CN103936806B - 从蛹虫草中提取虫草素的工艺方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从蛹虫草中提取虫草素的工艺方法，通过醇提、浓缩、脱蜡、纯化、液膜萃取、精制和干燥。与现有技术相比，本发明工艺最为简单、生产周期短，有机溶剂用量少且可重复使用，产品得率高，特别是采用FEP高分子聚合物填料的液膜萃取系统，材料重复使用期长，在理论上可以无限期地重复使用，因而可以大大节约生产成本，特别是所生产的产品纯度高，所提取的精品虫草素含量可达98%以上，为大规模工业化生产提供了条件。

Description

从蛹虫草中提取虫草素的工艺方法

技术领域

本发明涉及一种虫草素的提取方法，具体地说是一种从蛹虫草中提取虫草素的工艺方法。

背景技术

虫草素(cordycepin)又称虫草菌素、蛹虫草菌素，是蛹虫草中（尤其是核苷类）主要活性成分，也是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗生素。

虫草素是一种天然来源的药物，具有抗肿瘤、抗菌抗病毒、免疫调节、清除自由基等多种药理作用外，有良好的临床应用前景。

目前虫草素的研究现正成为药物化学中一个极其活跃的领域。

虫草素(Cordycepin) 是腺苷的类似物，分子式: C₁₀H₁₃N₅O₃，分子量: 251.24，碱性，针状或片状结晶，熔点230℃～231℃，最大吸收波长为259．0 nm，溶于水、热乙醇和甲醇，不溶于苯、乙醚和氯仿。1951年，德国的Cunningham等[4]从蛹虫草的培养滤液中分离发现虫草素。

1957年Cunningham等从Cordycepsmilitaris原浆液中分离得到虫草素以来，其多种生物活性逐渐被人们所认识。

上个世纪六十年代起，虫草素的合成与提取，在国内外科技界就引起了广泛关注与重视。虽然我国在1964年曾有过人工合成虫草素的报道，但未曾看到继续深入研究的报告。

1989年就有从蛹虫草菌丝中分离出虫草素的报告；美国SIGMA公司是全世界最大的生物标准品专业公司，也从蛹虫草中提取出了高纯度标准品。

近年来，研究人员发现虫草素具有免疫调节作用。此外，虫草素还能抑制蛋白质激酶活性，抗核苷磷酸化酶糖基的裂解，对体液免疫有调节作用。虫草素具有广谱抗菌的作用，它能抑制链球菌、鼻疽杆菌、炭疽杆菌、猪出血性败血症杆菌及葡萄球菌等病原菌的生长。此外，虫草素对石膏样小芽孢癣菌、羊毛状小芽孢癣菌、须疮癣菌等皮肤致病性真菌以及枯草杆菌也有抑制作用。Sugar证明了虫草素具有非常强的抗真菌活性。

虫草素也具有较强的抗病毒活性。研究发现，虫草素有抗疱疹病毒DeJulian-Ortiz和抑制脑炎病毒的功能，对人体免疫缺陷型病毒HIV-I型的侵染及其反转录酶的活性亦有抑制作用。深入研究发现，虫草素可抑制C型RNA致肿瘤病毒的复制，还可以有效抑制病毒的mRNA和多聚腺苷酸的合成，可以阻碍由5-I-2'-脱氧尿苷诱导的BALB/3T3和BALB/K-3T3细胞产生的鼠白血病病毒。3.4虫草素的抗炎作用。

其他研究发现虫草素对TdT+的白血病细胞的凋亡诱导与提高蛋白激酶A(PK-A)活性密切相关，并且经虫草素处理L1210白血病细胞，可显著抑制RNA的甲基化。

传统医学认为，虫草因药性平和，温而不燥，补而不滞，既补虚强身，又能治病延年，药性比人参、鹿茸更加平稳，比较不受体质、病症、季节、年龄的限制，无论强者、弱者、健者、病者，都可藉以提高免疫力和抗病力。现代生活工作节奏过快，压力增大，免疫系统功能减弱，极易引起肿瘤、肝炎等疾病。男性因肾功能减弱，常常会表现为头发脱落加速、性功能减弱，女性常表现为消瘦失眠，神疲食少、脾气暴躁、焦虑不安，加速更年期的到来等。可见，虫草是现代人保护自己健康的最佳保健品。

目前获取虫草素的方法主要有三条途径：从天然虫草中提取、人工合成和通过生物工程的方法从北虫草组织液中提取。

天然虫草资源稀缺，价格昂贵，含量甚微，很难成为主要原料。

人工合成虫草素虽然在上个世纪六十年代我国曾有报道，但由于合成的起始原料较贵或设备投入巨大或产业化工艺缺失或总收率太低或合成工艺技术无法重复，迄今难以实现产业化。

目前，通过人工方法培育虫草子实体已经能够实现产业化，能够提供足够的生产原料，因此，通过生物工程的方法，从人工培育的虫草子实体中提取虫草素，是实现虫草素作为治疗药物产业化生产的最可行的途径。

