CN102228515A

CN102228515A - 一种分离和富集莲子心总黄酮和总生物碱的方法

Info

Publication number: CN102228515A
Application number: CN 201110170851
Authority: CN
Inventors: 刘韶; 雷鹏; 李新中; 尹桃
Original assignee: Central South University
Current assignee: Central South University
Priority date: 2011-06-23
Filing date: 2011-06-23
Publication date: 2011-11-02
Anticipated expiration: 2031-06-23
Also published as: CN102228515B

Abstract

本发明涉及从莲子心中分离纯化有效部位的技术，具体公开了一种分离和富集莲子心总黄酮和生物碱的方法，是将莲心生物碱和黄酮类物质集中到同一分离单元进行分离，再用不同洗脱剂对其分别洗脱和富集。具体步骤为：以莲子心为原料，用乙醇/水提取，并用澄清剂进行除杂处理。将除杂液通过大孔弱酸型阳离子交换树脂富集分离，用乙醇/水洗脱得到总黄酮，洗脱液浓缩至干，经干燥即得莲子心总黄酮；再用含NaCl的乙醇/水洗脱得到总生物碱，洗脱液浓缩至干，除盐，经干燥即得莲子心总生物碱。本发明所述的方法具有简便易行，成本低廉和环境友好等特点，莲子心总黄酮和总生物碱得率高，大大节约了莲子心资源，提高了莲子心的药用利用率。

Description

一种分离和富集莲子心总黄酮和总生物碱的方法

技术领域

本发明属于从莲子心中分离纯化有效部位的技术，具体涉及一种分离和富集莲子心总黄酮和总生物碱的方法。

背景技术

莲子心为睡莲科植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn.)成熟种子的绿色胚芽及胚根，古名薏，味苦、性寒，主要产于我国湖南、湖北、浙江、福建和江西等地。据《本草纲目》记载，它能“清心去热”，而《随息居饮食谱》则记载它味“苦凉”，能“敛液、止汗、消热、养神、止血、固精”，现代药理分析证明它有强心降压、逆转肿瘤多药耐药之功效。

研究发现，莲子心中含有多种化学成分，其中主要为生物碱、黄酮类、多糖及挥发油等物质。其中莲子心中生物碱主要为莲心碱(liensinine)、异莲心碱(isoliensinine)、甲基莲心碱(neferine)、荷叶碱(nuciferine)、前荷叶碱(pronuciferine)、莲心季按碱(Lotusine)等，具有降血压、抗心律失常、抗血小板聚集、降血糖、抗肿瘤、化疗增敏等药理作用。莲子心中也含有含量较高的黄酮类物质，其主要成分为木犀草素(galuteoline)、芦丁(rutin)、金丝桃甙(hyperin)等，药理实验结果说明，其具有抗氧化、清除自由基、抑制肿瘤细胞等药理作用。欧阳明安等对莲子心的高极性的水溶性次生代谢产物的种类进行了初步研究，分离纯化得到了14个化合物，其主要为黄酮和黄酮甙类化合物。潘扬等分别对莲子心70％乙醇提取物、总生物碱类成分及总黄酮类成分3个部位进行降血糖活性研究，发现莲子心中降血糖的活性部位为生物碱类成分而非黄酮成分。这充分表明，莲子心生物碱与黄酮类物质可能具有不同的生物活性。

莲心生物碱常用的纯化方法为先用酸溶碱沉法、有机溶剂萃取法等获得脂溶性总碱，再用硅胶柱层析法获得有效部位，此类方法工艺复杂，使用较多有毒的有机溶剂，成品后处理繁琐，对环境及人身危害较大，不适合大规模工业生产应用。公开号为CN1117735C的中国专利公开了从莲子心中提取纯化异莲心碱和莲心碱的制备方法，但该方法采用有机溶剂萃取法，使用了大量氯仿、苯、乙醚等有毒有机溶剂，对环境和人身危害较大。公开号为CN1670026A的中国专利公开了莲子心生物碱提取物的制备方法，该方法应用非极性大孔树脂和大孔强酸聚苯乙烯系阳离子交换树脂，工艺步骤复杂，而且，目标只是莲子心总生物碱，没有将生物碱和黄酮类组分综合利用，导致药材的综合利用率较低。

