RU2720408C2

RU2720408C2 - Способ получения ингибиторов atr киназы (варианты)

Info

Publication number: RU2720408C2
Application number: RU2019113160A
Authority: RU
Inventors: Жан-Дамьен ШАРРЬЕ; Кристофер Джон ДЭВИС; Дамьен ФРАЙСС; Горка ЭТКСЕБАРРИЯ И ХАРДИ; Саймон ПЕГГ; Франсуаз ПЬЕРАР; Джоанн ПИНДЕР; Джон Стадли; Карл ЗВИКЕР; Тапан САНГХВИ; Майкл УОЛДО; Алес МЕДЕК; Дэвид Мэттью ШОУ; Маниндер ПАНЕСАР; Юэган Чжан; Назиха АЛЕМ
Original assignee: Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед
Priority date: 2013-12-06
Filing date: 2014-12-05
Publication date: 2020-04-29
Also published as: AU2014360380B2; NZ720909A; IL246028A0; HRP20192183T1; HUE046727T2; RU2019113160A3; RU2019113160A; IL246028B; JP6543252B2; DK3077397T3; LT3077397T; SI3077397T1; US20150158872A1; RU2687276C2; US20190256516A1; ES2768678T3; AU2019200723A1; BR112016012734A8; CN105934435A; WO2015085132A1

Abstract

Изобретение относится к способу получения соединения формулы I-1, включающему стадии: a) взаимодействия соединения формулы 6a* с соединением формулы 27 при соответствующих условиях образования амидной связи, где соответствующие условия для образования амидной связи включают взаимодействие соединения формулы 6a* с соединением формулы 27 в апротонном растворителе при нагреве, с образованием соединения формулы 28; b) очистки соединения формулы 28 с использованием соответствующего хелатирующего агента для палладия, выбранного из пропан-1,2-диамина; этан-1,2-диамина; этан-1,2-диамина; пропан-1,3-диамина; тетраметилэтилендиамина; этиленгликоля; 1,3-бис(дифенилфосфанил)пропана; 1,4-бис(дифенилфосфанил)бутана и 1,2-бис(дифенилфосфанил)этан/Pr-1,2-диамина; c) взаимодействия соединения формулы 28 при соответствующих условиях снятия защиты, где соответствующие условия снятия защиты включают взаимодействие соединения формулы 28 с кислотой в присутствии растворителя, с образованием соединения формулы 30; d) взаимодействия соединения формулы 30 с соединением формулы 25 при соответствующих условиях образования амидной связи, где соответствующие условия для образования амидной связи включают взаимодействие соединения формулы 30 с соединением формулы 25 в присутствии партнера для образования амидной связи, апротонного растворителя и основания, с образованием соединения формулы I-1. Изобретение также относится к способу получения соединения формулы I-1, включающему стадии: a) взаимодействия соединения формулы 5a при соответствующих условиях галогенирования, где соответствующие условия галогенирования включают взаимодействие соединения формулы 5a с галогенирующим агентом и основанием в присутствии растворителя, с образованием соединения формулы 34; b) взаимодействия соединения формулы 34 с соединением формулы 27 при соответствующих условиях образования амидной связи, где соответствующие условия для образования амидной связи включают взаимодействие соединения формулы 34 с соединением формулы 27 в апротонном растворителе при нагреве, с образованием соединения формулы 28; c) взаимодействия соединения формулы 28 при соответствующих условиях снятия защиты, где соответствующие условия снятия защиты включают взаимодействие соединения формулы 28 с кислотой в присутствии растворителя, с образованием соединения формулы 30; d) взаимодействия соединения формулы 30 с соединением формулы 25 при соответствующих условиях образования амидной связи, где соответствующие условия для образования амидной связи включают взаимодействие соединения формулы 30 с соединением формулы 25 в присутствии партнера для образования амидной связи, апротонного растворителя и основания, с образованием соединения формулы I-1. Технический результат – разработаны новые способы получения соединения формулы I-1, которое может найти применение в медицине для использования в качестве ингибитора ATR протеинкиназы. 2 н. и 13 з.п. ф-лы, 12 табл., 33 ил., 19 пр.

Description

Уровень техники

[0001] ATR (“ATM и Rad3-связанная”) киназа представляет собой протеинкиназу, участвующую в клеточных реакциях на повреждение ДНК. ATR киназа действует весте с ATM киназой (“мутировавшей относительно атаксии-телеангиэктазии”) и множеством других белков для регуляции реакции клеток на повреждение ДНК, обычно упоминаемой как реакция на повреждение ДНК (“DDR”). DDR стимулирует репарацию ДНК, способствует выживанию и останавливает осуществление клеточного цикла посредством активирования контрольных точек клеточного цикла, что дает время для репарации. Без DDR, клетки являются гораздо более чувствительными к повреждению ДНК и легко гибнут от повреждений ДНК, вызываемых эндогенными клеточными процессами, такими как репликация ДНК, или экзогенными агентами, повреждающими ДНК, обычно используемыми при терапии рака.

[0002] Здоровые клетки могут основываться на активном присутствии различных белков для репарации ДНК, включая ATR киназу для DDR. В некоторых случаях эти белки могут компенсировать друг друга посредством активации функционально избыточных процессов репарации ДНК. В противоположность этому, многие раковые клетки сохраняют дефекты в некоторых своих процессах репарации ДНК, таких как передача ATM сигналов, и, следовательно, демонстрируют более сильную зависимость от оставшихся в них интактных белков для репарации ДНК, которые включают ATR.

[0003] В дополнение к этому, многие раковые клетки экспрессируют активированные онкогены или не содержат ключевых подавителей опухоли, и это может делать эти раковые клетки склонными к дизрегуляции фаз репликации ДНК, что, в свою очередь, вызывает повреждение ДНК. ATR участвуют в качестве критического компонента DDR в реакции на нарушение репликации ДНК. В результате, эти раковые клетки, для выживания, сильнее зависят от активности ATR, чем здоровые клетки. Соответственно, ингибиторы ATR могут быть пригодными для использования при лечении рака, используемые либо сами по себе, либо в сочетании с агентами, повреждающими ДНК, поскольку они выключают механизм репарации ДНК, который является более важным для клеточного выживания во многих раковых клетках, чем в здоровых нормальных клетках.

[0004] На самом деле, нарушение функции ATR (например, посредством делеции ген), как показано, способствует гибели раковых клеток, как в отсутствие, так и в присутствии агентов, повреждающих ДНК. Это говорит о том, что ингибиторы ATR могут быть эффективными как в качестве отдельных агентов, так и в качестве сильнодействующих сенсибилизаторов для лучевой терапии или генотоксичной химиотерапии.

[0005] По всем этим причинам имеется необходимость в разработке сильнодействующих и селективных ингибиторов ATR для лечения рака, либо в качестве отдельных агентов, либо в качестве сочетанной терапии вместе с лучевой терапией или генотоксичной химиотерапией. Кроме того, было бы желательно иметь подход к синтезу ингибиторов ATR, который является применимым для крупномасштабного синтеза и улучшает способы, известные в настоящее время.

[0006] Пептид ATR может экспрессироваться и выделяться с использованием разнообразных способов, известных в литературе (смотри например, Ünsal-Kaçmaz et al, PNAS 99: 10, pp6673-6678, May 14, 2002; смотри также Kumagai et al. Cell 124, pp943-955, March 10, 2006; Unsal-Kacmaz et al. Molecular and Cellular Biology, Feb 2004, p1292-1300; и Hall-Jackson et al. Oncogene 1999, 18, 6707-6713).

Краткое описание чертежей

Фигура 1a: XRPD Соединения I-I этанольного сольвата

Фигура 2a: TGA Соединения I-1⋅ этанольного сольвата

Фигура 3a: DSC Соединения I-1⋅ этанольного сольвата

Фигура 4a: Спектр твердотельного ¹³C ЯМР (вращение при 12,5 кГц) Соединения I-1⋅ этанольного сольвата

Фигура 5a: Спектр твердотельного ¹⁹F ЯМР (вращение при 12,5 кГц) Соединения I-1⋅ этанольного сольвата

Фигура 1b: XRPD Соединения I-1⋅ гидрата I

Фигура 2b: TGA Соединения I-1⋅ гидрата I

Фигура 3b: DSC Соединения I-1⋅ гидрата I

Фигура 4b: XRPD Соединения I-1⋅ гидрата II

Фигура 5b: Спектр твердотельного ¹³C ЯМР (вращение при 11 кГц) Соединения I-1⋅ гидрат II

Фигура 6b: Спектр твердотельного ¹⁹F ЯМР (вращение при 11 кГц) Соединения I-1⋅ гидрата II

Фигура 1c: XRPD Соединения I-I безводной формы A

Фигура 2c: TGA Соединения I-I безводной формы A

Фигура 3c: DSC Соединение I-I безводной формы A

Фигура 4c: представляет собой конформационный график Соединения I-1 безводной формы A на основе рентгеноструктурного анализа монокристалла.

Фигура 5c: представляет собой конформационный график, показывающий порядок укладки Соединения I-1⋅ безводной формы A.

Фигура 6c: Спектр твердотельного ¹³C ЯМР (вращение при 12,5 кГц) Соединения I-1⋅ безводной формы A

Фигура 7c: Спектр твердотельного ¹⁹F ЯМР (вращение при 12,5 кГц) Соединения I-1⋅ безводной формы A

Фигура 1d: XRPD Соединения I-1⋅ безводной формы B

Фигура 2d: TGA Соединения I-1⋅ безводной формы B

Фигура 3d: DSC Соединения I-1⋅ безводной формы B

Фигура 4d: Спектр твердотельного ¹³C ЯМР (вращение при 12,5 кГц) Соединения I-1⋅ безводной формы B

Фигура 5d: Спектр твердотельного ¹⁹F ЯМР (вращение при 12,5 кГц) Соединения I-1⋅ безводной формы B

Фигура 1e: XRPD Соединения I-1⋅ безводной формы C

Фигура 2e: TGA Соединения I-1⋅ безводной формы C

Фигура 3e: DSC Соединения I-1⋅ безводной формы C

Фигура 4e: Спектр твердотельного ¹³C ЯМР (вращение при 12,5 кГц) Соединения I-1⋅ безводной формы C

Фигура 5e: Спектр твердотельного ¹⁹F ЯМР (вращение при 12,5 кГц) Соединения I-1⋅ безводной формы C

Фигура 1f: XRPD Соединения I-1⋅ аморфной формы

Фигура 2f: DSC Соединения I-1⋅ аморфной формы

Фигура 3f: Спектр твердотельного ¹³C ЯМР (вращение при 12,5 кГц) Соединения I-1⋅ аморфного

Фигура 4f: Спектр твердотельного ¹⁹F ЯМР (вращение при 12,5 кГц) Соединения I-1⋅ аморфного

Фигура 1g: XRPD Соединения I-1⋅ DMSO сольвата

Фигура 2g: TGA Соединения I-1⋅ DMSO сольвата

Фигура 3g: DSC Соединения I-1⋅ DMSO сольвата

Фигура 1h: XRPD Соединения I-1⋅ DMAC сольвата

Фигура 2h: TGA Соединения I-1⋅ DMAC сольвата

Фигура 3h: DSC Соединение I-1⋅ DMAC сольвата

Фигура 1i: XRPD Соединения I-1⋅ ацетонового сольвата

Фигура 2i: TGA Соединения I-1⋅ ацетонового сольвата

Фигура 3i: DSC Соединения I-1⋅ ацетонового сольвата

Фигура 1j: XRPD Соединения I-1⋅ изопропанольного сольвата

Фигура 2j: TGA Соединения I-1⋅ изопропанольного сольвата

Фигура 3j: DSC Соединения I-1⋅ изопропанольного сольвата

Сущность изобретения

[0007] Настоящее изобретение относится к твердым формам ингибиторов ATR, к композициям, содержащим ингибиторы ATR, а также к дейтерированным ингибиторам ATR. Настоящее изобретение также относится к способам и промежуточным соединениям для получения соединений, пригодных для использования в качестве ингибиторов ATR киназы, таких как амино-пиразолопиримидиновые производные и родственные молекулы. Амино-пиразолопиримидиные производные являются пригодными для использования в качестве ингибиторов ATR и являются также пригодными для использования при получении ингибиторов ATR.

[0008] Один из аспектов настоящего изобретения предлагает способ получения соединения формулы I-A:

[0009] Другой аспект включает способ получения соединения формулы I-1:

[0010] Другой аспект настоящего изобретения содержит Соединение формулы I-B:

или его фармацевтически приемлемую соль или производное, где:

каждый из Y¹, Y², Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰, Y¹¹, Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ независимо представляет собой водород или дейтерий; при условии, что, по меньшей мере, один из Y¹, Y², Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰, Y¹¹, Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ представляет собой дейтерий

каждый из X¹, X², X⁴, X⁵, X⁶, X⁷, X⁸ и X⁹ независимо выбирается из ¹²C или ¹³C; и

X³ независимо выбирается из -¹²C(O)- или -¹³C(O)-.

[0011] Еще один аспект настоящего изобретения предлагает твердые формы соединения формулы I-1:

[0012] Некоторые варианты осуществления, описанные в настоящем документе, в целом, относятся к композиции, которая может содержать эффективное количество Соединения I-1 или полиморфной безводной формы Соединения I-1 (в дальнейшем “Форма A”) или фармацевтически приемлемую соль упоминаемых выше соединений.

[0013] Другие варианты осуществления, описанные в настоящем документе, в целом, относятся к способу приготовления таких композиций, описанных в настоящем документе (например, композиции, которая может содержать эффективное количество Соединения I-1 или Формы A, или фармацевтически приемлемой соли упоминаемых выше соединений). Другие варианты осуществления, описанные в настоящем документе, в целом, относятся к способу лечения рака с использованием композиции, описанной в настоящем документе.

[0014] Некоторые варианты осуществления, описанные в настоящем документе, в целом, относятся к использованию композиции, описанной в настоящем документе (например, композиции, которая включает эффективное количество Соединения I-1 или Формы A, или фармацевтически приемлемой соли упоминаемых выше соединений), при приготовлении лекарственного препарата для лечения рака.

[0015] Другие аспекты настоящего изобретения приводятся в настоящем документе.

Подробное описание изобретения

[0016] Для целей настоящей заявки, будет понятно, что термины вариант осуществления, пример и аспект используются взаимозаменяемо.

Способы

[0017] Другой аспект настоящего изобретения включает способ получения соединения формулы I-A:

включающий взаимодействие соединения формулы 6:

при соответствующих условиях с образованием амидной связи, где:

R¹ независимо выбирается из фтора, хлора или -C(J¹)₂CN;

J¹ независимо выбирается из H или C_1-2алкила; или

два присутствующих J¹ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют 3-4-членное необязательно замещенное карбоциклическое кольцо;

R² независимо выбирается из H; галогена; -CN; NH₂; C_1-2алкила, необязательно замещенного 0-3 присутствующими атомами фтора; или C_1-3алифатической цепи, где до двух метиленовых единиц алифатической цепи необязательно заменены -O-, -NR-, -C(O)- или -S(O)_n;

R³ независимо выбирается из H; галогена; C_1-4алкила, необязательно замещенного 1-3 присутствующими галогена; C_3-4циклоалкила; -CN; или C_1-3алифатической цепи, где до двух метиленовых единиц алифатической цепи необязательно заменены -O-, -NR-, -C(O)- или -S(O)_n;

R⁴ независимо выбирается из Q¹ или C_1-10алифатической цепи, где до четырех метиленовых единиц алифатической цепи необязательно заменены -O-, -NR-, -C(O)- или -S(O)_n-; каждый R⁴ необязательно замещается 0-5 присутствующими J^Q; или

R³ и R⁴, взятые вместе с атомами, с которыми они связываются, образуют 5-6-членное ароматическое или неароматическое кольцо, имеющее 0-2 гетероатома, выбранных из кислорода, азота или серы; кольцо, образованное R³ и R⁴, необязательно замещается 0-3 присутствующими J^Z;

Q¹ независимо выбирается из 3-7-членного полностью насыщенного, частично ненасыщенного или ароматического моноциклического кольца, 3-7-членного кольца, имеющего 0-3 гетероатома, выбранных из кислорода, азота или серы; или 7-12-членного полностью насыщенного, частично ненасыщенного или ароматического бициклического кольца, имеющего 0-5 гетероатомов, выбранных из кислорода, азота или серы;

J^z независимо выбирается из C_1-6алифатического соединения, =O, галогена или

O;

J^Q независимо выбирается из -CN; галогена; =O; Q²; или C_1-8алифатической цепи, где до трех метиленовых единиц алифатической цепи необязательно заменены -O-, -NR-, -C(O)- или -S(O)_n-; в каждом случае, когда J^Q является необязательно замещенным 0-3 присутствующими J^R; или

для двух присутствующих J^Q на одном и том же атоме, они берутся вместе с атомом, с которым они соединены, и образуют 3-6-членное кольцо, имеющее 0-2 гетероатома, выбранных из кислорода, азота или серы; где кольцо образуется из двух присутствующих J^Q, необязательно замещенных 0-3 присутствующими J^X; или

для двух присутствующих J^Q, вместе с Q¹, они образуют 6-10-членную насыщенную или частично ненасыщенную соединенную мостиком кольцевую систему;

Q² независимо выбирается из 3-7-членного полностью насыщенного, частично ненасыщенного или ароматического моноциклического кольца, имеющего 0-3 гетероатома, выбранных из кислорода, азота или серы; или 7-12 членного полностью насыщенного, частично ненасыщенного или ароматического бициклического кольца, имеющего 0-5 гетероатомов, выбранных из кислорода, азота или серы;

J^R независимо выбирается из -CN; галогена; =O;

O; Q³; или C_1-6алифатической цепи, где до трех метиленовых единиц алифатической цепи необязательно заменены -O-, -NR-, -C(O)- или -S(O)_n-; каждый J^Rнеобязательно замещается 0-3 присутствующими J^T; или

для двух присутствующих J^R на одном и том же атоме, вместе с атомом, с которым они соединены, они образуют 3-6-членное кольцо, имеющее 0-2 гетероатома, выбранных из кислорода, азота или серы; где кольцо, образованное из двух присутствующих J^R, является необязательно замещенным 0-3 присутствующими J^X; или

два присутствующих J^R, вместе с Q², образуют 6-10-членную насыщенную или частично ненасыщенную соединенную мостиком кольцевую систему;

Q³ представляет собой 3-7-членное полностью насыщенное, частично ненасыщенное или ароматическое моноциклическое кольцо, имеющее 0-3 гетероатома, выбранных из кислорода, азота или серы; или 7-12-членное полностью насыщенное, частично ненасыщенное или ароматическое бициклическое кольцо, имеющее 0-5 гетероатомов, выбранных из кислорода, азота или серы;

J^X независимо выбирается из -CN; =O; галогена; или C_1-4алифатической цепи, где до двух метиленовых единиц алифатической цепи необязательно заменены -O-, -NR-, -C(O)- или -S(O)_n-;

J^T независимо выбирается из галогена, -CN;

O; =O; -OH; C_1-6алифатической цепи, где до двух метиленовых единиц алифатической цепи необязательно заменены -O-, -NR-, -C(O)- или -S(O)_n-; или 3-6-членного неароматического кольца, имеющего 0-2 гетероатома, выбранных из кислорода, азота или серы; каждый присутствующий J^T является необязательно замещенным 0-3 присутствующими J^M; или

два J^T, присутствующих на одном и том же атоме, вместе с атомом, с которым они соединены, образуют 3-6-членное кольцо, имеющее 0-2 гетероатома, выбранных из кислорода, азота или серы; или

два присутствующих J^T вместе с Q³ образуют 6-10-членную насыщенную или частично ненасыщенную соединенную мостиком кольцевую систему;

J^M независимо выбирается из галогена или C_1-6алифатической группы;

J представляет собой H или Cl;

n равно 0, 1 или 2 и

R независимо выбирается из H или C_1-4алифатической группы.

[0018] Для целей настоящей заявки, будет понятно, что когда два присутствующих J^Q вместе с Q¹ образуют соединенную мостиком кольцевую систему, два присутствующих J^Q присоединены к отдельным атомам Q¹. В дополнение к этому, когда два присутствующих J^R вместе с Q² образуют соединенную мостиком кольцевую систему, два присутствующих J^R присоединены к отдельным атомам Q². Кроме того, когда два присутствующих J^T вместе с Q³ образуют соединенную мостиком кольцевую систему, два присутствующих J^Tприсоединены к отдельным атомам Q³.

[0019] Специалистам в данной области будет понятно, что стрелка в

O представляет собой донорно-акцепторную связь.

Условия реакции

[0020] В некоторых примерах, соответствующие условия для образования амидной связи включают взаимодействие соединения формулы 6 с замещенным 3-аминопиридином в апротонном растворителе при нагреве. В других примерах, апротонный растворитель выбирается из NMP, необязательно замещенного пиридина или DMF. В другом варианте осуществления, апротонный растворитель представляет собой необязательно замещенный пиридин. В других вариантах осуществления, температура реакции составляет, по меньшей мере, 80°C. В другом варианте осуществления, температура реакции составляет, по меньшей мере, 100°C.

[0021] В другом варианте осуществления, способ, описанный выше, дополнительно включает получение соединения формулы 6:

посредством взаимодействия соединения формулы 5:

при соответствующих условиях с образованием активированного сложного эфира, где R¹ и J являются такими, как определено в настоящем документе.

[0022] В некоторых вариантах осуществления, соответствующие условия для образования активированного сложного эфира включают взаимодействие соединения формулы 5 с агентом для образования амидной связи в присутствии органического основания. В других вариантах осуществления, органическое основание представляет собой алифатический амин. В других вариантах осуществления, органическое основание независимо выбирается из триэтиламина или DIPEA. В одном или нескольких вариантах осуществления, агент для образования амидной связи независимо выбирается из TBTU, TCTU, HATU, T3P или COMU. В другом варианте осуществления, агент для образования амидной связи независимо выбирается из TBTU или TCTU. В другом варианте осуществления, агент для образования амидной связи представляет собой TCTU.

[0023] Другой аспект настоящего изобретения включает способ получения соединения формулы I-A:

включающий взаимодействие соединения формулы 5:

при соответствующих условиях с образованием амидной связи, где R¹, R², R³ и R⁴ являются такими, как определено в настоящем документе.

[0024] Еще один аспект настоящего изобретения включает способ получения соединения формулы 5:

посредством взаимодействия соединения формулы 4:

при соответствующих гидролитических условиях, где R¹ является таким, как определено в настоящем документе.

[0025] В некоторых вариантах осуществления, соответствующие гидролитические условия включают взаимодействие соединения формулы 4 с силаном в присутствии металлического катализатора. В других вариантах осуществления, силан представляет собой фенилсилан. В другом варианте осуществления, металлический катализатор представляет собой палладиевый катализатор. В другом варианте осуществления, палладиевый катализатор представляет собой Pd(PPh₃)₄. В другом варианте осуществления соответствующие гидролитические условия включают взаимодействие соединения формулы 4 с 4-метилбензолсульфинатом в присутствии металлического катализатора.

[0026] В других вариантах осуществления, соответствующие гидролитические условия включают взаимодействие соединения формулы 4 с водным раствором щелочи. В некоторых вариантах осуществления, водный раствор щелочи выбирается из раствора LiOH, NaOH или KOH.

[0027] Другой аспект настоящего изобретения включает способ получения соединения формулы 4:

посредством взаимодействия соединения формулы 3:

при соответствующих условиях конденсации с образованием пиримидинового кольца.

[0028] В некоторых вариантах осуществления, соответствующие условия конденсации с образованием пиримидинового кольца включают взаимодействие соединения формулы 3 с 1,3-диэлектрофильными частицами в присутствии растворителя. В другом варианте осуществления, 1,3-диэлектрофильные частицы выбираются из 1,3-диальдегида или 3-(диалкиламино)-проп-2-еналя. В других вариантах осуществления, растворитель выбирается из DMF или DMSO. В других вариантах осуществления, 1,3-диэлектрофильные частицы генерируются in situ из защищенных 1,3-диэлектрофильных частиц. В другом варианте осуществления, 1,3-диэлектрофильные частицы генерируются из кеталя в присутствии сульфоновой кислоты. В другом варианте осуществления, сульфоновая кислота представляет собой PTSA.

[0029] Другой аспект настоящего изобретения включает способ получения соединения формулы 3:

посредством взаимодействия соединения формулы 2:

при соответствующих условиях конденсации с образованием пиразольного кольца.

[0030] В некоторых вариантах осуществления, соответствующие условия конденсации с образованием пиразольного кольца включают взаимодействие соединения формулы 2 с гидразином или гидразином гидратом в присутствии апротонного растворителя при основных условиях. В другом варианте осуществления, апротонный растворитель представляет собой DMF. В другом варианте осуществления, основные условия включают взаимодействие соединения формулы 2 в присутствии ацетата калия или ацетата натрия.

[0031] Еще один аспект настоящего изобретения включает способ получения соединения формулы 2:

посредством взаимодействия соединения формулы 1:

при соответствующих условиях анионной конденсации.

[0032] В некоторых вариантах осуществления, соответствующие условия анионной конденсации включают 1) взаимодействие соединения формулы 1 с основанием в присутствии растворителя, с генерированием аниона соединения формулы 1; и 2) взаимодействие аниона соединения формулы 1 с трихлорацетонитрилом. В других вариантах осуществления, основание представляет собой ацетат калия. В другом варианте осуществления, растворитель представляет собой спирт. В других вариантах осуществления, растворитель представляет собой изопропиловый спирт.

[0033] Один из вариантов осуществления настоящего изобретения включает способ получения соединения формулы I-A:

включающий взаимодействие соединения формулы 9:

при соответствующих условиях конденсации с образованием пиримидинового кольца, где R¹, R², R³ и R⁴ являются такими, как определено в настоящем документе.

[0034] В некоторых вариантах осуществления, соответствующие условия конденсации с образованием пиримидинового кольца включают взаимодействие соединения формулы 9 с 1,3-диэлектрофильными частицами в присутствии растворителя. В другом варианте осуществления, 1,3-диэлектрофильные частицы выбираются из 1,3-диальдегида или 3-(диалкиламино)-проп-2-еналя. В других вариантах осуществления, растворитель выбирается из раствора DMF или DMSO в воде. В других вариантах осуществления, 1,3-диэлектрофильные частицы генерируются in situ из защищенных 1,3-диэлектрофильных частицы. В другом варианте осуществления, 1,3-диэлектрофильные частицы генерируются из кеталя в присутствии сульфоновой кислоты. В другом варианте осуществления, сульфоновая кислота представляет собой PTSA.

[0035] Другой вариант осуществления настоящего изобретения включает способ получения соединения формулы 9:

посредством взаимодействия соединения формулы 8:

[0036] В некоторых вариантах осуществления, соответствующие условия конденсации с образованием пиразольного кольца включают 1) взаимодействие соединения формулы 8 с основанием, в присутствии растворителя, для генерирования аниона соединения формулы 8; 2) взаимодействие аниона с трихлорацетонитрилом и 3) взаимодействие продукта из 2) с гидразином или гидразином гидратом в присутствии апротонного растворителя. В другом варианте осуществления, апротонный растворитель представляет собой NMP или DMF. В некоторых вариантах осуществления, основание выбирается из ацетата натрия или ацетата калия.

[0037] Еще один вариант осуществления включает способ получения соединения формулы 8:

посредством взаимодействия соединения формулы 7:

при соответствующих условиях с образованием амидной связи.

[0038] В некоторых примерах, соответствующие условия для образования амидной связи включают взаимодействие соединения формулы 7 с замещенным 3-аминопиридином, с агентом для образования амидной связи в присутствии апротонного растворителя и органического основания. В других примерах, апротонный растворитель выбирается из NMP или DMF. В другом варианте осуществления, органическое основание представляет собой алифатический амин. В других вариантах осуществления, органическое основание независимо выбирается из триэтиламина или DIPEA. В другом варианте осуществления, агент для образования амидной связи независимо выбирается из TBTU или TCTU.

Синтез Соединения I-1

[0039] Другой аспект настоящего изобретения предлагает способ получения соединения формулы I-1:

включающий стадию взаимодействия соединения формулы 30:

с соединением формулы 25:

[0040] Другие варианты осуществления настоящего изобретения предлагают способ получения соединения формулы 30:

посредством взаимодействия соединения формулы 28:

при соответствующих условиях снятия защиты с образованием карбоновой кислоты.

[0041] Другой вариант осуществления предлагает способ получения соединения формулы 28:

посредством взаимодействия соединения формулы 6a*:

с соединением формулы 27:

[0042] В некоторых вариантах осуществления, соответствующие условия для образования амидной связи включают взаимодействие соединения формулы 30 с соединением формулы 25 в присутствии партнера для образования амидной связи, апротонного растворителя и основания. В других вариантах осуществления, апротонный растворитель независимо выбирается из NMP, DMF или тетрагидрофурана. В других вариантах осуществления, апротонный растворитель представляет собой тетрагидрофуран. В другом варианте осуществления, основание представляет собой алифатический амин. В другом варианте осуществления, основание представляет собой DIPEA. В некоторых вариантах осуществления, партнер для образования амидной связи независимо выбирается из CDI, TBTU или TCTU. В одном или нескольких вариантах осуществления, партнер для образования амидной связи представляет собой TCTU. В другом варианте осуществления, партнер для образования амидной связи представляет собой CDI.

[0043] В других вариантах осуществления, соответствующие условия снятия защиты включают взаимодействие соединения формулы 28 с кислотой в присутствии растворителя. В некоторых вариантах осуществления, кислота представляет собой HCl. В другом варианте осуществления, растворитель представляет собой 1,4-диоксан.

[0044] В другом варианте осуществления, соответствующие условия для образования амидной связи включают взаимодействие соединения формулы 6a* с соединением формулы 27 в апротонном растворителе при нагреве. В других вариантах осуществления, апротонный растворитель независимо выбирается из NMP, пиридина или DMF. В другом варианте осуществления, апротонный растворитель представляет собой пиридин. В некоторых вариантах осуществления, реакция осуществляется при температуре, по меньшей мере, 80°C.

[0045] Другой аспект настоящего изобретения предлагает способ получения соединения формулы 27:

включающий стадию взаимодействия соединения формулы 26:

при соответствующих условиях с образованием амина.

[0046] В некоторых вариантах осуществления, соответствующие условия для образования амина включают взаимодействие соединения формулы 27 при условиях аминирования Бухвальда-Хартвига, известных специалистам в данной области.

[0047] Еще один вариант осуществления предлагает способ получения соединения формулы 26:

посредством 1) взаимодействия соединения формулы 18:

при соответствующих условиях галогенного обмена для генерирования соединения формулы 32

2) взаимодействия соединения формулы 32:

с соединением формулы 22:

при соответствующих условиях вытеснения.

[0048] В некоторых вариантах осуществления, соответствующие условия галогенного обмена включают взаимодействие соединения формулы 18 с фторидом калия в присутствии апротонного растворителя и катализатора с переносом фазы. В других вариантах осуществления, апротонный растворитель независимо выбирается из DMSO, DMF или сульфолана. В других вариантах осуществления, катализатор с переносом фазы представляет собой Me₄NCl. В других вариантах осуществления, соответствующие условия вытеснения включают взаимодействие соединения формулы 32 с соединением формулы 22 в присутствии основания. В другом варианте осуществления, основание представляет собой алифатический амин. В некоторых вариантах осуществления, алифатический амин представляет собой DIPEA.

[0049] Другие варианты осуществления настоящего изобретения предлагают способ получения соединения формулы 18:

посредством взаимодействия соединения формулы 31:

при соответствующих условиях галогенирования.

[0050] В некоторых вариантах осуществления, соответствующие условия галогенирования включают 1) взаимодействие соединения формулы 31 с основанием для генерирования аниона и 2) взаимодействие аниона с хлорирующим агентом. В другом варианте осуществления, основание представляет собой LDA. В другом варианте осуществления, хлорирующий агент представляет собой 1,1,1,2,2,2-гексахлорэтан.

[0051] Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения предлагают способ получения соединения формулы I-1:

включающий стадию взаимодействия соединения формулы 33:

с соединением формулы 25:

[0052] В некоторых вариантах осуществления, соответствующие условия для образования амидной связи включают взаимодействие соединения формулы 33 с соединением формулы 25 в присутствии партнера для образования амидной связи, апротонного растворителя и основания. В других вариантах осуществления, апротонный растворитель независимо выбирается из NMP, DMF или тетрагидрофурана. В других вариантах осуществления, апротонный растворитель представляет собой тетрагидрофуран. В другом варианте осуществления, основание представляет собой алифатический амин. В другом варианте осуществления, основание представляет собой DIPEA. В некоторых вариантах осуществления, партнер для образования амидной связи независимо выбирается из TBTU или TCTU. В одном или нескольких вариантах осуществления, партнер для образования амидной связи представляет собой TCTU.

[0053] Еще один вариант осуществления предлагает способ получения соединения формулы 33:

включающий стадию взаимодействия соединения формулы 28:

при соответствующих условиях снятия защиты.

[0054] В некоторых вариантах осуществления, соответствующие условия снятия защиты для расщепления сложного трет-бутилового эфира включают взаимодействие соединения формулы 28 с кислотой в присутствии растворителя. В одном из вариантов осуществления, кислота выбирается, но, не ограничиваясь этим, из метансульфоновой кислоты (предпочтительно), PTSA, TFA или HCl. В других вариантах осуществления, растворитель выбирается, но, не ограничиваясь этим, из 1,4-диоксана или ацетонитрила. В другом варианте осуществления, растворитель представляет собой ацетонитрил.

[0055] Другой вариант осуществления предлагает способ получения соединения формулы 4a:

включающий стадии:

a) взаимодействия соединения формулы 35:

где R° представляет собой C_1-6алифатическое соединение,

при кислотных условиях с образованием соединения формулы 36:

b) взаимодействия соединения формулы 36 с электрофильным фторирующим агентом с образованием соединения формулы 38:

c) взаимодействия соединения формулы 38 с соединением формулы 3:

при соответствующих условиях конденсации с образованием соединения формулы 4a.

[0056] В некоторых вариантах осуществления, R° независимо выбирается из метила, этила, пропила, изопропила, бутила и пентила. В других вариантах осуществления, R° независимо выбирается из метила или этила.

[0057] В другом варианте осуществления, электрофильный фторирующий агент представляет собой 1-(хлорметил)-4-фтор-1,4-диазониабицикло[2,2,2]октан дитетрафторборат. В других вариантах осуществления, электрофильный фторирующий агент представляет собой газообразный фтор.

[0058] В другом варианте осуществления, соответствующие условия конденсации включают взаимодействие соединения формулы 38 с соединением формулы 3 в присутствии растворителя и при нагреве. В некоторых вариантах осуществления, растворитель выбирается из DMF или DMSO.

[0059] Еще один вариант осуществления предлагает способ получения соединения формулы I-1:

включающий стадии:

a) взаимодействия соединения формулы 6a*:

с соединением формулы 27:

при соответствующих условиях образования амидной связи с образованием соединения формулы 28:

b) очистки соединения формулы 28 с использованием соответствующего хелатирующего агента для палладия;

c) взаимодействия соединения формулы 28 при соответствующих условиях снятия защиты с образованием соединения формулы 30

d) взаимодействия соединения формулы 30 с соединением формулы 25:

при соответствующих условиях образования амидной связи с образованием соединения формулы I-1.

[0060] В некоторых вариантах осуществления, соответствующий хелатирующий агент для палладия независимо выбирается из пропан-1,2-диамина; этан-1,2-диамина; этан-1,2-диамина; пропан-1,3-диамина; тетраметилэтилендиамина; этиленгликоля; 1,3-бис(дифенилфосфанил)пропана; 1,4-бис(дифенилфосфанил)бутана; и 1,2-бис(дифенилфосфанил)этан/Pr-1,2-диамина. В других вариантах осуществления, соответствующий хелатирующий агент для палладия представляет собой пропан-1,2-диамин.

[0061] Другой вариант осуществления предлагает способ получения соединения формулы 28:

включающий стадии:

a) взаимодействия соединения формулы 5a

при соответствующих условиях галогенирования с образованием соединения формулы 34:

где X представляет собой галоген;

b) взаимодействия соединения формулы 34 с соединением формулы 27:

при соответствующих условиях образования амидной связи с образованием соединения формулы 28.

[0062] В некоторых вариантах осуществления X независимо выбирается из фтора или хлора. В другом варианте осуществления, X представляет собой хлор. В некоторых вариантах осуществления, соответствующие условия галогенирования включают взаимодействие соединения формулы 5a с галогенирующим агентом и основанием в присутствии растворителя. В другом варианте осуществления галогенирующий агент представляет собой SOCl₂. В некоторых вариантах осуществления, основание представляет собой триэтиламин. В других вариантах осуществления, растворитель представляет собой DCM.

[0063] Еще один аспект настоящего изобретения предлагает способ получения соединения формулы I-1:

включающий стадии:

a) взаимодействия соединения формулы 5a

где X представляет собой галоген;

Дейтерированные соединения

[0064] В другом варианте осуществления, изотопы могут вводиться в соединение I-1 посредством выбора соответствующих групп, которые содержат атомы изотопов (либо коммерчески доступные, либо такие, которые могут быть получены в соответствии со способами, известными специалистам в данной области), и включения их в последовательность, сходную с той, о которой сообщается для немеченого материала.

[0065] Другой аспект настоящего изобретения предлагает соединение формулы I-B:

или его фармацевтически приемлемую соль, где:

каждый Y¹, Y², Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰, Y¹¹, Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ независимо представляет собой водород или дейтерий; при условии, что, по меньшей мере, один из Y¹, Y², Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰, Y¹¹, Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ представляет собой дейтерий

каждый X¹, X², X⁴, X⁵, X⁶, X⁷, X⁸ и X⁹ независимо выбирается из ¹²C или ¹³C; и

[0066] Следующие меченые молекулярные строительные блоки, которые можно использовать в способе синтеза для получения соединения формулы I-B, все, являются коммерчески доступными:

2,2,3,3,5,5,6,6-октадейтеропиперазин;

2,3,5,6-тетра -¹³C-пиперазин;

2,2,3,3,4,5,5,6,6-нонадейтеропиперидин-4-карбоновая кислота;

1,2-Ди¹³C-2-цианоуксусная кислота;

сложный этиловый эфир 1-¹³C-2-циано(¹³C)уксусной кислоты и

сложный этиловый эфир 2-¹³C-2-циано(¹³C)уксусной кислоты.