目前以蛹虫草为材料提取虫草素的方法主要有以下几种：采用超声波水提法、超声波醇提法、水热回流法和醇热回流法4 种。

虫草素的分离纯化方法：车振明等经过对蛹虫草子实体及培养基的粉碎、石油醚脱脂、80℃～85℃水浴、调节等电点沉淀、732-NH4离子交换树脂的分离、浓缩后，在4℃下低温结晶，得到一定纯度的虫草素晶体。

陈顺志等以蛹虫草人工培养后的发酵物为原料，采用超临界技术萃取核苷类有效成分，并以乙醇等作为夹带剂减压分离获得核苷多组份及单体。Cunnigham等将虫草菌培养液经过滤后用活性炭吸附，再经过洗脱液洗脱和浓缩，得到虫草素晶体。

目前工业化生产中，主要选用水提80%乙醇提取后，再经过脱脂、脱色处理，蒸发浓缩后，以3ML-7大孔树脂吸附纯化，进入层析柱分离，再经过重结晶，最终得到虫草素。该方法所得虫草素纯度相对较低，一般在92%左右，虽然可以实现规模化生产，但工艺比较复杂，特别是用大孔树脂作为吸附材料，重复使用性能不佳，造成生产成本很高。

因此如何提高蛹虫草中虫草素的含量并实现虫草素的工业化生产，是目前国内外研究的主要方向。

因此，一种能够较大程度地降低生产成本，特别是生产高纯度虫草素的工艺方法就应运而生。

发明内容

本发明的目的是提供一种虫草素的提取方法，具体地说是一种从蛹虫草中提取虫草素的工艺方法，特别是一种能够较大程度地降低生产成本并提高虫草素纯度的工艺方法。

本发明的目的主要通过以下过程实现的。

醇提：取粉碎后的蛹虫草颗粒，在提取罐中，按每100Kg浓度≧80%的乙醇溶剂中加入5～10Kg蛹虫草颗粒提取1～3次，提取过程中最好进行搅拌并加热，温度保持在48～52℃，每次提取30～120分钟，取提取液。

上述的蛹虫草粉碎成0.5mm以下的颗粒，最好在120～180μm。

上述蛹虫草颗粒可重复进行1～3次醇提过程，所得提取液混合后进入下一工序。

浓缩：将醇提所得提取液置入降膜蒸发器，在低于0.1MPa负压下抽滤并冷却，所得滤液进行加热回收溶剂，当浓缩物固液比低于1：10时，得浓缩提取物。

脱蜡：按浓缩提取物重量的1.5～2.5倍量加入石油醚，置入3～5级萃取系统内进行萃取，温度控制在40～60℃, 萃取2～6h，分离后得液相和固相。

将所得液相置入溶剂蒸馏塔内进行脱溶脱溶1～3次，脱去石油醚后所得脱蜡提取物，即虫草素成分。

纯化：将脱蜡后的脱蜡提取物加入液膜萃取系统中进行萃取纯化，具体过程如下：按每100Kg混合溶剂中加入脱蜡提取物5～30Kg的比例置入液膜萃取纯化系统的溶剂罐中进行萃取4～6h后进行分离，收集上层清液，即萃取相为粗品虫草素，下层即萃余相，即含多糖、蛋白物为主的为虫草萃余混合物。

上述每100Kg混合溶剂中加入脱蜡提取物优选为10～20Kg。

所述混合溶剂为：乙酸乙酯、正丁醇、氨水的混合液，混合比为：乙酸乙酯：正丁醇：氨水=1：1.5：3～1：2：4，其中氨水浓度为1～3‰。

所述液膜萃取系统的萃取膜为FEP（四氟乙烯和六氟丙烯的共聚物）高分子聚合物填料，粒径规格0.5～0.8mm，颗粒内布有10～50μm的微孔，每立方米塔板数为3000～5000。

将萃取相在45～85℃下进行脱溶，得虫草素浓缩物。

所述萃取相脱溶最好在旋转蒸发仪中进行。

将萃余相放入旋转蒸发仪中，45～85℃下脱去残余的混合溶剂，可得粗品多糖。

精制：

a) 按每Kg虫草素浓缩物，加入到95%以上浓度的乙醇3～5Kg中，同时加入活性炭20～60g和硅藻土40～60g，在脱色罐内搅拌充分混合，搅拌40～60分钟后，静置2～4h，过38～80μm网或筛取液相；

b) 将所得液相加入精密过滤机中180～400目、0.3MPa以上压力下进行过滤取液相，将色素及其它杂质滤除，然后进行脱溶，可用旋转蒸发仪脱溶；

上述a)、b)过程最好重复1～3次，即将脱溶所得物，再按每Kg再溶入3～5Kg的无水乙醇中，充分搅拌混合后，静置3～5h后，置入38～80μm滤芯的精密过滤机中、0.3MPa以上压力下进行过滤、脱溶，再进入结晶工序；

c) 将脱溶后的物料放入罐中，在-4～-20℃温度环境下2～4小时进行结晶，所得结晶即为精品虫草素。

上述脱溶后的物料最好装入316不锈钢罐中，再将不锈钢罐放置在冷藏箱内进行结晶。

干燥：将上述精品虫草素结晶放入低温真空冻干机中，进行干燥处理至含水量8-12%即可。

与现有技术相比，本发明工艺最为简单、生产周期短，有机溶剂用量少且可重复使用，产品得率高，特别是采用FEP高分子聚合物填料的液膜萃取系统，材料重复使用期长，在理论上可以无限期地重复使用，因而可以大大节约生产成本，特别是所生产的产品纯度高，所提取的精品虫草素含量可达98%以上，为大规模工业化生产提供了条件。

