CN103561744A

CN103561744A - 3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4h)-基)哌啶-2,6-二酮在治疗免疫相关性和炎症性疾病中的用途

Info

Publication number: CN103561744A
Application number: CN201280022778.1A
Authority: CN
Inventors: 阿尼塔·甘地; 彼得·H·谢弗
Original assignee: Celgene Corp
Current assignee: Celgene Corp
Priority date: 2011-03-11
Filing date: 2012-03-09
Publication date: 2014-02-05
Also published as: EA201391319A1; EP2683384A1; US20140148473A1; CA2829593A1; ZA201306305B; TW201700100A; AU2012229300B2; IL227990A0; AR085651A1; ES2562332T3; EA201691939A1; JP2017081959A; BR112013023280A2; WO2012125459A1; TW201242601A; JP6118273B2; RU2013145524A; JP2014508780A; PL2683384T3; SG192947A1

Abstract

本文提供将化合物和组合物用于调节免疫相关性疾病或炎症性疾病中淋巴细胞活性（包含B细胞和/或T细胞的活性）的方法。本文还提供用于该方法的药物组合物和给药方案。

Description

3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮在治疗免疫相关性和炎症性疾病中的用途

1.交叉引用相关申请

本申请要求2011年3月11日提交的美国临时专利申请号61/451,995和2011年4月28日提交的美国临时专利申请号61/480,272的权益，所述美国临时专利申请以引用方式全部特此并入本文。

2.序列表

本申请与2012年3月8日创建的，以12827-263-228_序列表.txt为文件名（大小为6,571个字节）呈送的序列表一起提交。该序列表以引用方式全部并入本文。

3.发明领域

本文提供治疗、预防和/或管控与淋巴细胞活性（包含B细胞和/或T细胞的活性）相关的疾病（例如免疫相关性疾病或炎症性疾病）的方法，该方法包括施用化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体、外消旋混合物、共晶体、包合物或多晶型物，其中化合物I是3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮。本文还提供用于这类治疗、预防和/或管控的药物组合物和给药方案。

4.发明背景

由淋巴细胞活性（包含B细胞和/或T细胞的活性）调节的炎症性和免疫相关性疾病（例如狼疮、硬皮病、干燥综合症、ANCA诱发的血管炎、抗磷脂综合症和重症肌无力）继续是重要的医疗问题。

狼疮或红斑狼疮是可引起身体不同部位，尤其是皮肤、关节、血液和肾脏内的慢性炎症的自身免疫性疾病的统称。人体的免疫系统通常产生称为抗体的蛋白质，以保护身体免受病毒、细菌和其他异物（即抗原）。在自身免疫性紊乱（如狼疮）中，免疫系统失去了区分抗原和其自身细胞和组织的能力，并可以使抗体对准其自身细胞和组织，形成免疫复合物。这些免疫复合物可以在组织中堆积并引起炎症、组织损伤和/或疼痛。最常见的三种类型的狼疮包括系统性红斑狼疮（SLE）、皮肤型红斑狼疮（CLE）和药物性狼疮。狼疮或红斑狼疮的更详细的说明可见于Wallace,2000,The Lupus Book:AGuide for Patients and Their Families,牛津大学出版社,修订和扩增版，其以引用方式全部并入本文。

硬皮病是一种发病率稳定（每百万人约19例）的罕见疾病。硬皮病的确切病因尚不清楚。异常情况涉及自身免疫以及内皮细胞和成纤维细胞功能的改变。系统性硬皮病通常始于皮肤增厚（通常是指部的皮肤增厚），伴有雷诺氏现象。雷诺氏病通常早于系统性硬皮病的进一步表现。在该疾病的早期，受感染的皮肤可能浮肿变软。最能发生皮肤增厚和硬化的部位通常是脸部、手部和指部。经常出现的是指硬皮病。诊查中肌腱摩擦音常易察觉，并可产生疼痛。随着疾病进一步发展，可能发生指部溃疡和自动断离。胃肠蠕动障碍是该疾病的一种特征，往往表现为心口灼热；或伴有吸收不良或假性梗阻的腹泻。新发高血压或肾功能不全是相关血管损伤的表现。由于心肌纤维化，心脏衰竭或心律失常也是可能的。(Hachulla E,Launay D,Diagnosis andclassification of systemic sclerosis,Clin Rev Allergy Immunol2010;40(2):78-83)。

硬皮病，尤其是系统性硬化症的主要表现是胶原蛋白不合适的过量的合成和沉积、内皮功能障碍、痉挛、虚脱和纤维化闭塞（obliteration by fibrosis）。在诊断方面，一项重要的临床参数是近掌指关节的皮肤增厚。雷诺氏现象是硬皮病的常见，几乎是普遍的组成部分。其通过冷暴露后的肤色变化进行诊断。缺血和皮肤增厚是雷诺氏病的症状。

仍然需要可用于治疗或预防免疫相关性和炎症性疾病（包含狼疮、硬皮病、干燥综合症、ANCA诱发的血管炎、抗磷脂综合症和重症肌无力）的预防性或治疗性药物。

5.发明概述

本文提供治疗、管控、缓解和/或预防与免疫相关性和炎症性疾病相关的疾病、紊乱和/或病症的方法，该方法包括施用治疗有效量的式I化合物：

或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体、外消旋混合物、共晶体、包合物或多晶型物。

在一个实施方式中，该化合物是3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮。

在某些实施方式中，该疾病选自狼疮硬皮病、干燥综合症、ANCA诱发的血管炎、抗磷脂综合症和重症肌无力。

在一个实施方式中，本文提供调节（例如降低）淋巴细胞活性（包含B细胞和/或T细胞的活性）的方法，该方法包括使B细胞和/或T细胞接触有效量的化合物I。

本文还提供适用于治疗、预防、缓解和/或管控与免疫相关性和炎症性疾病相关的疾病、紊乱和/或病症的，包括化合物I，可选地结合一种或多种其他治疗剂的单一剂型的药物组合物以及试剂盒。

在某些实施方式中，化合物I与一种或多种治疗剂，即作为淋巴细胞活性（包含B细胞的活性和/或T细胞活性）调节剂的药剂结合施用。该结合包含同时和序贯给药。

6.附图说明

图1示出3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮对抗CD3刺激的人T细胞中细胞因子和趋化因子的生产的影响，表示为生产的绝对量。

图2示出3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮对抗CD3刺激的人T细胞中细胞因子和趋化因子的生产的影响，表示为对照物的百分比。

图3示出3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮对脂多糖刺激的外周血单核细胞中细胞因子和趋化因子的生产的产量抑制情况。

图4示出3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮对脂多糖刺激的外周血单核细胞中细胞因子和趋化因子的生产的产量提升情况。

图5示出3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮响应固定化的IgG和IL-2而对NK细胞IFN-γ生产的提升情况，表示为生产的绝对量。

图6示出存在1μm Pomalidomide时，3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮响应固定化的IgG和IL-2而对NK细胞IFN-γ生产的提升情况，表示为IFN-γ的产量百分比。

图7示出对比涂覆有利妥昔单抗的淋巴瘤细胞，3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮对NK细胞调节的ADCC的影响。

图8示出博来霉素真皮纤维化小鼠模型中，显示受损皮肤的真皮厚度的苏木精和曙红染色的皮肤部分显微照片（预防炎症驱动的纤维化）。

图9示出博来霉素真皮纤维化小鼠模型中，显示受损皮肤的真皮厚度的苏木精和曙红染色的皮肤部分显微照片（已形成的纤维化的衰退）。

7.发明详述

除非另有定义，本文所用的所有技术和科学术语与所属领域的普通技术人员所普遍理解的具有相同的含义。所有的专利、申请、公开的申请及其他出版物以引用方式全部并入。在本文的术语存在多个定义的情况下，除非另有说明，否则以本节中的为准。

如本文所用以及除非另有说明，术语“治疗”指减轻或降低与正在治疗的疾病或病症相关的疾病或症状的严重度。

如本文所用，“预防”及该词的其他形式包含对疾病或紊乱或该特定疾病或紊乱的症状的发作或进展进行抑制。在某些实施方式中，具有癌症家族史的对象是预防性方案的候选者。一般地，在癌症的情况下，该术语“预防”指尤其是在有癌症风险的对象体内，在癌症的迹象或症状发作之前施用药物。

如本文所用以及除非另有说明，术语“管控”包含预防曾患过特定疾病或紊乱的对象体内该特定疾病或紊乱的复发，延长曾患过该疾病或紊乱的对象保持缓解的时间，降低对象的死亡率和/或保持降低与正在管控的疾病或病症相关的症状的严重度或保持避免与正在管控的疾病或病症相关的症状。

如本文所用，“对象”意指动物，通常指哺乳动物，包含人类。如本文所用，“患者”意指人类对象。

如本文所用以及除非另有规定，术语化合物的“治疗有效量”和“有效量”指足以在疾病的治疗、预防和/或管控中提供治疗性益处，延迟或最小化与待治疗的疾病或紊乱相关的一种或多种症状的量。术语“治疗有效量”和“有效量”可以包含改善整体治疗、减少或避免疾病或紊乱的症状或病因或提升另一治疗剂的治疗效能的量。

如本文所用以及除非另有规定，术语化合物的“预防有效量”是足以预防疾病或病症或与该疾病或病症相关的一种或多种症状或预防其复发的量。化合物的预防有效量意指单独或结合其他药剂、在疾病的预防中提供预防性益处的治疗剂的量。该术语“预防有效量”可以包含改善整体预防或提升另一预防性药剂的预防效能的量。

本文中所用以及除非另有说明，术语“药学上可接受的盐”包含但不仅限于可以存在于本文提供的化合物中的酸性基团的盐。在一定的酸性条件下，该化合物可以与各种无机和有机酸形成各种各样的盐。可以用来制备这类碱性化合物的药学上可接受的盐的酸是那些形成包括药理学上可接受的阴离子的盐的酸，所述盐包含但不仅限于乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、酒石酸氢盐、溴化物、依地酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、柠檬酸盐、二氢氯化物、依地酸盐、乙二磺酸盐、丙酸酯十二烷硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酰基对氨基苯基砷酸盐（glycollylarsanilate）、己基间苯二酚盐（hexylresorcinate）、哈胺、羟萘甲酸盐、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、肉豆蔻酸盐（muscate）、萘磺酸盐、硝酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、单宁酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐（teoclate）、三乙基碘化物（triethiodide）和双羟萘酸盐。

本文中所用以及除非另有说明，术语“水合物”意指本文提供的化合物或其盐，进一步包含通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量的量的水。该水合物可以是晶体或非晶体的。

本文中所用以及除非另有说明，术语“溶剂化物”意指一种或多种溶剂分子与本文提供的化合物结合而形成的溶剂化物。该术语“溶剂化物”包含水合物（例如一水合物、二水合物、三水合物、四水合物等等）。该溶剂化物可以是晶体或非晶体的。

如本文所用以及除非另有规定，术语“立体异构体”包含本文提供的所有对映异构体/立体异构体纯的以及对映异构体/立体异构体富集的化合物。

如本文所用以及除非另有说明，术语“立体异构体纯的”或“对映异构体纯的”意指化合物包括一种立体异构体以及大体上不含其相对的立体异构体或对映异构体。例如，当化合物包含80%、90%或95%或更多的一种立体异构体以及20%、10%或5%或更少的相对的立体异构体时，该化合物便是立体异构体或对映异构体纯的。在某些情况下，当本文提供的化合物关于特定的手性中心为约80%ee（对映异构体过量）或更大；优选地，等于或大于90%ee；以及关于特定的手性中心，更优选地为95%ee时，则该化合物被认为关于手性中心，是光学活性或立体异构体/对映异构体纯的（即大体上是R-形式或大体上是S-形式）。