[0067] Другие меченые молекулярные строительные блоки, которые можно использовать в способе синтеза для получения соединения формулы I-B, известны специалистам в данной области. Они могут включать, но, не ограничиваясь этим, следующие далее меченые молекулярные строительные блоки:

2-¹³C-оксетан-3-он;

3-¹³C-оксетан-3-он;

2,2,3,3-тетрадейтеропиперазин;

2,2,5,5-тетрадейтеропиперазин;

сложный этиловый эфир 4-дейтеропиперидин-4-карбоновой кислоты;

2-циано(¹³C)уксусную кислоту;

1-¹³C-2-цианоуксусную кислоту;

2-¹³C-2-цианоуксусную кислоту и

1-дейтеро-3-(диэтиламино)-2-фторакрилальдегид;

[0068] В одном или нескольких вариантах осуществления, Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ представляют собой дейтерий и Y¹, Y², Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰ и Y¹¹независимо выбираются из водорода или дейтерия. В другом варианте осуществления, Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ представляют собой дейтерий и Y¹, Y², Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰ и Y¹¹ представляют собой водород.

[0069] В другом варианте осуществления, X¹, X², X⁴, X⁵, X⁶, X⁷, X⁸ и X⁹представляют собой ¹²C; и

X³ представляет собой -¹²C(O)-. В других вариантах осуществления, X¹, X⁴, X⁵, X⁶, X⁷, X⁸, и X⁹ представляют собой ¹²C; X³ представляет собой -¹³C(O)- и X² представляет собой ¹³C.

[0070] В некоторых вариантах осуществления, Y¹¹, Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ представляют собой дейтерий и Y¹, Y², Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹ и Y¹⁰ независимо выбираются из водорода или дейтерия. В других вариантах осуществления, Y¹¹, Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ представляют собой дейтерий и Y¹, Y², Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸ Y⁹ и Y¹⁰ представляют собой водород.

[0071] В другом варианте осуществления, Y², Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ представляют собой дейтерий и Y¹, Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰ и Y¹¹ независимо выбираются из водорода или дейтерия. В другом аспекте настоящего изобретения, Y², Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ представляют собой дейтерий и Y¹, Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰ и Y¹¹ представляют собой водород.

[0072] В некоторых вариантах осуществления, Y¹², Y¹³, Y¹⁸ и Y¹⁹ представляют собой дейтерий и Y¹, Y², Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰, Y¹¹, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶ и Y¹⁷ представляют собой водород или дейтерий. В других вариантах осуществления, Y¹², Y¹³, Y¹⁸ и Y¹⁹ представляют собой дейтерий и Y¹, Y², Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰, Y¹¹, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶ и Y¹⁷ представляют собой водород.

[0073] В одном или нескольких вариантах осуществления, Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰ и Y¹¹ представляют собой дейтерий и Y¹, Y², Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ независимо выбираются из дейтерия или водорода. В другом варианте осуществления, Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰ и Y¹¹ представляют собой дейтерий и Y¹, Y², Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ представляют собой водород.

[0074] В другом варианте осуществления, Y² и Y¹¹представляют собой дейтерий и Y¹, Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰, Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ представляют собой дейтерий или водород. В других вариантах осуществления, Y² и Y¹¹представляют собой дейтерий и Y¹, Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰, Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹представляют собой водород.

[0075] В некоторых вариантах осуществления, Y² представляет собой дейтерий и Y¹, Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰, Y¹¹, Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ представляют собой дейтерий или водород. В другом варианте осуществления, Y² представляет собой дейтерий и Y¹, Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰, Y¹¹, Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ представляют собой водород.

[0076] В других вариантах осуществления, X¹, X², X⁴, X⁵, X⁶, X⁷ и X⁸ представляют собой ¹²C; X³ представляет собой -¹²C(O)- и X⁹ представляет собой ¹³C. В другом варианте осуществления, X¹, X², X⁸ и X⁹представляют собой¹²C; X³ представляет собой -¹²C(O)- и X⁴, X⁵, X⁶ и X⁷ представляют собой¹³C. В другом варианте осуществления, X², X⁴, X⁵, X⁶, X⁷, X⁸ и X⁹ представляют собой¹²C; X³ представляет собой -¹²C(O)- и X¹ представляет собой ¹³C. В других вариантах осуществления, X², X⁴, X⁵, X⁶, X⁷ и X⁹ представляют собой¹²C; X³ представляет собой -¹³C(O)- и X¹ и X⁸ представляют собой¹³C.

[0077] В некоторых вариантах осуществления, Y¹¹ представляет собой дейтерий и Y¹, Y², Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰, Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ независимо выбираются из водорода или дейтерия. В другом варианте осуществления, Y¹¹ представляет собой дейтерий и Y¹, Y², Y³, Y⁴, Y⁵, Y⁶, Y⁷, Y⁸, Y⁹, Y¹⁰, Y¹², Y¹³, Y¹⁴, Y¹⁵, Y¹⁶, Y¹⁷, Y¹⁸ и Y¹⁹ представляют собой водород.

[0078] В другом варианте осуществления, X¹, X⁴, X⁵, X⁶, X⁷, X⁸ и X⁹ представляют собой ¹²C; X³ представляет собой -¹²C(O)- и X² представляет собой ¹³C.

[0079] В другом примере, соединения формулы I-B по настоящему изобретению представлены в Таблице 1. Специалистам в данной области будет очевидно, что соединения по настоящему изобретению могут быть представлены в различных таутомерных формах.

Таблица

Твердые формы

[0080] Другой аспект настоящего изобретения предлагает твердую форму Соединения формулы I-1:

где форма выбирается из группы, состоящей из Соединения I-1⋅ этанольного сольвата, Соединения I-1⋅ гидрата I, Соединения I-1⋅ гидрата II, Соединения I-1⋅ безводной формы A, Соединения I-1⋅ безводной формы B, Соединения I-1⋅ безводной формы C, Соединения I-1⋅ DMSO сольвата, Соединения I-1⋅ DMAC сольвата, Соединения I-1⋅ ацетонового сольвата и Соединения I-1⋅ изопропанольного сольвата.

Соединение I-1⋅ этанольный сольват

[0081] В некоторых аспектах настоящего изобретения, твердая форма представляет собой Соединение I-1⋅ этанольный сольват. В другом аспекте настоящего изобретения, твердая форма представляет собой кристаллическое Соединение I-1⋅ этанольный сольват. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ этанольный сольват имеет отношение Соединения I-1⋅ к этанолу примерно 1:0,72. В другом аспекте настоящего изобретения, кристаллическое Соединение I-1⋅ этанольный сольват характеризуется потерями массы примерно 5,76% в диапазоне температур примерно от 166°C примерно до 219°C. Еще в одном аспекте настоящего изобретения, кристаллическое Соединение I-1⋅ этанольный сольват характеризуется одним или несколькими пиками, выраженными в единицах 2 тэта ±0,2, примерно при 17,2, 19,7, 23,8, 24,4 и 29,0 градуса на картине дифракции рентгеновского излучения на порошках, полученной с использованием излучения Cu K альфа. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ этанольный сольват характеризуется как имеющее картину дифракции рентгеновского излучения на порошках по существу такую же, как это показано на Фигуре 1a. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ этанольный сольват характеризуется как имеющее один или несколько пиков, соответствующих 175,4±0,3 м.д., 138,0±0,3 м.д., 123,1±0,3 м.д., 57,8±0,3 м.д., 44,0±0,3 м.д. и 19,5±0,3 м.д. в спектре твердотельного C¹³ ЯМР. В другом варианте осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ этанольный сольват характеризуется как имеющее один или несколько пиков, соответствующих -136,0±0,3 м.д. и -151,6±0,3 м.д. в спектре твердотельного F¹⁹ ЯМР.

Соединение I-1⋅ гидрат I

[0082] В некоторых аспектах настоящего изобретения, твердая форма представляет собой Соединение I-1⋅ гидрат I. В другом аспекте настоящего изобретения, твердая форма представляет собой кристаллическое Соединение I-1⋅ гидрат I. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ гидрат I имеет отношение Соединения I-1 к H₂O примерно 1:4,5. В другом варианте осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ гидрат I характеризуется потерями массы примерно 14,56% в диапазоне температур примерно от 25°C примерно до 100°C. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ гидрат I характеризуется одним или несколькими пиками, выраженными в единицах 2 тэта ±0,2, примерно при 6,5, 12,5, 13,7, 18,8 и 26,0 градуса на картине дифракции рентгеновского излучения на порошках, полученной с использованием излучения Cu K альфа. В другом варианте осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ гидрат I характеризуется как имеющее картину дифракции рентгеновского излучения на порошках по существу такую же, как это показано на Фигуре 1b.

Соединение I-1⋅ гидрат II

[0083] В некоторых аспектах настоящего изобретения, твердая форма представляет собой Соединение I-1⋅ гидрат II. В другом аспекте настоящего изобретения, твердая форма представляет собой кристаллическое Соединение I-1⋅ гидрат II. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ гидрат II характеризуется одним или несколькими пиками, выраженными в единицах 2 тэта ±0,2, примерно при 10,1, 11,3, 11,9, 20,2 и 25,1 градуса на картине дифракции рентгеновского излучения на порошках, полученной с использованием излучения Cu K альфа. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ гидрат II характеризуется как имеющее один или несколько пиков, соответствующих 177,0±0,3 м.д., 158,2±0,3 м.д., 142,9±0,3 м.д., 85,1±0,3 м.д., 58,9±0,3 м.д., и 31,9±0,3 м.д. в спектре твердотельного C¹³ ЯМР. В другом варианте осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ гидрат II характеризуется как имеющее один или несколько пиков, соответствующих -138,0±0,3 м.д. и -152,7±0,3 м.д. в спектре твердотельного F¹⁹ ЯМР.

Соединение I-1⋅ безводная форма A

[0084] В один из вариантов осуществления, твердая форма представляет собой Соединение I-1⋅ безводную форму A. В другом варианте осуществления, твердая форма представляет собой кристаллическое Соединение I-1⋅ безводную форму A. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1 безводная форма A характеризуется потерями массы примерно 0,96% в диапазоне температур примерно от 25°C примерно до 265°C. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ безводная форма A характеризуется одним или несколькими пиками, выраженными в единицах 2 тэта ±0,2, примерно при 6,1, 12,2, 14,5, 22,3 и 31,8 градуса на картине дифракции рентгеновского излучения на порошках, полученной с использованием излучения Cu K альфа. В другом варианте осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ безводная форма A характеризуется как имеющее картину дифракции рентгеновского излучения на порошках по существу такую же, как это показано на Фигуре 1c. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ безводная форма A характеризуется как имеющее один или несколько пиков, соответствующих 175,9±0,3 м.д., 138,9±0,3 м.д., 74,1±0,3 м.д., 42,8±0,3 м.д. и 31,5±0,3 м.д. в спектре твердотельного C¹³ ЯМР. В другом варианте осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ безводная форма A характеризуется как имеющее один или несколько пиков, соответствующих -136,8±0,3 м.д. и -155,7±0,3 м.д. в спектре твердотельного F¹⁹ ЯМР. Один из вариантов осуществления описывает способ получения Соединения I-1⋅ безводной формы A, включающий перемешивание суспензии, содержащей Соединение I-1⋅ этанольный сольват и пригодный для использования органический растворитель. В другом варианте осуществления, пригодный для использования органический растворитель представляет собой тетрагидрофуран. Другой аспект настоящего изобретения описывает способ получения Соединения I-1⋅ безводной формы A, включающий перемешивание суспензии, содержащей Соединение I-1⋅ аморфное, изопропанол и воду. В некоторых вариантах осуществления, суспензию нагревают до температуры в пределах примерно между 65°C и примерно 80°C. В другом варианте осуществления, суспензию нагревают до температуры в пределах примерно между 70°C и примерно 75°C. В других вариантах осуществления, Соединение I-1⋅ безводная форма A характеризуется как кристаллическая форма Соединения I-1, имеющая моноклинную кристаллическую систему, центросимметричную пространственную группу P21/c и следующие параметры элементарной ячейки:

a=15,29(3)Åα=90°

b=12,17(2)Åβ=107,22(3)°

c=14,48(3)Åγ=90°.

Соединение I-1⋅ безводная форма B

[0085] Как используется в настоящем документе, “безводная форма B” относится к THF сольватной форме Соединения I-1. В некоторых вариантах осуществления, твердая форма представляет собой Соединение I-1⋅ безводную форму B. В другом варианте осуществления, твердая форма представляет собой кристаллическое Соединение I-1⋅ безводную форму B. В другом варианте осуществления кристаллическое Соединение I-1⋅ безводная форма B характеризуется потерями массы примерно 2,5% в диапазоне температур примерно от 25°C примерно до 175°C. В других вариантах осуществления, Соединение I-1⋅ безводная форма B характеризуется одним или несколькими пиками, выраженными в единицах 2 тэта ±0,2, примерно при 7,2, 8,3, 12,9, 19,5, и 26,6 градуса на картине дифракции рентгеновского излучения на порошках, полученной с использованием излучения Cu K альфа. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ безводная форма B характеризуется как имеющее картину дифракции рентгеновского излучения на порошках по существу такую же, как это показано на Фигуре 1d. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ безводная форма B характеризуется как имеющее один или несколько пиков, соответствующих 173,4±0,3 м.д., 164,5±0,3 м.д., 133,5±0,3 м.д., 130,8±0,3 м.д., 67,7±0,3 м.д., 45,3±0,3 м.д. и 25,9±0,3 м.д. в спектре твердотельного C¹³ ЯМР. В другом варианте осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ безводная форма B характеризуется как имеющее один или несколько пиков, соответствующих -138,0±0,3 м.д. и -153,5±0,3 м.д. в спектре твердотельного F¹⁹ ЯМР.

Соединение I-1⋅ безводная форма C

[0086] В некоторых вариантах осуществления, твердая форма представляет собой Соединение I-1⋅ безводную форму C.

В другом варианте осуществления, твердая форма представляет собой кристаллическое Соединение I-1⋅ безводную форму C. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ безводная форма C характеризуется одним или несколькими пиками, выраженными в единицах 2 тэта ±0,2, примерно при 6,8, 13,4, 15,9, 30,9 и 32,9 градуса на картине дифракции рентгеновского излучения на порошках, полученной с использованием излучения Cu K альфа. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ безводная форма C характеризуется как имеющее картину дифракции рентгеновского излучения на порошках по существу такую же, как это показано на Фигуре 1e. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ безводная форма C характеризуется как имеющее один или несколько пиков, соответствующих 175,2±0,3 м.д., 142,5±0,3 м.д., 129,6±0,3 м.д., 73,5± 0,3 м.д., 54,0±0,3 м.д. и 46,7±0,3 м.д. в спектре твердотельного C¹³ ЯМР. В другом варианте осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ безводная форма C характеризуется как имеющее один или несколько пиков, соответствующих -131,2±0,3 м.д. и -150,7±0,3 м.д. в спектре твердотельного F¹⁹ ЯМР.

Соединение I-1⋅ аморфное

[0087] В некоторых вариантах осуществления, твердая форма представляет собой Соединение I-1⋅ аморфное. В другом варианте осуществления, твердая форма представляет собой кристаллическое Соединение I-1⋅ аморфное. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ аморфное характеризуется как имеющее один или несколько пиков, соответствующих 173,8±0,3 м.д., 144,2±0,3 м.д., 87,5±0,3 м.д., 45,6±0,3 м.д., и 29,5±0,3 м.д. в спектре твердотельного C¹³ ЯМР. В другом варианте осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ аморфное характеризуется как имеющее один или несколько пиков, соответствующих -137,7±0,3 м.д. и -153,1±0,3 м.д. в спектре твердотельного F¹⁹ ЯМР.

Соединение I-1⋅ DMSO сольват

[0088] В один из вариантов осуществления, твердая форма представляет собой Соединение I-1⋅ DMSO сольват. В другом варианте осуществления, твердая форма представляет собой кристаллическое Соединение I-1⋅ DMSO сольват. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ DMSO сольват имеет отношение Соединения I-1⋅ к DMSO примерно 1:1. В другом варианте осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ DMSO сольват характеризуется потерями массы примерно 12,44% в диапазоне температур примерно от 146°C примерно до 156°C. В некоторых вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ DMSO сольват характеризуется одним или несколькими пиками, выраженными в единицах 2 тэта ±0,2, примерно при 8,9, 14,8, 16,5, 18,6, 20,9, 22,2 и 23,4 градуса на картине дифракции рентгеновского излучения на порошках, полученной с использованием излучения Cu K альфа. В других вариантах осуществления, Соединение I-1⋅ DMSO сольват характеризуется как имеющее картину дифракции рентгеновского излучения на порошках по существу такую же, как это показано на Фигуре 1g.

Соединение I-1⋅ DMAC сольват

[0089] В некоторых вариантах осуществления, твердая форма представляет собой Соединение I-1⋅ DMAC сольват. В другом варианте осуществления, твердая форма представляет собой кристаллическое Соединение I-1⋅ DMAC сольват. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ DMAC сольват имеет отношение Соединения I-1⋅ к DMAC примерно 1:1,3. В другом варианте осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ DMAC сольват характеризуется потерями массы примерно 17,76% в диапазоне температур примерно от 85°C примерно до 100°C. В других вариантах осуществления, Соединение I-1⋅ DMAC сольват характеризуется одним или несколькими пиками, выраженными в единицах 2 тэта ±0,2, примерно при 6,0, 15,5, 17,7, 18,1, 20,4 и 26,6 градуса на картине дифракции рентгеновского излучения на порошках, полученной с использованием излучения Cu K альфа. В некоторых вариантах осуществления, Соединение I-1⋅ DMAC сольват характеризуется как имеющее картину дифракции рентгеновского излучения на порошках по существу такую же, как это показано на Фигуре 1h.

Соединение I-1⋅ ацетоновый сольват

[0090] В одном или нескольких вариантах осуществления, твердая форма представляет собой Соединение I-1⋅ ацетоновый сольват. В другом варианте осуществления, твердая форма представляет собой кристаллическое Соединение I-1⋅ ацетоновый сольват. В другом варианте осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ ацетоновый сольват имеет отношение Соединения I-1⋅ к ацетону примерно 1:0,44. В другом варианте осуществления, Соединение I-1⋅ ацетоновый сольват характеризуется потерями массы примерно 4,55% в диапазоне температур примерно от 124°C примерно до 151°C. В некоторых вариантах осуществления, Соединение I-1⋅ ацетоновый сольват характеризуется одним или несколькими пиками, выраженными в единицах 2 тэта ±0,2, примерно при 8,9, 15,5, 15,8, 16,7, 22,3, 25,7 и 29,0 градуса на картине дифракции рентгеновского излучения на порошках, полученной с использованием излучения Cu K альфа. В других вариантах осуществления, Соединение I-1⋅ ацетоновый сольват характеризуется как имеющее картину дифракции рентгеновского излучения на порошках по существу такую же, как это показано на Фигуре 1i.

Соединение I-1⋅ изопропанольный сольват

[0091] В один из вариантов осуществления, твердая форма представляет собой Соединение I-1⋅ изопропанольный сольват. В другом варианте осуществления, твердая форма представляет собой кристаллическое Соединение I-1⋅ изопропанольный сольват. В других вариантах осуществления, кристаллическое Соединение I-1⋅ изопропанольный сольват имеет отношение Соединения I-1 к изопропанолу примерно 1:0,35. В другом варианте осуществления, Соединение I-1⋅ изопропанольный сольват характеризуется потерями массы примерно 3,76% в диапазоне температур примерно от 136°C примерно до 180°C. В некоторых вариантах осуществления, Соединение I-1⋅ изопропанольный сольват характеризуется одним или несколькими пиками, выраженными в единицах 2 тэта ±0,2, примерно при 6,9, 17,1, 17,2, 19,1, 19,6, 23,7, 24,4 и 28,9 градуса на картине дифракции рентгеновского излучения на порошках, полученной с использованием излучения Cu K альфа. В другом варианте осуществления, Соединение I-1⋅ изопропанольный сольват характеризуется как имеющее картину дифракции рентгеновского излучения на порошках по существу такую же, как это показано на Фигуре 1j.

Препарат

[0092] Некоторые варианты осуществления, описанные в настоящем документе, как правило, относятся к композиции, которая может содержать эффективное количество Соединения I-1 или его фармацевтически приемлемой соли и одно или несколько вспомогательных веществ. Соединение I-1, как предполагается, представляет собой ингибитор ATR, и оно описано в WO 2014/089379, которая тем самым включается в качестве ссылки во всей своей полноте.

[0093] Соединение I-1 и Форма A могут существовать в свободной форме или в виде соли. Те соли, которые являются фармацевтически приемлемыми, могут быть пригодными для использования при введении Соединения I-1 или Формы A для медицинских целей. Соли, которые не являются фармацевтически приемлемыми, могут быть пригодными для использования при получении, выделении, очистке и/или разделении стереоизомерных форм Соединения I-1, Формы A и/или одного или нескольких его промежуточных соединений.

[0094] Как используется в настоящем документе, термин “фармацевтически приемлемая соль“ относится к соли соединения, которая находится в рамках компетентного медицинского суждения, является пригодной для использования на людях и низших животных без излишних побочных воздействий, таких как, токсичность, раздражение, аллергическая реакция, и тому подобное, и являются совместимыми с разумным отношением выгода/риск. Можно использовать различные фармацевтически приемлемые соли. Например, эти соли описаны в S. M. Berge et al., J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19, которая тем самым включается в качестве ссылки. Фармацевтически приемлемые соли соединений, описанных в настоящем документе, включают такие, которые получают из пригодных для использования неорганических и органических кислот и оснований. Соль соединения, описанного в настоящем документе (например, Соединения I-1), может быть получена in situ во время конечного выделения и очистки соединения.

[0095] Как описано выше, Соединение I-1 может существовать в различных полиморфных формах (то есть, “твердых формах”). Полиморфизм представляет собой способность соединения существовать в виде нескольких различных кристаллических или “полиморфных“ видов, где каждый вид имеет различное расположение своих молекул в кристаллической решетке. Каждый кристаллический вид отличный от других представляет собой “полиморф”. Каждый полиморф имеет одну и ту же химическую формулу, однако может демонстрировать различные физические свойства в результате различного расположения в кристаллической решетке. Полиморфы могут характеризоваться с помощью аналитических методов, таких как картина дифракции рентгеновского излучения на порошках (XRPD), термогравиметрический анализ (TGA), дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC), измерение температуры плавления и/или другие методики, известные в данной области.

[0096] Форма A, описанная в настоящем документе, может находиться в чистой форме или в смеси с другими материалами. Примеры других материалов включают, например, другие формы Соединения I-1 (такие как аморфные формы, другие полиморфные формы, сольваты и гидраты); другие диастеромерные Соединения I-1 и/или другие материалы, кроме Соединения I-1.

[0097] Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать эффективное количество чистой Формы A. Как используется в настоящем документе, “чистая” Форма A составляет более 95% (масс./масс.) (где масс./масс. представляет собой масса Формы A/масса Соединения I-1 (где масса Соединения I-1 представляет собой масса Формы A+масса всех других форм Соединения I-1)), например, более 98% (масс./масс.), более 99% (% масс./масс.), более 99,5% (% масс./масс.) или более 99,9% (% масс./масс.). В некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать эффективное количество Формы A в количестве, по меньшей мере, 95% (% масс./масс.), по меньшей мере, 97% (% масс./масс.) или, по меньшей мере, 99% (% масс./масс.) и не содержит никаких других диастереомеров Соединения I-1. В некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать эффективное количество Формы A в количестве, по меньшей мере, 95% (% масс./масс.), по меньшей мере, 97% (% масс./масс.) или, по меньшей мере, 99% (% масс./масс.), и она не содержит никаких других полиморфов и аморфных форм Соединения I-1.

[0098] В некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать Форму A вместе c одной или несколькими другими формами Соединения I-1. Другие формы Соединения I-1 включают, например, гидраты, сольваты, аморфные формы, другие полиморфные формы или их сочетания.

[0099] В некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать некоторое количество Соединения I-1 или Формы A (или фармацевтически приемлемой соли упоминаемых выше соединений) в пределах от микроскопического количества (0,1%) до 100% (% масс./масс.) по отношению к общей массе композиции. В некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать меньше примерно, чем 50% Соединения I-1 или Формы A по отношению к общей массе композиции (где общая масса включает массу Соединения I-1 или Формы A). Например, композиция может содержать количество Соединения I-1 или Формы A в пределах, выбранных из 0,1%-0,5%, 0,1%-1%, 0,1%-2%, 0,1%-5%, 0,1%-10%, 0,1%-20%, 0,1%-30%, 0,1%-40% и 0,1%-<50% (% масс./масс.) по отношению к общей массе композиции (где общая масса включает массу Соединения I-1 или Формы A). В других вариантах осуществления, композиция может содержать равное или большее примерно, чем 50% Соединения I-1 или Формы A по отношению к общей массе композиции (где общая масса включает массу Соединения I-1 или Формы A). Например, композиция может содержать, по меньшей мере, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, 99,5% или 99,9% (масс./масс.) Соединения I-1 или Формы A по отношению к общей массе композиции (где общая масса включает массу Соединения I-1 или Формы A). В некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать количество Соединения I-1 или Формы A в пределах примерно от 1% масс. примерно до 50% масс.; примерно от 5% масс. примерно до 40% масс., примерно от 5% масс. примерно до 25% масс. или примерно от 5% масс. примерно до 15% масс. Соединения I-1 или Формы A по отношению к общей массе композиции (где общая масса включает массу Соединения I-1 или Формы A).

[0100] Как используется в настоящем документе, “вспомогательное вещество” используется в настоящем документе в его обычном смысле, как понимается специалистами в данной области, и включает одно или несколько инертных веществ, которые включаются в композицию для обеспечения, без ограничения, объема, консистенции, стабильности, связывающей способности, смазывания, разрыхляющей способности, и тому подобное, композиции. Примеры вспомогательных веществ включают наполнители, связующие вещества, разрыхлители, смачивающие агенты, смазывающие вещества, вещества, способствующие скольжению, смачивающие вещества и поглотители.

[0101] В некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать Соединение I-1 или Форму A и один или несколько других компонентов, выбранных из одного или нескольких наполнителей, одного или нескольких связующих веществ, одного или нескольких разрыхлителей, одного или нескольких смачивающих агентов и одного или нескольких смазывающих веществ. В некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать некоторое количество одного или нескольких наполнителей в пределах примерно от 10% масс. примерно до 95% масс.; примерно от 25% масс. примерно до 90% масс.; примерно от 50% масс. примерно до 90% масс.; или примерно от 70% масс. примерно до 90% масс. наполнителя (наполнителей) по отношению к общей массе композиции (где общая масса включает массу одного или нескольких наполнителей). В некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать некоторое количество одного или нескольких смазывающих веществ в пределах примерно от 0,1% масс. примерно до 10% масс., примерно от 0,5% масс. примерно до 7% масс. или примерно от 1% масс. примерно до 5% масс. смазывающего вещества (смазывающих веществ) по отношению к общей массе композиции (где общая масса включает массу одного или нескольких смазывающих веществ). В некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать некоторое количество одного или нескольких разрыхлителей в пределах примерно от 1% масс. примерно до 15% масс., примерно от 1% масс. примерно до 10% масс. или примерно от 1% масс. примерно до 7% масс. разрыхлителя (разрыхлителей) по отношению к общей массе композиции (где общая масса включает массу одного или нескольких разрыхлителей).

[0102] Смачивающие агенты, связующие вещества, разрыхлители, смазывающие вещества и наполнители, пригодные для включения, могут быть совместимыми с ингредиентами композиций, например, они по существу не уменьшают химическую стабильность активного фармацевтического ингредиента (ингредиентов).

[0103] Термин “смачивающий агент” используется в настоящем документе в его обычном смысле, как понимается специалистами в данной области, и включает поверхностно-активные вещества, такие как неионные поверхностно-активные вещества и анионные поверхностно-активные вещества. Смачивающие агенты могут увеличивать растворимость композиции. Иллюстративные поверхностно-активные вещества включают натрий лаурилсульфат (SLS), полиоксиэтиленсорбитановые жирные кислоты (например, TWEEN^TM), сложные эфиры сорбитановых жирных кислот (например, Spans®), натрий додецилбензолсульфонат (SDBS), диоктилнатрий сульфосукцинат (докузат), натриевую соль диоксихолиновой кислоты (DOSS), сорбитан моностеарат, сорбитан тристеарат, натрий N-лауроилсаркозин, олеат натрия, миристат натрия, стеарат натрия, пальмитат натрия, Gelucire 44/14, этилендиаминтетрауксусную кислоту (EDTA), витамин E (d-альфа токоферилсукцинат полиэтиленгликоля 1000) (TPGS), лецитин, MW 677-692, мононатриевую соль глютаминовой кислоты моногидрат, Labrasol, PEG 8, глицериды каприловой кислоты/каприновой кислоты, Transcutol, простой моноэтиловый эфир диэтиленгликоля, Solutol HS-15, полиэтиленгликоль/гидроксистеарат, таурохолиновую кислоту, сополимеры полиоксипропилена и полиоксиэтилена (например, полоксамеры, также известные и коммерчески доступные под наименованием Pluronics®, такие как Pluronic® L61, Pluronic® F68, Pluronic® F108 и Pluronic® F127), насыщенные полигликолизированные глицериды (Gelucirs®), докузат натрия, сложные эфиры полиоксиэтиленсорбитановых жирных кислот, простые стеариловые эфиры полиоксиэтилена 20, простые полиоксиэтиленалкиловые эфиры, полиоксиэтиленовые производные касторового масла, пегилированные гидрированные касторовые масла, сложные сорбитановые эфиры жирных кислот, витамин E или производные токола, витамин E (TPGS), сложные токофериловые эфиры, лецитин, фосфоролипиды и их производные, стеариновую кислоту, олеиновую кислоту, олеиновый спирт, цетиловый спирт, моно и диглицериды, сложные эфиры пропиленгликоля и жирных кислот, сложные глицероловые эфиры жирных кислот, пальмитостеарат этиленгликоля, полиоксилглицериды, монокаприлат пропиленгликоля, монолаурат пропиленгликоля, полиглицерилолеат и любые их сочетания. Натрий лаурилсульфат представляет собой анионное поверхностно-активное вещество; а сополимеры полиоксипропилена и полиоксиэтилена представляют собой неионные поверхностно-активные вещества. Конкретные примеры сополимеров полиоксипропилена и полиоксиэтилена включают полоксамеры, такие как полоксамер с полиоксипропиленом с молекулярной массой 1800 г/моль и содержанием полиоксиэтилена 80% (например, полоксамер 188).

[0104] Термин “связующее вещество” используется в настоящем документе в его обычном смысле, как понимается специалистами в данной области, и включает агенты, используемые при приготовлении гранул активного ингредиента (например, Соединения I-1 или Формы A), где связующее вещество содержит активный ингредиент вместе с одним или несколькими неактивными агентами. Иллюстративные связующие вещества включают поливинилпирролидоны (PVP), предварительно желатинизированный крахмал, крахмал, микрокристаллическую целлюлозу, модифицированную целлюлозу (например, гидроксилпропилметилцеллюлозу (HPMC), гидроксипропилцеллюлозу (HPC) и гидроксиэтилцеллюлозу (HEC)), и любое их сочетание. PVP обычно характеризуются с помощью “значения K”, которое представляет собой меру вязкости полимерной композиции. PVP могут покупаться коммерчески (например, от Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) под торговым наименованием Povidone® K12, Povidone® K17, Povidone® K25, Povidone® K30, Povidone® K60 и Povidone® K90. Конкретные примеры PVP включают растворимые высушенные распылением PVP. PVP могут иметь среднюю молекулярную массу 3000 дальтон-4000 дальтон, например, Povidone® K12 имеет среднюю молекулярную массу 4000 дальтон. PVP может использоваться либо во влажном, либо в сухом состоянии.

[0105] Термин “наполнитель” (или “разбавитель”) используется в настоящем документе в его обычном смысле, как понимается специалистами в данной области, и включает микрокристаллические целлюлозы (например, Avicel® PH 101), лактозы, сорбитолы, целлюлозы, фосфаты кальция, крахмалы, сахара (например, маннитол, сахарозу или что-либо подобное), декстрозу, мальтодекстрин, сорбитол, ксилитол, порошкообразную целлюлозу, силикатированную микрокристаллическую целлюлозу, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу, метилгидроксиэтилцеллюлозу, предварительно желатинизированный крахмал, двухосновный фосфат кальция, сульфат кальция, карбонат кальция и любое их сочетание. Конкретные примеры наполнителей включают микрокристаллические целлюлозы и лактозы. Конкретные примеры микрокристаллических целлюлоз включают коммерчески доступную серию Avicel®, например, микрокристаллические целлюлозы, имеющие размер частиц 200 меш для более чем 70% и размер частиц 65 меш для менее чем 10% (например, Avicel® PH 101). Конкретный пример лактозы представляет собой моногидрат лактозы.

[0106] Термин “разрыхлитель” используется в настоящем документе в его обычном смысле, как понимается специалистами в данной области, и он может повышать дисперсность композиции. Примеры разрыхлителей включают натрий кросскармелозу, крахмал (например, кукурузный крахмал, картофельный крахмал), натрий крахмал гликолят, кросповидон, микрокристаллическую целлюлозу, альгинат натрия, альгинат кальция, альгиновую кислоту, предварительно желатинизированный крахмал, целлюлозу и ее производные, кальций карбоксиметилцеллюлозу, натрий карбоксиметилцеллюлозу, полисахариды сои, гуаровую смолу, ионообменные смолы, шипучую систему на основе пищевых кислот и компонента щелочного карбоната, натрий бикарбонат и любые их сочетания. Конкретные примеры разрыхлителей включают натрий кросскармелозу (например, Ac-Di-Sol®) и натрий крахмал гликолят.

[0107] Термин “смазывающее вещество” используется в настоящем документе в его обычном смысле, как понимается специалистами в данной области, и может улучшать сжатие и высвобождение композиции, например, во время прессования в форме. Иллюстративные смазывающие вещества включают стеарат магния, стеариновую кислоту (стеарин), гидрированные масла, натрий стеарилфумарат, натрий лаурилсульфат, тальк, жирную кислоту, стеарат кальция, стеарат натрия, глицерилмоностеарат, жирный спирт, сложный эфир жирной кислоты, глицерилбегенат, минеральное масло, растительное масло, лейцин, бензоат натрия и любое их сочетание. Конкретный пример смазывающего вещества представляет собой натрий стеарилфумарат.

[0108] Специалист в данной области понимает, что конкретное соединение, описанное в качестве смачивающего агента, связующего вещества, наполнителя, разрыхлителя и смазывающего вещества, может служить одной или нескольким целям. Например, микрокристаллическая целлюлоза может использоваться в качестве разрыхлителя и наполнителя.

[0109] В некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать количество Соединения I-1 или Формы A в пределах примерно от 5% масс. примерно до 50% масс. по отношению к общей массе композиции; и количество одного или нескольких наполнителей в пределах примерно от 10% масс. примерно до 90% масс. по отношению к общей массе композиции. В других вариантах осуществления, композиция может содержать количество Соединения I-1 или Формы A в пределах примерно от 5% масс. примерно до 50% масс. по отношению к общей массе композиции; количество одного или нескольких наполнителей в пределах примерно от 10% масс. примерно до 90% масс. по отношению к общей массе композиции и количество одного или нескольких разрыхлителей в пределах примерно от 1% масс. примерно до 15% масс. по отношению к общей массе композиции. В других вариантах осуществления, композиция может содержать количество Соединения I-1 или Формы A в пределах примерно от 5% масс. примерно до 50% масс. по отношению к общей массе композиции; количество одного или нескольких наполнителей в пределах примерно от 10% масс. примерно до 90% масс. по отношению к общей массе композиции; количество одного или нескольких разрыхлителей в пределах примерно от 1% масс. примерно до 15% масс. по отношению к общей массе композиции и количество одного или нескольких смазывающих веществ в пределах примерно от 0,1% масс. примерно до 10% масс. по отношению к общей массе композиции.

[0110] В некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать количество Соединения I-1 или Формы A в пределах примерно от 5% масс. примерно до 20% масс. по отношению к общей массе композиции; количество одного или нескольких смазывающих веществ в пределах примерно от 1% масс. примерно до 5% масс. по отношению к общей массе композиции; количество одного или нескольких разрыхлителей в пределах примерно от 1% масс. примерно до 10% масс. по отношению к общей массе композиции и количество одного или нескольких наполнителей в пределах примерно от 70% масс. примерно до 90% масс. по отношению к общей массе композиции. В других вариантах осуществления, композиция может содержать количество Соединения I-1 или Формы A в пределах примерно от 5% масс. примерно до 15% масс. по отношению к общей массе композиции; количество одного или нескольких смазывающих веществ в пределах примерно от 1% масс. примерно до 5% масс. по отношению к общей массе композиции; количество одного или нескольких разрыхлителей в пределах примерно от 1% масс. примерно до 5% масс. по отношению к общей массе композиции и количество одного или нескольких наполнителей в пределах примерно от 70% масс. примерно до 90% масс. по отношению к общей массе композиции.

[0111] В некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать количество Соединения I-1 или Формы A, примерно 10% масс. по отношению к общей массе композиции, количество лактозы моногидрата примерно 28% масс. по отношению к общей массе композиции, количество Avicel PH-101 (микрокристаллической целлюлозы) примерно 55% масс. по отношению к общей массе композиции, количество Ac-Di-Sol (натрия кросскармелозы) примерно 5% масс. по отношению к общей массе композиции и количество натрия стеарилфумарата примерно 3% масс. по отношению к общей массе композиции.

