CN109776475A

CN109776475A - 大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法

Info

Publication number: CN109776475A
Application number: CN201910142087.9A
Authority: CN
Inventors: 张建勇; 江和源; 王伟伟; 陈琳; 苏威
Original assignee: Tea Research Institute Chinese Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Tea Research Institute Chinese Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2019-02-26
Filing date: 2019-02-26
Publication date: 2019-05-21
Anticipated expiration: 2039-02-26
Also published as: CN109776475B

Abstract

大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，属于茶叶深加工领域。包括以下步骤：1）以茶为原料，采用热水浸提法，制备含有聚酯型儿茶素的茶叶浸提液；2）茶叶浸提液经过滤、浓缩处理，得聚酯型儿茶素初提物；3）大孔吸附树脂填料装填入层析柱，平衡，然后将聚酯型儿茶素初提物溶解后加入层析柱内；4）以酯类、酮类组成的溶剂洗脱，进行柱层析洗脱，合并聚酯型儿茶素洗脱组分，浓缩、干燥得聚酯型儿茶素。上述一种大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其提取方法简单、方便，提取率高，聚酯型儿茶素含量高达94‑99%，为获得聚酯型儿茶素产物提供技术支持，为其进一步的研究和应用提供理论基础。

Description

大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法

技术领域

本发明属于茶叶深加工领域，具体为大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法。

背景技术

聚酯型儿茶素是茶叶中的主要天然活性成分，具有抗氧化、抗辐射、抗菌消炎、抗癌、抗心脑血管疾病等多种生理活性和药理作用。从茶叶中制备聚酯型儿茶素主要有两种方法：溶剂提取法、柱分离法。溶剂提取法存在得率较低、溶剂消耗量大、成本高、易造成环境污染等问题，柱分离法具有分辨率高、灵敏度高、选择性好的特点，因此具有能耗低、淋洗剂易于回收再利用和所得产品纯度高等优点，在各学科领域广泛应用。层析法的种类很多，但其原理一致，即都是利用混合物各组分的理化性质( 吸附力、分子形状大小、极性、亲和力、分配系。

大孔吸附树脂具有优良的选择性分离特性、稳定的理化特性、再生容易等特点，在天然产物的分离纯化、精制及环境保护等领域得到了广泛的应用。我国使用吸附树脂分离黄酮类化合物的研究起步于20世纪70年代，然而有关茶叶聚酯型儿茶素产品的分离制备方法研究报道仍然较少。

发明内容

针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于设计提供一种大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法的技术方案，其提取方法简单、方便，提取率高，聚酯型儿茶素含量高达94-99%，为获得聚酯型儿茶素产物提供技术支持，为其进一步的研究和应用提供理论基础。

所述的大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）以茶为原料，采用热水浸提法，制备含有聚酯型儿茶素的茶叶浸提液；

2）茶叶浸提液经过滤、浓缩处理，得聚酯型儿茶素初提物；

3）大孔吸附树脂填料装填入层析柱，平衡，然后将聚酯型儿茶素初提物溶解后加入层析柱内；

4）以酯类、酮类组成的溶剂洗脱，进行柱层析洗脱，合并聚酯型儿茶素洗脱组分，浓缩、干燥得聚酯型儿茶素。

所述的大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其特征在于步骤1）中：茶和水的重量体积比为100g：1000-1200ml；热水温度为90-100℃，优选92-95℃；浸提时间为40-60min，优选45-50min；浸提2-3次，合并浸提液。以红茶或绿茶、乌龙茶、黑茶、白茶、黄茶为原料。

所述的大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其特征在于步骤2）中：茶叶浸提液经300目-400目抽滤、旋转蒸发浓缩处理。

所述的大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其特征在于步骤3）中：所述的柱层析材料为粒径0.3-1.2mm≥90%、平均孔径75-80A^。、比表面积550-550 m²/g、表观密度0.28-0.34 g/ml 、湿视密度0.68-0.75 g/ml的高多孔性苯乙烯大孔吸附树脂。

所述的大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其特征在于步骤3）中：所述的柱层析平衡用溶液为醇类溶剂、去离子水或水中的一种或其混合溶液；聚酯型儿茶素初提物和水的重量体积比为0.5g:90-125ml，优选0.5g:100-110ml；将树脂依次用水、95%乙醇和水进行清洗除杂质。装柱可采用湿法和干法两种方式，湿法可用去离子水、醇等溶剂匀浆装柱，大孔吸附树脂装柱前须经预处理。上样的聚酯型儿茶素初提物的溶解可用去离子水、食用级醇类等有机溶剂。柱层析平衡用溶液为醇类溶剂、去离子水溶液，或者它们的混合溶液。

所述的大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其特征在于步骤4）中：所述的酯为乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸甲酯，所述的酮为丙酮、丁酮或戊酮，所述的醇为甲醇、乙醇或丙醇；洗脱溶剂中的酯或酮：醇的比例为4-9：2-8。

