JP2017520616A - 杜仲葉からクロロゲン酸を抽出する方法 - Google Patents
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Abstract
本発明は、杜仲葉からクロロゲン酸を抽出する方法を提供し、それは以下のステップを含む：ａ、杜仲葉の秤取、ｂ、水抽出、ｃ、前処理、ｄ、ろ過、ｅ、マクロポーラス吸着樹脂への投入、ｆ、濃縮、ｇ、乾燥：空気入口温度１５０℃−２００℃、空気出口温度５０℃−９０℃である噴霧乾燥をして、クロロゲン酸粗生成物を得る。本発明は、水抽出、前処理、マクロポーラス吸着樹脂カラムへの投入、濃縮乾燥によってクロロゲン酸粗生成物を調製する。水抽出液は濃縮せず、前処理の後に直接マクロポーラス吸着樹脂に投入して純化処理を行い、クロロゲン酸が濃縮のために長時間水中で熱にさらされ、不安定になって分解してしまうという問題を解決するとともに、濃縮工程の段階を省いて生産サイクルを短縮する。また、異なる溶離液の濃度パラメータを制御することによって、２０〜６０％の各種規格の粗生成物を生産することができる。
Description
本発明は、杜仲葉からクロロゲン酸を抽出する方法に関する。
クロロゲン酸（Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ）はカフェ酸（Ｃａｆｆｅｉｃ ａｃｉｄ）とキナ酸（Ｑｕｉｎｉｃ ａｃｉｄ）とで組成されるデプシドであり、別名はカフェタンニン酸、化学名は３−Ｏ−カフェオイルキナ酸（３−Ｏ−Ｃａｆｆｅｏｙｌｑｕｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、分子式はＣ１６Ｈ１８Ｏ９、分子量は３５４．３０であって、植物体が好気呼吸の過程においてシキミ酸経路で生成するフェニルプロパノイド類である。クロロゲン酸は重要な生物活性物質であり、抗菌、抗ウィルス、白血球増殖、肝保護・利胆、抗腫瘍、血圧降下、血中脂質降下、活性酸素除去、中枢神経系興奮等の作用がある。クロロゲン酸は多くの漢方薬の有効成分のひとつであり、一部の売薬の品質指標でもある。クロロゲン酸の応用範囲は非常に広く、主に医薬、日用化学工業品、食品等の業界で応用されている。クロロゲン酸は様々な植物に広く存在するが、含有量が高い植物は決して多くはない。近年の研究では、杜仲葉のクロロゲン酸含有量が豊富で、１％〜５％に達することがわかっている。中国では杜仲が広範囲に植林されており、毎年数百万トンの杜仲葉を生産することができる。これはクロロゲン酸の抽出に十分な原料のベースとなっている。
現在、杜仲葉からクロロゲン酸を抽出するという報道は多く、クロロゲン酸の抽出方法は主として有機溶媒抽出法、物理的抽出法による抽出、超高圧抽出法、ホモジネート抽出法等がある。銭ホアほか、「杜仲葉クロロゲン酸の抽出分離」、中国野生植物資源、第２０巻第４期（銭ホア等、「杜仲葉緑原酸的提取分離」、中国野生植物資源、第２０巻第４期）では、以下が紹介されている。杜仲葉の乾燥粉末を、７０％エタノール（ｐＨ＝２．５）を用いて９０℃で３回抽出する。１回当たり３０分抽出し、固液比をそれぞれ１：１２、１：１０、１：８とする。抽出液を一定の体積になるまで濃縮し、前処理した後に投入する。同時に、１７種類のマクロポーラス吸着樹脂について、杜仲葉クロロゲン酸に対する吸着能、溶離能及び吸着動力学特性を比較する、というものである。また、スクリーニング試験は、ＮＫＡ−９が優れた性能の吸着剤であることを示している。王茜ほか、「杜仲葉クロロゲン酸抽出分離の工程条件と研究」、イオン交換と吸着、２００８、２４（１）：７３〜８０（王茜等、「杜仲葉中緑原酸提取分離工芸条件的研究」、離子交換与吸附、２００８、２４（１）：７３〜８０）では、杜仲葉クロロゲン酸の抽出と分離について研究を行っている。すなわち、水及び濃度の異なるエタノール、メタノール、アセトン水溶液を抽出溶媒として、クロロゲン酸得率への影響を研究しており、直交実験法を用いてクロロゲン酸抽出率に影響を与える主要因を分析し、またマクロポーラス樹脂でそれを分離している。その結果、以下のことが示された。５０℃の水により抽出されたクロロゲン酸の得率が比較的高く、１．０６％であったことから、水をクロロゲン酸抽出溶媒とする。また、水による杜仲葉クロロゲン酸抽出の最適な工程条件は、温度６０℃、固液比１：１６、ｐＨ４、抽出時間３ｈであり、スクリーニングされたＧＣ−Ｉ樹脂はクロロゲン酸の吸着分離に最適な吸着剤であって、吸着に最適なｐＨ値は３、吸着流速は３ＢＶ／ｈであった。この実験条件で得られた粗生成物の純度は３０．８８％、収率は７６．