CN104107211B - 黄芪总皂苷提取物的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种改进的黄芪总皂苷提取物的制备方法，包括对黄芪的水提液进行两次醇沉一次水沉，再使用大孔树脂吸附三次，浓缩后即得黄芪总皂苷提取物。由于黄芪总皂苷含量较低，且药材含大量糖类物质，提取分离比较困难。本发明能够显著降低无效杂质含量，保留了药物的有效成分，极大地提高了样品纯度，进而提高了皂苷的提取率，本方法制得的黄芪总皂苷提取物中黄芪总皂苷含量高达98～100％，是一种有效的黄芪总皂苷的提取分离方法。

Description

黄芪总皂苷提取物的制备方法

技术领域

本发明涉及中药材提取物的制备方法，具体地说，涉及黄芪总皂苷提取物的制备方法。

背景技术

黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。有益气固表、敛汗固脱、托疮生肌、利水消肿之功效。用于治疗气虚乏力，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，痈疽难溃，久溃不敛，血虚萎黄，内热消渴，慢性肾炎，蛋白尿，糖尿病等。炙黄芪益气补中，生用固表托疮。

黄芪中的主要活性成分为以黄芪甲苷为代表的皂苷类及多糖。黄芪总皂苷的动物实验研究表明，能明显抑制中性粒细胞的增生和降低炎症关节局部的细胞因子，如白细胞介素-1和一氧化氮的水平，减轻一氧化氮引起的软骨细胞凋亡等，而且毒性低，副作用小。

近年来，已有较多关于黄芪总皂苷成分提取方法的研究，目标是提高黄芪总皂苷的含量，降低大分子等杂质的含量，以提高黄芪制剂的有效性及安全性。

ZL02155002.6公开了黄芪总皂苷的制备方法，该方法包括步骤：黄芪经水热回流提取2次以上，提取液过滤后直接上大孔吸附树脂柱，进行脱糖，脱色处理，再分离纯化得到黄芪总皂苷混合物。该方法将含大量杂质的提取液直接经由大孔吸附树脂柱分离纯化，造成去除杂质的同时有效成分损失也较大的缺点。

ZL200610014211.6公开了一种黄芪总皂苷的制备方法，该方法包括步骤：取黄芪药材加入溶剂，将溶液调至碱性后再进行提取，得提取液；提取液上大孔型碱性阴离子交换柱，先用碱水和纯水冲洗，冲洗液弃去，再用含水乙醇洗脱，洗脱液浓缩，即得黄芪总皂苷。该方法仅经一次树脂纯化，存在杂质去除不彻底的缺点。

CN102488742A公开了一种黄芪总皂苷的制备方法，该方法包括步骤：黄芪煎煮1～3次，合并过滤；浓缩提取液，加入2～5倍量的80％～100％的乙醇，过滤浓缩至清膏；将清膏放入大孔树脂柱中洗脱后，即得黄芪总皂苷。该方法存在只经一次醇沉一次树脂纯化，杂质去除不彻底的缺点。

