CN101484562A - 用液态二甲醚提取高不饱和脂质 - Google Patents

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Abstract

一种从植物或动物材料获得含高不饱和脂肪酸的脂质的方法，该方法包括使所述材料接触液态二甲醚以得到含有脂质的二甲醚溶液和植物或动物材料残渣，将溶液与植物或动物材料残渣分离，并从溶液中回收脂质。

Description

用液态二甲醚提取高不饱和脂质
技术领域
本发明涉及分离技术。具体地说，本发明涉及用液态二甲醚(DME)并任选同时采用接近临界的二氧化碳提取诸如干燥或部分干燥的植物或种子(包括海洋或陆地种类)或动物产品(包括海洋或陆地种类)之类的材料，以获得富含高不饱和脂质、尤其是高不饱和复合脂质的提取物，并任选获得可用作营养制品或用于提取水溶性酶类和/或蛋白质的残渣。
背景技术
高不饱和脂质(在脂肪酸链中具有3个或更多不饱和位置并有18或更多碳原子的脂质)在人体内具有多种代谢作用。它们是婴儿大脑和视力发育所必需的，并且对心血管健康、心理健康以及免疫力和炎症状况有益。这些脂质的生物性质通常取决于所存在的脂肪酸的类型，含有高不饱和脂肪酸的脂质生物活性最强。通常，这些高不饱和脂肪酸仅以有效量存在于陆地植物和动物的复合脂质中，但有时也可能存在于海洋动物的天然和复合脂质中。
磷脂是复合脂质的一个亚类。它们是所有哺乳动物细胞膜的必需组分，并在维持细胞膜流动性及分子通过细胞膜的通路中扮演重要角色。高不饱和花生四烯酸(C20:4w-6)在动物的次级产品如非人乳的磷脂中不存在或以非常低的浓度存在。花生四烯酸是婴儿发育所必需的，因此用非人乳制造的婴儿配方食品中添加有这种脂肪酸。因此，出于该目的，需要获得这种脂肪酸的原料。许多动物组织，尤其是器官和腺体的复合脂质中富含花生四烯酸，如蛋类。
已知藓类植物和蕨类植物含有复合脂质形式的高水平的花生四烯酸。因此需要找到一种能回收复合脂质形式的这种高不饱和脂肪酸(HUFA)的提取技术，这尤其是因为脂肪酸的复合脂质形式能提供抗氧化保护。
海洋生物(微型和大型藻类、鱼肉、蛋类和肝脏、软体动物、无脊椎动物)是天然和/或复合脂质形式的HUFA二十碳五烯酸(C20:5w-3)和二十二碳六烯酸(C20:6w-3)的丰富来源。这些脂肪酸也是婴儿配方添加物中所需的，并可用于控制神经疾病、心血管疾病、炎症和血脂含量。还需要找到一种能回收这些多不饱和脂肪酸的提取技术。
类似地，某些植物的种子，尤其是松树和罗汉松的种子，的复合脂质中富含未被亚甲基中断的多不饱和脂肪酸(C20:3和C20:4)。未被亚甲基打断的脂肪酸可用于控制饱腹感并有可能作为抗炎药。因此需要找到一种能回收这些多不饱和脂肪酸的提取技术。
用超临界CO2提取天然脂质是熟知的，尤其是提取种子油。这些方法的缺点通常在于需要大的高压容器(通常采用300巴或更高的压力)来容纳原料，这就使得生产成本非常高。由于油在超临界CO2中的溶解度非常低(通常每100克溶剂仅溶解1克油)，因此还需要高流速和长提取时间。几乎没有涉及从海洋种类中提取脂质的报道。US 6,083,536描述了一种从粗制的冻干贻贝粉末中提取非极性脂质以得到可用于治疗炎性症状的非极性脂质成分的方法。新鲜贻贝先用酒石酸溶解，然后冻干并用CO2提取。未给出提取物的组成数据，也没有提取到复合脂质，因为它们都不溶于CO2。
US 4,367,178描述了一种用超临界CO2纯化粗制的大豆卵磷脂以提取天然脂质并留下不溶性磷脂的方法，用这种方法可浓缩卵磷脂中的磷脂。粗制的卵磷脂通过常规的时大豆油脱胶的方法制造。曾提议使用共溶剂如乙醇来提高超临界CO2的溶解能力以克服CO2的限制。
EP 1,004,245 A2描述的方法是先用超临界CO2提取干鸡蛋以除去天然脂质，然后用超临界CO2和在室温下为液体的有机共溶剂(乙醇)或者用有机溶剂(不含CO2)提取磷脂。两种选择的缺点在于不能完全提取磷脂。此外，两种方法都会在脱脂蛋粉中留下残余溶剂，从而导致蛋白质变性。通过超临界CO2提取获得的天然鸡蛋脂质中高不饱和脂肪酸的水平几乎可忽略，如实施例3所示。
Arntfield等(JAOCS，69，1992，823-825)显示在用CO2和作为共溶剂的甲醇提取之后鸡蛋蛋白质基本变性。使用乙醇和超临界CO2不能完全提取磷脂。磷脂酰胆碱是最容易提取的磷脂，但其他磷脂的溶解度非常低或不溶，因此无法提取(Teberliker等，JAOCS，78，2002，115-119)。Schriener等(Journal of FoodLipids，13，2006，36-56)显示，蛋黄脂质中的高不饱和脂肪酸大部分为磷脂酰乙醇胺，用该方法也无法提取。
PCT公开WO 02/092540描述了含HUFA的极性脂质以及极性脂质与其他油类的掺合物的药物用途。描述的提取方法采用醇和离心，但未给出进一步的细节。它还披露，富含极性脂质的部分是通过工业脱胶法提取食用种子油的副产品。
从湿的含磷脂材料中提取含HUFA的磷脂的方法描述于PCT公开WO2005/072477。使用脂族醇，尤其是异丙醇异丙醇和/或正丙醇。使含磷脂的材料在足以使磷脂溶于溶剂的温度下接触水溶性脂族醇，此时已经变性的蛋白质从溶液中沉淀出来。
DME之前被用于从生蛋黄(US 4,157,404)和蛋粉(US 4,234,619)中提取脂质。该方法能分开脂质和蛋白质组分。US 4,157,404描述了从生蛋黄(水分含量为50-55％)中提取脂质，但该过程中蛋白质发生变性。所述方法还要求然后将回收的脂质和水的混合物脱水，使水分含量为20％或更低，这会导致富含天然脂质的相和富含复合脂质/水的相发生相分离。US 4,234,619披露到，如果蛋被干燥则蛋白质不会变性，但之后仅能提取部分磷脂。在所述方法中，DME在-30℃至40℃温度范围内使用，使用喷雾干燥的全蛋粉，最多仅能获得70％的磷脂。该发明的预期产物是含有至少30％其原始磷脂含量且不含胆固醇的蛋粉。未披露回收和浓缩高不饱和脂肪酸的方法。此外，由于采用了低提取和分离温度，未发现如何将总脂质提取物中的天然脂质和复合脂质分开。
PCT公开WO 2004/066744描述了采用接近临界提取法从牛奶流中提取脂质，该方法采用DME为溶剂。该公开还披露，超临界CO2或液态DME都不能以有效产率从干乳清蛋白浓缩物(WPC)乳粉中提取脂质。该方法未披露从干燥的动物或植物组织提取HUFA极性脂质的方法。动物或植物组织中不含乳清蛋白，且获得的脂质不含高不饱和脂肪酸。
NZ 535894描述了从含有乳脂球形膜蛋白(制造脱脂奶粉时得到的一种乳类脂蛋白/脂质/乳糖的混合物)的喷雾干燥的乳产品中提取脂质。蛋白质与奶油结合，在动物或植物组织中未发现。采用液态DME提取法从这种高乳糖含量的乳粉流(其中，高乳糖含量是指占总粉末重量的至少30％)中提取脂质未获成功，在制造奶粉之前必需降低乳糖含量。未披露从干燥的动物或植物组织中提取HUFA脂质的方法，这是由于所述脂质不含HUFA。提取后残留的粉末还含有约6-8％复合脂质。
PCT公开WO 2006/058382大致描述了采用液态UME从多种材料获得提取物的方法。然而，其中未描述如何提取HUFA，也没有描述如何将复合脂质与天然脂质分离。所述方法是一种使用液态DME的简单的常规方法。实际上，唯一详细描述的方法是使用液态DME从不含HUFA的霍霍巴(Jojoba)籽中获得提取物。
有证据表明，动物和植物材料衍生产品中存在的蛋白质和其他复杂碳水化合物的类型(以及干燥材料的方法)决定了是否能成功提取脂质。植物或动物组织中存在的蛋白质和复杂碳水化合物完全不同于动物的次级产品，如牛奶。因此，通常无法预测是否能用二甲醚从含有与细胞和组织结合的蛋白质和碳水化合物的植物或动物组织中提取脂质，尤其是含高不饱和脂肪酸的复合脂质。
令人惊奇的是，申请人发现液态DME能从植物或动物材料中有效地提取HUFA，尤其，由天然和复合脂质构成的液体提取物中的残余DME能形成含有复合脂质的胶样相，复合脂质然后可方便地与天然脂质分离。
本发明的目的是提供一种获得含高不饱和脂肪酸的脂质，或者至少提供一种有用的替代方法。
发明内容
在第一个方面，本发明提供了一种从植物或动物材料获得含高不饱和脂肪酸的脂质的方法，该方法包括以下步骤：
(i)使所述材料接触液态二甲醚以得到含有脂质的二甲醚溶液和植物或动物材料残渣；
(ii)将溶液与植物或动物材料残渣分离；和
(iii)从溶液中回收脂质。
在本发明的某些优选实施方式中，步骤(i)中与所述材料接触后形成的溶液中含有天然脂质和复合脂质。
优选地，所述天然脂质和所述复合脂质一起从溶液中回收。优选地，将所述天然脂质与所述复合脂质分离。
在回收步骤(iii)中所述复合脂质可与溶解的二甲醚形成胶相。优选地，将含有复合脂质的胶相与含有天然脂质的溶液分离。