如本文所用以及除非另有说明，术语“立体异构体富集的”或“对映异构体富集的”包含本文提供的化合物的立体异构体的外消旋混合物及其他混合物（例如R/S=30/70、35/65、40/60、45/55、55/45、60/40、65/35和70/30）。

术语“共施用”和“结合”包含两种或更多治疗剂（例如，本文提供的化合物I或组合物和具有淋巴细胞活性（包含B细胞活性和/或T细胞活性）的另一调节剂或其他活性剂）的没有具体时间限制的同时、一道或序贯给药。在一个实施方式中，化合物I和至少一种其他药剂同时出现在细胞内或对象的体内或同时发挥其生物或治疗效果。在一个实施方式中，治疗剂在相同的组合物或单位剂型内。在另一实施方式中，治疗剂在单独的组合物或单位剂型内。

“B细胞”是在骨髓内成熟的淋巴细胞，以及包含童贞B细胞、记忆B细胞或效应B细胞（浆细胞）。本文的B细胞可以是正常的或非恶性的细胞。

“T细胞”是在胸腺内成熟的淋巴细胞，以及包含辅助T细胞、记忆T细胞和细胞毒性T细胞。

本文中所用的“整体生存期”指从随机取样到死亡于各种病因为止的时间，以及在意向治疗人群中测量。在随机对照研究中可以评估整体生存期。

本文中所用的“客观反应率”指在预定时间段末期，具有减少的预定硬皮病症状的患者的比例。通常测量的反应持续时间从初始反应的时间到有备案的硬皮病进展为止。

本文中所用的“进展时间”意指从随机取样到客观硬皮病进展为止的时间。在某些实施方式中，进展时间不包含死亡时间。

本文中所用的“没有进展的生存期”意指从随机取样到客观硬皮病进展或死亡为止的时间。

本文中所用的“治疗失败时间”意指测量从随机取样到因各种原因（包含疾病进展、治疗毒性和死亡）停止治疗的时间的任何末点。

本文中所用的“死亡率”意指对给定的人群中死亡数量的量度。

本文中所用的“呼吸系统疾病死亡率”意指死于急性低氧血症或其他导致死亡的具体的呼吸系统恶化情况（例如需要机械通气导致死亡、呼吸骤停或在自然界中被认为进行呼吸的对象体内的任何其他事件）的患者数。

本文中所用的“呼吸系统疾病入院情况”意指根据患者入院注意事项或其他医学意见备案，患者因肺部状态恶化而住院的情况。

本文中所用的“修正Rodnan皮肤得分”意指评价真皮皮肤厚度的验证数值评分系统。

本文中所用的“皮肤厚度”意指可以使用各种技术（包含硬度计和mRSS）评估的硬的或硬结的皮肤。

本文中所用的“皮肤硬结”意指硬化的、红的、发炎的、变厚的或嫩的皮肤。

本文中所用的“皮肤病生活质量指数”意指对硬皮病患者与皮肤症状相关的质量或生活进行的评估。

本文中所用的“肺功能”意指针对用力呼气流量、用力肺活量、FEV25-75%、肺容量或肺活量的任何量度。

本文中所用的“一氧化碳弥散能力”意指对整个肺泡-毛细血管膜的一氧化碳的摄取进行的评估。其可以代表对将氧气从肺部输送到血流的肺部能力的量度。

本文中所用的“Mahler呼吸困难指数”意指提供气短的临床测量的手段。

本文中所用的“圣乔治呼吸系统疾病问卷得分”意指测量肺病患者的生活质量的手段。

本文中所用的“UCLA硬皮病临床试验聚生体胃肠道得分”意指提供给硬皮病患者以评估与硬皮病（系统性硬化症）相关的胃肠症状的问卷。

本文中所用的“流量调节的扩张”意指对硬皮病患者体内血管内皮功能的任何量度。

本文中所用的“六分钟步行距离”意指对硬皮病患者在6min内可以步行的距离进行的任何评估或评估固定时间段或距离的步行能力的任何标准化的程序。

如本文所用，Pomalidomide指如下化合物：

7.1化合物I

在某些实施方式中，用于本文提供的方法（包含联合疗法）和本文提供的组合物中的化合物I是如下式的化合物：

在一个实施方式中，该化合物是3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮。

化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体、外消旋混合物、共晶体、包合物或多晶型物可以通过本领域技术人员已知的方法（例如，根据美国专利7,635,700和美国临时申请号61/451,806中所述的程序）制备。

在某些实施方式中，式I的化合物是固体。在某些实施方式中，式I的化合物是水合物。在某些实施方式中，式I的化合物是溶剂化物。在某些实施方式中，式I的化合物是无水的。在某些实施方式中，式I的化合物是不吸潮的。

在某些实施方式中，式I的固体化合物是无定形的。在某些实施方式中，式I的固体化合物是晶体的。在某些实施方式中，式I的固体化合物是2011年3月11日提交的美国临时专利申请号61/451,806（其以引用方式全部并入本文）中所述的晶体形式。

式I的固体形式的化合物可以根据美国临时专利申请号61/451,806的披露内容中所述的方法制备。该固体形式还可以根据对本领域的技术人员来说显而易见的其他方法制备。

在某些实施方式中，式I的化合物是3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代-4H-喹唑啉3-基)-哌啶-2,6-二酮或对映异构体或其对映异构体的混合物；或其药学上可接受的溶剂化物、水合物、共晶体、包合物或多晶型物的盐酸盐。在某些实施方式中，该盐酸盐是固体。在某些实施方式中，该盐酸盐是无水的。在某些实施方式中，该盐酸盐是不吸潮的。在某些实施方式中，该盐酸盐是无定形的。在某些实施方式中，该盐酸盐是晶体的。在某些实施方式中，该盐酸盐是晶体形式A。

式I化合物的盐酸盐及其固体形式可以根据美国临时专利申请号61/451,806的披露内容中所述方法制备。该盐酸盐及其固体形式还可以根据对本领域的技术人员来说显而易见的其他方法制备。

本文提供的式I化合物包含一个手性中心，以及可以作为对映异构体的混合物（例如外消旋混合物）而存在。该披露内容包含立体异构体纯形式的这类化合物的用途以及这些形式的混合物的用途。例如，包括相等或不等量的本文提供的式I化合物的对映异构体的混合物可用于本文披露的方法和组合物。这些同分异构体可以使用标准的技术（例如手性柱或手性拆解试剂）进行不对称合成或拆解。见，例如，Jacques,J.,等人,Enantiomers,Racemates andResolutions(Wiley-Interscience,New York,1981);Wilen,S.H.,等人,Tetrahedron33:2725(1977);Eliel,E.L.,Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw-Hill,NY,1962);以及Wilen,S.H.,Tables of Resolving Agents andOptical Resolutions p.268(E.L.Eliel,Ed.,Univ.of Notre Dame Press,NotreDame,IN,1972)。

应当指出的是，如果描述的结构和该结构的给定名称不一致，则偏重于该描述的结构。另外，如果结构或结构的一部分的立体化学没有用，例如，黑线或虚线标出，则该结构或该结构的一部分被解释为包含该结构的所有立体异构体。

7.2治疗方法

本文提供治疗、预防和/或管控与免疫相关性和炎症性疾病相关的疾病、紊乱和/或病症的方法，该方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。在某些实施方式中，该疾病选自狼疮硬皮病、干燥综合症、ANCA诱发的血管炎、抗磷脂综合症和重症肌无力。在某些实施方式中，该疾病是狼疮或硬皮病。

化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物的敏感性可以在各种活体内和活体外检定法中得到研究，包含本领域的技术人员已知的免疫相关性和炎症性疾病动物模型，包含但不仅限于系统性红斑狼疮的MRL/MpJ-Faslpr/J小鼠模型、系统性红斑狼疮的NZBWF1/J小鼠模型、博来霉素诱发的皮肤纤维化模型以及鼠类紧绷皮肤-1（Tsk-1）小鼠模型。

7.2.1硬皮病的治疗

在某些实施方式中，本文提供治疗、预防和/或管控硬皮病或其症状的方法，该方法包括向硬皮病患者施用治疗有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。

在某些实施方式中，本文提供预防硬皮病或其症状的方法，该方法包括向有患硬皮病风险的患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。

在某些实施方式中，该硬皮病是局灶性硬皮病、系统性硬皮病、局限性硬皮病或弥漫性硬皮病。

在某些实施方式中，系统性硬皮病包括CREST综合症（钙质沉着症、雷诺氏综合症、食管功能障碍或蠕动障碍、指硬皮病、毛细管扩张）。硬皮病也称为系统性硬化症或进行性系统性硬化症。在某些实施方式中，本文提供治疗或预防雷诺氏疾病或综合症的方法。在某些实施方式中，系统性硬化症包括硬皮病肺病、硬皮病肾脏危象、心脏表现、肌肉无力（包含疲劳或局限性CREST）、胃肠蠕动障碍和痉挛以及中枢、周围和自主神经系统异常（包含腕管综合症，继之以三叉神经痛）。它还包含全身无力（general disability）（包含抑郁症）以及对生活质量的影响。

在某些实施方式中，局限性硬皮病限于手部、脸部、脖颈或其组合。

在某些实施方式中，弥漫性硬皮病包括皮肤紧绷而且还发生在腕部（或肘部）上。在某些实施方式中，该弥漫性系统性硬化症是无皮肤硬化的硬皮病（包括内脏纤维化，但无皮肤紧绷）；或家族性进行性系统性硬化症。

在一个实施方式中，硬皮病与消瘦（例如与疾病相关的消瘦）不相关。

在一个实施方式中，本文提供用于减少、抑制或预防硬皮病的一种或多种如下症状的方法：（i）皮肤（例如四肢，如手部、脸部和足部内皮肤）逐渐硬化、增厚和紧绷；（ii）皮肤变色；（iii）四肢麻木；（iv）皮肤发亮；（v）皮肤表面下，喷射垩白液体的白色小肿块；（vi）雷诺氏食管功能障碍（暴露于冷应力或情绪压力时由血管痉挛导致的手部疼痛、麻木和/或变色）；（vii）毛细管扩张（例如手部、掌部、前臂、脸部和唇部上的红色斑点）；（viii）关节疼痛和/或僵硬；（ix）手部和足部肿胀；（x）皮肤瘙痒；（xi）指部僵硬和弯曲；（xii）某些关节外部（例如指节和肘部）上有溃疡（疮）；（xiii）消化问题，例如心口灼热、吞咽困难、腹泻、过敏性肠和便秘；（xiv）疲劳和虚弱；（xv）气短；（xvi）关节炎；（xvii）脱发；（xviii）内脏问题；（xix）指部溃疡；或（xx）指部自动断离，该方法包括向有需要的患者施用有效量的化合物I。

不受限于任何特定的理论，认为，化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物增强了Th1免疫响应，以及抑制了Th2免疫响应，这可在皮肤内产生抗纤维化作用。

本文进一步提供用于改善或减小硬皮病患者的皮肤厚度的方法，该方法包括向该患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。在一个实施方式中，该皮肤厚度减小了约20%、约25%、约30%、约40%、约50%、约60%、约70%、约80%、约90%或更多。

本文进一步提供用于达到与硬皮病相关的一个或多个临床末点的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。

本文进一步提供用于延长硬皮病患者的整体生存期、客观反应率、进展时间、没有进展的生存期和/或治疗失败时间的方法，该方法包括向该患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。

本文进一步提供用于减少硬皮病患者的死亡率、呼吸系统疾病死亡率和/或呼吸系统疾病入院情况的方法，该方法包括向该患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。