５１％であった。苗磊、「杜仲葉クロロゲン酸の抽出と純化」、北京化工大学、２０１１年６月６日（苗磊、「杜仲葉中緑原酸的提取和純化」、北京化工大学、２０１１年６月６日）によって、以下の内容が開示されている。まず水で杜仲葉粉末に対しクロロゲン酸の抽出を行い、抽出液をＮＫＡ−９マクロポーラス樹脂によって純化し、溶媒を蒸発させてクロロゲン酸生成物を得る。抽出残渣物を乾燥させた後、アルカリ液浸出により細胞壁を分解し、その後石油エーテルの熱還流で抽出した杜仲樹脂を乾燥させる。抽出液からゲル法で粗樹脂を得、アセトン洗浄で乳白色の精製樹脂を得て、杜仲樹脂生成物とする。李光鋒、「杜仲葉クロロゲン酸の抽出、純化の研究」、湖南農業大学、２００６年１０月（李光鋒、「杜仲葉中緑原酸的提取、純化研究」、湖南農業大学、２００６年１０月）の、２．クロロゲン酸の安定性についての研究の結果から、クロロゲン酸は６０℃以内で４〜６ｈは比較的安定することが示された。アルカリ性の条件において分解しやすく、ｐＨ＝３の酸性の条件において最も安定する。クロロゲン酸は強い光照射のもとでは不安定であるため、クロロゲン酸の抽出・分離は極力酸性、遮光の条件を維持して行う。クロロゲン酸の抽出溶媒及び抽出方法は、結果として水を抽出溶媒として加熱抽出するのが比較的好ましいことがわかった。その後、直交試験によって温度、時間、固液比及び粒度の４要素について考察した。加熱抽出工程を最適化した結果を以下に示す。温度６５℃、抽出時間６０ｍｉｎ、固液比１：２５、粒度４０メッシュの場合が比較的良好であった。クロロゲン酸のカラムクロマトグラフィ最適化条件の研究では、吸着剤、溶離剤等について研究した結果、ＫＬＦＣ−１５０樹脂を吸着剤とし、エタノールを溶離剤とするのが最適条件であり、この方法でクロロゲン酸を分離すれば、純度、収率ともに高くなり、純度は５６．６７％に、収率は７８．３７％に達することが示された。
ところで、従来の抽出方法では、クロロゲン酸が濃縮のために長時間水中で熱にさらされ、不安定になって分解してしまうという問題がある。また、カラム投入前の濃縮工程において多数の工程を経なければならないため、生産サイクルを短縮することができない。
本発明は、杜仲葉からクロロゲン酸を抽出する方法を提供する。
本発明は、以下のステップａ〜ｇを含む、杜仲葉からクロロゲン酸を抽出する方法。
ａ．杜仲葉の秤取。
ｂ．水抽出：水を加えて抽出する。抽出温度は４０℃〜８０℃、抽出時間は０．５ｈ〜４．０ｈ、抽出回数は１〜３回、１回当たりの水の使用量は薬材の質量の６〜１４倍、ｐＨ値は２〜７とし、浸出又は動的抽出を行う。
ｃ．前処理：清澄剤を加える。添加量は薬材の質量の０．２％〜１．０％、沈降温度は４０℃〜８０℃、沈降時間は０．５ｈ〜２４ｈとする。
ｄ．ろ過：ステップｃの前処理液を、孔径５０μｍ〜２００μｍのろ過膜又はフィルターコアでろ過する。
ｅ．マクロポーラス吸着樹脂への投入：ステップｄのろ過液を、非極性又は弱極性のマクロポーラス吸着樹脂に通す。樹脂カラムの直径と高さの比は１：４〜１：１０、投入の流速は２．０〜８．０ＢＶ／Ｈ、吸着量は、薬材の質量とカラム体積の比が１：１〜１：５とする。洗浄水の使用量は０．５〜２．０ＢＶ、洗浄水の流速は２．０〜８．０ＢＶ／Ｈ、溶離溶媒の種類はメタノール又はエタノールとし、その濃度は１０〜８０％、溶離液の使用量は１．０〜６．０ＢＶ、溶離液の流速は２．０〜８．０ＢＶ／Ｈとする。
ｆ．濃縮：濃縮温度は４０℃〜８０℃、真空度は−０．０４ＭＰ〜−０．０９ＭＰ、相対密度は１．０２〜１．１０とする。
ｇ．乾燥：空気入口温度１５０℃〜２００℃、空気出口温度５０℃〜９０℃である噴霧乾燥をして、クロロゲン酸の粗生成物を得る。
得られたクロロゲン酸の粗生成物をさらに精製、純化して、クロロゲン酸の純粋品を得る。
より好ましくは、以下のステップａ〜ｇを含む。
ａ．杜仲葉の秤取。
ｂ．水抽出：水を加えて抽出する。抽出温度は６０℃〜８０℃、抽出時間は０．５ｈ〜１．５ｈ、抽出回数は１〜３回、１回当たりの水の使用量は薬材の質量の１０〜１４倍、ｐＨ値は６〜７とし、浸出又は動的抽出を行う。
ｃ．前処理：清澄剤を加える。添加量は薬材の質量の０．４％〜０．８％、沈降温度は５０℃〜７０℃、沈降時間は１．０ｈ〜２．０ｈとする。
ｄ．ろ過：ステップｃの前処理液を、孔径５０μｍ〜１００μｍのろ過膜又はフィルターコアでろ過する。
ｅ．マクロポーラス吸着樹脂への投入：ステップｄのろ過液を、非極性又は弱極性のマクロポーラス吸着樹脂に通す。樹脂カラムの直径と高さの比は１：４〜１：８、投入流速は３．０〜５．０ＢＶ／Ｈ、吸着量は、薬材の質量とカラム体積の比が１：１〜１：４とする。洗浄水の使用量は１．０〜２．０ＢＶ、洗浄水の流速は３．０〜５．０ＢＶ／Ｈ、溶離溶媒の種類はメタノール又はエタノールとし、その濃度は１０〜３０％、溶離液の使用量は４．０〜６．０ＢＶ、溶離液の流速は２．０〜４．０ＢＶ／Ｈとする。