优选地，通过相分离将所述天然脂质与所述复合脂质分离。也可用离心来帮助分离。离心之前可进行加热。优选地，所述复合脂质通过真空干燥来干燥。
优选地，本发明的方法还包括按照以下步骤用临界的CO2处理步骤(iii)中从溶液中回收的脂质：
(iv)使步骤(iii)中从溶液中回收的脂质接触超临界CO2以得到含有天然脂质的CO2溶液和复合脂质残渣；
(v)将含有天然脂质的CO2溶液与复合脂质残渣分离；和
(vi)从中回收天然脂质CO2溶液。
在本发明的某些实施方式中，步骤(i)中要与液态二甲醚接触的植物或动物材料首先按照以下步骤用接近临界的CO2处理：
a.使所述材料接触接近临界的CO2以得到含有天然脂质的CO2溶液和植物或动物材料残渣；
b.将CO2溶液与植物或动物材料残渣分离；和
c.从CO2溶液中回收天然脂质。
在本发明的优选方法中，所述植物或动物材料在使用前被干燥或部分干燥。优选地，所述植物或动物材料被干燥至材料中的水分少于30重量％，更优选地，干燥至材料中的水分少于5重量％。优选地，所述植物或动物材料通过冷冻干燥或喷雾干燥来干燥。
在本发明的某些实施方式中，所述植物或动物材料是已被冷冻的湿生物质(wet biomass)。通常，所述冷冻的湿生物质在提取之前经研磨。
优选地，所述一种或多种复合脂质是磷脂、神经节苷脂、糖脂、脑甘脂或鞘脂，通常是磷脂。所述磷脂可包括以下一种或多种：磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、心磷脂、缩醛磷脂、烷基酰基磷脂、磷酸酯、溶血磷脂、神经酰胺氨基乙基膦酸酯和磷脂酸。所述糖脂可包括半乳糖脂、神经节苷脂、磺基异鼠李糖基二酰基甘油酯(sulphoquinovoysldiacylglyceride)、牛磺糖脂(tauroglycolipd)、糖鞘磷脂(glycosphingophospholipid)和甘露糖基脂质。
优选地，复合脂质中所含的高不饱和脂肪酸包括但不限于下述任何一种或多种：花生四烯酸(AA)、α-和γ-亚麻酸、松油酸(pinolenic acid)、二十碳三烯酸(sciadonic acid)、十八碳三烯酸(columbinic acid)、双高亚麻酸、二十碳四烯酸、二十碳四烯酸(juniperonic acid)、十八碳四烯酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)、和二十二碳六烯酸(DHA)。
还优选所述植物或动物材料获自下组中的任何一种：动物器官，动物腺体，大型和微型海洋藻类，丝状真菌，细菌，酵母，甲壳类动物，鱼，海洋无脊椎动物，蛋类，植物种子，植物叶片，植物针叶，蕨叶，藓类植物和地衣植物。
在本发明的优选实施方式中，所述液态二甲醚是接近临界的二甲醚。
在本发明的另一个方面，提供了通过本发明方法获得的含高不饱和脂肪酸的脂质。
在进一步的方面，本发明提供了通过本发明方法获得的复合脂质。
在另一个方面，本发明提供了通过本发明方法获得的天然脂质。
再在另一个方面，本发明提供了已经用本发明方法提取了含高不饱和脂肪酸的脂质的植物或动物材料。
本发明还提供了已经用本发明方法提取了含高不饱和脂肪酸的脂质的植物或动物材料作为营养制品、食品增补剂、或作为酶类来源的应用。
发明详述
定义
脂肪酸是指任何通常具有6个或更多碳原子烃链的饱和或不饱和的脂族羧酸。脂肪酸的分类标准包括碳原子的数目(例如C20)、不饱和位点的数目(例如C20：4)、从脂肪酸甲基末端开始第一个不饱和位点的位置(例如C20:4w-3)以及不饱和位点之间有多少碳原子。不饱和位点之间通常间隔1个碳原子(称为“亚甲基中断的”)，只有当共轭(不饱和位点之间没有碳原子)时才用较短的命名表示，或者可被1个以上的碳原子隔开(称为“非-亚甲基中断的”)并从脂肪酸的甲基末端开始标明碳原子的位置(例如5,11,14 C20:3)。脂肪酸由天然和复合脂质构成。在天然脂质中，只有脂肪酸通过酯键或其他键与甘油结合。脂肪酸也可以未结合状态存在，称为“游离脂肪酸”。在复合脂质中，脂肪酸和其他(极性)组分都与甘油结合。
多不饱和脂肪酸(PUFA)表示具有2个或更多不饱和位点的脂肪酸不饱和位点。
高不饱和脂肪酸(HUFA)表示具有3个或更多不饱和位点且脂肪酸链中有18个或更多碳原子的脂肪酸。例子包括花生四烯酸(AA)、α-(ALA)和γ-亚麻酸(GLA)、松油酸、二十碳三烯酸、十八碳三烯酸、双高亚麻酸、二高松油酸(dihomopinolenic acid)、二十碳四烯酸、十八碳四烯酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)和二十二碳六烯酸(DHA)。
复合脂质是由至少三个构件构成的脂质，其中包括脂肪酸(以及密切相关的醚、胺和烃衍生物)；极性含磷基团(通常是磷酸酯或磷酸)，和/或氨基醇，和/或碳水化合物；以及甘油。复合脂质包括，但不限于，磷脂，神经节苷脂，糖脂，脑甘脂，和鞘脂。磷脂的例子包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、鞘磷脂(SM)、心磷脂(CL)、缩醛磷脂、溶血磷脂和磷脂酸。
天然脂质是由1个或2个构件构成的脂质，所述构件无一包含极性含磷基团或碳水化合物。所述构件包括脂肪酸、甘油、甾醇、脂肪醇、胺、类胡萝卜素和天然烃类。天然脂质包括，但不限于，脂肪酸，单-、二-和三-酰基甘油酯，神经酰胺，N-酰基乙醇胺，甾醇和甾醇酯，类胡萝卜素和类胡萝卜素酯。
DME-水合复合脂质是已经与DME形成弱连接的复合脂质，类似于用水分子水合的脂质。
临界点是物质的液态和气态变为相同的点。
超临界表示压力-温度区域超过物质的临界点。在超过但接近物质的临界点时，物质为液态，但同时具有液态和气态的特性。流体的密度类似于液体，但粘度和扩散性类似于气体。
亚临界表示压力-温度区域等于或高于物质的蒸气压，但低于临界温度。术语“液化气体”和“压缩液化气体”可用来描述相同的区域，该区域内在提取温度下气体的蒸气压至少为3巴。
接近临界的表示压力-温度区域接近物质的临界点，因此包括亚临界和超临界。接近临界的包括降低的温度范围0.70≤Tr≤1.25(其中Tr是由DME的临界温度Tc衍生出的温度)；压力范围为，T<Tc时P>Pv(其中Pv是蒸气压)，以及T≥Tc时P>Pc(其中Pc是临界压力)。
营养制品表示从食物中分离或纯化的产品，并通常以一般与食品无关的药物形式出售，且经证实具有生理益处或能抵抗慢性疾病。
本发明
本发明提供了一种从植物或动物材料获得含高不饱和脂肪酸的脂质的方法，该方法包括以下步骤：
(i)使所述材料接触液态二甲醚以得到含有脂质的二甲醚溶液和植物或动物材料残渣；
(ii)将溶液与植物或动物材料残渣分离；和
(iii)从溶液中回收脂质。
所述植物或动物材料可以是含有具有HUFA的脂质的任何动物组织或植物组织。具体地说，该方法涉及动物器官或腺体，大型和微型海洋藻类，通过发酵培养的携带脂质的微生物，尤其是丝状真菌、藻类、酵母和细菌；小型海洋动物(甲壳类动物和无脊椎动物)，蛋类，以及植物的种子。植物或动物组织可包括植物或动物材料的一部分或全部，其中包括细胞材料、蛋白质、脂质和碳水化合物，但不包括衍生自植物或动物的次级产品，如牛奶。
DME在正常室温和压力下为气体，但在液体形式时是从天然产品提取物质的有效溶剂。用于本发明方法的液态DME通常是接近临界的DME。优选地，液态DME的压力至少等于提取温度下的蒸气压，更优选地，压力至少比蒸气压大10巴。所述温度范围优选为273-373K，更优选为313-353K。较高的提取温度能以较高产率得到富含高不饱和脂肪酸的复合脂质。典型的提取温度约为333K。该温度下典型的提取压力为40巴，该压力远高于DME的蒸气压，如果生物质是湿的可确保提取最多的水。
通过该方法获得的脂质通常是具有一定范围的结合HUFA的复合脂质的混合物。所述混合物的组成将主要取决于所用植物或动物材料的来源。如果植物或动物材料还含有天然脂质，则该过程中也能提取到天然脂质。
申请人发现，由于形成了含有复合脂质的胶样相和含有天然脂质的液相，脂质提取物中残余的DME由天然和复合脂质构成，前提是天然脂质不含高浓度(超过5质量％)的游离脂肪酸和/或部分甘油酯。胶相是一种密度大于含天然脂质的液相的半固态液体。假设DME可与复合脂质(尤其是磷脂)形成与水和磷脂之间形成的连接类似的弱连接。胶样相中的所谓DME-水合复合脂质可方便地与天然脂质分离。
在回收提取物时采取加热，脂质混合物中天然脂质与复合脂质的比例，以及天然脂质的组成，是促进DME-水合复合脂质形成的重要因素。如果总的脂质混合物含有约50-90％天然脂质且不含高水平的游离脂肪酸和/或部分甘油酯，则脂质混合物在室温呈液态，由于形成了复合物，可通过降低压力和/或加热回收提取物然后使提取物中的DME脱气。使用加热和/或离心能加速胶样相和液相的分离。如此获得的DME-水合复合脂质相仍含有一些天然脂质，但天然脂质相中不含复合脂质。这一发现尤其适用于鸡蛋脂质以及鱼脑脂质。
