CN106243171A - 一种制备桃叶珊瑚苷的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种制备桃叶珊瑚苷的提取方法，以杜仲叶或车前草为原料进行制备，分别得到车前草类桃叶珊瑚苷和杜仲叶类桃叶珊瑚苷：在粉碎的杜仲叶或车前草粉料中添加纤维素酶及食用乙醇或甲醇提取杜仲叶或车前草中的桃叶珊瑚苷，通过两级膜分离技术结合树脂吸附洗脱工艺对提取的桃叶珊瑚苷进行分离纯化，收集洗脱液减压浓缩、真空干燥得产品桃叶珊瑚苷粉末，有效解决了原来桃叶珊瑚苷生产中提取率低、废水量大和产品纯度低的问题；使杜仲叶及车前草资源得到充分高效合理利用，不致造成严重环境污染。

Description

一种制备桃叶珊瑚苷的提取方法

技术领域

本发明涉及化合物制备技术领域，具体的说，是一种制备桃叶珊瑚苷的提取方法。

背景技术

杜仲（学名Eucommia ulmoides Oliver），又名胶木，为杜仲科植物。

杜仲游离氨基酸极少，含有的少量蛋白质，是和绝大多数食品类似的完全蛋白，即能够水解检出对人体必需的8种氨基酸。测定了杜仲所含的15种矿物元素，其中有锌、铜、铁等微量元素，及钙、磷、钾、镁等宏量元素。

药用杜仲，即为杜仲科植物杜仲的干燥树皮，是中国名贵滋补药材。其味甘，性温。有补益肝肾、强筋壮骨、调理冲任、固经安胎的功效。 可治疗肾阳虚引起的腰腿痛或酸软无力，肝气虚引起的胞胎不固，阴囊湿痒等症。在《神农本草经》中被列为上品。

现代研究杜仲具有清除体内垃圾，加强人体细胞物质代谢，防止肌肉骨骼老化，平衡人体血压，分解体内胆固醇，降低体内脂肪，恢复血管弹性，利尿清热，广谱抗菌，兴奋中枢神经，提高白血球药理作用。

平车前，学名Plantago depressa Willd.，俗称车前草。一年生或二年生草本。直根长，具多数侧根，多少肉质。根茎短。叶基生呈莲座状，平卧、斜展或直立；叶片纸质，椭圆形、椭圆状披针形或卵状披针形，叶柄基部扩大成鞘状。花序梗有纵条纹，疏生白色短柔毛；穗状花序细圆柱状。花萼无毛，花冠白色，无毛。雄蕊着生于冠筒内面近顶端，同花柱明显外伸，花药卵状椭圆形或宽椭圆形，新鲜时白色或绿白色，干后变淡褐色。蒴果卵状椭圆形至圆锥状卵形。种子椭圆形，腹面平坦，黄褐色至黑色；子叶背腹向排列。花期5-7月，果期7-9月。

生于草地、河滩、沟边、草甸、田间及路旁，海拔5000-4500米。中国大部分地区，朝鲜、俄罗斯（西伯利亚至远东）、哈萨克斯坦、阿富汗、蒙古、巴基斯坦、克什米尔、印度也有分布。

平车前的全株，味甘，性寒。具有利尿、清热、明目、祛痰的功效。幼株可食用。

桃叶珊瑚苷是一种重要的生物活性物质，具有清湿热、利小便、镇痛、降压、保肝护肝、抗肿瘤等作用。它能促进干细胞再生，明显抑制乙型肝炎病毒DNA的复制，其苷元及有效多聚体是一种抗菌素。 它是杜仲、车前草、地黄等中药材的有效成分之一，又是某些成药的质量指标。

桃叶珊瑚苷(aucubin，AU)的化学名为β-D-吡喃葡萄糖苷，为环烯醚萜苷类化合物，植物的次生代谢产物。 具有清湿热、利小便、镇痛、降压、保肝护肝、抗肿瘤、等活性。它能促进干细胞再生, 明显抑制乙型肝炎病毒DNA 的复制，其苷元及有效多聚体是一种抗菌素。桃叶珊瑚苷为传统中药杜仲、车前草、地黄的主要活性成分，,又是某些成药的质量指标。桃叶珊瑚苷主要为医药、 日用化工和饲料等行业所应用。

