CN102643318B - 一种从蛹虫草子实体中提取精制虫草素的方法 - Google Patents
一种从蛹虫草子实体中提取精制虫草素的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102643318B CN102643318B CN201210084508.5A CN201210084508A CN102643318B CN 102643318 B CN102643318 B CN 102643318B CN 201210084508 A CN201210084508 A CN 201210084508A CN 102643318 B CN102643318 B CN 102643318B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cordycepin
- volume
- eluent
- cordyceps militaris
- hours
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种从蛹虫草子实体中提取精制虫草素的方法。采用的技术方案是：将蛹虫草子实体粉碎，过16目筛备用；取粉碎后的原料加3倍体积的70%乙醇浸泡24小时；将浸泡后的混悬液加入回流装置中，加热回流2～4小时，过滤；滤液用正丁醇萃取2～5次；将上清液60℃减压浓缩至无醇味的浸膏；浸膏经硅胶柱洗脱，流动相为按体积比，乙酸乙酯：95%乙醇为5:3，回收洗脱液，TLC跟踪检测；将回收的洗脱液，再次减压蒸馏浓缩为接收洗脱液体积的1/5；浓缩后的洗脱液在室温下结晶。本发明可减少有机溶剂用量，减少分离步骤，提高提取率，降低毒性，可以使蛹虫草中虫草素富集，生产成本低，虫草素纯度高。
Description
技术领域
本发明属于药用真菌提取领域，具体地涉及一种从蛹虫草子实体中提取精制虫草素的方法。
背景技术
虫草素（cordycepin,3′-脱氧腺苷）是蛹虫草中主要活性成分之一，是一种具有较高药用价值的核苷类物质。近几年来发现虫草素具有抗菌、消炎、抗肿瘤、免疫调节等多种药理作用，无论是医疗康复还是保健养生，虫草素有巨大的潜在市场和现实市场。目前虫草素纯品在国际市场上价格昂贵，约为1000美元/g。人工培育蛹虫草技术已经非常成熟，其子实体价格低廉，子实体中虫草素含量高达7‰，因此开展虫草素分离纯化工艺具有很好的商业价值。
目前，虫草素的分离方法有离子交换树脂、大孔吸附树脂、氧化铝柱层析、活性炭吸附法等。其中离子交换树脂吸附法需要用酸碱处理，后续处理比较复杂，其他提取方法提取率低，分离纯化选择性差，难以进行工业化生产。
发明内容
本发明目的在于提供一种可减少有机溶剂用量，减少分离步骤，提高提取率，降低毒性的一种从蛹虫草子实体中提取精制虫草素的方法。通过本发明的方法可以使蛹虫草中虫草素富集，生产成本低，虫草素纯度高。
本发明采用的技术方案是：一种从蛹虫草子实体中提取精制虫草素的方法，步骤如下：
1）将蛹虫草子实体粉碎，过16目筛备用；
2）取粉碎后的原料加3倍体积的70%乙醇浸泡24小时；
3）将浸泡后的混悬液加入回流装置中，加热回流2～4小时，过滤；
4）滤液用正丁醇萃取2～5次，取上清液；
5）上清液60℃减压浓缩至无醇味的浸膏；
6）将浸膏经硅胶柱洗脱，流动相为按体积比，乙酸乙酯：95%乙醇为5:3，回收洗脱液，TLC跟踪检测；优选，硅胶柱的柱高为柱直径的10-15倍；
7）将回收的洗脱液，再次减压蒸馏浓缩为接收洗脱液体积的1/5；
8）浓缩后的洗脱液在室温下结晶。
本发明的有益效果是：（1）设备投资少。本发明不需要复杂的提取、分离纯化设备，整个提取、分离纯化过程可在简单的容器和层析柱内完成即可，成本低廉。（2）原料来源丰富，以蛹虫草子实体为原料，成本低廉。（3）分离步骤采用柱层析分离富集虫草素，分离效果较好，纯化出的虫草素纯度较高，高达98%。（4）毒性较低。硅胶柱色谱作为一种分离的方法，根据物质在硅胶上的吸附力不同，通过吸附、解吸、再吸附、再解吸过程，对不同极性化合物能进行有效地分离。但是目前硅胶柱色谱中，流动相一般采用氯仿、乙酸乙酯、异丙醇和水，有机溶剂使用量增高，配比复杂，不利于流动相的回收利用，成本增加，而且氯仿为高毒物质，不利于食品安全，本发明克服以上不足采用乙酸乙酯和95%乙醇作为流动相，成本低廉，降低毒性。
附图说明
图1虫草素标准品高效液相色检测图。
图2图1得到的色谱峰的结果。
图3实施例1得到的虫草素洗脱液高效液相色检测图。
图4图3得到的色谱峰的结果。
图5实施例1得到的虫草素红外谱图。
具体实施方式
实施例1 一种从蛹虫草子实体中提取精制虫草素的方法
（一）步骤如下：
1) 取2000克干燥的蛹虫草子实体用中药粉碎机粉碎，过16目筛备用；
2) 粉碎后的原料加3倍体积的70%乙醇（室温）浸泡24小时；
3) 将浸泡后的混悬液加入回流装置中，加热回流，第一次为2h，放凉四层纱布过滤，之后滤渣再次加入70%乙醇，每次1h，再回流2次，合并三次的滤液；
4) 滤液用正丁醇按1:5于分液漏斗中萃取5次，取上清液；
5) 上清液60℃减压浓缩至无醇味的浸膏；
6) 经硅胶柱洗脱，硅胶型号200-300目，柱高以柱直径的10-15倍为宜，浸膏干法上样，流动相为按体积比，乙酸乙酯: 95%乙醇为5:3，回收洗脱液，每接收一定量时以虫草素标准品为对照，TLC检测，直至洗脱液无该物质为止；
7) 将回收的洗脱液，再次减压蒸馏浓缩为接收洗脱液体积的1/5；
8) 浓缩后的洗脱液在室温下结晶，即为虫草素晶体。
（二）测定
1．高效液相色法测定虫草素含量
1）试剂和材料
甲醇（色谱纯），纯净水，虫草素标准品。
