PT2144618E - Composições bioeficazes de óleo de krill - Google Patents

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PT2144618E
PT2144618E PT87189106T PT08718910T PT2144618E PT 2144618 E PT2144618 E PT 2144618E PT 87189106 T PT87189106 T PT 87189106T PT 08718910 T PT08718910 T PT 08718910T PT 2144618 E PT2144618 E PT 2144618E
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phospholipids
oil
fatty acids
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PT87189106T
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Inge Bruheim
Mikko Griinari
Snorre Tilseth
Sebastiano Banni
Jeffrey Cohn
Daniele Mancinelli
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Aker Biomarine Asa
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Description

ΡΕ2144618 1 DESCRIÇÃO "COMPOSIÇÕES BIOEFICAZES DE ÓLEO DE KRILL"
ÁREA DA INVENÇÃO
Esta invenção relaciona-se com extractos de krill do Antártico, compreendendo ácidos gordos bioactivos.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
No Oceano Austral, ao largo da costa da Antártida, pode ser encontrado o krill do Antártico (Euphausia superba) em grandes quantidades, calculadas entre 300-500 milhões de toneladas métricas de biomassa. Alimenta-se de fitoplâncton durante o curto verão Antártico. Contudo, durante o inverno, a sua alimentação limita-se a algas no gelo, bactérias, detritos marinhos e ao consumo de proteínas do corpo para obtenção de energia.
De modo a isolar o óleo de krill do krill, foram utilizados métodos de extracção com solventes. Ver, e.g., a WO 00/23546. Os lípidos do krill foram extraídos colocando-se o material num solvente cetona (e.g., acetona) de modo a extrair-se a fracção lipídica solúvel. Este método envolve a separação do teor de sólidos do líquido e recuperação da fracção rica em lípidos a partir da fracção líquida, por 2 ΡΕ2144618 evaporação. Passos adicionais do processamento incluem a extracção e recuperação por evaporação da fracção lipidica solúvel restante, a partir dos sólidos, utilizando um solvente como o etanol. Ver, e.g., a WO 00/23546. As composições produzidas por estes métodos são caracterizados por conterem, pelo menos, 75 μg/g de astaxantina, preferencialmente 90 μg/g de astaxantina. Outro extracto lipidico de krill revelado continha pelo menos 250 μg/g de canas-taxantina, preferencialmente 270 μg/g de canastaxantina.
As composições de óleo de krill têm sido descritas como sendo eficazes para diminuição do colesterol, inibição da adesão plaquetária, inibição da formação de placas arteriais, prevenção da hipertensão, controlo de sintomas de artrite, prevenção do cancro cutâneo, melhoramento do transporte transdérmico, redução dos sintomas prémenstruais ou controlo de glucose no sangue de um paciente. Ver, e.g., a WO 02/102394. Ainda noutro pedido, foi revelada uma composição de óleo de krill compreendendo um fosfolipido e/ou um flavonóide. O teor em fosfolipidos no extracto lipidico de krill pode ser tão elevado como 60% p/p e o teor em EPA/DHA pode atingir os 35% (p/p) . Ver, e.g., a WO 03/011873.
Adicionalmente, foram revelados nutracêuticos, farmacêuticos e cosméticos compreendendo o extracto fosfo-lipídico. Anteriormente, já tinha sido demonstrado que a extracção com fluido supercrítico, utilizando CO2 puro, podia ser utilizada para evitar a extracção de fosfo- 3 ΡΕ2144618 lípidos, de modo a extrair a fracção lipídica neutra a partir do krill, o que incluía a astaxantina esterificada e livre. Ver, e.g., Yamaguchi et al., J. Agric. Food Chem. (1986), 34(5), 904-7. A extracção com fluido supercrítico com modificador de solvente, tinha anteriormente sido utilizada para extrair fosfolípidos de ovas de salmão, mas não tinha sido anteriormente utilizada para extrair fosfolípidos a partir de farinha de krill. Ver, e.g., Tanaka et al., J. Oleo Sei. (2004), 53(9), 417-424.
Os métodos descritos acima baseiam-se no processamento de krill congelado, transportado desde o Oceano Austral até ao local de processamento. Este transporte é dispendioso e pode resultar na degradação do krill de partida. Os dados na literatura mostram uma rápida decomposição do óleo no krill o que explica porque é que o óleo de krill actualmente oferecido no mercado como um suplemento de ómega-3 contém quantidades muito elevadas de fos-fatidileolina parcialmente decomposta e também glicéridos parcialmente decompostos. Saether et ai., Comp. Biochem. Phys. B 83B(1) : 51-55 (1986) . Os produtos oferecidos também contêm níveis elevados de ácidos gordos livres. São necessários na técnica métodos para processamento do krill que não necessitem de transporte do material krill congelado ao longo de grandes distâncias, nem dos produtos produzidos por esses métodos. A presente invenção proporciona composições con- 4 ΡΕ2144618 tendo: de ceca de 3% a 10% de f osf olípidos com ligação éter, numa base p/p; e de cerca de 400 a cerca de 2500 mg/kg de astaxantina. Em algumas realizações, a composição inclui também desde cerca de 35% a 50% de fosfolípidos sem ligação éter, numa base p/p, de modo que a quantidade total de fosfolípidos com ligação éter e fosfolípidos sem ligação éter seja de cerca de 38% a 60%, numa base p/p. Em algumas realizações, os fosfolípidos de éter são seleccionados do grupo que consiste em alquilacilfosfatidilcolina, liso-alquilacilfosfatidilcolina, alquilacilfosfatidiletanolamina e suas combinações. Em algumas realizações, os lípidos de éter são superiores a 90% de alquilacilfosfatidilcolina. Em algumas realizações, os fosfolípidos sem éter são seleccionados do grupo que consiste em fosfatidilcolina, fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina e suas combinações. Em algumas realizações, a composição de óleo de krill inclui uma mistura de fracções obtidas a partir de krill. Em algumas realizações preferidas, o krill é Euphausia superba, apesar de outras espécies de krill também terem utilização na presente invenção. Outras espécies de krill incluem, mas não se limitam a, E. pacifica, E. frigida, E. longirostris, E. triacantha, E. vallentini, Meganyctiphanes norvegica, Thysanoessa raschii e Thysanoessa inermis. Em algumas realizações as composições compreendem cerca de 25% a 30% de ácidos gordos omega-3, como percentagem do total de ácidos gordos, e em que desde cerca de 80% a 90% dos ácidos gordos omega-3 estão ligados aos fosfolípidos referidos. Em algumas realizações, a presente invenção proporciona uma cápsula contendo as composições antecedentes. 5 ΡΕ2144618
Em algumas realizações, as composições de acordo com a presente invenção incluem pelo menos 65% (p/p) de fosfolipidos, sendo os referidos fosfolípidos caracteriza-dos por conterem pelo menos 35% de residuos de ácido gordo omega-3. Em algumas realizações preferidas, a composição deriva de biomassa marinha ou aquática. Em ainda outras realizações preferidas, a composição é derivada de krill. Em algumas realizações, a composição contém menos de 2% de ácidos gordos livres. Em algumas realizações a composição compreende, pelo menos, 10% de triglicéridos. Em algumas realizações preferidas, os fosfolípidos contêm mais de 50% de fostatidilcolina. Em algumas realizações a composição inclui pelo menos 500 mg/kg de esteres de astaxantina. Em algumas realizações a composição inclui pelo menos 500 mg/kg de esteres de astaxantina e, pelo menos, 35% (p/p) de ácidos gordos omega-3. Em algumas realizações a composição contém menos de 0,5g/100 g de colesterol total. Em algumas realizações a composição contém menos de 0,45% (p/p) de ácido araquidónico.
Em algumas realizações a presente invenção proporciona um extrato lipídico de krill compreendendo, pelo menos, 500, 100, 1500, 2000, 2100 ou 2200 mg/kg de esteres de astaxantina e pelo menos 36% (p/p) de ácidos gordos omega-3. Noutras realizações, a presente invenção proporciona extrato lipídico de krill compreendendo, pelo menos, 100 mg/kg de esteres de astaxantina, pelo menos 20% (p/p) de ácidos gordos omega-3 e menos de 0,45% (p/p) de ácido araquidónico. 6 ΡΕ2144618
As composiçoes de acordo com a invenção podem incluir pelo menos 65% (p/p) de fosfolipidos.
Noutro aspecto, as composições da invenção são obtidas a partir de origens aquáticas ou marinhas, sendo caracterizadas por conterem 65% (p/p) de fosfolipidos.
Ainda noutro aspecto, as composições da invenção são obtidas a partir de krill, sendo caracterizadas por conterem pelo menos 65% (p/p) de fosfolipidos.
Noutro aspecto, as composições da invenção são obtidas a partir de krill, sendo caracterizadas por conterem pelo menos 65% (p/p) de fosfolípidos e pelo menos 39% (p/p) de ácidos gordos omega-3.
Ainda noutro aspecto, as composições da invenção são obtidas a partir de krill, sendo caracterizadas por conterem pelo menos 65% (p/p) de fosfolípidos, pelo menos 39% (p/p) de ácidos gordos omega-3 e pelo menos 580 mg/kg de esteres de astaxantina.
Noutro eapecto, as composições da invenção são obtidas a partir de krill, sendo caracterizadas por conterem pelo menos 39% (p/p) de ácidos gordos omega-3 e pelo menos 580 mg/kg de esteres de astaxantina.
Ainda noutro aspecto a presente invenção 7 ΡΕ2144618 proporciona um óleo de krill como aqui descrito, eficaz para redução da resistência à insulina, melhorando o perfil lipidico do sangue, reduzindo a inflamação e reduzindo o esforço oxidante.
Em algumas realizações, as composições da invenção desde cerca de 3% a 10% de fosfolipidos com ligação éter, numa base p/p; desde cerca de 35% a 50% de fosfolipidos sem ligação éter, numa base p/p, de modo que a quantidade total de com ligação éter e de fosfolipidos sem ligação éter, na composição, seja de cerca de 48% a 60%, numa base p/p; desde cerca de 20% a 45% de triglicéridos, numa base p/p; e desde cerca de 400 a cerca de 2500 mg/kg de astaxantina. Em algumas realizações, os fosfolipidos com ligação éter são seleccionados do grupo que consiste em alquilacilfosfati-dilcolina, liso-alquilacilfosfatidilco-lina, alquilacilfos-fatidiletanolamina e suas combinações. Em algumas realizações, os lipidos com ligação éter contêm mais de 90% de alquilacilfosfatidilcolina. Em algumas realizações, os fosfolipidos sem ligação éter são seleccionados do grupo que consiste em fosfatidilcolina, fosfatidilserina, fosfatidil-etanolamina e suas combinações. Em algumas realizações, a composição de óleo de krill é composta por uma mistura de fracções lipidicas obtidas a partir do krill. Em algumas realizações preferidas, o krill é Euphausia superba, apesar de outras espécies de krill também terem utilização na presente invenção. Outras espécies de krill incluem, mas não se limitam a, E. pacifica, E. frigida, E. longirostris, ΡΕ2144618 E. triacantha, Ε. vallentini, Meganyctiphanes norvegica, Thysanoessa raschii e Thysanoessa inermis. Em algumas realizações as composições compreendem cerca de 25% a 30% de ácidos gordos omega-3, como percentagem do total de ácidos gordos, e em que desde cerca de 80% a 90% dos ácidos gordos omega-3 estão ligados aos fosfolipidos referidos. Em algumas realizações, a presente invenção proporciona uma cápsula contendo as composições antecedentes.
As composições da invenção podem ser utilizadas em métodos compreendendo a administração das composições antecedentes a um sujeito, numa quantidade eficaz para reduzir a resistência à insulina, reduzir a inflamação, melhorar o perfil lipidico do sangue e reduzir o esforço oxidante.
Em algumas realizações, um extracto lipidico de krill de acordo com a invenção, compreende mais de cerca de 80% de triglicéridos e mais de 90, 100, 500, 1000, 1500, 200, 2100 ou 2200 mg/kg de esteres de astaxantina. Em algumas realizações, um extracto lipidico de krill é caracterizado por conter cerca de 5% a cerca de 15% de resíduos de ácido gordo omega-3. Em algumas realizações, o extracto lipidico de krill é caracterizado por conter menos de cerca de 5% de fosfolipidos. Em algumas realizações, o extracto lipidico de krill é caracterizado por conter entre cerca de 5% e cerca de 10% de colesterol. A presente invenção também proporciona métodos 9 ΡΕ2144618 para produção de óleo de krill contendo 40% a 60% p/p de fosfolípidos, compreendendo: a) proporcionar um produto desnaturado de krill; e b) extracção do óleo a partir do produto desnaturado de krill. Em algumas realizações, o produto de krill desnaturado é produzido por tratamento do krill com calor. Em algumas realizações, a farinha de krill é armazenada antes do passo de extracção. O produto desnaturado de krill pode ser farinha de krill. Em algumas realizações, o passo de extracção compreende a extracção por fluidos supercriticos. Em algumas realizações, a extracção com fluido supercritico é um processo em dois passos, compreendendo um primeiro passo de extracção com dióxido de carbono e uma baixa concentração de um co-solvente (e.g., desde cerca de 1-10% de co-solvente) e um segundo passo de extracção com dóxido de carbono e uma concentração mais elevada de co-solvente (e.g., desde cerca de 10-30% de co-solvente). Em realizações preferidas, o co-solvente é um álcool monohidrico C1-C3, preferencialmente, etanol. Em algumas realizações a presente invenção proporciona óleo produzido pelo método precedente.
Em algumas realizações, a presente invenção proporciona métodos de produção de óleo de krill, compreendendo: a) proporcionar krill fresco; b) tratamento do referido krill fresco para desnaturar as lipases e fosfolipases no referido krill fresco, para proporcionar um produto de krill desnaturado; e c) extracção do óleo a partir do produto de krill desnaturado referido. Em algumas realizações, o passo de desnaturação compreende o aquecimento do krill 10 ΡΕ2144618 fresco referido. Em algumas realizações, o passo de desnaturação compreende o aquecimento do referido krill fresco, após moagem. Em algumas realizações, os métodos compreendem também a armazenagem do produto de krill referido à temperatura ambiente ou inferior, entre o passo de desnaturação e o passo de extracção. Em algumas realizações, o passo de desnaturação da enzima é conseguido por aplicação de calor. Em algumas realizações, o passo de extracção compreende a utilização de dióxido de carbono supercritico, com ou sem a utilização de um modificador polar. Em algumas realizações, o passo de extracção compreende a utilização de etanol. Em algumas realizações, o passo de extracção compreende a extracção por etano seguido por acetona, para precipitação de fosfolípidos. Em algumas realizações, o produto de krill desnaturado é uma farinha. Em algumas realizações, a presente invenção proporciona óleo produzido pelo método precedente.
Em algumas realizações, a presente invenção proporciona uma composição óleo extraído a partir de krill, possuindo um teor em fosfatidilcolina superior a cerca de 50% (p/p) . Em algumas realizações, o óleo tem um teor em fosfatidilcolina superior a cerca de 70% (p/p). Em algumas realizações, o óleo tem um teor em fosfatidilcolina superior a cerca de 80% (p/p). Em algumas realizações, a composição contém menos de 2% de ácidos gordos livres. Em algumas realizações, a composição contém menos de 10% de triglicéridos. Em algumas realizações, a composição contém pelo menos 500 mg/kg de esteres de astaxantina. Em algumas 11 ΡΕ2144618 realizações a composição contém menos de 0,45% (p/p) de ácido araquidónico.
