CN102093328A - 一种富集纯化松树皮中原花青素的方法 - Google Patents

一种富集纯化松树皮中原花青素的方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于天然有机化学领域,涉及一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂富集纯化松树皮中原花青素的方法。其特点是:应用间歇蒸馏-大孔吸附耦合技术分离纯化原花青素,对原花青素的吸附选择性良好,吸附快解析也快,吸附容量较大;提取方便快捷,原料来源丰富,生产成本低廉,分离效果明显,提取纯度高,可以得到含量50%以上的原花青素半成品和含量95%以上的原花青素终产品,克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂,可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附原花青素,吸附快、解析也快,吸附容量较大。

Description

一种富集纯化松树皮中原花青素的方法
技术领域:
本发明属于天然有机化学领域,涉及一种原花青素的纯化方法,特别是涉及一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法。
背景技术:
松树皮提取物是从松树皮中提取的一类物质。从树上剥下的松树皮被收集,摊平和提取。其中含有大量称作OPCs(原花青素低聚体)的化合物。在对其大量的研究中证明,OPCs为有效的抗氧化剂,且无毒,无突变性,无致癌性并无副作用。使用十分安全。松树皮已被证实是OPCs的新来源,从松树皮提取的OPCs不论在品质和功能上都没有任何不同,只是外观上有一些微小的差异。
原花青素英文名是Oligomeric Proantho Cyanidins(OPC),是一种有着特殊分子结构的生物类黄酮,是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂。一般为红棕色粉末,气微、味涩,溶于水和大多有机溶剂。主要功效有改善血液循环、治疗糖尿病性视网膜病、减轻水肿和抑制静脉曲张等。
发明内容:
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点,提供一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法。
为实现上述目的,本发明采用的技术方案是:
一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法,其步骤如下:
(1)将干松树皮粉碎后用乙醇加热回流提取;
(2)将经步骤(1)处理的松树皮提取液抽滤,得提取液并减压回收溶剂的初提物;
(3)将所获初提物用乙醇加热溶解,加入纯化水萃取,用酸调其PH值为2.0~2.5,静置、抽滤、并用水洗涤至中性,减压浓缩得原花青素粗提物;
(4)将所得原花青素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附;
(5)用不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱,用薄层色谱法跟踪检测,收集原花青素各阶段洗脱液;
(6)将原花青素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇,得原花青素半成品,其含量为50%以上;
(7)将所得原花青素半成品上硅胶层析柱,并以丙酮,甲醇以不同体积比例进行洗脱,薄层色谱法跟踪检测,收集原花青素各阶段洗脱液;
(8)将所收集的原花青素洗脱液,采用活性炭脱色、重结晶方法精制得原花青素,其含量在95%以上。
所述的步骤(1)中,松树皮粉碎后过10~80目筛在进行有机溶剂提取。
所述的步骤(1)中,乙醇为10~100%乙醇中的一种或一种以上,提取时间为4~48小时。
所述的步骤(1)中,提取的方法为浸泡法、回流提取法、渗漉法、煎煮法、连续提取法中的一种或一种以上。
所述的步骤(1)中,加入有机溶剂的体积为松树皮粉碎体积的10~20倍。
所述的步骤(3)中,加入纯化水的量按体积计算为提取物醇溶液的10~20倍,调节PH值所用的酸为盐酸。
所述的步骤(4)中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的X-5、NKA-9、S-8、D 3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种,吸附为静态吸附或动态吸附。
所述的步骤(5)中所述的洗脱为用10~95%的乙醇进行洗脱。
所述的在步骤(5)和(7)中,所采取的检测方法均为薄层色谱法跟踪检测。
所述的步骤(7)中所采取的丙酮与甲醇的体积为1~7∶1。
本发明应用间歇蒸馏-大孔吸附耦合技术分离纯化原花青素,对原花青素的吸附选择性良好,吸附快解析也快,吸附容量较大;提取方便快捷,原料来源丰富,生产成本低廉,分离效果明显,提取纯度高,可以得到含量50%以上的原花青素半成品和含量95%以上的原花青素终产品,克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂,不容于酸、碱及有机媒,对有机物选择性较好,不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响,可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附原花青素,吸附快、解析也快,吸附容量较大。
具体实施方式:
实施例1:一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法,其步骤如下:
(1)将干松树皮碎后过60目筛,用松树皮粉体积10倍的丙酮加热回流提取3次,每次2小时;
(2)将经步骤(1)处理的松树皮提取液抽滤,得提取液并减压回收溶剂的初提物;
(3)将所获初提物用乙醇加热溶解,加入体积为提取物醇溶液体积20倍的纯化水进行萃取,然后用酸调其PH值为2.0,静置、抽滤、减压回收溶剂得原花青素粗提物;
(4)将所得原花青素提物用大孔吸附树脂层析柱上进行吸附,所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-II型树脂;
(5)用10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%的乙醇在大孔吸附树脂层柱中依次进行梯度洗脱,用薄层色谱法跟踪检测,收集原花青素各阶段洗脱液;
(6)将原花青素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇,得到含量为52%原花青素半成品;
(7)将所得原花青素半成品上硅胶层析柱,并用丙酮,甲醇依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱,薄层色谱法跟踪检测,收集原花青素各阶段洗脱液;
(8)将所收集的原花青素洗脱液,采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量95%原花青素。
实施案例2:一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法,其步骤如下:
(1)将干松树皮粉碎后过10目筛,用松树皮粉体积20倍的丙酮加热回流提取4小时;
(2)将经步骤(1)处理的松树皮提取液抽滤,得提取液并减压回收溶剂的初提物;
(3)将所获初提物用乙醇加热溶解,加入体积为提取物醇溶液体积10倍的纯化水进行萃取,然后用酸调其PH值为2.3,静置、抽滤、减压回收溶剂得原花青素粗提物;
(4)将所得原花青素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附,所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的D4006型树脂;
(5)用10%、30%、50%、70%、90%的乙醇在大孔吸附树脂进行洗脱,用薄层色谱法跟踪检测,收集原花青素各阶段洗脱液;
(6)将原花青素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇,得到含量54%原花青素半成品;
(7)将所得原花青素半成品上硅胶层析柱,并用丙酮,甲醇依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱,薄层色谱法跟踪检测,收集原花青素各阶段洗脱液;
(8)将所收集的原花青素洗脱液,采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量97%原花青素。
实施案例3:一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法,其步骤如下:
(1)将干松树皮粉碎后过80目筛,用松树皮粉体积15倍的75%乙醇加热回流提取6小时;
(2)将经步骤(1)处理的松树皮提取液抽滤,得提取液并减压回收溶剂的初提物;
(3)将所获初提物用乙醇加热溶解,加入体积为提取物醇溶液体积15倍的纯化水进行萃取,然后用酸调其PH值为2.5,静置、抽滤、减压回收溶剂得原花青素粗提物;
(4)将所得原花青素粗提物用大孔吸附树脂层析柱子、上进行吸附,所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-9型树脂;
(5)用20%、40%、60%、80%的乙醇在大孔吸附树脂层析柱子中依次进行梯度洗脱,用薄层色谱法跟踪检测,收集原花青素各阶段洗脱液;
(6)将原花青素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇,得到含量56%以上原花青素半成品;
(7)将所得原花青素半成品上硅胶层析柱,并用丙酮,甲醇依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱,薄层色谱法跟踪检测,收集原花青素各阶段洗脱液;
(8)将所收集的原花青素洗脱液,采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量98%原花青素。

