CN105541626B - 一种从金银花露残液中提取和分离绿原酸与木犀草苷的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从金银花露残液中提取和分离绿原酸与木犀草苷的方法，属于医药化工技术领域，解决了金银花露生产企业目前只提取金银花中的一种或一类有效成分而废弃其他成分所造成的资源浪费问题。本发明包括膜分离、大孔树脂吸附、减压浓缩和真空干燥等步骤。本发明以金银花露生产残液为原料，利用大孔树脂吸附分离得到纯度大于55％的绿原酸和木犀草苷，实现了对金银花中有效成分的综合开发利用。本发明提供的工艺简便、经济、环保、安全，该工艺过程中所用的树脂和洗脱剂均可以重复使用，工艺成本低，适合工业化生产。

Description

一种从金银花露残液中提取和分离绿原酸与木犀草苷的方法

技术领域

本发明属于医药化工技术领域，涉及生物活性成分的提取分离工艺，特别提供了一种利用大孔树脂同时提取和分离金银花露生产残液中绿原酸与木犀草苷的方法。

背景技术

金银花(Flos lonicerae)为忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬属(Lonicera)植物忍冬(Lonicera japonica thunb)及同属多种植物的干燥花蕾，是一种“药食同源”的绿色天然产物，为中医常用药，具有清热解毒、凉风散热、抗病毒、保肝利胆的功能。

金银花中主要含挥发油类、绿原酸类、黄酮类、三萜皂苷类、环烯醚萜类及无机元素。其中黄酮类化合物包括木犀草素-3-O-α-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-半乳糖苷、槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷、金丝桃苷、忍冬苷、5-羟基-3',4',7-三甲氧基黄酮和紫堇黄酮等。早期研究认为绿原酸是金银花的主要活性成分之一，其含量被作为评价金银花药材品质优劣的指标。随着研究的深入，发现黄酮类化合物也是金银花有效成分之一，其含量也应成为金银花质量的评价指标。

绿原酸被认为是众多药材和中成药抗菌解毒、消炎利胆的主要有效成分，通常被作为定性甚至定量的指标。据报道，绿原酸具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等主要生物活性，是保健食品、药品、化妆品等工业的重要原料，20％绿原酸含量金银花提取物价格连续几年都在每吨15万元左右。金银花黄酮与抗菌活性有关，不仅能止咳祛痰、抗炎、抗菌、抗病毒，还具有优良的抗氧化、增强机体免疫力、降血糖血脂、自由基清除功能以及调节心血管系统的作用，具有广阔的应用前景。

目前，分别针对金银花中绿原酸和黄酮类化合物的提取分离研究很多。关于如何从金银花露生产残液中同时提取主要成分绿原酸和黄酮化合物的报道几乎没有，这在很大程度上制约了金银花综合利用和深加工产业的进一步发展。

刘磊等人(中国现代中药,2008,10(5):24-25)采用水提醇沉和大孔树脂纯化金银花中的绿原酸，绿原酸的含量能达20％以上。

范远景等人(安徽农业科学,2010,38(24):13052-13053,13057)利用大孔树脂D101纯化金银花绿原酸，纯度达到58.3％。

王雪梅等人(重庆理工大学学报(自然科学),2011,35(3):47-50)通过正交试验确定了水提法提取金银花绿原酸的最佳条件，绿原酸提取率达90％。

丁利君等人(食品科学,2002,23(2):62-66)证实超声波法提取金银花黄酮效果最好，60倍40％乙醇浸泡20h，超声提取45min，黄酮浸出量16.91％。

李荣等人(安徽医科大学学报,2006,41(4):410-412)通过正交设计研究表明金银花总黄酮最佳提取工艺为12倍90％乙醇提取3次，每次1h，总黄酮得率12.26％。

徐清萍等人(食品工程,2008,4:35-37)采用常温乙醇浸提法提取金银花黄酮，生药总黄酮提取率达到13.88％，利用大孔树脂分离纯化得到总黄酮含量最高为70g/100g。

刘泽峰(化学工程与装备,2009,8:23-25)采用响应面法表明金银花黄酮提取工艺的最佳条件为：74％乙醇，提取2h，液料比14.6(mL/g)，提取3次，黄酮含量9.32％。

陈福明等于2005年在公开号CN 1746149A，名称为“一种由金银花粗提物制备高纯度绿原酸的方法”中以金银花粗提物为原料，采用醇沉、逆流萃取、浓缩、柱析、结晶干燥得到绿原酸含量50～92％的产品。

陈旭良于2005年在公开号CN 1687009A，名称为“一种高效提取金银花有效成分的新方法”中采用乙醇和微波作用巧妙结合提高金银花有效成分收率。

张现涛等于2005年在公开号CN 1730015A，名称为“金银花提取物及其制备方法和应用”中采用水提、大孔树脂吸附、洗脱、乙酸乙酯萃取等步骤得到金银花提取物中绿原酸的重量百分含量25％以上。