Em algumas realizações a presente invenção proporciona composições contendo óeo de krill inodoro. Em algumas realizações, o óleo de krill inodoro contém menos de cerca de 10 mg/kg (p/p) de trimetilamina. Em algumas outras realizações, a presente invenção proporciona um óleo de kril inodoro propudizo pelo método compreendendo: a extracção de um óleo neutro de krill a partir de material contendo óleo de krill, por extracção com fluido super-crítico, para proporcionar um material de krill desodorizado, em que o referido óleo de krill neutro contém compostos causadores de odor e extracção de um óleo polar de krill a partir do referido material desodorizado de krill, por extracção com fluido supercritico, com um veículo polar, para proporcionar um óleo de krill essencialmente inodoro.
Em algumas realizações, a composição da invenção compreende óleo de krill menos de cerca de 70 microgra-mas/quilograma (p/p) de esteres de astaxantina. Em algumas realizações, as composições contêm menos que cerca de 50 microgramas/quilograma (p/p) de esteres de astaxantina. Em algumas realizações, as composições contêm menos que cerca de 20 microgramas/quilograma (p/p) de esteres de astaxantina. Em algumas realizações, as composições contêm menos que cerca de 5 microgramas/quilograma (p/p) de esteres de astaxantina. 12 ΡΕ2144618
Em algumas realizações, a presente invenção proporciona um óleo de krill, contendo 40% a 60% p/p de fosfolipidos, produzido pelo processo compreendendo: bomba-gem do krill fresco, de um arrastão para um navio, aquecimento do krill, para proporcionar um material de krill e extracção do óleo a partir do material de krill.
Noutras realizações, a presente invenção proporciona uma composição de mistura de óleo de krill, contendo: desde cerca de 45% a 55% p/p de f osf olipidos; desde cerca de 20% a 45% p/p de triglicéridos; e desde cerca de 400 a cerca de 2500 mg/kg de astaxantina. Em algumas realizações, o produto de mistura de óleo de krill compreende uma mistura de fracções lipídicas obtidas a partir de Euphausia superba. Em algumas realizações, a composição contém desde cerca de 25% a 30% de ácidos gordos omega-3, como percentagem do total de ácidos gordos, e em que desde cerca de 80% a 90% dos referidos ácidos gordos omega-3 estão ligados aos fosfolipidos referidos.
Ainda noutras realizações, a presente invenção proporciona uma composição de óleo do krill Euphausia superba contendo contendo desde cerca de 3% a 10% p/p de fodfolípidoe de éter; desde cerca de 27% a 50% de fosfolípidos não éter, de modo que a quantidade total de fosfolipidos na composição é de cerca de 30% a 60%; desde cerca de 20% a 50% de triglicéridos; desde cerca de 400 a cerca de 2500 mg/kg de astaxantina; e desde cerca de 25% a 13 ΡΕ2144618 30% de ácidos gordos omega-3, como percentagem do total de ácidos gordos na composição referida, e em que desde cerca de 70% a 95% dos referidos ácidos gordos omega-3 estão ligados aos fosfolípidos referidos.
Ainda noutras realizações, a presente invenção proporciona um suplemento dietético compreendendo óleo encapsulado de krill Euphausia superba, compreendendo entre cerca de 30% a 60% p/p de fosfolípidos; entre cerca de 20% a 50% de triglicéridos; entre cerca de 400 a cerca de 2500 mg/kg de astanxantina; e entre cerca de 20% a 35% de ácidos gordos omega-3, como percentagem do total de ácidos gordos na composição, em que entre cerca de 70% a 95% dos referidos ácidos gordos omega-3 estão ligados aos fosfolípidos referidos.
Em algumas realizações, a presente invenção proporciona métodos para obtenção de uma composição de óleo de krill de Euphausia superba, compreendendo: o contacto de Euphausia superba com um solvente polar, para proporcionar um extracto polar compreendendo fosfolípidos; contacto de Euphausia superba com um solvente neutro para proporcionar um extracto neutro compreendendo triglicéridos e asta-xantina; combinação do referido extracto polar com o extracto neutro referido para proporcionar óleo de krill Euphausia superba, compreendendo entre cerca de 30% a 60% p/p de fosfolípidos; entre cerca de 20% a 50% de triglicéridos; entre cerca de 400 a cerca de 2500 mg/kg de astanxantina; e entre cerca de 20% a 35% de ácidos gordos 14 ΡΕ2144618 omega-3, como percentagem do total de ácidos gordos na referida composição e em que entre cerca de 70% a 95% dos referidos ácidos gordos omega-3 estão ligados aos fosfoli-pidos referidos. Em algumas realizações, o método inclui ainda o passo de encapsulação do óleo de krill de Euphausia superba. Em algumas realizações, a presente invenção proporciona um óleo de krill de Euphausia superba pelos métodos descritos acima.
Em algumas realizações, a presente invenção proporciona métodos para produção de suplementos dietéticos, compreendendo: o contacto de Euphausia superba com um solvente polar, para proporcionar um extracto polar compreendendo fosfolipidos; contacto de Euphausia superba com um solvente neutro para proporcionar um extracto neutro compreendendo triglicéridos e astaxantina; combinação do referido extracto polar com o extracto neutro referido para proporcionar óleo de krill Euphausia superba, compreendendo entre cerca de 30% a 60% p/p de f osf olipidos; entre cerca de 20% a 50% de triglicéridos; entre cerca de 400 a cerca de 2500 mg/kg de astanxantina; e entre cerca de 20% a 35% de ácidos gordos omega-3, como percentagem do total de ácidos gordos na referida composição e em que entre cerca de 70% a 95% dos referidos ácidos gordos omega-3 estão ligados aos fosfo-lípidos referidos; e encapsulação do referido óleo de krill de Euphausia superba. 15 ΡΕ2144618
As composições da invenção, para utilização em métodos para evitar ou tratar hiperinsulinémia induzida pela alimentação, insensibilidade à insulina, hipertrofia da massa muscular, redução da adiponectina no soro, esteatose hepática, gordura no coração, gordura no fígado, resistência à insulina, inflamação, perfil lipídico do sangue, ou formas de esforço oxidante, formam um outro aspecto da invenção. Métodos adequados incluem a administração a um sujeito referido exposto a uma dieta rica em gordura, de uma quantidade eficaz de uma composição de óleo de krill da presente invenção, sob condições tais que uma condição seleccionada do grupo que consiste em hiperinsulinémia induzida pela alimentação, insensibilidade à insulina, hipertrofia da massa muscular, redução da adiponectina no soro, esteatose hepática, gordura no coração, gordura no fígado, resistência à insulina, inflamação, perfil lipídico do sangue, ou formas de esforço oxidante, seja reduzida. A presente invenção não se limita a composições de óleo de qualquer krill particular. Em algumas realizações, a composição do óleo de krill é uma composição do óleo do krill Euphausia superba. A presente invenção não é limitada a qualquer formulação particular de óleo de krill. Em algumas realizações, a composição de óleo de krill é encapsulada. Em algumas realizações preferidas, a quantidade eficaz de uma composição de óleo de krill situa-se entre cerca de 0,2 gramas e 10 gramas da referida composição de óleo de krill. Em algumas realizações, a composição de óleo de krill compreende: desde cerca de 45% a 55% p/p de fosfolípidos; desde cerca de 20% a 45% p/p de 16 ΡΕ2144618 triglicéridos; e desde cerca de 400 a cerca de 2500 mg/kg de astaxantina. Em algumas realizações a composição de óleo de krill compreende uma mistura de fracções lipídicas obtidas a partir de Euphausia superba. Em algumas realizações, a composição de óleo de krill compreende desde cerca de 25% a 30% de ácidos gordos omega-3, como percentagem do total de ácidos gordos e em que entre cerca de 80% a 90% dos referidos ácidos gordos omega-3 estão ligados aos fosfolípidos referidos. Em algumas realizações, a composição de óleo de krill compreende: desde cerca de 30% a 60% p/p de fosfolípidos; desde cerca de 25% a 50% p/p de triglicéridos; desde cerca de 400 a cerca de 2500 mg/kg de astaxantina; e desde cerca de 25% a 35% de ácidos gordos omega-3, como percentagem do total de ácidos gordos e em que entre cerca de 70% a 95% dos referidos ácidos gordos omega-3 estão ligados aos fosfolípidos referidos.
Numa outra realização, a presente invenção proporciona as composições, como aqui descritas, para indução de diurese, aumento da massa muscular ou diminuição do catabolismo de proteínas. Métodos adequados envolvendo as composições, incluem os seguintes: Métodos para indução de diurese num sujeito, compreendendo a administração ao sujeito referido de uma quantidade eficaz de uma composição de óleo de krill, sob condições tais que seja induzida a diurese. Métodos para aumento da massa muscular num 17 ΡΕ2144618 sujeito, compreendendo a administração ao sujeito referido de uma quantidade eficaz de uma composição de óleo de krill, sob condições tais que seja aumentada a massa muscular. Métodos para diminuição do catabolismo de proteínas num sujeito, compreendendo a administração ao sujeito referido de uma quantidade eficaz de uma composição de óleo de krill, sob condições tais que seja diminuído o catabolismo de proteínas. Métodos para diminuição da quantidade de lípidos no coração de um sujeito, compreendendo a administração ao sujeito referido de uma quantidade eficaz de uma composição de óleo de krill, sob condições tais que seja diminuída a quantidade de lípidos no coração do sujeito. Métodos para diminuição da quantidade de lípidos no fígado de um sujeito, compreendendo a administração ao sujeito referido de uma quantidade eficaz de uma composição de óleo de krill, sob condições tais que seja diminuída a quantidade de lípidos no fígado do sujeito.
DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
Figura 1. Análise por 31P RMN dos lípidos polares no óleo de krill.
Figura 2. Perfis de lípidos no sangue de ratos Zucker alimentados com diferentes formas de ácidos gordos omega-3 (TAG = FO, PL1 = NKO e PL2 = Superba) 18 ΡΕ2144618
Figura 3. Concentração de glucose no plasma em ratos Zucker alimentados com diferentes formas de ácidos gordos omega-3.
Figura 4. Concentração de insulina no plasma em ratos Zucker alimentados com diferentes formas de ácidos gordos omega-3.
Figura 5. Valores de HOMA-IR estimados em ratos Zucker alimentados com diferentes formas de ácidos gordos omega-3.
Figura 6. Efeito dos ácidos gordos omega-3 na dieta, sobre a produção de TNF- α por macrófagos peritoneais. Figura 7. Efeito dos ácidos gordos omega-3 na dieta, sobre a acumulação de lipidos no fígado. Figura 8. Efeito dos ácidos gordos omega-3 na dieta, sobre a acumulação de lipidos no músculo. Figura 9. Efeito dos ácidos gordos omega-3 na dieta, sobre a acumulação de lipidos no coração.
Figura 10. Concentrações relativas de DHA no cérebro de ratos Zucker alimentados com um suplemento de ácidos gordos omega-3.
Figura 11. Média de peso corporal (g) dos grupos de murganhos com artritismo induzido por colagénio BDA/1. B - PL2 é o grupo de óleo de krill. * p<0,05, significativamente diferente do Grupo A (Controlo Positivo - Óleo de Peixe) e do Grupo C (Controlo).
Figura 12. Peso corporal para os diversos grupos de tratamento.
Figura 13. Peso muscular para os diversos grupos de tratamento. 19 ΡΕ2144618
Figura 14. Relação entre o pelo muscular e corporal para os diversos grupos de tratamento.
Figura 15. Níveis de adiopnectina (ng/mL) no soro para os diversos grupos de tratamento.
Figura 16. Níveis de insulina no soro para os diversos grupos de tratamento.
Figura 17. Níveis de glucose no sangua (mmol/L) nos diversos grupos de tratamento.
Figura 18. Valores de HOMA-IR para ao diversos grupos de tratamento.
Figura 19. Níveis de triglicéridos no fígado (μιηοΐ/g) para os diversos grupos de tratamento.
DEFINIÇÕES
Tal como aqui utilizado, "fosfolípido" refere-se a um composto orgânico possuindo a seguinte estrutura geral:
20 ΡΕ2144618 em que RI é um resíduo de ácido gordo, R2 é um resíduo de ácido gordo ou -OH e R3 é um -H ou um composto colina contendo azoto (HOCH2CH2N+(CH3) 30H“) , etanolamina (HOCH2CH2-NH2), inositol ou serina. RI e R2 não podem ser simultaneamente OH. Quando R3 é um -OH, o composto é um fosfa-tídeo, tal como lecitina, cefalina, fosfatidilserina ou plasmalogéneo.
Um "fosfolípido com ligação éter", tal como aqui utilizado, refere-se a um fosfolípido possuindo uma ligação éter na posição 1 da armação glicerol. Exemplos de fosfo-lípidos com ligações éter incluem, mas não se limitam a, alquilacilfosfatidilcolina (AAPC), liso-alquilacilfosfati-dilcolina (LAAPC) e alquilacilfosfatidiletanolamina (AAPE). Um "fosfolípido sem ligação éter" é um fosfolípido que não possui uma ligação éter na posição 1 da armação glicerol.
Tal como aqui utilizado, o termo ácido gordo omega-3 refere-se a ácidos gordos poli-insaturados que possuem a ligação dupla final na cadeia hidrocarbonada, entre os terceiro e o quarto carbono átomos de carbono, a partir da extremidade metilo da molécula. Exemplos não limitantes de ácidos gordos omega-3 incluem ácido 5,8,11,14,17-eicosapentanóico (EPA), ácido 4,7,10,13,16,19-docosahexanóico (DHA) e ácido 7,10,13,16,19-docosapentanói-co (DPA).
Tal como aqui utilizado, astaxantina refere-se à extrutura química seguinte: 21 ΡΕ2144618
Tal como aqui utilizado, esteres de astaxantina refere-se aos ácidos gordos esterifiçados para grupos OH na molécula de astaxantina.
Tal como aqui utilizado, o termo p/p (peso/peso) refere-se à quantidade de uma dada substância numa composição com base no peso. For exemplo, uma composição compreendendo 50% p/p de fosfolípidos significa que a massa de fosfolípidos é 50% da massa total da composição (i.e., 50 gramas de fosfolípidos em 100 g de comoposição, tal como um óleo).
