CN102093328B - 一种富集纯化松树皮中原花青素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂富集纯化松树皮中原花青素的方法。其特点是：应用间歇蒸馏-大孔吸附耦合技术分离纯化原花青素，对原花青素的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量50％以上的原花青素半成品和含量95％以上的原花青素终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附原花青素，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
Description
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种原花青素的纯化方法，特别是涉及一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法。
背景技术：
松树皮提取物是从松树皮中提取的一类物质。从树上剥下的松树皮被收集，摊平和提取。其中含有大量称作OPCs(原花青素低聚体)的化合物。在对其大量的研究中证明，OPCs为有效的抗氧化剂，且无毒，无突变性，无致癌性并无副作用。使用十分安全。松树皮已被证实是OPCs的新来源，从松树皮提取的OPCs不论在品质和功能上都没有任何不同，只是外观上有一些微小的差异。
原花青素英文名是Oligomeric Proantho Cyanidins(OPC)，是一种有着特殊分子结构的生物类黄酮，是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂。一般为红棕色粉末，气微、味涩，溶于水和大多有机溶剂。主要功效有改善血液循环、治疗糖尿病性视网膜病、减轻水肿和抑制静脉曲张等。
发明内容：
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法，其步骤如下：
(1)将干松树皮粉碎后用乙醇加热回流提取；
(2)将经步骤(1)处理的松树皮提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂的初提物；
(3)将所获初提物用乙醇加热溶解，加入纯化水萃取，用酸调其PH值为2.0～2.5，静置、抽滤、并用水洗涤至中性，减压浓缩得原花青素粗提物；
(4)将所得原花青素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；
(5)用不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集原花青素各阶段洗脱液；
(6)将原花青素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得原花青素半成品，其含量为50％以上；
(7)将所得原花青素半成品上硅胶层析柱，并以丙酮，甲醇以不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集原花青素各阶段洗脱液；
(8)将所收集的原花青素洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得原花青素，其含量在95％以上。
所述的步骤(1)中，松树皮粉碎后过10～80目筛在进行有机溶剂提取。
所述的步骤(1)中，乙醇为10～100％乙醇中的一种或一种以上，提取时间为4～48小时。
所述的步骤(1)中，提取的方法为浸泡法、回流提取法、渗漉法、煎煮法、连续提取法中的一种或一种以上。
所述的步骤(1)中，加入有机溶剂的体积为松树皮粉碎体积的10～20倍。
所述的步骤(3)中，加入纯化水的量按体积计算为提取物醇溶液的10～20倍，调节PH值所用的酸为盐酸。
所述的步骤(4)中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的X-5、NKA-9、S-8、D 3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。
所述的步骤(5)中所述的洗脱为用10～95％的乙醇进行洗脱。
所述的在步骤(5)和(7)中，所采取的检测方法均为薄层色谱法跟踪检测。
所述的步骤(7)中所采取的丙酮与甲醇的体积为1～7∶1。
本发明应用间歇蒸馏-大孔吸附耦合技术分离纯化原花青素，对原花青素的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量50％以上的原花青素半成品和含量95％以上的原花青素终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附原花青素，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
具体实施方式：
实施例1：一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法，其步骤如下：
(1)将干松树皮碎后过60目筛，用松树皮粉体积10倍的丙酮加热回流提取3次，每次2小时；
(2)将经步骤(1)处理的松树皮提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂的初提物；
(3)将所获初提物用乙醇加热溶解，加入体积为提取物醇溶液体积20倍的纯化水进行萃取，然后用酸调其PH值为2.0，静置、抽滤、减压回收溶剂得原花青素粗提物；
(4)将所得原花青素提物用大孔吸附树脂层析柱上进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-II型树脂；
(5)用10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％的乙醇在大孔吸附树脂层柱中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集原花青素各阶段洗脱液；
(6)将原花青素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量为52％原花青素半成品；