2）色谱条件： Diamonsil 反相C18柱（250×4.6mm,5μm）；waters高效液相，1525泵；2478紫外可见光检测器；流动相：甲醇:水=15:85（v/v）；流速为1ml/min；260nm紫外检测波长；进样量20μl。
3）虫草素标准溶液的配制
准确秤取虫草素标准品5mg,甲醇溶解定容至10ml，配置成500mg/ml的标准储备液。再将其稀释成10、20、30、50、70/100μg/ml虫草素标准液，分别取上述溶液20μl，按色谱条件分别进样，测定峰面积。得到回归方程为y=58011.3x-58391.8相关系数r=0.9997。图1为虫草素标准品高效液相色检测图。图2为图1得到的色谱峰的结果。
4）样品测定：
取本实施例得到的虫草素，加入甲醇稀释至100ml，过0.22μm微孔滤膜，20μl进样，高效液相色检测图如图3，色谱峰的结果如图4。通过回归方程计算虫草素含量，虫草素的含量为13.3 μg/ml。采用上述方法每千克蛹虫草子实体可获得虫草素720 mg，回收率为27.4%。从虫草素峰面积占所有峰面积的比值可以看出，虫草素的纯度达到98.08%。说明采用本发明的方法获得了高纯度的虫草素。
2．自制样品红外图谱
取本实施例得到的虫草素样品，测定红外图谱，结果见图5。红外图谱数据：3319.4、3143.1、2927.6、1684.6、1614.4、1567.9、1468.3、1421.6、1395.4、1339.4、1298.1、1201.1、1172.7、967.7、843.05、719.6 cm-1。虫草素标准红外数据是：3331.3、3141.6、2922.9、1675.0、1575.7、1478.7、1420.2、1384.8、1340.5、1299.6、1208.3、1175.5、958.8、835.2、725.5cm-1。进一步证明本发明的方法获得了虫草素。
Claims (1)
1.一种从蛹虫草子实体中提取精制虫草素的方法，其特征在于步骤如下：
1）将蛹虫草子实体粉碎，过16目筛备用；
2）取粉碎后的原料加3倍体积的70%乙醇浸泡24小时；
3）将浸泡后的混悬液加入回流装置中，加热回流2～4小时，过滤；
4）滤液用正丁醇萃取2～5次，取上清液；
5）上清液60℃减压浓缩至无醇味的浸膏；
6）经硅胶柱洗脱，硅胶型号200-300目，柱高为柱直径的10-15倍，浸膏干法上样，流动相为按体积比，乙酸乙酯: 95%乙醇为5:3，回收洗脱液，TLC跟踪检测；
7）将回收的洗脱液，再次减压蒸馏浓缩为接收洗脱液体积的1/5；
8）浓缩后的洗脱液在室温下结晶。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210084508.5A CN102643318B (zh) | 2012-03-28 | 2012-03-28 | 一种从蛹虫草子实体中提取精制虫草素的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210084508.5A CN102643318B (zh) | 2012-03-28 | 2012-03-28 | 一种从蛹虫草子实体中提取精制虫草素的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102643318A CN102643318A (zh) | 2012-08-22 |
| CN102643318B true CN102643318B (zh) | 2014-10-22 |
Family
ID=46656423
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210084508.5A Expired - Fee Related CN102643318B (zh) | 2012-03-28 | 2012-03-28 | 一种从蛹虫草子实体中提取精制虫草素的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102643318B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104926904B (zh) * | 2015-07-14 | 2017-11-10 | 辽宁大学 | 一种从蛹虫草菌皮中提取纯化虫草素的方法 |
| CN105784904B (zh) * | 2016-03-22 | 2017-06-16 | 辽宁大学 | 测定肝微粒体中虫草素代谢物的液质联用方法 |
| CN106317148B (zh) * | 2016-07-29 | 2019-02-19 | 河北省科学院生物研究所 | 一种从蛹虫草中提取虫草素的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005030231A1 (fr) * | 2003-09-28 | 2005-04-07 | Shaosheng Sun | Extraction de l'aweto, fabrication et utilisation |
| CN101007025A (zh) * | 2006-01-24 | 2007-08-01 | 上海市农业科学院 | 一种连续提取北冬虫夏草子实体有效成分的方法 |
| CN101229199A (zh) * | 2008-01-15 | 2008-07-30 | 重庆和润生物工程有限公司 | 北冬虫夏草菌丝体中多种有效成分的综合提取方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS588093A (ja) * | 1981-07-06 | 1983-01-18 | Yamasa Shoyu Co Ltd | ５−ハロゲノ−３′−デオキシウリジンおよびその製造法 |
