CN105579565A - 脂质提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了用于从生物源提取和制备用于药物、营养品和功能性食品的脂质的改进方法。

Description

脂质提取方法

发明领域

本发明提供了用于从生物源提取和制备脂质以用于药物、营养品和功能性食品的改进方法。

发明背景

累积的证据表明，在鱼中发现的长链ω-3脂肪酸、二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)减少CHD和缺血性心脏病的风险。大量的流行病学研究，诸如医师健康研究和护士健康研究，考察了饮食和其它影响健康结果的生活方式因素。医师健康研究报道指出，与每周少于一份鱼餐相比，每周消费一或多份鱼与突发性心脏病的52％较低风险相关联。在另一个流行病学研究(美国的护士健康研究)中发现，与每月消费一份鱼餐相比，每周消费五份或多份鱼与45％的较少心脏死亡相关联。已知长链ω-3脂肪酸是心血管疾病的保护性膳食因素。已显示EPA和DHA降低甘油三酯水平，并充当抗心律失常剂。美国心脏协会(AHA)对鱼和鱼油消费以及心血管疾病的数据进行综合评述。AHA报告建议具有和不具有心脏病和升高的血液甘油三酯水平的个体食用鱼或服用鱼油补充剂。欧洲和其它社会的第三工作小组(TheThirdTaskForceofEuropeanandOtherSocieties)在2003年准备的报告还将鱼油建议为心肌梗死后治疗的标准疗法。

血液中的甘油三酯水平与CHD的增加呈正相关，因为甘油三酯水平升高，CHD的风险也增加。在整个生命期间多个因素影响血清甘油三酯的升高，主要贡献者是饮食。在许多海洋海产食品中丰富存在的DHA和EPA似乎均支持心血管健康和降低血液甘油三酯水平。已知鱼油可降低血清甘油三酯水平20-50％，与药物诸如他汀类、烟酸和贝特类观察到的效果相似。美国心脏协会建议无记录的CHD的个体每周食用两份鱼(优选多脂鱼)。CHD患者应当每日服用1克EPA和DHA(优选来自多脂鱼或以补充剂形式(如果在医生的关照下))。对于需要降低甘油三酯水平的那些患者，美国心脏协会建议在医生的关照下以补充剂形式每天服用2-4克EPA和DHA。EPA和DHA的处方形式Lovaza(以前称为Omacor)是可供具有高水平的血液甘油三酯的人使用的良好的ω-3脂肪酸来源。每一个1克胶囊装Lovaza含有465mgEPA乙酯、375mgDHA乙酯、80mg其他ω-3脂肪酸、30mgω-6脂肪酸和50mg抗氧化剂。它被作为饮食助剂开处方，以降低成人患者的非常高的甘油三酯水平。

在医学研究，ω-3脂肪酸正被研究以确定它们是否可有效地改善广泛的疾病状态-其中有心脏病、糖尿病、炎症、抑郁症、阿尔茨海默症和注意力缺陷症-使该组营养素成为临床研究令人激动和非常活跃的领域。确保ω-3脂肪酸为饮食的一部分(如由膳食指南推荐的)为实现更好的健康的适当起始点；因此，在利用ω-3脂肪酸改善人类病况的潜能中存在巨大的机会。

对某些受试者口服施用ω-3组合物导致不希望的副作用，包括打嗝和返流。某些形式的ω-3的生物利用度也可能是有限的。因此，本领域中所需要的是改进的ω-3制剂。

发明概述

本发明提供了用于从生物源提取和制备脂质以用于药物、营养品和功能性食品的改进方法。

在一些实施方案中，本发明提供了用于从生物材料中提取富含极性脂质的提取物的方法，所述方法包括：在使得极性脂质被优先提取的条件下将生物材料与浓缩的质子溶剂接触以形成包含极性脂质溶液和生物残留材料的桨料；将极性脂质溶液与生物残留材料分离以提供分离的极性脂质溶液；将水溶液添加至极性脂质溶液中以稀释质子溶剂，以使得极性脂质溶液分离成包含稀释的质子溶剂的上相和下部富含极性脂质的底相；以及分离富含极性脂质的底相，以提供富含极性脂质的提取物。在一些实施方案中，所述将水溶液添加至极性脂质溶液中以稀释质子溶剂(以使极性脂质溶液分离成包含稀释的质子溶剂的上相和下部富含极性脂质的底相)包括添加水溶液以当与生物样品中的水分组合时将质子溶剂的浓度稀释至约50％至70％w/w，优选约55％至65％w/w，更优选约58％至62％w/w。在一些实施方案中，当与生物样品中的水分组合时该质子溶剂的浓度被稀释至约60％w/w。在一些实施方案中，所述在使得极性脂质被优先提取的条件下将生物材料与浓缩的质子溶剂接触包括在约-10C至约50C的温度下将所述生物材料与浓缩的质子溶剂混合，以使得当与生物材料中的水分组合时溶剂浓度为约70％至约95％w/w。

在一些实施方案中，所述方法还包括用极性脂质难溶于其中的稀释的质子溶剂洗涤富含极性脂质的提取物，以提供包含稀释的质子溶剂的上相和富含极性脂质的底相，以及分离底相，以提供洗涤的富含极性脂质的提取物。在一些实施方案中，所述洗涤被重复2至约5次。在一些实施方案中，其中所述在使得磷脂难溶的条件下用稀释的质子溶剂洗涤富含极性脂质的提取物还包括将富含极性脂质的提取物与稀释的质子溶剂以富含极性脂质的提取物∶稀释的质子溶剂为约0.5∶1至5∶1的比率混合，其中稀释的质子溶剂包含具有约30％至70％的质子溶剂的水溶液。在一些实施方案中，所述质子溶剂选自由以下组成的组：浓缩的正-丁醇、正-丙醇、异丙醇、乙醇和甲醇。在一些实施方案中，所述质子溶剂是乙醇。

在一些实施方案中，洗涤的富含极性脂质的提取物的特征在于包含至少50％w/w的磷脂。在一些实施方案中，洗涤的富含极性脂质的提取物的特征在于包含少于约3％w/w的溶血磷脂。在一些实施方案中，洗涤的富含极性脂质的提取物的特征在于包含少于约1％w/w的溶血磷脂。在一些实施方案中，所述洗涤的富含极性脂质的提取物的特征在于包含少于约0.5％w/w的溶血磷脂。在一些实施方案中，洗涤的富含极性脂质的提取物的特征在于包含少于约0.1％的溶血磷脂。在一些实施方案中，洗涤的富含极性脂质的提取物的特征在于具有在饱和的60％的乙醇溶液中测定的小于300uS/cm的电导率。在一些实施方案中，所述方法还包括从洗涤的富含极性脂质的提取物中沉淀磷脂。在一些实施方案中，所述从洗涤的富含极性脂质的提取物中沉淀磷脂还包括在使得磷脂沉淀的条件下将洗涤的富含极性脂质的提取物与冷丙酮混合以提供富含极性脂质的沉淀。

在一些实施方案中，所述方法还包括通过蒸发从富含极性脂质的提取物或经洗涤的富含极性脂质的提取物中除去残留溶剂以提供固体的富含极性脂质的组合物。在一些实施方案中，固体的富含极性脂质的组合物包含至少90％w/w的磷脂。在一些实施方案中，固体的富含极性脂质的组合物包含少于约3％w/w的溶血磷脂。在一些实施方案中，固体的富含极性脂质的组合物包含少于约1％w/w的溶血磷脂。

在一些实施方案中，所述方法还包括在使得从生物残留材料中提取中性脂质的条件下将生物残留材料与质子溶剂接触以形成包含中性脂质溶液和生物残留材料的浆料；将中性脂质溶液与生物残留材料分离；以及

从中性脂质溶液中蒸发浓缩的质子溶剂，以提供中性脂质提取物。在一些实施方案中，所述使得从生物残留材料中提取中性脂质的条件包括在约15C至约40C的温度下将生物残留材料与浓缩的质子溶剂以约2∶1至8∶1的比率混合。

在一些实施方案中，所述方法还包括将洗涤的富含极性脂质的提取物与中性脂质提取物组合以提供混合脂质组合物。在一些实施方案中，混合脂质组合物的特征在于包含少于约3％的溶血磷脂。在一些实施方案中，混合脂质组合物的特征在于包含少于约1％的溶血磷脂。在一些实施方案中，混合脂质组合物的特征在于包含少于约0.5％的溶血磷脂。在一些实施方案中，混合脂质组合物的特征在于包含少于约0.1％的溶血磷脂。

在一些实施方案中，所述生物材料选自由以下组成的组：藻类材料、海洋动物材料和植物材料。在一些实施方案中，所述海洋动物材料选自鱼材料、磷虾材料和海洋浮游生物材料。在一些实施方案中，所述磷虾材料选自由以下组成的组：新鲜磷虾、冷冻磷虾、磷虾粉、湿磷虾膏、干磷虾膏和磷虾油。

在一些实施方案中，将如上所述产生的洗涤的富含极性脂质的提取物、富含极性脂质的沉淀、固体的富含极性脂质的组合物、中性脂质提取物或混合脂质组合物配制成口服递送媒介物。在一些实施方案中，所述口服递送媒介物选自由以下组成的组：片剂、胶囊剂和凝胶胶囊剂、溶液、混悬液、乳剂和可咀嚼基质。在一些实施方案中，将如上所述产生的洗涤的富含极性脂质的提取物、富含极性脂质的沉淀、固体的富含极性脂质的组合物、中性脂质提取物或混合脂质组合物配制成用于肠胃外递送的乳剂。

在一些实施方案中，本发明提供了用于产生橡皮糖产品的方法，所述方法包括：将如上所述产生的洗涤的富含极性脂质的提取物、富含极性脂质的沉淀、固体的富含极性脂质的组合物或混合脂质组合物或如上所述的磷脂组合物混合至凝胶基质中，以提供混合的橡皮糖混合物并由混合的橡皮糖混合物形成橡皮糖。在一些实施方案中，本发明提供了由上述方法制成的产品。

在一些实施方案中，本发明提供在固体凝胶基质中包含如上所述产生的洗涤的富含极性脂质的提取物、富含极性脂质的沉淀、固体的富含极性脂质的组合物或混合脂质组合物或如上所述的磷脂组合物的组合物或制品。

在一些实施方案中，本发明提供了用于从生物材料中提取脂质组合物的方法，所述方法包括：在使得极性脂质被优先提取的条件下将生物材料与浓缩的质子溶剂接触以形成包含极性脂质溶液和生物残留材料的浆料；将所述极性脂质溶液与生物残留材料分离；从极性脂质溶液中蒸发质子溶剂，以提供包含磷脂的极性脂质提取物；在使得磷脂为难溶的条件下用稀释的质子溶剂洗涤极性脂质提取物；蒸发所述第二质子溶剂以提供洗涤的磷脂提取物。在一些实施方案中，所述在使得极性脂质被优先提取的条件下将生物材料与浓缩的质子溶剂接触，包括在约-10C至约50C的温度下将生物材料与浓缩的质子溶剂混合，以便当与生物材料中的水分组合时溶剂浓度为约70％w/w至约95％w/w。在一些实施方案中，所述在使得磷脂是难溶的条件下用第二质子溶剂洗涤极性脂质提取物包括以约0.5∶1至5∶1的极性脂质提取物∶稀释的质子溶剂的比率将极性脂质提取物与稀释的质子溶剂混合，其中所述稀释的质子溶剂包含具有约30％w/w至70％w/w的质子溶剂的水溶液。

在一些实施方案中，浓缩的质子溶剂选自由以下组成的组：浓缩的正-丁醇、正-丙醇、异丙醇、乙醇和甲醇。在一些实施方案中，所述稀释的质子溶剂选自由以下组成的组：稀释的正-丁醇、正-丙醇、异丙醇、乙醇和甲醇。在一些实施方案中，浓缩的质子溶剂为浓缩的乙醇。在一些实施方案中，稀释的质子溶剂为稀释的乙醇。

在一些实施方案中，洗涤的磷脂提取物的特征在于包含至少50％、60％、70％、80％或90％的磷脂(即，磷脂的重量/洗涤的磷脂提取物的总重量)。在一些实施方案中，洗涤的磷脂提取物的特征在于包含少于约3％的溶血磷脂(即，溶血磷脂的重量/洗涤的磷脂提取物的总重量)。在一些实施方案中，洗涤的磷脂提取物的特征在于含有少于约1％的溶血磷脂。在一些实施方案中，洗涤的磷脂提取物的特征在于包含少于约0.5％的溶血磷脂。在一些实施方案中，洗涤的磷脂提取物的特征在于含有少于约0.1％的溶血磷脂。在一些实施方案中，洗涤的磷脂提取物的特征在于具有在饱和的60％的乙醇溶液中测量的小于300uS/cm的电导率。

