CN106083799A - 一种制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法,该方法以花生红衣为原料,先将其粉碎、过筛,石油醚去除脂类物质后,得到去脂花生红衣粉末;再用70%乙醇超声提取,得到原花青素粗提物;最后用大孔吸附树脂对原花青素粗提物进行纯化,用不同浓度乙醇溶液洗脱,将洗脱液旋转蒸发干燥后可以得到不同纯度且无黄曲霉毒素残留的原花青素产品。该方法工艺简单,无污染,易于工业化生产;既能保证提取得到的原花青素的品质还能很好的去除其中的黄曲霉毒素,提高了从花生红衣提取得到的原花青素后续应用的食品安全性,适合广泛应用推广。
Description
技术领域
本发明涉及原花青素制备领域,特别涉及一种制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法。
背景技术
花生衣中富含生物活性物质——多酚物质,具有很高的营养和利用价值。花生衣中多酚物质包括白藜芦醇、原花青素、酚酸等物质。而原花青素因其较强的清除自由基能力越来越受关注。原花青素由儿茶素、表儿茶素聚合而成,其主要的生理活性表现为能够清除人体内过剩的自由基,能提高人体的免疫能力,并具有较强的抗氧化能力,可作为防癌、防治心血管疾病药物的主要有效成分,可用作安全无毒的新型天然抗氧化剂。
根据中国粮油信息网提供的信息,2015/16年度全球花生产量预计达到4110万吨,花生衣约占花生质量的2.6%,因此,全世界有107万吨的花生衣产出。花生衣作为花生生产过程中价值极低的副产物,除了用作动物饲料外,大部分当作废弃物而造成资源浪费。少量花生衣作为中药材,可用于补血,市场价格为每公斤10~50元。如果能将花生衣充分利用,变废为宝,用来开发研制高附加值产品,产生的经济和社会效益将是巨大的,并且花生副产物中的活性成分含量丰富,功能成分较多,所以对花生副产物的综合利用,显得尤为重要。
花生红衣原料极易被黄曲霉毒素污染,在提取原花青素的过程中黄曲霉毒素会同时被提取出来。黄曲霉毒素是一类毒性极强的物质,具有强致癌性和强免疫抑制性,广泛分布在发霉食品及其制品中。欧盟、美国、日本和我国均对花生及其花生制品中黄曲霉毒素有明确的限量,所以在以花生红衣为原料提取原花青素时要考虑黄曲霉毒素的去除。申请公开号为CN 102532085 A的专利中公开了一种用次氯酸钠和氢氧化钠去除原花青素溶液中黄曲霉毒素的方法,虽然能把黄曲霉毒素去除,但这两种试剂可能会使原花青素发生化学反应而失活。不同纯度的原花青素在食品、保健品、药品以及化妆品等不同领域的应用,市场对其纯度的需求也不同。因此,寻求一种既能得到不同纯度的原花青素又能去除其中黄曲霉毒素的方法是现如今急需决的技术问题。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊,而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
鉴于上述和/或现有制备原花青素领域中存在的问题,提出了本发明。
因此,本发明的目的是解决现有技术中制备原花青素方法的不足,提供一种制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法。
为解决上述技术问题,本发明提供了如下技术方案:一种制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法,其特征在于,包括,粗提物的制备,将花生红衣粉碎,每千克加入8~12L的石油醚,并于25~35℃条件下脱脂4~6h,抽滤得残渣,去除残渣中的石油醚后,用体积分数为65~75%的乙醇水溶液进行超声提取,过滤,将滤液旋转蒸发至干,得到含有黄曲霉毒素的原花青素粗提物;原花青素的制备,将所述原花青素粗提物加水溶解后离心过滤,再经层析吸附分离并用水洗脱后,用质量浓度为10%、20%、40%和95%乙醇水溶液洗脱,洗脱流速为0.8~1.2mL/min,收集洗脱液旋转蒸发至干,得到花生红衣原花青素产品。
作为本发明所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法一种优选方案,其中:所述粗提物的制备,其中,所述乙醇水溶液,其添加量为每千克去除石油醚的残渣添加8~12L。
作为本发明所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法一种优选方案,其中:所述超声提取,其是在35~45℃、超声功率350~450W的条件下,超声提取25~35min。
