CN105713058A - 一种从金银花叶中同步制备绿原酸和木犀草苷的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从金银花叶中同步制备绿原酸和木犀草苷的方法，属于医药化工技术领域，解决了金银花非药用部分的综合利用问题，实现了对金银花资源合理科学的开发和综合利用。本发明以金银花叶为原料，采用乙醇浸渍、微波萃取、膜分离、大孔树脂吸附分离、减压浓缩和真空干燥等步骤，利用大孔树脂吸附分离得到纯度大于55％的绿原酸和木犀草苷，实现了金银花叶中两类主要有效成分的提取分离及部分纯化，促进了金银花资源的综合利用和深加工开发。本发明提供的工艺简便、经济、环保、安全，该工艺过程中所用的树脂和洗脱剂均可以重复使用，工艺成本低，适合工业化生产。

Description

一种从金银花叶中同步制备绿原酸和木犀草苷的方法

技术领域

本发明属于医药化工技术领域，涉及生物活性成分的提取分离工艺，特别提供了一种利用大孔树脂同时提取和分离金银花叶中绿原酸与木犀草苷的方法。

背景技术

金银花(Floslonicerae)为忍冬科(Caprifoliaeeae)忍冬属(Lonicera)植物忍冬(Lonicerajaponicathunb)及同属多种植物的干燥花蕾，是一种“药食同源”的绿色天然产物，为中医常用药，具有清热解毒、凉风散热、抗病毒、保肝利胆的功能。金银花叶作为金银花药材的一种副产物，长期以来都作为非药用部分而未得到利用。

绿原酸类和黄酮类化合物是金银花叶抗菌消炎的主要有效成分。绿原酸具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等主要生物活性，是保健食品、药品、化妆品等工业的重要原料，20％绿原酸含量金银花提取物价格连续几年都在每吨15万元左右。黄酮类化合物与抗菌活性有关，不仅能止咳祛痰、抗炎、抗菌、抗病毒，还具有优良的抗氧化、增强机体免疫力、降血糖血脂、自由基清除功能以及调节心血管系统的作用，具有广阔的应用前景。

研究表明，金银花叶的总黄酮含量是花中的2.78倍，同一时期金银花叶中绿原酸类有效成分约为花的60％～70％，而且金银花叶木犀草苷的抑菌效果和抗氧活性均高于叶中的绿原酸粗品。金银花叶产量较大，资源非常丰富。据调查，自采用金银花修剪整形技术以来，每茬花采摘后，都会有大量的茎叶被修剪，在金银花的一个生成年中，仅被修剪的茎叶就是花产量的5倍以上。因此，目前仅以花为药用原料及饮料、化妆品原料是自然资源的极大浪费，金银花叶与花一样具有药用开发价值。

目前，人们为了发展金银花综合利用和深加工产业，已开始关注金银花叶药用成分绿原酸和总黄酮的提取分离，但仍存在一定的不足，难以放大到产业化生产。

武雪芬等人(天然产物研究与开发，2001，13(3)：43-44)采用乙酸乙酯分离总黄酮，用β-环糊精共沉淀法分离绿原酸。该法引入大量有机溶剂，同时β-环糊精还会共沉淀环烯醚萜类物质，不适合商业化工业生产。

周才琼等人(西南农业大学学报，2003，25(3)：262-264)研究表明从金银花叶中提取总黄酮类化合物最佳工艺为90％乙醇、物料比1∶12，于70℃温浸60min。

王丽婷等人(华西药学杂志，2006，21(6)：520-523)研究表明从金银花叶中提取黄酮类化合物最好采用超声波法，黄酮的收率可达到15.0％。该法不适合商业化工业生产，采用超声波法的同时还会引入了新的杂质。

朱英等人(中成药，2007，29(1)：60-63)确定了水提取金银花叶总黄酮的最佳工艺条件：16倍量水，90℃水浴回流提取4次，每次1h。

郭玉等人(南华大学学报(医学版)，2008，36(2)：154-157)采用2005年版中国药典中收藏的提取方法分别提取了金银花叶中的总黄酮和绿原酸。该法不适合商业化工业生产。

陈旭良于2005年在公开号CN1687009A，名称为“一种高效提取金银花有效成分的新方法”中采用乙醇和微波作用巧妙结合提高金银花有效成分收率。

张现涛等于2005年在公开号CN1730015A，名称为“金银花提取物及其制备方法和应用”中采用水提、大孔树脂吸附、洗脱、乙酸乙酯萃取等步骤得到金银花提取物中绿原酸的重量百分含量25％以上。

刘会臣于2008年在公开号CN101579392A，名称为“一种金银花叶有效部位药物组合物及其制备方法”中采用水提醇沉、大孔树脂吸附、洗脱、浓缩至干等步骤分别得到金银花叶有机酸提取物和总黄酮提取物。该方法醇沉淀会大量包裹有机酸和黄酮物质。

赵铁华等于2008年在公开号CN101269107A，名称为“一种金银花叶药用提取物及其提取方法”中采用水提、大孔树脂吸附、洗脱、干燥等步骤得到总有机酸含量50-60％的金银花叶药用提取物。