在一些实施方案中，所述方法还包括在使得从生物残留材料中提取中性脂质的条件下将生物残留材料与浓缩的质子溶剂接触，以形成包含中性脂质溶液和生物残留材料的浆料；将中性脂质溶液与生物残留材料分离；以及从中性脂质溶液中蒸发浓缩的质子溶剂，以提供中性脂质提取物。在一些实施方案中，所述使得从生物残留材料中提取中性脂质的条件包括在约15C至约40C的温度下以约2∶1至8∶1的比率混合生物残留材料与浓缩的质子溶剂。在一些实施方案中，所述方法还包括将洗涤的磷脂提取物与中性脂质提取物组合以提供混合脂质组合物。

在一些实施方案中，所述混合脂质组合物的特征在于包含少于约3％的溶血磷脂(即，溶血磷脂的重量/洗涤的磷脂提取物的总重量)。在一些实施方案中，所述混合脂质组合物的特征在于包含少于约1％的溶血磷脂。在一些实施方案中，所述混合脂质组合物的特征在于包含少于约0.5％的溶血磷脂。在一些实施方案中，所述混合脂质组合物的特征在于包含少于约0.1％的溶血磷脂。在一些实施方案中，洗涤的磷脂提取物的特征在于具有在饱和的60％的乙醇溶液中测量的小于300uS/cm的电导率。

在一些实施方案中，所述方法还包括用冷丙酮洗涤磷脂以回收进一步浓缩的磷脂级分。在一些实施方案中，所述浓缩的磷脂级分为至少80％、85％、90％或95％w/w的磷脂(即，磷脂的重量/浓缩的磷脂级分的总重量)。

在一些实施方案中，所述生物材料选自由以下组成的组：藻类材料、海洋动物材料和植物材料。在一些实施方案中，所述海洋动物材料选自鱼材料、磷虾材料和海洋浮游生物材料。在一些实施方案中，所述磷虾材料选自由以下组成的组：新鲜磷虾、冷冻磷虾、磷虾粉、湿磷虾膏、干磷虾膏和磷虾油。

在一些实施方案中，将洗涤的磷脂提取物、中性脂质提取物或混合脂质组合物配制成口服递送媒介物。在一些实施方案中，所述口服递送媒介物选自由以下组成的组：片剂、胶囊剂和凝胶胶囊剂、溶液、混悬液、乳剂和可咀嚼基质。在一些实施方案中，将洗涤的磷脂提取物、中性脂质提取物或混合脂质组合物配制成用于肠胃外递送的乳剂。

在一些实施方案中，本发明提供包含具有以下结构的磷脂化合物的混合物的磷脂组合物：

其中R1和R2选自由以下组成的组：脂肪酸部分和-H，并且R3为H或选自胆碱、乙醇胺、肌醇和丝氨酸部分，磷脂化合物的混合物在位置R3上包含超过约85％或90％的胆碱部分(即，mol％，胆碱部分的摩尔数/磷脂化合物的总摩尔数)和超过约30％w/w的ω-3脂肪酸部分(即，ω-3脂肪酸部分的重量/磷脂化合物的总重量)，其中超过约90％w/w的ω-3脂肪酸部分(即，ω-3脂肪酸部分的重量/脂肪酸部分的总重量)在位置R2上，所述组合物的特征还在于包含少于约3％w/w，优选少于1％w/w的溶血磷脂(即，溶血磷脂的重量/磷脂组合物的总重量)。在一些实施方案中，该组合物具有在饱和的60％的乙醇溶液中测量的小于约300uS/cm的电导率。在一些实施方案中，所述ω-3脂肪酸部分选自由以下组成的组：二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸以及其组合。在一些实施方案中，组合物包含至少50％、60％、70％、75％、80％、90％或95％w/w(即，磷脂化合物的重量/磷脂组合物的总重量)的磷脂化合物。在一些实施方案中，磷脂化合物的混合物中的ω-3部分为二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸，并且其中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸以二十碳五烯酸∶二十二碳六烯酸为约1∶1至约3∶1的比率存在。在一些实施方案中，所述组合物还包含至少5％w/w和高达约10％、20％、30％、40％或50％w/w的包含ω-3脂肪酸部分的乙酯(即乙酯的重量/组合物的总重量)。在一些实施方案中，所述组合物包含至少10％w/w和高达约20％、30％、40％或50％w/w的包含ω-3脂肪酸部分的甘油酯化合物(即，甘油酯化合物的重量/组合物的总重量)。在一些实施方案中，所述组合物包含虾青素。在一些实施方案中，所述组合物包含至少第二抗氧化剂。在一些实施方案中，所述组合物部分或全部来源于磷虾。

在一些实施方案中，所述组合物在选自由以下组成的组的制剂中提供：胶囊剂、片剂、液体、粉剂、乳剂、膳食补充剂、营养补充剂、饮料和功能性食品。

在一些实施方案中，将所述组合物用于向受试者口服或静脉内施用以降低血清甘油三酯，降低血清胆固醇，减少噬斑形成，减少血小板聚集，治疗动脉粥样硬化，改善心血管健康，减少炎症，减少冠心病，治疗抑郁症，治疗阿尔茨海默病，治疗注意力缺陷症，和治疗代谢综合征。在一些实施方案中，将所述组合物以约0.1至约3克的日剂量施用。在一些实施方案中，将组合物向选自由以下组成的组的受试者施用：人、非人灵长类动物、家养动物或农场动物以及伴侣动物。

在一些实施方案中，本发明提供了用于产生橡皮糖产品的方法，所述方法包括：将如上产生的洗涤的富含极性脂质的提取物、富含极性脂质的沉淀、固体的富含极性脂质的组合物或混合脂质组合物或如上所述的磷脂组合物混合至凝胶基质中，以提供混合的橡皮糖混合物并由混合的橡皮糖混合物形成橡皮糖。在一些实施方案中，本发明提供了由上述方法制成的产品。

在一些实施方案中，本发明提供在固体凝胶基质中包含如上所述产生的洗涤的富含极性脂质的提取物、富含极性脂质的沉淀、固体的富含极性脂质的组合物或混合脂质组合物或如上所述的磷脂组合物的组合物。

定义

如本文中所用，″磷脂″是指具有以下通式的有机化合物：

其中R1是脂肪酸部分或-H，R2是脂肪酸部分或-H，并且R3是-H或磷脂头基部分诸如胆碱(HOCH₂CH₂N⁺(CH₃)₃OH^-)部分、乙醇胺(HOCH₂CH₂NH₂)部分、丝氨酸部分或肌醇部分诸如环己烷多元醇肌醇或其衍生物。优选地，R1和R2不能同时为-H。当R3是-H时，所述化合物是二酰基甘油磷酸酯，而当R3是含氮化合物时，所述化合物是磷脂诸如卵磷脂、脑磷脂、磷脂酰丝氨酸或缩醛磷脂。

如本文中所用，术语“长链多不饱和脂肪酸”是指具有20或更多个碳并且在两个或多个键上是不饱和的脂肪酸。

如本文中所用，术语ω-3脂肪酸是指在从该分子的甲基末端开始的第三与第四个碳原子之间的烃链中具有最后的双键的多不饱和脂肪酸。ω-3脂肪酸的非限制性实例包括，5，8，11，14，17-二十碳五烯酸(EPA)、4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸(DHA)和7，10，13，16，19-二十二碳五烯酸(DPA)。

如本文中所用，术语“部分”，当用于指脂肪酸时，是指通过键诸如酯或醚键结合于另一个分子例如甘油酯或磷酸甘油酯分子的脂肪酸的部分。脂肪酸“部分”从而指脂肪酸的脂肪链或指脂肪酸的脂酰基。在本文中定义的磷脂结构中，当脂肪酸部分是脂酰基时，脂酰基的脂肪链通过酯键连接并且当脂肪酸部分是脂肪酸的脂肪链时，所述脂肪链通过醚键连接。当结合本发明的磷脂(例如，EPA或DHA)提及特定的脂肪酸时，其从而应当被视为提及相关脂酰基或其脂肪链。

如本文中所用，术语“生理学上可接受的载体”是指通常与油状药物一起使用的任何载体或赋形剂。此类载体或赋形剂包括但不限于油、淀粉、蔗糖和乳糖。

如本文中所用，术语“口服递送媒介物”是指口服递送药物的任何装置，包括，但不限于，胶囊剂、丸剂、片剂和糖浆剂。

如本文中所用，术语“食品”是指适合于被人、非反刍动物或反刍动物消费的任何食物或饲料。“食品”可以是经制备和包装的食物(例如，蛋黄酱、色拉酱、面包或乳酪食物)或动物饲料(例如，挤出和粒化的动物饲料或粗混合饲料)。“预制食品”意指经批准供人消费的任何预包装食品。

如本文中所用，术语“食料”是指适合人或动物消费的任何物质。

如本文中所用，术语“功能性食品”是指已向其中添加了生物活性补充剂的食品。

如本文中所用，术语“婴儿食品”是指针对婴儿配制的食品诸如婴儿食品。

如本文中所用，术语“老年食品”是指针对老年人配制的食品。

如本文中所用，术语“孕期食品”是指针对孕妇配制的食品。

如本文中所用，术语“营养补充剂”是指被配制成膳食或营养补充剂以用作饮食的一部分的食品。

发明详述

本发明提供了用于从生物源提取和制备用于药物、营养品和功能性食品的脂质的改进方法。

在一些优选实施方案中，本发明提供了被设计来从起始生物材料提供中性和极性脂质提取物的多级提取工艺。在一些实施方案中，分离的中性和极性脂质提取物随后被组合以提供具有所需中性和极性脂质含量的脂质组合物。

在本发明的一些实施方案中，用目标浓度的质子溶剂对脂质进行单步提取，将其调整至生物材料的水含量。可通过溶剂的极性平衡或优化极性脂质与中性脂质之间的比率。可通过利用下述质子溶剂的后续洗涤过程来进一步提高极性脂质的比率。在所述单步提取和随后3-5个洗涤步骤后，当从其中磷脂包含40％w/w的脂质(即，磷脂的重量/原料的总重量)的原料产生时，富含极性脂质的提取物通常含有约55-60％w/w的磷脂(即，磷脂的重量/洗涤的磷脂提取物的总重量)。在其它实施方案中，将生物原料与较强的质子溶剂接触，以获得磷脂被高度富集的脂质提取物。

在优选实施方案中，所述提取在使得极性脂质被提取至液相(即，极性脂质溶液)中并且中性脂质优先保持与生物材料结合的条件下进行。质子溶剂包括具有与氧(如在羟基中)或氮(如在胺基中)结合的氢原子的任何溶剂。一般而言，含有不稳定的H⁺的任何溶剂被称为质子溶剂。此类溶剂的分子容易将质子(H⁺)供给试剂。在优选实施方案中，所述质子溶剂是有机质子溶剂。合适的有机质子溶剂包括，但不限于，正-丁醇、正-丙醇、异丙醇、硝基甲烷、乙醇和甲醇。在特别优选的实施方案中，所述质子溶剂是乙醇。在优选实施方案中，在约-10C至约50C，优选地约10C至30C的温度下用质子溶剂提取生物原料。在优选实施方案中，所述质子溶剂的浓度为至少超过90％、95％或98％w/w的质子溶剂(即，质子溶剂的重量/稀释的溶剂溶液的总重量)，或为约100％纯。在一些实施方案中，以质子溶剂∶生物原料为约1∶1至10∶1，优选地约3∶1至7∶1，最优选约5∶1的比率使用质子溶剂。在一些优选实施方案中，添加质子溶剂以使得当与所述生物材料中的水分组合时质子溶剂的浓度为约70％至约95％。该步骤产生极性脂质(尤其是磷脂)富集的极性脂质溶液，和含有中性脂质的生物残留物。优选例如通过离心或过滤或其它合适的方法分离所述极性脂质溶液与生物残留物。