发明内容

本发明的目的在于设计出一种制备桃叶珊瑚苷的提取方法，在粉碎后的杜仲叶或车前草粉料中，采用添加纤维素酶和食用乙醇或甲醇提取杜仲叶或车前草中的桃叶珊瑚苷，再通过两级膜分离技术结合树脂吸附洗脱工艺对提取的桃叶珊瑚苷进行分离纯化，收集洗脱液减压浓缩、真空干燥后得产品桃叶珊瑚苷，有效解决了原来桃叶珊瑚苷生产中提取率低、废水量大和产品纯度低的问题；使杜仲叶及车前草资源得到充分高效合理利用，不致造成严重环境污染。

本发明通过下述技术方案实现：一种制备桃叶珊瑚苷的提取方法，以杜仲叶或车前草为原料进行制备，分别得到车前草类桃叶珊瑚苷和杜仲叶类桃叶珊瑚苷：在粉碎的杜仲叶或车前草粉料中添加纤维素酶及食用乙醇或甲醇提取杜仲叶或车前草中的桃叶珊瑚苷，通过两级膜分离技术结合树脂吸附洗脱工艺对提取的桃叶珊瑚苷进行分离纯化，收集洗脱液减压浓缩、真空干燥得产品桃叶珊瑚苷粉末。

进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：采用车前草为原材料进行制备时，所述方法包括以下具体步骤：

1）车前草的粉碎：将含水量≤12%的车前草，用常规方法粉碎后过60~80目筛；

2）酶法辅助食用乙醇提取：将粉碎的车前草中加入一定量的食用乙醇，并恒温至69.5~78.9℃，加入适量的纤维素酶在下列条件下进行提取：纤维素酶添加量为底物浓度的0.3%，车前草与食用乙醇的质量比=1：5~10、提取2次、每次60-80min，食用乙醇的浓度为78.9~95%；

3）过滤：合并两次提取液后，用常规过滤方法除去悬浮物等杂质，得车前草醇提液；

4）超滤膜除杂：采用过滤孔径为0.03-0.0.05μm的超滤膜处理车前草醇提液，用超滤膜截留大分子蛋白质及多糖等杂质，得车前草超滤膜滤液，而桃叶珊瑚苷分子量在400Dal左右可以完全透过，超滤膜的操作条件为：P=0.65~1.0Mpa，T=30~50℃，pH=4~5，Q=60~70L/min；

5）纳滤浓缩：采用拦截分子量为120-180Dal的纳滤膜对车前草超滤膜滤液进行浓缩，部分脱盐，得车前草纳滤膜浓缩液；该级膜浓缩倍数可达15倍以上，无机盐离子去除率可达60%；

6）大孔树脂的分离纯化：车前草纳滤膜浓缩液通过大孔树脂进行吸附洗脱，先用1.2倍树脂柱体积的纯水洗去杂质，然后纯水洗脱，收集车前草纯水洗脱液；

7）浓缩及干燥：将收集的车前草纯水洗脱液通过常规减压浓缩和真空干燥后可得到车前草类桃叶珊瑚苷粉末。

进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：所述步骤5）纳滤浓缩时，纳滤膜的操作条件为：P=1.1-1.4Mpa，T=40-50℃，pH=4-5，Q=12~18L/min。

进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：所述步骤7）中，常规减压浓缩和真空干燥的温度条件为40~56℃。

进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：采用杜仲叶为原材料进行制备时，所述方法包括以下具体步骤：

