CN101157712B - 一种虫草素的分离纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种虫草素的分离纯化方法，该方法采用蛹虫草固体干燥培养基为原料，用NKA-II型大孔树脂柱和C18柱进行纯化，最后用蒸馏水进行反复重结晶。获得的虫草素纯度达到95％以上。该方法原料来源丰富、成本低廉、工艺简单、纯度高，适合工业化生产。

Description

一种虫草素的分离纯化方法

技术领域

本发明属于医药工业领域，具体地说涉及一种虫草素的分离纯化方法

背景技术

虫草素(Cordycepin)又称3′-脱氧腺苷(3′-Deoxyadenosine)是一种具有抗菌活性的核苷类物质，对核多聚腺苷酸聚酶有很强的抑制作用，能抑制癌细胞的生长，还有抗病毒、抗癌和抗真菌作用。近几年国内外研究发现，冬虫夏草中所含虫草素可有效杀灭癌细胞，常服用冬虫夏草可避免和减少癌变发生，因此国际国内医药保健品原材料市场需求旺盛，其中的有效成分虫草素具有巨大的潜在市场，目前虫草素的价格高达每克数万元，因此开展虫草素纯化工艺研究具有很好的商业价值。

目前常用的虫草素分离纯化方法主要有离子交换树脂吸附法、氧化铝柱层析、硅胶柱层析以及活性炭吸附法等。其中离子交换树脂吸附法需要用酸碱处理，后处理比较复杂，其他几种方法提取得率低，分离纯化选择性差，难以进行工业化生产。因此需要寻找更好的提取率高、成本低和易于工艺化生产的虫草素纯化工艺。

蛹虫草(Cordyceps militaris)，又称北冬虫夏草，与冬虫夏草同属异种，其中的虫草素的含量远远高于冬虫夏草。经研究发现培养蛹虫草的废弃的培养基中的虫草素的含量也非常高，高于蛹虫草子实体含量。

大孔吸附树脂具有良好的网状结构和很高的比表面积，通过物理吸附从水溶液中有选择地吸附有机物质，具有选择性好，解离容易，机械强度大，可反复使用和流体阻力小等优点，并且易于大规模工业化生产。到目前为止，还未见用大孔吸附树脂来分离纯化虫草素的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种虫草素的分离纯化方法，以解决现有技术中提取率低、分离纯化选择性差、以及工业化生产成本高的缺点。

本发明提供的一种虫草素的分离纯化方法，包括如下步骤：

①虫草素的粗提：将蛹虫草固体干燥培养基粉碎，加入10倍重量的水中，浸泡10-60min后，加热至100℃并保持1-3h，过滤；滤渣重复上述步骤，再提取1次，合并滤液，滤液静置过夜；

②粗提物的提纯：将上述滤液过大孔吸附树脂柱，使树脂对提取液中的虫草素进行充分吸附：先用10％乙醇洗脱除去部分水溶性杂质，再用50％乙醇洗脱，并收集50％乙醇部分进行浓缩干燥；

③虫草素的进一步纯化：将上述获得的样品用水溶解后，过C18柱，用水洗脱，收集水相部分，浓缩，置4℃静置析晶；

④虫草素纯品的制备：用蒸馏水重结晶3-6次，获得虫草素纯品。

其中所采用的蛹虫草固体干燥培养基是由上海市农业科学院植保所栽培的；采用的大孔吸附树脂柱购自天津海光化工公司，型号是NKA-II型；采用的C18柱购自德国Macherey-Nagel公司。

本发明的特点是：①利用虫草干燥固体培养基为原料，来源丰富，成本低廉；②将大孔树脂用于虫草素的进行初步提纯，使虫草素的纯度大幅提高；③通过C18柱进一步纯化，使其达到较高纯度；④利用蒸馏水反复重结晶，成本低，还可以获得高纯度的虫草素晶体。提取的虫草素的纯度达到95％以上。

具体实施方式：

实施例1：

1.虫草素的粗提：以3Kg蛹虫草麦粒培养基为原料，粉碎成粗粒，加入10倍重量的水中，常温浸泡60min，加热至微沸，保持此温度60min，过滤。滤渣重复上述步骤，再提取一次，合并滤液。

2.虫草培养基粗提物的提纯：将静置过夜后的提取液上清过NKA-II型大孔树脂，使树脂对提取液中的虫草素进行充分吸附。先用10％乙醇洗脱大孔树脂，除去部分杂质，再用50％乙醇洗脱，并收集该部分浓缩冻干备用(得7g样品，虫草素纯度达40％)，用95％乙醇对树脂进行再生处理，已备循环使用。

3.虫草素的进一步纯化：取5g上步获得的样品用水溶解后，过C18柱，用水洗脱，收集水相部分浓缩，过滤，置4℃静置析晶，得淡黄色球状固体。

4.虫草素纯品的制备：将上步析出的粗晶体加水使其饱和，置4℃条件下析晶，并反复重结晶4次，就可获得虫草素纯品0.5g(纯度：95.8％)。

实施例2：

1.虫草素的粗提：以2Kg蛹虫草麦粒培养基为原料，粉碎成粗粒，加入10倍重量的水中，常温浸泡60min，加热至微沸，保持此温度90min，过滤。滤渣重复上述步骤，再提取一次，合并滤液。

2.虫草培养基粗提物的提纯：将静置过夜后的提取液上清过NKA-II型大孔树脂，使树脂对提取液中的虫草素进行充分吸附。先用10％乙醇洗脱大孔树脂，除去部分杂质，再用50％乙醇洗脱，并收集该部分浓缩冻干备用(得4g样品，虫草素纯度达30％)，用95％乙醇对树脂进行再生处理，已备循环使用。

3.虫草素的进一步纯化：取3g上步获得的样品用水溶解后，过C18柱，用水洗脱，收集水相部分浓缩，过滤，置4℃静置析晶，得淡黄色球状固体。

4.虫草素纯品的制备：将上步所得样品加水饱和，置4℃条件下析晶，并反复重结晶3次，就可获得虫草素纯品0.3g(纯度：95.2％)。

Claims (1)

1.一种虫草素的分离纯化方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

①虫草素的粗提：将蛹虫草固体干燥培养基粉碎，加入10倍重量的水中，浸泡10-60min后，加热至100℃并保持1-3h，过滤；滤渣重复上述步骤，再提取1次，合并滤液，滤液静置过夜；

②粗提物的提纯：将上述滤液过NKA-II型大孔吸附树脂柱，使树脂对提取液中的虫草素进行充分吸附：先用10％乙醇洗脱除去部分水溶性杂质，再用50％乙醇洗脱，并收集50％乙醇部分进行浓缩干燥；

③虫草素的进一步纯化：将上述获得的样品用水溶解后，过C18柱，用水洗脱，收集水相部分，浓缩，置4℃静置析晶；

④虫草素纯品的制备：用蒸馏水重结晶3-6次，获得虫草素纯品。