CN101863935B - 1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法 - Google Patents
1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101863935B CN101863935B CN 201010199208 CN201010199208A CN101863935B CN 101863935 B CN101863935 B CN 101863935B CN 201010199208 CN201010199208 CN 201010199208 CN 201010199208 A CN201010199208 A CN 201010199208A CN 101863935 B CN101863935 B CN 101863935B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- benzyl
- isobutyl
- malate
- bletilla
- silica gel
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
本发明涉及一种1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法。该方法是将白及药材粉碎成粗粉，乙醇提取，回收乙醇，浓缩液加水稀释，经大孔吸附树脂柱富集，乙醇-水解吸附，回收乙醇，得到浓缩液，浓缩液加入硅胶混合均匀，干燥成粉，以氯仿-甲醇洗脱，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯粗品，粗品进行凝胶柱层析，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯精品，再经制备型反相硅胶柱层析，甲醇-水洗脱，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品。经高效液相色谱法检测，1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯的含量可达到98％以上，该方法成本较低，步骤简单，专属性强。
Description
技术领域
本发明涉及一种从中药白及中提取分离1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法。
技术背景
中药白及为兰科植物白及Bletilla striata(Thunb.)Reichb.F.的干燥块茎，味苦、甘、涩，性微寒，具有收敛止血、消肿生肌的功效。白及不仅是常用传统中药，而且也广泛用于食品添加剂和化妆品方面。
鉴于缺少对照品，即使在新颁布的2010年版《中国药典》中，白及质量控制项下也仅有性状、鉴别和检查项，缺少相关指标成分的含量测定，难以精确控制其内在质量，在对中药白及的研究中发现，1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯在中药白及中含量较高，且在不同的产地中含量有一定差别，可以作为评价白及质量指标之一。该化合物其结构式如下：
何讯等人(HPLC测定白及中militarine含量[J].中国中药杂志，2009，34(16)：2076-2078)测定了不同产地白及中1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯含量，认为该成分可以做为白及药材质量控制的检测指标，也预示该化合物做为白及含量测定的对照品具有潜在需求。韩广轩等人(中药白及化学成分研究(II)[J].第二军医大学学报，2002，23(9)：1029-1031)采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，反复硅胶柱层析，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯。但是该方法是对白及化学成分的系统分离，不适合于针对1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯的分离制备。而针对1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯进行分离的方法尚未见文献报道。
发明内容
本发明的目的是为了解决中药白及质量控制中含量测定所需对照品，提供一种从中药白及中提取分离1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的方法。
本发明所提供的一种1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法，包括以下步骤：
(1)将白及药材粉碎成粗粉，按照白及粗粉∶溶剂＝1∶4～20(重量)的比例，回流提取1～8小时，滤液回收溶剂，得到流浸膏，其中所述溶剂为甲醇或乙醇，浓度为30～80％；
(2)将上述白及流浸膏加水稀释，白及流浸膏∶水＝1∶4～10(重量)，稀释液经大孔吸附树脂柱富集，以20～80％乙醇为解吸附剂进行洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得到浓缩液，加硅胶混合均匀，硅胶加入量按白及粗粉∶硅胶＝1∶0.02～0.1(重量)计，室温干燥，得到干燥粉末；
(3)将上述干燥粉末转入层析柱，依次以不同比例氯仿-甲醇为洗脱剂进行洗脱，氯仿∶甲醇＝1∶0～0.2、1∶0.2～0.4、1∶0.5～0.9(体积)，依次收集洗脱液，薄层层析检识，合并1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯粗品；
(4)将上述1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯粗品进行凝胶柱层析，甲醇或水为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，薄层层析检识，合并1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯精品；
(5)将上述1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯精品进行反相硅胶柱层析，以甲醇-水洗脱，甲醇占水的30～70％(体积)，收集洗脱液，经高效液相检测，将纯度≥98％的1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分合并，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品。
上述步骤(1)中的白及药材选自兰科植物白及Bletillastriata(Thunb.)Reichb.f.的干燥块茎。
上述步骤(2)中所述大孔吸附树脂为非极性或弱极性大孔吸附树脂，优选型号为D101或AB-8型大孔吸附树脂。
上述步骤(3)和步骤(4)中薄层层析的显色条件为10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热显色。
上述步骤(4)中所述凝胶为葡聚糖凝胶或羟丙基葡聚糖凝胶，优选型号为Sephadex G-25或Sephadex LH-20型凝胶。
上述步骤(5)中所述反相硅胶优选型号为C8或C18型反相硅胶。
上述步骤(5)中高效液相检测条件：流动相为24％乙腈-水，检测波长为222nm。
本发明方法与现有技术相比具有以下有益效果：
1)本发明方法通过溶剂提取、大孔吸附树脂富集、硅胶粗分离、反相硅胶纯化四个步骤即可制备出纯度≥98％的1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品，步骤简单，专属性强，方法适用。