（1）杜仲叶的粉碎：将含水量≤12%的杜仲叶，用常规方法粉碎后过60~80目筛；

（2）酶法辅助甲醇提取：将粉碎的杜仲叶中加入一定量的甲醇，并恒温至50~70℃，加入适量的纤维素酶在下列条件下进行提取：纤维素酶添加量为底物浓度的0.3%，杜仲叶与甲醇的质量比=1：4~8、提取2次、每次90~120min，甲醇的浓度为75~85%；

（3）过滤：合并两次提取液后，用常规过滤方法除去悬浮物等杂质，得杜仲叶醇提液；

（4）超滤膜除杂：采用过滤孔径为0.03-0.0.05μm的超滤膜处理杜仲叶醇提液，用超滤膜截留大分子蛋白质及多糖等杂质，得杜仲叶超滤膜滤液，而桃叶珊瑚苷分子量在400Dal左右可以完全透过，超滤膜的操作条件为：P=0.65~1.0Mpa，T=30~50℃，pH=4~5，Q=60~70L/min；

（5）纳滤浓缩：采用拦截分子量为120-180Dal的纳滤膜对杜仲叶超滤膜滤液进行浓缩，部分脱盐，得杜仲叶纳滤膜浓缩液；该级膜浓缩倍数可达15倍以上，无机盐离子去除率可达60%；

（6）大孔树脂的分离纯化：杜仲叶纳滤膜浓缩液通过大孔树脂进行吸附洗脱，先用1.2倍树脂柱体积的纯水洗去杂质，然后用2.5倍树脂柱体积的体积百分比浓度为67.5%乙醇洗脱，收集杜仲叶乙醇洗脱液；

（7）浓缩及干燥：将收集的杜仲叶乙醇洗脱液通过常规减压浓缩和真空干燥后可得到杜仲叶类桃叶珊瑚苷粉末。

进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：所述步骤（5）纳滤浓缩时，纳滤膜的操作条件为：P=1.2-1.3Mpa，T=45-55℃，pH=4-5，Q=10~18L/min。

进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：所述步骤（7）中，常规减压浓缩和真空干燥的温度条件为37.8~48℃。

本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：

本发明在粉碎后的杜仲叶或车前草粉料中，采用添加纤维素酶和食用乙醇或甲醇提取杜仲叶或车前草中的桃叶珊瑚苷，再通过两级膜分离技术结合树脂吸附洗脱工艺对提取的桃叶珊瑚苷进行分离纯化，收集洗脱液减压浓缩、真空干燥后得产品桃叶珊瑚苷，有效解决了原来桃叶珊瑚苷生产中提取率低、废水量大和产品纯度低的问题；使杜仲叶及车前草资源得到充分高效合理利用，不致造成严重环境污染。

本发明采用天然产物化学及现代化生产技术提取、分离纯化杜仲叶或车前草主要活性成分桃叶珊瑚苷，将其制成国际通行的各种纯度规格的桃叶珊瑚苷提取物，较好地顺应和满足现代功能食品、保健品、药品、日化用品等健康领域，对其天然、安全、有效、方便的需求。

本发明酶法食用乙醇或甲醇提取杜仲叶或车前草中的桃叶珊瑚苷，纤维素酶的加入有助于打破叶细胞壁，释放细胞内的桃叶珊瑚苷，提取率可达到95%以上，提取时间缩短，节约能耗。

本发明采用超滤膜对提取液进行分离纯化，能有效分离其他副产物，膜操作过程简单，膜通量能长时间稳定，易于清洗、使用寿命长，易于实现工业化。

本发明采用纳滤膜对除杂后的提取液进行浓缩，脱盐率可达60%，能减轻后续工艺的负荷，延长树脂的使用寿命及节约能耗，纳滤滤液COD值≤100，可以回用生产工序，基本无废水排放。

本发明采用大孔吸附树脂能有效纯化桃叶珊瑚苷，本工艺所选用的树脂为弱极性大孔吸附树脂，其对桃叶珊瑚苷吸附量大、分离效果好，仅用少量溶媒集中洗脱并分段收集，就能制得较高纯度桃叶珊瑚苷。经过本工艺制得的粉末中桃叶珊瑚苷含量大于66%，提取率大于3%。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1：

