CN102614229A - 一种从银杏叶提取物中脱除银杏酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从银杏叶提取物中脱除银杏酸的方法，该方法包括提取、柱层析、干燥工序，其中，所述的柱层析工序是用水调节经提取、过滤工序制得的滤液相对密度为1.05～110，得到提取液，以每克树脂加入1.5～3ml提取液的比例，通过大孔吸附树脂交换柱，先用水洗涤，再用质量百分比浓度为60～80％的乙醇溶液洗脱，收集60～80％的乙醇洗脱液；所述的大孔吸附树脂的类型为LSA系列大孔吸附树脂。通过本发明方法制备得到的银杏叶精制物中总黄酮醇苷含量35％以上，总萜类内酯含量12％以上，总银杏酸含量1ppm以下。
Description
技术领域
本发明属于中药制备技术领域，具体涉及一种采用大孔吸附树脂柱层析从银杏叶提取物中去除银杏酸的工艺。
背景技术
银杏是我国特有物种，资源拥有量占世界总量的70％，在我国已有六百多年的药用历史，同时它也是西方国家研究最多的天然植物之一。现代药理研究表明银杏叶提取物中的活性成分主要为银杏黄酮类及萜类内酯类成分。可用于血瘀型胸痹及轻度脑动脉硬化引起的眩晕以及冠心病、心绞痛、心肌梗塞等疾病的治疗。但目前市售的银杏叶提取物中含有大量的银杏酸类成分，现代毒理学研究表明，银杏酸具有致敏性、胚胎毒性、免疫毒性和细胞毒素等的生物毒性，被认为是银杏叶提取物中主要的毒副作用成分。
1997年，德国卫生部要求银杏叶提取物及其制剂中银杏酸含量小于5ppm，如果制剂不能达到这一标准，将强制取消其注册号及销售权。《中国药典》2010版颁布的银杏叶提取物标准中要求总银杏酸含量低于10ppm。但是目前国内生产的银杏叶提取物制剂的银杏酸含量常常超标，甚至高达2000ppm以上(专利申请200710049086.7)，严重制约了银杏叶提取物相关制剂的安全使用，因此控制成品中银杏酸含量是保证其制剂安全性，提升产品质量必不可少的，研究去除银杏叶提取物中银杏酸的工艺十分必要。
目前，去除银杏叶提取物中银杏酸的方法有如下几种：①，以法国Beaufour-Ipsen公司采用Schwabe公司专利为代表的丙酮提取+萃取工艺；②，欧洲有某些企业采用丙酮提取+层析+有机溶剂萃取工艺；③，乙醇提取+层析+有机溶剂萃取；④，乙醇提取+层析；⑤，超临界萃取。专利申请(03131915.7、02113531.2、01133794.X和200610093940.5)涉及了有机溶剂萃取法脱除银杏叶提取物中银杏酸的工艺。但是该方法容易产生乳化而导致萃取不完全，无法保证产品质量的均一稳定，且涉及到有机溶剂残留，同时对操作人员和环境不友好。专利申请(200710049086.7)采用聚酰胺与离子交换树脂叠加的去除方法，能使银杏酸含量降至5ppm以下，但是操作比较繁琐。
发明内容
本发明的目的是提供一种操作简单、成本低廉、可有效除去银杏叶提取物中银杏酚酸，而不影响银杏总黄酮和总萜类内酯得率的方法。
实现本发明目的的技术方案是：
一种从银杏叶提取物中脱除银杏酸的方法，包括提取、柱层析、干燥工序，其中，所述的柱层析工序是用水调节经提取、过滤工序制得的滤液的相对密度为1.05～1.10，得到提取液，以每克树脂加入1.5～3ml提取液的比例，通过大孔吸附树脂交换柱，先用水洗涤，再用质量百分比浓度为60～80％的乙醇溶液洗脱，收集60～80％的乙醇洗脱液；其中，所述的大孔吸附树脂的类型为LSA系列大孔吸附树脂。优选大孔吸附树脂型号为LSA-10、LSA-21或LSA-5B。
所述的浓度为60～80％的乙醇溶液的用量为15～18倍量的柱体积，乙醇溶液的洗脱速率为20～30ml/min。用水洗涤时水的用量为2～4倍量的柱体积。