在一些实施方案中，将水溶液添加至极性脂质溶液以稀释质子溶剂。在优选实施方案中，质子溶剂的稀释导致溶液分离成包含稀释的质子溶剂的上相和下部富含极性脂质的底相。在一些实施方案中，所述质子溶剂的浓度被稀释至约50％至70％w/w(即，质子溶剂的重量/稀释的溶剂溶液的总重量)，优选至约60％w/w。在一些实施方案中，分离所述富含极性脂质的底相，以提供富含极性脂质的提取物。随后可洗涤所述富含极性脂质的提取物或可以例如通过蒸发除去残留溶剂和水分。

在一些实施方案中，用质子溶剂溶液(优选地包含用于初始提取步骤的同一质子溶剂)洗涤所述富含极性脂质的提取物。优选地以极性脂质(尤其是磷脂)难溶于其中的浓度使用质子溶剂。在优选实施方案中，所述洗涤步骤提供包含质子溶剂溶液的上相和当分离时提供富含极性脂质的提取物的富含极性脂质的底相。在每一个洗涤步骤中，将从先前步骤分离的富含极性脂质的提取物与新鲜质子溶剂溶液再混合，并且优选地再次分离所述富含极性脂质的提取物。在优选实施方案中，洗涤步骤中使用的质子溶剂溶液包含约30％至约70％w/w的质子溶剂(即，质子溶剂的重量/稀释的溶剂溶液的总重量)，优选约40％至60％w/w的质子溶剂，溶液的其余部分为水或其它用于质子溶剂的合适的稀释剂。在优选实施方案中，所述洗涤步骤使用约0.5∶1至5∶1的极性脂质提取物∶稀释的质子溶剂的比率。所述洗涤步骤可重复多次，例如，至少2次、3次、4次、5次或多至约10次，优选地重复约2至5次。所述洗涤过程导致洗涤的富含极性脂质的提取物。

在一些实施方案中，提供了甚至更纯的磷脂浓缩物。这些浓缩物可通过使本发明中描述的富含极性脂质的提取物经历本领域中已知的沉淀来获得。在一些实施方案中，所述沉淀步骤在约-20C至约+20C的温度下，更优选在约4C的温度下利用纯丙酮进行以提供富含极性脂质的沉淀。在一些实施方案中，重复该沉淀步骤例如2至5次，优选约3次，以提供富含极性脂质的沉淀。通过该技术，可除去几乎全部的剩余中性脂质。在其他实施方案中，磷脂可以通过色谱，例如，硅胶色谱来浓缩。

在一些实施方案中，优选地通过减压蒸发从洗涤的富含极性脂质的提取物或富含极性脂质的沉淀中除去残留溶剂和水分，以提供固体的富含极性脂质的组合物。

在一些实施方案中，洗涤的富含极性脂质的提取物的特征优选地在于包含至少50％、60％、70％或75％w/w的磷脂(即，磷脂的重量/洗涤的富含极性脂质的提取物的总重量)。在一些实施方案中，洗涤的富含极性脂质的提取物包含约30％至99％w/w、40％至60％w/w或50％至70％w/w的磷脂。在一些实施方案中，洗涤的富含极性脂质的提取物的特征在于包含少于约3％、2％、1％、0.5％或0.1％w/w的溶血磷脂(即，溶血磷脂的重量/洗涤的富含极性脂质的提取物的总重量)。在一些实施方案中，洗涤的富含极性脂质的提取物的特征在于具有小于500uS/cm，优选小于300uS/cm，最优选小于200uS/cm(在饱和的60％的乙醇溶液中测量的)的电导率。

在一些实施方案中，所述富含极性脂质的沉淀的特征优选地在于包括至少75％，80％，85％或80％w/w的磷脂(即，磷脂的重量/富含极性脂质的沉淀的总重量)。在一些实施方案中，洗涤的富含极性脂质的提取物的特征在于包含小于约3％、2％、1％、0.5％或0.1％w/w的溶血磷脂(即，溶血磷脂的重量/富含极性脂质的沉淀的总重量)。

从所述方法获得的富含极性脂质的磷虾油组合物不同于天然存在的磷虾油。然而溶血磷脂的含量优选为低的并且本发明提供了溶血磷脂含量的提高(与可获得的磷虾油相比)，在一些实施方案中，所述组合物包含大于0.01％、0.05％、0.1％或0.2％w/w(即，溶血磷脂的重量/富含极性脂质的沉淀的总重量)的磷脂的下限。至于所述溶血磷脂含量，2-溶血磷脂通常占优势。游离脂肪酸表明C-14、C-16和C-18脂肪酸而非EPA和DHA的存在如在SN-2位置水解后所预期的。可设想，该降解途径是在SN-1位置上进行水解，随后进行体外反式酯化，从而产生2-溶血磷脂。从本发明的方法获得的富含极性脂质的磷虾油组合物也被氧化至一定程度，如通过低水平的未在自然界中发现的聚合磷脂以及某些醛类的存在所证明。

从本发明的方法获得的富含极性脂质的磷虾油组合物还表现出改变的虾青素含量。虾青素因氧化和加热而被降解，并且在加工过程中虾青素二酯∶单酯的比率因非质子溶剂洗涤而偏移。二酯形式在磷虾体内占优势。通过测量487nm与390nm处的吸收之间的比率，可测定虾青素含量的这种偏移程度。在一些实施方案中，虾青素单酯∶虾青素二酯的比率大于约2∶1、3∶1、4∶1、5∶1或10∶1。在其它实施方案中，虾青素单酯∶虾青素二酯的比率的范围优选为约2∶1至100∶1、3∶1至50∶1、4∶1至20∶1、5∶1至20∶1或10∶1至50∶1。在一些实施方案中，所述富含极性脂质的组合物包含小于约50、40、30、20、10或5mg/kg(ppm)的虾青素二酯。在本文中所述的提取和洗涤方法中使用非质子溶剂还可导致未在磷虾体内发现的脂肪酸酯诸如脂肪酸乙酯的产生。本文中所述方法的优势在于这些脂肪酸酯通常通过洗涤步骤除去至极低水平。因此，在一些实施方案中，本发明的组合物包含少于约1.0％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％w/w的脂肪酸酯，优选乙酯(即，乙酯-或其它酯的重量/富含极性脂质的组合物的总重量)。在一些实施方案中，所述组合物具有痕量脂肪酸酯(优选乙酯)的下限，并且在一些实施方案中，包含超过约0.001％或0.005％的脂肪酸酯，诸如脂肪酸乙酯。

在一些实施方案中，所述富含极性脂质的组合物的特征优选地在于包含至少70％、80％、85％、90％或95％w/w的磷脂(即，磷脂的重量/固体的富含极性脂质的组合物的总重量)。在一些实施方案中，所述固体的富含极性脂质的组合物的特征在于包含少于约3％、2％、1％、0.5％或0.1％w/w的溶血磷脂(即，溶血磷脂的重量/固体的富含极性脂质的组合物的总重量)。

在一些实施方案中，所述洗涤的富含极性脂质的提取物、富含极性脂质的沉淀和固体的富含极性脂质的组合物的进一步特征在于包含具有以下结构的磷脂化合物的混合物：

其中R1和R2选自由以下组成的组：脂肪酸部分和-H，并且R3为H或选自胆碱、乙醇胺、肌醇或丝氨酸部分，磷脂化合物的混合物在位置R3上包含超过约85％或90％的胆碱部分(即，mol％，胆碱部分的摩尔数/磷脂化合物的总摩尔数)和超过约30％w/w的ω-3脂肪酸部分(即，ω-3脂肪酸部分的重量/磷脂化合物的重量)，其中超过约90％w/w的ω-3脂肪酸部分(即，ω-3脂肪酸部分的重量/脂肪酸部分的总重量)在位置R2上。在一些实施方案中，所述组合物的特征在包含少于约3％、2％、1％、0.5％或0.1％w/w的溶血磷脂(即，溶血磷脂的重量/固体的富含极性脂质的组合物的总重量)。

在一些实施方案中，ω-3脂肪酸部分优选选自由以下组成的组：二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸及其组合。在一些实施方案中，所述ω-3脂肪酸部分选自由以下组成的组：二十碳三烯酸(ETE；20：3(n-3)；全-顺式-11，14，17-二十碳三烯酸)；二十碳四烯酸(ETA；20：4(n-3)；全-顺式-8，11，14，17-二十碳四烯酸)；二十碳五烯酸(EPA；20：5(n-3)；全-顺式-5，8，11，14，17-二十碳五烯酸)；二十一碳五烯酸(HPA；21：5(n-3)；全-顺式6，9，12，15，18-二十一碳五烯酸)；二十二碳五烯酸(DPA；22：5(n-3)；全-顺式7，10，13，16，19-二十二碳五烯酸；二十二碳六烯酸(DHA；22：6(n-3)；全-顺式-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸)；二十四碳五烯酸(24：5(n-3)；全-顺式-9，12，15，18，21-二十四碳五烯酸；和二十四碳六烯酸(24：6(n-3)；全-顺式-6，9，12，15，18，21-二十四碳六烯酸)。在一些实施方案中，所述ω-3脂肪酸部分通过酯键结合在R1或R2位置上(以提供酰基磷脂)，而在其它实施方案中，所述ω-3脂肪酸部分是通过醚键或乙烯基醚键结合(以提供醚磷脂、烷基酰基磷脂或烯基酰基磷脂)。

在一些实施方案中，洗涤的富含极性脂质的提取物包含至少50％w/w、60％w/w、75％w/w或90％w/w的磷脂化合物，或约30％至99％、40％至60％，或50％至70％的磷脂化合物(即，磷脂化合物的重量/磷脂组合物的总重量)。在一些实施方案中，所述富含极性脂质的沉淀包含至少75％w/w、80％w/w、85％w/w或90％w/w的磷脂化合物，或约60％至99％、70％至95％，或80％至95％的磷脂化合物(即，磷脂化合物的重量/富含极性脂质的沉淀的总重量)。在一些实施方案中，所述固体的富含极性脂质的组合物包含至少80％w/w、85％w/w、90％或95％w/w的磷脂化合物，或约60％至99％，80％至99％，或85％至99％的磷脂化合物(即，磷脂化合物的重量/固体的富含极性脂质的组合物的总重量)。

在一些实施方案中，所述磷脂化合物的混合物的所述混合物中的ω-3部分是二十碳五烯酸和所述二十二碳六烯酸，并且其中所述二十碳五烯酸和所述二十二碳六烯酸以二十碳五烯酸∶二十二碳六烯酸为约1∶1至约3∶1的比率存在。在一些实施方案中，所述组合物部分或全部来源于磷虾。

在其它实施方案中，提取物、沉淀和组合物的脂肪酸含量以重量/重量(w/w；计算为磷脂级分中的ω-3脂肪酸部分的重量除以磷脂级分中的脂肪酸的总重量)计或以摩尔比(以占总脂肪酸的摩尔数的百分比表示的的ω-3脂肪酸部分在组合物中的摩尔数)计为约1％至约99％的ω-3脂肪酸部分，10％至40％w/w或摩尔比的ω-3脂肪酸部分，20％至40％w/w或摩尔比的ω-3脂肪酸部分，20％至50％w/w或摩尔比的ω-3脂肪酸部分，40％至60％w/w或摩尔比的ω-3脂肪酸部分，40％至99％w/w或摩尔比的ω-3脂肪酸部分，60％至99％w/w或摩尔比的ω-3脂肪酸部分，或80％至99％w/w或摩尔比的ω-3脂肪酸。所述w/w％可优选地通过选自由以下组成的组的分析方法来测定：气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)、GC-质谱(GC-MS)、核磁共振(NMR)或如本领域已知的其它合适的方法。在一些优选实施方案中，所述ω-3脂肪酸部分优选地选自DHA、EPA和其组合。在一些实施方案中，超过90％w/w的ω-3脂肪酸部分，优选超过95％w/w的ω-3脂肪酸部分，和最优选超过约98％w/w的ω-3脂肪酸部分分布在R2位置上。在一些优选实施方案中，所述ω-3脂肪酸部分为大于50％、60％、70％、80％、90％或95％w/w的EPA和/或DHA(即，EPA和/或DHA的重量/ω-3脂肪酸部分的总重量)。在一些实施方案中，EPA∶DPA的比率按摩尔计为约10∶1至1∶10、3∶1至1∶3、5∶1至1∶1、3∶1至1∶1、2∶1至1∶1、1∶1至1∶3或1∶1至1∶5。在一些实施方案中，所述提取物和组合物包含大于约40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％w/w的磷脂化合物(即，磷脂化合物的重量/磷脂组合物的总重量)。

