CN101200489B

CN101200489B - 丹参酮ⅱa磺酸钠的精制方法

Info

Publication number: CN101200489B
Application number: CN2006100952965A
Authority: CN
Inventors: 刘永红; 王小霞; 谭俊杰; 刘平
Original assignee: CHONGQING YAOYOU PHARMACEUTICAL Co Ltd
Current assignee: CHONGQING YAOYOU PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date: 2006-12-15
Filing date: 2006-12-15
Publication date: 2011-05-25
Anticipated expiration: 2026-12-15
Also published as: CN101200489A

Abstract

本发明涉及一种丹参酮II_A磺酸钠的精制方法，包括的步骤为：a)将待纯化的丹参酮II_A磺酸钠粗品加入由有机溶剂与水配制而成混合溶剂中，加热至40～60℃，搅拌使溶解，过滤除去不溶性微粒；b)滤液缓慢降温至0～30℃，析晶，过滤；c)减压干燥即得高纯度的丹参酮II_A磺酸钠。经HPLC分析，本发明制得的丹参酮II_A磺酸钠含量可达99.5％，质量可达到注射用原料药纯度要求。本发明方法简便，易于操作，精制成本低，适于工业化大生产。

Description

丹参酮IIA磺酸钠的精制方法

技术领域

发明涉及丹参酮II_A磺酸钠原料药的精制方法。

背景技术

丹参(Salvia miltiorrhiza Bye)是我国传统常用中药材，应用历史悠久，有近2000年的应用历史，是国内外药材市场的重要商品。本品为唇形科植物丹参(Salviamiltiorr hiza Bye)的干燥根及根茎。为《中华人民共和国药典》2005年版第一部收载。其应用始载于东汉《神农本草经》。主要成分有：呋喃并菲醌类色素丹参酮I、丹参酮II_A、丹参酮III、隐丹参酮、丹参酸、丹参酸甲酯、异丹参酮I、异丹参酮II、异丹参酮、丹参新酮、丹参醇I和丹参醇II，此外，尚含维生素E、鼠尾草酚、二氢丹参酮I、丹参新醌甲、丹参新醇乙和丹参新醌丙以及β-谷甾醇、替吉吉宁、原儿茶醛和异黄酮等。其功能与主治：祛瘀止痛，活血通经，清心除烦，可用于月经不调、经闭痛经、癥瘕积聚、胸腹刺痛、热痹疼痛、疮疡肿痛、心烦不眠、肝脾肿大、心绞痛等。其制剂在临床上应用广泛。可是目前丹参药材中的活性成分二萜醌类化合物丹参酮II_A的含量大部分只有0.05％～0.15％。丹参酮II_A磺酸钠，是从丹参中分离的丹参酮II_A经磺化而得的一种水溶性物质，与丹参相比，增加了药物的水溶性，同时也增强了疗效，其结构式如下所示：