液态DME可用于从湿或干的生物质中提取天然和复合脂质，在分离DME之后得到混合提取物。当生物质是湿的时，还要提取水，然后通过常规方法如真空蒸发、膜分离或相分离(尤其是通过离心)将水与脂质分离。然后任选用接近临界二氧化碳进一步提取混合的提取物以分离并回收天然脂质从而得到更加富含含HUFA的复合脂质的提取物。该复合脂质未水合且不需要进一步处理以除去水或DME。
植物或动物材料可用接近临界的二氧化碳提取以除去天然脂质，然后用液态DME重提取。这种顺序的操作步骤也能够获得富含复合脂质的提取物。
优选地，接近临界的二氧化碳的压力为至少73.2巴，温度范围为304.2-373K(超临界区域)；或二氧化碳压力大于或等于蒸气压，而温度范围为273-304.1K(亚临界区域)。更优选地，二氧化碳压力为至少250巴，而温度范围为313-353K。
本发明某些实施方式的关键要素是将植物或动物材料干燥或部分干燥之后用液态DME重提取。植物和动物材料的水分含量通常占总材料的60-80重量％。在提取之前除去至少一部分水是实践益处在于能得到固定提及的材料，由于已经降低了水的量因此脂质产量较大。因此，对于固定体积的加工植物，不需要大体积的加工设备，或者处理量及脂质产量较大。然而，该方法也适用于湿生物质，其优点在于无需干燥费用，并避免能降解脂质的酶被灭活，或者避免这些酶包入干生物质从而阻碍它们的提取。
申请人的另一个重要发现是，将植物或动物材料干燥但不同时除去水是有益的。当待提取材料的水分含量被降至低于总材料的30重量％时，进行本发明方法时不会使所述材料中存在的酶类或其他蛋白质显著降解或变性。经过提取的植物或动物材料残渣因此特别适用于各种应用，如富含蛋白质且脂肪含量低的营养补充品，例如保健产品，如脱脂牛肝；如酶类来源，例如蛋白酶、酯酶、谷氨酰胺转移酶。酶的降解会限制残渣的用途。
复合脂质的极性有巨大差异，因此难以找到能提取植物或动物组织中存在的大部分磷脂的溶剂或溶剂混合物。更加困难的是寻找在提取过程中不会使残余蛋白质和/或复合非脂质分子变性的溶剂系统，这样脱脂的残余材料可用于提取非脂质组分，如酶类，或将脱脂的残余材料用作营养制品。奇怪的是，申请人发现，如果在提取之前将材料干燥，则温度至少为40℃的液态DME可用来获得高产量的所有复合和天然脂质，且不会使残余脱脂材料变性。
一般过程
以下4个非限制性一般过程阐述了本发明方法是如何进行的。
1.DME提取
a.将植物或动物组织干燥至水分含量为30％或更低，需要时可选择水分含量以确保DME还含有水
b.将植物材料研磨到粒度为2mm或更低
c.在特定条件下使植物或动物材料接触液态DME
d.将满载的DME与植物或动物材料分离
e.从DME中回收富含HUFA的脂质提取物
如果脂质提取物中还含有天然脂质，可再进行以下额外步骤：
f.通过相分离从天然脂质中分离DME-水合复合脂质
g.从水合复合脂质中除去DME
任选地，残余的脱脂动物材料可用水溶液进一步提取以获得酶类。
2.DME提取后进行CO2提取
a.将植物或动物组织干燥至水分含量为10％或更低
b.将植物材料研磨到粒度为2mm或更低
c.在特定条件下使植物或动物材料接触液态DME
d.将满载的DME与植物或动物材料分离
e.从DME中回收富含HUFA的复合和天然脂质提取物
f.使富含HUFA的复合脂质提取物接触超临界CO2
g.从超临界CO2和溶解的天然脂质中分离并回收除去了天然脂质的富含HUFA的复合脂质
h.从CO2中回收天然脂质
3.CO2提取后进行DME提取
a.将植物或动物组织干燥至水分含量为10％或更低
b.将植物材料研磨到粒度为2mm或更低
c.在特定条件下使植物或动物材料接触超临界CO2
d.将超临界CO2与除去天然脂质的植物或动物材料分离
e.从CO2中回收天然脂质
f.在特定条件下使植物或动物材料接触液态DME
g.将满载的DME与植物或动物材料分离
h.从DME中回收富含HUFA的复合脂质提取物
4.DME提取湿生物质
a.需要时冷冻生物质
b.需要时将冷冻的植物或动物材料研磨至粒度为5mm或更低
c.在特定条件下使植物或动物材料接触液态DME
d.将满载的DME与植物或动物材料分离
e.从DME中回收富含HUFA的脂质提取物和水
f.将水与脂质分离
如果脂质提取物还含有天然脂质，可进行以下额外步骤：
g.在特定条件下使富含HUFA的脂质材料接触超临界CO2
h.从超临界CO2和溶解的天然脂质中分离并回收除去了天然脂质的富含HUFA的复合脂质
i.从CO2中回收天然脂质。
在上述一般过程中，可使用步骤a得到的喷雾干燥的粉末，例如蛋黄粉，因此在一般过程1-3中就不需要步骤b。
实施例
实施例1：提取干燥的牛肝
从本地肉类加工厂获得约8千克完整的新鲜牛肝。剥离肝脏上的皮下脂肪层、软骨和皮肤，然后切成大块。使大块通过切碎装置，得到有块的糊状物。然后将7913.5克切碎的肝脏置于冻干托盘上，然后将托盘放在冷冻机内直到固体完全冷冻。然后将托盘放在冻干机内并干燥至水分含量为约2-5％。固体产率为31.9％，得到2526.7克材料，将该材料研磨然后提取。托盘上的固体在带有孔大小约1mm的筛板的切碎机内研磨。细磨的固体然后用接近临界的DME在40巴和313K提取。使29.316千克接近临界的DME以恒定流速连续通过固体(2472.6g)，持续90分钟。通过固体之后，使DME连续通过减压阀和热交换机，并进入分离容器，DME在此处转变为气体。脂质从气体中沉淀出来并从分离容器回收。使DME经冷凝器/副冷却器热交换机和泵循环回到提取容器。以13.96％的产率获得363.69克脂质。脂质中含有53％磷脂，其中46.2％为磷脂酰胆碱(PC)，10.2％为磷脂酰肌醇(PI)，2.3％为磷脂酰丝氨酸(PS)，16.6％为磷脂酰乙醇胺(PE)，3.9％为鞘磷脂(SM)，6.6％为心磷脂(CL)，8％未鉴定。总脂质中含有4.5％花生四烯酸(AA)，7.4％二十二碳五烯酸(DPA)，2.1％二十碳五烯酸(EPA)和5.9％α-亚麻酸(AA)。脱脂肝脏可用作运动营养补充剂。
实施例2：提取牛心
从本地肉类加工厂获得约8千克完整的新鲜牛心。剥离心脏上的皮下脂肪层和软骨，然后切成大块。使大块通过切碎装置。然后将切碎的心脏放在冻干托盘上，将托盘放在冷冻机内直到固体完全冷冻。然后将托盘放在冻干机内并干燥至水分含量为约2-5％。固体产率为22.7％，得到1725.7克材料，将该材料研磨然后提取。托盘上的固体在带有孔大小约1mm的筛板的切碎机内研磨。细磨的固体然后用接近临界的DME在40巴和313K提取。使29.52千克千克接近临界的DME以恒定流速连续通过固体，持续90分钟。通过固体之后，使DME连续通过减压阀和热交换机，并进入分离容器，DME在此处转变为气体。脂质从气体中沉淀出来并从分离容器回收。使DME经冷凝器/副冷却器热交换机和泵循环回到提取容器。以12.3％的产率获得202.71克脂质。脂质中含有30.0％磷脂，其中28.3％为磷脂酰胆碱(PC)，4.4％为磷脂酰肌醇(PI)，0％为磷脂酰丝氨酸(PS)，13.7％为磷脂酰乙醇胺(PE)，6.6％为鞘磷脂(SM)，27.9％为心磷脂(CL)，12.2％未鉴定。总脂质中含有5.6％花生四烯酸(AA)，2.0％二十二碳五烯酸(DPA)，2.8％二十碳五烯酸(EPA)和5.9％ α-亚麻酸(AA)。
实施例3：用CO2然后用DME提取喷雾干燥的蛋黄
该实施例显示，可首先从固体原料提取天然脂质，然后用DME重提取以获得富含HUFA的复合脂质浓缩物。该实施例还显示，必需采用高提取温度以便以高产率从喷雾干燥的粉末获得复合脂质。在300巴和313K用超临界CO2提取10.67千克喷雾干燥的蛋黄粉。使530.34千克超临界CO2连续通过该固体，然后连续通过两个减压阶段，其中压力首先降至90巴，313K以回收仅含天然脂质的鸡蛋油(4.26kg，产率为40.0质量％)，然后降至58巴，323K以回收少量天然脂质组分(0.26kg，产率为2.4质量％)。天然脂质中所含花生四烯酸和二十二碳六烯酸各少于1％。然后在293K，40巴用16.24千克液态DME提取2.98千克除去天然脂质的蛋黄粉约60分钟，如实施例1和2所述。获得283.4克不含天然脂质的复合脂质提取物，相对于产率为6.8质量％的全脂蛋黄粉。该粉末用13.1千克液态DME在313K重提取50分钟，如上所述。进一步获得191.3克不含天然脂质的复合脂质提取物，相对于额外产率为4.6质量％的全脂蛋黄粉。因此总脂质产率为53.8％。为了以高产率获得不含天然脂质的复合脂质提取物，必需在至少313K的温度下提取粉末。脱脂蛋黄粉可用于要求脂肪含量低的烘焙应用。