本文进一步提供用于改善硬皮病患者的修正Rodnan皮肤得分的方法，该方法包括向该患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。在一个实施方式中，修正Rodnan皮肤得分的改善有5、10、15或20分或更多。

本文进一步提供用于改善或减小硬皮病患者的皮肤硬结的方法，该方法包括向该患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。

本文进一步提供用于改善硬皮病患者的皮肤病生活质量指数的方法，该方法包括向该患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。

本文进一步提供用于改善硬皮病患者的肺功能的方法，该方法包括向该患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。

本文进一步提供用于改善硬皮病患者的一氧化碳弥散能力的方法，该方法包括向该患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。在一个实施方式中，患者的一氧化碳弥散能力通过肺部一氧化碳弥散能力（DLco）的改善得以改善，该DLco的改善为约10%、约20%、约25%、约30%、约40%、约50%、约60%、约70%、约80%、约90%或更多。

本文进一步提供用于改善硬皮病患者的Mahler呼吸困难指数的方法，该方法包括向该患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。在一个实施方式中，Mahler呼吸困难指数的改善有4、5、6、7、8、9或10分或更多。

本文进一步提供用于改善硬皮病患者的圣乔治呼吸系统疾病问卷得分的方法，该方法包括向该患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。在一个实施方式中，圣乔治呼吸系统疾病问卷得分的改善有4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52分或更多。

本文进一步提供用于改善硬皮病患者的UCLA硬皮病临床试验聚生体胃肠道得分的方法，该方法包括向该患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。

本文进一步提供用于治疗或预防硬皮病患者或患者群体的指部溃疡的方法，该方法包括向该患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。

本文进一步提供改善硬皮病患者的流量调节的扩张的方法，该方法包括向该患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。

本文进一步提供改善或延长硬皮病患者的六分钟步行距离的方法，该方法包括向该患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。在一个实施方式中，六分钟步行距离的改善为约200m、约250m、约300m、约350m、约400m或更多。

7.2.2红斑狼疮的治疗

在某些实施方式中，本文提供治疗、预防和/或管控红斑狼疮或其症状的的方法，该方法包括向红斑狼疮患者施用治疗有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。

在一个实施方式中，本文提供预防红斑狼疮或其症状的方法，该方法包括向有患红斑狼疮风险的患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。

在某些实施方式中，本文提供用于治疗、预防和/或管控系统性红斑狼疮（SLE）、皮肤型红斑狼疮（CLE）和药物性狼疮的方法。

本文中，短语“系统性红斑狼疮”与SLE和狼疮可互换使用以及指本领域已知的该疾病的所有表现（包含缓解和发作）。在SLE中，B淋巴细胞活性异常过强以及免疫球蛋白γ（IgG）自身抗体的大规模异常生产发挥关键作用。这种病理过程导致涂覆有Ig的细胞被俘获（sequestration）并破坏，补体蛋白被固定并裂解，以及化学吸引素、血管活性肽和破坏性酶被释放进入组织(Hahn BH.Systemic Lupus Erythematosus.In:Kasper DL,Braunwald E,FauciAS,Hauser SL,Longo DL,Jameson,JL,编者.In:Harrison's Principles ofInternal Medicine(第16版).纽约(美国):McGraw-Hill;2005.pp.1960-1967)。

SLE的症状因人而异，以及可以来来去去。对多数患者来说，该症状包含关节疼痛和肿胀。经常受感染的关节在指部、手部、腕部以及膝部。某些患者患有关节炎。其他常见的症状包含：深吸气时胸部疼痛、疲劳、没有其他原因的发烧、全身不适、不安或病感（不适感）、脱发、口疮、淋巴结肿大、对日光敏感、皮疹–面颊和鼻梁上的“蝶形”皮疹影响约半数的SLE患者，对某些患者来说，该皮疹在日光下变得更糟，以及该皮疹还可以广泛分布。

其他症状取决于身体的哪一部分受到感染，以及可以包含如下：

脑部和神经系统：头痛、麻木、刺痛、发作、视力问题、人格改变，

消化道：腹痛、恶心和呕吐，

心脏：异常的心律（心律不齐），

肺部：咳血和呼吸困难，以及

皮肤：肤色有斑、寒冷时指部变色（雷诺氏现象）。

某些患者仅具有皮肤症状。这称为盘状狼疮。

在一个实施方式中，本文提供治疗中度、重度或极重度SLE的方法。本文中所用的术语“重度SLE”指这样的一种SLE病症，其中患者具有一种或多种重度或危及生命的症状（例如溶血性贫血、广泛的心脏或肺部受累、肾病或中枢神经系统受累）。

本文进一步提供用于达到与SLE相关的一个或多个临床末点的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。

本文进一步提供用于延长SLE患者的整体生存期、客观反应率、进展时间、没有进展的生存期和/或治疗失败时间方法，该方法包括向该患者施用有效量的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。

在某些实施方式中，化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物作为原代人记忆CD19+B细胞分化至成浆细胞阶段的抑制剂。不受限于任何特定的理论，认为，化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物阻滞早熟阶段的细胞，从而减少能够产生高水平的免疫球蛋白的成浆细胞的数目。这种效果的一种功能后果便是在这些分化培养物中免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）的产量降低。

在某些实施方式中，化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物抑制原代人记忆CD19+B细胞分化至成浆细胞阶段的能力。在某些实施方式中，化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物对短期培养物中的成熟CD138+浆细胞无显著影响。在某些实施方式中，化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物抑制B细胞分化因子，包含干扰素调节因子4（IRF4）、淋巴细胞诱发的成熟蛋白（BLIMP）、X盒蛋白-1（XBP-1）和B细胞淋巴瘤6（Bcl6）。

7.2.3其他免疫相关性疾病或紊乱的治疗

本文进一步提供使用化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物来治疗、管控或预防其他免疫相关性疾病或病症的的方法。在某些实施方式中，例如，本文提供一种治疗患有疾病或紊乱的个体的方法，其中该疾病或紊乱由不适当或不需要的免疫响应导致或与该免疫响应相关，例如可以通过免疫抑制得到有益治疗的疾病、紊乱或病症，该方法包括向该个体施用化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物。

在各种具体的实施方式中，所述免疫相关性疾病是选自如下的一种或多种：干燥综合症、ANCA诱发的血管炎、抗磷脂综合症、重症肌无力、阿狄森氏病、斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂抗体综合症、抗磷脂综合症（原发性或继发性）、哮喘、自身免疫性胃炎、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳病、自身免疫性淋巴组织增生病、自身免疫性血小板减少性紫癜、巴洛病、贝切特氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、脂泻病、恰加斯氏病、慢性炎性脱髓鞘性多神经病、疤痕性类天疱疮（例如粘膜类天疱疮）、冷凝集素病、德戈斯病、疱疹样皮炎（dermatitis herpetiformis？）、特发性混合型冷沉淀球蛋白血症、古德帕斯彻氏综合症、格雷夫斯氏病、Guillain-Barre综合症、桥本氏甲状腺炎（桥本氏病；自身免疫性甲状腺炎）、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜、IgA肾病、幼年型关节炎、扁平苔癣、Ménière病、混合性结缔组织病、硬斑病（morphea）、发作性睡病、神经性肌强直、小儿自身免疫性神经精神障碍（PANDA）、寻常天疱疮、恶性贫血病、多发性结节性动脉炎、多软骨炎、风湿性多肌痛、原发性无γ球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬变、雷诺疾病（雷诺现象）、莱特尔氏综合症、复发性多软骨炎、风湿热、斯耶格伦氏综合症、僵人综合症（Moersch-Woltmann综合症）、高安氏动脉炎、颞动脉炎（巨细胞性动脉炎）、葡萄膜炎、血管炎（例如与红斑狼疮无关的血管炎）、白癜风和/或韦格内氏肉芽肿症。

7.3剂量和给药量

待施用到患者的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物的剂量是相当广泛多变的以及可以取决于保健医师的判断。化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物的剂量因多种因素而不同，例如：要治疗、预防或管控的具体的适应症；患者年龄和状况；以及第二活性剂（若有）的用量。一般说来，化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物可以按约0.005mg/kg患者的体重到约10mg/kg患者的体重的剂量每日施用至患者1到4次或更多次，但是上述剂量可以根据患者的年龄、体重和医学条件以及施用的类型而进行合理变化。在一个实施方式中，该剂量为约0.01mg/kg患者的体重到约5mg/kg患者的体重；约0.05mg/kg患者的体重到约1mg/kg患者的体重；约0.1mg/kg患者的体重到约0.75mg/kg患者的体重或约0.25mg/kg患者的体重到约0.5mg/kg患者的体重。

在一个实施方式中，每日给药一个剂量。在任何给定的情况下，所施用的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物的量将取决于诸如活性成分的溶解度、所用的制剂以及给药途径等因素。在一个实施方式中，局部浓度的应用提供了约0.01–10μM的细胞内暴露或浓度。

在某些实施方式中，化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物按从约0.1mg/日到约1000mg/日的量使用，以及可以以传统的方式（例如，治疗、预防或管控期的每天施用相同的量）、按周期（例如使用1周，停用1周）或按在治疗、预防或管控的过程中增加或降低的量进行调整。在其他实施方式中，该剂量可以是从约1mg到约300mg；从约0.1mg到约150mg；从约1mg到约200mg；从约10mg到约100mg；从约0.1mg到约50mg；从约1mg到约50mg；从约10mg到约50mg；从约20mg到约30mg或从约1mg到约20mg。

7.4联合疗法

在本文提供的方法和组合物中，化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物可以结合其他药理学上的活性化合物（“第二活性剂”）。在特定类型的疾病或紊乱，以及与这类疾病或紊乱相关的病症和症状的治疗中，某些结合可以协同起效。化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物还可以起效，以减轻与某些第二活性剂相关的不利影响，以及增加与其相关的有利影响。

本文提供的方法和组合物中可以使用一种或多种第二活性成分或药剂。第二活性剂可以是大分子（例如蛋白）或小分子（例如合成的无机分子、有机金属分子或有机分子）。

在另一实施方式中，本文提供的治疗方法包括施用第二治疗剂，其中该第二治疗剂是抗炎药物，例如甾族的抗炎药物或非甾族的抗炎药物（NSAID）、醋氨酚、甲氧萘丙酸、布洛芬、乙酰水杨酸等等。在更具体的施用NSAID的实施方式中，还可以施用质子泵抑制剂（PPI），例如奥美拉唑。在一个实施方式中，抗炎剂是皮质类固醇。在另一实施方式中，抗炎剂是秋水仙碱。

在另一实施方式中，该第二治疗剂是免疫调节性化合物或免疫抑制剂化合物，例如硫唑嘌呤（Imuran^TM，Azasan^TM）、氨甲喋呤（Rheumatrex^TM，Trexall^TM）、青霉胺（Depen^TM，Cuprimine^TM）、环磷酰胺（Cytoxan^TM）、麦考酚酯mycophenolate（CellCept^TM，Myfortic^TM）、波生坦

强的松（Deltas1^TM、Liquid Pred^TM）以及PDE5抑制剂。在另一实施方式中，其中受感染的个体患有指部溃疡和肺性高血压症，可以施用血管扩张剂，例如前列环素（伊洛前列素）。

在另一实施方式中，该第二治疗剂是ActRII受体抑制剂或活化素-ActRII抑制剂。ActRII受体抑制剂包含ActRIIA抑制剂和ActRIIB抑制剂。ActRII受体抑制剂可以是包含ActRII活化素结合域的多肽。在某些实施方式中，包含活化素结合域的多肽被连接到抗体的Fc部分（即生成包括ActRII受体的包含活化素结合域的多肽和抗体的Fc部分的共轭物）。在某些实施方式中，该活化素结合域经由接头（例如肽接头）连接到抗体的Fc部分。

提供融合到人Fc域的示例性活化素结合ActRIIA多肽，见SEQ ID NO:1.

