CN106279091A - 一种表儿茶素没食子酸酯单体的制备方法 - Google Patents

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叶艳
龙菲菲
罗祥
马松
吴世华
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Hubei Zhongxin Biotech Co Ltd
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Hubei Zhongxin Biotech Co Ltd
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/58—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4
    • C07D311/60—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with aryl radicals attached in position 2
    • C07D311/62—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with aryl radicals attached in position 2 with oxygen atoms directly attached in position 3, e.g. anthocyanidins

Abstract

本发明提出了一种表儿茶素没食子酸酯单体的制备方法，包含如下步骤：（1）以小叶种儿茶素提取物为原料，加入纯水，配置成浓度为100‑200mg/ml的溶液，制得小叶种儿茶素溶液；（2）将小叶种儿茶素提取物的溶液通过装有吸附树脂的层析柱，并用乙醇洗脱剂进行分级洗脱，收集洗脱液，将所述洗脱液浓缩至16‑18波美度，得浓缩液；（3）将浓缩液在0‑4℃温度下放置48～72小时，按照浓缩液总质量0.1～0.2%的比例添加少量表儿茶素没食子酸酯单体对浓缩液进行结晶，离心、干燥，得到表儿茶素没食子酸酯单体。本发明所述制备方法简便，周期短，成本低，符合环保和安全的要求，提取率及产品纯度高，适宜规模型工业化生产。

Description

一种表儿茶素没食子酸酯单体的制备方法
技术领域
本发明属于儿茶素的制备领域，具体涉及一种表儿茶素没食子酸酯单体的制备方法。
背景技术
儿茶素是茶叶中最重要的生理活性物质，约占多酚类80%，属黄烷醇类，其基本结构是α-苯基苯并吡喃，分为酯型和非酯型两类，结构上的主要区别在于氢基取代的数量和位置不同。儿茶素主要由表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)和表儿茶素(EC)等单体组成。儿茶素具有明显的抗衰老、防癌抗突变、降脂减肥、降低血糖、血脂和胆固醇、预防心血管疾病等药理功能，已广泛应用于食品加工、医药保健和日用化工等领域。卫生部已批准了茶多酚为我国食品添加剂。儿茶素药理功能是多种有效活性组分综合作用的结果，但各儿茶素单体均表现出专化性机能，尤其是酯型儿茶素EGCG和ECG，它们在许多方面表现出的功效远远大于其他儿茶素组分，成为儿茶素分离、纯化与临床应用研究的焦点.目前，国内外对于EGCG结构与功效的研究已趋于完善，并已成功地开发研制出EGCG单体，但在ECG分离纯化方面的报道则相对较少,据国外最新研究成果表明，ECG在抑制人体病毒侵染、清除脂质自由基方面作用显著．同时，ECG具有极强的抑菌活性，可开发成一种天然的类抗生素物质．用大孔吸附树脂柱色谱法制备高ECG型儿茶素，摒弃传统的提取分离工艺主要包括离子沉淀法、有机溶剂萃取法，由于茶叶的功能成分复杂，从茶叶中制取高纯度的儿茶素单体具有相当难度。迄今，国内外尚未有ECG 单体产业化制备方面的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种表儿茶素没食子酸酯单体的制备方法，该方法简便，没用毒性强的有机溶剂，制备周期短，成本低，符合环保和安全的要求，表儿茶素没食子酸酯单体的提取率及产品纯度高，适宜规模型工业化生产。
本发明提供的技术方案是：一种表儿茶素没食子酸酯单体的制备方法，包括如下步骤：
（1）以小叶种儿茶素提取物为原料，加入纯水溶解小叶种儿茶素提取物，配置成浓度为100-200mg/ml的溶液，制得小叶种儿茶素溶液；
（2）将小叶种儿茶素提取物的溶液通过装有吸附树脂的层析柱，并用乙醇水溶液进行分级洗脱，收集洗脱液，将所述洗脱液浓缩至16-18波美度，得浓缩液；
（3）将浓缩液在0-4℃温度下放置48～72小时，按照浓缩液总质量0.1～0.2%的比例添加少量表儿茶素没食子酸酯单体对浓缩液进行结晶，离心、干燥，得到表儿茶素没食子酸酯单体。
对上述技术方案的进一步限定：步骤（1）中，小叶种儿茶素提取物是在28-32℃温度下搅拌40-50分钟进行溶解的。
对上述技术方案的进一步限定：将步骤（2）中小叶种复合儿茶素溶液缓慢通过装有吸附树脂的层析柱，并分别用10%、30%、80%的乙醇水溶液分级洗脱，收集30%的乙醇洗脱液，洗脱液浓缩至16-18波美度，得浓缩液。
对上述技术方案的进一步限定：所述吸附树脂为RS-16或RS-8，对其它杂质吸附率最低。
有益效果：本发明中，所述小叶种儿茶素溶液的浓度为100-200mg/ml，在这种较高的浓度下，有利于儿茶素富集；本发明采用吸附树脂可以有效进行分离，对其它杂质吸附率低，解决了表儿茶素没食子酸酯(ECG)与其它杂质的分离，从而成功实现了表儿茶素没食子酸酯(ECG)单体的制备。
具体实施方式
实施例1
1、取小叶种儿茶素提取物200克，加入纯水中溶解，配成1000 ml小叶种儿茶素溶液；
2、将步骤1中小叶种儿茶素溶液缓慢通过装有RS-8吸附树脂的层析柱，并分别用10%、30%、80%的乙醇水溶液分级洗脱，收集30%的乙醇洗脱液，并将所述洗脱液浓缩至16-18波美度，得浓缩液；
3、将所述浓缩液在0-4℃温度下放置48小时，按照浓缩液总质量0.1%的比例添加少量表儿茶素没食子酸酯单体对浓缩液进行结晶，然后离心、干燥得到22.43g白色固体。
将实施例1得到的白色固体与表儿茶素没食子酸酯（ECG）单体标准品对照鉴定并经高效液相色谱法分析检测（鉴定、检测结果为：所述白色固体，分子量为306.27，熔点208-210ºC，分子式为：C15H14O7，表明所述白色固体为ECG 单体，而且纯度≥98%。
实施例2
1、取小叶种儿茶素提取物100克，加入纯水中溶解，配成1000 ml小叶种儿茶素溶液；
2、将步骤1中小叶种儿茶素溶液缓慢通过装有RS-8吸附树脂的层析柱，并分别用10%、30%、80%的乙醇水溶液分级洗脱，收集30%的乙醇洗脱液，并将所述洗脱液浓缩至16-18波美度，得浓缩液；
3、将所述浓缩液在0-4℃温度下放置72小时，按照浓缩液总质量0.2%的比例添加少量表儿茶素没食子酸酯单体对浓缩液进行结晶，然后离心、干燥得到12.13g白色固体。
将实施例2得到的白色固体与表儿茶素没食子酸酯（ECG）单体标准品对照鉴定并经高效液相色谱法分析检测（鉴定、检测结果为：所述白色固体，分子量为306.27，熔点208-210ºC，分子式为：C15H14O7，表明所述白色固体为ECG 单体，而且纯度≥98%。
实施例3
1、取小叶种儿茶素提取物50克，加入纯水中溶解，配成1000 ml小叶种儿茶素溶液。
2、将步骤1中小叶种儿茶素溶液缓慢通过装有RS-16吸附树脂的层析柱，并分别用10%、30%、80%的乙醇水溶液梯度洗脱，收集30%的乙醇洗脱液，并将所述洗脱液浓缩至16-18波美度，得浓缩液；
3、将所述浓缩液在0-4°C温度下放置48小时，按照浓缩液总质量0.1%的比例添加少量表儿茶素没食子酸酯单体对浓缩液进行结晶，然后离心、干燥得到11.33g白色固体。
将实施例3得到的的白色固体与表儿茶素没食子酸酯（ECG）单体标准品对照鉴定并经高效液相色谱法分析检测（鉴定、检测结果为：所述白色固体，分子量为306.27，熔点208-210ºC，分子式为：C15H14O7，表明所述白色固体为ECG 单体，而且纯度≥98%。
在上述实施例中，吸附树脂用量：50 倍小叶种儿茶素提取物重量；上柱流速：1.0BV/h；三种不同浓度的乙醇水溶液的用量均为2BV；解吸流速：1.0 BV/h。
对本发明的进一步说明：上述实施例1-实施例3涉及的步骤（1）中，小儿茶素提取物是在28-32℃温度下搅拌40-50分钟进行溶解的，便于加快溶解速度和充分溶解。
对本发明的进一步说明：添加少量表儿茶素没食子酸酯的作用是加速结晶，如果不添加结晶速度慢或者不能结晶。
对本发明的进一步说明：采用浓度为80%的乙醇水溶液主要目的是洗脱其它吸附在树脂上的成分，以便再次使用树脂；所述BV为层析柱（树脂柱）内装载树脂的体积。
以上实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
本发明中，所述小叶种儿茶素提取物购自长沙飞拓植物制品有限公司， (本发明中“添加少量表儿茶素没食子酸酯单体对浓缩液进行结晶”) 表儿茶素没食子酸酯单体购自杭州禾田生物技术有限公司。