李雄辉等于2009年在公开号CN 101602668A，名称为“一种绿原酸提取的方法”中将大孔树脂富集、乙酸乙酯萃取、混合溶剂分相法相结合得到纯度较高的绿原酸产品。

张彤等于2009年在公开号CN 101837039A，名称为“一种不含绿原酸的金银花提取物及制备方法”中采用醇浸泡、大孔树脂吸附、洗脱等步骤去除金银花中绿原酸，得到木犀草苷含量达40.0％以上。

张彤等于2009年在公开号CN 101838200A，名称为“一种从金银花中提取分离绿原酸的方法”中通过醇提、打孔树脂富集、萃取和重结晶得到纯度98％以上的绿原酸产品。

罗亚东等于2010年在公开号CN 102001947A，名称为“一种金银花绿原酸的制备方法”中以金银花及其枝叶为原料，采用三相萃取方法，选择性地直接富集和分离纯化得到绿原酸初产品，后经过脱色、结晶和干燥得到质量分数为95％绿原酸产品。

赵勇彪等于2011年在公开号CN 102285885A，名称为“从金银花中快速高效提取绿原酸的方法”中采用取液压滤、吸附洗脱、纳滤浓缩等步骤有效提高绿原酸提取效率和纯度。

这些研究均只限于从金银花中提取绿原酸或者黄酮化合物，没有对从金银花资源进行合理科学的综合开发和利用；这些技术或采用大量有机溶剂，或采用萃取等技术，也使得生产工艺更为复杂，生产成本高，不利于产业化。

现阶段，人们开始关注金银花资源的综合利用和深加工开发高附加值产品，但仍存在颇多不足之处。

张树军等于2010年在公开号CN 101985421A，名称为“一种从金银花中同时制备绿原酸和木犀草苷的方法”中通过D101型大孔树脂富集、硅胶柱、聚酰胺柱分离纯化和重结晶得到纯度大于95％的绿原酸和木犀草苷；该方法工艺复杂，操作繁琐，工业化成本高。

杨俊等于2010年在公开号CN 101941908A，名称为“一种从金银花露加工残液中制备及半合成绿原酸的方法”中采用大孔树脂分离、酸水解、离子交换柱分离、半合成和重结晶等步骤得到纯度大于99％的绿原酸，充分利用了咖啡酰奎尼酸类物质，但在金银花有效成分的充分利用方面还不足，同时操作繁琐，生产成本高。

李锦宇等于2011年在公开号CN 102327312A，名称为“一种从金银花叶茎藤中提取有效成份的方法”中采用热水超声提取，经减压浓缩、水复溶、乙醇沉淀、淋洗、浓缩、真空干燥工序得粗多糖；采用乙醇超声提取，用石油醚脱色，乙酸乙酯萃取，大孔树脂吸附，浓缩和干燥得绿原酸粗品，再经乙酸乙酯萃取，分相剂分相、低温放置、真空干燥工序得绿原酸产品；采用乙酸乙酯萃取得到粗黄酮，再经浓缩、上柱吸附、乙醇洗脱、浓缩、干燥工序得黄酮产品。该法工艺复杂，引入大量有机溶剂脱色萃取，不利于商业化生产。

金银花露属其他剂型药品，是暑湿类非医保非处方药品，可以清热，消暑，解毒，多用于缓解暑温口渴，小儿痱毒，热毒疮疖等症状。金银花露的生产采用水蒸汽蒸馏法收集馏分而得到，而蒸馏剩下的残液目前或丢弃，或廉价售出，残液中含量较为丰富的绿原酸和黄酮类化合物等生物活性物质未能得到充分的开发和利用，造成了资源浪费。

所以，研究设计出一种能够简单的大量提取分离金银花露生产残液中绿原酸和黄酮的工艺十分重要，可以有效的利用植物资源，提高金银花的药用价值，促进金银花的综合利用和深加工产业的发展，具有显著的经济效益和社会效益。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从金银花露残液中提取和分离绿原酸与木犀草苷的方法，该方法工艺简单易行，提取效果能满足生产需要，是应用于工业大生产最经济、最环保和安全的方案，极大限度地提高了金银花中有效成分的利用率，防止企业只提取金银花中的一种或一类有效成分而废弃其他成分造成资源浪费。

本发明提供了一种从金银花露残液中提取和分离绿原酸与木犀草苷的方法，其特征在于：

(1)膜分离步骤：以金银花露生产残液为原料，过滤，加入蒸馏水稀释，然后用超滤膜进行处理。

(2)大孔树脂分离步骤：将步骤(1)得到的沉淀液，经大孔树脂吸附进行分离纯化，分别得到含绿原酸的洗脱液I和含黄酮类化合物的洗脱液II。

(3)减压浓缩步骤：将步骤(2)所得的洗脱液I和II分别在一定温度和真空下进行减压浓缩，得到含绿原酸的浸膏I和含黄酮类化合物的浸膏II。

(4)真空干燥步骤：将步骤(3)所得浸膏I和II在一定温度和真空度的条件下烘一定的时间进行真空干燥，分别得到一定纯度的绿原酸和木犀草苷。

所述膜分离步骤中，所加入蒸馏水比例为1:1～1:5。

所述大孔树脂分离步骤中，所述大孔树脂的型号为：D101，NKA-9，LS-303，XDA-5中的一种；所述经大孔树脂吸附进行分离纯化，其过程为：将得到的沉淀液调节pH值2～6，上样到大孔树脂后，用5～30％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时1～8柱体积，收集为洗脱液I，再用30～70％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时0.5～7柱体积，收集为洗脱液II。

