CN105085224B - 一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，包括下述步骤:浸泡处理、原料处理、酶解、去油、碱提、柱层析、干燥。本发明先采用酶提取植物油脂，利用非油成分对油和水的亲和力差异及油水比重不同而将油和非油成分分离，增加了产品收率和提高了提取率，本发明得到的金丝桃素，含量在0.5％(UV检测)以上，灰分7％以下。

Description

一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域的提取方法，具体说是一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法。

背景技术

贯叶连翘(Hypericum perforatum L)又名贯叶金丝桃、圣约翰草(St.John'swont)，是藤黄科金丝桃属植物，广泛分布于欧洲、亚洲、非洲北部、澳洲、南北美洲，是为人类较早认识和利用的草药之一，在我国河南、河北、山东、陕西、甘肃、四川、新疆等地均有分布。贯叶连翘隶属于藤黄科、金丝桃属。多年生草本，高20-60厘米，全体无毛。茎呈圆柱形，长l0-100cm，多分枝，茎和分枝两侧各具一条纵棱，小枝细瘦，对生于叶腋。单叶对生，无柄抱茎，叶片披针形或长椭圆形，长1-2cm，宽0.3-0.7cm，散布透明或黑色的腺点，黑色腺点大多分布于叶片边缘或近顶端。聚伞花序顶生，花黄色，花萼、花瓣各5片，长圆形或披针形，边缘有黑色腺点；雄蕊多数，合生为3束，花柱3。气微，味微苦涩。花期6-7月，果期8-9月。性辛、寒。

贯叶连翘作为传统中草药，全草含金丝桃素，以花瓣的含量最高，具有清热解毒、抗菌消炎、促进伤口愈合等功效。随着现代药理活性研究的深入，其在抗病毒、抗抑郁、抗肿瘤等方面的作用越来越受到人类关注。贯叶连翘已被德国、美国等国家收录于药典。

金丝桃素(Hypericin)是贯叶连翘中最具有生物活性的物质，具有收敛、抗菌、止血、通经活络及抗病毒与抗肿瘤、抗抑郁和光活动性等作用。金丝桃素由贯叶连翘的全草提取而得，主要成份为贯叶金丝桃提取物、金丝桃素，气清香，味苦，易溶于水。具有抗抑郁症、抗病毒的作用。也可作为兽药，用于鸡群防治禽流感。

现有的运用到生产中的工艺是用甲醇作为溶剂，氢氧化钠平衡酸碱度，此工艺生产出的产品收率低，金丝桃素含量在0.28-0.33％，且灰分严重超标。现在随着市场的扩大和竞争，0.3％的金丝桃素已经不能满足国际客户的需要，欧美客户需要0.4％及0.4％以上的金丝桃素，灰分要求在8％以下，而传统的工艺无法直接生产出0.4％含量的金丝桃素。

发明内容

本发明的目的是提供一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，具有工艺简单，适合生产，生产成本低等优点。

本发明通过以下技术方案实现，一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，具体包括如下步骤：

1)浸泡处理：将贯叶连翘装入编织袋，扎好口，放在水池里，水池加满水，并在水池上面压上重物，浸泡；

2)原料处理：将步骤1)得到的贯叶连翘粉碎，加入相当于原料2-3倍重量的纯净水，加热至50-60℃维持5-10min，得到膏状浆液；

3)酶解：将步骤2)得到的膏状浆液，调pH为4-5，加入膏状浆液0.05-0.1％重量份的果胶-纤维素复合酶和0.001重量份的甘露醇进行酶解40-60min，得到酶解液；

4)去油：将步骤3)得到的酶解液，加入2-3倍重量的纯净水，加热至60-70℃浸提60-120min，得上层浮油液与下层液、渣混合物，分离；

5)碱提：向步骤4)得到的下层液、渣混合物加入碱液，进行提取；

6)柱层析：合并步骤5)得到提取液，加酸调pH至3-4，离心，得上清液，浓缩，用大孔吸附树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为75-80％(v/v)的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；