ｆ．濃縮：濃縮温度は５０℃〜７０℃、真空度は−０．０７ＭＰ〜−０．０９ＭＰ、相対密度は１．０３〜１．０５とする。
ｇ．乾燥：空気入口温度１５０℃〜１７０℃、空気出口温度６０℃〜８０℃である噴霧乾燥をして、クロロゲン酸の粗生成物を得る。
ただし、ステップａで述べる杜仲葉にはクロロゲン酸が１．０〜５．０％含まれ、水分含有量は≦２０％とする。
ただし、ステップｃで述べる清澄剤の種類はキトサンとする。
ただし、ステップｅで述べるマクロポーラス吸着樹脂の型番は、非極性又は弱極性のＨＰＤ−１００、ＨＰＤ−４５０、ＨＰＤ−７００、ＮＫＡ−ＩＩ、ＮＫＡ−９又はＬＳ−４６とし、好ましくは、前記マクロポーラス吸着樹脂はＨＰＤ−１００、ＨＰＤ−４５０、又はＬＳ−４６とする。
本発明は、水抽出、前処理、マクロポーラス吸着樹脂カラムへの投入、濃縮乾燥によってクロロゲン酸粗生成物を調製するものである。水抽出液は濃縮せずに、前処理後、直接マクロポーラス吸着樹脂に投入して純化処理を行うことで、クロロゲン酸が濃縮のために長時間水中で熱にさらされ、不安定になって分解してしまうという問題を解決するとともに、濃縮工程の段階を省いて生産サイクルを短縮する。また、異なる溶離液の濃度パラメータを制御することで、２０〜６０％の各種規格の粗生成物を生産することができる。
実施例１ 本発明のクロロゲン酸を抽出する方法
１．抽出
杜仲葉を１０ｋｇ（クロロゲン酸含有量＝１．０％）用意し、水を用いて４０℃の条件下で３回抽出した。１回当たり４．０ｈ、１回当たりの水の使用量は６０Ｌ、ｐＨは２．０とし、各回の抽出液を合わせた。
１．抽出
杜仲葉を１０ｋｇ（クロロゲン酸含有量＝１．０％）用意し、水を用いて４０℃の条件下で３回抽出した。１回当たり４．０ｈ、１回当たりの水の使用量は６０Ｌ、ｐＨは２．０とし、各回の抽出液を合わせた。
２．前処理
キトサンを１００ｇ用意し、１％の酢酸水溶液で２％のキトサン水溶液を調合し、４０℃の条件下で抽出液を加え、均一に攪拌した後、２４．０ｈ置いた。
キトサンを１００ｇ用意し、１％の酢酸水溶液で２％のキトサン水溶液を調合し、４０℃の条件下で抽出液を加え、均一に攪拌した後、２４．０ｈ置いた。
３．ろ過
前処理で得た液を５０μｍのろ過膜でろ過し、濾液を収集した。
前処理で得た液を５０μｍのろ過膜でろ過し、濾液を収集した。
４．マクロポーラス吸着樹脂カラムへの投入
（１）投入：マクロポーラス吸着樹脂ＨＰＤ−１００を用意し、径と高さの比＝１：４の樹脂カラムとなるように湿式法でカラムに充填した。カラム体積は５０Ｌとし、前処理液を２．０ＢＶ／Ｈの流速で投入した。
（２）水洗浄：０．５ＢＶの水を用いて、２．０ＢＶ／Ｈの流速で洗浄した。
（３）溶離：１．０ＢＶの８０％メタノール溶液を用いて、２．０ＢＶ／Ｈの流速で溶離を行い、溶出液を収集した。
（１）投入：マクロポーラス吸着樹脂ＨＰＤ−１００を用意し、径と高さの比＝１：４の樹脂カラムとなるように湿式法でカラムに充填した。カラム体積は５０Ｌとし、前処理液を２．０ＢＶ／Ｈの流速で投入した。
（２）水洗浄：０．５ＢＶの水を用いて、２．０ＢＶ／Ｈの流速で洗浄した。
（３）溶離：１．０ＢＶの８０％メタノール溶液を用いて、２．０ＢＶ／Ｈの流速で溶離を行い、溶出液を収集した。
５．濃縮
溶出液を温度４０℃、真空度−０．０４ＭＰの条件下でメタノール回収し、さらに濃縮液の相対密度が１．０２（２５℃）になるまで濃縮した。
溶出液を温度４０℃、真空度−０．０４ＭＰの条件下でメタノール回収し、さらに濃縮液の相対密度が１．０２（２５℃）になるまで濃縮した。
６．噴霧乾燥
濃縮液を空気入口温度２００℃、空気出口温度９０℃で噴霧乾燥し、クロロゲン酸粗生成物を得た。
濃縮液を空気入口温度２００℃、空気出口温度９０℃で噴霧乾燥し、クロロゲン酸粗生成物を得た。
７．生成物の特徴
得られたクロロゲン酸粗生成物の純度は２４．３％、生成物得率は３．２％、クロロゲン酸移行率７７．８％であった。
得られたクロロゲン酸粗生成物の純度は２４．３％、生成物得率は３．２％、クロロゲン酸移行率７７．８％であった。
実施例２ 本発明のクロロゲン酸を抽出する方法
１．抽出
杜仲葉を１０ｋｇ（クロロゲン酸含有量＝３．６％）用意し、水を用いて８０℃の条件下で１回抽出した。抽出時間は０．５ｈ、水の使用量は１４０Ｌ、ｐＨは７．０とした。
１．抽出
杜仲葉を１０ｋｇ（クロロゲン酸含有量＝３．６％）用意し、水を用いて８０℃の条件下で１回抽出した。抽出時間は０．５ｈ、水の使用量は１４０Ｌ、ｐＨは７．０とした。