作为本发明所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法一种优选方案,其中:所述粉粹,其是粉粹花生红衣,过30~50目筛。
作为本发明所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法一种优选方案,其中:所述旋转蒸发,其工艺参数为温度40~50℃、压力-0.10~-0.09MPa、转速70~90rpm。
作为本发明所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法一种优选方案,其中:所述原花青素的制备,其中,所述溶解后离心过滤,其是溶解后静置25~35min,离心8~12min,经0.45μm针式滤器过滤。
作为本发明所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法一种优选方案,其中:所述原花青素的制备,其中,所述乙醇水溶液洗脱,质量浓度为10%、20%、40%和95%乙醇水溶液的用量均为柱体积的4倍。
作为本发明所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法一种优选方案,其中:所述收集洗脱液包括,分别收集1~2.5BV、1~3BV、0.5~3.5BV与0~4BV范围内的20%和40%乙醇水溶液的洗脱液。
作为本发明所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法一种优选方案,其中:所述用水洗脱,其洗脱流速为0.8~1.2mL/min。
作为本发明所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法一种优选方案,其中:所述离心其转速为3500~4500r/min。
本发明的有益效果:
(1)本发明提供的制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法,制备的原花青素的纯度高,只会有少量的多糖等杂质,纯度最高可达99.5%;
(2)本发明通过溶解静置离心过滤等手段,并进一步优选完善其参数,使得原花青素产品水溶性较好,可更好地发挥其生理活性;
(3)本发明得到的原花青素产品聚合度低,主要为原花青素二聚体和三聚体,抗氧化活性高,易于被人体所吸收;
(4)本发明所用的大孔吸附树脂能有效地去除提取过程中的黄曲霉毒素,大孔树脂价格低廉且可再生使用,因此具有生产成本低、工艺简单、实用性强的特点;
(5)本发明通过控制各环节工艺参数与环节,达到制备的原花青素产品纯度可控的目的,制成的各个产品可用于食品、保健品、药品及化妆品等领域。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案,下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动性的前提下,还可以根据这些附图获得其它的附图。其中:
图1为本发明实施例1中的20%乙醇水溶液洗脱液的色谱图。
图2为本发明实施例1中的40%乙醇水溶液洗脱液的色谱图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂,下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明,但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施,本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广,因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次,此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例,也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
实施例1:
用微型粉碎机将花生红衣粉碎至过40目筛,每千克花生红衣采用10升石油醚去除脂类物质,于30℃恒温水浴锅中脱脂5h,抽滤,滤渣之余通风橱中去除石油醚,保存在干燥器中备用,每千克去脂花生红衣采用10升浓度为70%(v/v)的乙醇水溶液提取;在超声功率400W,超声温度40℃的条件下,超声提取30min,相同条件下提取三次。过滤得到的滤液在温度为40~50℃、压力为-0.10~-0.09MPa、转速为80rpm的条件下旋转蒸发至干,得到含有黄曲霉毒素的原花青素粗提物。