在一些实施方案中，提取来自初始提取步骤的生物残留物以提供中性脂质提取物。该提取步骤优选使用质子溶剂，最优选初始提取步骤中使用的同一质子溶剂。在优选实施方案中，在约15C至约40C、优选约20C至约30C的温度下用质子溶剂提取所述生物残留物。在优选实施方案中，质子溶剂的浓度为至少90％、95％或98％w/w的质子溶剂(即，质子溶剂的体积/稀释的溶剂的总体积)或接近100％纯。在一些实施方案中，以质子溶剂∶生物原料为约1∶1至10∶1，优选约3∶1至7∶1，最优选约5∶1的比率使用质子溶剂。该步骤产生中性脂质富集的中性脂质提取物和亲脂性物质诸如虾青素和维生素E(如果在生物原料中存在的话)。

在一些实施方案中，中性脂质提取物优选包含三酰基甘油、二酰基甘油和游离脂肪酸的混合物。在包含按重量计约60％的磷脂(即，磷脂的重量/浓缩物的总重量)的磷脂浓缩物中，中性相优选包含约70-80％w/w三酰基甘油(即，三酰基甘油的重量/浓缩物的总重量)、约10-15％w/w的游离脂肪酸(即，游离脂肪酸的重量/浓缩物的总重量)，约2-5％w/w的二酰基甘油(即，二酰基甘油的重量/浓缩物的总重量)和约1-2％w/w的次要成分(即，次要成分的重量/浓缩物的总重量)，诸如胆固醇和虾青素。在获自磷虾凝结物的提取物的包含高于约80-90％w/w的磷脂(即，磷脂的重量/浓缩物的总重量)的磷脂浓缩物中，中性相优选包含约70-80％w/w的二酰基甘油(即，二酰基甘油的重量/浓缩物的总重量)，约10-25％w/w的三酰基甘油(即，三酰基甘油的重量/浓缩物的总重量)和约3-6％w/w的游离脂肪酸(即，游离脂肪酸的重量/浓缩物的总重量)。

可原样使用洗涤的富含极性脂质的提取物、富含极性脂质的沉淀、固体的富含极性脂质的组合物和中性脂质提取物，或可将其组合以提供具有所需极性脂质和中性脂质含量的混合脂质组合物。在优选实施方案中，所述混合脂质组合物具有确定的磷脂和甘油三酯含量。在一些优选实施方案中，所述混合脂质组合物具有约30％至60％w/w、35％至50％w/w或36％至44％w/w的磷脂含量(即，磷脂的重量/混合脂质组合物的总重量)，和约40％至70％w/w、50％至65％w/w或56％至64％w/w的甘油三酯含量(即，甘油三酯的总重量/混合脂质组合物的总重量)。在一些实施方案中，所述混合脂质组合物包含虾青素，优选从中性脂质提取物提供的中性虾青素。在一些实施方案中，所述脂质组合物提供至少第二抗氧化剂诸如维生素E。在一些实施方案中，所述脂质组合物可用另外的ω-3脂肪酸衍生物诸如EPA或DHA乙酯，优选EPA和/或DHA乙酯浓缩物，或包含EPA和DHA残基的甘油三酯或甘油二酯补充。在这些实施方案中，添加所述另外的ω-3脂肪酸衍生物以在脂质组合物中提供所需的ω-3脂肪酸含量。

本发明不限于任何特定生物原料的使用。所述生物原料可以优选地为藻类生物质、植物生物质或海洋动物生物质或从其生产。在优选实施方案中，海洋动物生物质被用作原料。合适的海洋动物生物质包括，但不限于，磷虾、螃蟹、哲水蚤属、浮游生物、卵、小龙虾、虾、鱼，尤其是鲱鱼以及海洋藻类。所述生物原料可以是新鲜的或冷冻的，或可以是从藻类、植物或海洋动物生物质产生的材料，诸如粉、粉末、水解物或凝结物(糊状物)。所述糊状物可以是湿糊状物或干糊状物。在一些优选实施方案中，所述生物原料是磷虾材料，例如磷虾凝结物、磷虾粉、磷虾水解物或新鲜或冷冻的磷虾。可利用任何种类的磷虾。在优选实施方案中，磷虾是南极磷虾或太平洋磷虾。

在一些特别优选的实施方案中，所述生物原料是磷虾膏或凝结物，并且可以是湿的或干的。合适的磷虾膏描述于例如WO09/027692(其通过引用整体并入全文)中。在一些实施方案中，将生物质(优选磷虾，新鲜收获的或冷冻的)加热至在25至80℃，优选40至75℃，最优选60至75℃范围内的温度，以将来自磷虾的脂质和蛋白质溶解/分散至水相中。在一些实施方案中，通过将水加热(除去磷虾之后)至高于约80℃，优选80至120℃，最优选95至100℃的温度来将蛋白质和磷脂从水相沉淀出来。可在大气压下加热水相，或可在升高的压力下在密闭系统中加热水相，以使温度可升高至高于100℃。可分离和表征所形成的沉淀(在下文中称为凝结物)。在其它实施方案中，将水相进行微滤。通过微滤产生的固相(称为残余物)与凝结物的固相类似。公开的数据显示，磷虾中的许多磷脂被从磷虾转移至凝结物或残余物中。

磷虾膏组合物的特征在于为蛋白质-脂质混合物。在优选实施方案中，组合物包含按干w/w计约10％至约30％的磷脂，和按干w/w计约20％至50％的蛋白质，其中所述磷脂包含ω-3脂肪酸残留物。在一些实施方案中，所述组合物包含具有按干w/w计约10％至约25％的ω-3脂肪酸含量的脂质级分。在一些实施方案中，所述磷脂包含按干w/w计大于约90％的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，所述磷脂包含按干w/w计少于约10％的乙醇胺。在一些实施方案中，所述膏组合物包含按干w/w计约20％至约45％的三酰基甘油。在一些实施方案中，所述组合物包含少于约1％w/w的胆固醇(即，胆固醇的重量/磷虾膏的总重量)。在一些实施方案中，所述组合物包含约0.01至约200mg/kg天然存在的虾青素。应当理解，可通过添加来自其它(外源)来源(天然的和非天然的)的虾青素来增加所述组合物的虾青素含量。同样地，可在加工过程中用外源性甘油三酯、磷脂和脂肪酸诸如ω-3脂肪酸补充所述组合物。在一些优选实施方案中，所述磷虾膏是湿磷虾膏，含有浓度为约50％至80％，60％至70％或约65％w/w的水(即，水的重量/磷虾膏的总重量)。

在一些实施方案中，本发明提供了包含上述富含极性脂质的提取物、混合脂质组合物或浓缩物和一种或多种另外的ω-3脂肪酸衍生物或游离脂肪酸的组合物。所述ω-3脂肪酸衍生物或游离脂肪酸可来源自中性脂质提取物或其它源，例如鱼油或ω-3酯浓缩物。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的ω-3脂肪酸衍生物选自ω-3酯和甘油酯。例如，在一些实施方案中，所述组合物可包含约1％至约60％w/w的磷脂(即，磷脂化合物的重量/组合物的总重量)，其余的99％至40％w/w的组合物为ω-3甘油酯、酯或游离脂肪酸或其组合(即，ω-3甘油酯、酯，或游离脂肪酸或其组合的重量/组合物的总重量)。在一些实施方案中，所述组合物可包含约5％至约60％w/w的磷脂，其余的95％至40％w/w的组合物为ω-3甘油酯、酯、或游离脂肪酸或其组合。在一些实施方案中，所述组合物可包含约20％至约60％w/w的磷脂，剩余的80％至40％w/w的组合物为ω-3甘油酯、酯，或游离脂肪酸或其组合。在一些实施方案中，所述组合物可包含约30％至约60％w/w的磷脂，剩余的70％至40％w/w的组合物为ω-3甘油酯、酯，或游离脂肪酸或其组合。在一些实施方案中，所述组合物可包含约40％至约60％w/w的磷脂，其余的60％至40％w/w的组合物为ω-3甘油酯、酯，或游离脂肪酸或其组合。在一些实施方案中，所述组合物可包含约50％至约60％w/w的磷脂，剩余的50％至40％w/w的组合物为ω-3甘油酯、酯，或游离脂肪酸或其组合。

在一些实施方案中，向有此需要的受试者施用上述化合物或组合物施以治疗与红细胞和细胞膜相关的疾病或病况，特别是与红细胞的细胞膜中的异常性相关的疾病或病况。在一些实施方案中，所述病况或疾病是镰状细胞病、镰状细胞性贫血或镰状细胞性状。在一些实施方案中，所述病况或疾病是地中海贫血(α-、β-或Δ-)、与血红蛋白病(血红蛋白E、血红蛋白S或血红蛋白C)组合的地中海贫血、脾肿大或膜异常诸如棘红细胞或刺突红细胞/棘细胞(spikecell)、靶形红细胞(靶细胞)、棘形细胞(锯齿形细胞)、椭圆形红细胞和卵形红细胞、球形红细胞、口形红细胞(口腔细胞)和咬痕细胞(“咬细胞”)。

在一些实施方案中，向有此需要的受试者施用有效量的上述化合物或组合物，以治疗或预防心血管病症或代谢综合征。在一些实施方案中，所述心血管病症选自动脉粥样硬化、动脉硬化、冠状动脉心脏(颈动脉)病(CHD或CAD)、急性冠脉综合征(或ACS)、心脏瓣膜疾病、主动脉和二尖瓣病症、心律失常/心房颤动、心肌病和心力衰竭、心绞痛、急性心肌梗塞(或AMI)、高血压、体位性低血压、休克、栓塞(肺和静脉)、心内膜炎、动脉、主动脉及其分支的疾病、周围血管系统的病症(外周动脉疾病或PAD)、川崎病、先天性心脏病(心血管缺陷)和中风(脑血管疾病)、血脂异常、高甘油三酯血症、高血压、心力衰竭、心律失常、低HDL水平、高LDL水平、稳定型心绞痛、冠心病、急性心肌梗塞、心肌梗塞的二级预防、心肌病、心内膜炎、2型糖尿病、胰岛素抵抗、葡萄糖耐量降低、高胆固醇血症、中风、高脂血症、高脂蛋白血症、慢性肾病、间歇性跛行、高磷酸盐血症、ω-3缺乏症、磷脂缺乏症、颈动脉粥样硬化、外周动脉疾病、糖尿病性肾病、HIV感染中的高胆固醇血症、急性冠状动脉综合征(ACS)、非酒精性脂肪肝病/非酒精性脂肪性肝炎(NAFLD/NASH)、动脉闭塞性疾病、脑动脉粥样硬化、动脉硬化、脑血管病症、心肌缺血、在血管中导致血栓形成的凝血病和糖尿病性自主神经病。

在一些实施方案中，向有此需要的受试者施用有效量的上述化合物或组合物，以治疗、预防或改善认知和/或认知疾病、病症或障碍(记忆、注意力、学习(缺陷))，或治疗或预防神经退行性病症。在一些实施方案中，认知疾病、病症或障碍选自注意力缺陷症(ADD)、注意力缺陷多动症(ADHD)、孤独症/自闭症谱系障碍(ASD)、(诵读困难、年龄相关记忆障碍和学习障碍、健忘症、轻度认知障碍、认知受损的非痴呆、前阿尔茨海默病、阿尔茨海默病、癫痫、皮克氏病、亨延顿舞蹈病、帕金森病、卢格里格病、前痴呆综合征、路易体痴呆、齿状核红核苍白球路易体萎缩、Freidreich共济失调、多系统萎缩、1型、2型、3型、6型、7型脊髓小脑性共济失调、肌萎缩性侧索硬化、家族性痉挛性下肢轻瘫、脊髓性肌萎缩、脊髓和延髓性肌萎缩、年龄相关性认知衰退、认知衰退、中度精神障碍、由衰老引起的精神衰退、影响脑电波强度和/或脑葡萄糖利用的病况、压力、焦虑、注意力集中受损、情绪恶化、一般认知和精神健康状况、神经发育、神经变性病症、荷尔蒙失调、神经失调或其任意组合。在具体的实施方案中，认知障碍是记忆障碍。

