CN103864867B

CN103864867B - 一种制取杜仲叶中桃叶珊瑚苷的方法

Info

Publication number: CN103864867B
Application number: CN201210539376.0A
Authority: CN
Inventors: 刘冬成; 任治军; 刘芸芳
Original assignee: HUBEI LAOLONGDONG DUZHONG DEVELOPMENT Co Ltd
Current assignee: HUBEI LAOLONGDONG DUZHONG DEVELOPMENT Co Ltd
Priority date: 2012-12-14
Filing date: 2012-12-14
Publication date: 2015-04-08
Anticipated expiration: 2032-12-14
Also published as: CN103864867A

Abstract

本发明公开了一种制取杜仲叶中桃叶珊瑚苷的方法，将杜仲叶粉碎、纤维素酶辅助中温水提取、常规过滤、超滤膜除杂、纳滤浓缩、大孔树脂的分离纯化、浓缩及干燥制得桃叶珊瑚苷粉；该方法采用纤维素酶辅助中温水提取杜仲叶中的桃叶珊瑚苷，提取率可达到95%，水提温度较低、提取时间缩短；采用超滤膜对提取液进行除杂、分离其他副产物，膜操作过程简单，膜通量能长时间稳定，易于清洗、使用寿命长和实现工业化；采用纳滤膜对除杂后的提取液进行浓缩，减轻了后续工艺的负荷，可延长树脂的使用寿命；纳滤滤液其COD值≤100，可以回用生产工序，基本无废水排放；采用大孔吸附树脂能有效纯化桃叶珊瑚苷，制得的粉末中桃叶珊瑚苷纯度大于62%，提取率大于2.8%。

Description

一种制取杜仲叶中桃叶珊瑚苷的方法

技术领域

本发明涉及制药行业中植物有效成分的提取分离方法，特别是涉及一种从杜仲叶中提取桃叶珊瑚苷的工艺方法。。

背景技术

桃叶珊瑚苷(aucubin，AU)的化学名为β-D-吡喃葡萄糖苷，为环烯醚萜苷类化合物，分子式为C15H2209，分子量346.331，CAS号为479—98—1，熔点181℃，易溶于水、乙醇和甲醇，几乎不溶于氯仿、乙醚和石油醚。该化合物主要存在于杜仲（Lucommia ulmoides Oliver）、山茱英科植物桃叶珊瑚（Aucubachinensis Benth）、车前科植物车（Plantago asiatica L）等植物中，是杜仲、车前草、地黄等中草药的有效成分之一，具有护肝解毒、抗炎、抗氧化、抗衰老、抗骨质疏松及营养神经元细胞等众多药理活性。桃叶珊瑚苷结构式如下。

杜仲叶为杜仲科杜仲属单种植物杜仲（Lucommia ulmoides Oliver）的叶子，是我国特有植物，资源丰富。杜仲叶含有多种有机物、氨基酸，以及杜仲有机酸、多糖、黄酮、三萜等天然有效活性成分。

目前桃叶珊瑚苷的提取分离工艺主要有冷浸提取法、回流提取法、超声波提取法、超临界CO₂萃取法等。分离纯化桃叶珊瑚苷常采用铅盐沉淀法、活性炭吸附法、薄层色谱分离法、大孔吸附树脂法、半制备高效液相色谱法等（李辉，文赤夫，李亚男，等。杜仲粕中桃叶珊瑚苷的分离和纯化。食品科学，2011，32（2））。中国专利（申请号200810031122.1）“一种从杜仲中提取环烯醚萜活性部位及单体的方法”，该种方法采用高效液相色谱仪器制备，仪器昂贵且制备规模受限。中国专利（申请号201010297478.7）“一种从杜仲果中提取桃叶珊瑚苷的工艺方法”，该发明使用的原料杜仲果产量低，季节性强，不利于长期持续生产。中国专利（申请号201110136082.9）“一种从杜仲籽粕中提取桃叶珊瑚苷的方法”，该发明使用的有机溶剂多，环境污染严重，且生产工艺复杂，操作繁琐。

发明内容

在为了克服上述现有技术中存在的问题及缺点，本发明提供一种制取杜仲叶中桃叶珊瑚苷的方法，该方法是在粉碎后的杜仲叶粉料中，采用添加纤维素酶和中温水提取杜仲叶中的桃叶珊瑚苷，再通过两级膜分离技术结合树脂吸附洗脱工艺对提取的桃叶珊瑚苷进行分离纯化，收集乙醇洗脱液减压浓缩、真空干燥后得产品桃叶珊瑚苷，有效解决了原来桃叶珊瑚苷生产中提取率低、废水量大和产品纯度低的问题。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:在粉碎后的杜仲叶粉料中，采用添加一定量纤维素酶和中温水提取杜仲叶中的桃叶珊瑚苷，通过两级膜分离技术结合树脂吸附洗脱工艺对提取的桃叶珊瑚苷进行分离纯化，收集乙醇洗脱液减压浓缩、真空干燥后得产品桃叶珊瑚苷粉末。