[0112] В некоторых вариантах осуществления, композиция может дополнительно включать одно или несколько веществ, способствующих скольжению, (или “добавок для текучести”). Вещество, способствующее скольжению, улучшает свойства текучести композиции посредством уменьшения трения и когезии между частицами. Иллюстративные вещества, способствующие скольжению, включают коллоидный диоксид кремния, тальк и любое их сочетание. Конкретный пример вещества, способствующего скольжению, представляет собой аморфный коллоидный диоксид кремния, имеющий средний размер частиц от 0,2 до 0,3 микрона, такой как Cab-O-Sil® M5P. Количество вещества, способствующего скольжению, может изменяться. Например, количество вещества (веществ), способствующего скольжению, может находиться в пределах примерно от 0,1% масс. примерно до 3% масс. или примерно от 0,1% масс. примерно до 1% масс. по отношению к общей массе композиции (где общая масса включает массу одного или нескольких вещества, способствующих скольжению).

[0113] В некоторых вариантах осуществления, композиция, описанная в настоящем документе, может дополнительно включать покрытие.

[0114] В некоторых вариантах осуществления, композиция, описанная в настоящем документе, может находиться в твердой дозированной форме, например, таблетки.

[0115] Некоторые варианты осуществления, описанные в настоящем документе, относятся к способу приготовления композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления, способ может включать приготовление смеси, которая содержит Соединение I-1 или Форму A и один или несколько наполнителей, с формированием композиции. В других вариантах осуществления, способ может включать приготовление смеси, которая содержит Соединение I-1 или Форму A, смазывающее вещество, разрыхлитель и наполнитель, с формированием композиции. Примеры, включающие конкретные примеры смазывающих веществ, разрыхлителей и наполнителей, каждый и независимо, описаны в настоящем документе.

[0116] В некоторых вариантах осуществления, способ может включать объединение Соединения I-1 или Формы A и одного или нескольких первых вспомогательных веществ с формированием смеси; и объединение смеси (которая содержит Соединение I-1 или Форму A и одно или несколько первых вспомогательных веществ) с одним или несколькими вторыми вспомогательными веществами. В некоторых вариантах осуществления, первые вспомогательные вещества могут включать одно или несколько из следующих: один или несколько наполнителей, один или несколько разрыхлителей и одно или несколько смазывающих веществ. В некоторых вариантах осуществления, вторые вспомогательные вещества могут включать один или несколько из следующих: один или несколько разрыхлителей и одно или несколько смазывающих веществ.

[0117] В других вариантах осуществления, способ приготовления композиции, описанной в настоящем документе, может включать: i) объединение Соединения I-1 или Формы A с одним или несколькими первыми вспомогательными веществами, которые могут включать один или несколько наполнителей, один или несколько разрыхлителей и одно или несколько смазывающих веществ, и ii) объединение смеси из i) с одним или несколькими вторыми вспомогательными веществами, которые могут включать один или более разрыхлителей и одно или несколько смазывающих веществ с формированием композиции. В некоторых вариантах осуществления, одно или несколько первых вспомогательных веществ могут включать количество одного или нескольких наполнителей в пределах примерно от 70% масс. примерно до 90% масс., количество одного или нескольких разрыхлителей в пределах примерно от 1% масс. примерно до 15% масс. и количество одного или нескольких смазывающих веществ в пределах примерно от 1% масс. примерно до 5% масс., каждого, по отношению к общей массе композиции, и вторые вспомогательные вещества могут включать некоторое количество одного или нескольких смазывающих веществ в пределах примерно от 0,5% масс. примерно до 5% масс. и количество одного или нескольких разрыхлителей в пределах примерно от 0,5% масс. примерно до 5% масс., каждого, по отношению к общей массе композиции.

[0118] В некоторых вариантах осуществления, способ приготовления композиции, описанный в настоящем документе, может включать: i) приготовление гранул Соединения I-1 или Формы A посредством объединения Соединения I-1 или Формы A с первыми вспомогательными веществами, которые могут включать один или несколько наполнителей, один или несколько разрыхлителей и одно или несколько смазывающих веществ; и ii) смешивание гранул Соединения I-1 или Формы A, полученных из i), со вторыми вспомогательными веществами, которые могут включать один или несколько разрыхлителей и одно или несколько смазывающих веществ, и необязательно, один или несколько наполнителей, с формированием композиции. В некоторых вариантах осуществления, первые вспомогательные вещества могут включать количество одного или нескольких наполнителей в пределах примерно от 70% масс. примерно до 90% масс., количество одного или нескольких разрыхлителей в пределах примерно от 0,5% масс. примерно до 5% масс. и количество первого смазывающего вещества в пределах примерно от 1% примерно до 5%, каждого, по отношению к общей массе композиции; и вторые вспомогательные вещества могут включать количество одного или нескольких вторых смазывающих веществ в пределах примерно от 0,5% масс. примерно до 5% масс. и количество одного или нескольких разрыхлителей в пределах примерно от 0,5% масс. примерно до 5% масс., каждого, по отношению к общей массе композиции. Примеры, включающие конкретные примеры пригодных для использования смазывающих веществ, разрыхлителей и наполнителей, описаны в настоящем документе.

[0119] В некоторых вариантах осуществления, способ приготовления композиции, описанный в настоящем документе, может включать прохождение Соединения I-1 или Формы A через сито; смешивание гранул Соединения I-1 или Формы A с одним или несколькими наполнителями, одним или несколькими разрыхлителями и одним или несколькими смазывающими веществами и перемешивание полученных в результате гранул вместе с одним или несколькими разрыхлителями и одним или несколькими смазывающими веществами.

[0120] В некоторых вариантах осуществления, способ приготовления композиции, описанный в настоящем документе, может включать прессование гранул, которые содержат Соединение I-1 или Форму A, с помощью машины для прессования таблеток, с формированием таблетки, которая содержит Соединение I-1 или Форму A.

[0121] В некоторых вариантах осуществления, таблетка, которая может включать Соединение I-1 или Форму A (например, таблетки, полученные после прессования таблеток), может покрываться пленкой.

[0122] Композиция, описанная в настоящем документе, может дополнительно содержать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей иных, чем те, которые описаны ранее. Как используется в настоящем документе, “фармацевтически приемлемый” означает являющийся инертным без излишнего ингибирования биологической активности соединений. Фармацевтически приемлемые носители должны быть биологически совместимыми, например, нетоксичными, невоспалительными, неиммуногенными или исключать другие нежелательные реакции или побочные воздействия при введении субъекту. Кроме того, стандартные технологии приготовления фармацевтических препаратов могут использоваться для объединения упоминаемых выше одного или нескольких фармацевтически приемлемых носителей.

[0123] Некоторые примеры материалов, которые могут служить в качестве фармацевтически приемлемых носителей, включают, но, не ограничиваясь этим, ионообменные смолы; оксид алюминия; стеарат алюминия; лецитин; сывороточные белки (такие как сывороточный альбумин человека); буферные вещества (такие как фосфаты или глицин); смеси частичных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот; воду; соли или электролиты (такие как протамин сульфат, динатрий гидрофосфат, калий гидрофосфат, хлорид натрия или соли цинка); коллоидный диоксид кремния; магния трисиликат; полиакрилаты; воски; блок-полимеры полиэтилен-полиоксипропилен; метилцеллюлозу; гидроксипропилметилцеллюлозу; шерстяной жир; сахара, такие как глюкоза; целлюлозу и ее производные, такие как натрий карбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза и ацетат целлюлозы; порошкообразную смолу трагаканта; ржаной солод; желатин; тальк; вспомогательные вещества, такие как масло какао и суппозиторные воски; масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; гликоли; такие как пропиленгликоль или полиэтиленгликоль; сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; агар; буферные агенты, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; альгиновую кислоту; не содержащую пирогенов воду; изотонический солевой раствор; раствор Рингера; этиловый спирт; фосфатные буферные растворы; другие нетоксичные совместимые смазывающие вещества; окрашивающие агенты; агенты для облегчения высвобождения; подсластители; ароматизирующие агенты; агенты, придающие запах; консерванты; сорбенты и антиоксиданты, могут также присутствовать в композиции, в соответствии с суждением того, кто ее приготавливает.

[0124] Некоторые варианты осуществления, описанные в настоящем документе, относятся к способу ингибирования или уменьшения активности ATR у субъекта, который может включать введение субъекту композиции, описанной в настоящем документе, которая содержит эффективное количество Соединения I-1 или Формы A или фармацевтически приемлемой соли упоминаемых выше соединений.

[0125] Другие варианты осуществления, описанные в настоящем документе, относятся к способу лечения рака у субъекта, который может включать введение субъекту композиции, описанной в настоящем документе, которая содержит эффективное количество Соединения I-1 или Формы A, или фармацевтически приемлемой соли упоминаемых выше соединений.

[0126] Другие варианты осуществления, описанные в настоящем документе, относятся к использованию композиции, описанной в настоящем документе, которая содержит эффективное количество Соединения I-1 или Формы A, или фармацевтически приемлемой соли упоминаемых выше соединений, при приготовлении лекарственного препарата для лечения рака.

[0127] В некоторых вариантах осуществления, по существу вся масса Соединения I-1 в композиции, описанной в настоящем документе, может представлять собой Форму A.

[0128] В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, 90% масс. Соединения I-1 в композиции, описанной в настоящем документе, может представлять собой Форму A.

[0129] В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, 95% масс. Соединения I-1 в композиции, описанной в настоящем документе, может представлять собой Форму A.

[0130] В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, 98% масс. Соединения I-1 в композиции, описанной в настоящем документе, может представлять собой Форму A.

[0131] В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, 99% масс. Соединения I-1 в композиции, описанной в настоящем документе, может представлять собой Форму A.

[0132] Композиции, описанные в настоящем документе, могут вводиться людям и другим животным перорально, ректально, парентерально, интрацистернально, интравагинально, интраперитонеально, местно (например, с помощью порошков, мазей или капель), буккально, в виде перорального или назального спрея или чего-либо подобного. Термин “парентеральный“, как используется в настоящем документе, включает, но, не ограничиваясь этим, методики подкожного, внутривенного, внутримышечного, внутрисуставного, внутрисиновиального, интрастернального, интратекального, внутрипеченочного, внутрираневого и внутричерепного вливания или инъекции. В некоторых вариантах осуществления, композиция, описанная в настоящем документе, может вводиться перорально, интраперитонеально и/или внутривенно.

[0133] Любая перорально приемлемая дозированная форма включает, но, не ограничиваясь этим, капсулы, таблетки, водные суспензии или растворы. В случае таблеток, пригодные для использования носители включают, но, не ограничиваясь этим, лактозу и кукурузный крахмал. Могут добавляться смазывающие агенты, такие как стеарат магния, и/или смачивающие агенты. Когда используются водные суспензии, активный ингредиент может объединяться с эмульгирующими и/или суспендирующими агентами. Могут включаться, по желанию, подсластители, ароматизирующие, окрашивающие агенты и/или агенты, придающие запах.

[0134] Жидкие дозированные формы для перорального введения включают, но, не ограничиваясь этим, фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. В дополнение к активному соединению, жидкие дозированные формы могут содержать инертные вспомогательные вещества, например, воду или другие растворители, солюбилизирующие агенты и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, диметилформамид, масла (такие как, хлопковое, арахисовое, кукурузное, масло из проростков, оливковое, касторовое и кунжутное масла), глицерол, тетрагидрофурфуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные сорбитановые эфиры жирных кислот и их смеси.

[0135] Твердые дозированные формы для перорального введения включают капсулы (например, мягкие и твердые заполненные желатиновые капсулы), таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых дозированных формах, активное соединение может смешиваться, по меньшей мере, с одним инертным фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом или носителем, таким как цитрат натрия или дикальций фосфат и/или a) с наполнителями, такими как крахмалы, лактоза, молочный сахар, сахароза, глюкоза, маннитол и кремниевая кислота, b) со связующими веществами, такими, например, как карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахароза и смола акации, c) со смачивающими веществами, такими как глицерол, d) с разрыхляющими агентами, такими как агар, карбонат кальция, картофельный или тапиоковый крахмал, альгиновая кислота, определенные силикаты и карбонат натрия, e) с агентами замедляющими растворение, такими как парафин, f) с ускорителями поглощения, такими как соединения четвертичного аммония, g) со смачивающими агентами, такими, например, как цетиловый спирт и глицерол моностеарат, h) с поглотителями, такими как каолиновая и бентонитная глина и i) со смазывающими веществами, такими как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, натрий лаурилсульфат и их смеси. В случае капсул, таблеток и пилюль, дозированная форма может также содержать буферный агент.

[0136] Твердые дозированные формы таблеток, драже, капсул, пилюль и гранул могут приготавливаться с покрытиями и оболочками, такими как энтеральные покрытия и другие покрытия, известные в области приготовления фармацевтических препаратов. Они могут необязательно содержать замутняющие агенты, также могут иметь такую композицию, которая может высвобождать только или предпочтительно активный ингредиент (ингредиенты), в определенной части кишечника, необязательно, замедленным образом. Примеры заливочных композиций, которые можно использовать, включают полимерные вещества и воски. Активное соединение (соединения) может находиться в микроинкапсулированной форме вместе с одним или несколькими вспомогательными веществами.

[0137] Стерильные формы для инъекций могут представлять собой водную или масляную суспензию. Препараты для инъекций могут быть приготовлены в соответствии с предыдущим уровнем техники с использованием соответствующих диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов. Стерильный препарат для инъекций может представлять собой стерильный раствор для инъекций, суспензию или эмульсию в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например, как раствор в пропиленгликоле. Среди приемлемых вспомогательных веществ и растворителей, которые можно использовать, находятся вода, раствор Рингера, U.S.P. и изотонический раствор хлорида натрия. В дополнение к этому, стерильные фиксированные масла можно использовать в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели можно использовать любое не имеющее вкуса фиксированное масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производные, являются пригодными для использования при приготовлении препаратов для инъекций, постольку, поскольку они представляют собой природные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, в особенности, в их полиоксиэтилированных версиях. Эти масляные растворы или суспензии могут также содержать длинноцепной спиртовый разбавитель или дисперсант, такой как карбоксиметилцеллюлоза, или сходные диспергирующие агенты, которые обычно используются при приготовлении фармацевтически приемлемых дозированных форм, включая эмульсии и суспензии.

[0138] Препараты для инъекций могут стерилизоваться, например, посредством фильтрования через бактериальный фильтр, или посредством введения стерилизующих агентов в форме стерильных твердых композиций, которые могут растворяться или диспергироваться в стерильной воде или другой стерильной среде для инъекций перед использованием.

[0139] Дозированные формы для местного или трансдермального введения включают мази, пасты, крема, примочки, гели, порошки, растворы, спреи, ингалянты и пластыри. Активный компонент может перемешиваться при стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем, и могут вводиться любые консерванты и/или буферы. Могут приготавливаться офтальмологические препараты, ушные капли и глазные капли. Такие дозированные формы могут быть приготовлены посредством растворения или распределения соединения в соответствующей среде. Могут также использоваться усилители поглощения для увеличения потока соединения через кожу. Скорость может контролироваться посредством либо посредством создания мембраны контролирующей скорость, либо посредством диспергирования соединения в полимерной матрице или геле.

[0140] Альтернативно, активные соединения и их фармацевтически приемлемые композиции могут также вводиться с помощью назального аэрозоля или ингаляции. Такие композиции приготавливаются в соответствии с технологиями, хорошо известными в области приготовления фармацевтических препаратов, и могут быть приготовлены в виде растворов в солевом буфере, с использованием бензилового спирта или других пригодных для использования консервантов, усилителей поглощения для усиления биологической доступности, фторуглеродов и/или других обычных солюбилизирующих или диспергирующих агентов.

[0141] Поверхностно-активные вещества, такие как Tweens, Spans и другие эмульгирующие агенты или усилители биологической доступности, могут вводиться в твердые, жидкие и другие дозированные формы, описанные в настоящем документе.

[0142] Композиции, описанные в настоящем документе, могут быть приготовлены в виде стандартной дозированной формы. Термин “стандартная дозированная форма” относится к физически отдельным единицам, пригодным в качестве единичной дозы для субъектов, которые подвергаются лечению, при этом каждая единица содержит заданное количество активного материала, вычисленная для оказания желаемого терапевтического воздействия, необязательно, в ассоциации с соответствующим фармацевтическим носителем. Стандартная дозированная форма может предназначаться для одной ежедневной дозы или для множества ежедневных доз (например, примерно 1-4 или больше раз в день). Когда используются множество ежедневных доз, стандартные дозированные формы могут быть одинаковыми или различными для каждого дозирования. Количество активного соединения в стандартной дозированной форме может изменяться в зависимости, например, от пациента и конкретного режима введения, составляя, например, от 0,01 мг/кг массы тела/доза до 100 мг/кг массы тела/доза.

[0143] В некоторых вариантах осуществления, композиция, описанная в настоящем документе, может находиться в форме твердой дозированной формы. В некоторых вариантах осуществления, композиция, описанная в настоящем документе, может находиться в форме таблетки. В других вариантах осуществления, композиция может находиться в форме 100 мг таблетки или 500 мг таблетки.

[0144] Будет очевидно, что количество активного соединения (например, Соединения I-1 или Формы A), необходимого для использования при лечении, может изменяться не только вместе с конкретным выбранным соединением, но также и со способом введения, природой состояния, для которого требуется лечение и возраста и состояния субъекта и, в конечном счете, оно будет зависеть от решения лечащего врача или ветеринара. Как правило, однако, соответствующая доза будет находиться в пределах примерно от 0,1 примерно до 100 мг/кг массы тела на одну дозу, например, в пределах от 0,5 до 50 мг/кг/доз, или, например, в пределах от 1 до 10 мг/кг/доз.

[0145] В некоторых вариантах осуществления, композиция, описанная в настоящем документе, может вводиться в количестве в пределах примерно от 5 мг примерно до 100 мг Соединения I-1 или Формы A, или фармацевтически приемлемой соли упоминаемых выше соединений, на одну дозу.

[0146] В некоторых вариантах осуществления, композиция, описанная в настоящем документе, может вводиться:

a) в количестве примерно 5 мг Соединения I-1 или Формы A, или фармацевтически приемлемой соли упоминаемого выше соединения, на одну дозу;

b) в количестве примерно 10 мг Соединение I-1 или Форм A, или фармацевтически приемлемой соль упоминаемых выше соединений, на одну дозу;

c) в количестве примерно 20 мг Соединения I-1 или Формы A, или фармацевтически приемлемой соли упоминаемых выше соединений, на одну дозу;

d) в количестве примерно 30 мг Соединения I-1 или Формы A, или фармацевтически приемлемой соли упоминаемых выше соединений, на одну дозу;

e) в количестве примерно 50 мг Соединение I-1 или Форм A, или фармацевтически приемлемой соли упоминаемых выше соединений, на одну дозу;

f) в количестве примерно 60 мг Соединения I-1 или Формы A, или фармацевтически приемлемой соли упоминаемых выше соединений, на одну дозу;

g) в количестве примерно 80 мг Соединения I-1 или Формы A, или фармацевтически приемлемой соли упоминаемых выше соединений, на одну дозу; или

h) в количестве примерно 100 мг Соединения I-1 или Формы A, или фармацевтически приемлемой соли упоминаемых выше соединений, на одну дозу.

[0147] В некоторых вариантах осуществления композиция, описанная в настоящем документе, может вводиться в голодном состоянии (например, субъект не принимает пищи или жидкости, за исключением воды, в течение, по меньшей мере, 8 часов). В других вариантах осуществления, композиция, описанная в настоящем документе, может вводиться в сытом состоянии (например, вместе с пищей в пределах 1 часа после приема пищи).

Применения соединения

[0148] Один из аспектов настоящего изобретения предлагает соединения или композиции, которые являются ингибиторами ATR киназы и, таким образом, являются пригодными для использования при лечении или облегчении тяжести заболевания, состояния или расстройства у субъекта или пациента, когда ATR вовлекается в заболевание, состояние или расстройство.

[0149] Другой аспект настоящего изобретения предлагает соединения или композиции, которые являются пригодными для использования при лечении заболеваний, расстройств и состояний, характеризуемых избыточной или аномальной клеточной пролиферацией. Такие заболевания включают пролиферативное или гиперпролиферативное заболевание. Примеры пролиферативных и гиперпролиферативных заболеваний включают, без ограничения, рак и миелопролиферативные расстройства.

[0150] В некоторых вариантах осуществления, указанные соединения выбираются из Соединения I-1 или Формы A. В других вариантах осуществления, указанные композиции включают Соединение I-1 или Форму A. Термин “рак” включает, но, не ограничиваясь этим, следующие раковые заболевания. Раковые заболевания, связанные с ротовой полостью: буккальной полости, губ, языка, полости рта, гортани; Сердечные: саркому (ангиосаркому, фибросаркому, рабдомиосаркому, липосаркому), миксому, рабдомиому, фиброму, липому и тератому; Легких: немелкоклеточный рак, бронхогенный рак (рак сквамозных клеток или эпидермоида, недифференцированный мелкоклеточный рак, недифференцированный немелкоклеточный рак, аденокарциному), альвеолярную (бронхиолярную) карциному, бронхиальную аденому, саркому, лимфому, хондромутозную гамартому, мезотелиому; Желудочно-кишечные раковые заболевания: рак пищевода (плоскоклеточный рак, рак гортани, аденокарциному, лейомиосаркому, лимфому), желудка (карциному, лимфому, лейомиосаркому), поджелудочной железы (протоковую аденокарциному, инсулиному, глюкагоному, гастриному, карциноидную опухоль, випому), тонкой кишки или тонкого кишечника (аденокарциному, лимфому, карциноидную опухоль, саркому Капоши, лейомиому, гемангиому, липому, нейрофиброму, фиброму), толстой кишки или толстого кишечника (аденокарциному, тубулярную аденому, ворсинчатую аденому, гамартому, лейомиому), ободочной кишки, ободочной - прямой кишки, рак толстой и прямой кишки; прямой кишки, Рак мочеполового тракта: почек (аденокарциному, опухоль Вильмса [аденосаркому почки], лимфому, лейкемию), мочевого пузыря и уретры (плоскоклеточный рак, переходно-клеточный рак, аденокарциному), простаты (аденокарциному, саркому), семенников (семиному, тератому, эмбриональный рак, тератокарциному, хориокарциному, саркому, карциному интерстициальных клеток, фиброму, фиброаденому, аденомутоидные опухоли, липому); Рак печени: гепатому (гепатоклеточную карциному), холангиокарциному, гептобластому, ангиосаркому, гепатоклеточную аденому, гемангиому, рак желчных протоков; Рак костей: остеогенную саркому (остеосаркому), фибросаркому, злокачественную фиброзную гистиоцитому, хондросаркому, саркому Юинга, злокачественную лимфому (саркому клеток ретикулума), множественную миелому, злокачественную гигантоклеточную опухоль типа хордомы, остеохондрому (osteocartilaginous exostoses), доброкачественную хондрому, хондробластокластому, хондромиксоидную фиброму, остеоид-остеому и гигантоклеточную опухоль; Рак нервной системы: рак черепа (остеому, гемангиому, гранулему, ксантому, деформирующий остит), мягких мозговых оболочек (менингиому, менингиосаркому, глиоматоз), мозга (астроцитому, медуллобластому, глиому, эпендимому, герминому [пинеалому], мультиформную глиому, олигодендроглиому, шванному, ретинобластому, наследственные опухоли), нейрофиброму, менингиому, глиому, саркому спинного мозг); Гинекологические раковые заболевания/женские раковые заболевания: рак матки (карциному эндометрия), рак шейки матки (карциному шейки матки, дисплазию шейки матки), яичников (карциному яичников [серозную цистаденокарциному, цистаденокарциному слизистых, неклассифицированную карциному], опухоли гранулоза-текальных клеток, опухоли клеток Сертоли-Лейдига, дисгерминому, злокачественную тератому), вульвы (плоскоклеточный рак, преинвазионный рак, аденокарциному, фибросаркому, меланому), вагины (прозрачноклеточную карциному, плоскоклеточный рак, ботриоидную саркому (эмбриональную рабдомиосаркому), фаллопиевых труб (карциному), грудной железы; Гематологические раковые заболевания: рак крови (миелоидную лейкемию [острую и хроническую], острую лимфобластную лейкемию, хроническую лимфоцитарную лейкемию, миелопролиферативные заболевания, множественную миелому, миелодиспластический синдром), болезнь Ходжкина, лимфому не-Ходжкина [злокачественную лимфому] волосатых клеток; лимфоидные расстройства; Рак кожи: злокачественную меланому, базально-клеточную карциному, плоскоклеточный рак, саркому Капоши, кератоакантому, диспластические новообразования в форме родинок, липому, ангиому, дерматофиброму, келоиды, псориаз, Рак щитовидной железы: папиллярную тироидную карциному, фолликулярную тироидную карциному, недифференцированный рак щитовидной железы, медуллярную тироидную карциному, множественное эндокринное новобразование типа 2A, множественное эндокринное новобразование типа 2B, наследственный медуллярный рак щитовидной железы, феохромоцитому, параганглиому; и Рак надпочечников: нейробластому.

[0151] В некоторых вариантах осуществления, рак выбирается из рака легких или поджелудочной железы. В других вариантах осуществления, рак выбирается из рака легких, рака головы и шеи, рака поджелудочной железы, рака желудочно-кишечного тракта или рака головного мозга. Еще в одном из вариантов осуществления, рак выбирается из немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, рака поджелудочной железы, рака желчных протоков, рака головы и шеи, рака мочевого пузыря, рака ободочной и прямой кишки, глиобластомы, рака пищевода, рака молочной железы, гепатоклеточной карциномы или рака яичников.

[0152] В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой рак легких. В других вариантах осуществления, рак легких представляет собой немелкоклеточный рак легких или мелкоклеточный рак легких. В другом варианте осуществления, рак представляет собой немелкоклеточный рак легких. В другом варианте осуществления, немелкоклеточный рак легких представляет собой сквамовый немелкоклеточный рак легких.

[0153] Таким образом, термин “раковая клетка“, как предусмотрено в настоящем документе, включает клетку, подверженную влиянию одного из определенных выше состояний. В некоторых вариантах осуществления, рак выбирается из колоректального рака, рака щитовидной железы или рака молочной железы. В других вариантах осуществления, рак представляет собой трижды негативный рак молочной железы.

[0154] Термин “миелопролиферативное расстройство”, включает такие расстройства, как истинная полицитемия, тромбоцитоз, миелоидная метаплазия с миелофиброзом, синдром гиперэозинофилии, юношескую миеломоноцитарную лейкемию, системное заболевание тучных клеток и гематопоэтические расстройства, в частности, острую миелогенную лейкемию (AML), хроническую миелогенную лейкемию (CML), острую промиелоцитарную лейкемию (APL) и острую лимфоцитарную лейкемию (ВСЕ).

Сочетанная терапия

[0155] Другой аспект настоящего изобретения направлен на способ лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение соединения или композиции по настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемой соли и дополнительного терапевтического агента. В некоторых вариантах осуществления, указанный способ включает последовательное или совместное введение соединения или композиции (или ее фармацевтически приемлемой соли) и дополнительного терапевтического агента.

[0156] Как используется в настоящем документе, термин “в сочетании” или “совместное введение” может использоваться взаимозаменяемо для упоминания использования нескольких видов терапии (например, одного или нескольких терапевтических агентов). Использование термина не ограничивается тем порядком, в котором эти виды терапии (например, терапевтические агенты) вводятся субъекту, или временным графиком введения каждого терапевтического агента.

[0157] В некоторых вариантах осуществления, указанный дополнительный терапевтический агент представляет собой противораковый агент. В других вариантах осуществления, указанный дополнительный терапевтический агент представляет собой агент для повреждения ДНК. В других вариантах осуществления, указанный дополнительный терапевтический агент выбирается из лучевой терапии, химиотерапии или других агентов, как правило, используемых в сочетании с лучевой терапией или химиотерапией, таких как радиосенсибилизаторы и химиосенсибилизаторы. В других вариантах осуществления, указанный дополнительный терапевтический агент представляет собой ионизирующее излучение.

[0158] Как должно быть известно специалисту в данной области, радиосенсибилизаторы представляют собой агенты, которые можно использовать в сочетании с лучевой терапией. Радиосенсибилизаторы работают очень разными способами, включая, но, не ограничиваясь этим, повышение чувствительности раковых клеток к лучевой терапии, работая синергически с лучевой терапией для оказания улучшенного синергического воздействия, действуя в дополнение к лучевой терапии или защищая окружающие здоровые клетки от повреждения, вызываемого лучевой терапией. Подобным же образом, химиосенсибилизаторы представляют собой агенты, которые можно использовать в сочетании с химиотерапией. Подобным же образом, химиосенсибилизаторы работают очень разными способами, включая, но, не ограничиваясь этим, повышение чувствительности раковых клеток к химиотерапии, работая синергически с химиотерапией для обеспечения улучшенного синергического воздействия, действуя в дополнение к химиотерапии или защищая окружающие здоровые клетки от повреждения, вызываемого химиотерапией.

[0159] Примеры агентов повреждающих ДНК, которые можно использовать в сочетании с соединениями или композициями по настоящему изобретению, включают, но, не ограничиваясь этим Платиновые агенты, такие как цисплатин, карбоплатин, недаплатин, сатраплатин и другие производные; Ингибиторы Topo I, такие как топотекан, иринотекан/SN38, рубитекан и другие производные; Антиметаболиты, такие как семейство фолиевых (метотрексат, пеметрексед и родственные им вещества); антагонисты пурина и антагонисты пиримидина (тиогуанин, флударабин, кладрибин, цитарабин, гемцитабин, 6-меркаптопурин, 5-Фторурацил (5FU) и родственные им вещества); Алкилирующие агенты, такие как азотные горчицы (циклофосфамид, мелфалан, хлорамбуцил, мехлорэтамин, ифосфамид и родственные им вещества); нитрозомочевины (например, кармустин); триазены (дакарбазин, темодал); алкилсульфонаты (например, бусульфан); прокарбазин и азиридины; Антибиотики, такие как гидроксимочевина, антрациклины (доксорубицин, даунорубицин, эпирубицин и другие производные); антрацендионы (митоксантрон и родственные им вещества); семейство стрептомицинов (блеомицин, митомицин C, актиномицин) и ультрафиолетовый свет.

[0160] В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент представляет собой ионизирующее излучение. В других вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент представляет собой цисплатин или карбоплатин. В других вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент представляет собой этопозид. В других вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент представляет собой темодал. В других вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент представляет собой иринотекан/SN38.

[0161] В определенных вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент выбирается из одного или нескольких агентов из следующих: цисплатина, карбоплатина, иринотекана/SN38, гемцитабина, этопозида, темодала или ионизирующего излучения.

[0162] Другие виды терапии или противораковые агенты, которые можно использовать в сочетании с изобретенным соединениями и композициями по настоящему изобретению, включают хирургию, лучевую терапию (в том числе, в качестве нескольких примеров, гамма-излучение, нейтроннно-лучевую радиационную терапию, электронно-лучевую радиационную терапию, протонную брахитерапию, близкофокусную лучевую терапию и системно вводимые радиоактивные изотопы, в качестве нескольких примеров), эндокринную терапию, модификаторы биологической реакции (интерфероны, интерлейкины и фактор некроза опухоли (TNF), в качестве нескольких примеров), гипертермию и криотерапию, агенты для ослабления любых отрицательных воздействий (например, противорвотные средства) и другие одобренные химиотерапевтические лекарственные средства, включая, но, не ограничиваясь этим, агенты, повреждающие ДНК, перечисленные в настоящем документе, веретенные яды (винбластин, винкристин, винорелбин, паклитаксель), подофиллотоксины (этопозид, иринотекан, топотекан), нитрозомочевины (кармустин, ломустин), неорганические ионы (цисплатин, карбоплатин), ферменты (аспарагиназа) и гормоны (тамоксифен, леупролид, флутамид и мегестрол), Gleevec™, адриамицин, дексаметазон и циклофосфамид.

[0163] Соединение или композиция по настоящему изобретению может также быть пригодной для использования при лечении рака в сочетании с любым из следующих терапевтических агентов: абарелисксом (Plenaxis depot®); альдеслейкином (Prokine®); альдеслейкином (Proleukin®); алемтузумаббом (Campath®); алитретиноином (Panretin®); аллопуринолом (Zyloprim®); алтретамином (Hexalen®); амифостином (Ethyol®); настрозолом (Arimidex®); триоксидом мышьяка (Trisenox®); аспарагиназой (Elspar®); азацитидином (Vidaza®); бевакузимабом (Avastin®); бексаротеном в капсулах (Targretin®); бексаротеном в виде геля (Targretin®); блеомицином (Blenoxane®); бортезомибом (Velcade®); бусульфаном внутривенно (Busulfex®); бусульфаном перорально (Myleran®); калустероном (Methosarb®); капецитабином (Xeloda®); карбоплатином (Paraplatin®); кармустином (BCNU®, BiCNU®); кармустином (Gliadel®); имплантом кармустина вместе с полифепросаном 20 (Gliadel Wafer®); целококсибом (Celebrex®); цетуксимабом (Erbitux®); хлорамбуцилом (Leukeran®); цисплатином (Platinol®); кладрибином (Leustatin®, 2-CdA®); клофарабин (Clolar®); циклофосамидом (Cytoxan®, Neosar®); циклофосфамидом (Cytoxan Injection®); циклофосфамидом (Cytoxan Tablet®); цитарабином (Cytosar-U®); цитарабином липосомально (DepoCyt®); дакарбазином (DTIC-Dome®); дактиномицином, актиномицином D (Cosmegen®); дарбепоетином альфа (Aranesp®); даунорубицином липосомально (DanuoXome®); даунорубицином, дауномицином (Daunorubicin®); даунорубицином, дауномицином (Cerubidine®); денилейкином дифтитокс (Ontak®); дектразоксаном (Zinecard®); доксорубицином (Adriamycin®, Rubex®); доцетакселем (Taxotere®); доксорубицином (Adriamycin PFS®); доксорубицином (Adriamycin PFS Injection®); доксорубицином липосомально (Doxil®); дромостанолоном пропионатом (Dromostanolone®); дромостанолоном пропионатом (Masterone Injection®); раствором Эллиота B (Elliott's B Solution®); эпирубицином (Ellence®); эпоетином альфа (Epogen®); эрлотибином (Tarceva®); эстрамустином (Emcyt®); этопозидом фосфатом (Etopophos®); этопозидом, VP-16 (Vepesid®); эксеместаном (Aromasin®); филграстимом (Neupogen®); флоксуридином (внутриартериально) (FUDR®); флударабином (Fludara®); фторурацилом, 5-FU (Adrucil®); фульвестрантом (Faslodex®); гефитинибом (Iressa®); гемцитабином (Gemzar®); гемтузимабом озогамицином (Mylotarg®); гозерелином ацетатом (Zoladex Implant®); гозерелином ацетатом (Zoladex®); гистрелином ацетатом (Histrelin implant®); гидроксимочевиной (Hydrea®); ибритумомабом тиуксетаном (Zevalin®); идарубицином (Idamycin®); ифосфамидом (IFEX®); иматинибом мезилатом (Gleevec®); интерфероном альфа 2a (Roferon A®); интерфероном альфа-2b (Intron A®); иринотеканом (Camptosar®); леналидомидом (Revlimid®); летрозолом (Femara®); лейковорином (Wellcovorin®, Leucovorin®); леупролидом ацетатом (Eligard®); левамизолом (Ergamisol®); ломустином, CCNU (CeeBU®); меклоретамином, азотной горчицей (Mustargen®); мегестролом ацетатом (Megace®); мелфаланом, L-PAM (Alkeran®); меркаптопурином, 6-MP (Purinethol®); месна (Mesnex®); месна (Mesnex tabs®); метотрексат (Methotrexate®); метоксаленом (Uvadex®); митомицином C (Mutamycin®); митотаном (Lysodren®); митоксантроном (Novantrone®); нандролоном фенпропионатом (Durabolin-50®); неларабином (Arranon®); нофетумомабом (Verluma®); опрелвекином (Neumega®); оксалиплатином (Eloxatin®); паклитакселем (Paxene®); паклитакселем (Taxol®); частицами паклитакселя, связанными с белками (Abraxane®); палифермином (Kepivance®); памидронатом (Aredia®); пегадемазом (Adagen (Pegademase Bovine)®); пегаспаргазой (Oncaspar®); пегфилграстимом (Neulasta®); пеметрекседом динатрием (Alimta®); пентостатином (Nipent®); пипоброманом (Vercyte®); пликамицином, митрамицином (Mithracin®); натрием порфимером (Photofrin®); прокарбазином (Matulane®); хинакрином (Atabrine®); расбуриказом (Elitek®); ритуксимабом (Rituxan®); сарграмостимом (Leukine®); сарграмостимом (Prokine®); сорафенибом (Nexavar®); стрептозоцином (Zanosar®); сунитинибом малеатом (Sutent®); тальком (Sclerosol®); тамоксифеном (Nolvadex®); темодалом (Temodal®); тенипозидом, VM-26 (Vumon®); тестолактоном (Teslac®); тиогуанином, 6-TG (Thioguanine®); тиотепа (Thioplex®); топотеканом (Hycamtin®); торемифеном (Fareston®); тоситумомабом (Bexxar®); тоситумомабом/I-131 тоситумомабом (Bexxar®); трастузумабом (Herceptin®); третиноином, ATRA (Vesanoid®); урациловой горчицей (Uracil Mustard Capcules®); вальрубицином (Valstar®); винбластином (Velban®); винкристином (Oncovin®); винорельбином (Navelbine®); золедронатом (Zometa®) и вориностатом (Zolinza®).

[0164] Относительно полного обсуждения современных видов терапии рака, смотри, http://www.nci.nih.gov/, список онкологических лекарственных средств, одобренных FDA - на http://www.fda.gov/cder/рак/druglistframe.htm, и в The Merck Manual, Seventeenth Ed. 1999, полное содержание которых тем самым включается в качестве ссылки.