SEQ ID NO:1

ILGRSETQECLFFNANWEKDRTNQTGVEPCYGDKDKRRHCFATWKNISGS

IEIVKQGCWLDDINCYDRTDCVEKKDSPEVYFCCCEGNMCNEKFSYFPEM

EVTQPTSNPVTPKPPTGGGTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI

SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVV

SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPVPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP

SREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

提供融合到Fc域的包括可溶性ActRIIB胞外域的示例性融合蛋白，见SEQ ID NO:2。

SEQ ID NO:2

ETRECIYYNANWELERTNQSGLERCEGEQDKRLHCYASWRNSSGTIELVK

KGCWDDDFNCYDRQECVATEENPQVYFCCCEGNFCNERFTHLPEAGGPEV

TYEPPPTGGGTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV

VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD

WLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ

VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV

DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

选用于活化素或ActRIIA结合的非抗体蛋白的进一步例子以及用于设计和选择该非抗体蛋白的方法见于WO/2002/088171、WO/2006/055689、WO/2002/032925、WO/2005/037989、美国2003/0133939以及美国2005/0238646，其每个以引用方式全部并入本文。

可以施用适于治疗其疾病或症状的如上治疗剂的任何组合。这类治疗剂可以与化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物任意组合同时或作为单独的治疗过程施用。

7.5循环疗法

在某些实施方式中，本文提供的化合物I或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物被循环施用至患者。循环疗法涉及施用一种活性剂达一段时间，接着休息（即停止给药）一段时间，以及重复这种序贯给药。循环疗法可以减小对一种或多种疗法的抗性发展，避免或减小该疗法的副作用和/或改善治疗效能。

因此，在一个实施方式中，以4到6周为一周期，约1周或2周为休息期，按单次或分份剂量每日施用本文提供的化合物。循环疗法进一步允许增加给药周期的频率、次数以及长度。因此，另一实施方式包含当单独施用本文提供的化合物时，施用循环要比通常的要多。在仍然另一实施方式中，对于也未施用第二活性成分的患者，按比通常会在该患者体内产生剂量限制性毒性的循环次数更多的次数施用本文提供的化合物。

在一个实施方式中，每日按从约0.1mg到约500mg/日的剂量施用本文提供的化合物，持续3或4周，接着休息1或2周。在其他实施方式中，该剂量可以是从约1mg到约300mg；从约0.1mg到约150mg；从约1mg到约200mg；从约10mg到约100mg；从约0.1mg到约50mg；从约1mg到约50mg；从约10mg到约50mg；从约20mg到约30mg或从约1mg到约20mg，接着休息。

在一个实施方式中，在4到6周的周期期间，对本文提供的化合物和第二活性成分口服给药，本文提供的所述化合物的给药发生30到60min之后是该第二活性成分的给药。在另一实施方式中，在每个周期内，通过静脉内输注施用本文提供的化合物和第二活性成分的组合约90min。

通常，将联合治疗施用至患者的循环次数将是从约1到约24个循环；从约2到约16个循环；或从约4到约3个循环。

7.6药物组合物和剂型

药物组合物可用于单独、单一剂型的制剂中。本文提供的药物组合物和剂型包括本文提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、外消旋体、包合物或前体药物。药物组合物和剂型可以进一步包括一种或多种赋形剂。

本文提供的药物组合物和剂型还可以包括一种或多种附加活性成分。可选的第二或附加活性成分的例子如上文所披露。

本文提供的单一剂型适于向患者经口、粘膜（例如鼻、舌下、阴道、口腔或直肠）、肠胃外（例如皮下、静脉内、弹丸注射、肌内或动脉内）、局部（例如滴眼剂或其他眼用制剂）、经皮或头皮给药。剂型的例子包含但不仅限于：片剂；囊片；胶囊，例如弹性明胶软胶囊；扁囊剂；锭剂；糖锭；分散剂；栓剂；粉末；喷雾剂（例如鼻腔喷雾或吸入器）；凝胶剂；适于向患者经口或粘膜给药的液体剂型，其包含混悬液（例如水性或非水性液体混悬液、水包油乳剂或油包水液体乳剂）、溶液以及酏剂；适于向患者肠胃外给药的液体剂型；适于局部给药的滴眼剂或其他眼用制剂；以及可以复原，以提供适于向患者肠胃外给药的液体剂型的无菌固体（例如晶体的或无定形的固体）。

剂型的组合物、形状和类型通常因其用途而不同。例如，与疾病的长久治疗所用的剂型相比，相同疾病的及时治疗所用的剂型可以包含更大量的一种或多种活性成分。类似地，与用于治疗相同疾病的口服剂型相比，肠胃外剂型可以包含较小量的一种或多种活性成分。使用具体剂型的这些和其他方式会彼此不同，这对本领域的技术人员来说，是显而易见的。见，例如Remington’s Pharmaceutical Sciences,第20版,Mack Publishing,Easton PA(2000)。

在一个实施方式中，药物组合物和剂型包括一种或多种赋形剂。合适的赋形剂为药剂学本领域的技术人员熟知，以及本文提供合适赋形剂的非限制性例子。具体的赋形剂是否适于掺入药物组合物或剂型取决于本领域熟知的各种因素，包含但不仅限于剂型向患者的给药方式。例如，口服剂型（例如片剂）可以包含不适用于肠胃外剂型的赋形剂。具体赋形剂的合适性还可以取决于剂型中特定的活性成分。例如，某些活性成分的分解可以通过某些赋形剂（例如乳糖）或通过暴露于水加速。包括伯胺或仲胺的活性成分尤其容易发生这类加速的分解。因此，提供包含极少（若有）乳糖、其他单糖或二塘的药物组合物和剂型。如本文所用，术语“不含乳糖”意指存在的（若有）乳糖的量不足以大体上提高活性成分的降解速率。

不含乳糖的组合物可以包括本领域熟知的以及例如美国药典（USP）25-NF20（2002）中所列的赋形剂。一般说来，不含乳糖的组合物包括药学上可配伍的和药学上可接受的量的活性成分、粘合剂/填充剂以及润滑剂。在一个实施方式中，不含乳糖的剂型包括活性成分、微晶纤维素、预糊化淀粉和硬脂酸镁。

还提供包括活性成分的无水药物组合物和剂型，这是因为水可以促进某些化合物的降解。例如，制药学领域广泛接受的是，将加水（例如5%）作为模拟长期存储的手段，以测定随着时间流逝，诸如保质期或制剂稳定性等的特性情况。见，例如Jens T.Carstensen,Drug Stability:Principles&Practice,2d.Ed.,Marcel Dekker,NY,NY,1995,pp.379-80。实际上，水和热会加速某些化合物的分解。因此，水对制剂的影响必是至关重要的，因为制剂在生产、处理、包装、存储、装运和使用过程中经常遇到湿气和/或潮气。

可以利用无水的或低湿气含量的成分以及低湿气和/或潮气的条件制备无水的药物组合物和剂型。如果预期在生产、包装和/或存储期间与湿气和/或潮气有实质性接触，则包括乳糖和至少一种包括伯胺或仲胺的活性成分的药物组合物和剂型是无水的。

应该制备并存储无水的药物组合物，以便保持其无水性质。相应地，在一个实施方式中，用已知能预防暴露于水的材料来包装无水的组合物，以便使其可以包含在合适的处方试剂盒中。合适的包装材料的例子包含但不仅限于气密性密封箔、塑料、单位剂量容器（例如小瓶）、罩板包装以及条带包装（strip pack）。

还提供包括一种或多种化合物的药物组合物和剂型，所述化合物可降低活性成分分解的速率。这类化合物在本文中被称为“稳定剂”，其包含但不仅限于抗氧化剂，例如抗坏血酸、pH缓冲液或盐缓冲液。

与赋形剂的量和类型类似，剂型中活性成分的量和具体类型可因各种因素而有所不同，例如，但不仅限于，对患者的剂型给药途径。在一个实施方式中，剂型包括本文提供的从约0.10到约500mg的量的化合物。在其他实施方式中，剂型包括本文提供的约0.1、1、2、5、7.5、10、12.5、15、17.5、20、25、50、100、150、200、250、300、350、400、450或500mg的量的化合物。

在其他实施方式中，剂型包括如下量的第二活性成分：1到约1000mg；从约5到约500mg；从约10到约350mg或从约50到约200mg。当然，该第二活性剂的具体量将取决于所用的具体药剂；正在治疗或管控的疾病或紊乱；以及本文提供的化合物的量；以及一道施用至患者的任意可选的附加活性剂。

口服剂型

适于口服给药的药物组合物可以以独立的剂型提供，例如，但不仅限于片剂（例如咀嚼片）、囊片、胶囊以及液体（例如调味糖浆）。这类剂型包含预定量的活性成分，以及可以通过本领域技术人员熟知的制药方法制备。一般地，参见，Remington’s Pharmaceutical Sciences,第20版,Mack Publishing,Easton PA(2000)。

通过按照传统的药物配料技术紧密混合活性成分和至少一种赋形剂来制备本文提供的口服剂型。赋形剂可以根据给药所需的药剂形式采取各种各样的形式。例如，适用于口服液或气雾剂剂型的赋形剂包含但不仅限于水、乙二醇、油类、醇类、调味剂、防腐剂以及着色剂。适用于固体口服剂型（例如粉末、片剂、胶囊和囊片）的赋形剂的例子包含但不仅限于淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。

在一个实施方式中，口服剂型是片剂或胶囊，在这种情况下，采用固体赋形剂。在另一实施方式中，片剂可以通过标准的水性或非水性技术进行包衣。这类剂型可以通过任何药学方法制备。一般说来，通过将活性成分与液体载体、精细分割的的固体载体或两者均匀和紧密地混合，然后必要时，将产品制成所需的显示形状来制备药物组合物和剂型。

例如，片剂可以通过压缩或模制制备。压缩片剂可以通过在合适的机器中以自由流动的形式（例如粉末或微粒）压缩活性成分，可选地与赋形剂混合来制备。模制片剂可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉状化合物的混合物而制得。

可用于本文提供的口服剂型的赋形剂的例子包含但不仅限于粘合剂、填充剂、崩解剂和润滑剂。适用于药物组合物和剂型的粘合剂包含但不仅限于玉米淀粉、马铃薯淀粉或其他淀粉、明胶、天然和合成胶（例如阿拉伯胶、海藻酸钠、海藻酸、其他海藻酸盐、粉状黄蓍胶、瓜尔胶）、纤维素及其衍生物（例如乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠）、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、预糊化淀粉、羟丙基甲基纤维素、（例如2208、2906、2910号）、微晶纤维素及其混合物。

合适形式的微晶纤维素包含但不仅限于作为AVICEL-PH-101、AVICEL-PH-103、AVICEL RC-581、AVICEL-PH-105出售的材料（购自宾夕法尼亚州马库斯胡克的FMC公司美国粘胶部门的Avicel销售部）及其混合物。一种特定的粘合剂是微晶纤维素和作为AVICEL RC-581销售的羧甲基纤维素钠的混合物。适合的无水或低水分的赋形剂或添加剂包括AVICEL-PH-103^TM和淀粉1500LM。

