CN101973853A - 羟基酪醇的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种羟基酪醇的提取方法。它包括以下步骤:制备原料提取液;取其中任一种提取液,加入浓盐酸使其pH值为0~2,煮沸2~4h水解,水解液进大孔吸附树脂柱层析,用pH值为1~2的酸液洗脱,合并流出液及酸洗液,调pH值至中性,浓缩,过滤;滤液进大孔吸附树脂柱层析,用体积浓度10~30%乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩,干燥,得到羟基酪醇。本发明将原料提取液酸化后通过煮沸工序来实现羟基酪醇的转化,大大缩短了羟基酪醇的转化时间,而且提高了转化率,从整体上缩短了生产周期,节约了生产成本;之后再采用大孔吸附树脂进行分离和纯化,得到羟基酪醇。
Description
技术领域
本发明涉及植物中有效成分的提取方法,具体涉及羟基酪醇的提取方法。
背景技术
3,4-二羟基苯乙醇(羟基酪醇)的分子式为C8H10O3,结构式为
羟基酪醇最早是从有“液体白金”、“美女之油”、“地中海甘露”美誉的橄榄油中提取得到的酚类化合物,它在橄榄油中的含量为约4.2mg/(100g初榨油)和约0.5g/(100g精制油)。由于其卓越的抗氧化性能,因而被广泛应用于以下领域:1、心血管药物,对动脉硬化、高血压、心脏病、脑溢血等的预防与治疗有奇效,优于同类药品;2、应用于美容产品保健品,能有效增强皮肤弹性和润泽,具除皱抗衰老之功效;3、对骨骼系统有益处:有助于人体对矿物质的吸收,无需补钙,自然吸收,保持骨密度,减少骨骼疏松,同时提高内分泌系统功能,促进新陈代谢,促进伤口愈合,消除体内自由基,恢复人体脏腑器官的健康状态,防止脑衰,延缓衰老,保持青春活力;4、在抗癌防癌方面的应用:可以防治肺癌、乳腺癌、子宫癌、前列腺癌等,促进癌症后期恢复和提高化疗效果;5、可以有效降低和抑制吸烟对人体的危害,防治因吸烟导致的多种病变。
迄今为止,羟基酪醇主要产自于橄榄树,尤其是其果实或叶子,并且作为橄榄液体提取物或粉末提取物上市,例如以商标HIDROXTM上市。如公开号为CN1665764的发明专利,公开了一种制备富含羟基酪醇的组合物的方法,包括:(a)用橄榄制备植物液;(b)将酸加入植物液中,由此制得酸化的植物液;(c)将酸化的植物液培养一段时间直至植物液中原先存在的油橄榄苦甙(环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙)有至少50%转化成羟基酪醇,其中所说的一段时间至少为2个月,通常为2~12个月。虽然该方法可以使植物液中原先存在的油橄榄苦甙的90%转化成羟基酪醇,但完成这一转化需要花费的时间太长,导致生产周期长,不适于工业化生产,此外还存在原料单一的问题。又如公开号为CN101298411的发明专利,公开了一种从橄榄提取液中提取羟基酪醇的方法,包括如下步骤:(1)将橄榄提取液加入去离子水稀释;(2)过苯乙烯类树脂层析柱,用去离子水冲洗,弃去前300ml~500ml的流出液,然后开始接收透明洗脱液;(3)浓缩所述透明洗脱液,用乙酸乙酯萃取,将乙酸乙酯层浓缩,回收乙酸乙酯,浓缩至不能再浓缩,得浅橘黄胶状物;(4)将浅橘黄胶状物进行分子蒸馏,得到羟基酪醇粗品。该发明所得产品的纯度较高,也较大程度的保持了天然物的原有品质,但该方法并没有将橄榄提取液中的油橄榄苦甙转化成羟基酪醇这一步骤,只是将提取液中单独存在的羟基酪醇提取分离出来而已,因此该申请的得率比较低,而且同样存在原料单一的问题。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种生产周期短、成本低且原料多样化的羟基酪醇的提取方法。采用该方法提取羟基酪醇,提取率高。
为解决上述技术问题,本发明采用以下技术方案:
羟基酪醇的提取方法,包括以下步骤:
1)制备原料提取液,所述原料为玄参科、木犀科、冬青科、金丝桃科、紫草科或马鞭草科植物的干制或新鲜的枝、叶、茎,或者是紫葳科或景天科植物干制或新鲜的枝、叶、茎、根,或者是橄榄科橄榄属植物的果肉、茎或叶;
