CN102093327B - 一种富集纯化狼毒中狼毒素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法。其特点是：应用间歇蒸馏-大孔吸附耦合技术分离纯化狼毒素，对狼毒素的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量35％以上的狼毒素半成品和含量95％以上的狼毒素终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附狼毒素，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
Description
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种狼毒素的纯化方法，特别是涉及一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法。
背景技术：
狼毒又叫续毒、绵大戟、山萝卜、闷花头、热加巴、一扫光、搜山虎、一把香、药罗卜，有毒性，为瑞香科植物瑞香狼毒或大戟科植物狼毒大戟、月腺大戟的根。根含二萜、黄酮、木脂素、香豆精类成分，包括狼毒素(chamaejasmin)A、B、C，狼毒素、异狼毒素(isochamaejasmin)，7-甲氧基狼毒素(7-methoxychamaejasmin)，新狼毒素(neochamaejasmin)A、B，狼毒色酮(chamaechromone)及二氢山柰酚(dihydrokaempfero1)等。植物狼毒的根入药具有泻水逐饮、破积杀虫之功效；现代研究表明，中药狼毒亦具有抗癌的作用。
狼毒素临床上用于治疗皮肤病，结核病，肿瘤以及慢性气管炎等。近年来，人们发现天然植物狼毒中含有大量的狼毒素，由于其原料狼毒可大片繁殖，易于栽种，来源较广，从中提取狼毒素已取得了可喜进展。名称为“一种瑞香狼毒提取物制剂及其新用途”的专利申请中便公开了将狼毒经有机试剂直接浸提狼毒提取物工艺流程。上述专利文献中的狼毒素提取工艺主要是经过用有机试剂浸提等步骤提取而成，其分离效果远远不如间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法处理后在进行硅胶柱层析分离的效果。
发明内容：
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用间歇蒸馏大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其步骤如下：
(1)将干狼毒粉碎后用甲醇加热回流提取；
(2)将经步骤(1)处理的狼毒提取液抽滤，将提取液减压回收甲醇得初提物；
(3)将所获初提物用酸调其PH值为2.0～2.5，静置、抽滤、并用水洗涤至中性，减压浓缩得狼毒素粗提物；
(4)将所得狼毒素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；
(5)用不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集狼毒素各阶段洗脱液；
(6)将狼毒素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得狼毒素半成品，其含量为35％以上；
(7)将所得狼毒素半成品上硅胶层析柱，并以丙酮，甲醇以不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集狼毒素各阶段洗脱液；
(8)将所收集的狼毒素洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得狼毒素，其含量在95％以上。
所述的步骤(1)中，狼毒粉碎后过40～80目筛在进行有机溶剂提取。
所述的步骤(1)中，甲醇浓度为75％，提取时间为3～4小时，可提取2～3次。
所述的步骤(1)中，提取的方法为浸泡法、回流提取法、渗漉法、煎煮法、连续提取法中的一种或一种以上。
所述的步骤(1)中，加入甲醇的体积为狼毒粉碎体积的5～10倍。
所述的步骤(3)中，调节PH值所用的酸为磷酸。
所述的步骤(4)中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的X-5、NKA-9、S-8、D 3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。
所述的步骤(5)中所述的洗脱为用30～90％的乙醇进行洗脱。
所述的在步骤(5)和(7)中，所采取的检测方法均为薄层色谱法跟踪检测。
所述的步骤(7)中所采取的丙酮与甲醇的体积为1～7∶1。
本发明应用间歇蒸馏-大孔吸附技术耦合分离纯化狼毒素，对狼毒素的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量35％以上的狼毒素半成品和含量95％以上的狼毒素终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附狼毒素，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
具体实施方式：
实施例1：一种利用间歇蒸馏大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其步骤如下：
(1)将干狼毒粉碎后过60目筛，用狼毒粉体积5倍的甲醇加热回流提取2次，每次2小时；
(2)将经步骤(1)处理的狼毒提取液抽滤，将提取液减压回收甲醇得初提物；
(3)将所获初提物用酸调其PH值为2.0，静置、抽滤、减压回收溶剂得狼毒素；
(4)将所得狼毒素提物用大孔吸附树脂层析柱上进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-II型树脂；
(5)用30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％的乙醇在大孔吸附树脂层柱中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集狼毒素各阶段洗脱液；