２．前処理
キトサンを２０ｇ用意し、１％の酢酸水溶液で２％のキトサン水溶液を調合し、８０℃の条件下で抽出液を加え、均一に攪拌した後、０．５ｈ置いた。
キトサンを２０ｇ用意し、１％の酢酸水溶液で２％のキトサン水溶液を調合し、８０℃の条件下で抽出液を加え、均一に攪拌した後、０．５ｈ置いた。
３．ろ過
前処理で得た液を２００μｍのろ過膜でろ過し、濾液を収集した。
前処理で得た液を２００μｍのろ過膜でろ過し、濾液を収集した。
４．マクロポーラス吸着樹脂カラムへの投入
（１）投入：マクロポーラス吸着樹脂ＨＰＤ−４５０を用意し、径と高さの比＝１：１０の樹脂カラムとなるように湿式法でカラムに充填した。カラム体積は１０Ｌとし、前処理液を２．０ＢＶ／Ｈの流速で投入した。
（２）水洗浄：２．０ＢＶの水を用いて、２．０ＢＶ／Ｈの流速で洗浄した。
（３）溶離：６．０ＢＶの１０％エタノール溶液を用いて、２．０ＢＶ／Ｈの流速で溶離を行い、溶出液を収集した。
（１）投入：マクロポーラス吸着樹脂ＨＰＤ−４５０を用意し、径と高さの比＝１：１０の樹脂カラムとなるように湿式法でカラムに充填した。カラム体積は１０Ｌとし、前処理液を２．０ＢＶ／Ｈの流速で投入した。
（２）水洗浄：２．０ＢＶの水を用いて、２．０ＢＶ／Ｈの流速で洗浄した。
（３）溶離：６．０ＢＶの１０％エタノール溶液を用いて、２．０ＢＶ／Ｈの流速で溶離を行い、溶出液を収集した。
５．濃縮
溶出液を温度８０℃、真空度−０．０９ＭＰの条件下でエタノール回収し、さらに濃縮液の相対密度が１．１０（２５℃）になるまで濃縮した。
溶出液を温度８０℃、真空度−０．０９ＭＰの条件下でエタノール回収し、さらに濃縮液の相対密度が１．１０（２５℃）になるまで濃縮した。
６．噴霧乾燥
濃縮液を空気入口温度１５０℃、空気出口温度５０℃で噴霧乾燥し、クロロゲン酸粗生成物を得た。
濃縮液を空気入口温度１５０℃、空気出口温度５０℃で噴霧乾燥し、クロロゲン酸粗生成物を得た。
７．生成物の特徴
得られたクロロゲン酸粗生成物の純度は５８．４％、生成物得率は４．８％、クロロゲン酸移行率は７７．９％であった。
得られたクロロゲン酸粗生成物の純度は５８．４％、生成物得率は４．８％、クロロゲン酸移行率は７７．９％であった。
実施例３ 本発明のクロロゲン酸を抽出する方法
１．抽出
杜仲葉を１０ｋｇ（クロロゲン酸含有量＝５．０％）用意し、水を用いて６０℃の条件下で２回抽出した。１回当たり１．５ｈ、１回当たりの水の使用量は８０Ｌ、ｐＨ値は３．０とし、各回の抽出液を合わせた。
１．抽出
杜仲葉を１０ｋｇ（クロロゲン酸含有量＝５．０％）用意し、水を用いて６０℃の条件下で２回抽出した。１回当たり１．５ｈ、１回当たりの水の使用量は８０Ｌ、ｐＨ値は３．０とし、各回の抽出液を合わせた。
２．前処理
キトサンを４０ｇ用意し、１％の酢酸水溶液で２％のキトサン水溶液を調合し、６０℃の条件下で抽出液を加え、均一に攪拌した後、１２．０ｈ置いた。
キトサンを４０ｇ用意し、１％の酢酸水溶液で２％のキトサン水溶液を調合し、６０℃の条件下で抽出液を加え、均一に攪拌した後、１２．０ｈ置いた。
３．ろ過
前処理で得た液を２００μｍのろ過膜でろ過し、濾液を収集した。
前処理で得た液を２００μｍのろ過膜でろ過し、濾液を収集した。
４．マクロポーラス吸着樹脂カラムへの投入
（１）投入：マクロポーラス吸着樹脂ＨＰＤ−７００を用意し、径と高さの比＝１：８の樹脂カラムとなるように湿式法でカラムに充填した。カラム体積は２０Ｌとし、前処理液を３．０ＢＶ／Ｈの流速で投入した。
（２）水洗浄：１．０ＢＶの水を用いて、３．０ＢＶ／Ｈの流速で洗浄した。
（３）溶離：５．０ＢＶの２０％エタノール溶液を用いて、３．０ＢＶ／Ｈの流速で溶離を行い、溶出液を収集した。
（１）投入：マクロポーラス吸着樹脂ＨＰＤ−７００を用意し、径と高さの比＝１：８の樹脂カラムとなるように湿式法でカラムに充填した。カラム体積は２０Ｌとし、前処理液を３．０ＢＶ／Ｈの流速で投入した。
（２）水洗浄：１．０ＢＶの水を用いて、３．０ＢＶ／Ｈの流速で洗浄した。
（３）溶離：５．０ＢＶの２０％エタノール溶液を用いて、３．０ＢＶ／Ｈの流速で溶離を行い、溶出液を収集した。
５．濃縮
溶出液を温度６０℃、真空度−０．０８ＭＰの条件下でエタノール回収し、さらに濃縮液の相対密度が１．０５０（２５℃）になるまで濃縮した。
溶出液を温度６０℃、真空度−０．０８ＭＰの条件下でエタノール回収し、さらに濃縮液の相対密度が１．０５０（２５℃）になるまで濃縮した。
６．噴霧乾燥
濃縮液を空気入口温度１５０℃、空気出口温度７０℃で噴霧乾燥し、クロロゲン酸粗生成物を得た。