Esta invenção revela novas composições de óleo de krill caracterizado por conter níveis elevados de astaxantina, fosfolípidos, incluindo quantidades enriquecidas de fosfolípidos com ligação éter, e ácidos gordos omega-3. As composições de óleo de krill são extraídas a partir de farinha de krill utilizando extracção com fluido supercrítico (SFE) com um co- -solvente modificador. A farinha de krill foi processada a bordo de um navio na Antártida, utilizando krill vivo como material de partida, de modo a assegurar qualidade mais elevada possível da farinha de krill. Os óleos de krill foram extraídos a 22 ΡΕ2144618 partir da farinha de krill em dois passos, sendo, no passo 1, extraída a fracção neutra, utilizando CO2 supercrítico puro ou em combinação com 5% de etanol. A fracção neutra consistiu principalmente em triglicéridos e colesterol. No passo 2, os lípidos polares (fosfolípidos) são extraídos por adição de, pelo menos, 20% de etanol ao meio de extracção CO2 supercrítico. A presente invenção proporciona métodos para evitar a decomposição dos glicéridos e fosfolípidos no óleo de krill e composições produzidas por estes métodos. O produto obtido por estes novos métodos é virtualmente livre de constituintes de decomposição enzimatica do óleo. A solução para o problema consiste em incorporar um passo de desnaturação de proteínas no krill fresco, antes da utilização de gualquer tecnologia de extracção. A desnaturação pode ser conseguida por esforço térmico ou por outro meio. Após desnaturação, o óleo pode ser extraído por uma selecção óptima de solventes não polares e polares, incluindo a utilização de dióxido de carbono supercrítico. O krill está adaptado a uma digestão de nutrientes muito eficiente, a baixas temperaturas. Consequentemente, as enzimas são sensíveis ao calor e o psso de aplicação de desnaturação térmica de lipases e fosfolipases não implica a utilização de temperaturas muito elevadas. Surpreendentemente, verificou-se que a utilização de condições suaves de desnaturação pode melhorar muito a qualidade de óleo de krill. 23 ΡΕ2144618
Adicionalmente, uma grande dificuldade em diversos processos de extracção consiste no custo da remoção da água. Isto é particularmente verdadeiro para métodos que possibilitam a extracção de lipido muito insaturadps, em que o método de secagem por congelação tem sido considerado como o método de escolha para evitar a degradação oxidante dos lipidos. Contudo, os lipidos no krill são, novamente, surpreendentemente estáveis contra a deterioração oxidante. Consequentemente, um processo incluindo a utilização moderada de calor no processo de remoção da água é executável, desde que as enzimas tenham sido inactivadas. A. Processamento do krill A presente invenção proporciona métodos para processamento do krill pescado, no local de captura e, preferencialmente, a bordo do navio. Após processamento a bordo, o krill pode ainda ser sujeito a processos de extracção a bordo do navio uo numa localização remota, longe do navio. Os passos de processamento aqui descritos também permitem a armazenagem do material krill, preferencialmente uma farinha de krill, durante desde cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 ou 12 meses até cerca de 24 a 36 meses, antes do processamento.
Em algumas realizações preferidas, o krill recém apanhado é primeiro sujeito a um passo de desnaturação de proteína. A presente invenção não se limita a qualquer método particular de desnaturação de proteína. Em algumas 24 ΡΕ2144618 realizações, a desnaturação é conseguida por aplicação de químicos, calor ou uma combinação destes. Em algumas realizações, o krill recém apanhado é comprimido em húmido para se obter óleo e a farinha. Em algumas realizações a farinha é depois aquecida até uma temperatura de cerca de 50°C a cerca de 100°C, durante cerca de 20 minutos a uma hora, preferencialmentecerca de 40 minutos, para desnaturar as proteínas. Em algumas realizações, este material é então comprimido para dar um bloco comprimido. Quando este método é utilizado no krill, apenas é libertada uma pequena quantidade de óleo. A maior parte do óleo ainda está presente na farinha desnaturada. Em algumas realizações, são adicionados antioxidantes, tal como etoxiquina ou Vitamina E, à farinha. Contudo, como mostrado nos exemplos, a farinha resultante é surpreendentemente estável. A estabilidade pode ser apenas parcialmente explicável pela adição de um antioxidante à farinha. Este antioxidante pode, após extracção do óleo a partir da farinha desnaturada, ser removido em passos de processamento adicionais. Alternativamente, o óleo pode ser extraído logo após a produção da farinha sem qualquer adição de antioxidante no processo. Adicionalmente, podem ser aplicadas condições de armazenamento a uma temperatura baixa a muito baixa, se a adição de antioxidante não for desejada. O óleo de krill extraído a partir da farinha de krill desnaturada, por extracção com fluido supercrítico, mesmo após 19 meses depois da produção da farinha, não 25 ΡΕ2144618 continha virtualmente nenhums fosfolípidos decompostos. Este produto mostrou ser substancialmente diferente das amostras de óleo de krill disponíveis actualmente no comércio. Os procedimentos de processamento comercial do krill anteriormente descrito utiliza krill que foi congelado imediatamente depois da apanha, seguido por secagem por congelamento e extracção a baixas temperaturas. Contudo, estes processos apenas dão um produto adequado se a duração do período em que o krill é mantido dongelado for muito curto ou a temperatura extremamente baixa (-60°C a -80°C). Contudo, os dados proporcionados aqui mostram claramente que, se for adicionado um passo de desnaturação das proteínas antes de um método opcional de extracção, pode ser produzido um excelente óleo de krill, mesmo após um longo período de armazenamento. Esta metodologia também permite a utilização de métodos alternativos para remoção da água antes da extracção, o que, por sua vez, tem um grande impacto nos custos da operação industrial. Se for desejado um período longo de armazenamento, o material desnaturado deve ser, preferencialmente, armazenado a baixa temperatura, preferencialmente -20°C.
Em algumas realizações, o óleo de krill é extraído a partir da farinha de krill desnaturada. Em algumas realizações, o óleo de krill é extraído por contacto da farinha de krill com etanol. Em algumas realizações, o krill é depois extraído com um solvente cetona, como a acetona. Noutras realizações, 0 óleo de krill é extraído por extracção, em um ou dois passos, com 26 ΡΕ2144618 fluido supercrítico. EM algumas realizações a extracção com fluido supercrítico utiliza dióxido de carbono e é produzido óleo neutro de krill. Em algumas realizações a extracção com fluido supercrítico utiliza dióxido de carbono com a adição de um veículo polar, como o etanol, para produzir um óleo de krill polar. Em algumas realizações a farinha de krill é extraída primeiro com dióxido de carbono seguido por dióxido de carbono com um veículo polar, ou vice versa. Em algumas realizações a farinha de krill é primeiro extraída com CO2 suplementado com uma pequena quantidade de um co-solvente polar (e.g., desde cerca de 1% até cerca de 10%, preferencialmente cerca de 5%) como um álcool C1-C3 monohídrico, preferencialmente etanol, seguido por extracção com CO2 suplementado com uma quantidade elevada de um co-solvente polar (entre cerca de 10% até cerca de 30%, preferencialmente cerca de 23%) como um álcool C1-C3 monohídrico, preferencialmente etanol, ou vice-versa. Surpreendentemente, verificou-se que a utilização de uma pequena quantidade de solvente polar no C02, como veiculo, facilita a extracção dos componentes lipidicos neutros e da astaxantina, num único passo. A utilização de quantidades elevadas de solvente polar como veículo, no outro passo, facilita a extracção de fosfolípidos com ligação éter, assim como dos fosfolípidos sem ligação éter. A presente invenção é distinta dos produtos de óleo de krill anteriormente descritos, tais como os descritos na U.S. Pat. N°. 6 800 299 ou WO 03/011873 e óleo 27 ΡΕ2144618 de krill marca Neptune, por possuir níveis substancialmente mais elevados de fosfolípidos sem ligação éter, fosfolípidos com ligação éter e astaxantina. Os óleos de krill da presente invenção também possuem propriedades inesperadamente superiores, em comparação com os óleos de krill anteriormente disponibilizados. Em particular, o óleo de krill da presente invenção demosntrou reduzir os níveis de colesterol LDL no sangue, melhorar a transferência de DHA para o cérebro, assim como reduzir a acumulação de lipidos no fígado e músculo, enquanto que as composições de óleo de krill anteriormente descritas não possuem tais propriedades. Assim, em algumas realizações, a presente invenção proporciona uma composição de óleo de krill, preferencialmente uma composição de óleo do krill Euphausia superba, compreendendo desde cerca de 40% a cerca de 60% p/p de fosfolípidos, preferencialmente desde cerca de 45% a 55% p/p de fosfolípidos e desde cerca de 400 mg/kg de astaxantina a cerca de 2500 mg/kg de astaxantina, preferencialmente desde cerca de 1000 a cerca de 2200 mg/kg de astaxantina, mais preferencialmente desde cerca de 1500 a cerca de 2200 mg/kg de astaxantina. Em algumas realizações preferidas as composições compreendem mais de cerca de 1000, 1500, 1800, 1900, 2000 ou 2100 mg/kg de astaxantina. Em algumas realizações preferidas, as composições de óleo de krill da presente invenção compreendem desde cerca de 1%, 2%, 3% ou 4% até cerca de 8%, 10%, 12% ou 15% de fosfolípidos com ligação éter ou mais de cerca de 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% ou 10% de fosfolípidos com ligação éter. Em algumas realizações, os 28 ΡΕ2144618 fosfolípidos com ligação éter são, preferencialmente, alquilacilfosfatidilcolina, liso-alquilacilfosfatidilcolina, alquilacilfosfatidiletanolamina ou suas combinações. Em algumas realizações, as composições de óleo de krill compreendem desde cerca de 1%, 2%, 3% ou 4% até cerca de 8%, 10%, 12% ou 15% p/p de fosfolípidos com ligações éter e desde cerca de 30%, 33%, 40%, 42%, 45%, 48%, 50%, 52%, 54%, 55%, 56%, 58% até cerca de 60% de fosfolípidos sem ligação éter, de modo que a quantidade total de fosfolípidos (ambos os fosfolípidos, com ligação éter e sem ligação éter) se situe entre 40% e 60% do total de fosfolípidos, assim como os limites dos fosfolípidos com ligação éter e sem ligação éter, podem incluir outros valores não especificamente listados no intervalo.
Em outras realizações, a composição compreende desde cerca de 20% a 45% p/p de triglicéridos; e desde cerca de 400 a cerca de 2500 mg/kg de astaxantina. Em algumas realizações , as composições compreendem desde cerca de 20% a 35%, preferencialmente entre cerca de 25% a 35%, de ácidos gordos omega-3, como percentagem do total de ácidos gordos na composição, em que cerca de 70% a 95% ou, preferencialmente, entre cerca de 80% a 90% dos ácidos gordos omega-3 estão ligados aos fosfolípidos. Em algumas realizações, a presente invenção proporciona composições encapsuladas de óleo do krill Euphausia superba. Em algumas realizações, a presente invenção proporciona um método de fabrico de uma composição de óleo do krill Euphausia superba compreendendo o contacto de Euphausia superba com 29 ΡΕ2144618 um solvente polar, para proporcionar um extracto polar compreendendo fosfolípidos, o contacto de Euphausia superba com um solvente neutro para proporcionar um extracto neutro compreendendo triglicéridos e astaxantina e combinação do referido extracto polar e do referido extracto neutro para proporcionar os óleos do krill Euphausia superba descritos acima. Em algumas realizações, as fracções das extracções polar e não polar são combinadas para proporcionar um produto final desejado compreendendo os fosfolípidos com ligação éter, os fosfolípidos sem ligação éter, grupos omega-3 e astaxantina. Em outras realizações, a presente invenção proporciona métodos de fabrico de de um óleo do krill Euphausia superba (ou de outras espécies de krill), compreendendo o contacto de uma preparação de Euphausia superba, como a farinha de Euphausia superba, sob condições supercríticas, com CO2 contendo uma peguena guantidade de um solvente polar, como o etanol, para extrair os lípidos neutros e astaxantina; contacto da farinha restante do primeiro passo de extracção, sob condições supercríticas, com CO2 contendo uma quantidade elevada de um solvente polar, como o etanol, para extrair a fracção lipídica polar contendos os fosfolípidos com ligação éter e sem ligação áter; e depois mistura dos extractos lipídicos polar e neutro para proporcionar as composições descritas acima. 0 óleo de krill extraído pelos métodos da presente invenção comtém poucos produtos de degradação enzimática. Exemplos das composições de óleo de krill da presente invenção são proporcionados nas Tabelas 9-24. Em 30 ΡΕ2144618 algumas realizações a presente invenção proporciona um óleo polar de krill contendo pelo menos 65% (p/p) de fosfolipidos, em que os fosfolipidos são caracterizados por conterem pelo menos 35% de resíduos de ácidos gordos omega-3. A presente invenção não está limitada à presença de qualquer tipo particular de resíduos de ácido gordo omega-3 na composição do óleo de krill. Em algumas realizações preferidas as composições do óleo de krill comtêm, pelo menos cerca de 5%, 4%, 3% ou preferencialmente 2% de ácidos gordos livres, com base em peso/peso (p/p). Em algumas realizações as composições de óleo de krill contêm menos de cerca de 25%, 20%, 15%, 10% ou 5% de triglicéridos (p/p) . Em algumas realizações, as composições do óleo de krill comtêm mais de cerca de 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60% ou 65% de fosfatidil colina (p/p)· Em algumas realizações as composições do óleo de krill comtêm mais de 100, 200, 300, 400 ou 500 mg/kg de esteres de astaxantina e até cerca de 700 mg/kg de esteres de astaxantina. Em algumas realizações a presente invenção proporciona composições de óleo de krill contendo pelo menos 500, 1000, 1500, 2000, 2100 ou 2200 mg/kg de esteres de astaxantina e pelo menos 36% (p/p) de ácidos gordos omega-3. Em algumas realizações, as composições do óleo de krill da presente invenção comtêm menos de cerca de 1, Og/lOOg, 0,5g/100g , 0,2g/100g ou 0,lg/100g de colesterol total. Em algumas realizações, as composições do óleo de krill da presente invenção comtêm menos do que cerca de 0,45. a presente invenção
Em algumas realizações, 31 ΡΕ2144618 proporciona um extracto neutro de óleo de krill contendo mais de 70%, 75%, 80%, 85% ou 90% de triglicéridos. Em algumas realizações, as composições do óleo de krill entre cerca de 50 a cerca de 2500 mg/kg de esteres de astaxantina. Em algumas realizações, as composições do óleo de krill contêm desde cerca de 50, 100, 200 ou 500 até cerca de 750, 1000, 1500 ou 2500 mg/kg de esteres de astaxantina. Em algumas realizações, as composições comtêm desde cerca de 1% a cerca de 30% de resíduos de ácido gordo omega-3 e preferencialmente desde cerca de 5%-15% de de resíduos de ácido gordo omega-3. Em algumas realizações as composições do óleo de krill contêm menos de 20%, 15%, 10% ou 5% de fosfolípidos.
Em algumas realizações a presente invenção proporciona óleo de krill contendo menos de cerca de 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5 ou 1 microgramas /quilograma (p/p) de esteres de astaxantina. Em algumas realizações, o óleo de krill é transparente ou possui apenas uma cor levemente avermelhada. Em algumas realizações, o óleo de krill com baixo teor de astaxantina é obtido por extracção de um material de krill, como o óleo de krill, por extracção com fluido supercrítico, com dióxido de carbono puro. Está contemplado que este passo remove a astaxantina do material de krill. Em algumas realizações, o material de krill é depois sujeito a extracção com fluido supercrítico, com dióxido de carbono e um veículo polar, como o etanol, preferencialmente 20% de etanol. O óleo extraído durante este passo é caracteizado por conter um baixo teor de 32 ΡΕ2144618 astaxantina. Em outras realizações, o óleo de krill contendo astaxantina é extraído em contracorrente com fluido supercrítico, com dióxido de carbono puro, para proporcionar um óleo de krill com baixo teor de astaxantina.
Em algumas realizações a presente invenção proporciona óleo de krill que é substancialmente inodoro. Substancialmente inodoro pretende significar que o óleo de krill não tem um odor apreciável, como determinado por um painel de avaliação. Em algumas realizações, o óleo de krill substancialmente inodoro contém menos de cerca de 10, 5 ou 1 miligramas/quilograma de trimetilamina. Em algumas realizações preferidas, o óleo inodoro de krill é produzido sujeitando primeiro o material de krill a extracção com fluido supercrítico com dióxido de carbomo puro, para remover os compostos que causam o odor, como a trimetilamina, seguido por extracção com dióxido de carbono com um veículo polar como o etanol.