本发明制取杜仲叶中桃叶珊瑚苷的方法包括以下步骤。

1、原料叶的粉碎：干燥的杜仲叶，其含水量≤14%，用常规方法粉碎后过100目筛。

2、酶法辅助中温水提取：将粉碎的原料叶中加入一定量的水，调节pH为4.5，并恒温至50℃一60℃，加入适量的纤维素酶在下列条件下进行提取：纤维素酶添加量为底物浓度的0.2%，即每千克原料叶需消耗0.002千克的纤维素酶、杜仲叶:水的质量比=1:12、提取2次、每次60—80min。

3、过滤：合并两次提取液后，用常规过滤方法除去悬浮物等杂质。

4、超滤膜除杂:本发明采用过滤孔径为0.02—0.0.06um的超滤膜处理杜仲叶水提液，该膜能截留几乎全部的大分子蛋白质及多糖等杂质，而桃叶珊瑚苷分子量在400Da1左右可以完全透过，该膜的操作条件为:P=0.2—0.6Mpa，T=30—50℃，pH=4—5， Q=60—70L/min。

5、纳滤浓缩:本发明采用拦截分子量为200—400Da1的纳滤膜对一级膜滤液进行浓缩，并能部分脱盐。该级膜浓缩倍数可达15倍以上，无机盐离子去除率可达60％。该膜的操作条件为：P=1.0—1.5Mpa， T=30—60℃，pH=4—5， Q=20L/min。

6、大孔树脂的分离纯化:纳滤膜浓缩液通过大孔树脂进行吸附洗脱，先用1倍树脂柱体积的纯水洗去杂质，然后用2倍树脂柱体积的体积百分比浓度为60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液。

7、浓缩及干燥:将收集的乙醇洗脱液通过常规减压浓缩和真空干燥后可得到桃叶珊瑚苷粉末。

上述步骤2中杜仲叶桃叶珊瑚苷的提取率可达95 % 。

上述步骤4,5中两级膜浓缩均可将物料浓缩10倍以上，纳滤膜脱盐率可达60%，其滤液COD值可以降低到100以下。

上述步骤6中大孔树脂可以为ADS-4型树脂。

上述步骤7中的减压浓缩和真空干燥温度均不高于60℃。本发明有以下有益的效果。

1、酶法中温水提取杜仲叶中的桃叶珊瑚苷，纤维素酶的加入有助于打破叶细胞壁，释放细胞内的桃叶珊瑚苷，提取率可达到95%，水提温度较低、提取时间缩短，节约能耗。

2、采用超滤膜对提取液进行分离纯化，能有效分离其他副产物，膜操作过程简单，膜通量能长时间稳定，易于清洗、使用寿命长，易于实现工业化。

3、采用纳滤膜对除杂后的提取液进行浓缩，脱盐率可达60%，能减轻后续工艺的负荷，延长树脂的使用寿命及节约能耗，纳滤滤液COD值≤100，可以回用生产工序，基本无废水排放。

4、采用大孔吸附树脂能有效纯化桃叶珊瑚苷，本工艺所选用的树脂为弱极性大孔吸附树脂，其对桃叶珊瑚苷吸附量大、分离效果好，仅用少量溶媒集中洗脱并分段收集，就能制得较高纯度桃叶珊瑚苷。经过本工艺制得的粉末中桃叶珊瑚苷含量大于62%，提取率大于2.8%。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

图1是本发明的工艺流程路线示意图。

具体实施方式

例1、参见说明书附图1，取干燥的杜仲叶10Kg，粉碎后过100目筛，加120Kg水，调节温度55℃，恒温并调节pH值至4. 5，再加入20g纤维素酶，在此条件下提取60min，过滤，滤渣再按前述提取条件第二次提取，合并两次滤液，常规过滤，桃叶珊瑚苷提取率为96.0%；在操作条件为P=0.3Mpa，T=45℃， pH = 4.5，Q=70L/min滤液过0.03um超滤膜，提取液在该条件下浓缩了 12.6倍，该超滤膜平均通量为215. 8L/m²•h；在操作条件P = 1.5Mpa，T=50℃，pH=4. 5，Q=20L/min将超滤滤液再过200分子量纳滤膜，超滤滤液在该条件下浓缩了16. 8倍，无机盐离子去除率为63%，该纳滤膜平均通量为18.4 L/m²•h，纳滤滤液COD为93；将纳滤浓缩液通过ADS-4树脂纯化，先用1倍树脂柱体积纯水洗脱杂质，然后用2倍树脂柱体积的体积百分比浓度为60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩、真空干燥其减压浓缩（真空干温度均不高于60℃）后可得到桃叶珊瑚苷粉末，经HPLC检测桃叶珊瑚苷纯度为64.4%得率为2.88 %。