[0165] Другой вариант осуществления предлагает введение соединения или композиции по настоящему изобретению вместе с дополнительным терапевтическим агентом, который ингибирует или модулирует ремонтный белок удаления оснований. В некоторых вариантах осуществления, ремонтный белок удаления оснований выбирается из UNG, SMUG1, MBD₄, TDG, OGG1, MYH, NTH1, MPG, NEIL1, NEIL2, NEIL3 (ДНК гликозилаз); APE1, APEX2 (AP эндонуклеаз); LIG1, LIG3 (ДНК лигаз I и III); XRCC1 (дополнительного хозяина LIG3); PNK, PNKP (полинуклеотидкиназы и фосфатазы); PARP1, PARP2 (поли(ADP-рибоза)полимераз); PolB, PolG (полимераз); FEN1 (эндонуклеазы) или апратаксина. В других вариантах осуществления, ремонтный белок удаления оснований выбирается из PARP1, PARP2 или PolB. В других вариантах осуществления, ремонтный белок удаления оснований выбирается из PARP1 или PARP2. В некоторых вариантах осуществления, агент выбирается из олапариба (также известного как AZD2281 или KU-0059436), инипариба (также известного как BSI-201 или SAR240550), велипариба (также известного как ABT-888), рукапариба (также известного как PF-01367338), CEP-9722, INO-1001, MK-4827, E7016, BMN673 или AZD2461

Способы лечения

[0166] Один из аспектов настоящего изобретения относится к способу ингибирования активности ATR киназы у пациента, этот способ включает введение пациенту соединения, описанного в настоящем документе, или композиции, содержащей указанное соединение. В некоторых вариантах осуществления, указанный способ используются для лечения или предотвращения состояния, выбранного из пролиферативных и гиперпролиферативных заболеваний, таких как рак.

[0167] В некоторых вариантах осуществления, рак выбирается из раковых заболеваний, описанных в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления, указанный рак представляет собой рак легких, рак головы и шеи, рак поджелудочной железы, рак желудочно-кишечного тракта или рак головного мозга. В других вариантах осуществления, рак выбирается из рака легких или поджелудочной железы.

[0168] В других вариантах осуществления, рак выбирается из немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, рака поджелудочной железы, рака желчных протоков, рака головы и шеи, рака мочевого пузыря, рака ободочной и прямой кишки, глиобластомы, рака пищевода, рака молочной железы, гепатоклеточной карциномы или рака яичников.

[0169] В некоторых вариантах осуществления, рак легких представляет собой мелкоклеточный рак легких, и дополнительные терапевтические агенты представляют собой цисплатин и этопозид. В других примерах, рак легких представляет собой немелкоклеточный рак легких, и дополнительные терапевтические агенты представляют собой гемцитабин и цисплатин. В других вариантах осуществления, немелкоклеточный рак легких представляет собой сквамовый немелкоклеточный рак легких. В другом варианте осуществления, рак представляет собой рак молочной железы, и дополнительный терапевтический агент представляет собой цисплатин. В других вариантах осуществления, рак представляет собой трижды негативный рак молочной железы.

[0170] В определенных вариантах осуществления, “эффективное количество“ соединения или фармацевтически приемлемой композиции представляет собой количество эффективное для лечения указанного заболевания. Соединения и композиции, в соответствии со способом по настоящему изобретению, могут вводиться с использованием любого количества и любого способа введения, эффективного для лечения или уменьшения тяжести указанного заболевания.

[0171] Один из аспектов предлагает способ ингибирования ATR у пациента, включающий введение соединения или композиции, как описывается в настоящем документе. Другой вариант осуществления предлагает способ лечения рака, включающий введение пациенту соединения или композиции, описанной в настоящем документе, где переменные являются такими, как определено в настоящем документе.

[0172] Другой вариант осуществления предлагает способы лечения рака поджелудочной железы посредством введения соединения или композиции, описанной в настоящем документе, в сочетании с другим известным лечением рака поджелудочной железы. Один из аспектов настоящего изобретения включает введение соединения или композиции, описанной в настоящем документе, в сочетании с гемцитабином. В некоторых вариантах осуществления, рак поджелудочной железы включает одну из следующих линий клеток: PSN-1, MiaPaCa-2 или Panc-1. В соответствии с другим аспектом, рак включает одну из следующих линий первичной опухоли: Panc-M или MRC5.

[0173] Другой аспект настоящего изобретения включает введение соединения или композиции, описанной в настоящем документе, в сочетании с лучевой терапией. Еще один аспект предлагает способ устранения радиационно-индуцированной контрольной точки G2/M посредством введения соединения или композиции, описанной в настоящем документе, в сочетании с лучевым лечением.

[0174] Другой аспект предлагает способ лечения рака поджелудочной железы посредством введения в раковые клетки поджелудочной железы соединения или композиции, описанной в настоящем документе, в сочетании с одним или несколькими видами противораковой терапии. В некоторых вариантах осуществления, соединение или композиция объединяются с химиорадиационной терапией, химиотерапией и/или лучевой терапией. Как должно быть понятно специалистам в данной области, “химиорадиационная терапия” относится к режиму лечения, который включает как химиотерапию (такую как гемцитабин), так и облучение. В некоторых вариантах осуществления, химиотерапия представляет собой гемцитабин.

[0175] Еще один аспект предлагает способ повышения чувствительности раковых клеток поджелудочной железы по отношению к противораковой терапии, выбранной из гемцитабина или лучевой терапии посредством введения соединения или композиции, описанной в настоящем документе, в сочетании с противораковой терапией.

[0176] В некоторых вариантах осуществления, противораковая терапия представляет собой гемцитабин. В других вариантах осуществления, противораковая терапия представляет собой лучевую терапию. В другом варианте осуществления противораковая терапия представляет собой химиорадиационную терапию.

[0177] Другой аспект предлагает способ ингибирования фосфорилирования Chk1 (Ser 345) в раковой клетке поджелудочной железы, включающий введение соединения или композиции, описанной в настоящем документе, после лечения гемцитабином (100 нМ) и/или облучением (6 Гр) в раковую клетку поджелудочной железы.

[0178] Другой аспект предлагает способ разрушения индуцируемых повреждениями контрольных точек клеточного цикла посредством введения в раковую клетку соединения или композиции, описанной в настоящем документе, в сочетании с лучевой терапией.

[0179] Другой аспект предлагает способ ингибирования репарации повреждения ДНК посредством гомологичной рекомбинации в раковой клетке с помощью введения соединения или композиции, описанной в настоящем документе, в сочетании с одним или несколькими из следующих видов лечения: химиорадиационной терапии, химиотерапии и лучевой терапии.

[0180] В некоторых вариантах осуществления, химиотерапия представляет собой гемцитабин.

[0181] Другой аспект предлагает способ ингибирования репарации повреждения ДНК посредством гомологичной рекомбинации в раковой клетке с помощью введения соединения или композиции, описанной в настоящем документе, в сочетании с гемцитабином и лучевой терапией.

[0182] Другой аспект настоящего изобретения предлагает способ лечения немелкоклеточного рака легких, включающий введение пациенту соединения или композиции, описанной в настоящем документе, в сочетании с одним или несколькими из следующих дополнительных терапевтических агентов: цисплатином или карбоплатином, этопозидом и ионизирующим излучением. Некоторые варианты осуществления включают введение пациенту соединения, описанного в настоящем документе, в сочетании с цисплатином или карбоплатином, этопозидом и ионизирующим излучением. В некоторых вариантах осуществления сочетание представляет собой цисплатин, этопозид и ионизирующее излучение. В других вариантах осуществления сочетание представляет собой карбоплатин, этопозид и ионизирующее излучение.

[0183] Другой вариант осуществления предлагает способ ускорения гибели клеток, для раковых клеток, включающий введение пациенту соединения, описанного в настоящем документе, или композиции, содержащей указанное соединение.

[0184] Еще один вариант осуществления предлагает способ предотвращения клеточной репарации повреждения ДНК в раковых клетках, включающий введение пациенту соединения, описанного в настоящем документе, или композиции, содержащей указанное соединение. Еще один вариант осуществления предлагает способ предотвращения клеточной репарации повреждения ДНК, вызываемой повреждением ДНК в раковых клетках, включающий введение пациенту соединения по настоящему изобретению или композиции, содержащей указанное соединение.

[0185] Другой вариант осуществления предлагает способ сенсибилизации клеток по отношению к агентам, повреждающим ДНК, включающий введение пациенту соединения, описанного в настоящем документе, или композиции, содержащей указанное соединение.

[0186] В некоторых вариантах осуществления, способ используется на раковых клетках, имеющих дефекты в каскаде передачи сигналов ATM. В некоторых вариантах осуществления, указанный дефект представляет собой изменение экспрессирования или активности одного или нескольких из следующих объектов: ATM, p53, CHK2, MRE11, RAD50, NBS1, 53BP1, MDC1, H2AX, MCPH1/BRIT1, CTIP или SMC1. В других вариантах осуществления, указанный дефект представляет собой изменение экспрессирования или активности одного или нескольких из следующих объектов: ATM, p53, CHK2, MRE11, RAD50, NBS1, 53BP1, MDC1 или H2AX. В соответствии с другим вариантом осуществления, способ используется для рака, для раковой клетки или клетки, экспрессирующей онкогены, повреждающие ДНК.

[0187] В другом варианте осуществления, клетка представляет собой раковую клетку, экспрессирующую онкогены, повреждающие ДНК. В некоторых вариантах осуществления, указанная раковая клетка имеет изменение экспрессирования или активности одного или нескольких из следующих объектов: K-Ras, N-Ras, H-Ras, Raf, Myc, Mos, E2F, Cdc25A, CDC4, CDK2, Cyclin E, Cyclin A и Rb.

[0188] В соответствии с другим вариантом осуществления, способ используется для рака, раковой клетки или клетки, которая имеет дефект в белке, вовлеченном в репарацию с удалением оснований (“ремонтный белок удаления оснований”). Имеются множество способов, известных в данной области, для определения того, имеет ли опухоль дефект в репарации с удалением оснований. Например, секвенирование генных продуктов либо ДНК, либо mРНК для каждого гена репарации с удалением оснований (например, UNG, PARP1 или LIG1) может осуществляться на образце опухоли для определения того, присутствуют ли мутации, модулирующие, как ожидается, функционирование или экспрессирование генного продукта (Wang et al., Cancer Research 52:4824 (1992)). В дополнение к мутационной дезактивации, клетки опухоли могут модулировать ген репарации ДНК посредством гиперметилирования его промоторной области, приводящего к уменьшению экспрессирования гена. Чаще всего это оценивается с использованием специфичной к метилированию цепной реакции полимеразы (PCR) для количественного определения уровней метилирования на промоторах генов репарации с удалением оснований, представляющих интерес. Анализ метилирования промотора гена репарации с удалением оснований является коммерчески доступным (http://www.sabiosciences.com/dna_methylation_product/HTML/MEAH-421A.html).

[0189] Наконец, уровни экспрессирования генов репарации с удалением оснований могут оцениваться посредством прямого количественного определения уровней продуктов mРНК и белков каждого гена с использованием стандартных методик, таких как количественная цепная реакция полимеразы, связанной с обратной транскриптазой (RT-PCR), и иммуногистохимии (IHC), соответственно, (Shinmura et al., Carcinogenesis 25: 2311 (2004); Shinmura et al., Journal of Pathology 225:414 (2011)).

[0190] В некоторых вариантах осуществления, ремонтный белок удаления оснований представляет собой UNG, SMUG1, MBD₄, TDG, OGG1, MYH, NTH1, MPG, NEIL1, NEIL2, NEIL3 (ДНК гликозилазы); APE1, APEX2 (AP эндонуклеазы); LIG1, LIG3 (ДНК лигазы I и III); XRCC1 (LIG3 дополнительного хозяина); PNK, PNKP (полинуклеотидкиназы и фосфатазы); PARP1, PARP2 (поли(ADP-рибоза)полимеразы); PolB, PolG (полимеразы); FEN1 (эндонуклеазу) или апратаксин.

[0191] В некоторых вариантах осуществления, ремонтный белок удаления оснований представляет собой PARP1, PARP2 или PolB. В других вариантах осуществления, ремонтный белок удаления оснований представляет собой PARP1 или PARP2.

[0192] Способы, описанные выше (секвенирование гена, метилирование промотора и экспрессирование mРНК) также могут использоваться для характеризации статуса (например, экспрессии или мутации) других генов или белков, представляющих интерес, такие онкогены, повреждающие ДНК, экспрессируются опухолью или дефектами в каскаде передачи сигналов ATM клетки.

[0193] Другой вариант осуществления предлагает использование соединения или композиции, описанной в настоящем документе, в качестве радиосенсибилизатора или химиосенсибилизатора.

[0194] Другой вариант осуществления предлагает использование соединения или композиции, описанной в настоящем документе, в качестве единственного агента (монотерапии) для лечения рака. В некоторых вариантах осуществления, соединения или композиции, описанные в настоящем документе, используются для лечения пациентов, имеющих рак, с помощью дефекта реакции на повреждение ДНК (DDR). В других вариантах осуществления, указанный дефект представляет собой мутацию или потерю ATM, p53, CHK2, MRE11, RAD50, NBS1, 53BP1, MDC1 или H2AX.

Терминология

[0195] Термины “субъект“, “хозяин” или “пациент” включают животное и человека (например, мужчину или женщину, например, ребенка, подростка или взрослого). Предпочтительно, “субъект“, “хозяин” или “пациент” представляет собой человека.

[0196] Соединения по настоящему изобретению включают соединения, в целом описанные в настоящем документе, и дополнительно иллюстрируются классами, подклассами и видами, описанными в настоящем документе. Как используется в настоящем документе, должны применяться следующие далее определения, если не указано иного. Для целей настоящего изобретения, химические элементы идентифицируются в соответствии с Периодической таблицей элементов, version CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 75^th Ed. В дополнение к этому, общие принципы органической химии описаны в “Organic Chemistry”, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, и “March's Advanced Organic Chemistry”, 5^th Ed., Ed.: Smith, M.B. and March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001, полное содержание которых тем самым включается в качестве ссылок.

[0197] Как описывается в настоящем документе, указанный численный диапазон атомов включает любое целое число в нем. Например, группа, имеющая от 1 до 4 атомов, может иметь 1, 2, 3, или 4 атома.

[0198] Как описывается в настоящем документе, соединения по настоящему изобретению могут необязательно быть замещенными одним или несколькими заместителями, такими, как иллюстрируется, в целом, в настоящем документе, или как иллюстрируется с помощью конкретных классов, подклассов и видов по настоящему изобретению. Будет очевидно, что фраза “необязательно замещенный” используется взаимозаменяемо с фразой “замещенный или незамещенный”. Как правило, термин “замещенный”, перед которым либо стоит термин “необязательно”, либо нет, относится к замене водородных радикалов в данной структуре радикалом указанного заместителя. Если не указано иного, необязательно замещенная группа может иметь заместитель в каждом замещаемом положении группы, и когда несколько положений в любой данной структуре может замещаться несколькими заместителями, выбранными из указанной группы, заместители могут быть либо одинаковым, либо различным в каждом положении. Сочетания заместителей, предусмотренные настоящим изобретением, предпочтительно представляют собой такие заместители, которые дают в результате образование стабильных или химически доступных соединений.

[0199] Если не указано иного, заместитель, соединенный с помощью связи, нарисованной от центра кольца, означает, что заместитель может быть связан на любом положении кольца. В примере i ниже, например, J^w может связываться в любом положении пиридильного кольца. Для бициклических колец, связь, нарисованная сквозь оба кольца, показывает, что заместитель может связываться в любом положении бициклического кольца. В примере ii ниже, например, J^w может связываться с 5-членным кольцом (например, на атоме азота) и на 6-членном кольце.

iii

[0200] Термин “стабильный”, как используется в настоящем документе, относится к соединениям, которые по существу не изменяются, когда подвергаются воздействию условий, делающих возможным их получение, детектирование, извлечение, очистку и использование для одной или нескольких целей, описанных в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления, стабильное соединение или химически доступное соединение представляет собой такое соединение, которое по существу не изменяется, когда выдерживается при температуре 40°C или меньше, в отсутствие влажности или других химически активных условий, в течение, по меньшей мере, недели.

[0201] Термин “донорно-акцепторная связь”, как используется в настоящем документе, определяется как координационная связь, сформированная при взаимодействии между молекулярными частицами, одна из которых служит в качестве донора, а другая в качестве акцептора пары электронов, которые должны обобществляться в образующемся комплексе.

[0202] Термин “алифатическое соединение” или “алифатическая группа”, как используется в настоящем документе, означает прямоцепную (то есть, неразветвленную), разветвленную или циклическую, замещенную или незамещенную углеводородную цепь, которая является полностью насыщенной или которая содержит одну или несколько единиц ненасыщенности, которая имеет одну точку присоединения к остальной части молекулы.

[0203] Если не указано иного, алифатические группы содержат 1-20 алифатических атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления, алифатические группы содержат 1-10 алифатических атомов углерода. В других вариантах осуществления, алифатические группы содержат 1-8 алифатических атомов углерода. В других вариантах осуществления, алифатические группы содержат 1-6 алифатических атомов углерода, а в других вариантах осуществления, алифатические группы содержат 1-4 алифатических атома углерода. Алифатические группы могут представлять собой линейные или разветвленные замещенные или незамещенные алкильные, алкенильные или алкинильные группы. Конкретные примеры включают, но, не ограничиваясь этим, метил, этил, изопропил, н-пропил, втор-бутил, винил, н-бутенил, этинил и трет-бутил. Алифатические группы могут также быть циклическими или иметь сочетание линейных или разветвленных и циклических групп. Примеры таких типов алифатических групп включают, но, не ограничиваясь этим, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогексенил, -CH₂-циклопропил, CH₂CH₂CH(CH₃)-циклогексил.

[0204] Термин “циклоалифатическое соединение” (или “карбоцикл” или “карбоциклил”) относится к моноциклическому C₃-C₈ углеводороду или бициклическому C₈-C₁₂ углеводороду, который является полностью насыщенным или который содержит одну или несколько единиц ненасыщенности, но который не является ароматическим, который имеет одну точку присоединения к остальной части молекулы, где любое индивидуальное кольцо в указанной бициклической кольцевой системе имеет 3-7 элементов. Примеры циклоалифатических групп включают, но, не ограничиваясь этим, циклоалкильные и циклоалкенильные группы. Конкретные примеры включают, но, не ограничиваясь этим, циклогексил, циклопропил и циклобутил.

[0205] Термин “гетероцикл”, “гетероциклил” или “гетероциклическое соединение”, как используется в настоящем документе, означает неароматические, моноциклические, бициклические или трициклические кольцевые системы, в которых один или несколько элементов кольца представляют собой независимо выбранные гетероатомы. В некоторых вариантах осуществления, “гетероцикл”, “гетероциклил” или “гетероциклическая” группа имеет от трех до четырнадцати элементов кольца, при этом один или несколько элементов кольца представляет собой гетероатомы, независимо выбранные из кислорода, серы, азота или фосфора, и каждое кольцо в системе содержит 3-7 элементов кольца.

[0206] Примеры гетероциклов включают, но, не ограничиваясь этим, 3-1H-бензимидазол-2-он, 3-(1-алкил)-бензимидазол-2-он, 2-тетрагидрофуранил, 3-тетрагидрофуранил, 2-тетрагидротиофенил, 3-тетрагидротиофенил, 2-морфолино, 3-морфолино, 4-морфолино, 2-тиоморфолино, 3-тиоморфолино, 4-тиоморфолино, 1-пирролидинил, 2-пирролидинил, 3-пирролидинил, 1-тетрагидропиперазинил, 2-тетрагидропиперазинил, 3-тетрагидропиперазинил, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил, 1-пиразолинил, 3-пиразолинил, 4-пиразолинил, 5-пиразолинил, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил, 4-пиперидинил, 2-тиазолидинил, 3-тиазолидинил, 4-тиазолидинил, 1-имидазолидинил, 2-имидазолидинил, 4-имидазолидинил, 5-имидазолидинил, индолинил, тетрагидрохинолинил, тетрагидроизохинолинил, бензотиолан, бензодитиан и 1,3-дигидро-имидазол-2-он.

[0207] Циклические группы, (например, циклоалифатические и гетероциклы) могут быть линейно слитыми, соединенными мостиками или спироциклическими.

[0208] Термин “гетероатом” означает один или несколько атомов из кислорода, серы, азота, фосфора или кремния (включая любую окисленную форму азота, серы, фосфора или кремния; кватернизованную форму любого основного азота или замещаемый азот гетероциклического кольца, например, N (как в 3,4-дигидро-2H-пирролиле), NH (как в пирролидиниле) или NR⁺ (как в N-замещенном пирролидиниле)).

[0209] Термин “ненасыщенный”, как используется в настоящем документе, означает, что остаток имеет одну или несколько единиц ненасыщенности. Как должно быть известно специалистам в данной области, ненасыщенные группы могут быть частично ненасыщенными или полностью ненасыщенными. Примеры частично ненасыщенных групп включают, но, не ограничиваясь этим, бутен, циклогексен и тетрагидропиридин. Полностью ненасыщенные группы могут быть ароматическими, анти-ароматическими или неароматическими. Примеры полностью ненасыщенных групп включают, но, не ограничиваясь этим, фенил, циклоокстатетраен, пиридил, тиенил и 1-метилпиридин-2(1H)-он.

[0210] Термин “алкокси” или “тиоалкил”, как используется в настоящем документе, относится к алкильной группе, как определено ранее, присоединенной через атом кислорода (“алкокси”) или серы (“тиоалкил”).

[0211] Термины “галогеналкил”, “галогеналкенил”, “галогеналифатическое соединение” и “галогеналкокси” означают алкил, алкенил или алкокси, например, замещенные одним или несколькими атомами галогена. Этот термин включает перфторированные алкильные группы, такие как -CF₃ и -CF₂CF₃.

[0212] Термины “галоген”, “гало” и “гал” означают F, Cl, Br или I.

[0213] Термин “арил”, используемый сам по себе или как часть большего остатка, как в “арилалкиле”, “арилалкокси” или “арилоксиалкиле”, относится к моноциклическим, бициклическим и трициклическим кольцевым системам, имеющим от пяти до четырнадцати членов кольца, в целом, где, по меньшей мере, одно кольцо в системе является ароматическим и где каждое кольцо в системе содержит 3-7 элементов кольца. Термин “арил” может использоваться взаимозаменяемо с термином “арильное кольцо”.

[0214] Термин “гетероарил”, используемый сам по себе или как часть большего остатка, как в “гетероарилалкиле” или “гетероарилалкокси”, относится к моноциклическим, бициклическим и трициклическим кольцевым системам, имеющим в целом от пяти до четырнадцати элементов кольца, где, по меньшей мере, одно кольцо в системе является ароматическим, по меньшей мере, одно кольцо в системе содержит один или несколько гетероатомов и где каждое кольцо в системе содержит 3-7 элементов кольца. Термин “гетероарил” может использоваться взаимозаменяемо с термином “гетероарильное кольцо” или термином “гетероароматическое соединение”. Примеры гетероарильных колец включают, но, не ограничиваясь этим, 2-фуранил, 3-фуранил, N-имидазолил, 2-имидазолил, 4-имидазолил, 5-имидазолил, бензимидазолил, 3-изоксазолил, 4-изоксазолил, 5-изоксазолил, 2-оксазолил, 4-оксазолил, 5-оксазолил, N-пирролил, 2-пирролил, 3-пирролил, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, 2-пиримидинил, 4-пиримидинил, 5-пиримидинил, пиридазинил (например, 3-пиридазинил), 2-тиазолил, 4-тиазолил, 5-тиазолил, тетразолил (например, 5-тетразолил), триазолил (например, 2-триазолил и 5-триазолил), 2-тиенил, 3-тиенил, бензофурил, бензотиофенил, индолил (например, 2-индолил), пиразолил (например, 2-пиразолил), изотиазолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,5-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазолил, 1,2,3-триазолил, 1,2,3-тиадиазолил, 1,3,4-тиадиазолил, 1,2,5-тиадиазолил, пуринил, пиразинил, 1,3,5-триазинил, хинолинил (например, 2-хинолинил, 3-хинолинил, 4-хинолинил) и изохинолинил (например, 1-изохинолинил, 3-изохинолинил или 4-изохинолинил).

[0215] необходимо понять, что термин “гетероарил” включает определенные типы гетероарильных колец, которые существуют при равновесии между двумя различными формами. Более конкретно, например, такие частицы как гидропиридин и пиридинон (и подобным же образом, гидроксипиримидин и пиримидинон), как подразумевается, охватываются определением “гетероарила”.

[0216] Термин “защитная группа” и “блокирующая группа”, как используется в настоящем документе, являются взаимозаменяемыми и относятся к агенту, используемому для временного блокирования одной или нескольких желаемых функциональных групп в соединении с множеством химически активных центров. В определенных вариантах осуществления, защитная группа имеет одну или несколько, или предпочтительно, все, следующие характеристики: a) добавляется селективно к функциональной группе с хорошим выходом с получением защищенного субстрата, который b) является стабильной по отношению к реакциям, осуществляемым на одном или нескольких других химически активных центрах; и c) является селективно удаляемой с хорошим выходом с помощью реагентов, которые не воздействуют на регенерированную функциональную группу со снятой защитой. Как было бы понятно специалистам в данной области, в некоторых присутствующих, реагенты не воздействуют на другие химически активные группы в соединении. В других случаях, реагенты могут также взаимодействовать с другими химически активными группами в соединении. Примеры защитных групп описаны подробно в Greene, T.W., Wuts, P. G in “Protective Groups in Organic Synthesis”, Third Edition, John Wiley & Sons, New York: 1999 (и в других изданиях книги), полное содержание которой тем самым включается в качестве ссылки. Термин “азотзащитная группа”, как используется в настоящем документе, относится к агенту, используемому для временного блокирования одного или нескольких желаемых химически активных центров азота в мультифункциональном соединении. Предпочтительные азотзащитные группы также имеют характеристики, иллюстрируемые для защитной группы, выше, и определенные иллюстративные азотзащитные группы также подробно описаны в Chapter 7 в Greene, T.W., Wuts, P. G в “Protective Groups in Organic Synthesis”, Third Edition, John Wiley & Sons, New York: 1999, полное содержание которой тем самым включается в качестве ссылки.

[0217] В некоторых вариантах осуществления, метиленовая единица алкильной или алифатической цепи необязательно заменяется другим атомом или группой. Примеры таких атомов или группы включают, но, не ограничиваясь этим, азот, кислород, серу, -C(O)-, -C(=N-CN)-, -C(=NR)-, -C(=NOR)-, -SO- и -SO₂-. Эти атомы или группы могут объединяться с образованием групп больших размеров. Примеры таких групп больших размеров включают, но, не ограничиваясь этим, -OC(O)-, -C(O)CO-, -CO₂-, -C(O)NR-, -C(=N-CN), -NRCO-, -NRC(O)O-, -SO₂NR-, -NRSO₂-, -NRC(O)NR-, -OC(O)NR-, и -NRSO₂NR-, где R представляет собой, например, H или C_1-6алифатическое соединение. Должно быть понятно, что эти группы могут связываться с метиленовыми единицами алифатической цепи с помощью одинарных, двойных или тройных связей. Пример необязательной замены (в этом случае, атома азота), который связан с алифатической цепью через двойную связь, может представлять собой -CH₂CH=N-CH₃. В некоторых случаях, особенно на конечном краю, необязательная замена может быть связана с алифатической группой с помощью тройной связи. Один из примеров этого может представлять собой CH₂CH₂CH₂C=N. Должно быть понятно, что в этой ситуации, конечный атом азота не связан с другим атомом.

[0218] Должны быть также понятно, что термин “метиленовая единица” может также относится к разветвленной или замещенной метиленовой единице. Например, в изопропильном остатке [-CH(CH₃)₂], атом азота (например, NR), заменяющий первую упоминаемую “метиленовую единицу”, должен давать в результате диметиламин [-N(CH₃)₂]. В таких случаях, как эти, специалист в данной области должен понять, что атом азота не будет иметь никаких дополнительных атомов, связанных с ним, и “R” из “NR” в этом случае отсутствовал бы.

[0219] Если не указано иного, необязательные замены образуют химически стабильное соединение. Необязательные замены могут осуществляться как в пределах цепи, так и/или на любом краю цепи; то есть как в точке присоединения, так и/или также на конечном краю. Две необязательных замены могут также располагаться рядом друг с другом в пределах цепи, постольку, поскольку это дает в результате химически стабильное соединение. Например, C₃ алифатическое соединение может необязательно замещаться 2 атомами азота с образованием -C-N=N. Необязательные замены могут также полностью заменять все атомы углерода в цепи. Например, C₃ алифатическое соединение может необязательно заменяться -NR-, -C(O)- и -NR- с образованием -NRC(O)NR- (мочевины).

[0220] Если не указано иного, если замена осуществляется на конечном краю, замещающий атом связывается с атомом водорода на конечном краю. Например, если метиленовая единица -CH₂CH₂CH₃ необязательно замещается -O-, полученное в результате соединение может представлять собой -OCH₂CH₃, -CH₂OCH₃ или -CH₂CH₂OH. Должно быть понятно, что если конечный атом не содержит свободных валентных электронов, тогда атома водорода на конечном краю не требуется (например, -CH₂CH₂CH=O или -CH₂CH₂C≡N).

[0221] Если не указано иного, структуры, показанные в настоящем документе, также, как подразумевается, включают все изомерные (например, энантиомерные, диастереомерные, геометрические, конформационные и вращательные) формы структуры. Например, в настоящее изобретение включаются R и S конфигурации для каждого ассиметричного центра, (Z) и (E) изомеры с двойной связью, и (Z) и (E) конформационные изомеры. Как будет понятно специалисту в данной области, заместитель может свободно вращаться вокруг любых вращающихся связей. Например, заместитель, изображенный как

,также представляет собой

[0222] Следовательно, отдельные стереохимические изомеры, также, как и энантиомерные, диастереомерные, геометрические, конформационные и вращательные смеси настоящих соединений находятся в рамках настоящего изобретения.

[0223] Если не указано иного, все таутомерные формы соединений по настоящему изобретению находятся в рамках настоящего изобретения.

[0224] В соединениях по настоящему изобретению любой атом, не обозначенный конкретно как конкретный изотоп, как подразумевается, представляет собой любой стабильный изотоп этого атома. Если не утверждается иного, когда положение конкретно обозначено как “H” или “водород”, это положение, как понимается, содержит водород при его природной изотопной композиции. Также если не утверждается иного, когда положение конкретно обозначено как “D” или “дейтерий”, это положение, как понимается, содержит дейтерий при концентрации, которая, по меньшей мере, в 3340 раз больше, чем природная концентрация дейтерия, которая составляет 0,015% (то есть, по меньшей мере, 50,1% включения дейтерия).

[0225] Как “D”, так и “d” относятся к дейтерию.

[0226] В дополнение к этому, если не указано иного, структуры, изображенные в настоящем документе, также, как подразумевается, включают соединения, которые отличаются только присутствием одного или нескольких изотопно обогащенных атомов. Например, соединения, имеющие представленные структуры, за исключением замены водорода дейтерием или тритием, или замены углерода углеродом, обогащенным ¹³C- или ¹⁴C, находятся в рамках настоящего изобретения. Такие соединения являются пригодными для использования, например, в качестве аналитических инструментов или зондов при биологических анализах.

[0227] Как используется в настоящем документе, “кристаллический” относится к твердому телу, которое имеет конкретное расположение и/или конформацию молекул в кристаллической решетке.

[0228] Как используется в настоящем документе, термин “аморфный” относится к твердым формам, которые состоят из неупорядоченных расположений молекул и не обладают различаемой кристаллической решеткой.

[0229] Как используется в настоящем документе, термин “сольват” относится к кристаллическому твердому аддукту, содержащему либо стехиометрические, либо нестехиометрические количества растворителя, инкорпорированного в кристаллическую структуру. Если инкорпорированный растворитель представляет собой воду, такой аддукт упоминается как “гидрат”.

Сокращения [0230] Используются следующие сокращения:
DMSO	диметилсульфоксид
DCM	дихлорметан
ATP	аднозинтрифосфат
TFA	трифторуксусная кислота
¹H ЯМР	Протонный ядерный магнитный резонанс
HPLC	высокоэффективная жидкостная хроматография
LCMS	жидкостная хроматография - масс-спектрометрия
Rt	Время удерживания
MTBE	простой метил трет-бутиловый эфир
XRPD	дифракция рентгеновского излучения на порошках
DSC	дифференциальная сканирующая калориметрия
TGA	термогравиметрический анализ
RT	комнатная температура
NMP	N-метил-2-пирролидон
Bp	температура кипения
DMF	диметилформамид
PTSA	п-толуолсульфоновая кислота
DIPEA	N,N-диизопропилэтиламин
HOBT	гидроксибензотриазол
HATU	1-[Бис(диметиламино)метилен]-1H-1,2,3-триазолo[4,5-b]пиридиний 3-оксид гексафторфосфат
TBTU	2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний тетрафторборат
T3P	Пропилфосфоновый ангидрид
COMU	1-[(1-(Циано-2-этокси-2-оксоэтилиденаминоокси)диметиламино-морфолино)]уронийгексафторфосфат
TCTU	[(6-хлорбензотриазол-1-ил)окси-(диметиламино)метилен]диметиламмоний тетрафторборат
HBTU	O-Бензотриазол-N,N,N',N'-тетраметил-уроний гексафторфосфат
ECDI	1-Этил-3-(3-диметиламинопропил)-карбодиимид
LDA	литий диизопропиламид
CDI	1,1'-Карбонилдиимидазол

Способы

[0231] Способы и соединения, описанные в настоящем документе, являются пригодными для использования при получении ингибиторов ATR, которые содержат аминопиразолопиримидиновое ядро. Общие процедуры синтеза, показанные на схемах в настоящем документе, являются пригодными для использования при генерировании широкого ряда химических частиц, которые можно использовать при получении фармацевтических соединений.

СХЕМА A

[0232] Соединения по настоящему изобретению могут синтезироваться в соответствии со способами, сходным со способом, изображенном на Схеме A.

Стадия 1

[0233] Анион коммерчески доступного аллилцианоацетата 1 может взаимодействовать, например, с трихлорацетонитрилом с получением промежуточного соединения 2. На стадии анионной конденсации, анион коммерчески доступного аллилцианоацетата 1 может генерироваться с помощью основания, такого как ацетат калия, в соответствующем растворителе, таком как спирт (например, изопропиловый спирт). Затем анион взаимодействует с трихлорацетонитрилом при комнатной температуре.

Стадия 2

[0234] Затем промежуточное соединение 2 взаимодействует с гидразином с образованием диаминопиразола 3. На стадии образования пиразола, промежуточное соединение 2 взаимодействует с гидразином (или его гидратом) в апротонном растворителе, таком как DMF, с получением диаминопиразола 3. Реакцию осуществляют при основных условиях (например, в присутствии ацетата калия или AcONa) при нагреве (например, ≥110°C) для обеспечения полной циклизации.

Стадия 3

[0235] Промежуточное соединение 3 может дополнительно конденсироваться с партнером по диэлектрофильному связыванию с образованием пиримидина 4a-c. На стадии образования пиримидина, промежуточное соединение 3 взаимодействует с 1,3-диэлектрофильными частицами (например, 1,3-диальдегидом или 3-(диалкиламино)-проп-2-еналем) в различных типах растворителей (например, в DMF или смеси DMSO/вода) для получения бициклических ядер 4a-c. Затем один или два из электрофильных центров защищаются/маскируются (например, маскируются с помощью альдегида как кеталь), и требуется введение сульфоновой кислоты (например, PTSA) для освобождения химически активной функциональной группы.

Стадия 4

[0236] Снятие защиты, например, с помощью гидролиза, со сложного аллилового эфира приводит к получению карбоновых кислот 5a-c. На стадии снятия защиты, соединение 4a-c подвергается воздействию гидролитических условий, которые известны специалистам в данной области. Например, обработка 4a-c с помощью фенилсилана или 4-метилбензолсульфината в присутствии каталитического количества палладия (например, Pd(PPh₃)₄) приводит к образованию соответствующей карбоновой кислоты 5a-c. Альтернативно, соединения 4a-c могут обрабатываться водным раствором щелочи (например, NaOH, LiOH или KOH) с получением кислот 5a-c.

Стадия 5

[0237] На стадии образования активированного сложного эфира, карбоновые кислоты 5a-c взаимодействуют с агентом для образования амидной связи, известным специалистам в данной области. Соответствующие партнеры для образования амидной связи включают, но, не ограничиваясь этим, TBTU, TCTU, HATU, T3P и COMU. Когда связывающий агент выбирается соответствующим образом, реакция может осуществляться быстро (~1 час) при комнатной температуре в присутствии органического основания, такого как алифатический амин (например, триэтиламин, DIPEA) с получением активированных сложных эфиров 6a-c. Например, когда используются агенты для образования амидной связи TBTU [J=H] или TCTU[J=Cl], соединения 6a-c легко получают посредством фильтрования реакционной смеси.

[0238] Образование активированных сложных эфиров 6a-c перед образованием амидной связи для получения I-A, как правило, является предпочтительным, хотя и прямое преобразование 5a-c в соединения формулы I-A по настоящему изобретению также является возможным. Альтернативные активированные сложные эфиры также могут использоваться (выделяться или образовываться in situ) и будут известны специалистам в данной области (например, с использованием связывающих агентов CDI, TBTU, TCTU, HATU, T3P, COMU).

Стадия 6

[0239] На стадии образования амидной связи, активированные сложные эфиры 6a-c могут взаимодействовать с замещенным или незамещенным 3-аминопиридином с получением соединений формулы I-A по настоящему изобретению. Условия реакции для амидного связывания осуществляются, как правило, в апротонном растворителе (например, NMP, пиридин, DMF и тому подобное…) при нагреве (например, ≥90°C). Затем 3-аминопиридин может дополнительно функционализоваться после образования амидной связи.