李雄辉等于2009年在公开号CN101602668A，名称为“一种绿原酸提取的方法”中对原料金银花(或杜仲叶、杜仲皮)采用大孔树脂富集、乙酸乙酯萃取、混合溶剂分相法相结合得到纯度较高的绿原酸产品。

张彤等于2009年在公开号CN101837039A，名称为“一种不含绿原酸的金银花提取物及制备方法”中采用醇浸泡、大孔树脂吸附、洗脱等步骤去除金银花中绿原酸，得到木犀草苷含量达40.0％以上。

罗亚东等于2010年在公开号CN102001947A，名称为“一种金银花绿原酸的制备方法”中以金银花及其枝叶为原料，采用三相萃取方法，选择性地直接富集和分离纯化得到绿原酸初产品，后经过脱色、结晶和干燥得到质量分数为95％绿原酸产品。

赵素娟等于2011年在公开号CN102166249A，名称为“从金银花叶中提取活性成分的方法”中采用超临界CO2萃取、超声波强化浸提、大孔树脂吸附、有机溶剂萃取等步骤提取金银花叶片中活性成分，有机物酸可达到50％以上。

赵勇彪等于2011年在公开号CN102285885A，名称为“从金银花中快速高效提取绿原酸的方法”中采用取液压滤、吸附洗脱、纳滤浓缩等步骤有效提高绿原酸提取效率和纯度。

李锦宇等于2011年在公开号CN102327312A，名称为“一种从金银花叶茎藤中提取有效成份的方法”中采用热水超声提取，经减压浓缩、水复溶、乙醇沉淀、淋洗、浓缩、真空干燥工序得粗多糖；采用乙醇超声提取，用石油醚脱色，乙酸乙酯萃取，大孔树脂吸附，浓缩和干燥得绿原酸粗品，再经乙酸乙酯萃取，分相剂分相、低温放置、真空干燥工序得绿原酸产品；采用乙酸乙酯萃取得到粗黄酮，再经浓缩、上柱吸附、乙醇洗脱、浓缩、干燥工序得黄酮产品。该法工艺复杂，引入大量有机溶剂脱色萃取，不利于商业化生产。

目前，从金银花及叶中提取分离绿原酸和黄酮类化合物尚未形成大规模商业化的生产。研究设计出一种能够简单的大量提取分离金银花叶中绿原酸和黄酮类化合物的工艺，对开发金银花新的药用部位，最大限度地合理开发利用金银花资源，对满足市场需求，提高金银花的药用价值，促进金银花深加工产业的发展，都具有显著的经济效益和社会效益。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从金银花叶中同时提取和分离绿原酸与木犀草苷的方法，该方法工艺简单易行，提取效果能满足生产需要，是应用于工业大生产最经济、最环保和安全的方案，极大限度地利用金银花资源，提高金银花的药用价值，促进金银花深加工产业的发展。

本发明提供了一种从金银花叶中同时提取和分离绿原酸与木犀草苷的方法，其特征在于：

(1)乙醇浸渍步骤：取金银花叶为原料，切段或粉碎，加入一定浓度乙醇水溶液浸渍5～24小时；

(2)微波萃取步骤：步骤(1)所得料液，加一定量蒸馏水，在一定提取功率下萃提一定时间，过滤；

(3)膜分离步骤：步骤(2)所得滤液，用超滤膜进行膜分离；

(4)大孔树脂分离步骤：步骤(3)所得溶液，上大孔吸附树脂柱吸附，用不同浓度乙醇水溶液洗脱，分别得到含绿原酸的洗脱液I和含黄酮类化合物的洗脱液II；

(5)减压浓缩步骤：将步骤(4)所得的洗脱液I和II分别在一定温度和真空下进行减压浓缩，得到含绿原酸的浸膏I和含黄酮类化合物的浸膏II。

(6)真空干燥步骤：将步骤(5)所得浸膏I和II在一定温度和真空度的条件下烘一定的时间进行真空干燥，分别得到一定纯度的绿原酸和木犀草苷。

所述浸渍步骤中，所加乙醇水溶液浓度为50～90％(V/V)，体积为所加金银花叶质量的1.5～3倍。

所述微波萃取步骤中，所加蒸馏水比例为1∶10～1∶20，功率为240～440W，萃提时间为10～20min。

所述大孔树脂分离步骤中，所述大孔树脂的型号为：D101，NKA-9，LS-303，XDA-5中的一种；所述经大孔树脂吸附分离，其过程为：将得到的浓缩液调节pH值2～7，上样到大孔树脂后，用5～30％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时1～8柱体积，收集为洗脱液I，再用30～70％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时0.5～7柱体积，收集为洗脱液II。

