CN103665067B - 一种Thonningianin A单体的分离纯化方法 - Google Patents

一种Thonningianin A单体的分离纯化方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103665067B
CN103665067B CN201310715198.7A CN201310715198A CN103665067B CN 103665067 B CN103665067 B CN 103665067B CN 201310715198 A CN201310715198 A CN 201310715198A CN 103665067 B CN103665067 B CN 103665067B
Authority
CN
China
Prior art keywords
thonningianin
monomer
product
concentrated
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201310715198.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103665067A (zh
Inventor
白兰辉
文焕松
夏柯
郭建华
刘丁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
CHENGDU PUSH BIO-TECHNOLOGY CO., LTD.
Original Assignee
Pusi Biological Science & Technology Co Ltd Chengdu
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pusi Biological Science & Technology Co Ltd Chengdu filed Critical Pusi Biological Science & Technology Co Ltd Chengdu
Priority to CN201310715198.7A priority Critical patent/CN103665067B/zh
Publication of CN103665067A publication Critical patent/CN103665067A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103665067B publication Critical patent/CN103665067B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/582—Recycling of unreacted starting or intermediate materials

Abstract

本发明涉及一种Thonningianin A单体的分离纯化方法，属于中药活性成分的分离纯化技术领域。具体步骤为：（1）提取：将赶黄草药材切成小段，以乙醇回流提取、过滤；（2）浓缩：将滤液浓缩至20%；（3）大孔吸附树脂富集与洗脱；（4）聚酰胺树脂富集与洗脱；（5）高效制备液相色谱分离：流动相为乙腈-0.3%磷酸水溶液，检测波长254nm；（6）产品回收：将Thonningianin A单体溶液过滤析出晶体，经干燥即得到Thonningianin A单体产品。本发明操作简便，生产周期短，分离效率高，工艺稳定可靠，重现性好，成本易控制，产品纯度高，可作为含量测定的标准物质使用。