一种制备桃叶珊瑚苷的提取方法，以杜仲叶或车前草为原料进行制备，分别得到车前草类桃叶珊瑚苷和杜仲叶类桃叶珊瑚苷：在粉碎的杜仲叶或车前草粉料中添加纤维素酶及食用乙醇或甲醇提取杜仲叶或车前草中的桃叶珊瑚苷，通过两级膜分离技术结合树脂吸附洗脱工艺对提取的桃叶珊瑚苷进行分离纯化，收集洗脱液减压浓缩、真空干燥得产品桃叶珊瑚苷粉末。

在粉碎后的杜仲叶或车前草粉料中，采用添加纤维素酶和食用乙醇或甲醇提取杜仲叶或车前草中的桃叶珊瑚苷，再通过两级膜分离技术结合树脂吸附洗脱工艺对提取的桃叶珊瑚苷进行分离纯化，收集洗脱液减压浓缩、真空干燥后得产品桃叶珊瑚苷，有效解决了原来桃叶珊瑚苷生产中提取率低、废水量大和产品纯度低的问题；使杜仲叶及车前草资源得到充分高效合理利用，不致造成严重环境污染。

实施例2：

本实施例是在上述实施例的基础上进一步优化，进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：采用车前草为原材料进行制备时，所述方法包括以下具体步骤：

1）车前草的粉碎：将含水量≤12%的车前草，用常规方法粉碎后过60~80目筛；

2）酶法辅助食用乙醇提取：将粉碎的车前草中加入一定量的食用乙醇，并恒温至69.5~78.9℃，加入适量的纤维素酶在下列条件下进行提取：纤维素酶添加量为底物浓度的0.3%，车前草与食用乙醇的质量比=1：5~10、提取2次、每次60-80min，食用乙醇的浓度为78.9~95%；

3）过滤：合并两次提取液后，用常规过滤方法除去悬浮物等杂质，得车前草醇提液；

4）超滤膜除杂：采用过滤孔径为0.03-0.0.05μm的超滤膜处理车前草醇提液，用超滤膜截留大分子蛋白质及多糖等杂质，得车前草超滤膜滤液，而桃叶珊瑚苷分子量在400Dal左右可以完全透过，超滤膜的操作条件为：P=0.65~1.0Mpa，T=30~50℃，pH=4~5，Q=60~70L/min；

5）纳滤浓缩：采用拦截分子量为120-180Dal的纳滤膜对车前草超滤膜滤液进行浓缩，部分脱盐，得车前草纳滤膜浓缩液；该级膜浓缩倍数可达15倍以上，无机盐离子去除率可达60%；

6）大孔树脂的分离纯化：车前草纳滤膜浓缩液通过大孔树脂进行吸附洗脱，先用1.2倍树脂柱体积的纯水洗去杂质，然后纯水洗脱，收集车前草纯水洗脱液；采用大孔吸附树脂能有效纯化桃叶珊瑚苷，本工艺所选用的树脂为弱极性大孔吸附树脂，其对桃叶珊瑚苷吸附量大、分离效果好，仅用少量溶媒集中洗脱并分段收集，就能制得较高纯度桃叶珊瑚苷。经过本工艺制得的粉末中桃叶珊瑚苷含量大于66%，提取率大于3%；

7）浓缩及干燥：将收集的车前草纯水洗脱液通过常规减压浓缩和真空干燥后可得到车前草类桃叶珊瑚苷粉末。

实施例3：

本实施例是在上述任一实施例的基础上进一步优化，进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：所述步骤5）纳滤浓缩时，纳滤膜的操作条件为：P=1.1-1.4Mpa，T=40-50℃，pH=4-5，Q=12~18L/min。

实施例4：

本实施例是在上述任一实施例的基础上进一步优化，进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：所述步骤7）中，常规减压浓缩和真空干燥的温度条件为40~56℃。

