CN110776540B - 白及中2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物的制备方法及用途 - Google Patents

白及中2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物的制备方法及用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种白及中2‑异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物的制备方法及用途，属于医药、日用化工领域。所述白及的提取物优选为块茎和/或须根。所述白及2‑异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物可作为酪氨酸酶抑制剂应用于制备黑色素生成抑制剂或美白剂的化妆品、医药品或皮肤外用剂，对紫外线照射后的皮肤晒黑及色斑、老年斑、雀斑等皮肤色素沉着具有良好的预防、改善及治疗效果。

Description

白及中2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物的制备方法 及用途
技术领域
本发明属于医药品和日用化工领域，特别涉及一种白及中2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物及其制备方法以及作为酪氨酸酶抑制剂在药品、化妆品领域的应用。
背景技术
白及为兰科植物白及(Bletilla striata(Thunb)Rchb.f.)的干燥块茎，又名甘根、白根、连及草、白芨等。李时珍释其名曰：其根白色，连及而生，故曰白及，入药始载于《神农本草经》。白及属植物在我国分布范围很广，长江流域是白及种类最为丰富、气候条件最宜的生态区域，主产于贵州、四川、云南、湖南、湖北、安徽等省。其味苦、甘、涩，性凉，归归肺、肝、胃经。具有收敛止血、消肿生肌作用，用于咯血吐血，外伤出血，疮疡肿毒，皮肤皲裂、水火烫伤等病症。白及中主要化学成分包括多糖类、联苄类、菲类及其衍生物、黄酮类，2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类化合物等(Phytochemistry,1933,33: 1481-1483；HelvChim Acta,2008,91:520-525)。现代药理研究表明，白及具有止血，抗菌，抗肿瘤等作用(药学实践杂志,2011,29:206-207；中华医学杂志,2003,85:412-416)。此外，白及是高级卷烟烟条粘合剂，野山参断须修复剂，胃镜检查的保护剂，美容面膜等。白及多糖(也称白及胶)也是重要的医药工业原材料，作为加工代血浆、血管栓塞剂用于肿瘤的治疗中。
黑色素(Melanin)是由表皮基底层中的黑色素细胞分泌的多种多酚样物质的生物聚合体，颜色从黄色(褐黑色素)到黑色(真黑色素)。它能够吸收太阳紫外线，清除反应态的氧(ROS)，避免皮肤被紫外线伤害。黑色素生成紊乱会所致雀病、老年斑、白癜风以及白化病等。日光中的紫外线激活表皮中的黑色素细胞内的黑色素生成酶，产生色素。这种色素沉着，引起的雀斑、皮肤变黑，对中青年人，尤其是青年女性来讲已经成为一大烦恼。这一过程中一系列黑色素的生成中，酪氨酸酶将酪氨酸转化成多巴、多巴醌，经非酶氧化而聚合生产黑色素。酪氨酸酶是催化黑色素生成的前两步反应，是关键的限速酶。因此，通过抑制酪氨酸酶的活性可以延缓黑色素的生成，改善皮肤的色素沉着。
目前已有多种酪氨酸酶抑制剂用于改善或治疗皮肤色斑，并已商品化，例如L-抗坏血酸、曲酸、氢醌，但由于存在的稳定性差、效果不佳或细胞毒性等问题，无法满足日益扩大的消费市场需求。天然来源的植物类提取物具有安全性好、资源丰富、成本低等优势得到广泛的关注。例如，来源于植物成分的氢醌糖苷类衍生物---熊果苷，在活性剂量下没有细胞毒性，被开发成为商品，已在多种美白产品中添加使用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物。
本发明的另一目的在于提供上述白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物作为酪氨酸酶抑制剂在药品、化妆品领域的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物，其所述白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物中含有如下化合物：1-(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-葡萄糖苷(dactylorhin E)、4-(葡糖糖氧基)-顺式肉桂酸葡萄糖氧基苄酯(bleformin J)、1-(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸(gymnosideI)、1,4-二(4- 葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-葡萄糖苷(dactylorhin A)、1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯(militarine)、1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(6- 乙酰基)葡萄糖苷(gymnoside III)、1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(4-肉桂酰基)葡萄糖苷(gymnoside V)和1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(4-肉桂酰基-6-乙酰基)葡萄糖苷(gymnoside IX)。