在一些实施方案中，向有此需要的受试者施用有效量的上述化合物或组合物，以抑制、预防或治疗炎症或炎性疾病。在一些实施方案中，炎症或炎性疾病选自器官移植排斥；因器官移植(包括，但不限于以下器官的移植：心脏、肺、肝和肾)导致的复氧损伤(见Grupp等，J.Mol.Cell.Cardiol.31：297-303(1999))；关节的慢性炎性疾病，包括关节炎、类风湿关节炎、骨关节炎和与增加的骨吸收相关的骨疾病；炎性肠病(IBD)诸如回肠炎、溃疡性结肠炎(UC)、巴雷特综合征和克罗恩氏病(CD)；炎性肺部疾病诸如哮喘、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和慢性阻塞性肺疾病(COPD)；眼的炎性疾病，包括角膜营养不良、沙眼、盘尾丝虫病、葡萄膜炎、交感性眼炎和眼内炎；牙龈的慢性炎性疾病，包括牙龈炎和牙周炎；肾的炎性疾病，包括尿毒症并发症、肾小球肾炎和肾病；皮肤的炎性疾病，包括硬化性皮炎、银屑病和湿疹；中枢神经系统的炎性疾病，包括神经系统的慢性脱髓鞘疾病、多发性硬化、AIDS相关神经变性和阿尔茨海默病、传染性脑膜炎、脑脊髓炎、帕金森病、亨廷顿舞蹈病、癫痫、肌萎缩性侧索硬化和病毒性或自身免疫性脑炎、先兆子痫；慢性肝衰竭、脑和脊髓创伤以及癌症。炎性疾病也可以是身体的全身性炎症，例如革兰氏阳性或革兰氏阴性休克、出血性或过敏性休克、或由响应于促炎细胞因子的癌症化学治疗引发的休克，例如，与促炎细胞因子相关的休克。此类休克可以例如由作为癌症的治疗施用的化疗剂诱导。其它病症包括抑郁症、肥胖症、过敏性疾病、急性心血管事件、肌肉消耗性疾病和癌症恶病质。还可用浓缩的治疗性磷脂组合物治疗因手术和创伤引起的炎症。

在一些实施方案中，所述有效量包含约0.1至约5克的洗涤的磷脂组合物或混合脂质组合物，优选约0.2至约3克的洗涤的磷脂组合物或混合脂质组组合物，最优选约0.5至约1.5克的洗涤的磷脂组合物或混合脂质组合物。

本发明的洗涤的磷脂提取物组合物或混合脂质组合物(即，脂质组合物)可用于治疗各种受试者。合适的受试者包括人以及家养动物、非人灵长类动物和伴侣动物，诸如狗、猫和鸟。

优选地静脉内或口服施用本发明的脂质组合物。因此，在一些实施方案中，将本发明的组合物(诸如在前面的章节中描述的那些)包含在可接受的赋形剂和/或载体中以用于口服消费或用于静脉内施用。载体和从而组合物本身的实际形式不是至关重要的。所述载体可以是液体、凝胶、囊形片、胶囊剂、粉剂、固体片剂(包被的或非包被的)、茶等。所述组合物优选呈片剂或胶囊剂形式，最优选呈软凝胶胶囊剂形式。合适的赋形剂和/或载体包括植物油、鱼油、磷虾油、麦芽糊精、碳酸钙、磷酸二钙、磷酸三钙、微晶纤维素、葡萄糖、米粉、硬脂酸镁、硬脂酸、交联羧甲基纤维素钠、羟乙基淀粉钠、交聚维酮、蔗糖、植物胶、乳糖、甲基纤维素、聚维酮、羧甲基纤维素、玉米淀粉等(包括其混合物)。优选的载体包括碳酸钙、硬脂酸镁、麦芽糊精及其混合物。使用常规技术将多种成分和赋形剂和/或载体混合并形成所需形式。本发明的片剂或胶囊剂可涂覆有在约6.0至7.0的pH下溶解的肠溶包衣。在小肠中溶解但在胃中不溶解的合适的肠溶包衣为醋酸纤维素邻苯二甲酸酯。关于用于配制和用于施用的技术的进一步细节可见于Remington′sPharmaceuticalSciences(MaackPublishingCo.，Easton，PA)的最新版本。对于静脉内或口服施用，本发明的ω-3化合物和组合物可优选作为乳剂提供。

在一些实施方案中，用调味剂或甜味剂将脂质组合物配制用于口服施用。可用的调味剂的实例包括，但不限于，纯八角提取物、仿香蕉提取物、仿樱桃提取物、巧克力提取物、纯柠檬提取物、纯橙提取物、纯薄荷提取物、仿菠萝提取物、仿朗姆提取物、仿草莓提取物或纯香草兰提取物；或挥发油，诸如蜜蜂花油、月桂油、香柠檬油、柏木油、胡桃油、樱桃油、桂皮油、丁香油或薄荷油；花生酱、巧克力调味剂、香草兰饼干屑、奶油糖果或太妃糖。在一个实施方案中，膳食补充剂含有可可或巧克力。可添加乳化剂以稳定成品的稳定性。合适的乳化剂的实例包括，但不限于，卵磷脂(例如，来自卵或大豆)，和/或单-和二-甘油酯。其它的乳化剂对于本领域技术人员是轻易显而易见的，并且合适的乳化剂的选择将部分取决于制剂和成品。除了上述碳水化合物以外，营养补充剂还可含有天然或人造的(优选低卡路里的)甜味剂，例如糖类、甜蜜素、aspartamine、阿斯巴甜、乙酰磺胺酸钾和/或山梨醇。

还可将本发明的脂质组合物作为膳食补充剂、营养补充剂或功能性食品来进行递送。

所述膳食补充剂可包含一种或多种惰性成分，特别地当期望限制由膳食补充剂添加至饮食的卡路里数时。例如，本发明的膳食补充剂也可以含有任选的成分，包括例如，草药、维生素、矿物质、增强剂、着色剂、甜味剂、调味剂、惰性成分等。例如，本发明的膳食补充剂可含有以下物质的一种或多种：抗坏血酸盐(抗坏血酸、抗坏血酸矿物盐、玫瑰果、金虎尾等)，脱氢表雄酮(DHEA)、绿茶(多酚)、肌醇、海带、红皮藻、生物类黄酮、麦芽糊精、荨麻、烟酸、烟酰胺、迷迭香、硒、硅土(二氧化硅、硅胶、马尾、马尾草等)、螺旋藻、锌等。此类任选的成分可为天然存在的或浓缩的形式。

在一些实施方案中，所述膳食补充剂还包含维生素和矿物质，包括，但不限于，磷酸或醋酸三钙；磷酸二钾；硫酸镁或氧化镁；盐(氯化钠)；氯化钾或醋酸钾；抗坏血酸；正磷酸铁；烟酰胺；硫酸锌或氧化锌；泛酸钙；葡萄糖酸铜；核黄素；β-胡萝卜素；盐酸吡哆醇；单硝酸硫胺素；叶酸；生物素；氯化铬或吡啶甲酸铬；碘化钾；硒酸钠；钼酸钠；叶绿醌；维生素D₃；氰钴胺；亚硒酸钠；硫酸铜；维生素A；维生素C；肌醇；碘化钾。维生素和矿物质的合适剂量可以例如通过查阅美国RDA指南来获得。

在其它实施方案中，本发明提供了营养补充剂(例如，能量棒或代餐棒或饮料)，其由本发明的脂质组合物组成。在优选实施方案中，所述营养补充剂包含有效量的如上所述组分。营养补充剂可用作膳食或零食替代物，并且通常提供营养品卡路里。优选地，所述营养补充剂以均衡量提供碳水化合物、蛋白质和脂肪。所述营养补充剂还可包含碳水化合物、单糖、中链长度的糖或多糖，或其组合。可选择单糖的期望的感官特性。未烹饪的玉米淀粉是复杂碳水化合物的一个实例。如果期望其应该保持其高分子量结构，则应当仅将其包含在食品制剂或其未被烹饪或加热处理的部分中，因为热会将复杂的碳水化合物分解成简单的碳水化合物，其中简单的碳水化合物是单糖或二糖。在一个实施方案中，所述营养补充剂包含具有三级链长度(简单、适中和复杂；例如，蔗糖、麦芽糊精和未烹饪的玉米淀粉)的碳水化合物源的组合。

在其它实施方案中，本发明提供了包含本发明的脂质组合物的食品、预制食品或粮食(即，功能性食品)。在优选实施方案中，所述食品包含有效量如上所述的组分。例如，在一些实施方案中，提供了含有脂肪酸或其衍生物的饮料和固体或半固体食物。这些形式可以包括，但不限于，饮料(例如，软饮料、牛奶和其它乳饮料和消脂饮品)、焙烤食品、布丁、乳制品、糖果、零食或冰冻甜点或新奇食品(例如，冰淇淋、奶昔)、预制冷冻食品、糖果、零食产品(例如，土豆片)、汤、糊状食品、酱、沙拉酱、预制肉制品、奶酪、酸奶和任何其它含有脂肪或油的食物以及食物成分(例如，小麦面粉)。

在一些优选实施方案中，将所述脂质组合物掺入可咀嚼基质。优选的可咀嚼基质是软糖和基于明胶的橡皮糖。示例性橡皮糖包括熊橡皮糖、蠕虫橡皮糖、青蛙橡皮糖、汉堡包橡皮糖、樱桃橡皮糖、汽水瓶橡皮糖、鲨鱼橡皮糖、军人橡皮糖、河马橡皮糖、龙虾橡皮糖、西瓜橡皮糖、章鱼橡皮糖、苹果橡皮糖、桃橡皮糖和橙子橡皮糖。术语“橡皮糖”和“橡皮糖状”在本文可互换使用。

在一些特别优选的实施方案中，所述可咀嚼基质材料是通常称为橡皮糖或果冻材料的甜料。橡皮糖或果冻糖是广泛的一般类型的基于明胶的耐嚼糖果。橡皮熊是最流行的和众所周知的橡皮糖。同样地提供其它形状，有时将橡皮糖与其它形式的糖果诸如棉花糖和巧克力组合并使之发酵。

在优选实施方案中，所述可咀嚼基质材料包含胶凝剂，其可以是能够形成软的、可咀嚼的、自支撑的咀嚼胶的任何生理上可耐受的胶凝剂(优选地糖类(例如寡糖或多糖)、蛋白质或糖蛋白)或组合。许多此类材料已知来自从食品和制药工业，并且在例如Handbookofhydrocolloids，GOPhillips和PAWilliams(编辑)，WoodheadPublishing，Cambridge，UK，2000中进行了论述。胶凝剂优选地是能够例如在物理化学参数诸如温度、pH、金属离子(例如组1或2金属离子)的存在等的变化的影响下经历溶胶-凝胶转变的材料。优选的胶凝剂包括明胶、藻酸盐和角叉菜胶。然而，明胶的使用是特别优选的，因为确保了捕获的片段在喉部被分解，以及因为具有所需性质的核可使用明胶来容易地产生。

可从任何哺乳动物的胶原或任何水生物种的胶原产生在本发明的可咀嚼基质中用作胶凝剂的明胶，然而来自咸水鱼，特别是冷水鱼和温水鱼的明胶的使用是优选的。具有5至25重量％的氨基酸含量的明胶是优选的，更特别具有10至25重量％的氨基酸含量的那些。明胶通常具有在10至250kDa，优选75至220kDa，特别是80至200kDa的范围内的重均分子量。无Bloom值或具有60-300、150-300，尤其是90-200的低Bloom值的明胶是优选的。当使用无Bloom值的明胶例如冷水鱼明胶时，其通常与另一种明胶或其它胶凝剂一起使用。冷水鱼明胶和温水鱼明胶的组合是特别优选的。明胶通常以1至50重量％，优选2至35重量％，优选5至25重量％的浓度存在于水相中。在明胶和多糖的混合物的情况下，水相中的明胶∶多糖的重量比通常为50∶1至5∶1，优选40∶1至9∶1，尤其是20∶1至10∶1。

当将多糖、或多糖与明胶的混合物用作胶凝剂时，优选使用天然多糖、合成多糖或半合成多糖，例如来自植物、鱼、陆生哺乳动物、藻类、细菌的多糖及其衍生物和断裂产物。典型的海洋多糖包括角叉菜胶、藻酸盐、琼脂和壳聚糖。