适用于本文提供的药物组合物和剂型的填充剂的例子包含但不仅限于滑石粉、碳酸钙（例如颗粒或粉末）、微晶纤维素、粉状纤维素、葡聚糖结合剂、高岭土、甘露糖醇、硅酸、山梨糖醇、淀粉、预糊化淀粉及其混合物。在一个实施方式中，药物组合物中的粘合剂或填充剂以该药物组合物或剂型的从约50到约99wt%的量而存在。

崩解剂可用于组合物中，以提供被暴露于水性环境时崩解的片剂。包含太多崩解剂的片剂会在保存期间崩解，而那些包含太少崩解剂的片剂则不会以所需的速率或者在所需的条件下崩解。因此，可以用足够量的崩解剂来形成固体口服剂型，所述量既不能太多，也不能太少，否则会不利地改变活性成分的释放。崩解剂的用量因制剂的类型而不同，并且对本领域的普通技术人员来说容易辨别。在一个实施方式中，药物组合物包括从约0.5到约15wt%的崩解剂或从约1到约5wt%的崩解剂。

可用于药物组合物和剂型的崩解剂包含但不仅限于琼脂；海藻酸；碳酸钙；微晶纤维素；交联羧甲基纤维素钠；交联聚维酮；波拉克林钾；淀粉羟乙酸钠；马铃薯或木薯淀粉、其他淀粉；预糊化淀粉、其他淀粉；粘土；其他藻胶；其他纤维素；树胶及其混合物。

可用于药物组合物和剂型的润滑剂包含但不仅限于硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇、聚乙二醇、其他二醇类、硬脂酸、十二烷基硫酸钠、滑石粉、氢化植物油（例如花生油、棉子油、葵花子油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油）、硬脂酸锌、油酸乙酯、月桂酸乙酯、琼脂及其混合物。附加的润滑剂包含，例如syloid硅胶（马里兰州巴尔的摩的W.R.Grace Co.制造的AEROSIL200）；合成二氧化硅凝聚型气溶胶（由得克萨斯州普莱诺的Degussa Co.市售）；CAB-O-SIL（由马萨诸塞州波士顿的Cabot Co.销售的热解二氧化硅产品）；及其混合物。如果都使用的话，润滑剂可以按占掺有他们的药物组合物或者剂型的小于约1wt%的量使用。

在一个实施方式中，固体口服剂型包括本文提供的化合物、无水乳糖、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸、无水胶体二氧化硅和明胶。

控释剂型

活性成分（例如本文提供的化合物）可以通过控释手段或通过本领域的普通技术人员熟知的给药设备施用。例子包含但不仅限于那些专利号为：3,845,770；3,916,899；3,536,809；3,598,123；以及4,008,719；5,674,533；5,059,595；5,591,767；5,120,548；5,073,543；5,639,476；5,354,556；5,639,480；5,733,566；5,739,108；5,891,474；5,922,356；5,972,891；5,980,945；5,993,855；6,045,830；6,087,324；6,113,943；6,197,350；6,248,363；6,264,970；6,267,981；6,376,461；6,419,961；6,589,548；6,613,358；6,699,500的美国专利（其中每个以引用方式并入本文）中描述的例子。这类剂型可以用来通过利用，例如羟丙基甲基纤维素、其他聚合物基质、凝胶、可透膜、渗透系统、多层包衣、微粒、脂质体、微球或其组合以提供不同比例的所需释放度从而用于为一种或多种活性成分提供缓释或控释。本领域的普通技术人员已知的合适的控释制剂（包含本文所述的那些控释制剂）可以被容易地选定，与本文提供的活性成分一起使用。因此，提供的组合物包含适于口服的单一剂型，例如但不仅限于适于控释的片剂、胶囊、囊形片和囊片。

所有控释的药剂制品有一个共同的目标，即改善药物疗效，使其优于其非受控对等物取得的疗效。理想的情况下，在医学治疗中使用优化设计的控释药剂其特点是采用最少的原料药在最短的时间内治愈或控制病情。控释制剂的优点包括延长药物活性、减少用药频率并提高患者的依从性。此外，控释制剂可以用来影响起效的时间或其他特征如血药浓度，从而影响副（如不良）作用的发生。

大多数控释制剂设计为最初释放及时产生理想的治疗效果的药物（活性成分）量，并逐步和不断地释放其他药物量以在延长的时间段内保持这一水平的治疗或预防作用。为了在体内保持这种恒定的药物水平，必须以会取代代谢和排出体外的药物量的比率从剂型中释放药物。活性成分的控释可通过各种条件（包括但不仅限于pH值、温度、酶、水或其他生理条件或化合物）促进。

在某些实施方式中，可以使用静脉输注、可植入渗透泵、透皮贴剂、脂质体或其他给药方式给药。在一个实施方式中，可以使用泵(见Sefton,CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14:201(1987);Buchwald等人,Surgery88:507(1980);Saudek等人,N.Engl.J.Med.321:574(1989))。在另一个实施方式中，可以使用聚合材料。在仍然另一实施方式中，可以按技术医师决定的适当位点，将控释系统放置对象体内，从而仅需要全身剂量的一小部分(见，例如Goodson,MedicalApplications of Controlled Release,vol.2,pp.115-138(1984))。关于其他控释系统的评论见Langer的评阅(Science249:1527-1533(1990))。可以将活性成分分散在不溶于体液的固体基质中，例如聚甲基丙烯酸甲酯；聚甲基丙烯酸丁酯；增塑或未增塑的聚氯乙烯、增塑尼龙；增塑的聚对苯二甲酸乙二醇酯、天然橡胶；聚异戊二烯；聚异丁烯；聚丁二烯；聚乙烯；乙烯-乙酸乙烯酯共聚物；有机硅橡胶；聚二甲基硅氧烷；硅氧烷碳酸酯共聚物；亲水性聚合物，例如丙烯酸和甲基丙烯酸酯类的水凝胶、骨胶原；围绕有外部高分子膜的交联聚乙烯醇和交联的部分水解的聚乙酸乙烯酯，如聚乙烯，聚丙烯，乙烯/丙烯共聚物，乙烯/丙烯酸乙酯共聚物，乙烯/乙酸乙烯酯共聚物，有机硅橡胶，聚二甲基硅氧烷，氯丁橡胶，氯化聚乙烯，聚氯乙烯，氯乙烯与乙酸乙烯酯共聚物，偏二氯乙烯，乙烯和丙烯，离聚物聚对苯二甲酸乙二醇酯，丁基橡胶表氯醇橡胶，乙烯/乙烯醇共聚物，乙烯/乙酸乙烯酯/乙烯醇三元共聚物，以及乙烯/乙烯氧基乙醇共聚物。然后，活性成分在释放速率控制步骤中扩散通过外部高分子膜。这类肠胃外组合物中活性成分的百分比高度依赖其特定性质以及对象的需要。

肠胃外剂型

肠胃外剂型可以通过各种途径（包括但不仅限于皮下、静脉内（包括弹丸注射）、肌内和动脉内）向患者施用。在某些实施方式中，肠胃外剂型的施用绕过患者对污染物的自然防御能力，因此，在这些实施方式中，肠胃外剂型是无菌的或者能够在施用至患者前进行消毒。肠胃外剂型的例子包括但不仅限于注射备用的溶液、准备溶解或悬浮在药学上可接受的溶媒中用于注射的干制品、用于注射的混悬液以及乳剂。

可以用来提供肠胃外剂型的合适的溶媒为本领域的技术人员所熟知。例子包括但不仅限于：USP注射用水；水相溶媒（例如，但不仅限于氯化钠注射液、林格氏注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液和乳酸钠林格氏注射液）；水溶性溶媒（例如，但不仅限于酒精、聚乙二醇和聚丙二醇）；以及非水相溶媒（例如，但不仅限于玉米油、棉子油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯）。

提高本文披露的一种或多种所述活性成分的溶解度的化合物也可以被掺入该肠胃外剂型。例如，环糊精及其衍生物可用以提高本文提供的化合物的溶解度。见，例如美国专利号5,134,127，其以引用方式并入本文。

局部和粘膜剂型

本文提供的局部和粘膜剂型包含但不仅限于喷雾剂、气雾剂、溶液、乳剂、混悬液、滴眼液或其他眼用制剂或者本领域技术人员所知的其他剂型。见，例如Remington’s Pharmaceutical Sciences,第16和18版,Mack Publishing,Easton PA(1980、1990和2000)；以及Introduction to Pharmaceutical DosageForms,第4版,Lea&Febiger,Philadelphia(1985)。适用于治疗口腔内粘膜组织的剂型可以制为漱口剂或者口服凝胶。

可用于提供本文包含的局部和粘膜剂型的适当的赋形剂（例如载体和稀释剂）和其他材料为制药领域的那些技术人员所熟知并取决于给定的药物组合物或剂型将施用的具体组织。在一个实施方式中，赋形剂包括但不仅限于水、丙酮、乙醇、乙二醇、丙二醇、1,3-丁二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油及其混合物，以形成无毒的和药学上可接受的溶液、乳剂或凝胶。增湿剂或湿润剂也可加入药物组合物和剂型。附加成分的例子为本领域所熟知。见，例如Remington’s Pharmaceutical Sciences,第16和18版,MackPublishing,Easton PA(1980、1990和2000)。

药物组合物或剂型的pH值也可进行调整，以改善一种或多种活性成分的递送。同样，溶剂载体的极性、其离子强度或张力可以进行调整，以改善递送。如硬脂酸等的化合物也可以被添加到药物组合物或剂型中，以改变一种或多种活性成分的亲水性或亲油性从而改善递送。在其他实施方式中，硬脂酸可以作为制剂的液态溶媒，作为乳化剂或表面活性剂，并作为递送增强剂或渗透增强剂。在其他实施方式中，活性成分的盐、溶剂化物、水合物、前体药物、包合物或立体异构体可用于进一步调整生成的组合物的性质。

试剂盒

在一个实施方式中，本文提供的活性成分不同时或者通过相同的给药途径施用至患者。在另一实施方式中，本文提供试剂盒，所述试剂盒可以简化适量活性成分的施用。

在一个实施方式中，试剂盒包括本文提供的剂型化合物。试剂盒可以进一步包括附加活性成分，例如其他抗炎性、免疫调节性或免疫抑制剂化合物或其组合。附加活性成分的例子包含但不仅限于本文披露的那些。

在其他实施方式中，试剂盒可进一步包括用于施用该活性成分的设备。这类设备的例子包含但不仅限于注射器、点滴袋、补丁（patch）和吸入器。

试剂盒可进一步包括用于移植的细胞或者血液以及可用于施用一种或者多种活性成分的药学上可接受的溶媒。例如，如果活性成分以必须被复原以用于肠胃外给药的固体形式提供，该试剂盒可以包括合适的溶媒的密封容器，其中该活性成分可被溶解以形成适于肠胃外给药的无微粒无菌溶液。药学上可接受的溶媒的例子包含但不仅限于：USP注射用水；水相溶媒（例如，但不仅限于氯化钠注射液、林格氏注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液和乳酸钠林格氏注射液）；水溶性溶媒（例如，但不仅限于酒精、聚乙二醇和聚丙二醇）；以及非水相溶媒（例如，但不仅限于玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯）。

实施例

通过非限制性说明介绍如下实施例。

8.1实施例1：测试化合物对抗人CD3刺激的人T细胞中细胞因子和趋化因子的生产的影响

本实施例利用多重Luminex Technology论证了3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮（测试化合物对抗人CD3刺激的人T细胞中细胞因子和趋化因子的生产的影响。