2)取上述任一种提取液,加入浓盐酸使其pH值为0~2,煮沸2~4h水解,水解液进大孔吸附树脂柱层析,用pH值为1~2的酸液洗脱,合并流出液及酸洗液,调pH值至中性,浓缩,过滤;
3)滤液进大孔吸附树脂柱层析,用体积浓度10~30%乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩,干燥,得到羟基酪醇。
为了进一步缩短本申请提取方法的生产周期,可将水解液先浓缩后再进大孔吸附树脂柱层析,具体可将水解液调节pH值至5.5~6.5后浓缩至相当于原料重量,浓缩液调节pH值至1~2后再进大孔吸附树脂柱层析。
上述方法中,步骤1)中,所述原料玄参科植物,包括玄参属、兔耳草属、来江藤属和醉鱼草属,其中,玄参属包括玄参Scrophularia ningpoensis Hemsl.,兔耳草属包括短管兔耳草Lagotis brevituba Maxim,来江藤属包括来江藤Brandisia hancei Hook.f.,醉鱼草属包括腺冠醉鱼草Buddleja adenantha、翅枝醉鱼草Buddleja alata、互叶醉鱼草Buddleja alternifolia、大花醉鱼草Buddleja colvilei;
所述原料木犀科植物,包括木犀榄属、丁香属、女贞属、木犀属和茉莉花属;其中,木犀榄属包括油橄榄Olea europaea L.;丁香属包括什锦丁香Syinga chinesis Willd、花叶丁香Syinga persical L.、小叶丁香Syinga mi2crophylla Diels、暴马丁香Syringa reticulata(BI)Hara amurensis(Ruper.)Pringle、白丁香Syinga oblate Lindle Var affinis Lingelsh、辽东丁香Syinga Wolfii Schneider、紫丁香Syinga oblate Lindl、红丁香Syain2ga Villosa Vahl;女贞属包括丽叶女贞Ligustrum henryiHemsl.、日本女贞L.japonicum Thunb.、日本毛女贞L.japonicum Thunb.vat.pubescens Koidz、女贞L.lucidum Ait.、序梗女贞L.pricei Hayaga、粗壮女贞L.robustum(Roxb)Bl.、光萼小蜡L.sinense Lour.vat.myrianthus(Diels)Hook.f、宜昌女贞L.strongylophyllum Hemsl.,木犀属包括牛矢果Osmanthus matsumuranus Hayata;茉莉花属包括素馨Jasminum officinale Linn.var.grandiflorum(Linn.)Kobuski;
所述原料冬青科植物,包括冬青属苦丁茶冬青Hex kudingchaC.J.Tseng、大叶冬青I.latifolia Thunb.、枸骨I.conuta Lindl.和五棱苦丁茶I.oentagina S.K.Chen,Y.S.Feng et C.F.Liang、毛冬青IlexpubescensHook.etArn;
所述原料金丝桃科植物,包括黄牛木属黄牛木Cratoxylom ligustrium、红芽木、毛叶黄牛木Cratoxxlum prunifolium(kurz);
所述原料紫草科植物,包括厚壳树属厚壳树Ehretia thyrsiflora;
所述原料马鞭草科植物,包括赪桐属三台花、白花灯笼Clerodendrum fortunatum linn;
所述原料紫葳科植物,包括紫葳属凌霄花Campsis grandiflora;
所述原料景天科植物,包括红景天属大花红景天Rhodiola crenulata(Hook.f.et Thoms.)H.Ohba、红景天Rhodiola rosea Linn.、粗茎红景天Rhodiola wallichiana(Hook.)S.H.Fu、云南红景天Rhodiola yunnanensis(Franch.)S.H.Fu、长白红景天Rhodiola angusta Nakai、互生红景天Rhodiola alterna S.H.Fu;
