CN110898095A - 一种金银花精制物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种金银花精制物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提出的一种金银花精制物及其制备方法和应用，制备方法步骤如下：a：提取和浓缩干燥：金银花煎煮过滤后得提取液，干燥后得粗提干燥粉；b：精纯：溶解粗提干燥粉后，通过滤膜去除颗粒物，获得澄清液，采用离子交换色谱技术对澄清液进行精细纯化，将获得的精制液干燥，得金银花精制物。用于制备辅助抗炎治疗的药物。在本申请中,采用离子交换色谱技术制备的金银花精制物，能显著提高精制物的纯度及药剂所需的有效成分含量，节约了金银花的药材成本，有利于工业生产制备，确保了工艺的稳定性和安全性，使金银花药剂尽可能的发挥其功效。该制备方法制得的金银花精制物中的有效成分，能更好的在用其制成的辅助抗炎治疗的药物中发挥功效。

Description

一种金银花精制物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及中药制备领域，尤其涉及一种金银花精制物及其制备方法和应用。
背景技术
金银花(Lonicera japonica Thunb.)为忍冬科植物的花蕾，药用历史悠久，是中医临床用药之一，具有清热解毒、保肝利胆等功效，主要用于治疗呼吸道感染、热病、疮疡、泻痢、头痛、咽痛等多种疾病。金银花药材的植物来源十分广泛，河南、山东是其传统的地道产地和栽培地，产量以山东省最丰，品质则以河南省最优。金银花的药用价值及用途广泛，社会需求量很大，到目前为止，约有80％的清热解毒杀菌类的中药处方中含有金银花。几千年传统经验及近代药理实验和临床应用都证明金银花对于多种病菌有较强的抗菌作用和极好的治疗效果。
金银花药材中的化学成分主要包括有机酸类、黄酮类、挥发油类、萜类、糖类和微量元素，而提取物中主要的化学成分为有机酸类、糖类、黄酮类和萜类。绿原酸是金银花提取物主要的药效成份之一，提取物中绿原酸含量的高低直接影响提取物的疗效，因而金银花中绿原酸提取方法的研究有着十分重要的意义。
目前金银花提取制备方法主要有：水提法、水提醇沉法、超声波提取法、酶解法、高速逆流色谱提取法、大孔树脂分离技术、结晶与重结晶法等，但由于技术或设备限制，目前尚无法应用于工业化生产。水提法、水提醇沉法、大孔树脂分离技术是工业上提取应用较多的方法，但是这几种方法有着共同的缺陷就是提取效率一般，且提取物中所含的鞣质过多，无法高效的制备高绿原酸含量的金银花提取物和工业生产应用受限。为了克服现有技术的缺陷，我们急迫需要开发一种产率高、能耗低、操作简单易于工业化生产的金银花提取制备工艺。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种金银花精制物及其制备方法和应用，能有效解决目前金银花精制物制备工艺中原料的生物利用度差、金银花精制物中绿原酸含量低的问题，避免大量有机溶剂的使用造成环境污染，降低生产成本。
本发明的另一目的在于提供增强抗炎治疗效果的金银花中药制剂的制备方法，该方法简便可行、符合口服药物体内吸收过程，最终制得的中药制剂稳定性好，疗效可靠显著。
为了实现上述目的，本发明提出一种金银花精制物的制备方法，包括以下步骤：
a：提取和浓缩干燥：将金银花预处理，加水进行多次煎煮，过滤药渣，合并提取液，浓缩干燥后，获得粗提干燥粉；
b：精纯：加水溶解所述粗提干燥粉后，通过滤膜去除颗粒物，获得澄清液，采用离子交换色谱技术对所述澄清液进行精细纯化，收集柱流穿液或洗脱液，即得精制液；将所述精制液浓缩干燥，获得粉末状的金银花精制物。
进一步地，在所述的金银花精制物的制备方法中，在步骤a中，金银花预处理步骤依次包括洗净、干燥、粉碎。
