CN104418742A - 一种从金银花提取物中制备高纯度绿原酸的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种从金银花提取物中制备高纯度绿原酸的方法，具体涉及膜分离和膜浓缩过程，大孔树脂吸附洗脱过程和聚酰胺精制过程。本发明以金银花提取物为原料，用去离子水溶解，经膜分离和膜浓缩后过大孔树脂柱，流加洗杂液洗杂，用洗脱液洗脱至高效液相色谱（HPLC）检测无绿原酸流出，并收集洗脱液，洗脱液经减压浓缩、聚酰胺柱吸附分离洗脱精制后，喷雾干燥，得绿原酸纯度为98%以上的高纯度绿原酸。该方法制备的绿原酸纯度极高，绿原酸损失少，操作简单，适合大规模生产。

Description

一种从金银花提取物中制备高纯度绿原酸的方法

技术领域

本发明涉及提取绿原酸的方法，具体涉及一种从金银花提取物中制备高纯度绿原酸的方法。

背景技术

以金银花为原料生产绿原酸是我国绿原酸的主要生产方式。目前，国内金银花中绿原酸的制备一般是先将绿原酸提取液醇沉或絮凝沉淀后，采用大孔树脂进行分离纯化。但是，在生成沉淀的过程中会伴有绿原酸的包夹，导致绿原酸的大量损失，产率低。另外，沉淀法除杂效果差，产品纯度低。中国专利02133448.X公开了“大孔树脂吸附提取高含量绿原酸的工艺方法”，以金银花为原料，提取浓缩后，加入乙醇进行醇沉，过滤，滤液浓缩，经一次大孔树脂吸附分离洗脱后，喷雾干燥得绿原酸纯度为40%的绿原酸产品。中国专利01144170.4公开了“金银花中绿原酸的提取纯化方法”，以金银花为原料，提取浓缩后，加入絮凝剂进行絮凝沉淀，过滤，滤液经大孔树脂吸附分离洗脱后，真空干燥得得率为22%，纯度为48%的绿原酸产品。

随着膜材料、制膜方法以及膜应用的不断发展，膜分离技术逐渐成为分离技术大家族中的重要成员。由于膜分离技术可以根据膜截留分子量大小选择性分离纯化化合物，具有分离精度高、易于操作和管理、在应用中对环境造成二次污染小的优点而逐渐成为国内学术研究的热点。中国专利99115374.X和中国专利200510020265.9中分别公开了将膜分离技术用于杜仲叶和金银花制备绿原酸的方法，制备了高纯度绿原酸产品。

聚酰胺柱层析技术是目前应用很广泛的分离纯化技术，对极性物质和非极性物质均能适用，尤其适用于分离黄酮类、醌类和酚类化合物。聚酰胺吸附剂可重复适用，对绿原酸及其结构类似物分离纯化效果较好。中国专利200410035758.5和中国专利200910264401.7分别公开了将聚酰胺柱层析技术应用于金银花和菊芋制备绿原酸的工艺研究中，制备了高纯度绿原酸产品。

虽然膜分离技术，大孔树脂分离纯化技术和聚酰胺柱层析技术均已用于绿原酸制备工艺的研究中，但三者的联用技术在制备高纯度绿原酸的研究中尚未见报导。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用膜分离、大孔树脂分离纯化和聚酰胺柱层析联用技术从金银花提取物中制备高纯度绿原酸的方法。

为实现上述目的本发明采用技术方案为：

一种从金银花提取物中制备高纯度绿原酸的方法：

1）膜分离和膜浓缩过程：将金银花提取物的水溶液先通过截留分子量为1000的中空纤维超滤膜进行膜分离，收集透过液，再用截留分子量200的纳滤膜将提取液浓缩至原体积的10%，收集浓缩液；

2）大孔树脂吸附洗脱过程：将步骤1）中得到的浓缩液以1-5BV/h的流速通过大孔树脂柱，动态吸附饱和后，用去离子水以1-10BV/h的流速淋洗上述大孔树脂柱至流出液无色，再用体积分数为20%-100%的乙醇以5-10BV/h的流速进行洗脱，收集乙醇洗脱液直至无绿原酸流出，最后将收集所得洗脱液减压浓缩至膏状；

3）聚酰胺精制过程：将步骤2）中浸膏用水溶解，其中料液按质量体积比为1:5（g/mL）的比例溶解，溶解后以1-5BV/h的流速通过聚酰胺柱，动态吸附饱和后，用3-8BV去离子水以1-10BV/h的流速淋洗上述聚酰胺柱，再用体积分数为20%-100%的乙醇水溶液以5-10BV/h的流速进行洗脱，收集乙醇洗脱液直至无绿原酸流出，喷雾干燥即得绿原酸纯度为98%以上的高纯度绿原酸。

所述步骤1）金银花提取物的水溶液为以金银花为原料经水提醇沉法提取所得的提取物中加入去离子水，室温下充分搅拌后，配制成，其中金银花提取物与去离子水的比例为1:10（W/V）。

所述步骤2）的大孔树脂为符合药用要求的极性大孔吸附树脂。

所述步骤2）的大孔树脂为ADS-7型、ADS-17型、NKA-2型、HPD500型或HPD600型大孔吸附树脂中的一种。

所述步骤3）中聚酰胺的粒径为30-100目。

所述步骤2）和步骤3）中洗脱收集绿原酸后的大孔树脂柱和聚酰胺柱均可经再生液再生后重复利用，进而达到连续操作的目的。

所述再生液为无水乙醇。

本发明有益效果在于：

1.本发明方法采用膜分离技术不但能解决常规初步分离纯化过程中醇沉或絮凝沉淀过程中绿原酸的损失量大，纯化效果差等缺陷，而且可以有效的除去蛋白质、多糖等大分子杂质，降低了后续处理的难度，适用于工业化生产。

2.本发明方法整个绿原酸制备过程均在室温下进行，减少了能源消耗的同时降低了绿原酸的分解，提高了绿原酸产品的纯度。

3.本发明方法采用聚酰胺柱层析技术，将绿原酸与其结构类似物等杂质充分分离，实现了绿原酸的高纯化制备。

4.本发明方法整个操作过程操作简单，洗脱剂和再生剂均可回收重复利用，节约溶剂，可用于大规模生产。

5.本发明首先采用膜分离技术进行预处理，不但可以减小后续处理的难度，而且可以保护树脂不受有害物质的损害，延长树脂的使用寿命，对工业化生产具有重要的意义

附图说明

图1为从金银花提取物中制备高纯度绿原酸的工艺流程图。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，但本发明不限于此。

本发明所述实施例中，金银花提取物是以金银花为原料，经干燥、粉碎后，加水浸提，过滤，滤液加入乙醇，低温冷藏，静置过夜，使杂质沉淀；过滤，滤液浓缩干燥后得到的。

本发明所述实施例中，绿原酸的纯度采用高效液相色谱法进行检测，所用色谱柱为Hypersil BDS C-18（4.6mm×250mm，5μm)，检测波长为327nm，流动相A为0.1%三氟乙酸水溶液，B为乙腈，流速为1mL/min，进样量为10μL，梯度洗脱程序如表1。

表1HPLC梯度洗脱程序

实施例1

100g金银花提取物用1000mL去离子水溶解，充分搅拌后，配制成金银花提取物水溶液，将上述水溶液先通过截留分子量为1000的中空纤维超滤膜进行膜分离，收集透过液，再将收集的透过液用截留分子量为200的纳滤膜浓缩至原体积的10%，收集浓缩液，将浓缩液以5BV/h的流速直接过ADS-7型大孔树脂柱，动态吸附饱和后，先用去离子水以2BV/h的流速淋洗上述大孔树脂柱至流出液无色，再用体积分数为80%的乙醇以10BV/h的流速进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至膏状，浸膏用水溶解，其中料液按质量体积比为1:5（g/mL）的比例溶解，溶解后以1BV/h的流速上聚酰胺柱，动态吸附饱和后，用3BV去离子水以2BV/h的流速淋洗上述聚酰胺柱，再用体积分数为80%的乙醇水溶液以8BV/h的流速进行洗脱，收集乙醇洗脱液直至HPLC检测无绿原酸流出，喷雾干燥，经HPLC检测，得9.80g纯度为98.9%的高纯度绿原酸。