[0240] Альтернативно, две стадии, описанные выше, могут объединяться: карбоновые кислоты 5a-c могут использоваться в качестве исходных точек для образования амидной связи, активированные сложные эфиры генерируются in situ, с использованием таких же агентов для образования амидной связи, как те, которые описаны выше. Соединения I-A по настоящему изобретению выделяются способом, сходным с тем, который описан выше.

Схема B

[0241] Альтернативно, соединения по настоящему изобретению могут быть получены в соответствии со способами, сходными с тем, который изображен на Схеме B.

Стадия 1

[0242] Амид 8 может легко быть получен из коммерчески доступной цианоуксусной кислоты 7. На стадии образования амидной связи, цианоуксусная кислота 7 может взаимодействовать с замещенным 3-аминопиридином с получением соединения 8 по настоящему изобретению. Условия реакции для амидного связывания осуществляются, как правило, в апротонном растворителе (например, DCM, NMP, DMF и тому подобное), в присутствии органического основания, такого как алифатический амин, (например, триэтиламин или DIPEA) и амидного связывающего агента, известного специалистам в данной области: например EDCI, TBTU, COMU, T3P, и тому подобное.

Стадия 2

[0243] На стадии образования пиразола, анион цианоамида 8 может генерироваться с помощью основания (такого как ацетат калия или натрия) в соответствующем растворителе, таком как спирт (например, этанол). Затем анион взаимодействует с трихлорацетонитрилом при комнатной температуре. Полученный в результате твердый продукт, который можно собрать посредством фильтрования, взаимодействует затем с гидразином (или его гидратом) в апротонном растворителе, таком как DMF или NMP, с получением диаминопиразола 9, последний дополнительно конденсируется вместе с партнером по диэлектрофильному связыванию с образованием пиримидиновой части соединений формулы I-A по настоящему изобретению.

Стадия 3

[0244] На стадии образования пиримидина, промежуточное соединение 9 взаимодействует с 1,3-диэлектрофильными частицами (например, 1,3-диальдегидом или 3-(диалкиламино)-проп-2-еналем) в различных типах растворителей (например, iPrOH/вода, DMF или DMSO/вода) с получением желаемых продуктов I-A. Когда один или два из электрофильных центров защищается/маскируются (например, маскируется альдегидом как кеталь), требуется введение сульфоновой кислоты (например, PTSA) для освобождения химически активной функциональной группы.

Приготовления и примеры

[0245] Все коммерчески доступные растворители и реагенты используют, как они получены. Реакции с микроволновым нагревом осуществляют с использованием микроволновой печки CEM Discover. Например, флэш-хроматографию осуществляют на системе ISCO^© Combiflash^R Companion^TM, элюируя с помощью градиента смеси от 0 до 100% EtOAc/петролейный эфир. Другие способы, известные в данной области, также используют для осуществления флэш-хроматографии. Образцы используются предварительно поглощенными на диоксиде кремния. Когда она упоминается, сверхкритическая жидкостная хроматография (SFC) осуществляется на установке Berger Minigram SFC. Все спектры ¹H ЯМР регистрируют с использованием инструмента Bruker Advance III 500 на 500 МГц. Образцы для MS анализируются на масс-спектрометре Waters SQD с электрораспылительной ионизацией, работающем в режиме положительных и отрицательных ионов. Образцы вводят в масс-спектрометр с использованием хроматографии. Все конечные продукты имеют чистоту ≥95%, если не указано иного, в деталях эксперимента. Чистота с помощью ВЭЖХ измеряется на системе Waters Acquity UPLC с помощью инструмента Waters SQD MS, снабженного колонкой Waters UPLC BEH C8 1,7 мкм, 2,1×50 мм и предварительной колонкой C8 1,7 мкм, 2,1×5 мм Vanguard BEH.

[0246] Как используется в настоящем документе, термин “Rt (мин)” относится к времени удерживания при ВЭЖХ, в минутах, относящемуся к соединениям. Если не указано иного, методы ВЭЖХ, используемые для получения сообщаемых времен удерживания, являются такими, как описано ниже:

Метод ВЭЖХ

Инструмент: Waters Acquity UPLC-MS;

Колонка: Waters UPLC BEH C8 1,7 мкм, 2,1×50 мм с предварительной колонкой 1,7 мкм, 2,1×5 мм Vanguard BEH C8;

Температура колонки: 45°C;

Подвижная фаза A: 10 мМ формиата аммония в смеси вода:ацетонитрил, 95:5, pH 9;

Подвижная фаза B: ацетонитрил;

детектирование: 210-400 нм;

Градиент: 0-0,40 мин: 2% B, 0,40-4,85 мин: 2% B-98% B, 4,85-4,90 мин: 98% B-2% B, 4,90-5,00 мин: выдерживание при 2% B;

Скорость потока: 0,6 мл/минут.

Приготовление 1: Аллил 3,5-диамино-1H-пиразол-4-карбоксилат

Стадия 1: аллил 3-амино-4,4,4-трихлор-2-цианобут-2-еноат 2

[0247] К раствору KOAc (589,4 г, 6,006 моль) в изопропаноле (3 л) добавляют аллилцианоацетат (429,4 г, 403,2 мл, 3,432 моль), и реакционную смесь охлаждают до 5°C. Трихлорацетонитрил (495,5 г, 3,432 моль) добавляют порциями по 50 мл, поддерживая температуру ниже 15°C. Затем реакционной смеси дают возможность для нагрева до 20°C и перемешивают в течение 3 часов. Воду (~4 л) добавляют для растворения неорганических материалов и преципитации желаемого продукта. Смесь перемешивают в течение 20 минут, и твердый продукт выделяют посредством фильтрования в вакууме. Этот продукт фильтруют, промывают водой (2×0,5 л) и сушат в вакуумной печи в течение ночи при 40°C с получением аллил 3-амино-4,4,4-трихлор-2-цианобут-2-еноата 2 в виде беловатого порошка (787 г, 85%).

Стадия 2: Аллил 3,5-диамино-1H-пиразол-4-карбоксилат 3

[0248] К суспензии аллил 3-амино-4,4,4-трихлор-2-циано-бут-2-еноата 2 (619 г, 2,297 моль) и KOAc (676,3 г, 6,891 моль) в DMF (2,476 л) при 0°C медленно добавляют гидразин гидрат (172,5 г, 167,6 мл, 3,446 моль) в течение 15 мин. Затем реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 2 часов, на этой стадии ¹H ЯМР показывает полное потребление исходных материалов. Затем реакционную смесь нагревают в течение ночи при 110°C, перед тем, как ей позволяют охладиться до температуры окружающей среды, и перемешивают в течение еще 48 часов. Смесь фильтруют через воронку из спеченого стекла для удаления преципитировашего твердого продукта, и фильтрат выпаривают при пониженном давлении с получением густой жидкости. Добавляют DCM (приблизительно 2 л), и смесь фильтруют опять для удаления дополнительных твердых продуктов, которые преципитируют. Фильтрат очищают через 1 кг слоя силикагеля (градиент DCM/MeOH в качестве элюента), и растворитель удаляют с получением оранжевого твердого продукта, который суспендируют в ацетонитриле и нагревают примерно при 70°C до тех пор, пока весь твердый продукт не переходит в раствор, в этом момент раствору позволяют охлаждаться до температуры окружающей среды, затем до 2°C. Преципитат, который образуется, выделяют посредством фильтрования в вакууме, промывают охлажденным MeCN (~50 мл) и сушат до постоянной массы в вакуумной печи с получением указанного в заголовке соединения в виде беловатого порошка (171,2 г, 41%).

Приготовление 2a: 1H-бензо[d][1,2,3]триазол-1-ил 2-амино-6-фторпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилат

Стадия 1: аллил 2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилат 4a

[0249] К суспензии аллил 3,5-диамино-1H-пиразол-4-карбоксилата 3 (42,72 г, 234,5 ммоль) в смеси DMSO (270,8 мл)/вода (270,8 мл), добавляют p-TsOH гидрат (46,72 г, 245,6 ммоль) и 3-(диизопропиламино)-2-фтор-проп-2-еналь (описанный в Tetrahedron Letters, 33(3), 357-60; 1992) (38,69 г, 223,3 ммоль). Реакционную смесь нагревают до 100°C в течение 3 часов, в течение этого времени твердый продукт медленно преципитирует из раствора. Оранжевой суспензии дают возможность для охлаждения до RT в течение ночи. Твердый продукт фильтруют, промывают водой и сушат в вакууме с получением аллил 2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]-пиримидин-3-карбоксилата 4a как твердого продукта в виде песка (45,05 г, выход 85%).

[0250] В альтернативном способе, аллил 2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилат 4a может быть синтезирован с помощью общей Схемы C-1, ниже.

Схема C-1

Реакция 1

[0251] Малоновый альдегид, защищенный бис-ацеталем (промежуточное соединение 35), может быть освобожден от защиты при кислотных условиях с образованием промежуточного соединения 36. В некоторых вариантах осуществления, кислотные условия могут генерироваться посредством использования кислоты, независимо выбранной из HCl, H₂SO₄, MeSO₂H, TFA, HBF₄ или pTSA, в соответствующем растворителе, например, в воде. Предпочтительно, кислота, используемая в реакции, выбирается из pTSA или MeSO₂H. R° предпочтительно представляет собой C_1-6алифатическую группу. В некоторых вариантах осуществления, R° выбирается из метила, этила, пропила, изопропила, бутила или пентила. В других вариантах осуществления, R° выбирается из метила или этила.

Реакция 2

[0252] Промежуточное соединение 36 может взаимодействовать с электрофильным фторирующим агентом с образованием промежуточного соединения 38. В некоторых вариантах осуществления, электрофильный фторирующий агент независимо выбирается из 1-(хлорметил)-4-фтор-1,4-диазонийбицикло[2,2,2]октана дитетрафторбората (Selectfluor®), Accufluor®, N-фторбензолсульфонамида, замещенных 1-фторпиридиниевых солей или газообразного фтора.

Реакция 3

[0253] Промежуточное соединение 38 может взаимодействовать с промежуточным соединением 3 при соответствующих условиях конденсации с образованием промежуточного соединения 4a. В некоторых вариантах осуществления, соответствующие условия конденсации могут включать взаимодействие промежуточного соединения 38 с промежуточным соединением 3 в присутствии растворителя и при нагреве с получением бициклического ядра 4a. Реакция может иметь место в различных типах растворителей, например, воде, DMSO/воде или DMF.

[0254] В одном из примеров, промежуточное соединение 4a образуется с использованием методологии, описанной на Схеме C-2.

Схема C-2

[0255] 1,1,3,3-тетраметоксипропан 35a (20 г, 121,8 ммоль) растворяют в воде (200 мл). Добавляют моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (23,17 г, 121,8 ммоль), и смесь перемешивают при 19-20°C в течение 90 минут. Добавляют порциями 1-(хлорметил)-4-фтор-1,4-диазонийбицикло[2,2,2]октан дитетрафторборат 37 (Selectfluor, 1,4 экв., 60,4 г, 170,5 ммоль). Добавление является эндотермическим (от 20,1°C до 19,4°C), однако температура начинает медленно расти после завершения добавления (температура повышается до 25,4°C в течение 45 минут). Selectfluor растворяется в течение 1 часа. Смеси позволяют перемешиваться при температуре окружающей среды в течение 18 часов. Смесь становится гомогенной по прохождении этого времени. Медленно добавляют DMSO (150 мл) в течение 5 минут. Добавление является экзотермическим - во время добавления температура повышается от 20,4°C до 34,2°C. Затем смесь начинает остывать. Полученную в результате смесь перемешивают в течение 45 минут. Затем добавляют порциями соединение 3 (21,4 г, 115,7 ммоль). Добавление не является экзотермическим. Смесь нагревают до 85°C в течение 4 часов (профиль LC/MS является идентичным во временных точках 2 час и 4 час). Затем перемешиваемой смеси позволяют охладиться до температуры окружающей среды в течение ночи. Полученная в результате реакционная смесь представляет собой суспензию. К полученной суспензии медленно добавляют воду (150 мл). Температуру повышают от 20,4°C до 21,5°C. Суспензию перемешивают в течение 2 часов, а затем продукт выделяют посредством фильтрования. Осадок промывают водой и сушат на спеченом стекле с получением бежевого твердого продукта (15,5 г). Продукт дополнительно сушат в вакуумной печи при 40°C в течение 20 часов. Это дает соединение 4a в виде бежевого твердого продукта (13,5 г, выход 50%). Чистота согласно ВЭЖХ 97,7% площади пиков; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 4,83 (2H, д), 5,29 (1H, д), 5,49 (1H, д), 6,04-6,14 (1H, м), 6,57 (2H, ушир. с), 8,80 (1H, м), 9,40 (1H, м); 19F ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ -153,1.

Стадия 2: 2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновая кислота 5a

[0256] К суспензии аллил 2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата 4a (45 г, 190,5 ммоль) в DCM (1,35 л) добавляют фенилсилан (41,23 г, 46,96 мл, 381,0 ммоль), а затем Pd(PPh₃)₄ (8,805 г, 7,620 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов 30 мин. Реакционную смесь фильтруют, и твердый продукт промывают DCM с получением светло-желтого твердого продукта (43,2 г). Этот твердый продукт дополнительно перетирают в DCM (225 мл) при RT в течение 45 мин, затем фильтруют и сушат в течение ночи в вакууме с получением 2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновой кислоты 5a в виде светло-желтого твердого продукта (37,77 г, выход 100%).

[0257] В альтернативном способе, натрий-4-метилбензолсульфинат (безводный, 1,2 экв., 22,6 г, 127 ммоль) суспендируют в сухом DMSO (20 объем, 500 мл). Перемешиваемую смесь нагревают до 30°C в атмосфере азота. По завершении разбавления добавляют Pd(PPh₃)₄ (2% моль, 2,4 г, 2,1 ммоль). Смесь перемешивают в течение 10 мин при 25-30°C, по прохождении этого времени образуется мутный желтый раствор. Порциями добавляют аллил 2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилат 4a (25 г, 105,8 ммоль), поддерживая температуру при 25-30°C. После завершения добавления мутный раствор перемешивают до завершения реакции согласно ВЭЖХ (2-3 часа). Тяжелый преципитат образуется через 15 минут после добавления субстрата. Смесь становится гуще, когда осуществляется реакция. Реакционную смесь разбавляют водой (125 мл), и медленно добавляют 2M HCl (66 мл), поддерживая температуру при 25-30°C. Суспензию перемешивают в течение 30 минут, затем фильтруют. Фильтрование является медленным (2 часа). Полученный в результате твердый продукт промывают водой, затем сушат на спеченом стекле. Твердый продукт суспендируют в DCM (8 объем) в течение 1 часа. Твердый продукт фильтруют (быстрое фильтрование) и промывают DCM. Твердый продукт повторно суспендируют в хлороформе (8 объем) в течение 1 часа. Кислоту фильтруют и сушат на спеченом стекле. Ее дополнительно сушат в вакуумной печи при 50°C в течение 24 часов. Продукт 5a получают в виде беловатого твердого продукта (18,6 г, 85%); ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 12,14 (1H, ушир. с), 9,31 (1H, дд), 8,69 (1H, м), 6,47 (2H, ушир. с); ¹⁹F ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ -153,65; MS (ES+) 197,1.

Стадия 3: 1H-бензо[d][1,2,3]триазол-1-ил 2-амино-6-фторпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилат 6a

[0258] К суспензии 2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновой кислоты 5a (20 г, 102,0 ммоль) в хлороформе (300 мл) добавляют Et₃N (11,35 г, 15,63 мл, 112,2 ммоль). Суспензию перемешивают в течение ~5 мин, а затем добавляют (бензотриазол-1-илокси-диметиламино-метилен)диметиламмонийбор тетрафторид (32,75 г, 102,0 ммоль). Суспензию нагревают до 60°C в течение 1 часа перед тем, как суспензии дают возможность для охлаждения до RT. Полученную в результате суспензию фильтруют, промывают хлороформом (200 мл) и сушат в вакууме в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения 6a в виде светло-желтого порошка (32,5 г, 88%).

Приготовление 2b: (6-хлорбензотриазол-1-ил)-2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилат

[0259] В 2,5-л трехгорлую колбу, снабженную бруском мешалки, конденсором, линией для азота и датчиком температуры Hanna, загружают 2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновую кислоту 5a (60 г, 305,9 ммоль), хлороформ (900,0 мл) и триэтиламин (32,44 г, 44,68 мл, 320,6 ммоль). [(6-хлорбензотриазол-1-ил)окси-(диметиламино)метилен]диметиламмоний (ион (1) тетрафторида бора) (87,00 г, 244,7 ммоль) добавляют порциями в течение 5 мин (внутренняя температура падает от 22,7 до 21,5°C по завершении добавления). Смесь нагревают при 60°C (внутренняя температура) в течение 2 часов, получая с помощью отгонки кремовую суспензию. Смесь охлаждают до комнатной температуры, затем твердый продукт собирают посредством фильтрования, как следует, промывают хлороформом (пока не потечет по существу бесцветный фильтрат) и сушат с помощью отсоса с получением продукта 6a* в виде кремового твердого продукта (82,2 г, выход 77%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d ₆) δ 9,55 (дд, 1H), 8,91 (д, 1H), 8,22 (дд, 1H), 8,09 (дд, 1H), 7,57 (дд, 1H) и 6,87 (с, 2H). MS (ES+) 348,1.

[0260] В альтернативном способе, 2-амино-6-фторпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновую кислоту 5a (30 г, 153 ммоль) суспендируют в ацетонитриле (540 мл). Добавляют триэтиламин (22,5 мл, 153 ммоль), а затем [(6-хлорбензотриазол-1-ил)окси-(диметиламино)метилен]диметиламмоний тетрафторборат (TCTU, 54,4 г, 153 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Продукт выделяют посредством фильтрования - осадок на фильтре промывают ацетонитрилом (2×60 мл). Продукт получают в виде коричневого твердого продукта (49,3 г, 93%); ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d ₆) δ 9,55 (дд, 1H), 8,91 (д, 1H), 8,22 (дд, 1H), 8,09 (дд, 1H), 7,57 (дд, 1H) и 6,87 (с, 2H); 19F ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ -150,1; MS (ES+) 348,1.

Приготовление 3: 1H-бензо[d][1,2,3]триазол-1-ил 2-амино-6-хлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилат

Стадия 1: 2-амино-6-хлор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилат 4b

[0261] К суспензии аллил 3,5-диамино-1H-пиразол-4-карбоксилата 3 (1 г, 5,489 ммоль) в DMF (5 мл) добавляют (Z)-2-хлор-3-диметиламино-проп-2-энилиден]диметиламмоний гексафторфосфат (1,683 г, 5,489 ммоль), а затем триэтиламин (722,1 мг, 994,6 мкл, 7,136 ммоль). Реакционную смесь нагревают до 60°C в течение 4 часов, за это время твердый продукт медленно преципитирует из раствора. Коричневой суспензии дают возможность для охлаждения до RT. Твердый продукт фильтруют, промывают водой и сушат в вакууме с получением аллил 2-амино-6-хлор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата 4b в виде коричневого твердого продукта (1,092 г, выход 72%).

Стадия 2: 2-амино-6-хлор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновая кислота 5b

[0262] К суспензии аллил 2-амино-6-хлор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата 4b (1 г, 3,96 ммоль) в DCM (15 мл) добавляют фенилсилан (856,6 мг, 0,9756 мл, 7,916 ммоль), а затем Pd(PPh₃)₄ (182,9 мг, 0,1583 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 7 часов. Реакционную смесь фильтруют, и твердый продукт промывают DCM с получением светло-желтого твердого продукта (43,2 г). Этот твердый продукт дополнительно перетирают с DCM (225 мл) при RT в течение 45 мин, затем фильтруют и сушат в течение ночи в вакууме с получением 2-амино-6-хлор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновой кислоты 5b в виде желтого твердого продукта (791 мг, выход 94%).

Стадия 3: 1H-бензо[d][1,2,3]триазол-1-ил 2-амино-6-хлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилат 6b

[0263] К раствору 2-амино-6-хлор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновой кислоты 5b (1,51 г, 7,103 ммоль) в хлороформе (15,1 мл) добавляют TBTU бор тетрафторид (2,737 г, 8,524 ммоль) и TEA (862,5 мг, 1,188 мл, 8,524 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 50°C в течение одного часа. Полученную в результате суспензию фильтруют, и твердый продукт перетирают в этилацетате с получением указанного в заголовке соединения 6b в виде желтого твердого продукта (2,05 г, 88%).

Приготовление 4: 1H-бензо[d][1,2,3]триазол-1-ил 2-амино-6-(цианометил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилат

Стадия 1: аллил 2-амино-6-(цианометил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилат 4c

[0264] К суспензии аллил 3,5-диамино-1H-пиразол-4-карбоксилата 3 (63,49 г, 348,5 ммоль) в смеси DMSO (340 мл) и воды (340 мл), добавляют 3-(диметоксиметил)-4,4-диметокси-бутаннитрил (полученный в соответствии с Приготовлением 5, ниже) (85 г, 418,2 ммоль), а затем пара-толуолсульфоновую кислоту гидрат (1) (11,27 г, 59,24 ммоль). Реакционную смесь нагревают до 85°C и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают на ледяной бане. Смесь разбавляют EtOAc (680 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO₃ (1,36 л). Преципитат фильтруют и промывают водой, затем смесью воды и EtOAc. Коричневый твердый продукт сушат в вакууме с получением аллил 2-амино-6-(цианометил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата 4c в виде коричневого твердого продукта (55,94 г, выход 62%).

Стадия 2: 2-амино-6-(цианометил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновая кислота 5c

[0265] К суспензии аллил 2-амино-6-(цианометил)-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата 4c (10,2 г, 39,65 ммоль) в DCM (350 мл) добавляют фенилсилан (8,581 г, 9,773 мл, 79,3 ммоль), а затем Pd(PPh₃)₄ (1,5 г, 1,298 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь фильтруют, и твердый продукт промывают DCM и сушат в вакууме с получением 2-амино-6-(цианометил)-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновой кислоты 5c в виде желтого твердого продукта (8,61 г, выход 100%).

Стадия 3: 1H-бензо[d][1,2,3]триазол-1-ил 2-амино-6-(цианометил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилат 6c

[0266] К раствору 2-амино-6-(цианометил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновой кислоты 5c (5,11 г, 23,53 ммоль) в DCM (51 мл) добавляют TBTU бор тетрафторид (9,067 г, 28,24 ммоль) и TEA (2,858 г, 3,937 мл, 28,24 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение одного часа. Полученную в результате суспензию фильтруют, и твердый продукт перетирают с горячим хлороформом с получением указанного в заголовке соединения 6c в виде бежевого твердого продукта (6,59 г, 84%).

Пример 1: Синтез 2-амино-6-фтор-N-[5-фтор-4-[4-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-карбонил]-1-пиперидил]-3-пиридил]пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамида (Соединение I-1)

Стадия 1: трет-бутил 1-[3-[(2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил)амино]-5-фтор-4-пиридил]пиперидин-4-карбоксилат 28

[0267] Смесь (6-хлорбензотриазол-1-ил) 2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата 6a* (44,02 г, 126,6 ммоль) и трет-бутил 1-(3-амино-5-фтор-4-пиридил)пиперидин-4-карбоксилата 27 (полученного в соответствии с Приготовлением 7b) (34 г, 115,1 ммоль) в пиридине (510,0 мл) нагревают при внутренней температуре 95°C в течение ночи (18 часов). Смесь охлаждают до комнатной температуры (продукт преципитирует), затем добавляют этанол (340,0 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин. Собранный посредством фильтрования желтый твердый продукт, как следует, промывают этанолом, сушат с помощью отсоса, затем на линии высокого вакуума в течение 1 часа с получением продукта 28 в виде желтого твердого продукта, (32,5 г, выход 56%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 10,45 (с, 1H), 9,58 (с, 1H), 9,51 (дд, 1H), 8,72 (дд, 1H), 8,25 (д, 1H), 6,81 (с, 2H), 3,15-2,93 (м, 4H), 2,55-2,47 (замаскированный сигнал, 1H), 2,02-1,91 (м, 4H), 1,47 (с, 9H). MS (ES+) 474,2.

Стадия 2: трифторацетат 1-[3-[(2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил)амино]-5-фтор-4-пиридил]пиперидин-4-карбоновой кислоты 29

[0268] К суспензии трет-бутил 1-[3-[(2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил)амино]-5-фтор-4-пиридил]пиперидин-4-карбоксилата 28 (69,7 г, 147,2 ммоль) в DCM (348,5 мл) и триэтилсилане (18,83 г, 25,87 мл, 161,9 ммоль) добавляют TFA (151,1 г, 102,1 мл, 1,325 моль) (из смеси оседает твердый продукт при начальном добавлении TFA, затем он переходит в раствор после завершения добавления). Полученный в результате оранжевый раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Добавляют дополнительный TFA (16,78 г, 11,34 мл, 147,2 ммоль), и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем смесь нагревают при 40°C в течение 20 мин для принудительного завершения реакции. Смесь концентрируют в вакууме, добавляют хлороформ (300 мл) и смесь опять концентрируют в вакууме с получением оранжевой твердой суспензии. Смесь перетирают в DCM (приблизительно 200 мл), перемешивают в течение 20 мин, затем твердый продукт собирают посредством фильтрования, промывают минимальным количеством DCM и сушат с помощью отсоса с получением желтого твердого продукта. Фильтрат концентрируют в вакууме, остаток повторно суспендируют в DCM (приблизительно 50 мл), перемешивают в течение 20 мин, затем твердый продукт собирают посредством фильтрования, промывают минимальным количеством DCM и сушат с помощью отсоса с получением желтого твердого продукта, который объединяют с первым сбором твердого продукта. Твердый продукт сушат в вакууме в течение ночи с получением желаемого продукта 29 в виде желтого твердого продукта (82,8 г, 96%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 10,44 (с, 1H), 9,59 (с, 1H), 9,50 (дд, 1H), 8,84 (дд, 1H), 8,33 (д, 1H), 3,13-3,10 (м, 4H), 2,57-2,47 (замаскированный сигнал, 1H) и 2,08-1,93 (м, 4H). MS (ES+) 418,1.

Стадия 3: гидрохлорид 1-[3-[(2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил)амино]-5-фтор-4-пиридил]пиперидин-4-карбоновой кислоты 30

[0269] К раствору 1-[3-[(2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил)амино]-5-фтор-4-пиридил]пиперидин-4-карбоновой кислоты (трифторуксусная кислота) 29 (73 г, 124,7 ммоль) в NMP (662,7 мл) добавляют хлористый водород (4M в 1,4-диоксане) (37,40 мл 4 M, 149,6 ммоль). Через несколько секунд образуется желтый преципитат. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин, затем твердый продукт собирают посредством фильтрования, промывают минимальным количеством NMP, затем MTBE, и сушат с помощью отсоса с получением чистого продукта 30 в виде светло-желтого твердого продукта, (59,7 г, количественный выход). MS (ES+) 418,1.

Стадия 4: 2-амино-6-фтор-N-[5-фтор-4-[4-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-карбонил]-1-пиперидил]-3-пиридил]пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамид (Соединение I-1)

[0270] К желтой суспензии 1-[3-[(2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил)амино]-5-фтор-4-пиридил]пиперидин-4-карбоновой кислоты (хлористоводородная кислота) 30 (59,7 г, 131,5 ммоль) в NMP (477,6 мл) добавляют DIPEA (50,99 г, 68,72 мл, 394,5 ммоль), затем [(6-хлорбензотриазол-1-ил)окси-(диметиламино)метилен]диметиламмоний (ион (1) тетрафторида бора) (51,44 г, 144,7 ммоль). Через несколько минут образуется желтая суспензия. Смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре, затем добавляют 1-(оксетан-3-ил)пиперазин 25 (полученный в соответствии с Приготовлением 8, ниже) (26,18 г, 184,1 ммоль). Кремовая/рыжеватая суспензия превращается в оранжевый раствор (экзотермическое повышение температуры от 23,9 до 29,4°C). Колбу помещают на баню лед/вода до тех пор, пока внутренняя температура не достигнет 24°C, затем ледяную баню удаляют и внутренняя температура поддерживается постоянно при 24°C.

[0271] Раствор перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре, затем охлаждают на бане лед/соль/вода до 10°C перед медленным добавлением воды (1,015 л) порциями по 100 мл. Перед добавлением следующих 100 мл воды, пережидают экзотермическое повышение температуры в пределах между 17°C и 20°C (внутреннее), затем позволяют раствору охлаждаться до температуры в пределах между 10 и 15°C. Повторяют это до добавления всей воды. После прекращения экзотермического выделения тепла, баню лед/соль/вода удаляют и смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 20 мин (образуется густая желтая/кремовая суспензия). Твердый продукт, собранный посредством фильтрования через воронку со спеченным стеклом, как следует, промывают водой, затем сушат с помощью отсоса в течение 10 мин. Вакуум удаляют и твердый продукт суспендируют в воде на воронке со спеченым стеклом, затем повторно прикладывают вакуум и твердый продукт сушат с помощью отсоса в течение ночи, затем сушат в вакуумной печи в течение 24 часов при 40°C<10 мБар.

[0272] Твердый продукт (54,5 г) суспендируют в этаноле (545 мл, 10 объем экв.) и нагревают с обратным холодильником в течение 2 часов, затем охлаждают до комнатной температуры в течение 2 часов. Твердый продукт собирают посредством фильтрования, промывают минимальным количеством этанола и сушат с помощью отсоса в течение 1 часа с получением продукта в виде бледно-желтого твердого продукта. Твердый продукт помещают в вакуумную печь при 23,5°C и <10 мБар на ночь с получением твердой формы I-1 этанольного сольвата в виде бледно-желтого твердого продукта, (51 г, выход 64%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 10,64 (с, 1H), 9,67 (с, 1H), 9,48 (дд, 1H), 9,26 (дд, 1H), 8,26 (д, 1H), 6,79 (с, 2H), 4,55 (т, 2H), 4,47 (т, 2H), 4,34 (т, 0,7H), 3,61 (дт, 4H), 3,48-3,41 (м, 2,5H), 3,22-3,17 (м, 2H), 3,05-3,03 (м, 2H), 3,99-2,93 (м, 1H), 2,28 (дт, 4H), 2,17-2,10 (м, 2H), 1,74 (д, 2H), 1,07 (т, 2H). MS (ES+) 542,3.

Пример 2: Альтернативный подход к синтезу 2-амино-6-фтор-N-[5-фтор-4-[4-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-карбонил]-1-пиперидил]-3-пиридил]пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамида (Соединение I-1)

Стадия 1: трет-бутил 1-(3-(2-амино-6-фторпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамидо)-5-фторпиридин-4-ил)пиперидин-4-карбоксилат 28

[0273] 6-хлор-1H-бензо[d][1,2,3]триазол-1-ил 2-амино-6-фторпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилат 6a* (45 г, 129,4 ммоль) и трет-бутил 1-(3-амино-5-фторпиридин-4-ил)пиперидин-4-карбоксилат 27 (полученный в соответствии с Приготовлением 7b, описанным ниже) (40,1 г, 135,9 ммоль) суспендируют в пиридине (675 мл). Смесь нагревают при 95°C в атмосфере азота до завершения реакции (определяют посредством анализа с помощью ВЭЖХ). Смесь охлаждают, и добавляют по каплям этанол (450 мл). Смесь фильтруют, и осадок на фильтре промывают этанолом (2×70 мл). Влажный осадок сушат с получением продукта 28 в виде желтого кристаллического продукта (47,7 г, 78%); ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d ₆) δ 10,45 (с, 1H), 9,58 (с, 1H), 9,51 (дд, 1H), 8,72 (дд, 1H), 8,25 (д, 1H), 6,81 (с, 2H), 3,15-2,93 (м, 4H), 2,55-2,47 (замаскированный сигнал, 1H), 2,02-1,91 (м, 4H), 1,47 (с, 9H); 19F ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ-153,5, -136,3; MS (ES+) 474,2.

[0274] В альтернативном варианте осуществления, промежуточное соединение 28 может быть очищено перед осуществлением стадии 2 посредством использования процедуры подобной той, которая следует далее:

Стадия 1a: Очистка трет-бутил 1-[3-[(2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил)амино]-5-фтор-4-пиридил]пиперидин-4-карбоксилата 28

[0275] трет-Бутил 1-[3-[(2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил)амино]-5-фтор-4-пиридил]пиперидин-4-карбоксилат 28 (530 г; 1,12 моль) добавляют к смеси NMP (5,3) и 1,2-диаминопропана (249 г; 3,36 моль) и полученную в результате редкую суспензию перемешивают при 20-25°C в течение 15 часов. К суспензии добавляют этанол (10,4 л), и суспензию перемешивают в течение 4 часов при 20-25°C. Кристаллический золотистый твердый продукт собирают посредством фильтрования, промывают этанолом (2×2,6 л), сушат с помощью отсоса, затем сушат в вакуумной печи в течение 24 часов при 35-40°C с получением соединения 28 в виде кристаллического золотистого твердого продукта (479 г; 90%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d ₆) δ 10,45 (с, 1H), 9,57 (с, 1H), 9,49 (дд, 1H), 8,71 (д, 1H), 8,24 (д, 1H), 6,79 (с, 2H), 3,44-3,33 (м, 1H), 3,34-3,20 (м, 4H), 3,07 (дт, 4H), 2,01-1,89 (м, 4H), 1,46 (с, 9H). ¹⁹F ЯМР (500 МГц, DMSO-d ₆) δ -136,3, -153,4.

Стадия 2: гидрохлорид 1-(3-(2-амино-6-фторпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамидо)-5-фторпиридин-4-ил)пиперидин-4-карбоновой кислоты 30

[0276] Трет-бутил 1-(3-(2-амино-6-фторпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамидо)-5-фторпиридин-4-ил)пиперидин-4-карбоксилат 28 (36 г, 76 ммоль) суспендируют в растворе HCl в 1,4-диоксане (4M, 670 мл). По каплям добавляют воду (36 мл) к быстро перемешиваемой суспензии. Смесь перемешивают в атмосфере азота до завершения реакции (определяют посредством анализа с помощью ВЭЖХ). Смесь разбавляют 1,4-диоксаном (180 мл) и фильтруют. Осадок на фильтре промывают TBME (2 ×7 2 мл). Влажный осадок сушат с получением бледно-коричневого твердого продукта (гидрохлоридная соль, 32,7 г, 95%); ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d ₆) δ 10,34 (с, 1H), 9,53-9,49 (м, 2H), 8,82 (м, 1H), 8,50 (м, 1H), 3,13-3,22 (м, 4H), 2,57-2,47 (замаскированный сигнал, 1H) и 2,08-1,93 (м, 4H); 19F ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ-152,9, -133,8; MS (ES+) 418,1.

Стадия 3: 2-амино-6-фтор-N-[5-фтор-4-[4-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-карбонил]-1-пиперидил]-3-пиридил]пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамид (Соединение I-1∙аморфное)

[0277] К раствору 1-(оксетан-3-ил)пиперазина 25 (525 мг, 3,69 ммоль) в THF (12 мл) добавляют DIPEA (1,72 мл, 9,91 ммоль), а затем 1-(3-(2-амино-6-фторпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамидо)-5-фторпиридин-4-ил)пиперидин-4-карбоновую кислоту (гидрохлоридная соль, 1,5 г, 3,3 ммоль). Добавляют [(6-хлорбензотриазол-1-ил)окси-(диметиламино)метилен]-диметиламмоний тетрафторборат (TCTU, 1,29 г, 3,64 ммоль), и смесь перемешивают в атмосфере азота до тех пор, пока реакция не завершится (определяют посредством анализа с помощью ВЭЖХ). Смесь охлаждают и по каплям добавляют воду (24 мл). Смеси дают возможность для нагрева до температуры окружающей среды и перемешивают в течение 3 часов, затем фильтруют. Осадок на фильтре промывают (3×3 мл). Влажный осадок сушат в вакууме (с отводом азота) при 40°C. Получают аморфную форму Соединения I-1. (1,54 г, 86%); ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 10,64 (с, 1H), 9,67 (с, 1H), 9,48 (дд, 1H), 9,26 (дд, 1H), 8,26 (д, 1H), 6,79 (с, 2H), 4,55 (т, 2H), 4,47 (т, 2H), 4,34 (т, 0,7H), 3,61 (дт, 4H), 3,48-3,41 (м, 2,5H), 3,22-3,17 (м, 2H), 3,05-3,03 (м, 2H), 3,99-2,93 (м, 1H), 2,28 (дт, 4H), 2,17-2,10 (м, 2H), 1,74 (д, 2H), 1,07 (т, 2H); 19F ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ-152,8, -136,1; MS (ES+) 542,3.

[0278] Соединение I-1∙ аморфное может быть получено с использованием альтернативного способа из Примера 2, Стадия 3, выше.

[0279] В другом примере, Соединение I-1∙ аморфное приготавливают посредством добавления N,N-диизопропилэтиламина (461 мкл; 342 мг; 2,64 ммоль) к суспензии гидрохлорида 1-[3-[(2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил)амино]-5-фторпиридин-4-ил]пиперидин-4-карбоновой кислоты 30 (1,00 г; 2,20 ммоль; LR) в THF (20 мл). Добавляют 1,1'-карбонилдиимидазол (CDI) (430 мг; 2,65 ммоль), и смесь нагревают при 40-50°C. Осуществляют дополнительные загрузки 1,1'-карбонилдиимидазола (CDI) (в целом 213 мг; 1,31 ммоль), и смесь нагревают до тех пор, пока реакция не завершится (определяют посредством анализа с помощью ВЭЖХ). Добавляют 1-(оксетан-3-ил)пиперазин 25 (375 мг; 2,64 ммоль), и смесь нагревают при 55-60°C до тех пор, пока реакция не завершится (определяют посредством анализа с помощью ВЭЖХ). Реакционную смесь охлаждают до 20-25°C. Добавляют воду (40 мл) и 2M NaOH (водн.) (551 мкл), и суспензию перемешивают в течение 5-10 минут. Твердые продукты собирают посредством фильтрования, промывают водой (2×5 мл), сушат с помощью отсоса, затем сушат в вакуумной печи при 45-50°C в течение 16 часов с получением Соединения I-1 в виде желтого твердого продукта (869 мг; 73%).