Description

一种Thonningianin A单体的分离纯化方法
技术领域
本发明涉及药用植物化合物单体的分离提纯方法，具体来说，涉及一种从赶黄草中分离纯化Thonningianin A单体的方法，属于中药分离纯化技术领域。
背景技术
赶黄草（Penthorum chinense Pursh）为虎耳草科 (Saxifragaceae)扯根菜属 (Penthorum)植物扯根菜（Penthorum chinense Pursh）的干燥地上部分。夏、秋季节采集，除去杂质、干燥或鲜用。赶黄草为苗族传统药物，民间以其全草入药。全草性温、味甘、无毒，具清热、利尿消尿、解毒、活血、平肝、健脾、祛黄疸等功效。主治黄疸、水肿、经闭、血崩、带下、跌打损伤，以及各型肝炎、胆囊炎、脂肪肝等。
Thonningianin A 是赶黄草的特征性化学成分，也是该植物中活性最高的黄酮苷类成分；Thonningianin A分子式为C42H34O21，分子量是874.16，其结构式如下:
由于Thonningianin A是赶黄草的特征性化学成分，因此如果能以Thonningianin A作为该药材及其相关制剂的质量评价指标，将既能较真实地反映其质量又具有专属性，同时还可对赶黄草药材及其制剂的质量控制起到重要作用。
通过大量文献检索发现，目前仅有关于赶黄草中总黄酮提取工艺的报道，如“《华南理工大学》2012，赶黄草有效成分的分离鉴定及其活性与提取工艺研究”。而对于从赶黄草中分离出高纯度Thonningianin A单体产品却未见相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种Thonningianin A单体的分离纯化方法。该方法操作简便，生产周期短，分离效率高，工艺稳定，成本易控制，可实现大量Thonningianin A单体的高纯度分离制备，得到的Thonningianin A单体纯度高，可作为含量测定标准物质，并对赶黄草药材及其制剂的质量进行有效控制。
为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
一种Thonningianin A单体的分离纯化方法，包括以下工艺步骤：
（1）提取
将赶黄草药材切成0.5cm的小段，按照药材重量：乙醇溶液=1Kg：6L，加入70%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，提取液过滤，收集、合并滤液；
按照1：6的比例，既可以有效浸泡药材，又能较少的使用乙醇用量，从而降低溶剂的使用成本；而采用70%乙醇回流提取，既可将Thonningianin A这种黄酮类成分有效的提取出来，又使其他杂质成分溶出率较低，确保制备时杂质干扰少。
（2）浓缩
将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至原滤液体积的15-25%，减少浓缩液中的乙醇含量；
通过浓缩，既可回收乙醇又减少了后续步骤中富集液的体积。
（3）大孔吸附树脂富集与洗脱
将步骤（2）浓缩后的滤液过大孔吸附树脂进行吸附，用纯化水清洗树脂至无色后，再用60%-70%的乙醇洗脱产品段，至流出液无色，收集合并洗脱液，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇；
通过纯化水确保除去大极性杂质和一些糖类成分，而60-70%乙醇在保证产品被洗脱出来的同时，极性较小的杂质却不会被洗脱下来。
（4）聚酰胺树脂富集与洗脱
将步骤（3）浓缩后的洗脱液过聚酰胺树脂进行吸附，先用10%的乙醇清洗树脂至无色后，再用浓度为90%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇后得含产品的浓缩液；
洗脱液通过聚酰胺树脂的吸附，能有效达到分离Thonningianin A与除去一部分杂质的作用；而通过10%乙醇洗脱掉一些大极性的色素和杂质，减少制备时的杂质干扰；90%乙醇既能快速的洗脱产品，浓缩时又能把制备原料减少到最少体积。
（5）高效制备液相色谱分离
色谱条件如下：
填料为C18的色谱柱；
流动相组成为：乙腈-0.3%（V/V）磷酸水溶液，二者体积比为45：55；
检测波长为254nm；
取步骤（4）浓缩后的洗脱液用溶剂过滤器采用0.45μm有机膜过滤，滤液进样，进行Thonningianin A单体的制备分离，紫外检测器在线监测，针对性收集Thonningianin A单体的制备馏分溶液，得Thonningianin A单体溶液；
在进行高效制备液相色谱分离前，可通过液-质联用或其它本技术领域常用的方法确定高效液相色谱中Thonningianin A单体的峰形。
以液-质联用方法为例，可与上述制备分离色谱条件相同，采用填料相同的色谱柱、组成相同的流动相、相同的检测波长等，柱温为室温；取步骤（4）所得的浓缩液过滤，然后进样，进行Thonningianin A单体的高效液相分离纯化，根据质谱检测结果，可确定Thonningianin A单体在液相色谱中所对应的峰形。
高效制备液相色谱相对于其他的常规分离方法（比如硅胶柱洗脱分离）既能对产品快速分离，而且对产品的收率有很大的提高。
（6）产品回收
将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的Thonningianin A单体溶液加热回收乙腈，Thonningianin A单体在水溶液中大量析出，放置室温后用漏斗过滤析出晶体，过滤固体于65℃干燥12小时，即得到Thonningianin A单体产品。