-
2012
- 2012-03-28 CN CN201210084508.5A patent/CN102643318B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005030231A1 (fr) * | 2003-09-28 | 2005-04-07 | Shaosheng Sun | Extraction de l'aweto, fabrication et utilisation |
| CN101007025A (zh) * | 2006-01-24 | 2007-08-01 | 上海市农业科学院 | 一种连续提取北冬虫夏草子实体有效成分的方法 |
| CN101229199A (zh) * | 2008-01-15 | 2008-07-30 | 重庆和润生物工程有限公司 | 北冬虫夏草菌丝体中多种有效成分的综合提取方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| JP昭58-8093A 1983.01.18 |
| 人工蛹虫草子实体化学成分的研究;吕子明;《沈阳药科大学硕士学位论文》;20030714;11-13,32-34 * |
| 吕子明.人工蛹虫草子实体化学成分的研究.《沈阳药科大学硕士学位论文》.2003,11-13，32-34. |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102643318A (zh) | 2012-08-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107337586B (zh) | 一种从汉麻中提取纯化大麻二酚的方法 | |
| CN101130548B (zh) | 一种提取制备高含量青蒿素的方法 | |
| CN101157712B (zh) | 一种虫草素的分离纯化方法 | |
| CN101336949B (zh) | 从白子菜中提取多糖和黄酮的方法 | |
| CN101274953B (zh) | 从植物中提制科罗索酸的方法 | |
| CN101074188B (zh) | 利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法 | |
| CN102643318B (zh) | 一种从蛹虫草子实体中提取精制虫草素的方法 | |
| CN101928316A (zh) | 一种高纯度片状虫草素晶体的制备方法 | |
| CN110590882B (zh) | 一种从金花葵花中同时分离纯化6种黄酮化合物的方法 | |
| CN102093328B (zh) | 一种富集纯化松树皮中原花青素的方法 | |
| CN108218948A (zh) | 一种七叶皂苷钠的制备方法 | |
| CN102070569B (zh) | 一种富集纯化荨麻中3，4二香草基四氢呋喃的方法 | |
| CN107245046B (zh) | 一种从辣椒中提取分离辣椒总生物碱和辣椒红色素的方法 | |
| CN103059037B (zh) | 一种富集纯化白屈菜中白屈菜碱的方法 | |
| CN101353294A (zh) | 高含量白藜芦醇分离纯化的方法 | |
| CN111253221B (zh) | 一种大麻二酚分离纯化的方法 | |
| CN101805269A (zh) | 一种分离提取天然茶氨酸的方法 | |
| CN107235988A (zh) | 一种青蒿素及次甲基青蒿素的提取方法 | |
| CN104926904B (zh) | 一种从蛹虫草菌皮中提取纯化虫草素的方法 | |
| CN102329346A (zh) | 一种从肉苁蓉中提取松果菊苷的方法 | |
| CN102532219A (zh) | 一种富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法 | |
| CN111848705A (zh) | 一种茶中糖苷结合态香气前体物质的制备分离方法 | |
| CN110437070A (zh) | 一种以甜菊叶为原料综合利用制备高纯度绿原酸的方法及其制备得到的绿原酸 | |
| CN108164382B (zh) | 一种从啤酒花中综合提取黄酮化合物的方法 | |
| CN102093327B (zh) | 一种富集纯化狼毒中狼毒素的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20181012 Address after: 110000 two villages in Guanghui livestock farm, Yuhong District, Shenyang, Liaoning Patentee after: LIAONING HONGQIAO BIOLOGICAL POLYTRON TECHNOLOGIES Inc. Address before: 110136 58 Shenbei New Area Road South, Shenyang, Liaoning. Patentee before: Liaoning University |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20141022 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |