CN102603828A

CN102603828A - 一种从杜仲叶中提取桃叶珊瑚甙的方法

Info

Publication number: CN102603828A
Application number: CN2012100405210A
Authority: CN
Inventors: 李光锋
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2012-02-22
Filing date: 2012-02-22
Publication date: 2012-07-25

Abstract

本发明提供了一种从中提取高纯度桃叶珊瑚甙的方法，大大地提高桃叶珊瑚甙得率和纯度。提出了一整套从杜仲叶分离提取得到高纯度的桃叶珊瑚甙，采用醇提超声处理，离心，浓缩，萃取，大孔吸附树脂层析，连续分离，浓缩，结晶，得到桃叶珊瑚甙纯品。整个分离过程中对环境条件要求不高，分离时间较短，纯度高。分离材料易得便宜，分离操作过程简单，易控制，采用结晶和重结晶，纯化效率高，减少对环境的污染，同时又节约了资源。

Description

一种从杜仲叶中提取桃叶珊瑚甙的方法

所属技术领域：

本发明属于天然产物加工领域，涉及了一种杜仲叶桃叶珊瑚甙的提取纯化方法，更具体地说是涉及了一种从杜仲叶中提取高纯度桃叶珊瑚甙的方法。

背景技术

桃叶珊瑚甙(aucubin)又名珊瑚木甙，是一种环烯醚萜甙类化合物，为白色粉末，分子量346，分子式C₁₅H₂₂O₉，，分子结构如图1所示。

图1桃叶珊瑚甙的结构

熔点179.6℃，比旋度163.1°。由于C₄去甲环烯醚萜甙结构不太稳定，桃叶珊瑚甙相对稳定性较差。桃叶珊瑚甙吸湿性不是很强，在潮湿的情况下很不稳定，容易变色，而干燥品相对较稳定。光线对桃叶珊瑚甙的影响较小，而温度、氧化剂的影响较大。碱性物质对桃叶珊瑚甙的影响比酸性物质大得多。

桃叶珊瑚甙的甙元及其多聚体具有抗菌作用，是一种抗菌素，其抗炎、抗菌性能与当药苦甙相同。桃叶珊瑚甙本身不具抗病毒作用，但当它与葡萄糖甙酶一起预培养后会产生明显的抗病毒作用。可刺激副交感神经中枢、加速尿酸转移和排出，利尿作用明显。能促进干细胞再生，明显抑制乙型肝炎病毒DNA的复制。另外桃叶珊瑚甙具有镇痛、清湿热、抗肿瘤等作用。

桃叶珊瑚甙是杜仲中有效活性成分之一。杜仲皮、叶和种子中均含有此成分，种子中含量可高达19％～23％，是杜仲种子的苦味素物质之一。在杜仲皮和叶中桃叶珊瑚甙含量有较大区别，杜仲叶比杜仲皮含量高，由于环烯醚双键性质活泼，甙易被酶和酸水解，故甙在鲜品和干品中的含量差别也很大。

温度对桃叶珊瑚甙抗氧化活性的影响很大，桃叶珊瑚甙抗氧化活性保存率随着加热时间的延长而出现不同程度的下降趋势，温度愈高保存率下降愈快。在室温条件下4h内桃叶珊瑚甙是稳定的；在高温条件下连续加热处理8h，桃叶珊瑚甙抗氧化活性损失高达70％。这可能因为桃叶珊瑚甙本身是热敏性物质，高温处理会使其发生氧化分解，产生黑色物质。100℃处理的桃叶珊瑚甙溶液在第1个小时内即已颜色变深。

桃叶珊瑚甙在杜仲种子含量最高，由于杜仲种子产量少，另外杜仲种子目前主要用于热榨提取杜仲油，虽有文献报道从杜仲籽粕中提取桃叶珊瑚甙，必须采用冷榨或超临界CO₂提取杜仲油后得到的杜仲籽粕，才能用于提取桃叶珊瑚甙，但是会影响杜仲油原有风味。而且目前都是采用制备色谱法进行制备高纯度桃叶珊瑚甙，严重影响了桃叶珊瑚甙的规模化生产。

发明内容

本发明的目的在于针对目前杜仲种子资源不足，严重影响了桃叶珊瑚甙的生产，公开一种利用结晶与重结晶方法从杜仲叶中规模化生产桃叶珊瑚甙，有效解决杜仲种子资源不足问题，又能降低桃叶珊瑚甙的生产成本。

因此，本发明提供一种从杜仲叶中提取桃叶珊瑚甙的纯化方法，其具体步骤如下：

(1)将干杜仲叶进行粉碎，并将杜仲叶、70％乙醇按重量(kg)/体积比(V)＝1∶3-5进行混合，加热至40℃提取90min；

(2)过滤除渣后，减压浓缩至原有体积的1/10-1/15；

(3)将浓缩液用LSA-10大孔树脂吸附，并用乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液；

(4)将洗脱液再经浓缩至原有体积的1/3-1/8，室温过夜结晶得到桃叶珊瑚甙粗品；

(5)加入70％乙醇进行加热溶解，然后加入水调节乙醇终浓度为30-40％，室温过夜再结晶，得桃叶珊瑚甙纯品。

在一个实施方案中，步骤2的过滤过程是纱布过滤、陶瓷膜过滤。其中，优选是三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤1次。

在一个实施方案中，步骤3中所述的乙醇溶液是用pH6.5左右的水与乙醇进行配制，其浓度为50％的乙醇溶液。

在一个实施方案中，步骤5的乙醇溶液的终浓度为35％。

技术效果：

1、本发明方法中所用的原料、设备均为常见的普通原料、设备，避免了工业化生产过程中对于昂贵原材料、仪器的依赖，大大地降低了生产成本；

2、杜仲叶产量高、价格低，来源方便，后续资源有保障。使用杜仲叶作为杜仲皮、杜仲籽的替代物，既大大提高了杜仲叶的利用效率，提高杜仲叶的附加值，又摆脱了对于杜仲籽的依赖，完全缓解了市场对杜仲籽的大量需求，同时又能对废弃杜仲叶充分利用。

3、本发明方法操作简单，仅使用树脂层析过滤、结晶再结晶技术，也不需要精密仪器或自动化设备，可在杜仲资源丰富的乡镇企业进行生产，这极大地降低了桃叶珊瑚甙的生产成本，简化了生产过程，确保规模化生产桃叶珊瑚甙。

4、本发明所用的试剂均为无毒、廉价、量产的化学试剂，整个过程中可利用成熟的试剂回收的常规技术，这极大地降低了向环境排放废弃物。

附图说明

图1：从杜仲叶中提取桃叶珊瑚甙的纯度HPLC曲线图，其中纵坐标表示峰面积，横坐标表示分离时间。

图2：桃叶珊瑚甙标准品的HPLC曲线图，其中纵坐标表示峰面积，横坐标表示分离时间。

具体实施方式

下面结合附图，用本发明的实施实例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限制本发明。

实施例1

称取100kg干杜仲叶并进行粉碎，加入70％乙醇溶液500L，加热至40℃提取90min后；三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤1次得滤液，将其减压浓缩至40L；将浓缩液用LSA-10大孔树脂吸附，并用50％乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液100L；将洗脱液再经浓缩至20L，室温过夜结晶得到桃叶珊瑚甙粗品3.54kg；加入70％乙醇溶液3L进行搅拌加热溶解，然后加入水调节乙醇终浓度为35％，室温过夜再结晶，得桃叶珊瑚甙纯品1.05kg。结果如图1所示。

实施例2

称取200kg干杜仲叶并进行粉碎，加入70％乙醇溶液800L，加热至40℃提取90min后；三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤1次得滤液，将其减压浓缩至55L；将浓缩液用LSA-10大孔树脂吸附，并用50％乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液120L；将洗脱液再经浓缩至25L，室温过夜结晶得到桃叶珊瑚甙粗品6.67kg；加入70％乙醇溶液5L进行搅拌加热溶解，然后加入水调节乙醇终浓度为35％，室温过夜再结晶，得桃叶珊瑚甙纯品2.36kg。

实施例3

称取300kg干杜仲叶并进行粉碎，加入70％乙醇溶液1000L，加热至40℃提取90min后；三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤1次得滤液，将其减压浓缩至70L；将浓缩液用LSA-10大孔树脂吸附，并用50％乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液140L；将洗脱液再经浓缩至30L，室温过夜结晶得到桃叶珊瑚甙粗品9.24kg；加入70％乙醇溶液6L进行搅拌加热溶解，然后加入水调节乙醇终浓度为35％，室温过夜再结晶，得桃叶珊瑚甙纯品3.59kg。

Claims

1.一种杜仲叶桃叶珊瑚甙的提取纯化方法，步骤包括：

(1)将干杜仲叶进行粉碎，并将杜仲叶、70%乙醇按重量(kg)/体积比(V)=1:3-5进行混合，加热至40℃提取90min；

(2)过滤除渣后，减压浓缩至原有体积的1/10-1/15；

(5)加入70%乙醇进行加热溶解，然后加入水调节乙醇终浓度为30-40%，室温过夜再结晶，得桃叶珊瑚甙纯品。

2.根据权利要求1的方法，其中步骤2中过滤过程是纱布过滤、陶瓷膜过滤，其中是三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤1次。

3.根据权利要求2的方法，其中步骤3中乙醇溶液是用pH6.5左右的水与乙醇进行配制，所配制溶液的浓度为50%的乙醇溶液。

4.根据权利要求3的方法，其中步骤5中乙醇溶液的终浓度为35%。