具体实施方式

实施例1：取粉碎成120μm的蛹虫草颗粒后置入提取罐中，按每100Kg浓度85%的乙醇溶剂中加入10Kg蛹虫草颗粒提取3次，提取时搅拌并加热，温度保持在50℃60分钟，取提取液。

合并醇提所得提取液置入降膜蒸发器，在0.05MPa负压下抽滤并冷却，所得滤液进行加热回收溶剂，当浓缩物固液比低于1：10时，得浓缩提取物。

按浓缩提取物重量的2倍量加入石油醚，置入3～5级萃取系统内进行萃取，温度控制在40～60℃, 萃取2～6h，用38～180μm滤网过滤分离后得液相和固相。

将所得液相置入溶剂蒸馏塔内进行脱溶脱溶2次，脱去石油醚后得脱蜡提取物，即虫草素成分，为含油组份。

将脱蜡后的脱蜡提取物加入液膜萃取系统中进行萃取纯化，具体过程如下：按每100Kg混合溶剂中加入脱蜡提取物15Kg的比例置入液膜萃取纯化系统的溶剂罐中进行萃取5h后进行分离，收集上层清液，即萃取相为粗品虫草素，下层即萃余相，为含多糖、蛋白物为主的为虫草萃余混合物。

所述混合溶剂为：乙酸乙酯、正丁醇、氨水的混合液，混合比为：乙酸乙酯：正丁醇：氨水=1：2：4，其中氨水浓度为1‰。

所述液膜萃取系统的萃取膜为FEP高分子聚合物填料，采用从美国杜邦公司进口的FEP氟树脂原料，加工制成粒径规格0.5mm的颗粒，颗粒内有10～50μm的微孔，每立方米塔板数为3500。

将萃取相置旋转蒸发仪中，80℃下进行脱溶，得虫草素浓缩物。将萃余相放入旋转蒸发仪中，80℃下脱去残余的混合溶剂，可得粗品多糖。

按每Kg虫草素浓缩物，加入95%以上浓度的乙醇3Kg中，同时加入活性炭50g和硅藻土50g，在脱色罐内搅拌充分混合，搅拌60分钟后，静置3h，过49μm网或筛取液相；将所得液相加入49μm滤芯的精密过滤机中、0.3MPa以上压力下进行过滤取液相，将色素及其它杂质滤除，然后用旋转蒸发仪进行脱溶；上述过程再重复进行2次，即将脱溶所得物，再按每Kg再溶入5Kg的无水乙醇中，充分搅拌混合后，静置3h后，置入49μm滤芯的精密过滤机中、0.3MPa以上压力下进行过滤，然后进行脱溶，之后再进入结晶工序。

将脱溶后的物料放入罐中，用316不锈钢罐，放置在冷藏箱内，在-20℃温度环境下3小时进行结晶，所得结晶即为精品虫草素。

将上述精品虫草素结晶放入低温真空冻干机中，进行干燥处理至含水量10%即可。

实施例2：取粉碎成180μm的蛹虫草颗粒后置入提取罐中，按每100Kg浓度90%的乙醇溶剂中加入8Kg蛹虫草颗粒提取2次，提取过程中搅拌并加热，温度保持在52℃，保温120分钟，取提取液。

将醇提所得提取液置入降膜蒸发器，在0.05MPa负压下抽滤并冷却，所得滤液进行加热回收溶剂，当浓缩物固液比1：8时，得浓缩提取物。

按浓缩提取物重量的1.5倍量加入石油醚，置入3级萃取系统内进行萃取，温度控制在60℃, 萃取3h，分离后得液相和固相。

将所得液相置入溶剂蒸馏塔内进行脱溶脱溶1次，脱去石油醚后得脱蜡提取物，即虫草素成分，为含油组份。

将脱蜡后的脱蜡提取物加入液膜萃取系统中进行萃取纯化，具体过程如下：按每100Kg混合溶剂中加入脱蜡提取物12Kg的比例置入液膜萃取纯化系统的溶剂罐中进行萃取6h后进行分离，收集上层清液，即萃取相为粗品虫草素，下层即萃余相，即含多糖、蛋白物为主的为虫草萃余混合物。