2)分离成本较低，所用试剂均可回收利用。
3)该方法制备量大，一次提取，可制备出十克级或百克级的对照品。
具体实施方式：
实施例1
(1)将白及药材粉碎成粗粉，按照白及粗粉∶80％乙醇＝1∶12的重量比例，回流提取2小时，滤液回收溶剂，得到流浸膏；
(2)将上述白及流浸膏按1∶6的重量比加水稀释，稀释液经D101型大孔吸附树脂富集，以70％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得到浓缩液，加硅胶混合均匀，硅胶加入量按白及粗粉∶硅胶＝1∶0.05(重量)计，室温干燥，得到干燥粉末；
(3)将上述干燥粉末转入层析柱，依次以氯仿∶甲醇＝1∶0、1∶0.3、1∶0.6为洗脱剂进行洗脱，依次收集洗脱液，经薄层层析检识，合并1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯粗品；
(4)将上述1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯粗品通过SephadexLH-20凝胶柱层析，以甲醇为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，薄层层析检识，合并1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯精品；
(5)将上述1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯精品进行C18反相硅胶柱层析，以50％甲醇-水洗脱，收集洗脱液，经高效液相检测，将纯度≥98％的1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分合并，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品。
实施例2
(1)将白及药材粉碎成粗粉，按照白及粗粉∶60％乙醇＝1∶8的重量比例，回流提取4小时，滤液回收溶剂，得到流浸膏；
(2)将上述白及流浸膏按1∶8的重量比加水稀释，稀释液经AB-8型大孔吸附树脂富集，以50％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得到浓缩液，加硅胶混合均匀，硅胶加入量按白及粗粉∶硅胶＝1∶0.1(重量)计，室温干燥，得到干燥粉末；
(3)将上述干燥粉末转入层析柱，依次以氯仿∶甲醇＝1∶0.1、1∶0.3、1∶0.7为洗脱剂进行洗脱，依次收集洗脱液，经薄层层析检识，合并1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯粗品；
(4)将上述1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯粗品通过SephadexLH-20凝胶柱层析，以甲醇为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，薄层层析检识，合并1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯精品；
(5)将上述1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯精品进行C18反相硅胶柱层析，以40％甲醇-水洗脱，收集洗脱液，经高效液相检测，将纯度≥98％的1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分合并，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品。
实施例3
(1)将白及药材粉碎成粗粉，按照白及粗粉∶30％甲醇＝1∶16的重量比例，回流提取6小时，滤液回收溶剂，得到流浸膏；
(2)将上述白及流浸膏按1∶10的重量比加水稀释，稀释液经AB-8型大孔吸附树脂富集，以40％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得到浓缩液，加硅胶混合均匀，硅胶加入量按白及粗粉∶硅胶＝1∶0.08(重量)计，室温干燥，得到干燥粉末；
(3)将上述干燥粉末转入层析柱，依次以氯仿∶甲醇＝1∶0.1、1∶0.4、1∶0.9为洗脱剂进行洗脱，依次收集洗脱液，经薄层层析检识，合并1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯粗品；
(4)将上述1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯粗品通过SephadexG-25凝胶柱层析，以水为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，薄层层析检识，合并1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯精品；
(5)将上述1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯精品进行C8反相硅胶柱层析，以30％甲醇-水洗脱，收集洗脱液，经高效液相检测，将纯度≥98％的1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分合并，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品。
Claims (8)
1.一种4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法，包括以下步骤：
(1)将白及药材粉碎成粗粉，按照白及粗粉∶溶剂＝1∶4～20(重量)的比例，回流提取1～8小时，滤液回收溶剂，得到流浸膏，其中所述溶剂为甲醇或乙醇，浓度为30～80％；
(2)将上述白及流浸膏加水稀释，白及流浸膏∶水＝1∶4～10(重量)，稀释液经非极性或弱极性大孔吸附树脂柱富集，以20～80％乙醇为解吸附剂进行洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得到浓缩液，加硅胶混合均匀，硅胶加入量按白及粗粉∶硅胶＝1∶0.02～0.1(重量)计，室温干燥，得到干燥粉末；
(3)将上述干燥粉末转入层析柱，依次以不同比例氯仿-甲醇为洗脱剂进行洗脱，氯仿∶甲醇＝1∶0～0.2、1∶0.2～0.4、1∶0.5～0.9(体积)，依次收集洗脱液，薄层层析检识，合并1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯粗品；
(4)将上述1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯粗品进行凝胶柱层析，甲醇或水为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，薄层层析检识，合并1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯精品；
(5)将上述1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯精品进行反相硅胶柱层析，以甲醇-水洗脱，甲醇占水的30～70％(体积)，收集洗脱液，经高效液相检测，将纯度≥98％的1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯组分合并，回收溶剂，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品。