濃縮液を空気入口温度１５０℃、空気出口温度７０℃で噴霧乾燥し、クロロゲン酸粗生成物を得た。
７．生成物の特徴
得られたクロロゲン酸粗生成物の純度は５２．４％、生成物得率は７．１％、クロロゲン酸移行率は７４．４％であった。
得られたクロロゲン酸粗生成物の純度は５２．４％、生成物得率は７．１％、クロロゲン酸移行率は７４．４％であった。
実施例４ 本発明のクロロゲン酸を抽出する方法
１．抽出
杜仲葉を１０ｋｇ（クロロゲン酸含有量＝３．６％）用意し、水を用いて６０℃の条件下で２回抽出した。１回当たり２．０ｈ、１回当たりの水の使用量は１００Ｌ、ｐＨ値は４．０とし、各回の抽出液を合わせた。
１．抽出
杜仲葉を１０ｋｇ（クロロゲン酸含有量＝３．６％）用意し、水を用いて６０℃の条件下で２回抽出した。１回当たり２．０ｈ、１回当たりの水の使用量は１００Ｌ、ｐＨ値は４．０とし、各回の抽出液を合わせた。
２．前処理
キトサンを６０ｇ用意し、１％の酢酸水溶液で２％のキトサン水溶液を調合し、６０℃の条件下で抽出液を加え、均一に攪拌した後、８．０ｈ置いた。
キトサンを６０ｇ用意し、１％の酢酸水溶液で２％のキトサン水溶液を調合し、６０℃の条件下で抽出液を加え、均一に攪拌した後、８．０ｈ置いた。
３．ろ過
前処理で得た液を５０μｍのろ過膜でろ過し、濾液を収集した。
前処理で得た液を５０μｍのろ過膜でろ過し、濾液を収集した。
４．マクロポーラス吸着樹脂カラムへの投入
（１）投入：マクロポーラス吸着樹脂ＮＫＡ−ＩＩを用意し、径と高さの比＝１：８の樹脂カラムとなるように湿式法でカラムに充填した。カラム体積は４０Ｌとし、前処理液を５．０ＢＶ／Ｈの流速で投入した。
（２）水洗浄：２．０ＢＶの水を用いて、５．０ＢＶ／Ｈの流速で洗浄した。
（３）溶離：４．０ＢＶの３０％エタノール溶液を用いて、４．０ＢＶ／Ｈの流速で溶離を行い、溶出液を収集した。
（１）投入：マクロポーラス吸着樹脂ＮＫＡ−ＩＩを用意し、径と高さの比＝１：８の樹脂カラムとなるように湿式法でカラムに充填した。カラム体積は４０Ｌとし、前処理液を５．０ＢＶ／Ｈの流速で投入した。
（２）水洗浄：２．０ＢＶの水を用いて、５．０ＢＶ／Ｈの流速で洗浄した。
（３）溶離：４．０ＢＶの３０％エタノール溶液を用いて、４．０ＢＶ／Ｈの流速で溶離を行い、溶出液を収集した。
５．濃縮
溶出液を温度７０℃、真空度−０．０８ＭＰの条件下でエタノール回収し、さらに濃縮液の相対密度が１．０６（２５℃）になるまで濃縮した。
溶出液を温度７０℃、真空度−０．０８ＭＰの条件下でエタノール回収し、さらに濃縮液の相対密度が１．０６（２５℃）になるまで濃縮した。
６．噴霧乾燥
濃縮液を空気入口温度１８０℃、空気出口温度８０℃で噴霧乾燥し、クロロゲン酸粗生成物を得た。
濃縮液を空気入口温度１８０℃、空気出口温度８０℃で噴霧乾燥し、クロロゲン酸粗生成物を得た。
７．生成物の特徴
得られたクロロゲン酸粗生成物の純度は４７．４％、生成物得率は５．６％、クロロゲン酸移行率は７３．７％であった。
得られたクロロゲン酸粗生成物の純度は４７．４％、生成物得率は５．６％、クロロゲン酸移行率は７３．７％であった。
実施例５ 本発明のクロロゲン酸を抽出する方法
１．抽出
杜仲葉を１０ｋｇ（クロロゲン酸含有量＝３．６％）用意し、水を用いて４０℃の条件下で３回抽出した。１回当たり４．０ｈ、１回当たりの水の使用量は８０Ｌ、ｐＨ値は３．０とし、各回の抽出液を合わせた。
１．抽出
杜仲葉を１０ｋｇ（クロロゲン酸含有量＝３．６％）用意し、水を用いて４０℃の条件下で３回抽出した。１回当たり４．０ｈ、１回当たりの水の使用量は８０Ｌ、ｐＨ値は３．０とし、各回の抽出液を合わせた。
２．前処理
キトサンを１００ｇ用意し、１％の酢酸水溶液で２％のキトサン水溶液を調合し、４０℃の条件下で抽出液を加え、均一に攪拌した後、２４．０置いた。
キトサンを１００ｇ用意し、１％の酢酸水溶液で２％のキトサン水溶液を調合し、４０℃の条件下で抽出液を加え、均一に攪拌した後、２４．０置いた。
３．ろ過
前処理で得た液を１００μｍのろ過膜でろ過し、濾液を収集した。
前処理で得た液を１００μｍのろ過膜でろ過し、濾液を収集した。
４．マクロポーラス吸着樹脂カラムへの投入
（１）投入：マクロポーラス吸着樹脂ＮＫＡ−９を用意し、径と高さの比＝１：１０の樹脂カラムとなるように湿式法でカラムに充填した。カラム体積は５０Ｌとし、前処理液を８．０ＢＶ／Ｈの流速で投入した。
（２）水洗浄：２．０ＢＶの水を用いて、８．０ＢＶ／Ｈの流速で洗浄した。
（３）溶離：６．０ＢＶの４０％エタノール溶液を用いて、８．０ＢＶ／Ｈの流速で溶離を行い、溶出液を収集した。