所述1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯的质量百分含量不低于20％。
所述的白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物中，1-(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-葡萄糖苷所对应的峰面积占0.51～3.14％，4-(葡糖糖氧基)-顺式肉桂酸葡萄糖氧基苄酯所对应的峰面积占2.94～5.01％，1-(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸所对应的峰面积占4.37～8.51％，1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-葡萄糖苷所对应的峰面积占4.02～9.26％，1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯所对应的峰面积占 22.69～35.58％，1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(6-乙酰基)葡萄糖苷所对应的峰面积占5.05～10.16％，1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(4-肉桂酰基)葡萄糖苷所对应的峰面积占1.60～3.74％，1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(4- 肉桂酰基-6-乙酰基)葡萄糖苷所对应的峰面积占3.45～8.42％。
上述白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物的制备方法，包括以下操作步骤：将兰科植物白及的块茎或须根粉碎，浸入提取溶剂中冷提或在提取溶剂中加热回流提取，所述提取溶剂为水、甲醇、乙醇和丙酮中的一种以上，过滤或离心除去不溶物，再对所得提取溶液进行减压浓缩，干燥成干浸膏，得到白及提取物；将白及提取物经过溶剂萃取分离或大孔吸附树脂分离，得到白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物；
所述溶剂萃取分离是将白及提取物分散于水中，依次用乙酸乙酯和正丁醇进行等体积萃取3次，分别真空减压干燥，正丁醇萃取部位，即为白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物。
所述大孔吸附树脂分离是将白及提取物溶于水中，过滤，取滤液经大孔树脂D101柱色谱，所述的大孔树脂包括但不限于D101、HP-20、AB-8、X-5、D1300等类型，依次采用水、体积百分比浓度为50％的乙醇-水溶液和体积百分比浓度为95％的乙醇-水溶液进行梯度洗脱，体积百分比浓度为50％的乙醇-水溶液的洗脱提取物即为白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物。
所述提取的温度为20～100℃，提取的时间为1～48小时；所述分离是采用柱色谱分离法和/或萃取法进行分离。
上述的一种白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物作为酪氨酸酶抑制剂应用于抑制黑色素生成或美白的化妆品和医药品。
本发明所提供的白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物可以做药品或化妆品，使用量可视不同的用途而不同。
制备药物时，用该白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物与常规的药用载体混合制成散剂、片剂或乳剂、膏剂等外用制剂，其用量以0.1～50％比较合适。
制备化妆品时可在化妆品基质中添加0.1～20％的本发明提取物即可。
本发明相对现有技术，具有如下的优点及有益效果：本发明提供了一种新的具有酪氨酸酶抑制作用的白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物，该提取物可作为酪氨酸酶抑制剂，可用于制备抑制黑色素生成或美白化妆品或医药品，对紫外线照射后的皮肤晒黑及色斑、老年斑、雀斑等皮肤色素沉着具有良好的预防、改善及治疗效果。此外，将上述提取物与其他确有相关用途的化合物、提取物混合，用于制备抑制黑色素生成或美白的化妆品或医药品。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
图1是白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物的液质总离子流(TIC)特征图谱及主要色谱峰的指认图谱，其中a为白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物的TIC特征图谱，b为主要色谱峰的指认图谱。
图2是不同浓度白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物、熊果苷对酪氨酸酶的抑制作用。
具体实施方式
下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细的描述，但本发明实施方式不限于此。
实施例1：白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物的制备