所述减压浓缩步骤中，所述温度为40～85℃，真空度为0.05～0.09MPa。

所述真空干燥步骤中，所述温度为50～85℃，真空度为93.3～98.6KPa，烘2～10小时，分别得到纯度大于55％的绿原酸和木犀草苷。

本发明的优点在于所提供的构想合理、方法工艺简便、经济、环保、安全，解决了金银花露生产企业目前只提取金银花中的一种或一类有效成分而废弃其他成分所造成的资源浪费问题，实现了对金银花中有效成分的综合开发利用。本发明包括离心分离步骤、大孔树脂分离步骤、减压浓缩步骤、真空干燥步骤，保证了运用本发明制备的产成品的质量，节省了生产成本，提高了生产效率。本发明以金银花露生产残液为原料，实现了金银花中两类主要有效成分的提取分离及部分纯化，促进了金银花资源的综合利用和深加工开发，最终得到纯度大于55％的绿原酸和木犀草苷类化合物。本发明提供的工艺过程中所用的树脂和洗脱剂均可以重复使用，工艺成本很低，操作方便，适合工业化生产，能充分提高金银花原料的利用率。

具体实施方式

实施例1

取金银花露生产残液100ml，过滤，滤液中加入蒸馏水100ml，经过超滤膜过滤处理后得到滤液约200ml。将滤液调节pH为3后上样到XDA-5大孔树脂，用30％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时4柱体积；再用60％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时1柱体积；分别收集洗脱液，在60℃、0.09MPa下减压浓缩至膏状，在60℃，98KPa下真空干燥，分别得到纯度为68％的绿原酸1.86g和木犀草苷2.85g。

实施例2

取金银花露生产残液100ml，过滤，滤液中加入蒸馏水200ml，经过超滤膜过滤处理后得到滤液约300ml。将滤液调节pH为5后上样到NKA-9大孔树脂，用10％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时2柱体积；再用50％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时1柱体积；分别收集洗脱液，在65℃、0.09MPa下减压浓缩至膏状，在65℃，98KPa下真空干燥，分别得到纯度为73％的绿原酸2.24g和木犀草苷3.56g。

实施例3

取金银花露生产残液100ml，过滤，滤液中加入蒸馏水300ml，经过超滤膜过滤处理后得到滤液约400ml。将滤液调节pH为3后上样到LS-303大孔树脂，用10％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时3柱体积；再用55％乙醇水溶液(V/V)洗脱，流速为每小时1柱体积；分别收集洗脱液，在65℃、0.08MPa下减压浓缩至膏状，在65℃，98KPa下真空干燥，分别得到纯度为67％的绿原酸1.78g和木犀草苷2.93g。

Claims (1)

1.一种从金银花露残液中提取和分离绿原酸与木犀草苷的方法，其特征在于：

(1)膜分离步骤：以金银花露生产残液为原料，过滤，加入蒸馏水稀释，然后用超滤膜进行处理；

(2)大孔树脂分离步骤：将步骤(1)得到的滤液，经大孔树脂吸附进行分离纯化，分别得到洗脱液I和II；

(3)减压浓缩步骤：将步骤(2)所得的洗脱液I和II分别在一定温度和真空下进行减压浓缩，得到含绿原酸的浸膏I和含黄酮类化合物的浸膏II；

(4)真空干燥步骤：将步骤(3)所得浸膏I和II在一定温度和真空度的条件下烘一定的时间进行真空干燥，分别得到一定纯度的绿原酸和木犀草苷；

所述膜分离步骤中，金银花露生产残液与加入蒸馏水的比例为1∶1～1∶5；

所述大孔树脂分离步骤中，所述大孔树脂的型号为：NKA-9，LS-303，XDA-5中的一种；所述经大孔树脂吸附进行分离纯化，其过程为：将得到的滤液调节pH值2～6，上样到大孔树脂后，用体积分数为5～30％的乙醇水溶液洗脱，流速为每小时1～8柱体积，收集为洗脱液I，再用体积分数为30～70％的乙醇水溶液洗脱，流速为每小时0.5～7柱体积，收集为洗脱液II；

所述减压浓缩步骤中，所述温度为40～85℃，真空度为0.05～0.09MPa；

所述真空干燥步骤中，所述温度为50～85℃，真空度为93.3～98.6KPa，烘2～10小时，分别得到纯度大于55％的绿原酸和木犀草苷。