（１）投入：マクロポーラス吸着樹脂ＮＫＡ−９を用意し、径と高さの比＝１：１０の樹脂カラムとなるように湿式法でカラムに充填した。カラム体積は５０Ｌとし、前処理液を８．０ＢＶ／Ｈの流速で投入した。
（２）水洗浄：２．０ＢＶの水を用いて、８．０ＢＶ／Ｈの流速で洗浄した。
（３）溶離：６．０ＢＶの４０％エタノール溶液を用いて、８．０ＢＶ／Ｈの流速で溶離を行い、溶出液を収集した。
５．濃縮
溶出液を温度５０℃、真空度−０．０６ＭＰの条件下でエタノール回収し、さらに濃縮液の相対密度が１．０８（２５℃）になるまで濃縮した。
溶出液を温度５０℃、真空度−０．０６ＭＰの条件下でエタノール回収し、さらに濃縮液の相対密度が１．０８（２５℃）になるまで濃縮した。
６．噴霧乾燥
濃縮液を空気入口温度１６０℃、空気出口温度６０℃で噴霧乾燥し、クロロゲン酸粗生成物を得た。
濃縮液を空気入口温度１６０℃、空気出口温度６０℃で噴霧乾燥し、クロロゲン酸粗生成物を得た。
７．生成物の特徴
得られたクロロゲン酸粗生成物の純度は４５．８％、生成物得率は５．９％、クロロゲン酸移行率は７５．１％であった。
得られたクロロゲン酸粗生成物の純度は４５．８％、生成物得率は５．９％、クロロゲン酸移行率は７５．１％であった。
実施例６ 本発明のクロロゲン酸を抽出する方法
１．抽出
杜仲葉を１０ｋｇ（クロロゲン酸含有量＝３．６％）用意し、水を用いて６０℃の条件下で２回抽出した。１回当たり１．５ｈ、１回当たりの水の使用量は１２０Ｌ、ｐＨ値は６．５とし、各回の抽出液を合わせた。
１．抽出
杜仲葉を１０ｋｇ（クロロゲン酸含有量＝３．６％）用意し、水を用いて６０℃の条件下で２回抽出した。１回当たり１．５ｈ、１回当たりの水の使用量は１２０Ｌ、ｐＨ値は６．５とし、各回の抽出液を合わせた。
２．前処理
キトサンを８０ｇ用意し、１％の酢酸水溶液で２％のキトサン水溶液を調合し、６０℃の条件下で抽出液を加え、均一に攪拌した後、２．０ｈ置いた。
キトサンを８０ｇ用意し、１％の酢酸水溶液で２％のキトサン水溶液を調合し、６０℃の条件下で抽出液を加え、均一に攪拌した後、２．０ｈ置いた。
３．ろ過
前処理で得た液を５０μｍのろ過膜でろ過し、濾液を収集した。
前処理で得た液を５０μｍのろ過膜でろ過し、濾液を収集した。
４．マクロポーラス吸着樹脂カラムへの投入
（１）投入：マクロポーラス吸着樹脂ＮＫＡ−９を用意し、径と高さの比＝１：１０の樹脂カラムとなるように湿式法でカラムに充填した。カラム体積は４０Ｌとし、前処理液を６．０ＢＶ／Ｈの流速で投入した。
（２）水洗浄：１．０ＢＶの水を用いて、６．０ＢＶ／Ｈの流速で洗浄した。
（３）溶離：３．０ＢＶの５０％エタノール溶液を用いて、３．０ＢＶ／Ｈの流速で溶離を行い、溶出液を収集した。
（１）投入：マクロポーラス吸着樹脂ＮＫＡ−９を用意し、径と高さの比＝１：１０の樹脂カラムとなるように湿式法でカラムに充填した。カラム体積は４０Ｌとし、前処理液を６．０ＢＶ／Ｈの流速で投入した。
（２）水洗浄：１．０ＢＶの水を用いて、６．０ＢＶ／Ｈの流速で洗浄した。
（３）溶離：３．０ＢＶの５０％エタノール溶液を用いて、３．０ＢＶ／Ｈの流速で溶離を行い、溶出液を収集した。
５．濃縮
溶出液を温度６０℃、真空度−０．０８ＭＰの条件下でエタノール回収し、さらに濃縮液の相対密度が１．０４５（２５℃）になるまで濃縮した。
溶出液を温度６０℃、真空度−０．０８ＭＰの条件下でエタノール回収し、さらに濃縮液の相対密度が１．０４５（２５℃）になるまで濃縮した。
６．噴霧乾燥
濃縮液を空気入口温度１６０℃、空気出口温度７０℃で噴霧乾燥し、クロロゲン酸粗生成物を得た。
濃縮液を空気入口温度１６０℃、空気出口温度７０℃で噴霧乾燥し、クロロゲン酸粗生成物を得た。
７．生成物の特徴
得られたクロロゲン酸粗生成物の純度は４１．６％、生成物得率は６．２％、クロロゲン酸移行率は７１．６％であった。
得られたクロロゲン酸粗生成物の純度は４１．６％、生成物得率は６．２％、クロロゲン酸移行率は７１．６％であった。
実施例７ 本発明のクロロゲン酸を抽出する方法
１．抽出
杜仲葉を１０ｋｇ（クロロゲン酸含有量＝３．６％）用意し、水を用いて７０℃の条件下で２回抽出した。１回当たり１．０ｈ、１回当たりの水の使用量は１００Ｌ、ｐＨ値は７．０とし、各回の抽出液を合わせた。
１．抽出
杜仲葉を１０ｋｇ（クロロゲン酸含有量＝３．６％）用意し、水を用いて７０℃の条件下で２回抽出した。１回当たり１．０ｈ、１回当たりの水の使用量は１００Ｌ、ｐＨ値は７．０とし、各回の抽出液を合わせた。
２．前処理
キトサンを６０ｇ用意し、１％の酢酸水溶液で２％のキトサン水溶液を調合し、７０℃の条件下で抽出液を加え、均一に攪拌した後、２．０ｈ置いた。