白及须根1kg，粉碎后，加入水10L加热回流提取2次，每次2小时，合并二次的提取液经纱布过滤后，经1000rpm离心5分钟，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得白及提取物BJ(110g)。取白及提取物100g，溶解于适量水中，过滤，取滤液经大孔树脂D101开放柱色谱，乙醇-水梯度洗脱。分别减压回收，得水洗脱部分(51.5g)，50％(v/v)乙醇-水洗脱部分(28.0g)，以及95％(v/v)乙醇-水洗脱部分(12.5g)。其中，50％(v/v)乙醇-水洗脱部分即为白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物。
实施例2：白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物液质TIC特征图谱的建立及主要色谱峰的指认
取实施例1中所得的白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物适量，精密称定，加甲醇溶解制成10.0mg/mL的溶液，过0.45μm滤膜后，即得供试品溶液。
精密取上述供试品1μl，注入高效液相色谱质谱联用仪进行分析，记录TIC图(图1)。液相色谱条件为：0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱：5％B→15％B(0～10min),15％B→20％B(10～20min),20％B(20～23min),20％B→25％B(23～28min),25％B(28～31min), 25％B→31％B(31～40min),31％B→36％B(40～45min),36％B→45％B(45～50min), 45％B→100％B(50～60min)。质谱条件：电喷雾负离子扫描(ESI-)，离子源温度为100℃，毛细管电压：2kV，锥孔电压：20V，脱溶剂气为600L·h-1，脱溶剂气温度为400℃，雾化气为50L·h-1；采用MSE采集方式，碰撞气为氩气。获得的白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物的TIC特征图谱。对比多批次提取物的TIC特征图谱，标定其中八个色谱峰依次为：1-(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-葡萄糖苷、4-(葡糖糖氧基)-顺式肉桂酸葡萄糖氧基苄酯、1-(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸、1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2- 葡萄糖苷、1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯、1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(6-乙酰基)葡萄糖苷、1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(4-肉桂酰基)葡萄糖苷、1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(4-肉桂酰基-6-乙酰基)葡萄糖苷。它们的保留时间及质谱信息如表1所示：
表1白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物TIC图谱中八个色谱峰的指认
Figure BDA0002258993670000051
Figure BDA0002258993670000061
实施例3：白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物TIC特征图谱重现性考察
取4批来源不同产地(云南，贵州、湖北，云南)的白及，按照实施例1中的制备方法依次处理，得到4批白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物(BJB1801，BJB1802，BJB1803，BJB1804)，按照实施例2中的处理方法和条件，分别进行分析，得到4批白及2- 异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物的TIC特征图谱，以其中militarine的色谱保留时间为 1计算得到的各色谱峰的相对保留时间及各色谱峰对应的化学物质依次为：
1号峰：0.52±0.02(dactylorhin E)
2号峰：0.56±0.02(bleformin J)
3号峰：0.67±0.02(gymnoside I)
4号峰：0.73±0.02(dactylorhin A)
5号峰：1.00(militarine)
6号峰：1.08±0.02(gymnoside III)
7号峰：1.57±0.02(gymnoside V)
8号峰：1.90±0.03(gymnoside IX)
表2 4批白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类TIC图谱中八个色谱峰的信息
Figure BDA0002258993670000071
由表2可见，采用峰面积归一化法，1-(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-葡萄糖苷所对应的峰面积占0.51～3.14％，4-(葡糖糖氧基)-顺式肉桂酸葡萄糖氧基苄酯所对应的峰面积占2.94～5.01％，1-(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸所对应的峰面积占4.37～8.51％，1,4-二 (4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-葡萄糖苷所对应的峰面积占4.02～9.26％，1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯所对应的峰面积占22.69～35.58％，1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2- 异丁基苹果酸酯-2-(6-乙酰基)葡萄糖苷所对应的峰面积占5.05～10.16％，1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(4-肉桂酰基)葡萄糖苷所对应的峰面积占1.60～3.74％，1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(4-肉桂酰基-6-乙酰基)葡萄糖苷所对应的峰面积占3.45～8.42％。