所述Thonningianin A单体产品的纯度复检采用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）法，色谱条件如下：
以C18（十八烷基硅烷键合硅胶）为填充剂；以乙腈－0.3%磷酸水溶液（体积比45：55）为流动相；流速1.0mL/min；检测波长为254 nm。
步骤（1）、（3）、（4）中所述乙醇的浓度均为体积百分比。
由于高效液相色谱对样品溶液的纯度、色泽等要求均较高，前期需把原料尽可能的处理杂质与色素较少，这样才能达到良好的分离效果。
在高效液相色谱分离过程中，色谱条件的选择非常重要，它对样品溶液中各物质的出峰顺序、峰形、分离效果等起着决定性的作用；色谱条件主要包括色谱柱（包括填料、柱长及内径等）、流动相（包括组成及流速等）、检测波长、检测器等，且各色谱条件的选择及其组合也至关重要。
本发明通过大量的试验研究及对比分析，确定了如上所述的各色谱条件，使样品溶液中各物质的出峰时间、峰形、分离效果等达到了最佳化，从而确保Thonningianin A单体得到充分有效的分离。
与现有技术相比，本发明的优点和有益技术效果在于：
1、本发明采用制备型高效液相色谱系统对Thonningianin A单体进行分离纯化，通过最适宜的前处理方法（提取、浓缩、大孔吸附树脂富集与洗脱、聚酰胺树脂富集与洗脱）和色谱条件等，达到良好的分离效果，紫外检测器在线监测过程直观，针对性收集Thonningianin A单体，目标明确，且易于控制产品质量。
2、本发明操作简便，生产周期短，产品收率高、纯度高达98%以上，工艺稳定可靠，重现性好，成本易控制。
3、本发明各工艺步骤中的有机试剂均可回收再利用，溶剂消耗量少。
4、具有较高的学术价值。由于目前尚未有能规模化生产Thonningianin A单体方法的报道，本发明所得产品不但能有效改善Thonningianin A对照品缺乏的现状，也能为产业化开发Thonningianin A制剂提供高纯度优质原料。
附图说明
图1是本发明实施例1 Thonningianin A产品的HPLC分析图谱。
图2是本发明实施例1的高效制备液相色谱图，图中记录为4针样品连续进样色谱图。
图3是本发明实施例1的Thonningianin A单体产品复检的HPLC分析图谱。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。
但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。
下述各实施例中，终产品Thonningianin A单体的纯度复检均采用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）法，色谱条件如下：
以C18（十八烷基硅烷键合硅胶）为填充剂；以乙腈－0.3%磷酸水溶液（45：55）为流动相；流速1.0mL/min；检测波长为254 nm。
实施例1
（1）提取
取赶黄草药材1千克切成0.5cm的小段，加入6L 浓度为70%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；
（2）浓缩
将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至体积为3.5L；
（3）大孔吸附树脂富集与洗脱
将步骤（2）浓缩后的滤液过直径为10cm的大孔吸附树脂层析柱进行吸附，先用纯化水清洗树脂至无色后，再用浓度为60%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液共5L，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇，得浓缩液1.5L；
（4）聚酰胺树脂富集与洗脱
将步骤（3）所得的浓缩液过直径为10cm的聚酰胺树脂层析柱进行吸附，富集完后，先10%的乙醇清洗树脂至无色后，再用90%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液共2.5L，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇，得浓缩液为250mL；
（5）高效制备液相色谱分离
色谱条件如下：
填料为C18的色谱柱，柱规格为50cm×10cm；
流动相组成为：乙腈-0.3%（V/V）磷酸水溶液，体积比为45：55；
检测波长为254nm，室温操作；
取步骤（4）所得的浓缩液用溶剂过滤器采用0.45μm有机膜过滤，滤液进样，每一针进样量滤液为125mL，紫外检测器在线监测，针对性收集Thonningianin A单体的制备馏分溶液，得Thonningianin A单体溶液；
在进行高效制备液相色谱分离前，通过液-质联用方法确定高效液相色谱中Thonningianin A单体的峰形，采用的色谱条件同上，取步骤（4）所得的浓缩液过滤然后进样，进行Thonningianin A单体的高效液相分离纯化，根据质谱检测结果，确定Thonningianin A单体在液相色谱中所对应的峰形；
（6）产品回收
将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的Thonningianin A单体溶液50℃加热回收乙腈，得到析出产品水溶液800mL，放置室温后用漏斗过滤Thonningianin A晶体，过滤固体于65℃干燥12小时，得到honningianin A单体产品0.26克。HPLC分析图谱如图1所示。
整个生产流程用时约4天。
计算得产品收率为（0.26/1000）×100%=0.026%。
通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）复检产品纯度，测得结果为99.20%。