实施例2

600g金银花提取物用6000mL去离子水溶解，充分搅拌后，配制成金银花提取物水溶液，将上述水溶液先通过截留分子量为1000的中空纤维超滤膜进行膜分离，收集透过液，再将收集的透过液用截留分子量为200的纳滤膜浓缩至原体积的10%，收集浓缩液，将浓缩液以5BV/h的流速直接过HPD500型大孔树脂柱，动态吸附饱和后，先用去离子水以3BV/h的流速淋洗上述大孔树脂柱至流出液无色，再用体积分数为70%的乙醇以8BV/h的流速进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至膏状，浸膏用水溶解，其中料液按质量体积比为1:5（g/mL）的比例溶解，溶解后以3BV/h的流速上聚酰胺柱，动态吸附饱和后，用4BV去离子水以4BV/h的流速淋洗上述聚酰胺柱，再用体积分数为70%的乙醇水溶液以8BV/h的流速进行洗脱，收集乙醇洗脱液直至HPLC检测无绿原酸流出，喷雾干燥，经HPLC检测，得65.72g纯度为98.4%的高纯度绿原酸。

实施例3

1000g金银花提取物用10000mL去离子水溶解，充分搅拌后，配制成金银花提取物水溶液，将上述水溶液先通过截留分子量为1000的中空纤维超滤膜进行膜分离，收集透过液，再将收集的透过液用截留分子量为200的纳滤膜浓缩至原体积的10%，收集浓缩液，将浓缩液直接过ADS-17型大孔树脂柱，动态吸附饱和后，先用去离子水以5BV/h的流速淋洗上述大孔树脂柱至流出液无色，再用体积分数为60%的乙醇以6BV/h的流速进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至膏状，浸膏用水溶解，其中料液按质量体积比为1:5（g/mL）的比例溶解，溶解后以5BV/h的流速上聚酰胺柱，动态吸附饱和后，用6BV去离子水以4BV/h的流速淋洗上述聚酰胺柱，再用体积分数为60%的乙醇水溶液以6BV/h的流速进行洗脱，收集乙醇洗脱液直至HPLC检测无绿原酸流出，喷雾干燥，经HPLC检测，得98.61g纯度为99.3%的高纯度绿原酸。

实施例4

2000g金银花提取物用20000mL去离子水溶解，充分搅拌后，配制成金银花提取物水溶液，将上述水溶液先通过截留分子量为1000的中空纤维超滤膜进行膜分离，收集透过液，再将收集的透过液用截留分子量为200的纳滤膜浓缩至原体积的10%，收集浓缩液，将浓缩液直接过HPD-600型大孔树脂柱，动态吸附饱和后，先用去离子水以8BV/h的流速淋洗上述大孔树脂柱至流出液无色，再用体积分数为40%的乙醇以5BV/h的流速进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至膏状，浸膏用水溶解，其中料液按质量体积比为1:5（g/mL）的比例溶解，溶解后以3BV/h的流速上聚酰胺柱，动态吸附饱和后，用5BV去离子水以8BV/h的流速淋洗上述聚酰胺柱，再用体积分数为40%的乙醇水溶液以7BV/h的流速进行洗脱，收集乙醇洗脱液直至HPLC检测无绿原酸流出，喷雾干燥，经HPLC检测，得197.2g纯度为99.2%的高纯度绿原酸。