实施例4：用DME提取喷雾干燥的蛋黄
该实施例显示，提取相内的小量DME可用于在DME提取之后将天然脂质与复合脂质分离。在323K和40巴用液态DME提取4.119千克喷雾干燥的蛋黄粉。8.517千克接近临界的DME连续通过该固体。通过固体之后，使DME连续通过减压阀和热交换机，并进入分离容器，DME在此处转变为气体。脂质从气体中沉淀出来并通过加热阀从分离容器回收。使DME经冷凝器/副冷却器热交换机和泵循环回到提取容器。从分离容器回收的脂质(2197.86g，产率为53.3％)被加热以除去大部分残余DME，然后离心以将脂质分成富含天然脂质的相和富含DME-水合复合脂质的相。富含天然脂质的相占总脂质的75.3％，含有少于1质量％复合脂质且不含花生四烯酸或DHA。富含极性脂质的相占总脂质的24.7％，含有大于95％极性脂质。该极性脂质含有5.89％花生四烯酸和2.46％ DHA。
实施例5：提取冻干的蛋黄
该实施例显示，将蛋黄冷冻干燥能改善供脂质提取的有效性。从本地市场购买鲜蛋，然后手动分成蛋黄和蛋白。将蛋白丢弃。室温下混合蛋黄然后加入圆底真空瓶，冷冻然后冻干。然后在40巴和333K用598.1克液态DME提取73.05克冻干的蛋黄。47.01克黄色液体提取物含有2％花生四烯酸和1％DHA，产率为64质量％，与蛋黄粉的理论总脂质产率相同。将残余蛋黄粉和未经提取的冻干蛋黄粉的水溶性与喷雾干燥的蛋黄粉(脱脂但未提取)进行比较。新鲜的和提取过的喷雾干燥的蛋黄粉都不溶于水，表明喷雾干燥过程导致变性。冻干的蛋白质(提取前和提取后)在水中的溶解度为22％，而新鲜蛋黄的蛋白质有58％溶解。提取的蛋白质可用作低脂营养补充品。
实施例6：用DME和CO2提取冻干的贻贝粉末
该实施例显示，酶活性提取脂质后脱脂贻贝固体的酶活性得以保存。使冷冻的青口贻贝浆部分解冻并通过脱浆(dejuicing)装置以分离出细微固体和液体(浆汁)以及大块(固体)。部分浆液按实施例12的描述处理。剩余浆汁和固体分别冻干，然后先用DME提取。所得粗制提取物然后用超临界CO2重提取。还对直接冷冻然后冻干的浆液(表1中的全粉)进行比较性DME提取。由于研磨和脱水步骤，产率有一些变化，上述步骤会导致酶活性有一些变化。脂质产率为占干粉的质量百分比，提取物的复合脂质含量以及终产品中EPA和DHA的含量示于表1。
表1：从青口贻贝提取含HUFA的复合脂质
 
物质 总DME产率  CO2提取后的复合脂质产率 复合脂质产物的％EPA，DHA    
全粉 8.3 3.4 11.6，10.8
浆状固体 11.9 3.8 11.9，10.7
浆液 6.4 未测定 20.4，11.7
提取物的磷脂特征如下：磷脂酰胆碱31.9％，磷脂酰乙醇胺24.5％，磷脂酰肌醇3.9％，磷脂酰丝氨酸3.1％，磷酸酯1.1％，神经酰胺2-氨基乙基膦酸酯17.0％。磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺还包括缩醛磷脂。
除去脂质后贻贝粉末的磷脂酶活性测定如下。将脱脂青口贻贝粉末(8g)固体与40ml蒸馏水混合，然后离心。取一份贻贝制品上清液(20ml)加入1克含有约24％PC、34％PE和12％PS的模型磷脂混合物并在40℃乳化，然后保持此温度16小时。通过31P-NMR分析反应混合物样品(0.2ml)的磷脂组成。磷脂的水解程度示于表2，其中L表示溶血-(由母体磷脂水解得到的一种脂肪酸)，G表示甘油-(另一种由母体磷脂水解得到的脂肪酸)，tot表示完整和水解磷脂的总和。PC和PE大量水解。然而，大多数种类的水解和完整磷脂的总和会随原料而明显改变，表明发生了其他反应。31P NMR谱中有一些新的未鉴定峰，可能代表磷脂酶C活性，并有可能解释这种差异。
表2：使用贻贝酶提取物水解磷脂
Figure A200780024591D00191
实施例7：用DME提取Hoki头
该实施例显示，由于DME和磷脂之间形成临时复合物(DME-水合物)，可在DME提取之后将天然脂质与基于海洋动物的复合脂质分离。使冷冻的Hoki鱼头通过绞肉机。然后将切碎的鱼头放在冻干机托盘上，冷冻，然后冻干。然后在切碎机内将干燥并切碎的鱼头进一步研磨成粉末，然后在40巴和333K用DME提取。采用实施例4所述的常规方法用15.408千克DME提取1970.6克粉末。获得棕色的富含脂质的提取物，然后通过静置分离成天然脂质相和富含磷脂的相(neutral and phospholipids rich phases)。将提取物离心以加速相分离。上部的天然脂质相仅含2.5％磷脂。底部的“胶”相含有19.2质量％的DME-水合磷脂。然后在真空中除去底部相中的DME以得到含33.2％磷脂和0.5％神经节苷脂的提取物。该复合脂质浓缩物含有5.8％ EPA、12.7％ DHA和3.6％其他HUFA。
实施例8：用DME提取柠檬鱼肉
该实施例显示，可从鱼肉中提取极其富含HUFA的复合脂质。将新鲜的柠檬鱼肉切成块然后冻干。然后在切碎机内将干燥的肉块进一步研磨成粉末，然后在40巴和333K用DME提取。采用实施例1和2所述的常规方法用886.7克DME提取135.95克粉末。获得高度富含磷脂(64质量％)的黄色半固体提取物，产率为2.6％。提取物的磷脂部分含46.2％PC、7.9％PI、3.5％PS、25.0％PE、5.2％SM和7.9％CL。该提取物尤其富含DHA，DHA占总脂肪酸的24.9％。该复合脂质提取物还含有4.5％DPA、5.3％EPA和6.7％AA。未变性的鱼蛋白可用作食品增补剂。
实施例9：用DME提取绵羊和猪的胰脏，脂质提取物用CO2重提取
该实施例显示，超临界CO2可用来从粗制DME提取物中重提取天然脂质，并可从残余固体中提取活性磷脂酶和蛋白水解酶。在40巴和333K用液态DME提取冻干的牛和猪的胰脏样品。采用实施例1和2所述的常规方法用1193.4克DME提取120.72克牛胰脏。获得高度富含天然脂质的黄/绿色半固体提取物，产率为44.8％。该提取物仅含19％磷脂、0.7％AA和0.7％DPA。采用实施例1和2所述的常规方法用1240.2克DME提取120.18克猪胰脏。获得高度富含天然脂质的黄色半固体提取物，产率为24.0％。该提取物仅含13％磷脂、1.5％AA且不含EPA或DPA。粗制的牛和猪胰脏提取物然后再在300巴和333K用超临界CO2提取，直到无法从提取物中进一步回收天然脂质。然后再对提取物和残余复合脂质浓缩物进行分析。牛复合脂质含有2.3％AA、1.4％EPA和1.8％ALA。猪复合脂质含有4.8％AA和各少于1％的EPA和DPA。然后检测残余的脱脂绵羊和猪胰脏固体的蛋白水解酶和磷脂酶活性。
如下测定磷脂酶活性。脱脂牛(0.65g)或猪胰脏(0.98g)固体与20毫升蒸馏水混合后离心。取等分胰脏制品上清液(2ml)加入含有约24％PC、34％PE和12％PS的模型磷脂的含水(10ml)乳液(1g)中并在40℃保持16小时。通过31P-NMR分析反应混合物样品(0.2ml)的磷脂组成。磷脂的水解程度示于表3，其中L表示溶血-(由母体磷脂水解得到的一种脂肪酸)，G表示甘油-(另一种由母体磷脂水解得到的脂肪酸)。
PC和PE大量水解。然而，大多数种类的水解和完整磷脂的总和会随原料而明显改变，表明发生了其他反应。31PNMR谱中有一些新的未鉴定峰，可能代表磷脂酶C活性，并有可能解释这种差异。
猪胰脏显示出显著的磷脂酶A2活性，其水解优先级为PE>PS>PC。与猪胰脏相比，牛胰脏对PE和PC的磷脂酶A2活性低得多，但对PS显示出类似的水解水平。
表3：磷脂酶A2活性
如下测定用DME提取后保留的蛋白酶活性。DME提取的猪胰脏冻干粉末(0.9834g)用25毫升100mM CaCl2(39mg/mL)提取，DME提取的牛胰脏(0.65g)用25毫升100mM CaCl2(26mg/mL)提取。在提取前和提取后检测提取物的酶的自体活化并与从冷冻的猪和羊胰脏制备的标准胰脏提取物进行比较。DME提取粉末的结果示于表4，冷冻参比样品的结果示于表5。
表4：DME提取的冻干的胰脏粉末的胰蛋白酶产率
Figure A200780024591D00221
表5：从冷冻的猪和羊胰脏提取并活化的标准蛋白酶水平
 
酶 底物 猪 绵羊 单位
胰蛋白酶 BAEE 168,500 93,250 单位/g组织
糜蛋白酶 SGGFpNA 0.48 0.675 μmol/min/g
弹性酶I SAAApNA 0.67 0.25 μmol/min/g
弹性酶II SAAPLpNA 10.8 16.825 μmol/min/g
数据基于用标准条件提取25克绵羊和猪的胰脏。酶活性在活化完成之后测定，通过胰蛋白酶活性达到最高水平后其活性的轻微降低来测定。用来检测弹性酶II活性的底物SAAPLpNA也被弹性酶I和糜蛋白酶水解。因此采用该底物也能估算弹性酶II的活性。