橄榄科橄榄属植物包括橄榄Canavium album Raeuseh。
步骤1)中所述原料提取液的制备方法为:取原料,粉碎,用6~12倍原料重量的水煎煮提取1~3次,每次提取30~150min,合并煎煮液,浓缩,过滤,即得相应提取液。
原料中以橄榄科橄榄属植物为原料制备的提取液也可是直接从市场上购买成品的。
步骤2)中,酸液的用量为树脂柱床体积的2~4倍。
步骤2)和3)中,所述大孔吸附树脂的型号为CAD45、SD200、AB-8、D101或D102,优选为D101、CAD45或SD200。
步骤3)中,乙醇的用量为树脂柱床体积的2~4倍。
与现有技术相比,本发明将原料提取液酸化后通过煮沸工序来实现羟基酪醇的转化,不仅大大缩短了羟基酪醇的转化时间,而且提高了转化率(转化率达85%以上),从整体上缩短了生产周期,节约了生产成本;之后再采用大孔吸附树脂进行分离和纯化,得到羟基酪醇。
具体实施方式
下面以实施例对本发明作进一步说明,但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1:
1、橄榄叶提取液的制备
以新鲜橄榄叶为原料,粉碎成粗粉,加水煎煮提取2次(每次加水量为原料重量的10倍,每次提取100min),合并煎煮液,浓缩至原料重量,过滤,即得橄榄叶提取液。
经测定,提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为8%。测定的方法为(下同):HPLC,色谱条件:色谱柱(Kromasil 100-5C18);流动相:乙腈∶水=25∶75,紫外检测波长:285nm,柱温:27℃,流速:1mL/min)。
2、羟基酪醇的制备
1)取1L上述制得的提取液为原料,加入浓盐酸使其pH值为1,煮沸3h,所得水解液进CAD45大孔吸附树脂柱层析,收集流出液,用pH=1的盐酸(3倍树脂柱床体积)洗脱,合并流出液及酸洗液,用氢氧化钠调pH值至中性,浓缩至原提取液体积的1/10,过滤;
2)滤液进SD200大孔吸附树脂柱层析,用20%乙醇(v/v,3倍树脂柱床体积)洗脱,收集洗脱液,浓缩至浸膏,喷雾干燥,得到羟基酪醇80g,纯度为25%。
实施例2:
1、大花红景天提取液的制备
以大花红景天为原料,粉碎至100目,加水煎煮提取3次(第一次加入原料重量10倍的水提取90min,第二次加入原料重量6倍的水提取30min,第三次加入原料重量6倍的水提取30min),合并煎煮液,浓缩至原料重量,过滤,即得红景天提取液。
经测定,大花红景天提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为1.1%。
2、羟基酪醇的制备
1)取1L上述制得提取液为原料,加入浓盐酸使其pH值为2,煮沸4h,所得水解液用氢氧化钠调节pH值至6.0后浓缩至相当于原料重量,浓缩液调节pH值至2后再进SD200大孔吸附树脂柱层析,收集流出液,用pH=2的盐酸(2倍树脂柱床体积)洗脱,合并流出液及酸洗液,用氢氧化钠调pH值至中性,浓缩至原提取液体积的1/15,过滤;
2)滤液进SD200大孔吸附树脂柱层析,用30%乙醇(v/v,4倍树脂柱床体积)洗脱,收集洗脱液,浓缩至浸膏,喷雾干燥,得到羟基酪醇6.9g,纯度为40%。
实施例3:
1、日本毛女贞提取液的制备
以干的日本毛女贞的枝和叶为原料,粉碎至80目,加入原料重量12倍的水煎煮提取150min,收集煎煮液,浓缩至原料重量,过滤,即得日本毛女贞提取液。
经测定,日本毛女贞提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为0.8%。
2、羟基酪醇的制备
1)取1L上述制得的提取液为原料,加入浓盐酸使其pH值为1.5,煮沸2h,所得水解液进D101大孔吸附树脂柱层析,收集流出液,用pH=1.5的盐酸(3倍树脂柱床体积)洗脱,合并流出液及酸洗液,用氢氧化钠调pH值至中性,浓缩至原提取液体积的1/8,过滤;
2)滤液进AB-8大孔吸附树脂柱层析,用10%乙醇(v/v,4倍树脂柱床体积)洗脱,收集洗脱液,浓缩至浸膏,喷雾干燥,得到羟基酪醇7g,纯度为25%。
实施例4:
1、光萼小蜡提取液的制备