所述混合溶剂为：乙酸乙酯、正丁醇、氨水的混合液，混合比为：乙酸乙酯：正丁醇：氨水=1：1.5：3，其中氨水浓度为3‰。

所述液膜萃取系统的萃取膜为FEP高分子聚合物填料，粒径规格0.6mm，每立方米塔板数为4000。

将萃取相置旋转蒸发仪中，85℃下进行脱溶，得虫草素浓缩物。

将萃余相放入旋转蒸发仪中，85℃下脱去残余的混合溶剂，可得粗品多糖。

按每Kg虫草素浓缩物，加入97%浓度的乙醇3Kg中，同时加入活性炭20g和硅藻土40g，在脱色罐内搅拌充分混合，搅拌40分钟后，静置2h，过80μm网或筛取液相；将所得液相加入80μm滤芯的精密过滤机中、0.3MPa以上压力下进行过滤取液相，将色素及其它杂质滤除，然后用旋转蒸发仪脱溶；上述过程再重复1次，之后再进入结晶工序。

将脱溶后的物料放入罐中用316不锈钢罐，放置在冷藏箱内）在-15℃温度环境下4小时进行结晶，所得结晶即为精品虫草素。

将上述精品虫草素结晶放入低温真空冻干机中，进行干燥处理至含水量8%即可。

实施例3：取粉碎成150μm的蛹虫草颗粒，置入提取罐中，按每100Kg浓度90%的乙醇溶剂中加入6Kg蛹虫草颗粒提取3次，提取过程中搅拌并加热，温度保持在48℃，保温100分钟，取提取液。

将醇提所得提取液置入降膜蒸发器，在0.07MPa负压下抽滤并冷却，所得滤液进行加热回收溶剂，当浓缩物固液比低于1：5时，得浓缩提取物。

按浓缩提取物重量的2.5倍量加入石油醚，置入3级萃取系统内进行萃取，温度控制在40℃, 萃取3h，分离后得液相和固相。

将所得液相置入溶剂蒸馏塔内进行脱溶脱溶3次，脱去石油醚后得脱蜡提取物，即虫草素成分，为含油组份。

将脱蜡后的脱蜡提取物加入液膜萃取系统中进行萃取纯化，具体过程如下：按每100Kg混合溶剂中加入脱蜡提取物15Kg的比例置入液膜萃取纯化系统的溶剂罐中进行萃取4h后进行分离，收集上层清液，即萃取相为粗品虫草素，下层即萃余相，即含多糖、蛋白物为主的为虫草萃余混合物。

所述混合溶剂为：乙酸乙酯、正丁醇、氨水的混合液，混合比为：乙酸乙酯：正丁醇：氨水=1：2：4，其中氨水浓度为2‰。

所述液膜萃取系统的萃取膜为FEP高分子聚合物填料，粒径规格0.5～0.8mm，每立方米塔板数为3000～5000。

将萃取相置旋转蒸发仪中，85℃下进行脱溶，得虫草素浓缩物。

将萃余相放入旋转蒸发仪中， 85℃下脱去残余的混合溶剂，可得粗品多糖。

按每Kg虫草素浓缩物，加入到97%浓度的乙醇5Kg中，同时加入活性炭40g和硅藻土40g，在脱色罐内搅拌充分混合，搅拌60分钟后，静置4h，过75μm网或筛取液相；将所得液相加入49μm滤芯的精密过滤机中、0.8MPa压力下进行过滤取液相，将色素及其它杂质滤除，然后用旋转蒸发仪脱溶；上述过程重复进行3次，之后再进入结晶工序。

将脱溶后的物料放入罐中在-10℃温度环境下3小时进行结晶，所得结晶即为精品虫草素。

将上述精品虫草素结晶放入低温真空冻干机中，进行干燥处理至含水量9%即可。

实施例4：取粉碎成180μm的蛹虫草颗粒，置入提取罐中，按每100Kg浓度95%的乙醇溶剂中加入9Kg蛹虫草颗粒提取3次，提取过程中搅拌并加热，温度保持在50℃，保温90分钟，取提取液。

将醇提所得提取液置入降膜蒸发器，在0.07MPa负压下抽滤并冷却，所得滤液进行加热回收溶剂，当浓缩物固液比低于1：6时，得浓缩提取物。

按浓缩提取物重量的2倍量加入石油醚，置入3级萃取系统内进行萃取，温度控制在55℃, 萃取6h，分离后得液相和固相。

将所得液相置入溶剂蒸馏塔内进行脱溶脱溶2次，脱去石油醚后得脱蜡提取物，即虫草素成分，为含油组份。

将脱蜡后的脱蜡提取物加入液膜萃取系统中进行萃取纯化，具体过程如下：

按每100Kg混合溶剂中加入脱蜡提取物18Kg的比例置入液膜萃取纯化系统的溶剂罐中进行萃取5h后进行分离，收集上层清液，即萃取相为粗品虫草素，下层即萃余相，即含多糖、蛋白物为主的为虫草萃余混合物。