上述提取、过滤工序包括以下步骤：取银杏叶提取物加入热水搅拌或超声提取，过滤，合并滤液；提取次数为3～5次，每次提取时间为1～2小时。所述的热水用量为银杏叶提取物干重的2～3倍量，热水的温度在40～60℃。
所述的干燥工序是将洗脱液浓缩后在60℃以下干燥。干燥方式可以为喷雾干燥或真空干燥。
通过本发明方法制备的银杏叶精制物中总黄酮醇苷含量35％以上，总萜类内酯含量12％以上，总银杏酸含量低于1ppm。
本发明所指的“％”均为质量百分含量。
部分工艺参数的筛选过程如下：
试验1、考察不同型号大孔吸附树脂脱除银杏叶提取物中银杏酸的效果。
取9份100g的干燥银杏叶提取物，分别粉碎过100目筛，加入50℃左右热水超声提取三次，每次时间分别均是2小时，三次热水用量范围是：分别为银杏叶提取物干重的3倍，3倍，2倍，滤过，合并滤液，滤液用水调节相对密度值1.05～110得到提取液，再以每克树脂加入2ml提取液的比例分别过不同型号的大孔树脂柱，先分别用3倍柱体积的纯化水洗涤，再分别用15倍柱体积质量百分比浓度为70％的乙醇按20ml/min速度洗脱，合并洗脱液，洗脱液浓缩，喷雾干燥，即得。
结果如表1所示：
表1
通过对比试验，发现不同的大孔吸附树脂对黄酮和内酯的含量均有所提高，银杏酸含量有所下降，但是纯化效果存在差异，以LSA-10、LSA-21、LSA-5B和DM-130型号效果最好。
试验2、考察LSA-10、LSA-21、LSA-5B和DM-130大孔吸附树脂的使用次数。
按照试验1的操作方法，70％乙醇洗脱完毕后，先用3倍柱体积量的95％乙醇洗脱后再用5倍量柱体积纯化水洗脱，再上样，重复使用树脂5次。测定成品中银杏酸含量，结果见表2。
表2
结果表明：LSA系列大孔吸附树脂，特别是LSA-10、LSA-21和LSA-5B型号大孔吸附树脂在循环使用5次之后，仍能保证成品中银杏酸含量在1ppm以下，而DM-130大孔树脂随使用次数的增加，对银杏酸的脱除效果有所下降。
与现有技术比较本发明的有益效果：本发明与传统的溶剂萃取法相比，本发明使用LSA系列大孔吸附树脂采用特定的方法进行柱层析后，几乎完全去除银杏叶提取物中的总银杏酸类成分，同时还能提高有效成分的含量，该工艺方法简单，树脂使用寿命长，对环境有好，生产成本低，能保证最终产品质量的均一稳定，可以满足银杏叶提取物相关制剂的要求。
具体实施方式
下面以具体实施例对本发明作详细说明，所涉及到的方法是本领域的技术人员能够掌握和应用的技术手段，但本发明不限于所述实施例。
银杏叶提取物采购于江苏邳州，按照《中国药典》2010版银杏叶提取物项下的标准检测，总黄酮醇苷含量24.41％，总内酯含量6.55％，银杏酸含量9.6ppm，符合规定。
实施例1：
干燥银杏叶提取物1kg，粉碎至过100目筛，用60℃热水搅拌提取3次，每次水用量为银杏叶提取物干重3倍量，每次提取2小时，滤过，合并3次滤液，滤液再用水调节相对密度至1.05得到提取液。以每克树脂加入2ml提取液的比例，通过LSA-10型大孔吸附树脂交换柱，装柱径高比为1∶8，先用3倍体积纯化水洗涤，再用16倍柱体积、质量百分比浓度为65％的乙醇溶液按20ml/min速度洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得浓缩液，浓缩液于60℃以下真空干燥，得约930g干浸膏粉，得率为93％。按照《中国药典》2010版银杏叶提取物含量测定方法，测得总黄酮含量为：65.4％(其中总黄酮醇苷含量为38.9％)，总内酯的含量为12.5％，总银杏酸的含量为0.5ppm。
实施例2：
