CN103012510B - 一种1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品的制备方法 - Google Patents
一种1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品的制备方法，属于中药及天然产物对照品提取和纯化技术领域。将白芍药材粉碎，回流提取，浓缩，加水稀释，并经两次大孔吸附树脂富集、解吸附，再通过两次凝胶柱层析分离，得到1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品，经高效液相色谱法检测，其含量可达到98%以上，该方法成本较低，步骤简单，专属性强。
Description
技术领域
本发明涉及一种从中药白芍中提取分离1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品的制备方法，属于中药及天然产物对照品提取和纯化技术领域。
技术背景
中药白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根。味苦、酸，微寒，归肝、脾经，具有平肝止痛，养血调经，敛阴止汗功效。用于头痛眩晕，四肢挛痛，月经不调，自汗，盗汗等病症。白芍是中药常用药，其化学成分主要含有芍药苷、羟基芍药苷等萜类和酚类化合物。
1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖具有较强的生物活性[1-2]，不仅存在于中药白芍中，也广泛存在于其他植物中[3]，同时也是中药质量控制的重要指标，但由于缺少对照品，对1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的质量控制只限于论文发表，在实际中很少应用。所以能够提供一种大量制备1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的方法具有重要意义，在研究中发现虽然1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖在中药五倍子中含量较高，但是由于五倍子中也存在相似的其他化学成分，给分离制备带来一定困难，而从中药白芍中制备1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖相对简单，故本发明提供一种从中药白芍中制备1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖方法。1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖化合物其结构式如下：
参考文献：
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发明内容
本发明的目的是为了解决中药质量控制中含量测定所需的1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品，而提供的一种从中药白芍中分离制备1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品的方法。
本发明所提供的一种1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品的制备方法，包括以下步骤：
（1）将白芍药材粉碎，按照白芍:溶剂重量比=1:4~20的比例，回流提取1~4小时，过滤，浓缩滤液，得到白芍流浸膏，常温比重1.15~1.18，其中所述溶剂为甲醇水溶液或乙醇水溶液，质量浓度为20~80%；
（2）将步骤（1）白芍流浸膏加水稀释，白芍流浸膏:水重量比=＝1:4~10，稀释液经大孔吸附树脂柱富集，以质量浓度20~70%乙醇水溶液为解吸附剂进行洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得到白芍浓缩液，常温比重1.10~1.15；
（3）将上述步骤（2）白芍浓缩液加水稀释，白芍浓缩液:水重量比=1:4~10，稀释液经大孔吸附树脂柱富集，以质量浓度10~50%乙醇水溶液为解吸附剂进行洗脱，收集洗脱液，聚酰胺薄层层析检识，回收溶剂，得到1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖粗品浓缩液；
（4）将上述步骤（3）1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖粗品浓缩液进行凝胶柱层析，甲醇或水为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，聚酰胺薄层层析检识，合并1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖组分，回收溶剂，得到1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖精品；
（5）将上述步骤（4）1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖精品再进行凝胶柱层析，甲醇或水为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，经高效液相检测，将纯度≥98%的1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖组分合并，回收溶剂，得到1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品。
上述步骤（1）中的白芍药材选自毛茛科植物芍药Paeonialactiflora Pall.的干燥根。
上述步骤（2）中所述大孔吸附树脂优选为非极性或弱极性大孔吸附树脂，优选型号为D101或AB-8型大孔吸附树脂。
上述步骤（3）和步骤（4）中聚酰胺薄层层析条件是展开剂为体积比50:50的甲醇水溶液，显色剂为质量比1:100的三氯化铁水溶液。
优选步骤（3）中的解吸附剂的浓度低于步骤（2）中的解吸附剂的浓度。
上述步骤（4）中所述凝胶为葡聚糖凝胶或羟丙基葡聚糖凝胶，优选型号为Sephadex G-25或Sephadex LH-20型凝胶。
上述步骤（5）中高效液相检测条件优选：采用C18填料的色谱柱，以体积比为18:82的乙腈:磷酸-水为流动相，其中磷酸-水中磷酸：水体积比为0.05:100，流速1.0mL/min，检测波长为275nm，柱温25℃。
本发明方法与现有技术相比具有以下有益效果：
1）本发明方法通过溶剂提取、大孔吸附树脂富集、凝胶纯化即可制备出纯度≥98%的1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品，步骤简单，专属性强，方法适用。
2）分离成本较低，所用试剂均可回收利用。
3）该方法制备量大，一次提取，可制备出十克级或百克级的对照品。
具体实施方式
大孔吸附树脂优选型号为D101或AB-8型大孔吸附树脂；聚酰胺薄层层析条件是展开剂为体积比50:50的甲醇水溶液，显色剂为质量比1:100的三氯化铁水溶液；凝胶为葡聚糖凝胶或羟丙基葡聚糖凝胶，优选型号为Sephadex G-25或Sephadex LH-20型凝胶。
高效液相检测条件优选：采用C18填料的色谱柱，以体积比为18:82的乙腈:磷酸-水为流动相，其中磷酸-水中磷酸：水体积比为0.05:100，流速1.0mL/min，检测波长为275nm，柱温25℃。
实施例1
（1）将白芍药材粉碎成粗粉，按照白芍粗粉:80%乙醇水溶液=1:12的重量比例，回流提取4小时，滤液回收溶剂，得到常温比重1.15流浸膏；
（2）将上述白芍流浸膏按1:8的重量比加水稀释，稀释液经大孔吸附树脂柱富集，以50%乙醇水溶液为解吸附剂进行洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得到常温比重1.12浓缩液；
（3）将上述白芍浓缩液再按1:6的重量比加水稀释，稀释液经大孔吸附树脂柱富集，以15%乙醇水溶液为解吸附剂进行洗脱，收集洗脱液，聚酰胺薄层层析检识，回收溶剂，得到1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖粗品浓缩液；
（4）将上述1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖粗品浓缩液进行凝胶柱层析，甲醇为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，聚酰胺薄层层析检识，合并1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖组分，回收溶剂，得到1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖精品；