キトサンを６０ｇ用意し、１％の酢酸水溶液で２％のキトサン水溶液を調合し、７０℃の条件下で抽出液を加え、均一に攪拌した後、２．０ｈ置いた。
３．ろ過
前処理で得た液を１００μｍのろ過膜でろ過し、濾液を収集した。
前処理で得た液を１００μｍのろ過膜でろ過し、濾液を収集した。
４．マクロポーラス吸着樹脂カラムへの投入
（１）投入：マクロポーラス吸着樹脂ＬＳ−４６を用意し、径と高さの比＝１：８の樹脂カラムとなるように湿式法でカラムに充填した。カラム体積は２０Ｌとし、前処理液を５．０ＢＶ／Ｈの流速で投入した。
（２）水洗浄：１．０ＢＶの水を用いて、５．０ＢＶ／Ｈの流速で洗浄した。
（３）溶離：５．０ＢＶの２０％エタノール溶液を用いて、３．０ＢＶ／Ｈの流速で溶離を行い、溶出液を収集した。
（１）投入：マクロポーラス吸着樹脂ＬＳ−４６を用意し、径と高さの比＝１：８の樹脂カラムとなるように湿式法でカラムに充填した。カラム体積は２０Ｌとし、前処理液を５．０ＢＶ／Ｈの流速で投入した。
（２）水洗浄：１．０ＢＶの水を用いて、５．０ＢＶ／Ｈの流速で洗浄した。
（３）溶離：５．０ＢＶの２０％エタノール溶液を用いて、３．０ＢＶ／Ｈの流速で溶離を行い、溶出液を収集した。
５．濃縮
溶出液を温度６０℃、真空度−０．０８ＭＰの条件下でエタノール回収し、さらに濃縮液の相対密度が１．０４５（２５℃）になるまで濃縮した。
溶出液を温度６０℃、真空度−０．０８ＭＰの条件下でエタノール回収し、さらに濃縮液の相対密度が１．０４５（２５℃）になるまで濃縮した。
６．噴霧乾燥
濃縮液を空気入口温度１６０℃、空気出口温度７０℃で噴霧乾燥し、クロロゲン酸粗生成物を得た。
濃縮液を空気入口温度１６０℃、空気出口温度７０℃で噴霧乾燥し、クロロゲン酸粗生成物を得た。
７．生成物の特徴
得られたクロロゲン酸粗生成物の純度は５５．８％、生成物得率は５．５％、クロロゲン酸移行率は８５．３％であった。
得られたクロロゲン酸粗生成物の純度は５５．８％、生成物得率は５．５％、クロロゲン酸移行率は８５．３％であった。
比較例１ クロロゲン酸を抽出する方法
１．抽出
杜仲葉を１０ｋｇ（クロロゲン酸含有量＝３．６％）用意し、水を用いて７０℃の条件下で２回抽出した。１回当たり１．０ｈ、１回当たりの水の使用量は１００Ｌ、ｐＨ値は７．０とし、各回の抽出液を合わせた。
１．抽出
杜仲葉を１０ｋｇ（クロロゲン酸含有量＝３．６％）用意し、水を用いて７０℃の条件下で２回抽出した。１回当たり１．０ｈ、１回当たりの水の使用量は１００Ｌ、ｐＨ値は７．０とし、各回の抽出液を合わせた。
２．濃縮
抽出液を温度６０℃、真空度−０．０８ＭＰの条件下で原液の半分まで濃縮した。
抽出液を温度６０℃、真空度−０．０８ＭＰの条件下で原液の半分まで濃縮した。
３．前処理
キトサンを４０ｇ用意し、１％の酢酸水溶液で２％のキトサン水溶液を調合し、６０℃の条件下で抽出液を加え、均一に攪拌した後、２．０ｈ置いた。
キトサンを４０ｇ用意し、１％の酢酸水溶液で２％のキトサン水溶液を調合し、６０℃の条件下で抽出液を加え、均一に攪拌した後、２．０ｈ置いた。
４．ろ過
前処理で得た液を１００μｍのろ過膜でろ過し、濾液を収集した。
前処理で得た液を１００μｍのろ過膜でろ過し、濾液を収集した。
５．マクロポーラス吸着樹脂カラムへの投入
（１）投入：マクロポーラス吸着樹脂ＬＳ−４６を用意し、径と高さの比＝１：８の樹脂カラムとなるように湿式法でカラムに充填した。カラム体積は２０Ｌとし、前処理液を５．０ＢＶ／Ｈの流速で投入した。
（２）水洗浄：用１．０ＢＶの水を用いて、５．０ＢＶ／Ｈの流速で洗浄した。
（３）溶離：５．０ＢＶの２０％エタノール溶液を用いて、３．０ＢＶ／Ｈの流速で溶離を行い、溶出液を収集した。
（１）投入：マクロポーラス吸着樹脂ＬＳ−４６を用意し、径と高さの比＝１：８の樹脂カラムとなるように湿式法でカラムに充填した。カラム体積は２０Ｌとし、前処理液を５．０ＢＶ／Ｈの流速で投入した。
（２）水洗浄：用１．０ＢＶの水を用いて、５．０ＢＶ／Ｈの流速で洗浄した。
（３）溶離：５．０ＢＶの２０％エタノール溶液を用いて、３．０ＢＶ／Ｈの流速で溶離を行い、溶出液を収集した。
６．濃縮
溶出液を温度６０℃、真空度−０．０８ＭＰの条件下でエタノール回収し、さらに濃縮液の相対密度が１．０３（２５℃）になるまで濃縮した。
溶出液を温度６０℃、真空度−０．０８ＭＰの条件下でエタノール回収し、さらに濃縮液の相対密度が１．０３（２５℃）になるまで濃縮した。
７．噴霧乾燥
濃縮液を空気入口温度１６０℃、空気出口温度７０℃で噴霧乾燥し、クロロゲン酸粗生成物を得た。
濃縮液を空気入口温度１６０℃、空気出口温度７０℃で噴霧乾燥し、クロロゲン酸粗生成物を得た。