Em algumas realizações, a presente invenção proporciona uma farinha de krill deslipidifiçada, produzida após estracção dos lípidos a partir da farinha de krill. Em algumas realizações, a farinha de krill deslipidifiçada contém a proteína do krill. Em algumas realizações a farinha de krill deslipidifiçada contém menos de cerca de 200, 150, 120, 100, 75, 65, 60, 55 ou 50 g/kg de gordura total. Em algumas realizações a farinha de krill deslipidifiçada contémdesde cerca de 1 a cerca de 100 mg/kg 33 ΡΕ2144618 de esteres de astaxantina e preferencialmente desde cerca de 5 a cerca de 20 mg/kg de esteres de astaxantina. Em algumas realizações a farinha de krill deslipidifiçada contém mais de 60%, 65%, 70% ou 75% de proteína de krill. Em algumas realizações a presente invenção proporciona alimentação animal compreendendo a farinha de krill deslipidifiçada. Em algumas realizações a alimentação animal é alimentação para peixes ou alimentação para organismos aquáticos, tal como alimentação para camarões, alimentação para caranguejos ou alimentação para caranguejo de rio. Nas realizações preferidas a farinha de krill é incorporada na ração completa para o organismo em questão. Nas realizações preferidas a alimentação é proporcionada sob a forma de granulado. Em muitos casos, os compostos como a astaxantina, são removidos durante a deslipidificação. Os métodos da presente invenção proporcionam uma farinha de kril deslipidifiçada que retém quantidades significativas de astaxantina. Assim, em algumas realizações, a presente invenção proporciona métodos para alimentação de organismos aquáticos, proporcionando ao organismo aquático uma alimentação compreendendo a farinha de krill deslipidifiçada descrita acima. Em outras realizações, a presente invenção proporciona métodos para aumento da coloração da carne de espécies aquáticas, compreendendo a alimentação das espécies aquáticas com uma alimentação compreendendo a farinha de krill deslipidifiçada descrita acima. B. Composições contendo óleo de krill 34 ΡΕ2144618
Em algumas realizações, as composições desta invenção (tais como as descritas nas secções anteriores), estão contidas em excipientes e/ou veículos aceitáveis para consumo oral. A forma final do veículo e, assim, da própria composição, não é crítica. 0 veículo pode ser um líquido, gel, cápsula de gel, cápsula, pó, comprimido sólido (revestido ou não revestido), chá ou outro do mesmo tipo. A composição tem, preferencialmente, a forma de um comprimido ou cápsula e mais preferencialmente, a forma de uma cápsula de gelatina mole. Excipientes e/ou veículos adequados incluem maltodextrina, carbonato de cálcio, fosfato dicálcico fosfato tricálcico, celulose microcristalina, dextrose, farinha de arroz, estearato de magnésio, ácido esteárico croscarmelose sódica, amido glicolato de sódio, crospovidona, sacarose, gomas vegetais, lactose, metil-celulose, povidona, carboximetilcelulose, amido de milho e outros do mesmo tipo (incluindo misturas destes). Veículos preferidos incluem carbonato de cálcio, estearato de magnésio, maltodextrina e suas misturas. Os diversos ingredientes e o excipiente e/ou veículo são misturados e moldados na forma desejada, utilizando técnicas convencionais. 0 comprimido ou cápsula da presente invenção pode ser coberto com um revestimento entérico que se dissolva a um pH de cerca de 6,0 a 7,0. Um revestimento entérico adequado, que se dissolve no intestino delgado, mas não no estômago é o ftalato de acetato de celulose. Outros detalhes sobre as técnicas de formulação e administração podem ser encontrados na última edição de Remington's Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing Co., Easton, PA). 35 ΡΕ2144618 0 suplemento dietético pode incluir um ou mais ingredientes inertes, especialmente se for desejável limitar o número de calorias adicionado à dieta, pelo suplemento alimentar. Por exemplo, o suplemento dietético da presente invenção pode também conter ingredientes opcionais, incluindo, por exemplo, ervas, vitaminas, minerais, melhoradores, corantes, edulcurantes, aromatizantes, ingredientes inertes e outros do mesmo tipo. Por exemplo, o suplemento dietético da presente invenção pode conter um ou mais dos seguintes: ascorbatos (ácido ascórbico, sais minerais de ascorbato, fruto da roseira, acerola e outros do mesmo tipo), dehidroepiandrosterona (DHEA), Fo-Ti ou Ho Shu Wu (ervas tradicionais em tratamentos asiáticos), unha-de-gato (antigo ingrediente herbal), chá verde (poli-fenóis), inositol, algas, "dulse" (Palmaria palmata), bioflacinóides, maltodextrinas, urtiga, niacina, niacinamida, rosmaninho, selénio, sílica (dóxido de silício, sílica gel, cavalinha, "shavegrass" (Equisetum arvense) e outros do mesmo tipo). Tais ingredientes naturais podem ser de ocorrência natural ou formas concentradas.
Em algumas realizações, o suplemento dietético compreende também vitaminas e minerais, incluindo, mas não se limitando a, fosfato ou acetato de cálcio tribásico; fosfato de potássio, dibásico; sulfato ou óxido de magnésio; sal (cloreto de sódio); cloreto ou acetato de potássio; ácido ascórbico, ortofosfato férrico, niacinamida; 36 ΡΕ2144618 sulfato ou óxido de zinco; pantotenato de cálcio; gluconato de cobre; riboflavina; beta-caroteno; cloridrato de piridoxina; mononitrato de tiamina; ácido fólico; biotina; cloreto ou picolonato de crómio; iodeto de potássio; sele-nato de sódio; molibdato de sódio; filoquinona; vitamina D3; cianocobalamina; seleneto de sódio; sulfato de cobre; vitamina A; citamina C; inositol; iodeto de potássio. As dosagens adequadas para as vitaminas e minerais podem ser obtidas, por exemplo, por consulta das directinas U.S. RDA.
Noutras realizações, as composições incluem pelo menos um aromatizante alimentar, tal como acetaldeido (etanal), acetoina (metilcarbinol de acetilo), anetole (anisole parapropenilico), benzaldeído (aldeído benzóico), ácido N butírico (ácido butanóico), d ou 1 carvona (carvol), cinamaldeído (aldeído cinâmico), citral (2,6 dimetiloctadieno 2,6 al 8, geranial, neral), decanal (aldeído N decílico, capraldeído, aldeído cáprico, aldeído caprinálico, CIO aldeído), acetato de etilo, butirato de etilo, ester etílico do ácido 3 metil 3 fenil glicínico (etil metil fenilglicidato, aldeído de strawberry, C16 aldeído), vanilina etílica, geraniol (3,7 dimetil 2,6 e 3,6 octadien 1 ol), acetato de geranilo (acetato de geraniol), limoneno (d, 1 e dl), linalool (linalol, 3,7 dimetil 1,6 octadien 3 ol), acetato de linalilo (bergamol), antranilato de metilo (metil 2 aminobenzoato) , piperonal (3,4 metilenedioxi benzaldeído, heliotropina), vanilina, alfalfa (medicago sativa L.), pimenta da Jamaica (Pimenta offi-cinalis) semente de ambarete (Hibiscus abelmoschus), 37 ΡΕ2144618 angélica (Angélica archangelica) , angostura (Galipea off i-cinalis), anis (Pimpinella anisum), anis estrelado (Illicum verum), erva-cidreira (Melissa officinalis), mangerico (Ocimum basilicum), louro (Laurus nobilis), calêndula (Calendula officinalis), (Anthemis nobilis), pimenta (Capsicum frutescens), caraway (Carum carvi) , cardamono (Elettaria cardamomum), cássia (Cinnamomum cassia) , pimenta de caiena (Capsicum frutescens), semente de aipo (Apium graveolens), cerefólio (Anthriscus cerefolium), cebolinho (Allium schoenoprasum), coriander (Coriandrum sativum), cuminho (Cuminum cyminum), flor de sabugueiro (Sanbucus canadensis), funcho (Foeniculum vulgare) , feno grego (Tri-gonella foenum graecum), gengibre (Zingiber officinale), marroio (Marrubium vulgare), rábano (Armoracia lapathi-folia), hissopo (Hyssopus officinalis) , lavanda (Lavandula officinalis), macis (Myristica fragrans), marjoram (Majorana hortensis), mostarda (Brassica nigra, Brassica juncea, Brassica hirta), noz moscada (Myristica fragrans), paprica (Capsicum annuum), pimenta preta (Piper nigrum), hortelã (Mentha piperita) semente de papoila (Papayer somniferum), rosmaninho (Rosmarinus officinalis), açafrão (Crocus sativus), sálvia (Salvia officinalis) segurelha (Satureia hortensis, Satureia Montana) sésamo (Sesamumm indicum), hortelã-pimenta (Menta spicata), estragão (Artemísia dracunculus), timo (Thymus vulgaris, Thymus serpyl-lum), curcuma (Curcuma longa), baunilha (Vanila plani-filia), zedoária (Curcuma zedoaria), sacarose, glucose, sacarina, sorbitol, manitol, aspartame. Outros aromati-zantes adequados são revelados em referências tais como 38 ΡΕ2144618
Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Edição, Mack Publishing, p. 1288-1300 (1990) e Fúria e Pellanca, Fenaroli's Handbook of Flavor Ingredients, The Chemical Rubber Company, Cleveland, Ohio (1971), conhecidas pelos técnicos da matéria.
Noutras realizações, as composições compreendem pelo menos um corante alimentar sintético ou natural (e.g., extrato de anato, astaxantina, pó de beet, azul ultramarino, cantaxantina, caramelo, carotenal, beta caroteno, carmim, farinha tostada de semente de algodão, gluconato ferroso, lactato ferroso, extracto colorido de uva, extracto de pele de uva, óxido de ferro, sumo de fruta, sumo vegetal, farinha de algas secas, farinha de cravo-túnico, óleo de cenoura, óleo de endosperma de milho, paprica, oleoresina de paprica, riboflavina, açafrão, curcuma, curcuma e oleoresina).
Ainda noutras realizações, as composições incluem pelo menos um fitonutriente (e.g., isoflavonóides de soja, proantcianidinas oligoméricas, indol 3 carbinol, sulfora-fona, ligandos fibrosos, fitoesteróis de plantas, ácido ferúlico, antocianocidos, triterpenos, ácidos gordos omega 3/6, ácidos gordos conjugados, tais como o ácido linoleico conjugado e o ácido linolénico conjugado, poliacetileno, quinonas, terpenos, catequinas, gaiatos e quercetina). As origens dos fitonutrientes vetetais incluem, mas não se limitam a, lecitina de soja, isoflavonas de soja, germe de arroz castanho, geleia real, própolis de abelha, sumo de 39 ΡΕ2144618 bagas de acerola, em pó, chá verde japonês, extracto de sementes de uva, extracto de pele de uva, sumo de cenoura, mirtilo, farinha de linhaça, polén de abelha, ginkgo biloba, prímula (óleo de prímula verpertina), trevo vermelho, raiz de bardana, dente-de-leão, salsa, frutos de roseira, cardo mariano, ginja, ginseng siberiano, rosmaninho, curcumina, alho, lycopene, extracto de semente de uva, espinafre e bróculo.
Ainda noutras realizações, as composições incluem pelo menos uma vitamina (e.g., vitamina A, tiamina (Bl), riboflavina (B2), piridoxina (B6), cianocobalamina (B12), biotina, ácido ascórbico (vitamina C) , ácido retinóico (vitamina D) , vitamina E, ácido fólico e outros folatos, vitamina K, niacina e ácido pantoténico). Em algumas realizações, as partículas incluem pelo menos um mineral (e.g., sódio, potássio, magnésio, cálcio, fósforo, cloro, ferro, zinco, manganês, flúor, cobre, milibdénio, crómio, selénio e iodo). Em algumas rwalizações particularmente preferidas, uma dosagem de uma pluralidade de partículas incluindo vitaminas ou minerais no intervalo das doses diárias recomendadas (RDA), como especificado pelo United States Department of Agriculture. Ainda noutras realizações, as partículas incluem um amino ácido suplementar à formula, em que é incluído pelo menos um amino ácido (e.g., 1-carnitina ou triptofano). C. Utilizações do óleo de krill
Anteriormente foi revelado que os ácidos gordos 40 ΡΕ2144618 omega-3 possuem propriedades anti-inflamatórias. Ver, e.g., Calder, Am. J. Clin. Nutr., 83 (2006) 1505S. Adicionalmente, foi revelado que uma emulsão fosfolipidica derivada de origem marinha e/ou sintética, contendo ácidos gordos poli-insaturados tem efeitos anti-inflamatórios e/ou imunosupressivos. Ver, e.g., 5 434 183. Uma realização desta invenção é uma composição de óleo de krill eficaz para redução da inflamação, i.e., redução dos niveis de TNF-α, IL-1 beta, IL-6, IL-10, TGF beta e fibrinogénio, no sangue. A diabetes de tipo 2 é um distúrbio metabólico caracterizado pelo comprometimento do controlo glicémico (niveis elevados de glucose no sangue). Na diabetes de tipo 2 é a grande resistência dos tecidos à insulina que contribui para o desenvolvimento da doença. As estratégias para redução da resistência à insulina ou melhoramento da sensibilidade dos tecidos à insulina, são reconhecidas como benéficas na prevenção da diabetes de tipo 2. Em seres humanos saudáveis, um suplemento, durante 3 semanas, com óleo de peixe (1,1 g de EPA/d e 0,7 g de DHA/d) diminuíram a resposta da insulina a uma carga oral de glucose em 40%. Um enriquecimento dietético em PUFA omega-3 resultou na diminuição da oxidação da glucose, aumento da oxidação da gordura e aumento da armazenagem de glicogénio; contudo, a resposta glicémica não se alterou, o que indica uma melhoria da sensibilidade à insulina. Outra realização desta invenção é uma composição de óleo de krill eficaz para redução da resistência à insulina. 41 ΡΕ2144618 Não foi revelado o óleo de krill como sendo eficaz no tratamento de um dos mais importantes problemas do estilo de vida das sociedades modernas, i.e., ganho excessivo de peso e obesidade. 0 excesso de massa de tecido adiposo (peso excessivo e obesidade) está associado com inflamação de baixo grau no tecido adiposo e, no total do corpo, reflete os mediadores inflamatórios "spilling over" a partir do tecido adiposo. Trayhurn et al., Br. J. Nutrition (2004), 92(3), 347-355. A inflamação parece ser uma ligação importante entre a obesidade e o síndroma metabólico/diabetes de tipo II, assim como com doença cardiovascular. Libby et al., J. Amer. Coll. Card. (2006), 48 (9, Supl. A), A33-A46. Assim, o excesso de tecido adiposo é uma condição pouco saudável. A redução de peso melhorará a condição inflamatória, mas é difícil conseguir-se uma redução de peso persistente. Um suplemento de ácido gordo omega-3 pode aliviar a condição inflamatória no tecido adiposo e, assim, complementar idealmente as principais estratégias de redução de peso, i.e., dieta com poucas calorias e exercício. Existem estudis clínicos com seres humanos que demonstram que o omega-3 melhora o efeito de uma dieta com muito poucas calorias e exercício, na redução da massa de gordura corporal. Kunesova et al., Physiological research/Academia Scientiarium Bohemoslovaca (2006), 55(1), 63-72. Apesar de um regime de dieta e exercício poder falhar no resultado consistente de diminuição do peso a longo prazo, o efeito dos ácidos 42 ΡΕ2144618 gordos omega-3 no alívio da condição inflamatória no tecido adiposo, pode persistir, gerando uma condição que pode ser descrita como "tecido adiposo saudável". Nteriormente foi demonstrado que os ácidos gordos omega-3 dietéticos podem ser utilizados para reduzir a inflamação no tecido adiposo, sem influenciar o nível de obesidade. Todoric et al., Diabetologia (2006), 49(9), 2109-2119. A redução da inflamação nos tecidos adiposos foi demonstrada por um aumento dos níveis de adiponectina circulante. A adiponectina é uma hormona anti-inflamatória derivada do tecido adiposo. Os resultados de tratamentos de pessoas obesas com ácidos gordos omega-3, para alívio dos níveis circulatórios de marcadores inflamatórios são inconclusivos. Trebble et al., Br. J. Nutrition (2003), 90(2), 405-412. Contudo, a duração desses estudos pode não ter sido suficiente, dada a lenta reabsorção do tecido adiposo nos seres humanos. Itoh et al. verificaram que 1,8 g/d de EPA aumentou a adiponectina, um marcador derivado de inflamação do tecido adiposo, num grupo de sujeitos com excesso de peso e síndroma metabólico. Itoh et al., Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology (2007), 27(9), 1918-1925.