2.根据权利要求1的方法，其特征在于步骤(1)中所述白及药材选自兰科植物白及Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f.的干燥块茎。
3.根据权利要求1的方法，其特征在于所述大孔吸附树脂型号为D101或AB-8型大孔吸附树脂。
4.根据权利要求1的方法，其特征在于步骤(3)和步骤(4)中薄层层析的显色条件为10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热显色。
5.根据权利要求1的方法，其特征在于步骤(4)中所述凝胶为葡聚糖凝胶或羟丙基葡聚糖凝胶。
6.根据权利要求5的方法，其特征在于所述凝胶型号为Sephadex G-25或Sephadex LH-20型凝胶。
7.根据权利要求1的方法，其特征在于步骤(5)中所述反相硅胶为C8或C18型反相硅胶。
8.根据权利要求1的方法，其特征在于步骤(5)中高效液相检测条件：流动相为24％乙腈-水，检测波长为222nm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201010199208 CN101863935B (zh) | 2010-06-04 | 2010-06-04 | 1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201010199208 CN101863935B (zh) | 2010-06-04 | 2010-06-04 | 1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101863935A CN101863935A (zh) | 2010-10-20 |
| CN101863935B true CN101863935B (zh) | 2013-01-02 |
Family
ID=42955890
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 201010199208 Expired - Fee Related CN101863935B (zh) | 2010-06-04 | 2010-06-04 | 1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101863935B (zh) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2958644B1 (fr) * | 2010-04-09 | 2022-07-29 | Guerlain Sa | Composition cosmetique |
| CN103293261A (zh) * | 2012-03-05 | 2013-09-11 | 贵州益佰制药股份有限公司 | 白及药材的含量测定方法 |
| CN107095963B (zh) * | 2016-02-26 | 2021-07-06 | 中国医学科学院药物研究所 | 白及有效部位在治疗老年性痴呆的用途 |
| CN106924273B (zh) * | 2017-02-23 | 2020-04-07 | 贵州医科大学 | Militarine在制备肝素拮抗药物方面的应用 |
| CN110776540B (zh) * | 2019-11-04 | 2021-02-09 | 厦门市食品药品质量检验研究院(中华人民共和国厦门口岸药品检验所) | 白及中2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物的制备方法及用途 |
| CN111679015A (zh) * | 2020-07-24 | 2020-09-18 | 张家港清蓝生物医药科技有限公司 | 一种白及小分子特征指纹图谱分析方法 |
| CN115611956A (zh) * | 2021-07-12 | 2023-01-17 | 云南屈美生物科技有限公司 | 一种白及多糖和Militarine联产的制备方法及由其制备得到的产品和应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101502616B (zh) * | 2009-03-16 | 2011-03-16 | 正安县绿野科技产业有限责任公司 | 白及药材的含量测定方法 |
-
2010
- 2010-06-04 CN CN 201010199208 patent/CN101863935B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101863935A (zh) | 2010-10-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101863935B (zh) | 1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法 | |
| CN101797344B (zh) | 一种淡竹叶精制总黄酮的制备方法 | |
| CN102451235B (zh) | 油橄榄叶提取物的制备方法 | |
| CN101723996B (zh) | 一种从黑米中分离制备高纯度花色苷单体的方法 | |
| CN102976909B (zh) | 一种从生姜中提取纯化6-姜酚的方法 | |
| CN108864217B (zh) | 一种石榴皮安石榴苷的纯化方法 | |
| CN104892687A (zh) | 高速逆流色谱分离纯化十大功劳叶中单体化合物的方法 | |
| CN104997840A (zh) | 一种异叶青兰五环三萜类组分的样品前处理方法及其应用 | |
| CN104829474B (zh) | 一种从枸杞叶中制备甜菜碱化学对照品的方法 | |
| CN104370895B (zh) | 一种荭草苷和异荭草苷的制备方法 | |
| CN103665067B (zh) | 一种Thonningianin A单体的分离纯化方法 | |
| CN102040635B (zh) | 一种连翘酯苷b和金石蚕苷单体的高效分离纯化方法 | |
| CN101658598B (zh) | 从泽泻中提取并富集泽泻总三萜酮醇类组分的方法 | |
| CN102503996A (zh) | 一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法 | |
| CN103012510B (zh) | 一种1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品的制备方法 | |
| CN106916162B (zh) | 一种岩大戟内酯b原料药的制备方法 | |
| CN107721857A (zh) | 一种从平卧菊三七中制备高纯度绿原酸的方法 | |
| CN105061212B (zh) | 一种新绿原酸的制备方法 | |
| CN104892620B (zh) | 一种高纯度水黄皮素的制备方法 | |
| CN102078400B (zh) | 一种枇杷叶总三萜酸提取物的制备方法 | |
| CN103923138B (zh) | 一种烟花苷的制备方法及其应用 | |
| CN106831910A (zh) | 一种马钱苷原料药的制备方法 | |
| CN103058859B (zh) | 一种香椿叶中没食子酸及其甲酯的同时制备及检测方法 | |
| CN102250169A (zh) | 一种泻鼠李皮苷b的制备方法 | |
| CN106668234A (zh) | 玫瑰花总黄酮提取纯化工艺 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20130102 Termination date: 20130604 |