用DME提取冻干胰脏导致猪胰脏的整体蛋白酶含量轻微降低。在之前用DME提取的冻干牛胰脏中检测到较低酶活性水平可能是由于种间差异和/或获取胰脏的动物年龄不同。在DME处理的粉末中观察到相当水平的自体活化，通过调节pH诱导酶原活化之前蛋白酶水平相对较高能证实这一点。检测到最初的胰蛋白酶活性足以通过调节提取物的pH值到更加适合活化的值(例如pH8.5)来完全激活酶原。相反，冷冻胰脏的胰酶原活化要求加入外源胰蛋白酶。
比较从活性冷冻的胰脏和DME提取的冻干胰脏获得的蛋白水解特征显示，DME提取后保留了大部分酶活性。从冷冻胰脏提取弹性酶I的典型效率为0.67μmol/min/g组织，而从DME提取的冻干猪胰脏得到的效率仅为67.4μmol/min/g组织。胰蛋白酶产率似乎低于预期产率，但这可能是高于其他蛋白酶预期产率的原因，其他蛋白酶在胰蛋白酶介导下水解从而在从冷冻胰脏提取过程中降低了它们的活性。
实施例10：用DME提取Hoki肝脏
该实施例显示，可直接从湿生物质提取含高不饱和脂肪酸的脂质。使市售的冷冻的完整hoki鱼肝通过较大尺寸的Urschel粉碎机从而将肝脏碎成大块。浸软的肝脏然后在60℃和40巴用DME提取2小时。使31.996千克DME通过6.7427千克湿的肝脏。获得2.234千克含有水和含高不饱和脂肪酸的脂质的提取物。然后将部分提取的残余固体重新混合并再在相同条件下用DME提取3小时。使48.46千克DME通过肝脏，又回收到1.834千克提取物，其中大部分是水。蒸发水分之后总共获得2.3082千克油。这种油中含有9.35％ DHA、1.43％ DPA、4.91％ EPA、1.3％ C20:4w-3、0.6％AA以及1.9％ C18:3和C18:4w-3。检测残余固体的转谷氨酰胺酶活性，但提取过程已将酶灭活。
实施例11：用DME提取松树种子以获得富含未被亚甲基打断的脂肪酸的脂质
该实施例显示，松树种子可用DME提取以获得富含未被亚甲基打断的脂肪酸的脂质提取物。市售侧柏种子先部分冷压后用DME重提取。残余的冷压种壳含有约35质量％天然油(以预压榨物质计算为26％)。经过压榨的种壳在60℃和40巴用DME提取150分钟。使37.06千克DME通过14.0385千克部分压榨的种子。获得5.942千克提取物，其为天然脂质、复合脂质和水的混合物。通过离心将提取物分离成若干相。分离出的上相是4.847千克天然脂质油。这种油含有9.9％二十碳四烯酸(C20:4非亚甲基中断的脂肪酸)、4.3％二十碳三烯酸(C20:3非亚甲基中断的脂肪酸)和33.2％α亚麻酸。中间相是0.488千克未鉴定的复合脂质。其与主要脂质产物具有类似的脂肪酸组成。
实施例12：用DME提取青口贻贝浆，然后通过超临界CO2提取以分离天然和复合脂质
该实施例显示，可从动物脂质浆中提取含高不饱和脂肪酸的脂质。实施例6制造的青口贻贝固体浆无需干燥直接提取。此时，利用高压将含有细小贻贝固体的浆液泵入提取容器，并使其并流接触压力为40巴、提取温度为60℃的容器内的垂直静态混合物中的DME。提取的固体沉积到提取容器底部。DME和溶解的脂质以及水留在容器顶部，然后按照之前实施例的描述通过与分离容器相连的减压阀和热交换机。在333K和40巴使52.906千克DME接触6.1359千克贻贝浆溶液，得到80.4克提取物，真空下除去水之后提取物中含有富含HUFA的复合脂质和天然脂质(3.4％ C18:3和C18:4w-3；18.7％ EPA，11.1％DHA)。将残余固体冻干以确定基于干重的脂质产率，产率为9.0质量％。然后将冻干的固体磨碎并按实施例6所述相同方法重提取，进一步的产率仅为0.3质量％，显示浆液基本被完全提取。49.74克脂质提取物在333K和300巴用超临界CO2重提取，得到29.10克天然脂质(基于总脂质重量产率为58.4％)。提取物富含HUFA(4.0％ C18:3和C18:4w-3；20.2％ EPA，11.0％DHA)。残余物几乎全部为实施例6所述类型的复合脂质，也富含HUFA(2.4％ C18:3和C18:4w-3；17.2％ EPA，12.6％ DHA)。
实施例13：用超临界CO2然后DME提取，以及用DME然后超临界CO2重提取冻干的磷虾以分离天然脂质和富含HUFA的复合脂质
该实施例显示，通过先用CO2提取天然脂质然后用DME提取富含HUFA的复合脂质，或者通过用DME从磷虾提取总脂质然后用超临界CO2重提取总脂质提取物以除去天然脂质可从冻干的磷虾提取含高不饱和脂肪酸的脂质。180.12克含12.2％脂质的冻干磷虾粉末在300巴和314K用超临界CO2提取以得到11.28克脂质。残余磷虾粉末然后在40巴和332K用DME提取以得到3.30克富含磷脂的脂质，其中包含20％EPA、15.6％DHA和38％总HUFA。3.0603千克含21.4％脂质的第二种磷虾粉末以中试规模在40巴和357K用17.271千克DME提取以得到652.1克富含脂质的提取物，总脂肪酸中含14.0％EPA和9.0％DHA。100.32克这种富含脂质的提取物然后在300巴和314K用26.21千克超临界CO2重提取以得到33.04克未提取的脂质残余物，其高度富含磷脂(76.6％)，含有28.8％EPA、21.9％DHA和55.6％总HUFA。
实施例14：用DME从湿的和干的被孢酶(Mortierella alpina)生物质提取脂质
在该实施例中，使微生物被孢酶(Mortierella alpina)(IRL176株)发酵产生富含花生四烯酸的脂质。该生物质然后作为湿生物质或作为干生物质提取，得到高度富含花生四烯酸的提取物。在150mL鲁氏烧瓶中制备25毫升马铃薯葡糖琼脂(PDA)。在鲁氏烧瓶中接种0.1毫升孢子原液并室温培育1个月。从PDA鲁氏烧瓶表面刮下致密的孢子原液并接种到装有200毫升马铃薯葡糖培养基的500mL无挡板摇瓶中。接种过的摇瓶在旋转振荡器(180rpm)上于25℃培育96小时。取15mL接种摇瓶样品接种到13 x 500mL(总共2000mL)含40g/L葡萄糖和10g/L酵母的无挡板摇瓶中。所得摇瓶在旋转振荡器(180rpm)上于25℃培育7天。收获培养物并通过过滤(滤纸数1)回收生物质。回收的细胞用60℃水以1：1(体积/体积)洗涤。干细胞重12.2g/L。218.85克新鲜的湿生物质用DME提取，但仅回收到1.89克脂质水平低的提取物。这表明细胞未破裂。然后将第二批150.14克新鲜的湿生物质冷冻，研磨后再在333K和40巴用2.416千克DME提取。冷冻和之后的研磨造成细胞破碎，从而得以提取油分。提取到油(6.51g)和水(99.53g)的混合物。油中含有31.8％花生四烯酸、13.8％GLA和55.9％总PUFA。提取后残余的生物质(37.34g)然后在强制对流炉中313K干燥过夜以得到30.02g最终的干物质。这种干生物质然后用研体和研棒研磨。然后在333K和40巴用0.840千克DME提取27.61克这种干生物质，进一步回收到3.87克脂质，其中含33.2％花生四烯酸、14.1％GLA和57.3％总PUFA。
实施例15：用DME提取高不饱和海藻脂质
将58.29克菱形藻(Nitzschia Laevis)混合和异养发酵产生的湿生物质冷冻，然后在40巴和333K用1584克DME提取。总共获得53.10克提取物，其由43.55克水和9.55克天然和复合脂质构成，所述脂质中含2.2％AA、11.8％EPA和2.8％DHA。通过真空下蒸发将脂质混合物与水分离。在300巴和333K用108克超临界CO2提取2.161克干燥的脂质混合物，得到0.560克天然脂质，其中仅含1.4％AA、8.2％EPA和2.2％DHA。提取后残留的复合脂质材料含有4.2％AA、20.0％EPA和3.4％DHA。
工业应用性
本发明的方法可用于从材料中提取高不饱和脂质(脂肪酸)，所述材料如干燥或部分干燥的植物或种子(包括海洋或陆地种类)，或者动物产品(包括海洋或陆地种类或微生物)。高不饱和脂质是婴儿大脑和视力发育所必需的，并且对心血管健康、心理健康以及免疫力和炎症状况有益。

Claims (32)

1.一种从植物或动物材料获得含高不饱和脂肪酸的脂质的方法，该方法包括以下步骤：
(i)使所述材料接触液态二甲醚以得到含有脂质的二甲醚溶液和植物或动物材料残渣；
(ii)将溶液与植物或动物材料残渣分离；和