在现有技术中，丹参酮II_A的来源主要有两大类：全合成路线和植物提取方法。其中，全合成路线的方法有：沈家祥、张琢、乔明以哌啶与丙醛为原料经四步反应制备，即“中药丹参有效成分—丹参酮II_A的新的全合成方法”(药学学报，1988，23(7)，p545～548)和Yoshinobu Inouye and Hiroshi Kakisawa，“Total syntheses ofTanshinone-I，Tanshinone-II and cryptotanshinone”(Bulietin of the Chemical Societyof Japan，1969，42，p3318-3323)。其从植物丹参提取丹参酮II_A的方法主要又有两大类：第一类为常规的溶剂(包括水)萃取法.该方法较为传统，发表了大量的文献如刘惠茹、唐家福、张良前的“均匀法优选丹参回流提取工艺”(华西药学杂志，2000，15(2)，p153)；郭增军、王开、苏纪兰等“丹参提取工艺的实验研究”(西北药学杂志，2002，17(2)，p62～63)；江华、李兆明的“丹参片提取工艺的研究”(华西药学杂志，2002，17(5)，p391)；刘敏彦、王超、王玉峰的“丹参中丹参酮II_A层析条件改进分析”(中成药，2001，23(7)，p527)；钱士辉、鞠建明、朱玲英的“丹参提取工艺的实验研究”(中国野生植物资源，1999，18(1)，p41～42)；曹明成、沈善、潘纯发的“丹参提取工艺的实验研究”(中成药，1996，18(3)，p4～5)；时延增、张玲、李宝国的“不同醇沉工艺对丹参中丹参酮II_A含量的影响”(时珍国药研究，1996，7(4)，p211～212)；张玲、于宗渊、徐新刚等“丹参水醇法提取工艺的研究”(中成药，1995，17(5)，p1～3)。也有浙江大学的“亚临界水提取中药丹参中脂溶性成分的方法”(CN200510061998)，该发明具有接近传统中国水煮中药特点，不需要有机溶剂提取脂溶性成分，科学先进、过程清洁、环境友好、提取速度快，效率高的优点，但亚临界水必须在5-30MPa的高压条件下，工业化困难。第二类为超临界CO₂流体萃取法。近年来这方面的研究成果较多，发表了大量的文献和申请了大量的专利，如苏子仁、陈建南、刘中秋等的“应用SFE-CO₂提取丹参脂溶性有效成分工艺研究”(中成药，1998，20(8)，p1～2)；查道成、贾书阳的“提取丹参酮II_A的工艺探讨”(时珍国医国药，2002，13(9)，p517)；张军的一种丹参药材中有效部位的制剂及其制备方法(申请号CN200310113454.1)；化学工业部西南化工研究设计院的“中药丹参中活性成分超临界二氧化碳萃取工艺方法”(申请号CN99117379.1)；中国科学院地球化学研究所的“一种超临界二氧化碳萃取精制丹参药材中丹参酮II_A的方法”(申请号CN03117836.7)。但由于超临界CO₂流体萃取设备投资较大，工业化应用成本较高。

目前技术较为成熟并已有批量生产的丹参酮II_A要是从丹参提取所得，由于从丹参提取所得的丹参酮II_A中含有丹参酮I、丹参酮III、隐丹参酮、丹参酸、丹参酸甲酯、异丹参酮I、异丹参酮II、异丹参酮、丹参新酮、丹参醇I和丹参醇II等结构相似的成分，经磺化所得的丹参酮II_A磺酸钠中仍有一定浓度的杂质，同时这些杂质均有呋喃并菲醌结构，紫外吸收波长相近，往往导致丹参酮II_A磺酸钠的标示含量偏高，增大了用药风险，降低了药品的安全性。在我国已获注册登记的剂型有上海第一生化的丹参酮II_A磺酸钠注射液以及丹参酮II_A磺酸钠的冻干粉针剂，均为注射用药，因此丹参酮II_A磺酸钠的纯度至关重要。

在已公开的文献和技术中，丹参酮II_A磺酸钠的提纯有两条思路：第一类提纯方法：对丹参酮II_A进行精制。可以采用乙醇、甲醇、丙酮等溶剂进行重结晶，溶解时温度较高，如倪力军、史晓浩、高秀蛟等“提取时间、溶剂对丹参提取物质量的影响研究”(中成药，2003，25(10)，p780～782)；同时丹参酮II_A不是很稳定，光、热、pH值对其均有影响，所以该方法精制效果不明显。现在比较成熟的技术是采用柱层析的方法，如张军的“一种丹参药材中有效部位的制剂及其制备方法”(申请号CN200310113454.1)、天津天士力现代中药资源有限公司的“一种丹参酮的提取方法”(申请号CN200410018760.1)和首都师范大学2001级岳敏的“大孔吸附树脂在富集分离中药有效部位工艺中的应用”硕士论文均采用大孔吸附树脂提纯，但是样品的纯度都不高；另如中山大学古练权的“用于预防和治疗动脉硬化的丹参酮II_A”(WO2004058245)：进行以硅胶为载体，含1％-10％乙酸乙酯的石油醚/乙酸乙酯混合溶液的梯度洗脱的柱层析分离；也有人对乙酸乙酯萃取法，醇沉法，大孔吸附树脂法等精制工艺进行比较研究，如黑龙江中医药大学2001级研究生杜松的“心肌康注射液中丹参的精制工艺及指纹图谱的初步研究”硕士论文。目前比较先进的纯化技术主要为采用制备高速逆流色谱仪：如方亮、戈延茹、郭建鹏等的“用均匀设计法优化丹参提取工艺”(延边大学医学学报，1998，21(2)，p93～95)；香港生物科技研究院有限公司的“应用高速逆流色谱分离纯化丹参酮的方法”(申请号CN00120986.8)，但丹参酮II_A的纯度只能达到95％；而北京天纯维通生物技术有限公司的“一种分离纯化丹参酮的方法”(申请号CN01120116.9)，丹参酮II_A的纯度也只能达到98％。但是高速逆流色谱精制方法的共同问题是成本过高，难以工业化生产。

