CN104926903B - 一种提取虫草中有效成分的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种提取虫草中有效成分的方法，包括以下步骤：粉末状冬虫夏草用酸性水溶液提取，提取液经离心后得到沉淀物和上清液，上清液分别用乙酸乙酯和氯仿萃取后，用大孔吸附树脂吸附水中虫草素，树脂经乙醇解吸后得到纯化的虫草素；沉淀物也分别用乙酸乙酯和氯仿萃取，乙酸乙酯2次萃取液合并精馏后得到虫草多糖，氯仿2次萃取液合并后精馏得到生物碱。本发明用优化大孔吸附树脂吸附虫草素的条件，使其提取量增高到0.83‰；同时提取到虫草中重要活性成分虫草多糖和生物碱。
Description
技术领域
本发明涉及提取冬虫夏草中有有效成分的方法。更具体地说，本发明涉及大孔吸附树脂提取冬虫夏草中虫草素的方法，也提供了提取虫草多糖和生物碱的方法。
背景技术
冬虫夏草是我国的一种名贵中药材，属于药用真菌，是寄生于昆虫体上的真菌与其寄生昆虫形成的虫菌复合体，隶属于子囊菌纲、麦角菌科和虫草属。在近年的研究表明，冬虫夏草具有镇静、抑菌、抑制癌症、增强机体免疫功能等多方面的药理作用。其有效成分生物碱，其含量较少，包含虫草素、尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤等13种，具有抗肿瘤、抗菌抗病毒、免疫调节和清除自由基等多种药理作用，其中虫草素具有很好的抗真菌、细菌、病毒的活性，对链球菌、鼻疽杆菌、炭疽杆菌及葡萄糖球菌等病原菌的生长有抑制作用。
专利201110004151.0公布了一种虫草素的提取方法，首先用行星球磨机将虫草粉碎成粒度0.1微米的颗粒，再将粉末加入到PH值为2-3的水中，利用超生溶解法促进虫草素的在水溶液中的溶出，经离心后收集上清液。之后上清液用活性炭去除色素，再用乙酸乙酯和氯仿分别萃取上清液除杂，移除萃取层的上清液，经大孔吸附树脂吸附后，树脂用水洗除色后用乙醇水溶液洗脱，收集并干燥洗脱液得到虫草素产品。此发明提取的虫草素纯度达到98％以上，提取率为0.31‰。但是此发明在吸附虫草的吸附剂选用D101型树脂，使虫草提取率偏低，在除色和溶剂萃取过程中使虫草中损失掉大量其他活性成分。
发明内容
本发明提供一种提取虫草中有效成分的方法，大孔吸附树脂提取工艺有效提取虫草中虫草素，对虫草素的提取率增加了1倍。
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是可提取虫草中活性成分虫草多糖和生物碱。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种提取虫草中有效成分的方法，所述方法为：
步骤i：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入虫草素水溶液，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为20～60℃，开启搅拌器后放入大孔吸附树脂，大孔树脂与水溶液质量比为0.5～0.8:1，20～60分后停止实验；之后进行减压抽滤将溶液与树脂分离；
步骤ii：树脂装入三口烧瓶中，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为20～60℃，开启搅拌器后放入乙醇，用乙醇解吸树脂中虫草素，树脂与乙醇质量比为1：1.5～4，20～60分后停止实验。
优选的是，其中，所述虫草素水溶液经以下3步制备：
步骤1：将冬虫夏草粉碎成粒径为100目的粉末；
步骤2：将虫草粉末加入到pH值为2的水中，粉末与水的质量比为1：15，混合液在50℃条件下用超声波处理1小时，之后将混合液离心处理得到上清液和沉淀，收集上清液；
步骤3：上清液用乙酸乙酯萃取，再用氯仿萃取。
优选的是，其中，所述步骤2离心所得沉淀分别用乙酸乙酯和氯仿萃取。
优选的是，其中，所述乙酸乙酯萃取液合并后精馏除去乙酸乙酯，得到虫草多糖。
优选的是，其中，所述氯仿萃取液合并后精馏除去氯仿，得到生物碱。
优选的是，其中，所述步骤i的实验时间为45min。
优选的是，其中，所述步骤ii的温度恒定为25℃。
优选的是，其中，所述步骤ii中树脂与乙醇质量比为1：3。
优选的是，其中，所述步骤ii中实验时间为20分钟。
优选的是，其中，所述大孔吸附树脂以下型号中的一种：NKA-II，AB-8，D101，D62。
本发明至少包括以下有益效果：本发明提供一种大孔吸附树脂从酸性水溶液提纯虫草素的方法，大孔吸附树脂对虫草素的提取率增加了1倍，且可同时提取虫草中活性成分虫草多糖和生物碱。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
虫草素水溶液制备方法：
步骤1：将200g冬虫夏草粉碎成粒径为100目的粉末；
步骤2：将200g虫草粉末加入到pH值为2的400g的盐酸水溶液中，混合液在50℃条件下用超声波处理1小时，之后将混合液离心处理得到上清液和沉淀，收集上清液和沉淀物。
步骤3：上清液用乙酸乙酯萃取，再用氯仿萃取，得到虫草素水溶液。
虫草多糖和生物碱的提取：
步骤4：将沉淀物先用乙酸乙酯萃取，再用氯仿萃取。
步骤5：将步骤3和4所得乙酸乙酯萃取液合并，蒸发掉乙酸乙酯，所得浓缩液用75℃水清洗3次后，干燥后得到虫草多糖；将步骤3和4所得氯仿萃取液合并，蒸发掉氯仿，所得浓缩液用55℃水清洗3次后，干燥后得到生物碱。
<实例1>
步骤i：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入20g虫草素水溶液，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为35℃，开启搅拌器后放入10g大孔吸附树脂D101，搅拌45分后停止实验；之后进行减压抽滤将溶液与树脂分离。
步骤ii：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入树脂，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为25℃，开启搅拌器后加入30g乙醇，用乙醇解吸树脂中虫草素，20分钟后停止实验。
将乙醇溶液进行常压精馏除去乙醇，真空干燥后得到虫草素，其提取率为0.35‰。
<实例2>
步骤i：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入20g虫草素水溶液，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为35℃，开启搅拌器后放入10g大孔吸附树脂AB-8，搅拌45分后停止实验；之后进行减压抽滤将溶液与树脂分离。