实施例5：

本实施例是在实施例1的基础上进一步优化，进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：采用杜仲叶为原材料进行制备时，所述方法包括以下具体步骤：

（1）杜仲叶的粉碎：将含水量≤12%的杜仲叶，用常规方法粉碎后过60~80目筛；

（2）酶法辅助甲醇提取：将粉碎的杜仲叶中加入一定量的甲醇，并恒温至50~70℃，加入适量的纤维素酶在下列条件下进行提取：纤维素酶添加量为底物浓度的0.3%，杜仲叶与甲醇的质量比=1：4~8、提取2次、每次90~120min，甲醇的浓度为75~85%；

（3）过滤：合并两次提取液后，用常规过滤方法除去悬浮物等杂质，得杜仲叶醇提液；

（4）超滤膜除杂：采用过滤孔径为0.03-0.0.05μm的超滤膜处理杜仲叶醇提液，用超滤膜截留大分子蛋白质及多糖等杂质，得杜仲叶超滤膜滤液，而桃叶珊瑚苷分子量在400Dal左右可以完全透过，超滤膜的操作条件为：P=0.65~1.0Mpa，T=30~50℃，pH=4~5，Q=60~70L/min；

（5）纳滤浓缩：采用拦截分子量为120-180Dal的纳滤膜对杜仲叶超滤膜滤液进行浓缩，部分脱盐，得杜仲叶纳滤膜浓缩液；该级膜浓缩倍数可达15倍以上，无机盐离子去除率可达60%；

（6）大孔树脂的分离纯化：杜仲叶纳滤膜浓缩液通过大孔树脂进行吸附洗脱，先用1.2倍树脂柱体积的纯水洗去杂质，然后用2.5倍树脂柱体积的体积百分比浓度为67.5%乙醇洗脱，收集杜仲叶乙醇洗脱液；采用大孔吸附树脂能有效纯化桃叶珊瑚苷，本工艺所选用的树脂为弱极性大孔吸附树脂，其对桃叶珊瑚苷吸附量大、分离效果好，仅用少量溶媒集中洗脱并分段收集，就能制得较高纯度桃叶珊瑚苷。经过本工艺制得的粉末中桃叶珊瑚苷含量大于66%，提取率大于3%；

（7）浓缩及干燥：将收集的杜仲叶乙醇洗脱液通过常规减压浓缩和真空干燥后可得到杜仲叶类桃叶珊瑚苷粉末。

实施例6：

本实施例是在实施例1或5的基础上进一步优化，进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：所述步骤（5）纳滤浓缩时，纳滤膜的操作条件为：P=1.2-1.3Mpa，T=45-55℃，pH=4-5，Q=10~18L/min。

实施例7：

本实施例是在实施例1或5或6的基础上进一步优化，进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：所述步骤（7）中，常规减压浓缩和真空干燥的温度条件为37.8~48℃。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种制备桃叶珊瑚苷的提取方法，以杜仲叶或车前草为原料进行制备，分别得到车前草类桃叶珊瑚苷和杜仲叶类桃叶珊瑚苷，其特征在于：在粉碎的杜仲叶或车前草粉料中添加纤维素酶及食用乙醇或甲醇提取杜仲叶或车前草中的桃叶珊瑚苷，通过两级膜分离技术结合树脂吸附洗脱工艺对提取的桃叶珊瑚苷进行分离纯化，收集洗脱液减压浓缩、真空干燥得产品桃叶珊瑚苷粉末。

2.根据权利要求1所述的一种制备桃叶珊瑚苷的提取方法，其特征在于：采用车前草为原材料进行制备时，所述方法包括以下具体步骤：

1）车前草的粉碎：将含水量≤12%的车前草，用常规方法粉碎后过60~80目筛；

2）酶法辅助食用乙醇提取：将粉碎的车前草中加入一定量的食用乙醇，并恒温至69.5~78.9℃，加入适量的纤维素酶在下列条件下进行提取：纤维素酶添加量为底物浓度的0.3%，车前草与食用乙醇的质量比=1：5~10、提取2次、每次60-80min，食用乙醇的浓度为78.9~95%；