干燥银杏叶提取物2kg，粉碎至过100目筛，用50℃热水超声提取5次，每次水用量为银杏叶提取物重2倍量，每次提取1.5小时，滤过，合并5次滤液，滤液再用水调节相对密度至110得到提取液。以每克树脂加入2.5ml提取液的比例，通过LSA-21型大孔吸附树脂交换柱，装柱径高比为1∶9。先用4倍体积纯化水洗涤，再用18倍柱体积、质量百分比浓度为70％的乙醇溶液按25ml/min速度洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得浓缩液，浓缩液喷雾干燥，得约1910g干浸膏粉，得率为95.5％。按照《中国药典》2010版银杏叶提取物含量测定方法，测得总黄酮含量为：66.2％(其中总黄酮醇苷含量为39.3％)，总内酯的含量为12.8％，总银杏酸的含量为0.2ppm。
实施例3：
干燥银杏叶提取物2.5kg，粉碎至过100目筛，用40℃热水搅拌提取4次，每次水用量为银杏叶提取物重2.5倍量，每次提取2小时，滤过，合并4次滤液，滤液再用水调节相对密度至1.08得到提取液。以每克树脂加入3ml提取液的比例，通过LSA-5B型大孔吸附树脂交换柱，装柱径高比为1∶10。先用2倍体积纯化水洗涤，再用17倍柱体积质量百分比浓度为80％的乙醇溶液按30ml/min速度洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得浓缩液，浓缩液于60℃以下真空干燥，得约2.14kg干浸膏粉，得率为85.6％。按照《中国药典》2010版银杏叶提取物含量测定方法，测得总黄酮含量为：64.9％(其中总黄酮醇苷含量为37.8％)，总内酯的含量为12.1％，总银杏酸的含量为0.8ppm。
Claims (10)
1.一种从银杏叶提取物中脱除银杏酸的方法，其特征在于该方法包括提取、柱层析、干燥工序，其中，所述的柱层析工序是用水调节经提取、过滤工序制得的滤液相对密度为1.05～110，得到提取液，以每克树脂加入1.5～3ml提取液的比例，通过大孔吸附树脂交换柱，先用水洗涤，再用质量百分比浓度为60～80％的乙醇溶液洗脱，收集60～80％的乙醇洗脱液；其中，所述的大孔吸附树脂的类型为LSA系列大孔吸附树脂。
2.根据权利要求1所述的从银杏叶提取物中脱除银杏酸的方法，其特征在于所述的浓度为60～80％的乙醇溶液的用量为15～18倍量的柱体积。
3.根据权利要求1所述的从银杏叶提取物中脱除银杏酸的方法，其特征在于所述的浓度为60～80％的乙醇溶液洗脱速率为20～30ml/min。
4.根据权利要求1所述的从银杏叶提取物中脱除银杏酸的方法，其特征在于用水洗涤时水的用量为2～4倍量的柱体积。
5.根据权利要求1所述的从银杏叶提取物中脱除银杏酸的方法，其特征在于所述的提取、过滤工序包括以下步骤：取银杏叶提取物加入热水搅拌或超声提取，过滤，合并滤液；提取次数为3～5次，每次提取时间为1～2小时。
6.根据权利要求5所述的从银杏叶提取物中脱除银杏酸的方法，其特征在于所述的热水用量为银杏叶提取物的2～3倍量，热水的温度在40～60℃。
7.根据权利要求1所述的从银杏叶提取物中脱除银杏酸的方法，其特征在于所述的大孔吸附树脂型号为LSA-10、LSA-21或LSA-5B。
8.根据权利要求1所述的从银杏叶提取物中脱除银杏酸的方法，其特征在于所述的干燥工序是将洗脱液浓缩后在60℃以下干燥。
9.根据权利要求8所述的从银杏叶提取物中脱除银杏酸的方法，其特征在于所述的干燥方式为喷雾干燥或真空干燥。
10.根据权利要求1所述的从银杏叶提取物中脱除银杏酸的方法，其特征在于所制备的银杏叶精制物中总黄酮醇苷含量35％以上，总萜类内酯含量12％以上，总银杏酸含量低于1ppm。
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