CN102070685A

CN102070685A - 一种富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法

Info

Publication number: CN102070685A
Application number: CN2010106231374A
Authority: CN
Inventors: 姚德坤; 姚德利; 闫峰; 黄运生; 姚航; 郑君
Original assignee: GREAT XINGAN MOUNTAINS LINGEBEI ORGANIC FOOD CO Ltd
Current assignee: GREAT XINGAN MOUNTAINS LINGEBEI ORGANIC FOOD CO Ltd
Priority date: 2010-12-20
Filing date: 2010-12-20
Publication date: 2011-05-25

Abstract

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种利用大孔吸附树脂富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法。其特点是：应用大孔吸附技术分离纯化牛蒡苷，对牛蒡苷的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量35％以上的牛蒡苷半成品和含量90％以上的牛蒡苷终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附牛蒡苷，吸附快、解析也快，吸附容量较大。

Description

一种富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法

技术领域：

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种牛蒡苷的纯化方法，特别是涉及一种利用大孔吸附树脂富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法。

背景技术：

牛蒡别名牛菜、大力子、恶实、牛蒡子、蝙蝠刺、牛鞭草，为我国古老的药食两用食物蔬菜。牛蒡为二年生草本植物，高1～2m。基生叶丛生，大形，有长柄；茎生叶广卵形或心形，边缘微波状或有细齿，基部心形，下面密被白短柔毛。头状花序多数，排成伞房状；总苞球形，总苞片披针形，先端具短钩；花淡红色，全为管状。瘦果椭圆形，具棱，灰褐色，冠毛短刚毛状。牛蒡果实含牛蒡甙(arctiin)，水解生成牛蒡甙元(arctigenin)及葡萄糖(glucose)。又含罗汉松脂酚(matairesinol)，络石甙元(trachelogenin)，倍半木质素(sesquiligenan)AL-D及AL-F。种子含牛蒡甙，牛蒡酚(lap-paol)A、B、C、D、E、F、H。又含脂肪油，其中脂肪酸成分有：花生酸(arachic acid)，硬脂酸(steraic acid)，棕榈酸(pal mitic acid)和亚油酸(linoleic acid)。研究表明，牛蒡有明显的降血糖、降血脂、降血压、补肾壮阳、润肠通便和抑制癌细胞滋生、扩散及移弃水中重金属的作用，是非常理想的天然保健食品。

牛蒡苷又叫牛蒡子苷，牛蒡子苷具有抗胰腺癌活性，其作用机理之一是诱导细胞凋亡。本品能引起血管扩张，血压下降；使冷血及温血动物产生惊厥，大剂量引起呼吸衰竭，对运动神经及骨胳呈麻痹作用，在临床上已经得到应用。近年来，人们发现牛蒡中含有大量的牛蒡苷，而其原料牛蒡来源广泛且容易栽种，对牛蒡苷的研究已取得了可惜的进展。名称为“一种牛蒡子提取物及其制备方法和应用”的专利中请中便公开了将牛蒡经醇沉乙酸乙酯萃取得牛蒡苷工艺流程。上述专利文献中的牛蒡提取工艺主要是经过用乙醇回流提取后萃取等步骤提取而成，其分离效果远远不如大孔吸附树脂处理后在进行硅胶柱层析分离的效果。

发明内容：

本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用大孔吸附树脂富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种利用大孔吸附树脂富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法，其步骤如下：

(1)将干牛蒡粉碎后用乙醇加热回流提取；

(2)将经步骤(1)处理的牛蒡提取液抽滤，将提取液减压回收乙醇至无醇，得初提物；

(3)将所获初提物加入乙酸乙酯萃取，用酸调其PH值为2.0～2.5，静置、抽滤、并用水洗涤至中性，减压浓缩得牛蒡苷粗提物；

(4)将所得牛蒡粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；

(5)用不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集牛蒡苷各阶段洗脱液；

(6)将牛蒡苷各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得牛蒡苷半成品，其含量为35％以上；

(7)将所得牛蒡苷半成品上硅胶层析柱，并以丙酮，甲醇以不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集牛蒡苷各阶段洗脱液；

(8)将所收集的牛蒡苷洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得牛蒡苷，其含量在90％以上。

所述的步骤(1)中，牛蒡粉碎后过30～80目筛在进行有机溶剂提取。

所述的步骤(1)中，所用乙醇浓度为50～90％，可提取2～3次，每次3～6h。

所述的步骤(1)中，提取的方法为浸泡法、回流提取法、渗漉法、煎煮法、连续提取法中的一种或一种以上。

所述的步骤(1)中，加入乙醇的体积为牛蒡粉碎体积的5～10倍。

所述的步骤(3)中，加入乙酸乙酯的量按体积计算为提取物水溶液的5～10倍，调节PH值所用的酸为盐酸。

所述的步骤(4)中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的X-5、NKA-9、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。

所述的步骤(5)中所述的洗脱为用30～90％的乙醇进行洗脱。

所述的在步骤(5)和(7)中，所采取的检测方法均为薄层色谱法跟踪检测。

所述的步骤(7)中所采取的丙酮与甲醇的体积为1～7∶1。

本发明应用大孔吸附技术分离纯化牛蒡苷，对牛蒡苷的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量35％以上的牛蒡苷半成品和含量90％以上的牛蒡苷终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。