Uma realização da invenção é a utilização do óleo de krill para aumentar os níveis de adiponectina. A adiponectina é uma proteína hormonal que modula diversos processos metabólicos, incluindo a regulação da glucose e o catabolismo dos ácidos gordos. A adiponectina é exclu- 43 ΡΕ2144618 sivamente secretada, a partir do tecido adiposo, para a corrente sanguínea e é muito abundante no plasma, em relação a muitas hormonas. Os níveis da hormona são inversamente correlacionados com o índice de massa corporal (BMI) . A hormona tem um papel no alívio da desregulação metabólica que pode resultar em diabetes de tipo 2, obesidade, aterosclerose e doença do fígado não alcoólico gordo (NAFLD). Díez et al., Eur. J. Endocrinol., 148 (3):293-300; Ukkola et al., J. Mol. Med. 80 (11):686-702.
Outra realização da invenção é a utilização de óleo de krill em sujeitos com excesso de peso e obesos para alívio da disfunção do tecido adiposo induzida pela dieta e de alterações induzidas no metabolismo dos lípidos pela dieta.
Noutras realizações, o óleo de krill é eficaz na redução dos factores de risco da diabetes de tipo 2, como a hiperinsulinémia e resistência à insulina e factores de risco de doença cardiovascular em sujeitos com excesso de peso. Adicionalmente, esta invenção revela que o óleo de krill é eficaz na prevenção da acumulação de gordura nos músculos e no fígado (esteatose do fígado). É bem sabido pelos técnicos da matéria, que o rato Zucker obeso é um modelo de rato útil para estudo do Síndroma X metabólico e diabetes mellitus não dependente da insulina, incluindo tolerância à glucose, resistência à 44 ΡΕ2144618 insulina e hiper insulinémia. Também foi anteriormente demonstrado que a astaxantina é um poderoso antioxidante, útil na prevenção de esforço oxidante in vivo e em ratos Zucker, utilizando Vitamina E. Ver, e.g., Aoi et al. (2003). Antioxidants & Redox Signaling. 5(1) :139 — 44; Laight et al. , Eur. J. Pharmacol. 377 (1999) 89.
Ainda outra realização da invenção é uma composição do óleo de krill eficaz no melhoramento de perfil de lipidos no sangue por aumento dos niveis do colesterol HDL, diminuindo os niveis do colesterol LDL e dos triglicéridos. Assim, a nova composição do óleo de krill é eficaz para tratamento do sindroma metabólico. O sindroma metabólico é definido como a coexistência de 3 ou mais componentes seleccionados do grupo: obesidade abdominal, niveis elevados de triglicéridos no sangue, niveis baixos de HDL, pressão sanguínea elevada e níveis elevados de glucose no plasma, em jejum.
Noutra realização desta invenção, verificou-se que as composições do óleo de krill são eficazes e seguras para o tratamento do sindroma metabólico em seres humanos.
Ainda noutras realizações, as composições do óleo de krill da presente invenção têm utilidade no aumento ou na indução de diurese. Em algumas realizações, as composições do óleo de krill da presente invenção têm utilidade na diminuição do catabolismo das proteínas e no aumento da massa muscular de um sujeito. 45 ΡΕ2144618
Em algumas realizações, a composição do óleo de krill da presente invenção tem utilidade no tratamento e doença de coração com gordura doença do fígado não alcoólico com gordura. Assim, as composições do óleo de krill são úteis para diminuição do teor de lípidos no coração e/ou fígado e/ou músculo, num sujeito.
Ainda outra realização da invenção é um método para aumentar a transferência de DHA para o cérebro. EXEMPLO 1
Capturou-se krill do Antártico (Euphausia superba) que se embarcou-se vivo, antes de ser processado em farinha de krill, um óleo (óleo asta) e granulado. A composição e propriedades da farinha de krill foram monitorizadas durante o processamento e comparadas com um produto comercial da concorrência (Tabela 1 e 2). Adicionalmente, determinou-se a composição em amino ácidos da farinha de krill e do granulado (Tabela 3), mostrando que a farinha de krill proporciona alimentação adequada para utilização em aquacultura, devido à presença de todos os amino ácidos essenciais necessários aos peixes teleósteos. Durante o processamento da farinha de krill recupera-se um óleo neutro (óleo asta), sendo a composição química do óleo asta mostrada nas Tabelas 4 e 5. 46 ΡΕ2144618
Tabela 1. Composição dos produtos a partir da linha de processamento
Krill congelado completo Após decantação Após secagem Kbnstruktor Kosbkin (navio Ucraniano) Proteína 13,5 g/100 g 20,9 g/100 g 58,5 g/100 g 60,2 g/100 g Humidade 76,3 g/100 g 65,6 g/100 g 9,1 g/100 g 9,6 g/100 g Lípido (Folch) 8,6 g/100 g 10 g/100 g 21,8 g/100 g 21,4 g/100 g Ácido gordo livre 29,8 g/100 g 25,3 g/100 g 24,8 g/100 g 23,3 g/100 g Astaxantina total 53,3 mg/kg 81,3 mg/kg 145 mg/kg 126 mg/kg
Tabela 2. Composição lipidica por classes nos produtos a partir da linha de processamento
Proteína bruta Krill conge- Após decanta- Após Konstruktor Kosbkin lado ccmpleto ção (g/100 g) secagem (navio Ucraniano) (g/100 g) (g/100 g) (g/100 g) Ester ceroso/ester de 2,5 3,0 1,9 3,3 colesterol Triglicéridos/pigmentos 30,2 33,7 29,3 32,2 Ácidos gordos livres 15,1 2,5 9,0 5,9 Monoglicéridos 3,9 Nd 1,3 Nd PE 6,6 10,4 7,9 6,3 PS 1,2 1,6 1,4 2,7 PI 1,9 2,0 2,1 3,5 PC 28 35,9 32,0 32,1 Esfingcmielina/liso PC 2,0 0,5 3,0 3,0 Nd = nao detectado - 47 - ΡΕ2144618
Tabela 3. Amino ácidos ne farinha de krill e no granulado.
Amino ácido Total na farinha Livre na farinha Livre no granulado (g/100 g de proteína) (g/100 g de proteína) (g/100 g de proteína) Ácido aspártico 10,5 0,02 0,22 Ácido glutâmico 13,5 0,007 0,51 Hidroxiprolina <0,5 <0,001 <0,05 Serina 4,2 0,02 0,13 Glicina 4,4 0,18 3,28 Histidina 2,1 <0,01 <0,05 Arginina 6,7 0,56 4,86 Treonina 4,1 <0,01 0,22 Alanina 5,4 0,08 0,87 Prolina 3,8 0,53 2,32 Tirosina 4,0 0,01 0,2 Valina 5,0 0,02 0,13 Metionina 2,9 <0,01 0,12 Isoleucina 5,0 0,02 0,1 Leucina 7,8 0,14 0,19 Fenilalanina 4,4 0,01 0,1 Lisina 7,8 0,02 0,27 Cisteina/Cistina 1,4 <0,01 <0,05 Triptofano 1,1 <0,02 <0,05 Creatinina <0,01 <0,05 Asparagina <0,01 0,05 Glutamina <0,01 <0,05 Ácido 3-aminopropanóico 0,5 8,99 Taurina 0,5 8,52 Ácido 4-aminobutanóico <0,01 <0,05 Citrulina 0,04 0,14 Camosina <0,01 <0,05 Anserina <0,01 <0,05 Qrnitina 0,02 1,04 0 ácido 3-aminopropanóico também é conhecido como β-alanina 0 ácido 4-aminobutanóico também é conhecido como ácido γ-aminobutirico ou GABA. 48 ΡΕ2144618
Tabela 4. Composição e parâmetros de qualidade do óleo asta
Humidade 0,14 g/100 g Impurezas insolúveis 0,02 g/100 g Matéria insaponificável 1,5 g/100 g Azoto 0,5 g/100 g Ácidos gordos livres 0,3 g/100 g Valor de peróxido < 2 meq peróxido/kg de óleo Valor de ansidina < 1 Fosforoso 23 mg/kg Fosfolipidos 575 mg/kg Astaxantina 1245 mg/kg
Tabela 5. Composição de ácidos gordos no áleo asta Ácido gordo Óleo asta Ficheiro o u 0,00 C6:0 0,00 o 00 u 0,00 CIO: 0 0,00 C12:0 0,00 C14:0 17,5 C14:1 0,00 C15:0 0,00 C16:0 19,3 C16:1 9, 7 C18:0 1,2 C18:1 22,6 C18:2N6 1,4 C18:3N6 0,1 ΡΕ2144618 49 (continuação Ácido gordo Ficheiro Óleo asta C18:3N3 0, 7 C18:4N3 3,0 C20:0 0,1 C20:1 1,3 C20:2N6 <0, 1 C20:3N6 0,1 C20:4N6 0,1 C20:3N3 <0,1 C20:4N3 0,2 C20:5N3 (EPA) 5,6 C22 :0 0,1 C22:1 0,3 C22:2N6 0,0 C22:4N6 <0, 1 C22:5N6 0,00 C22:5N3 0,2 C22:6N3 (DHA) 2,00 C24 :1 0,03 Total 88,4 Saturado 38,0 Monoinsaturado 33,9 Poli-insaturado 16,4 Total 88,4 Omega-3 11,9 Omega-6 1,6 ΡΕ2144618 50 EXEMPLO 2
Extraiu-se com etanol a farinha de krill obtida no exemplo 1, de acor5do com o método revelado na JP02215351. Os resultados mostraram que puderam ser extraídos cerca de 22% de gordura da farinha, algo menos do extraído utilizando Folch (25%). A Tabela 6 mostra a composição de ácidos gordos da farinha de krill e do óleo de krill extraído da farinha utilizando etanol. A Tabela 7 mostra a composição e propriedades da farinha de krill e produtos, antes e depois da extracção, enquanto que a Tabela 8 mostra a composição lipídica.
Tabela 6. Distribuição de ácidos gordos na farinha de krill (g/100 g de lípido) e no óleo de krill extraído com etanol Ácido gordo Ficheiro C4:0 C6:0 C8:0 CIO: 0 C12:0 C14:0 C14:1 C15:0 C16:0 C16:1 C18:0 C18:1 C18:2N6
Farinha de krill 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 7,8 0,00 0,00 15, 8 5.1 0,9 13,41.1
OK EtOH 6, 4 14, 7 4.2 0, 7 11,81.2 ΡΕ2144618 51 Ácido gordo Ficheiro C18:3N6 C18:3N3 C18:4N3 C20:0 C20:1 C20:2N6 C20:3N6 C20:4N6 C20:3N3 C20:4N3 C20:5N3 (EPA) C22:0 C22:1 C22:2N6 C22:4N6 C22:5N6 C22:5N3 C22:6N3 (DHA) C24 :1 Saturado Monoinsaturado Poli-insaturado Total Omega-3 Omega-6 (continuação) Farinha de krill 0,1 0,4 1,1 0,1 0,8 <0, 1 0,1 0,2 <0, 1 0,2 10.5 <0,1 0,5 <0, 1 <0, 1 0,00 0,2 5, 4 0,03 24.6 19, 9 21,0 65,5 18,2 1,3
OK EtOH 0,1 0,4 0,1 0,1 0,6 <0, 1 <0, 1 0,2 <0, 1 0,2 10, 4 <0,1 0,4 <0, 1 4,8 21,9 17,0 19,4 58,2 17, 0 52 ΡΕ2144618
Tabela 7. Composição e propriedades da farinhade krill e produtos, após extracção
Farinha de krill Farinha de krill deslipidifiçada Óleo de krill extraído com EtOH Proteína bruta 586 g/kg 735 g/kg Gordura (Folch) 250 g/kg 30 g/kg Humidade/etanol 71 g/kg 134 g/kg 85 g/kg Esteres de astaxantina 144 mg/kg 10 mg/kg 117 mg/kg Diesteres 110 mg/kg 8,5 mg/kg 117 mg/kg Monoesteres 33 mg/kg 1,8 mg/kg 37 mg/kg Proteína biologicamente digestível 854 g/kg de proteína 870 g/kg de proteína índice de fluidez 4,8 1,9 NH3 9 mg N/100 g 0 3 mg N/100 g TMA 2 mg N/100 g 0 70 mg N/100 g TMAO 125 mg N/100 g 0 456 mg N/100 g
Tabela 8. Distribuição de lípidos por classes
Farinha de krill Farinha de krill Óleo de krill deslipidifiçada extraído com EtOH Ester de colesterol 3,5 TG 32,7 37,4 31,1 FFA 7,8 14,1 16,0 Colesterol 9,1 8,0 12,6 DG 1,1 3,3 MG 3,7 Esfingolípido 2,8 PE 6,5 2,5 2,7 Cardiolipina 4,2 PI 1,1 11,0 PS 1,4 53 ΡΕ2144618 (continuação)
Farinha de krill Farinha de krill Óleo de krill deslipidifiçada extraído com EtOH PC 28,6 20,2 25,3 LPC 2,9 2,6 6,2 Total de lipidos polares 40,6 40,5 36,9 Total de lipidos neutros 54,2 59,5 63,1 EXEMPLO 3
Submeteu-se depois a farinha de krill obtida no exemplo 1 a um método de extracção em duas fases, com fluido supercritico. Durante a fase 1 removeu-se 12,1% de gordura (óleo de krill neutro), utilizando apenas CO2 puro, apenas a 300 bar, 60°C e durante 30 minutos. Na fase 2 aumentou-se a pressão para 400 bar e adicionou-se 20% de etanol (v/v) durante 90 minutos. Isto resultou na extracção de mais 9% de goordura polar, sendo daqui em diante chamado óleo de krill polar. A composição total de ácidos gordos do éleo de krill polar, do óleo de krill neutro e de um produto comercial obtido à Neptune Biotech (Lavai, Quebec, Canadá), estão listadas na Tabela 9. Adicionalmente, também são mostradas a composição dos ácidos gordos para os fosfo-lípidos (Tabela 10), lipidos neutros (Tabela 11), ácidos gordos livres, diglicéridos (Tabela 12), triglicéridos, liso.fosfatidilcolina (LPC) (Tabela 13), fosfatidilcolina (PC), fosfatidiletanolamina (PE) (Tabela 14), fosfatidili-nositol (PI) e fosfatidilserina (PS) (Tabela 15). A Tabela 54 ΡΕ2144618 16 mostra os níveis de astaxantina e colesteral para as diversas fracções.