以干的光萼小蜡的叶和茎为原料,粉碎成粗粉,加水煎煮提取2次(第一次加水量为原料重量的8倍,提取120min,第二次加水量为原料重量的6倍,提取30min),合并煎煮液,浓缩至原料重量,过滤,即得光萼小蜡提取液。
经测定,光萼小蜡提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为0.8%。
2、羟基酪醇的制备
1)取1L上述制得的提取液为原料,加入浓盐酸使其pH值为0.5,煮沸3h,所得水解液进AB-8大孔吸附树脂柱层析,收集流出液,用pH=2的盐酸(2倍树脂柱床体积)洗脱,合并流出液及酸洗液,调pH值至中性,浓缩至原提取液体积的1/15,过滤;
2)滤液进AB-8大孔吸附树脂柱层析,用25%乙醇(v/v,3倍树脂柱床体积)洗脱,收集洗脱液,浓缩至浸膏,喷雾干燥,得到羟基酪醇4.4g,纯度为40%。
实施例5:
1、宜昌女贞提取液的制备
以新鲜宜昌女贞的枝和叶为原料,提取工艺同实施例4。
经测定,宜昌女贞提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为1.2%。
2、羟基酪醇的制备
工艺同实施例4,得到羟基酪醇6.8g,纯度为40%。
实施例6:
1、粗壮女贞提取液的制备
以新鲜的粗壮女贞的枝、叶为原料,提取工艺同实施例2。
经测定,粗壮女贞提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为0.8%。
2、羟基酪醇的制备
工艺同实施例2,得到羟基酪醇7.5g,纯度为40%。
实施例7:毛冬青提取液的制备
以干的毛冬青的叶和茎为原料,提取工艺同实施例1。
经测定,毛冬青提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为0.8%。
2、羟基酪醇的制备
工艺同实施例1,得到羟基酪醇7g,纯度为25%。
实施例8:
1、红景天提取液的制备
以红景天为原料,提取工艺同实施例3。
经测定,红景天提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为1.5%。
2、羟基酪醇的制备
工艺同实施例3,得到羟基酪醇14g,纯度为25%。
实施例9:
1、女贞提取液的制备
以新鲜女贞的叶子为原料,提取工艺同实施例2。
经测定,女贞提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为1.0%。
2、羟基酪醇的制备
工艺同实施例2,得到羟基酪醇5.6g,纯度为40%。
实施例10
1、紫丁香取液的制备
以新鲜紫丁香的叶子为原料,提取工艺同实施例1。
经测定,紫丁香提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为0.9%。
2、羟基酪醇的制备
工艺同实施例1,得到羟基酪醇8.5g,纯度为25%。
实施例11
1、油橄榄提取液的制备
以新鲜油橄榄的叶子为原料,提取工艺同实施例2。
经测定,油橄榄提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为7.8%。
2、羟基酪醇的制备
工艺同实施例2,得到羟基酪醇46.3g,纯度为40%。
实施例12
1、玄参提取液的制备
以干玄参为原料,提取工艺同实施例3。
经测定,玄参提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为1.3%。
2、羟基酪醇的制备
工艺同实施例3,得到羟基酪醇11.7g,纯度为25%。
实施例13
1、来江滕提取液的制备
以干的来江滕为原料,提取工艺同实施例2。
经测定,来江滕提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为0.8%。
2、羟基酪醇的制备
工艺同实施例2,得到羟基酪醇5g,纯度为40%。
实施例14
1、大花醉鱼草提取液的制备
以干的大花醉鱼草为原料,提取工艺同实施例1。
经测定,大花醉鱼草提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为1.1%。