(iii)从溶液中回收脂质。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(i)中与所述材料接触后形成的溶液中含有天然脂质和复合脂质。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述天然脂质和所述复合脂质一起从溶液中回收。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，将所述天然脂质与所述复合脂质分离。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，在回收步骤(iii)中所述复合脂质与溶解的二甲醚形成胶相。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，将含有复合脂质的胶相与含有天然脂质的溶液分离。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，通过相分离将所述天然脂质与所述复合脂质分离。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，通过离心将所述天然脂质与所述复合脂质分离。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，离心前进行加热。
10.如权利要求8-10中任一项所述的方法，其特征在于，所述复合脂质通过真空干燥来干燥。
11.如上述权利要求中任一项所述的方法，还包括按照以下步骤用接近临界的CO2处理步骤(iii)中从溶液中回收的脂质：
(iv)使步骤(iii)中从溶液中回收的脂质接触接近临界的CO2以得到含有天然脂质的CO2溶液和复合脂质残渣；
(v)将含有天然脂质的CO2溶液与复合脂质残渣分离；和
(vi)从CO2溶液中回收天然脂质。
12.如上述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(i)中要与液态二甲醚接触的植物或动物材料首先按照以下步骤用接近临界的CO2处理：
a.使所述材料接触接近临界的CO2以得到含有天然脂质的CO2溶液和植物或动物材料残渣；
b.将CO2溶液与植物或动物材料残渣分离；和
c.从CO2溶液中回收天然脂质。
13.如上述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述植物或动物材料在使用前被干燥或部分干燥。
14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述植物或动物材料被干燥至材料中的水分少于30重量％。
15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述植物或动物材料被干燥至材料中的水分少于5重量％。
16.如权利要求13-15中任一项所述的方法，其特征在于，所述植物或动物材料通过冷冻干燥或喷雾干燥来干燥。
17.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其特征在于，所述植物或动物材料是已被冷冻的湿生物质。
18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述冷冻的湿生物质在步骤(i)之前被研磨。
19.如上述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述一种或多种复合脂质是磷脂、神经节苷脂、糖脂、脑甘脂或鞘脂。
20.如上述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述一种或多种复合脂质是磷脂。
21.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述磷脂包括以下一种或多种：磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、心磷脂、缩醛磷脂、烷基酰基磷脂、磷酸酯、溶血磷脂、神经酰胺氨基乙基膦酸酯和磷脂酸。
22.如权利要求19所述的方法，其特征在于，所述糖脂包括半乳糖脂、神经节苷脂、磺基异鼠李糖基二酰基甘油酯、牛磺糖脂、糖鞘磷脂和甘露糖基脂质。
23.如上述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，脂质中所含的高不饱和脂肪酸包括但不限于下述任何一种或多种：花生四烯酸、α-和γ-亚麻酸、松油酸、二十碳三烯酸、十八碳三烯酸、双高亚麻酸、二十碳四烯酸、二十碳四烯酸、十八碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸、和二十二碳六烯酸。
24.如上述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述植物或动物材料获自下组中的任何一种：动物器官，动物腺体，大型和微型海洋藻类，丝状真菌，细菌，酵母，甲壳类动物，鱼，海洋无脊椎动物，蛋类，植物种子，植物叶片，植物针叶，蕨叶，藓类植物和地衣植物。
25.如上述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述液态二甲醚是接近临界的二甲醚。
26.通过权利要求1-25中任一项所述的方法获得的含有高不饱和脂肪酸的脂质。
27.通过权利要求1-25中任一项所述的方法获得的复合脂质。
28.通过权利要求1-25中任一项所述的方法获得的天然脂质。
29.一种植物或动物材料，已通过权利要求1-25中任一项所述的方法从中提取了含高不饱和脂肪酸的脂质。
30.如权利要求29所述的植物或动物材料作为营养制品的应用。
31.如权利要求29所述的植物或动物材料作为食品增补剂的应用。
32.如权利要求29所述的植物或动物材料作为酶类来源的应用。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102326669A (zh) * 2011-08-26 2012-01-25 朱新亮 一次性低温脱水脱脂制得白色鱼粉工艺
CN103415593A (zh) * 2011-03-07 2013-11-27 吉坤日矿日石能源株式会社 烃燃料的制造方法
CN105579565A (zh) * 2013-06-14 2016-05-11 阿克海洋生物南极股份公司 脂质提取方法
CN107258936A (zh) * 2009-11-03 2017-10-20 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 包含具有至少20个碳原子的多不饱和脂肪酸的植物油
CN111787936A (zh) * 2018-03-16 2020-10-16 株式会社理光 生产生物材料的提取物和提取残渣的方法、提取物和提取残渣

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8697138B2 (en) 2007-03-28 2014-04-15 Aker Biomarine As Methods of using krill oil to treat risk factors for cardiovascular, metabolic, and inflammatory disorders
PT2144618E (pt) 2007-03-28 2013-07-08 Aker Biomarine Asa Composições bioeficazes de óleo de krill
WO2009139641A1 (en) 2008-05-15 2009-11-19 Pronova Biopharma Norge As Krill oil process
US8557297B2 (en) 2008-09-12 2013-10-15 Olympic Seafood, As Method for processing crustaceans and products thereof
US9814256B2 (en) 2009-09-14 2017-11-14 Rimfrost Technologies As Method for processing crustaceans to produce low fluoride/low trimethyl amine products thereof
US9896642B2 (en) * 2008-10-14 2018-02-20 Corbion Biotech, Inc. Methods of microbial oil extraction and separation
IT1392810B1 (it) * 2009-02-04 2012-03-23 Eni Spa Procedimento per l'estrazione di lipidi da biomassa algale