所述减压浓缩步骤中，所述温度为40～85℃，真空度为0.05～0.09MPa。

所述真空干燥步骤中，所述温度为50～85℃，真空度为93.3～98.6KPa，烘2～10h，分别得到纯度大于55％的绿原酸和木犀草苷。

本发明的优点在于：方法工艺简便、经济、环保、安全，可操作性强，解决了金银花非药用部分的综合利用问题，实现了对金银花资源合理科学的开发和综合利用。本发明包括乙醇浸渍、微波萃取、膜分离、大孔树脂吸附分离、减压浓缩和真空干燥等步骤，保证了运用本发明制备产品的质量，节省了生产成本，提高了生产效率。本发明以金银花叶为原料，实现了金银花叶中两类主要有效成分的提取分离及部分纯化，促进了金银花资源的综合利用和深加工开发，最终得到不同纯度的绿原酸和木犀草苷。本发明提供的工艺过程中所用的树脂和洗脱剂均可以重复使用，工艺成本很低，操作方便，适合工业化生产。

具体实施方式

通过下述实施例进一步对发明进行说明。

实施例1

取金银花叶100g，粉碎，加入65％乙醇水溶液160ml浸润，静置过夜，按料液比1∶10加水，在提取功率300W条件下处理10min，过滤，然后滤液用超滤膜进行膜分离处理后，将滤液调节pH为3后上样到XDA-5大孔树脂，用30％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时4柱体积；再用60％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时1柱体积；分别收集洗脱液，在60℃、0.09MPa下减压浓缩至膏状，在60℃，98KPa下真空干燥，分别得到纯度为67％的绿原酸1.46g和木犀草苷3.15g。

实施例2

取金银花叶100g，粉碎，加入75％乙醇水溶液200ml浸润，静置5h，按料液比1∶15加水，在提取功率440W条件下处理20min，过滤，然后滤液用超滤膜进行膜分离处理后，将滤液调节pH为3后上样到NKA-9大孔树脂，用10％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时2柱体积；再用50％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时1柱体积；分别收集洗脱液，在60℃、0.09MPa下减压浓缩至膏状，在60℃，98KPa下真空干燥，分别得到纯度为78％的绿原酸1.53g和木犀草苷3.21g。

实施例3

取金银花叶100g，粉碎，加入85％乙醇水溶液240ml浸润，静置12h，按料液比1∶20加水，在提取功率350W条件下处理15min，过滤，然后滤液用超滤膜进行膜分离处理后，将滤液调节pH为5后上样到LS-303大了树脂，用10％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时3柱体积；再用55％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时1柱体积；分别收集洗脱液，在65℃、0.08MPa下减压浓缩至膏状，在65℃，98KPa下真空干燥，分别得到纯度为65％的绿原酸1.38g和总黄酮2.98g。

Claims (6)

1.一种从金银花叶中同步制备绿原酸和木犀草苷的方法，其特征在于：

(1)乙醇浸渍步骤：取金银花叶为原料，切段或粉碎，加入一定浓度乙醇水溶液浸渍5～24小时；

(2)微波萃取步骤：步骤(1)所得料液，加一定量蒸馏水，在一定提取功率下萃提一定时间，过滤；

(3)膜分离步骤：步骤(2)所得滤液，用超滤膜进行膜分离；

(4)大孔树脂分离步骤：步骤(3)所得溶液，上大孔吸附树脂柱吸附，用不同浓度乙醇水溶液洗脱，分别得到含绿原酸的洗脱液I和含黄酮类化合物的洗脱液II；

(5)减压浓缩步骤：将步骤(4)所得的洗脱液I和II分别在一定温度和真空下进行减压浓缩，得到含绿原酸的浸膏I和含黄酮类化合物的浸膏II。

(6)真空干燥步骤：将步骤(5)所得浸膏I和II在一定温度和真空度的条件下烘一定的时间进行真空干燥，分别得到一定纯度的绿原酸和木犀草苷。

2.按照权利要求1所述一种从金银花叶中同步制备绿原酸和木犀草苷的方法，其特征在于：所述浸渍步骤中，所加乙醇水溶液浓度为50～90％(V/V)，体积为所加金银花叶质量的1.5～3倍。

3.按照权利要求1所述一种从金银花叶中同步制备绿原酸和木犀草苷的方法，其特征在于：所述微波萃取步骤中，所加蒸馏水比例为1∶10～1∶20，功率为240～440W，萃提时间为10～20min。

4.按照权利要求1所述一种从金银花叶中同步制备绿原酸和木犀草苷的方法，其特征在于：所述大孔树脂分离步骤中，所述大孔树脂的型号为：D101，NKA-9，LS-303，XDA-5中的一种；所述经大孔树脂吸附分离，其过程为：将得到的浓缩液调节pH值2～7，上样到大孔树脂后，用5～30％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时1～8柱体积，收集为洗脱液I，再用30～70％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时0.5～7柱体积，收集为洗脱液II。

5.按照权利要求1所述一种从金银花叶中同步制备绿原酸和木犀草苷的方法，其特征在于：所述减压浓缩步骤中，所述温度为40～85℃，真空度为0.05～0.09MPa。

6.按照权利要求1所述一种从金银花叶中同步制备绿原酸和木犀草苷的方法，其特征在于：所述真空干燥步骤中，所述温度为50～85℃，真空度为93.3～98.6KPa，烘2～10h，分别得到纯度大于55％的绿原酸和木犀草苷。