CN1515582A - 低酸银杏叶提取物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及的是一种低酸银杏叶提取物的制备方法。其步骤包括以银杏叶为原料用含水乙醇或甲醇或丙酮提取，取提取液浓缩回收溶剂，浓缩液用水或纯化水稀释，在20℃以下冷却沉降，取上清液进大孔吸附树脂柱吸附，用醇类溶液洗脱，洗脱液再用除酸树脂柱吸附，再用醇类溶液洗脱，合并流出液和洗脱液在小于75℃浓缩干燥，或者以银杏叶提取物为原料，用醇类或丙酮溶液溶解，溶解液过除酸树脂柱吸附，用醇类或丙酮溶液洗脱，合并流出液和洗脱液在小于75℃浓缩干燥。本制备方法，工艺流程简单，周期短，去除银杏酚酸效果好，所采用的介质无有害残留，产品品质好，工艺稳定，成本低。
Description
本发明属于天然植物药用成份的提取技术，具体地说是一种低酸银杏叶提取物的制备方法。
银杏属银杏科银杏种植物，是最古老的树种之一，其果和叶均为常用的中药材，具有敛肺气，平喘咳，止带浊的功能，可用于治疗肺虚咳喘，冠心病，心绞痛等疾病，从银杏叶中提取出的银杏叶提取物制成各种制剂，已广泛应用于动脉硬化及高血压所致冠状动脉供血不足，心绞痛，心肌梗塞，脑血栓，脑血管痉挛等症，近年来，国内外的医学科学家对银杏叶开发作了大量的努力，发现在银杏叶提取物中，占主要比例的有效活性物质为黄酮，黄酮醇及其甙类，儿茶素素和双黄酮类，倍半萜和二萜的内酯类，但也发现了其中含有可以致人体强烈过敏和造成接触性皮炎等疾患的酚酸类混合物，统称为银杏酚酸，实验证明，这种银杏叶提取物中的银杏酚酸含量必须于10ppm才对人体无害，1997年世界首届银杏研讨会提出了将银杏叶提取物产品中的有害成份银杏酚酸含量降低到5ppm以下的标准。但目前国内大部分的银杏提取物中还没有达到此要求。
本发明的目的在于提供一种稳定并适合工业化大生产、银杏酚酸含量几乎为零的低酸银杏提取物的制备方法。
实现本发明目的的技术方案：它主要包括下列步骤：
以银杏叶为原料：
(a)银杏叶用40％-95％乙醇或40％-100％甲醇或40％-100％丙酮提取；
(b)取提取液浓缩回收乙醇或甲醇或丙酮；
(c)浓缩液稀释冷却在-1℃至20℃沉降；
(d)上清液过苯乙烯型大孔吸附树脂柱吸附；
(e)用醇类或丙酮溶液洗脱；
(f)洗脱液过除酸树脂柱吸附酚酸类成分；
(g)用醇类或丙酮溶液洗脱；
(h)流出液和洗脱液浓缩干燥；
或者以银杏叶提取物为原料：
(1)用醇类或丙酮溶液溶解；
(2)溶解液过除酸树脂柱吸附；
(3)用醇类或丙酮溶液洗脱；
(4)流出液和洗脱液浓缩干燥。
在上述方法中步骤(e)可以是一次洗脱，洗脱剂以乙醇或甲醇或丙酮为佳，浓度30％-95％。
在上述方法中步骤(e)可以是梯度洗脱，洗脱剂以乙醇或甲醇或丙酮为佳，第一次洗脱浓度为0％-30％；第二次洗脱浓度为40％-95％；
在上述方法中步骤(f)或(2)中所述的吸附介质是苯乙烯型DAD-1树脂；
在上述方法中步骤(g)或(3)的洗脱剂为甲醇或乙醇或丙酮，其浓度可以为30％-95％；
在上述方法中在步骤(d)中浓缩液稀释剂可以为水或纯化水；
在上述方法中步骤(c)也可以是浓缩液稀释后粗分离，再稀释，冷却自然沉降；
在上述方法中步骤(a)中可以为浸渍提取，温度区间为常温至80℃；
在上述方法中步骤(h)洗脱液浓缩温度为小于75℃。
本发明的一种低酸银杏叶提取物的制备方法，工艺流程简单，周期短，去除银杏酚酸效果好，所采用的介质无有害物质残留，产品品质好，成本低。
以下结合实施例对本发明作进一步的说明，但本发明也不仅限于实施例的内容。
实施例一：
取银杏叶1kg，用40％乙醇12、10、10倍(指以原料重量与溶剂体积比计，后续实施例与此相同)，80℃搅拌浸渍提取三次，每次2小时，放出提取液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后的药液再加入5倍量的纯化水搅拌均匀后在0℃或者-1℃温度下静置1 2小时，取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)AB-8，用2倍树脂体积的水洗，用20％的乙醇洗脱后，树脂再用75％的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液直接过DAD-1除酸树脂，用适量的75％乙醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，减压浓缩，然后减压干燥，控制温度≤75℃，得含银杏黄酮醇苷28.5％，银杏萜内酯为7.5％，银杏酚酸为2.38ppm的低酸银杏叶提取物25g。AB-8树脂和DAD-1树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例二：
取银杏叶200kg，用75％乙醇10、6、5倍，70℃搅拌浸提三次，每次3小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入8倍量的纯化水稀释，药液粗分离后加纯化水定容至800L，在20℃下静置，取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)DM-130，用2倍树脂体积的纯化水洗，用75％的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的75％乙醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，减压浓缩，然后喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％，银杏酚酸为3.45ppm的银杏叶提取物5.5kg。树脂分别经再生后可重复使用。
实施例三：
取银杏叶200kg粉碎成面积≤1cm2的碎片，用40％丙酮17、14、13倍，60℃浸提三次，每次4小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入8倍量的纯化水稀释，在20℃下静置，取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)HPD-600，用2倍树脂体积的纯化水洗，用75％的丙酮洗脱，洗脱液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的75％丙酮洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，减压浓缩，然后喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％，银杏酚酸为1.23ppm的银杏叶提取物5.6kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例四：
取银杏叶500kg粉碎成粗粉，用40％甲醇10、6、5倍，70℃浸提三次，每次3小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入8倍量的自来水稀释，经粗分离后的药液在7℃下静置4小时，取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)HPD-600，用2倍树脂体积的纯化水洗，用75％的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的75％乙醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，然后喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏酚酸为0.35ppm的银杏叶提取物14.5kg。树脂分别经再生后重复使用。
实施例五：
取银杏叶500kg，用85％乙醇8、6、5倍，55℃搅拌浸提三次，每次3小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入12倍量的纯化水稀释，在7℃下静置。取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)D101，用2倍树脂体积的纯化水洗，用75％的乙醇洗脱，洗脱液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的75％乙醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，然后喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％，银杏酚酸为0.13ppm的银杏叶提取物13.5kg。树脂分别经再生后重复使用。
实施例六：
取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用95％乙醇5、3、2倍，60℃浸提三次，每次3小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入10倍量的纯化水稀释，经粗分离后的药液在10℃下静置10小时，取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)AB-8，用2倍树脂体积的纯化水洗，用75％的乙醇洗脱，洗脱液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的75％乙醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，然后在≤75℃减压干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥10％，银杏酚酸为1.23ppm的银杏叶提取物28kg。
实施例七：