使用如下缩写：

缩写解释或定义

IL 白介素

G-CSF 粒细胞集落刺激因子

GM-CSF 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子

IFN-γ 干扰素γ

TNF-α 肿瘤坏死因子α

RANTES 活化、正常T细胞表达和分泌调节

该项研究中使用如下材料：

补充有10%FBS、100单位/mL青霉素、100mg/mL链霉素和2mM L-谷氨酰胺的RPMI-1640培养基（Life Technologies）

Human T-细胞富集鸡尾酒(StemCell，Cat#15061)

Luminex Human Cytokine/Chemokine12-Plex Kit(Millipore，Cat#MPXHCYTO-60K-12)

Luminex IS100仪器(Millipore)

抗人CD3抗体，OKT3克隆(eBioscience，Cat#16-0037-85)

将测试化合物制备为含于DMSO的4mM储液。根据制造商的程序，利用

Human T细胞富集鸡尾酒，通过阴性选择从血沉棕黄层中分离得到T细胞。

37℃时，在100μL1X PBS中，用3μg/mL抗人CD3抗体预涂覆所有的96孔板4h。用RPMI-1640完全培养基清洗该板3次，然后进行T细胞检定。然后，在180μL RPMI-1640完全培养基中，以2.5x10⁵细胞/孔的密度，在预先涂覆有抗CD3的板中将T细胞制成板。以一式两份的方式，用10、1、0.1、0.01、0.001、0.0001和0.00001μM的20μL10X滴定的测试化合物处理细胞。最终的DMSO浓度为0.25%。在37℃、5%CO₂条件下，孵育该板48h。48h之后，收获上清液并通过多重流式微珠阵列（CBA）检定法进行细胞因子/趋化因子检测如下：IL-2、IL-3、IL-5、IL-10、IL-13、IL-15、IL-17A、GM-CSF、G-CSF，IFN-γ、TNF-α和RANTES。在Luminex IS100仪器上分析CBA板。

使用GraphPad Prism5.0软件将来自每个供体的数据制图并表达为均值pg/mL±SEM以及DMSO对照物的%±SEM。

测试化合物显示了抗CD3刺激的原代人T细胞中的免疫调节活性，改变了若干细胞因子和趋化因子的生产。用溶媒孵育的受刺激的人T细胞生产的基准水平的细胞因子和趋化因子如下文表1所示。

表1：基准水平的细胞因子和趋化因子

测试化合物提升了受刺激的人T细胞中IL-2、IL-3、IL-5、IL-10、IL-13、GM-CSF、IFN-γ、RANTES和TNF-α的生产。对于大多数细胞因子和趋化因子来说，通过测试化合物对生产的提升在很大程度上是依赖浓度的，但是IL-10和IL-5除外。测试化合物在较低的浓度下提升了IL-10的生产但是在较高的浓度下抑制了对IL-10生产的提升。测试化合物在0.01和0.1μM下将IL-5的生产分别增加了3倍和4倍，这显示在较低和较高浓度下提升幅度均较小。测试化合物对抗CD3刺激的人T细胞中细胞因子和趋化因子的生产的影响表示为生产的绝对量以及溶媒对照细胞的百分比，分别如图1和图2所提供。图2中的虚线表示水平等同于两倍的基准产量（EC₂₀₀）。

8.2实施例2：抗炎活性

对人外周血单核细胞（hPBMC）中3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮（测试化合物）的抗炎活性进行了研究。利用LuminexTechnology测定该化合物的抑制（提升）浓度IC₅₀，以对来自LPS刺激的健康人供体PBMC的促炎性细胞因子/趋化因子和IL-10（抗炎性细胞因子）进行同时分析（simultaneous profiling）。

使用如下缩写：

缩写解释或定义

GM-CSF 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子

IL 白介素

LPS 脂多糖

MCP-1 单核细胞趋化蛋白-1

MDC 巨噬细胞源趋化因子

MIP-1α 巨噬细胞炎性蛋白-1α

MIP-1β 巨噬细胞炎性蛋白-1β

PBMC 外周血单核细胞

PPM 多效途径改性剂

RANTES 活化调节正常T细胞表达和分泌

TNF-α 肿瘤坏死因子-α

来自健康供体的50ml血沉棕黄层从新泽西州血液中心（新泽西州东奥兰治）获得。脂多糖（菌株）（Cat#L-1887）从Sigma购得。用于Luminex xMAPTechnology的具有抗体结合珠的Milliplex试剂盒从Millipore（马萨诸塞州比尔里卡）购得并在检定之前组合成多重格式。

人外周血单核细胞的提纯

将50ml人血沉棕黄层分成25ml等分试样，将两份分别放入50ml锥形管中并向每个锥形管中添加25ml无菌HBSS。通过翻转轻轻地混合该管。将15ml的室温Ficoll-Paque Plus（GE Healthcare（位置）；cat#17-1440-02）分成等分试样，放入四个50ml的锥形管中。然后，25ml的血沉棕黄层/HBSS混合物在该Ficoll上部轻轻并缓慢地分层。将样本按450rpm离心35min。将包含上部分层的血浆吸除并丢弃。将包含单核细胞的界面转入两个50ml的锥形管中。用HBSS填充两个锥形管至总体积50ml并按1200rpm离心10min。在HBSS中再次清洗细胞并按1000rpm旋转10min。用20ml RPMI完全培养基（RPMI/5%人血清/1x青霉素/链霉素/谷氨酰胺）再悬浮细胞沉淀物并计数。

人外周血单核细胞的处理

将100μl（2x106/ml）hPBMC添加到96孔平底板的每个孔中（最终的细胞计数=2x10⁵/孔）并于37℃孵育1h。将20μl（10x）化合物添加到每个测试孔中以及将包含2.5%DMSO的20μl培养基添加到每个对照孔（[DMSO]最终=0.25%）中以及将板于37℃孵育1h。然后用80μl的2.5ng/ml LPS（[LPS]最终=1ng/ml）刺激细胞并于37℃孵育18h。

将50μl上清液从每个孔转入3个新的圆底96孔板并于-20℃存储进行Luminex分析。对于每个样本重复孔操作。

Luminex分析

使用Luminex IS100仪器，根据制造商（Millipore，马萨诸塞州比尔里卡01821）的说明，以多重格式，对上清液样本进行细胞因子分析。使用纯的上清液，以双重格式进行IL-12和GM-CSF分析，使用稀释1:20的上清液，以多重格式进行所有其他细胞因子分析。使用Upstate Beadview软件执行数据分析。使用非线性回归、S形剂量响应，限制顶值为100%以及底值为0%，允许可变斜率，来计算IC₅₀。EC₅₀基于S形曲线的上限值（等于246.9%，代表10μM时，Pomalidomide（对照物）产生的平均IL-10提升度）以及达到100%的下限值。使用GraphPad Prism v5.00执行IC₅₀。数值表示n（重复试验的数目）的均值+SEM（均值标准误差）。

如下文表2和图3中的数据证明，一般地，测试化合物对所检验的多种细胞因子（例如Il-6、IL-8、IL-1β、GM-CSF、MDC、MIP-1α、MIP-1β和TNF-α）具有多样抑制效力。而且，测试化合物以各种效力提升了IL-10、MCP-1和RANTES的生产，如表3和图4中所提供。

表2：测试化合物的细胞因子抑制度总结

表3：细胞因子抑制度总结-0.1μM时的控制%

8.3实施例3：响应IgG/利妥昔单抗而对人自然杀手（NK）细胞功能的影响

在本实施例中，对测试化合物响应IgG/利妥昔单抗而增强人NK细胞功能的能力进行了研究。在对自然杀手（NK）细胞功能的两次检定中比较测试化合物的免疫调节活性（1）IgG-和IL-2诱发的干扰素-γ（IFN-γ）生产以及（2）杀伤活性，如活体外ADCC（抗体依赖性细胞介导的细胞毒性）模型中所测。

使用如下缩写：

缩写解释或定义

ABC-DLBCL 活化B细胞样弥漫大B细胞淋巴瘤

ADCC 抗体依赖性细胞介导的细胞毒性

DMSO 二甲基亚砜

IgG 免疫球蛋白G

IFN-γ 干扰素-γ

NK 自然杀手

PPM 多效途径改性剂

rhIL-2 人重组体白介素-2

在该项研究中使用的材料及其来源如下文提供：

来自健康志愿者的血沉棕黄层（新泽西州血液中心）

Ficoll-Hypaque Plus（宾夕法尼亚州Fisher Scientific Co LLC，Cat#17144002）

补充有10%FBS（胎牛血清）、100单位/mL青霉素、100mg/mL链霉素和2mM L-谷氨酰胺的RPMI-1640培养基（Invitrogen，Cat#21870-076）补充有10%FBS、100单位/mL青霉素、100mg/mL链霉素和2mM L-谷氨酰胺的RPMI-1640培养基（无酚红）（Invitrogen，Cat#11835-030）利妥昔单抗（Rituxan，Roche,Inc.）（Cat#DIN02241927，批号B50177）人AB+血清（加利福尼亚州Gemini Bio Products，Cat#100-512）

CytoTox96非放射性细胞毒性检测试剂盒（威斯康星州Promega，Cat#G1780）

RosetteSep人NK细胞富集鸡尾酒（不列颠哥伦比亚省温哥华Stem CellTechnologies，Cat#15065）

小鼠抗人CD56+共轭的APC（加利福尼亚州BD Biosciences，Cat#555518）

来自血清的人免疫球蛋白G（IgG）（密苏里州圣路易斯Sigma；Cat#I2511-10MG）

人重组体IL-2（明尼苏达州R&D Systems，Cat#202-IL-050/CF）

人IFN-γELISA试剂盒（ThermoFisher，Cat#PIEHIFNG5）

使用如下细胞系：

活化B细胞样弥漫大B细胞淋巴瘤（ABC-DLBCL）：Riva细胞（马里兰州的NCI）

生发中心B细胞样弥漫大B细胞淋巴瘤（GCB-DLBCL）：

WSU-DLCL2（加利福尼亚州Celgene Signal）

Farage（弗吉尼亚州ATCC）

滤泡性淋巴瘤：DoHH2（德国DSMZ）

伯基特氏淋巴瘤（BL）：Raji（弗吉尼亚州ATCC）。

在Ficoll-Hypaque（宾夕法尼亚州Fisher Scientific Co LLC）密度梯度离心之前，根据制造商的说明，使用RosetteSep NK细胞富集鸡尾酒（不列颠哥伦比亚省温哥华Stem Cell Technologies），通过阴性选择，从血沉棕黄层血液中分离得到来自健康供体的NK细胞。将CD56+NK细胞分离为如通过流式细胞计量术（加利福尼亚州BD Biosciences）所测定的～85%纯度。

NK IgG诱发的干扰素–γ（IFN-γ）检定法

4℃时用100μg/mL人IgG（Sigma）涂覆96孔平底板过夜。次日，用冷的1X PBS将未结合的IgG洗掉。然后，在180μL RPMI-1640培养基中按2x10⁵细胞/孔，在涂覆有IgG的96孔板中将NK细胞制成板并添加10ng/mL的rhIL-2（明尼苏达州R&D Systems）。将测试化合物加入20μL体积的DMSO。测试化合物的最终浓度为0.0001、0.001、0.01、0.1、1或10μM。最终的DMSO浓度为0.25%。48h之后，收获上清液并通过ELISA进行IFN-γ生产分析。

针对每个供体，使用GraphPad Prism v5.0软件对用来测定测试化合物响应固定化的IgG和rhIL-2刺激而提升NK细胞IFN-γ生产的能力的数据进行分析。数据按两种方法表示：（1）表示为生产的IFN-γ的绝对量（pg/mL±SEM）和（2）存在1μM Pomalidomide时，表示为IFN-γ的产量百分比。使用非线性回归、S形剂量响应，限制顶值为100%以及底值为0%，允许可变斜率，来计算EC₅₀值。测试化合物的EC₅₀是0.0015μM。