7)干燥：将洗脱液浓缩，得到浸膏，再通过干燥得到金丝桃素。

本发明步骤1)所述的浸泡，时间优选15-24h。

步骤3)所述的果胶-纤维素复合酶，优选活性是1-3万活性单位/克的固态果胶-纤维复合酶。

步骤5)所述的碱提，优选加入0.1M的NaOH溶液，加入量为步骤4)得到的下层液、渣混合物体积的3-5倍，加热提取2次，温度80-100℃，每次30-60min。

步骤6)所述的离心，优选转速为3500r/min，时间10min，所述的大孔吸附树脂型号优选D101型、HPD100型。

与现有技术相比，本发明的优点：

1、贯叶连翘的植物细胞内含有油脂，主要由成分为甘油三酯的化合物组成的混合物，这些油脂以油粒和油体原生质体形式、呈不连续颗粒状、与颗粒蛋白体一起无规则地分散在细胞内等存在形式存在。现有的提取方法，都是直接对贯叶连翘等原料打碎或粉碎后通过水提/醇提、或者微波提取等方式直接提取，在提取的时候，细胞中的油脂会同时分离出，含有油脂的基团和金丝桃素(Hypericin)、伪金丝桃素(Pseudohypericin)、原金丝桃素(Protohypericin)、原金丝桃素(Protopseudohypericin)、环伪金丝桃素(Cyclopseudoyhypericin)、异金丝桃素(Isohypericin)、大黄素-蒽酮(Emodin-anthrone)、色素等成分混在一起，从而影响后续有效成分的分离，增加了工序的处理难度。本发明先采用酶提取植物油脂，利用非油成分对油和水的亲和力差异及油水比重不同而将油和非油成分分离，增加了产品收率和提高了提取率。

2、本发明采用贯叶连翘水池浸泡，贯叶连翘浸泡在水里，逐渐软化，水分自然进入到内部，利于植物油脂的分离，利于后续酶解、去油；同时，浸泡在水里，厌氧细菌大量繁殖，特别是夏天的时候，会变酸，pH值会降低，方便后面工序的调整pH。

3、本发明先采用果胶-纤维素复合酶去除细胞壁，释放植物细胞中的油脂，加入甘露醇，可以保持渗透压，利于油脂的释放，同时也可以破坏色素，得到的产品色泽比现有产品浅。

4、本发明得到的金丝桃素，含量在0.5％(UV检测)以上，灰分7％以下。

具体实施方式

下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。

实施例1：

一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，具体包括如下步骤：

1)浸泡处理：将贯叶连翘装入编织袋，扎好口，放在水池里，水池加满水，并在水池上面压上重物，浸泡24h；

2)原料处理：将步骤1)得到的贯叶连翘粉碎，加入相当于原料2倍重量的纯净水，加热至60℃维持5min，得到膏状浆液；

3)酶解：将步骤2)得到的膏状浆液，调pH为5，加入膏状浆液0.05％重量份的活性是3万活性单位/克的固态果胶-纤维复合酶和0.001重量份的甘露醇进行酶解40min，得到酶解液；

4)去油：将步骤3)得到的酶解液，加入2倍重量的纯净水，加热至60℃浸提120min，得上层浮油液与下层液、渣混合物，分离；

5)碱提：向步骤4)得到的下层液、渣混合物加入3倍体积0.1M的NaOH溶液，加热提取2次，温度100℃，每次60min；

6)柱层析：合并步骤5)得到提取液，加酸调pH至3，离心，3500r/min，10min，得上清液，浓缩，用D101型大孔吸附树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为75％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；

7)干燥：将洗脱液浓缩，得到浸膏，再通过干燥得到金丝桃素，经UV检测，含量0.52％(UV检测)，灰分6.5％。

实施例2：

一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，具体包括如下步骤：

1)浸泡处理：将贯叶连翘装入编织袋，扎好口，放在水池里，水池加满水，并在水池上面压上重物，浸泡18h；

2)原料处理：将步骤1)得到的贯叶连翘粉碎，加入相当于原料3倍重量的纯净水，加热至50℃维持8min，得到膏状浆液；

3)酶解：将步骤2)得到的膏状浆液，调pH为4.5，加入膏状浆液0.1％重量份的活性是2万活性单位/克的固态果胶-纤维复合酶和0.001重量份的甘露醇进行酶解50min，得到酶解液；

