权利要求123的方法，其中碱是脂族胺。

127.权利要求126的方法，其中碱是DIPEA。

128.权利要求123－127任意一项的方法，其中酰胺偶联伴侣独立地选自CDI、TBTU或TCTU。

129.权利要求128的方法，其中酰胺偶联伴侣是TCTU。

130.权利要求128的方法，其中酰胺偶联伴侣是CDI。

131.权利要求122的方法，其中适合的去保护条件包含使式28化合物与酸在溶剂的存在下反应。

132.权利要求131的方法，其中酸是HCl。

133.权利要求131的方法，其中溶剂是1,4-二噁烷。

134.权利要求122的方法，其中适合于生成酰胺键的条件包含使式6a*化合物与式27化合物在非质子溶剂中、在加热下反应。

135.权利要求134的方法，其中非质子溶剂独立地选自NMP、吡啶或DMF。

136.权利要求135的方法，其中非质子溶剂是吡啶。

137.权利要求136任意一项的方法，其中反应是在至少80℃的温度下进行的。

138.权利要求122的方法，其中钯清除剂独立地选自丙烷-1,2-二胺；乙烷-1,2-二胺；乙烷-1,2-二胺；丙烷-1,3-二胺；四甲基乙二胺；乙二醇；1,3-双(二苯膦基)丙烷；1,4-双(二苯膦基)丁烷；和1,2-双(二苯膦基)乙烷/Pr-1,2-二胺。

139.权利要求138的方法，其中钯清除剂是丙烷-1,2-二胺。

140.制备式28化合物的方法：

包含如下步骤：

a)使式5a化合物

在适合的卤化条件下反应，生成式34化合物：

其中X是卤素；

b)使式34化合物与式27化合物：

在适合的酰胺键生成条件下反应，生成式28化合物。

141.制备式I-1化合物的方法：

包含如下步骤：

e)使式5a化合物

在适合的卤化条件下反应，生成式34化合物：

其中X是卤素；

f)使式34化合物与式27化合物：

在适合的酰胺键生成条件下反应，生成式28化合物：

g)使式28化合物在适合的去保护条件下反应，生成式30化合物

h)使式30化合物与式25化合物：

在适合的酰胺键生成条件下反应，生成式I-1化合物。