实施例2
（1）提取
取赶黄草药材10千克切成0.5cm的小段，加入60L 浓度为70%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；
（2）浓缩
将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至体积为35L。
（3）大孔吸附树脂富集与洗脱
将步骤（2）浓缩后的滤液过直径为10cm的大孔吸附树脂层析柱进行吸附，先用纯化水清洗树脂至无色后，再用浓度为70%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液共5L，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇，得浓缩液14L；
（4）聚酰胺树脂富集与洗脱
将步骤（3）所得的浓缩液过直径为15cm的聚酰胺树脂层析柱进行吸附，富集完后，先用10%的乙醇清洗树脂至无色后，再用90%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液共25L，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇，得浓缩液为2.5L；
（5）高效制备液相色谱分离
色谱条件如下：
填料为C18的色谱柱，柱规格为50cm×10cm；
流动相组成为：乙腈-0.3%（V/V）磷酸水溶液，体积比为45：55；
检测波长为254nm，室温操作；
取步骤（4）所得的浓缩液用溶剂过滤器采用0.45μm有机膜过滤，滤液进样，每一针进样量滤液为125mL，紫外检测器在线监测，针对性收集Thonningianin A单体的制备馏分溶液，得Thonningianin A单体溶液；
在进行高效制备液相色谱分离前，通过液-质联用方法确定高效液相色谱中Thonningianin A单体的峰形，采用的色谱条件同上，取步骤（4）所得的浓缩液过滤然后进样，进行Thonningianin A单体的高效液相分离纯化，根据质谱检测结果，确定Thonningianin A单体在液相色谱中所对应的峰形；
（6）产品回收
将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的Thonningianin A单体溶液加热回收乙腈，得到析出产品水溶液800mL，放置室温后用漏斗过滤Thonningianin A晶体，过滤固体于65℃干燥12小时，得到honningianin A单体产品2.82克。
整个生产流程用时约5天。
计算得产品收率为（2.82/100000）×100%=0.0282%。
通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）复检产品纯度，测得结果为99.12%。
实施例3
（1）提取
取赶黄草药材50千克切成0.5cm的小段，加入300L 浓度为70%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；
（2）浓缩
将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至体积为180L。
（3）大孔吸附树脂富集与洗脱
将步骤（2）浓缩后的滤液过直径为25cm的大孔吸附树脂层析柱进行吸附，先用纯化水清洗树脂至无色后，再用浓度为65%的乙醇洗脱，至流出液无色，收集合并洗脱液共220L，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇，得浓缩液14L；
（4）聚酰胺树脂富集与洗脱
将步骤（3）所得的浓缩液过直径为25cm的聚酰胺树脂层析柱进行吸附，富集完后，先用10%的乙醇清洗树脂至无色后，再用90%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液共120L，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇，得浓缩液为12L；
（5）高效制备液相色谱分离
色谱条件如下：
填料为C18的色谱柱，柱规格为50cm×10cm；
流动相组成为：乙腈-0.3%（v/v）磷酸水溶液，体积比为45：55；
检测波长为254nm，室温操作；
取步骤（4）所得的浓缩液用溶剂过滤器采用0.45μm有机膜过滤，滤液进样，每一针进样量滤液为125mL，紫外检测器在线监测，针对性收集Thonningianin A单体的制备馏分溶液，得Thonningianin A单体溶液；
在进行高效制备液相色谱分离前，通过液-质联用方法确定高效液相色谱中Thonningianin A单体的峰形，采用的色谱条件同上，取步骤（4）所得的浓缩液过滤然后进样，进行Thonningianin A单体的高效液相分离纯化，根据质谱检测结果，确定Thonningianin A单体在液相色谱中所对应的峰形；
（6）产品回收
将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的Thonningianin A单体溶液加热回收乙腈，得到析出产品水溶液30L，放置室温后用漏斗过滤Thonningianin A晶体，过滤固体于65℃干燥12小时，得到honningianin A单体产品15.3克。
整个生产流程用时约5天。
计算得产品收率为（15.3/5000000）×100%=0.0306%。
通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）复检产品纯度，测得结果为98.89%。

