CN102276571A - 一种高纯度表没食子儿茶素的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种从粗品茶多酚制备高纯度表没食子儿茶素(EGC)的制备方法，属于天然产物化学的技术领域。采用以茶多酚粗品为原料，经大孔吸附树脂吸附、低浓度的脂肪醇洗脱、浓缩、结晶、干燥后可得到含量大于90％的EGC。本发明的制备工艺所得到的EGC含量高，同时操作简单方便，同时生产成本低，利于工业化生产，又可以满足现代功能食品、保健品等领域的市场需求。

Description

一种高纯度表没食子儿茶素的制备方法
技术领域
本发明属于天然产物化学的技术领域，具体涉及一种从粗品茶多酚中制备高含量表没食子儿茶素的方法。
背景技术
茶多酚是一种从绿茶中提取的多酚类成分，是茶叶中的主要活性成分。主要由没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate，EGCG)、表儿茶素没食子酸酯(Epicatechin-3-gallate，ECG)、表没食子儿茶素(Epigallocatechin，EGC)和表儿茶素(Epicatechin，EC)等组成。小叶种绿茶中EGCG和EGC含量较高，分别占4％和1％左右。
不同的茶儿茶素单体的生理活性存在一定差异，EGCG对于预防和治疗恶性肿瘤、高血脂症肥胖症、神经退行性疾病等有良好作用；ECG具有良好的抗菌作用；EGC能刺激骨骼形成，帮助减缓骨骼老化。茶多酚中EGCG和ECG属于酯型儿茶素，苦涩味较重，而EGC和EC属于游离型儿茶素，味爽口不苦涩，这对于开发功能型茶饮料尤为重要。
目前文献报道或专利公开的EGCG制备技术较多，但EGC的制备技术相对较少。主要包括制备型高效液相色谱法和高速逆流色谱法制备分离，属于实验室分离范畴，制备量通常只有数毫克，无法进行工业化生产。公开号为CN101134941和CN101113411的专利介绍了一种诱导制备EGCG酯酶及用该酶生产EGC和没食子酸的方法。该方法EGC转化率和得率较高，适用于工业化大规模生产，但以米曲霉EGCG水解制备EGC的方法，水解后的EGC和没食子酸还要进行进一步分离，制备成本较高。
发明内容
针对以上现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种从粗品茶多酚中提取纯化出高含量EGC的方法。其核心技术是采用茶多酚为原料，经溶解、大孔吸附树脂进行吸附、低浓度的脂肪醇洗脱、浓缩洗脱液、结晶、冷冻干燥，从而获得高含量EGC，含量经高效液相色谱检测可达到92-95％。
本发明目的通过以下技术方案实现：
1.取一定含量的茶多酚粗品，加适量纯净水作溶剂进行加热提取，提取液过滤，残渣弃去；
2.将溶解后的茶多酚溶液通过装有非极性大孔吸附树脂的层析柱；
3.用纯净水冲洗树脂；
4.用低浓度的脂肪醇洗脱树脂，当流出液有颜色变化时，开始收集流出液；
5.浓缩洗脱液，至浓缩液达到5-30％；
6.浓缩液在4℃的条件下放置24h，结晶；
7.将晶体用少量纯净水冲洗，过滤后采用冷冻干燥的方法进行干燥，得到粉末状的EGC。
在一个实施方案中，步骤1中为茶多酚粗品为经乙酸乙酯萃取或聚酰胺树脂进行吸附分离所获得的小叶种绿茶提取物，所述纯净水体积为茶多酚粗品的1-20倍量(M∶V)，优选2-15倍，最优10倍。
在一个实施方案中，步骤2中为大孔吸附树脂，优选美国罗门哈斯的Amberlite XAD-2、日本三菱公司的HP-20和我国D101与AB-8。
在另一个实施方案中，步骤4中脂肪醇为C1-C3伯醇和仲醇，优选甲醇和乙醇。所述脂肪醇浓度为5-15％。所述脂肪醇洗脱体积为1-10倍柱体积，优选2-5倍柱体积，最优3倍柱体积。
技术效果：
1.采用柱层析分离技术，大大简化了目前报道的各种工艺，操作简单方便，同时生产成本低，利于工业化生产。
2.按照本发明提供的生产工艺生产出来的EGC含量经高效液相色谱检测可达到92-95％，可以满足现代功能食品、保健品等领域的市场需求，具有很好的市场优势。
附图说明
图1粗品茶多酚高效液相色谱图
图2经纯化后样品中EGC高效液相色谱图
具体实施方式
下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实施例的任一个或类似实例。
实施例1
将100kg粗品茶多酚原料(EGC含量为9.87％)加入500kg纯净水，加热溶解，冷却后过滤，滤液以0.8倍柱体积/小时的流速通过型号为HP-20的大孔吸附树脂。然后用8倍于柱体积的纯净水清洗树脂；再用5倍于柱体积的15％甲醇以1倍柱体积/小时的流速解析，收集解析液，浓缩至5-30％，浓缩液在4℃的条件下放置24h，结晶；将晶体用少量纯净水冲洗，过滤后采用冷冻干燥的方法进行干燥，得到粉末状的EGC。所得EGC样品进行纯度，其检测仪器为Agilentl100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，色谱柱为Shim-pack ODS C18柱(4.6×150mm，5μm)，流动相流动相：A相，水；B相，甲酰胺∶甲醇∶冰醋酸40∶2∶1.5(体积比)，线性梯度进行洗脱，13min从14％增加到24％，22min增加到34％，再维持6min。检测波长：278nm nm；柱温30℃；流速：1.0mL/min；上样量为10μL。检测所得到EGC的纯度为95.37％，结果如表1和图2所示。
实施例2
将100kg粗品茶多酚原料(EGC含量为9.87％)加入5000kg纯净水，加热溶解，冷却后过滤，滤液以1倍柱体积/小时的流速通过型号为AB-8的大孔树脂。然后用10倍于柱体积的纯净水清洗树脂；再用3倍于柱体积的5％乙醇以0.8倍柱体积/小时的流速解析，收集解析液，浓缩至5-30％，浓缩液在4℃的条件下放置24h，结晶；将晶体用少量纯净水冲洗，过滤后采用冷冻干燥的方法进行干燥，得到粉末状的EGC。经HPLC检测EGC含量达93.24％，结果如表1所示。
实施例3
将200kg粗品茶多酚原料(EGC含量为9.87％)加入1600kg纯净水，加热溶解，冷却后过滤，滤液以0.8倍柱体积/小时的流速通过型号为D-101的大孔树脂。然后用5倍于柱体积的纯净水清洗树脂；再用2倍于柱体积的15％乙醇以0.8倍柱体积/小时的流速解析，收集解析液，浓缩至5-30％，浓缩液在4℃的条件下放置24h，结晶；将晶体用少量纯净水冲洗，过滤后采用冷冻干燥的方法进行干燥，得到粉末状的EGC。经HPLC检测EGC含量达92.66％，结果如表1所示。
实施例4
将100kg粗品茶多酚原料(EGC含量为9.87％)加入1500kg纯净水，加热溶解，冷却后过滤，滤液以1.0倍柱体积/小时的流速通过型号为AmberliteXAD-2的大孔树脂。然后用2倍于柱体积的纯净水清洗树脂；再用8倍于柱体积的5％甲醇以1.0倍柱体积/小时的流速解析，收集解析液，浓缩至5-30％，浓缩液在4℃的条件下放置24h，结晶；将晶体用少量纯净水冲洗，过滤后采用冷冻干燥的方法进行干燥，得到粉末状的EGC。经HPLC检测EGC含量达91.83％，结果如表1所示。(注：柱体积是指所装大孔树脂的柱体积)
表1
Figure BSA00000576190400041