制备上样液:用去离子水溶解一定量的上述粗提物粉末,静置30min后,4000r/min下离心10min,过0.45μm针式滤器,再经过AB-8大孔吸附树脂层析吸附分离。在用不同浓度乙醇水溶液洗脱之前,先采用去离子水洗脱,洗掉亲水性杂质(如多糖,蛋白质等),洗脱流速为1mL/min,然后先后用4倍柱体积的10%乙醇水溶液、20%乙醇水溶液、40%乙醇水溶液、95%乙醇水溶液洗脱原花青素,洗脱流速为1.2mL/min,将10%和95%乙醇洗脱液弃掉,分别收集20%和40%乙醇水溶液的1~2.5BV洗脱液。
干燥:将洗脱液在温度为45℃、压力为-0.10MPa、转速为80rpm的条件下旋转蒸发至干得到不同纯度原花青素产品。20%、40%乙醇洗脱液得到的产品纯度分别为99.5%、89.6%,且产品中黄曲霉毒素均未检出。
实施例2:
用微型粉碎机将花生红衣粉碎至过30目筛,每千克花生红衣采用8升石油醚去除脂类物质,于35℃恒温水浴锅中脱脂4h,抽滤,滤渣之余通风橱中去除石油醚,保存在干燥器中备用。提取:每千克去脂花生红衣采用12升浓度为70%(v/v)的乙醇水溶液提取;在超声功率350W,超声温度45℃的条件下,超声提取25min,相同条件下提取三次。过滤得到的滤液在温度为40℃、压力为-0.09MPa、转速为75rpm的条件下旋转蒸发至干,得到含有黄曲霉毒素的原花青素粗提物。
制备上样液:用去离子水溶解一定量的粗提物粉末,静置35min后,4500r/min下离心8min,过0.45μm针式滤器,再经过AB-8大孔吸附树脂层析吸附分离。在用不同浓度乙醇水溶液洗脱之前先采用去离子水洗脱,洗掉亲水性杂质(如多糖,蛋白质等),洗脱流速为1.2mL/min。先后用4倍柱体积的10%乙醇水溶液、20%乙醇水溶液、40%乙醇水溶液、95%乙醇水溶液洗脱原花青素,洗脱流速为1.2mL/min,将10%和95%乙醇洗脱液弃掉,收集20%和40%乙醇水溶液的1~3BV洗脱液。
干燥:蒸发溶剂,得到不同纯度原花青素产品。20%、40%乙醇洗脱液得到的产品纯度分别为98.6%、87.5%,黄曲霉毒素均未检出。
实施例3:
粉碎:用微型粉碎机将花生红衣粉碎至过40目筛。
脱脂:每千克花生红衣采用10升石油醚去除脂类物质,于30℃恒温水浴锅中脱脂5h,抽滤,滤渣之余通风橱中去除石油醚,保存在干燥器中备用。
提取:每千克去脂花生红衣采用8升浓度为65%(v/v)的乙醇水溶液提取;在超声功率450W,超声温度35℃的条件下,超声提取35min,相同条件下提取三次。过滤得到的滤液在温度为45℃、压力为-0.09MPa、转速为85rpm的条件下旋转蒸发至干,得到含有黄曲霉毒素的原花青素粗提物。
制备上样液:用去离子水溶解一定量的粗提物粉末,静置35min后,4500r/min下离心9min,过0.45μm针式滤器,再经过AB-8大孔吸附树脂层析吸附分离。在用不同浓度乙醇水溶液洗脱之前先采用去离子水洗脱,洗掉亲水性杂质(如多糖,蛋白质等),洗脱流速为0.8mL/min。
先后用4倍柱体积的10%乙醇水溶液、20%乙醇水溶液、40%乙醇水溶液、95%乙醇水溶液洗脱原花青素,洗脱流速为1.2mL/min,将10%和95%乙醇洗脱液弃掉,收集20%和40%乙醇水溶液的0.5~3.5BV洗脱液。
干燥:蒸发溶剂,得到不同纯度原花青素产品。20%、40%乙醇洗脱液得到的产品纯度分别为96.2%、85.6%,黄曲霉毒素均未检出。
实施例4:
粉碎:用微型粉碎机将花生红衣粉碎至过40目筛。
脱脂:每千克花生红衣采用12升石油醚去除脂类物质,于35℃恒温水浴锅中脱脂6h,抽滤,滤渣之余通风橱中去除石油醚,保存在干燥器中备用。
提取:每千克去脂花生红衣采用8升浓度为75%(v/v)的乙醇水溶液提取;在超声功率450W,超声温度35℃的条件下,超声提取35min,相同条件下提取三次。过滤得到的滤液在温度为45℃、压力为-0.09MPa、转速为85rpm的条件下旋转蒸发至干,得到含有黄曲霉毒素的原花青素粗提物。
制备上样液:用去离子水溶解一定量的粗提物粉末,静置25min后,4500r/min下离心12min,过0.45μm针式滤器,再经过AB-8大孔吸附树脂层析吸附分离。