所述混合溶剂为：乙酸乙酯、正丁醇、氨水的混合液，混合比为：乙酸乙酯：正丁醇：氨水=1：1.8：3，其中氨水浓度为1.5‰。

所述液膜萃取系统的萃取膜为FEP高分子聚合物填料，粒径规格0.8mm，每立方米塔板数为4500。

将萃取相置旋转蒸发仪中，75℃下进行脱溶，得虫草素浓缩物。

将萃余相放入旋转蒸发仪中，75℃下脱去残余的混合溶剂，可得粗品多糖。

按每Kg虫草素浓缩物，加入95%以上浓度的乙醇3～5Kg中，同时加入活性炭20～60g和硅藻土40～60g，在脱色罐内搅拌充分混合，搅拌40～60分钟后，静置2～4h，过38～80μm网或筛取液相；将所得液相加入38～80μm滤芯的精密过滤机中、0.3MPa以上压力下进行过滤取液相，将色素及其它杂质滤除，然后进行脱溶；上述过程重复进行3次，之后再进入结晶工序。

将脱溶后的物料放入316不锈钢罐中，再放置在冷藏箱内，在-4～-20℃温度环境下2～4小时进行结晶，所得结晶即为精品虫草素。

将上述精品虫草素结晶放入低温真空冻干机中，进行干燥处理至含水量8-12%即可。

实施例5：取粉碎成250μm的蛹虫草颗粒，置入提取罐中，按每100Kg浓度85%的乙醇溶剂中加入6Kg蛹虫草颗粒提取2次，提取过程中搅拌并加热，温度保持在48℃，保温100分钟，取提取液。将醇提所得提取液置入降膜蒸发器，在0.04MPa负压下抽滤并冷却，所得滤液进行加热回收溶剂，当浓缩物固液比低于1：7时，得浓缩提取物。

按浓缩提取物重量的2.2倍量加入石油醚，置入3级萃取系统内进行萃取，温度控制在45℃, 萃取4h，分离后得液相和固相。

将所得液相置入溶剂蒸馏塔内进行脱溶脱溶1～3次，脱去石油醚后得脱蜡提取物，即虫草素成分，为含油组份。

将脱蜡后的脱蜡提取物加入液膜萃取系统中进行萃取纯化，具体过程如下：按每100Kg混合溶剂中加入脱蜡提取物14Kg的比例置入液膜萃取纯化系统的溶剂罐中进行萃取5h后进行分离，收集上层清液，即萃取相为粗品虫草素，下层即萃余相，即含多糖、蛋白物为主的为虫草萃余混合物。

所述混合溶剂为：乙酸乙酯、正丁醇、氨水的混合液，混合比为：乙酸乙酯：正丁醇：氨水=1：2：3，其中氨水浓度为2.5‰。

所述液膜萃取系统的萃取膜为FEP高分子聚合物填料，粒径规格0.8mm，每立方米塔板数为5000。

将萃取相置旋转蒸发仪中，60℃下进行脱溶，得虫草素浓缩物。

将萃余相放入旋转蒸发仪中，80℃下脱去残余的混合溶剂，可得粗品多糖。

按每Kg虫草素浓缩物，加入98%浓度的乙醇4Kg中，同时加入活性炭30g和硅藻土40g，在脱色罐内搅拌充分混合，搅拌50分钟后，静置4h，过38μm网或筛取液相；将所得液相加入38μm滤芯的精密过滤机中、0.5MPa压力下进行过滤取液相，将色素及其它杂质滤除，然后用旋转蒸发仪脱溶；上述过程再重复2次，之后再进入结晶工序。

将脱溶后的物料放入罐中，在-20℃温度环境下3小时进行结晶，所得结晶即为精品虫草素。

将上述精品虫草素结晶放入低温真空冻干机中，进行干燥处理至含水量10%即可。

实施例6：取粉碎成35μm的蛹虫草颗粒，置入提取罐中，按每100Kg浓度95%的乙醇溶剂中加入10Kg蛹虫草颗粒提取3次，提取过程中搅拌并加热，温度保持在50℃，保温120分钟，取提取液。

将醇提所得提取液置入降膜蒸发器，在0.08MPa负压下抽滤并冷却，所得滤液进行加热回收溶剂，当浓缩物固液比1：7时，得浓缩提取物。

按浓缩提取物重量的2.5倍量加入石油醚，置入3级萃取系统内进行萃取，温度控制在60℃, 萃取3h，分离后得液相和固相。

将所得液相置入溶剂蒸馏塔内进行脱溶脱溶1次，脱去石油醚后得脱蜡提取物，即虫草素成分，为含油组份。

将脱蜡后的脱蜡提取物加入液膜萃取系统中进行萃取纯化，具体过程如下：按每100Kg混合溶剂中加入脱蜡提取物10Kg的比例置入液膜萃取纯化系统的溶剂罐中进行萃取4h后进行分离，收集上层清液，即萃取相为粗品虫草素，下层即萃余相，即含多糖、蛋白物为主的为虫草萃余混合物。