典型的植物多糖包括果胶。典型的微生物多糖包括胶凝糖和硬葡聚糖。带电荷的，例如带静电荷的和/或硫酸化的多糖的使用是优选的，海洋多糖，特别是角叉菜胶和藻酸盐，尤其是角叉菜胶的使用也是优选的。包括ι-和κ-角叉菜胶的角叉菜胶家族是从红藻产生的线性硫酸化多糖的家族。κ-角叉菜胶中的重复二糖单元是β-D-半乳糖-4-硫酸盐和3，6-脱水-α-D-半乳糖，而ι-角叉菜胶中的重复二糖单元为β-D-半乳糖-4-硫酸盐和3，6-脱水-α-D-半乳糖-2-硫酸盐。κ-和ι-角叉菜胶均用于食品的制备。角叉菜胶被用作稳定剂、乳化剂、胶凝剂和脂肪替代品。

ι和κ角叉菜胶均在水环境中形成盐-或冷-固化可逆凝胶。卷曲-螺旋转变和螺旋的聚集形成明胶网络。κ角叉菜胶具有特定单价阳离子的结合位点，从而导致凝胶形成，剪切模量和弹性模量按Cs⁺＞K⁺＞＞Na⁺＞Li⁺顺序减小。通常地，递增的盐浓度增加κ角叉菜胶的弹性模量以及凝固和熔化温度。当按照本发明，例如以高达100mM，更特别地高达50mM的浓度使用κ角叉菜胶时，水溶性钾、铷或铯化合物，特别是钾化合物，特别是天然存在的化合物(例如，盐)的使用是优选的。对于ι角叉菜胶也发现盐依赖性构象转变。还已知所述分子在多价阳离子如Ca²⁺存在的情况下，以强螺旋稳定经历卷曲-螺旋转变。当按照本发明例如以高达100mM的浓度使用ι角叉菜胶时，水溶性钙、锶、钡、铁或铝化合物，尤其是钙化合物，特别是天然存在的化合物(例如，盐)的使用是优选的。

根据本发明使用的多糖胶凝剂通常具有5kDa至2MDa，优选地10kDa至1MDa，最优选地100kDa至900kDa，特别地200至800kDa的重均分子量。它们在水相中通常以0.01至5重量％，优选地0.1至1.5重量％，特别是0.2至1重量％的浓度使用。当在水相中包含单价或多价阳离子(通常地组1或组2金属离子)时，这通常为在2.5至100mM，特别是5至50mM的范围内的浓度。

除了胶凝剂和水以及任何所需的胶凝引发剂以外，其它生理上可耐受的材料也可存在于可咀嚼基质中，例如，乳化剂、乳剂稳定剂、pH调节剂、粘度调节剂、甜味剂、填充剂、维生素(例如维生素C、硫胺素、核黄素、烟酸、维生素B6、维生素B12、叶酸、泛酸)、矿物质、香料、调味剂、制造剂、颜料、生理活性剂等，如上文中关于可被包含在可氧化的脂肪酸组合物中的添加料所详细描述的。

所述可咀嚼基质优选具有在10至30C，更优选15至28C的范围内的胶凝温度，和在20至80C，更优选24至60C，特别是28至50C的范围内的熔化温度。

当将甜味剂包含在可咀嚼基质中时，这通常选自天然甜味剂，诸如蔗糖、果糖、葡萄糖、还原葡萄糖、麦芽糖、木糖醇、麦芽糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、乳糖醇、异麦芽酮糖醇、赤藓醇、氢化葡萄糖、聚葡糖醇、甘油、甜菊、龙舌兰花蜜，转化糖浆和人工甜味剂，例如阿斯巴甜、乙酰舒泛钾、纽甜、糖精、蔗糖素。非致龋性甜味剂的使用是优选的，并且木糖醇的使用是特别优选的。优选的调味剂包括橙、覆盆子、樱桃、柠檬、血橙、柚、草莓、蓝莓、黑莓及其组合，特别是橙和覆盆子。

橡皮糖糖食(如熊橡皮糖)的大量生产包括混合橡皮糖糖食成分，以及将所得混合物倒入许多刮浆衬里的(例如，玉米淀粉衬里的)托盘/模具。玉米淀粉防止橡皮熊粘附在模具上，并使它们一旦凝固便容易脱下。首先，产生所需的字模以及，如果需要的话，用机器复制。任选地，将淀粉粉末施加至字模。将橡皮糖糖食成分，诸如糖、葡萄糖糖浆、明胶和水混合在一起并加热。在一个方面中，将所述成分与给所述小熊带来它们的特征外貌和味道的颜料和调味剂混合。将熔融明胶混合物倒入模具中并使其冷却和凝固，随后包装或消费。优选地，随后加热橡皮糖糖食，并将其放置在大的鼓式拌合机中以施加分离的凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)和甜味剂(例如，糖)的组合物。

在一些优选实施方案中，橡皮糖糖食的生产包括以下内容。形成胶体批和果泥批，并将其与玉米糖浆和糖组合以形成基质浆料。胶体批以按重量计5至15％的胶凝剂，更优选按胶体批的总重量计7至12％的胶凝剂的水平包含胶凝剂在水中的溶液。将胶体批保持在170至190F的温度下。果泥批优选包含水、果泥和/或高果糖玉米糖浆或其它甜味剂、低粘度变性淀粉和柠檬酸钠。将其保持在65至75F的温度。优选地，所述果泥具有10至45，更优选25至40的白利糖度。任选地，所述果泥批包括多种果泥。果泥包括典型的果泥、果汁或果粉。果泥批包含按重量计30至40％的水，按重量计0至40％的果泥，按重量计0至40％的高果糖玉米糖浆，按重量计25％至35％的低粘度变性淀粉，和按重量计0.0至2.0％的柠檬酸钠。在混合釜中，将按重量计25至40％的另外的玉米糖桨与按重量计15至40％的细砂糖、按重量计10％至15％的胶体批和按重量计20至30％的果泥批组合以形成基质浆料。优选地，玉米糖浆为约42DE的玉米糖浆，然而，如可由本领域普通技术人员所理解的，可使用其它DE玉米糖浆。将所述基质浆料组分在贮存罐中彻底混合，并保持在130至150F。

随后将基质浆料蒸煮以将白利糖度从70升至85，更优选升至从75至80的白利糖度。在一个实施方案中，使基质浆料通过线圈烹调器，并加热到250至325F的温度以对其蒸煮。可使用其它蒸煮方法，如本领域普通技术人员所将理解。优选地将蒸煮的基质浆料经历真空以进一步提高白利糖度至所需范围内。将蒸煮的基质浆料保持在约200F，直至使用。优选将酸化剂溶液连同颜料和调味剂一起添加至蒸煮的基质浆料，随后立即沉积在淀粉模具中。在一个方面中，酸化剂溶液包含以按重量计15至20％的量存在的抗坏血酸，以按重量计10至20％的量存在的柠檬酸，和以按重量计5至10％的量存在的苹果酸，其余包含水。如将由本领域普通技术人员所理解，可用其它食用酸替代所列的那些酸，或除了所列的那些酸可使用其它食用酸。在一个方面，将按重量计95至97％的蒸煮的基质浆料与按重量计2至3％的酸化剂溶液组合，并且其余包含调味剂和颜料。任选地，所述酸化剂溶液用于使基质桨料的pH从2.6升至3.2。本领域普通技术人员将毫无困难地选择合适的颜料和调味剂。随后将组合的混合物沉积在淀粉模具中，例如，使用Mogul淀粉成型机。此类淀粉成型机为本领域普通技术人员所熟知。在一个方面中，将0.3至3克的基质浆料沉积在各模腔中。在一些优选实施方案中，用于形成橡皮熊的淀粉成型机(“Mogul”)包括每模具两个喷嘴，和用于递送小软胶囊的装置。在将一个胶囊置于模具中前，第一喷嘴提供约40％的该模具的体积。最后，第二喷嘴填满模具。随后快速冷却含有胶囊的橡皮熊。将具有沉积的基质浆料的淀粉托盘转移至干燥室，在其中保持12至48小时。任选地，首先将托盘在130至150F的温度下保持10至15小时，随后冷却至70至80F，并在该温度下保持6至12小时。随后从托盘取出胶凝淀粉模制的食品片，回收淀粉。

在本发明的一些实施方案中，预期胶囊内的油免于被存在于产品中的水水解。橡皮糖和其它果冻糖含有相当高含量的水并且进一步地，酸度低以抵消细菌的生长。

实施例1

本实施例描述鳞虾凝结物(糊状物)的产生。

材料和方法

原料。冷冻磷虾通过AkerBiomarine获得，将10吨储存于NorwayPelagic，Bergen，并根据需要取回。将磷虾以2×12.5kg磷虾的规格包装在塑料袋置于硬纸板盒中。将盒子盖上FRAL和C05S或A06S的邮戳。将含有磷虾的盒子在加工前一天置于工艺装置的底板上的单层中。到加工时，磷虾从+3℃变化至-3℃。

处理和设备

在蒸汽加热釜(200l)中或在刮面热交换器(Contherm6×4，AlfaLavalAB)进行加热。

将磷虾和热液体(通常为95±2℃)在支持螺旋进料的单螺杆泵(PCM4LIVA，PCMS.A.，Vanves，France)中混合。用水校准泵的总流量，且当添加磷虾时，水流减少。

通过经由分离的不锈钢管(6x2″管6m和5x180°弯曲0.3m，总长度37.5m)或经由阿基米德式软管泵(Matcon，Herslev，管3”x26m)的运输将磷虾与热液体的混合物保持在指定的温度(70±5℃)。

首先在金属筛上分离磷虾和液体。

对于大多数实验，在单或双带式过滤器(SobyeAS，合成纤维过滤器的空气开口为0.8mm)上排出磷虾和凝结物。在70℃下在(P19-40100nmZrO2膜，CeramicMFplant，DownstreamProcessing，Bergen)中进行蒸煮液体的膜过滤。作为膜过滤前的预过滤，旋转式流体筛(Jesmavs20/65，HansJessensMaskinbyggeriAS，Vejle)，(空气开口100μm)。

在双螺旋压榨机(P9，StordBartz，Bergen，体积比1∶4.2)中对排出的凝结物进行脱水。

在双螺旋压榨机(P13，StordBartz，Bergen，体积比1∶5)中对排出的磷虾进行脱水。

在三相卧螺离心机(Z23，FlottwegGmbH&Co.，Vilsbiburg，Germany)中或旋转式流体筛(Jesmavs20/65，HansJessensMaskinbyggeriAS，Vejle)(空气开口100μm)与油分离器(SA-1，WestfaliaSeparatorAG，Oelde，Germany)的组合中分离压榨液。

在4级降膜蒸发器(Anhydro，Denmark)中浓缩压榨液。

在支持机械流化的热风干燥器(FT200，Forberg，Larvik)中或在蒸汽加热Rotadisc干燥器(TST0，3R，StordBartz，Bergen)中进行干燥。

分析方法

蛋白质，Kjeldahl法：通过溶解在浓硫酸中(以铜作为催化剂)来将样品中的氮转化成铵。氨在碱性蒸馏物中释放，并通过滴定来测定，(ISO5983：1997(E)，MethodA01)。不确定性：1％。

蛋白质，燃烧：通过在高温下于纯氧中燃烧样品来进行氮的释放。通过导热性来检测。样品中的蛋白质的百分比通过将分析的氮的百分比与给定的蛋白质因子相乘来计算，(AOACOfficialMethod990.03，第16版。1996，MethodA25)。

水分：测定在103℃下干燥4小时的质量损失(ISO6496(1999).MethodA04)。不确定性：4％。

灰分：在550℃下燃烧有机物质。将燃烧后剩余的残留物定义为样品的灰分含量。(ISO5984：2002.MethodA02)。不确定性：3％。

脂肪，乙酸乙酯提取：通过硫酸钠吸收湿样品中的水分，随后利用乙酸乙酯提取脂肪(NS9402，1994(修正计算)。MethodA29)。

脂肪，索氏抽提：利用石油醚提取脂肪。主要测定甘油三酯的含量，(AOCSOfficialMethodBa3-38Reapproved1993.MethodA03)。

脂肪，Bligh和Dyer：利用1∶2∶0.8的比例的氯仿、甲醇和水的混合物提取脂肪，所述混合物构成单相系统。氯仿和水的添加产生含有脂质的氯仿相和水/甲醇相。脂质在蒸发和称重后的氯仿相的等分试样中测定。提取物包括甘油三酯和磷脂。(E.G.Bligh&W.J.Dyer：Arapidmethodoftotallipidextractionandpurification.Can.J.Biochem.Physiol.第37卷(1959).MetodeA56)。