Tabela 9. Composições dos totais de ácidos gordos dos produtos de óleo de krill (% (p/p))
Total de ácidos gordos Ácido gordo OK Neutro OK Polar OK N Ficheiro o u 0,00 0,00 0, 00 C6:0 0,00 0,00 0, 00 o 00 u 0,00 0,00 0, 00 CIO: 0 0,00 0,00 0, 00 C12:0 0,47 0,04 0,24 C14:0 22,08 3,28 12,48 C14:1 0,33 0,01 0, 17 C15:0 0,58 0,36 0,52 C16:0 27, 03 29,25 23,25 C16:1 0,07 0,01 8, 44 C18:0 1, 72 1,03 1, 42 C18:1 30,29 13,57 18,92 C18:2N6 2,10 1, 96 1, 71 C18:3N6 0,30 0,21 0, 00 C18:3N3 0,69 1, 02 1,32 C18:4N3 0,05 0,81 3,50 C20:0 0,06 0,00 0, 05 C20:1 1,87 0,81 1, 16 C20:2N6 0, 05 0, 05 0, 05 C20:3N6 0,22 0, 73 0, 04 55 ΡΕ2144618 (continuação)
Total de ácidos gordos Ácido gordo OK Neutro OK Polar OK N Ficheiro C20:4N6 0,00 0,00 0, 49 C20:3N3 0,09 0,09 0, 06 C20:4N3 0,24 0,51 0,33 C20:5N3 (EPA) 7,33 29,88 16,27 C22 :0 0,01 0,06 0, 05 C22:1 0,64 1, 78 0, 82 C22:2N6 0,00 0,00 0, 00 C22:4N6 0,00 0,00 0, 07 C22:5N6 0,00 0,03 0, 00 C22:5N3 0,21 0,67 0,36 C22:6N3 (DHA) 3,51 12,61 8, 17 C24 :0 0, 05 0,00 0, 01 C24 :1 0,03 0,25 0, 11 Total 100,00 100,00 100,00 Saturado 52,00 34, 01 38,01 Monoinsaturado 33,22 16, 43 29,61 Poli-insaturado 14, 77 49,56 32,37 Total 100,00 100,00 100,00 Omega-3 12, 11 46,58 30,02 Omega-6 2,67 2,98 2,35 56 ΡΕ2144618
Tabela 10. Composição de ácidos gordos da fracçao fosfolipidica (% (p/p))
Total de fosfolipidos Ácido gordo OK Neutro OK Polar OK N Ficheiro o u 0,00 0,00 0, 00 o <£> α 0,00 0,00 0, 00 o 00 α 0,00 0,00 0, 00 CIO: 0 0,00 0,00 0, 00 C12:0 0,00 0,00 0, 00 C14 :0 0,01 0,00 0, 00 C14 :1 0,42 0,01 0, 01 C15:0 2,52 0,00 0, 00 C16:0 4, 73 35, 78 32,81 C16:1 0,19 0,17 0, 19 C18:0 6,31 1, 18 1,55 C18:1 38,40 15,58 13,54 C18:2N6 4, 18 2,16 1, 90 C18:3N6 0,18 0,22 0, 19 C18:3N3 1,02 1, 05 1, 48 C18:4N3 3,08 1,62 2, 15 C20:0 0,27 0,00 0, 07 C20:1 2,55 1, 02 0, 78 C20:2N6 0,19 0,06 0, 06 C20:3N6 0,00 0, 14 0, 10 C20:4N6 0,57 0,62 0, 64 C20:3N3 0,43 0,08 0, 09 C20:4N3 0,17 0, 45 0, 42 57 ΡΕ2144618 (continuação)
Total de fosfolipidos Ácido gordo OK Neutro OK Polar OK N Ficheiro C20:5N3 (EPA) 20,58 25,53 26,47 C22:0 0, 14 0,06 0, 00 C22:1 0,00 2,09 1, 94 C22:2N6 0,25 0, 71 0, 85 C22:4N6 0, 44 0,00 0, 03 C22:5N6 0, 11 0,00 0, 00 C22:5N3 0,00 0,60 0,63 C22:6N3 (DHA) 10,93 10,30 13,34 C24 :0 1, 77 0,30 0,37 C24 :1 0,59 0,28 0,38 Total 100,00 100,00 100,00 Saturado 15, 74 37,32 34,81 Monoinsaturado 42, 14 19,15 16,84 Poli-insaturado 42, 12 43,53 48,34 Total 100,00 100,00 100,00 Omega-3 36,22 39,62 44,56 Omega-6 5, 91 3,90 3, 78 58 ΡΕ2144618
Tabela 11. Composição de ácidos gordos da fracçao lipidica neutra total (% (p/p))
Total de lipidos neutros Ácido gordo OK Neutro OK Polar OK Neptune Ficheiro o t* o 0,00 0,00 0, 00 C6:0 0,00 0,00 0, 00 o 00 u 0,00 0,00 0, 00 CIO: 0 0,00 0,00 0, 00 C12:0 0,00 0,00 0, 00 C14:0 20,35 11,31 18,44 C14:1 0,30 0,29 0, 25 C15:0 0,53 1,53 0,62 C16:0 23, 79 0,49 24,11 C16:1 12, 42 5,22 11,86 C18:0 1,54 3,27 1, 67 C18:1 26,81 33,09 23,82 C18:2N6 1,68 2,37 1, 79 C18:3N6 0,20 0,23 0, 25 C18:3N3 0,59 0,62 0, 03 C18:4N3 0,03 1,27 0, 05 C20:0 0,07 0,00 0, 06 C20:1 1,63 1, 41 1,39 C20:2N6 0,04 0,00 0, 05 C20:3N6 0,18 0,94 0, 01 C20:4N6 0,00 0,00 0, 00 C20:3N3 0,09 0,00 0, 01 C20:4N3 0,18 0, 41 0,23 C20:5N3 (EPA) 5, 88 19,26 9,68 C22 :0 0,02 0,00 0, 03 59 ΡΕ2144618 (continuação)
Total de lipidos neutros Ácido gordo OK Neutro OK Polar OK Neptune Ficheiro C22:1 0,56 0,60 0,53 C22:2N6 0,00 0,00 0, 00 C22:4N6 0,00 0,00 0, 04 C22:5N6 0,01 0,00 0, 00 C22:5N3 0,17 0,27 0,22 C22:6N3 (DHA) 2, 74 17,22 4, 64 C24 :0 0, 15 0,00 0, 17 C24 :1 0,03 0,21 0, 06 Total 100,00 100,00 100,00 Saturado 46, 45 16,60 45,10 Monoinsaturado 41, 75 40,82 37,91 Poli-insaturado 11,80 42,59 16,99 Total 100,00 100,00 100,00 Omega-3 9,68 39,05 14,86 Omega-6 2, 11 3,54 2, 14
Tabela 12. Composição de ácidos gordos dos diglicéridos e ácidos gordos livres (% (p/p)).
Diglicéridos Ácidos gordos livres Ácido gordo OK Neutro OK Polar CK Neptune OK Neutro OK Polar CK Neptune Ficheiro C4:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C6:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C8:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C10:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C12:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C14:0 13,85 14,35 12,22 5,86 7,19 5,45 ΡΕ2144618 - 60 - (continuação)
Diglicéridos Ácidos gordos livres Ácido gordo OK Neutro OK Polar CK Neptune OK Neutro OK Polar CK Neptune Ficheiro C14:l 0,18 0,00 0,17 0,05 0,00 0,08 C15:0 0,49 1,08 0,66 0,46 1,60 0,45 C16:0 23,68 35,24 25,81 28,30 29,37 21,12 C16:l 9,49 6,80 0,09 3,27 3,08 4,91 C18:0 1,56 3,63 1,89 1,13 2,43 0,99 C18:l 23,67 19,85 23,82 14,50 14, 77 17, 41 C18:2N6 1,79 0,21 1,90 1,69 0,97 1,86 C18:3N6 0,17 0,00 0,01 0,14 0,00 0,22 C18:3N3 0,69 0,00 1,19 0,85 0,00 1,34 C18:4N3 1,92 0,00 2,75 1,30 0,00 2,72 C20:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C20:l 1,09 0,00 1,01 0,48 0,00 0,57 C20:2N6 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C20:3N6 0,13 0,00 0,00 0,08 0,00 0,05 C20:4N6 0,45 0,00 0,64 0,78 0,00 1,43 C20:3N3 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C20:4N3 0,35 0,00 0,43 0,39 0,00 0,43 C20:5N3 (EPA) 14,03 9,80 18,00 24,33 23,57 25,36 C22:0 0,18 0,00 0,10 0,00 0,00 0,05 C22:l 0,41 0,00 0,57 0,80 0,69 0,37 C22:2N6 0,28 0,00 0,50 0,46 0,00 0,54 C22:4N6 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C22:5N6 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C22:5N3 0,20 0,00 0,27 0,34 0,00 0,32 C22:6N3 (DHA) 4, 74 9,04 7,53 14,31 16,33 13,95 C24:0 0,64 0,00 0,42 0,49 0,00 0,39 C24:l 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 Total 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 Saturado 40,40 54,30 41,10 36,24 40,59 28,45 Monoinsaturado 34,84 26,64 25,66 19,09 18,54 23,34 Poli-insaturado 24, 77 19,06 33,24 44,67 40,87 48,22 Total 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 Qmega-3 21,95 18,85 30,18 41,51 39,90 44,13 Cmega-6 2,82 0,21 3,05 3,15 0,97 4,09 61 ΡΕ2144618
Tabela 13. Composição de ácidos gordos nas fracções triglicérido e liso- fosfatidilcolina (% (p/p) ). Ácido gordo Triglicéridos OK Neutro OK Polar CK Neptune OK Neutro Liso PC OK Polar CK Neptune Ficheiro C4:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C6:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C8:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C10:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C12:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C14:0 23,06 26,65 25,13 19,38 4,27 2,87 C14:l 0,36 0,93 0,36 0,00 0,08 0,00 C15:0 0,56 2,64 0,78 0,00 0,52 0,45 C16:0 23,17 4,93 27,80 41,00 44,14 39,56 C16:l 13,68 11,58 0,04 0,00 1,84 2,24 C18:0 1,52 3,12 1,99 0,76 1,59 1,32 C18:l 27,83 34,39 27,92 6,65 14,24 11,29 C18:2N6 1,64 2,05 1,92 0,00 1,75 2,07 C18:3N6 0,20 0,00 0,30 0,00 0,00 0,06 C18:3N3 0,51 0,00 0,00 7,95 0,67 1,75 C18:4N3 1,99 0,00 4,83 0,00 1,11 2,46 C20:0 0,06 0,00 0,08 0,00 0,00 0,00 C20:l 1,67 0,00 1,76 0,00 0,52 0,00 C20:2N6 0,04 0,00 0,05 0,00 0,00 0,00 C20: 3N6 0,05 0,00 0,01 0,00 0,00 0,54 C20: 4N6 0,00 0,00 0,00 0,00 0,40 0,00 C20:3N3 0,05 0,00 0,07 0,00 0,00 0,00 C20: 4N3 0,11 0,00 0,17 0,00 0,31 0,55 C20:5N3 (EPA) 2,10 7,97 4, 44 0,00 18,59 28,48 C22:0 0,02 0,00 0,04 0,00 0,00 0,00 C22:l 0,37 0,00 0,42 0,00 1,46 0,91 C22:2N6 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C22:4N6 0,01 0,00 0,01 0,00 0,00 0,00 C22:5N6 0,00 0,00 0,01 0,00 0,00 0,00 C22:5N3 0,10 0,00 0,16 0,00 0,41 0,62 - 62 - ΡΕ2144618 (continuação) Triglicéridos Liso PC Ácido gordo OK Neutro OK Polar CK Neptune OK Neutro OK Polar CK Neptune Ficheiro C22:6N3 (DHA) 0,67 3,97 1, 42 24,26 7.79 13,82 C24:0 0,26 1,78 0,26 0,00 0,32 0,00 C24:l 0,00 0,00 0,03 0,00 0,00 0,00 Total 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 Saturado 48,64 39,12 56,08 61,14 50,83 35,21 Monoinsaturado 43,90 46,89 30,52 6,65 18,14 14,44 Poli-insaturado 7,45 13,99 13, 41 32,20 31,02 50,35 Total 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 Qmega-3 5,51 11,94 11,11 32,20 28,87 47,69 Qmega-6 1,94 2,05 2,30 0,00 2,15 2,66 Tabela 14. Composição em ácidos gordos das fracções fosfatidilcolina e fosfatidilserina ( % (p/p) • PC PS Ácido gordo OK Neutro OK Polar CK Neptune OK Neutro OK Polar CK Neptune Ficheiro C4:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C6:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C8:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C10:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C12:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C14:0 0,75 3,29 2, 77 7,60 9,52 2,31 C14:l 2,07 0,04 0,02 0,00 0,00 0,00 C15:0 1,34 0,00 0,00 3,83 0,00 0,00 C16:0 16,65 31,92 29,83 30,44 43,61 19,49 C16:l 0,96 0,01 0,17 9,96 3,47 2,79 C18:0 1,33 1,06 1,33 2,08 3,34 2,24 ΡΕ2144618 - 63 - (continuação) PC PS Ácido gordo OK Neutro OK Polar CK Neptune OK Neutro OK Polar CK Neptune Ficheiro C18:l 34,34 13,55 11,16 0,00 7,37 11,87 C18:2N6 10,55 2,27 1,90 0,00 0,00 0,00 C18:3N6 1, 44 0,25 0,20 0,00 0,00 0,00 C18:3N3 2,49 1,19 1,54 0,00 0,00 0,00 C18:4N3 2,38 1,92 2, 41 0,00 0,00 0,00 C20:0 2,79 0,03 0,05 0,00 0,00 0,00 C20:l 2,42 0,82 0,74 0,00 0,00 0,00 C20:2N6 0,56 0,05 0,06 0,00 0,00 0,00 C20: 3N6 0,67 0,13 0,09 0,00 0,00 0,00 C20: 4N6 1,85 0,61 0,56 0,00 0,00 0,00 C20: 3N3 3,94 0,07 0,06 0,00 0,00 0,33 C20: 4N3 4,32 0,50 0,46 0,00 0,00 0,00 C20:5N3 (EPA) 1,08 29,85 30,09 25,84 15,81 16,35 C22:0 0,00 0,05 0,02 0,00 0,00 0,00 C22:l 2,77 0,00 1,87 0,00 0,00 0,00 C22:2N6 0,00 0,81 0,97 0,00 0,00 0,00 C22:4N6 0,00 0,01 0,02 0,00 0,00 0,00 C22:5N6 1,49 0,01 0,00 0,00 0,00 0,00 C22:5N3 1,48 0,67 0,68 0,00 0,00 0,00 C22:6N3 (DHA) 0,00 10,53 12, 49 20,25 16,89 44,63 C24:0 2,34 0,10 0,18 0,00 0,00 0,00 C24:l 0,00 0,25 0,34 0,00 0,00 0,00 Total 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 Saturado 25,19 36,46 34,18 43,95 56,47 24,04 Monoinsaturado 42,56 14,67 14,29 9,96 10,84 14,65 Poli-insaturado 32,25 48,87 51,53 46,09 32,69 61,31 Total 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 Qmega-3 15,69 44,73 47, 73 46,09 32,69 61,31 Cmega-6 15,56 4,13 3,81 0,00 0,00 0,00 64 ΡΕ2144618
Tabela 15. Composição de ácidos gordos das fracções fosfatidilinositol e fosfatidiletanolamina(% (p/p)). PI PE Ácido gordo OK Neutro OK Polar CK Neptune OK Neutro OK Polar CK Neptune Ficheiro C4:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C6:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C8:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C10:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C12:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C14:0 11,15 5,82 5,72 14, 42 4,60 0,83 C14:l 3,03 0,66 0,00 0,00 0,00 0,10 C15:0 5,86 1,95 3,18 0,00 1,30 0,23 C16:0 37,02 30,66 21,39 35,91 31,21 18,38 C16:l 18,05 2,24 1,16 0,00 1,51 0,75 C18:0 6,72 2,83 5,56 12,72 16,70 1,84 C18:l 18,15 24, 77 14,23 36,96 19,91 18,45 C18:2N6 0,00 2,67 0,00 0,00 2,62 0,85 C18:3N6 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C18:3N3 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,33 C18:4N3 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C20:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C20:l 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C20:2N6 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C20:3N6 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,15 C20:4N6 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C20:3N3 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C20:4N3 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C20:5N3 (EPA) 0,00 17,60 20,45 0,00 10,76 21,26 C22:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C22:l 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C22:2N6 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C22:4N6 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C22:5N6 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C22:5N3 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,67 65 ΡΕ2144618 (continuação) PI PE Ácido gordo OK Neutro OK Polar CK Neptune OK Neutro OK Polar CK Neptune Ficheiro C22:6N3 (DHA) 0,00 10,79 18,32 0,00 11,39 35,16 C24:0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 C24:l 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 Total 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 Saturado 60, 76 41,26 45,84 63,04 53,81 21,28 Monoinsaturado 39,24 27,67 15,39 39,96 21,42 19,30 Poli-insaturado 0,00 31,07 38,77 0,00 24,77 59,42 Total 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 Qmega-3 0,00 28,40 38,77 0,00 22,15 57,43 Cmega-6 0,00 2,67 0,00 0,00 2,62 1,99
Tabela 16. Dados da composição doa nova composição do óleo de krill obtido e deóleo de krill OKN
Compostos OK Neptune OK extraído com etanol OK polar OK neutro Esteres de astaxantina 472 mg/kg 117 mg/kg 580 mg/kg 98 mg/kg Astaxantina. livre 11 mg/kg < 1 mg/kg < 1 mg/kg < 1 mg/kg Colesterol total 1 g/lOOg 12 g/lOOg <0,5 g/lOOg 5,7 g/lOOg EXEMPLO 4
Extraíram-se os lípidos neutros a partir da farinha de krill (138 kg) utilizando SFE com CO2 puro (relação entre solventes de 25kg/kg) , a 500 bar e a 75°C. Os lípidos neutros foram fraccionados a 200 bar (75°C) e a 60 bar (35°C) nos separadores SI e S2, respectivamente. ΡΕ2144618
Caracterizou-se o extracto obtido no SI (19,6 kg) e os resultados podem ser encontrados nas Tabelas 17A-C. 0 extracto no S2 (0,4 kg) era mais rico em água e não foi utilizado. Seguidamente, os lipidos polares foram extraídos utilizando C02 a 500 bar, 20% de etanol e a uma temperatura de 75°C, utilizando uma relação entre solventes de 32 (kg/kg) e recolhendo um extracto de 18,2 kg, utilizando um separador a 60 bar e 35°C. Recolheram-se e analisaram-se os lipidos polares (Tabelas 18A-C). A seguir os lipidos polares foram misturados, numa relação 50/50 com os lipidos neutros colhidos a partir de Sl, antes de o etanol ser finalmente cuidadosamente removido por evaporação. O produto obtido era vermelho e transparente. Se o etanol for removido antes da mistura das fracções não se obtem um produto transparente. A composição do produto 50/50 vermelho e transparente pode ser encontrada nas Tabelas 19A-C.