发明内容

本发明的目的在于克服已有的莲心生物碱和黄酮类物质分离纯化方法毒性大、纯化步骤繁琐、药材综合利用率低的缺点，提供了一种快速简便、环境友好、药材综合利用率高的从莲子心中分离、富集生物碱和黄酮类物质的技术方案。

本发明采用阳离子交换树脂分离和富集莲心生物碱和黄酮类物质，改进之处为：1.将莲心生物碱和黄酮类物质集中到同一分离单元进行分离，提高了设备和材料的利用率，降低分离成本；2.根据莲心生物碱和黄酮类物质的结构特点，用不同洗脱剂对其分别洗脱，分布分离和富集有效成分，提高莲子心药材的综合利用率。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

一种分离和富集莲子心总生物碱和总黄酮的方法，具体包括以下步骤：

(1)将莲子心用质量百分浓度50％～80％乙醇于提取设备中加热回流提取，每次所用溶剂为生药质量的6～12倍，提取1～3次，经过滤得到莲子心提取液，减压浓缩至生药质量的3～5倍；

(2)将步骤(1)所得到的提取液经澄清剂吸附澄清处理，除杂过滤，即为除杂液；

(3)将步骤(2)所得的除杂液经大孔弱酸型阳离子交换树脂，先用纯化水洗脱杂质，后用质量百分浓度50％-95％乙醇作为洗脱剂分离总黄酮，洗脱液浓缩干燥后即得总黄酮组分富集物；

(4)再用含NaCl的质量百分浓度50％-95％乙醇作为生物碱洗脱剂分离总生物碱，洗脱液浓缩至干，热乙醇少量多次洗涤，除去NaCl，合并洗涤液，冷藏，过滤，回收乙醇干燥即得总生物碱组分富集物。

所述的步骤(2)中，澄清剂为壳聚糖及ZTC1+1-II型天然澄清剂；

所述的步骤(3)中，所用乙醇的质量百分浓度优选为70％。

所述的步骤(4)中，所述的生物碱洗脱剂为NaCl含量为0.01～0.04g/mL的70％乙醇溶液；

所述的步骤(3)和(4)中，所述的洗脱剂用量分别为5～10倍柱体积。

与现有技术相比，本发明的优势在于：

1、本发明采用大孔弱酸型阳离子交换树脂在同一分离单元对莲子心总生物碱和总黄酮进行分离富集，选用不同的洗脱液洗脱，分步分离富集，提高了设备和材料利用率，降低了分离成本，提高了药材的综合利用率。

2、本发明工艺简单快捷，生物碱和黄酮类物质得率高，莲子心药材综合利用率高，设备及材料廉价易得，适合工业生产。

具体实施方式

下面结合实例对本发明进行详细描述，但是它并不仅限于实施例或类似实例。

实施例1：

取莲子心药材100g，用8倍于药材质量的70％(质量百分浓度)乙醇回流提取60min，过滤。药渣再用10倍于药材质量的70％(质量百分浓度)乙醇回流提取45min，过滤，合并滤液，减压浓缩至生药质量的5倍，用壳聚糖除杂处理，过滤，得除杂液。

将已预处理好的D152树脂30mL装入内径15mm，高40mm的玻璃柱内，加入上述制备所得的莲子心除杂液，以约5倍柱体积纯化水，2BV/h的流速洗去水溶性杂质。然后用10BV 70％乙醇以2BV/h的流速洗脱，收集洗脱液I。再用5BV NaCl含量为0.02g/mL的70％(质量百分浓度)乙醇溶液以2 BV/h的流速洗脱，收集洗脱液II。洗脱液I干燥后得莲子心总黄酮粗品，总黄酮含量为87.8％；洗脱液II干燥后得总生物碱，其甲基莲心碱含量为38.85％，异莲心碱含量为16.21％，莲心碱含量为12.35％。