发明内容

本发明的目的是提供一种改进的黄芪总皂苷提取物的制备方法。

为了实现本发明目的，本发明的一种黄芪总皂苷提取物的制备方法，包括对黄芪的水提液进行两次醇沉一次水沉，再使用大孔树脂吸附三次，浓缩后即得黄芪总皂苷提取物。

上述方法具体包括以下步骤：

(1)用水煎煮提取黄芪药材,浓缩，得到黄芪水煎膏；

(2)对步骤(1)得到的黄芪水煎膏进行一次醇沉，浓缩，得到黄芪总皂苷一次醇沉膏；

(3)对步骤(2)得到的黄芪总皂苷一次醇沉膏进行二次醇沉，浓缩，得到黄芪总皂苷二次醇沉膏；

(4)对步骤(3)得到的黄芪总皂苷二次醇沉膏进行水沉，浓缩，得到黄芪总皂苷水沉膏；

(5)步骤(4)得到的黄芪总皂苷水沉膏经水稀释后经过大孔树脂进行一次吸附，收集洗脱液；

(6)步骤(5)收集的洗脱液经过大孔树脂进行二次吸附，收集洗脱液；

(7)步骤(6)收集的洗脱液经过大孔弱碱性阴离子树脂进行三次吸附，浓缩，得到黄芪总皂苷提取物。

更具体地，上述方法包括以下步骤：

1)提取：用黄芪药材6-12倍重量的水煎煮提取黄芪药材2-3次，每次提取1-2小时，合并提取液，浓缩，得到黄芪水煎膏；

2)一次醇沉：在搅拌条件下，向步骤1)得到的黄芪水煎膏中加入浓度93％以上的乙醇，使含醇量达74.5％-75.5％，搅拌，静置12小时以上，过滤，收集滤液挥干乙醇至无醇味，并浓缩至在80℃测定相对密度为1.11-1.20，得到黄芪总皂苷一次醇沉膏；

3)二次醇沉：在搅拌条件下，向步骤2)得到的醇沉膏中加入浓度93％以上的乙醇，使含醇量达84.5％-85.5％，搅拌15min，冷藏12小时以上，滤取上清液(剩余药渣离心后过滤取上清液)，挥干乙醇至无醇味，并浓缩至在80℃测定相对密度为1.11-1.20，得到黄芪总皂苷二次醇沉膏；

4)水沉：在搅拌条件下，向步骤3)得到的醇沉膏中加水稀释至1ml溶液中含醇沉膏0.5-1.0g，搅拌15min，冷藏12小时以上，滤取上清液(剩余药渣离心后过滤取上清液)，浓缩至在80℃测定相对密度为1.11-1.20，得到黄芪总皂苷水沉膏；

5)大孔树脂一次吸附：向黄芪总皂苷水沉膏中加水稀释至每1ml含水沉膏5g，药液经0.45μm微孔滤膜过滤后，滤液以1BV/h速度通过大孔吸附树脂，上样量为树脂体积的8倍，经树脂吸附后用2倍树脂体积的水洗脱，洗脱流速为3BV/h，弃去洗脱液，再使用2倍树脂体积的30％乙醇洗脱，洗脱流速为3BV/h，弃去洗脱液，再用3倍树脂体积的50％乙醇洗脱，洗脱流速为2BV/h，收集洗脱液；

6)大孔树脂二次吸附：将步骤5)收集的洗脱液，以1BV/h速度过大孔吸附树脂，上样量为树脂体积的8倍，经树脂吸附后分别用2倍树脂体积的水和2倍树脂体积的30％乙醇洗脱，洗脱流速为3BV/h，弃去洗脱液，再用3倍树脂体积的50％乙醇洗脱，洗脱流速为2BV/h，收集洗脱液；

7)大孔弱碱性阴离子树脂三次吸附：将步骤6)收集的洗脱液直接以2.5～3.5BV/h的流速过弱碱性阴离子树脂柱，待露出树脂面时，加入树脂等重量的浓度为85％的乙醇以相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，真空减压干燥后即得黄芪总皂苷提取物。

本发明中使用的水为纯化水、蒸馏水或注射用水。

利用大孔树脂进行一次吸附和二次吸附，使用的大孔树脂的型号为D101、ADS-F8、ADS-17、HPD750、HPD100、HPD450、AB-8或DM130等。

优选使用的大孔树脂的型号为D101。D101树脂是一种非极性吸附剂，比表面积480-520m²/g，平均孔径

本发明中使用的大孔弱碱性阴离子树脂的型号为D900、D301R、D301G、D370、D371、D380或D382等。

优选使用的大孔弱碱性阴离子树脂的型号为D900。D900树脂是一种弱碱性阴离子交换树脂，交换容量mmol/g(干)≥8.0，粒度％(0.315-1.25)mm≥90。

采用上述方法制备的黄芪总皂苷提取物中，黄芪总皂苷含量98～100％，黄芪甲苷含量70～80％。

由于黄芪总皂苷含量较低，且药材含大量糖类物质，提取分离比较困难。本发明能够显著降低无效杂质含量，保留了药物的有效成分，极大地提高了样品纯度，进而提高了皂苷的提取率，是一种有效的黄芪总皂苷的提取分离方法。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