Claims (4)

1.一种Thonningianin A单体的分离纯化方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：
（1）提取
将赶黄草药材切成0.5cm的小段，按照药材重量：70%乙醇溶液=1Kg：6L，加入浓度为70%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，提取液过滤，收集、合并滤液；
（2）浓缩
将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至原滤液体积的15-25%；
（3）大孔吸附树脂富集与洗脱
将步骤（2）浓缩后的滤液过大孔吸附树脂进行吸附，先用纯化水清洗树脂至无色后，再用60%-70%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇；
（4）聚酰胺树脂富集与洗脱
将步骤（3）浓缩后的洗脱液过聚酰胺树脂进行吸附，先用10%的乙醇清洗树脂至无色后，再用90%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇得解析产品浓缩液；
（5）高效制备液相色谱分离
色谱条件如下：
填料为C18的色谱柱；
流动相组成为：乙腈-0.3%磷酸水溶液，二者体积比为45：55；
检测波长为254nm；
取步骤（4）浓缩液用溶剂过滤器采用0.45μm有机膜过滤，滤液进样，进行Thonningianin A单体的制备分离，紫外检测器在线监测，针对性收集Thonningianin A单体的制备馏分溶液，得Thonningianin A单体溶液；
（6）产品回收
将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的Thonningianin A单体溶液加热回收乙腈，Thonningianin A单体在水溶液中大量析出，放置室温后用漏斗过滤析出晶体，过滤固体于65℃干燥12小时，即得到Thonningianin A单体产品；
步骤（1）、（3）、（4）中所述乙醇的浓度均为体积百分比；
在进行所述高效制备液相色谱分离前，通过液-质联用方法确定高效液相色谱中Thonningianin A单体的峰形，取步骤（4）所得的浓缩液过滤然后进样，进行Thonningianin A单体的高效液相分离纯化，根据质谱检测结果，确定Thonningianin A单体在液相色谱中所对应的峰形，色谱条件如下：
填料为C18的色谱柱；
流动相组成为：乙腈-0.3%磷酸水溶液，二者体积比为45：55；
检测波长为254nm；
步骤（6）所述Thonningianin A单体产品的纯度复检采用反相分析型液相色谱RP-HPLC法，色谱条件如下：
以C18为填充剂；以乙腈-0.3%磷酸水溶液V/V=45：55为流动相；流速1.0mL/min；检测波长为254nm。
2.根据权利要求1所述的一种Thonningianin A单体的分离纯化方法，其特征在于工艺步骤如下：
（1）提取
取赶黄草药材1千克切成0.5cm的小段，加入6L 浓度为70%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；
（2）浓缩
将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至体积为3.5L；
（3）大孔吸附树脂富集与洗脱
将步骤（2）浓缩后的滤液过直径为10cm的大孔吸附树脂层析柱进行吸附，先用纯化水清洗树脂至无色后，再用浓度为60%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液共5L，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇，得浓缩液1.5L；
（4）聚酰胺树脂富集与洗脱
将步骤（3）所得的浓缩液过直径为10cm的聚酰胺树脂层析柱进行吸附，富集完后，先10%的乙醇清洗树脂至无色后，再用90%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液共2.5L，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇，得浓缩液为250mL；
（5）高效制备液相色谱分离
色谱条件如下：
填料为C18的色谱柱，柱规格为50cm×10cm；
流动相组成为：乙腈-0.3%磷酸水溶液，体积比为45：55；
检测波长为254nm，室温操作；
取步骤（4）所得的浓缩液用溶剂过滤器采用0.45μm有机膜过滤，滤液进样，每一针进样量滤液为125mL，紫外检测器在线监测，针对性收集Thonningianin A单体的制备馏分溶液，得Thonningianin A单体溶液；
在进行高效制备液相色谱分离前，通过液-质联用方法确定高效液相色谱中Thonningianin A单体的峰形，采用的色谱条件同上，取步骤（4）所得的浓缩液过滤然后进样，进行Thonningianin A单体的高效液相分离纯化，根据质谱检测结果，确定Thonningianin A单体在液相色谱中所对应的峰形；
（6）产品回收
将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的Thonningianin A单体溶液50℃加热回收乙腈，得到析出产品水溶液800mL，放置室温后用漏斗过滤Thonningianin A晶体，过滤固体于65℃干燥12小时，得到honningianin A单体产品0.26克；
整个生产流程用时4天；
计算得产品收率为（0.26/1000）×100%=0.026%；
通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱RP-HPLC复检产品纯度，测得结果为99.20%。
3.根据权利要求1所述的一种Thonningianin A单体的分离纯化方法，其特征在于工艺步骤如下：
（1）提取
取赶黄草药材10千克切成0.5cm的小段，加入60L 浓度为70%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；
（2）浓缩
将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至体积为35L；
（3）大孔吸附树脂富集与洗脱