所述混合溶剂为：乙酸乙酯、正丁醇、氨水的混合液，混合比为：乙酸乙酯：正丁醇：氨水=1：2：4，其中氨水浓度为1‰。

所述液膜萃取系统的萃取膜为FEP高分子聚合物填料，粒径规格0.7mm，每立方米塔板数为4500。

将萃取相置旋转蒸发仪中，85℃下进行脱溶，得虫草素浓缩物。

将萃余相放入旋转蒸发仪中，85℃下脱去残余的混合溶剂，可得粗品多糖。

按每Kg虫草素浓缩物，加入95%浓度的乙醇5Kg中，同时加入活性炭60g和硅藻土60g，在脱色罐内搅拌充分混合，搅拌60分钟后，静置4h，过50μm网或筛取液相；将所得液相加入75μm滤芯的精密过滤机中、1MPa压力下进行过滤取液相，将色素及其它杂质滤除，然后用旋转蒸发仪脱溶；上述过程重复进行3次，之后再进入结晶工序。

将脱溶后的物料放入罐中，在-18℃温度环境下4小时进行结晶，所得结晶即为精品虫草素。

将上述精品虫草素结晶放入低温真空冻干机中，进行干燥处理至含水量8%即可。

实施例7：取粉碎成180μm的蛹虫草颗粒，置入提取罐中，按每100Kg浓度86%的乙醇溶剂中加入7Kg蛹虫草颗粒提取3次，提取过程中搅拌并加热，温度保持在48℃，保温90分钟，取提取液。

将醇提所得提取液置入降膜蒸发器，在0.065MPa负压下抽滤并冷却，所得滤液进行加热回收溶剂，当浓缩物固液比低于1：7时，得浓缩提取物。

按浓缩提取物重量的2.5倍量加入石油醚，置入3级萃取系统内进行萃取，温度控制在40℃, 萃取6h，分离后得液相和固相。

将所得液相置入溶剂蒸馏塔内进行脱溶脱溶2次，脱去石油醚后得脱蜡提取物，即虫草素成分，为含油组份。

将脱蜡后的脱蜡提取物加入液膜萃取系统中进行萃取纯化，具体过程如下：

按每100Kg混合溶剂中加入脱蜡提取物8Kg的比例置入液膜萃取纯化系统的溶剂罐中进行萃取6h后进行分离，收集上层清液，即萃取相为粗品虫草素，下层即萃余相，即含多糖、蛋白物为主的为虫草萃余混合物。

所述混合溶剂为：乙酸乙酯、正丁醇、氨水的混合液，混合比为：乙酸乙酯：正丁醇：氨水=1：1.5：2.5，其中氨水浓度为1‰。

所述液膜萃取系统的萃取膜为FEP高分子聚合物填料，粒径规格0.5mm，每立方米塔板数为3500。

将萃取相置旋转蒸发仪中，80℃下进行脱溶，得虫草素浓缩物。

将萃余相放入旋转蒸发仪中，85℃下脱去残余的混合溶剂，可得粗品多糖。

按每Kg虫草素浓缩物，加入95%以上浓度的乙醇5Kg中，同时加入活性炭50g和硅藻土50g，在脱色罐内搅拌充分混合，搅拌60分钟后，静置4h，过50m网或筛取液相；将所得液相加入50μm滤芯的精密过滤机中、1.2MPa以上压力下进行过滤取液相，将色素及其它杂质滤除，然后进行脱溶；上述过程重复2次，之后再进入结晶工序。

将脱溶后的物料放入罐中,用316不锈钢罐，放置在冷藏箱内，在-20℃温度环境下3小时进行结晶，所得结晶即为精品虫草素。

将上述精品虫草素结晶放入低温真空冻干机中，进行干燥处理至含水量9%即可。

实施例8：取粉碎成150μm以下的蛹虫草颗粒，置入提取罐中，按每100Kg浓度90%的乙醇溶剂中加入10Kg蛹虫草颗粒提取3次，提取过程中搅拌并加热，温度保持在50℃，保温120分钟，取提取液。

将醇提所得提取液置入降膜蒸发器，在0.03MPa负压下抽滤并冷却，所得滤液进行加热回收溶剂，当浓缩物固液比低于1：6时，得浓缩提取物。

按浓缩提取物重量的1.5倍量加入石油醚，置入3级萃取系统内进行萃取，温度控制在60℃, 萃取6h，分离后得液相和固相。

将所得液相置入溶剂蒸馏塔内进行脱溶脱溶1次，脱去石油醚后得脱蜡提取物，即虫草素成分，为含油组份。

将脱蜡后的脱蜡提取物加入液膜萃取系统中进行萃取纯化，具体过程如下：按每100Kg混合溶剂中加入脱蜡提取物5Kg的比例置入液膜萃取纯化系统的溶剂罐中进行萃取5h后进行分离，收集上层清液，即萃取相为粗品虫草素，下层即萃余相，即含多糖、蛋白物为主的为虫草萃余混合物。