所述的大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其特征在于步骤4）中：淋洗速度为1.5-6.0柱床体积/小时，优选2-5柱床体积/小时，更优选3-4柱床体积/小时。

所述的大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其特征在于步骤4）中：所述柱层析分离的温度控制在28-33℃。

上述一种大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其提取方法简单、方便，提取率高，聚酯型儿茶素含量高达94-99%，为获得聚酯型儿茶素产物提供技术支持，为其进一步的研究和应用提供理论基础。

附图说明

图1为实例1中得到的聚酯型儿茶素初提物的液相分析图谱；

图2是为例1中大孔吸附树脂处理后的聚酯型儿茶素液相分析图谱。

具体实施方式

下面将结合附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整描述，显然所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

称取100g 红茶茶片，加入500ml去离子水（90℃）浸提45min，取出浸提液，再加入等体积去离子水（90℃）浸提45min，合并浸提液，经300目抽滤，经真空冷冻干燥处理得到聚酯型儿茶素初提物，其中聚酯型儿茶素含量为39.56%，得率10.64%。

称取0.5g聚酯型儿茶素初提物，溶于100ml水中作为上柱溶液。将粒径为0.3-0.5mm的高多孔性苯乙烯大孔吸附树脂填充到直径为20 mm、长800 mm的层析柱中，填充柱床体积为200ml，将树脂依次用水、95%乙醇和水进行清洗，以去除含有的各种杂质，且柱床平衡。柱层析分离的温度控制在28℃，加载上柱溶液到高多孔性苯乙烯大孔吸附树脂顶部，依次2.0BV的去离子水淋洗，4BV的乙酸乙酯：乙醇＝8：3的洗脱溶剂淋洗，淋洗速度均为1.5BV/小时，洗脱组分经高效液相色谱检测，收集合并聚酯型儿茶素洗脱组分，经浓缩、真空冷冻干燥处理得到高纯度聚酯型儿茶素制备产物，其中聚酯型儿茶素含量为94.63%。

实施例2

称取100g 乌龙茶茶片，加入500ml去离子水（95℃）浸提50min，取出浸提液，再加入等体积去离子水（95℃）浸提50min，合并浸提液，经300目抽滤，经真空冷冻干燥处理得到聚酯型儿茶素初提物，其中聚酯型儿茶素含量为41.88%，得率12.57%。

称取0.5g聚酯型儿茶素初提物，溶于100ml水中作为上柱溶液。将粒径为0.6-0.8mm的高多孔性苯乙烯大孔吸附树脂填充到直径为26 mm、长1000 mm的层析柱中，填充柱床体积为400ml，将树脂依次用水、95%乙醇和水进行清洗，以去除含有的各种杂质，且柱床平衡。柱层析分离的温度控制在30℃，加载上柱溶液到高多孔性苯乙烯大孔吸附树脂顶部，依次1.5BV的去离子水淋洗，4BV的乙酸乙酯：甲醇＝6：3的洗脱溶剂淋洗，淋洗速度均为2.5BV/小时，洗脱组分经高效液相色谱检测，收集合并聚酯型儿茶素洗脱组分，经浓缩、真空冷冻干燥处理得到高纯度聚酯型儿茶素制备产物，其中聚酯型儿茶素含量为98.52%。

实施例3

称取100g 绿茶茶片，加入500ml去离子水（90℃）浸提50min，取出浸提液，再加入等体积去离子水（90℃）浸提50min，合并浸提液，经300目抽滤，经真空冷冻干燥处理得到聚酯型儿茶素初提物，其中聚酯型儿茶素含量为40.23%，得率11.92%。

称取0.5g聚酯型儿茶素初提物，溶于100ml水中作为上柱溶液。将粒径为0.9-1.1mm的高多孔性苯乙烯大孔吸附树脂填充到直径为26 mm、长800 mm的层析柱中，填充柱床体积为300ml，将树脂依次用水、95%乙醇和水进行清洗，以去除含有的各种杂质，且柱床平衡。柱层析分离的温度控制在32℃，加载上柱溶液到高多孔性苯乙烯大孔吸附树脂顶部，依次2.0BV的去离子水淋洗，5BV的丙酮：丙醇＝7：4的洗脱溶剂淋洗，淋洗速度均为3BV/小时，洗脱组分经高效液相色谱检测，收集合并聚酯型儿茶素洗脱组分，经浓缩、真空冷冻干燥处理得到高纯度聚酯型儿茶素制备产物，其中聚酯型儿茶素含量为97.68%。

对比例 1：

称取100g 红茶茶片，加入500ml去离子水（90℃）浸提45min，取出浸提液，再加入等体积去离子水（90℃）浸提45min，合并浸提液，经300目抽滤，经真空冷冻干燥处理得到聚酯型儿茶素初提物，其中聚酯型儿茶素含量为38.42%，得率13.23%。