取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用80％甲醇8、6、5倍，常温搅拌浸提三次，每次5小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入10倍量的纯化水稀释，在10℃下静置，取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)ADS-17，用2倍树脂体积的纯化水洗，用40％的甲醇洗脱，洗脱液过已处理的DAD-1除酸树脂，收集洗脱液。用适量的40％甲醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，然后在≤75℃减压干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物22kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例八：
取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用95％甲醇8、6、6倍，55℃浸提三次，每次3小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的自来水稀释，经粗分离后，再加5倍量的自来水搅匀后，在10℃下静置，取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)HPD-600，用2倍树脂体积的纯化水洗，用95％的乙醇洗脱，洗脱液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的95％乙醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，然后在≤75℃减压干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物28kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例九：
取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用75％丙酮7、6、5倍，80℃浸提三次，每次2小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后，再加5倍量的纯化水搅匀后，在1℃下静置，取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)D-101A，用2倍树脂体积的纯化水洗，用95％的丙酮洗脱，洗脱液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的95％的丙酮洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，然后在≤75℃减压干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物25.8kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例十：
取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用80％丙酮10、8、6倍，常温浸提三次，每次6小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后，再加5倍量的纯化水搅匀后，在10℃下静置，取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)ADS-16，用2倍树脂体积的纯化水洗，用40％的丙酮洗脱，洗脱液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的40％的丙酮洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物25kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例十一：
取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用92％丙酮10、8、6倍，常温搅拌浸提三次，每次6小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后，再加5倍量的纯化水搅匀后，在6℃下静置，取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)XDA-5，用2倍树脂体积的纯化水洗，用75％的乙醇洗脱，洗脱液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的75％乙醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物25.8kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例十二：
取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用100％丙酮10、8、6倍，60℃浸提三次，每次2小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后，再加5倍量的纯化水搅匀后，在5℃下静置，取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)HPD-600，用2倍树脂体积的纯化水洗，用70％的甲醇洗脱，洗脱液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的70％甲醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物26kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例十三：
取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用95％甲醇10、8、6倍，常温搅拌浸提三次，每次6小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入10倍量的纯化水稀释，经粗分离后，在10℃下静置，取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)LSA-20，用2倍树脂体积的纯化水洗，用40％的丙酮洗脱，洗脱液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的40％的丙酮洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物23.5kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例十四：
取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用95％工业乙醇8、8、7倍，50℃浸提三次，每次3小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后，再加5倍量的纯化水搅匀后，在4℃下静置，取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)AB-8，用2倍树脂体积的纯化水洗，用95％的甲醇洗脱，洗脱液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的95％甲醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，≤75℃减压浓缩干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物25.8kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例十五：
取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用90％工业乙醇12、12、10倍，80℃浸提三次，每次2小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后，再加5倍量的纯化水搅匀后，在5℃下静置，取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)DM-130，用2倍树脂体积的纯化水洗，用75％的乙醇洗脱，洗脱液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的75％乙醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物24.5kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例十六：
取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用95％药用乙醇8、6、4倍，70℃浸提三次，每次2小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后，再加5倍量的纯化水搅匀后，在3℃下静置，取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)ADS-17，用2倍树脂体积的纯化水洗，用70％的乙醇洗脱，洗脱液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的70％乙醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物30.2kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例十七：