实施例4:酪氨酸酶抑制活性的测定
按照下表3中的反应体系，总反应体系200μl，依次加入磷酸盐缓冲液(PBS，25mM,pH 6.8)、不同浓度的样品溶液(熊果苷阳性对照)，L-酪氨酸溶液(0.1mg/ml)，混合均匀于25℃水浴中恒温10min后，再加入20μl酪氨酸酶(200U/mg)混匀，于水浴37℃恒温20min，取出于紫外分光光度计475nm处测吸光度。测定时，以相应的空白对照为参比，计算样品溶液(对照品溶液)对酪氨酸酶的抑制率，并依据浓度-抑制率曲线估计半数抑制浓度(IC50) 的近似值。
抑制率(％)＝(A-B)/A×100％
式中：A为标准对照的吸光度值，B为样品溶液(或阳性对照)的吸光度值。每组反应液的吸光度值，按照3个平行样的平均值计算。
表3反应体系的组成
Figure BDA0002258993670000072
Figure BDA0002258993670000081
注：测定吸光度值时，“标准对照溶液”、“样品溶液”、“阳性溶液”分别以“空白对照液1”、“空白对照液2”、“空白对照液3”为空白。
样品溶液：精确称取白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物0.2g，置25ml量瓶中，用PBS-DMSO(9:1，v/v)混合液超声溶解，得到浓度为8mg/ml的储备液，再依次稀释成浓度为4、2、1、0.5、0.25mg/ml的溶液。
对照品溶液：取熊果苷对照品适量，加PBS制成8mg/ml的储备液，再依次稀释成浓度为 4、2、1、0.5、0.25mg/ml的溶液。
实施例3中的4批白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物测定结果见表4、图2，白及提取物、熊果苷对酪氨酸酶的抑制随着浓度的增大而上升。在实验浓度范围内，当浓度为0.8mg/ml时，白及提取物和熊果苷对酪氨酸单酚酶有较强的抑制作用，最高抑制率分别为 77.0％和92.5％。白及提取物的IC50为0.182mg/ml，熊果苷的IC50为0.135mg/ml。白及2- 异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物对酪氨酸酶有较强的抑制作用。
表4酪氨酸酶抑制作用
Figure BDA0002258993670000082
实施例5：美白面膜
配方：丁二醇：3％甘油：3％，β-葡聚糖：2％透明质酸：0.2％，甲基纤维素0.5％，羟苯甲酯：0.02％，月桂醇硫酸钠：2％，烟酰胺：1.5％，胶原蛋白：1％，四胜肽：0.5％，六胜肽：0.5％，香精：0.2％，芦荟提取物：2％，白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物：3％，水余量。
实施例6：透白精华液
配方：甘油：5％，丁二醇：2.5％，透明质酸：1.2％，维生素E：0.5％，甲基纤维素0.5％，羟苯甲酯：0.02％，胶原蛋白：1％，四胜肽：0.5％，六胜肽：0.5％，九胜肽：0.5％，香精： 0.2％，白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物：3％，水余量。
实施例7：美白霜
配方：丙二醇：60g，硬脂酸：15g，羊毛脂：5g，十二烷基硫酸钠：0.5g，三乙醇胺：0.3g，透明质酸：0.2g，对羟基苯甲酸乙酯：香精：0.2g，金缕梅提取物：2g，白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物：4g，水适量。
实施例8：祛斑软膏
配方：羊毛脂：10g，凡士林：70g，甘油：5g，透明质酸：1g，维生素C：0.5g，维生素E：0.5g，羟苯甲酯：0.02g，白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物：5g。
实施例9：淡斑美白皂
配方：小麦胚芽油：30g，椰子油：20g，蜂蜡：20g，氢氧化钠：15g，豆蔻精油：5ml，玫瑰花提取物：2g，白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物：5g，水适量。
实施例10：比较实施例5和实施例8的样品对人体的祛斑美白效果
选择30名健康志愿者，年龄20～50岁。志愿者多为由于长期日晒或面对电脑，皮肤表现为较为暗沉发黄，或有雀斑。分成3组，每组10名，实验组分别涂抹实施例5和实施例8的样品，对照组不涂抹任何化妆品。试验期间不改变原来的生活习惯和饮食习惯。试验组在每日早晨和入睡前各涂抹一次，连续60天。在未化妆的情况下，拍摄记录试验开始日、30天和60天的照片，目测比较判定肤色状态。结果见表5，含白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物的实施例5和实施例8具有较好的祛斑和美白效果。
表5实施例5和实施例8的样品对人体祛斑美白效果的结果
Figure BDA0002258993670000091