(7)将所得原花青素半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集原花青素各阶段洗脱液；
(8)将所收集的原花青素洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量95％原花青素。
实施案例2：一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法，其步骤如下：
(1)将干松树皮粉碎后过10目筛，用松树皮粉体积20倍的丙酮加热回流提取4小时；
(2)将经步骤(1)处理的松树皮提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂的初提物；
(3)将所获初提物用乙醇加热溶解，加入体积为提取物醇溶液体积10倍的纯化水进行萃取，然后用酸调其PH值为2.3，静置、抽滤、减压回收溶剂得原花青素粗提物；
(4)将所得原花青素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的D4006型树脂；
(5)用10％、30％、50％、70％、90％的乙醇在大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集原花青素各阶段洗脱液；
(6)将原花青素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量54％原花青素半成品；
(7)将所得原花青素半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集原花青素各阶段洗脱液；
(8)将所收集的原花青素洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量97％原花青素。
实施案例3：一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法，其步骤如下：
(1)将干松树皮粉碎后过80目筛，用松树皮粉体积15倍的75％乙醇加热回流提取6小时；
(2)将经步骤(1)处理的松树皮提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂的初提物；
(3)将所获初提物用乙醇加热溶解，加入体积为提取物醇溶液体积15倍的纯化水进行萃取，然后用酸调其PH值为2.5，静置、抽滤、减压回收溶剂得原花青素粗提物；
(4)将所得原花青素粗提物用大孔吸附树脂层析柱子、上进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-9型树脂；
(5)用20％、40％、60％、80％的乙醇在大孔吸附树脂层析柱子中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集原花青素各阶段洗脱液；
(6)将原花青素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量56％以上原花青素半成品；
(7)将所得原花青素半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集原花青素各阶段洗脱液；
(8)将所收集的原花青素洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量98％原花青素。
Claims (8)
1.一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法，其步骤如下：
(1)将干松树皮粉碎后用10～100％乙醇水溶液加热回流提取；
(2)将经(1)处理的松树皮提取液过滤，回收乙醇，得流浸膏状初提物；
(3)将所收获流浸膏状初提物用水充分洗涤后干燥得到干浸膏，用乙醇溶解后脱色，脱色液经回收乙醇后加水析出大量沉淀，调pH值至2-2.5，分离、收集沉淀物，并用水洗涤至中性，得到原花青素的粗提物；
(4)将所得原花青素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；
(5)用不同浓度乙醇水溶液对大孔吸附树脂进行洗脱，收集原花青素各阶段洗脱液；
(6)将原花青素洗脱液浓缩回收洗脱剂，得原花青素半成品；
(7)将所得原花青素半成品上硅胶层析柱，并以甲醇，丙酮以不同体积比进行洗脱，收集原花青素各阶段洗脱液；
(8)将所收集到的原花青素洗脱液进行精制得原花青素；
所述的步骤(1)中，提取时间为4～48小时。
2.根据权利要求1所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法，其特征是：所述的步骤(1)中，松树皮粉碎后过10～80目筛，再进行乙醇水溶液加热回流提取。
3.根据权利要求1所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法，其特征是：所述的步骤(1)中，提取的方法为浸渍法、回流提取法，渗漉法、煎煮法、连续提取法中的一种以上。
4.根据权利要求3所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法，其特征是；所述的步骤(1)中，加入乙醇水溶液的体积为松树皮粉体积的10～20倍。
5.根据权利要求4所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法，其特征是：步骤(4)中所述吸附为静态吸附或动态吸附：步骤(5)中所述的洗脱为用10～95％的乙醇水溶液进行洗脱。
6.根据权利要求5所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法，其特征是：在步骤(5)和(7)中，洗脱过程中采用薄层色谱法跟踪检测。
7.根据权利要求6所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法，其特征是：步骤(7)中所采用丙酮与甲醇的体积比为1～7∶1。
8.根据权利要求7所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法，其特征是：在步骤(8)中，采用活性炭脱色和重结晶方法进行精制。
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