所述混合溶剂为：乙酸乙酯、正丁醇、氨水的混合液，混合比为：乙酸乙酯：正丁醇：氨水=1：1.5：3，其中氨水浓度为1‰。

所述液膜萃取系统的萃取膜为FEP高分子聚合物填料，粒径规格0.5mm，每立方米塔板数为4000。

将萃取相置旋转蒸发仪中，75℃下进行脱溶，得虫草素浓缩物。

将萃余相放入旋转蒸发仪中，75℃下脱去残余的混合溶剂，可得粗品多糖。

按每Kg虫草素浓缩物，加入98%浓度的乙醇3.5Kg中，同时加入活性炭40g和硅藻土45g，在脱色罐内搅拌充分混合，搅拌60分钟后，静置3h，过38μm网或筛取液相；将所得液相加入50μm滤芯的精密过滤机中、0.8MPa压力下进行过滤取液相，将色素及其它杂质滤除，然后进行脱溶；上述过程重复2次，之后再进入结晶工序。

将脱溶后的物料放入罐中，在-18℃温度环境下4小时进行结晶，所得结晶即为精品虫草素。

将上述精品虫草素结晶放入低温真空冻干机中，进行干燥处理至含水量10%即可。

实施例9：取粉碎成350μm以下的蛹虫草颗粒，置入提取罐中，按每100Kg浓度99%的乙醇溶剂中加入9Kg蛹虫草颗粒提取2次，提取过程中搅拌并加热，温度保持在45℃，保温120分钟，取提取液。

将醇提所得提取液置入降膜蒸发器，在0.03MPa负压下抽滤并冷却，所得滤液进行加热回收溶剂，当浓缩物固液比低于1：6时，得浓缩提取物。

按浓缩提取物重量的2.3倍量加入石油醚，置入3级萃取系统内进行萃取，温度控制在60℃, 萃取5h，分离后得液相和固相。

将所得液相置入溶剂蒸馏塔内进行脱溶脱溶1次，脱去石油醚后得脱蜡提取物，即虫草素成分，为含油组份。

将脱蜡后的脱蜡提取物加入液膜萃取系统中进行萃取纯化，具体过程如下：

按每100Kg混合溶剂中加入脱蜡提取物25Kg的比例置入液膜萃取纯化系统的溶剂罐中进行萃取5h后进行分离，收集上层清液，即萃取相为粗品虫草素，下层即萃余相，即含多糖、蛋白物为主的为虫草萃余混合物。

所述混合溶剂为：乙酸乙酯、正丁醇、氨水的混合液，混合比为：乙酸乙酯：正丁醇：氨水=1：1.6：2.4，其中氨水浓度为1.8‰。

所述液膜萃取系统的萃取膜为FEP高分子聚合物填料，粒径规格0.6mm，每立方米塔板数为4200。

将萃取相置旋转蒸发仪中，82℃下进行脱溶，得虫草素浓缩物。

将萃余相放入旋转蒸发仪中，80℃下脱去残余的混合溶剂，可得粗品多糖。

按每Kg虫草素浓缩物，加入98%浓度的乙醇4.5Kg中，同时加入活性炭60g和硅藻土45g，在脱色罐内搅拌充分混合，搅拌60分钟后，静置4h，过49μm网或筛取液相；将所得液相加入49μm滤芯的精密过滤机中、0.6MPa压力下进行过滤取液相，将色素及其它杂质滤除，然后用旋转蒸发仪脱溶；上述过程再重复1次，之后再进入结晶工序。

将脱溶后的物料放入罐中，在-15℃温度环境下4小时进行结晶，所得结晶即为精品虫草素。

将上述精品虫草素结晶放入低温真空冻干机中，进行干燥处理至含水量8%即可。

实施例10：取粉碎成180μm以下的蛹虫草颗粒，置入提取罐中，按每100Kg浓度98%的乙醇溶剂中加入10Kg蛹虫草颗粒提取3次，提取过程中搅拌并加热，温度保持在51℃，保温120分钟，取提取液。

将醇提所得提取液置入降膜蒸发器，在0.05MPa负压下抽滤并冷却，所得滤液进行加热回收溶剂，当浓缩物固液比低于1：7时，得浓缩提取物。

按浓缩提取物重量的1.8倍量加入石油醚，置入3级萃取系统内进行萃取，温度控制在60℃, 萃取5h，分离后得液相和固相。

将所得液相置入溶剂蒸馏塔内进行脱溶脱溶2次，脱去石油醚后得脱蜡提取物，即虫草素成分，为含油组份。

将脱蜡后的脱蜡提取物加入液膜萃取系统中进行萃取纯化，具体过程如下：按每100Kg混合溶剂中加入脱蜡提取物28Kg的比例置入液膜萃取纯化系统的溶剂罐中进行萃取5h后进行分离，收集上层清液，即萃取相为粗品虫草素，下层即萃余相，即含多糖、蛋白物为主的为虫草萃余混合物。

所述混合溶剂为：乙酸乙酯、正丁醇、氨水的混合液，混合比为：乙酸乙酯：正丁醇：氨水=1：2：3，其中氨水浓度为2‰。

所述液膜萃取系统的萃取膜为FEP高分子聚合物填料，粒径规格0.5mm，每立方米塔板数为3800。

将萃取相置旋转蒸发仪中，85℃下进行脱溶，得虫草素浓缩物。

将萃余相放入旋转蒸发仪中，85℃下脱去残余的混合溶剂，可得粗品多糖。

按每Kg虫草素浓缩物，加入98%浓度的乙醇5Kg中，同时加入活性炭60g和硅藻土45g，在脱色罐内搅拌充分混合，搅拌60分钟后，静置3h，过50μm网或筛取液相。将所得液相加入50μm滤芯的精密过滤机中、0.5MPa压力下进行过滤取液相，将色素及其它杂质滤除，然后用旋转蒸发仪脱溶；上述过程重复3次，之后再进入结晶工序。