例2、参见说明书附图1，取干燥的杜仲叶10Kg，粉碎后过100目筛，加120Kg水，调节温度50℃，恒温并调节 pH值至4. 5，再加入20g纤维素酶，在此条件下提取80min，过滤，滤渣再按前述提取条件第二次提取，合并两次滤液，常规过滤，桃叶珊瑚苷提取率为95. 1%；在操作条件为P=0.3 Mpa，T=45℃，pH=4. 5，Q =70L/min滤液过0.02um超滤膜，提取液在该条件下浓缩了13.3倍，该超滤膜平均通量为225.3L/m²•h；在操作条件P = 1. 5Mpa，T=50℃，pH = 4.5，Q=20L/min将超滤滤液再过400分子量纳滤膜浓缩，超滤膜滤液在该条件下浓缩了15.5倍，无机盐离子去除率为60%，该纳滤膜平均通量为20.2L/m²•h，纳滤滤液COD为92；将纳滤浓缩液通过ADS-4树脂纯化，先用1倍树脂柱体积纯水洗脱杂质，然后用2倍树脂柱体积的体积百分比浓度为60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩、真空干燥(其减压浓缩和真空干温度均不高于60℃)后可得到桃叶珊瑚苷粉末，经HPLC检测桃叶珊瑚苷纯度为63.1%，得率为 3.01 %。

Claims

1.一种制取杜仲叶中桃叶珊瑚苷的方法，包括以杜仲叶为原料制取杜仲叶中的桃叶珊瑚苷，其特征在于：在粉碎的杜仲叶粉料中添加纤维素酶及中温水提取杜仲叶中的桃叶珊瑚苷，通过两级膜分离技术结合树脂吸附洗脱工艺对提取的桃叶珊瑚苷进行分离纯化，收集乙醇洗脱液减压浓缩、真空干燥得产品桃叶珊瑚苷粉末。

2.根据权利要求1所述的一种制取杜仲叶中桃叶珊瑚苷的方法，其特征在于：制取杜仲叶中桃叶珊瑚苷的方法包括以下步骤：

（1）、原料叶的粉碎：将含水量≤14%杜仲叶，用常规方法粉碎后过100目筛；

（2）、酶法辅助中温水提取：将粉碎的原料叶中加入一定量的水，调节pH为4.5，并恒温至50℃-60℃，加入适量的纤维素酶在下列条件下进行提取：纤维素酶添加量为底物浓度的0.2%，即每千克原料叶需消耗0.002千克的纤维素酶、杜仲叶粉料׃水的质量比=1：12、提取2次、每次60-80min；

（3）、过滤：合并两次提取液后，用常规过滤方法除去悬浮物等杂质；

（4）、超滤膜除杂：采用过滤孔径为0.02-0.0.06µm的超滤膜处理杜仲叶水提液，用超滤膜截留大分子蛋白质及多糖等杂质，而桃叶珊瑚苷分子量在400Dal左右可以完全透过，该膜的操作条件为：P=0.2-0.6Mpa，T=30-50℃，pH=4-5，Q=60-70L/min；

（5）、纳滤浓缩：采用拦截分子量为200-400Dal的纳滤膜对一级膜滤液进行浓缩，部分脱盐，该级膜浓缩倍数可达15倍以上，无机盐离子去除率可达60%；该膜的操作条件为：P=1.0-1.5Mpa，T=30-60℃，pH=4-5，Q=20L/min；

（6）、大孔树脂的分离纯化：纳滤膜浓缩液通过大孔树脂进行吸附洗脱，先用1倍树脂柱体积的纯水洗去杂质，然后用2倍树脂柱体积的体积百分比浓度为60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；

（7）、浓缩及干燥：将收集的乙醇洗脱液通过常规减压浓缩和真空干燥后可得到桃叶珊瑚苷粉末。

3.根据权利要求1和权利要求2所述的一种制取杜仲叶中桃叶珊瑚苷的方法，其特征在于：减压浓缩和真空干燥温度均不高于60℃。