Claims (4)

1.一种表儿茶素没食子酸酯单体的制备方法，包括如下步骤：
（1）以小叶种儿茶素提取物为原料，加入纯水溶解小叶种儿茶素提取物，配置成浓度为100-200mg/ml的溶液，制得小叶种儿茶素溶液；
（2）将小叶种儿茶素提取物的溶液通过装有吸附树脂的层析柱，并用乙醇水溶液进行分级洗脱，收集洗脱液，将所述洗脱液浓缩至16-18波美度，得浓缩液；
（3）将浓缩液在0-4℃温度下放置48～72小时，按照浓缩液总质量0.1～0.2%的比例添加少量表儿茶素没食子酸酯单体对浓缩液进行结晶，离心、干燥，得到表儿茶素没食子酸酯单体。
2.根据权利要求1所述的一种表儿茶素没食子酸酯单体的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，小叶种儿茶素提取物是在28-32℃温度下搅拌40-50分钟进行溶解的。
3.根据权利要求1或2所述的一种表儿茶素没食子酸酯单体的制备方法，其特征在于：对上述技术方案的进一步限定：将步骤（2）中小叶种复合儿茶素溶液缓慢通过装有吸附树脂的层析柱，并分别用10%、30%、80%的乙醇水溶液分级洗脱，收集30%的乙醇洗脱液，洗脱液浓缩至16-18波美度，得浓缩液。
4.根据权利要求3所述的一种表儿茶素没食子酸酯单体的制备方法，其特征在于：所述吸附树脂为RS-16或RS-8。
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