将脱溶后的物料放入罐中，在-20℃温度环境下4小时进行结晶，所得结晶即为精品虫草素。

将上述精品虫草素结晶放入低温真空冻干机中，进行干燥处理至含水量11%即可。

Claims (9)

1.一种从蛹虫草中提取虫草素的工艺方法，其特征在于主要包含以下工艺过程：

醇提：取粉碎后的蛹虫草颗粒，在提取罐中，按每100Kg浓度≧80%的乙醇溶剂中加入5～10Kg蛹虫草颗粒提取1～3次，温度保持在48～52℃，每次提取30～120分钟，取提取液；

浓缩：将醇提所得提取液置入降膜蒸发器，在低于0.1MPa负压下抽滤，所得滤液进行加热回收溶剂，当浓缩物固液比低于1：10时，得浓缩提取物；

脱蜡：按浓缩提取物重量的1.5～2.5倍量加入石油醚，置入3～5级萃取系统内进行萃取，温度控制在40～60℃, 萃取2～6h，分离后得液相和固相，将所得液相置入溶剂蒸馏塔内进行脱溶1～3次，脱去石油醚后得脱蜡提取物；

纯化：将脱蜡后的脱蜡提取物加入液膜萃取系统中进行萃取纯化，具体过程如下：按每100Kg混合溶剂中加入脱蜡提取物5～30Kg，置入液膜萃取纯化系统的溶剂罐中进行萃取4～6h后进行分离，收集上层清液，即萃取相，其余为萃余相；将萃取相置旋转蒸发仪中，45～85℃下进行脱溶，得虫草素浓缩物；

所述混合溶剂为：乙酸乙酯、正丁醇、氨水的混合液，混合比为：乙酸乙酯：正丁醇：氨水=1：1.5：3～1：2：4，其中氨水浓度为1～3‰；

所述液膜萃取系统的萃取膜为FEP高分子聚合物填料，粒径规格0.5～0.8mm，每立方米塔板数为3000～5000；

精制：

a)按每Kg虫草素浓缩物，加入95%以上浓度的乙醇3～5Kg中，同时加入活性炭20～60g和硅藻土40～60g，在脱色罐内搅拌充分混合，搅拌40～60分钟后，静置2～4h，过38～80μm网或筛取液相；

b)将所得液相加入精密过滤机中38～80μm、0.3MPa以上压力下进行过滤取液相，然后进行脱溶；

c)将脱溶后的物料放入罐中，在-4～-20℃温度环境下进行2～4小时的结晶，所得结晶即为精品虫草素；

干燥：将上述精品虫草素结晶放入低温真空冻干机中，进行干燥处理至含水量8-12%。

2.根据权利要求1所述的虫草素的提取方法，其特征在于：在纯化工序中，每100Kg混合溶剂中加入脱蜡提取物为10～20Kg。

3.根据权利要求1或2所述的虫草素的提取方法，其特征在于：把脱蜡提取物泵入蒸发器内，进一步将残余的石油醚脱除。

4.根据权利要求1或2所述的虫草素的提取方法，其特征在于：所述精制中a)、b)过程重复1～3次，即将脱溶所得物，再按每Kg溶入3～5Kg的无水乙醇中，充分搅拌混合后，静置3～5h后，置入38～80μm滤芯的精密过滤机中、0.3MPa以上压力下进行过滤，然后进行脱溶，之后再进入 c)步骤进行结晶。

5.根据权利要求3所述的虫草素的提取方法，其特征在于：所述精制中a)、b)过程重复1～3次，即将脱溶所得物，再按每Kg溶入3～5Kg的无水乙醇中，充分搅拌混合后，静置3～5h后，置入38～80μm滤芯的精密过滤机中、0.3MPa以上压力下进行过滤，然后进行脱溶，之后再进入 c)步骤进行结晶。

6.根据权利要求1或2所述的虫草素的提取方法，其特征在于：将萃余相放入旋转蒸发仪中，45～85℃下脱去残余的混合溶剂，得粗品多糖。

7.根据权利要求3所述的虫草素的提取方法，其特征在于：将萃余相放入旋转蒸发仪中，45～85℃下脱去残余的混合溶剂，得粗品多糖。

8.根据权利要求4所述的虫草素的提取方法，其特征在于：将萃余相放入旋转蒸发仪中，45～85℃下脱去残余的混合溶剂，得粗品多糖。

9.根据权利要求5所述的虫草素的提取方法，其特征在于：将萃余相放入旋转蒸发仪中，45～85℃下脱去残余的混合溶剂，得粗品多糖。