步骤ii：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入树脂，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为25℃，开启搅拌器后加入30g乙醇，用乙醇解吸树脂中虫草素，20分钟后停止实验。
将乙醇溶液进行常压精馏除去乙醇，真空干燥后得到虫草素，其提取率为0.19‰。
<实例3>
步骤i：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入20g虫草素水溶液，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为35℃，开启搅拌器后放入10g大孔吸附树脂D62，搅拌45分后停止实验；之后进行减压抽滤将溶液与树脂分离。
步骤ii：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入树脂，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为25℃，开启搅拌器后加入30g乙醇，用乙醇解吸树脂中虫草素，20分钟后停止实验。
将乙醇溶液进行常压精馏除去乙醇，真空干燥后得到虫草素，其提取率为0.29‰。
<实例4>
步骤i：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入20g虫草素水溶液，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为35℃，开启搅拌器后放入10g大孔吸附树脂NKA-II，搅拌45分后停止实验；之后进行减压抽滤将溶液与树脂分离。
步骤ii：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入树脂，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为25℃，开启搅拌器后加入30g乙醇，用乙醇解吸树脂中虫草素，20分钟后停止实验。
将乙醇溶液进行常压精馏除去乙醇，真空干燥后得到虫草素，其提取率为0.41‰。
比较实施例1-4可知，在相同实验条件下，大孔吸附树脂NKA-II的吸附效果较AB-8，D101，D62好，本发明选用大孔吸附树脂NKA-II提取水溶液中的虫草素，下面实施例比较树脂吸附最佳吸附条件。
<实例5>
步骤i：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入20g虫草素水溶液，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为35℃，开启搅拌器后放入12g大孔吸附树脂NKA-II，搅拌45分后停止实验；之后进行减压抽滤将溶液与树脂分离。
步骤ii：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入树脂，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为25℃，开启搅拌器后加入30g乙醇，用乙醇解吸树脂中虫草素，20分钟后停止实验。
将乙醇溶液进行常压精馏除去乙醇，真空干燥后得到虫草素，其提取率为0.63‰。
<实例6>
步骤i：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入20g虫草素水溶液，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为35℃，开启搅拌器后放入14g大孔吸附树脂NKA-II，搅拌45分后停止实验；之后进行减压抽滤将溶液与树脂分离。
步骤ii：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入树脂，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为25℃，开启搅拌器后加入30g乙醇，用乙醇解吸树脂中虫草素，20分钟后停止实验。
将乙醇溶液进行常压精馏除去乙醇，真空干燥后得到虫草素，其提取率为0.75‰。
<实例7>
步骤i：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入20g虫草素水溶液，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为35℃，开启搅拌器后放入16g大孔吸附树脂NKA-II，搅拌45分后停止实验；之后进行减压抽滤将溶液与树脂分离。
步骤ii：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入树脂，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为25℃，开启搅拌器后加入30g乙醇，用乙醇解吸树脂中虫草素，20分钟后停止实验。
将乙醇溶液进行常压精馏除去乙醇，真空干燥后得到虫草素，其提取率为0.81‰。
比较实施例4-7，在其他实验时间相同的条件下，树脂NKA-II的用量从10、12、14增加到16g，虫草素的提取率从0.41‰、0.63‰、0.75‰升高到0.81‰，可见随着树脂用量的增加提取率升长，而增长率却在下降。可见，实施例6中虫草素在树脂中浓度在最高，可见虫草素水溶液与树脂用量最佳比例为1：0.7。
<实例8>
步骤i：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入20g虫草素水溶液，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为25℃，开启搅拌器后放入14g大孔吸附树脂NKA-II，搅拌45分后停止实验；之后进行减压抽滤将溶液与树脂分离。
步骤ii：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入树脂，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为25℃，开启搅拌器后加入30g乙醇，用乙醇解吸树脂中虫草素，20分钟后停止实验。
将乙醇溶液进行常压精馏除去乙醇，真空干燥后得到虫草素，其提取率为0.51‰。
<实例9>
步骤i：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入20g虫草素水溶液，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为45℃，开启搅拌器后放入14g大孔吸附树脂NKA-II，搅拌45分后停止实验；之后进行减压抽滤将溶液与树脂分离。
步骤ii：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入树脂，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为25℃，开启搅拌器后加入30g乙醇，用乙醇解吸树脂中虫草素，20分钟后停止实验。
将乙醇溶液进行常压精馏除去乙醇，真空干燥后得到虫草素，其提取率为0.83‰。
<实例10>
步骤i：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入20g虫草素水溶液，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为55℃，开启搅拌器后放入14g大孔吸附树脂NKA-II，搅拌55分后停止实验；之后进行减压抽滤将溶液与树脂分离。
步骤ii：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入树脂，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为25℃，开启搅拌器后加入30g乙醇，用乙醇解吸树脂中虫草素，20分钟后停止实验。
将乙醇溶液进行常压精馏除去乙醇，真空干燥后得到虫草素，其提取率为0.79‰。
比较实施例6、8、9和10可见，在其他实验条件相同的时，最初随着温度从25摄氏度升高到45℃，提取率由0.51‰上升至0.83‰，但温度为55℃时，提取率反而降低至0.79‰，是由于树脂吸附为动态吸附，即吸附和解吸同时进行，当吸附速率高于解吸速率时，外在表现为吸附行为，随着温度升高，吸附速率升高较解吸速率快，但当温度偏高导致解吸速率升高，而吸附速率相应降低，随外表现仍为吸附行为，但是吸附率明显降低。
所以大孔吸附树脂吸附虫草素的最佳吸附条件为：树脂选用型号为NKA-II,吸附温度为45℃，虫草素水溶液与树脂质量比为1：0.7。
本发明至少包括以下有益效果：本发明提供一种大孔吸附树脂从酸性水溶液提纯虫草素的方法，大孔吸附树脂对虫草素的提取率增加了1倍，且可同时提取虫草中活性成分虫草多糖和生物碱。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用。它完全可以被适用于各种适合本发明的领域。对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改。因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。
Claims (3)
1.一种提取虫草中有效成分的方法，所述方法为：
步骤i：在装有温度计和搅拌器的三口烧瓶中加入20g虫草素水溶液后，将烧瓶置于恒温水浴中，水温恒定为45℃，开启搅拌器后放入14g大孔吸附树脂NKA-II，搅拌45分钟后停止实验；之后进行减压抽滤将溶液与大孔吸附性树脂NKA-II分离；
步骤ii：大孔吸附性树脂NKA-II装入三口烧瓶中后，将烧瓶至于恒温水浴中，水温恒定为25℃，开启搅拌器后放入30g乙醇，用乙醇解吸大孔吸附性树脂NKA-II中的虫草素，20分钟后停止实验，将乙醇溶液进行常压精馏除去乙醇，真空干燥后得到虫草素；
所述虫草素水溶液经以下三步制备：
步骤一：将冬虫夏草粉碎成粒径为100目的粉末；
步骤二：将200g虫草粉末加入到400g pH值为2的盐酸水溶液中，混合液在50℃条件下用超声波处理1小时，之后将混合液离心处理得到上清液和沉淀物，收集上清液；
步骤三：上清液先用乙酸乙酯萃取，再用氯仿萃取；
其中，所述步骤二中沉淀物分别先用乙酸乙酯萃取，再用氯仿萃取。
2.如权利要求1所述的提取虫草中有效成分的方法，其中乙酸乙酯萃取液合并后精馏除去乙酸乙酯，得到虫草多糖。
3.如权利要求1所述的提取虫草中有效成分的方法，其中氯仿萃取液合并后精馏除去氯仿，得到生物碱。
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Inventor after: Lin Hu Inventor before: Wu Aiqun |
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| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20180326 Address after: 100085 room 4, room 5, Haidian District trail Road, Beijing, Beijing Applicant after: Beijing Hui Hui Biological Technology Co., Ltd. Address before: 532100 the Guangxi Zhuang Autonomous Region Chongzuo city Fusui County Nanmi Road business district (two) No. 15 building 302 room Applicant before: Wu Aiqun |
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| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20210528 Address after: 110300 Central Avenue, Xinmin Economic Development Zone, Shenyang City, Liaoning Province Patentee after: Shenyang Linte Pharmaceutical Co.,Ltd. Address before: 100085 room A404, 4th floor, No.5 Kaifa Road, Haidian District, Beijing Patentee before: BEIJING HUILINSI BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. |
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| TR01 | Transfer of patent right |