进一步地，在所述的金银花精制物的制备方法中，在步骤a中，煎煮次数为两次，第一次煎煮0.5～1h，第二次煎煮0.3～0.5h。
进一步地，在所述的金银花精制物的制备方法中，在步骤b中，所述离子交换色谱技术所用的分离材料的基质为琼脂糖、硅胶、聚苯乙烯或聚丙烯酸酯，所述基质的粒径为40-100μm；配基的结构式可为
Figure BDA0001801936620000031
Figure BDA0001801936620000032
所述离子交换色谱技术中的上样体积为柱体积的10-50倍，所述离子交换色谱技术中色谱操作的上样和洗脱流速均为150-500cm/h；所述离子交换色谱技术中色谱纯化的方式为流穿模式或结合模式。
进一步地，在所述的金银花精制物的制备方法中，在步骤b中，所述浓缩干燥的方式为微波干燥、冷冻干燥、真空干燥或喷雾干燥。
进一步地，在所述的金银花精制物的制备方法中，在步骤a和b中，所述水为纯化水、蒸馏水或注射用水。
本发明还提供一种金银花精制物，所述金银花精制物的浊度浅于或等于0.5级号浊度标准液的浊度，由上述制备方法制备得到。
进一步地，在所述的金银花精制物中，粉末状的所述金银花精制物极易溶于水，且溶解度不小于0.5g/ml。
本发明还提供一种金银花精制物在制备辅助抗炎治疗的药物中的应用。
进一步地，在所述的金银花精制物的应用中，在制备辅助抗炎治疗的药物时，所述金银花精制物加入辅料，以制备成临床制剂。
与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：采用离子交换色谱技术制备的金银花精制物，能显著提高精制物的纯度及药剂所需的有效成分含量，该制备方法节约了金银花的药材成本，有利于工业生产制备，并确保了工艺的稳定性和安全性，使金银花药剂尽可能的发挥其功效。该制备方法制得的金银花精制物中的有效成分，能更好的在用其制成的辅助抗炎治疗的药物中发挥功效。
具体地，采用滤膜及离子交换色谱技术相结合的方法，可有效去除脂类、色素、重金属、农残等无效成分，同时避免有机试剂的使用、减少工业生产污染；更重要的是保留了活性成分，能最大化提高金银花的药用价值。
本发明的优点如下：
(1)本发明的制备方法，其整个制备过程可在室温下进行，减少了能源的消耗，同时避免了目标组分的降解，显著提高精制终产品的质量和收率。
(2)本发明方法采用的离子交换色谱分离技术，可以有效的去除农药残留、重金属、内毒素等有毒有害物质，实现金银花精制物的高效纯化制备。
(3)本发明的制备方法，其整个制备过程操作简单，不需要使用毒有害的有机溶剂，成本低，可用于大规模生产。
(4)本发明先采用浓缩干燥、粉末溶解后过滤等预处理方法，不但可以减小后续处理的难度，而且可以保护离子交换色谱技术所用的分离材料不受颗粒等杂质的影响，延长分离材料的使用寿命，更适于工业化生产。
附图说明
图1为本发明中金银花精制物制备方法中提取液的HPLC分析色谱图；
图2为本发明中金银花精制物制备方法中精制液的HPLC分析色谱图。
具体实施方式
下面将结合示意图对本发明的金银花精制物及其制备方法和应用进行更详细的描述，其中表示了本发明的优选实施例，应该理解本领域技术人员可以修改在此描述的本发明，而仍然实现本发明的有利效果。因此，下列描述应当被理解为对于本领域技术人员的广泛知道，而并不作为对本发明的限制。
为了清楚，不描述实际实施例的全部特征。在下列描述中，不详细描述公知的功能和结构，因为它们会使本发明由于不必要的细节而混乱。应当认为在任何实际实施例的开发中，必须做出大量实施细节以实现开发者的特定目标，例如按照有关系统或有关商业的限制，由一个实施例改变为另一个实施例。另外，应当认为这种开发工作可能是复杂和耗费时间的，但是对于本领域技术人员来说仅仅是常规工作。