4)去油：将步骤3)得到的酶解液，加入3倍重量的纯净水，加热至65℃浸提90min，得上层浮油液与下层液、渣混合物，分离；

5)碱提：向步骤4)得到的下层液、渣混合物加入4倍体积0.1M的NaOH溶液，加热提取2次，温度90℃，每次30min；

6)柱层析：合并步骤5)得到提取液，加酸调pH至4，离心，3500r/min，10min，得上清液，浓缩，用HPD100型大孔吸附树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为80％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；

7)干燥：将洗脱液浓缩，得到浸膏，再通过干燥得到金丝桃素，经UV检测，含量0.55％(UV检测)，灰分6.7％。

实施例3：

1)浸泡处理：将贯叶连翘装入编织袋，扎好口，放在水池里，水池加满水，并在水池上面压上重物，浸泡15h；

2)原料处理：将步骤1)得到的贯叶连翘粉碎，加入相当于原料2倍重量的纯净水，加热至55℃维持10min，得到膏状浆液；

3)酶解：将步骤2)得到的膏状浆液，调pH为4，加入膏状浆液0.05％重量份的活性是1万活性单位/克的固态果胶-纤维复合酶和0.001重量份的甘露醇进行酶解60min，得到酶解液；

4)去油：将步骤3)得到的酶解液，加入2倍重量的纯净水，加热至70℃浸提60min，得上层浮油液与下层液、渣混合物，分离；

5)碱提：向步骤4)得到的下层液、渣混合物加入5倍体积0.1M的NaOH溶液，加热提取2次，温度80℃，每次45min；

6)柱层析：合并步骤5)得到提取液，加酸调pH至3，离心，3500r/min，10min，得上清液，浓缩，用DHPD100型大孔吸附树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为75％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；

7)干燥：将洗脱液浓缩，得到浸膏，再通过干燥得到金丝桃素，经UV检测，含量0.53％(UV检测)，灰分6.8％。

Claims (5)

1.一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)浸泡处理：将贯叶连翘装入编织袋，扎好口，放在水池里，水池加满水，并在水池上面压上重物，浸泡；

2)原料处理：将步骤1)得到的贯叶连翘粉碎，加入相当于原料2-3倍重量的纯净水，加热至50-60℃维持5-10min，得到膏状浆液；

3)酶解：将步骤2)得到的膏状浆液，调pH为4-5，加入膏状浆液0.05-0.1％重量份的果胶-纤维素复合酶和0.001重量份的甘露醇进行酶解40-60min，得到酶解液；

4)去油：将步骤3)得到的酶解液，加入2-3倍重量的纯净水，加热至60-70℃浸提60-120min，得上层浮油液与下层液、渣混合物，分离；

5)碱提：向步骤4)得到的下层液、渣混合物加入碱液，进行提取；

6)柱层析：合并步骤5)得到提取液，加酸调pH至3-4，离心，得上清液，浓缩，用大孔吸附树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为75-80％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；

7)干燥：将洗脱液浓缩，得到浸膏，再通过干燥得到金丝桃素。

2.根据权利要求1所述的一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，其特征在于：步骤1)所述的浸泡，时间为15-24h。

3.根据权利要求1所述的一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，其特征在于：步骤3)所述的果胶-纤维素复合酶，为活性是1-3万活性单位/克的固态果胶-纤维复合酶。

4.根据权利要求1所述的一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，其特征在于：步骤5)所述的碱提，是指加入0.1M的NaOH溶液，加入量为步骤4)得到的下层液、渣混合物体积的3-5倍，加热提取2次，温度80-100℃，每次30-60min。

5.根据权利要求1所述的一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，其特征在于：步骤6)所述的大孔吸附树脂型号为D101型、HPD100型。