第二类精制方法：对丹参酮II_A磺酸钠进行精制。如：现行的工业技术主要采用乙醇回流冷却重结晶的方法，其产品采用HPLC方法测定纯度只能达到93％左右(用紫外测定可以达到98.5％)；另外杨承鸿、金波和阮运昌在“超临界CO₂萃取法去除丹参酮磺酸盐中杂质的研究”(中药材，2006，2，p193-194)中，回收率为97.8％，未见精制后的含量，同时超临界CO₂萃取需用专用的设备，生产成本较高。

中药有效成分的纯化一直是一个难点问题，如何保证注射剂中药活性成分的纯度是中药发展的关键因素，若能采取简便易行的精制方法更有意义。常温下，丹参酮II_A磺酸钠在一般有机溶剂(如甲醇、乙醇、丙酮等)和极性溶剂(如水)的溶解度均很小，即使升温至回流温度如70-80℃，溶解度稍有增加，但采用单一溶剂进行重结晶效果不明显，溶剂使用量大，精制后样品经HPLC分析，含量只能在93-97％左右，纯度不能满足注射剂的要求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种丹参酮II_A磺酸钠的精制方法，可得到纯度较高的符合注射用原料药的要求。

考虑丹参酮II_A基团的脂溶性和磺酸钠基团的水溶性性，本发明拟采用混合溶剂予以重结晶的方法。精制后的丹参酮II_A磺酸钠，含量经HPLC分析，可以达到99.5％以上。

本发明的目的是通过这样的技术方案实现的，即一种丹参酮II_A磺酸钠的精制方法，包括如下步骤：

a)将待纯化的丹参酮II_A磺酸钠粗品在由有机溶剂与水配制而成混合溶剂中，加热至40℃～60℃搅拌溶解为丹参酮II_A磺酸钠溶液，过滤除去不溶性微粒；

b)滤液缓慢降温至0℃～30℃，析晶，过滤；

c)减压干燥即得丹参酮II_A磺酸钠。

在本发明中，丹参酮II_A磺酸钠粗品可采用任意方法制备，可购买从植物丹参中提取生产的丹参酮II_A磺化而得的丹参酮II_A磺酸钠或全合成所得的丹参酮II_A磺酸钠。

步骤a)中，所述丹参酮II_A磺酸钠粗品与混合溶剂的质量体积比为1:2～20；加热温度为40℃～60℃，优选45℃～55℃。

溶解时的混合溶剂是本发明的关键，混合溶剂为有机溶剂与水配制而成，混合溶剂中的有机溶剂为醇类或/和酮类溶剂，其中醇类选自甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇；酮类选自丙酮、丁酮、甲基异丁基酮等。

上述步骤b)中析晶温度为0℃～30℃，降温速度对产品的质量有较大影响，具体的降温速度为：60℃～30℃范围内为0.1℃～0.4℃/min，30℃～0℃范围内为0.05℃～0.08℃/min。