在本发明中，除另有明确规定和限定，如有术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或隐含指明技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”特征可以明示或者隐含包括一个或者多个该特征，在本发明描述中，“至少”的含义是一个或一个以上，除非另有明确具体的限定。
在下列段落中参照附图以举例方式更具体地描述本发明。根据下面说明，本发明的优点和特征将更清楚。需说明的是，附图均采用非常简化的形式且均使用非精准的比例，仅用以方便、明晰地辅助说明本发明实施例的目的。
实施例一
本发明提出一种金银花精制物的制备方法，具体步骤如下：
称取预处理后的金银花500g，加水10L放入煎药机中煮(120℃)0.5h，纱布过滤，药渣加水5L再次放入煎药机中煮(120℃)0.3h，纱布过滤，合并提取液，并经喷雾干燥后，获得粗提干燥粉。提取液的HPLC分析色谱图，如图1所示。
80g粗提干燥粉通过平衡缓冲液进行溶解，并使用0.22μm滤膜去除颗粒性不溶物。将Q Sepharose 6FF离子交换层析柱(柱体积50mL)连接到层析系统上，设计流速16ml/min(200cm/h)，将溶解过滤后的澄清液通过系统泵过平衡好的Q柱，采用50％乙醇(1％磷酸)洗脱目标组分，收集洗脱馏分进行HPLC分析，即为精制液。将精制液放置于-40℃冰箱冷冻5h，后放入冻干机中，抽真空干燥直至水分全部去除，收集冻干粉末，即为金银花精制物的成品粉末。精制液的HPLC分析色谱图，如图2所示。
实施例二
本发明提出一种金银花精制物的制备方法，具体步骤如下：
称取预处理后的金银花500g，加水5L放入煎药机中煮(120℃)0.5h，纱布过滤，药渣加水2.5L再次放入煎药机中煮(120℃)0.3h，纱布过滤，合并提取液，并经喷雾干燥后，获得粗提干燥粉。提取液的HPLC分析色谱图，如图1所示。
70g粗提干燥粉通过平衡缓冲液进行溶解，并使用0.22μm滤膜去除颗粒性不溶物。将WorkBeads 100Q离子交换层析柱(柱体积50mL)连接到层析系统上，设计流速25ml/min(300cm/h)，将溶解过滤后的澄清液通过系统泵过平衡好的Q柱，采用50％乙醇(1％甲酸)洗脱目标组分，收集洗脱馏分进行HPLC分析，即为精制液。将精制液放置于-40℃冰箱冷冻5h，后放入离心浓缩仪中，抽真空干燥直至水分全部去除，收集干燥粉末，即为金银花精制物的成品粉末。精制液的HPLC分析色谱图，如图2所示。
实施例三
本发明提出一种金银花精制物的制备方法，具体步骤如下：
称取预处理后的金银花500g，加水10L放入煎药机中煮(120℃)1h，纱布过滤，药渣加水5L再次放入煎药机中煮(120℃)0.5h，纱布过滤，合并提取液，并经喷雾干燥后，获得粗提干燥粉。提取液的HPLC分析色谱图，如图1所示。
100g粗提干燥粉通过平衡缓冲液进行溶解，并使用0.22μm滤膜去除颗粒性不溶物。将WorkBeads 100S离子交换层析柱(柱体积50mL)连接到层析系统上，设计流速25ml/min(300cm/h)，将溶解过滤后的澄清液通过系统泵过平衡好的S柱，采用0.5M NaOH洗脱杂质再生色谱柱，收集穿出馏分进行HPLC分析，穿出液即为精制液。将精制液放置于-40℃冰箱冷冻5h，后放入冻干机中，抽真空干燥直至水分全部去除，收集冻干粉末，即为金银花精制物的成品粉末。精制液的HPLC分析色谱图，如图2所示。
实施例四
本发明提出一种金银花精制物的制备方法，具体步骤如下：
称取预处理后的金银花500g，加水10L放入煎药机中煮(120℃)1h，纱布过滤，药渣加水5L再次放入煎药机中煮(120℃)0.5h，纱布过滤，合并提取液，并经喷雾干燥后，获得粗提干燥粉。提取液的HPLC分析色谱图，如图1所示。