若未特别指明，以下实施例中涉及的百分号“％”为体积百分比；“倍量”是指重量倍数；水为纯化水、蒸馏水或注射用水。

实施例1黄芪总皂苷提取物的制备方法

包括如下步骤：

(1)提取：用黄芪药材12倍量的水煎煮提取黄芪药材3次，每次提取2小时，合并提取液，浓缩，得到黄芪水煎膏，备用；

(2)一次醇沉：在搅拌条件下，向步骤(1)得到的黄芪水煎膏中加入浓度95％的乙醇，使含醇量达75％，充分搅拌，静置14小时，过滤，收集滤液挥干乙醇至无醇味并浓缩至在80℃测定相对密度为1.13，得到黄芪总皂苷一次醇沉膏，备用；

(3)二次醇沉：在搅拌条件下，向步骤(2)得到的醇沉膏中加入浓度95％的乙醇，使含醇量达85％，搅拌15min，冷藏12小时，滤取上清液(剩余药渣离心后过滤取上清液)，收集滤液挥干乙醇至无醇味并浓缩至在80℃测定相对密度为1.14，收膏得黄芪总皂苷二次醇沉膏，备用；

(4)水沉：在搅拌条件下，向步骤(3)得到的醇沉膏中加入注射用水稀释至1ml含醇沉膏约1.0g，搅拌15min，冷藏12小时，滤取上清液(剩余药渣离心后过滤取上清液)，滤液浓缩至在80℃测定相对密度为1.12，收膏得黄芪总皂苷水沉膏，备用；

(5)D101大孔树脂精制：取步骤(4)得到黄芪总皂苷水沉膏，加入注射用水稀释至每1ml含水沉膏5g，药液经0.45μm微孔滤膜过滤澄清后，滤液以1BV/h速度过D101大孔吸附树脂(上柱液：树脂＝8:1，体积比)吸附，吸附后用2BV(即2个柱体积)纯化水洗脱，洗脱流速为3BV/h，弃去洗脱液，再使用2BV的30％乙醇洗脱，洗脱流速为3BV/h，弃去洗脱液，再用3BV的70％乙醇洗脱，洗脱流速为2BV/h，收集洗脱液。

(6)ADS-7大孔树脂精制：自D101树脂流出来的洗脱液，以1BV/h速度过ADS-7大孔吸附树脂(上柱液：树脂＝8:1，体积比)吸附，吸附后分别用2BV纯化水和2BV的30％乙醇洗脱，洗脱流速为3BV/h，弃去洗脱液，再用3BV的50％乙醇洗脱，洗脱流速为2BV/h，收集洗脱液。

(7)D900树脂脱色：自ADS-7树脂流出来的洗脱液直接以3BV/h的流速过生药量2/3的D900脱色树脂，待露出树脂面时，加入树脂1倍量的85％的乙醇以相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，真空减压干燥，得到黄芪总皂苷。

经检测，本实施例中制备的黄芪总皂苷，HPLC法测定含黄芪甲苷80％，紫外分光光度法测定含总皂苷100％。

实施例2黄芪总皂苷提取物的制备方法

包括如下步骤：

(1)提取：用黄芪药材6倍量的水煎煮提取黄芪药材2次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，得到黄芪水煎膏，备用；

(2)一次醇沉：在搅拌条件下，向步骤(1)得到的黄芪水煎膏中加入浓度93％的乙醇，使含醇量达74.5％，充分搅拌，静置12小时，过滤，收集滤液挥干乙醇至无醇味并浓缩至在80℃测定相对密度为1.11，得到黄芪总皂苷一次醇沉膏，备用；

(3)二次醇沉：在搅拌条件下，向步骤(2)得到的醇沉膏中加入浓度93％的乙醇，使含醇量达84.5，搅拌15min，冷藏12小时，滤取上清液(剩余药渣离心后过滤取上清液)，收集滤液挥干乙醇至无醇味并浓缩至在80℃测定相对密度为1.12，收膏得黄芪总皂苷二次醇沉膏，备用；

(4)水沉：在搅拌条件下，向步骤(3)得到的醇沉膏中加入注射用水稀释至1ml含醇沉膏约0.5，搅拌15min，冷藏12小时，滤取上清液(剩余药渣离心后过滤取上清液)，滤液浓缩至在80℃测定相对密度为1.11，收膏得黄芪总皂苷水沉膏，备用；