US20120277449A1 (en) * 2009-06-05 2012-11-01 Gaye Elizabeth Morgenthaler Systems and methods for producing biofuels from algae
JP5328547B2 (ja) * 2009-07-31 2013-10-30 一般財団法人電力中央研究所 有機物の抽出方法、有機物の製造方法、有機物抽出装置組立体、湿潤材料の処理方法
US8273248B1 (en) 2010-04-06 2012-09-25 Heliae Development, Llc Extraction of neutral lipids by a two solvent method
WO2011127169A1 (en) * 2010-04-06 2011-10-13 Heliae Development, Llc Methods of and systems for isolating carotenoids and omega- 3 rich oils from algae
JP5997887B2 (ja) * 2011-09-05 2016-09-28 学校法人帝京大学 経口投与剤
JP5934483B2 (ja) * 2011-09-05 2016-06-15 学校法人帝京大学 リン脂質結合型ｄｈａ増加剤
US9200236B2 (en) 2011-11-17 2015-12-01 Heliae Development, Llc Omega 7 rich compositions and methods of isolating omega 7 fatty acids
AU2015100022B4 (en) * 2012-01-03 2016-01-07 Rimfrost Technologies As Method for processing crustaceans to produce low fluoride/low trimethyl amine products thereof
US9029615B2 (en) 2012-09-05 2015-05-12 Dynasep Inc. Energy efficient method and apparatus for the extraction of lower alcohols from dilute aqueous solution
US9630894B2 (en) 2012-09-05 2017-04-25 Dynasep Inc. Energy efficient method and apparatus for the extraction of biomolecules from dilute aqueous solution
US9629820B2 (en) 2012-12-24 2017-04-25 Qualitas Health, Ltd. Eicosapentaenoic acid (EPA) formulations
US10123986B2 (en) 2012-12-24 2018-11-13 Qualitas Health, Ltd. Eicosapentaenoic acid (EPA) formulations
CA2894709C (en) * 2012-12-24 2022-08-09 Qualitas Health, Ltd. Eicosapentaenoic acid (epa) formulations
WO2015023783A1 (en) 2013-08-13 2015-02-19 Darling Ingredients Inc. Lipid extraction
GB201400431D0 (en) 2014-01-10 2014-02-26 Aker Biomarine As Phospholipid compositions and their preparation
WO2016065280A1 (en) * 2014-10-24 2016-04-28 Darling Ingredients Inc. Lipid extraction
JP6349532B2 (ja) 2014-12-08 2018-07-04 志郎 馬渡 エーテルリン脂質およびその製造方法
NZ747847A (en) 2015-02-11 2023-06-30 Aker Biomarine Antarctic As Lipid compositions
AU2016217559A1 (en) 2015-02-11 2017-08-31 Aker Biomarine Antarctic As Lipid extraction processes
WO2016148282A1 (ja) * 2015-03-18 2016-09-22 株式会社Ihi 脂質組成物及びその製造方法
US20180187121A1 (en) * 2015-06-15 2018-07-05 White Dog Labs, Inc. Method for producing one or more oil-soluble bioproducts
KR101795885B1 (ko) 2015-12-22 2017-11-10 연세대학교 산학협력단 초고속 온라인 지질 추출기, 이를 이용한 생체 내 지질 추출과 분석 시스템 및 방법
US10653708B2 (en) 2017-06-16 2020-05-19 Institute of Rheological Functions of Food Uses of ether phospholipids in treating diseases
RS64705B1 (sr) 2017-12-22 2023-11-30 Pharmalink International Ltd Kompozicije koje sadrže ekstrakt lipida dagnјi i ulje krila, i nјihove medicinske primene
WO2019176958A1 (en) * 2018-03-16 2019-09-19 Ricoh Company, Ltd. Method of producing extract and extraction residue of biological material, extract, and extraction residue
JP7213639B2 (ja) * 2018-03-16 2023-01-27 株式会社アルビオン 生体原料の抽出物及び抽出残渣の製造方法
CN109796328B (zh) * 2019-03-14 2022-03-25 浙江工业大学 一种高纯度香榧籽油金松酸的分离方法
RU2717529C1 (ru) * 2019-08-12 2020-03-23 Общество с ограниченной ответственностью ООО "Продекттехинновация" Способ переработки биологического сырья
US11840462B2 (en) 2021-01-04 2023-12-12 Massachusetts Institute Of Technology Switchable system for high-salinity brine desalination and fractional precipitation
KR102605643B1 (ko) 2023-02-28 2023-11-24 (주)자연과사람 어류의 조직 및 부산물로부터 오일의 친환경 추출 방법

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US196163A (en) * 1877-10-16 Improvement in adjustable rowlocks
FR2104367A5 (zh) * 1970-08-20 1972-04-14 Chevron Res
JPS5611424B2 (zh) * 1973-08-06 1981-03-14
US4069351A (en) * 1976-02-05 1978-01-17 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Extracting foods with a dimethyl ether-water mixture