Приготовление 5: Альтернативный подход к синтезу трет-бутил 1-(3-(2-амино-6-фторпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамидо)-5-фторпиридин-4-ил)пиперидин-4-карбоксилата (Соединение 28)

Стадия 1: 2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил хлорид 34

[0280] К суспензии 2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновой кислоты 5a (500 мг, 2,55 ммоль) в дихлорметане (7,5 мл) добавляют триэтиламин (409 мкл, 297 мг, 2,93 ммоль). Добавляют тионилхлорид (205 мкл, 334 мг, 2,80 ммоль), и смесь нагревают при 35-40°C в течение 2 часов. Смесь охлаждают до температуры окружающей среды и перемешивают при температуре окружающей среды до тех пор, пока реакция не завершится (отслеживают с помощью ВЭЖХ). Твердый продукт собирают посредством фильтрования, промывают дихлорметаном (2×1 мл) и сушат с помощью отсоса с получением продукта 34 в виде бежевого твердого продукта (465 мг, 85%); ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d ₆) δ 9,30 (дд, J=4,9, 2,7 Гц, 1H), 8,68 (д, J=2,7 Гц, 1H); ¹⁹F ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ -154,1.

Стадия 2: трет-бутил 1-(3-(2-амино-6-фторпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамидо)-5-фторпиридин-4-ил)пиперидин-4-карбоксилат 28

[0281] 2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонилхлорид 34 (100 мг, 0,466 ммоль) и трет-бутил 1-(3-амино-5-фторпиридин-4-ил)пиперидин-4-карбоксилат 27 (138 мг, 0,466 ммоль) суспендируют в пиридине (1,5 мл). Смесь нагревают до 90-100°C в течение 16 часов. Смесь охлаждают и добавляют этанол (3 мл). Смесь перемешивают в течение 1-2 часов, фильтруют, и осадок на фильтре промывают этанолом (0,5 мл). Твердые продукты сушат с помощью отсоса с получением продукта 28 (162 мг, 73%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ₆) δ 10,45 (с, 1H), 9,57 (с, 1H), 9,50 (дд, J=4,8, 2,5 Гц, 1H), 8,71 (д, J=2,5 Гц, 1H), 8,24 (д, J=2,5 Гц, 1H), 6,80 (с, 2H), 3,07 (дд, J=6,5, 3,3 Гц, 4H), 2,11-1,80 (м, 4H), 1,46 (с, 9H); 19F ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ -136,8, -153,9; MS (ES+) 474,2.

Пример 3: Альтернативный подход к синтезу 2-амино-6-фтор-N-[5-фтор-4-[4-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-карбонил]-1-пиперидил]-3-пиридил]пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамида (Соединение I-1)

[0282] 6-хлор-1H-бензо[d][1,2,3]триазол-1-ил 2-амино-6-фторпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилат 6a* (45 г, 129,4 ммоль) и трет-бутил 1-(3-амино-5-фторпиридин-4-ил)пиперидин-4-карбоксилат 27 (полученный в соответствии с Приготовлением 7b, описанным ниже) (40,1 г, 135,9 ммоль) суспендируют в пиридине (675 мл). Смесь нагревают при 95°C в атмосфере азота до завершения реакции (определяют посредством анализа с помощью ВЭЖХ). Смесь охлаждают, и добавляют по каплям этанол (450 мл). Смесь фильтруют, и осадок на фильтре промывают этанолом (2×70 мл). Влажный осадок сушат с получением продукта 28 в виде желтого кристаллического продукта (47,7 г, 78%); ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d ₆) δ 10,45 (с, 1H), 9,58 (с, 1H), 9,51 (дд, 1H), 8,72 (дд, 1H), 8,25 (д, 1H), 6,81 (с, 2H), 3,15-2,93 (м, 4H), 2,55-2,47 (замаскированный сигнал, 1H), 2,02-1,91 (м, 4H), 1,47 (с, 9H); 19F ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ-153,5, -136,3; MS (ES+) 474,2.

Стадия 2: мезилат 1-[3-[(2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил)амино]-5-фтор-4-пиридил]пиперидин-4-карбоновой кислоты 33

[0283] Метансульфоновую кислоту (274 мкл; 406 мг; 4,22 ммоль) добавляют к суспензии трет-бутил 1-[3-[(2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил)амино]-5-фтор-4-пиридил]пиперидин-4-карбоксилата 28 (1,00 г; 2,11 ммоль) в ацетонитриле (15 мл), и смесь нагревают до 75-80°C в течение 16 часов. Твердые продукты собирают посредством фильтрования, промывают ацетонитрилом (2×2 мл) и сушат в вакууме с получением мезилата 1-[3-[(2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил)амино]-5-фтор-4-пиридил]пиперидин-4-карбоновой кислоты 33 (0,94 г; 87%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 10,43 (с, 1H), 9,58 (с, 1H), 9,49 (дд, 1H), 8,83 (д, 1H), 8,32 (д, 1H), 6,85 (ушир. С, 2H), 3,11 (дт, 4H), 2,31 (с, 3H), 1,99 (м, 4H); ¹⁹F ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ -135,5, -153,1; MS (ES+) 418,1.

Стадия 3: 2-амино-6-фтор-N-[5-фтор-4-[4-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-карбонил]-1-пиперидил]-3-пиридил]пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамид (Соединение I-1 аморфное)

[0284] N,N-Диизопропилэтиламин (51 мкл; 38 мг; 0,29 ммоль) добавляют к суспензии мезилата 1-[3-[(2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил)амино]-5-фтор-4-пиридил]пиперидин-4-карбоновой кислоты (50 мг; 0,097 ммоль) и 1-(оксетан-3-ил)пиперазин (15 мг; 0,11 ммоль) в THF (1,00 мл). Добавляют [(6-хлорбензотриазол-1-ил)окси-(диметиламино)метилен]-диметиламмоний тетрафторборат (TCTU, 36,3 мг; 0,10 ммоль), и смесь перемешивают в атмосфере азота до тех пор, пока реакция не завершится (определяют посредством анализа с помощью ВЭЖХ). К суспензии добавляют воду (2 мл) и перемешивают ее в течение 5 часов. Твердые продукты собирают посредством фильтрования, промывают водой (2×200 мкл), сушат с помощью отсоса, затем сушат в вакуумной печи в течение 24 часов при 45-50°C с получением Соединения I-1 в виде бледно-желтого твердого продукта (31 мг; 59%).

Приготовление 6: Приготовление бутаннитриловых промежуточных соединений

Стадия 1: 3-(диметоксиметил)-4,4-диметоксибутаннитрил 11

[0285] 2-(диметоксиметил)-3,3-диметокси-пропан-1-ол 10 (Journal of American Chemical Society (1973), 95(26), 8741) (92 г, 473,7 ммоль) растворяют в сухом THF (920 мл), и смесь охлаждают на ледяной бане. Добавляют за один раз триэтиламин (143,8 г, 198,1 мл, 1,421 моль), а затем в течение 1 часа добавляют по каплям дополнительный метансульфонилхлорид (59,69 г, 40,33 мл, 521,1 ммоль) и поддерживают внутреннюю температуру ниже 5°C. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 часа, а затем дают возможность для нагрева до комнатной температуры. Смесь разбавляют этилацетатом (920 мл) и водой (920 мл). Слои разделяют, и органический слой выделяют, промывают насыщенным раствором NaHCO₃, затем насыщенным раствором соли. Органические слои сушат над MgSO₄, фильтруют и выпаривают с получением [2-(диметоксиметил)-3,3-диметоксипропил]метансульфоната в виде оранжевого масла (125,31 г, 97%), которое используют непосредственно без дополнительной очистки.

[0286] Тетраэтиламмоний цианид (142,3 г, 910,8 ммоль) добавляют порциями в течение 10 минут к раствору [2-(диметоксиметил)-3,3-диметоксипропил]метансульфоната (124 г, 455,4 ммоль) в MeCN (1,24 л). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 72 часов, затем распределяют между этилацетатом (1,24 л) и водой (1,24 л). Слои разделяют, и органический слой выделяют, промывают насыщенным раствором соли. Органические слои сушат над MgSO₄, фильтруют и выпаривают с получением 3-(диметоксиметил)-4,4-диметоксибутаннитрила 11 в виде темно-коричневого масла (86,1 г).

Стадия 2: 3-(диметоксиметил)-4,4-диметокси-2-метилбутаннитрил 12a и 3-(диметоксиметил)-4,4-диметокси-2,2-диметилбутаннитрил 13a

[0287] К раствору 3-(диметоксиметил)-4,4-диметокси-бутаннитрила 11 (250 мг, 1,205 ммоль) в THF (3 мл) при -75^oC добавляют раствор йодметана (513,1 мг, 225,0 мкл, 3,615 ммоль) в THF (1 мл). Затем добавляют раствор (бис(триметилсилил)амино)натрия (1,808 мл 2M, 3,615 ммоль) в THF, поддерживая температуру ниже -60°C. После добавления, реакционную смесь перемешивают при -75°C в течение 2 часов, а затем медленно гасят с помощью водного раствора насыщенного NH₄Cl (5 мл). Смесь разбавляют водой и простым эфиром, и слои разделяют. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и концентрируют в вакууме с получением желтого масла, которое очищают с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя градиентом простой петролейный эфир:EtOAc от 100:0 до 80:20. Растворители концентрируют в вакууме с получением прозрачного масла (194 мг). ЯМР показывает, что это масло представляет собой смесь 80% монометильного соединения 12с и 20% бисметильного соединения 13a. Эту смесь используют непосредственно на следующей стадии.

Стадия 3: 3-(диметоксиметил)-2-этил-4,4-диметоксибутаннитрил 12b и 3-(диметоксиметил)-2-диэтил-4,4-диметоксибутаннитрил 13b

[0288] Когда в процедуре сходной с Приготовлением 6, стадия 2, выше, этилйодид используют вместо метилйодида, смесь монозамещенного соединения 12b и дизамещенного соединения 13b выделяют и используют непосредственно на следующих стадиях.

Приготовление 7a: Синтез трет -бутил 1-(3-амино-5-фтор-4-пиридил)пиперидин-4-карбоксилата

Стадия 1: трет-бутил 1-(3-бром-5-фтор-4-пиридил)пиперидин-4-карбоксилат 26

[0289] 3-л колбу с фланцем, снабженную термометром, конденсором, линией для азота и подвесной мешалкой, нагревают при 40°C (наружная), затем загружают циклогексанол (750 мл), динатрий карбонат (129,8 г, 1,225 моль), 3-бром-4-хлор-5-фтор-пиридин (хлористоводородную кислоту 18) (137,5 г, 556,8 ммоль), и промывают в ней трет-бутилпиперидин-4-карбоксилат (123,8 г, 668,2 ммоль) циклогексанолом (350 мл). Смесь нагревают до внутренней температуры 120°C в течение ночи (18 час). Реакционную смесь удаляют с нагреваемого столика и позволяют охладиться до комнатной температуры. Добавляют воду (687,5 мл) и EtOAc (687,5 мл), перемешивают в течение 10 мин, затем переносят в разделительную воронку. Добавляют дополнительный EtOAc (1,238 л), смешивают и водную фазу удаляют. Органическую фазу дополнительно промывают водой (687 мл), водную фазу удаляют, органический слой собирают. Водные фазы объединяют и обратно экстрагируют EtOAc (687,5 мл), водный слой удаляют, и органическую фазу объединяют с другими органическими слоями. Органические слои концентрируют в вакууме (температура водяной бани=60°C, вакуум до 2 мБар) с получением вязкого коричневого масла.

[0290] Масло растворяют в смеси 25% EtOAc/бензин, затем пропускают через короткий слой диоксида кремния, элюируя с помощью смеси 25% EtOAc/бензин до тех пор, пока продукт не перестанет выходить. Фильтрат концентрируют в вакууме с получением коричневого масла, 127,1 г. Продукт повторно очищают с помощью ISCO Companion (1,5 кг диоксида кремния, загруженного в DCM, элюирование смесью от 0 до 20% EtOAc/бензин), фракции продукта объединяют и концентрируют в вакууме с получением желаемого продукта 26 в виде твердого продукта, от бледно-желтого до кремового цвета, (98 г, выход 49%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 8,47 (с, 1H), 8,41 (д, 1H), 3,39-3,36 (м, 2H), 3,12 (тт, 2H), 2,49-2,43 (м, 1H), 1,91-1,87 (м, 2H), 1,71-1,64 (м, 2H) и 1,43 (с, 9H). MS (ES+) 361,0.

Стадия 2: трет-бутил 1-(3-амино-5-фтор-4-пиридил)пиперидин-4-карбоксилат 27

[0291] К раствору трет-бутил 1-(3-бром-5-фтор-4-пиридил)пиперидин-4-карбоксилата 26 (98 г, 272,8 ммоль), дифенилметанимина (59,34 г, 54,94 мл, 327,4 ммоль) и Cs₂CO₃ (177,8 г, 545,6 ммоль) в 1,4-диоксане (1,274 л) добавляют ксантфос (15,78 г, 27,28 ммоль) и Pd₂(dba)₃ (12,49 г, 13,64 ммоль). Смесь перемешивают в атмосфере азота при 95°C в течение ночи. Смесь охлаждают до комнатной температуры, затем распределяют между EtOAc (1000 мл, 10 объем экв.) и водой (490 мл, 5 объем экв.), смешивают и органический слой отделяют. Органические слои дополнительно промывают водой (1×250 мл), насыщенным раствором соли (250 мл), сушат (MgSO₄), фильтруют и концентрируют в вакууме с получением сырого продукта в виде темно-красного вязкого масла, 185,3 г.

[0292] Полученный продукт масла (185,3 г) растворяют в THF (882,0 мл), и добавляют HCl (545,5 мл (2 M), 1,091 моль). Полученную в результате смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин. THF удаляют в вакууме, затем добавляют дополнительную HCl (2M) (588,0 мл). Водные слои промывают дважды EtOAc (294,0 мл). Большое количество желтого преципитата образуется во время экстракции, как в органической, так и в водной фазе, твердый продукт, как из органической, так и из водной фазы собирают посредством фильтрования и сушат с помощью отсоса. Смешанный органический и водный фильтрат добавляют в разделительную воронку, экстрагируют 2M HCl (2×200 мл). Все водные фазы плюс твердый продукт, собранный на спеченом стекле (продукт), объединяют с получением суспензии. pH доводят до 6 с использованием 2M NaOH, и экстрагируют DCM (3×600 мл). Органические слои объединяют, сушат (MgSO₄), фильтруют и концентрируют в вакууме с получением бледно-оранжевого воскообразного твердого продукта, 112,2 г. Этот твердый продукт суспендируют в MeCN (200 мл), перемешивают в течение 10 мин, затем твердый продукт собирают посредством фильтрования, промывают минимальным количеством MeCN и сушат с помощью отсоса с получением продукта 27 в виде белого твердого продукта (66,8 г, выход 83%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 7,82 (д, 1H), 7,63 (д, 1H), 5,22 (с, 2H), 3,11-3,00 (м, 2H), 2,91 (тт, 2H), 2,36 (тт, 1H), 1,88-1,83 (м, 2H), 1,79-1,71 (м, 2H), 1,43 (с, 9H). MS (ES+) 297,1.

Схема 7b: Альтернативный подход к синтезу трет-бутил 1-(3-амино-5-фтор-4-пиридил)пиперидин-4-карбоксилата

Стадия 1: 3-бром-4-хлор-5-фторпиридин гидрохлорид 18

[0293] Раствор диизопропиламина (101,2 г, 140,2 мл, 1,000 моль) в тетрагидрофуране (1,148 л) охлаждают до температуры в пределах между -25°C и -20°C. Добавляют бутиллитий (2,5M в гексане) (400 мл 2,5 M, 1,000 моль) при такой скорости, чтобы поддерживать температуру реакции ниже -20°C (добавление в течение 20 минут). Затем смеси дают возможность для нагрева до 4°C в течение 1 часа, затем повторно охлаждают до -78°C. Добавляют 3-бром-5-фтор-пиридин (153,0 г, 869,6 ммоль) в тетрагидрофуране (382,5 мл) в течение 40 минут. Смесь перемешивают в течение 90 минут, затем в течение 40 минут добавляют по каплям раствор 1,1,1,2,2,2-гексахлорэтана (205,9 г, 869,6 ммоль) в тетрагидрофуране (350,0 мл). После завершения добавления, смеси дают возможность для нагрева до температуры окружающей среды в течение ночи. Смесь охлаждают до 0°C, затем переносят в холодную воду (2 л), перемешивают в течение 20 мин, затем добавляют MTBE (2,5 л) и энергично перемешивают в течение 30 мин, затем переносят в разделительную воронку, и органический слой отделяют. Водный слой переносят обратно в реакционную емкость и дополнительно экстрагируют MTBE (2,5 л), энергично перемешивают в течение 10 мин, затем переносят в разделительную воронку, и органический слой отделяют. Органические слои объединяют, сушат (MgSO₄), фильтруют и концентрируют до коричневого масла. Масло растворяют в пентане (500 мл) и простом эфире (300 мл). Медленно добавляют HCl (2M в простом эфире) (434,8 мл 2 M, 869,6 ммоль) при перемешивании. По завершении добавления, смесь перемешивают в течение 20 мин, затем собирают твердый продукт посредством фильтрования, промывают простым эфиром и сушат в вакууме в течение 1 часа с получением продукта 18 в виде бежевого твердого продукта (148,9 г, 69%); ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 8,77 (2H, с); 19F ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ -124,8; MS 210,8.

Стадия 2: трет-бутил 1-(3-бром-5-фторпиридин-4-ил)пиперидин-4-карбоксилат 26

[0294] 3-бром-4-хлор-5-фтор-пиридин гидрохлорид 18 (62 г, 251,1 ммоль) суспендируют в DCM (600 мл) и перемешивают. Смесь охлаждают на ледяной бане, и медленно добавляют гидроксид натрия (276,2 мл 1 M, 276,2 ммоль). Полученную в результате смесь перемешивают в течение 1 часа. Осуществляют разделение фаз смеси. Добавляют дополнительную смесь DCM/вода для облегчения разделения фаз. Некоторое количество смолистых частиц остается в водной фазе. Органическую фазу промывают насыщенным раствором соли, сушат (MgSO₄), фильтруют и концентрируют. Остаток перетирают с гептаном. Гептановый раствор фильтруют через слой Florisil, элюируя гептаном. Фильтрат концентрируют до масла, которое отверждают. Это дает 41 г свободного основания.

[0295] Тщательно перемешиваемую смесь свободного основания 3-бром-4-хлор-5-фторпиридина (55 г, 0,26 моль), фторида калия (31 г, 0,53 моль) и Me₄NCl (5,8 г, 53 ммоль) в DMSO (400 мл) нагревают до 130°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и добавляют трет-бутилпиперидин-4-карбоксилат гидрохлорид 22 (66 г, 0,30 моль) и DIPEA (65 г, 0,50 моль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель выпаривают в вакууме. Остаток распределяют между DCM/вода. Органический слой промывают водой (3×), сушат над Na₂SO₄, и фильтруют через силикагель с использованием DCM в качестве элюента. Фильтрат выпаривают с получением трет-бутил 1-(3-бром-5-фторпиридин-4-ил)пиперидин-4-карбоксилата 26 (61 г, 65%) в виде светло-желтого твердого продукта; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d ₆) δ 8,47 (с, 1H), 8,41 (д, 1H), 3,39-3,36 (м, 2H), 3,12 (тт, 2H), 2,49-2,43 (м, 1H), 1,91-1,87 (м, 2H), 1,71-1,64 (м, 2H) и 1,43 (с, 9H); 19F ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ -135,2; MS (ES+) 361,0.

Стадия 3: трет-бутил 1-(3-амино-5-фторпиридин-4-ил)пиперидин-4-карбоксилат 27

[0296] Трет-бутил 1-(3-бром-5-фторпиридин-4-ил)пиперидин-4-карбоксилат 26 (800 г, 2,23 моль) растворяют в 1,4-диоксане (7,5 л). Дифенилметанимин (484 г, 2,67 моль) добавляют одной порцией с последующим добавлением карбоната цезия (1,45 кг, 4,45 моль), ксантфоса (129 г, 223 ммоль) и Pd₂(dba)₃ (102 г, 111 ммоль). Добавляют дополнительный 1,4-диоксан (2,9 л), и смесь нагревают до 95°C в атмосфере азота до завершения реакции (определяют посредством анализа с помощью ВЭЖХ). Смесь охлаждают до 20°C, и добавляют этилацетат (8 л) и воду (4 л). Органическую фазу выделяют и промывают водой (4 л) и насыщенным раствором соли (3,5 л) и сушат над сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат концентрируют до коричневого масла (1,3 кг). Масло растворяют в 2-метилтетрагидрофуране (7,2 л) и добавляют 2M HCl при 20°C и смесь перемешивают в течение 30 минут. Водный слой выделяют, и органический слой экстрагируют 2M HCl (1,2 л). Объединенные водные слои нейтрализуют с помощью 2M NaOH (5,4 л, pH 8-9). Продукт экстрагируют 2-метилтетрагидрофураном (14 л, затем 2×5 л). Объединенные экстракты промывают водой (1,6 л), и органический раствор концентрируют. Остаток суспендируют в ацетонитриле (2 л), фильтруют и сушат. Это дает продукт 27 в виде белого твердого продукта (568,7 г, 86,5%); ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d ₆) δ 7,82 (д, 1H), 7,63 (д, 1H), 5,22 (с, 2H), 3,11-3,00 (м, 2H), 2,91 (тт, 2H), 2,36 (тт, 1H), 1,88-1,83 (м, 2H), 1,79-1,71 (м, 2H), 1,43 (с, 9H); 19F ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ -140,0; MS (ES+) 297,1.

Приготовление 8: Синтез трет-бутил пиперидин-4-карбоксилата

Стадия 1: 1-бензил-4-трет-бутил пиперидин-1,4-дикарбоксилат 21

[0297] В 5-л колбу с фланцем загружают 1-бензилоксикарбонилпиперидин-4-карбоновую кислоту 20 (200 г, 759,6 ммоль) в DCM (500,0 мл) с последующим добавлением DCM (2,000 л), трет-бутанола (140,8 г, 181,7 мл, 1,899 моль) и DMAP (46,40 г, 379,8 ммоль). Смесь охлаждают на бане лед/соль/вода (внутренняя температура -3,4°C). Добавляют порциями 3-(этилиминометиленамино)-N,N-диметил-пропан-1-амин (хлористоводородную кислоту (1)) (145,6 г, 759,6 ммоль) в течение 15 мин, при этом капельную воронку промывают DCM (500,0 мл). Смесь перемешивают на ледяной бане в течение 2 часов. Затем ледяную баню удаляют (внутренняя температура 3°C) и дают смеси возможность для нагрева до комнатной температуры в течение ночи. Смесь промывают 5% лимонной кислотой (2×500 мл), затем насыщенным раствором NaHCO₃ (500 мл), водой (500 мл), и органические соединения сушат над MgSO₄, затем их фильтруют и концентрируют в вакууме с получением продукта 21 в виде вязкого светло-желтого масла, которое превращается белый твердый продукт при отстаивании. (246,1 г, 101%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 7,40-7,31 (м, 5H), 5,08 (с, 2H), 3,90 (дт, 2H), 2,93 (ушир. с, 2H), 2,43 (тт, 1H), 1,80-1,76 (м, 2H) и 1,45-1,37 (м, 11H).

Стадия 2: трет-бутил пиперидин-4-карбоксилат 22

[0298] В 3-л колбу в атмосфере азота загружают Pd на C, влажный, Degussa (10% Pd, 50% воды) (8,120 г, 76,30 ммоль), затем EtOAc (1,706 л). Смесь дегазируют с помощью циклов N₂/вакуум (3x), затем добавляют раствор 1-бензил-4-трет-бутилпиперидин-1,4-дикарбоксилата 21 (243,7 г, 763,0 ммоль) в EtOAc (243,7 мл). Смесь перемешивают в атмосфере водорода в течение ночи. Водород дополняют, и смесь перемешивают в течение еще 3,5 часа. Добавляют метанол (60 мл), чтобы облегчить растворение преципитата, затем фильтруют через целит, промывая через его слой метанолом. Фильтрат концентрируют в вакууме с получением коричневого масла с небольшим количеством суспендированного белого твердого продукта, 138,6 г. Твердый продукт удаляют посредством фильтрования и промывают минимальным количеством EtOAc. Фильтрат концентрируют в вакууме с получением желаемого продукта в виде светло-коричневого масла (129 г, 91%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 2,88 (дт, 2H), 2,44 (тд, 2H), 2,23 (тт, 1H), 1,69-1,64 (м, 2H) и 1,41-1,33 (м, 11H).

Приготовление 9: Синтез 1-(оксетан-3-ил)пиперазина

Стадия 1: бензил 4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-карбоксилат 24

[0299] Бензил пиперазин-1-карбоксилат 23 (27,3 мл, 142,2 ммоль) растворяют в сухом THF (313,1 мл), и добавляют оксетан-3-он (12,29 г, 10,93 мл, 170,6 ммоль). Полученный в результате раствор охлаждают на ледяной бане. Добавляют NaBH(Oac)₃ (59,99 г, 284,4 ммоль) порциями в течение 30 мин, добавляют примерно четверть. Смесь удаляют с ледяной бани, дают возможность для нагрева до комнатной температуры, затем продолжают порциями добавление NaBH(Oac)₃ в течение 30 мин. По завершении добавления, наблюдают медленное экзотермическое повышение температуры от 22°C до 32°C, после чего смесь охлаждают на ледяной бане до тех пор, пока не достигнут внутренней температуры 22°C. Ледяную баню удаляют, и внутреннюю температуру реакционной смеси доводят до постоянного значения 22°C. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи.

[0300] Полученную в результате белую суспензию гасят посредством добавления 2M раствора карбоната натрия (приблизительно 150 мл) pH=8) и концентрируют при пониженном давлении для удаления THF. Затем продукт экстрагируют EtOAc (3×250 мл). Органические слои объединяют, сушат над MgSO₄, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением продукта 24 в виде белого твердого продукта (32,7 г, выход 83%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 7,39-7,30 (м, 5H), 5,07 (с, 2H), 4,52 (т, 2H), 4,42 (т, 2H), 3,43-3,39 (м, 5H) и 2,22 (т, 4H). MS (ES+) 276,8.

Стадия 2: 1-(оксетан-3-ил)пиперазин 25

[0301] В 1-л колбу добавляют Pd(OH)₂ (1,661 г, 2,366 ммоль) в атмосфере азота. Добавляют MeOH (130,8 мл) и EtOAc (261,6 мл) и смесь дегазируют с помощью циклов вакуум/азот (3×). Затем добавляют бензил 4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-карбоксилат 24 (32,7 г, 118,3 ммоль), и смесь перемешивают в атмосфере водорода в течение выходных дней. Смесь фильтруют через пад из Целита, промывая через него EtOAc, затем метанолом. Фильтрат концентрируют в вакууме с получением продукта 25 в виде оранжевого масла 1(8,1 г, количественный выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 4,51 (т, 2H), 4,41 (т, 2H), 3,36-3,30 (замаскированный сигнал, 1H), 2,69 (т, 4H) и 2,14 (ушир. с, 4H).

Пример 4: Синтез 2-амино-6-фтор-N-(5-фтор-4-(4-(2,2,3,3,5,5,6,6-окстадейтеро-пиперазин-1-карбонил)пиперидин-1-ил)-3-пиридил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамида (Соединение I-2) и 2-амино-6-фтор-N-(5-фтор-4-(4-(2,2,3,3,5,5,6,6-октадейтеро-4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-карбонил)пиперидин-1-ил)-3-пиридил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамида (Соединение I-3)

[0302] Смесь (6-хлорбензотриазол-1-ил) 2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата 6a* (41,69 г, 119,9 ммоль) и трет-бутил 1-(3-амино-5-фтор-4-пиридил)пиперидин-4-карбоксилата 27 (32,2 г, 109,0 ммоль) в пиридине (483 мл) нагревают при 90°C в течение 12 часов. Реакционную смесь охлаждают до RT, добавляют EtOH (322 мл), и смесь перемешивают при RT в течение 10 мин. Твердый продукт собирают посредством фильтрования, как следует, промывают этанолом и сушат с помощью отсоса с получением 28 в виде желтого твердого продукта (33 г, 64%).

Стадия 2: 1-(3-(2-амино-6-фторпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамидо)-5-фторпиридин-4-ил)пиперидин-4-карбоновая кислота 29

[0303] К суспензии трет-бутил 1-[3-[(2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил)амино]-5-фтор-4-пиридил]пиперидин-4-карбоксилата 28 (69,7 г, 147,2 ммоль) в DCM (348,5 мл) добавляют триэтилсилан (18,83 г, 25,87 мл, 161,9 ммоль), а затем TFA (151,1 г, 102,1 мл, 1,325 моль). Полученный в результате раствор перемешивают при RT в течение 12 часов. Смесь концентрируют в вакууме с получением оранжевого твердого продукта, который перетирают в DCM (200 мл) в течение 20 мин. Твердый продукт собирают посредством фильтрования, промывают минимальным количеством DCM и сушат с помощью отсоса с получением желаемого продукта трифторацетата в виде желтого твердого продукта (75,2 г, 96%).

[0304] К раствору трифторацетата 1-[3-[(2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил)амино]-5-фтор-4-пиридил]пиперидин-4-карбоновой кислоты (73 г, 124,7 ммоль) в NMP (662,7 мл) добавляют хлористый водород (4M в диоксане) (37,4 мл 4 M, 149,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при RT в течение 20 мин, затем твердый продукт собирают посредством фильтрования, промывают минимальным количеством NMP, затем MTBE, сушат с помощью отсоса с получением чистого продукта гидрохлорида 29 в виде светло-желтого твердого продукта.

Стадия 3: 2-амино-6-фтор-N-(5-фтор-4-(4-(2,2,3,3,5,5,6,6-октадейтеро-пиперазин-1-карбонил)пиперидин-1-ил)-3-пиридил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамид (Соединение I-2)

[0305] (Бензотриазол-1-илокси-диметиламино-метилен)-диметиламмоний трифторборат (127,3 мг, 0,3966 ммоль) добавляют к смеси гидрохлорида 1-[3-[(2-амино-6-фтор-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбонил)амино]-5-фтор-4-пиридил]пиперидин-4-карбоновой кислоты 29 (150 мг, 0,3305 ммоль), 2,2,3,3,5,5,6,6-октадейтеропиперазина (155,6 мг, 1,652 ммоль) и Et₃N (83,6 мг, 115,2 мкл, 0,8262 ммоль) в DMF (5 мл). Реакционную смесь перемешивают при RT в течение 18 часов. Сырую смесь очищают с помощью препаративной ВЭЖХ с получением Соединения I-2 в виде белого твердого продукта (114 мг, 48%).

Стадия 4: 2-амино-6-фтор-N-(5-фтор-4-(4-(2,2,3,3,5,5,6,6-октадейтеро-4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-карбонил)пиперидин-1-ил)пиридин-3-ил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамид (Соединение I-3)

[0306] Натрий триацетоксиборогидрид (24,67 мг, 0,1164 ммоль) добавляют к раствору оксетан-3-она (7,271 мг, 0,1009 ммоль), 2-амино-6-фтор-N-(5-фтор-4-(4-(2,2,3,3,5,5,6,6-окстадейтеро-пиперазин-1-карбонил)пиперидин-1-ил)пиридин-3-ил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксамида 13 (56 мг, 0,07761 ммоль) и уксусной кислоты (13,98 мг, 13,24 мкл, 0,2328 ммоль) в DMF (2 мл). Реакционную смесь перемешивают при RT в течение 18 час. Раствор гасят с помощью метанола и воды, и сырую смесь очищают с помощью препаративной ВЭЖХ с получением желаемого продукта I-3 (20 мг, 46%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 10,64 (с, 1H), 9,67 (с, 1H), 9,48 (дд, 1H), 9,26 (дд, 1H), 8,26 (д, 1H), 6,79 (с, 2H), 4,55 (т, 2H), 4,47 (т, 2H), 3,63 (м, 1H), 3,20 (м, 2H), 3,15 (м, 2H), 2,95 (м, 1H), 2,10 (м, 2H), 1,74 (д, 2H); ES+ 550,4.

Аналитические данные соединений
№ Соединения	LCMS ES +	LCMS (Rt мин)	¹H ЯМР
I-1	542,3	2,14	¹H ЯМР (500 МГц, метанол-d₄) δ 1,87 (2H, м), 2,27-2,33 (2H, м), 2,55 (4H, м), 2,97-3,03 (1H, м), 3,18 (2H, м), 3,70-3,85 (4H, м), 4,67-4,70 (2H, м), 4,75-4,78 (2H, м), 8,16 (1H, д), 9,00 (1H, дд), 9,17 (1H, дд), 9,68 (1H, с), 10,65 (1H, s).
I-2	494,3	----	¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 10,64 (с, 1H), 9,67 (с, 1H), 9,48 (дд, 1H), 9,26 (дд, 1H), 8,26 (д, 1H), 6,79 (с, 2H), 3,20-3,25 (м, 2H), 3,05-3,07 (м, 2H), 2,95-2,98 (м, 1H), 2,07-2,12 (м, 2H), 1,74 (д, 2H).
I-3	550,4	2,13	¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 10,64 (с, 1H), 9,67 (с, 1H), 9,48 (дд, 1H), 9,26 (дд, 1H), 8,26 (д, 1H), 6,79 (с, 2H), 4,55 (т, 2H), 4,47 (т, 2H), 3,63 (м, 1H), 3,20 (м, 2H), 3,15 (м, 2H), 2,95 (м, 1H), 2,10 (м, 2H), 1,74 (д, 2H).

Твердые формы Соединения I-1

[0307] Соединение I-1 получают в различных твердых формах, включая соли, сольваты, гидраты и безводные формы. Твердые формы по настоящему изобретению являются пригодными для использования при приготовлении медицинских препаратов для лечения рака. Один из вариантов осуществления предлагает использование твердой формы, описанной в настоящем документе, для лечения рака. В некоторых вариантах осуществления, рак представляет собой трижды негативный рак молочной железы, рак поджелудочной железы, мелкоклеточный рак легких, рак ободочной и прямой кишки, рак яичников или немелкоклеточный рак легких. Другой вариант осуществления предлагает фармацевтическую композицию, содержащую твердую форму, описанную в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель.

[0308] Авторы описывают в настоящем документе множество новых твердых форм Соединения I-1. Наименование и стехиометрия для каждой из этих твердых форм приводятся в Таблице 2, ниже:

Таблица 2
Пример	Формы	Стехиометрия
Пример 5	Соединение I-1⋅ этанольный сольват	1:0,72
Пример 6a	Соединение I-1⋅ гидрат I	1:4,5
Пример 6b	Соединение I-1⋅ гидрат II	-------
Пример 7	Соединение I-1⋅ безводная форма A	Нет
Пример 8	Соединение I-1⋅ безводная форма B	-------
Пример 9	Соединение I-1⋅ безводная форма C	Нет
Пример 10	Соединение I-1⋅ аморфное	Нет
Пример 11	Соединение I-1⋅ DMSO сольват	1:1
Пример 12	Соединение I-1⋅ DMAC сольват	1:1,3
Пример 13	Соединение I-1⋅ ацетоновый сольват	1:0,44
Пример 14	Соединение I-1⋅ изопропанольный сольват	1:0,35

Экспериментальный метод твердотельного ЯМР

[0309] Спектры твердотельного ЯМР получают на спектрометре с широким отверстием Bruker-Biospin 400 МГц Advance III, снабженном 4-мм зондом HFX Bruker-Biospin. Образцы набивают в 4-мм роторы из ZrO₂ (приблизительно 70 мг или меньше, в зависимости от доступности образца). Как правило, применяется скорость вращения под магическим углом (MAS), равная 12,5 кГц. Температура головки зонда устанавливается при 275°K, для сведения к минимуму влияния нагрева трением во время вращения. Протонное время релаксации измеряют с использованием эксперимента релаксации восстановление-насыщение 1H MAS T1 для установления соответствующей задержки рециклирования эксперимента MAS с кросс-поляризацией (CP) 13C. Задержка рециклирования эксперимента 13C CPMAS устанавливается такой, чтобы она была, по меньшей мере, в 1,2 раза больше, чем измеренное время релаксации 1H T1, чтобы довести до максимума отношение сигнал/шум в спектре углерода. Время контакта при CP для эксперимента 13C CPMAS устанавливают при 2 мсек. Используют протонный импульс CP с линейным повышением (от 50% до 100%). Соотношение Хартманна-Хана оптимизируется по отношению к внешнему эталонному образцу (глицину). Спектры фтора получают с использованием установки с некоординированным протонным MAS с задержкой рециклирования, установленной как приблизительно 5-кратное измеренное время релаксации 19F T1. Время релаксации фтора измеряют с использованием эксперимента релаксации восстановления-насыщения 19F MAS T1 с развязкой по отношению к протонам. Спектры, как углерода, так и фтора, получают с помощью SPINAL 64, используют развязку при напряженности поля приблизительно 100 кГц. Химический сдвиг в сторону сильного поля сравнивают с внешним стандартом адамантана при его резонансе 29,5 м.д.

Пример 5: Соединение I-1 (этанольный сольват)

[0310] Соединение I-1 этанольный сольват может быть получено в соответствии со способами, описанными в Примере 1, Стадия 4.

XRPD Соединения I-1 (этанольный сольват)

[0311] Картину XRPD Соединения I-1⋅ этанольного сольвата регистрируют при комнатной температуре в режиме отражения с использованием дифрактометра PANalytical, снабженного трубкой источника Empyrean и детектором PIXcel 1D (PANalytical, The Netherlands). Генератор рентгеновского излучения работает при напряжении 45 кВ и токе 40 мА. Образец порошка помещают в кремниевый держатель. Данные находятся в диапазоне значений 2 тэта 3°-39° с величиной шага 0,013° и временем экспозиции 121 сек на один шаг. Фигура 1a показывает рентгеновскую дифрактограмму порошкообразного образца, которая является характерной для кристаллического лекарственного вещества.