取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用食用乙醇6、5、4倍，65℃浸提三次，每次2小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后，再加5倍量的纯化水搅匀后，在10℃下静置，取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)D140，用2倍树脂体积的纯化水洗，用80％的乙醇洗脱，洗脱液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的80％乙醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥8％的银杏叶提取物27.9kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例十八：
取黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥9％银杏叶提取物30kg，用30％的乙醇完全溶解后，溶液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的30％乙醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥25％，银杏萜内酯≥8％的银杏叶提取物27.9kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例十九：
取黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥9％银杏叶提取物30kg，用70％的乙醇完全溶解后，溶液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的70％乙醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥25％，银杏萜内酯≥8.5％的银杏叶提取物28.9kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例二十：
取黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％银杏叶提取物30kg，用95％的乙醇完全溶解后，溶液过已处理的DAD-1除酸树脂用适量的95％乙醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥25％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物28kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例二十一：
取黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％银杏叶提取物30kg，用30％的甲醇完全溶解后，溶液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的30％甲醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥25％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物27.9kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例二十二：
取黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥8％银杏叶提取物30kg，用70％的甲醇完全溶解后，溶液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的75％甲醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥25％，银杏萜内酯≥8％的银杏叶提取物28.9kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例二十三：
取黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％银杏叶提取物30kg，用95％的甲醇完全溶解后，溶液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的95％甲醇洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥25％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物28kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例二十四：
取黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥7％银杏叶提取物30kg，用30％的丙酮完全溶解后，溶液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的30％的丙酮洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥25％，银杏萜内酯≥7％的银杏叶提取物27.9kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例二十五：
取黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥9％银杏叶提取物30kg，用70％的丙酮完全溶解后，溶液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的70％的丙酮洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥25％，银杏萜内酯≥8.5％的银杏叶提取物28.9kg。树脂经不同的方法处理后重复使用。
实施例二十六：
取黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％银杏叶提取物30g，用95％的丙酮完全溶解后，溶液过已处理的DAD-1除酸树脂，用适量的95％的丙酮洗脱，收集并合并流出液和洗脱液，在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥25％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物28g。树脂经不同的方法处理后重复使用。
Claims (9)
1.一种低酸银杏叶提取物的制备方法，它主要包括下列步骤：
以银杏叶为原料：
(a)用40％-95％乙醇或40％-100％甲醇或40％-100％丙酮提取；
(b)取提取液浓缩回收乙醇或甲醇或丙酮；
(c)浓缩液稀释冷却-1℃至20℃沉降；
(d)上清液过苯乙烯型大孔吸附树脂柱吸附；
(e)用醇类或丙酮溶液洗脱；
(f)洗脱液过除酸树脂柱吸附；
(g)用醇类或丙酮溶液洗脱；
(h)流出液和洗脱液浓缩干燥；
或者以银杏叶提取物为原料：
(1)用醇类或丙酮溶液溶解；
(2)溶解液过除酸树脂柱吸附；
(3)用醇类或丙酮溶液洗脱；
(4)流出液和洗脱液浓缩干燥。
2.根据权利要求1所述的低酸银杏叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤(e)为一次洗脱，洗脱剂为甲醇或乙醇或丙酮，浓度30％-95％。
3.根据权利要求1所述的低酸银杏叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤(e)为梯度洗脱，洗脱剂为甲醇或乙醇或丙酮，第一次洗脱浓度为0％-30％，第二次洗脱浓度为40％-95％。
4.根据权利要求1或2或3所述的低酸银杏叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤(f)、(2)所述的吸附介质是DAD-1除酸树脂。
5.根据权利要求4所述的低酸银杏叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤(g)、(3)的洗脱剂为甲醇或乙醇或丙酮，其浓度为30％-95％。
6.根据权利要求1至5任一项所述的低酸银杏叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤(d)所述的浓缩液稀释剂为水或纯化水。
7.根据权利要求6所述的低酸银杏叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤(c)为浓缩液稀释后粗分离，再稀释，冷却自然沉降。
8.根据权利要求7所述的低酸银杏叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤(a)为浸渍提取，温度区间为常温至80℃。
9.根据权利要求8所述的制备银杏叶提取物的方法，其特征在于：步骤(h)洗脱液浓缩温度为小于75℃。
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