Claims (4)

1.一种从粗品茶多酚制备高纯度表没食子儿茶素的制备方法，其步骤包括：
(1)将茶多酚粗品加入一定量的纯净水，加热溶解；
(2)将溶解后的茶多酚溶液通过装有非极性大孔吸附树脂的层析柱；
(3)用纯净水冲洗树脂；
(4)用低浓度的脂肪醇洗脱树脂，当流出液有颜色变化时，开始收集流出液；
(5)浓缩洗脱液，至浓缩液达到5-30％；
(6)浓缩液在4℃的条件下放置24h，结晶，得到结晶物；
(7)将晶体用少量纯净水冲洗，过滤后采用冷冻干燥的方法进行干燥，得到粉末状的EGC。
2.根据权利要求1的方法，步骤1中茶多酚粗品为经乙酸乙酯萃取或聚酰胺树脂进行吸附分离所获得的小叶种绿茶提取物，所述纯净水体积为茶多酚粗品的1-20倍量(M∶V)，优选2-15倍，最优10倍。
3.根据权利要求1或2的方法，其中步骤2中大孔吸附树脂，优选日本三菱公司的HP-20、美国罗门哈斯公司的Amberlite XAD-2和我国D101与AB-8。
4.根据权利要求1或2的方法，其中步骤4中脂肪醇为C1-C3伯醇和仲醇，优选甲醇和乙醇。所述脂肪醇浓度为为5-15％。所述脂肪醇洗脱体积为1-10倍柱体积，优选2-5倍柱体积，最优3倍柱体积。
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Assignee: China Tea (Hu'nan) Co., Ltd.

Assignor: Hunan Agricultural University

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License type: Exclusive License

Record date: 20140528

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