称取0.5 g聚酯型儿茶素初提物，溶于100ml水中作为上柱溶液。将AB-8大孔吸附树脂填充到直径为20 mm、长800 mm的层析柱中，填充柱床体积为200ml，将树脂依次用水、95%乙醇和水进行清洗，以去除含有的各种杂质，且柱床平衡。室温下，加载上柱溶液到AB-8大孔吸附树脂顶部，依次2.0BV的去离子水淋洗，4BV的乙酸乙酯：乙醇＝8：3的洗脱溶剂淋洗，淋洗速度均为1.5BV/小时，收集合并洗脱液，经浓缩、真空冷冻干燥处理得到高纯度聚酯型儿茶素制备产物，其中聚酯型儿茶素含量为64.52%。

对比例2：

称取100g 乌龙茶茶片，加入500ml去离子水（95℃）浸提50min，取出浸提液，再加入等体积去离子水（95℃）浸提50min，合并浸提液，经300目抽滤，经真空冷冻干燥处理得到聚酯型儿茶素初提物，其中聚酯型儿茶素含量为40.92%，得率11.34%。

称取0.5g聚酯型儿茶素初提物，溶于100ml水中作为上柱溶液。将AB-8大孔吸附树脂填充到直径为26 mm、长1000 mm的层析柱中，填充柱床体积为400ml，将树脂依次用水、95%乙醇和水进行清洗，以去除含有的各种杂质，且柱床平衡。室温下，加载上柱溶液到AB-8大孔吸附树脂顶部，依次1.5BV的去离子水淋洗，4BV的乙酸乙酯：甲醇＝6：3的洗脱溶剂淋洗，淋洗速度均为2.5BV/小时，收集合并洗脱液，经浓缩、真空冷冻干燥处理得到高纯度聚酯型儿茶素制备产物，其中聚酯型儿茶素含量为65.78%。

对比例3：

称取100g 绿茶茶片，加入500ml去离子水（90℃）浸提50min，取出浸提液，再加入等体积去离子水（90℃）浸提50min，合并浸提液，经300目抽滤，经真空冷冻干燥处理得到聚酯型儿茶素初提物，其中聚酯型儿茶素含量为40.88%，得率11.44%。

称取0.5g聚酯型儿茶素初提物，溶于100ml水中作为上柱溶液。将AB-8大孔吸附树脂填充到直径为26 mm、长800 mm的层析柱中，填充柱床体积为300ml，将树脂依次用水、95%乙醇和水进行清洗，以去除含有的各种杂质，且柱床平衡。室温下，加载上柱溶液到AB-8大孔吸附树脂顶部，依次2.0BV的去离子水淋洗，5BV的丙酮：丙醇＝7：4的洗脱溶剂淋洗，淋洗速度均为3BV/小时，收集合并洗脱液，经浓缩、真空冷冻干燥处理得到高纯度聚酯型儿茶素制备产物，其中聚酯型儿茶素含量为66.45%。

本发明的保护范围并不只限于以上实施例，凡与本发明的技术路线、方案相同或等同的内容均落入本发明的保护范围。

Claims

1.大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其特征在于包括以下步骤：

2）茶叶浸提液经过滤、浓缩处理，得聚酯型儿茶素初提物；

2.如权利要求1所述的大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其特征在于步骤1）中：茶和水的重量体积比为100g：1000-1200ml；热水温度为90-100℃，优选92-95℃；浸提时间为40-60min，优选45-50min；浸提2-3次，合并浸提液。

3.如权利要求1所述的大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其特征在于步骤2）中：茶叶浸提液经300目-400目抽滤、旋转蒸发浓缩处理。

4.如权利要求1所述的大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其特征在于步骤3）中：所述的柱层析材料为粒径0.3-1.2mm≥90%、平均孔径75-80A、比表面积550-550 m²/g、表观密度0.28-0.34 g/ml 、湿视密度0.68-0.75 g/ml的高多孔性苯乙烯大孔吸附树脂。

5.如权利要求1所述的大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其特征在于步骤3）中：所述的柱层析平衡用溶液为醇类溶剂、去离子水或水中的一种或其混合溶液；聚酯型儿茶素初提物和水的重量体积比为0.5g:90-125ml，优选0.5g:100-110ml；将树脂依次用水、95%乙醇和水进行清洗除杂质。

6.如权利要求1所述的大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其特征在于步骤4）中：所述的酯为乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸甲酯，所述的酮为丙酮、丁酮或戊酮，所述的醇为甲醇、乙醇或丙醇；洗脱溶剂中的酯或酮：醇的比例为4-9：2-8。

7.如权利要求1所述的大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其特征在于步骤4）中：淋洗速度为1.5-6.0柱床体积/小时，优选2-5柱床体积/小时，更优选3-4柱床体积/小时。

8.如权利要求1所述的大孔吸附树脂控温常压分离纯化聚酯型儿茶素的方法，其特征在于步骤4）中：所述柱层析分离的温度控制在28-33℃。