实施例5

5000g金银花提取物用50000mL去离子水溶解，充分搅拌后，配制成金银花提取物水溶液，将上述水溶液先通过截留分子量为1000的中空纤维超滤膜进行膜分离，收集透过液，再将收集的透过液用截留分子量为200的纳滤膜浓缩至原体积的10%，收集浓缩液，将浓缩液直接过NKA-2型大孔树脂柱，动态吸附饱和后，先用去离子水以10BV/h的流速淋洗上述大孔树脂柱至流出液无色，再用体积分数为20%的乙醇以6BV/h的流速进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至膏状，浸膏用水溶解，其中料液按质量体积比为1:5（g/mL）的比例溶解，溶解后以4BV/h的流速上聚酰胺柱，动态吸附饱和后，用8BV去离子水以6BV/h的流速淋洗上述聚酰胺柱，再用体积分数为40%的乙醇水溶液以6BV/h的流速进行洗脱，收集乙醇洗脱液直至HPLC检测无绿原酸流出，喷雾干燥，经HPLC检测，得495.6g纯度为98.7%的高纯度绿原酸。

实施例6

如实施例1所述，所不同的是同时进行6组实验，并且将上一组实验的解吸液和再生液回收溶剂后作为下一组实验的洗脱剂和再生剂使用，研究洗脱剂和再生剂的重复利用性，所得绿原酸的洗脱率和再生剂用量结果如表2所示。

表2洗脱剂和再生剂的可重复利用性

Claims (7)

1.一种从金银花提取物中制备高纯度绿原酸的方法，其特征在于：

1）膜分离和膜浓缩过程：将金银花提取物的水溶液先通过截留分子量为1000的中空纤维超滤膜进行膜分离，收集透过液，再用截留分子量200的纳滤膜将提取液浓缩至原体积的10%，收集浓缩液；

2）大孔树脂吸附洗脱过程：将步骤1）中得到的浓缩液以1-5BV/h的流速通过大孔树脂柱，动态吸附饱和后，用去离子水以1-10BV/h的流速淋洗上述大孔树脂柱至流出液无色，再用体积分数为20%-100%的乙醇以5-10BV/h的流速进行洗脱，收集乙醇洗脱液直至无绿原酸流出，最后将收集所得洗脱液减压浓缩至膏状；

3）聚酰胺精制过程：将步骤2）中浸膏用水溶解后以1-5BV/h的流速通过聚酰胺柱，动态吸附饱和后，用3-8BV去离子水以1-10BV/h的流速淋洗上述聚酰胺柱，再用体积分数为20%-100%的乙醇水溶液以5-10BV/h的流速进行洗脱，收集乙醇洗脱液直至无绿原酸流出，喷雾干燥即得绿原酸纯度为98%以上的高纯度绿原酸。

2.按权利要求1所述的从金银花提取物中制备高纯度绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤1）金银花提取物的水溶液为以金银花为原料经水提醇沉法提取所得的提取物中加入去离子水，室温下充分搅拌后，配制成，其中金银花提取物与去离子水的比例为1:10（W/V）。

3.按权利要求1所述的从金银花提取物中制备高纯度绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤2）的大孔树脂为符合药用要求的极性大孔吸附树脂。

4.按权利要求3所述的从金银花提取物中制备高纯度绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤2）的大孔树脂为ADS-7型、ADS-17型、NKA-2型、HPD500型或HPD600型大孔吸附树脂中的一种。

5.按权利要求1所述的从金银花提取物中制备高纯度绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤3）中聚酰胺的粒径为30-100目。

6.按权利要求1所述的从金银花提取物中制备高纯度绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤2）和步骤3）中洗脱收集绿原酸后的大孔树脂柱和聚酰胺柱均可经再生液再生后重复利用，进而达到连续操作的目的。

7.按权利要求6所述的从金银花提取物中制备高纯度绿原酸的方法，其特征在于：所述再生液为无水乙醇。