本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附牛蒡苷，吸附快、解析也快，吸附容量较大。

具体实施方式：

实施例1：一种利用大孔吸附树脂富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法，其步骤如下：

(1)将干牛蒡粉碎后过60目筛，用牛蒡粉体积5倍的60％乙醇回流提取2次，每次3小时；

(2)将经步骤(1)处理的牛蒡提取液抽滤，将提取液减压回收乙醇得初提物；

(3)将所获初提物加入体积为提取物醇溶液体积5倍的乙酸乙酯进行萃取，然后用酸调其PH值为2.0，静置、抽滤、减压回收溶剂得牛蒡苷粗提物；

(4)将所得牛蒡苷粗提物用大孔吸附树脂层析柱上进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-II型树脂；

(5)用30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％的乙醇在大孔吸附树脂层柱中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集牛蒡苷各阶段洗脱液；

(6)将牛蒡苷各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量为35％牛蒡苷半成品；

(7)将所得牛蒡苷半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集牛蒡苷各阶段洗脱液；

(8)将所收集的牛蒡苷洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量93％牛蒡苷。

实施案例2：一种利用大孔吸附树脂富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法，其步骤如下：

(1)将干牛蒡粉碎后过40目筛，用牛蒡粉体积8倍的75％乙醇回流提取3次，每次4小时；

(3)将所获初提物加入体积为提取物醇溶液体积8倍的乙酸乙酯进行萃取，然后用酸调其PH值为2.3，静置、抽滤、减压回收溶剂得牛蒡苷粗提物；

(4)将所得牛蒡苷粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的D4006型树脂；

(5)用30％、50％、70％、90％的乙醇在大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集牛蒡苷各阶段洗脱液；

(6)将牛蒡苷各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量35.8％牛蒡苷半成品；

(8)将所收集的牛蒡苷洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量92％牛蒡苷。

实施案例3：一种利用大孔吸附树脂富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法，其步骤如下：

(1)将干牛蒡粉碎后过80目筛，用牛蒡粉体积10倍的85％乙醇回流提取3次，每次4小时6小时；

(3)将所获初提物加入体积为提取物醇溶液体积10倍的乙酸乙酯进行萃取，然后用酸调其PH值为2.5，静置、抽滤、减压回收溶剂得牛蒡苷粗提物；

(4)将所得牛蒡苷粗提物用大孔吸附树脂层析柱子、上进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-9型树脂；

(5)用40％、60％、80％的乙醇在大孔吸附树脂层析柱子中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集牛蒡苷各阶段洗脱液；

(6)将牛蒡苷段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量37％牛蒡苷半成品；

(8)将所收集的牛蒡苷洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量95％牛蒡苷。

Claims

1.一种利用大孔吸附树脂富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征在于，其步骤如下：

(1)将干牛蒡粉碎后用乙醇加热回流提取；

(2)将经(1)处理的牛蒡提取液过滤，减压回收乙醇；

(3)将所收获初提物加入乙酸乙酯中萃取，调pH值至2-2.5，分离、收集沉淀物，并用水洗涤至中性，得到牛蒡苷的粗提物。

(4)将所得牛蒡苷粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；

(5)用不同浓度乙醇水溶液对大孔吸附树脂进行洗脱，收集牛蒡苷段洗脱液；

(6)将牛蒡苷洗脱液浓缩回收洗脱剂，得牛蒡苷半成品；

(7)将所得牛蒡苷半成品上硅胶层析柱，并以甲醇，丙酮以不同体积比进行洗脱，收集牛蒡苷各阶段洗脱液；

(8)将所收集到得牛蒡苷洗脱液进行精制的牛蒡苷。

2.根据权利要求1所述的利用大孔吸附树脂富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法其特质是：所述的步骤(1)中，牛蒡粉后过30～80目筛再进行乙醇加热回流提取。

3.根据权利要求1所述的利用大孔吸附树脂富集纯牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征是：在所属的步骤(1)中，所用乙醇浓度在50～90％，可提取2～3次，提取时间为3～6小时。

4.根据权利要求3所述的利用大孔吸附树脂富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征是：所述的步骤(1)中，提取的方法为浸渍法、回流提取法，渗漉法、煎煮法、连续提取法中的一种或一种以上。

5.根据权利要求3所述的利用大孔吸附树脂富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征是；所属的步骤(1)中，加入乙醇的体积为牛蒡粉体积的5～10倍。

6.根据权利要求5所述的利用大孔吸附树脂富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征是：在所述的步骤(3)中，加入乙酸乙酯的量按体积计为提取物醇溶液的5～10倍，调节PH值所用的酸为盐酸

7.根据权利要求6所述的利用大孔吸附树脂富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征是：步骤(4)中所述吸附为静态吸附或动态吸附：步骤(5)中所述的洗脱为用30～90％的乙醇水溶液进行洗脱。

8.根据权利要求7所述的利用大孔吸附树脂富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征是：在步骤(5)和(7)中，洗脱过程中采用薄层色谱法跟踪检测。

9.根据权利要求8所述的利用大孔吸附树脂富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征是：步骤(7)中所采用丙酮与甲醇得体积比为1～7∶1。

10.根据权利要求7所述的利用大孔吸附树脂富集纯化牛蒡中牛蒡苷的方法，其特征是：在步骤(8)中，采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制。