８．生成物の特徴
得られたクロロゲン酸粗生成物の純度は４４．６％、生成物得率は４．５％、クロロゲン酸移行率は５５．８％であった。
得られたクロロゲン酸粗生成物の純度は４４．６％、生成物得率は４．５％、クロロゲン酸移行率は５５．８％であった。
本発明は水を抽出溶媒とし、キトサンの清澄処理を経た後、直接マクロポーラス吸着樹脂カラムに投入して溶離させ、その後濃縮し乾燥させるもので、工程は簡潔であり、作業性が高く、カラム投入前の濃縮工程において多数の工程を省くことで生産サイクルを短縮する。異なる溶離液の濃度パラメータを制御することで、２０〜６０％の各種規格の粗生成物を生産することができ、クロロゲン酸の移行率が７０〜９０％と高く、中でも実施例７の条件が最も好ましい。
Claims (6)
- 以下のステップａ〜ｇを含むことを特徴とする、杜仲葉からクロロゲン酸を抽出する方法。
ａ．杜仲葉の秤取、
ｂ．水抽出：水を加えて抽出し、抽出温度４０℃〜８０℃、抽出時間０．５ｈ〜４．０ｈ、抽出回数は１〜３回、１回当たりの水の使用量は薬材の質量の６〜１４倍、ｐＨ値は２〜７とし、浸出又は動的抽出を行う、
ｃ．前処理：清澄剤を加え、添加量は薬材の質量の０．２％〜１．０％、沈降温度は４０℃〜８０℃、沈降時間は０．５ｈ〜２４ｈとし、
ｄ．ろ過：ステップｃの前処理液を、孔径５０μｍ〜２００μｍのろ過膜又はフィルターコアでろ過する、
ｅ．マクロポーラス吸着樹脂への投入：ステップｄのろ過液を、非極性又は弱極性のマクロポーラス吸着樹脂に通し、樹脂カラムの直径と高さの比は１：４〜１：１０、投入の流速は２．０〜８．０ＢＶ／Ｈ、吸着量は、薬材の質量とカラム体積の比が１：１〜１：５とし、洗浄水の使用量は０．５〜２．０ＢＶ、洗浄水の流速は２．０〜８．０ＢＶ／Ｈ、溶離溶媒の種類はメタノール又はエタノールとし、その濃度は１０〜８０％、溶離液の使用量は１．０〜６．０ＢＶ、溶離液の流速は２．０〜８．０ＢＶ／Ｈとする、
ｆ．濃縮、
ｇ．乾燥してクロロゲン酸の粗生成物を得る。 - 請求項１に記載の抽出方法において、
ステップｆで述べる濃縮条件は、濃縮温度４０℃〜８０℃、真空度−０．０４ＭＰ〜−０．０９ＭＰ、相対密度１．０２〜１．１０とし、ステップｇで述べる乾燥条件は、空気入口温度１５０℃〜２００℃、空気出口温度５０℃〜９０℃である噴霧乾燥をして、クロロゲン酸の粗生成物を得ることを特徴とする抽出方法。 - 請求項１に記載の抽出方法において、
以下のステップａ〜ｇを含むことを特徴とする抽出方法。
ａ．杜仲葉の秤取、
ｂ．水抽出：水を加えて抽出し、抽出温度は６０℃〜８０℃、抽出時間は０．５ｈ〜１．５ｈ、抽出回数は１〜３回、1回当たりの水の使用量は薬材の質量の１０〜１４倍、ｐＨ値は６〜７とし、浸出又は動的抽出を行う、
ｃ．前処理：清澄剤を加え、添加量は薬材の質量の０．４％〜０．８％、沈降温度は５０℃〜７０℃、沈降時間は１．０ｈ〜２．０ｈとする、
ｄ．ろ過：ステップｃの前処理液を、孔径５０μｍ〜１００μｍのろ過膜又はフィルターコアでろ過する、
ｅ．マクロポーラス吸着樹脂への投入：ステップｄのろ過液を、非極性又は弱極性のマクロポーラス吸着樹脂に通し、樹脂カラムの直径と高さの比は１：４〜１：８、投入流速は３．０〜５．０ＢＶ／Ｈ、吸着量は、薬材の質量とカラム体積の比が１：１〜１：４とし、洗浄水の使用量は１．０〜２．０ＢＶ、洗浄水の流速は３．０〜５．０ＢＶ／Ｈ、溶離溶媒の種類はメタノール又はエタノールとし、その濃度は１０〜３０％、溶離液の使用量は４．０〜６．０ＢＶ、溶離液の流速は２．０〜４．０ＢＶ／Ｈとする、
ｆ．濃縮：濃縮温度は５０℃〜７０℃、真空度は−０．０７ＭＰ〜−０．０９ＭＰ、相対密度は１．０３〜１．０５とする、
ｇ．乾燥：空気入口温度１５０℃〜１７０℃、空気出口温度６０℃〜８０℃である噴霧乾燥をして、クロロゲン酸の粗生成物を得る。 - 請求項１または２に記載の抽出方法において、
ステップａで述べる杜仲葉にはクロロゲン酸が１．０％〜５．０％含まれることを特徴とする抽出方法。 - 請求項１または２に記載の抽出方法において、
ステップｃで述べる清澄剤の種類をキトサンとすることを特徴とする抽出方法。 - 請求項１または２に記載の抽出方法において、
ステップｅで述べるマクロポーラス吸着樹脂の型番はＨＰＤ−１００、ＨＰＤ−４５０、ＨＰＤ−７００、ＮＫＡ−ＩＩ、ＮＫＡ−９又はＬＳ−４６とし、好ましくは、前記マクロポーラス吸着樹脂はＨＰＤ−１００、ＨＰＤ−４５０、又はＬＳ−４６とすることを特徴とする抽出方法。
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