3）过滤：合并两次提取液后，用常规过滤方法除去悬浮物等杂质，得车前草醇提液；

4）超滤膜除杂：采用过滤孔径为0.03-0.0.05μm的超滤膜处理车前草醇提液，用超滤膜截留大分子蛋白质及多糖等杂质，得车前草超滤膜滤液，超滤膜的操作条件为：P=0.65~1.0Mpa，T=30~50℃，pH=4~5，Q=60~70L/min；

5）纳滤浓缩：采用拦截分子量为120-180Dal的纳滤膜对车前草超滤膜滤液进行浓缩，部分脱盐，得车前草纳滤膜浓缩液；

6）大孔树脂的分离纯化：车前草纳滤膜浓缩液通过大孔树脂进行吸附洗脱，先用1.2倍树脂柱体积的纯水洗去杂质，然后纯水洗脱，收集车前草纯水洗脱液；

7）浓缩及干燥：将收集的车前草纯水洗脱液通过常规减压浓缩和真空干燥后可得到车前草类桃叶珊瑚苷粉末。

3.根据权利要求2所述的一种制备桃叶珊瑚苷的提取方法，其特征在于：所述步骤5）纳滤浓缩时，纳滤膜的操作条件为：P=1.1-1.4Mpa，T=40-50℃，pH=4-5，Q=12~18L/min。

4.根据权利要求2或3所述的一种制备桃叶珊瑚苷的提取方法，其特征在于：所述步骤7）中，常规减压浓缩和真空干燥的温度条件为40~56℃。

5.根据权利要求1所述的一种制备桃叶珊瑚苷的提取方法，其特征在于：采用杜仲叶为原材料进行制备时，所述方法包括以下具体步骤：

（1）杜仲叶的粉碎：将含水量≤12%的杜仲叶，用常规方法粉碎后过60~80目筛；

（2）酶法辅助甲醇提取：将粉碎的杜仲叶中加入一定量的甲醇，并恒温至50~70℃，加入适量的纤维素酶在下列条件下进行提取：纤维素酶添加量为底物浓度的0.3%，杜仲叶与甲醇的质量比=1：4~8、提取2次、每次90~120min，甲醇的浓度为75~85%；

（3）过滤：合并两次提取液后，用常规过滤方法除去悬浮物等杂质，得杜仲叶醇提液；

（4）超滤膜除杂：采用过滤孔径为0.03-0.0.05μm的超滤膜处理杜仲叶醇提液，用超滤膜截留大分子蛋白质及多糖等杂质，得杜仲叶超滤膜滤液，超滤膜的操作条件为：P=0.65~1.0Mpa，T=30~50℃，pH=4~5，Q=60~70L/min；

（5）纳滤浓缩：采用拦截分子量为120-180Dal的纳滤膜对杜仲叶超滤膜滤液进行浓缩，部分脱盐，得杜仲叶纳滤膜浓缩液；

（6）大孔树脂的分离纯化：杜仲叶纳滤膜浓缩液通过大孔树脂进行吸附洗脱，先用1.2倍树脂柱体积的纯水洗去杂质，然后用2.5倍树脂柱体积的体积百分比浓度为67.5%乙醇洗脱，收集杜仲叶乙醇洗脱液；

（7）浓缩及干燥：将收集的杜仲叶乙醇洗脱液通过常规减压浓缩和真空干燥后可得到杜仲叶类桃叶珊瑚苷粉末。

6.根据权利要求5所述的一种制备桃叶珊瑚苷的提取方法，其特征在于：所述步骤（5）纳滤浓缩时，纳滤膜的操作条件为：P=1.2-1.3Mpa，T=45-55℃，pH=4-5，Q=10~18L/min。

7.根据权利要求5或6所述的一种制备桃叶珊瑚苷的提取方法，其特征在于：所述步骤（7）中，常规减压浓缩和真空干燥的温度条件为37.8~48℃。