DE2436130C3 (de) * 1973-08-06 1979-01-04 Asahi Kasei Kogyo K.K., Osaka (Japan) Verfahren zur Herstellung von Extrakten, die die den Geruch und den Geschmack bildenden Bestandteile von Pflanzen bzw. Blüten und Nahrungsmitteln enthalten
JPS5312898A (en) * 1976-07-19 1978-02-04 Asahi Chem Ind Co Ltd Preparation of yolk lecithin
JPS609770B2 (ja) 1977-11-16 1985-03-13 旭化成株式会社 脱コレステロ−ル脱脂卵粉末の製造法
US4157404A (en) * 1978-07-28 1979-06-05 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Process for obtaining yolk lecithin from raw egg yolk
CA1115291A (en) 1978-08-01 1981-12-29 Nobumitsu Yano Process for obtaining yolk lecithin from raw egg yolk
DE3011185A1 (de) 1980-03-22 1981-10-01 Kali-Chemie Pharma Gmbh, 3000 Hannover Verfahren zur gewinnung von fuer physiologische zwecke direkt verwendbarem rin(paragraph)lecithin
SE504029C2 (sv) * 1994-07-01 1996-10-21 Magnus Haerroed Hydrering av lipider utan stereo- eller positions- isomerisering
AUPN531195A0 (en) 1995-09-11 1995-10-05 J.W. Broadbent Nominees Pty. Ltd. Lipid extract having anti-inflamatory activity
DE19638460A1 (de) * 1996-09-19 1998-03-26 Peter Siegfried Verfahren zur Herstellung von Fettsäureestern
DE19854807A1 (de) 1998-11-27 2000-05-31 Krupp Uhde Gmbh Verfahren zur Gewinnung insbesondere von Lecithin aus Trockenei
JP2001072693A (ja) * 1999-09-03 2001-03-21 Asahi Kasei Corp 精製卵黄レシチンの製造法
JP2001106636A (ja) * 1999-10-04 2001-04-17 Asahi Kasei Corp 植物エキスの製造法
WO2001076715A2 (en) 2000-04-12 2001-10-18 Westfalia Separator Industry Gmbh Method for the fractionation of oil and polar lipid-containing native raw materials
EP2255668A3 (en) 2001-05-14 2012-04-04 Martek Biosciences Corporation Production and Use of a Polar Lipid-Rich Fraction Containing Omega-3 and/or Omega-6 Highly Unsaturated Fatty Acids from Microbes, Genetically Modified Plant Seeds and Marine Organisms
US7329789B1 (en) 2001-10-25 2008-02-12 Phasex Corporation Method for extraction and concentration of carotenoids using supercritical fluids
NZ523920A (en) * 2003-01-31 2005-11-25 Fonterra Co Operative Group Methods for extracting lipids from diary products using a near critical phase fluid
PL1694873T3 (pl) * 2003-12-17 2008-06-30 Akzo Nobel Chemicals Int Bv Sposób obróbki skór zwierzęcych
WO2005072477A2 (en) 2004-01-26 2005-08-11 Martek Biosciences Corporation Method for the separation of phospholipids from phospholipid-containing materials
WO2006041316A1 (en) 2004-10-12 2006-04-20 Katrina Fletcher Beta-serum dairy products, neutral lipid-depleted and/or polar lipid-enriched dairy products, and processes for their production
US7868195B2 (en) 2009-10-30 2011-01-11 Daniel Fleischer Systems and methods for extracting lipids from and dehydrating wet algal biomass
US8765983B2 (en) 2009-10-30 2014-07-01 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for extracting lipids from and dehydrating wet algal biomass

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107258936A (zh) * 2009-11-03 2017-10-20 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 包含具有至少20个碳原子的多不饱和脂肪酸的植物油
CN103415593A (zh) * 2011-03-07 2013-11-27 吉坤日矿日石能源株式会社 烃燃料的制造方法
CN102326669A (zh) * 2011-08-26 2012-01-25 朱新亮 一次性低温脱水脱脂制得白色鱼粉工艺
CN102326669B (zh) * 2011-08-26 2013-05-08 朱新亮 一次性低温脱水脱脂制得白色鱼粉工艺
CN105579565A (zh) * 2013-06-14 2016-05-11 阿克海洋生物南极股份公司 脂质提取方法
US11578289B2 (en) 2013-06-14 2023-02-14 Aker Biomarine Antarctic As Lipid extraction processes
CN111787936A (zh) * 2018-03-16 2020-10-16 株式会社理光 生产生物材料的提取物和提取残渣的方法、提取物和提取残渣
US11547953B2 (en) 2018-03-16 2023-01-10 Ricoh Company, Ltd. Method of producing extract and extraction residue of biological material, extract, and extraction residue

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US8383845B2 (en) 2013-02-26

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