上述步骤c)在-40℃～60℃的温度下进行。具体可以采用的减压干燥可以为冷冻干燥方法或一般的减压真空干燥法。温度越低，丹参酮II_A磺酸钠样品中热分解产物越少，杂质越少。

本发明制得的丹参酮II_A磺酸钠纯度经HPLC分析，含量可达99.5％，质量可达到注射用原料药纯度要求。本发明方法简便，易于操作，成本低，适于工业化大生产。

本专利所附的丹参酮II_A磺酸钠纯度的HPLC分析谱图参考了以下文献：采用济南百诺医药科技开发有限公司申请的“丹参酮II_A磺酸钠及其制剂中丹参酮I磺酸钠的测定方法”中国专利(申请号为CN200410036053.5)。具体分析步骤如下：1)采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶、十六烷基硅烷键合硅胶、辛烷基硅烷键合硅胶及氰基键合硅胶的至少一种为填充剂；以甲醇-乙腈-缓冲液为流动相，流动相中甲醇的体积比为0％～90％，乙腈的体积比为0％～90％，缓冲液的体积比为5％～90％，缓冲液的pH值为2～5；2)将样品注入高效液相色谱仪中，进行色谱分离，紫外检测。同时，分析所用的丹参酮II_A对照品均来源于中国药品生物制品检验所提供的药品检验用标准物质。

附图说明

图1是市售的丹参酮II_A磺酸钠HPLC图谱；

图2是实施例1所得丹参酮II_A磺酸钠HPLC图谱；

图3是实施例2所得丹参酮II_A磺酸钠HPLC图谱；

图4是实施例3所得丹参酮II_A磺酸钠HPLC图谱；

图5是实施例4所得丹参酮II_A磺酸钠HPLC图谱；

图6是对比实施例1所得的丹参酮II_A磺酸钠HPLC图谱；

图7是对比实施例2所得的丹参酮II_A磺酸钠HPLC图谱。

具体实施方式

下面的实施例可以对本发明作进一步解释。

实施例1

在100ml反应瓶中，加入丹参酮II_A磺酸钠粗品1.0g(市售，HPLC法含量93.6％，m.p.＝234℃～235℃，见附图一，)，悬浮在7ml去离子水、1ml丙酮和6ml无水乙醇组成的混合溶剂中，充分搅拌，水浴升温至50℃～55℃至样品全部溶解，热过滤，弃滤渣，滤液缓慢降温至5℃，析晶4h，过滤，滤饼置于<50℃的减压干燥箱中进行真空干燥4h，即得丹参酮II_A磺酸钠纯品0.8g，m.p.＝239℃～240℃(X-4显微熔点仪测定，上海精密科学仪器有限公司)，收率80.0％，以干燥品计含量为100.1％。

实施例2

在250ml反应瓶中，加入丹参酮II_A磺酸钠粗品16.0g(同实施例1)，悬浮在80ml去离子水和80ml丙酮组成的混合溶剂中，充分搅拌，水浴升温至50℃～55℃至样品全部溶解，热过滤，弃滤渣，滤液缓慢降温至0℃，析晶4h，过滤，滤饼置于<50℃的减压干燥箱中进行真空干燥4h，即得丹参酮II_A磺酸钠纯品12.9g，m.p.＝238℃～240℃，收率80.6％，以干燥品计含量为99.9％。

实施例3

在250ml反应瓶中，加入丹参酮II_A磺酸钠粗品16.0g(同实施例1)，悬浮在80ml去离子水和80ml丙酮组成的混合溶剂中，充分搅拌，水浴升温至40℃～45℃至样品全部溶解，热过滤，弃滤渣，滤液缓慢降温至30℃，析晶4h，过滤，滤饼用约10ml冰的去离子水充分洗涤，抽干后置于倒入不锈钢浅盘中进行冷冻干燥(-40℃-35℃，30-36h)，即得丹参酮II_A磺酸钠纯品12.7g，m.p.＝239℃～240℃(同实施例1)，收率63.4％，以干燥品计含量为101.3％。