虾青素：利用乙醇和二氯甲烷进行提取。通过开放硅胶柱层析来除去极性产物。在Si60柱上于正相HPLC上分离同分异构体，并在470nm处进行检测。(SchierleJ.&W.1994.DeterminationofstabilizedastaxanthininPink，premixesandfishfeeds.第3版.RevisedSupplementto：HoffmanP，KellerHE，SchierleJ.，SchuepW.Analyticalmethodsforvitaminsandcarotenoidsinfeed.Basel：DepartmentofVitaminResearchandDevelopment，Roche.MethodA23)。

油中的水分：通过用卡尔费歇尔试剂滴定来测定脂肪和油的实际水含量，所述试剂与水定量反应，(AOCSOfficialMethodCA2e-84.Reapproved1993.MethodA13)。

磷虾和预热的水在烹调器中混合，并升至70C的温度。随后，通过过滤将加热的磷虾和热水分离，以提供磷虾乳。随后通过加热至95℃使磷虾乳凝结，并通过Soby与液体分离。随后将凝结物在P-9压机中压榨。表1和表2给出了凝结物在湿基和干基上的分析。凝结物的干物质介于12.8至16.7％之间。在干基上，脂肪含量为约60％，并且TMAO为340mgN/100g。通过压榨使凝结物的干物质增加至34-38％。脂肪含量在干基上也增加(表3)，但TMAO降至145mgN/100g。洗涤滤饼(1份水∶1份凝结物的滤饼)后随后再次压榨，TMAO在干基上降至45mgN/100g(表4)。

表1湿基(wb)上的凝结物分析

表2干基(db)上的凝结物分析

表3来自湿基上的凝结物的滤饼的分析

表4来自干基上的凝结物的滤饼的分析

实施例2

本实施例描述通过乙醇提取进行的从磷虾干粕获得的油提取物的洗涤步骤。在首次除去大部分乙醇后，将含有60.5％干物质和2.4％水的材料与乙醇分离。向94.5kg的此材料中添加24.8kg水和35.0kg乙醇。将混合物搅拌，并使其分离成含有大部分磷脂的底层，富含三酰甘油的中间层，以及含有少于约3％的脂质(主要是溶血磷脂)的顶层。底层的电导率为722us/cm。除去包含81.7kg的两个顶层，将67kg的60％(w/w)的乙醇水溶液添加至底层，并剧烈搅拌约10分钟。在相沉降后，除去82.2kg的顶层，并将76.0kg的60％的乙醇溶液添加至底层(电导率现为384uS/cm)并剧烈搅拌约10分钟。沉降后，除去包含82.0kg的顶相。底相的电导率现为183uS/cm。从底相蒸发乙醇/水后，获得31.0kg的脂质产物，其含有16.4％的EPA和7.9％的DHA(从12％的EPA和6％的DHA起)和55.21％的磷脂(从40％起)。在气味和味道方面进一步高度改善产物。

极性脂质级分的组成如下：

磷脂	重量％	Mol-％	MVV[g/mol]
				PC	45,38	79,47	790,0
1-LPC	0,45	1,17	534,5
				2-LPC	3,76	9,73	534,5
PI	0,24	0,37	907,0
				LPI	---＊)	---＊)	629,5
PS-Na	---＊)	---＊)	833,0
				LPS	---＊)	---＊)	555,5
SPH	---＊)	---＊)	812,0
				PE	3,05	5,47	770,0
LPE	0,31	0,88	492,5
				APE	1,44	1,93	1032,0
PG	---＊)	---＊)	820,0
				DPG	---＊)	---＊)	774,0
PA	---＊)	---＊)	746,0
				LPA	---＊)	---＊)	468,5
其它	0,58	0,98	812,0
				总计	55,21	100,00
磷	2,24

实施例3

本实施例描述从湿材料中提取油。如WO2009/027692(通过引用整体并入本文)所述，从磷虾获得的包含约70％的水、15％的脂质和约15％的其它干物质(主要为蛋白质)的凝结物。该材料经历如下提取步骤。将3500克纯乙醇添加至1004克凝结物，并搅拌45分钟。随后通过滤纸在接收瓶上施加真空将混合物过滤，获得3854克滤液。将1179克滤液在旋转蒸发器上进行蒸发，随后用60％的乙醇溶液洗涤所获得的干物质4次，最后在旋转蒸发器上蒸发溶剂。所获得的油(23.7克)在室温下为固体，并包含76.8％的磷脂。通过冷冻干燥除去水。

EPA的含量为200mg/克，DHA的含量为87mg/克油。磷脂级分的组成如下：

磷脂	重量％	Mol-％	MW(g/mol]
				PC	71,97	93,03	790,0
1-LPC	0,24	0,45	534,5
				2-LPC	0,73	1,39	534,5
PI	---＊)	---＊)	907,022 -->
				LPI	---＊)	---＊)	629,5
PS-Na	---＊)	---＊)	833,0
				LPS	---＊)	---＊)	555,5
SPH	---＊)	---＊)	812,0
				PE	3,37	4,47	770,0
LPE	---＊)	---＊)	492,5
				APE	---＊)	---＊)	1032,0
PG	---＊)	---＊)	820,0
				DPG	---＊)	---＊)	774,0
PA	---＊)	---＊)	746,0
				LPA	---＊)	---＊)	468,5
其它	0,53	0,66	812,0
				总计	76,83	100,00
磷	3,03

实施例4

本实施例描述用于从磷虾湿材料中提取油的替代方法，所述方法从磷虾冷冻糊状物入手，将其经历如下所述的提取步骤。与实施例3不同，所有步骤在氮气气氛下进行。

所述糊状物包括约65％的水(通过干物质评估)、17％的脂质(约等重量的磷脂和中性脂质)和约18％的其它干物质(主要是蛋白质)。在脂质中，某些脂肪酸按重量计的比例如下：C16∶0约15-17％；C14∶0约6-10％；C18∶3n-3约1.4-3.1％；以及C18∶4n-3约3.5-7％。

将100kg冷冻凝结物(-20℃)添加至容器中。基于凝结物的水含量，随后将350kg纯乙醇(99.8％w/w，室温)添加至容器中，在液相中产生约84％w/w的终乙醇浓度(～350kg乙醇于415kg液体溶剂中)。添加乙醇以接近所需的终浓度，随后通过卡尔费歇尔滴定检查水含量，并添加额外的乙醇以获得正确的最终量。

将混合物在容器中搅拌45分钟，必要时温和加热。在单独批次中研究4个最终温度，即a)2℃，b)10℃，c)15℃和d)20℃。在搅拌完成后，将混合物静置，它们各自包含红色液相和含有壳碎片和其它不溶性物质的湿浆。为了从浆料中除去液相，将混合物倾析，并且使液体材料通过粗过滤器，随后通过75μm和5μm滤筒过滤器进行系列过滤以获得a)345kg、b)366kg、c)372kg或d)374kg的滤液，剩余材料残留在滤饼中。还已使用较小的筒式过滤器(例如1.2μm)。

随后将滤液经历一系列洗涤。首先，添加去离子水以得到～60％w/w的乙醇溶液(a：137kg水；b：149kg；c：152kg；d：155kg)，将混合物搅拌10-15分钟，并在室温下(15-20℃)于在底部具有阀门的容器中放置沉降12-24小时。通过使底相穿过阀门排出将底相分离，产生介于5.4至9.0kg之间的富含脂质的级分。将富含脂质的级分在室温下用60％w/w的乙醇再洗涤2至5次，以获得含有按重量计约80％的磷脂和20％的中性脂质的最终材料。即使在第一次洗涤中，85％的TMAO被除去，并且进一步的洗涤导致材料具有检测不到的TMAO(小于1mgN/100g，即至多为WO2013/102792的表X中报导的1/20)。

通过冷丙酮沉淀处理该富含脂质的材料至少一次。加入三份w/w丙酮，并通过温和加热和缓慢搅拌溶解富含脂质的材料。停止搅拌并将混合物冷却至4℃以进行沉淀。当沉淀完成时，除去上层溶剂相。该冷沉淀步骤总共进行3次，在第一次后每次重新溶解于新鲜丙酮中。

然后将沉淀经历蒸发和冷冻干燥以除去残余丙酮和水。批次c(即在15℃下提取，随后用60％EtOH洗涤3次，然后进行冷丙酮沉淀)提供1.9kg由98％磷脂/1.7％中性脂质组成的固体材料(橙色蜡)，水含量为3％。EPA的含量为19.2g/100g且DHA的含量为11.0g/100g固体材料。通过³¹PNMR测量的磷脂级分的组成如下：

磷脂	重量％	Mol-％	MW[g/mol]
				PC	82,59	89,03	790,0
1-LPC	---＊)	---＊)	534,5
				2-LPC	0,12	0,19	534,5
PI	0,47	0,44	907,0
				LPI	---＊)	---＊)	629,5
PS-Na	---＊)	---＊)	833,0
				LPS	---＊)	---＊)	555,5
SPH	---＊)	---＊)	812,0
				PE	8,25	9,13	770,0
LPE	---＊)	---＊)	492,5
				APE	0,59	0,49	1032,0
PG	---＊)	---＊)	820,0
				DPG	---＊)	---＊)	774,0
PA	---＊)	---＊)	746,0
				LPA	---＊)	---＊)	468,5
其它	0,69	0,73	812,0
				总计	92,72	100,00
磷	3,64

^＊)＝未观察到，无信号分配

因此，基于通过NMR分析的材料的总重量，将近93％的终材料为磷脂。在补偿点火后存在的残余水(约3％)、残余有机溶剂以及盐/矿物质后，总体纯度为98％。因此该方法提供了具有比使用实施例1看到的更高的纯度的磷脂。

通过HPLC对脂质组合物进行进一步分析，结果示于下文(克/100g的油)：

(1)基于Winther等(2011)Lipids46：25-36；HomanR等1998JChromatogrBBiomedSciAppl708：21-26和Moreau等2006Lipids41：727-734中的技术计算。

(2)通过AOCSCe1b-89计算为脂肪酸甲酯。

纵观特定脂肪酸，比例如下，在多个批次中测量：

纯化的磷脂包括醚连接和酯连接的脂肪酸，但10％或更少为醚连接的。NMR显示醚连接的脂肪酸部分在位置sn1而非sn2上，并且醚连接的脂肪酸是完全饱和的或单不饱和的。当磷脂为磷脂酰胆碱时，约10％的分子包含醚连接的脂肪酸；当磷脂为磷脂酰乙醇胺(具有或不具有N-乙酰化)时，约40％的分子包含醚连接的脂肪酸。PUFA被看到只含有酯键。纯化的磷脂中按重量计30-40％的脂肪酸为ω-3，并且这些脂肪酸分布在sn1和sn2位置(主要在sn2)上。大部分ω-3脂肪酸为EPA和/或DHA，EPA约为DHA的2倍。

使用该方法的磷脂酰乙醇胺含量比使用实施例1的方法看到的高(约为2倍)。

当与使用实施例1(约1％)的方法观察到的量和起始湿材料中的量(约1.2-1.4mol％)相比较时，溶血磷脂酰胆碱含量(0.2-0.4mol％)在纯化的磷脂中非常低。未检测到其中sn1和sn2位置上的脂肪酸链均已失去的分子。也未看到溶血磷脂酰乙醇胺(具有或不具有N-乙酰化)和溶血磷脂酰肌醇。

当与实施例3中获得的材料相比较时，纯化的磷脂中的虾青素水平要低得多。由于较弱的红色，该降低甚至是可见的。氨基酸、TMAO和龙虾肌碱均低于按标准分析法的LOQ。

因此可通过使用于84％乙醇中进行提取，随后于60％乙醇中进行洗涤，以及随后进行多个冷丙酮沉淀步骤的方法来获得非常纯的磷虾磷脂。

实施例5

本实施例描述用于优选使用从洗涤的富含极性脂质的提取物制备的60％w/w的磷虾磷脂组合物产生含有磷虾油提取物的橡皮糖的方法。将明胶溶于水(1∶2)并且使蛋白质在80-100℃(明胶在68℃熔化)下变形成凝胶。同时，在另一个转鼓中，将糖与糖浆混合并于100-120℃下蒸煮。明胶与糖在另一个转鼓中通过蒸煮和搅拌混合。2小时后，终产物通常含有15-17％的水。将明胶和糖混合物在真空转鼓外自动冷却至70-80℃。向橡皮糖混合物中添加不同的调味剂(例如，覆盆子与橙的组合)。随后在pI对明胶(猪明胶，250bloom具有pH3-4的pI)进行酸化或碱处理。随后将磷虾磷脂提取油添加至明胶和糖混合物中。该过程花费约5-10分钟。在添加之前，磷虾提取物优选用水或山梨醇糖浆稀释(例如，提取物为比例为1∶4的油∶水的液体)。将橡皮糖材料的均质混合物倒入模具。模具可以是玉米或小麦质的并且可重复使用。在RT下1-3天后，GB形成，将其从模具中取出。将橡皮糖转移至腔室，在所述腔室中对它们进行喷蜡和喷油。可能用糖进行第二次涂层。