（5）将上述1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖精品再进行凝胶柱层析，甲醇为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，经高效液相检测，将纯度≥98%的1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖组分合并，回收溶剂，得到1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品。
实施例2
（1）将白芍药材粉碎成粗粉，按照白芍粗粉:60%乙醇水溶液=1:15的重量比例，回流提取2小时，滤液回收溶剂，得到常温比重1.16流浸膏；
（2）将上述白芍流浸膏按1:10的重量比加水稀释，稀释液经大孔吸附树脂柱富集，以50%乙醇水溶液为解吸附剂进行洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得到常温比重1.14浓缩液；
（3）将上述白芍浓缩液再按1:6的重量比加水稀释，稀释液经大孔吸附树脂柱富集，以30%乙醇水溶液为解吸附剂进行洗脱，收集洗脱液，聚酰胺薄层层析检识，回收溶剂，得到1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖粗品浓缩液；
（4）将上述1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖粗品浓缩液进行凝胶柱层析，水为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，聚酰胺薄层层析检识，合并1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖组分，回收溶剂，得到1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖精品；
（5）将上述1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖精品再进行凝胶柱层析，水为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，经高效液相检测，将纯度≥98%的1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖组分合并，回收溶剂，得到1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品。
实施例3
（1）将白芍药材粉碎成粗粉，按照白芍粗粉:40%乙醇=1:20的重量比例，回流提取3小时，滤液回收溶剂，得到常温比重1.15流浸膏；
（2）将上述白芍流浸膏按1:6的重量比加水稀释，稀释液经大孔吸附树脂柱富集，以60%乙醇为解吸附剂进行洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得到常温比重1.15浓缩液；
（3）将上述白芍浓缩液再按1:8的重量比加水稀释，稀释液经大孔吸附树脂柱富集，以30%乙醇为解吸附剂进行洗脱，收集洗脱液，聚酰胺薄层层析检识，回收溶剂，得到1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖粗品浓缩液；
（4）将上述1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖粗品浓缩液进行凝胶柱层析，甲醇为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，聚酰胺薄层层析检识，合并1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖组分，回收溶剂，得到1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖精品；
（5）将上述1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖精品再进行凝胶柱层析，甲醇为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，经高效液相检测，将纯度≥98%的1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖组分合并，回收溶剂，得到1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品。
Claims (9)
1.一种1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将白芍药材粉碎，按照白芍:溶剂重量比=1:4~20的比例，回流提取1~4小时，过滤，浓缩滤液，得到白芍流浸膏，常温比重1.15~1.18，其中所述溶剂为甲醇水溶液或乙醇水溶液，质量浓度为20~80%；
（2）将步骤（1）白芍流浸膏加水稀释，白芍流浸膏:水重量比=1:4~10，稀释液经大孔吸附树脂柱富集，以质量浓度20~70%乙醇水溶液为解吸附剂进行洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得到白芍浓缩液，常温比重1.10~1.15；
（3）将上述步骤（2）白芍浓缩液加水稀释，白芍浓缩液:水重量比=1:4~10，稀释液经大孔吸附树脂柱富集，以质量浓度10~50%乙醇水溶液为解吸附剂进行洗脱，收集洗脱液，聚酰胺薄层层析检识，回收溶剂，得到1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖粗品浓缩液；
（4）将上述步骤（3）1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖粗品浓缩液进行凝胶柱层析，甲醇或水为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，聚酰胺薄层层析检识，合并1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖组分，回收溶剂，得到1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖精品；
（5）将上述步骤（4）1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖精品再进行凝胶柱层析，甲醇或水为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，经高效液相检测，将纯度≥98%的1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖组分合并，回收溶剂，得到1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品。
2.按照权利要求1的方法，其特征在于，步骤（1）中的白芍药材选自毛茛科植物芍药Paeonialactiflora Pall.的干燥根。
3.按照权利要求1的方法，其特征在于，步骤（2）中所述大孔吸附树脂为非极性或弱极性大孔吸附树脂。
4.按照权利要求3的方法，其特征在于，大孔吸附树脂优选型号为D101或AB-8型大孔吸附树脂。
5.按照权利要求1的方法，其特征在于，步骤（3）和步骤（4）中聚酰胺薄层层析条件是展开剂为体积比50:50的甲醇水溶液，显色剂为质量比1:100的三氯化铁水溶液。
6.按照权利要求1的方法，其特征在于，步骤（3）中的解吸附剂的浓度低于步骤（2）中的解吸附剂的浓度。
7.按照权利要求1的方法，其特征在于，步骤（4）中所述凝胶为葡聚糖凝胶或羟丙基葡聚糖凝胶。
8.按照权利要求7的方法，其特征在于，凝胶优选型号为Sephadex G-25或Sephadex LH-20型凝胶。
9.按照权利要求1的方法，其特征在于，步骤（5）中高效液相检测条件优选：采用C18填料的色谱柱，以体积比为18:82的乙腈:磷酸-水为流动相，其中磷酸-水中磷酸：水体积比为0.05:100，流速1.0mL/min，检测波长为275nm，柱温25℃。
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