实施例4

在250ml反应瓶中，加入丹参酮II_A磺酸钠粗品16.0g(同实施例1)，悬浮在160ml去离子水和160ml无水乙醇组成的混合溶剂中，充分搅拌，水浴升温至55℃～60℃至样品全部溶解，热过滤，弃滤渣，滤液缓慢降温至0℃，析晶4h，过滤，滤饼置于<50℃的减压干燥箱中进行真空干燥4h，即得丹参酮II_A磺酸钠纯品10.2g，m.p.＝237℃～240℃(同实施例1)，收率63.8％，以干燥品计含量为99.6％。

实施例5

在250ml的反应瓶中，加入丹参酮II_A磺酸钠粗品16.0g(同实施例1)，悬浮在16ml去离子水和160ml丙酮组成的混合溶剂中，充分搅拌，水浴升温至50℃～55℃至样品全部溶解，热过滤，弃滤渣，滤液缓慢降温降至15℃，恒温析晶4h，过滤，滤饼用约2ml冰的去离子水充分洗涤，抽滤，滤饼置于倒入不锈钢浅盘中进行冷冻干燥(-40℃～35℃，30～36h)，即得丹参酮II_A磺酸钠纯品13.2g，m.p.＝238℃～240℃(同实施例1)，收率75.5％，以干燥品计含量为101.0％。

对比实施例1

在250ml反应瓶中，加入丹参酮II_A磺酸钠粗品6.5g(同实施例1)，悬浮在400ml乙醇中，充分搅拌，水浴升温至75℃～85℃回流至样品全部溶解，继续恒温搅拌15min，热过滤，弃滤渣，滤液缓慢降温至5℃，析晶4h，过滤，滤饼置于<50℃的减压干燥箱中进行真空干燥4h，即得丹参酮II_A磺酸钠纯品4.6g，m.p.＝235℃～237℃(同实施例1)，收率70.8％，以干燥品计含量为95.4％。

对比实施例2

在250ml反应瓶中，加入丹参酮II_A磺酸钠粗品10.0g(同实施例1)，悬浮在600ml丙酮中，充分搅拌，水浴升温至回流约57℃，样品全部溶解，继续恒温搅拌15min，热过滤，弃滤渣，滤液缓慢降温至5℃，析晶4h，过滤，滤饼置于<50℃的减压干燥箱中进行真空干燥4h，即得丹参酮II_A磺酸钠纯品7.9g，m.p.＝237℃～238℃(同实施例1)，收率79.0％，以干燥品计含量为96.5％。

上述实施例充分说明：采用单一溶剂进行重结晶效果不明显，经HPLC分析，含量只能在93-97％左右，纯度不能满足注射用原料药的要求(参见对比实施例1、2)；而本发明采用混合溶剂予以重结晶的方法。精制后的丹参酮II_A磺酸钠，含量经HPLC分析，可以达到99.5％以上，纯度满足注射用原料药的要求。

Claims

1.一种丹参酮Ⅱ_A磺酸钠的精制方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)将待纯化的丹参酮Ⅱ_A磺酸钠粗品加入由有机溶剂与水配制而成的混合溶剂中，加热至40℃～60℃，搅拌使溶解，过滤去除不溶性微粒；所述丹参酮Ⅱ_A磺酸钠粗品与混合溶剂的质量体积比为1∶2～20；混合溶液中的有机溶剂与水的体积比为0.1～1∶1～10；混合溶液中的有机溶剂为醇类或/和酮类溶剂，醇类选自甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇；酮类选自丁酮、甲基异丁基酮；

b)溶液缓慢降温至0℃～30℃，析晶，过滤；其中析晶温度为0℃～30℃，降温速度：60℃～30℃范围内为0.1℃～0.4℃/min，30℃～0℃范围内为0.05℃～0.08℃/min；

c)减压干燥既得丹参酮Ⅱ_A磺酸钠。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤c)在-40℃～60℃的温度下进行。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a)中的加热温度为45℃～55℃。