实施例2：

取莲子心药材1000g，用10倍于药材质量的60％(质量百分浓度)乙醇回流提取两次，合并提取液，回收乙醇至完全，加纯化水定容至生药质量的3倍，用ZTC1+1-II型澄清剂除杂处理，过滤，得除杂液。

将已预处理好的D152树脂300mL装入内径15mm，高40mm的玻璃柱内，加入上述制备所得的，莲子心除杂液。以约5倍柱体积纯化水，2BV/h的流速洗去水溶性杂质。10BV 70％乙醇以2BV/h的流速洗脱，收集洗脱液I。再用7BV NaCl含量为0.01g/mL的70％乙醇溶液以2BV/h的流速洗脱，收集洗脱液II。洗脱液I干燥后得莲子心总黄酮粗品，总黄酮含量为84.2％；洗脱液II干燥后得总生物碱，其甲基莲心碱含量为36.36％，异莲心碱含量为15.34％，莲心碱含量为12.21％。

实施例3：

取莲子心药材1000g，用12倍于药材质量的70％(质量百分浓度)乙醇回流提取两次，合并提取液，回收乙醇至完全，加纯化水定容生药质量的5倍。用ZTC1+1-II型澄清剂除杂处理，过滤，得除杂液。

将已预处理好的D001-CC型阳离子树脂300mL装入内径15mm，高40mm的玻璃柱内。加入上述制备所得的莲子心除杂液。以约5倍柱体积纯化水，2BV/h的流速洗去水溶性杂质。5BV 50％乙醇以2BV/h的流速洗脱，收集洗脱液I。再用10BV NaCl含量为0.05g/mL的50％(质量百分浓度)乙醇溶液以2BV/h的流速洗脱，收集洗脱液II。洗脱液I干燥后得莲子心总黄酮粗品，总黄酮含量为76.2％；洗脱液II干燥后得总生物碱，其甲基莲心碱含量为35.72％，异莲心碱含量为14.78％，莲心碱含量为11.87％。

实施例4：

取莲子心药材1000g，用8倍于药材质量的50％(质量百分浓度)乙醇回流提取三次，合并提取液，回收乙醇至完全，加纯化水定容至生药质量的5倍。用ZTC1+1-II型澄清剂除杂处理，过滤，得除杂液。

将已预处理好的D113型阳离子树脂300mL装入内径15mm，高40mm的玻璃柱内。加入上述制备所得的莲子心除杂液。以约5倍柱体积纯化水，2BV/h的流速洗去水溶性杂质。10BV 95％(质量百分浓度)乙醇以2BV/h的流速洗脱，收集洗脱液I。再用7BV NaCl含量为0.02g/mL的95％(质量百分浓度)乙醇溶液以2BV/h的流速洗脱，收集洗脱液II。洗脱液I干燥后得莲子心总黄酮粗品，总黄酮含量为84.6％；洗脱液II干燥后得总生物碱，其甲基莲心碱含量为37.26％，异莲心碱含量为16.13％，莲心碱含量为12.58％。

Claims

1.一种分离和富集莲子心总生物碱和总黄酮的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

(1)将莲子心用质量百分浓度50％～80％乙醇加热回流提取，每次所用溶剂为生药质量的6～12倍，提取1～3次，经过滤得到莲子心提取液，减压浓缩至生药质量的3～5倍；

2.根据权利要求1所述的分离和富集莲子心总生物碱和总黄酮的方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，澄清剂为壳聚糖及ZTC1+1II型天然澄清剂。

3.根据权利要求1所述的分离和富集莲子心总生物碱和总黄酮的方法，其特征在于，在所述的步骤(3)中，所用乙醇的质量百分浓度为70％。

4.根据权利要求1所述的分离和富集莲子心总生物碱和总黄酮的方法，其特征在于，在所述的步骤(4)中，所述的生物碱洗脱剂为NaCl含量为0.01～0.04g/mL70％乙醇溶液。

5.根据权利要求1或4所述的分离和富集莲子心总生物碱和总黄酮的方法，其特征在于，在所述的步骤(3)和(4)中，所述的洗脱剂用量分别为5～10倍柱体积。