将步骤（2）浓缩后的滤液过直径为10cm的大孔吸附树脂层析柱进行吸附，先用纯化水清洗树脂至无色后，再用浓度为70%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液共5L，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇，得浓缩液14L；
（4）聚酰胺树脂富集与洗脱
将步骤（3）所得的浓缩液过直径为15cm的聚酰胺树脂层析柱进行吸附，富集完后，先用10%的乙醇清洗树脂至无色后，再用90%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液共25L，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇，得浓缩液为2.5L；
（5）高效制备液相色谱分离
色谱条件如下：
填料为C18的色谱柱，柱规格为50cm×10cm；
流动相组成为：乙腈-0.3%磷酸水溶液，体积比为45：55；
检测波长为254nm，室温操作；
取步骤（4）所得的浓缩液用溶剂过滤器采用0.45μm有机膜过滤，滤液进样，每一针进样量滤液为125mL，紫外检测器在线监测，针对性收集Thonningianin A单体的制备馏分溶液，得Thonningianin A单体溶液；
在进行高效制备液相色谱分离前，通过液-质联用方法确定高效液相色谱中Thonningianin A单体的峰形，采用的色谱条件同上，取步骤（4）所得的浓缩液过滤然后进样，进行Thonningianin A单体的高效液相分离纯化，根据质谱检测结果，确定Thonningianin A单体在液相色谱中所对应的峰形；
（6）产品回收
将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的Thonningianin A单体溶液加热回收乙腈，得到析出产品水溶液800mL，放置室温后用漏斗过滤Thonningianin A晶体，过滤固体于65℃干燥12小时，得到honningianin A单体产品2.82克；
整个生产流程用时5天；
计算得产品收率为（2.82/100000）×100%=0.0282%；
通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱RP-HPLC复检产品纯度，测得结果为99.12%。
4.根据权利要求1所述的一种Thonningianin A单体的分离纯化方法，其特征在于工艺步骤如下：
（1）提取
取赶黄草药材50千克切成0.5cm的小段，加入300L 浓度为70%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；
（2）浓缩
将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至体积为180L；
（3）大孔吸附树脂富集与洗脱
将步骤（2）浓缩后的滤液过直径为25cm的大孔吸附树脂层析柱进行吸附，先用纯化水清洗树脂至无色后，再用浓度为65%的乙醇洗脱，至流出液无色，收集合并洗脱液共220L，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇，得浓缩液14L；
（4）聚酰胺树脂富集与洗脱
将步骤（3）所得的浓缩液过直径为25cm的聚酰胺树脂层析柱进行吸附，富集完后，先用10%的乙醇清洗树脂至无色后，再用90%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液共120L，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇，得浓缩液为12L；
（5）高效制备液相色谱分离
色谱条件如下：
填料为C18的色谱柱，柱规格为50cm×10cm；
流动相组成为：乙腈-0.3%磷酸水溶液，体积比为45：55；
检测波长为254nm，室温操作；
取步骤（4）所得的浓缩液用溶剂过滤器采用0.45μm有机膜过滤，滤液进样，每一针进样量滤液为125mL，紫外检测器在线监测，针对性收集Thonningianin A单体的制备馏分溶液，得Thonningianin A单体溶液；
在进行高效制备液相色谱分离前，通过液-质联用方法确定高效液相色谱中Thonningianin A单体的峰形，采用的色谱条件同上，取步骤（4）所得的浓缩液过滤然后进样，进行Thonningianin A单体的高效液相分离纯化，根据质谱检测结果，确定Thonningianin A单体在液相色谱中所对应的峰形；
（6）产品回收
将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的Thonningianin A单体溶液加热回收乙腈，得到析出产品水溶液30L，放置室温后用漏斗过滤Thonningianin A晶体，过滤固体于65℃干燥12小时，得到Thonningianin A单体产品15.3克；
整个生产流程用时5天；
计算得产品收率为（15.3/5000000）×100%=0.0306%；
通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱RP-HPLC复检产品纯度，测得结果为98.89%。
CN201310715198.7A 2013-12-23 2013-12-23 一种Thonningianin A单体的分离纯化方法 Active CN103665067B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310715198.7A CN103665067B (zh) 2013-12-23 2013-12-23 一种Thonningianin A单体的分离纯化方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310715198.7A CN103665067B (zh) 2013-12-23 2013-12-23 一种Thonningianin A单体的分离纯化方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103665067A CN103665067A (zh) 2014-03-26
CN103665067B true CN103665067B (zh) 2015-10-21