2、羟基酪醇的制备
工艺同实施例1,得到羟基酪醇10g,纯度为25%。
实施例15
1、短管兔耳草提取液的制备
以干的短管兔耳草为原料,提取工艺同实施例2。
经测定,短管兔耳草提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为1.0%。
2、羟基酪醇的制备
工艺同实施例2,得到羟基酪醇6.0g,纯度为40%。
实施例16
1、凌霄花提取液的制备
以干的凌霄花为原料,提取工艺同实施例3。
经测定,凌霄花提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为1.2%。
2、羟基酪醇的制备
工艺同实施例3,得到羟基酪醇9.8g,纯度为25%。
实施例17
1、枸骨提取液的制备
以干的枸骨为原料,提取工艺同实施例3。
经测定,枸骨提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为1.4%。
2、羟基酪醇的制备
工艺同实施例3,得到羟基酪醇13.5g,纯度为25%。
实施例18
1、白花灯笼提取液的制备
以干的白花灯笼为原料,提取工艺同实施例1。
经测定,白花灯笼提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为1.5%。
2、羟基酪醇的制备
工艺同实施例1,得到羟基酪醇15g,纯度为25%。
实施例19
1、五棱苦丁茶提取液的制备
以干的五棱苦丁茶为原料,提取工艺同实施例2。
经测定,五棱苦丁茶提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为1.2%。
2、羟基酪醇的制备
工艺同实施例2,得到羟基酪醇6.8g,纯度为40%。
实施例20
1、素馨提取液的制备
以干的素馨为原料,提取工艺同实施例3。
经测定,素馨提取液中环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙的含量为1.0%。
2、羟基酪醇的制备
工艺同实施例3,得到羟基酪醇9.8g,纯度为25%。
实施例21
1)取从市场上购买的1L橄榄提取液(生产厂商ebiser s.L,注册商标名称Hitofulvic,羟基酪醇的含量为8.2%),加入浓盐酸使其pH值为2,煮沸2.5h,所得水解液进CAD45大孔吸附树脂柱层析,收集流出液,用pH=2的盐酸(3倍树脂柱床体积)洗脱,合并流出液及酸洗液,调pH值至中性,浓缩至原橄榄提取液体积的1/15,过滤;
2)滤液进CAD45大孔吸附树脂柱层析,用15%乙醇(v/v,3倍树脂柱床体积)洗脱,收集洗脱液,浓缩至浸膏,喷雾干燥,得到羟基酪醇80.6g,纯度为25%。
Claims (8)
1.羟基酪醇的提取方法,其特征在于包括以下步骤:
1)制备原料提取液,所述原料为玄参科、木犀科、冬青科、金丝桃科、紫草科或马鞭草科植物的干制或新鲜的枝、叶、茎,或者是紫葳科或景天科植物干制或新鲜的枝、叶、茎、根,或者是橄榄科橄榄属植物的果肉、茎或叶;
2)取上述任一种提取液,加入浓盐酸使其pH值为0~2,煮沸2~4h水解,水解液进大孔吸附树脂柱层析,用pH值为1~2的酸液洗脱,合并流出液及酸洗液,调pH值至中性,浓缩,过滤;
3)滤液进大孔吸附树脂柱层析,用体积浓度10~30%乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩,干燥,得到羟基酪醇。
2.根据权利要求1所述的羟基酪醇的提取方法,其特征在于:步骤1)中,
所述原料玄参科植物,包括玄参属、兔耳草属、来江藤属和醉鱼草属,其中,玄参属包括玄参Scrophularia ningpoensis Hemsl.,兔耳草属包括短管兔耳草Lagotis brevituba Maxim,来江藤属包括来江藤Brandisia hancei Hook.f.,醉鱼草属包括腺冠醉鱼草Buddleja adenantha、翅枝醉鱼草Buddleja alata、互叶醉鱼草Buddleja alternifolia、大花醉鱼草Buddleja colvilei;