上述说明书中提及的所有出版物和专利均通过引用并入本文。在不背离本发明的范围和精神的情况下对本发明的所述化合物、组合物以及方法和用途进行各种修改和变化对于本领域技术人员来说将是显而易见的。虽然已结合具体优选实施方案对本发明进行了描述，但应当理解，所要求保护的发明不应当不适当地限定于此类具体实施方案。事实上，用于进行本发明的所述模式的各种修改对于医学、生物学和化学科学领域中的技术人员而言是明显的，且旨在包含在以下权利要求的范围内。

Claims (58)

1.一种用于从生物材料提取富含极性脂质的提取物的方法，所述方法包括：

在使得极性脂质被优先提取的条件下将所述生物材料与浓缩的质子溶剂接触，以形成包含极性脂质溶液和生物残留材料的桨料；

将所述极性脂质溶液与所述生物残留材料分离以提供分离的极性脂质溶液；

将水溶液添加至所述极性脂质溶液中以稀释所述质子溶剂，以便所述极性脂质溶液分离成包含稀释的质子溶剂的上相和下部富含极性脂质的底相；以及

分离所述富含极性脂质的底相以提供所述富含极性脂质的提取物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述将水溶液添加至所述极性脂质溶液中以稀释所述质子溶剂以便所述极性脂质溶液分离成包含稀释的质子溶剂的上相和下部富含极性脂质的底相，包括添加所述水溶液以当与所述生物样品中的水分组合时将所述质子溶剂的浓度稀释至约50％至70％w/w。

3.根据权利要求2所述的方法，其中当与所述生物样品中的水分组合时所述质子溶剂的浓度被稀释至约60％w/w。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述在使得极性脂质被优先提取的条件下将所述生物材料与浓缩的质子溶剂接触，包括在约-10C至约50C的温度下将所述生物材料与浓缩的质子溶剂混合，以便当与所述生物材料中的水分组合时所述溶剂的浓度为约70％至约95％w/w。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，所述方法还包括用极性脂质难溶于其中的稀释的质子溶剂洗涤所述富含极性脂质的提取物，以提供包含所述稀释的质子溶剂的上相和富含极性脂质的底相，以及分离所述底相以提供洗涤的富含极性脂质的提取物。

6.根据权利要求5所述的方法，其中洗涤被重复2至约5次。

7.根据权利要求5或6中任一项所述的方法，其中所述用稀释的质子溶剂在使得磷脂为难溶的条件下洗涤所述富含极性脂质的提取物还包括，以约0.5∶1至5∶1的富含极性脂质的提取物比稀释的质子溶剂的比率将所述富含极性脂质的提取物与所述稀释的质子溶剂混合，其中所述稀释的质子溶剂包含具有约30％至70％的所述质子溶剂的水溶液。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述质子溶剂选自由以下组成的组：浓缩的正-丁醇、正-丙醇、异丙醇、乙醇和甲醇。

9.根据权利要1至7中任一项所述的方法，其中所述质子溶剂为乙醇。

10.根据权利要求5至9中任一项所述的方法，其中所述洗涤的富含极性脂质的提取物的特征在于包含至少50％w/w的磷脂。

11.根据权利要求5至10中任一项所述的方法，其中所述洗涤的富含极性脂质的提取物的特征在于包含少于约3％的溶血磷脂。

12.根据权利要求5至10中任一项所述的方法，其中所述洗涤的富含极性脂质的提取物的特征在于包含少于约1％的溶血磷脂。

13.根据权利要求5至10中任一项所述的方法，其中所述洗涤的富含极性脂质的提取物的特征在于包含少于约0.5％的溶血磷脂。

14.根据权利要求5至10中任一项所述的方法，其中所述洗涤的富含极性脂质的提取物的特征在于包含少于约0.1％的溶血磷脂。

15.根据权利要求5至14中任一项所述的方法，其中所述洗涤的富含极性脂质的提取物的特征在于具有在饱和的60％的乙醇溶液中测量的小于300uS/cm的电导率。

16.根据权利要求5至15中任一项所述的方法，所述方法还包括从所述洗涤的富含极性脂质的提取物中沉淀磷脂。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述从所述洗涤的富含极性脂质的提取物中沉淀磷脂还包括在使得磷脂沉淀的条件下将所述洗涤的富含极性脂质的提取物与冷丙酮混合，以提供富含极性脂质的沉淀。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，所述方法还包括通过蒸发从所述富含极性脂质的提取物或所述洗涤的富含极性脂质的提取物除去残留的溶剂，以提供固体的富含极性脂质的组合物。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述固体的富含极性脂质的组合物包含至少90％w/w的磷脂。

20.根据权利要求18所述的方法，其中所述固体的富含极性脂质的组合物包含少于约3％w/w的溶血磷脂。

21.根据权利要求18所述的方法，其中所述固体的富含极性脂质的组合物包含少于约1％w/w的溶血磷脂。

22.根据权利要求5至21中任一项所述的方法，其中所述洗涤的富含极性脂质的提取物或所述固体的富含极性脂质的组合物包含少于约0.05％w/w的脂肪酸酯。

23.根据权利要求5至22中任一项所述的方法，其中所述洗涤的富含极性脂质的提取物或所述固体的富含极性脂质的组合物具有大于约4∶1的虾青素单酯∶虾青素二酯的比率。

24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，所述方法还包括：

在使得从所述生物残留材料中提取中性脂质的条件下将所述生物残留材料与质子溶剂接触，以形成包含中性脂质溶液和生物残留材料的浆料；

将所述中性脂质溶液与所述生物残留材料分离；以及

从所述中性脂质溶液中蒸发所述浓缩的质子溶剂以提供中性脂质提取物。

25.根据权利要求24所述的方法，其中所述使得从所述生物残留材料中提取中性脂质的条件包括在约15C至约40C的温度下以约2∶1至8∶1的比率将所述生物残留材料与所述浓缩的质子溶剂混合。

26.根据权利要求24或25中任一项所述的方法，所述方法还包括将所述洗涤的富含极性脂质的提取物与所述中性脂质提取物组合以提供混合脂质组合物。

27.根据权利要求26所述的方法，其中所述混合脂质组合物的特征在于包含少于约3％的溶血磷脂。

28.根据权利要求26所述的方法，其中所述混合脂质组合物的特征在于包含少于约1％的溶血磷脂。

29.根据权利要求26所述的方法，其中所述混合脂质组合物的特征在于包含少于约0.5％的溶血磷脂。

30.根据权利要求26所述的方法，其中所述混合脂质组合物的特征在于包含少于约0.1％的溶血磷脂。

31.根据权利要求1至30中任一项所述的方法，其中所述生物材料选自由以下组成的组：藻类材料、海洋动物材料和植物材料。

32.根据权利要求31所述的方法，其中所述海洋动物材料选自鱼材料、磷虾材料和海洋浮游生物材料。

33.根据权利要求32所述的方法，其中所述磷虾材料选自由以下组成的组：新鲜磷虾、冷冻磷虾、磷虾粉、湿磷虾膏、干磷虾膏和磷虾油。

34.根据权利要求1至33中任一项所述的方法，其中将所述洗涤的富含极性脂质的提取物、所述富含极性脂质的沉淀、所述固体的富含极性脂质的组合物、所述中性脂质提取物或所述混合脂质组合物配制成口服递送媒介物。

35.根据权利要求34所述的方法，其中所述口服递送媒介物选自由以下组成的组：片剂、胶囊剂和凝胶胶囊剂、溶液、混悬液、乳剂和可咀嚼基质。

36.根据权利要求1至35中任一项所述的方法，其中将所述洗涤的富含极性脂质的提取物、所述富含极性脂质的沉淀、所述固体的富含极性脂质的组合物、所述中性脂质提取物或所述混合脂质组合物配制成用于肠胃外递送的乳剂。

37.一种包含具有以下结构的磷脂化合物的混合物的磷脂组合物：

其中R1和R2选自由以下组成的组：脂肪酸部分和-H，并且R3为H或胆碱、乙醇胺、肌醇或丝氨酸部分，所述磷脂化合物的混合物在位置R3上包含超过约85％(mol％)的胆碱部分和超过约30％w/w的ω-3脂肪酸部分，其中超过约90％w/w的所述ω-3脂肪酸部分在位置R2上，所述组合物的特征还在于包含少于约3％w/w的溶血磷脂。

38.根据权利要求37所述的组合物，其中所述ω-3脂肪酸部分选自由以下组成的组：二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸及其组合。

39.根据权利要求37或38中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含至少50％w/w的所述磷脂化合物。

40.根据权利要求37至38中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含至少75％w/w的所述磷脂化合物。

41.根据权利要求37至40中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含至少90％w/w的所述磷脂化合物。

42.根据权利要求37至41中任一项所述的组合物，其中磷脂化合物的混合物的所述混合物中的所述ω-3部分为二十碳五烯酸和所述二十二碳六烯酸，并且其中所述二十碳五烯酸和所述二十二碳六烯酸以二十碳五烯酸∶二十二碳六烯酸为约1∶1至约3∶1的比率存在。

43.根据权利要求37至42中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含至少5％的包含ω-3脂肪酸部分的乙酯。

44.根据权利要求37至43中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含至少10％的包含所述ω-3脂肪酸部分的甘油酯化合物。

45.根据权利要求37至44中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含虾青素。

46.根据权利要求37至45中任一项所述的组合物，其中所述组合物具有大于约4∶1的虾青素单酯∶虾青素二酯的比率。

47.根据权利要求37至46中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含少于约0.05％w/w的脂肪酸酯。

48.根据权利要求37至47中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含至少第二抗氧化剂。

49.根据权利要求37至48中任一项所述的组合物，其中所述组合物部分或完全来源于鳞虾。

50.根据权利要求37至49中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含少于1％w/w的溶血磷脂。

51.根据权利要求37至50中任一项所述的组合物，其中所述组合物的特征还在于具有在饱和的60％的乙醇溶液中测量的小于约300uS/cm的电导率。

52.根据权利要求37至51中任一项所述的组合物，其中所述组合物在选自由以下组成的组的制剂中提供：胶囊剂、片剂、液体、粉剂、乳剂、膳食补充剂、营养补充剂、饮料和功能性食品。

53.根据权利要求37至51中任一项所述的组合物用于向受试者口服或静脉内施用以进行以下方面的用途：降低血清甘油三酯，降低血清胆固醇，减少噬斑形成，减少血小板聚集，治疗动脉粥样硬化，改善心血管健康，减少炎症，减少冠心病，治疗抑郁症，治疗阿尔茨海默病，治疗注意力缺陷症，和治疗代谢综合征。

54.根据权利要求53所述的用途，其中以约0.1至约3克的日剂量施用所述组合物。

55.根据权利要求53或55所述的用途，其中向选自由以下组成的组的受试者施用所述组合物：人、非人灵长类动物、家养动物或农场动物以及伴侣动物。

56.一种用于产生橡皮糖产品的方法，所述方法包括：

将如权利要求1至31的任一项中所述产生的洗涤的富含极性脂质的提取物、富含极性脂质的沉淀、固体的富含极性脂质的组合物或混合脂质组合物或如权利要求35至47的任一项中所述的磷脂组合物混合到凝胶基质中，以提供混合的橡皮糖混合物以及

由所述混合橡皮糖混合物形成橡皮糖。

57.一种根据权利要求56所述的方法产生的产品。

58.一种组合物，其在固体凝胶基质中包含如权利要求1至31的任一项中所述产生的洗涤的富含极性脂质的提取物、富含极性脂质的沉淀、固体的富含极性脂质的组合物或混合脂质组合物或如权利要求35至47的任一项中所述的磷脂组合物。