Tabela 17A. Composição em ácidos gordos do extracto recolhido em Sl Ácido gordo Unidade Quantidade O i—1 g/100 g 18,4 16 : 0 g/100 g 22,2 18 : 0 g/100 g 1,5 16:1 n-7 g/100 g 10,9 18:1 (n-9)+(n-7)+(n-5) g/100 g 25, 6 20:1 (n-9)+(n-7) g/100 g 1,8 22:1 (n-11)+(n-9)+(n-7) g/100 g 0,5 67 ΡΕ2144618 (continuação) Ácido gordo Unidade Quantidade 16:2 (n-4) g/100 g 1,3 16:4 (n-1) g/100 g 1,2 18:2 n-6 g/100 g 1,3 18:3 n-3 g/100 g 0,8 18:4 n-3 g/100 g 2,9 20:5 n-3 g/100 g 4, 1 22:6 n-4 g/100 g 1, 7
Tabela 17B. Composição dos lípidos, por classes, do extracto recolhido em SI
Lipido Unidade Quantidade Triacilglicerol g/100 g 84 Diacilglicerol g/100 g 0, 7 Ácidos gordos livres g/100 g 1,5 Colesterol g/100 g 2, 7 Esteres de colesterol g/100 g 0,9
Tabela 17C. Miscelânea de dados de análise do extracto em SI
Composto Unidade Quantidade Astaxantina livre mg/kg 4,3 Esteres de astaxantina mg/kg 462 Trimetilamina mg N/10 0 g <1 Óxido de trimetilamina mg N/10 0 g 2 68 ΡΕ2144618
Tabela 18A. Composição em ácidos gordos do extracto recolhido em Sl, após CO2 e 20% de etanol Ácido gordo Unidade Quantidade 14 : 0 g/100 g 1,3 16 : 0 g/100 g 13,8 18 : 0 g/100 g 0,6 16:1 n-7 g/100 g 0,9 18:1 (n-9)+(n-7)+(n-5) g/100 g 6,5 20:1 (n-9)+(n-7) g/100 g 0,6 22:1 (n-11)+(n-9)+(n-7) g/100 g 0,1 16:2 (n-4) g/100 g <0,1 16:4 (n-1) g/100 g <0,1 18:2 n-6 g/100 g 0, 8 18:3 n-3 g/100 g 0,6 18:4 n-3 g/100 g 1,0 20:5 n-3 g/100 g 14, 7 22:6 n-4 g/100 g 6,5
Tabela 18B. Composição dos lipidos, por classes, do extracto recolhido em Sl, após CO2 e 20% de etanol
Lipido Unidade Quantidade Triacilglicerol g/100 g <0,5 Colesterol g/100 g <0,5 Fosfatidiletanolamina g/100 g 1,6 Fosfatidilcolina g/100 g 67 Liso-fosfatidilcolina g/100 g 4,4 69 ΡΕ2144618
Tabela 18C. Miscelânea de dados de análise do extracto em SI
Composto Unidade Quantidade Trimetilamina mg N/10 0 g 422 Óxido de trimetilamina mg N/100 g 239
Tabela 19A. Composição em ácidos gordos do produto misturado final, do Exemplo 4, recolhido em SI Ácido gordo Unidade Quantidade 14 : 0 g/100 g 9,7 16:0 g/100 g 18,5 18:0 g/100 g 1,0 16:1 n-7 g/100 g 5, 8 18:1 (n-9)+(n-7)+(n-5) g/100 g 16,0 20:1 (n-9)+(n-7) g/100 g 1,2 22:1 (n-11)+(n-9)+(n-7) g/100 g 1,0 16:2 (n-4) g/100 g 0,3 16:4 (n-1) g/100 g <0,1 18:2 n-6 g/100 g 1,0 18:3 n-3 g/100 g 0,8 18:4 n-3 g/100 g 2,1 20:5 n-3 g/100 g 10, 7 22:6 n-4 g/100 g 4, 7 70 ΡΕ2144618
Tabela 19B. Composição dos lipidos, por classes, do produto final misturado, obtido no Exemplo 4 Lípido Unidade Quantidade Triacilglicerol g/100 g 53 Diacilglicerol g/100 g 1,3 Ácidos gordos livres g/100 g 0,5 Colesterol g/100 g 0,6 Esteres de colesterol g/100 g <0,5 Fosfatidiletanolamina g/100 g <1 Fosfatidilcolina g/100 g 42 Liso-fosfatidilcolina g/100 g 5,9
Tabela 19C. Miscelânea de dados de análise do produto final misturado, obtido no Exemplo 4
Composto Unidade Quantidade Astaxantina livre mg/kg 1,1 Esteres de astaxantina mg/kg 151 Trimetilamina mg N/10 0 g 109 Óxido de trimetilamina mg N/10 0 g 80 EXEMPLO 5
Misturou-se o óleo asta obtido no exemplo 1 com os lipidos polares obtidos no exemplo 4, numa relação 45:54 (v/v) . Seguidamente removeu-se o etanol por evaporação e 71 ΡΕ2144618 obteve-se um produto vermelho escuro e transparente. 0 produto foi analisado e os resultados podem ser encontrados nas Tabelas 20A-C. Adicionalmente, encapsulou-se o produto, com sucesso, em cápsulas de gelatina mole. Durante a encapsulação observou-se que qualquer outro aumento em fosfolipidos e consequentemente de viscosidade tornará muito difícil o encapsulamento do produto final.
Tabela 20Ά. Composição em ácidos gordos do produto misturado final, obtido no Exemplo 5 Ácido gordo Unidade Quantidade 14 : 0 g/100 g 8,2 16 : 0 g/100 g 17,7 18 : 0 g/100 g 1,0 16:1 n-7 g/100 g 4, 9 18:1 (n-9)+(n-7)+(n-5) g/100 g 14, 9 20:1 (n-9)+(n-7) g/100 g 1,1 22:1 (n-11)+(n-9)+(n-7) g/100 g 1,0 16:2 (n-4) g/100 g 0,4 16:4 (n-1) g/100 g <0,1 18:2 n-6 g/100 g 1,2 18:3 n-3 g/100 g 0,8 18:4 n-3 g/100 g 1,8 20:5 n-3 g/100 g 10,6 22:6 n-4 g/100 g 4,8 72 ΡΕ2144618
Tabela 20B. Composição dos lípidos, por classes, do produto final misturado, obtido no Exemplo 5
Lipido Unidade Quantidade Triacilglicerol g/100 g 41 Diacilglicerol g/100 g 0,8 Ácidos gordos livres g/100 g 1,2 Colesterol g/100 g 0,4 Esteres de colesterol g/100 g 0,3 Fosfatidiletanolamina g/100 g 0,6 Fosfatidilcolina g/100 g 51 Liso-fosfatidilcolina g/100 g <0,5 Total de lípidos polares g/100 g 52,4 Total de lípidos neutros g/100 g 43,6
Tabela 20C. Miscelânea de dados de análise do produto final misturado, obtido no Exemplo 5
Composto Unidade Quantidade Astaxantina livre mg/kg 12 Esteres de astaxantina mg/kg 1302 Trimetilamina mg N/10 0 g 193 Óxido de trimetilamina mg N/10 0 g 1, 7 EXEMPLO 6
Bombeou-se o krill fresco a partir do navio de colheita, directamente para um recipiente com vapor indi- 73 ΡΕ2144618 recto e aqueceu-se a 90°C. Removeram-se água e uma pequena quantidade de óleo numa prensa de parafuso, antes de se adicionar etoxiquina (antioxidante) e secar a farinha desnaturada, sob vácuo, a uma temperatura não excedendo os 80°C. Após 19 meses de armazenamento à temperatura ambiente, extraiu-se uma amostra da farinha desnaturada e extraiu-se, em dois passo, com CO2 supercrítico, à escala de laboratório, com um débito de 2 mL/min a 100°C e a uma pressão de 7500 psi. No segundo passo, adicionou-se 20% de etanol ao CO2. Combinaram-se as duas fracções recolhidas e analisou-se por HPLC utilizando detecção ELS. Determinou-se que a fosfatidilcolina representava 42,22%, enquanto que a fosfatidilcolina parcialmente decomposta representava 1,68%. Estes dados contrastam fortemente com os dados obtidos por análise de uma amostra de óleo de krill comercial, que mostrava um teor de 9,05% de fosfati-dilcolina e 4,60% de fosfatidilcolina parcialmente decomposta .
Exemplo 7
Extrairam-se os lípidos do krill a partir de uma farinha de krill (pó com grau alimentar), utilizando extracção com fluido supercrítico com co-solvente. Inicialmente utilizaram-se 300 bar de pressão, 333°K e 5% de etanol (etano:CC>2, p/p) , durante 60 minutos, de modo a remover os lípidos neutros e a astaxantina da farinha de krill. De seguida aumentou-se o teor de etanol para 23% e manteve-se a extracção durante 3 horas e 40 minutos. O 74 ΡΕ2144618 extracto foi depois evaporado utilizando um evaporador de película de líquido em queda e finalmente filtrou-se o óleo de krill resultante. 0 produto obtido foi analisado e os resultados podem ser encontrados na Tabela 21.
Tabela 21. Análise do óleo de krill obtido utilizando extracção com fluido supercrítico
Parâmetro Valor Etanol 1,1% p/p Teor em água 2,98% p/p C2 0:5 n-3 (EPA) 19,9 C22:6 n-3 (DHA) 11,3 Total de omega 3 35, 7 Total de omega 6 3,0 Total de fosfolípidos 50,55% em peso Relação omega 3-PL/total de omega 3 77,6% p/p Relação EPA-PL/total de EPA 84,4% p/p Relação DHA-PL/total de DHA 74,7% p/p Triglicéridos 25,9 g/lOOg Astaxantina 2091 mg/kg Valor de peróxido <0,1 EXEMPLO 8
Preparou-se o óleo de krill de acordo com o método descrito no exemplo 7, extraindo-o da mesma farinha de krill. 0 óleo foi sugeito a análise por 31P RMN para 75 ΡΕ2144618 identificação e quantificação das diversas formas de fosfolipidos. As análises foram realizadas de acordo com os métodos seguintes: pesaram-se as amostras (20 - 40 mg) em tubos de 1,5 mL para centrífuga. Seguidamente, adicionou-se detergente para RMN (750 μί, 10% de colato de Na, 1% de EDTA, pH 7,0, em H20+D20, 0,3 g de padrão interno L-l PMG). Depois os tubos foram colocados numa estufa a 60°C e agitados/sonicados periodicamente até dispersão completa. A solução foi então transferida para um tubo de 5 mL para análise de RMN. Registaram-se od espectro de RMN de fósforo num Bruker Avance 300, de dois canais, com a seguinte regulação instrumental: frequência do espectrómetro, 121,498 MHz, largura do varimento, 24,271 Hz, 64 000 pontos de dados, 30 graus de impulso de excitação, tendo sido normalmente tomados 576 transients, cada um com um atraso de 8 segundos e duração da aquisição f.i.d de 1,35 seg. Os espectros foram processados com uma função de pesagem exponencial vulgar, com um alargamento de linha de 0,2 Hz, antes da transformação de Fourier.