(5)D101大孔树脂精制：取黄芪总皂苷水沉膏适量，加入注射用水稀释至每1ml含水沉膏5g，药液经0.45μm微孔滤膜过滤澄清后，滤液以1BV/h速度过D101大孔吸附树脂(上柱液：树脂＝10:1)吸附，吸附后用2BV纯化水洗脱，洗脱流速为3BV/h，弃去洗脱液，再使用1BV的30％乙醇洗脱，洗脱流速为3BV/h，弃去洗脱液，再用2BV的70％乙醇洗脱，洗脱流速为2BV/h，收集洗脱液。

(6)ADS-7大孔树脂精制：自D101树脂流出来的洗脱液，以1BV/h速度过ADS-7大孔吸附树脂(上柱液：树脂＝10:1)吸附，吸附后分别用2BV纯化水和2BV的30％乙醇洗脱，洗脱流速为2BV/h，弃去洗脱液，再用2BV的50％乙醇洗脱，洗脱流速为2BV/h，收集洗脱液。

(7)D900树脂脱色：自ADS-7树脂流出来的洗脱液直接以3.5BV/h的流速过生药量2/3的D900脱色树脂，待露出树脂面时，加入树脂1倍量的85％的乙醇以相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，真空减压干燥，得到黄芪总皂苷。

经检测，本实施例中制备的黄芪总皂苷，HPLC法测定含黄芪甲苷74％，紫外分光光度法测定含总皂苷98％。

实施例3黄芪总皂苷提取物的制备方法

包括如下步骤：

(1)提取：用黄芪药材10倍量的水煎煮提取黄芪药材3次，每次提取1.5小时，合并提取液，浓缩，得到黄芪水煎膏，备用；

(2)一次醇沉：在搅拌条件下，向步骤(1)得到的黄芪水煎膏中加入浓度95％的乙醇，使含醇量达74.5％，充分搅拌，静置16小时，过滤，收集滤液挥干乙醇至无醇味并浓缩至在80℃测定相对密度为1.14，得到黄芪总皂苷一次醇沉膏，备用；

(3)二次醇沉：在搅拌条件下，向步骤(2)得到的醇沉膏中加入浓度95％的乙醇，使含醇量达85.5％，搅拌16min，冷藏13小时，滤取上清液(剩余药渣离心后过滤取上清液)，收集滤液挥干乙醇至无醇味并浓缩至在80℃测定相对密度为1.12，收膏得黄芪总皂苷二次醇沉膏，备用；

(4)水沉：在搅拌条件下，向步骤(3)得到的醇沉膏中加入注射用水稀释至1ml含醇沉膏约0.8g，搅拌15min，冷藏14小时，滤取上清液(剩余药渣离心后过滤取上清液)，滤液浓缩至在80℃测定相对密度为1.15，收膏得黄芪总皂苷水沉膏，备用；

(5)大孔树脂吸附：取黄芪总皂苷水沉膏适量，加入注射用水稀释至每1ml含水沉膏4g，药液经0.45μm微孔滤膜过滤澄清后，滤液以1BV/h速度过大孔吸附树脂(上柱液：树脂＝8:1，体积比)吸附，吸附后用2BV纯化水洗脱，洗脱流速为3BV/h，弃去洗脱液，再使用2BV的30％乙醇洗脱，洗脱流速为3BV/h，弃去洗脱液，再用4BV的50％乙醇洗脱，洗脱流速为2BV/h，收集洗脱液。

(6)大孔树脂精制：自步骤(5)树脂流出来的洗脱液，以1BV/h速度过大孔吸附树脂(上柱液：树脂＝8:1，体积比)吸附，吸附后分别用2BV纯化水和2BV的30％乙醇洗脱，洗脱流速为3BV/h，弃去洗脱液，再用4BV的50％乙醇洗脱，洗脱流速为2BV/h，收集洗脱液。

(7)阴离子树脂脱色：自步骤(6)树脂流出来的洗脱液直接以2.5BV/h的流速过生药量2/3的阴离子脱色树脂，待露出树脂面时，加入树脂2倍量的85％的乙醇以相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，真空减压干燥，得到黄芪总皂苷。