测试化合物响应固定化的IgG和IL-2刺激而以剂量依赖性方式提升了NK细胞IFN-γ的生产。结果分别如图5中提供（表示为生产的IFN-γ的pg/mL）。图6提供的结果表示为相对存在1μM Pomalidomide时生产的IFN-γ，测试化合物对生产的IFN-γ增加的百分比。图5和图6中绘制的每个值表示12-14个测定值的均值±SEM。

ADCC检定法

在含于100μL的RPMI-1640培养基的96孔U底板中播种经提纯的NK细胞（5x10⁴），所述培养基不含苯酚（Invitrogen），加有2%人AB+血清（加利福尼亚州Gemini Bio Products）；以及用10ng/mL rhIL-2和利妥昔单抗（5μg/mL）加上浓度从0.01到10μM不一的测试化合物处理所述细胞48h。

37℃时，用5μg/mL利妥昔单抗处理各种淋巴瘤细胞系（GCB-DLBCL：WSU-DLCL2和Farage；滤泡性淋巴瘤：DoHH2；ABC-DLBCL：Riva；伯基特氏淋巴瘤[BL]：Raji）30min。将未结合的利妥昔单抗洗掉，按10:1的比率将靶细胞（5x103/100μL/孔）添加到预处理的效应细胞（NK细胞）中，以及于37℃将两者共孵育4h。对照条件由NK细胞以及（1）单独用培养基、（2）仅用利妥昔单抗或（3）单独用IL-2处理的肿瘤细胞组成。使用上清液（50μL）的等分试样，利用标准的乳酸脱氢酶（LDH）释放检定法对NK细胞对肿瘤细胞的细胞毒性进行分析，以测量ADCC（威斯康星州Promega的CytoTox96非放射性细胞毒性检定法）。单独通过靶细胞的自发释放率如用溶解于1%Triton X-100的靶细胞所测定的，是最大释放率的<15%。通过减掉相应稀释率时效应细胞的自发释放率而纠正了实验释放率。具体溶解的百分比根据下式计算：

具体溶解的百分比=100x（实验–效应自发–靶自发）/（靶最大–靶自发）。

测试化合物诱发了所有细胞系中剂量依赖性NK细胞调节的ADCC。对每个细胞系执行三个实验以及在每个实验中对来自三个供体的每个的样本进行测试。数据如图8所示，表示为9个测定值的均值±SEM。

8.4实施例4：对原代人B细胞分化模型中转录因子表达的影响

在本实施例中，使用活体外人B细胞分化培养系统研究了3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮（测试化合物）对控制浆细胞分化以及免疫球蛋白生产的转录因子表达的影响。

在本实施例中使用如下缩写：

缩写或专业术语	解释或定义
		BCL6	B细胞淋巴瘤6蛋白
BLIMP-1	B-淋巴细胞诱发的成熟蛋白1
		EtOH	乙醇
FBS	胎牛血清
		DMSO	二甲基亚砜
IRF-4	干扰素调节因子4
		MFI	平均荧光强度
PAX5	成对盒蛋白Pax-5
		SLE	系统性红斑狼疮
XBP-1	X盒结合蛋白1

来自健康供体的50ml血沉棕黄层从新泽西州血液中心获得。SLE狼疮PBMC样本从Conversant Bio（亚拉巴马州亨茨维尔35806）获得。

该项研究中使用如下细胞培养试剂。

项目	来源
		Iscoves改良Dulbecco培养基	Invitrogen
胎牛血清	Lonza
		人胰岛素	Sigma

项目	来源
		人运铁蛋白	Sigma
青霉素/链霉素	Lonza
		重组体人IL-2	R&D Systems
重组体人IL-6	R&D Systems
		重组体人IL-10	R&D Systems
重组体人IL-15	R&D Systems
		CD40配体/TNFSF5/组氨酸标签	R&D Systems
多组氨酸小鼠IgG1抗体	R&D Systems
		ODN2006-人TLR9配体	Invivogen
人干扰素ΑA	PB interferon source

流式细胞计量术分析中使用如下。

项目	来源
		FITC抗人CD19	IBD Pharmigen
FITC抗人CD20	IBD Pharmigen
		PE抗人CD27	IBD Pharmigen
PE抗人CD38	IBD Pharmigen
		APC抗人CD38	IBD Pharmigen
FITC抗小鼠IgG1k同种型	IBD Pharmigen
		PE抗小鼠IgG1k同种型	IBD Pharmigen
FITC抗小鼠IgG2bk同种型	IBD Pharmigen
		APC抗小鼠IgG1k同种型	IBD Pharmigen
染色缓冲液	IBD Pharmigen

将如下基因引物用于RT-PCR：

项目	来源
		AICDA基因表达检定法	Applied Biosystem
BCL6基因表达检定法	Applied Biosystem
		GAPDH基因表达检定法	Applied Biosystem
IGJ基因表达检定法	Applied Biosystem
		IRF4基因表达检定法	Applied Biosystem
PAX5基因表达检定法	Applied Biosystem
		PRDM1基因表达检定法	Applied Biosystem
XBP1基因表达检定法	Applied Biosystem

逆转录试剂盒	Applied Biosystem
		Master Mix	Applied Biosystem

8.4.1hPBMC的提纯

将50ml人血沉棕黄层分成25ml等分试样，将两份分别放入50ml锥形管中并向每个锥形管中添加25ml无菌HBSS。通过颠倒轻轻地混合该管。将15ml的室温Ficoll-Paque Plus（GE Healthcare；cat#17-1440-02）分成等分试样，放入四个50ml的锥形管中。然后，25ml的血沉棕黄层/HBSS混合物在该Ficoll上部轻轻并缓慢地分层。将样本按450rpm离心35min。将包含上部分层的血浆吸除并丢弃。将包含单核细胞的界面转入两个50ml的锥形管中。用HBSS填充两个锥形管至总体积50ml并按1200rpm离心10min。在HBSS中再次清洗细胞并按1000rpm旋转10min。用20mL B细胞培养基（Iscoves+10%PFBS、1%P/S和5μg/mL人胰岛素）再悬浮细胞沉淀物并用细胞计数器计数。

8.4.2B细胞富集CD19+

将经提纯的PBMC计数并按2x10⁸细胞/管分成等分试样。按1200rpm将细胞离心5min，然后丢弃上清液。将细胞再悬浮于4mL的Robosep缓冲液（Stemcell Technologies cat#20104）中以及转入14mL的聚苯乙烯圆底管（BDcat#352057）并充分混合。然后添加200μL的EasySep人B细胞富集鸡尾酒（Stemcell Technologies cat#19054）。将样本用漩涡混合器处理并室温孵育10min。接下来，向该管添加300μL的EasySep磁性颗粒（经漩涡混合器处理）（Stemcell Technologies cat#19054）。将样本用漩涡混合器处理并室温孵育5min。5min孵育之后，向该管添加5mL的Robosep缓冲液并通过移液器来回吸（pipetting up and down）充分混合。紧接着将该管放入银磁铁（StemcellTechnologies cat#19054）中并室温孵育5min。孵育之后，以一个连续的动作翻转磁铁和管并将所需的组分倒入50mL锥形管。对其余的PBMC（每个供体）重复这些程序并组合起来。将组合起来的组分按1200rpm离心5min，然后丢弃上清液并将细胞再悬浮于5mL的B细胞培养基中。用细胞计数器对分离的CD19+细胞计数。

8.4.3B细胞分化检定法

步骤1—B细胞活化—第0天到第4天：通过将50μg/mL人运铁蛋白添加到B细胞培养基（Iscoves+10%PFBS、1%P/S和5μg/mL人胰岛素）中制备新鲜的B细胞鸡尾酒。通过0.22μM滤器滤出实验需要的所需体积的培养基。向细胞添加B细胞分化鸡尾酒（最终浓度）：重组体人IL-2（20U/mL）、IL-10（50ng/mL）、IL-15（10ng/mL）、CD40配体/TNFSF5/组氨酸标签（50ng/mL）、多组氨酸小鼠IgG1抗体（5μg/mL）以及ODN2006-人TLR9配体（10μg/mL）。向6孔平底板的每个孔添加5ml（1x10⁵/ml）的CD19+B细胞（最终细胞计数=5x10⁵/孔）。将5μL（1x）±化合物/DMSO添加到每个测试孔（0.1%最终DMSO）并于37℃孵育4天。

步骤2—成浆细胞生成—第4天到第7天：收获细胞并用细胞计数器计数；将等分试样移出进行流动分析，用PBS清洗其余的细胞。通过将1μg/mL人运铁蛋白添加到B细胞培养基（Iscoves+10%PFBS、1%P/S和5μg/mL人胰岛素）中制备新鲜的B细胞鸡尾酒。通过0.22μM滤器滤出实验需要的所需体积的培养基。向细胞添加B细胞分化鸡尾酒（最终浓度）：重组体人IL-2（20U/mL）、IL-10（50ng/mL）、IL-15（10ng/mL）、IL-6（50ng/mL）。添加新鲜的B细胞鸡尾酒以及将细胞转回原来的孔中并使体积恢复到5mL。将5μL（1x）±化合物/DMSO添加到每个测试孔（0.1%最终DMSO）并于37℃孵育4天。

在第7天，收获细胞并用细胞计数器计数。然后将细胞分出进行流动分析，而将其余的细胞用RLT缓冲液溶解并于-80℃存储用于RNA提取和基因表达。将上清液分成等分试样并于-20℃冷冻，用于免疫球蛋白检定。

8.4.4测试化合物储液的制备和稀释物

称取测试化合物并溶解于无菌100%DMSO（二甲基亚砜；俄亥俄州克利夫兰Research Organics）中，制成40mM储液。基于实验设计，在检定中使用了该40mM储液的稀释物来获得最终的测试化合物浓度。

8.4.5RNA提取和基因表达

收获分化的B细胞（见4.3.3部分）并采用QIAGEN RNeasy迷你离心柱试剂盒，用Qiacube RNA提取仪器（加利福尼亚州瓦伦西亚Qiagen）将其用于总核糖核酸（RNA）制备。采用逆转录酶试剂盒（Applied Biosystems），用热循环仪[加拿大魁北克圣布鲁诺MJ Research;Inc.）将提纯的RNA逆转录入cDNA。以一式三份的方式，使用7500RT-PCR系统（Applied Biosystems）执行基因表达检定。针对每个样本，执行甘油醛3-磷酸脱氢酶基因表达检定对照并将其用作归一化对照。对于每种基因，将每个实验内的样本归一化为仅针对特定时间点的0.1%DMSO处理。

收获上清液（来自8.4.3部分）并通过ELISA进行IgG和IgM生产分析（纽约州水牛城ZeptoMetrix Corp.）。

8.4.6细胞表型

将分化的B细胞（见4.3.3部分）收获、计数并按约1x106细胞/4mL管或更小的浓度分为等分试样。用染色缓冲液将细胞清洗1X。接下来再用10%人血清/PBS将细胞阻滞20-30min。阻滞之后，按1200rpm将细胞离心5min并丢弃上清液。根据实验设计，将20μL各种BD Pharmigen流式抗体加入100μL剩余的缓冲液中。于4℃将细胞染色20-30min。然后用染色缓冲液将细胞清洗2X并丢弃上清液。接下来，向管中添加500μL染色缓冲液或PBS。立即分析样本或置于4℃过夜。用小鼠抗人CD20和CD38、CD19和CD27或各自的同种型对照物对细胞染色。使用FACSCanto流式细胞仪、FACSDiva分析软件（BD Bioscience）和FlowJo分析软件分析所有样本。