所述木犀科植物,包括木犀榄属、丁香属、女贞属、木犀属和茉莉花属;其中,木犀榄属包括油橄榄Olea europaea L.;丁香属包括什锦丁香Syinga chinesis Willd、花叶丁香Syinga persical L.、小叶丁香Syinga mi2crophylla Diels、暴马丁香Syringa reticulata(BI)Hara amurensis(Ruper.)Pringle、白丁香Syinga oblate Lindle Var affinis Lingelsh、辽东丁香Syinga Wolfii Schneider、紫丁香Syinga oblate Lindl、红丁香Syain2ga Villosa Vahl;女贞属包括丽叶女贞Ligustrum henryiHemsl.、日本女贞L.japonicum Thunb.、日本毛女贞L.japonicum Thunb.vat.pubescens Koidz、女贞L.lucidum Ait.、序梗女贞L.pricei Hayaga、粗壮女贞L.robustum(Roxb)Bl.、光萼小蜡L.sinenseLour.vat.myrianthus(Diels)Hook.f.、宜昌女贞L.strongylophyllum Hemsl.,木犀属包括牛矢果Osmanthusmatsumuranus Hayata;茉莉花属包括素馨Jasminum officinale Linn.var.grandiflorum(Linn.)Kobuski;
所述冬青科植物,包括冬青属苦丁茶冬青Hex kudingchaC.J.Tseng、大叶冬青I.latifolia Thunb.、枸骨I.conuta Lindl.和五棱苦丁茶I.oentagina S.K.Chen,Y.S.Feng et C.F.Liang、毛冬青IlexpubescensHook.etArn;
所述金丝桃科植物,包括黄牛木属黄牛木Cratoxylom ligustrium、红芽木、毛叶黄牛木Cratoxxlum prunifolium(kurz);
所述紫草科植物,包括厚壳树属厚壳树Ehretia thyrsiflora;
所述马鞭草科植物,包括赪桐属三台花、白花灯笼Clerodendrum fortunatum linn;
所述紫葳科植物,包括紫葳属凌霄花Campsis grandiflora;
所述景天科植物,包括红景天属大花红景天Rhodiola crenulata(Hook.f.et Thoms.)H.Ohba、红景天Rhodiola rosea Linn.、粗茎红景天Rhodiola wallichiana(Hook.)S.H.Fu、云南红景天Rhodiola yunnanensis(Franch.)S.H.Fu、长白红景天Rhodiola angusta Nakai、互生红景天Rhodiola alterna S.H.Fu;
所述橄榄科橄榄属植物包括橄榄Canavium album Raeuseh。
3.根据权利要求1或2所述的羟基酪醇的提取方法,其特征在于:步骤2)中,水解液调节pH值至5.5~6.5后浓缩至原料重量,所得浓缩液调节pH值至1~2后再进大孔吸附树脂柱层析。
4.根据权利要求1、2或3所述的羟基酪醇的提取方法,其特征在于:步骤2)中,所述原料提取液的制备方法为:取原料,粉碎,用6~12倍原料重量的水煎煮提取1~3次,每次提取30~150min,合并煎煮液,浓缩,过滤,即得相应提取液。
5.根据权利要求1、2或3所述的羟基酪醇的提取方法,其特征在于:步骤2)中,酸液的用量为树脂柱床体积的2~4倍。
6.根据权利要求1、2或3所述的羟基酪醇的提取方法,其特征在于:步骤2)和3)中,所述大孔吸附树脂的型号为CAD45、SD200、AB-8、D101或D102。
7.根据权利要求6所述的羟基酪醇的提取方法,其特征在于:所述大孔吸附树脂的型号为D101、CAD45或SD200。
8.根据权利要求1、2或3所述的羟基酪醇的提取方法,其特征在于:步骤3)中,乙醇的用量为树脂柱床体积的2~4倍。
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