[0312] Таблица 3a приводит репрезентативные пики XRPD для Соединения I-1⋅ этанольного сольвата:

Таблица 3a Репрезентативные пики XRPD
Пики XRPD	Угол (2 тэта ±0,2)	Интенсивность, %
1*	10,9	20,6
2	12,7	6,4
3	13,6	12,2
4	14,3	7,5
5	14,9	9,5
6	15,5	5,7
7	16,2	15,7
8*	17,2	50,6
9	18,0	1,4
10*	19,7	35,3
11	20,4	26,2
12	20,6	23,1
13	21,7	3,5
14	22,2	3,7
15	22,8	11,2
16	23,2	18,2
17*	23,8	100
18	23,8	91,4
19	24,3	71,3
20*	24,4	72,8
21	24,9	15,1
22	25,7	15,9
23	26,3	6,0
24	27,5	5,8
25*	29,0	44,9
26	30,0	9,7
27	30,9	4,6
28	31,5	4,5
29	32,4	2
30	32,9	3,4
31	34,5	3,4
32	34,9	2,7
33	35,7	2,8
34	37,5	1,2

Термогравиметрический анализ Соединения I-1 (этанольного сольвата)

[0313] Термогравиметрический анализ Соединения I-1⋅ этанольного сольвата осуществляют для определения процента потерь массы как функции температуры с использованием Discover TGA (TA Instruments Trios). Образец (8,338 мг) добавляют на предварительно тарированный алюминиевый поддон и нагревают от температуры окружающей среды до 310°C при 20°C/мин. Результаты TGA, наблюдаемые на Фигуре 2a показывают большие потери массы 5,76% между 166°C (начало) и 219°C (конечная точка). Эти потери массы соответствует приблизительно 0,72 молярного эквивалента этанола. Следующие потери массы, наблюдаемые при 290°C, представляют собой результат плавления/деградации.

Дифференциальная сканирующая калориметрия Соединения I-1 (этанольного сольвата)

[0314] Дифференциальную сканирующую калориметрию Соединения I-1⋅ этанольного сольвата измеряют с использованием TA Instrument DSC Q2000. Образец (1,84 мг) взвешивают в алюминиевом герметичном поддоне с предварительно проколотыми отверстиями и нагревают от температуры окружающей среды до 300°C при 20°C/мин. Результаты DSC, наблюдаемые на Фигуре 3, показывают эндотерму десольватации при 169°C (начало), а затем одну эндотерму плавления при 258°C (начало).

Твердотельный ЯМР Соединения I-1 (этанольного сольвата)

[0315] Спектр твердотельного ¹³C ЯМР Соединения I-1⋅ этанольного сольвата показан на Фигуре 4a. Таблица 3b приводит химические сдвиги релевантных пиков.

Таблица 3b Спектр твердотельного ¹³ C ЯМР Соединения I-1 (этанольного сольвата)
	Соединение I-1 (этанольный сольват), химические сдвиги ¹³C
№ Пика	F1 [м.д.]	Интенсивность
1*	175,4	53,9
2	162,4	58,4
3	160,0	14,1
4	157,4	17,6
5	150,7	19,1
6	148,2	25,1
7	145,8	39,9
8	140,1	42,1
9*	138,0	48,7
10	136,1	48,2
11	134,3	85,7
12*	123,1	45,6
13	89,0	41,6
14	76,8	67,5
15	76,1	75,8
16*	57,8	79,7
17	51,6	100,0
18	48,9	90,9
19*	44,0	60,5
20	42,2	61,4
21	38,8	74,7
22	30,9	64,3
23	28,7	70,2
24*	19,5	33,2

[0316] Спектр твердотельного ¹⁹F ЯМР Соединения I-1⋅ этанольного сольвата показан на Фигуре 5a. Таблица 3c приводит химические сдвиги релевантных пиков.

Таблица 3c Спектр твердотельного ¹⁹ F ЯМР Соединения I-1 (этанольного сольвата)
	Соединение I-1 (этанольный сольват) химические сдвиги ¹⁹F
№ Пика	F1 [м.д.]	Интенсивность
1*	-136,0	8,5
2*	-151,6	12,5

Пример 6a: Соединение I-1 (гидрат I)

[0317] Соединение I-1⋅ этанольный сольват (1000 мг), полученное в соответствии со способами, описанными в Примере 1, Стадия 4, суспендируют в воде (20 мл) в течение 4 дней при комнатной температуре. Суспензию центрифугируют, и оставшиеся твердые продукты выделяют, затем сушат в течение ночи при 35°C в вакуумной печи с получением Соединения I-1⋅ гидрата I в виде желтого порошка.

XRPD Соединения I-1 (гидрат I)

[0318] Картину XRPD Соединения I-1⋅ гидрата I регистрируют при комнатной температуре в режиме отражения с использованием дифрактометра Bruker D8 Discover, снабженного источником с герметичной трубкой и площадным детектором Hi-Star (Bruker AXS, Madison, WI, Asset V012842). Генератор рентгеновского излучения работает при напряжении 40 кВ и токе 35 мА. Образец порошка помещают в никелевый держатель. Регистрируют два интервала со временем экспонирования по 120 секунд каждый. Затем данные интегрируют в диапазоне значений 2 тэта 3,5°-39° с величиной шага 0,02° и сводят в одну непрерывную картину. Фигура 1b показывает рентгеновскую дифрактограмму порошкообразного образца, которая является характерной для кристаллического лекарственного вещества.

[0319] Таблица 4a приводит репрезентативные пики XRPD для Соединения I-1⋅ гидрата I:

Таблица 4a Репрезентативные пики XRPD
Пики XRPD	Угол (2 тэта ±0,2)	Интенсивность, %
1	4,0	1,4
2	4,8	3,0
3	5,7	7,8
4	6,3	100,0
5*	6,5	51,0
6	9,1	3,0
7	10,1	10,5
8	10,4	10,8
9	11,2	5,9
10	11,5	8,7
11	11,8	11,5
12*	12,5	16,0
13*	13,7	10,9
14	14,3	7,2
15	15,0	9,2
16	15,5	10,5
17	16,9	14,8
18*	18,8	10,8
19	20,1	14,1
20	20,6	11,6
21	22,6	10,2
22	23,9	4,5
23	24,7	7,8
24*	26,0	13,6
25	27,3	10,9
26	28,6	4,9
27	32,3	2,2

Термогравиметрический анализ Соединения I-1 (гидрата I)

[0320] Термогравиметрический анализ Соединения I-1⋅ гидрата I осуществляют для определения процента потерь массы как функции времени с использованием TA Instrument TGA Q5000 (Asset V014258). Образец (7,380 мг) добавляют на предварительно тарированный алюминиевый поддон и нагревают от температуры окружающей среды до 350°C при 10°C/мин. Результаты TGA, наблюдаемые на Фигуре 2b, показывают большие начальные потери массы до 100°C, затем малую величину дополнительных потерь массы перед плавлением/деградацией. Начальные потери массы 14,56% соответствуют приблизительно 4,5 молярным эквивалентам воды. Температура начала плавления/деградации составляет 292°C.

Дифференциальная сканирующая калориметрия Соединения I-1 (гидрата I)

[0321] Дифференциальная сканирующая калориметрия Соединения I-1⋅ гидрат I измеряется с использованием TA Instrument DSC Q200 (Asset V005642). Образец (5,598 мг) взвешивают в алюминиевом герметичном поддоне с предварительно проколотыми отверстиями и нагревают от температуры окружающей среды до 350°C при 10°C /мин. Результаты DSC, наблюдаемые на Фигуре 3b, показывают начальное широкое эндотермическое явление, которое соответствует дегидратации и следующему далее плавлению до аморфной формы. После плавления имеется Tg (переход стеклования) при 125°C, перекристаллизация при 180°C, плавление при 257°C, затем конечное явление плавления/деградации при 278°C.

Пример 6b: Соединение I-1 (гидрат II)

[0322] Соединение I-1⋅ этанольный сольват (1000 мг), полученное в соответствии со способами, описанными в Примере 1, Стадия 4, суспендируют в воде (20 мл) в течение 4 дней при комнатной температуре. Суспензию центрифугируют, и оставшиеся твердые продукты выделяют с получением Соединения I-1⋅ гидрата II в виде желтой пасты.

XRPD Соединения I-1 (гидрата II)

[0323] Картину XRPD Соединения I-1⋅ гидрата II регистрируют при комнатной температуре в режиме отражения с использованием дифрактометра Bruker D8 Discover, снабженного источником с герметичной трубкой и площадным детектором Hi-Star (Bruker AXS, Madison, WI, Asset V012842). Генератор рентгеновского излучения работает при напряжении 40 кВ и токе 35 мА. Образец порошка помещают в никелевый держатель. Регистрируют два интервала со временем экспонирования по 120 секунд, каждый. Затем данные интегрируют в диапазоне значений 3,5°-39° 2 тэта с величиной шага 0,02° и сводят в одну непрерывную картину. Фигура 4b показывает рентгеновскую дифрактограмму порошкообразного образца, которая является характерной для кристаллического лекарственного вещества.

[0324] Таблица 4b приводит репрезентативные пики XRPD для Соединения I-1⋅ гидрата II:

Таблица 4b Репрезентативные пики XRPD
Пики XRPD	Угол (2 тэта ±0,2)	Интенсивность, %
1	4,2	4,2
2	5,7	12,7
3	6,4	100,0
4	8,0	12,2
5*	10,1	15,4
6*	11,3	22,6
7	11,6	21,2
8*	11,9	29,9
9	12,5	45,6
10	14,3	25,2
11	15,1	22,2
12	17,0	19,7
13	17,7	17,2
14	18,8	39,7
15	19,8	21,1
16*	20,2	24,7
17	21,9	10,3
18	22,6	28,6
19	24,0	12,0
20	24,7	8,8
21*	25,1	13,0
22	25,9	12,6
23	27,2	5,3
24	28,3	12,2
25	28,7	9,5
26	29,4	9,2
27	31,9	14,9

Твердотельный ЯМР Соединения I-1 (гидрата II)

[0325] Спектр твердотельного ¹³C ЯМР Соединения I-1⋅ гидрата II показан на Фигуре 5b. Таблица 4c приводит химические сдвиги релевантных пиков.

Таблица 4c Спектр твердотельного ¹³ C ЯМР Соединения I-1 (гидрата II)
	Соединение I-1 (гидрат II) химические сдвиги ¹³C
№ Пика	F1 [м.д.]	Интенсивность
1*	177,0	49,2
2	161,8	24,9
3	161,3	39,9
4	160,9	31,4
5	159,7	20,1
6*	158,2	35,5
7	151,9	15,0
8	149,1	20,5
9*	142,9	68,3
10	136,3	37,6
11	133,7	78,7
12	132,9	40,1
13	130,5	34,2
14	122,8	23,3
15*	85,1	40,3
16	76,9	73,5
17	76,4	95,7
18*	58,9	72,4
19	50,2	100,0
20	49,5	66,0
21	48,5	47,3
22	45,0	48,6
23	41,8	45,0
24	37,2	84,6
25*	31,9	67,5
26	28,9	65,8

[0326] Спектр твердотельного ¹⁹F ЯМР Соединения I-1⋅ гидрата II показан на Фигуре 6b. Таблица 4d приводит химические сдвиги релевантных пиков.

Таблица 4d Спектр твердотельного ¹⁹ F ЯМР Соединения I-1⋅ гидрата II
	Соединение I-1 (гидрат II) химические сдвиги ¹⁹F
№ Пика	F1 [м.д.]	Интенсивность
1*	-138,0	8,2
2*	-152,7	12,5

Пример 7: Соединение I-1 (безводная форма A)

[0327] Соединение I-1⋅ этанольный сольват (1000 мг), полученное в соответствии со способами, описанными в Примере 1, Стадия 4, суспендируют в THF (20 мл) в течение 72 часов при комнатной температуре. Суспензию центрифугируют, и оставшиеся твердые продукты выделяют, затем сушат в течение ночи при 35°C в вакуумной печи с получением Соединения I-1⋅ безводной формы A (“форма A”) в виде желтого порошка.

[0328] В альтернативном способе, Соединение I-1⋅ аморфная форма (15,1 г; 0,028 моль), полученное в соответствии со способом, описанным в Примере 2, Стадия 3, суспендируют в смеси 2-пропанола (300 мл) и воды (100 мл). Смесь перемешивают и нагревают до 70-75°C и фильтруют пока она горячая. Полученный в результате прозрачный фильтрат нагревают и дистиллируют, и растворитель заменяют 2-пропанолом, пока температура содержимого не достигнет 82,5°C. Полученную в результате суспензию охлаждают до 15°C в течение 10 часов и перемешивают в течение еще 5 часов. Твердые продукты собирают посредством фильтрования, сушат с помощью отсоса в течение 1 часа, затем сушат в вакуумной печи в течение 20 часов при 60°C с получением Соединения I-1⋅ безводной формы A (13,9 г; 92%).

[0329] Можно использовать ряд других растворителей для получения Соединения I-1⋅ безводной формы A. Таблица 5a ниже приводит список способов.

Таблица 5a Растворители, используемые для приготовления Формы A
Растворитель	Способ перекристаллизации	Результаты для остаточного твердого продукта
Анизол	Из суспензии	Форма A
2-Бутанон	Из суспензии	Форма A
Этилацетат	Из суспензии	Нет
Гептан	Из суспензии	Форма A
Изопропанол	Из горячей суспензии	Форма A
Изопропилацетат	Из суспензии	Форма A
TBME	Из суспензии	Форма A
THF	Из суспензии	Форма A

XRPD Соединения I-1 (безводной формы A)

[0330] Картину XRPD Соединения I-1⋅ безводной формы A регистрируют при комнатной температуре в режиме отражения с использованием дифрактометра Bruker D8 Discover, снабженного источником с герметичной трубкой и площадным детектором Hi-Star (Bruker AXS, Madison, WI, Asset V012842). Генератор рентгеновского излучения работает при напряжении 40 кВ и токе 35 мА. Образец порошка помещают в никелевый держатель. Регистрируют два интервала со временем экспонирования по 120 секунд, каждый. Затем данные интегрируют в диапазоне значений 2 тэта 3,5°-39° с величиной шага 0,02° и сводят в одну непрерывную картину. Фигура 1c показывает рентгеновскую дифрактограмму порошкообразного образца, которая является характерной для кристаллического лекарственного вещества.

[0331] Таблица 5b приводит репрезентативные пики XRPD Соединения I-1⋅ безводной формы A:

Таблица 5b Репрезентативные пики XRPD
Пики XRPD	Угол (2 тэта ±0,2)	Интенсивность, %
1	3,6	12,5
2	3,9	17,4
3*	6,1	51,0
4	9,7	20,5
5*	12,2	22,8
6	14,0	23,5
7*	14,5	22,2
8	16,4	33,5
9	17,1	25,0
10	17,8	36,0
11	19,1	21,5
12	20,2	26,5
13	21,3	16,1
14*	22,3	31,6
15	24,4	23,7
16	25,3	100,0
17	28,4	11,9
18*	31,8	16,0

Термогравиметрический анализ Соединения I-1 (безводной формы A)

[0332] Термогравиметрический анализ Соединения I-1⋅ безводной формы A осуществляют для определения процента потерь массы как функции времени с использованием TA Instrument TGA Q5000 (Asset V014258). Образец (7,377 мг) добавляют на предварительно тарированный алюминиевый поддон и нагревают от температуры окружающей среды до 350°C при 10°C/мин. Результаты TGA, наблюдаемые на Фигуре 2c, показывают очень небольшие наблюдаемые потери массы до плавления или термической деградации. От температуры окружающей среды до 265°C, потери массы составляют 0,96%. Температура начала деградации составляет 292°C.

Дифференциальная сканирующая калориметрия Соединения I-1 (безводной формы A)

[0333] Дифференциальная сканирующая калориметрия Соединения I-1⋅ безводная форма A измеряется с использованием TA Instrument DSC Q2000 (Asset V014259). Образец (3,412 мг) взвешивают в алюминиевом герметичном поддоне с предварительно проколотыми отверстиями и нагревают от температуры окружающей среды до 350°C при 10°C/мин. Результаты DSC, наблюдаемые на Фигуре 3c, показывают одно эндотермическое явление плавления при 262°C. Имеются два различных пика, содержащихся в пределах явления плавления, которые разделены по температуре примерно на 1°C.

Композиция и приготовление активных таблеток, содержащих безводную форму A

Композиция 10-мг таблетки Формы A

[0334] Композиции препаратов, как для сухого гранулирования, так и для смесей для таблеток активной Формы A, для 10-мг таблеток описаны в таблицах 5c и 5d. Общее описание композиции таблеток описано в Таблице 5e.

Таблица 5c Внутригранулярное перемешивание Формы A (10 мг)
Компонент	Количество (мг) на одну таблетку	% масс./масс.
Форма A	10,00	10,26
Лактоза моногидрат, #316, NF, PhEur, JP	27,50	28,20
Avicel PH-101 (микрокристаллическая целлюлоза), NF, PhEur, JP	55,00	56,41
Ac-Di-Sol (натрий кросскармелоза), NF, PhEur, JP	3,00	3,08
Натрий стеарилфумарат, NF, PhEur, JP	2,00	2,05
В целом	97,50	100,00

Таблица 5d Композиция таблетки Формы A (10 мг)
Компонент	Количество (мг) на одну таблетку	% масс./масс.
Внутригранулярная смесь Формы A (измельченная)	97,50	97,50
Ac-Di-Sol (натрий кросскармелоза), NF, PhEur, JP	1,50	1,50
Натрий стеарилфумарат, NF, PhEur, JP	1,00	1,00
В целом	100,00	100,00

Таблица 5e Общая композиция таблетки Формы A (10 мг)
		% в сухой грануле	% в сердцевине таблетки
Внутригранулярно	Форма A Лактоза моногидрат, #316, NF, PhEur, JP Avicel PH-101, NF, PhEur, JP Ac-Di-Sol, NF, PhEur, JP Натрий стеарилфумарат, NF, PhEur, JP	10,26 28,20 56,41 3,08 2,05	10,00 27,50 55,00 3,00 2,00
Внутригранулярно	Гранулы в целом:	100,00	97,50
Экстрагранулярно	Ac-Di-Sol, NF, PhEur, JP натрий стеарилфумарат, NF, PhEur, JP		1,50 1,00
	Сердцевина таблетки в целом:		100,00

Композиция 50-мг таблетки Формы A

[0335] Композиции препаратов, как для сухого гранулирования, так и для смесей для таблеток активной Формы A, для 50-мг таблеток описаны в таблицах 5f и 5g. Общее описание композиции таблеток описано в Таблице 5h.

Таблица 5f Внутригранулярное перемешивание Формы A (50 мг)
Компонент	Количество (мг) на одну таблетку	% масс./масс.
Форма A	50,00	10,26
Лактоза моногидрат, #316, NF, PhEur, JP	137,50	28,20
Avicel PH-101 (микрокристаллическая целлюлоза), NF, PhEur, JP	275,00	56,41
Ac-Di-Sol (натрий кросскармелоза), NF, PhEur, JP	15,00	3,08
Натрий стеарилфумарат, NF, PhEur, JP	10,00	2,05
В целом	487,50	100,00

Таблица 5g Композиция таблетки Формы A (50 мг)
Компонент	Количество (мг) на одну таблетку	% масс./масс.
Внутригранулярная смесь Формы A (измельченная)	487,50	97,50
Ac-Di-Sol (натрий кросскармелоза), NF, PhEur, JP	7,50	1,50
Натрий стеарилфумарат, NF, PhEur, JP	5,00	1,00
В целом	100,00	100,00

Таблица 5h Общая композиция таблетки Формы A (50 мг)
		% в сухой грануле	% в сердцевине таблетки
Внутригранулярно	Форма A Лактоза моногидрат, #316, NF, PhEur, JP Avicel PH-101, NF, PhEur, JP Ac-Di-Sol, NF, PhEur, JP Натрий стеарилфумарат, NF, PhEur, JP	10,26 28,20 56,41 3,08 2,05	10,00 27,50 55,00 3,00 2,00
Внутригранулярно	Гранулы в целом:	100,00	97,50
Экстрагранулярно	Ac-Di-Sol, NF, PhEur, JP Натрий стеарилфумарат, NF, PhEur, JP		1,50 1,00
	Сердцевина таблетки в целом:		100,00

Способ приготовления 10-мг и 50-мг таблеток Формы A

Стадия I. Смешивание перед гранулированием:

[0336] Форму A пропускают через коническую мельницу, собранную вместе с ситом 24R с круглыми отверстиями и импеллером типа со скругленными лопастями при скорости импеллера 1500 об/мин. Лактозу моногидрат, микрокристаллическую целлюлозу и внутри-гранулярную натрий кросскармелозу просеивают через сито #30 меш. Измельченную на конической мельнице Форму A и все просеянные компоненты затем смешивают в течение 10 минут при 26 об/мин. Натрий стеарилфумарат вручную просеивают через сито 60 меш, а затем загружают в блендер и перемешивают вместе с материалами в течение 3 минут при 26 об/мин. Образцы извлекают для анализа однородности смеси.

Стадия II. Сухое гранулирование:

[0337] Смесь гранулируют в сухом виде на Gerteis Minipactor. Смесь пропускают через роликовый компактор, собранный с сочетанием гладких и имеющих спиральную нарезку компактирующих роликов, при скорости роликов 2 об/мин, при усилии на ролике 5 кН/см и с зазором между роликами 2 мм. Компактированный порошок затем гранулируют с помощью валков вальцов типа с зубцами через 1-мм сито при скорости измельчения 80 об/мин.

Стадия III. Конечное перемешивание:

[0338] Экстрагранулярную натрий кросскармелозу и натрий стеарилфумарат просеивают вручную через сита 30 и 60 меш, соответственно. Экстрагранулярную натрий кросскармелозу перемешивают вместе с сухим гранулятом в течение 5 минут при 32 об/мин. Затем к объемной смеси добавляют экстрагранулярный натрий стеарилфумарат и перемешивают в течение 3 минут при 32 об/мин. Образцы извлекают для анализа однородности смеси. Смесь герметизируют в двойных мешках из полиэтилена низкой плотности внутри твердого вторичного контейнера для защиты от прокалывания.

Стадия IV. Прессование таблеток:

[0339] Используют частично машину для прессования таблеток (Piccola D-8 Rotatory Press) (2 станции из 8 станций) с 0,25- дюймовым (6-мм) стандартным круглым вогнутым приспособлением для усилия 10 мг и приспособления для изготовления таблеток в форме капсул 0,568 дюйм×0,2885 дюйм (13×7 мм) для усилия 50 мг. Скорость вращения барабана составляет 25-35 об/мин. Контрольное исследование в ходе способа, для таблеток, включает среднюю массу, индивидуальную массу и твердость, как показано в Таблице 5i.

Таблица 5i Описание контроля в ходе способа прессования таблеток Формы A (10 мг и 50 мг)
Параметр	Усилие 10 мг			Усилие 50 мг
Параметр	минимум	целевое	максимум	минимум	целевое	максимум
Средняя и индивидуальная масса (мг)	92	100	108	460	500	540
Твердость (кП)	3,6	5,3	7,0	11,9	15,9	19,9

Получение кристаллов Формы A

[0340] Форму A кристаллизуют из смеси DCM/гептан посредством медленного выпаривания растворителей. Бесцветный кристалл игольчатой формы с размерами 0,10×0,02×0,02 мм выбирают для дифракционного эксперимента на дифрактометре Bruker APEX II CCD с излучением Cu Kα при комнатной температуре. Структуру разрешают с помощью прямых методов и уточняют с помощью пакета программного обеспечения SHELXTL.

Экспериментальные данные для кристаллов Формы A:

[0341] Кристалл демонстрирует моноклинную ячейку с центросимметричной пространственной группой P21/c. Параметры решетки представляют собой a=15,29(3)Å, b=12,17(2)Å, c=14,48(3)Å, α=90°, β=107,22(3)°, γ=90°, объем=2573(9)Å3. Корректировка дает коэффициент R 6,9%. Конформационные графики Соединения I-1⋅ безводной формы A на основе рентгеноструктурного анализа монокристалла показаны на Фигурах 4c и 5c. Соединение I-1⋅ безводная форма A выглядит упорядоченным в виде ассиметричной единицы (Фигура 4c). Как показано на Фигуре 5c, молекулы Соединения I-1⋅ безводной формы A образуют одномерную цепь вдоль оси b, которая стабилизируется с помощью межмолекулярных водородных связей между аминовыми и пиридиновыми группами. Множество цепей пакетируется в трех измерениях с межслойным расстоянием приблизительно 4,3Å.

Таблица 5j Данные параметра кристалла для Формы A
C₂₅H₂₉F₂N₉O₃	Z=4
M _r=541,57	F(000)=1136
Моноклинная, P2₁/c	D _x=1,398 мг⋅м^-3
a=15,29 (3) Å	Излучение Cu Kα, λ=1,54178 Å
b=12,17 (2) Å	μ=0,89 мм^-1
c=14,48 (3) Å	T=296 K
β=107,22 (3)°	Иглы, бесцветные
V=2573 (9) Å³	0,10×0,02×0,02 мм

[0342] Геометрия: Все ESD (оцененные среднеквадратичные отклонения) (за исключением ESD для диэдрального угла между двумя l.s.(полученными с помощью метода наименьших квадратов) плоскостями) оцениваются с использованием полной матрицы ковариации. ESD ячейки учитываются индивидуально при оценке ESD для расстояний, углов и торсионных углов; корреляции между ESD для параметров ячейки используются только тогда, когда они определяются симметрией кристалла. Примерную (изотропную) трактовку ESD ячейки используют для оценки ESD, включающих l.s. плоскости.

Таблица 5k Параметры сбора данных для кристалла формы A
дифрактометр Bruker APEX II CCD	R _int=0,084
Источник излучения: герметичная трубка	θ_max=53,6°, θ_мин=3,0°
фотографии осцилляций между ω и φ сканами	h=-15→15
9104 измеренных отражений	k=-12→11
2939 независимых отражений	l=-11→14
1165 отражений с I>2σ(I)

[0343] Сбор данных: Apex II; корректировка ячейки: Apex II; редуцирование данных: Apex II; программа (программы), используемая для разрешения структуры: SHELXS97 (Sheldrick, 1990); программа (программы), используемая для уточнения структуры: SHELXL97 (Sheldrick, 1997); молекулярная графика: Mercury; программное обеспечение, используемое для подготовки материала для публикации: publCIF.

Таблица 5m Параметры корректировки для кристалла формы A
Корректировка на F ²	0 ограничений
Матрица наименьших квадратов: полная	Положение водородного центра: получают из положений соседних центров
R[F ²>2σ (F ²)]=0,069	параметры атомов H ограничены
wR(F ²)=0,179	w=1/[σ²(F _o ²)+(0,0743P)²], где P=(F _o ²+2F _c ²)/3
S=0,94	(Δ/σ)_max<0,001
2939 отражений	Δ〉_max=0,23 e Å^-3
352 параметры	Δ〉_мин=-0,26 e Å^-3

[0344] Корректировка: Корректировка F² по отношению ко всем отражениям. Взвешенный R-фактор wR и качество подгонки S основываются на F², обычные R-факторы R основываются на F, при F считается равным нулю для отрицательных F². Пороговое выражение F²>2сигма(F²) используется только для вычисления R-факторов (gt), и тому подобное, и не является релевантным для выбора отражений для уточнения. R-факторы на основе F² статистически примерно в два раза превышают те, которые основываются на F, а R-факторы на основе всех данных будут еще больше.

Твердотельный ЯМР Соединения I-1 (безводной формы A)

[0345] Спектр твердотельного ¹³C ЯМР Соединения I-1⋅ безводной формы A показан на Фигуре 6c. Таблица 5n приводит химические сдвиги релевантных пиков.

Таблица 5n Спектр твердотельного ¹³ C ЯМР Формы A
	Соединение I-1 (безводная форма A) химические сдвиги ¹³C
№ Пика	F1 [м.д.]	Интенсивность
1*	175,9	67,9
2	163,1	46,9
3	162,0	59,1
4	160,1	18,1
5	157,3	24,5
6	151,2	21,8
7	148,7	30,9
8	145,9	49,9
9	139,8	65,6
10*	138,9	66,8
11	135,8	57,2
12	134,3	82,8
13	122,6	60,6
14	89,3	54,0
15	76,2	86,5
16*	74,1	92,0
17	59,8	84,5
18	51,7	77,2
19	50,3	98,8
20	49,4	91,4
21*	42,8	100,0
22	38,4	97,7
23*	31,5	84,2
24	28,3	85,4

[0346] Спектр твердотельного ¹⁹F ЯМР Соединения I-1⋅ безводной формы A показан на Фигуре 7c. Таблица 5p приводит химические сдвиги релевантных пиков.

Таблица 5p Спектр твердотельного ¹⁹ F ЯМР Формы A
	Соединение I-1 (безводная форма A) химические сдвиги ¹⁹F
№ Пика	F1 [м.д.]	Интенсивность
1,0*	-136,8	6,8
2,0*	-155,7	12,5

Пример 8: Соединение I-1 (безводная форма B)

[0347] Загрузку Соединения I-1⋅ аморфного (3,50 г), полученного в соответствии со способами, описанными в Примере 2, Стадия 3, помещают в 250-мл 3-хгорлую колбу, добавляют THF (70 мл), и перемешивают с использованием подвесной мешалки при температуре окружающей среды в течение ночи (например, по меньшей мере, 12 часов). Суспензию фильтруют в вакууме (фильтровальная бумага Whatman диаметром 4,25 см), промывают THF (7 мл), и извлекают в вакууме в течение примерно 35 минут с получением умеренно твердого желтого твердого продукта (2,25 г). Сушка твердых продуктов в вакууме с хорошим выпотеванием при 35°C в течение ночи дает 1,921 г Соединения I-1⋅ безводной формы B в виде желтого твердого продукта.

XRPD Соединения I-1 (безводной формы B)

[0348] Картину XRPD Соединения I-1⋅ безводной формы B регистрируют при комнатной температуре в режиме отражения с использованием дифрактометра Bruker D8 Discover, снабженного источником с герметичной трубкой и площадным детектором Hi-Star (Bruker AXS, Madison, WI, Asset V012842). Генератор рентгеновского излучения работает при напряжении 40 кВ и токе 35 мА. Образец порошка помещают в никелевый держатель. Регистрируют два интервала со временем экспонирования по 300 секунд, каждый. Затем данные интегрируют в диапазоне значений 2 тэта 3,5°-39° с величиной шага 0,02° и сводят в одну непрерывную картину. Фигура 1d показ рентгеновскую дифрактограмму порошкообразного образца, которая является характерной для кристаллического лекарственного вещества.

[0349] Таблица 6a приводит репрезентативные пики XRPD Соединения I-1⋅ безводной формы B:

Таблица 6a Репрезентативные пики XRPD
Пики XRPD	Угол (2 тэта ±0,2)	Интенсивность, %
1	5,2	19,0
2	5,9	33,8
3*	7,2	52,9
4*	8,3	79,0
5	9,8	88,8
6	11,1	60,8
7	11,7	65,4
8*	12,9	62,9
9	14,8	62,0
10	15,6	100,0
11	16,3	62,7
12	16,8	57,1
13	18,0	52,6
14*	19,5	33,9
18	25,2	39,9
19	25,9	27,3
20*	26,6	22,9
21	27,4	30,0
22	28,0	44,8
23	28,9	26,9
24	30,6	18,0
25	32,2	11,6
26	36,0	3,1

Термогравиметрический анализ Соединения I-1 (безводной формы B)

[0350] Термогравиметрический анализ Соединения I-1⋅ безводной формы B осуществляют для определения процента потерь массы как функции времени с использованием TA Instrument TGA Q500 (Asset V014840). Образец (2,728 мг) добавляют на предварительно тарированный платиновый поддон и нагревают от температуры окружающей среды до 350°C при 10°C/мин. Результаты TGA, наблюдаемые на Фигуре 2d, показывают два различных события потери массы, в целом 2,5%, до 175°C. Температура начала плавления/деградации составляет 284°C.

Дифференциальная сканирующая калориметрия Соединения I-1 (безводной формы B)

[0351] Дифференциальная сканирующая калориметрия Соединения I-1⋅ безводной формы B измеряется с использованием TA Instrument DSC Q2000 (Asset V012390). Образец (2,125 мг) взвешивают в алюминиевом герметичном поддоне с предварительно проколотыми отверстиями и нагревают от 30°C до 350°C при 3°C/мин, с модуляцией ±1°C каждые 60 секунд. Результаты DSC, наблюдаемые на Фигуре 3d, показывают экзотермическое явление при 177°C (вероятно, небольшую перегруппировку кристаллической структуры), эндотермическое плавление при 257°C, перекристаллизацию при 258°C, затем конечное явление плавления/деградации при 280°C.

Спектр твердотельного ЯМР Соединения I-1 (безводной формы B)

Спектр твердотельного ¹³C ЯМР Соединения I-1⋅ безводной формы B показан на Фигуре 4d. Таблица 6b приводит химические сдвиги релевантных пиков.

Таблица 6b Спектр твердотельного ¹³ C ЯМР Формы B
	Соединение I-1 (безводная форма B) химические сдвиги ¹³C
№ Пика	F1 [м.д.]	Интенсивность
1*	173,4	43,0
2*	164,5	30,6
3	162,3	98,7
4	159,9	16,0
5	157,4	22,4
6	151,8	15,7
7	149,5	23,9
8	144,9	42,7
9	141,6	32,6
10	136,3	63,8
11*	133,5	58,5
12*	130,8	35,3
13	124,4	26,2
14	86,9	52,3
15	74,9	58,9
16	72,0	29,5
17*	67,7	26,8
18	59,5	69,8
19	50,8	100,0
20*	45,3	86,3
21	40,4	28,8
22	37,9	60,0
23	30,3	85,3
24*	25,9	31,3

[0352] Спектр твердотельного ¹⁹F ЯМР Соединения I-1⋅ безводной формы B показан на Фигуре 5d. Таблица 6c приводит химические сдвиги релевантных пиков.

Таблица 6c Спектр твердотельного ¹⁹ F ЯМР Формы B
	Соединение I-1 (безводная форма B) химические сдвиги ¹⁹F
№ Пика	F1 [м.д.]	Интенсивность
1*	-138,0	7,0
2*	-153,5	12,5

Пример 9: Соединение I-1 (безводная форма C)

[0353] Соединение I-1⋅ безводная форма B (~15 мг), полученное в соответствии со способом, описанным в Примере 8, добавляют на алюминиевые герметичные поддоны с предварительно проколотыми отверстиями и нагревают с помощью DSC до 265°C при скорости 5°C/мин (3 поддона, ~5 мг, каждый) с получением Соединения I-1⋅ безводной формы C в виде темно-желтого порошка.

XRPD Соединения I-1 (безводной формы C)

[0354] Картину XRPD Соединения I-1⋅ безводной формы C регистрируют при комнатной температуре в режиме отражения с использованием дифрактометра Bruker D8 Discover, снабженного источником с герметичной трубкой и площадным детектором Hi-Star (Bruker AXS, Madison, WI, Asset V012842). Генератор рентгеновского излучения работает при напряжении 40 кВ и токе 35 мА. Образец порошка помещают в никелевый держатель. Регистрируют два интервала со временем экспонирования по 120 секунд, каждый. Затем данные интегрируют в диапазоне значений 2 тэта 3,5°-39° с величиной шага 0,02 и сводят в одну непрерывную картину. Фигура 1e показывает рентгеновскую дифрактограмму порошкообразного образца, которая является характерной для кристаллического лекарственного вещества.

[0355] Таблица 7a приводит репрезентативные пики XRPD для Соединения I-1⋅ безводной формы C:

Таблица 7a Репрезентативные пики XRPD
Пики XRPD	Угол (2 тэта ±0,2)	Интенсивность, %
1	3,6	1,1
2	4,0	1,1
3*	6,8	44,8
4	7,6	11,1
5	8,1	12,7
6	10,3	13,3
7	11,4	100,0
8*	13,4	29,1
9	14,2	51,8
10	14,9	23,8
11*	15,9	31,1
12	16,3	14,2
13	16,7	17,6
14	17,0	26,9
15	18,2	37,9
16	19,1	50,4
17	20,7	31,7
18	22,6	3,8
19	23,3	16,0
20	23,9	15,0
21	24,5	10,1
22	25,5	24,0
23	25,8	33,3
24	27,1	17,3
25	27,9	23,8
26	29,1	19,2
27*	30,9	22,3
28	32,0	12,9
29*	32,9	12,8
30	33,7	7,5
31	35,1	4,5

Термогравиметрический анализ Соединения I-1 (безводной формы C)

[0356] Термогравиметрический анализ Соединения I-1⋅ безводной формы C осуществляют для определения процента потерь массы как функции времени с использованием TA Instrument TGA Q500 (Asset V014840). Образец (3,363 мг) добавляют на предварительно тарированный платиновый поддон и нагревают от температуры окружающей среды до 350°C при 10°C/мин. Результаты TGA, наблюдаемые на Фигуре 2e, показывают отсутствие значительных явлений потери массы до плавления/деградации. Температура начала плавления/деградации составляет 292°C.

Дифференциальная сканирующая калориметрия Соединения I-1 (безводной формы C)

[0357] Дифференциальную сканирующую калориметрию Соединения I-1⋅ безводной формы C измеряют с использованием TA Instrument DSC Q2000 (Asset V012390). Образец (4,100 мг) взвешивают в алюминиевом герметичном поддоне с предварительно проколотыми отверстиями и нагревают от 30°C до 350°C при 3°C/мин, с модуляцией ±1°C каждые 60 секунд. Результаты DSC, наблюдаемые на Фигуре 3e, показывают одно явление эндотермического плавления/деградации при 281°C.

Спектр твердотельного ЯМР

[0358] Спектр твердотельного ¹³C ЯМР Соединения I-1⋅ безводной формы C показан на Фигуре 4e. Таблица 7b приводит химические сдвиги релевантных пиков.