Family

ID=50303928

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310715198.7A Active CN103665067B (zh) 2013-12-23 2013-12-23 一种Thonningianin A单体的分离纯化方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103665067B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104546872A (zh) * 2014-12-09 2015-04-29 华南理工大学 一种鞣花单宁类黄酮在制备抗肿瘤药物中的应用
CN105193833B (zh) * 2015-10-13 2018-11-30 四川古蔺肝苏药业有限公司 赶黄草单体在制备肝保护药物中的用途
CN108567789B (zh) * 2018-06-29 2020-02-21 浙江中医药大学 Thonningianin A在制备预防或治疗酒精性心肌病药物中的应用
CN109260239A (zh) * 2018-11-08 2019-01-25 西南医科大学 赶黄草总黄酮制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101177440A (zh) * 2007-10-12 2008-05-14 成都普思生物科技有限公司 一种从党参药材中快速分离纯化党参炔苷单体的方法
CN103242398A (zh) * 2013-04-26 2013-08-14 四川古蔺肝苏药业有限公司 二氢黄酮化合物及其制备方法与应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101177440A (zh) * 2007-10-12 2008-05-14 成都普思生物科技有限公司 一种从党参药材中快速分离纯化党参炔苷单体的方法
CN103242398A (zh) * 2013-04-26 2013-08-14 四川古蔺肝苏药业有限公司 二氢黄酮化合物及其制备方法与应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Qun Lu. et al..Isolation and Identification of Compounds from Penthorum chinense Pursh with Antioxidant and Antihepatocarcinoma Properties..《Journal of Agricultural and Food Chemistry》.2012,第60卷(第44期),第11097-11103页. *
Thonningianins A and B, New Antioxidants from the African Medicinal Herb Thonningia sanguinea.;Ikuko I. Ohtani, Naomi Gotoh. et al.;《Journal of Natural Products》;20000405;第63卷(第5期);第676-679页 *
冯浩, 等..赶黄草化学成分的研究..《中国中药杂志》.2001,第26卷(第4期),第260页右栏第2段. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN103665067A (zh) 2014-03-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102451235B (zh) 油橄榄叶提取物的制备方法
CN102276679B (zh) 一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯度茶皂素的方法
CN102492005B (zh) 一种芍药苷和白芍苷的制备方法
CN102070690B (zh) 一种同时制备腺苷、虫草素、n6-(2-羟乙基)腺苷化学对照品的方法
CN101260131A (zh) 从杜仲中提取环烯醚萜活性部位及单体的方法
CN106967137B (zh) 一种大孔树脂联用制备液相色谱分离高纯度橄榄苦苷的方法
CN103665067B (zh) 一种Thonningianin A单体的分离纯化方法
CN101948501B (zh) 一种羟基积雪草甙的制备方法
CN108864217B (zh) 一种石榴皮安石榴苷的纯化方法
CN102146109A (zh) 高纯度栀子苷的制备方法
CN101921277B (zh) 一种从骆驼蓬中同时制备鸭嘴花碱和鸭嘴花酮碱的方法
CN105294628A (zh) 一种从野菊花中分离制备黄酮类成分的方法
CN101863935B (zh) 1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法
CN103408610A (zh) 从梨树叶中提取熊果苷的方法
CN102093328A (zh) 一种富集纯化松树皮中原花青素的方法
CN104711300B (zh) 淫羊藿素的制备方法
CN109096351A (zh) 一种娑罗子皂苷提取工艺
CN103073605A (zh) 一种蒙花苷单体的分离纯化方法
CN103083392B (zh) 一种分离富集山豆根中具异戊烯基黄酮部位的方法
CN103059037B (zh) 一种富集纯化白屈菜中白屈菜碱的方法
CN105434539A (zh) 一种荷叶黄酮的组合物
CN102250183B (zh) 一种以人参花蕾为原材料制备高纯度人参皂苷Re的方法
CN115385901A (zh) 一种从半夏中同时分离夏佛塔苷和胡芦巴碱的方法
CN114617913A (zh) 一种黄芪茎叶总皂苷的提取分离纯化方法
CN102399252A (zh) 一种王不留行黄酮苷单体的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CP03 Change of name, title or address

Address after: 610045 Sichuan city of Chengdu province Wuhou District Wuhou New Town Road No. 8 West two CMC Vuko

Patentee after: CHENGDU PUSH BIO-TECHNOLOGY CO., LTD.

Address before: 610045 Sichuan city of Chengdu province Wuhou District Vuko two West Road No. 8

Patentee before: Pusi Biological Science & Technology Co., Ltd., Chengdu

CP03 Change of name, title or address