(6)将狼毒素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量为35％狼毒素半成品；
(7)将所得狼毒素半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集狼毒素各阶段洗脱液；
(8)将所收集的狼毒素洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量95％狼毒素。
实施案例2：一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其步骤如下：
(1)将干狼毒粉碎后过80目筛，用狼毒粉体积8倍的甲醇加热回流提取3次，每次2小时；
(2)将经步骤(1)处理的狼毒提取液抽滤，将提取液减压回收甲醇得初提物；
(3)将所获初提物用酸调其PH值为2.3，静置、抽滤、减压回收溶剂得狼毒素粗提物；
(4)将所得狼毒素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的D4006型树脂；
(5)用30％、50％、70％、90％的乙醇在大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集狼毒素各阶段洗脱液；
(6)将狼毒素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量36.4％狼毒素半成品；
(7)将所得狼毒素半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集狼毒素各阶段洗脱液；
(8)将所收集的狼毒素洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量96.8％狼毒素。
实施案例3：一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其步骤如下：
(1)将干狼毒粉碎后过40目筛，用狼毒粉体积10倍的甲醇加热回流提取3次，每次3小时；
(2)将经步骤(1)处理的狼毒提取液抽滤，将提取液减压回收甲醇得初提物；
(3)将所获初提物用酸调其PH值为2.5，静置、抽滤、减压回收溶剂得狼毒素粗提物；
(4)将所得狼毒素粗提物用大孔吸附树脂层析柱子、上进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-9型树脂；
(5)用40％、60％、80％的乙醇在大孔吸附树脂层析柱子中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集狼毒素各阶段洗脱液；
(6)将狼毒素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量37％狼毒素半成品；
(7)将所得狼毒素半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集狼毒素各阶段洗脱液；
(8)将所收集的狼毒素洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量97％狼毒素。
Claims (8)
1.一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其步骤如下：
(1)将干狼毒粉碎后用甲醇加热回流提取；
(2)将经(1)处理的狼毒素提取液过滤，回收甲醇得初提物；
(3)将所收获初提物调pH值至2-2.5，分离、收集沉淀物，并用水洗涤至中性，得到狼毒素的粗提物；
(4)将所得狼毒素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；
(5)用不同浓度乙醇水溶液对大孔吸附树脂进行洗脱，收集狼毒素各阶段洗脱液；
(6)将狼毒素洗脱液浓缩回收洗脱剂，得狼毒素半成品；
(7)将所得狼毒素半成品上硅胶层析柱，并以丙酮，甲醇以不同体积比进行洗脱，收集狼毒素各阶段洗脱液；
(8)将所收集到的狼毒素洗脱液进行精制得狼毒素；
所述的步骤(1)中，狼毒粉碎后过40～80目筛用甲醇加热回流提取。
2.根据权利要求1所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征是：在所述的步骤(1)中，甲醇的浓度为75％。
3.根据权利要求2所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征是：在所述的步骤(1)中，加入甲醇的体积为狼毒粉体积的5～10倍。
4.根据权利要求3所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征是：所述的步骤(3)中，调节pH值所用的酸为磷酸。
5.根据权利要求4所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征是：所述的步骤(4)中吸附为静态吸附或动态吸附；步骤(5)中所述的洗脱液用30～90％的乙醇水溶液进行洗脱。
6.根据权利要求5所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征是：在步骤(5)和(7)中，采用薄层色谱法跟踪检测。
7.根据权利要求6所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征是：步骤(7)中丙酮与甲醇的体积比为1～7∶1。
8.根据权利要求7所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征是：在步骤(8)中采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制。
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| 田发益等.西藏狼毒凝集素的分离纯化技术.《中国野生植物资源》.2004,第23卷(第3期),36-38. * |
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