60g粗提干燥粉通过平衡缓冲液进行溶解，并使用0.22μm滤膜去除颗粒性不溶物。将DEAE Sepharose 6FF离子交换层析柱(柱体积50mL)连接到层析系统上，设计流速16ml/min(200cm/h)，将溶解过滤后的澄清液通过系统泵过平衡好的DEAE柱，采用30％乙醇(1％甲酸)洗脱目标组分，收集洗脱馏分进行HPLC分析，即为精制液。将精制液放置于-40℃冰箱冷冻5h，后放入冻干机中，抽真空干燥直至水分全部去除，收集冻干粉末，即为金银花精制物的成品粉末。精制液的HPLC分析色谱图，如图2所示。
实施例五
本发明提出一种金银花精制物的制备方法，具体步骤如下：
称取预处理后的金银花500g，加水10L放入煎药机中煮(120℃)1h，纱布过滤，药渣加水5L再次放入煎药机中煮(120℃)0.5h，纱布过滤，合并提取液，并经喷雾干燥后，获得粗提干燥粉。提取液的HPLC分析色谱图，如图1所示。
90g粗提干燥粉通过平衡缓冲液进行溶解，并使用0.22μm滤膜去除颗粒性不溶物。将WorkBeads 100 TREN离子交换层析柱(柱体积50mL)连接到层析系统上，设计流速25ml/min(300cm/h)，将溶解过滤后的澄清液通过系统泵过平衡好的Q柱，采用50％乙醇(1％甲酸)洗脱目标组分，收集洗脱馏分进行HPLC分析，即为精制液。将精制液通过减压干燥的方式进行干燥，直至水分全部去除，收集干燥粉末，即为金银花精制物的成品粉末。精制液的HPLC分析色谱图，如图2所示。
上述各实施例中，HPLC分析条件如下：
(1)色谱柱填料：Unitary C18(5μm，4.6*150mm)；
(2)流动相A：0.1％磷酸水，流动相B：0.1％磷酸乙腈；
(3)流速：2ml/min；
(4)梯度条件：0-5min 10％B相，5-15min从10-25％B相，10-15min从25-90％B相。
(5)柱温：40℃；
(6)检测波长：325nm；
(7)进样体积：5μl。
本发明还提出一种金银花精制物，原料主要组成为金银花，经上述各实施例中的制备方法精制，步骤b中获得的精制物相比于步骤a中获得的粗提干燥粉相较的粉末色泽均匀，表面光洁，质地细腻；精制物加纯化水后迅速溶解，且其溶液澄清透亮，而粗提干燥粉溶解速度缓慢且溶液浑浊。具体地，精制物极易溶于水且溶解度不小于0.5g/ml。步骤d中获得的精制液的外观澄清透亮，浊度浅于或等于0.5级号浊度标准液的浊度。
如图1至2所示，各步骤中的HPLC分析结果表明，纯化前后样品的分析谱图中目标峰没有显著变化，根据总体积、积分峰面积及重量计算得知，纯化后金银花精制物中主要成分的含量没有明显下降，绿原酸类物质收率达90％以上，纯度可达60％以上。上述实验结构表明了，采用本发明中金银花精制物的制备方法制备，获得的金银花精制物具有高收率和高纯度的优势。
本发明还提出一种金银花精制物的应用，在制备辅助抗炎治疗的药物时，金银花精制物无论是否加入辅料，均可制备成有效的临床制剂，应用范围广。
综上，在本发明中，提出的金银花精制物的制备方法，采用离子交换色谱技术制备的金银花精制物，能显著提高精制物的纯度及药剂所需的有效成分含量，该制备方法节约了金银花的药材成本，有利于工业生产制备，并确保了工艺的稳定性和安全性，使金银花药剂尽可能的发挥其功效。该制备方法制得的金银花精制物中的有效成分，能更好的在用其制成的辅助抗炎治疗的药物中发挥功效。
具体地，采用滤膜及离子交换色谱技术相结合的方法，可有效去除脂类、色素、重金属、农残等无效成分，同时避免有机试剂的使用、减少工业生产污染；更重要的是保留了活性成分，能最大化提高金银花的药用价值。
本发明的优点如下：
(1)本发明的制备方法，其整个制备过程可在室温下进行，减少了能源的消耗，同时避免了目标组分的降解，显著提高精制终产品的质量和收率。
(2)本发明方法采用的离子交换色谱分离技术，可以有效的去除农药残留、重金属、内毒素等有毒有害物质，实现金银花精制物的高效纯化制备。