在用不同浓度乙醇水溶液洗脱之前先采用去离子水洗脱,洗掉亲水性杂质(如多糖,蛋白质等),洗脱流速为1.2mL/min.先后用4倍柱体积的10%乙醇水溶液、20%乙醇水溶液、40%乙醇水溶液、95%乙醇水溶液洗脱原花青素,洗脱流速为1.2mL/min,将10%和95%乙醇洗脱液弃掉,收集20%和40%乙醇水溶液的0~4BV洗脱液。
干燥:蒸发溶剂,得到不同纯度原花青素产品。20%、40%乙醇洗脱液得到的产品纯度分别为93.8%、83.2%,黄曲霉毒素均未检出。
由此可见,本发明提供的一种制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法,制得的原花青素的纯度高,最高可达99.5%;利用大孔吸附树脂能有效地去除粗提物中的黄曲霉毒素,并且所用的大孔树脂价格低廉且可再生使用,因此具有生产成本低、工艺简单、实用性强的特点;收集不同柱体积范围的洗脱液得到的原花青素纯度不同,可达到制备的原花青素产品纯度可控的效果,制成的各个产品可用于食品、保健品、药品及化妆品等领域。
应说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的精神和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (10)
1.一种制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法,其特征在于:包括,
粗提物的制备:将花生红衣粉碎,每千克加入8~12L的石油醚,并于25~35℃条件下脱脂4~6h,抽滤得残渣,去除残渣中的石油醚后,用体积分数为65~75%的乙醇水溶液进行超声提取,过滤,将滤液旋转蒸发至干,得到含有黄曲霉毒素的原花青素粗提物;
原花青素的制备:将所述原花青素粗提物加水溶解后离心过滤,再经层析吸附分离并用水洗脱后,用质量浓度为10%、20%、40%和95%乙醇水溶液洗脱,洗脱流速为0.8~1.2mL/min,收集洗脱液旋转蒸发至干,得到花生红衣原花青素产品。
2.根据权利要求1所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法,其特征在于:所述粗提物的制备,其中,所述乙醇水溶液,其添加量为每千克去除石油醚的残渣添加8~12L。
3.根据权利要求1或2所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法,其特征在于:所述超声提取,其是在35~45℃、超声功率350~450W的条件下,超声提取25~35min。
4.根据权利要求1所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法,其特征在于:所述粉粹,其是粉粹花生红衣,过30~50目筛。
5.根据权利要求1所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法,其特征在于:所述旋转蒸发,其工艺参数为温度40~50℃、压力-0.10~-0.09MPa、转速70~90rpm。
6.根据权利要求1、2、4或5中任一项所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法,其特征在于:所述原花青素的制备,其中,所述溶解后离心过滤,其是溶解后静置25~35min,离心8~12min,经0.45μm针式滤器过滤。
7.根据权利要求1、2、4或5中任一项所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法,其特征在于:所述原花青素的制备,其中,所述乙醇水溶液洗脱,质量浓度为10%、20%、40%和95%乙醇水溶液的用量均为柱体积的4倍。
8.根据权利要求1、2、4或5中任一项所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法,其特征在于:所述收集洗脱液包括,分别收集1~2.5BV、1~3BV、0.5~3.5BV与0~4BV范围内的20%和40%乙醇水溶液的洗脱液。
9.根据权利要求1或2所述制备不同纯度且无黄曲霉毒素的原花青素的方法,其特征在于:所述用水洗脱,其洗脱流速为0.8~1.2mL/min。
10.根据权利要求1、2、4或5中任一项所述不同纯度花生红衣原花青素的制备方法,其特征在于:所述离心其转速为3500~4500r/min。
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