Identificaram-se os picos utiliando desvios químicos conhecidos. Também foi utilizada a desacetilação de amostras com monometilamina, em duas amostras, para confirmação da identidade do pico e para se conseguir melhor resolução dos picos. Na Figura 1 é apresentado um espectro de exemplo. A integração das áreas dos picos deu quantidades molares relativas de cada uma das classe de lípidos. Os valores de percentagem de peso foram calculados utilizando massas moleculares calculadas a partir de um 76 ΡΕ2144618 perfil de uma amostra de ácidos gordos de krill (tamanho médio da cadeia = 18,6). Os teores de PL total foram calculados a partir do pico do padrão interno PMG. A quantificação dos fosfolípidos é mostrada na tabela 25, tanto para o material cru, como para o produto final e para uma amostra de óleo de krill disponível no comércio (Neptune Oil Krill). Os principais lípidos com ligações éter presentes na farinha de krill são alquilacilfosfatidilcolina (AAPC), com 7-9% do total de lípidos polares, liso-alquil-acilfosfatidilcolina (LAAPC) com 1% do total de lípidos polares e alquilacilfosfatidil-etanolamina (AAPE) com < 1% do TPL.
Tabela 22. Perfis dos fosfolípidos
Krill em pó de tipo B NKO Óleo de krill obtido no Exemplo 7 PC 66,0 68, 6 75,3 AAPC 12,0 7,0 13,0 PI 1LPC 1,2 1,3 0,4 PS 2LPC 7,4 13,8 2,9 LAAPC 2,2 1,2 0,9 PE 6,0 3,4 3,4 AAPE 1,5 SM 77 ΡΕ2144618 (continuação)
Krill em pó de tipo B NKO Óleo de krill obtido no Exemplo 7 GPC 1,3 DHSM NAPE 3,4 CL 5,3 2,1 LPE 0,5 LCL % de PL na amostra de pó ou de lipido 8,3 30, 0 47,9
Efectuou-se uma análise sobre os perfis de ácidos gordos e éter/álcool da AAPC. Os resultados são apresentados na Tabela 23
Tabela 23. Perfil de ácido gordo da alqilacilfosfatidil-colina.
Composição em ácido Composição em álcool da AAPC gordo da AAPC álcool % 20:5(n-3) -46,9% 16:0 46,6 22:6(n-3) -36,1% 18:1 17,8 18:1(n-9) -4,6% 16:1 14, 1 22:5(n-3) -2,6% 14:0 10 20:4(n-6) -1,9% 18:0 8,6 21:5(n-3) 1,5% 18 : 2 5, 1 ΡΕ2144618 - 7 8 -(continuação)
Composição em ácido Composição em álcool da AAPC gordo da AAPC álcool o 0 18:2(n-6) - 0, 9% 17:0 4,4 16:1(n-9) - 0, 8% 15:0-i 2,1 O 1 o kD \—1 7% 15 : 0 1, 7 Fitânico -0,6% 20 :1 1,4 18:3(n-3) - 0,5% 15:0-a 1,3 18:4(n-3) - 0, 4% 18:0-i 0,4 18:1(n-7) - 0, 4% 24:1 - 0,4% 14:0 - 0,3%
Os alcoóis restantes (il7:0, etc.), representavam menos de 0,3% cada. Apenas uma parte de 20:1 foi confirmada por GC-MS. Determinaram-se os grupos álcool na composição da AAPC do krill (a identificação foi realizada sob a forma de gliceroisd de l-alquil-2,3-diTMS, em GC-MS, tendo-se obtido a % de alcoóis gordos por GC com FID) . Dez outrso ácidos gordos situavam todos abaixo de 0,3% em massa. EXEMPLO 9 A finalidade desta experiência foi a de determinar o efeito de diversas fontes de ácido gordo omega-3 sobre os parâmetros metabólicos no rato Zucker. O rato Zucker é um modelo largamente utilizado de obesidade e resistência à insulina. A obesidade é devida a uma mutação no receptor leptina que compromete a regulação do apetite. As fontes de omega-3 comparadas neste estudo, foram óleo de 79 ΡΕ2144618 peixe (FO) e dois tipos de óleo de krill. Os óleos de krill eram de um fornecedor comercial (Neptune Krill Oil) ou preparados de acordo com o exemplo 7 (Superba™) . Alimentaram-se quatro grupos de ratos (n = 6 por grupo) ad lib com uma dieta de controlo (CTRL) ou uma dieta complementada com uma fonte de ácidos gordos omega-3 (FO, NKO, Superba). Todas as dieram forneciam a mesma quantidade de ácidos gordos dietéticos, ácido oleico, ácido linoleico e ácido linolénico. As dietas com omega-3 (FO, NKO, Superba™) foram adicionalmente equilibradas quanto aos teores de EPA e DHA. Os ratos Zucker tinham 4 semanas de idade no inicio do estudo e um peso médio inicial de 250 g. Neste estádio, os ratos Zucker podem ser caracterizados como sendo pré-diabéticos. Alimentaram-se os ratos com a dieta de teste durante 4 semanas, após o que foram sacrificados e recolhidas amostras de sangue e tecido. Os dados apresentados nas figuras que se seguem são médias ± SE. Este exemplo mostra que o suplemento dos ratos Zucker com óleo de krill preparado como no exemplo 7 resulta numa melhoria dos parâmetros metabólicos caracteristicos da obesidade induzida pela condição diabética de tipo dois. Os efeitos induzidos pelo novo óleo de krill é frequentemente mais pronunciado do que o efeito de FO e em diversos casos superior ao efeito induzido pelo NKO. Os efeitos dos dois tipos de óleo de krill diferenciaram-se, especificamente, em relaçãoà redução dos níveis de colesterol LDL no sangue, assim como na acumulação de lípidos no fígado e músculo (Figuras 2-9) . Adicionalmente, a eficácia de transferência de DAH a partir da dieta para o tecido cerebral foi superior com o óleo de krill preparado como no exemplo 7 (Figura 10). 80 ΡΕ2144618 EXEMPLO 11
Este exemplo descreve o efeito do complemento de dietas humanas com óleo de krill, óleo de peixe (controlo positivo) ou um óleo de controlo negativo (sem ácidos gordos omega-3) sobre o azoto da ureia no sangue (BUN). O BUN mede a quantidade de azoto proveniente da uriea, presente no sangue. O BUN é utilizado como medida da função renal. Contudo, a creatinina no soro é considerada uma medida mais especifica da função renal. Neste estudo, o óleo de krill diminuiu o BUN por 11,8%, mantendo-se os níveis de creatinina inalterados. Assim, é provável que a diminuição no BUN seja devida a qualquer outro efeito que melhorou a função renal. O BUN diminui se o óleo de krill induziu diurese, i.e., excreção de urina (efeito diurético) . O BUN também diminui se o catabolismo de proteínas corporais é reduzido. O catabolismo das proteínas é uma característica normal do processamento das proteínas corporais. Muitos tecidos expressam velocidades elevadas de processamento de proteínas. Por exemplo, o sistema gastrointestinal expressa elevadas velocidades de processamento de proteínas. Nos animais em crescimento, uma redução do catabolismo da proteína GI melhora o aumento de peso. Os murganhos suplementados com óleo de krill desenvolveram-se a uma velocidade superior à de murganhos suplementados com óleo de peixe ou dieta de controlo (Figura 11). 81 ΡΕ2144618
Tabela 24. Efeito sobre o azoto da ureia no sangue em seres humanos, para os diferentes grupos de tratamento.
Controlo Óleo de krill Óleo IYferibaden
P n = 23 n = 24 n = 25
BGN, rtg/dL
Linha de base 11,5 (7,8, 13,8) Aa partir da 11,0 (-14,3, 26,1) linha de base, % 11,5 (9,5, 13,5) -11,8 (-20,0, 1,5) 11,5 (9,5, 14,0) 9,1 (-9,1, 35,7) 0,523 0,014r
Creatinina, rrg/dL 0,8 (0,8, 1,0) 0,952r 0,0 (-5,9, 6,7) 0,416
Linha de base 0,9 (0,7, 0,9) 0,9 (0,7, 0,9)
Aa partir da 0,0 (-9,6, 2,9) 0,0 (-2,0, 5,9) linha de base, % EXEMPLO 12 A finalidade desta experiência foi a de investigar o efito do óleo de krill dietético sobre parâmetros metabólicos em murganhos alimentados com elevados teores de gordura e para comparar o efeito do óleo de krill dietético com o de óleo de peixe contendo o mesmo teor de ácidos gordos omega-3. Alimentaram-se quatro grupos de murganhos C57BL/6 (n = 10 por grupo), com a) ração (N), 2) dieta com elevado teor de gordura, compreendendo 21% de gordura de manteiga e 0,15% de colesterol (HF), 3) dieta com elevado teor de gordura + óleo de krill (HFKO) ou 4) dieta com elevado teor de gordura + óleo de peixe (HFFO). O tratamento 3 continha 2,25% (p/p) de óleo de krill como preparado no exemplo 5 (excepto por o teor de astaxantina ser de 500 ppm) , o que era equivalente a 0,36% de ácidos 82 ΡΕ2144618 gordos omega-3. 0 tratamento 4 também continha 0,36% de ácidos gordos omega-3, obtidos a partir de um óleo de peixe normal 18-12. Os murganhos foram alimentados com as dietas durante 7 semanas, com livre acesso a água. Os dados representados neste exemplo são médias ± SE. As colunas que não partilham uma letra comum são significativamente diferentes (p<0,05) por ANOVA, seguido pelo teste de comparação múltipla de Tukey. N = dieta com ração normal (n = 10); HF = dieta com elevado teor de gordura (n = 10); HFFO = dieta com elevado teor de gordura suplementada com óleo de peixe (n = 9); HFKO = dieta com elevado teor de gordura, suplementada com óleo de krill (n = 8). Os dados são apresentados nas figuras 18-25.
Este exemplo mostrou que a adição de um suplemento de óleo de krill à dieta de murganhos alimentados com uma dieta com elevado teor de gordura, resultou numa melhoria da hiperinsulinémia induzida pela dieta, da resistência à insulina, aumento do teor de lípido muscular (medido como alteração da massa muscular) redução da adi-ponectina no soro e esteatose hepática. Estes efeitos ateroprotectores potencialmente benéficos, foram semelhantes ou superiores aos conseguidos com um suplemento contendo um teor comparável de ácidos gordos omega-3 (Figuras 12-19).
Lisboa, 25 de junho de 2013

Claims (27)

  1. ΡΕ2144618 1 REIVINDICAÇÕES 1. Composição contendo: entre cerca de 3% a 10% de fosfolípidos com ligações éter, numa base p/p; e entre cerca de 400 a cerca de 2500 mg/kg de as- taxantina.
  2. 2. Composição da reivindicação 1, contendo também desde cerca de 35% a 50% de fosfolípidos sem ligações éter, numa base p/p, de modo que a quantidade total de fosfolípidos com ligações éter e de fosfolípidos sem ligações éter na composição se situa entre 38% a 60%, numa base p/p.
  3. 3. Composição da reivindicação 1 ou reivindicação 2, contendo também desde cerca de 20% a 45% de trigli-céridos, numa base p/p.
  4. 4. Composição de qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que os referidos fosfolípidos com ligações éter são seleccionados do grupo que consiste em alquilacil-fosfatidilcolina, liso-alquilacilfosfatidilco-lina, alquil-acilfosfatidiletanolamina e suas combinações.
  5. 5. Composição de qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que os referidos fosfolípidos com ligações éter são mais de 90% de alquilacilfosfatidil-colina. 2 ΡΕ2144618
  6. 6. Composição de qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que os referidos fosfolipidos sem ligações éter são seleccionados do grupo que consiste em fosfati-dilcolina, fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina e suas combinações.
  7. 7. Composição de qualquer uma das reivindicações 1 a 6, em que as composições referidas compreendem uma mistura de fracções lipídicas obtidas a partir de Euphausia superba.
  8. 8. Composição de qualquer uma das reivindicações 1 a 6, em que as composições referidas incluem desde cerca de 25% a 40% de ácidos gordos omega-3, como percentagem do total de ácidos gordos, e em que entre cerca de 80% a 90% dos referidos ácidos gordos omega-3 estão ligados aos referidos fosfolipidos.
  9. 9. Composição de qualquer uma das reivindicações 1 a 8, em que a composição é derivada de krill.
  10. 10. Composição de qualquer uma das reivindicações 1 a 9, em que a referida composição contém menos de 2% de ácidos gordos livres.
  11. 11. Composição de qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada também por os referidos fosfolipidos conterem mais de 50% de fosfatidilcolina (p/p). 3 ΡΕ2144618
  12. 12. Composição de qualquer uma das reivindica ções 1 a 11, caracterizada também por conter pelo menos 36% (p/p) de ácidos qordos omega-3.
  13. 13. Composição de qualquer uma das reivindica ções 1 a 12, caracterizada também por conter menos de cerca de 0,5g/100g de colesterol total, menos de cerca de 0,45% de ácido araquidónico (p/p) e menos de cerca de 10 mg/kg (p/p) de trimetilamina.
  14. 14. Composição de qualquer uma das reivindica ções 1 a 13, caracterizada também por não conter acetona.
  15. 15. Composição de qualquer uma das reivindica ções 1 a 14, em que a referida composição é inodora.
  16. 16. Composição como reivindicado na reivindicação 1, em que a referida composição é uma composição de óleo do krill Euphausia superba, contendo: desde cerca de 3% a cerca de 10% p/p de fosfo-lípidos com ligações éter; desde cerca de 27% a 50% p/p de fosfolipidos sem ligações éter, de modo que a quantidade total de fosfolipidos na composição se situa entre cerca de 30% a 60% p/p; desde cerca de 20% a 50% de triglicéridos; desde cerca de 400 a cerca de 2500 mg/kg de astaxantina; e 4 ΡΕ2144618 desde cerca de 20% a 35% de ácidos gordos omega-3, como percentagem do total de ácidos gordos na referida composição, em que entre cerca de 70% a 95% dos referidos ácidos gordos omega-3 estão ligados aos fosfolipidos referidos.
  17. 17. Cápsula contendo a composição de qualquer uma das reivindicações 1 a 16.
  18. 18. Suplemento dietético compreendendo a com posição de qualquer uma das reivindicações 1 a 16.
  19. 19. Composição, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, para prevençãoou tratamento de hiperinsulinémia induzida pela dieta, insensibilidade à insulina, hipertrofia da massa muscular, reducção da adiponectina no soro, esteatose hepática, coração gordo, figado gordo, resistência à insulina, inflamação, perfil de lipidos no sangue ou esforço oxidante.
  20. 20. Composição, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, para indução de diurese, aumento da massa muscular ou diminuição do catabolismo das proteínas.
  21. 21. Processo para produção de óleo de krill contendo 40% a 60% de fosfolipidos, compreendendo o processo referido: 5 ΡΕ2144618 a) proporcionar um produto de kril desnaturado; e b) extracção do referido óleo a partir do referido produto desnaturado.
  22. 22 Processo da reivindicação 21, em que o referido produto de krill desnaturado é produzido a) proporcionando krill fresco; b) tratando o referido krill fresco para desnaturar as lipases e fosfolipases no referido krill fresco, para proporcionar um produto de krill desnaturado; e c) extracção do referido óleo a partir do referido produto de krill desnaturado.
  23. 23. Processo da reivindicação 22, em que o passo de desnaturação compreende o aquecimento do krill fresco referido.
  24. 24. Processo de qualquer uma das reivindicações 21 a 23, em que o produto de krill desnaturado referido é uma farinha de krill.
  25. 25. Processo de qualquer uma das reivindicações 21 a 24, em que o passo de extracção inclui a utilização de etanol.
  26. 26. Processo de qualquer uma das reivindicações 21 a 25, compreendendo também a encapsulação do referido óleo de krill. 6 ΡΕ2144618
  27. 27. Óleo produzido pelos processos de qualquer uma das reivindicações 21 a 25. Lisboa, 25 de junho de 2013
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