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物，其特征在于：所述白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物中含有如下化合物：1-(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-葡萄糖苷、4-(葡萄糖氧基)-顺式肉桂酸葡萄糖氧基苄酯、1-(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸、1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-葡萄糖苷、1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯、1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(6-乙酰基)葡萄糖苷、1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(4-肉桂酰基)葡萄糖苷和1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(4-肉桂酰基-6-乙酰基)葡萄糖苷。
2.根据权利要求1所述的一种白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物，其特征在于：所述1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯的质量百分含量不低于20％。
3.根据权利要求1所述的一种白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物，其特征在于：所述的白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物中，1-(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-葡萄糖苷所对应的峰面积占0.51～3.14％，4-(葡萄糖氧基)-顺式肉桂酸葡萄糖氧基苄酯所对应的峰面积占2.94～5.01％，1-(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸所对应的峰面积占4.37～8.51％，1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-葡萄糖苷所对应的峰面积占4.02～9.26％，1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯所对应的峰面积占22.69～35.58％，1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(6-乙酰基)葡萄糖苷所对应的峰面积占5.05～10.16％，1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(4-肉桂酰基)葡萄糖苷所对应的峰面积占1.60～3.74％，1,4-二(4-葡萄糖氧苄基)-2-异丁基苹果酸酯-2-(4-肉桂酰基-6-乙酰基)葡萄糖苷所对应的峰面积占3.45～8.42％。
4.根据权利要求1至3任一项所述的一种白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：将兰科植物白及的块茎或须根粉碎，浸入提取溶剂中冷提或在提取溶剂中加热回流提取，所述提取溶剂为水、甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯中的至少一种；过滤或离心除去不溶物，再对所得提取溶液进行减压浓缩，干燥成干浸膏，得到白及提取物；将白及提取物经过溶剂萃取分离或大孔树脂分离，得到白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物；
所述溶剂萃取分离是将白及提取物分散于水中，依次用乙酸乙酯和正丁醇进行等体积萃取3次，分别真空减压干燥，正丁醇萃取部位，即为白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物；
所述大孔树脂分离是将白及提取物溶于水中，过滤，取滤液经大孔树脂开放柱色谱，依次采用水、体积百分比浓度为50％的乙醇-水溶液、体积百分比浓度为95％的乙醇-水溶液进行梯度洗脱，体积百分比浓度为50％的乙醇-水溶液的洗脱提取物即为白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述提取的温度为20～100℃，提取的时间为1～48小时。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述的大孔树脂包括D101、HP-20、AB-8、X-5、D1300中的至少一种。
7.根据权利要求1至3任一项所述的一种白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物在制备酪氨酸酶抑制剂中的用途。
8.如权利要求1至3任一项所述的白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物作为酪氨酸酶抑制剂在制备黑色素生成抑制剂或美白剂的化妆品、医药品或皮肤外用剂中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述白及2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类提取物在化妆品中的质量含量以干品计为0.1～20％，在药品中的质量含量以干品计为0.1～50％。
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