经检测，本实施例中制备的黄芪总皂苷，HPLC法测定含黄芪甲苷77％，紫外分光光度法测定含总皂苷99％。

对比例1：参照ZL200610014211.6实施例2中公开的方法制备黄芪总皂苷提取物。

对比例2：参照CN102488742A实施例2中公开的方法制备黄芪总皂苷提取物。

表1本发明实施例1-3与对比例1-2的黄芪总皂苷提取物成分分析比较

	黄芪甲苷	黄芪总皂苷
			实施例1	80％	100％
实施例2	74％	98％
			实施例3	77％	99％
对比例1	70％	85％
			对比例2	62％	86％

以上实验结果表明，本发明能够显著降低无效杂质含量，保留了药物的有效成分，极大地提高了样品纯度，本方法制得的黄芪总皂苷提取物中黄芪总皂苷含量高达98～100％，是一种有效的黄芪总皂苷的提取分离方法。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (6)

1.黄芪总皂苷提取物的制备方法，其特征在于，包括对黄芪的水提液进行两次醇沉一次水沉，再使用大孔树脂吸附三次，浓缩后即得黄芪总皂苷提取物；

所述方法包括以下步骤：

1)提取：用黄芪药材6-12倍重量的水煎煮提取黄芪药材2-3次，每次提取1-2小时，合并提取液，浓缩，得到黄芪水煎膏；

2)一次醇沉：在搅拌条件下，向步骤1)得到的黄芪水煎膏中加入浓度93％以上的乙醇，使含醇量达74.5％-75.5％，搅拌，静置12小时以上，过滤，收集滤液挥干乙醇至无醇味，并浓缩至在80℃测定相对密度为1.11-1.20，得到黄芪总皂苷一次醇沉膏；

3)二次醇沉：在搅拌条件下，向步骤2)得到的醇沉膏中加入浓度93％以上的乙醇，使含醇量达84.5％-85.5％，搅拌15min，冷藏12小时以上，滤取上清液挥干乙醇至无醇味，并浓缩至在80℃测定相对密度为1.11-1.20，得到黄芪总皂苷二次醇沉膏；

4)水沉：在搅拌条件下，向步骤3)得到的醇沉膏中加水稀释至1ml溶液中含醇沉膏0.5-1.0g，搅拌15min，冷藏12小时以上，滤取上清液浓缩至在80℃测定相对密度为1.11-1.20，得到黄芪总皂苷水沉膏；

5)大孔树脂一次吸附：向黄芪总皂苷水沉膏中加水稀释至每1ml含水沉膏5g，药液经0.45μm微孔滤膜过滤后，滤液以1BV/h速度通过大孔吸附树脂，上样量为树脂体积的8倍，经树脂吸附后用2倍树脂体积的水洗脱，洗脱流速为3BV/h，弃去洗脱液，再使用2倍树脂体积的30％乙醇洗脱，洗脱流速为3BV/h，弃去洗脱液，再用3倍树脂体积的50％乙醇洗脱，洗脱流速为2BV/h，收集洗脱液；

6)大孔树脂二次吸附：将步骤5)收集的洗脱液，以1BV/h速度过大孔吸附树脂，上样量为树脂体积的8倍，经树脂吸附后分别用2倍树脂体积的水和2倍树脂体积的30％乙醇洗脱，洗脱流速为3BV/h，弃去洗脱液，再用3倍树脂体积的50％乙醇洗脱，洗脱流速为2BV/h，收集洗脱液；

7)大孔弱碱性阴离子树脂三次吸附：将步骤6)收集的洗脱液直接以2.5～3.5BV/h的流速过弱碱性阴离子树脂柱，待露出树脂面时，加入树脂等重量的浓度为85％的乙醇以相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，真空减压干燥后即得黄芪总皂苷提取物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，使用的水为纯化水、蒸馏水或注射用水。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用大孔树脂进行一次吸附和二次吸附，使用的大孔树脂的型号为D101、ADS-F8、ADS-17、HPD750、HPD100、HPD450、AB-8或DM130。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，大孔树脂进行一次吸附和二次吸附使用的大孔树脂的型号为D101。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，使用的大孔弱碱性阴离子树脂的型号为D900、D301R、D301G、D370、D371、D380或D382。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，使用的大孔弱碱性阴离子树脂的型号为D900。