Claims (10)

1.一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法,其特征在于,其步骤如下:
(1)将干松树皮粉碎后用75%乙醇加热回流提取;
(2)将经(1)处理的松树皮提取液过滤,得流浸膏状初提物,回收乙醇;
(3)将所收获流浸膏状初提物用水充分洗涤后干燥得到干浸膏,用乙醇溶解后脱色,脱色液经回收乙醇后加水析出大量沉淀,调pH值至2-2.5,分离、收集沉淀物,并用水洗涤至中性,得到原花青素的粗提物。
(4)将所得原花青素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附;
(5)用不同浓度乙醇水溶液对大孔吸附树脂进行洗脱,收集原花青素各阶段洗脱液;
(6)将原花青素洗脱液浓缩回收洗脱剂,得原花青素半成品;
(7)将所得原花青素半成品上硅胶层析柱,并以甲醇,丙酮以不同体积比进行洗脱,收集原花青素各阶段洗脱液;
(8)将所收集到得原花青素洗脱液进行精制的原花青素。
2.根据权利要求1或2所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合富集纯化松树皮中原花青素的方法其特质是:所述的步骤(1)中,松树皮粉后过10~80目筛再进行乙醇加热回流提取。
3.根据权利要求1或2所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树耦合法脂富集纯松树皮中原花青素的方法,其特征是:在所属的步骤(1)中,乙醇为10~100%中的一种或一种以上,提取时间为4~8小时。
4.根据权利要求3所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法,其特征是:所述的步骤(1)中,有机溶剂提取的方法为浸渍法、回流提取法,渗漉法、煎煮法、连续提取法中的一种或一种以上。
5.根据权利要求3所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法,其特征是;所属的步骤(1)中,加入有机溶剂的体积为松树皮粉体积的10~20倍。
6.根据权利要求5所述的利用大间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法,其特征是:在所述的步骤(3)中,加入纯化水的量按体积计为提取物醇溶液的10~20倍,调节PH值所用的酸为盐酸
7.根据权利要求6所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法,其特征是:步骤(4)中所述吸附为静态吸附或动态吸附:步骤(5)中所述的洗脱为用10~95%的乙醇水溶液进行洗脱。
8.根据权利要求7所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法,其特征是:在步骤(5)和(7)中,洗脱过程中采用薄层色谱法跟踪检测。
9.根据权利要求8所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法,其特征是:步骤(7)中所采用丙酮与甲醇得体积比为1~7∶1。
10.根据权利要求7所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法,其特征是:在步骤(8)中,采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制。
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