(3)本发明的制备方法，其整个制备过程操作简单，不需要使用毒有害的有机溶剂，成本低，可用于大规模生产。
(4)本发明先采用浓缩干燥、粉末溶解后过滤等预处理方法，不但可以减小后续处理的难度，而且可以保护离子交换色谱技术所用的分离材料不受颗粒等杂质的影响，延长分离材料的使用寿命，更适于工业化生产。
上述仅为本发明的优选实施例而已，并不对本发明起到任何限制作用。任何所属技术领域的技术人员，在不脱离本发明的技术方案的范围内，对本发明揭露的技术方案和技术内容做任何形式的等同替换或修改等变动，均属未脱离本发明的技术方案的内容，仍属于本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种金银花精制物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
a：提取和浓缩干燥：将金银花预处理，加水进行多次煎煮，过滤药渣，合并提取液，浓缩干燥后，获得粗提干燥粉；
b：精纯：加水溶解所述粗提干燥粉后，通过滤膜去除颗粒物，获得澄清液，采用离子交换色谱技术对所述澄清液进行精细纯化，收集柱流穿液或洗脱液，即得精制液；将所述精制液浓缩干燥，获得粉末状的金银花精制物。
2.根据权利要求1所述的金银花精制物的制备方法，其特征在于，在步骤a中，金银花预处理步骤依次包括洗净、干燥、粉碎。
3.根据权利要求1所述的金银花精制物的制备方法，其特征在于，在步骤a中，煎煮次数为两次，第一次煎煮0.5～1h，第二次煎煮0.3～0.5h。
4.根据权利要求1所述的金银花精制物的制备方法，其特征在于，在步骤b中，所述离子交换色谱技术所用的分离材料的基质为琼脂糖、硅胶、聚苯乙烯或聚丙烯酸酯，所述基质的粒径为40-100μm；配基的结构式可为
Figure FDA0001801936610000011
Figure FDA0001801936610000012
所述离子交换色谱技术中的上样体积为柱体积的10-50倍，所述离子交换色谱技术中色谱操作的上样和洗脱流速均为150-500cm/h；所述离子交换色谱技术中色谱纯化的方式为流穿模式或结合模式。
5.根据权利要求1所述的金银花精制物的制备方法，其特征在于，在步骤b中，所述浓缩干燥的方式为微波干燥、冷冻干燥、真空干燥或喷雾干燥。
6.根据权利要求1至5中任意一项所述的金银花精制物的制备方法，其特征在于，在步骤a和b中，所述水为纯化水、蒸馏水或注射用水。
7.一种金银花精制物，其特征在于，所述金银花精制物的浊度浅于或等于0.5级号浊度标准液的浊度，由权利要求1至6中任一项所述的制备方法制备得到。
8.根据权利要求7所述的金银花精制物，其特征在于，粉末状的所述金银花精制物极易溶于水，且溶解度不小于0.5g/ml。
9.一种根据权利要求7或8所述的金银花精制物在制备辅助抗炎治疗的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的金银花精制物在制备辅助抗炎治疗的药物中的应用，其特征在于，在制备辅助抗炎治疗的药物时，所述金银花精制物加入辅料，以制备成临床制剂。
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CN1398845A (zh) * 2002-07-10 2003-02-26 刘斌 大孔树脂吸附提取高含量绿原酸的工艺方法
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杨俊杰等: "《中药化学实用技术》", 31 January 2016, 重庆大学出版社 *

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