Таблица 7b Спектр твердотельного ¹³ C ЯМР Формы C
	Соединение I-1 (безводная форма C) химические сдвиги ¹³C
№ Пика	F1 [м.д.]	Интенсивность
1*	175,2	86,8
2	163,3	42,2
3	162,1	43,3
4	158,2	10,2
5	152,4	12,6
6	149,9	17,5
7	144,9	42,2
8*	142,5	55,9
9	137,9	100,0
10	135,7	43,6
11*	129,6	64,4
12	123,6	44,4
13	86,5	47,6
14	76,6	87,7
15*	73,5	72,6
16	59,6	93,7
17*	54,0	53,5
18	51,2	67,4
19	49,7	58,8
20*	46,7	86,3
21	42,3	55,8
22	37,2	97,6
23	31,4	79,4
24	28,9	79,5

[0359] Спектр твердотельного ¹⁹F ЯМР Соединения I-1⋅ безводной формы C показан на Фигуре 5e. Таблица 7c приводит химические сдвиги релевантных пиков.

Таблица 7c Спектр твердотельного ¹⁹ F ЯМР Формы C
	Соединение I-1 (безводная форма C) химические сдвиги ¹⁹F
№ Пика	F1 [м.д.]	Интенсивность
1*	-131,2	4,8
2*	-150,7	12,5

Пример 10: Соединение I-1 (аморфная форма)

[0360] Соединение I-1⋅ аморфную форму получают в соответствии со способами, описанными в Примере 2, Стадия 3 или в Примере 3, Стадия 3, выше.

XRPD Соединения I-1 (аморфной формы)

[0361] Картину XRPD Соединения I-1⋅ аморфной формы регистрируют при комнатной температуре в режиме отражения с использованием дифрактометра PANalytical, снабженного трубкой источника Cu Empyrean и детектором PIXcel 1D (PANalytical, The Netherlands). Генератор рентгеновского излучения работает при напряжении 45 кВ и токе 40 мА. Образец порошка помещают в кремниевый держатель. Данные находятся в диапазоне значений 2 тэта 3°-39° с величиной шага 0,013° и временем экспозиции 0,5 сек на один шаг. Фигура 1f показывает рентгеновскую дифрактограмму порошкообразного образца, который является характерным для аморфного лекарственного вещества.

Дифференциальная сканирующая калориметрия Соединения I-1 (аморфной формы)

[0362] Дифференциальную сканирующую калориметрию Соединения I-1⋅ аморфной формы измеряют с использованием TA Instrument DSC Q2000. Образец (2,61 мг) взвешивают в алюминиевом негерметичном поддоне и нагревают с использованием модуляционного режима от температуры окружающей среды до 350°C при скорости нагрева 2°C/мин, с амплитудой модуляции ±0,5°C и периодом 60 сек. Результаты DSC, наблюдаемые на Фигуре 2f, показывают переход стеклования (Tg) при 128°C (начало) с изменением теплоемкости 0,3 Дж/(г⋅°C). После перехода стеклования следует экзотерма кристаллизации при 174°C (начало), за которой, в свою очередь, следует явление плавления/деградации при 250°C.

Твердотельный ЯМР Соединения I-1 (аморфного)

[0363] Спектр твердотельного ¹³C ЯМР Соединения I-1⋅ аморфной формы показан на Фигуре 3f. Таблица 8a приводит химические сдвиги релевантных пиков.

Таблица 8a Спектр твердотельного ¹³ C ЯМР аморфной формы
	Соединение I-1 (аморфная форма) химические сдвиги ¹³C
№ Пика	F1 [м.д.]	Интенсивность
1*	173,8	27,7
2	162,3	49,2
3	157,6	18,0
4	149,3	21,9
5*	144,2	30,0
6	134,7	59,6
7	123,1	20,3
8*	87,5	24,0
9	75,6	39,7
10	59,4	32,7
11	50,8	100,0
12*	45,6	36,0
13	41,8	28,6
14	38,3	39,3
15*	29,5	57,2

[0364] Спектр твердотельного ¹⁹F ЯМР Соединения I-1⋅ аморфного показан на Фигуре 4f. Таблица 8b приводит химические сдвиги релевантных пиков.

Таблица 8b Спектр твердотельного ¹⁹ F ЯМР аморфной формы
	Соединение I-1 (аморфное) химические сдвиги ¹⁹F
№ Пика	F1 [м.д.]	Интенсивность
1,0*	-137,7	9,8
2,0*	-153,1	12,5

Пример 11: Соединение I-1 (DMSO сольват)

[0365] Соединение I-1⋅ безводная форма A (10,0 г; 18,47 ммоль), полученное в соответствии со способами, описанными в Примере 7, суспендируют в DMSO (200 мл) и нагревают до 55°C. Смесь фильтруют пока она горячая. Горячий фильтрат перемешивают в чистой колбе и охлаждают до 20-25°C, затем перемешивают в течение дополнительных 2 часов. Твердые продукты собирают посредством фильтрования, промывают DMSO (10 мл), сушат с помощью отсоса, затем сушат в вакуумной печи в течение 14 часов при 40-45°C с получением Соединения I-1⋅ DMSO сольвата (7,23 г; 63%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 10,63 (с, 1H), 9,66 (с, 1H), 9,47 (дд, 1H), 9,24 (дд, 1H), 8,24 (д, 1H), 6,78 (с, 2H), 4,54 (т, 2H), 4,46 (т, 2H), 3,60 (дт, 4H), 3,43 (м, 1H), 3,18 (м, 2H), 2,97 (м, 3H), 2,54 (с, 6H), 2,26 (дт, 4H), 2,12 (квд, 2H), 1,73 (д, 2H); ¹⁹F ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ -136,1, -152,8,

XRPD Соединения I-1 (DMSO сольвата)

[0366] Картину XRPD Соединения I-1⋅ DMSO сольвата регистрируют при комнатной температуре в режиме отражения с использованием дифрактометра PANalytical, снабженного трубкой источника Empyrean и детектором PIXcel 1D (PANalytical, The Netherlands). Генератор рентгеновского излучения работает при напряжении 45 кВ и токе 40 мА. Образец порошка помещают в кремниевый держатель. Данные регистрируют в диапазоне значений 2 тэта 3°-39° с величиной шага 0,013° и временем экспозиции 121 сек на один шаг. Фигура 1g показывает рентгеновскую дифрактограмму порошкообразного образца, которая является характерной для кристаллического лекарственного вещества.

[0367] Таблица 9 приводит репрезентативные пики XRPD для Соединения I-1⋅ DMSO сольвата:

Таблица 9 Репрезентативные пики XRPD
Пики XRPD	Угол (2 тэта ±0,2)	Интенсивность, %
1	7,0034	8,33
2*	8,9204	11,28
3	10,4007	10,11
4	12,4735	6,81
5	12,7962	12,32
6	13,3976	12,25
7*	14,8102	29,16
8	15,439	15,1
9	15,7477	14,37
10*	16,5454	82,57
11	17,051	15,34
12	18,1033	20,25
13*	18,6354	29,71
14	19,593	3,68
15	20,1178	6,42
16*	20,9143	35,76
17	21,3593	11,65
18*	22,1801	100
19	22,8306	25,4
20*	23,3866	51,08
21	23,8312	16,31
22	24,5088	15,65
23	25,6545	25,59
24	27,0136	3,06
25	27,4405	2,43
26	27,6871	3,27
27	28,5715	8,73
28	28,9693	11,53
29	29,555	8,95
30	30,1186	5,69
31	30,5402	8,63
32	31,2969	6,42
33	32,0663	8,71
34	33,2165	3,04
35	34,1902	7,02
36	34,6067	3,57
37	35,45	1,47
38	36,5669	3,23
39	38,6972	2,19

Термогравиметрический анализ Соединения I-1 (DMSO сольвата)

[0368] Термогравиметрический анализ Соединения I-1⋅ DMSO сольвата осуществляют для определения процента потерь массы как функции температуры с использованием Discover TGA (TA Instruments Trios). Образец (3,26 мг) добавляют на предварительно тарированный алюминиевый поддон и нагревают от температуры окружающей среды до 350°C при 10°C/мин. Результаты TGA, наблюдаемые на Фигуре 2g, показывают большие потери массы 12,44% между 146°C (начало) и 156°C (конечная точка). Эти потери массы соответствует приблизительно 1 молярному эквиваленту DMSO. Затем наблюдают вторые потери массы 0,52% между 254°C (начало) и 262°C (конечная точка). Следующие потери массы, наблюдаемые при 304°C, представляют собой результат плавления/деградации.

Дифференциальная сканирующая калориметрия Соединения I-1 (DMSO сольвата)

[0369] Дифференциальную сканирующую калориметрию Соединения I-1⋅ DMSO сольвата измеряют с использованием TA Instrument DSC Q2000. Образец (1,77 мг) взвешивают в алюминиевом герметичном поддоне с проколотыми отверстиями и нагревают от температуры окружающей среды до 350°C при 10°C/мин. Результаты DSC, наблюдаемые на Фигуре 3g, показывают эндотерму десольватации при 143°C (начало), а затем одну эндотерму плавления при 258°C (начало).

Пример 12: Соединение I-1 (DMAC сольват)

[0370] Соединение I-1⋅ безводная форма A (100 мг; 0,18 ммоль), полученное в соответствии со способами, описанными в Примере 7, суспендируют в DMAC (2000 мкл) и перемешивают в течение 20 часов при 20-25°C. Твердые продукты собирают посредством фильтрования, промывают DMAC (500 мкл), сушат с помощью отсоса, затем сушат в вакуумной печи при 40-50°C с получением Соединения I-1⋅ DMAC сольвата (84 мг). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d ₆) δ 10,62 (с, 1H), 9,66 (с, 1H), 9,46 (дд, 1H), 9,26-9,22 (м, 1H), 8,24 (д, 1H), 6,77 (с, 2H), 4,54 (т, 2H), 4,46 (т, 2H), 3,66-3,54 (м, 4H), 3,43 (п, 1H), 3,18 (тт, 2H), 2,94 (с, 8H), 2,78 (с, 4H), 2,26 (дт, 4H), 2,12 (квд, 2H), 1,96 (с, 4H), 1,76-1,69 (м, 2H).

XRPD Соединения I-1 (DMAC сольвата)

[0371] Картину XRPD Соединения I-1⋅ DMAC сольвата регистрируют при комнатной температуре в режиме отражения с использованием дифрактометра PANalytical, снабженного трубкой источника Empyrean и детектором PIXcel 1D (PANalytical, The Netherlands). Генератор рентгеновского излучения работает при напряжении 45 кВ и токе 40 мА. Образец порошка помещают в кремниевый держатель. Данные регистрируют в диапазоне значений 2 тэта 3°-39° с величиной шага 0,013° и временем экспозиции 121 сек на один шаг. Фигура 1h показывает рентгеновскую дифрактограмму порошкообразного образца, которая является характерной для кристаллического лекарственного вещества.

[0372] Таблица 10 приводит репрезентативные пики X RPD для Соединения I-1⋅ DMAC сольвата:

Таблица 10 Репрезентативные пики XRPD
XRPD Пики	Угол (2 тэта ±0,2)	Интенсивность, %
1*	6,0169	75,51
2	7,5182	7,99
3	8,5957	32,29
4	9,7593	33,98
5	10,9655	15,95
6	11,3688	7,25
7	12,0406	12,17
8	13,6703	19,18
9	14,1108	36,56
10	14,2831	23,2
11	14,5895	9,33
12	15,1755	25,52
13*	15,4632	20,85
14	16,0919	71,07
15	16,9423	0,92
16*	17,7117	82,12
17*	18,1371	77,28
18	18,5857	4,73
19	19,0786	16,95
20	19,745	7,05
21*	20,3531	40,38
22	20,7384	29,95
23	21,2654	10,22
24	21,7978	9,56
25	22,4818	2,27
26	22,8051	5,51
27	23,3945	6,33
28	23,829	19,65
29	24,6486	3,69
30	25,343	5,43
31	25,6712	7,83
32*	26,6041	100
33	27,6488	39,15
34	28,1311	10,68
35	28,4779	15,9
36	28,763	13,68
37	29,2517	17,62
38	29,5534	13,91
39	29,9062	12,28
40	30,5467	7,27
41	31,4852	9,17
42	32,228	2,69
43	32,6692	3,7
44	34,7188	1,29
45	36,4642	1,43
46	37,1111	1,9
47	38,0592	1,92

Термогравиметрический анализ Соединения I-1 (DMAC сольвата)

[0373] Термогравиметрический анализ Соединения I-1⋅ DMAC сольвата осуществляют для определения процента потерь массы как функции температуры с использованием Discover TGA (TA Instruments Trios). Образец (5,12 мг) добавляют на предварительно тарированный алюминиевый поддон и нагревают от температуры окружающей среды до 350°C при 10°C/мин. Результаты TGA, наблюдаемые на Фигуре 2h, показывают большие потери массы 17,76% в пределах между 85°C (начало) и 100°C (конечная точка). Эти потери массы соответствует приблизительно 1,3 молярного эквивалента DMAC. Следующие потери массы, наблюдаемые при 306°C, представляют собой результат плавления/деградации.

Дифференциальная сканирующая калориметрия Соединения I-1 (DMAC сольвата)

[0374] Дифференциальную сканирующую калориметрию Соединения I-1⋅ DMAC сольвата измеряют с использованием TA Instrument DSC Q2000. Образец (1,93 мг) взвешивают в алюминиевом герметичном поддоне с проколотыми отверстиями и нагревают от температуры окружающей среды до 350°C при 10°C/мин. Результаты DSC, наблюдаемые на Фигуре 3h, показывают эндотерму десольватации при 81°C (начало), а затем одну эндотерму плавления при 261°C (начало).

Пример 13: Соединение I-1 (ацетоновый сольват)

[0375] Соединение I-1⋅ аморфное (100 мг; 0,18 ммоль), полученное в соответствии со способами, описанными в Примере 2, Стадия 3, выше, суспендируют в ацетоне (2000 мкл) и перемешивают в течение 22 часов. Соединение I-1⋅ ацетоновый сольват собирают посредством фильтрования. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d ₆) δ 10,63 (с, 1H), 9,66 (с, 1H), 9,46 (дд, 1H), 9,24 (дд, 1H), 8,24 (д, 1H), 6,78 (с, 2H), 4,54 (т, 2H), 4,46 (т, 2H), 3,65-3,54 (м, 4H), 3,43 (п, 1H), 3,19 (тт, 2H), 3,06-2,90 (м, 3H), 2,26 (дт, 4H), 2,18-2,05 (м, 3H), 1,72 (д, 2H).

XRPD Соединения I-1 (ацетоновый сольват)

[0376] Картину XRPD Соединения I-1⋅ ацетонового сольвата регистрируют при комнатной температуре в режиме отражения с использованием дифрактометра PANalytical, снабженного трубкой источника Empyrean и детектором PIXcel 1D (PANalytical, The Netherlands). Генератор рентгеновского излучения работает при напряжении 45 кВ и токе 40 мА. Образец порошка помещают в кремниевый держатель. Данные регистрируют в диапазоне значений 2 тэта 3°-39° с величиной шага 0,013° и временем экспозиции 121 сек на один шаг. Фигура 1i показывает рентгеновскую дифрактограмму порошкообразного образца, которая является характерной для кристаллического лекарственного вещества.

[0377] Таблица 11 приводит репрезентативные пики XRPD для Соединения I-1⋅ ацетонового сольвата:

Таблица 11 Репрезентативные пики XRPD
Пики XRPD	Угол (2 тэта ±0,2)	Интенсивность, %
1	6,9871	31,75
2*	8,9148	62,84
3	10,4145	7,38
4	12,4529	6,65
5	12,7486	9,09
6	13,4567	7,37
7	14,8093	10,97
8*	15,528	35,3
9*	15,826	19,22
10*	16,6652	22,77
11	17,1217	6,15
12	17,9563	10,57
13	18,1349	9,4
14	18,589	7,22
15	19,5447	3,06
16	20,0055	2,55
17	20,8656	6,29
18	21,3488	6,36
19*	22,2722	100
20	22,6595	13,43
21	22,9581	19,8
22	23,465	21,26
23	23,7918	8,65
24	24,5843	8,65
25*	25,7222	13,01
26	26,0003	3,74
27	27,696	2,49
28	28,7335	4,74
29*	29,0658	13,52
30	29,6743	8,03
31	30,2154	6,04
32	30,6427	4,67
33	31,36	4,28
34	32,2601	3,86
35	33,3871	0,66
36	33,8459	1,15
37	34,2253	1,42
38	35,6517	2,34
39	35,9083	2
40	36,4752	2,17

Термогравиметрический анализ Соединения I-1 (ацетонового сольвата)

[0378] Термогравиметрический анализ Соединения I-1⋅ ацетонового сольвата осуществляют для определения процента потерь массы как функции температуры с использованием Discover TGA (TA Instruments Trios). Образец (2,45 мг) добавляют на предварительно тарированный алюминиевый поддон и нагревают от температуры окружающей среды до 350°C при 10°C/мин. Результаты TGA, наблюдаемые на Фигуре 2i, показывают начальные потери массы 1,46%. Большие потери массы 4,55% затем наблюдают в пределах между 124°C (начало) и 151°C (конечная точка), что соответствует приблизительно 0,44 молярного эквивалента ацетона. Следующие потери массы, наблюдаемые при 302°C, представляют собой результат плавления/деградации.

Дифференциальная сканирующая калориметрия Соединения I-1 (ацетонового сольвата)

[0379] Дифференциальную сканирующую калориметрию Соединения I-1⋅ ацетонового сольвата измеряют с использованием TA Instrument DSC Q2000. Образец (1,42 мг) взвешивают в алюминиевом герметичном поддоне с проколотыми отверстиями и нагревают от температуры окружающей среды до 350°C при 10°C/мин. Результаты DSC, наблюдаемые на Фигуре 3i, показывают эндотерму десольватации при 136°C (начало), а затем эндотерму плавления при 166°C (начало). За ней, в свою очередь, следует экзотерма промежуточной перекристаллизации при 175°C. Другая эндотерма плавления регистрируется затем при 259°C. За ней также следует экзотерма перекристаллизации при 261°C. Конечная эндотерма плавления наблюдается при 279°C.

Пример 14: Соединение I-1 (изопропанольный сольват)

[0380] Соединение I-1⋅ аморфное (100 мг; 0,18 ммоль), полученное в соответствии со способами, описанными в Примере 2, Стадия 3, выше, суспендируют в 2-пропаноле (2000 мкл) и перемешивают в течение 22 часов при 20-25°C. Соединение I-1⋅ изопропанольный сольват собирают посредством фильтрования.

XRPD Соединения I-1 (изопропанольного сольвата)

[0381] Картину XRPD Соединения I-1⋅ изопропанольного сольвата регистрируют при комнатной температуре в режиме отражения с использованием дифрактометра PANalytical, снабженного трубкой источника Empyrean и детектором PIXcel 1D (PANalytical, The Netherlands). Генератор рентгеновского излучения работает при напряжении 45 кВ и токе 40 мА. Образец порошка помещают в кремниевый держатель. Данные регистрируют в диапазоне значений 2 тэта 3°-39° с величиной шага 0,013° и временем экспозиции 121 сек на один шаг. Фигура 1j показывает рентгеновскую дифрактограмму порошкообразного образца, которая является характерной для кристаллического лекарственного вещества.

[0382] Таблица 12 приводит репрезентативные пики XRPD для Соединения I-1⋅ изопропанольного сольвата:

Таблица 12 Репрезентативные пики XRPD
Пики XRPD	Угол (2 тэта ±0,2)	Интенсивность, %
1*	6,937	100
2	11,0107	7,85
3	12,8255	8,34
4	13,6694	3,53
5	14,1876	2,27
6	14,8878	7,9
7	16,1846	4,17
8*	17,1027	18,84
9*	17,2424	19,04
10	18,0956	0,47
11*	19,1139	5,27
12*	19,6437	15,33
13	20,3628	10,96
14	21,4978	1,13
15	22,769	5,81
16*	23,6531	41,5
17*	24,3573	39,72
18	24,8556	17,48
19	25,8121	8,63
20	27,2638	2,35
21*	28,8751	21,82
22	30,0648	2,34
23	31,4229	1,58
24	32,9263	1,14
25	34,4773	2,29
26	35,6844	1,53
27	37,3825	0,46

Термогравиметрический анализ Соединения I-1 (изопропанольного сольвата)

[0383] Термогравиметрический анализ Соединения I-1⋅ изопропанольного сольвата осуществляют для определения процента потерь массы как функции температуры с использованием Discover TGA (TA Instruments Trios). Образец (3,39 мг) добавляют на предварительно тарированный алюминиевый поддон и нагревают от температуры окружающей среды до 300°C при 10°C/мин. Результаты TGA, наблюдаемые на Фигуре 2j, показывают большие потери массы 3,76% в пределах между 136°C (начало) и 180°C (конечная точка). Эти потери массы соответствует приблизительно 0,35 молярного эквивалента IPA. Следующие потери массы, наблюдаемые при 278°C, представляют собой результат плавления/деградации.

Дифференциальная сканирующая калориметрия Соединения I-1 (изопропанольного сольвата)

[0384] Дифференциальную сканирующую калориметрию Соединения I-1⋅ изопропанольного сольвата измеряют с использованием TA Instrument DSC Q2000. Образец (1,03 мг) взвешивают в T-ноль алюминиевом поддоне и нагревают от температуры окружающей среды до 320°C при 10°C/мин. Результаты DSC, наблюдаемые на Фигуре 3j, показывают широкую эндотерму десольватации при 135°C (начало), а затем одну эндотерму плавления при 258°C (начало).

Пример 15: Анализ ингибирования клеточного ATR:

[0385] Соединения могут просматриваться на их способность ингибировать внутриклеточный ATR с использованием анализа иммунофлюоресцентной микроскопии для детектирования фосфорилирования гистона субстрата ATR H2AX в клетках, обработанных гидроксимочевиной. Клетки HT29 помещают при 14000 клеток на лунку в 96-луночные черные планшеты для получения изображения (BD 353219), в среды Маккоя 5A (Sigma M8403), дополненные 10% фетальной сывороткой теленка (JRH Biosciences 12003), раствором пенициллина/стрептомицина, разбавленным 1:100 (Sigma P7539) и 2 мМ L-глютамина (Sigma G7513), и дают им возможность для прилипания в течение ночи при 37°C в 5% CO₂. Затем к средам с клетками добавляют соединения, начиная от конечной концентрации 25 мкМ при 3-кратных последовательных разбавлениях, и клетки инкубируют при 37°C в 5% CO₂. Через 15 мин, добавляют гидроксимочевину (Sigma H8627) при конечной концентрации 2 мМ.

[0386] После 45 мин обработки гидроксимочевиной, клетки промывают в PBS, фиксируют в течение 10 мин в 4% формальдегида, разбавленного PBS (Polysciences Inc 18814), промывают 0,2% Tween-20 в PBS (промывочным буфером) и пермеабилизируют в течение 10 мин в 0,5% растворе Triton X-100 в PBS, все это при комнатной температуре. Затем клетки промывают один раз в промывочном буфере и блокируют в течение 30 мин при комнатной температуре в растворе сыворотки козы 10% (Sigma G9023), разбавленной в промывочном буфере (блокирующий буфер). Для детектирования уровней фосфорилирования H2AX, клетки затем инкубируются в течение 1 часа при комнатной температуре в растворе первичного антитела (моноклонального антитела мыши анти-фосфорилированый гистон H2AX Ser139; Upstate 05-636), разбавленного 1:250 в блокирующем буфере. Затем клетки промывают пять раз в промывочном буфере перед инкубированием в течение 1 часа при комнатной температуре в темноте в смеси вторичного антитела (конъюгированного антитела козы анти-Alexa Fluor 488 мыши; Invitrogen A11029) и штамма Hoechst (Invitrogen H3570), разбавленного 1:500 и 1:5000, соответственно, в промывочном буфере. Затем клетки промывают пять раз в промывочном буфере и, наконец, добавляют 100 мкл PBS в каждую лунку перед получением изображений.

[0387] Получают изображение клеток по отношению к интенсивности Alexa Fluor 488 и Hoechst с использованием программного обеспечения BD Pathway 855 Bioimager и Attovision (BD Biosciences, Version 1.6/855) для количественного определения фосфорилированных H2AX Ser139 и окрашивания ДНК, соответственно. Процент фосфорилированных H2AX-положительных ядер в монтаже из 9 изображений при увеличении 20x вычисляют затем для каждой лунки с использованием программного обеспечения BD Image Date Explorer (BD Biosciences Version 2.2.15). Фосфорилированные H2AX-положительные ядра определяются как Hoechst-положительные области, представляющие интерес, содержащие интенсивность Alexa Fluor 488, превышающую в 1,75 раза среднюю интенсивность Alexa Fluor 488 в клетках, не обработанных гидроксимочевиной. Процент H2AX-положительных ядер, в конечном счете, изображается как график зависимости от концентрации для каждого соединения, и определяются IC50 для ингибирования внутриклеточного ATR с использованием программного обеспечения Prism (GraphPad Prism version 3,0cx for Macintosh, GraphPad Software, San Diego California, USA).

[0388] Соединения, описанные в настоящем документе, могут также исследоваться в соответствии с другими способами, известными в данной области (смотри Sarkaria et al, “Inhibition of ATM and ATR Kinase Activities by the Radiosensitizing Agent, Caffeine: Cancer Research 59: 4375-5382 (1999); Hickson et al, “Identification and Characterization of a Novel and Specific Inhibitor of the Ataxia-Telangiectasia Mutated Kinase ATM” Cancer Research 64: 9152-9159 (2004); Kim et al, “Substrate Specificities and Identification of Putative Substrates of ATM Kinase Family Members” The Journal of Biological Chemistry, 274(53): 37538-37543 (1999); и Chiang et al, “Determination of the catalytic activities of mTOR and other members of phosphoinositide-3-kinase-related kinase family” Methods Mol. Biol. 281:125-41 (2004)).

Пример 16: Анализ ингибирования ATR:

[0389] Соединения могут просматриваться на их способность ингибировать ATR киназу с использованием анализа инкорпорирования радиоактивного фосфата. Анализы осуществляют в смеси 50 мМ Tris/HCl pH 7,5), 10 мМ MgCl₂ и 1 мМ DTT. Конечные концентрации субстрата составляют 10 мкМ [γ-33P]ATP (3 мКюри 33P ATP/ммоль ATP, Perkin Elmer) и 800 мкМ целевого пептида (ASELPASQPQPFSAKKK).

[0390] Анализы осуществляют при 25°C в присутствии 5 нМ полноразмерного ATR. Приготавливают исходный буферный раствор для анализа, содержащий все реагенты, перечисленные выше, за исключением ATP и исследуемого соединения, представляющего интерес. 13,5 мкл исходного раствора помещают в 96-луночный планшет с последующим добавлением 2 мкл исходного раствора в DMSO, содержащего последовательные разбавления исследуемого соединения (как правило, начиная с конечной концентрации 15 мкМ с 3-кратными последовательными разбавлениями) по два образца (конечная концентрация DMSO 7%). Планшет предварительно инкубируют в течение 10 минут при 25°C, и реакцию инициируют посредством добавления 15 мкл [γ-33P]ATP (конечная концентрация 10 мкМ).

[0391] Реакцию прекращают через 24 часа посредством добавления 30 мкл 0,1M фосфорной кислоты, содержащей 2 мМ ATP. 96-луночный планшет с фосфоцеллюлозным фильтром Multiscreen (Millipore, Cat no. MAPHN0B50) предварительно обрабатывают 100 мкл 0,2M фосфорной кислоты перед добавлением 45 мкл смеси для анализа с остановленной реакцией. Планшет промывают 0,2M фосфорной кислотой 5×200 мкл. После сушки, в лунку добавляют 100 мкл жидкого сцинтилляционного коктейля Optiphase 'SuperMix' (Perkin Elmer) перед счетом сцинтилляций (1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter, Wallac).

[0392] После удаления средних фоновых значений для всех точек данных, данные K_i(app) вычисляют из нелинейного регрессионного анализа данных по начальным скоростям с использованием пакета программного обеспечения Prism (GraphPad Prism version 3,0cx for Macintosh, GraphPad Software, San Diego California, USA).

[0393] В целом, соединения по настоящему изобретению являются эффективными при ингибировании ATR. Соединения I-1 и I-3 ингибируют ATR при значениях K_i ниже 1 мкМ.

Пример 17: Анализ сенсибилизации по отношению к цисплатину

[0394] Соединения могут просматриваться на их способность к сенсибилизации колоректальных раковых клеток HCT116 по отношению к цисплатину с использованием анализа 96-часовой выживаемости клеток (MTS). Клетки HCT116, которые имеют дефект в передаче сигналов ATM к цисплатину (смотри, Kim et al.; Oncogene 21:3864 (2002); смотри также, Takemura et al.; JBC 281:30814 (2006)) помещают при 470 клеток на одну лунку в 96-луночные полистироловые планшеты (Costar 3596) в 150 мкл среды Маккоя 5A (Sigma M8403), дополненной 10% фетальной сывороткой теленка (JRH Biosciences 12003), раствором пенициллина/стрептомицина, разбавленного 1:100 (Sigma P7539) и 2 М L-глютамина (Sigma G7513), и они получают возможность для прилипания в течение ночи при 37°C в 5% CO₂. Затем, как соединения, так и цисплатин добавляют одновременно в среды с клетками при 2-кратных последовательных разбавлениях от верхней конечной концентрации 10 мкМ как полную матрицу концентраций при конечном клеточном объеме 200 мкл, а затем клетки инкубируют при 37°C в 5% CO₂. Через 96 часов, 40 мкл реагента MTS (Promega G358a) добавляют в каждую лунку, и клетки инкубируют в течение 1 часа при 37°C в 5% CO₂. Наконец, измеряют коэффициент поглощения на 490 нм с использованием считывающего устройства SpectraMax Plus 384 (Molecular Devices), и можно получить концентрацию соединения, необходимую для уменьшения IC₅₀ одного только цисплатина, по меньшей мере, в 3 раза (до 1 десятичного знака).

[0395] В целом, соединения по настоящему изобретению являются эффективными при сенсибилизации раковых клеток к цисплатину. Соединения I-1 и I-3 имеют значения сенсибилизации по отношению к цисплатину <0,2 мкМ.

Пример 18: Активность агента самого по себе по отношению к HCT116

[0396] Соединения могут просматриваться на активность агента самого по себе по отношению к колоректальным раковым клеткам HCT116 с использованием анализа 96-часовой выживаемости (MTS). HCT116 помещают при 470 клеток на лунку в 96-луночные полистироловые планшеты (Costar 3596), в 150 мкл среды Маккоя 5A (Sigma M8403), дополненной 10% фетальной сывороткой теленка (JRH Biosciences 12003), раствором пенициллина/стрептомицина, разбавленной 1:100 (Sigma P7539) и 2 мМ L-глютамина (Sigma G7513), и они получают возможность для прилипания в течение ночи при 37°C в 5% CO₂. Затем соединения добавляют в среды с клетками при 2-кратных последовательных разбавлениях, начиная от верхней конечной концентрации 10 мкМ, как полную матрицу концентраций при конечном клеточном объеме 200 мкл, а затем клетки инкубируют при 37°C в 5% CO₂. Через 96 часов, 40 мкл реагента MTS (Promega G358a) добавляют в каждую лунку, и клетки инкубируют в течение 1 часа при 37°C в 5% CO₂. Наконец, измеряют коэффициент поглощения на 490 нм с использованием считывающего устройства SpectraMax Plus 384 (Molecular Devices), и можно вычислить значения IC₅₀.

Пример 19: анализ ингибирования комплекса с ATR

[0397] Соединения просматривают на их способность к ингибированию ATR киназы, в присутствии белков партнеров ATRIP, CLK2 и TopBP1, с использованием анализа инкорпорирования радиоактивного фосфата. Анализы осуществляют в смеси 50 мМ Tris/HCl pH 7,5), 10 мМ MgCl₂ и 1 мМ DTT. Конечные концентрации субстрата составляют 10 мкМ [g-33P]ATP (3,5 мкКюри 33P ATP/нмоль ATP, Perkin Elmer, Massachusetts, USA) и 800 мкМ целевого пептида (ASELPASQPQPFSAKKK, Isca Biochemicals, Cambridgeshire, UK).

[0398] Анализ осуществляют при 25°C в присутствии 4 нМ полноразмерного ATR, 40 нМ полноразмерного ATRIP, 40 нМ полноразмерного CLK2 и 600 нМ TopBP1(A891-S1105). Приготавливают исходный буферный раствор ферментов, содержащий все реагенты, перечисленные выше, за исключением целевого пептида, ATP и исследуемого соединения, представляющего интерес. Этот исходный раствор ферментов предварительно инкубируют в течение 30 минут при 25°C. 8,5 мкл исходного раствора ферментов помещают в 96-луночный планшет с последующим добавлением 5 мкл целевого пептида и 2 мкл исходного раствора в DMSO, содержащего последовательные разбавления исследуемого соединения (как правило, начиная с конечной концентрации 1,5 мкМ, с 2,5-кратными последовательными разбавлениями) для двух образцов (конечная концентрация DMSO 7%). Планшет предварительно инкубируют в течение 10 минут при 25°C, и реакцию инициируют посредством добавления 15 мкл [g-33P]ATP (конечная концентрация 10 мкМ).

[0399] Реакцию останавливают через 20 часов посредством добавления 30 мкл 0,3 M фосфорной кислоты, содержащей 2 мМ ATP. 96-луночный планшет с фосфоцеллюлозным фильтром (Multiscreen HTS MAPHNOB50, Merck-Millipore, Massachusetts, USA) предварительно обрабатывают 100 мкл 0,1 M фосфорной кислоты перед добавлением 45 мкл смеси для анализа с остановленной реакцией. Планшет промывают 5×200 мкл 0,1 M фосфорной кислоты. После сушки, в лунку добавляют 50 мкл жидкого сцинтилляционного коктейля Optiphase 'SuperMix' (Perkin Elmer, Massachusetts, USA) перед счетом сцинтилляций (Wallac 1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter, Perkin Elmer, Massachusetts, USA).

[0400] После удаления средних фоновых знамений для всех точек данных, данные Ki(app) вычисляют из нелинейного регрессионного анализа данных по начальным скоростям с использованием пакета программного обеспечения Prism (GraphPad Prism version 3,0cx for Macintosh, GraphPad Software, San Diego California, USA).

[0401] Хотя авторы описали ряд вариантов осуществления настоящего изобретения, очевидно, что основные примеры авторов могут быть изменены для предложения других вариантов осуществления, которые используют соединения, методы и способы настоящего изобретения. Следовательно, будет очевидно, что рамки настоящего изобретения должны определяться прилагаемой формулой изобретения, а не конкретными вариантами осуществления, которые представлены в настоящем документе в качестве примеров.

Claims

1. Способ получения соединения формулы I-1:

включающий стадии:

a) взаимодействия соединения формулы 6a*:

с соединением формулы 27:

при соответствующих условиях образования амидной связи, где соответствующие условия для образования амидной связи включают взаимодействие соединения формулы 6a* с соединением формулы 27 в апротонном растворителе при нагреве, с образованием соединения формулы 28:

b) очистки соединения формулы 28 с использованием соответствующего хелатирующего агента для палладия, выбранного из пропан-1,2-диамина; этан-1,2-диамина; этан-1,2-диамина; пропан-1,3-диамина; тетраметилэтилендиамина; этиленгликоля; 1,3-бис(дифенилфосфанил)пропана; 1,4-бис(дифенилфосфанил)бутана и 1,2-бис(дифенилфосфанил)этан/Pr-1,2-диамина;

c) взаимодействия соединения формулы 28 при соответствующих условиях снятия защиты, где соответствующие условия снятия защиты включают взаимодействие соединения формулы 28 с кислотой в присутствии растворителя, с образованием соединения формулы 30

при соответствующих условиях образования амидной связи, где соответствующие условия для образования амидной связи включают взаимодействие соединения формулы 30 с соединением формулы 25 в присутствии партнера для образования амидной связи, апротонного растворителя и основания, с образованием соединения формулы I-1.

2. Способ по п.1, где соответствующие условия образования амидной связи включают апротонный растворитель, выбранный из NMP, DMF и тетрагидрофурана.

3. Способ по п.2, в котором апротонный растворитель представляет собой тетрагидрофуран.

4. Способ по п.2, в котором соответствующие условия образования амидной связи включают основание, где основание представляет собой алифатический амин.

5. Способ по п.4, в котором основание представляет собой DIPEA.

6. Способ по любому из пп.1-5, в котором партнер для образования амидной связи независимо выбирают из CDI, TBTU и TCTU.

7. Способ по п.6, в котором партнер для образования амидной связи представляет собой TCTU.

8. Способ по п.6, в котором партнер для образования амидной связи представляет собой CDI.

9. Способ по п.1, в котором соответствующие условия снятия защиты включают кислоту, где кислота представляет собой HCl.

10. Способ по п.1, в котором соответствующие условия снятия защиты включают растворитель, где растворитель представляет собой 1,4-диоксан.

11. Способ по п.1, в котором соответствующие условия образования амидной связи включают апротонный растворитель, выбранный из NMP, пиридина и DMF.

12. Способ по п.11, в котором апротонный растворитель представляет собой пиридин.

13. Способ по п.12, в котором реакцию осуществляют при температуре, по меньшей мере, 80°C.

14. Способ по п.1, в котором хелатирующий агент для палладия представляет собой пропан-1,2-диамин.

15. Способ получения соединения формулы I-1:

включающий стадии:

a) взаимодействия соединения формулы 5a

при соответствующих условиях галогенирования, где соответствующие условия галогенирования включают взаимодействие соединения формулы 5a с галогенирующим агентом и основанием в присутствии растворителя, с образованием соединения формулы 34:

где X представляет собой галоген;

при соответствующих условиях образования амидной связи, где соответствующие условия для образования амидной связи включают взаимодействие соединения формулы 34 с соединением формулы 27 в апротонном растворителе при нагреве, с образованием соединения формулы 28

;

;