8.4.7细胞存活性

要测定活的细胞数，用0.4%台盼蓝对B细胞（见4.3.3部分）染色并使用Countess自动细胞计数器（Invitrogen）对复样中活的细胞计数。

使用GraphPad Prism5.0软件为数据制图。使用非线性回归、S形剂量响应，限制顶值为100%以及底值为0%，允许可变斜率，来计算IC₅₀值。测试化合物的Ig检定结果表示为相对于对照DMSO值的抑制百分比。

测试化合物抑制IgG和IgM的正常和SLE PBMC生产的能力如下：

8.5实施例5：对博来霉素诱发的真皮纤维化的预防和治疗的影响

在本实施例中，研究了3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮（测试化合物）对实验纤维化的进展和博来霉素诱发的真皮纤维化的小鼠模型中已形成的纤维化的衰退的影响。

在本实施例中使用如下缩写：

缩写或专业术语	解释或定义
		ANOVA	方差分析
α-SMA	平滑肌肌动蛋白
		CMC	羧甲基纤维素
ECM	细胞外基质
		NaCl	氯化钠
PO	口服
		QD	每日一次给药

缩写或专业术语	解释或定义
		SSc	系统性硬化症

该项研究中使用DBA/2小鼠。该项研究中，每个治疗组使用八只动物。

将小鼠安放于具有食物和水等的标准条件下的畜舍中。

在蒸馏H₂0中制备溶媒0.5%羧甲基纤维素（CMC）/0.25%吐温80并于磁力搅拌器（添加0.5g CMC；Sigma#C9481）和0.25ml到99.75ml吐温80（Sigma#P8074）上溶解过夜，制成总的100ml0.5%CMC/0.25%吐温80）。

称取测试化合物粉末并于每日现悬浮于溶媒0.5%CMC/0.25%吐温80中，以避免药物在水性培养基中水解。将化合物悬浮而非溶解于该溶媒种。采用机动的Eberbach组织均质器，用特氟隆杵和研钵（Potter-Elvehjem组织研磨器）将制剂均质化。这些研究中所用的每日药物储液浓度是3mg/ml。

博来霉素从埃尔朗根-纽伦堡大学（University of Erlangen-Nuremberg）的药房处获得并每周新鲜制备一次。通过在上背部1.5cm²处的指定区域，按0.5mg/ml浓度，隔日局部皮内注射溶解于0.9%NaCl的100μl博来霉素在6周大的DBA小鼠体内诱发皮肤纤维化。

研究设计

博来霉素诱发的真皮纤维化的小鼠模型被广泛用于评估抗纤维化疗法。在该模型中，通过隔日皮内注射博来霉素达3周诱发局灶性真皮纤维化。该模型类似于SSc的早期、炎性阶段。为评估对预防纤维化的潜在影响，与第一次博来霉素注射同时启动治疗。为研究测试化合物对预防活体内博来霉素诱发的真皮纤维化的影响，将治疗分为如下几组：

·对照组：皮内注射NaCl达3周。治疗包括施用溶媒（0.5%CMC/0.25%吐温80）。

·未治疗的博来霉素组：皮内注射博来霉素达3周。施用溶媒（0.5%CMC/0.25%吐温80）。

·测试化合物组：皮内注射博来霉素达3周。按30mg/kg施用测试化合物；PO、QD。

·阳性对照组：皮内注射博来霉素达3周。注射伊马替尼（50mg/kg；IP、QD）。已有显示，甲磺酸伊马替尼在博来霉素诱发的真皮纤维化中发挥了强有力的抗纤维化作用。见Akhmetshina A.等人,ArthritisRheum2009;60(1):219-224。

为评估纤维化的衰退，使用了博来霉素诱发的真皮纤维化的修正模型。使小鼠预先经受博来霉素，以诱发严重的皮肤纤维化。一组接受测试化合物的治疗，同时继续经受博来霉素达另外3周。将该组的结果与经受博来霉素6周的小鼠（预防进一步进展）和经受博来霉素3周接着经受NaCl另外3周（诱发衰退）的小鼠比较。该项衰退研究中使用了如下几组：

·对照组：皮内注射NaCl达6周。对照治疗包括施用溶媒。

·未治疗的博来霉素1组（衰退）：皮内注射博来霉素达3周，接着皮内注射NaCl达另外3周。治疗包括施用溶媒。未治疗的博来霉素2组（预防进展）：皮内注射博来霉素达6周。治疗包括施用溶媒。

·测试化合物组：皮内注射博来霉素达6周。按30mg/kg施用测试化合物；PO、QD。

·阳性对照组：皮内注射博来霉素达6周。注射伊马替尼（50mg/kg；IP、QD）

实验程序

通过将免疫组织化学用于α平滑肌肌动蛋白（α-SMA），用苏木精、曙红和活化的成纤维细胞染色测定真皮厚度。通过修正Rodnan皮肤得分测定的真皮厚度是目前SSc中人类抗纤维化药剂的临床试验中最常见的首要结果。用苏木精/曙红给皮肤部分染色，以得到对组织结构的更好的可视化效果。用Nikon Eclipse80i显微镜（荷兰巴德霍维多普Nikon），通过测量每个小鼠4处不同的皮肤部分表皮–真皮结合处和真皮–皮下脂肪结合处之间的最大距离对真皮厚度进行分析。评估由2名独立的检查员执行。

为了量化成肌纤维细胞，将皮肤部分脱蜡并用5%牛血清白蛋白孵育60min。通过用单克隆抗–α-SMA抗体（克隆1A4；德国斯德海姆Sigma-Aldrich）室温孵育2h，接着用3%过氧化氢孵育10min，检测到α-SMA阳性细胞。将用辣根过氧化物酶（德国汉堡Dako）标记的山羊抗兔子抗体用作第二抗体。用3,3′-二氨基联苯胺四盐酸盐（Sigma-Aldrich）使α-SMA的表达可视化。将单克隆小鼠IgG抗体（加利福尼亚州圣迭戈Calbiochem）用作对照物。

另外，会用SirCol胶原蛋白检定法测量受损皮肤中胶原蛋白的量；将所有小鼠的RNA和血浆存储，用于进一步分析。

在博来霉素真皮纤维化小鼠模型中，测试化合物显著地减小了受损皮肤的真皮厚度。每日一次口服（PO、QD）30mg/kg的测试化合物以大约22±0.49%（p<0.0001）显著地预防了真皮变厚。

苏木精和曙红染色的皮肤部分的代表性显微照片如图8所示。通过测量表皮–真皮结合处和真皮–皮下脂肪结合处之间的最大距离评估真皮厚度。结合点之间所划的线显示治疗组中的相对厚度。

为测定治疗对成纤维细胞活化的影响，对受损皮肤部分的α-SMA+成肌纤维细胞计数。每日一次口服（PO、QD）30mg/kg的测试化合物将成肌纤维细胞的数目减少了30±0.23%（p<0.0001）。

对博来霉素诱发的真皮纤维化衰退的影响

在设计用以研究纤维化潜在衰退的修正博来霉素模型中，还确定了测试化合物对纤维化进展的抑制效果。测试化合物将博来霉素诱发的真皮变厚的真皮厚度减小了22±0.28%（p<0.0001）。图9显示代表性的苏木精和曙红染色的皮肤部分的显微照片。通过测量表皮–真皮结合处和真皮–皮下脂肪结合处之间的最大距离评估真皮厚度。结合点之间所划的线显示治疗组中的相对厚度。

本发明的范围不局限于本文所描述的具体实施方式。事实上，前文的说明和附图使得，除了所描述的那些，本发明的其他各种修改对本领域的技术人员来说，也将是显而易见的。这样的修改都将落入所附权利要求书的范围内。

本文引用各种出版物、专利和专利申请，其公开的全部内容以引用方式并入。

Claims

1.一种用于治疗、预防或管控免疫相关性疾病或炎性疾病的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体、外消旋混合物、共晶体、包合物或多晶型物。

2.权利要求1所述的方法，其中该疾病是系统性红斑狼疮、硬皮病、干燥综合征、ANCA诱发的血管炎、抗磷脂综合症或重症肌无力。

3.权利要求1或2所述的方法，其中该疾病是系统性红斑狼疮。

4.权利要求1-3任一项所述的方法，其中疾病是重度系统性红斑狼疮。

5.权利要求1或2所述的方法，其中该疾病是硬皮病。

6.权利要求5所述的方法，其中该硬皮病是局灶性硬皮病、系统性硬皮病、局限性硬皮病或弥漫性硬皮病。

7.权利要求6所述的方法，其中该系统性硬皮病包括CREST综合症。

8.一种用于减少、抑制或预防系统性红斑狼疮的症状的方法，该方法包括向患有该系统性红斑狼疮的症状的患者施用有效量的3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体或外消旋混合物，其中该症状选自如下：关节疼痛、关节肿胀、关节炎、深吸气时胸部疼痛、疲劳、没有其他原因的发烧、全身不适、不安、脱发、口疮、淋巴结肿大、对日光敏感、皮疹、头痛、麻木、刺痛、发作、视力问题、人格改变、腹痛、恶心、呕吐、异常的心律、咳血和呼吸困难、肤色有斑和雷诺氏现象。

9.一种用于减少、抑制或预防硬皮病的症状的方法，该方法包括向患有该硬皮病的症状的患者施用有效量的3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体、外消旋混合物、共晶体、包合物或多晶型物，其中该症状选自如下：（i）皮肤逐渐硬化、增厚和紧绷；（ii）皮肤变色；（iii）四肢麻木；（iv）皮肤发亮；（v）皮肤表面下，喷射垩白液体的白色小肿块；（vi）雷诺氏食管功能障碍；（vii）毛细管扩张；（viii）关节疼痛和/或僵硬；（ix）手部和足部肿胀；（x）皮肤瘙痒；（xi）指部僵硬和弯曲；（xii）某些关节外部（例如指节和肘部）上有溃疡；（xiii）消化问题，例如心口灼热、吞咽困难、腹泻、过敏性肠和便秘；（xiv）疲劳和虚弱；（xv）气短；（xvi）关节炎；（xvii）脱发；（xviii）内脏问题；（xix）指部溃疡；以及（xx）指部自动断离。

10.一种用于改善硬皮病患者的修正Rodnan皮肤得分、减小或改善其皮肤厚度、减小或改善其皮肤硬结、改善其肺功能、改善其皮肤病生活质量指数、改善其一氧化碳弥散能力、改善其Mahler呼吸困难指数、改善其圣乔治呼吸系统疾病问卷得分、改善其UCLA硬皮病临床试验聚生体胃肠道得分、改善其流量调节的扩张或改善或延长其六分钟步行距离的方法，该方法包括向该患者施用有效量的3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉3(4H)-基)哌啶-2、6-二酮或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体、外消旋混合物、共晶体、包合物或多晶型物。

11.权利要求1-10任一项所述的方法，该方法进一步包括施用第二活性剂，该第二活性剂是抗炎化合物或免疫调节性化合物。

12.权利要求1-11任一项所述的方法，其中该有效量为约0.005mg/kg患者体重到约10mg/kg患者体重。

13.一种用于调节B细胞活性的方法，该方法包括使该细胞接触有效量的3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮或其药学上可接受的盐、固体形式、溶剂化物、水合物、立体异构体、互变异构体、外消旋混合物、共晶体、包合物或多晶型物。

14.一种用于调节T细胞活性的方法，该方法包括使该细胞接触有效量的3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮或其药学上可接受的盐、固体形式、溶剂化物、水合物、互变异构体、立体异构体、外消旋混合物、共晶体、包合物或多晶型物。